natgillin/translations-raw huggingface dataset:
If physical and/or chemical properties of any of the test chemicals are not amenable to a flow-through diluter system, then an alternative exposure system (e.g., static-renewal) can be employed.
Informații privind obținerea și prelucrarea eșantioanelor pentru analize histologice și pentru efectuarea analizelor histologice pe eșantioane de țesuturi sunt disponibile în «Amphibian Metamorphosis Assay: Part 1 – Technical guidance for morphologic sampling and histological preparation» (Testul metamorfozei la amfibieni: Partea 1 – Orientare tehnică pentru eșantionare morfologică și pregătire histologică ) și în «Amphibian Metamorphosis Assay: Part 2 – Approach to reading studies, diagnostic criteria, severity grading and atlas» (Testul metamorfozei la amfibieni: Partea 2 – Metodă de interpretare a studiilor, criterii de diagnostic, aprecierea severității și atlas) (9).
The system components should have water-contact components of glass, stainless steel, and/or Polytetrafluoroethylene.
Laboratoarele care efectuează testul pentru prima dată (primele dăți) trebuie să solicite consiliere din partea unor patologi cu experiență în scopuri de formare înainte de efectuarea analizei histologice și a evaluării glandei tiroide.
However, suitable plastics can be utilised if they do not compromise the study.
Schimbările evidente și semnificative în ceea ce privește parametrii apicali indicând accelerarea sau asincronia dezvoltării pot exclude necesitatea efectuării analizei histopatologice a glandelor tiroide.
Exposure tanks should be glass or stainless steel aquaria, equipped with standpipes that result in an approximate tank volume between 4,0 and 10,0 l and minimum water depth of 10 to 15 cm.
Cu toate acestea, absența unor modificări morfologice evidente sau a dovezilor privind întârzierea dezvoltării impun efectuarea analizelor histologice.
The system should be capable of supporting all exposure concentrations and a control, with four replicates per treatment.
Toate bazinele de testare trebuie verificate zilnic pentru a verifica dacă nu există mormoloci morți, iar numărul acestora se înregistrează pentru fiecare bazin.
The flow rate to each tank should be constant in consideration of both the maintenance of biological conditions and chemical exposure (e.g. 25 ml/min).
Data, concentrația și numărul bazinelor trebuie înregistrate pentru orice activitate de observare a mortalității.
The treatment tanks should be randomly assigned to a position in the exposure system in order to reduce potential positional effects, including slight variations in temperature, light intensity, etc.
Animalele moarte trebuie îndepărtate din bazinul de testare imediat după ce au fost observate.
Fluorescent lighting should be used to provide a photoperiod of 12 hr light:
O rată a mortalității de peste 10 % poate indica condiții de testare necorespunzătoare sau efecte toxice ale substanței chimice testate.
12 hr dark at an intensity that ranges from 600 to 2000 lux (lumen/m2) at the water surface.
Observații suplimentare
Water temperature should be maintained at 22° ± 1 °C, pH maintained between 6,5 to 8,5, and the dissolved oxygen (DO) concentration > 3,5 mg/l (> 40 % of the air saturation) in each test tank.
Cazurile de comportament anormal și de malformații și leziuni vizibile macroscopic trebuie înregistrate.
As a minimum water temperature, pH and dissolved oxygen should be measured weekly;
Data, concentrația și numărul bazinului trebuie înregistrate în caz că se observă comportament anormal, malformații sau leziuni vizibile macroscopic.
temperature should preferably be measured continuously in at least one test vessel.
Comportamentul normal este caracterizat prin rămânerea mormolocilor suspendați în coloana de apă cu coada ridicată deasupra capului, bătaia ritmică și regulată a înotătoarei caudale, ridicarea periodică la suprafață, opercularea și receptivitatea la stimuli.
Appendix 1 outlines the experimental conditions under which the protocol should be executed.
Un comportament anormal ar include, de exemplu, plutirea la suprafață, rămânerea pe fundul bazinului, înotare inversată sau neregulată, lipsa de activitate la suprafață și lipsa de reacție la stimuli.
For further information on setting up flow-through exposure systems and/or static renewal systems, please refer to the ASTM Standard Guide for Conducting Acute Toxicity Tests on Test Materials with Fishes, Macroinvertebrates, and Amphibians (5) and general aquatic toxicology tests.
În plus, diferențele mari în consumul de hrană între tratamente trebuie înregistrate.
Water quality
Malformațiile și leziuni majore ar putea include anomalii morfologice (de exemplu, deformări ale membrelor), leziuni hemoragice, infecții bacteriene sau fungice, pentru a menționa doar câteva.
Any water that is locally available (e.g. springwater or charcoal-filtered tap water) and permits normal growth and development of X. laevis tadpoles could be used.
Aceste determinări sunt calitative și trebuie considerate analoage semnelor clinice de boală/stres și trebuie raportate la animalele de control.
Because local water quality can differ substantially from one area to another, analysis of water quality should be undertaken, particularly, if historical data on the utility of the water for raising Xenopus is not available.
În cazul în care apariția sau rata apariției este mai mare în bazinele expuse decât în cele de control, atunci acestea ar trebui considerate drept dovadă de toxicitate evidentă.
Special attention should be given that the water is free of copper, chlorine and chloramines, all of which are toxic to frogs and tadpoles.
Colectarea de date
It is further recommended to analyse the water concerning background levels of fluoride, perchlorate and chlorate (by-products of drinking water disinfection) as all of these anions are substrates of the iodine transporter of the thyroid gland and elevated levels of each of these anions may confound the study outcome.
Toate datele trebuie colectate cu ajutorul sistemelor electronice sau manuale care sunt în conformitate cu bunele practici de laborator (BPL).
Analysis should be performed before testing begins and the testing water should normally be free from these anions.
Caracterizarea substanței chimice testate:
Iodide Concentration in Test Water
proprietățile fizico-chimice;
In order for the thyroid gland to synthesise TH, sufficient iodide needs to be available to the larvae through a combination of aqueous and dietary sources.
informații referitoare la stabilitate și biodegradabilitate;
Currently, there are no empirically derived guidelines for minimal iodide concentrations.
Informații și date privind substanța chimică:
However, iodide availability may affect the responsiveness of the thyroid system to thyroid active agents and is known to modulate the basal activity of the thyroid gland, an aspect that deserves attention when interpreting the results from thyroid histopathology.
Măsurătorile privind substanța chimică testată pot fi necesare pentru soluțiile stoc, precum și pentru soluțiile de testare;
Therefore, measured aqueous iodide concentrations from the test water should be reported.
Solvent (dacă este altul decât apa):
Based on the available data from the validation studies, the protocol has been demonstrated to work well when test water iodide (I-) concentrations ranged between 0,5 and 10 μg/l.
justificarea alegerii unui solvent și caracterizarea solventului (natură, concentrație utilizată);
Ideally, the minimum iodide concentration in the test water should be 0,5 μg/l.
Înregistrări operaționale:
If the test water is reconstituted from deionised water, iodine should be added at a minimum concentration of 0,5 μg/l.
acestea constau în observații referitoare la funcționarea sistemului de testare și la mediul și infrastructura de sprijin.
Any additional supplementation of the test water with iodine or other salts should be noted in the report.
Înregistrările tipice includ:
Holding of animals
temperatura ambiantă, temperatura de testare, perioada de expunere la lumină, starea componentelor critice ale sistemului de expunere (de exemplu pompe, contoare de cicluri, presiuni), debite, niveluri de apă, schimbări ale recipientelor de rezervă, precum și înregistrări privind hrănirea.
Adult Care and Breeding
Parametrii generali de calitate a apei includ:
Adult care and breeding is conducted in accordance with standard guidelines and the reader is directed to the standard guide for performing the Frog Embryo Teratogenesis Assay (FETAX) (6) for more detailed information.
pH, OD, conductivitate, iod total, alcalinitate și duritate;
Such standard guidelines provide an example of appropriate care and breeding methods, but strict adherence is not required.
Abateri de la metoda de testare:
To induce breeding, pairs (3-5) of adult females and males are injected with human chorionic gonadotropin (hCG).
aceste informații trebuie să includă orice informație sau descrieri ale abaterilor de la metoda de testare;
Female and male specimens are injected with approximately 800 IU-1000 IU and 600 IU-800 IU, respectively, of hCG dissolved in 0,6-0,9 % saline solution.
Observații și date biologice:
Breeding pairs are held in large tanks, undisturbed and under static conditions in order to promote amplexus.
acestea includ observații zilnice legate de mortalitate, consumul de alimente, comportamentul de înot anormal, letargie, pierderea echilibrului, malformații, leziuni, etc. Observațiile și datele colectate la intervale prestabilite includ:
The bottom of each breeding tank should have a false bottom of stainless steel or plastic mesh which permits the egg masses to fall to the bottom of the tank.
stadiul de dezvoltare, lungimea membrelor posterioare, lungimea bot-cloacă și greutatea umedă;
Frogs injected in the late afternoon will usually deposit most of their eggs by mid morning of the next day.
Tehnicile de analiză statistică și justificarea tehnicilor utilizate;
After a sufficient quantity of eggs are released and fertilised, adults should be removed from the breeding tanks.
rezultatele analizei statistice, de preferat, sub formă de tabel;
Larval Care and Selection
Date histologice:
After the adults are removed from the breeding tanks, the eggs are collected and evaluated for viability using a representative sub-set of the embryos from all breeding tanks.
acestea includ descrieri, precum și severitatea gradată și scoruri privind incidența unor observații specifice, astfel cum se detaliază în documentul de orientare privind histopatologia;
The best individual spawn(s) (2-3 recommended to evaluate the quality of the spawns) should be retained based upon embryo viability and the presence of an adequate number (minimum of 1500) of embryos.
Observații ad hoc:
All the organisms used in a study should originate from a single spawning event (i.e., the spawns should not be co-mixed).
aceste observații trebuie să includă descrieri ale studiului care nu se încadrează în categoriile descrise anterior.
The embryos are transferred into a large flat pan or dish and all obvious dead or abnormal eggs (see definition in (5)) are removed using a pipette or eyedropper.
Raportarea datelor
The sound embryos from each of the three spawns are transferred into three separate hatching tanks.
Apendicele 2 conține foi de calcul privind colectarea zilnică a datelor care pot fi utilizate ca orientări pentru introducerea datelor brute și pentru calcularea statisticilor sumare.
Four days after being placed in the hatching tanks, the best spawn, based on viability and hatching success, is selected and the larvae are transferred into an appropriate number of rearing tanks at 22° ± 1 °C.
În plus, tabelele de raportare sunt astfel elaborate încât să fie convenabile pentru comunicarea rezumatelor datelor privind parametrii studiați.
In addition, some additional larvae are moved into extra tanks for use as replacements in the event that mortalities occur in the rearing tanks during the first week.
Tabelele de raportare pentru evaluările histologice pot fi consultate în apendicele 2.
This procedure maintains consistent organism density and thereby reduces developmental divergence within the cohort of a single spawn.
Criterii de performanță și de acceptabilitate/validitate a testelor
All rearing tanks should be siphoned clean daily.
În general, abaterile majore de la metoda de testare vor conduce la date inacceptabile pentru interpretare sau raportare.
As a precaution, vinyl or nitrile gloves are preferred to latex gloves.
Prin urmare, următoarele criterii din tabelul 4 au fost dezvoltate ca orientare pentru determinarea calității testului efectuat, performanța generală a organismelor de control.
Mortalities should be removed daily and replacement larvae should be added back to maintain the organism density during the first week.
Tabelul 4
Feeding should occur at least twice per day.
Criterii de performanță pentru testul AMA.
During the pre-exposure phase, tadpoles are acclimated to the conditions of the actual exposure phase, including the type of food, temperature, light-dark cycle and the culture medium.
Criteriu
Therefore, it is recommended that the same culture/dilution water be used during the pre-exposure phase and the exposure phase.
Limite acceptabile
If a static culture system is used for maintaining tadpoles during the pre-exposure phase, the culture medium should be replaced completely at least twice per week.
Concentrațiile testate
Crowding, caused by high larval densities during the pre-exposure period, should be avoided because such effects could markedly affect tadpole development during the subsequent testing phase.
Menținute la ≤ 20 % CV (coeficient de variație) (variabilitatea concentrațiilor de testare măsurate) pe parcursul testului cu durata de 21 de zile
Therefore, the rearing density should not exceed approximately four tadpoles/l culture medium (static exposure system) or 10 tadpoles/l culture medium (with e.g. 50 ml/min flow rate in the pre-exposure or culturing system).
Mortalitatea în grupurilor de control;
Under these conditions, tadpoles should develop from stages 45/46 to stage 51 within twelve days.
≤ 10 % – mortalitatea în orice replică în grupurile de control trebuie să nu depășească 2 mormoloci
Representative tadpoles of this stock population should be inspected daily for developmental stage in order to estimate the appropriate time point for initiation of exposure.
Stadiul de dezvoltare median minim al grupurilor de control la sfârșitul testului
Care should be used to minimise stress and trauma to the tadpoles, especially during movement, cleaning of aquaria, and manipulation of larvae.
Intervalul stadiilor de dezvoltare în grupul de control
Stressful conditions/activities should be avoided such as loud and/or incessant noise, tapping on aquaria, vibrations in the aquaria, excessive activity in the laboratory, and rapid changes in environmental media (light availability, temperature, pH, DO, water flow rates, etc.)
A 10-a și a 90-a procentilă a distribuției stadiilor de dezvoltare nu trebuie să difere cu mai mult de 4 stadii.
If tadpoles do not develop to stage 51 within 17 days after fertilisation, excessive stress should be considered as a potential culprit.
Oxigen dizolvat
Larval Culture and Feeding
≥ 40 % față de saturația în aer [8]
Tadpoles are fed with e.g. the commercial tadpole feed used in the validation studies (see also appendix 1) throughout the pre-exposure period (after Nieuwkoop and Faber (NF) stage 45/46 (8)) and during the entire test period of 21 days, or other diet that has demonstrated to allow equal performance of the Amphibian Metamorphosis Assay.
pH-ul trebuie menținut între 6,5 și 8,5.
The feeding regime during the pre-exposure period should be carefully adjusted to meet the demands of the developing tadpoles.
Diferențele între replici/tratament nu trebuie să depășească 0,5.
That is, small portions of food should be provided to the newly hatched tadpoles several times per day (at least twice).
± 1 °C – diferențele între replici/tratament nu trebuie să depășească 0,5 °C.
Excess food should be avoided in order i) to maintain water quality and ii) to prevent the clogging of gill filters with food particles and detritus.
Concentrațiile de testare fără toxicitate evidentă
For the tadpole feed used in the validation studies, the daily food rations should be increased along with tadpole growth to approximately 30 mg/animal/day shortly before test initiation.
Performanța replicii
This commercially available feed has been shown in the validation studies to support proper growth and development of X. laevis tadpoles, and is a fine particulate that stays suspended in the water column for a long period of time and is subject to washing out with the flow.
≤ 2 replici per test pot fi compromise
Therefore, the total daily amount of food should be divided into smaller portions and fed at least twice daily.
Condiții speciale de utilizare a unui solvent
For this feed the feeding regime is outlined in Table 1.
Dacă se utilizează un solvent cărăuș, trebuie să se utilizeze un vas de control cu solvent și un vas de control cu apă curată, iar rezultatele trebuie raportate.
Feeding rates should be recorded.
Diferențele semnificative din punct de vedere statistic dintre vasul de control cu solvent și vasul de control cu apă curată sunt tratate în mod specific.
It can be fed dry or as a stock solution prepared in dilution water.
Pentru informații suplimentare, a se vedea mai jos.
Such a stock solution should be freshly prepared every other day and stored at 4 °C when not in use.
Condiții speciale pentru sistemul static cu reînnoire
Feeding regime with commercial tadpole feed used in the validation studies for X. laevis tadpolesduring the in-life portion of the AMA in flow-through conditions
Analizele substanțelor chimice reprezentative înainte și după reînnoire trebuie raportate.
Study Day
Nivelurile de amoniac trebuie măsurate imediat înainte de reînnoire.
Food ration (mg feed/animal/day)
Toți parametrii legați de calitatea apei enumerați în tabelul 1 din apendicele 1 trebuie măsurați imediat înainte de reînnoire.
Analytical Chemistry
Perioada de reînnoire nu trebuie să depășească 72 de ore.
Prior to conducting a study, the stability of the test chemical should be evaluated using existing information on its solubility, degradability and volatility.
Program corespunzător de hrănire (50 % din porția zilnică de hrană din hrana comercială pentru mormoloci)
Test solutions from each replicate tank at each concentration should be sampled for analytical chemistry analyses at test initiation (day 0), and weekly during the test for a minimum of four samples.
Validitatea testului
It is also recommended that each test concentration be analysed during system preparation, prior to test initiation, to verify system performance.
Pentru ca un test să fie considerat acceptabil/valid, trebuie să fie îndeplinite următoarele cerințe:
In addition, it is recommended that stock solutions be analysed when they are changed, especially if the volume of the stock solution does not provide adequate amounts of chemical to span the duration of routine sampling periods.
Experiment valid în cadrul unui test determinat a fi negativ pentru activitatea tiroidei:
In the case of chemicals which cannot be detected at some or all of the concentrations used in a test, stock solutions should be measured and system flow rates recorded in order to calculate nominal concentrations.
Pentru orice tratament dat (inclusiv în grupurile de control), mortalitatea nu poate depăși 10 %.
Chemical Delivery
Pentru orice replică dată, mortalitatea nu poate depăși trei mormoloci, în caz contrar replica este considerată compromisă
The method used to introduce the test chemical to the system can vary depending on its physicochemical properties.
Cel puțin două niveluri de tratament, cu toate cele patru replici necompromise, trebuie să fie disponibile pentru analiză
Water soluble chemicals can be dissolved in aliquots of test water at a concentration which allows delivery at the target test concentration in a flow-through system.
Cel puțin două niveluri de tratament fără toxicitate evidentă ar trebui să fie disponibile pentru analiză
Chemicals which are liquid at room temperature and sparingly soluble in water can be introduced using liquid:liquid saturator methods.
Experiment valid în cadrul unui test determinat a fi pozitiv pentru activitatea tiroidei:
Chemicals which are solid at room temperature and are sparingly soluble in water can be introduced using glass wool column saturators (7).
Poate exista mortalitate de maximum doi mormoloci/replică în grupul de control
The preference is to use a carrier-free test system, however different test chemicals will possess varied physicochemical properties that will likely require different approaches for preparation of chemical exposure water.
Arbore decizional pentru efectuarea testului AMA.
It is preferred that effort be made to avoid solvents or carriers because:
Arborele decizional a fost dezvoltat astfel încât testul AMA să ofere asistență logică în efectuarea și interpretarea rezultatelor biotestului (a se vedea diagrama din figura 3).
certain solvents themselves may result in toxicity and/or undesirable or unexpected endocrinological responses, ii) testing chemicals above their water solubility (as can frequently occur through the use of solvents) can result in inaccurate determinations of effective concentrations, and iii) the use of solvents in longer-term tests can result in a significant degree of “biofilming” associated with microbial activity.
Arborele decizional, în esență, ponderează parametrii prin faptul că dezvoltarea avansată, dezvoltarea asincronă și histopatologia tiroidiană au o importanță mare, în timp ce dezvoltarea întârziată, lungimea bot-cloacă și greutatea corporală umedă, parametri care pot fi potențial afectați de toxicitatea generală, au o importanță mai mică.
For difficult to test chemicals, a solvent may be employed as a last resort, and the OECD Guidance Document on aquatic toxicity testing of difficult substances and mixtures should be consulted (4) to determine the best method.
Dezvoltarea avansată (determinată utilizând stadiul de dezvoltare, SVL și HLL)
Solvents which have been found to be effective for aquatic toxicity testing include acetone, ethanol, methanol, dimethyl formamide and triethylene glycol.
Dezvoltarea avansată este cunoscută ca survenind numai prin efecte datorate hormonilor tiroidieni.
In case a solvent carrier is used, solvent concentrations should be below the chronic No Observed Effect Concentration (NOEC);
Acestea pot fi efecte la nivelul țesuturilor periferice, precum interacțiunea directă cu receptorul hormonilor tiroidieni (cum ar fi T4) sau efecte care modifică nivelurile circulante ale hormonilor tiroidieni.
the OECD Guidance Document recommends a maximum of 100 μl/l;
În oricare dintre cazuri, acestea sunt considerate dovezi suficiente pentru a indica faptul că substanța chimică are activitate tiroidiană.
a recent review recommends that solvent concentrations as low as 20 μl/l of dilution water be used (12).
Dezvoltarea avansată este evaluată în unul din două moduri.
If solvent carriers are used, appropriate solvent controls should be evaluated in addition to non-solvent controls (clean water).
În primul mod, stadiul de dezvoltare generală poate fi evaluat pe baza metodei standardizate detaliate în Nieuwkoop și Faber (8).
If it is not possible to administer a chemical via the water, either because of physicochemical characteristics (low solubility) or limited chemical availability, introducing it via the diet may be considered.
În al doilea mod, caracteristici morfologice specifice pot fi cuantificate, precum lungimea membrelor posterioare, în zilele 7 și 21, ele fiind asociate în mod pozitiv cu efecte agoniste asupra receptorilor hormonilor tiroidieni.
Preliminary work has been conducted on dietary exposures;
În cazul în care apar progrese semnificative statistic în ceea ce privește dezvoltarea sau lungimea membrelor posterioare, testul indică faptul că substanța chimică este are activitate tiroidiană.