natgillin/translations-raw huggingface dataset:
The mass of baker's yeast added should be adjusted to the size of the collembolan population, but as a general rule 2-15 mg is sufficient.
Este posibilă verificarea stadiului de dezvoltare a larvelor în funcție de lățimea capsulei cefalice (7).
Synchronisation
Douăzeci de larve din primul stadiu de dezvoltare pentru prima generație sunt alocate în mod aleatoriu fiecărui vas de testare care conține sistemul de sediment-apă, cu ajutorul unei pipete neefilate.
The test should be performed with synchronised animals to obtain homogeneous test animals of the same instar and size.
Aerarea apei este oprită în timpul introducerii larvelor în vasele de testare și trebuie să rămână astfel timp de 24 de ore după introducerea acestora (a se vedea punctul 32).
Furthermore, the synchronisation enables discrimination of F. fimetaria males and females from the age of 3 weeks and onwards based on sexual dimorphism, i.e. size differences.
În funcție de protocolul de testare utilizat (a se vedea punctele 19 și 20), numărul de larve folosite pentru fiecare concentrație este de cel puțin 120 (6 replici per concentrație) pentru metoda ECX și de cel puțin 160 pentru metoda NOEC (8 replici per concentrație).
The procedure below is a suggestion on how to obtain synchronised animals (the practical steps are optional).
În cazul protocolului cu sediment adiționat, expunerea începe o dată cu introducerea larvelor.
Synchronisation.
Adiționarea apei acoperitoare
Prepare containers with a 0,5 cm layer of plaster of Paris/charcoal substrate.
La douăzeci și patru de ore după adăugarea de larve în primul stadiul larvar pentru prima generație, substanța chimică testată este adiționată în coloana de apă acoperitoare, fiind asigurată din nou o ușoară aerare (pentru posibile modificări ale protocolului de testare, a se vedea punctul 7).
For egg laying transfer 150-200 adult F. fimetaria and 50-100 F. candida from the best 15-20 containers of the stock culture with 4-8 weeks old substrate to the containers and feed them 15 mg baker's yeast.
Cu ajutorul unei pipete se aplică mici volume de soluții stoc de substanță chimică testată sub suprafața apei.
Avoid bringing juveniles together with adults as presence of juveniles may inhibit egg production.
Apoi, apa acoperitoare trebuie să fie amestecată cu grijă, pentru a nu perturba sedimentul.
Keep the culture at 20 ± 1 °C (the mean should be 20 °C) and a light-dark cycle of 12-12 hours (400-800 Lux).
În cadrul protocolului cu apă adiționată, expunerea începe cu adiționarea apei (la o zi de la introducerea larvelor).
Ensure that fresh food is available and the air is water saturated.
Colectarea adulților eclozați
Lack of food may lead the animals to defecate on the eggs resulting in fungal growth on the eggs or F. candida may cannibalise its own eggs.
Chironomidele eclozate din prima generație sunt colectate cel puțin o dată, însă, de preferință, de două ori pe zi (a se vedea punctul 36) din vasele de testare cu ajutorul unui aspirator, exhaustor sau al unui dispozitiv similar (a se vedea apendicele 5).
After 10 days the eggs are carefully collected with a needle and spatula and moved to “egg-paper” (small pieces of filter paper dipped in plaster of Paris/charcoal slurry) which is placed in a container with fresh plaster/charcoal substrate.
Trebuie să fie acordată o atenție deosebită pentru a nu provoca leziuni adulților.
A few grains of yeast are added to the substrate to attract the juveniles and make them leave the egg-paper.
Chironomidele colectate din patru vase de testare aferente unui tratament sunt eliberate într-o cușcă de reproducere la care au fost repartizate în prealabil.
It is important that the egg-paper and substrate are humid, or the eggs will dehydrate.
În ziua primei eclozări (masculi), vasele de cristalizare sunt adiționate prin introducerea cu ajutorul unei pipete a unui volum mic de soluție stoc de substanță chimică testată sub suprafața apei (protocol cu apă adiționată).
As an alternative, adult animals may be removed from the synchronisation culture boxes after producing eggs for 2 or 3 days.
Concentrația substanței chimice testate din vasul de cristalizare este în mod nominal aceeași ca în vasele de tratament care sunt alocate respectivei cuști de reproducere specifice.
After three days most of the eggs on the egg-paper will have hatched, and some juveniles may be found under the egg-paper.
În cadrul protocolului cu sediment adiționat, vasele de cristalizare sunt preparate în aproximativ, ziua a 11-a de la începerea expunerii (introducerea de larve de primă generație), astfel încât să se poată realiza echilibrarea acestora timp de aproximativ 48 de ore înainte de producerea primelor șiraguri de ouă.
To have evenly aged juveniles, the egg-paper with un-hatched eggs is removed from the Petri dish with forceps.
Șiragurile de ouă sunt colectate din vasul de cristalizare în cușca de reproducere cu ajutorul unor pensete sau al unei pipete neefilate.
The juveniles, now 0-3 days, stay in the dish and are fed baker's yeast.
Fiecare șirag de ouă se introduce într-un vas care conține mediu de cultură din vasul de cristalizare din care a fost colectat (de exemplu, o microplacă cu 12 godeuri împreună cu cel puțin 2,5 ml de mediu).
Un-hatched eggs are discharged.
Vasele care conțin șiragurile de ouă sunt acoperite cu un capac pentru a preveni evaporarea semnificativă.
Eggs and hatched juveniles are cultured in the same manner as the adults.
Șiragurile de ouă sunt păstrate pentru observație timp de cel puțin șase zile după ce au fost produse, astfel încât să poată fi clasificate ca fertile sau infertile.
In particular for F. fimetaria the following measures should be taken:
Pentru începerea celei de a 2-a generații, cel puțin trei, însă de preferință șase șiraguri de ouă fertile sunt selectate din fiecare cușcă de creștere și, cu puțină hrană, sunt lăsate să eclozeze.
ensuring sufficient fresh food, old moulding food is removed, after 1 week the juveniles are divided into new Petri dishes provided that the density is above 200.
Aceste șiraguri de ouă trebuie să fi fost produse în momentul maxim al activității de depunere a ouălor, care în mod normal are loc în jurul celei de a 19-a zile de testare în controale.
Handling collembolans at test initiation
În mod ideal, a 2-a generație în toate grupurile de tratament apare în aceeași zi, însă din cauza efectelor substanței chimice asupra dezvoltării larvelor, se poate ca aceasta să nu fie posibilă întotdeauna.
9-12 days old F. candida or the 23-26 days old F. fimetaria are collected, e.g. by suction, and released into a small container with moist plaster/charcoal substrate and their physical condition is checked under the binocular (injured and damaged animals are disposed).
În acest caz, concentrațiile mai mari pot fi inițiate mai târziu decât tratamentele cu concentrații mai mici și controlul (solvent).
All steps should be done while keeping the collembolans in a moist atmosphere to avoid drought stress, e.g. by using wetted surfaces etc.
a.
Static electricity should be neutralised, otherwise the animals may just fly into the air, or stick to the side of the test container and dry out.
Cu ajutorul unei pipete, se aplică mici volume de soluții stoc ale substanțelor chimice testate sub suprafața apei.
An ioniser or a moist cloth below the container may be used for neutralisation.
După adiționare, se asigură o ușoară aerare.
The food should be spread all over the soil surface and not just in one lump.
b.
During transportation and during the testing period it should be avoided to knock or otherwise physically disturb the test containers, as this may increase the compaction of the soil, and hamper the interaction between the collembolans.
În protocolul cu sediment adiționat, vasele de expunere care conțin sistemul apă-sediment pentru cea de a 2-a generație sunt pregătite în același mod ca pentru prima generație.
A number of prerequisites should be fulfilled in advance before using alternative species:
În funcție de protocolul de testare utilizat (a se vedea punctele 19 și 20), numărul de larve folosite pentru fiecare concentrație este de cel puțin 120 (6 replici per concentrație) pentru metoda ECX și de cel puțin 160 pentru metoda NOEC (8 replici per concentrație).
They should be unequivocally identified;
Larvele din vasele de testare trebuie să fie hrănite de preferință zilnic sau de cel puțin trei ori pe săptămână.
The rationale for the selection of the species should be given;
Hrană pentru pești (o suspensie în apă sau hrană fin măcinată, de exemplu Tetra-Min sau Tetra-Phyll; a se vedea detalii în apendicele 2) între 0,25 și 0,5 mg (0,35 – 0,5 mg pentru C. yoshimatsui) per larvă per zi reprezintă o cantitate adecvată de hrană pentru larvele tinere în primele 10 zile a dezvoltării lor.
It should be ensured that the reproductive biology is included in the testing phase so it will be a potential target during the exposure;
Este posibil să fie necesară mai multă hrană pentru larvele cu vârstă mai mare:
The life-history should be known:
0,5 – 1 mg per larvă per zi ar trebui să fie suficient pentru restul testului.
age at maturation, duration of egg development, and instars subject to exposure;
Porția de hrană trebuie să fie redusă pentru toate grupurile tratate sau de control dacă se constată dezvoltarea de ciuperci sau dacă sunt observate cazuri de deces la controale.
Optimal conditions for growth and reproduction should be provided by the test substrate and food supply;
În cazul în care dezvoltarea de ciuperci nu poate fi oprită, testul trebuie repetat.
Variability should be sufficiently low for precise and accurate toxicity estimation.
Relevanța toxicologică a expunerii prin ingestie este în general mai mare în cazul substanțelor chimice cu o puternică afinitate pentru carbonul organic sau al substanțelor chimice cu legături covalente cu sedimentul.
Extraction and counting of animals
Prin urmare, în cazul testării substanțelor chimice care au astfel de proprietăți, cantitatea de hrană necesară pentru a asigura supraviețuirea și creșterea naturală a larvelor poate fi adăugată în sedimentul formulat înainte de perioada de stabilizare, în funcție de cerința de reglementare.
Two methods of extraction can be performed.
Pentru a preveni deteriorarea calității apei, trebuie folosite plante în loc de hrană pentru pești, de exemplu adăugarea a 0,5 % (greutate uscată) de frunze fin măcinate de urzică (Urtica dioica), de dude (Morus alba), de trifoi alb (Trifolium repens), de spanac (Spinacia oleracea) sau de la alte plante (Cerophyl sau α-celuloză).
First method:
Adăugarea în sediment a întregii porții de hrană de origine organică înainte de adiționare nu este lipsită de consecințe în ceea ce privește calitatea apei și performanțele biologice (21) și nici nu reprezintă o metodă standardizată, însă studii recente indică că această metodă dă rezultate (19) (26).
A controlled temperature gradient extractor based on principles by MacFadyen can be used (1).
Chironomidele adulte din cuștile de reproducere nu au în mod normal nevoie de hrană, însă fecunditatea și fertilitatea sunt îmbunătățite atunci când adulților eclozați li se pune la dispoziție ca sursă de hrană un tampon de vată îmbibat cu o soluție saturată de zaharoză (34).
The heat coming from a heating element at the top of the extraction box (regulated through a thermistor placed on the surface of the soil sample).
Aerarea ușoară a apei acoperitoare în vasele de testare se efectuează cu 24 de ore după adăugarea larvelor din primul stadiul de dezvoltare din ambele generații și este continuată pe tot parcursul testului (trebuie să se acorde atenție concentrației de oxigen dizolvat, care nu trebuie să scadă sub nivelul de 60 % din ASV).
The temperature in the cooled liquid surrounding the collecting vessel is regulated through a thermistor situated at the surface of the collection box (placed below the soil core).
Aerarea se face cu ajutorul unei pipete Pasteur din sticlă a cărei orificiu este fixat la 2 – 3 cm deasupra stratului de sediment eliberând câteva bule pe secundă.
The thermistors are connected to a programmable controlling unit which raises the temperature according to a pre-programmed schedule.
La testarea substanțelor chimice volatile, trebuie să se acorde atenție ca sistemul sediment-apă să nu fie aerat, asigurând în același timp respectarea criteriului de validitate de 60 % din ASV (punctul 10).
Animals are collected in the cooled collecting box (2 °C) with a bottom layer of plaster of Paris/charcoal.
Orientări suplimentare sunt disponibile la referința (16).
Extraction is started at 25 °C and the temperature is increased automatically every 12 h by 5 °C and has a total duration of 48 hours.
Testul pentru C. riparius se efectuează la o temperatură constantă de 20 °C (± 2 °C).
After 12 h at 40 °C the extraction is finished.
Pentru C. dilutus și C. yoshimatsui, temperaturile recomandate sunt 23 °C și, respectiv, 25 °C (± 2 °C).
Second method:
Se utilizează o perioadă de expunere la lumină de 16 ore, iar intensitatea luminii trebuie să fie de 500 – 1000 lux.
After the experimental incubation period the number of juvenile Collembola present is assessed by flotation.
Pentru cuștile de reproducere, poate fi inclusă o oră suplimentară de fază de zori și de amurg.
For that purpose the test is performed in the vessels of approximately 250 ml volume.
Durata expunerii
At the end of the test approx.
Protocolul cu apă adiționată:
200 ml of distilled water are added.
Perioada de expunere a primei generații începe atunci când substanța chimică testat este adiționată în apa acoperitoare a vaselor de testare (adică la o zi de la introducerea larvelor – pentru modificări posibile ale protocolului de expunere, a se vedea punctul 7).
The soil is gently agitated with a fine paintbrush to allow Collembola to float to the water surface.
Expunerea larvelor din cea de a 2-a generație începe imediat, întrucât ele sunt introduse într-un sistem sediment-apă deja adiționat.
A small amount, approx.
Durata maximă de expunere pentru 1-a generație este de 27 de zile, iar pentru a 2-a generație este de 28 de zile (larvele din 1-a generație petrec o zi în vasele fără expunere) pentru C. riparius și C. yoshimatsui.
0,5 ml, of black Kentmere photographic dye may be added to the water to aid counting by increasing the contrast between the water and the white Collembola.
Ținând cont de suprapunere, durata totală a testării este de aproximativ 44 de zile.
The dye is not toxic to Collembola.
Pentru C. dilutus, duratele maxime de expunere sunt de 64 și de 65 de zile pentru prima generație și, respectiv, pentru cea de a 2-a generație.
Counting:
Durata totală este de aproximativ 100 de zile.
Counts of numbers may be carried out by eye or under a light microscope using a grid placed over the floatation vessel or by photographing the surface of each vessel and later counting the Collembola on enlarged prints or projected slides.
Protocolul cu sediment adiționat:
Counts may also be performed using digital image processing techniques (12).
expunerea începe cu adăugarea de larve și este de maximum 28 de zile pentru ambele generații pentru C. riparius și C. yoshimatsui și de maximum 65 de zile pentru ambele generații pentru C. dilutus.
All techniques should be validated.
Eclozare
Determination of the maximum WHC of the soil
Timpul de dezvoltare și numărul total de chironomide, femele și masculi, eclozate și vii sunt determinate pentru ambele generații.
The following method for determining the maximum water holding capacity (WHC) of the soil has been found to be appropriate.
Masculii sunt ușor de identificat prin antenele plumoase și prin corpul lor fin.
It is described in Annex C of ISO DIS 11268-2 (Soil Quality — Effects of pollutants on earthworms (Eisenia fetida).
Vasele de testare pentru ambelor generații trebuie observate de cel puți trei ori pe săptămână pentru a vedea dacă larvele prezintă comportamente anormale (de exemplu, ieșirea din sediment, înot neobișnuit) în raport cu controlul.
Part 2: Determination of effects on reproduction).
În perioada de eclozare, care începe după aproximativ 12 zile de la introducerea larvelor pentru C. riparius și C. yoshimatsui (după 20 de zile pentru C. dilutus), chironomidele eclozate sunt numărate și li se stabilește sexul cel puțin o dată, dar, de preferință, de două ori pe zi (dimineața devreme și după-amiaza târziu).
Cover the bottom of the tube with a wet piece of filter paper and then place it on a rack in a water bath.
După identificare, chironomidele din prima generație sunt îndepărtate cu grijă din vase și sunt transferate într-o cușcă de reproducere.
The water holding capacity (WHC) should be calculated as follows:
Chironomidele din cea de a 2-a generație sunt îndepărtate și ucise după identificare.
Soil Quality — Determination of pH.
Orice șiraguri de ouă depozitate în vasele de testare ale primei generații trebuie să fie colectate individual și transferate cu cel puțin 2,5 ml de apă nativă în plăci de microtitrare cu 12 godeuri (sau în alte vase adecvate) care sunt acoperite cu un capac pentru a preveni evaporarea semnificativă.
C.40.
Numărul de larve moarte și pupe vizibile care nu au eclozat trebuie înregistrate.
SEDIMENT-WATER CHIRONOMID LIFE-CYCLE TOXICITY TEST USING SPIKED WATER OR SPIKED SEDIMENT
Exemple de cuști de reproducere, de vase de testare și de exhaustoare sunt furnizate în apendicele 5.
This test method is equivalent to OECD Testing Guideline (TG) 233 (2010).
Reproducerea
It is designed to assess the effects of life-long exposure of chemicals on the freshwater dipteran Chironomus sp., fully covering the 1st generation (P generation) and the early part of the 2nd generation (F1 generation).
Efectele asupra reproducerii sunt evaluate prin determinarea numărului de șiraguri de ouă produse de prima generație de chironomide și prin fertilitatea acestor șiraguri de ouă.
It is an extension of the existing test methods C.28 (1) or C.27 (15) using a spiked-water exposure scenario or a spiked sediment scenario, respectively.
O dată pe zi șiragurile de ouă sunt colectate din vasele de cristalizare plasate în fiecare recipient de reproducere.
It takes into account existing toxicity test protocols for Chironomus riparius and Chironomus dilutus (previously named C. tentans (2)) that have been developed in Europe and North America (3) (4) (5) (6) (7) (8) (9) and subsequently ring-tested (1) (7) (10) (11) (12).
Șiragurile de ouă trebuie colectate și transferate cu cel puțin 2,5 ml de apă nativă într-un placă de microtitrare cu 12 godeuri (un șirag de ouă în fiecare godeu) sau în alte vase adecvate care sunt acoperite cu un capac pentru a preveni evaporarea semnificativă.
Other well documented chironomid species may also be used, e.g. Chironomus yoshimatsui (13) (14).
Următoarele caracteristici sunt documentate pentru fiecare șirag de ouă:
The complete exposure duration is ca.
ziua de producție, dimensiuni (normale, adică 1 ± 0,3 cm sau mici; tipic ≤ 0,5 cm) și structura (normală = formă de banană cu șirag de ouă dispuse în spirală sau anormală, de exemplu, șirag de ouă nespiralat) și fertilitatea (fertile sau infertile).
44 days for C. riparius and C. yoshimatsui, and –ca.
Pe parcursul unei perioade de șase zile după producere fertilitatea unui șirag de ouă este evaluată.
100 days for C. dilutus.
Un șirag de ouă este considerat fertil atunci când cel puțin un ou din trei eclozează.
The water exposure scenario, spiking of the water column, is intended to simulate a pesticide spray drift event and covers the initial peak concentration in surface waters.
Măsurători analitice
Water spiking is also useful for other types of exposure (including chemical spills), but not for accumulation processes within the sediment lasting longer than the test period.
Concentrația substanței chimice testate
In that case, and also when run-off is the main entry route of pesticides into water bodies, a spiked sediment design may be more appropriate.
Ca cerință minimă, eșantioanele din apa acoperitoare, din apa interstițială și din sediment trebuie analizate la începutul expunerii (în cazul adiționării apei, de preferință la o oră după aplicare) și la sfârșitul testului, la concentrația cea mai mare și la o concentrație mai mică.
If other exposure scenarios are of interest, the test design may be readily adapted.
Aceasta se aplică vaselor din ambele generații.
For example, if the distribution of the test chemical between the water phase and the sediment layer is not of interest and adsorption to the sediment has to be minimised, the use of surrogate artificial sediment (e.g. quartz sand) may be considered.
Din vasele de cristalizare în cuștile de reproducere numai apa acoperitoare este analizată, întrucât doar cu aceasta intră în contract șiragurile de ouă (în ceea ce privește protocolul cu sediment adiționat, poate fi avută în vedere o confirmare analitică a concentrației sedimentului).
Chemicals that require testing of sediment-dwelling organisms may persist in sediment over long periods.
Dacă se consideră necesar, pe durata testului pot fi efectuate măsurători suplimentare ale sedimentului, ale apei interstițiale sau ale apei acoperitoare.
Sediment-dwelling organisms may be exposed via a number of routes.
Aceste determinări ale concentrației substanței chimice testate furnizează informații despre comportamentul/partiția substanței chimice testate în sistemul apă-sediment.
The relative importance of each exposure route, and the time taken for each to contribute to the overall toxic effect, is dependent on the physical-chemical properties of the chemical.
Eșantionarea sedimentului și a apei interstițiale la începutul și pe durata testului (a se vedea punctul 39) necesită vase de testare suplimentare pentru realizarea de determinări analitice.
For strongly adsorbing chemicals or for chemicals covalently binding to sediment, ingestion of contaminated food may be a significant exposure route.
Măsurătorile efectuate în sediment în cadrul protocolului cu apă adiționată pot să nu fie necesare dacă migrarea substanței chimice testate între apă și sediment a fost determinată în mod clar într-un studiu apă/sediment în condiții comparabile (de exemplu, raportul sediment/apă, tipul de aplicare, conținutul de carbon organic din sediment) sau dacă se arată că concentrațiile măsurate în apa acoperitoare au rămas la valori cuprinse între 80 și 120 % din valorile nominale sau măsurate inițial.
In order not to underestimate the toxicity of highly lipophilic chemicals, the use of food added to the sediment before application of the test chemical may be considered (see paragraph 31).
Atunci când se efectuează măsurători intermediare (de exemplu, în ziua a 7-a și/sau a 14-a) și dacă pentru analiză este nevoie de eșantioane mari care nu pot fi prelevate din vasele de testare fără a influența sistemul de testare, trebuie să se efectueze determinări analitice pe eșantioane din vase de testare suplimentare tratate în același mod (inclusiv prezența organismelor de testare), dar neutilizate pentru observații biologice.
Therefore, it is possible to include all routes of exposure and all life stages.
În unele cazuri, nu se pot analiza concentrațiile în apa interstițială, pentru că dimensiunea eșantionului este prea mică.
Measured endpoints are the total number of adults emerged (for both 1st and 2nd generations), development rate (for both 1st and 2nd generations), sex ratio of fully emerged and alive adults (for both 1st and 2nd generations), number of egg ropes per female (1st generation only) and fertility of the egg ropes (1st generation only).
Parametri fizico-chimici
Formulated sediment is strongly recommended.
pH-ul. oxigenul dizolvat în apa de testare și temperatura apei din vasele de testare și din vasele de cristalizare trebuie măsurate în mod corespunzător (a se vedea punctul 10).
Formulated sediment has several advantages over natural sediments:
Duritatea apei și amoniacul trebuie măsurate în vasele de control, precum și în unul dintre vasele de testare și de cristalizare la cea mai mare concentrație, la începutul și la sfârșitul testului.