natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Then 100 μl of the extraction buffer 2 (details on buffer preparation see below) will be pipetted into each tube.
Având în vedere conștientizarea crescândă a nevoii de a proteja mediul marin împotriva unor cantități din ce în ce mai mari de substanțe chimice și necesitatea de a estima concentrația probabilă a substanțelor chimice în mare, au fost elaborate metode de testare a biodegradabilității în apa de mare.
The samples will be stored at room temperature for 15 minutes and in the meantime they will be sometimes gently shaken by hand.
Metodele descrise aici folosesc apă de mare naturală atât ca fază apoasă, cât și ca sursă de microorganisme.
Afterwards all tubes will be placed in the water bath again and boiled for another 15 minutes at 100 °C.
În încercarea de a respecta metodele privind ușurința biodegradabilității în apă dulce, a fost investigată utilizarea apei de mare ultrafiltrate și centrifugate și a sedimentelor marine ca inocul.
Until further analysis the tubes will be frozen at – 20 °C.
Aceste investigații au fost lipsite de succes.
Buffer preparation
Prin urmare, mediul de testare este apa de mare naturală pretratată pentru îndepărtarea particulelor grosiere.
PCR-buffer 1:
Pentru a evalua biodegradabilitatea completă prin metoda agitării flaconului, trebuie să fie utilizate concentrații relativ mari ale substanței testate din cauza sensibilității mici a metodei analitice de determinare a carbonului organic dizolvat (dissolved organic carbon – DOC).
500 mg N-Lauroylsarcosine (e.g. Merck KGaA, Darmstadt, GE)
Acesta, necesită în schimb adăugarea la apa de mare a unor nutrienți minerali (N și P), ale căror concentrații mici ar limita înlăturarea DOC.
ad 100 ml dest.
În metoda cu flaconul închis este de asemenea necesar să se adauge nutrienți din cauza concentrației substanței testate adăugate.
→ autoclave
Prin urmare, metodele nu sunt teste pentru ușurința biodegradabilității deoarece nu se adaugă inocul în plus față de microorganismele deja prezente în apa de mare.
PCR-buffer 2:
Teste nici nu simulează mediului marin, întrucât se adaugă nutrienți, iar concentrația substanței testate este mult mai mare decât ar fi prezentă în mare.
20 g Chelex (e.g. Biorad, Munich, GE)
Din aceste motive, metodele sunt propuse în cadrul unei noi secțiuni, «Biodegradabilitatea în apă de mare».
To swell in 100 ml dest.
APLICARE
Determination of genetic sex (by PCR-method) in medaka (Prepared by the Laboratory for Aquatic Organisms of Bayer CropScience AG and Universität Würzburg Biozentrum)
Rezultatele testelor, care ar fi aplicate deoarece modelul de utilizare și de eliminare a substanței în cauză indică o cale către mare, oferă o primă impresie asupra biodegradabilității în apa de mare.
The prepared and frozen tubes (described in the above section) will be thawed on ice.
Dacă rezultatul este pozitiv (îndepărtare > 70 % DOC; > 60 % ThOD – theoretical oxygen demand), se poate concluziona că există un potențial pentru biodegradare în mediul marin.
After that, they will be centrifuged using an Eppendorf centrifuge (30 sec at max. speed, at room temperature).
Cu toate acestea, un rezultat negativ nu exclude un astfel de potențial, însă indică faptul că este necesar un studiu suplimentar, de exemplu, utilizând o concentrației a substanței testate cât mai mică.
For the PCR, the clear supernatant separated from the precipitate will be used.
În orice caz, dacă o valoare mai definitivă pentru rata sau gradul de biodegradare în apa de mare într-un anumit loc este necesară, trebuie aplicate alte metode mai complexe și mai sofisticate și, prin urmare, mai costisitoare.
It has absolutely to be avoided that any traces of Chelex (localized in the precipitate) are transferred to the PCR reaction, because this will interfere with the “Taq”-polymerase activity.
De exemplu, ar putea fi aplicat un teste de simulare folosind o concentrație a substanței testate mai apropiată de concentrația din mediu probabilă.
The supernatant will be used directly or can be stored frozen (at – 20 °C) and rethawed again in several cycles without negative impact on the DNA for later analyses.
De asemenea, apa de mare nefortificată și nepretratată prelevată din locația de interes ar putea fi utilizată, iar biodegradarea primară ar putea fi urmată de analiza chimică specifică.
Preparation of the “Reaction Mix” (25 μl per sample):
Pentru biodegradabilitatea completă, ar fi necesare substanțe marcate cu 14C pentru a se putea măsura la concentrații care reflectă realist concentrațiile din mediu ratele dispariției 14C organic solubil și producția de 14CO2.
Volume
ALEGEREA METODELOR
Final Concentration
Selectarea metodei de utilizat depinde de o serie de factori;
Template DNA
tabelul următor ajută la procesul de selecție.
0,5μl-2μl
În timp ce substanțele cu solubilitate în apă sub echivalentul de 5 mg C/l nu pot fi testate prin metoda agitării flaconului, cel puțin, în principiu, substanțele puțin solubile în apă pot fi testate prin metoda de testare cu flacon închis.
buffer with MgCl2
Tabel
2,5μl
Avantajele și dezavantajele testării prin metoda agitării flaconului și a flaconului închis
Nucleotides (each of dATP, dCTP, dGTP, dTTP)
METODĂ
Forward Primer (10μM) (see below 3-5)
AVANTAJE
0,5μl
DEZAVANTAJE
Reverse Primer (10μM) (see below 3-5)
AGITAREA FLACONULUI
Water (PCR grade)
aparatură simplă cu excepția analizorului C
up to 25μl
o durată de 60 de zile nu constituie o problemă
Taq E- Polymerase
fără interferență din partea nitrificării
0,3μl
poate fi adaptată pentru substanțe volatile
buffer with MgCl2:
necesită analizorul C
Tris/HCl (pH8,8 at 25 °C), 160mM (NH4)2SO4, 25mM MgCl2, 0,1 %Tween 20
utilizează 5 – 40 mg DOC/1, poate avea efect inhibitor
For each PCR (see below 3-5) the special primer as a new combination of “Reaction-Mix” and the adequate needed amount of template DNA for each sample (see above) is needed.
determinarea DOC este dificilă la concentrații mici în apa de mare (efect al clorurilor)
The respective volumes will be transferred into new tubes using pipettes.
uneori DOC este mai mare în apa de mare
After that all tubes will be closed, stirred (ca.
FLACON ÎNCHIS
10 sec) and centrifuged (10 sec, at room temperature).
aparatură simplă
Now the respective PCR-programmes can be started.
determinare finală simplă
Additionally a positive control (exemplary DNA sample with known activity and clear results) and a negative control (1 μl dest.
utilizează concentrație mică de substanță testată (2 mg/l), prin urmare, șanse mai mici de inhibiție
H2O) will be used in each PCR-programme.
poate fi adaptată cu ușurință pentru substanțe volatile
Preparation of the agarose gel (1 %) — During running PCR-programmes:
poate fi dificil de menținut etanșeitatea flacoanelor
Solve 3 g agarose in 300 ml 1 × TAE-buffer (1 % agarose gel)
creșterea de bacterii pe peretele flaconului poate conduce la valori false
This solution should be boiled using an microwave (ca.
valorile absorției de O2 în martor pot fi mari în special după 28 de zile;
2-3 min)
ar putea fi eliminate prin învechirea apei de mare
Transfer the hot solution into a special casting box, which lies on ice
posibilă interferență cu absorția de O2 prin nitrificare
After ca.
METODA AGITĂRII FLACONULUI
20 min the agarose gel is ready to use
Această metodă este o variantă cu apă de mare a Testului de screening modificat al OCDE descris în capitolul C.4B din prezenta anexă (2).
Storage the agarose gel in 1 × TAE-buffer until the end of the PCR-programmes
A fost finalizată în urma unui test interlaboratoare organizat pentru Comisia Europeană (CE) de Institutul danez pentru calitatea apei (3).
Actin-PCR-programme:
La fel ca în cazul metodei de testare cu flacon închis utilizând apă de mare, rezultatele acestui test nu trebuie să fie considerate drept indicatori ai ușurinței biodegradabilității, însă trebuie să fie utilizate pentru a obține informații privind biodegradabilitatea substanțelor în mediile marine.
Special primer:
Dacă limitele sensibilității analizelor carbonului organic sunt îmbunătățite, poate fi avantajoasă utilizarea de concentrații mai mici ale substanței testate, în special pentru substanțele inhibitoare.
“Mact1(upper/forward)” → TTC AAC AGC CCT GCC ATG TA
Soluția substanței testate în mediul de testare este incubată în condiții aerobe cu agitare la întuneric sau la lumină difuză și la o temperatură fixă controlată (controlată la ± 2 °C) care în mod normal variază între 15 și 20 °C.
“Mact2(lower/reverse)” → GCA GCT CAT AGC TCT TCT CCA GGG AG
În cazurile în care obiectivul studiului este acela de a simula condițiile de mediu, testele pot fi efectuate în afara acestui interval normal de temperatură.
Programme:
Durata testului maximă recomandată este de aproximativ 60 de zile.
Cycle (35-times):
Degradarea este urmată de măsurători ale DOC (degradare completă) și, în unele cazuri, prin analize specifice (degradare primară).
Denaturation
Pentru a ști dacă testul poate fi aplicat unei anumite substanțe, trebuie să fie cunoscute anumite proprietăți ale acesteia.
→ 45 sec at 95 °C
Trebuie stabilit conținutul de carbon organic din substanță, volatilitatea acesteia trebuie să fie astfel încât nu existe pierderi semnificative pe durata testului, iar solubilitatea ei în apă trebuie să fie mai mare decât echivalentul a 25 – 40 mg C/l.
Annealing
În plus, substanța testată nu trebuie să se absoarbă în mod semnificativ pe suprafața sticlei.
→ 45 sec at 56 °C
Sunt necesare informații privind puritatea sau proporțiile relative ale componentelor majore ale substanței testate pentru ca rezultatele obținute să poată fi interpretate, în special atunci când rezultatul se situează aproape de nivelul de «trecere».
Elongation
Informațiile privind toxicitatea substanței testate pentru bacterii, de exemplu astfel cum este măsurată în testele ratei respirației pe termen scurt (4), pot fi utile atunci când sunt selectate concentrațiile de testare corespunzătoare și pot fi esențiale pentru interpretarea corectă a valorilor mici ale biodegradării.
→ 1 min at 68 °C
Cu toate acestea, astfel de informații nu sunt întotdeauna suficiente pentru interpretarea rezultatelor obținute în testarea biodegradării, iar procedura descrisă la punctul 18 este mai adecvată.
15 min 68 °C
Trebuie utilizate substanțe de referință adecvate pentru a verifica activitatea microbiană a eșantionului de apă de mare.
X- and Y-Gene-PCR-programme:
Benzoatul de sodiu, acetatul de sodiu și anilina sunt exemple de substanțe care pot fi utilizate în acest scop.
The samples with intact DNA will be used in this PCR-programme to detect the X- and Y-Genes.
Substanțele de referință trebuie să se degradeze într-un interval de timp rezonabil de scurt, altfel se recomandă repetarea testului folosind un alt eșantion de apă de mare.
Male DNA should show one double-band and female DNA should show one single band (after staining and gel-electrophoresis).
În testul interlaboratoare organizat de CE, în care eșantioanele de apă de mare au fost prelevate din diferite locații și în diferite momente din cursul unui an (3), faza de latență (tL) și timpul necesar obținerii unei degradări de 50 % (t50), cu excepția fazei de latență, au fost de 1 – 4 zile și, respectiv, de 1 – 7 zile pentru benzoatul de sodiu.
For this programme-run one positive control for males (XY-sample) and one for females (XX-sample) should be included.
În ceea ce privește anilina, tL a variat între 0 și 10 zile, în timp ce t50 a variat între 1 și 10 zile.
“PG 17,6” (lower/reverse) → GAT CGT CCC TCC ACA GAG AAG AGA
Reproductibilitatea metodei a fost stabilită în urma testului interlaboratoare (3).
Cycle (40-times):
Cea mai mică concentrație a substanței testate, pentru care această metodă poate fi utilizată cu analiza DOC, este determinată în mare măsură prin limita de detectare a analizei carbonului organic (aproximativ 0,5 mg C/l, în prezent) și prin concentrația de carbon organic dizolvat în apa de mare utilizată (în general de ordinul a 3 – 5 mg/l pentru apa de mare din larg).
→ 45 sec at 55 °C
Concentrația de fond a DOC nu trebuie să depășească în jur de 20 % din concentrația DOC total după adăugarea substanței testate.
→ 1 min 30 sec at 68 °C
Dacă nu este fezabil, concentrația de fond a DOC poate fi redusă uneori prin învechirea apei de mare înainte de testare.
Y-Gene-PCR-programme as “control” for X- and Y-Gene-PCR-programme:
Dacă metoda este folosită numai cu analiza chimică specifică (prin care se măsoară degradarea primară), investigatorul trebuie să documenteze, prin furnizarea de informații suplimentare, dacă se poate preconiza o degradare completă.
This PCR-programme verifies the results of the “X- and Y-Gene-PCR-programme”.
Informațiile suplimentare pot consta în rezultatele obținute în urma altor teste privind biodegradabilitatea cu ușurință sau inerentă.
The “male-samples” should show one band and the “female-samples” shouldn't show any band (after staining and gel-electrophoresis).
Aparatură obișnuită de laborator și:
“DMTYa (upper/forward)” → GGC CGG GTC CCC GGG TG
a.
“DMTYd (lower/reverse)” → TTT GGG TGA ACT CAC ATG G
Dispozitiv de agitare care să poată conține flacoane Erlenmeyer de 0,5 – 2 litri, fie cu control automat al temperaturii, fie utilizat într-o cameră cu o temperatură constantă de 15 – 20 °C controlată la ± 2 °C;
Staining of the PCR-samples:
b.
Staining solution:
Flacoane Erlenmeyer de 0,5 – 2 litri cu gâtul îngust;
50 % Glycerol
c.
0,25 % Bromphenolblue
Dispozitive de filtrare cu membrană, sau centrifuge;
0,25 % Xylenecyanol
d.
Pipette 1 μl of the staining solution into each single tube
Filtre cu membrană, 0,2 – 0,45 μm;
Start of the Gel-Electrophoresis:
e.
The prepared 1 % agarose gel will be transferred into a gel-electrophoresis-chamber filled with 1 × TAE-Buffer
Analizor de carbon;
10 - 15 μl of each stained PCR-sample will be pipetted into an agarose gel slot
f.
Also 5 - 15 μl of the 1kb-“Ladder”(Invitrogen) will be pipetted into a separate slot
Echipamente pentru analize specifice (opțional).
Start the electrophoresis by 200 V
Apa de mare
Stop after 30-45 min
Se prelevează un eșantion de apă de mare într-un recipient curățat cu atenție și se transportă la laborator, de preferință în termen de o zi sau două de la prelevare.
Determination of the bands:
Pe durata transportului, temperatura eșantionului nu trebuie lăsată să depășească semnificativ temperatura care urmează să fie utilizată în test.
Clean the agarose gel in distilled H2O
Se identifică cu precizie locația de unde a fost prelevat eșantionul și se descrie situația poluării și nutrienților.
Now transfer the agarose gel into Ethidium bromide for 15 - 30 min
În special pentru apele de coastă, această caracterizare trebuie să includă numărul coloniilor microbiene heterotrofe și determinarea concentrațiilor azotatului, amoniacului și fosfatului dizolvați.
After that, a picture of the agarose gel should be taken in an UV-light-box
Se furnizează următoarele informații pentru eșantionul de apă de mare:
Finally the samples are analysed in comparison to the positive control-band (or bands) and the ladder
data prelevării;
Appendix 10
adâncimea de prelevare;
Guidance on tissue sampling for genetic sex determination by PCR method in the three-spined stickleback
aspectul eșantionului – tulbure etc.;
Tissue sampling and DNA extraction
temperatura la momentul prelevării;
DNA can be extracted using a variety of commercially available reagents and both manual and automated extraction systems.
salinitatea;
The protocol used at the Cefas Weymouth laboratory is outlined below, and the alternative approaches have been added where appropriate.
intervalul de timp dintre prelevare și utilizarea în test.
With fine scissors, a small piece of tissue (10-20 mg) from the dorsolateral area (after removing the head and tail for VTG analysis), is removed from each individual fish.
În cazul în care conținutul de DOC din eșantionul cu apă de mare este mare (punctul 8), se recomandă ca apa de mare să fie învechită timp de aproximativ o săptămână înainte de utilizare.
The tissue is added into a tube and either placed directly in liquid nitrogen (for storage at – 80 °C) or filled with 70 % ethanol (for transport and subsequent storage at 4 °C).
Învechirea se realizează prin depozitare în condiții aerobe la temperatura de testare la întuneric sau la lumină difuză.
The scissors are cleaned after each single fish in 70 % ethanol then in distilled water and dried with tissue paper.
Dacă este necesar, condițiile aerobe sunt menținute prin aerare ușoară.
The ethanol (if present) is removed by aspiration and the tissue is digested overnight with proteinase K in 400 μl of ATL buffer (Qiagen).
Pe durata învechirii, conținutul materialului organic ușor degradabil este redus.
An aliquot (200 μl) of the digest is transferred to a 96-well S-block (Qiagen) and the DNA extracted in a 96-well format using the Qiagen Universal BioRobot and the QIamp Investigator BioRobot kit.
În testul interlaboratoare (3), nu au fost observate diferențe între potențialele de degradare ale eșantioanelor de apă de mare învechită sau recent prelevate.
The DNA is eluted in a 50 μl of DNase and RNase free water.
Înainte de utilizare, apa de mare se tratează în prealabil pentru a îndepărta particulele mari, de exemplu prin filtrarea cu ajutorul unui filtru din nailon sau al unui filtru de hârtie cu porozitate mare (fără membrană sau filtre GF-C) sau prin sedimentare și decantare.
If using hard tissues to extract DNA (such as a spine or a pectoral fin) it may be necessary to homogenise the sample in the lysis buffer using a FastPrep® tissue lyser or equivalent tissue disruption system.
Procedura utilizată trebuie raportată.
Alternatively,
Pretratamentul se efectuează după învechire, dacă se utilizează.
the tissue is digested overnight with proteinase K in 400 μl of G2 lysis buffer (Qiagen) and DNA is extracted from 200 μl of the digest using either the EZ-1 DNA easy tissue kit and the EZ-1 biorobot or the DNA easy tissue mini kit.
Soluții stoc pentru nutrienți minerali
The DNA is eluted in a 50 μl volume.
Se prepară următoarele soluții stoc folosind reactivi de puritate analitică:
The tissues are processed using the DNAzol reagent.
Ortofosfat diacid monopotasic, KH2PO4
Briefly, tissue samples are lysed in 1ml of DNAzol for 10 minutes in a 1,5 ml micro centrifuge tube and then centrifuged at 13000 rpm for 5 minutes to remove any particulate matter.
8,5 g
The lysed sample is then transfered to a new 1,5 ml micro centrifuge tube containing 500 μl of 100 % molecular grade ethanol and then centrifuged at 13000 rpm for 10 minutes to precipitate the DNA.
Ortofosfat acid dipotasic, K2HPO4
The ethanol is removed and replaced with 400 μl of 70 % molecular grade ethanol, centrifuged at 13000 rpm for 5 minutes and the DNA pellet is dissolved in 50 μl molecular DNase and RNase free water.
21,75 g
Again, when using the hard tissues (pectoral fin) it may be necessary to homogenise the sample in the lysis buffer using a FastPrep® tissue lyser or equivalent tissue disruption system prior to extracting the DNA.
Ortofosfat acid disodic dihidrat, Na2HPO4.2H2O
The DNA is stored at – 20 °C until required.
33,3 g
gloves must be worn during the procedures.
Clorură de amoniu, NH4Cl
Polymerase chain reaction (PCR) analysis
0,5 g
Amplifications were performed using 2,5 μl of the DNA extract in a 50 μl reaction volume using the Idh locus primers (as described by Peichel et al., 2004.
Se dizolvă și se completează cu apă distilată până la 1 l.
Current Biology 1:1416-1424):
Clorură de calciu, CaCl2
Forward primer
27,5 g
Reverse primer
Sulfat de magneziu heptahidrat, MgSO4.7H2O
There are numerous suppliers of suitable PCR reagents.
22,5 g
The method outlined below is that currently used at the Cefas Weymouth laboratory.
Clorură de fier (III) hexahidrat, FeCl3.6H2O
Preparation of the “Reaction Mix” (50 μl per sample):
0,25 g
A mastermix is prepared as follows.
Precipitarea în soluție (d) poate fi prevenită prin adăugarea unei picături de HCl concentrat sau a 0,4 g de acid etilendiaminotetraacetic (EDTA, sare disodică) per litru.
This can be prepared in advance and stored frozen at – 20 °C until required.
Dacă se formează un precipitat într-o soluție stoc, aceasta trebuie înlocuită cu o soluție nou preparată.
Make sufficient mastermix for a negative control (molecular biology grade water only).
Pregătirea mediului de testare
Volume (stock conc.)/ sample
Se adaugă 1 ml din fiecare soluție stoc menționată mai sus per litru de apă de mare pretatată.
® Reaction Buffer
Nu se adaugă un inocul specific în plus față de microorganismele care sunt deja prezente în apa de mare.
Nucleotides (dATP, dCTP, dGTP, dTTP)
Se determină (opțional) numărul de heterotrofe care formează colonii în mediul de testare cu apă de mare (și, de preferință, și în eșantioanele de apă de mare originale), de exemplu, prin numărarea pe placă, utilizând agar marin.
0,5 μl (25 mM each)
Acest lucru este de dorit în special pentru eșantioanele prelevate din locații costiere sau poluate.
250 μM each
Se verifică activitatea microbiană heterotrofă în apa de mare prin realizarea unui test cu o substanță de referință.
Forward Primer
Pregătirea flacoanelor
0,5μl (0,1 nmol/μl)
Se asigură că toate vasele din sticlă sunt curățate foarte atent, nu trebuie să fie neapărat sterile (de exemplu, folosind acid clorhidric alcoolic), se clătesc și se usucă înainte de utilizare pentru a evita contaminarea cu reziduuri rezultate din teste anterioare.
Reverse Primer
Flacoanele trebuie, de asemenea, să fie curățate înainte de prima utilizare.
2,0μM
Se evaluează substanțele testate în flacoane duplicat simultan, împreună cu un singur flacon pentru substanța de referință.
Molecular biology grade water
Se realizează un test martor, în duplicat, fără substanța testată sau de referință, pentru determinarea valorilor analitice ale martorului.
GoTaq polymerase
Se dizolvă substanțele testate în mediul de testare – ele pot să fie adăugate în mod convenabil prin intermediul unei soluții stoc concentrate – pentru a asigura concentrațiile inițiale dorite, în mod normal de 5 – 40 mg DOC/l.
Dispense 47,5 μl to a labelled 0,5 ml thin walled PCR tube.
Se testează substanța de referință, în mod normal la o concentrație inițială corespunzătoare de 20 mg DOC/l.
Add 2,5 μl of the purified DNA to the appropriately labelled tube.
În cazul în care sunt utilizate soluții stoc ale substanței testate și/sau de referință, se asigură faptul că salinitatea mediului de apă de mare nu este modificat în mod semnificativ.
Repeat for all samples and the negative control.
În cazul în care sunt estimate efecte toxice sau dacă acestea nu pot fi excluse, se recomandă includerea unui experiment privind inhibarea, în duplicat, în protocolul de testare.
Over lay with 2 drops of mineral oil.
Se adaugă substanțele testată și de referință în același vas, concentrația substanței de referință fiind, în mod normal, aceeași cu cea din testul de control (și anume 20 mg DOC/l) pentru a permite de comparațiile.
Alternatively, use a thermal cycler with a heated lid.
Se varsă cantități adecvate de soluții de testare în flacoanele Erlenmeyer (până la aproximativ jumătatea volumului, ceea ce reprezintă o cantitate convenabilă) și apoi se acoperă fiecare flacon în mod neermetic (folie de aluminiu) pentru a permite schimbul gazos dintre flacon și aerul ambiental.
Close the lids.
(În cazul în care se utilizează analiza DOC, dopurile de vată nu sunt adecvate).
Samples were denatured in a Peltier PTC-225 thermal cycler at 94 ± 2 °C for 5 minutes followed by 39 cycles of 94 ± 2 °C for 1 minute, 55 ± 2 °C for 1 minute, 72 ± 2 °C for 1 minute, and a final extension of 72 ± 2 °C for 10 minutes.
Vasele se plasează pe agitator și se agită în mod continuu cu viteză redusă (de exemplu, 100 rpm) pe durata testului.
Preparation of the agarose gel (2 %):
Se controlează temperatură (15 – 20 °C și în intervalul ± 2 °C) și se protejează vasele de lumină pentru a evita creșterea de alge.
Traditionally the PCR products are resolved on a 20 % agarose gel containing ethidium bromide.
Se asigură că aerul nu conține materiale toxice.
Capillary based electrophoresis systems can also be used.
Test fizico-chimic de control (opțional)