natgillin/translations-raw huggingface dataset:
The bound fatty acids of the triacylglycerols (TAGs) and, depending on the esterification method, the free fatty acids (FFA), are converted into fatty acid methyl esters (FAME), which are determined by capillary gas chromatography.
PRINCIPIU
The method described in this Annex allows the determination of FAME from C12 to C24, including saturated, cis- and transmonounsaturated and cis- and trans-polyunsaturated fatty acid methyl esters.
Cromatografia în fază gazoasă este utilizată pentru analiza cantitativă a esterilor metilici ai acizilor grași.
PRINCIPLE
Esterii metilici ai acizilor grași se prepară în conformitate cu partea A. Aceștia sunt injectați și vaporizați în injector.
Gas chromatography (GC) is used for the quantitative analysis of FAME.
Separarea esterilor metilici ai acizilor grași se realizează pe coloane analitice cu polaritate și lungime specifice.
The FAME are prepared according to Part A. They are then injected into and vaporised within the injector.
Un detector cu ionizare în flacără (FID) este utilizat pentru detectarea esterilor metilici ai acizilor grași.
The separation of FAME is performed on analytical columns of specific polarity and length.
Condițiile pentru analiză sunt indicate în partea B.
A Flame Ionisation Detector (FID) is used for the detection of the FAME.
Hidrogenul sau heliul se poate utiliza ca gaz purtător (faza mobilă) în cromatografia în fază gazoasă a esterilor metilici ai acizilor grași cu detector cu ionizare în flacără.
The conditions of analysis are given in Part B.
Hidrogenul accelerează separarea și oferă vârfuri mai clare.
Hydrogen or helium may be used as the carrier gas (mobile phase) in the gas chromatography of FAME with FID.
Faza staționară este un strat microscopic al unei pelicule subțiri de lichid pe o suprafață solidă inertă din silice topită.
Hydrogen speeds up separation and gives sharper peaks.
Pe măsură ce trec prin coloana capilară, compușii volatilizați analizați interacționează cu filmul fazei staționare de pe suprafața interioară a coloanei.
The stationary phase is a microscopic layer of a thin liquid film on an inert solid surface made of fused silica.
Ca urmare a acestei interacțiuni între diferiți compuși, ei eluează la momente diferite, un astfel de moment purtând denumirea de timp de retenție a compusului pentru un set dat de parametri de analiză.
As they pass through the capillary column the volatilised compounds being analysed interact with the stationary phase coating the inner surface of the column.
Comparația timpilor de retenție este utilizată pentru identificarea diferiților compuși.
Due to this different interaction of different compounds, they elute at a different time, which is called the retention time of the compound for a given set of analysis parameters.
PARTEA A
The comparison of the retention times is used for the identification of the different compounds.
PREPARAREA ESTERILOR METILICI AI ACIZILOR GRAȘI DIN ULEIUL DE MĂSLINE ȘI DIN ULEIUL DIN RESTURI DE MĂSLINE
PART A
Această parte descrie prepararea esterilor metilici ai acizilor grași.
PREPARATION OF THE FATTY ACID METHYL ESTERS FROM OLIVE OIL AND OLIVE-POMACE OIL
Ea include metode pentru prepararea esterilor metilici ai acizilor grași din uleiurile de măsline și din uleiurile din resturi de măsline.
This part specifies the preparation of the methyl esters of fatty acids.
SFERA DE APLICARE
It includes methods for preparing fatty acid methyl esters from olive and olive-pomace oils.
Prepararea esterilor metilici ai acizilor grași din uleiurile de măsline și din uleiurile din resturi de măsline se realizează prin transesterificarea cu soluție metanolică de hidroxid de potasiu la temperatura camerei.
FIELD OF APPLICATION
Necesitatea de purificare a probei anterior transesterificării depinde de conținutul de acizi grași liberi al probei și de parametrul analitic care trebuie determinat; se poate alege în funcție de tabelul următor:
The preparation of the fatty acid methyl esters from olive oils and olive-pomace oils are performed by transesterification with methanolic solution of potassium hydroxide at room temperature.
Categoria uleiului
The necessity of purification of the sample prior to the trans-esterification depends on the sample's free fatty acids content and the analytical parameter to be determined, it can be chosen according to the following table:
Metoda
Category of oil
Ulei de măsline virgin cu o aciditate ≤ 2,0 %
Method
Acizi grași
Virgin olive oil with acidity ≤ 2,0 %
Acizi grași trans
Fatty acids
ΔECN42 (după purificare cu silicagel SPE)
trans-Fatty acids
Ulei de măsline rafinat
ΔECN42 (after purification with silica-gel SPE)
Ulei de măsline compus din uleiuri de măsline rafinate și uleiuri de măsline virgine
Refined olive oil
Ulei rafinat din resturi de măsline
Olive oil composed of refined olive oil and virgin olive oils
Ulei din resturi de măsline
Refined olive pomace oil
Ulei de măsline virgin cu o aciditate > 2,0 %
Olive pomace oil
Ulei brut din resturi de măsline
Virgin olive oil with acidity > 2,0 %
Acizi grași (după purificare cu silicagel SPE)
Crude olive pomace oil
Acizi grași trans (după purificare cu silicagel SPE)
Fatty acids (after purification with silica-gel SPE)
METODOLOGIE
trans-Fatty acids (after purification with silica-gel SPE)
Transesterificarea cu soluție metanolică de hidroxid de potasiu la temperatura camerei.
METHODOLOGY
Principiu
Trans-esterification with methanolic solution of potassium hydroxide at room temperature
Esterii metilici se formează prin transesterificare cu hidroxid de potasiu metanolic ca o etapă intermediară înainte de a avea loc saponificarea.
Principle
Reactivi
Methyl esters are formed by trans-esterification with methanolic potassium hydroxide as an intermediate stage before saponification takes place.
Metanol cu un conținut maxim de apă de 0,5 % (m/m).
Reagents
Hexan, de calitate cromatografică.
Methanol containing not more than 0,5 % (m/m) water.
Heptan, de calitate cromatografică.
Hexane, chromatographic quality.
Dietil eter, stabilizat pentru analiză.
Heptane, chromatographic quality.
Acetonă, de calitate cromatografică.
Diethyl ether, stabilised for analysis.
Solvent de eluare pentru purificarea uleiului prin cromatografie în coloană/extracție în fază solidă (SPE), amestec hexan/dietil eter 87/13 (v/v).
Acetone, chromatographic quality.
Hidroxid de potasiu, soluție metanolică de aproximativ 2M: se dizolvă 11,2 g de hidroxid de potasiu în 100 ml de metanol.
Elution solvent for purifying the oil by column/SPE chromatography, mixture hexane/diethyl ether 87/13 (v/v).
Cartușe de silicagel, 1 g (6 ml), pentru extracție în fază solidă.
Potassium hydroxide, approximately 2M methanolic solution: dissolve 11,2 g of potassium hydroxide in 100 ml of methanol.
Aparatură
Silica gel cartridges, 1 g (6 ml), for solid phase extraction.
Eprubete cu dop filetat (5 ml volum), cu capac prevăzut cu o îmbinare cu PTFE.
Apparatus
Pipete gradate sau automate, 2 ml și 0,2 ml.
Screw-top test tubes (5 ml volume) with cap fitted with a PTFE joint.
Purificarea probelor de ulei
Graduated or automatic pipettes, 2 ml and 0,2 ml.
Când este necesar, probele vor fi purificate prin trecerea uleiului printr-un cartuș de silicagel pentru extracție în fază solidă.
Purification of oil samples
Un cartuș de silicagel (3.1.2.8) este plasat într-un aparat de eluare sub vid și se spală cu 6 ml de hexan (3.1.2.2); spălarea se realizează fără vid.
When necessary, the samples will be purified by passing the oil through a silica gel solid-phase extraction cartridge.
Apoi se încărcă pe coloană o soluție de ulei (aproximativ 0,12 g) în 0,5 ml de hexan (3.1.2.2).
A silica gel cartridge (3.1.2.8) is placed in a vacuum elution apparatus and washed with 6 ml of hexane (3.1.2.2); washing is performed without vacuum.
Soluția este trasă în jos și eluată apoi cu 10 ml de hexan/dietil eter (87:13 v/v) (3.1.2.6).
Then a solution of the oil (0,12 g approximately) in 0,5 ml of hexane (3.1.2.2) is loaded onto the column.
Eluatele combinate sunt omogenizate și împărțite în două volume similare.
The solution is pulled down and then eluted with 10 ml of hexane/diethyl ether (87:13 v/v) (3.1.2.6).
O parte alicotă se evaporă până la uscare într-un evaporator rotativ la presiune scăzută și la temperatura camerei.
The combined eluates are homogenised and divided in two similar volumes.
Se dizolvă reziduul în 1 ml de heptan și soluția este pregătită pentru analiza acizilor grași prin cromatografie în fază gazoasă.
An aliquot is evaporated to dryness in a rotary evaporator under reduced pressure at room temperature.
A doua parte alicotă se evaporă, iar reziduul se dizolvă în 1 ml de acetonă pentru analiza trigliceridelor prin HPLC, dacă este necesar.
Procedure
Se lasă să se stratifice până când devine limpede soluția de deasupra.
In a 5 ml screw-top test tube (3.1.3.1) weigh approximately 0,1 g of the oil sample.
Se decantează stratul superior care conține esterii metilici.
Add 2 ml of heptane (3.1.2.2), and shake.
Soluția de heptan este pregătită pentru injectare în cromatograful în fază gazoasă.
Add 0,2 ml of the methanolic potassium hydroxide solution (3.1.2.7), put on the cap fitted with a PTFE joint, tighten the cap, and shake vigorously for 30 seconds.
Se recomandă ca soluția să fie păstrată la frigider până la analiza cromatografică în fază gazoasă.
Leave to stratify until the upper solution becomes clear.
Nu se recomandă depozitarea soluției pentru o perioadă mai mare de 12 ore.
Decant the upper layer containing the methyl esters.
PARTEA B
The heptane solution is ready for injection into the gas chromatograph.
ANALIZA ESTERILOR METILICI AI ACIZILOR GRAȘI PRIN CROMATOGRAFIE ÎN FAZĂ GAZOASĂ
It is advisable to keep the solution in the refrigerator until gas chromatographic analysis.
Această parte oferă orientări generale pentru aplicarea cromatografiei în fază gazoasă cu coloană capilară pentru a se determina compoziția calitativă și cantitativă a unui amestec de esteri metilici ai acizilor grași obținut conform metodei specificate în partea A.
Storage of the solution for more than 12 hours is not recommended.
Această parte nu este aplicabilă acizilor grași polimerizați.
PART B
Gaz purtător
ANALYSIS OF FATTY ACID METHYL ESTERS BY GAS CHROMATOGRAPHY
Gaz inert (heliu sau hidrogen), complet uscat și cu un conținut de oxigen mai mic 10 mg/kg.
This part gives general guidance for the application of capillary column gas chromatography to determine the qualitative and quantitative composition of a mixture of fatty acid methyl esters obtained in accordance with the method specified in Part A.
Nota 1:
The part is not applicable to polymerised fatty acids.
Hidrogenul poate dubla viteza de analiză, însă este periculos.
Carrier gas
Există dispozitive de securitate.
Inert gas (helium or hydrogen), thoroughly dried and with an oxygen content of less than 10 mg/kg.
Gaze auxiliare
Note 1:
Hidrogen (cu puritate ≥ 99,9 %) care nu conține impurități organice.
Hydrogen can double the speed of analysis but is hazardous.
Aer sau oxigen care nu conține impurități organice.
Safety devices are available.
Azot (cu puritate > 99 %).
Auxiliary gases
Produse de etalonare
Hydrogen (purity ≥ 99,9 %), free from organic impurities.
Amestec de esteri metilici ai acizilor grași puri sau de esteri metilici ai unei substanțe grase cu compoziție cunoscută, de preferat similară cu cea a substanței grase de analizat.
Air or oxygen, free from organic impurities.
Izomerii cis și trans ai esterilor metilici octadecenoici, octadecadienoici și octadecatrienoici sunt utili pentru identificarea izomerilor trans ai acizilor nesaturați.
Nitrogen (purity > 99 %).
Ar trebui să se facă eforturi pentru a se preveni oxidarea acizilor grași polinesaturați.
Reference standard
APARATURĂ
Mixture of methyl esters of pure fatty acids, or the methyl esters of a fat of known composition, preferably similar to that of the fatty matter to be analysed.
Instrucțiunile se referă la aparatele obișnuite de cromatografie în fază gazoasă care utilizează coloane capilare și un detector cu ionizare prin flacără.
Cis and trans isomers of octadecenoic, octadecadienoic and octadecatrienoic methyl esters are useful for the identification of trans isomers of unsaturated acids.
Cromatograful în fază gazoasă
Care should be taken to prevent the oxidation of polyunsaturated fatty acids.
Cromatograful în fază gazoasă trebuie să cuprindă următoarele elemente.
APPARATUS
Dispozitiv de injecție
The instructions given are for the usual equipment used for gas chromatography, employing capillary columns and a flame-ionisation detector.
Se utilizează un dispozitiv de injecție cu coloane capilare, caz în care dispozitivul de injecție trebuie să fie conceput special pentru utilizarea cu astfel de coloane.
Gas chromatograph
Poate fi cu divizare sau fără, cu injector pe coloană rece.
The gas chromatograph shall comprise the following elements.
Cuptor
Injection system
Cuptorul trebuie să fie în măsură să aducă coloana capilară la o temperatură de minimum 260 °C și să mențină temperatura dorită în limita a 0,1 °C.
Use an injection system with capillary columns, in which case the injection system should be specially designed for use with such columns.
Această ultimă cerință este importantă îndeosebi atunci când se utilizează un tub de silice topită.
It may be of the split type or the splitless on-column injector type.
Utilizarea unui aparat de încălzit echipat cu un programator de temperatură este recomandată în toate cazurile, în special în prezența acizilor grași cu mai puțin de 16 atomi de carbon.
Oven
Coloană capilară
The oven shall be capable of heating the capillary column to a temperature of at least 260 °C and of maintaining the desired temperature to within 0,1 °C.
Tub din material inert față de substanțele de analizat (în general de sticlă sau de silice topită).
The last requirement is particularly important when a fused silica tube is used.
Diametrul intern trebuie să fie cuprins între 0,20 și 0,32 mm.
The use of temperature-programmed heating is recommended in all cases, and in particular for fatty acids with less than 16 carbon atoms.
În interior, trebuie să suporte tratamente adecvate (prepararea stării de suprafață, inactivarea) înainte de a primi filmul fazei staționare.
Capillary column
O lungime de 60 m este suficientă pentru acizii grași și pentru izomerii cis și trans ai acizilor grași.
Tube, made of a material inert to the substances to be analysed (usually glass or fused silica).
Fază staționară, coloanele de tip polisiloxani polari (cianopropil-silicon) grefate (reticulate) sunt adecvate.
The internal diameter shall be between 0,20 to 0,32 mm.
Nota 2:
The internal surface shall undergo an appropriate treatment (e.g. surface preparation, inactivation) before receiving the stationary phase coating.
Polisiloxanii polari riscă să creeze dificultăți în identificarea și separarea acidului linolenic și a acizilor C20.
A length of 60 m is sufficient for fatty acid and cis and trans isomers of fatty acids.
Grosimile filmului trebuie să fie reduse: 0,1-0,2 μm.
Stationary phase, polar polysiloxane (cyanopropylsilicone) bonded (cross-linked) columns are suitable.
Montajul și condiționarea coloanei
Note 2:
Se respectă precauțiile obișnuite de montare a coloanelor capilare, adică dispunerea coloanei în cuptor (suport), alegerea și montarea îmbinărilor (etanșeitate), poziționarea extremităților coloanei în injector și detectorul (reducerea volumelor moarte).
There is a risk that polar polysiloxanes may give rise to difficulties in the identification and separation of linolenic acid and C20 acids.
Se pune coloana sub un flux de gaz purtător [de exemplu, 0,3 bar (30 kPa) pentru o coloană de 25 de metri lungime și cu un diametru interior de 0,3 mm].
The coatings shall be thin, i.e. 0,1 to 0,2 μm.
Se condiționează coloana prin programarea temperaturii cuptorului la 3 °C/minut de la temperatura ambiantă până la o temperatură cu 10 °C sub limita de descompunere a fazei staționare.
Assembly and conditioning of the column
Se menține cuptorul la această temperatură timp de o oră, până la stabilizarea liniei de bază.
Observe the normal precautions for assembling capillary columns, i.e. arrangement of the column in the oven (support), choice and assembly of joints (leak tightness), positioning of the ends of the column in the injector and the detector (reduction of dead-spaces).
Se revine la 180 °C pentru a se lucra în condiții izoterme.
Place the column under a flow of carrier gas (e.g. 0,3 bar (30 kPa) for a column of length 25 m and internal diameter 0,3 mm).
Nota 3:
Condition the column by temperature programming of the oven at 3 °C/min from ambient temperature to a temperature 10 °C below the decomposition limit of the stationary phase.
În comerț sunt disponibile coloane precondiționate adecvate.
Maintain the oven at this temperature for one hour until stabilisation of the baseline.
Detector cu ionizare în flacără și convertor-amplificator
Return it to 180 °C to work under isothermal conditions.
Seringa
Note 3:
Seringa trebuie să aibă o capacitate de maximum 10 μl și să fie gradată la 0,1 μl.
Suitably pre-conditioned columns are available commercially.
Sistem de culegere a datelor
Flame ionisation detector and converter-amplifier
Sistemul de culegere a datelor, conectat online cu detectoare și utilizat cu un program software adecvat pentru integrarea și normalizarea vârfurilor.
Syringe
Operațiunile descrise la punctele 4.1-4.3 vizează utilizarea unui detector cu ionizare în flacără.
The syringe shall have a maximum capacity of 10 μl, graduated in 0,1 μl divisions.
Condiții de testare
Data acquisition system
Alegerea condițiilor optime de operare pentru coloane capilare
Data acquisition system connected online with the detectors and employed with a software program suitable for peak integration and normalisation.
Datorită eficienței și permeabilității coloanelor capilare, separarea constituenților și durata analizei sunt dependente în mare măsură de debitul gazului purtător în coloană.
The operations described in 4.1 to 4.3 are for the use of a flame-ionisation detector.
Prin urmare, va fi necesar să se optimizeze condițiile de operare prin ajustarea acestui parametru (sau pur și simplu pierderea încărcăturii din capul coloanei), în funcție de ceea ce se dorește, adică îmbunătățirea separărilor sau realizarea rapidă a analizei.
Test conditions
Următoarele condiții s-au dovedit adecvate pentru separarea esterilor metilici ai acizilor grași (C4-C26).
Selection of optimum operating conditions for capillary columns
Exemple de cromatograme sunt prezentate în apendicele B:
Owing to the efficiency and permeability of capillary columns, the separation of the constituents and the duration of the analysis are largely dependent on the flow-rate of the carrier gas in the column.
Temperatura injectorului:
It will therefore be necessary to optimise the operating conditions by adjusting this parameter (or simply column head loss) depending on whether the aim is to improve separation or speed up analysis.
250 °C
The following conditions have proved to be suitable for the separation of FAMEs (C4 to C26).
Temperatura detectorului:
Examples of chromatograms are shown in Appendix B:
Temperatura cuptorului:
Injector temperature:
165 °C (8 min) la 210 °C la 2 °C/min
250 °C
Gaz purtător: hidrogen:
Detector temperature:
presiune în capul coloanei: 179 kPa
Oven temperature:
Flux total:
165 °C (8 min) to 210 °C at 2 °C/min
Raportul de splitare:
Carrier gas hydrogen:
Volumul de injectare:
column head pressure, 179 kPa
Determinarea rezoluției (a se vedea apendicele A)
Total flow:
Se calculează rezoluția, R, a două vârfuri vecine I și II, cu ajutorul formulei:
Split ratio:
R = 2 × [(dr(II) – dr(I))/(ω(I) + ω(II))] or R = 2 × [(tr(II) – tr(I))/(ω(I) + ω(II))] (USP) (United States Pharmacopeia),
Injection volume:
R = 1,18 × [(tr(II) – tr(I))/(ω0,5(I) + ω0,5(II))] (EP, BP, JP, DAB) [JP (Japanese Pharmacopeia), EP (Pharmacopée Européenne), BP (British Pharmacopeia)],
Determination of the resolution (see Appendix A)
dr(I) este distanța de retenție a vârfului I;
Calculate the resolution, R, of two neighbouring peaks I and II, using the formula:
dr(II) este distanța de retenție a vârfului II;
R = 2 × ((ddr(II) – dr(I))/(ω(I) + ω(II))) or R = 2 × ((tr(II) – tr(I))/(ω(I) + ω(II))) (USP) (United States Pharmacopeia),
tr(I) este timpul de retenție al vârfului;
R = 1,18 × ((tr(II) – tr(I))/(ω0,5(I) + ω0,5(II))) (EP, BP, JP, DAB), (JP (Japanese Pharmacopeia), EP (Pharmacopée Européenne), BP (British Pharmacopeia))
tr(II) este timpul de retenție al vârfului II;
dr(I) is the retention distance of peak I;
ω(I) este lățimea bazei vârfului I;
dr(II) is the retention distance of peak II;
ω(II) este lățimea bazei vârfului II;
tr(I) is the retention time of peak I;
ω0,5 este lățimea vârfului compusului specificat, la jumătatea înălțimii vârfului;
tr(II) is the retention time of peak II;
Dacă ω(I) ≈ ω(II), R se calculează cu ajutorul următoarelor formule:
ω(I) is the width of the base of peak I;
σ este deviația standard (a se vedea apendicele A, figura 1).
ω(II) is the width of the base of peak II;
Dacă distanța dr dintre cele două vârfuri dr(II) – dr(I) este egală cu 4σ, factorul de rezoluție R = 1.
ω0,5 is the peak width of the specified compound, at mid-height of the peak;
Dacă două vârfuri nu sunt separate complet, tangentele la punctele de inflexiune ale celor două vârfuri se intersectează în punctul C. Pentru a se separa complet cele două vârfuri, distanța dintre cele două vârfuri trebuie să fie egală cu:
If ω(I) ≈ ω(II), calculate R using the following formulas:
dr(II) – dr(I) = 6 σ de unde R = 1,5 (a se vedea apendicele A, figura 3).
σ is the standard deviation (see Appendix A, Figure 1).
EXPRIMAREA REZULTATELOR
If the distance dr between the two peaks dr(II) - dr(I) is equal to 4σ, the resolution factor R = 1.
Analiza cantitativă
If two peaks are not separated completely, the tangents to the inflection points of the two peaks intersect at point C. In order to completely separate the two peaks, the distance between the two peaks must be equal to:
Se identifică vârfurile esterului metilic al probei din cromatograma din apendicele B figura 1, dacă este necesar prin interpolare, sau prin comparație cu cele ale amestecurilor etalon de esteri metilici (în conformitate cu punctul 2.3).
dr(II) - dr(I) = 6 σ from where R = 1,5 (see Appendix A, Figure 3).
Analiza cantitativă
EXPRESSION OF RESULTS
Determinarea compoziției
Qualitative analysis
Se calculează fracțiunea de masă wi a esterilor metilici ai acizilor grași individuali, exprimată în procentaj de masă de esteri metilici, după cum urmează:
Identify the methyl ester peaks of the sample from the chromatogram in Appendix B, figure 1, if necessary by interpolation, or by comparison with those of the methyl esters reference mixtures (as indicated at point 2.3).
Mod de calcul
Quantitative analysis
Caz general
Determination of the composition
Se calculează conținutul unui constituent dat i, exprimat în procentaj de masă de esteri metilici, prin determinarea procentajului reprezentat de aria vârfului corespunzător în raport cu suma ariilor tuturor vârfurilor, cu ajutorul următoarei formule:
Calculate the mass fraction wi of the individual fatty acid methyl esters, expressed as a percentage by mass of methyl esters, as follows:
Ai este aria valorii de vârf a esterilor metilici ai acizilor grași individuali i;
Method of calculation
ΣA este suma ariilor totalității valorilor de vârf ale tuturor esterilor metilici ai acizilor grași individuali.
General case
Rezultatele sunt exprimate cu două decimale.
Calculate the content of a given component i, expressed as a percentage by mass of methyl esters, by determining the percentage represented by the area of the corresponding peak relative to the sum of the areas of all the peaks, using the following formula:
Nota 4:
Ai is the area under the peak of the individual fatty acid methyl ester i;
Pentru grăsimi și uleiuri, fracția masică a esterilor metilici ai acizilor grași este egală cu fracția masică a triacilglicerolilor în grame per 100 g.
ΣA is the sum of the areas under all the peaks of all the individual fatty acid methyl esters.
Pentru cazurile în care această ipoteză nu este permisă, a se vedea 5.2.2.2.
The results are expressed to two decimal places.
Utilizarea factorilor de corecție