natgillin/translations-raw huggingface dataset:
This test method is most easily applied to water-soluble chemicals which, under the conditions of the test, are likely to remain in the water.
Organismele testate
For testing of chemicals that are volatile, strongly adsorbing, coloured, having a low solubility in water or chemicals that may affect the availability of nutrients or minerals in the test medium, certain modifications of the described procedure may be required (e.g., closed system, conditioning of the test vessels).
Se pot folosi câteva specii de microalge și cianobacterii neatașate.
Guidance on some appropriate modifications is given in (2) (3) and (4).
S-a demonstrat că sușele enumerate în apendicele 2 sunt adecvate prin folosirea procedurii de testare specificate în această metodă de testare.
DESCRIPTION OF THE TEST METHOD
Dacă se folosesc alte specii, ar trebui raportate sușa și/sau originea.
Test vessels and other apparatus which will come into contact with the test solutions should be made entirely of glass or other chemically inert material.
Trebuie să se confirme că creșterea exponențială a algelor de testare selectate poate fi menținută pe parcursul întregii perioade de testare, în condițiile predominante.
The items should be thoroughly washed to ensure that no organic or inorganic contaminants may interfere with the algal growth or composition of the test solutions.
Mediul de cultură
The test vessels will normally be glass flasks of dimensions that allow a sufficient volume of culture for measurements during the test and a sufficient mass transfer of CO2 from the atmosphere (see paragraph 30).
Se recomandă două medii alternative de cultură, mediul OCDE și mediul AAP.
Note that the liquid volume must be sufficient for analytical determinations (see paragraph 37).
Compozițiile acestor medii sunt prezentate în apendicele 3.
In addition some or all of the following equipment may be required:
Trebuie reținut că valoarea inițială a pH-ului și capacitatea de tamponare (care reglează creșterea pH-ului) pentru cele două medii sunt diferite.
Culturing apparatus:
Prin urmare, rezultatele testelor pot fi diferite, în funcție de mediul folosit, în special în cazul testării de substanțe chimice ionizante.
a cabinet or chamber is recommended, in which the chosen incubation temperature can be maintained at ± 2 °C.
Concentrația biomasei inițiale
Light measurement instruments:
Biomasa inițială din culturile de testare trebuie să fie egală în toate aceste culturi și suficient de scăzută pentru a permite creșterea exponențială pe parcursul întregii perioade de incubație fără riscul de epuizare a nutrienților.
it is important to note that the method of measurement of light intensity, and in particular the type of receptor (collector), may affect the measured value.
Biomasa inițială nu ar trebui să depășească 0,5 mg/l ca greutate uscată.
Measurements should preferably be made using a spherical (4 π) receptor (which responds to direct and reflected light from all angles above and below the plane of measurement), or a 2 π receptor (which responds to light from all angles above the measurement plane).
Se recomandă următoarele concentrații celulare inițiale:
Apparatus to determine algal biomass.
5 × 103 – 104 celule/ml
Cell count, which is the most frequently used surrogate parameter for algal biomass, may be made using an electronic particle counter, a microscope with counting chamber, or a flow cytometer.
2-5 × 103 celule/ml
Other biomass surrogates can be measured using a flow cytometer, fluorimeter, spectrophotometer or colorimeter.
104 celule/ml
A conversion factor relating cell count to dry weight is useful to calculate.
5 × 104 – 105 celule/ml
In order to provide useful measurements at low biomass concentrations when using a spectrophotometer, it may be necessary to use cuvettes with a light path of at least 4 cm.
Concentrațiile substanței chimice de testare
Test organisms
Intervalul de concentrație în care pot apărea efecte poate fi stabilit pe baza rezultatelor testelor de stabilire a intervalului.
Several species of non-attached microalgae and cyanobacteria may be used.
Pentru testul definitiv final ar trebui selectate cel puțin cinci concentrații dispuse în serie geometrică cu un factor care să nu depășească 3,2.
The strains listed in Appendix 2 have been shown to be suitable using the test procedure specified in this test method.
Pentru substanțele chimice de testare care prezintă o curbă concentrație-răspuns constantă poate fi justificat un factor mai mare.
If other species are used, the strain and/or origin should be reported.
Seriile de concentrații ar trebui să acopere, de preferat, intervalul care provoacă o inhibare de 5-75 % a vitezei de creștere a algelor.
Confirm that exponential growth of the selected test alga can be maintained throughout the test period under the prevailing conditions.
Probe duplicat și probe de control
Growth medium
Proiectul testului ar trebui să includă trei probe duplicat la fiecare concentrație de testare.
The compositions of these media are shown in Appendix 3.
Numărul de probe de control duplicate trebuie să fie de cel puțin trei, recomandându-se să depășească de două ori numărul probelor duplicat folosite pentru fiecare concentrație de testare.
Note that the initial pH value and the buffering capacity (regulating pH increase) of the two media are different.
Pentru determinările analitice ale concentrațiilor substanței chimice de testare se poate pregăti un set separat de soluții de testare (a se vedea punctele 36 și 38).
Therefore the results of the tests may be different depending on the medium used, particularly when testing ionising chemicals.
Dacă se utilizează un solvent pentru solubilizarea substanței chimice de testare, în proiectul testului trebuie incluse probe de control suplimentare conținând solventul în aceeași concentrație cu cea folosită în cazul culturilor de testare.
Modification of the growth media may be necessary for certain purposes, e.g. when testing metals and chelating agents or testing at different pH values.
Pregătirea culturii de inocul
Use of a modified medium should be described in detail and justified (3) (4).
În scopul adaptării algei testate la condițiile de testare și al asigurării faptului că algele se află în faza de creștere exponențială când sunt folosite pentru inocularea soluțiilor de testare, se pregătește o cultură de inocul în mediul de testare cu 2-4 zile înainte de începerea testului.
Initial biomass concentration
Biomasa de alge ar trebui ajustată pentru a permite creșterii exponențiale să predomine în cultura de inocul până la începerea testului.
The initial biomass in the test cultures must be the same in all test cultures and sufficiently low to allow exponential growth throughout the incubation period without risk of nutrient depletion.
Cultura de inocul trebuie incubată în aceleași condiții ca și culturile de testare.
The initial biomass should not exceed 0,5 mg/l as dry weight.
Se măsoară creșterea biomasei din cultura de inocul pentru a se verifica dacă creșterea se încadrează în intervalul normal pentru sușa testată în condițiile de cultură.
The following initial cell concentrations are recommended:
Un exemplu al procedurii pentru cultura algelor este descris în apendicele 4.
5 × 103 – 104 cells/ml
Pentru a se evita diviziunile celulare sincrone în timpul testului, poate fi necesară o a doua etapă de propagare a culturii de inocul.
2-5 × 103 cells/ml
Pregătirea soluțiilor de testare
104 cells/ml
Toate soluțiile de testare trebuie să conțină aceleași concentrații de mediu de cultură și de biomasă inițială a algelor testate.
5 × 104 – 105 cells/ml
Soluțiile de testare ale concentrațiilor alese se pregătesc de obicei prin amestecarea unei soluții stoc a substanței chimice de testare cu mediu de cultură și cultură de inocul.
Concentrations of test chemical
De obicei, soluțiile stoc se pregătesc prin dizolvarea substanței chimice în mediul de testare.
The concentration range in which effects are likely to occur may be determined on the basis of results from range-finding tests.
Solvenții, cum ar fi acetona, alcoolul terț-butilic și dimetil-formamida, pot fi folosiți ca soluție vehicul pentru adăugarea în mediul de testare de substanțe chimice cu solubilitate scăzută în apă (2)(3).
For the final definitive test at least five concentrations, arranged in a geometric series with a factor not exceeding 3.2, should be selected.
Concentrația solventului nu trebuie să depășească 100 μl/l, aceeași concentrație de solvent adăugându-se în toate culturile (inclusiv în probele de control) din seria de testare.
For test chemicals showing a flat concentration response curve a higher factor may be justified.
Incubația
The concentration series should preferably cover the range causing 5-75 % inhibition of algal growth rate.
Se acoperă vasele de testare cu capace care permit trecerea aerului.
Replicates and controls
Vasele se agită, după care se introduc în echipamentul pentru cultură.
The test design should include three replicates at each test concentration.
Este necesar ca, în timpul testului, algele să fie menținute în suspensie și să se faciliteze transferul de CO2.
If determination of the NOEC is not required, the test design may be altered to increase the number of concentrations and reduce the number of replicates per concentration.
În acest scop, se vor folosi mișcări de agitare și amestecare constante.
The number of control replicates must be at least three, and ideally should be twice the number of replicates used for each test concentration.
Culturile ar trebui menținute la o temperatură cuprinsă între 21 și 24 °C, controlate la ± 2 °C.
A separate set of test solutions may be prepared for analytical determinations of test chemical concentrations (see paragraphs 36 and 38).
În cazul altor specii decât cele enumerate în apendicele 2, cum ar fi specii tropicale, pot fi adecvate temperaturi mai ridicate, cu condiția îndeplinirii criteriilor de validitate.
When a solvent is used to solubilise the test chemical, additional controls containing the solvent at the same concentration as used in the test cultures must be included in the test design.
Se recomandă ca flacoanele să fie așezate aleatoriu și repoziționate în fiecare zi în incubator.
Preparation of inoculum culture
PH-ul mediului de control nu trebuie să crească cu mai mult de 1,5 unități în timpul testului.
In order to adapt the test alga to the test conditions and ensure that the algae are in the exponential growth phase when used to inoculate the test solutions, an inoculum culture in the test medium is prepared 2-4 days before start of the test.
În cazul metalelor și substanțelor chimice care se ionizează parțial la un pH aproximativ egal cu pH-ul de testare, poate fi necesară limitarea devierii pH-ului în scopul obținerii de rezultate reproductibile și bine definite.
The algal biomass should be adjusted in order to allow exponential growth to prevail in the inoculum culture until the test starts.
O deviere de < 0,5 unități de pH este posibilă din punct de vedere tehnic și poate fi obținută prin asigurarea unei viteze adecvate de transfer de masă CO2 din aerul înconjurător către soluția de testare, de exemplu prin creșterea vitezei de agitare.
Incubate the inoculum culture under the same conditions as the test cultures.
O altă posibilitate constă în reducerea necesarului de CO2 prin reducerea biomasei inițiale sau a duratei testului.
Measure the increase in biomass in the inoculum culture to ensure that growth is within the normal range for the test strain under the culturing conditions.
Suprafața unde sunt incubate culturile trebuie să primească iluminare fluorescentă continuă și uniformă, de tipul celei «alb-rece» sau «lumina zilei».
An example of the procedure for algal culturing is described in Appendix 4.
Sușele de alge și cianobacterii sunt diferite din punctul de vedere al necesarului de lumină.
To avoid synchronous cell divisions during the test a second propagation step of the inoculum culture may be required.
Intensitatea luminii se selectează la un nivel adecvat pentru organismul de testare folosit.
Preparation of test solutions
În cazul speciilor recomandate de alge verzi, intensitatea luminii la nivelul soluțiilor de testare se selectează în intervalul 60-120 μE · m– 2 s– 1 când se măsoară în intervalul de lungimi de undă eficient din punct de vedere fotosintetic de 400-700 nm, folosindu-se un receptor corespunzător.
All test solutions must contain the same concentrations of growth medium and initial biomass of test alga.
Unele specii, în special Anabaena flos-aquae, cresc bine la intensități scăzute ale luminii și pot fi afectate negativ la intensități ridicate.
Test solutions of the chosen concentrations are usually prepared by mixing a stock solution of the test chemical with growth medium and inoculum culture.
În cazul unor astfel de specii se selectează o intensitate luminoasă medie în intervalul 40-60 μE · m– 2 · s– 1.
Stock solutions are normally prepared by dissolving the chemical in test medium.
(În cazul instrumentelor de măsurare a luminii calibrate în lux, un interval echivalent de 4440-8880 lucși pentru lumină albă rece corespunde aproximativ intensității luminoase recomandate de 60-120 μE · m– 2 · s– 1).
Solvents, e.g. acetone, t-butyl alcohol and dimethyl formamide, may be used as carriers to add chemicals of low water solubility to the test medium (2)(3).
Intensitatea luminoasă trebuie menținută la ± 15 % de intensitatea luminoasă medie de deasupra zonei de incubație.
The concentration of solvent should not exceed 100 μl/l, and the same concentration of solvent should be added to all cultures (including controls) in the test series.
Durata testului
Incubation
Durata normală a testului este de 72 de ore.
Cap the test vessels with air-permeable stoppers.
Cu toate acestea, pot fi folosite durate mai lungi sau mai scurte ale testului, cu condiția respectării tuturor criteriilor de validitate de la punctul 11.
The vessels are shaken and placed in the culturing apparatus.
Măsurători și determinări analitice
During the test it is necessary to keep the algae in suspension and to facilitate transfer of CO2.
Biomasa de alge din fiecare flacon se determină cel puțin o dată pe zi în timpul perioadei de testare.
To this end constant shaking or stirring should be used.
Dacă măsurătorile se fac pe volume mici, extrase din soluția de testare cu o pipetă, acestea nu se înlocuiesc.
The cultures should be maintained at a temperature in the range of 21 to 24 °C, controlled at ± 2 °C.
Măsurarea biomasei are loc prin numărarea manuală a celulelor cu ajutorul unui microscop sau al unui contor electronic de particule (în funcție de numărul de celule și/sau de biovolum).
For species other than those listed in Appendix 2, e.g. tropical species, higher temperatures may be appropriate, providing that the validity criteria can be fulfilled.
Tehnici alternative, cum ar fi citometria de flux, fluorescența clorofilei in vitro sau in vivo (5) (6) sau densitatea optică, pot fi folosite dacă se demonstrează o corelație satisfăcătoare cu biomasa pentru intervalul de cantități de biomasă prezente în test.
It is recommended to place the flasks randomly and to reposition them daily in the incubator.
PH-ul soluțiilor se măsoară la începutul și la sfârșitul testului.
The pH of the control medium should not increase by more than 1,5 units during the test.
Dacă este disponibilă o procedură analitică de determinare a substanței chimice de testare în intervalul de concentrație utilizat, soluțiile de testare ar trebui analizate pentru a fi verificate concentrațiile inițiale și menținerea concentrațiilor de expunere în timpul testului.
For metals and chemicals that partly ionise at a pH around the test pH, it may be necessary to limit the pH drift to obtain reproducible and well defined results.
Analizarea concentrației substanței chimice de testare la începutul și la sfârșitul testului unei concentrații de testare scăzute și înalte, precum și o concentrație în jurul valorii anticipate EC50 pot fi suficiente în cazurile în care este probabil ca variația concentrațiilor de expunere să fie de mai puțin de 20 % față de valorile nominale din timpul testului.
A drift of < 0,5 pH units is technically feasible and can be achieved by ensuring an adequate CO2 mass transfer rate from the surrounding air to the test solution, e.g. by increasing the shaking rate.
Analizarea tuturor concentrațiilor de testare la începutul și la sfârșitul testului este recomandată în cazul concentrațiilor care nu rămân în intervalul de 80-120 % din concentrația nominală.
Another possibility is to reduce the demand for CO2 by reducing the initial biomass or the test duration.
În cazul substanțelor chimice de testare volatile, instabile sau puternic adsorbante, se recomandă recoltarea suplimentară de probe la intervale de 24 de ore în timpul perioadei de expunere în scopul definirii cu mai mare precizie a pierderii de substanță chimică de testare.
The surface where the cultures are incubated should receive continuous, uniform fluorescent illumination e.g. of “cool-white” or “daylight” type.
Pentru aceste substanțe chimice sunt necesare probe duplicat suplimentare.
Strains of algae and cyanobacteria vary in their light requirements.
În toate cazurile, determinarea concentrațiilor substanței chimice de testare trebuie efectuată doar în unul dintre vasele conținând probe duplicat la fiecare concentrație de testare (sau în conținutul vaselor grupate în funcție de proba duplicat).
The light intensity should be selected to suit the test organism used.
Mediile de testare pregătite special pentru analiza concentrațiilor de expunere în timpul testului ar trebui tratate identic cu cele folosite pentru testare, adică ar trebui să se inoculeze cu alge și să fie incubate în condiții identice.
For the recommended species of green algae, select the light intensity at the level of the test solutions from the range of 60-120 μE · m– 2 · s– 1 when measured in the photosynthetically effective wavelength range of 400-700 nm using an appropriate receptor.
Dacă este necesară analiza concentrației substanței chimice de testare dizolvate, se poate impune separarea algelor de mediu.
Some species, in particular Anabaena flos-aquae, grow well at lower light intensities and may be damaged at high intensities.
Este de preferat ca separarea să aibă loc prin centrifugare la o forță gravitațională scăzută, suficientă pentru depunerea algelor.
For such species an average light intensity in the range 40-60 μE · m– 2 · s– 1 should be selected.
Dacă se poate dovedi menținerea satisfăcătoare, pe toată durata testului, a concentrației substanței chimice de testare în limita a ± 20 % din cea nominală sau cea măsurată inițial, atunci analiza rezultatelor poate avea loc pe baza valorilor nominale sau măsurate inițial.
(For light-measuring instruments calibrated in lux, an equivalent range of 4440 - 8880 lux for cool white light corresponds approximately to the recommended light intensity 60-120 μE · m– 2 · s– 1).
Dacă abaterea de la concentrația inițială nominală sau măsurată nu se află în limita a ± 20 %, analiza rezultatelor ar trebui să fie bazată pe media geometrică a concentrației din timpul expunerii sau pe modelele care descriu scăderea concentrației substanței chimice testate (3)(7).
Maintain the light intensity within ±15 % from the average light intensity over the incubation area.
Testul de inhibare a creșterii algelor este un sistem de testare mai dinamic decât majoritatea testelor de toxicitate acvatică pe termen scurt.
Test duration
Prin urmare, concentrațiile de expunere reale se pot dovedi dificil de definit, în special în cazul substanțelor chimice adsorbante testate la concentrații scăzute.
Test duration is normally 72 hours.
În astfel de cazuri, dispariția substanței chimice de testare din soluție prin adsorbție în biomasa de alge în creștere nu înseamnă că aceasta s-a pierdut din sistemul de testare.
However, shorter or longer test durations may be used provided that all validity criteria in paragraph 11 can be met.
În cursul analizării rezultatului testului, ar trebui să se verifice dacă o scădere a concentrației substanței chimice de testare în cursul testului este însoțită de o reducere a inhibării creșterii.
Measurements and analytical determinations
Dacă acesta este cazul, poate fi luată în considerare aplicarea unui model adecvat de descriere a scăderii concentrației substanței chimice de testare (7).
The algal biomass in each flask is determined at least daily during the test period.
Dacă nu este cazul, analizarea rezultatelor se poate întemeia pe valorile concentrațiilor inițiale (nominale sau măsurate).
If measurements are made on small volumes removed from the test solution by pipette, these should not be replaced.
Alte observații
Measurement of biomass is done by manual cell counting by microscope or an electronic particle counter (by cell counts and/or biovolume).
Observația microscopică se efectuează în scopul verificării stării normale și sănătoase a culturii de inocul și pentru observarea oricărei stări anormale a algelor (care poate fi provocată de expunerea la substanța chimică de testare) la sfârșitul testului.
Alternative techniques, e.g. flow cytometry, in vitro or in vivo chlorophyll fluorescence (5) (6), or optical density can be used if a satisfactory correlation with biomass can be demonstrated over the range of biomass occurring in the test.
Test limită
Measure the pH of the solutions at the beginning and at the end of the test.
În unele condiții, de exemplu atunci când un test preliminar arată că substanța chimică de testare nu are efecte toxice la concentrații de până la 100 mg/l sau până la limita solubilității sale în mediul de testare (oricare dintre ele este mai scăzută), se poate realiza un test la valori-limită, care presupune compararea răspunsurilor unui grup de control și ale unui grup supus tratamentului (100 mg/l sau o concentrație egală cu limita solubilității).
Provided an analytical procedure for determination of the test chemical in the concentration range used is available, the test solutions should be analysed to verify the initial concentrations and maintenance of the exposure concentrations during the test.
Se recomandă ca acest test să fie confirmat prin analizarea concentrației de expunere.
Analysis of the concentration of the test chemical at the start and end of the test of a low and high test concentration and a concentration around the expected EC50 may be sufficient where it is likely that exposure concentrations will vary less than 20 % from nominal values during the test.
Unui test la valori-limită i se aplică toate condițiile de testare și criteriile de validitate descrise anterior, cu excepția faptului că numărul de probe duplicat supuse tratamentului ar trebui să fie de cel puțin șase.
Analysis of all test concentrations at the beginning and at the end of the test is recommended where concentrations are unlikely to remain within 80-120 % of the nominal concentration.
Variabilele de răspuns din grupul de control și din cel supus tratamentului pot fi analizate folosind un test statistic de comparare a mediilor, cum ar fi un test t (Student).
For volatile, unstable or strongly adsorbing test chemicals, additional samplings for analysis at 24 hour intervals during the exposure period are recommended in order to better define loss of the test chemical.
Dacă varianțele acestor două grupuri sunt inegale, ar trebui să se efectueze un test t ajustat pentru varianțe inegale.
For these chemicals, extra replicates may be needed.
Reprezentarea grafică a curbelor de creștere
In all cases, determination of test chemical concentrations need only be performed on one replicate vessel at each test concentration (or the contents of the vessels pooled by replicate).
Biomasa din vasele de testare poate fi exprimată în unități ale parametrului înlocuitor folosit pentru măsurare (de exemplu numărul de celule, fluorescența).