natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Survival
Distanța dintre tavă și pereții din sticlă trebuie să fie de cel puțin 3 cm pentru a se asigura că eliberarea gameților nu se realizează în afara tăvii.
Fish should be examined daily during the test period and any mortality should be recorded and the dead fish removed as soon as possible.
Ouăle depuse pe tavă cad printre ochiurile sitei și pot fi prelevate la 45-60 de minute după pornirea iluminării.
Dead fish should not be replaced in either the control or treatment vessels.
Ouăle transparente nu se lipesc și pot fi ușor numărate în condiții de iluminare transversală.
Sex of fish that die during the test should be determined by macroscopic evaluation of the gonads.
Atunci când se utilizează cinci femele pentru fiecare vas, numărul de ouă este considerat mic dacă este de maximum 20 pe zi, mediu dacă este de maximum 100 și mare dacă este peste 100.
Behaviour and appearance
Tava de reproducere trebuie îndepărtată, ouăle colectate, iar tava reintrodusă în vasul de testare, fie seara la o oră cât mai târzie, fie dimineața foarte devreme.
Any abnormal behaviour (relative to controls) should be noted;
Perioada până la reintroducere nu trebuie să depășească o oră, întrucât, în caz contrar, semnalul substratului de reproducere poate induce împerecherea individuală și eliberarea gameților într-un moment neobișnuit.
this might include signs of general toxicity including hyperventilation, uncoordinated swimming, loss of equilibrium, and atypical quiescence or feeding.
Dacă situația impune introducerea mai târziu a tăvii de reproducere, aceasta trebuie să se efectueze cu cel puțin 9 ore după pornirea iluminării.
Additionally external abnormalities (such as haemorrhage, discoloration) should be noted.
La această oră târzie din zi, eliberarea gameților nu mai este indusă.
Such signs of toxicity should be considered carefully during data interpretation since they may indicate concentrations at which biomarkers of endocrine activity are not reliable.
Apendicele 4 B
Such behavioural observations may also provide useful qualitative information to inform potential future fish testing requirements.
Substratul de reproducere pentru Pimephales promelas
For example, territorial aggressiveness in normal males or masculinised females has been observed in fathead minnows under androgenic exposure;
Două sau trei plăci și tăvi de reproducere din plastic/ceramică/sticlă sau oțel inoxidabil combinate sunt așezate în fiecare cameră de testare (de exemplu, un jgheab semicircular de culoare gri cu o lungime de 80 mm, așezat pe o tavă cu margini ridicate cu o lungime de 130 mm) (a se vedea imaginea).
in zebrafish, the characteristic mating and spawning behaviour after the dawn onset of light is reduced or hindered by oestrogenic or anti-androgenic exposure.
S-a demonstrat că plăcile din PVC sau din ceramică tratate în mod corespunzător sunt adecvate pentru un substrat de reproducere (Thorpe et al, 2007).
Because some aspects of appearance (primarily colour) can change quickly with handling, it is important that qualitative observations be made prior to removal of animals from the test system.
Se recomandă ca plăcile să fie șlefuite pentru a îmbunătăți aderența.
Experience to date with fathead minnows suggests that some endocrine active chemicals may initially induce changes in the following external characteristics:
Tava trebuie să fie, de asemenea, prevăzută cu un ecran de protecție pentru a împiedica accesul peștilor la ouăle căzute, cu excepția cazului în care eficiența aderenței ouălor a fost demonstrată pentru substratul de reproducere utilizat.
body colour (light or dark), coloration patterns (presence of vertical bands), and body shape (head and pectoral region).
Baza este concepută pentru a reține toate ouăle care nu aderă la suprafața plăcilor și care, în consecință, ar cădea pe fundul bazinului (sau acele ouă să fie depuse direct pe baza plană din plastic).
Therefore observations of physical appearance of the fish should be made over the course of the test, and at conclusion of the study
Toate substraturile de reproducere trebuie curățate înainte de utilizare timp de cel puțin 12 ore în apă de diluție.
Humane killing of fish
Apendicele 5 A
At day 21, i.e. at termination of the exposure, the fish should be euthanized with appropriate amounts of Tricaine (Tricaine methane sulfonate, Metacain, MS-222 (CAS 886-86-2), 100-500 mg/l buffered with 300 mg/l NaHCO3 (sodium bicarbonate, CAS 144-55-8) to reduce mucous membrane irritation; blood or tissue is then sampled for vitellogenin determination, as explained in the Vitellogenin section.
Evaluarea caracteristicilor sexuale secundare la Pimephales promelas pentru detectarea anumitor substanțe chimice care acționează la nivel endocrin
Observation of secondary sex characteristics
Prezentare generală
Some endocrine active chemicals may induce changes in specialised secondary sex characteristics (number of nuptial tubercles in male fathead minnow, papillary processes in male medaka).
În cazul adulților de Pimephales promelas, caracteristicile aspectului fizic potențial importante în cadrul testării perturbatorilor endocrini includ culoarea corpului (deschisă/închisă), modelele de colorație (prezența sau absența unor dungi verticale), forma corpului (forma capului și a regiunii pectorale, distensia abdomenului), precum și caracteristicile sexuale secundare specializate (numărul și dimensiunea tuberculilor nupțiali, dimensiunea depozitului subcutanat dorsal și ovipozitorul).
Notably, chemicals with certain modes of action may cause abnormal occurrence of secondary sex characteristic in animals of the opposite sex;
Tuberculii nupțiali sunt situați pe cap (depozit subcutanat dorsal) la masculii de Pimephales promelas activi din punct de vedere reproductiv și sunt de obicei dispuși bilateral simetric (Jensen et al.
for example, androgen receptor agonists, such as trenbolone, methyltestosterone and dihydrotestosterone, can cause female fathead minnows to develop pronounced nuptial tubercles or female medaka to develop papillary processes (11, 20, 21).
2001).
It also has been reported that oestrogen receptor agonists can decrease nuptial tubercle numbers and size of the dorsal nape pad in adult males (25, 26).
Femelele de control și masculii și femelele tinere nu dezvoltă tuberculi (Jensen et al.
The number and size of nuptial tubercles in fathead minnow and papillary processes in medaka can be quantified directly or more practically in preserved specimens.
La masculi, numărul de tuberculi individuali situați în jurul ochilor și între nări este de maximum opt.
Recommended procedures for the evaluation of secondary sex characteristics in fathead minnow and medaka are available from Appendix 5A and Appendix 5B, respectively.
Cei mai mulți și mai mari tuberculi sunt așezați sub forma a două șiruri paralele imediat sub nări și deasupra gurii.
Vitellogenin (VTG)
Numeroși pești au grupuri de tuberculi sub mandibulă;
Blood is collected from the caudal artery/vein with a heparinised microhematocrit capillary tubule, or alternatively by cardiac puncture with a syringe.
cei situați cel mai aproape de gură apar în general într-o singură pereche, în timp ce setul situat mai ventral se poate compune din până la patru tuberculi.
Depending upon the size of the fish, collectable blood volumes generally range from 5 to 60 μl per individual for fathead minnows and 5-15 μl per individual for zebrafish.
Numărul efectiv de tuberculi este rareori mai mare de 30 (interval 18-28; Jensen et al. 2001).
Plasma is separated from the blood via centrifugation, and stored with protease inhibitors at – 80 °C, until analysed for vitellogenin.
Tuberculii predominanți (din punctul de vedere al numărului) sunt prezenți sub forma unei structuri singulare, relativ rotunde, cu înălțimea aproximativ echivalentă cu raza.
Alternatively, in medaka the liver will be used, and in zebrafish the head/tail homogenate can be used as tissue-source for vitellogenin determination (Appendix 6).
Cei mai mulți masculi activi din punct de vedere reproductiv au, de asemenea, cel puțin câțiva tuberculi măriți și pronunțați astfel încât nu pot fi distinși ca structuri individuale.
The measurement of VTG should be based upon a validated homologous ELISA method, using homologous VTG standard and homologous antibodies.
Unele tipuri de substanțele chimice cu efecte la nivel endocrin pot cauza apariția anormală a unor caracteristici sexuale secundare la sexul opus;
It is recommended to use a method capable to detect VTG levels as low as few ng/ml plasma (or ng/mg tissue), which is the background level in unexposed male fish.
de exemplu, agoniști ai receptorilor androgenici, cum ar fi 17β-metiltestosteronul sau 17β-trenbolonul, pot cauza apariția de tuberculi nupțiali la femelele de Pimephales promelas (Smith 1974; Ankley et al.
Quality control of vitellogenin analysis will be accomplished through the use of standards, blanks and at least duplicate analyses.
2001; 2003), în timp ce agoniști ai receptorilor estrogenici pot reduce numărul sau dimensiunea tuberculilor nupțiali la masculi (Miles-Richardson et al.
For each ELISA method, a test for matrix effect (effect of sample dilution) should be run to determine the minimum sample dilution factor.
1999; Harries et al.
Each ELISA plate used for VTG assays should include the following quality control samples:
2000).
at least 6 calibration standards covering the range of expected vitellogenin concentrations, and at least one non-specific binding assay blank (analysed in duplicate).
În continuare este prezentată o descriere a caracterizării tuberculilor nupțiali la Pimephales promelas pe baza procedurilor utilizate în cadrul laboratorului Agenției de Protecție a Mediului din SUA din Duluth, Minnesota.
Absorbance of these blanks should be less than 5 % of the maximum calibration standard absorbance.
Produsele și/sau echipamentele specifice pot fi înlocuite cu materiale comparabile aflate la dispoziție.
At least two aliquots (well-duplicates) of each sample dilution will be analysed.
Vizualizarea se realizează cel mai bine cu ajutorul unei lupe iluminate sau al unui microscop de disecție 3X iluminat.
Well-duplicates that differ by more than 20 % should be re-analysed.
Peștele este observat din partea dorsală și cu partea anterioară înainte (capul spre observator).
The correlation coefficient (R2) for calibration curves should be greater than 0,99.
Se așează peștele într-o placă Petri mică (de exemplu, cu diametrul de 100 mm), cu partea anterioară înainte și cu partea ventrală în jos.
If the nominal concentrations trend away from the calibration regression line (e.g. at lower concentrations), it may be necessary to split the calibration curve into low and high ranges or to use a nonlinear model to adequately fit the absorbance data.
Se numără și se clasifică tuberculii.
If the curve is split, both line segments should have R2 > 0,99.
Se repetă observația pe partea ventrală a capului după ce s-a așezat peștele în placa Petri cu partea dorsală anterioară înainte.
The ratio of the expected concentration to the measured concentration will be reported along with the results from each set of assays performed on that day.
Au fost identificate șase zone specifice pentru evaluarea prezenței și dezvoltării de tuberculi la adulții de Pimephales promelas.
Evaluation of Biomarker Responses by Analysis of Variance (ANOVA)
A fost creat un model pentru a cartografia localizarea și cantitatea tuberculilor prezenți (a se vedea partea de încheiere a prezentului apendice).
To identify potential endocrine activity of a chemical, responses are compared between treatments and control groups using analysis of variance (ANOVA).
Numărul tuberculilor este înregistrat, iar dimensiunea lor poate fi clasificată cantitativ astfel:
Where a solvent control is used, an appropriate statistical test should be performed between the dilution water and solvent controls for each endpoint.
0- absent, 1-prezent, 2-mărit și 3-pronunțat pentru fiecare organism (Fig.
Guidance on how to handle dilution water and solvent control data in the subsequent statistical analysis can be found in OECD, 2006c (27).
1).
All biological response data should be analysed and reported separately by sex.
Categoria 0 – absența oricărui tubercul.
If the required assumptions for parametric methods are not met — non-normal distribution (e.g. Shapiro-Wilk's test) or heterogeneous variance (Bartlett's test or Levene's test), consideration should be given to transforming the data to homogenise variances prior to performing the ANOVA, or to carrying out a weighted ANOVA.
Categoria 1 – tubercul prezent, identificat ca orice tubercul care are un singur punct a cărui înălțime este aproape echivalentă cu raza sa (diametru).
Dunnett's test (parametric) on multiple pair-wise comparisons or a Mann-Whitney with Bonferroni adjustment (non-parametric) may be used for non-monotonous dose-response.
Categoria 2 – tubercul mărit, identificat prin țesutul sub formă de asterisc, prezentând de obicei o bază radială mare cu șanțuri sau caneluri care pornesc din centru.
Other statistical tests may be used (e.g. Jonckheere-Terpstra test or Williams test) if the dose-response is approximately monotone.
Cupola tuberculului este adesea mai neregulată, însă uneori poate fi întrucâtva rotunjită.
A statistical flowchart is provided in Appendix 8 to help in the decision on the most appropriate statistical test to be used.
Categoria 3 – tubercul pronunțat, de obicei foarte mare și rotunjit cu o structură mai puțin definită.
Additional information can also be obtained from the OECD Document on Current Approaches to Statistical Analysis of Ecotoxicity Data (27).
Uneori, acești tuberculi se grupează formând o singură masă de-a lungul unei zone sau a mai multor zone (B, C și D, descrise mai jos).
Reporting of test results
Colorația și forma sunt similare celor din categoria 2, însă, uneori, sunt destul de greu de distins.
Study data should include:
Utilizând acest sistem de clasificare va conduce în general la un scor < 50 la un mascul normal din grupul de control care posedă un număr de tuberculi cuprins între 18 și 20 (Jensen et al.
Testing facility:
2001).
Responsible personnel and their study responsibilities
Numărul efectiv de tuberculi la unii pești poate fi mai mare decât cel indicat în casetele model (apendicele A) pentru o anumită zonă de clasificare.
Each laboratory should have demonstrated proficiency using a range of representative chemicals
În acest caz, cifrele suplimentare pot fi marcate în interior, la dreapta sau la stânga casetei.
Characterisation of test chemical
Prin urmare, modelul nu trebuie să afișeze o simetrie.
Solvent:
Localizați dorsal spre ventral în jurul marginii anterioare a ochilor.
Characterization of solvent (nature, concentration used)
De obicei multiplii la masculii maturi din grupul de control, absenți la femelele din grupul de control, dispuși în general în perechi (câte unul lângă fiecare ochi) sau singuri la femelele expuse la androgeni.
Justification of choice of solvent (if other than water)
B Tuberculii situați între nări (porii canalelor senzoriale).
Test animals:
De obicei dispuși în perechi la masculii din grupul de control la niveluri de dezvoltare mai mari (2- mărit sau 3- pronunțat).
Species and strain
Absenți la femelele din grupul de control, însă uneori prezenți și dezvoltați la femelele expuse la androgeni.
Supplier and specific supplier facility
C Tuberculii situați imediat anterior nărilor, paralel cu gura.
Details of animal acclimation procedure
Prezenți sau măriți la masculii mai puțin dezvoltați sau la femelele tratate cu androgeni.
Body weight of the fish at the start of the exposure (from a sub-sample of the fish stock)
D Tuberculi situați paralel cu linia gurii.
Test Conditions:
În general clasificați ca dezvoltați la masculii din grupul de control.
Test procedure used (test-type, loading rate, stocking density, etc.);
Absenți la femelele din grupul de control, însă prezenți la femelele expuse la androgeni.
Method of preparation of stock solutions and flow-rate;
E Tuberculii situați pe mandibulă, aproape de gură, de obicei de mici dimensiuni și în general dispuși în perechi.
The nominal test concentrations, weekly measured concentrations of the test solutions and analytical method used, means of the measured values and standard deviations in the test vessels and evidence that the measurements refer to the concentrations of the test chemical in true solution;
Variabili la masculii din grupul de control sau tratați și la femelele tratate.
Dilution water characteristics (including pH, hardness, alkalinity, temperature, dissolved oxygen concentration, residual chlorine levels, total organic carbon, suspended solids and any other measurements made)
F Tuberculii situați ventral față de E. De obicei de mici dimensiuni și dispuși în perechi.
Water quality within test vessels:
Prezenți la masculii din grupul de control și la femelele expuse la androgeni.
pH, hardness, temperature and dissolved oxygen concentration;
Model de tuberculi
Detailed information on feeding (e.g. type of food(s), source, amount given and frequency and analyses for relevant contaminants if available (e.g. PCBs, PAHs and organochlorine pesticides).
Clasificare numerică
Evidence that the controls met the acceptance criteria of the test;
rezent
Data on mortalities occurring in any of the test concentrations and control;
Data
Statistical analytical techniques used, treatment of data and justification of techniques used;
ărit
Data on biological observations of gross morphology, including secondary sex characteristics and vitellogenin;
Scor total
Results of the data analyses preferably in tabular and graphical form;
ronunțat
Incidence of any unusual reactions by the fish and any visible effects produced by the test chemical
Apendicele 5 B
This section contains a few considerations to be taken into account in the interpretation of test results for the various endpoints measured.
Mai jos este prezentată o descriere a măsurării proceselor papilare, care sunt caracteristici sexuale secundare ale Oryzias latipes.
It is important to have at least one treatment where there are no signs of toxic effects.
3).
For example, it is possible that production of VTG in females can also be affected by general toxicity and non-endocrine toxic modes of action, e.g. hepatotoxicity.
După ce se introduce corpul peștelui în formol neutru tamponat 10 %, se prinde regiunea anterioară a înotătoarei anale cu ajutorul unei pensete și se pliază timp de 30 de secunde pentru a menține deschisă înotătoarea anală.
Examples of the range of values encountered in control and treatment groups are available in the validation reports (1, 2, 3, 4).
După fixarea corpului peștelui în formol neutru 10 % tamponat timp de cel puțin 24 de ore, se scoate carcasa peștelui din tubul conic și se șterge formolul cu hârtie de filtru (sau un șervet de hârtie).
High VTG values in control males could compromise the responsiveness of the assay and its ability to detect weak oestrogen agonists.
Se așează peștele cu abdomenul în sus.
Low VTG values in control females could compromise the responsiveness of the assay and its ability to detect aromatase inhibitors and oestrogen antagonists.
Se taie apoi cu grijă înotătoarea anală cu ajutorul unei foarfeci mici de disecție (este de preferat să se taie înotătoarea anală cu puțin pterigiofor).
The validation studies were used to build that guidance.
Se prinde cu ajutorul unei pensete zona anterioară a înotătoarei anale excizate și se așează pe o lamelă din sticlă cu câteva picături de apă.
If a laboratory has not performed the assay before or substantial changes (e.g. change of fish strain or supplier) have been made it is advisable that a technical proficiency study is conducted.
Se acoperă apoi înotătoarea anală cu o altă lamelă din sticlă.
It is recommended that chemicals covering a range of modes of action or impacts on a number of the test endpoints are used.
Se procedează cu grijă pentru a nu se zgâria procesele papilare în momentul prinderii înotătoarei anale cu penseta.
In general, vitellogenin measurements should be considered positive if there is a statistically significant increase in VTG in males (p < 0,05), or a statistically significant decrease in females (p < 0,05) at least at the highest dose tested compared to the control group, and in the absence of signs of general toxicity.
Se notează pe foaia de lucru numărul de plăci comune care prezintă procese papilare pentru fiecare nervură a înotătoarei (de exemplu, prima nervură: 0, a doua nervură: 10, a treia nervură: 12, etc.) și se notează suma acestor numere în fișa Excel pentru fiecare pește în parte.
A positive result is further supported by the demonstration of a biologically plausible relationship between the dose and the response curve.
Dacă este necesar, se fotografiază înotătoarea anală și se determină pe fotografie numărul de plăci comune care prezintă procese papilare.
As mentioned earlier, the vitellogenin decrease may not entirely be of endocrine origin;
După măsurare, se introduce înotătoarea anală în tubul conic descris la punctul (1) și se depozitează.
however a positive result should generally be interpreted as evidence of endocrine activity in vivo, and should normally initiate actions for further clarification.
Fig.
Vitellogenin induction by 17β-estradiol and 17β-ethinylestradiol in male zebrafish (Danio rerio).
1.
Development of an ELISA for determination of the hepatic vitellogenin in Medaka (Oryzias latipes).
Diagramă care ilustrează diferența de formă și de dimensiune a înotătoarei anale între sexe.
Fish full life-cycle testing for androgen methyltestosterone on medaka (Oryzias latipes).
A, mascul;
Screening and testing for endocrine disruption in fish-biomarkers as “signposts”, not “traffic lights”, in risk assessment.
B, femelă.
Effects of waterborne exposure to 17β-estradiol on secondary sex characteristics and gonads of the fathead minnow (Pimephales promelas).
Fig.
Villeneuve and G.T.
2.
Ankley.
A, Procese papilare pe plăcile comune ale înotătoarei anale.
Abbreviations & definitions
J.P., placă comună;
Chemical
A.S., spațiu axial;
A substance or a mixture
P., proces.
Coefficient of variation.
B, Extremitatea distală a înotătoarei anale.
Loading rate
Fig.
Wet weight of fish per volume of water.
3.
Stocking density
Fotografia unui corp de pește care ilustrează locul inciziei atunci când gonada este fixată într-o altă soluție de fixare decât formol neutru 10 % tamponat.
Number of fish per volume of water.
În acest caz, corpul restant va fi tăiat între zona anterioară a înotătoarei anale și anus cu ajutorul unei lame tăietoare (linia roșie), iar capul peștelui va fi introdus în soluția de fixare pentru gonade și partea corpului dinspre coadă va fi introdusă în formol neutru 10 % tamponat.
VTG (Vitellogenin)
Procesele papilare apar în mod normal numai la masculii adulți și sunt situate pe nervurile înotătoarei, pornind de la cea de a doua până la cea de a șaptea sau a opta nervură de la extremitatea posterioară a înotătoarei anale (Fig.
Phospholipoglycoprotein precursor to egg yolk protein that normally occurs in sexually active females of all oviparous species.
1 și 2).
HPG axis
Cu toate acestea, procesele papilare apar rareori pe prima nervură de la extremitatea posterioară a înotătoarei anale.
Hypothalamic-pituitary-gonadal axis.
Această procedură de operare standard (POS) cuprinde măsurarea proceselor de pe prima nervură a înotătoarei (numărul nervurilor este calculat în cadrul acestei POS pornind de la extremitatea posterioară a înotătoarei anale).
MTC
Proceduri recomandate de prelevare a probelor pentru analiza vitelogeninei
Maximum Tolerated Concentration, representing about 10 % of the LC50.
Se procedează cu grijă pentru a evita contaminarea încrucișată între probele VTG ale masculilor și femelelor.
Experimental conditions for the fish endocrine screening assay
Procedura 1 A:
Recommended species
Pimephales promelas, prelevare de sânge din vena/artera caudală
Fathead minnow
După anesteziere, pedunculul caudal este parțial secționat cu o lamă de bisturiu și se recoltează sânge din vena/artera caudală cu un tub capilar heparinizat microhematocrit.