natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Using the media and test conditions described in this Test Method, this criterion can be attained using a static test regime (5).
Se preferă ca factorul de separare între concentrațiile de testare să nu depășească 3,2, dar se poate folosi o valoare mai mare în cazul în care curba concentrație-răspuns este plată.
It is also anticipated that this criterion will be achievable under semi-static and flow-through test conditions.
Utilizarea a mai puțin de cinci concentrații trebuie justificată.
Calculation of the doubling time is shown in paragraph 49.
Pentru fiecare concentrație de testare se folosesc cel puțin trei probe duplicat.
Reference chemical(s), such as 3,5-dichlorophenol used in the international ring test (7), may be tested as a means of checking the test procedure.
La stabilirea intervalului de concentrații de testare (pentru testul de stabilire a intervalului și/sau testul final de stabilire a toxicității), trebuie să se rețină următoarele:
It is advisable to test a reference chemical at least twice a year or, where testing is carried out at a lower frequency, in parallel to the determination of the toxicity of a test chemical.
pentru determinarea unei ECx, concentrațiile de testare trebuie să încadreze valoarea ECx în scopul asigurării unui nivel de încredere adecvat.
All equipment in contact with the test media should be made of glass or other chemically inert material.
De exemplu, dacă se estimează EC50, concentrația cea mai mare testată trebuie să fie mai mare decât valoarea EC50.
Glassware used for culturing and testing purposes should be cleaned of chemical contaminants that might leach into the test medium and should be sterile.
Dacă valoarea EC50 se află în afara intervalului concentrațiilor de testare, intervalele de încredere aferente vor fi mari și există riscul ca evaluarea corectă a adecvării statistice a modelului să nu fie posibilă;
The test vessels should be wide enough for the fronds of different colonies in the control vessels to grow without overlapping at the end of the test.
dacă se urmărește estimarea LOEC/NOEC, concentrația cea mai scăzută de testare trebuie să fie suficient de scăzută, astfel încât creșterea să nu fie semnificativ mai mică decât cea a probei de control.
It does not matter if the roots touch the bottoms of the test vessels, but a minimum depth of 20 mm and minimum volume of 100 ml in each test vessel is advised.
În plus, concentrația cea mai mare de testare trebuie să fie suficient de mare, astfel încât creșterea să fie semnificativ mai mică decât cea a probei de control.
The choice of test vessels is not critical as long as these requirements are met.
Dacă nu este cazul, testul se va repeta folosind un interval diferit de concentrații (cu excepția cazului în care concentrația cea mai mare se află la limita solubilității sau la concentrația-limită maximă cerută, de exemplu 100 mg/l).
Glass beakers, crystallising dishes or glass petri dishes of appropriate dimensions have all proved suitable.
Fiecare test trebuie să includă probe de control constând în mediu nutritiv, număr de fronde și colonii, condiții de mediu și proceduri identice celor din vasele de testare, dar fără substanța chimică de testare.
Test vessels must be covered to minimise evaporation and accidental contamination, while allowing necessary air exchange.
Dacă se folosește un solvent sau agent de dispersie suplimentar, se va include o tratare suplimentară a probei de control cu acest solvent/agent de dispersie, prezent în aceeași concentrație cu cea din vasele cu substanța chimică de testare.
Suitable test vessels, and particularly covers, must avoid shadowing or changes in the spectral characteristics of light.
Numărul vaselor de control duplicate (și vasele cu solvenți, dacă este cazul) trebuie să fie cel puțin egal cu numărul de vase folosite pentru fiecare concentrație de testare; în mod ideal acest număr va fi de două ori mai mare.
The cultures and test vessels should not be kept together.
Dacă determinarea NOEC nu este necesară, testul poate fi modificat în sensul creșterii numărului de concentrații și al reducerii numărului de probe duplicat per concentrație.
This is best achieved using separate environmental growth chambers, incubators, or rooms.
Cu toate acestea, numărul de probe duplicat de control trebuie să fie de cel puțin trei.
Illumination and temperature must be controllable and maintained at a constant level (see paragraphs 35-36).
Expunere
Test organism
Coloniile constând în 2-4 fronde vizibile se transferă din cultura de inocul și se distribuie aleatoriu în vasele de testare în condiții aseptice.
The organism used for this test is either Lemna gibba or Lemna minor.
Fiecare vas de testare va conține un total de 9-12 fronde.
Short descriptions of duckweed species that have been used for toxicity testing are given in Appendix 2.
Numărul de fronde și colonii va fi același în fiecare vas de testare.
Plant material may be obtained from a culture collection, another laboratory or from the field.
Experiența dobândită în urma aplicării acestei metode și a ring testului a indicat că folosirea a trei probe duplicat per tratament, fiecare probă duplicat conținând inițial 9-12 fronde, este suficientă pentru a detecta diferențe de creștere de aproximativ 4-7 % inhibare calculată în funcție de viteza de creștere (10-15 % calculată în funcție de randament) între tratamente (7).
If collected from the field, plants should be maintained in culture in the same medium as used for testing for a minimum of eight weeks prior to use.
Vasele de testare vor fi poziționate aleatoriu în incubator pentru a se minimiza influența diferențelor spațiale de intensitate a luminii sau de temperatură.
Field sites used for collecting starting cultures must be free of obvious sources of contamination.
Este nevoie, de asemenea, de o dispunere fixă sau aleatorie a vaselor (sau o repoziționare mai frecventă) atunci când se fac observații.
If obtained from another laboratory or a culture collection they should be similarly maintained for a minimum of three weeks.
Dacă un test preliminar de stabilitate arată că nu poate fi menținută concentrația substanței chimice de testat (concentrația măsurată scade sub 80 % din concentrația măsurată inițial) pe durata perioadei de testare (7 zile), se recomandă un test semistatic.
The source of plant material and the species and clone (if known) used for testing should always be reported.
În acest caz, coloniile se expun unor soluții proaspăt preparate de testare și de control de cel puțin două ori în timpul testului (de exemplu ziua 3 și ziua 5).
Monocultures, that are visibly free from contamination by other organisms such as algae and protozoa, should be used.
Frecvența expunerii la un mediu proaspăt va depinde de stabilitatea substanței chimice de testare;
Healthy plants of L. minor will consist of colonies comprising between two and five fronds whilst healthy colonies of L. gibba may contain up to seven fronds.
pentru menținerea concentrațiilor cât mai aproape de nivelul constant în cazul substanțelor chimice foarte instabile sau volatile, poate fi necesară o frecvență mai mare.
The quality and uniformity of the plants used for the test will have a significant influence on the outcome of the test and should therefore be selected with care.
În unele situații poate fi necesară o procedură dinamică (8)(10).
Young, rapidly growing plants without visible lesions or discoloration (chlorosis) should be used.
Scenariul de expunere prin aplicare foliară (pulverizare) nu este inclus în prezenta metodă de testare.
Good quality cultures are indicated by a high incidence of colonies comprising at least two fronds.
Pentru aceasta, a se vedea referința (11).
A large number of single fronds are indicative of environmental stress, e.g. nutrient limitation, and plant material from such cultures should not be used for testing.
Condiții de incubare
Cultivation
Se va utiliza o lumină fluorescentă albă, caldă sau rece, continuă pentru a asigura o intensitate luminoasă cuprinsă în intervalul 85-135 μE · m– 2s– 1 atunci când este măsurată în radiație activă fotosintetică (400-700 nm) în puncte aflate la distanțe egale de sursa de lumină cu distanțele la care se află frondele de Lemna (echivalent cu 6500-10000 lucși).
To reduce the frequency of culture maintenance (e.g. when no Lemna tests are planned for a period), cultures can be held under reduced illumination and temperature (4 — 10 °C).
Diferențele față de intensitatea luminoasă selectată în zona de testare nu trebuie să depășească ± 15 %.
Details of culturing are given in Appenxix 3.
Metoda de detectare și măsurare a luminii, în special tipul de senzor, va influența valoarea măsurată.
Obvious signs of contamination by algae or other organisms may require surface sterilisation of a sub-sample of Lemna fronds, followed by transfer to fresh medium (see Appendix 3).
Senzorii sferici (care răspund la lumina din toate unghiurile de deasupra și dedesubtul planului de măsurare) și senzorii «cosinusf» (care răspund la lumina din toate unghiurile de deasupra planului de măsurare) sunt preferabili senzorilor unidirecționali și vor da valori mai mari pentru o sursă de lumină multipunct de tipul celei descrise aici.
In this eventuality the remaining contaminated culture should be discarded.
O deviație de peste 1,5 unități nu va invalida totuși testul dacă se poate demonstra întrunirea criteriilor de validitate.
Different media are recommended for Lemna minor and Lemna gibba, as described below.
Durată
Careful consideration should be given to the inclusion of a pH buffer in the test medium (MOPS (4-morpholinepropane sulphonic acid, CAS No: 1132-61-2) in L. minor medium and NaHCO3 in L. gibba medium) when it is suspected that it might react with the test chemical and influence the expression of its toxicity.
Testul se încheie după 7 zile de la transferul plantelor în vasele de testare.
Steinberg Medium (9) is also acceptable as long as the validity criteria are met.
Numărul de fronde din vasele de testare se determină și se consemnează la începutul testului, acordându-se atenție înregistrării frondelor proeminente și distincte.
A modification of the Swedish standard (SIS) Lemna growth medium is recommended for culturing and testing with L. minor.
Numărul de fronde cu aspect normal sau anormal se stabilește la începutul testului, cel puțin o dată la fiecare trei zile în timpul perioadei de expunere (adică cel puțin de două ori în timpul perioadei de 7 zile), precum și la încheierea testului.
The composition of this medium is given in Appendix 4.
Se înregistrează modificările în dezvoltarea plantei, cum ar fi dimensiunea frondei, aspectul, indicațiile de necroză, cloroză sau gibozitate, separarea coloniilor sau pierderea de flotabilitate, precum și cele privind lungimea și aspectul rădăcinii.
The growth medium, 20X — AAP, as described in Appendix 4, is recommended for culturing and testing with L. gibba.
Se înregistrează, de asemenea, caracteristici semnificative ale mediului de testare (de exemplu prezența de material nedizolvat, creșterea de alge în vasul de testare).
Steinberg medium, as described in Appendix 4, is also suitable for L. minor, but may also be used for L. gibba as long as the validity criteria are met.
Pe lângă determinările numărului de fronde în timpul testului, se evaluează și efectele substanței chimice de testare asupra uneia (sau mai multora) dintre următoarele variabile de măsurare:
Test solutions
suprafața totală a frondelor;
Test solutions are usually prepared by dilution of a stock solution.
greutatea uscată;
Stock solutions of the test chemical are normally prepared by dissolving the chemical in growth medium.
greutatea în stare proaspătă.
The highest tested concentration of the test chemical should not normally exceed the water solubility of the chemical under the test conditions.
Suprafața totală a frondelor are avantajul de a putea fi determinată pentru fiecare vas de testare și de control la începutul, în timpul și la sfârșitul testului.
It should be noted however that Lemna spp. float on the surface and may be exposed to chemicals that collects at the water-air interface (e.g. poorly water-soluble or hydrophobic chemicals or surface-active chemicals).
Greutatea uscată sau în stare proaspătă se determină la începutul testului, pe baza unui eșantion al culturii de inocul reprezentativ pentru substanța folosită la începutul testului și la sfârșitul testului, pe baza materialului din fiecare vas de testare și de control.
Under such circumstances exposure will result from material other than in solution and test concentrations may, depending on the characteristics of the test chemical, exceed water solubility.
Dacă suprafața frondelor nu se măsoară, se preferă greutatea uscată în locul greutății în stare proaspătă.
For test chemicals of low water solubility it may be necessary to prepare a concentrated stock solution or dispersion of the chemical using an organic solvent or dispersant in order to facilitate the addition of accurate quantities of the test chemical to the test medium and aid in its dispersion and dissolution.
Suprafața totală a frondelor, greutatea uscată și greutatea în stare proaspătă se determină după cum urmează:
Every effort should be made to avoid the use of such materials.
Suprafața totală a frondelor:
There should be no phytotoxicity resulting from the use of auxiliary solvents or dispersants.
suprafața totală a frondelor din toate coloniile poate fi determinată prin analiza imaginilor.
For example, commonly used solvents which do not cause phytotoxicity at concentrations up to 100 μl/l include acetone and dimethylformamide.
Se capturează o imagine a vasului de testare și a plantelor cu ajutorul unei camere video (de exemplu, prin așezarea vasului pe o cutie iluminată), iar imaginea rezultată se prelucrează digital.
If a solvent or dispersant is used, its final concentration should be reported and kept to a minimum (≤ 100 μl/l), and all treatments and controls should contain the same concentration of solvent or dispersant.
Suprafața totală a frondelor dintr-un vas de testare se poate determina apoi prin calibrare cu forme plane de arie cunoscută.
Further guidance on the use of dispersants is given in (8).
Trebuie acordată atenție excluderii interferențelor provocate de marginea vasului de testare.
Test and control groups
O metodă alternativă mai complicată constă în fotocopierea vasului de testare și a plantelor, decuparea siluetei rezultate a coloniilor și determinarea suprafeței lor folosind un analizor al suprafeței frunzelor sau hârtie milimetrică.
Prior knowledge of the toxicity of the test chemical to Lemna, e.g. from a range-finding test, will help in selecting suitable test concentrations.
Alte tehnici (de exemplu raportul dintre greutatea hârtiei corespunzătoare suprafeței siluetei coloniilor și greutatea hârtiei corespunzătoare suprafeței unei unități) pot fi, de asemenea, utile.
In the definitive toxicity test, there should normally be at least five test concentrations arranged in a geometric series.
Greutatea uscată:
Preferably the separation factor between test concentrations should not exceed 3.2, but a larger value may be used where the concentration-response curve is flat.
se colectează toate coloniile din vasele de testare și se clătesc cu apă distilată sau deionizată.
Justification should be provided if fewer than five concentrations are used.
Se înlătură excesul de apă și se usucă la 60 °C, până se atinge o greutate constantă.
At least three replicates should be used at each test concentration.
Se includ toate fragmentele de rădăcină.
In setting the range of test concentrations (for range-finding and/or for the definitive toxicity test), the following should be considered:
Greutatea uscată se exprimă cu o precizie de cel puțin 0,1 mg.
To determine an ECx, test concentrations should bracket the ECx value to ensure an appropriate level of confidence.
Greutatea în stare proaspătă:
For example, if estimating the EC50, the highest test concentration should be greater than the EC50 value.
se transferă toate coloniile în tuburi de polistiren (sau alt material inert) precântărite, cu fund rotunjit care prezintă mici orificii (1 mm).
If the EC50 value lies outside of the range of test concentrations, associated confidence intervals will be large and a proper assessment of the statistical fit of the model may not be possible.
Tuburile se centrifughează apoi la 3000 rpm la temperatura camerei, timp de 10 minute.
If the aim is to estimate the LOEC/NOEC, the lowest test concentration should be low enough so that growth is not significantly less than that of the control.
Tuburile, care conțin acum coloniile uscate, se recântăresc, iar greutatea în stare proaspătă se calculează prin scăderea greutății tubului gol.
In addition, the highest test concentration should be high enough so that growth is significantly lower than that in the control.
Frecvența măsurătorilor și determinărilor analitice
If this is not the case, the test will have to be repeated using a different concentration range (unless the highest concentration is at the limit of solubility or the maximum required limit concentration, e.g. 100 mg/l).
Dacă se folosește un test static, pH-ul fiecărui tratament se măsoară la începutul și la sfârșitul testului.
Every test should include controls consisting of the same nutrient medium, number of fronds and colonies, environmental conditions and procedures as the test vessels but without the test chemical.
Dacă se folosește un test semistatic, pH-ul se măsoară în fiecare lot de soluție de testare «proaspătă» înainte de fiecare reînnoire, precum și în soluțiile «uzate» corespunzătoare.
If an auxiliary solvent or dispersant is used, an additional control treatment with the solvent/dispersant present at the same concentration as that in the vessels with the test chemical should be included.
Intensitatea luminoasă se măsoară în încăperea, incubatorul sau camera de creștere în puncte aflate la distanțe de sursa de lumină identice cu cele ale frondelor de Lemna.
The number of replicate control vessels (and solvent vessels, if applicable) should be at least equal to, and ideally twice, the number of vessels used for each test concentration.
Măsurătorile se fac cel puțin o dată în timpul testului.
If determination of NOEC is not required, the test design may be altered to increase the number of concentrations and reduce the number of replicates per concentration.
Temperatura mediului dintr-un vas înlocuitor menținut în condiții identice în încăperea, incubatorul sau camera de creștere se măsoară cel puțin o dată pe zi.
However, the number of control replicates must be at least three.
Concentrațiile substanței chimice de testat se determină la intervale corespunzătoare în timpul testului.
Exposure
În testele statice, cerința minimă este de a determina concentrațiile la începutul și la sfârșitul testului.
Each test vessel should contain a total of 9 to 12 fronds.
Cu toate acestea, pentru testele în care concentrația inițială măsurată a substanței chimice de testare nu se situează în limita a ± 20 % din cea nominală, dar se pot aduce dovezi suficiente care să indice repetabilitatea și stabilitatea concentrațiilor inițiale (adică în intervalul de 80-120 % din concentrațiile inițiale), determinările chimice se vor efectua doar la concentrațiile de testare cele mai mari și cele mai scăzute.
The number of fronds and colonies should be the same in each test vessel.
În toate cazurile, determinarea concentrațiilor substanței chimice de testare înainte de reînnoire trebuie efectuată doar la un vas duplicat la fiecare concentrație de testare (sau la conținutul vaselor combinate în funcție de proba duplicat).
Experience gained with this method and ring-test data have indicated that using three replicates per treatment, with each replicate containing 9 to 12 fronds initially, is sufficient to detect differences in growth of approximately 4 to 7 % of inhibition calculated by growth rate (10 to 15 % calculated by yield) between treatments (7).
Dacă se folosește un test în regim dinamic, se recomandă un regim de recoltare a eșantioanelor similar cu cel descris pentru testele semistatice, inclusiv analiza la începutul, mijlocul și sfârșitul testului, dar măsurarea soluțiilor «uzate» nu este adecvată în acest caz.
A randomised design for location of the test vessels in the incubator is required to minimise the influence of spatial differences in light intensity or temperature.
La aceste tip de test, trebuie verificat zilnic debitul diluantului și al substanței chimice de testare sau al soluției stoc a substanței chimice de testare.
A blocked design or random repositioning of the vessels when observations are made (or repositioning more frequently) is also required.
Dacă abaterea de la concentrația nominală sau cea măsurată inițial nu se află în limita a ± 20 %, este necesar ca rezultatele să se exprime în funcție de media geometrică a concentrației în timpul expunerii sau de modelele care descriu declinul concentrației substanței chimice de testare (8).
If a preliminary stability test shows that the test chemical concentration cannot be maintained (i.e. the measured concentration falls below 80 % of the measured initial concentration) over the test duration (7 days), a semi-static test regime is recommended.
Unui test la valori-limită i se aplică toate condițiile de testare și criteriile de validitate descrise anterior, cu excepția faptului că numărul de probe duplicat supuse tratamentului trebuie să fie dublu.
In this case, the colonies should be exposed to freshly prepared test and control solutions on at least two occasions during the test (e.g. days 3 and 5).
Creșterea în grupul de control și în cel supus tratamentului poate fi analizată folosind un test statistic de comparare a mediilor, cum ar fi un test-t (Student).
The frequency of exposure to fresh medium will depend on the stability of the test chemical;
Timp de duplicare
a higher frequency may be needed to maintain near-constant concentrations of highly unstable or volatile chemicals.
Pentru determinarea timpului de duplicare (Td) a numărului de fronde și asigurarea respectării de către studiu a acestui criteriu de validitate (punctul 12), se utilizează următoarea formulă cu datele obținute de la vasele de control:
In some circumstances, a flow-through procedure may be required (8)(10).
unde μ este viteza medie specifică de creștere determinată conform descrierii de la punctele 54-55.
The exposure scenario through a foliar application (spray) is not covered in this test method;
Scopul testului este de a determina efectele substanței chimice de testat asupra creșterii vegetative a Lemna.
instead, see (11).
Prezenta metodă de testare descrie două variabile de răspuns, deoarece diferitele jurisdicții au preferințe și cerințe de reglementare diferite.
Incubation conditions
Viteza medie specifică de creștere:
Continuous warm or cool white fluorescent lighting should be used to provide a light intensity selected from the range of 85-135 μE · m– 2s– 1 when measured in a photosynthetically active radiation (400-700 nm) at points the same distance from the light source as the Lemna fronds (equivalent to 6500-10000 lux).
această variabilă de răspuns se calculează pe baza modificărilor logaritmilor numerelor de fronde și, în plus, pe baza modificărilor logaritmilor unui alt parametru de măsurare (suprafața totală a frondelor, greutatea uscată sau greutatea în stare proaspătă) în funcție de timp (exprimat în zile) în probele de control și în fiecare grup supus tratamentului.
Any differences from the selected light intensity over the test area should not exceed the range of ± 15 %.
Este numită uneori viteză relativă de creștere (12).
The method of light detection and measurement, in particular the type of sensor, will affect the measured value.
Randamentul: