natgillin/translations-raw huggingface dataset:
One of the following two growth media may be used:
CaCl2 · 2H2O
OECD medium:
MgSO4 · 7H2O
Original medium of OECD TG 201, also according to ISO 8692
Soluția stoc 2:
EPA medium AAP also according to ASTM.
fier
When preparing these media, reagent or analytical-grade chemicals should be used and deionised water.
FeCl3 · 6H2O
Composition of the AAP-medium (US.
EDTA · 2H2O
EPA) and the OECD TG 201 medium.
Soluția stoc 3:
Component
microelemente
OECD
MnCl2 · 4H2O
MgCl2·6(H2O)
CoCl2 · 6H2O
CaCl2·2(H2O)
CuCl2 · 2H2O
MgSO4·7(H2O)
MoO4 · 2H2O
FeCl3·6(H2O)
Soluția stoc 4:
EDTA·2(H2O)
bicarbonat
MnCl2·4(H2O)
SiO3 · 9H20
CoCl2·6(H2O)
Soluțiile stoc se sterilizează prin filtrarea prin membrană (diametrul mediu al porilor 0,2 μm) sau în autoclavă (120 °C, 15 min).
MoO4·2(H2O)
Soluțiile se depozitează la întuneric la 4 °C.
CuCl2·2(H2O)
Soluțiile stoc nr.
This prevents iron precipitation and at the same time, chelation of heavy metal ions is minimised.
Se pregătește un mediu de cultură prin adăugarea unui volum adecvat al soluțiilor stoc 1-4 în apă:
The pH of the medium is obtained at equilibrium between the carbonate system of the medium and the partial pressure of CO2 in atmospheric air.
10 ml de soluție stoc nr.
An approximate relationship between pH at 25 oC and the molar bicarbonate concentration is:
1
With 15 mg NaHCO3/l, pHeq = 7,5 (U.S. EPA medium) and with 50 mg NaHCO3/l, pHeq = 8,1 (OECD medium).
1 ml de soluție stoc nr.
Element
1 ml de soluție stoc nr.
Nutrient
1 ml de soluție stoc nr.
Stock solution 1:
Se completează până la 1000 ml cu apă sterilizată.
1,5 g/l
Se adaugă 1 ml din fiecare soluție stoc în 2.1–2.7 la aproximativ 900 ml de apă deionizată sau distilată, apoi se diluează la 1 l.
MgCl2·6H2O
Soluțiile stoc de macronutrienți se obține prin dizolvarea următoarelor substanțe în 500 ml de apă deionizată sau distilată.
1,2 g/l
Reactivii 2.1, 2.2, 2.3, și 2.4 pot fi combinați într-o singură soluție stoc.
1,8 g/l
SiO3 · 9H2O
0,16 g/l
Nota 1:
Stock solution 2:
Se folosește exclusiv pentru speciile de diatomee folosite pentru testare.
FeCl3·6H2O
Soluția stoc de micronutrienți se obține prin dizolvarea următoarelor substanțe în 500 ml de apă deionizată sau distilată:
100 mg/l
0,005 mg A se vedea nota 2.
trace elements
Se folosește exclusiv pentru culturile stoc ale speciilor de diatomee.
MnCl2·4H2O
Se filtrează mediul într-un recipient steril printr-un filtru cu membrană de 0,22 μm, dacă se folosește un contor de particule, sau printr-un filtru de 0,45 μm, dacă nu se folosește un contor de particule.
3 mg/l
Apendicele 4
CoCl2·6H2O
Exemplu de procedură pentru cultura de alge
CuCl2·2H2O
Scopul cultivării pe baza procedurii de mai jos este acela de a obține culturi de alge pentru testele de toxicitate.
0,01 mg/l
Trebuie folosite metode adecvate pentru a garanta lipsa infectării cu bacterii a culturilor de alge.
MoO4·2H2O
Se recomandă culturile axenice, dar se stabilesc și se folosesc culturile cu un singur tip de alge.
7 mg/l
Toate operațiile se efectuează în condiții sterile pentru a evita contaminarea cu bacterii și alte alge.
Stock solution 4:
Echipamente și materiale
bicarbonate
A se vedea metoda de testare:
50 g/l
«Aparatură».
SiO3·9H20
Proceduri pentru obținerea culturilor de alge
Sterilise the stock solutions by membrane filtration (mean pore diameter 0,2 μm) or by autoclaving (120 °C, 15 min).
Prepararea soluțiilor nutritive (mediilor):
Store the solutions in the dark at 4 °C.
Toate sărurile nutritive ale mediului se prepară ca soluții stoc concentrate și se păstrează la rece și întuneric.
Do not autoclave stock solutions 2 and 4, but sterilise them by membrane filtration.
Aceste soluții se sterilizează prin filtrare sau în autoclavă.
Prepare a growth medium by adding an appropriate volume of the stock solutions 1-4 to water:
Mediul se prepară prin adăugarea cantității corecte de soluție stoc în apa distilată sterilă, acordându-se atenție prevenirii infecțiilor.
1 ml of stock solution 2
Culturile stoc sunt culturi mici de alge care se transferă cu regularitate într-un mediu proaspăt pentru a acționa ca material inițial de testare.
1 ml of stock solution 3
Dacă nu sunt folosite cu regularitate, se scurg pe tuburile înclinate acoperite cu agar.
1 ml of stock solution 4
Culturile se transferă într-un mediu proaspăt cel puțin o dată la două luni.
Make up to 1000 ml with sterilised water.
Culturile stoc se cresc în flacoane conice care conțin mediul corespunzător (volum de cca 100 ml).
Allow sufficient time for equilibrating the medium with the atmospheric CO2, if necessary by bubbling with sterile, filtered air for some hours.
Când algele sunt incubate la 20 °C cu iluminare continuă, este necesar un transfer săptămânal.
Preparation of U.S.
În timpul transferului, o cantitate din cultura «veche» se transferă cu pipete sterile într-un flacon cu mediu proaspăt, astfel încât, în cazul speciilor cu creștere rapidă, concentrația inițială să fie de cca 100 de ori mai mică decât în cultura veche.
EPA medium
Viteza de creștere a unei specii se poate determina din curba de creștere.
Add 1 ml of each stock solution in 2.1–2.7 to approximately 900 ml of deionised or distilled water and then dilute to 1 litre.
Dacă aceasta se cunoaște, este posibil să se estimeze densitatea la care cultura ar trebui transferată într-un mediu nou.
Macronutrient stock solutions are made by dissolving the following into 500 ml of deionised or distilled water.
Acest lucru trebuie făcut înainte ca algele din cultură să atingă faza morții.
Reagents 2.1, 2.2, 2.3, and 2.4 can be combined into one stock solution.
Precultura:
Micronutrient Stock Solution(see 3).
Precultura are ca scop obținerea unei cantități de alge adecvate pentru inocularea culturilor de testare.
SiO3·9H2O
Precultura se incubează în condițiile testării și se folosește în timpul creșterii exponențiale, în mod normal după o perioadă de incubare de 2-4 zile.
See Note 1.
Când culturile de alge conțin celule deformate sau anormale, acestea trebuie înlăturate.
Note 1:
Apendicele 5
Use for diatom test species only.
Analiza datelor prin metoda regresiei neliniare
May be added directly (202,4 mg) or by way of stock solution to give 20 mg/l Si final concentration in medium.
Considerații generale
The micronutrient stock solution is made by dissolving the following into 500 ml of deionised or distilled water:
Răspunsul la testele pe alge și alte teste de creștere microbiană – în mod natural, creșterea biomasei este o variabilă continuă sau metrică – o viteză de proces, dacă se folosește viteza de creștere, și integrala sa în funcție de timp, dacă se selectează biomasa.
[Disodium (Ethylenedinitrilo) tetraacetate].
Ambele fac trimitere la răspunsul mediu corespunzător al probelor de control duplicat neexpuse care manifestă un răspuns maxim pentru condițiile impuse – lumina și temperatura fiind principalii factori determinanți în testul pe alge.
SeO4·5H2O
Sistemul este distribuit sau omogen, iar biomasa poate fi considerată ca fiind un continuum fără a se ține cont de celulele individuale.
0,005 mg See Note 2.
Distribuția varianței tipului de răspuns pentru un astfel de sistem are legătură exclusiv cu factorii experimentali (descriși în mod obișnuit de distribuțiile log-normale sau normale ale erorilor).
Note 2:
Aceasta este în contrast cu răspunsurile tipice din cadrul biotestului cu date binare, pentru care toleranța (distribuită de obicei binomial) a organismelor individuale este adesea presupusă a fi componenta dominantă a varianței.
Use only in medium for stock cultures of diatom species.
Răspunsurile de control sunt, în acest caz, zero sau nivel de fond.
Adjust pH to 7,5 ± 0,1 with 0,1 N or 1,0 N NaOH or HCl.
În situația necomplicată, răspunsul normalizat sau relativ, r, descrește uniform de la 1 (inhibare zero) la 0 (100 % inhibare).
Filter the media into a sterile container through either a 0,22 μm membrane filter if a particle counter is to be used or a 0,45 μm filter if a particle counter is not to be used.
Este de reținut faptul că toate răspunsurile au o marjă de eroare aferentă și că inhibările aparent negative pot fi calculate doar ca rezultat al unei erori aleatorii.
Store medium in the dark at approximately 4 °C until use.
Analiza regresiei
Appendix 4
Modele
Example of a procedure for the culturing of algae
Obiectivul unei analize a regresiei este de a descrie cantitativ curba concentrație-răspuns sub forma unei funcții matematice de regresie Y = f (C) sau, mai frecvent, F(Z), unde Z = log C. Folosită invers, C = f– 1 (Y) permite calcularea valorilor ECx, inclusiv EC50, EC10 și EC20 și limitele lor de încredere de 95 %.
General observations
Câteva formule funcționale matematice simple au demonstrat că pot descrie cu succes relațiile concentrație-răspuns obținute în testele de inhibare a creșterii algelor.
The purpose of culturing on the basis of the following procedure is to obtain algal cultures for toxicity tests.
Funcțiile includ, de exemplu, ecuația logistică, ecuația Weibull nesimetrică și funcția de distribuție log-normală, toate acestea fiind curbe sigmoide care se apropie asimptotic de 0 pentru C → 0 și de 1 pentru C → infinit.
Use suitable methods to ensure that the algal cultures are not infected with bacteria.
Folosirea modelelor funcției-limită continue (de exemplu modelul Kooijman «de inhibare a creșterii populațiilor», Kooijman et al.
Axenic cultures may be desirable but unialgal cultures must be established and used.
1996) este o alternativă propusă recent la modelele asimptotice.
All operations must be carried out under sterile conditions in order to avoid contamination with bacteria and other algae.
Acest model nu presupune efecte la concentrații sub o anumită limită EC0 +, care se estimează prin extrapolarea relației concentrație-răspuns pentru a intersecta axa concentrației prin folosirea unei funcții continue simple care nu este diferențiabilă în punctul de pornire.
Equipment and materials
Trebuie reținut că analiza poate consta într-o simplă minimizare a sumelor pătratelor reziduale (presupunând că varianța este constantă) sau a pătratelor ponderate, dacă eterogenitatea varianței este compensată.
See under test method:
Procedură
Apparatus.
Procedura poate fi descrisă după cum urmează:
Procedures for obtaining algal cultures
se selectează o ecuație funcțională adecvată Y = f(C) și se ajustează la date prin regresie neliniară.
Preparation of nutrient solutions (media):
Se preferă folosirea măsurătorilor pentru fiecare flacon individual, și nu valorile medii ale probelor duplicat, pentru a se obține din date cât mai multe informații posibil.
All nutrient salts of the medium are prepared as concentrated stock solutions and stored dark and cold.
Dacă, pe de altă parte, varianța este mare, experiența practică arată că valorile medii ale probelor duplicat pot asigura o estimare matematică mai precisă, mai puțin influențată de erorile sistematice ale datelor decât în cazul fiecărui punct de date reținut.
These solutions are sterilised by filtration or by autoclaving.
Se reprezintă grafic curba ajustată și datele măsurate și se examinează dacă ajustarea curbei este adecvată.
The medium is prepared by adding the correct amount of stock solution to sterile distilled water, taking care that no infection occurs.
Analiza valorilor reziduale poate fi un instrument deosebit de util în acest scop.
For solid medium 0,8 per cent of agar is added.
Dacă relația funcțională aleasă pentru ajustarea relației concentrație-răspuns nu descrie în mod corect întreaga curbă sau o parte esențială a acesteia, cum ar fi răspunsul la concentrații scăzute, se alege altă opțiune de ajustare a curbei – de exemplu, o curbă asimetrică, cum ar fi funcția Weibull, în locul uneia simetrice.
Stock culture:
Inhibările negative pot fi o problemă pentru funcția de distribuție log-normală, de exemplu, fiind necesară și în acest caz o funcție de regresie alternativă.
The stock cultures are small algal cultures that are regularly transferred to fresh medium to act as initial test material.
Nu se recomandă atribuirea valorii zero sau a unei valori pozitive mici unor astfel de valori negative, deoarece aceasta distorsionează distribuția erorilor.
If the cultures are not used regularly they are streaked out on sloped agar tubes.
În scopul estimării valorilor ECx scăzut, se poate dovedi utilă trasarea de ajustări separate ale curbei pe părți ale acesteia, cum ar fi partea de inhibare scăzută.
These are transferred to fresh medium at least once every two months.
Se calculează pe baza ecuației ajustate [prin «estimare inversă», C = f– 1(Y)] estimările punctuale caracteristice ale ECx și se raportează EC50 ca minim și una sau două estimări ECx scăzut.
The stock cultures are grown in conical flasks containing the appropriate medium (volume about 100 ml).
Experiența dobândită în urma testării practice a arătat că precizia testului pe alge permite, în mod normal, o estimare suficient de precisă la un nivel de inhibare de 10 %, dacă punctele de date sunt suficiente – cu excepția situațiilor când stimularea are loc la concentrații scăzute, ca factor de confuzie.
When the algae are incubated at 20 °C with continuous illumination, a weekly transfer is required.
Precizia unei estimări a EC20 este adesea considerabil mai bună decât cea a unui EC10, deoarece EC20 este poziționat de obicei pe partea aproximativ liniară a curbei concentrație-răspuns centrale.
During transfer an amount of “old” culture is transferred with sterile pipettes into a flask of fresh medium, so that with the fast-growing species the initial concentration is about 100 times smaller than in the old culture.
Uneori, EC10 poate fi dificil de interpretat ca urmare a stimulării creșterii.
The growth rate of a species can be determined from the growth curve.
Astfel, chiar dacă EC10 poate fi obținut, în mod normal, cu suficientă precizie, se recomandă să se raporteze întotdeauna și EC20.
If this is known, it is possible to estimate the density at which the culture should be transferred to new medium.
Factori de ponderare
This must be done before the culture reaches the death phase.
Varianța experimentală nu este în general constantă și include de obicei o componentă proporțională, aplicarea unei regresii ponderate permanente fiind, prin urmare, avantajoasă.
Pre-culture:
Factorii de ponderare pentru o astfel de analiză sunt dați de obicei invers proporțional cu varianța:
The pre-culture is intended to give an amount of algae suitable for the inoculation of test cultures.
Multe programe de regresie includ opțiunea de analiză de regresie ponderată, factorii de ponderare fiind enumerați într-un tabel.
The pre-culture is incubated under the conditions of the test and used when still exponentially growing, normally after an incubation period of 2 to 4 days.
Pentru simplificare, factorii de ponderare se normalizează prin multiplicarea lor cu n/Σ wi (n este numărul punctelor de date), astfel încât suma lor să fie egală cu 1.
When the algal cultures contain deformed or abnormal cells, they must be discarded.
Răspunsuri de normalizare
Appendix 5
Cu excepția cazului în care această eroare este neglijabilă, factorii de ponderare din regresie și limitele de încredere se corectează pentru covarianța cu proba de control (Draper și Smith, 1981).
Data analysis by nonlinear regression
Este de reținut faptul că precizia înaltă pe răspunsul mediu de control estimat este importantă pentru minimizarea varianței generale pentru răspunsul relativ.
General considerations
Această varianță este descrisă mai jos:
The response in algal tests and other microbial growth tests — growth of biomass — is by nature a continuous or metric variable — a process rate if growth rate is used and its integral over time if biomass is selected.
(Indicele i se referă la nivelul concentrației i, iar indicele 0 se referă la probele de control.)
Both are referenced to the corresponding mean response of replicate non-exposed controls showing maximum response for the conditions imposed — with light and temperature as primary determining factors in the algal test.
Yi = Răspuns relativ = ri/r0 = 1 – I = f(Ci)
The system is distributed or homogenous and the biomass can be viewed as a continuum without consideration of individual cells.
cu o varianță Var(Y i) = Var (ri/r0) ≅ (∂Yi / ∂ ri)2 · Var(ri) + ((∂ Yi/ ∂ r0)2 · Var(r0)
The variance distribution of the type of response for a such system relate solely to experimental factors (described typically by the log-normal or normal distributions of error).
și întrucât (∂ Yi/ ∂ ri) = 1/r0 și (∂ Y i/ ∂ r0) = ri/r02
This is by contrast to typical bioassay responses with quantal data for which the tolerance (typically binomially distributed) of individual organisms are often assumed to be the dominant variance component.
cu date distribuite normal și probe duplicat mi și m0:
Control responses are here zero or background level.
Var(ri ) = σ2/mi
In the uncomplicated situation, the normalised or relative response, r, decreases monotonically from 1 (zero inhibition) to 0 (100 per cent inhibition).
varianța totală a răspunsului relativ Yi devine astfel:
Note, that all responses have an error associated and that apparent negative inhibitions can be calculated as a result of random error only.
Eroarea pe media de control este invers proporțională cu rădăcina pătrată a numărului de probe de control duplicate exprimat ca medie, uneori fiind justificată introducerea de date anterioare în scopul reducerii considerabile în acest fel a erorii.
Regression analysis
O procedură alternativă este de a nu normaliza datele și de a ajusta răspunsurile absolute, inclusiv datele despre răspunsul de control, introducând însă valoarea răspunsului de control ca parametru adițional care urmează să fie ajustat prin regresie neliniară.
Models
Cu o ecuație obișnuită de regresie cu 2 parametri, această metodă impune ajustarea a 3 parametri, necesitând prin urmare mai multe puncte de date decât regresia neliniară pe date care sunt normalizate prin folosirea unui răspuns de control prestabilit.
A regression analysis aims at quantitatively describing the concentration response curve in the form of a mathematical regression function Y = f (C) or more frequently F(Z) where Z = log C. Used inversely C = f– 1 (Y) allows the calculation of, ECx figures, including the EC50, EC10 and EC20, and their 95 % confidence limits.
Intervale de încredere inverse
Several simple mathematical functional forms have proved to successfully describe concentration — response relationships obtained in algal growth inhibition tests.
Calcularea intervalelor de încredere ale regresiei neliniare prin estimare inversă este destul de complexă, nefiind inclusă ca dotare standard în pachetele de programe informatice uzuale de statistică.
Functions include for instance the logistic equation, the nonsymmetrical Weibul equation and the log normal distribution function, which are all sigmoid curves asymptotically approaching zero for C → 0 and one for C → infinity.
Limitele de încredere aproximative pot fi obținute cu ajutorul programelor standard de regresie neliniară cu reparametrizare (Bruce și Versteeg, 1992), care presupune rescrierea ecuației matematice cu estimările punctuale dorite, de exemplu EC10 și EC50 ca parametri de estimat.
The use of continuous threshold function models (e.g. the Kooijman model “for inhibition of population growth” Kooijman et al.
(Fie funcția I = f (α, β, concentrație) și se folosesc relațiile de definiție f (α, β, EC10) = 0,1 și f (α, β, EC50 ) = 0,5 pentru a substitui f (α, β, concentrație) cu o funcție echivalentă g (EC10, EC50, concentrație).
1996) is a recently proposed or alternative to asymptotic models.
Un calcul mai direct (Andersen et al., 1998) se efectuează prin reținerea ecuației originale și folosirea unei expansiuni Taylor în jurul mediilor ri și r0.
This model assumes no effects at concentrations below a certain threshold EC0+ that is estimated by extrapolation of the response concentration relationship to intercept the concentration axis using a simple continuous function that is not differentiable in the starting point.
În ultimul timp au devenit populare «metodele bootstrap».
Note that the analysis can be a simple minimisation of sums of residual squares (assuming constant variance) or weighted squares if variance heterogeneity is compensated.
Aceste metode folosesc datele măsurate și reeșantionarea frecventă cu ajutorul unui generator de numere aleatorii pentru a estima o distribuție empirică a varianței.
Procedure
REFERINȚE
The procedure can be outlined as follows:
Capitolul C.11 se înlocuiește cu următorul text:
Select an appropriate functional equation, Y = f(C), and fit it to the data by non-linear regression.
NĂMOL ACTIV, TEST DE INHIBARE A RESPIRAȚIEI (OXIDAREA CARBONULUI ȘI A AMONIULUI)
Use preferably the measurements from each individual flask rather than means of replicates, in order to extract as much information from the data as possible.
Prezenta metodă de testare este echivalentă cu Orientarea OCDE privind testarea (TG) nr.
If the variance is high, on the other hand, practical experience suggests that means of replicates may provide a more robust mathematical estimation less influenced by systematic errors in the data, than with each individual data point retained.
209 (2010).
Plot the fitted curve and the measured data and examine whether the curve fit is appropriate.
Această metodă de testare descrie o metodă de determinare a efectelor unei substanțe chimice asupra microorganismelor din nămolul activ (în mare parte bacterii) prin măsurarea vitezei de respirație (oxidarea carbonului și/sau a amoniului) în condiții definite, în prezența a diferite concentrații ale substanței chimice de testare.
Analysis of residuals may be a particular helpful tool for this purpose.
Metoda de testare se bazează pe testul ETAD – Ecological and Toxicological Association of the Dyestuffs Manufacturing Industry (Asociația ecologică și toxicologică a producătorilor de coloranți) (1) ( 2), pe Orientarea anterioară a OCDE TG nr.
If the chosen functional relationship to fit the concentration response does not describe well the whole curve or some essential part of it, such as the response at low concentrations, choose another curve fit option — e.g., a non-symmetrical curve like the Weibul function instead of a symmetrical one.
209 (3) și pe standardul ISO 8192 revizuit (4).
Negative inhibitions may be a problem with for instance the log — normal distribution function likewise demanding an alternative regression function.
Obiectivul acestui test este furnizarea unei metode de evaluare rapide a efectelor substanțelor chimice asupra microorganismelor din nămolul activ în etapa biologică (aerobă) a stațiilor de epurare a apelor uzate.
It is not recommended to assign a zero or small positive value to such negative values because this distorts the error distribution.
Rezultatele testului pot, de asemenea, să indice concentrațiile neinhibitorii ale substanțelor chimice de testare care se utilizează în testele de biodegradabilitate (de exemplu capitolele C.4 A-F, C.9, C.10, C12 și C.29 din prezenta anexă, Orientarea OCDE privind testarea (TG) nr.
It may be appropriate to make separate curve fits on parts of the curve such as the low inhibition part to estimate EClowx figures.
302C).
Calculate from the fitted equation (by “inverse estimation”, C = f– 1(Y)), characteristic point estimates ECx's, and report as a minimum the EC50 and one or two EClow x estimates.
În acest caz, testul poate fi realizat ca un test de depistare, similar unui test de stabilire a intervalului sau unui test la valori-limită (a se vedea punctul 39), luând în considerare numai respirația totală.
Experience from practical testing has shown that the precision of the algal test normally allows a reasonably accurate estimation at the 10 % inhibition level if data points are sufficient — unless stimulation occurs at low concentrations as a confounding factor.
Cu toate acestea, aceste informații trebuie luate în considerare cu precauție pentru testele de biodegradabilitate rapidă (capitolele C.4 A-F și C.29 ale prezentei anexe) pentru care concentrația inoculului este semnificativ mai scăzută decât cea utilizată în prezenta metodă de testare.