natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Several studies are available in the scientific literature to document this type of response in fathead minnow (20) and medaka (21).
Procedura de testare utilizată (tipul testului, rata de încărcare, densitatea populației, etc.);
A decrease in secondary sex characteristics in males should be interpreted with caution because of low statistical power, and should be based on expert judgement and weight of evidence.
Metoda de preparare a soluțiilor stoc și debitul;
There are limitations to the use of zebrafish in this assay, due to the absence of quantifiable secondary sex characteristics responsive to androgenic acting chemicals.
Concentrațiile nominale de testare, concentrațiile măsurate săptămânal ale soluțiilor de testare și metoda analitică utilizată, mediile valorilor măsurate și deviațiile standard în vasele de testare și dovada faptului că măsurătorile se referă la concentrațiile substanței chimice de testare în soluție veritabilă;
In the fathead minnow, the main indicator of exogenous androgenic exposure is the number of nuptial tubercles located on the snout of the female fish.
Caracteristicile apei de diluție (incluzând pH, duritate, alcalinitate, temperatură, concentrația oxigenului dizolvat, nivelurile de clor rezidual, carbonul organic total, solidele în suspensie și orice altă măsurătoare efectuată)
In the medaka, the number of papillary processes constitutes the main marker of exogenous exposure to androgenic chemicals in female fish.
Calitatea apei din vasele de testare:
Appendix 5A and Appendix 5B indicate the recommended procedures to follow for the evaluation of sex characteristics in fathead minnow and in medaka, respectively.
pH-ul, duritatea, temperatura și concentrația de oxigen dizolvat;
Definitions used in this test method are given in Appendix 1.
Informații detaliate privind hrănirea [de exemplu, tipul de aliment (alimente), sursa, cantitatea furnizată, frecvența și analizele privind contaminanți relevanți, dacă sunt disponibile (de exemplu, BPC, HAP și pesticide organoclorurate)].
In the assay, male and female fish in a reproductive status are exposed together in test vessels.
Dovada că soluțiile de control îndeplinesc criteriile de acceptare a testului;
Their adult and reproductive status enables a clear differentiation of each sex, and thus a sex-related analysis of each endpoint, and ensures their sensitivity towards exogenous chemicals.
Datele privind mortalitățile pentru fiecare nivel de concentrație de testare și pentru fiecare control;
At test termination, sex is confirmed by macroscopic examination of the gonads following ventral opening of the abdomen with scissors.
Tehnicile de analiză statistică utilizate, prelucrarea datelor și justificarea tehnicilor utilizate;
An overview of the relevant bioassay conditions is provided in Appendix 2.
Datele privind observațiile biologice de morfologie macroscopică, inclusiv caracteristicile sexuale secundare și vitelogenina;
The assay is normally initiated with fish sampled from a population that is in spawning condition;
Rezultatele analizelor datelor, de preferință sub formă de tabele și de grafice;
senescent animals should not be used.
Incidența oricărei reacții neobișnuite a peștilor și a oricărui efect vizibil provocat de substanța chimică de testare
Guidance on the age of fish and on the reproductive status is provided in the section on Selection of fish.
ORIENTĂRI PENTRU INTERPRETAREA ȘI ACCEPTAREA REZULTATELOR TESTULUI
The assay is conducted using three chemical exposure concentrations as well as a water control, and a solvent control if necessary.
Această secțiune include câteva observații care trebuie luate în considerare pentru interpretarea rezultatelor testului în ceea ce privește diferiții parametri măsurați.
Two vessels or replicates per treatment are used (each vessel containing 5 males and 5 females) in medaka and zebrafish, whereas four vessels or replicates per treatment are used (each vessel containing 2 males and 4 females) in fathead minnow.
Rezultatele trebuie interpretate cu precauție în cazul în care substanța chimică de testare pare a cauza semne evidente de toxicitate sau a afecta starea generală a animalului testat.
This is to accommodate the territorial behaviour of male fathead minnow while maintaining sufficient power of the assay.
La stabilirea intervalului de concentrații de testare, nu trebuie să se depășească concentrația maximă tolerată pentru a permite o interpretare corespunzătoare a datelor.
The exposure is conducted for 21 days and sampling of fish is performed at day 21 of exposure.
Este important să se aplice cel puțin un tratament care să nu determine semne ale unor efecte toxice.
On sampling at day 21, all animals are killed humanely.
Semnele de boală și semnele unor efecte toxice trebuie evaluate și raportate în detaliu.
Secondary sex characteristics are measured in fathead minnow and medaka (see Appendix 5A and Appendix 5B);
De exemplu, producția de VTG la femele poate fi, de asemenea, afectată de toxicitatea generală și de modurile de acțiune toxice neendocrine, de exemplu de hepatotoxicitate.
blood samples are collected for determination of vitellogenin in zebrafish and fathead minnow, alternatively head/tail can be collected for the determination of vitellogenin in zebrafish (Appendix 6);
Cu toate acestea, interpretarea efectelor poate fi consolidată prin alte niveluri de tratament, ele nefiind mascate de toxicitatea sistemică.
liver is collected for VTG analysis in medaka (Appendix 6).
Există câteva aspecte care trebuie luate în considerare pentru acceptarea rezultatelor testului.
TEST ACCEPTANCE CRITERIA
Cu titlu orientativ, nivelurile de VTG la grupele de control de masculi și de femele trebuie să fie distincte și separate de aproximativ trei ordine de mărime în cazul Pimephales promelas și al peștelui-zebră și de aproximativ un ordin de mărime în cazul Oryzias latipes.
For the test results to be acceptable the following conditions apply:
Exemple ale intervalului de valori întâlnite la grupele de control și la grupele tratate sunt disponibile în rapoartele de validare (1, 2, 3, 4).
the mortality in the water (or solvent) controls should not exceed 10 % at the end of the exposure period;
Valori mari ale VTG la masculii din grupele de control ar putea compromite performanța testului și capacitatea acestuia de a detecta agoniștii estrogenici slabi.
the dissolved oxygen concentration should be at least 60 % of the air saturation value (ASV) throughout the exposure period;
Valori mici ale VTG la femelele din grupele de control ar putea compromite performanța testului și capacitatea acestuia de a detecta inhibitorii aromatazei și antagoniștii estrogenici.
the water temperature should not differ by more than ± 1,5 °C between test vessels at any one time during the exposure period and be maintained within a range of 2 °C within the temperature ranges specified for the test species (Appendix 2);
Studiile de validare au fost utilizate pentru a elabora această orientare.
evidence should be available to demonstrate that the concentrations of the test chemical in solution have been satisfactorily maintained within ± 20 % of the mean measured values.
În cazul în care un laborator nu a realizat anterior testul sau au fost efectuate modificări substanțiale (de exemplu, schimbarea subspeciei sau a furnizorului de pești), se recomandă efectuarea unui studiu de competență tehnică.
Normal laboratory equipment and especially the following:
Se recomandă utilizarea unor substanțe chimice care posedă o serie de moduri de acțiune sau de impacturi asupra unor parametri studiați.
oxygen and pH meters;
Practic, fiecare laborator este încurajat să își elaboreze propriile date istorice de control pentru masculi și femele și să efectueze teste cu o substanță chimică de control pozitivă pentru activitatea estrogenică (de exemplu, 17β-estradiol la 100 ng/l sau un agonist slab cunoscut) având ca rezultat creșterea VTG la masculi, cu o substanță chimică de control pozitivă pentru inhibarea aromatazei (de exemplu, fadrozol sau procloraz la 300 μg/l) având ca rezultat scăderea VTG la femele și cu o substanță chimică de control pozitivă pentru activitatea androgenică (de exemplu, 17β-trenbolon la 5 μg/l) având ca rezultat inducerea caracteristicilor sexuale secundare la femelele de Pimephales promelas și de Oryzias latipes.
equipment for determination of water hardness and alkalinity;
Toate aceste date pot fi comparate cu datele disponibile din studiile de validare (1, 2, 3) pentru a garanta competența laboratorului.
adequate apparatus for temperature control and preferably continuous monitoring;
În general, măsurătorile vitelogeninei trebuie considerate pozitive în cazul unei creșteri semnificative statistic a VTG la masculi (p < 0,05) sau în cazul unei scăderi semnificative statistic la femele (p < 0,05) cel puțin la doza maximă testată în comparație cu grupul de control și în absența semnelor de toxicitate generală.
tanks made of chemically inert material and of a suitable capacity in relation to the recommended loading and stocking density (see Appendix 2);
Un rezultat pozitiv este confirmat și prin demonstrarea unei relație plauzibilă din punct de vedere biologic între doză și curba răspunsurilor.
spawning substrate for fathead minnow and zebrafish, Appendix 4 gives the necessary details;
Astfel cum s-a menționat anterior, scăderea vitelogeninei poate să nu fie în totalitate de origine endocrină;
suitably accurate balance (i.e. accurate to ± 0,5 mg).
cu toate acestea, un rezultat pozitiv trebuie să fie, în general, interpretat ca o dovadă a activității endocrine in vivo și trebuie să genereze în mod normal acțiuni pentru clarificări suplimentare.
Any water in which the test species shows suitable long-term survival and growth may be used as test water.
Vitellogenin induction by 17ß-estradiol and 17ß-ethinylestradiol in male zebrafish (Danio rerio).
It should be of constant quality during the period of the test.
Screening and testing for endocrine disruption in fish-biomarkers as «signposts,» not «traffic lights,» in risk assessment.
The pH of the water should be within the range 6,5 to 8,5, but during a given test it should be within a range of ± 0,5 pH units.
Effects of waterborne exposure to 17B-estradiol on secondary sex characteristics and gonads of the fathead minnow (Pimephales promelas).
In order to ensure that the dilution water will not unduly influence the test result (for example by complexion of test chemical), samples should be taken at intervals for analysis.
Abrevieri și definiții
Measurements of heavy metals (e.g. Cu, Pb, Zn, Hg, Cd, and Ni), major anions and cations (e.g. Ca2+, Mg2+, Na+, K+, Cl-, and SO42-), pesticides (e.g. total organophosphorus and total organochlorine pesticides), total organic carbon and suspended solids should be made, for example, every three months where dilution water is known to be relatively constant in quality.
Substanța chimică
If water quality has been demonstrated to be constant over at least one year, determinations can be less frequent and intervals extended (e.g. every six months).
o substanță sau un amestec
Some chemical characteristics of acceptable dilution water are listed in Appendix 3.
coeficient de variație.
Test solutions of the chosen concentrations are prepared by dilution of a stock solution.
test de imunoabsorbție cu anticorpi marcați enzimatic.
The stock solution should preferably be prepared by simply mixing or agitating the test chemical in dilution water by using mechanical means (e.g. stirring or ultrasonication).
Rate de încărcare
Saturation columns (solubility columns) can be used for achieving a suitable concentrated stock solution.
greutatea umedă a peștilor per volum de apă.
The use of a solvent carrier is not recommended.
Densitatea populației
However, in case a solvent is necessary, a solvent control should be run in parallel, at the same solvent concentration as the chemical treatments.
numărul de pești per volum de apă.
For difficult test chemicals, a solvent may be technically the best solution;
VTG (vitelogenină)
the OECD Guidance Document on aquatic toxicity testing of difficult substances and mixtures should be consulted (22).
fosfolipoglicoproteină precursoare a proteinelor din vitellus care în mod normal apare la femelele active din punct de vedere sexual din toate speciile ovipare.
The choice of solvent will be determined by the chemical properties of the chemical.
Axul HPG
The OECD Guidance Document recommends a maximum of 100 μl/l, which should be observed.
axul hipotalamo-hipofizo-gonadal.
However a recent review (23) highlighted additional concerns when using solvents for endocrine activity testing.
CMT
Therefore it is recommended that the solvent concentration, if necessary, is minimised wherever technically feasible (dependent on the physical-chemical properties of the test chemical).
concentrația maximă tolerată, reprezentând aproximativ 10 % din CL50 (concentrația letală).
A flow-through test system will be used.
Condiții experimentale pentru testul de screening endocrin la pești
Such a system continually dispenses and dilutes a stock solution of the test chemical (e.g. metering pump, proportional diluter, saturator system) in order to deliver a series of concentrations to the test chambers.
Specii recomandate
The flow rates of stock solutions and dilution water should be checked at intervals, preferably daily, during the test and should not vary by more than 10 % throughout the test.
peștele zebră
Care should be taken to avoid the use of low-grade plastic tubing or other materials that may contain biologically active chemicals.
Tipul de test
When selecting the material for the flow-through system, possible adsorption of the test chemical to this material should be considered.
În regim dinamic
Holding of fish
Temperatura apei
Test fish should be selected from a laboratory population, preferably from a single stock, which has been acclimated for at least two weeks prior to the test under conditions of water quality and illumination similar to those used in the test.
Calitatea luminii
It is important that the loading rate and stocking density (for definitions, see Appendix 1) be appropriate for the test species used (see Appendix 2).
Becuri fluorescente (spectru larg)
Following a 48-hour settling-in period, mortalities are recorded and the following criteria applied:
10-20 μE/m2/s, 540-1000 lux, sau 50-100 ft-c (niveluri ambientale de laborator)
mortalities of greater than 10 % of population in seven days:
Perioada de expunere la lumină (tranzițiile răsărit-apus sunt opționale, cu toate acestea nu sunt considerate necesare)
reject the entire batch;
16 h de lumină, 8 h de întuneric
mortalities of between 5 % and 10 % of population:
12-16 h de lumină, 12-8 h de întuneric
acclimation for seven additional days;
< 5 g/l
if more than 5 % mortality during second seven days, reject the entire batch;
Dimensiunea camerelor de testare
mortalities of less than 5 % of population in seven days:
10 l (minimum)
accept the batch
2 l (minimum)
Fish should not receive treatment for disease during the acclimation period, in the pre-exposure period, or during the exposure period.
5 l (minimum)
Pre-exposure and selection of fish
Volumul soluției de testare
A one-week pre-exposure period is recommended, with animals placed in vessels similar to the actual test.
8 l (minimum)
Fish should be fed ad libitum throughout the holding period and during the exposure phase.
1,5 l (minimum)
The exposure phase is started with sexually dimorphic adult fish from a laboratory supply of reproductively mature animals (e.g. with clear secondary sexual characteristics visible as far as fathead minnow and medaka are concerned), and actively spawning.
4 l (minimum)
For general guidance only (and not to be considered in isolation from observing the actual reproductive status of a given batch of fish), fathead minnows should be approximately 20 (± 2) weeks of age, assuming they have been cultured at 25 ± 2 °C throughout their lifespan.
Schimburile volumice ale soluțiilor de testare
Japanese medaka should be approximately 16 (± 2) weeks of age, assuming they have been cultured at 25 ± 2 °C throughout their lifespan.
Minimum 6/zi
Zebrafish should be approximately 16 (± 2) weeks of age, assuming they have been cultured at 26 ± 2 °C throughout their lifespan.
Minimum 5/zi
TEST DESIGN
A se vedea punctul 20.
Three concentrations of the test chemical, one control (water) and, if needed, one solvent control are used.
Masculi:
The data may be analysed in order to determine statistically significant differences between treatment and control responses.
Femele:
These analyses will inform whether further longer term testing for adverse effects (namely, survival, development, growth and reproduction) is required for the chemical, rather than for use in risk assessment (24).
Nr. de pești per vas de testare
For zebrafish and medaka, on day 21 of the experiment, males and females from each treatment level (5 males and 5 females in each of the two replicates) and from the control(s) are sampled for the measurement of vitellogenin and secondary sex characteristics, where applicable.
6 (2 masculi și 4 femele)
For fathead minnow, on day 21 of exposure, males and females (2 males and 4 females in each of the four replicates) and from the control(s) are sampled for the measurement of vitellogenin and secondary sex characteristics.
10 (5 masculi și 5 femele)
For the purposes of this test, the highest test concentration should be set by the maximum tolerated concentration (MTC) determined from a range finder or from other toxicity data, or 10 mg/l, or the maximum solubility in water, whichever is lowest.
Numărul de tratamente
The MTC is defined as the highest test concentration of the chemical which results in less than 10 % mortality.
= 3 (plus controalele corespunzătoare)
Using this approach assumes that there are existing empirical acute toxicity data or other toxicity data from which the MTC can be estimated.
Nr. de vase per tratament
Estimating the MTC can be inexact and typically requires some professional judgment.
Nr. de pești per concentrație testată
Three test concentrations, spaced by a constant factor not exceeding 10, and a dilution-water control (and solvent control if necessary) are required.
16 femele adulte și 8 masculi adulți (4 femele și 2 masculi în fiecare vas duplicat)
A range of spacing factors between 3,2 and 10 is recommended.
10 femele adulte și 10 masculi adulți (5 femele și 5 masculi în fiecare vas duplicat)
Selection and weighing of test fish
Regimul de hrănire
It is important to minimise variation in weight of the fish at the beginning of the assay.
Adulți sau nauplius de Artemia, vii sau congelați, de două sau de trei ori pe zi (ad libitum), hrană disponibilă în comerț sau o combinație a celor menționate
Suitable size ranges for the different species recommended for use in this test are given in Appendix 2.
Nauplius de Artemia de două sau trei ori pe zi (ad libitum), hrană disponibilă în comerț sau o combinație a celor menționate
For the whole batch of fish used in the test, the range in individual weights for male and female fish at the start of the test should be kept, if possible, within ± 20 % of the arithmetic mean weight of the same sex.
Fără aerare, cu excepția cazului în care concentrația de oxigen dizolvat este sub 60 % din valoarea de saturație din aer
It is recommended to weigh a subsample of the fish stock before the test in order to estimate the mean weight.
Apă curată de suprafață, din puțuri sau reconstituită sau apă de la robinet declorizată
Conditions of exposure
Perioada de preexpunere
The test duration is 21 days, following a pre-exposure period.
Perioadă recomandată de 7 zile
The recommended pre-exposure period is one week.
Durata expunerii la substanța chimică
Fish should be fed ad libitum with an appropriate food (Appendix 2) at a sufficient rate to maintain body condition.
Parametri biologici studiați
Care should be taken to avoid microbial growth and water turbidity.
supraviețuire
As a general guidance, the daily ration may be divided into two or three equal portions for multiple feeds per day, separated by at least three hours between each feed.
comportament
A single larger ration is acceptable particularly for weekends.
caracteristici sexuale secundare
Food should be withheld from the fish for 12 hours prior to sampling/necropsy.
Criterii de acceptare a testului
Fish food should be evaluated for the presence of contaminants such as organochlorine pesticides, polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs), polychlorinated biphenyls (PCBs).
Oxigen dizolvat > 60 % din saturație;
Food with an elevated level of phytoestrogens that would compromise the response of the assay to known oestrogen agonist (e.g. 17-beta estradiol) should be avoided.
temperatura medie de 25 ± 2 °C;
Uneaten food and faecal material should be removed from the test vessels at least twice weekly, e.g. by carefully cleaning the bottom of each tank using a siphon.
supraviețuire de 90 % la peștii de control;
The photoperiod and water temperature should be appropriate for the test species (see Appendix 2).
concentrațiile de testare măsurate menținute în limita a 20 % din valorile medii măsurate pentru fiecare nivel de tratament.
Frequency of analytical determinations and measurements
temperatura medie de 24 ± 2 °C;
Prior to initiation of the exposure period, proper function of the chemical delivery system should be ensured.
temperatura medie de 26 ± 2 °C;
All analytical methods needed should be established, including sufficient knowledge on the chemical stability in the test system.
Câteva caracteristici chimice ale unei ape de diluție acceptabile
During the test, the concentrations of the test chemical are determined at regular intervals, as follows:
< 20 mg/l
the flow rates of diluent and toxicant stock solution should be checked preferably daily but as a minimum twice per week, and should not vary by more than 10 % throughout the test.
< 2 mg/l
It is recommended that the actual test chemical concentrations be measured in all vessels at the start of the test and at weekly intervals thereafter.
Total pesticide organofosforice
It is recommended that results be based on measured concentrations.
Apendicele 4 A
However, if concentration of the test chemical in solution has been satisfactorily maintained within ± 20 % of the nominal concentration throughout the test, then the results can either be based on nominal or measured values.
Substratul de reproducere pentru peștele-zebră
Samples may need to be filtered (e.g., using a 0,45 μm pore size) or centrifuged.
Tavă de reproducere
If needed, then centrifugation is the recommended procedure.
tavă instrumentară în întregime din sticlă, cu dimensiuni de exemplu de 22 × 15 × 5,5 cm (L × l × î), acoperită cu o sită mobilă din oțel inoxidabil (orificii de 2 mm).
However, if the test material does not adsorb to filters, filtration may also be acceptable.
Sita trebuie să acopere deschiderea tăvii instrumentare la un nivel situat mai jos decât marginea ei.
During the test, dissolved oxygen, temperature, and pH should be measured in all test vessels at least once per week.
Substratul de reproducere se fixează pe sită.
Total hardness and alkalinity should be measured in the controls and one vessel at the highest concentration at least once per week.
Se formează o structură în care pot pătrunde peștii.
Temperature should preferably be monitored continuously in at least one test vessel.
De exemplu, sunt adecvate plante de acvariu artificiale realizate din plastic de culoare verde (NB: trebuie luată în considerare posibila absorbție a substanței chimice de testare în materialul din plastic).
A number of general (e.g. survival) and core biological responses (e.g. vitellogenin levels) are assessed over the course of the assay or at termination of the assay.
Plasticul trebuie să fie curățat cu o cantitate suficientă de apă caldă pentru o perioadă suficientă pentru a se asigura că nicio substanță chimică nu poate pătrunde în apa de testare.
Measurement and evaluation of these endpoints and their utility are described below.
Dacă se utilizează materiale din sticlă, trebuie avut grijă ca peștii să nu se rănească sau să se înghesuie în timpul deplasărilor.