natgillin/translations-raw huggingface dataset:
(Pimephales promelas)
După prelevarea sângelui, plasma este separată rapid prin centrifugare timp de 3 minute la 15000 g (sau, alternativ, timp de 10 minute la 15000 g la o temperatură de 4 °C).
Medaka (Oryzias latipes)
Dacă se dorește, procentul de hematocrit poate fi determinat în urma centrifugării.
Zebrafish
Plasma este apoi extrasă din tubul microhematocrit și depozitată într-un tub de centrifugare cu 0,13 unități de aprotinină (un inhibitor de protează) la o temperatură de – 80 °C până când poate fi determinată vitelogenina.
Test type
În funcție de dimensiunea Pimephales promelas (care depinde de sex), volumele de plasmă care pot fi prelevate sunt cuprinse între 5 și 60 de microlitri per pește (Jensen et al.
Flow-through
2001).
Water temperature
Procedura 1B:
Illumination quality
Pimephales promelas, prelevare de sânge din inimă
Fluorescent bulbs (wide spectrum)
Alternativ, sângele poate fi prelevat și printr-o puncție cardiacă realizată cu ajutorul unei seringi heparinizate (1000 de unități de heparină/ml).
Light intensity 10-20 μE/m2/s, 540-1000 lux, or 50-100 ft-c (ambient laboratory levels)
Sângele este transferat în tuburi Eppendorf (ținute în gheață) și apoi centrifugat (5 minute, 7000 g, la temperatura camerei).
10-20 μE/m2/s, 540-1000 lux, or 50-100 ft-c (ambient laboratory levels)
Plasma trebuie transferată în tuburi Eppendorf curate (în alicote, dacă volumul de plasmă permite acest lucru) și congelată rapid la – 80 °C până ce este analizată (Panter et al., 1998).
Photoperiod (dawn/dusk transitions are optional, however not considered necessary)
Procedura 2A:
16 h light, 8 h dark
Oryzias latipes, excizie a ficatului
12-16 h light, 12-8 h dark
Extragerea peștilor pentru testare din camera de testare
< 5 g per l
Peștii pentru testare trebuie scoși din camera de testare cu ajutorul unui minciog de mici dimensiuni.
Test chamber size
Se procedează cu grijă pentru a nu scăpa peștii pentru testare în alte camere de testare.
10 l (minimum)
În principiu, peștii pentru testare trebuie să fie scoși în următoarea ordine:
2 l (minimum)
control, control cu solvent (dacă este cazul), cea mai mică concentrație, concentrație medie, cea mai mare concentrație și control pozitiv.
5 l (minimum)
În plus, trebuie extrași toți masculii dintr-o cameră de testare înainte de extragerea femelelor rămase.
Test solution volume
Sexul fiecărui pește pentru testare este identificat pe baza caracteristicilor sexuale secundare externe (de exemplu, forma înotătoarei anale).
8 l (minimum)
Se așează peștii pentru testare într-un container de transport și se transportă la stația de lucru pentru excizia ficatului.
l (minimum)
Se verifică etichetele camerei de testare și containerul de transport pentru precizie și pentru a confirma faptul că numărul peștilor scoși din camera de testare și numărul peștilor rămași în camera de testare sunt conforme celor preconizate.
4 l (minimum)
În cazul în care sexul nu poate fi stabilit pe baza aspectului exterior al peștelui, se îndepărtează toți peștii din camera de testare.
Volume exchanges of test solutions
În acest caz, sexul este identificat prin observarea gonadei sau a caracteristicilor sexuale secundare cu ajutorul unui microscop stereoscopic.
Minimum of 6 daily
Excizia ficatului
Minimum of 5 daily
S transferă peștii pentru testare din containerul de transport în soluția anestezică cu ajutorul unui minciog de mici dimensiuni.
Age of test organisms See paragraph 20
După anestezierea peștilor pentru testare, ei sunt transferați pe o hârtie de filtru (sau pe un șervet de hârtie) cu ajutorul unei pensete (obișnuite).
See paragraph 20
Când se prind peștii pentru testare, se aplică brațele pensetei de o parte și de alta a capului pentru a evita ruperea cozii.
See paragraph 20 12.
Se șterge apa de pe suprafața peștilor pentru testare cu o hârtie de filtru (sau cu un șervet de hârtie).
Approximate wet weight of adult fish (g) Females:
Se efectuează apoi o mică incizie transversală între zona ventrală a gâtului și zona de mijloc a abdomenului cu ajutorul unei foarfeci de disecție.
1,5 ± 20 %
Se introduce foarfeca de disecție în incizia mică și se efectuează o incizie de-a lungul liniei mediane a abdomenului, de la un punct caudal la mantaua branhială până la partea craniană a anusului.
Males:
Se procedează cu grijă pentru a nu se introduce foarfeca de disecție prea adânc evitându-se astfel distrugerea ficatului și a gonadei.
2,5 ± 20 %
Se efectuează următoarele operațiuni la un microscop stereoscopic.
Females:
Se așează peștele pentru testare cu abdomenul în sus pe un șervet de hârtie (se află la dispoziție și o placă Petri din sticlă sau o lamelă din sticlă).
0,35 ± 20 %
Se îndepărtează pereții cavității abdominale cu ajutorul unei pensete de precizie și se exteriorizează organele interne.
0,65 ± 20 %
Dacă este necesar, organele interne pot fi exteriorizate și prin înlăturarea unei părți a peretelui cavității abdominale.
0,4 ± 20 %
Se expune porțiunea care leagă ficatul de vezica biliară cu ajutorul unei alte pensete de precizie.
No. of fish per test vessel
Se prinde apoi canalul biliar și se excizează vezicula biliară.
6 (2 males and 4 females)
Se procedează cu grijă pentru a nu leza vezicula biliară.
10 (5 males and 5 females)
Se prinde esofagul și se separă prin excizare tractul gastrointestinal de ficat în același mod.
No. of treatments
Se procedează cu grijă pentru a nu vărsa conținutul tractului gastrointestinal.
= 3 (plus appropriate controls)
Se separă prin excizare tractul gastrointestinal caudal de anus și se îndepărtează tractul din cavitatea abdominală.
No. vessels per treatment
Se taie masa de grăsime și alte țesuturi de la periferia ficatului.
4 minimum
Se procedează cu grijă pentru a nu zgâria ficatul.
2 minimum
Se prinde zona portală hepatică cu ajutorul pensetei de precizie și se extrage ficatul din cavitatea abdominală.
No. of fish per test concentration
Se așează ficatul pe o lamelă din sticlă.
16 adult females and 8 males (4 females and 2 males in each replicate vessel)
Cu ajutorul pensetei de precizie, se îndepărtează grăsimea și alte țesuturi (de exemplu, mucoasă abdominală), dacă este necesar, de pe suprafața ficatului.
10 adult females and 10 males (5 females and 5 males in each replicate vessel)
Se cântărește ficatul cu ajutorul unei balanțe analitice electronice, utilizând ca tară un microtub de 1,5 ml.
Feeding regime
Se înregistrează valoarea pe fișa de lucru (citire: 0,1 mg).
Live or frozen adult or nauplii brine shrimp two or three times daily (ad libitum), commercially available food or a combination of the above
Se confirmă informațiile de identificare pe eticheta microtubului.
Brine shrimp nauplii two or three times daily (ad libitum), commercially available food or a combination of the above
Se închide capacul microtubului care conține ficatul.
None unless DO concentration falls below 60 % air saturation
Se depozitează într-un stativ pentru răcire (sau stativ cu gheață).
Clean surface, well or reconstituted water or dechlorinated tap water
După excizia unui ficat, se curăță instrumentele de disecție sau se înlocuiesc cu unele curate.
Pre-exposure period
Se excizează ficații de la toți peștii din containerul de transport conform descrierii de mai sus.
7 days recommended
După excizarea ficaților de la toți peștii din containerul de transport (adică, toți masculii sau toate femelele dintr-o cameră de testare), se așează toate eșantioanele de ficat pe un stativ pentru tuburi prevăzute cu o etichetă de identificare și se depozitează într-un congelator.
Chemical exposure duration
Atunci când ficații sunt donați pentru pretratament la scurt timp după excizie, eșantioanele sunt transportate la stația de lucru următoare într-un stativ pentru răcire (sau stativ cu gheață).
Biological endpoints
După excizia ficatului, carcasa peștelui este disponibilă pentru măsurarea caracteristicilor sexuale secundare.
survival
Eșantion
behaviour
Se depozitează eșantioanele de ficat prelevate de la pești la temperatura de ≤ – 70 °C în cazul în care nu sunt utilizate pentru pretratament la scurt timp după excizie.
sex characteristics
Se efectuează o incizie în partea anterioară a înotătoarelor pectorale cu ajutorul unei foarfeci.
VTG
Figura 2
Test acceptability
Se efectuează o incizie pe linia mediană a abdomenului cu ajutorul unei foarfeci spre un punct situat la aproximativ 2 mm cranial față de anus.
Dissolved oxygen > 60 % of saturation;
Figura 3
mean temperature of 25 ± 2 °C;
Pereții abdominali sunt îndepărtați cu ajutorul unui forceps pentru a expune ficatul și celelalte organe interne.
90 % survival of fish in the controls;
(Alternativ, pereții abdominali pot fi fixați cu ace lateral).
measured test concentrations within 20 % of mean measured values per treatment level.
Figura 4
mean temperature of 24 ± 2 °C;
Ficatul este disecat și excizat cu ajutorul unui forceps.
mean temperature of 26 ± 2 °C;
Fig-5
Some chemical characteristics of acceptable dilution water
Intestinele sunt retrase ușor cu ajutorul unui forceps.
< 20 mg/l
Fig-6
< 2 mg/l
Ambele capetele ale intestinelor și toate elementele mezenterice atașate sunt secționate cu ajutorul unei foarfeci.
Total organophosphorus pesticides
Fig-7 (femelă)
Appendix 4A
Procedura este identică în cazul femelei.
Spawning substrate for zebrafish
Fig-8
Spawning tray
Procedura încheiată.
all glass instrument dish, for example 22 × 15 × 5,5 cm (l × w × d), covered with a removable stainless steel wire lattice (mesh width 2 mm).
Procedura 2 B:
The lattice should cover the opening of the instrument dish at a level below the brim.
Oryzias latipes, pretratament a ficatului pentru măsurarea vitelogeninei
On the lattice, spawning substrate should be fixed.
Se ia flaconul cu tamponul de omogenat din trusa ELISA și se răcește în bucăți de gheață (temperatura soluției: ≤ 4 °C).
It should provide structure for the fish to move into.
În cazul în care se utilizează un tampon de omogenat din sistemul EnBio ELISA, se decongelează soluția până ajunge la temperatura camerei și apoi se răcește flaconul în bucăți de gheață.
For example, artificial aquaria plants made of green plastic material are suitable (NB: possible adsorption of the test chemical to the plastic material should be considered).
Se calculează volumul tamponului de omogenat pentru ficat pe baza greutății sale (se adaugă 50 μl de tampon de omogenat per mg de ficat pentru omogenat).
The plastic material should be leached out in sufficient volume of warm water for sufficient time to ensure that no chemicals may be disposed to the test water.
De exemplu, în cazul în care greutatea ficatului este de 4,5 mg, volumul tamponului de omogenat pentru ficat este de 225 μl.
When using glass materials it should be ensured that the fish are neither injured nor cramped during their vigorous actions.
Se întocmește o listă a volumelor de tampon de omogenat pentru toți ficații.
The distance between the tray and the glass panes should be at least 3 cm to ensure that the spawning is not performed outside the tray.
Se pregătește ficatul pentru pretratament.
The eggs spawned onto the tray fall through the lattice and can be sampled 45-60 min after the start of illumination.
Se scoate de la congelator microtubul de 1,5 ml care conține ficatul chiar înainte de pretratament.
The transparent eggs are non-adhesive and can easily be counted by using transversal light.
Pretratamentul ficatului de la masculi trebuie realizat înaintea celui al femelelor pentru a evita contaminarea cu vitelogenină.
When using five females per vessel, egg numbers up to 20 at a day can be regarded as low, up to 100 as medium and more than 100 as high numbers.
În plus, pretratamentul pentru grupele de testare trebuie realizat în următoarea ordine:
The spawning tray should be removed, the eggs collected and the spawning tray re-introduced in the test vessel, either as late as possible in the evening or very early in the morning.
Numărul microtuburilor de 1,5 ml care conțin probe de ficat scoase din congelator la un moment dat nu trebuie să depășească numărul care poate fi centrifugat în acel moment.
The time until re-introduction should not exceed one hour since otherwise the cue of the spawning substrate may induce individual mating and spawning at an unusual time.
Se aranjează microtuburile de 1,5 ml care conțin probe de ficat pe stativul cu gheață în ordinea numerotării eșantioanelor (nu este necesară decongelarea ficatului).
If a situation needs a later introduction of the spawning tray, this should be done at least 9 hours after start of the illumination.
Efectuarea pretratamentului
At this late time of the day, spawning is not induced any longer.
Adăugarea tamponului de omogenizare
Appendix 4B
Se verifică lista pentru a se identifica volumul de tampon de omogenat care trebuie utilizat pentru o anumită probă de ficat și se ajustează micropipeta (intervalul de volume: 100-1000 μl) până la volumul adecvat.
Spawning substrate for fathead minnow
Se montează un vârf curat la micropipetă.
Two or three combined plastic/ceramic/glass or stainless steel spawning tiles and trays are placed in each of the test chamber (e.g., 80 mm length of grey semi-circular guttering sitting on a lipped tray of 130mm length) (see picture).
Se extrage tamponul de omogenat din flaconul cu reactiv și se adaugă tamponul în microtubul de 1,5 ml care conține ficatul.
Properly seasoned PVC or ceramic tiles have demonstrated to be appropriate for a spawning substrate (Thorpe et al, 2007).
Se adaugă tamponul de omogenat în toate microtuburile de 1,5 ml care conțin ficat conform procedurii descrise mai sus.
It is recommended that the tiles are abraded to improve adhesion.
Nu este necesară schimbarea vârfului micropipetei cu unul nou.
The tray should also be screened to prevent fish from access to the fallen eggs unless the egg adhesion efficiency has been demonstrated for the spawning substrate used.
Cu toate acestea, în cazul în care vârful este contaminat sau este suspectat a fi contaminat, acesta trebuie schimbat.
The base is designed to contain any eggs that do not adhere to the tile surface and would therefore fall to the bottom of the tank (or those eggs laid directly onto the flat plastic base).
Omogenizarea ficatului
All spawning substrates should be leached for a minimum of 12 hours, in dilution water, before use.
Se atașează un nou pistil pentru omogenizare la omogenizatorul microtubului.
Appendix 5A
Se introduce pistilul în microtubul de 1,5 ml.
Assessment of secondary sex characteristics in fathead minnow for the detection of certain endocrine active chemicals
Se utilizează omogenizatorul microtubului pentru a presa ficatul între suprafața pistilului și peretele intern al microtubului de 1,5 ml.
Overview
Se lasă omogenizatorul microtubului să funcționeze 10-20 de secunde.
Potentially important characteristics of physical appearance in adult fathead minnows in endocrine disrupter testing include body colour (i.e. light/dark), coloration patterns (i.e. presence or absence of vertical bands), body shape (i.e. shape of head and pectoral region, distension of abdomen), and specialized secondary sex characteristics (i.e. number and size of nuptial tubercles, size of dorsal pad and ovipositor).
Se răcește microtubul de 1,5 ml cu ajutorul unor bucăți de gheață pe parcursul operațiunii.
Nuptial tubercles are located on the head (dorsal pad) of reproductively-active male fathead minnows, and are usually arranged in a bilaterally-symmetric pattern (Jensen et al.
Se scoate pistilul din microtubul de 1,5 ml și se lasă deoparte aproximativ 10 secunde.
2001).
Se efectuează apoi un control vizual al stării suspensiei.
Control females and juvenile males and females exhibit no tubercle development (Jensen et al.
Dacă bucățile de ficat sunt observate în suspensie, se repetă operațiunile (3) și (4) pentru a pregăti în mod satisfăcător omogenatul de ficat.
2001).
Se răcește omogenatul de ficat în suspensie pe stativul cu gheață până în momentul centrifugării.
There can be up to eight individual tubercles around the eyes and between the nares of the males.
Se schimbă pistilul cu unul nou pentru fiecare omogenat.
The greatest numbers and largest tubercles are located in two parallel lines immediately below the nares and above the mouth.
Se omogenizează toți ficații cu tampon de omogenat conform procedurii descrise mai sus.
In many fish there are groups of tubercles below the lower jaw;
Centrifugarea omogenatului de ficat în suspensie
those closest to the mouth generally occur as a single pair, while the more ventral set can be comprised of up to four tubercles.
Se fixează temperatura camerei centrifugii frigorifice la ≤ 5 °C.
The actual numbers of tubercles is seldom more than 30 (range, 18-28; Jensen et al.
Se introduc microtuburile de 1,5 ml care conțin omogenatul de ficat în suspensie în centrifuga frigorifică (se ajustează dacă este necesar).
2001).
Se centrifughează omogenatul de ficat în suspensie la 13000 g timp de 10 min la ≤ 5 °C.
The predominant tubercles (in terms of numbers) are present as a single, relatively round structure, with the height approximately equivalent to the radius.
Totuși, dacă supernatantele sunt separate în mod adecvat, forța și timpul de centrifugare pot fi ajustate după necesități.
Most reproductively-active males also have, at least some, tubercles which are enlarged and pronounced such that they are indistinguishable as individual structures.
După centrifugare, se verifică dacă supernatantele sunt separate în mod adecvat (suprafață: lipide, intermediar: supernatant, strat inferior: țesut hepatic).
Some types of endocrine-disrupting chemicals can cause the abnormal occurrence of certain secondary sex characteristics in the opposite sex;
Dacă separarea nu este adecvată, se centrifughează suspensia din nou în aceleași condiții.
for example, androgen receptor agonists, such as 17β-methyltestosterone or 17β-trenbolone, can cause female fathead minnows to develop nuptial tubercles (Smith 1974; Ankley et al.
Se elimină toate probele din centrifuga frigorifică și se aranjează în ordinea numerotării eșantioanelor pe stativul cu gheață.
2001; 2003), while oestrogen receptor agonists may decrease number or size of nuptial tubercles in males (Miles-Richardson et al.
Se procedează cu atenție pentru a nu resuspenda fiecare strat separat după centrifugare.
1999; Harries et al.
Colectarea supernatantului
2000).
Se așează patru microtuburi de 0,5 ml pentru depozitarea supernatantului în stativul pentru tuburi.
Below is a description of the characterization of nuptial tubercles in fathead minnows based on procedures used at the U.S. Environmental Protection Agency lab in Duluth, MN.
Se colectează 30 μl din fiecare supernatant (separat ca strat intermediar) cu micropipeta și se introduce într-un microtub de 0,5 ml.
Specific products and/or equipment can be substituted with comparable materials available.
Se procedează cu atenție pentru a nu colecta lipide de pe suprafață sau țesutul hepatic din stratul inferior.
Viewing is best accomplished using an illuminated magnifying glass or 3X illuminated dissection scope.
Se colectează supernatantul și se introduce în celelalte două microtuburi de 0,5 ml în același mod ca cel descris mai sus.
View fish dorsally and anterior forward (head toward viewer).
Se colectează restul supernatantului cu micropipeta (dacă este fezabil: ≥ 100 μl).
Place fish in small Petri dish (e.g., 100 mm in diameter), anterior forward, and ventral down.
Se introduce apoi supernatantul în microtubul de 0,5 ml rămas.
Focus viewfinder to allow identification of tubercles.
Se închide dopul microtubului de 0,5 ml și se notează volumul supernatantului pe etichetă.
Gently and slowly roll fish from side to side to identify tubercle areas.
Apoi se răcesc imediat microtuburile pe stativul cu gheață.
Count and score tubercles.
Se schimbă vârful micropipetei cu unul nou pentru fiecare supernatant.
Repeat the observation on the ventral head surface by placing the fish dorsal anterior forward in the Petri dish.
În cazul în care o cantitate mare de lipide se lipește de vârf, se schimbă imediat cu unul nou pentru a evita contaminarea extractului de ficat cu grăsime.
Observations should be completed within 2 min for each fish.
Se repartizează întregul supernatant centrifugat în patru microtuburi de 0,5 ml în conformitate cu procedura descrisă mai sus.
Tubercle Counting and Rating
După aceasta, toate se așează pe stativul pentru tuburi cu eticheta de identificare și apoi se introduc imediat în congelator.
Six specific areas have been identified for assessment of tubercle presence and development in adult fathead minnows.
În cazul în care concentrațiile de VTG sunt măsurate imediat după pretratament, un microtub de 0,5 ml (conținând 30 μl de supernatant) se păstrează la rece în stativul pentru tuburi și se transferă în stația de lucru unde se realizează testul ELISA.
A template was developed to map the location and quantity of tubercles present (see end of this Appendix).
În acest caz, se așează microtuburile rămase în stativele pentru tuburi și se introduc în congelator.
The number of tubercles is recorded and their size can be quantitatively ranked as:
După colectarea supernatantului, se elimină reziduurile în mod corespunzător.
0- absence, 1-present, 2-enlarged and 3-pronounced for each organism (Fig.
Depozitarea eșantioanelor
1).
Microtuburile de 0,5 ml conținând supernatantul omogenatului de ficat se depozitează la temperatura ≤ – 70 °C până în momentul utilizării acestora în cadrul testului ELISA..
Rate 0- absence of any tubercle.
Procedura 3 A:
Rating 1-present, is identified as any tubercle having a single point whose height is nearly equivalent to its radius (diameter).
Peștele-zebră, prelevare de sânge din vena/artera caudală
Rating 2- enlarged, is identified by tissue resembling an asterisk in appearance, usually having a large radial base with grooves or furrows emerging from the centre.
Imediat după anestezie, se secționează transversal pedunculul caudal și se prelevează probe de sânge din artera/vena caudală cu ajutorul unui tub capilar microhematocrit heparinizat.
Tubercle height is often more jagged but can be somewhat rounded at times.
Volumele de sânge variază de la 5 la 15 μl în funcție de dimensiunile peștilor.
Rating 3- pronounced, is usually quite large and rounded with less definition in structure.
În tubul microcapilar se adaugă un volum egal de tampon de aprotinină (6 μgml în PBS), iar plasma este separată de sânge prin centrifugare (5 minute la 600 g).
At times these tubercles will run together forming a single mass along an individual or combination of areas (B, C and D, described below).
Plasma este colectată în tuburi de testare și depozitată la o temperatură de – 20 °C până în momentul măsurării vitelogeninei sau a altor proteine care prezintă interes.
Coloration and design are similar to rating 2 but at times are fairly indiscriminate.
Procedura 3 B:
Using this rating system generally will result in overall tubercle scores of < 50 in a normal control male possessing a tubercle count of 18 to 20 (Jensen et al.
Peștele-zebră, prelevare de sânge prin puncție cardiacă
2001).
Pentru a se evita coagularea sângelui și degradarea proteinelor, probele sunt colectate într-o soluție salină tamponată cu fosfat (PBS) conținând heparină (1000 unități/ml) și aprotinină – inhibitoare de protează (2 TIU/ml).
The actual number of tubercles in some fish may be greater than the template boxes (Appendix A) for a particular rating area.
Ca ingrediente pentru tampon se recomandă, sare de amoniu a heparinei și aprotinină liofilizată.
If this happens, additional rating numbers may be marked within, to the right or to the left of the box.
Pentru prelevarea de probe de sânge se recomandă utilizarea unei seringi (1 ml) cu un ac subțire fix (de exemplu, Braun Omnikan-F).
The template therefore does not need to display symmetry.
Seringa trebuie preumplută cu tampon (aproximativ 100 μl) pentru a realiza o eluare completă a volumelor sanguine mici de la fiecare pește.
An additional technique for mapping tubercles which are paired or joined vertically along the horizontal plane of the mouth could be done by double-marking two tubercle rating points in a single box.
Probele de sânge sunt prelevate prin puncție cardiacă.
Mapping regions:
Peștele trebuie anesteziat în prealabil cu MS-222 (100 mg/l).