natgillin/translations-raw huggingface dataset:
The weight of the pooled head and tail from each fish is measured to the nearest mg.
În cazul în care sunt utilizate metode statice cu reînnoire, stabilitatea concentrației substanței chimice testate trebuie documentată și trebuie să rămână în limitele criteriilor privind performanța.
After being weighed, the parts are placed in appropriate tubes (e.g. 1,5 ml eppendorf) and frozen at – 80 °C until homogenisation or directly homogenised on ice with two plastic pistils.
Sunt recomandate perioade de reînnoire de douăzeci și patru de ore.
(Other methods can be used if they are performed on ice and the result is a homogenous mass).
Perioadele de reînnoire care depășesc 72 de ore nu sunt acceptabile.
The tubes should be numbered properly so that the head and tail from the fish can be related to their respective body-section used for gonad histology.
În plus, parametrii privind calitatea apei (OD, temperatură, pH, etc.) trebuie măsurați la sfârșitul fiecărei perioade de reînnoire, imediat înainte de reînnoire.
When a homogenous mass is achieved, 4 x the tissue weight of ice-cold homogenisation buffer is added.
Intervalul de concentrații de testare
Keep working with the pistils until the mixture is homogeneous.
Este necesar un număr minim de trei concentrații de testare și un control cu apă curată (și un control cu vehicul, dacă este necesar).
Important note:
Diferența minimă a concentrației de testare între cea mai mare și cea mai mică trebuie să fie de aproximativ un ordin de mărime.
New pistils are used for each fish.
Separarea maximă a dozei este de 0,1 și cea minimă este de 0,33.
The samples are placed on ice until centrifugation at 4 °C at 50000 × g for 30 min.
Începerea și realizarea testului
Use a pipette to dispense portions of 20 μl supernatant into at least two tubes by dipping the tip of the pipette below the fat layer on the surface and carefully sucking up the supernatant without fat- or pellet fractions.
Expunerea trebuie începută în momentul în care un număr suficient de mormoloci din populația stocului de preexpunere a atins stadiul de dezvoltare de 51, conform Nieuwkoop și Faber (8), și care au vârsta mai mică sau egală cu 17 zile după fertilizare.
The tubes are stored at – 80 °C until use.
Pentru selectarea animalelor de testare, mormoloci sănătoși și cu aspect normal din cadrul populației stoc trebuie comasați într-un singur vas care să conțină un volum corespunzător de apă de diluție.
Homogenisation buffer:(50 mM Tris-HCl pH 7,4; 1 % Protease inhibitor cocktail (Sigma)):
Pentru determinarea stadiului de dezvoltare, mormolocii trebuie să fie îndepărtați în mod individual din bazinul de în care au fost comasați, cu ajutorul unei mici plase sau strecurători și trebuie transferați într-un spațiu de măsurare transparent (de exemplu, placă Petri de 100 mm) care conține apă de diluție.
12 ml Tris-HCl pH 7,4 + 120 μl Protease inhibitor cocktail.TRIS:
Pentru determinarea stadiului, este preferabil să nu se recurgă la anestezie, însă mormolocii pot fi anesteziați individual utilizând 100 mg/l de metansulfonat de tricaină (de exemplu, MS-222), tamponată în mod corespunzător cu bicarbonat de sodiu (pH 7) înainte de manipulare.
TRIS-ULTRA PURE (ICN) e.g. from Bie & Berntsen, Denmark.Protease inhibitor cocktail:
Dacă este utilizată, metodologia de utilizare corespunzătoare, de exemplu a MS-222, pentru anestezie trebuie obținută de la laboratoare experimentate și raportată împreună cu rezultatele testului.
From Sigma (for mammalian tissue) Product number P 8340.Note:
Animalele trebuie să fie manipulate cu grijă pe durata acestui transfer pentru a minimaliza stresul cauzat de manipulare și pentru a evita orice leziune.
The homogenisation buffer should be used the same day as manufactured.
Stadiul de dezvoltare al animalelor este determinat cu ajutorul un microscop de disecție binocular.
Place on ice during use.
Pentru a reduce variabilitatea ultimă în stadiul de dezvoltare, este important ca determinarea stadiului să fie realizată cât mai exact posibil.
Vitellogenin fortification samples and inter-assay reference standard
Conform Nieuwkoop și Faber (8), reperul principal care indică stadiul de dezvoltare utilizat pentru selectarea organismelor din stadiul 51 este morfologia membrelor posterioare.
On each day that vitellogenin assays are performed, a fortification sample made using an inter-assay reference standard will be analysed.
Caracteristicile morfologice ale membrelor posterioare trebuie să fie examinate la microscop.
The vitellogenin used to make the inter-assay reference standard will be from a batch different from the one used to prepare calibration standards for the assay being performed.
Dacă pentru informații complete privind determinarea stadiului mormolocilor trebuie să se consultate ghidul Nieuwkoop și Faber (8), stadiul poate fi determinat în mod fiabil utilizând reperele morfologice majore.
The fortification sample will be made by adding a known quantity of the inter-assay standard to a sample of control male plasma.
Tabelul de mai jos poate fi utilizat pentru a simplifica și pentru a standardiza procesul de determinare a stadiului pe întreaga durată a studiului prin identificarea acelor repere morfologice majore care sunt asociate unor diferite stadii, presupunând că dezvoltarea este normală.
The sample will be fortified to achieve a vitellogenin concentration between 10 and 100 times the expected vitellogenin concentration of control male fish.
Repere morfologice majore de stadializare conform ghidului Neuwkoop și Faber.
The sample of control male plasma that is fortified may be from an individual fish or may be a composite from several fish.
Repere morfologice majore
A subsample of the unfortified control male plasma will be analysed in at least two duplicate wells.
Stadiu de dezvoltare
The fortified sample also will be analysed in at least two duplicate wells.
Membre posterioare
The mean quantity of vitellogenin in the two unfortified control male plasma samples will be added to the calculated quantity of vitellogenin added to fortification the samples to determine an expected concentration.
Membre anterioare
The ratio of this expected concentration to the measured concentration will be reported along with the results from each set of assays performed on that day.
Structura craniofacială
Decision flowchart for the statistical analysis
Morfologia nervului olfactiv
Dunnett test on nested ANOVA
Lungimea cozii
No Yes
Pentru începerea testului, toți mormolocii trebuie să fie în stadiul 51.
Dunn or Mann-Whitney test on rep means
Cel mai important reper morfologic major de stadializare pentru stadiul respectiv este morfologia membrelor posterioare, care este demonstrată în Figura 1.
variance stabilising transform
Morfologia membrelor posterioare a unui mormoloc X. laevis în stadiul 51.
>=4 reps per conc
În plus față de selectarea stadiului de dezvoltare, poate fi folosită selectarea opțională a dimensiunii animalelor utilizate în scopuri experimentale.
<=3 reps per conc Dunn test Yes
În acest scop, lungimea corpului întreg (nu SVL) trebuie măsurată în ziua 0 pentru un subeșantion de aproximativ 20 de mormoloci aflați în stadiul 51 conform NF.
No Normalising transform?
După calcularea mediei lungimii corpului întreg pentru acest grup de animale, limitele minimă și maximă pentru lungimea corpului întreg a animalelor utilizate în scopuri experimentale pot fi stabilite permițând un interval al valorii medii de ± 3 mm (valorile medii ale lungimii corpului întreg sunt cuprinse între 24 și 28,1 mm pentru mormolocii în stadiul 51).
Tamhane-Dunnett test >=4 reps per conc
Cu toate acestea, determinarea stadiului de dezvoltare constituie parametrul principal în a determina dacă fiecare animal este gata de testare.
<=3 reps per conc Nested ANOVA not normal No Yes No
Mormolocii care prezintă malformații sau leziuni vizibile macroscopic trebuie excluși de la testare.
Yes variance stabilising transformation
Mormolocii care îndeplinesc criteriile de stadializare descrise mai sus sunt ținuți într-un bazin cu apă curată de cultură până la finalizarea procesului de determinare a stadiului.
Dunnett test Variances unequal
După finalizarea procesului de determinare a stadiului, larvele sunt distribuite în mod aleatoriu în bazinele de tratament de expunere până când fiecare bazin conține 20 de larve.
Variances equal
Fiecare bazin de tratament este ulterior inspectat pentru a detecta animale cu aspect anormal (de exemplu, leziuni, comportament de înot anormal, etc.).
Not monotone
Mormolocii cu un aspect evident nesănătos trebuie îndepărtați din bazinele de tratament și înlocuiți cu larve nou selectate din bazinul de comasare.
Stept-down Jonckheere or Williams' test
Pentru informații mai aprofundate privind procedurile de terminare a testării și prelucrarea mormolocilor, a se consulta «OECD Guidance Document on Amphibian Thyroid Histology» (Document de orientare al OCDE privind histologia tiroidei amfibienilor) (9).
Step-down trendtest on replicate means
Ziua 7 Măsurători
Monotone
În ziua 7, cinci mormoloci aleși în mod aleatoriu per replică sunt îndepărtați din fiecare bazin de testare.
Tamhane-Dunnett test on nested ANOVA
Procedura de selectare aleatorie utilizată trebuie să confere fiecărui organism testat o probabilitate egală de a fi selectat.
Dunn test on rep means
Aceasta se poate realiza prin utilizarea oricărei metode de randomizare, însă necesită ca fiecare mormoloc să fie prins.
Dunn or Mann-Whitney test
Mormolocii neselectați sunt transferați înapoi în bazinul de origine, iar mormolocii selectați sunt eutanasiați fără cruzime excesivă în 150 – 200 mg/l MS-222 tamponată în mod corespunzător cu bicarbonat de sodiu pentru a se obține pH 7.
Nested ANOVA normal
Mormolocii eutanasiați sunt clătiți cu apă și uscați prin tamponare, proces urmat de determinarea greutății corporale cu rotunjire la cel mai apropiat miligram.
Rep means normally distributed
Lungimea membrelor posterioare, lungimea bot-cloacă și stadiul de dezvoltare sunt determinate pentru fiecare mormoloc (cu ajutorul unui microscop de disecție binoculară).
Step-down Jonckheere test
Ziua 21 Măsurători (încheierea testului)
Rep means normal or not homogenous
În momentul încheierii testului (ziua 21), mormolocii rămași sunt îndepărtați din bazinele de testare și eutanasiați fără cruzime excesivă în 150 – 200 mg/l MS-222 tamponată în mod corespunzător cu bicarbonat de sodiu, astfel cum se descrie mai sus.
Rep means normal & homogenous
Mormolocii sunt clătiți cu apă și uscați prin tamponare, proces urmat de determinarea greutății corporale cu rotunjire la cel mai apropiat miligram.
Determine whether Dose-Response is monotone
Stadiul de dezvoltare, SVL și lungimile membrelor posterioare sunt măsurate pentru fiecare mormoloc.
C.38.
Toate larvele sunt plasate în soluție de fixare Davidson timp de 48 – 72 de ore, fie ca eșantioane de corp întreg, fie ca eșantioane fără cap conținând maxilarul inferior pentru evaluări histologice.
THE AMPHIBIAN METAMORPHOSIS ASSAY
Pentru histopatologie, trebuie prelevați din fiecare bazin replică un număr total de cinci mormoloci.
This test method is equivalent to OECD test guideline (TG) 231 (2009).
Având în vedere faptul că înălțimea unei celule foliculare depinde de stadiu (10), cea mai adecvată metodă în ceea ce privește eșantionarea pentru analize histologice este, ori de câte ori este posibil, utilizarea unor indivizi aflați în stadii de dezvoltare compatibile.
The need to develop and validate an assay capable of detecting chemicals active in the thyroid system of vertebrate species originates from concerns that environmental levels of chemicals may cause adverse effects in both humans and wildlife.
În vederea selectării indivizilor aflați în stadii de dezvoltare compatibile, trebuie determinat stadiul de dezvoltare a tuturor larvelor înainte de selectare și prelucrarea subsecventă în vederea colectării și conservării de date.
In 1998, the OECD initiated a high-priority activity to revise existing TGs and to develop new TGs for the screening and testing of potential endocrine disrupters.
Acest lucru este necesar deoarece divergența normală în dezvoltare va avea ca rezultat distribuții stadiale distincte în cadrul fiecărui bazin replică.
One element of the activity was to develop a TG for the screening of chemicals active on the thyroid system of vertebrate species.
Animalele selectate pentru histopatologie (n = 5 din fiecare bazin replică) trebuie corelate medianei stadiului controalelor (replici comasate), ori de câte ori este posibil.
Both an enhancement of the Repeated dose 28-day oral toxicity study in rodents (Chapter B.7 of this Annex) and the Amphibian Metamorphosis Assay (AMA) were proposed.
În cazul în care există bazine replică în care se află mai mult de cinci larve în stadiul corespunzător, atunci cinci larve sunt selectate în mod aleatoriu.
The enhanced test method B.7 underwent validation and a revised test method has been issued.
În cazul în care există bazine replică cu mai puțin de cinci larve în stadiul corespunzător, atunci indivizii selectați în mod aleatoriul din stadiul vecin de dezvoltare, inferior sau superior, trebuie să fie eșantionați pentru a constitui o dimensiune totală a eșantionului de cinci larve per replică.
The Amphibian Metamorphosis Assay (AMA) underwent an extensive validation programme which included intra- and inter-laboratory studies demonstrating the relevance and reliability of the assay (1, 2).
De preferință, decizia de a eșantiona larve suplimentare din stadiul vecin de dezvoltare, inferior sau superior, trebuie luată pe baza unei evaluări generale a distribuției stadiilor în bazinele de control și în cele cu tratament chimic.
Subsequently, the validation of the assay was subject to peer-review by a panel of independent experts (3).
Adică, în cazul în care tratamentul chimic este asociat cu o întârziere a dezvoltării, trebuie eșantionate larve suplimentare din stadiul imediat inferior.
This test method is the outcome of the experience gained during the validation studies for the detection of thyroid active chemicals, and of work conducted elsewhere in OECD member countries.
În schimb, în cazul în care tratamentul chimic este asociat cu o accelerare a dezvoltării, trebuie eșantionate larve suplimentare din stadiul imediat superior.
The Amphibian Metamorphosis Assay (AMA) is a screening assay intended to empirically identify chemicals which may interfere with the normal function of the hypothalamic-pituitary-thyroid (HPT) axis.
În caz de modificări severe ale dezvoltării mormolocilor ca urmare a tratamentului cu o substanță chimică testată, ar putea să nu existe o suprapunere a distribuirii stadiilor în bazinele cu tratament chimic cu stadiul de dezvoltare median calculat în bazinele de control.
The AMA represents a generalised vertebrate model to the extent that it is based on the conserved structures and functions of the HPT axis.
Doar în aceste cazuri, procesul de selecție trebuie să fie modificat utilizând un stadiu diferit de stadiul median de control pentru a se obține o eșantionare compatibilă cu stadiul a larvelor pentru histopatologie tiroidiană.
It is an important assay because amphibian metamorphosis provides a well-studied, thyroid-dependent process which responds to chemicals active within the HPT axis, and it is the only existing assay that detects thyroid activity in an animal undergoing morphological development.
În plus, dacă stadiile sunt nedeterminate (asincronie), 5 mormoloci din fiecare replică trebuie aleși în mod aleatoriu pentru analiza histologică.
The general experimental design entails exposing stage 51 Xenopus laevis tadpoles to a minimum of three different concentrations of a test chemical and a dilution water control for 21 days.
Raționamentul care stă la baza eșantionării oricărei larve care nu se află într-un stadiu echivalent cu stadiul de dezvoltare median de control trebuie raportată.
There are four replicates of each test treatment.
Determinarea parametrilor biologici studiați
Larval density at test initiation is 20 tadpoles per test tank for all treatment groups.
Pe durata fazei de expunere de 21 de zile, măsurarea principalilor parametri studiați este realizată în zilele 7 și 21, fiind necesară, totuși, observarea zilnică a animalelor testate.
The observational endpoints are hind limb length, snout to vent length (SVL), developmental stage, wet weight, thyroid histology, and daily observations of mortality.
Tabelul 3 conține o prezentare generală a parametrilor studiați care vor fi măsurați și a momentelor de observare corespunzătoare.
Test Species
Informații mai detaliate privind procedurile tehnice de măsurare a parametrilor studiați apicali și evaluările histologice sunt disponibile în documentele de orientare ale OCDE (9).
Xenopus laevis is routinely cultured in laboratories worldwide and is easily obtainable through commercial suppliers.
Momentele de observare a principalilor parametri studiați în AMA.
Reproduction can be easily induced in this species throughout the year using human chorionic gonadotropin (hCG) injections and the resultant larvae can be routinely reared to selected developmental stages in large numbers to permit the use of stage-specific test protocols.
Parametrii apicali
It is preferred that larvae used in the assay are derived from in-house adults.
Zilnic
As an alternative although this is not the preferred procedure, eggs or embryos may be shipped to the laboratory performing the test and allowed to acclimate;
Mortalitate
the shipping of larval stages for use in the test is unacceptable.
Lungimea membrelor posterioare
Equipment and Supplies
Lungimea bot-cloacă
The following equipment and supplies are needed for the conduct of this assay:
Greutatea corporală umedă
Exposure system (see description below);
Histologia glandei tiroide
Glass or stainless steel aquaria (see description below);
Stadiul de dezvoltare, lungimea membrelor posterioare, SVL și greutatea umedă sunt parametrii apicali ai AMA, fiecare fiind descris în mod succint mai jos.
Breeding tanks;
În documentele de orientare din referințe sunt disponibile mai multe informații tehnice referitoare la colectarea acestor date, inclusiv proceduri de analiză asistate de calculator, care sunt recomandate pentru a fi utilizate.
Temperature controlling apparatus (e.g., heaters or coolers (adjustable to 22° ± 1 °C));
Stadiul de dezvoltare al mormolocilor de X. laevis este determinat cu ajutorul criteriilor de determinare a stadiului de dezvoltare conform Nieuwkoop și Faber (8).
Thermometer;
Datele privind stadiul de dezvoltare sunt utilizate pentru a determina dacă dezvoltarea este accelerată, asincronă, întârziată sau neafectată.
Binocular dissection microscope;
Accelerarea sau întârzierea dezvoltării este determinată prin compararea medianei stadiilor atinse de grupele de control și de grupele tratate.
Digital camera with at least 4 megapixel resolution and micro function;
Dezvoltarea asincronă este raportată atunci când țesuturile examinate nu prezintă nicio anomalie sau malformație, însă ritmul morfogenezei sau al dezvoltării diferitelor țesuturi este perturbat la un singur mormoloc.
Image digitising software;
Diferențierea și creșterea membrelor posterioare se află sub controlul hormonilor tiroidieni și reprezintă repere majore de dezvoltare deja utilizate în determinarea stadiului de dezvoltare.
Petri dish (e.g. 100 × 15 mm) or transparent plastic chamber of comparable size;
Dezvoltarea membrelor posterioare este utilizată calitativ în determinarea stadiul de dezvoltare, însă aici este luată în considerare ca parametru cantitativ.
Analytical balance capable of measuring to 3 decimal places (mg);
Prin urmare, lungimea membrelor posterioare este măsurată ca parametru studiat în vederea detectării efectelor asupra axului tiroidian (figura 2).
Dissolved oxygen meter;
Din motive de coerență, lungimea membrelor posterioare este măsurată la nivelul membrului posterior stâng.
pH meter;
Lungimea membrelor posterioare este evaluată în ziua 7 și în ziua 21 a testului.
Light intensity meter capable of measuring in lux units;
În ziua 7, măsurarea lungimii membrelor posterior este simplă, astfel cum se ilustrează în figura 2.
Miscellaneous laboratory glassware and tools;
Cu toate acestea, măsurarea lungimii membrelor posterioare în ziua 21 este mai complicată ca urmare a flectării membrelor.
Adjustable pipettes (10 to 5000 μl) or assorted pipettes of equivalent sizes;
Prin urmare, măsurarea lungimii membrelor posterioare în ziua 21 trebuie să înceapă de la peretele cavității abdominale și să urmeze linia mediană a membrului prin orice devieri unghiulare.
Test chemical in sufficient quantities to conduct the study, preferably of one lot;
Modificările lungimii membrelor posterioare în ziua 7, chiar dacă nu sunt evidente în ziua 21, sunt considerate în continuare semnificative pentru potențialul activității tiroidiene.
Analytical instrumentation appropriate for the chemical on test or contracted analytical services.
Măsurătorile lungimilor sunt obținute fotografii digitale utilizând programe informatice de analiză, astfel cum este descris în documentul OCDE de orientare privind histologia tiroidei amfibienilor (9).
Chemical Testability
Lungimea corpului și greutatea umedă
The AMA is based upon an aqueous exposure protocol whereby test chemical is introduced into the test chambers via a flow-through system.
Determinarea lungimii bot-cloacă (SVL) (figura 2) și a greutății umede este inclusă în protocolul de testare în vederea evaluării efectelor posibile ale substanțelor chimice testate asupra ritmului de creștere a mormolocilor în raport cu grupal de control și sunt utile în detectarea toxicității generale determinate de substanța chimică testată.
Flow-through methods however, introduce constraints on the types of chemicals that can be tested, as determined by the physicochemical properties of the chemical.
Întrucât eliminarea apei aderente pentru determinarea greutății poate provoca condiții de stres pentru mormoloci și poate cauza leziuni ale pielii, aceste măsurători sunt efectuate în ziua 7 pe mormolocii subeșantionați și pe toți mormolocii rămași la încheierea testului (ziua 21).
Therefore, prior to using this protocol, baseline information about the chemical should be obtained that is relevant to determining the testability, and the OECD Guidance Document on Aquatic Toxicity Testing of Difficult Substances and Mixtures (4) should be consulted.
Din motive de coerență, ca limită caudală de măsurare trebuie utilizat partea cranială a cloacei.
Characteristics which indicate that the chemical may be difficult to test in aquatic systems include:
Lungimea bot-cloacă (SVL) este utilizată pentru a evalua creșterea mormolocilor astfel cum se ilustrează în figura 2.
high octanol water partitioning coefficients (log Kow), high volatility, susceptibility to hydrolysis, and susceptibility to photolysis under ambient laboratory lighting conditions.
Tipuri de măsurători ale lungimii corpului și (B) măsurători ale lungimii membrelor posterioare pentru mormoloci de X. laevis (1).
Other factors may also be relevant to determining testability and should be determined on a case by case basis.
În timp ce stadiul de dezvoltare și lungimea membrelor posterioare reprezintă parametrii studiați importanți pentru evaluarea schimbărilor legate de expunere în dezvoltarea metamorfică, întârzierea în dezvoltare nu poate considerată, prin ea însăși, un indicator cu valoare diagnostică pentru activitatea antitiroidiană.
If a successful test is not possible for the chemical using a flow-through test system, a static renewal system may be employed.
Unele modificări pot fi observate doar prin analiza histopatologică de rutină.
If neither system is capable of accommodating the test chemical, then the default is to not test it using this protocol.
Criteriile de diagnostic includ hipertrofia/atrofia glandei tiroide, hipertrofia celulelor foliculare, hiperplazia celulelor foliculare și următoarele criterii calitative suplimentare:
Exposure System
zona luminală foliculară, calitate coloidului și înălțimea/forma celulelor foliculare.
A flow-through diluter system is preferred, when possible, over a static renewal system.
Gradele de gravitate (4 grade) trebuie raportate.