natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Additional information, from tests with similar chemicals or from literature, on mortality or reproduction of Collembola may also be useful in deciding on the range of concentrations to be used in the range-finding test.
De asemenea, pentru vasul de cristalizare, raportul dintre adâncimea stratului de sediment și adâncimea apei acoperitoare trebuie să fie de aproximativ 1:4.
The duration of the range-finding test is two weeks for F. fimetaria and 3 weeks for F. candida to ensure one clutch of juveniles has been produced.
După ce șiragurile de ouă sunt colectate din vasul de cristalizare, ele sunt plasate într-o placă de microtitrare cu 12 godeuri (un șirag per godeu conținând cel puțin 2,5 ml apă din vasul de cristalizare adiționat), ulterior plăcile fiind acoperite cu un capac pentru a preveni evaporarea semnificativă.
At the end of the test, mortality and reproduction of the Collembola are assessed.
Pot fi utilizate și alte vase adecvate pentru păstrarea șiragurilor de ouă.
The number of adults and the occurrence of juveniles should be recorded.
Cu excepția plăcilor de microtitrare, se recomandă ca toate vasele de testare și alte aparate care vor intra în contact cu sistemul de testare să fie complet din sticlă sau dintr-un alt material inert din punct de vedere chimic (de exemplu, politetrafluoretilenă).
At least two replicates for each test concentration treatment and six control replicates are recommended.
De preferință, specia care se utilizează în test este Chironomus riparius.
The spacing factor may vary depending on the dose-response pattern.
Se mai poate utiliza și C. yoshimatsui.
For determination of the NOEC/LOEC, at least five concentrations in a geometric series should be tested.
Este potrivită și specia C. dilutus, dar este mai greu de manipulat și necesită o durată mai mare de testare.
Four replicates for each test concentration treatment plus eight controls are recommended.
Detalii privind metodele de cultură a C. riparius sunt prezentate în apendicele 2.
A combined approach allows for determination of both the NOEC/LOEC and ECx.
De asemenea, sunt disponibile informații privind condițiile de cultură pentru C. dilutus (5) și pentru C. yoshimatsui (14).
For this combined approach, eight treatment concentrations in a geometric series should be used.
Identificarea speciei trebuie să fie confirmată înainte de testare, dar nu este necesară înainte de fiecare test în parte atunci când organismele provin dintr-o cultură proprie.
If no effects are observed at the highest concentration in the range-finding test (i.e. 1000 mg/kg), the reproduction test can be performed as a limit test, using a test concentration of 1000 mg/kg and the control.
De preferință, trebuie să se utilizeze sediment formulat (numit și sediment reconstituit, artificial sau sintetic).
A limit test will provide the opportunity to demonstrate that there is no statistically significant effect at the limit concentration.
Totuși, în cazul în care se folosește sediment natural, caracteristicile acestuia trebuie să fie cunoscute (cel puțin pH-ul, conținutul de carbon organic, dar se recomandă și determinarea altor parametri ca raportul C/N și granulometria) și trebuie să nu existe niciun fel de contaminare și nici alte organisme care ar putea concura cu larvele de chironomide sau pe care le-ar putea consuma.
The reproductive output is the main endpoint (e.g. the number of juveniles produced per test vessel).
De asemenea, înaintea testării se recomandă ca sedimentele să fie condiționate timp de șapte zile în condiții de testare.
The statistical analysis, e.g. ANOVA procedures, compares treatments by Student t-test, Dunnett's test, or Williams' test.
Se recomandă (1) (20) (21) următorul sediment formulat, astfel cum este descris în (1):
95 % confidence intervals are calculated for individual treatment means.
a.
The number of surviving adults in the untreated controls is a major validity criterion and should be documented.
4 – 5 % (greutate uscată) turbă:
As in the range-finding test, all other harmful signs should be reported in the final report as well.
cu pH cât mai apropiat de valoarea 5,5 – 6;
LCx and ECx
este important să se utilizeze turbă sub formă de pudră (dimensiunea particulelor ≤ 1 mm) și doar aer uscat;
ECx-values, including their associated lower and upper 95 % confidence limits for the parameter, are calculated using appropriate statistical methods (e.g. logistic or Weibull function, trimmed Spearman-Karber method, or simple interpolation).
b.
To compute the EC50 or any other ECx, the complete data set should be subjected to regression analysis.
20 % (greutate uscată) argilă caolinică (de preferință, cu conținut de caolinit de peste 30 %);
is usually estimated by probit analysis or similar analysis that takes into account the binomially distributed mortality data.
c.
Appropriate statistical methods should be used according to OECD Document 54 on the Current Approaches in the Statistical Analysis of Ecotoxicity Data: a Guidance to Application (9).
75 – 76 % (greutate uscată) nisip de cuarț (trebuie să predomine nisipul fin, cu peste 50 % dintre particule între 50 și 200 μm);
In general, adverse effects of the test chemical compared to the control are investigated using one-tailed hypothesis testing at p ≤ 0,05.
d.
Normal distribution and variance homogeneity can be tested using an appropriate statistical test, e.g. the Shapiro-Wilk test and Levene test, respectively (p ≤ 0,05).
Se adaugă apă deionizată pentru a obține un conținut de umiditate al amestecului final în intervalul 30 – 50 %;
One-way Analysis of Variance (ANOVA) and subsequent multi-comparison tests can be performed.
e.
Multiple comparisons (e.g. Dunnett's test) or step-down trend tests (e.g. Williams' test) can be used to calculate whether there are significant differences (p ≤ 0,05) between the controls and the various test chemical concentrations (selection of the recommended test according to OECD Document 54 (9)).
Se adaugă carbonat de calciu de calitate chimică pură (CaCO3), pentru a ajusta pH-ul amestecului final al sedimentului la 7 ± 0,5;
Otherwise, non-parametric methods (e.g. Bonferroni-U-test according to Holm or Jonckheere-Terpstra trend test) could be used to determine the NOEC and the LOEC.
f.
the identity of the test chemical, batch, lot and CAS-number, purity;
Conținutul de carbon organic din amestecul final trebuie să fie 2 % (± 0,5 %) și se ajustează prin utilizarea unor cantități corespunzătoare de turbă și nisip, conform (a) și (c).
physico-chemical properties of the test chemical (e.g. log Kow, water solubility, vapour pressure, Henry's constant (H) and preferably information on the fate of the test chemical in soil) if available;
Trebuie să se cunoască sursa de turbă, argilă caolinică și nisip.
the formulation of the test chemical and the additives should be specified if not the pure chemical is tested;
Componentele sedimentului trebuie să fie verificate, pentru a confirma absența contaminării chimice (de exemplu, metale grele, compuși organoclorurați, compuși organofosforici).
identification of species and supplier of the test organisms, description of the breeding conditions and age range of test organisms;
În apendicele 3 este descris un exemplu de preparare a sedimentului formulat.
detailed specification if natural soil is used (origin, history, particle size distribution, pH, organic matter content);
Se acceptă și amestecul de constituenți uscați dacă se demonstrează că după adăugarea apei acoperitoare nu apare o separare a constituenților sedimentului (de exemplu, plutirea unor particule de turbă) și că turba sau sedimentul sunt suficient condiționate.
water holding capacity of the soil;
Orice apă care corespunde caracteristicilor chimice ale unei ape de diluție acceptabile, astfel cum este prezentată în apendicele 2 și 4, este potrivită ca apă pentru testare.
description of the technique used to apply the test chemical to the soil;
Orice apă adecvată, apă naturală (apă de suprafață sau apă subterană), apă reconstituită (a se vedea apendicele 2) sau apă de la robinet declorurată sunt acceptabile ca apă de cultură și apă de testare dacă chironomidele vor supraviețui în ea pe durata culturii și testării fără să prezinte semne de stres.
pH and water content of the soil at the start and end of the test (control and each treatment);
La începutul testului, pH-ul apei de testare trebuie să fie între 6 și 9, iar duritatea totală să nu fie mai mare de 400 mg/l CaCO3.
detailed description of the extraction method and extraction efficiency;
Totuși, în cazul în care se bănuiește că există o interacțiune între ionii care determină duritatea apei și substanța chimică testată, trebuie să se utilizeze o apă cu duritate mai mică (astfel, în această situație nu trebuie să se folosească mediul Elendt M4).
number of adults and their mortality (%) in each test vessel at the end of the test;
Același tip de apă trebuie să se utilizeze pe toată durata studiului.
a description of obvious physiological or pathological symptoms or distinct changes in behaviour;
Caracteristicile calității apei prezentate în apendicele 4 trebuie să fie măsurate cel puțin de două ori pe an sau ori de câte ori se presupune că este posibil ca aceste caracteristici să se fi schimbat semnificativ.
the NOEC/LOEC values, LCx for mortality and ECx for reproduction (mostly LC50, LC10, EC50, and EC10) together with 95 % confidence intervals.
Soluții stoc – Apă adiționată
A graph of the fitted model used for calculation, its function equation and its parameters (See (9));
a.
all information and observations helpful for the interpretation of the results;
Concentrațiile de testare se calculează pe baza concentrațiilor din coloana de apă, adică apa care acoperă sedimentul.
power of the actual test if hypothesis testing is done (9);
Soluțiile de testare în concentrațiile alese se prepară de obicei prin diluarea unei soluții stoc.
deviations from procedures described in this Test Method and any unusual occurrences during the test;
Soluțiile stoc se prepară de preferință prin dizolvarea substanței chimice testate în apa de testare.
validity of the test;
În unele cazuri poate fi necesară folosirea solvenților sau a agenților de dispersie pentru a realiza o soluție stoc cu concentrație corespunzătoare.
for NOEC, when estimated, the minimal detectable difference.
Exemple de solvenți adecvați sunt acetona, eterul monoetilic al etilen glicolului, eterul dimetilic al etilen glicolului, dimetilformamida și trietilen glicolul.
Wiles JA and Krogh PH (1998) Testing with the collembolans I. viridis, F. candida and F. fimetaria.
Agenții de dispersie care pot fi utilizați sunt Cremophor RH40, Tween 80, metilceluloză 0,01 % și HCO-40.
In Handbook of soil invertebrate toxicity tests (ed.
b.
H Løkke and CAM Van Gestel), pp. 131-156.
De obicei, sedimentele adiționate la o concentrație aleasă sunt preparate prin adăugarea unei soluții de substanță chimică testată direct în sediment.
Chapter C.36 of this Annex, Predatory mite (Hypoaspis (Geolaelaps) aculeifer) reproduction test in soil.
O soluție stoc de substanță testată dizolvată în apa deionizată este amestecată cu sedimentul formulat cu ajutorul unui tambur, al unui malaxor sau prin amestecare manuală.
Toxicity testing with the collembolans Folsomia fimetaria and Folsomia candida and the results of a ringtest.
Dacă este puțin solubilă în apă, substanța chimică testată se poate dizolva într-un volum cât se poate de mic de solvent organic adecvat (de exemplu, hexan, acetonă sau cloroform).
Danish Environmental Protection Agency, Environmental Project No. 1256, pp. 66.
Această soluție este apoi amestecată cu 10 g de nisip de cuarț fin pentru fiecare vas de testare.
In Soil Zoology (Kevan D.K. McE., Ed).
Se așteaptă evaporarea solventului și trebuie eliminat în totalitate din nisip;
Butterworths, London, pp. 412-416
apoi nisipul este amestecat cu o cantitate adecvată de sediment.
Chemical is a substance or a mixture.
Pentru solubilizarea, dispersia sau emulsionarea substanței chimice testate se pot folosi numai agenți cu volatilizare rapidă.
Main actions and timetable for performing a collembolan test
Este necesar să se țină cont de faptul că nisipul provenit din amestecul de substanță chimică testată și nisip trebuie să fie luat în considerare atunci când se prepară sedimentul (adică sedimentul trebuie să fie astfel preparat cu mai puțin nisip).
Time (day)
Dacă este necesar, se pot analiza subeșantioane pentru determinarea gradului de omogenitate.
Action
Protocolul testului se referă la alegerea numărului și la spațierea concentrațiilor de testare, la numărul de vase pentru fiecare concentrație și la numărul de larve per vas, la numărul de vase de cristalizare și de cuști de creștere.
23 to – 26
Protocolul pentru ECx, NOEC și pentru un test limită sunt descrise mai jos.
Preparation of synchronous F. fimetaria culture
Protocolul pentru analiza prin regresie
Check pH of artificial soil and adjust accordingly
Concentrația pentru care se observă efecte (ECx,) și intervalul de concentrații la care efectul substanței chimice testate este de interes trebuie să fie cuprinse în test, astfel încât parametrul studiat să nu fie extrapolat în afara limitelor datelor generate.
9 to – 12
Extrapolarea mult sub cea mai mică sau peste cea mai mare concentrație trebuie evitată.
Preparation of synchronous F. candida culture
Pentru selectarea unui interval adecvat de concentrații de testare poate fi utilă realizarea unui test preliminar de determinare a intervalelor în conformitate cu metodele de testare C.27 sau C.28.
2 to – 7
Pentru o metodă implicând ECx, sunt necesare cel puțin cinci concentrații și opt replici pentru fiecare concentrație.
Pre-moist soil
Pentru fiecare concentrație trebuie utilizate două cuști de reproducere (A și B).
Distribute juveniles into batches
Cele opt replici sunt împărțite în două grupe a câte patru replici pentru a deservi fiecare cușcă de reproducere.
Prepare stock solutions and apply test chemical if solvent required
Această reunire a replicilor este necesară datorită numărului de chironomide necesare în cușcă în vederea unor evaluări corecte ale reproducerii.
stock solutions and apply test chemical if solid chemical, water soluble or surface application is required.
Cu toate acestea, cea de a 2-a generație numără din nou opt replici, inițiate din populațiile expuse în cuștile de reproducere.
Measure soil pH and weigh the containers.
Factorul dintre concentrații nu trebuie să fie mai mare de doi (cu o posibilă excepție în cazurile în care curba de doză-răspuns are o pantă ușoară).
Add food.
Numărul de replici pentru fiecare tratament poate fi redus la șase (trei pentru fiecare cușcă de reproducere) în cazul în care se crește numărul de concentrații de testare cu răspunsuri diferite.
Introduce collembolans.
Creșterea numărului de replici sau reducerea mărimii intervalelor concentrațiilor de testare tinde să micșoreze intervalele de încredere în jurul ECX.
Range-finding test F. fimetaria:
Protocolul pentru estimarea NOEC
Definitive tests:
Numărul de replici trebuie să fie suficient pentru a asigura o putere statistică adecvată pentru detectarea unei diferențe de 20 % față de control la un nivel de semnificație statistică de 5 % (α = 0,05).
Measure moisture content and replenish water and add 2-10 mg yeast
Pentru rata de dezvoltare, fecunditate și fertilitate, este în general utilă o analiză a varianței (ANOVA), urmată de testul Dunnett sau testul Williams (22 – 25).
Definitive F. fimetaria test:
În ceea ce privește raportul de eclozare și raportul sexelor, pot fi utile testul Cochran-Armitage, testul exact al lui Fisher (cu corecție Bonferroni) sau testul Mantel-Haentzal.
Range-finding F. candida:
Un test limită [o concentrație de testare și control (controale)] poate fi efectuat în cazul în care nu există efecte observate în testul preliminar opțional de determinare a intervalelor până la concentrația maximă.
Definitive F. candida test:
Scopul testului limită este de a indica faptul că orice efecte toxice ale substanței chimice testate se constată la niveluri superioare concentrației-limită testate.
Guidance on rearing and synchronisation of F. fimetaria and F. candida
Pentru apă, sunt recomandate concentrații de 100 mg/l, iar pentru sediment de 1000 mg/kg (greutate uscată).
The time and durations given in this guidance should be checked for each specific collembolan strain to ensure that timing will allow for sufficient synchronised juveniles.
De obicei, sunt necesare cel puțin opt replici, atât pentru tratament, cât și pentru control.
Basically, the incidence of oviposition after the adults are transferred to fresh substrate and egg hatching determines the appropriate day for egg collection and collection of synchronous juveniles.
Trebuie să se demonstreze o putere statistică adecvată pentru detectarea unei diferențe de 20 % față de control la un nivel de semnificație statistică de 5 % (α = 0,05).
It is recommended to have a permanent stock culture consisting of e.g. 50 containers/Petri dishes.
Cu răspunsuri metrice (rată de dezvoltare), testul t este o metodă statistică adecvată atunci când datele îndeplinesc cerințele acestui test (normalitate, varianțe omogene).
The stock culture should be kept in a good feeding condition by weekly feeding, watering and removal of old food and carcasses.
În cazul în care aceste cerințe nu sunt îndeplinite, se poate utiliza testul t pentru varianțe inegale sau un test neparametric, precum testul Wilcoxon-Mann-Whithey.
Too few collembolans on the substrate may result in inhibition by more fungal growth.
Pentru raportul de eclozare este adecvat testul exact al lui Fisher.
If the stock culture is used for egg production too often, the culture may get fatigue.
Pregătirea sistemului apă-sediment (adiționarea apei)
Signs of fatigue are dead adults and mould on the substrate.
a.
The remaining eggs from the production of synchronous animals can be used to rejuvenate the culture.
Sediment formulat (a se vedea punctele 13 – 14 și apendicele 3) este introdus în fiecare vas de testare și de cristalizare pentru a forma un strat de minimum 1,5 cm (pentru vasul de cristalizare acesta poate fi relativ mai subțire), dar de maximum 3 cm.
In a synchronous culture of F. fimetaria, males are distinguished from females primarily by size.
Apa (a se vedea punctul 15) este introdusă astfel încât raportul dintre adâncimea stratului de sediment și adâncimea apei să nu depășească 1:4.
Males are clearly smaller than females, and the walking speed of the males is faster than for females.
După pregătirea vaselor de testare, sistemul sediment-apă trebuie lăsat la aerare ușoară timp de aproximativ șapte zile înainte de introducerea larvelor în primul stadiu din prima și din cea de a 2-a generație (a se vedea punctul 14 și apendicele 3).
Correct selection of the gender requires little practice and can be confirmed by microscopic inspection of the genital area (13).
Sistemul sediment-apă al vaselor de cristalizare nu este aerat pe durata testării, deoarece nu este necesară asigurarea supraviețuirii larvelor (înainte de eclozare șiragurile de ouă sunt deja colectate).
Preparation of culturing substrate
Discul este înlăturat imediat după aceea.
The culturing substrate is plaster of Paris (calcium sulphate) with activated charcoal.
Se pot utiliza și alte dispozitive.
This provides a moist substrate, with the function of the charcoal being to absorb waste gases and excreta (14) (15).
Pregătirea sistemului apă-sediment (sediment adiționat)
Different forms of charcoal may be used to facilitate observations of the Collembola.
b.
For example, powdered charcoal is used for F. candida and F. fimetaria (producing a black/grey plaster of Paris):
Sedimentele adiționate pregătite conform punctului 16b sunt introduse în vase și în vasul de cristalizare, iar apa acoperitoare este adăugată pentru a se obține un raport volumic sediment-apă de 1:4.
Substrate constituents:
Adâncimea stratului de sediment trebuie să fie cuprinsă între 1,5 și 3 cm (aceasta poate fi relativ mai mică pentru vasul de cristalizare).
20 ml of activated charcoal
Pentru a evita separarea ingredientelor sedimentului și resuspendarea materiilor fine în timpul adăugării apei de testare în coloana de apă, sedimentul poate fi acoperit cu un disc din plastic în timp ce se toarnă apa, apoi discul este înlăturat imediat.
200 ml of distilled water
După adăugarea de apă acoperitoare peste sedimentul adiționat, este de dorit să se lase timp pentru migrarea substanței chimice testate din sediment în faza apoasă (4) (5) (7) (18).
200 ml of plaster of Paris
Perioada de timp corespunzătoare pentru echilibrare depinde de sediment și de substanța chimică și poate fi de ordinul orelor sau de ordinul zilelor, iar în cazuri rare poate ajunge până la cinci săptămâni.
50 g of activated pulverized charcoal
Întrucât în această perioadă s-ar putea produce degradarea multor substanțe chimice, nu se așteaptă atingerea echilibrului, dar se recomandă o perioadă de echilibrare de 48 de ore.
260-300 ml of distilled water
Cu toate acestea, atunci când timpul de înjumătățire a degradării substanței chimice în sediment este cunoscut ca fiind lung (a se vedea punctul 8), perioada de echilibrare poate fi prelungită.
400 g plaster of Paris.
La sfârșitul acestei perioade de echilibrare suplimentare, concentrația substanței chimice testate trebuie să fie măsurată în apa acoperitoare, în apa interstițială și în sediment, cel puțin la concentrația cea mai mare și la una mai mică (a se vedea punctul 38).
The substrate mixture is allowed to set before use.
Aceste determinări analitice ale substanței chimice testate permit calculul bilanțului masic și exprimarea rezultatelor pe baza concentrațiilor măsurate.
Breeding
Vasele de testare trebuie să fie acoperite (de exemplu, cu plăci din sticlă).
Collembolans are held in containers such as Petri dishes (90 mm × 13 mm), with the bottom covered by a 0,5 cm layer of plaster /charcoal substrate.
Dacă este necesar, în timpul studiului nivelul apei se completează până la volumul original, pentru a compensa evaporarea.
They are cultured at 20 ± 1 °C at a light-dark cycle of 12-12 hours (400-800 Lux).
Această operațiune trebuie să se efectueze cu apă distilată sau apă deionizată, pentru a preveni acumularea de săruri.
Containers are kept moist at all times ensuring that the relative humidity of the air within the containers is 100 %.
Vasele de cristalizare din cuștile de reproducere nu sunt acoperite și este posibil, însă nu indispensabil, să fie ajustate pentru a compensa pierderea de apă pe durata perioadei de testare, întrucât șiragurile de ouă sunt în contact cu apa numai timp de aproximativ o zi, iar vasele sunt utilizate numai într-o scurtă fază a testului.
This can be guaranteed by presence of free water within the porous plaster, but avoiding generating a water film on the plaster surface.
Adăugarea de organisme de testare
Water loss can be prevented by providing a humid ambient air.
Cu patru sau cinci zile înainte de a introduce larve în primul stadiu pentru prima generație, masele de ouă trebuie prelevate din cultură și plasate în vase mici conținând mediul de cultură.
Any dead individuals should be removed from the containers, as should any mouldy food.
Se poate utiliza un mediu de cultură învechit provenit din cultura stoc sau un mediu proaspăt preparat.
To stimulate production of eggs it is necessary to transfer the adult animals to Petri dishes with newly prepared plaster of Paris/charcoal substrate.
În orice caz, în mediul de cultură se va adăuga o mică cantitate de hrană, de exemplu câteva picături dintr-o suspensie de hrană fin măcinată pentru pești sub formă de fulgi (a se vedea apendicele 2).
Granulated dried baker's yeast is used as the sole food supply for both F. candida and F. fimetaria.
Trebuie să se utilizeze doar mase de ouă proaspăt depuse.
Fresh food is provided once or twice a week, to avoid moulding.
În mod normal, larvele încep să eclozeze după aproximativ 2 zile de la depunerea ouălor (2 – 3 zile pentru C. riparius la 20 °C și 1 – 4 zile pentru C. dilutus la 23 °C și C. yoshimatsui la 25 °C), iar creșterea larvelor se realizează în patru stadii, fiecare cu o durată de 4 – 8 zile.
It is placed directly on the plaster of Paris in a small heap.
În test trebuie utilizate larve în primul stadiu (maximum 48 de ore după eclozare).