natgillin/translations-raw huggingface dataset:
ECx (effect concentration for x % effect) is the concentration that causes an x % of an effect on test organisms within a given exposure period when compared with a control.
Acesta fapt ar trebui luat în considerare înainte de selectarea celei mai adecvate metode de testare.
The following method for determining the maximum water holding capacity of the soil is considered to be appropriate.
La finalul perioadei de expunere de 21 de zile, în funcție de specia testată, se măsoară unul sau doi biomarkeri cu rol de parametru, la masculi și la femele, ca indicatori ai efectelor estrogenice, de inhibare a aromatazei sau androgenice ale substanței chimice testate;
It is described in Annex C of ISO DIS 11268-2 (Soil Quality — Effects of pollutants on earthworms (Eisenia fetida).
acești parametri sunt vitelogenina și caracteristicile sexuale secundare.
Part 2: Determination of effects on reproduction (23)).
Vitelogenina se măsoară la Pimephales promelas, la Oryzias latipes și la peștele-zebră, în timp ce caracteristicile sexuale secundare se măsoară doar la Pimephales promelas și la Oryzias latipes.
Cover the bottom of the tube with a piece of filter paper filled with water and then places it on a rack in a water bath.
Acest test biologic servește drept test de screening in vivo pentru anumite moduri endocrine de acțiune, iar aplicarea sa ar trebui considerată în contextul «Cadrului conceptual al OCDE pentru testarea și evaluarea perturbatorilor endocrini» (28).
Soil Quality — Determination of pH (16).
CONSIDERAȚII INIȚIALE ȘI LIMITĂRI
Rearing of Hypoaspis (Geolaelaps ) aculeifer, food mites and synchronisation of culture
Vitelogenina este produsă în mod normal de ficatul femelelor vertebrate ovipare ca răspuns la circulația estrogenului endogen.
Rearing of Hypoaspis (Geolaelaps) aculeifer:
Este un precursor al proteinelor din vitelus și, după ce este produsă în ficat, circulă în fluxul sanguin la ovar de unde este preluată și modificată de ovocitele în dezvoltare.
Cultures can be maintained in plastic vessels or glass jars filled with plaster of Paris / charcoal powder (9:1) mixture.
Vitelogenina este aproape nedetectabilă în plasma peștilor imaturi, femele și masculi, deoarece nu au suficient estrogen circulant;
The plaster can be kept moist by adding few drops of distilled or deionised water if required.
cu toate acestea, ficatul are capacitatea de a sintetiza și de a secreta vitelogenină ca răspuns la o stimulare estrogenică exogenă.
Rearing temperatures are optimal between 20 ± 2 °C, light / dark regime is not relevant for this species.
Măsurarea vitelogeninei servește la detectarea substanțelor chimice cu diferite moduri estrogenice de acțiune.
Prey can be Typrophagus putrescentiae or Caloglyphus sp. mites (food mites should be handled with care since they could cause allergies in humans), but nematodes, enchytraeids and collembolans are also suited as prey items.
Detectarea substanțelor chimice estrogenice este posibilă prin măsurarea inducției vitelogeninei la peștii masculi și a fost amplu documentată în literatura științifică de specialitate revizuită inter pares [ex.
Their source should be recorded.
(7)].
Population development can start with a single female because males develop in unfertilised eggs.
Inducția vitelogeninei a fost demonstrată și în urma expunerii la androgeni aromatizabili (8, 9).
Generations are largely overlapping.
O reducere a nivelului de estrogen circulant la femele, de exemplu prin inhibarea aromatazei care transformă androgenul endogen în estrogenul natural 17β-estradiol, determină o reducere a nivelului de vitelogenină, care se utilizează pentru detectarea substanțelor chimice cu proprietăți de inhibare a aromatazei (10, 11).
A female can live at least 100 days and can deposit approximately 100 eggs during its lifetime.
Relevanța biologică a răspunsului vitelogeninei ca urmare a inhibării estrogenice/a aromatazei este bine stabilită și a fost amplu documentată.
A maximum oviposition rate is reached between 10 and 40 days (after becoming adults) and amounts to 2,2 eggs female– 1 day– 1.
Cu toate acestea, este posibil ca producția de vitelogenină la femele să fie afectată și de toxicitatea generală și de modurile de acțiune toxice neendocrine, de exemplu de hepatotoxicitate.
Developmental time from egg to adult female is approximately 20 days at 20 °C. More than one culture should be maintained and held beforehand.
Mai multe metode de măsurare au fost dezvoltate cu succes și standardizate pentru utilizarea de rutină.
Rearing of Typrophagus putrescentiae: The mites are kept in a glass vessel filled with fine brewers yeast powder which is put in a plastic bucket filled with KNO3-solution in order to avoid escaping.
Acesta este cazul metodelor cu specificitate de specie utilizând testul de imunoabsorbție cu anticorpi marcați enzimatic (ELISA), în care se utilizează imunochimia pentru a cuantifica vitelogenina produsă în probe mici de sânge sau hepatice prelevate de la pești individuali (12, 13, 14, 15, 16, 17, 18).
The food mites are placed on top of this powder.
Pentru măsurarea vitelogeninei, de la Pimephales promelasse prelevează probe de sânge, de la peștele-zebră se prelevează probe de sânge sau omogenat din cap/coadă, iar de la Oryzias latipes se prelevează probe hepatice.
Afterwards, they are carefully mixed with the powder (which has to be replaced twice a week) using a spatula.
În cazul Oryzias latipes, există o bună corelație între vitelogenina măsurată în sânge și cea măsurată în ficat (19).
Synchronisation of culture: Specimens that are used in the test should be of similar age (ca.
În apendicele 6 sunt descrise procedurile recomandate pentru prelevările efectuate în scopul măsurării vitelogeninei.
At a rearing temperature of 20 °C this is achieved by
respectivele seturi trebuie să fie bazate pe o metodă ELISA validată, cu specificitate de specie.
Transfer females to a clean rearing vessel and add sufficient food
Caracteristicile sexuale secundare ale peștilor masculi de anumite specii sunt vizibile la exterior, cuantificabile și sensibile la nivelurile de androgeni endogeni circulanți;
The development of the mites follows approximately the pattern described below at 20 °C (figure):
O atenuare a caracteristicilor sexuale secundare ale masculilor ar trebui interpretată cu prudență din cauza puterii statistice mici și ar trebui să fie bazată pe opiniile experților și pe greutatea dovezilor.
Egg 5d, Larva 2d, Protonymph 5d, Deutonymph 7d, preoviposition period of female 2d.
Există limitări în ceea ce privește utilizarea peștelui-zebră în acest test din cauza absenței caracteristicilor sexuale secundare cuantificabile sensibile la substanțe chimice cu efecte androgenice.
Afterwards, the mites are adult.
În cazul Pimephales promelas, principalul indicator al expunerii la androgeni exogeni este numărul de tuberculi nupțiali situați pe botul femelei.
Figure
În cazul femelelor de Oryzias latipes, numărul de procese papilare constituie principalul indicator al expunerii exogene la substanțe chimice cu efecte androgenice.
Development of Hypoaspis (Geolaelaps) aculeifer at 20 °C.
Procedurile recomandate pentru evaluarea caracteristicilor sexuale ale Pimephales promelas și, respectiv, ale Oryzias latipes sunt indicate în apendicele 5A și în apendicele 5B.
(removal = females used for the test)
Definițiile utilizate în cadrul acestei metode de testare sunt prezentate în apendicele 1.
20 days
În cadrul testului, masculii și femelele aflați în stadiu de reproducere sunt expuși împreună în vase de testare.
The adult test animals are removed from the synchronised culture and introduced into the test vessels between the 28th and the 35th day after the parental females have started egg laying (i.e. 7 – 14 days after they became adult).
Stadiul de adult și cel reproducător al acestora permite o diferențiere clară a fiecărui sex și, în consecință, o analiză a fiecărui parametru în funcție de sex, și asigură sensibilitatea lor la substanțe chimice exogene.
This ensures that the test animals have already passed their preoviposition period and have been mated by males that are also present in the culture vessel.
La finalul testului, sexul este confirmat printr-o examinare macroscopică a gonadelor după incizia ventrală a abdomenului cu ajutorul unei foarfeci.
Observations in laboratory cultures suggest, that females mate immediately or shortly after becoming adult if males are present (Ruf, Vaninnen, pers. obs.).
O prezentare generală a condițiilor de biotestare relevante este redată în apendicele 2.
The period of seven days is chosen to facilitate integration in laboratory routine and to buffer individual developmental variability among mites.
Testul se efectuează în mod normal pe pești selectați dintr-o populație capabilă să elibereze gameți;
The oviposition should be started with at least the same number of females that is eventually needed for the test (If for example 400 females are needed in the test, at least 400 females should be allowed to oviposit for two to three days.
nu trebuie utilizate animale senescente.
At least 1200 eggs should be the starting point for the synchronised population (sex ratio ca.
Orientarea privind vârsta peștilor și stadiul de reproducere al acestora este inclusă în secțiunea privind selectarea speciei de pește.
0,5, mortality ca. 0,2).
Testul este realizat utilizând trei concentrații de expunere la substanțe chimice, precum și un vas de control cu apă și un vas de control cu solvent, dacă este necesar.
To avoid cannibalism, it is more feasible to keep not more than 20-30 ovipositing females in one vessel.
Pentru fiecare tratament se utilizează două vase sau vase duplicat (fiecare vas conținând 5 masculi și 5 femele) în cazul Oryzias latipes și al peștelui-zebră și patru vase sau vase duplicat (fiecare vas conținând 2 masculi și 4 femele) în cazul Pimephales promelas.
Extraction methods
Acest principiu permite acomodarea comportamentului teritorial al masculului de Pimephales promelas menținând în aceleași timp o putere suficientă a testului.
For micro-arthropods a heat extraction is an appropriate method to separate specimens from the soil / substrate (see figure below).
Expunerea se realizează timp de 21 de zile, iar prelevarea de probe de la pești se efectuează în cea de a 21 zi de expunere.
The method is based on the activity of the organisms, so only mobile specimens will have the chance to be recorded.
După prelevarea de probe în cea de a 21-a zi, toate animalele sunt eutanasiate.
The principle of the heat extraction is to make conditions for the organisms gradually worse in the sample, so that they will leave the substrate and fall in a fixing liquid (e.g. ethanol).
Caracteristicile sexuale secundare se măsoară în cazul Pimephales promelas și al Oryzias latipes (a se vedea apendicele 5A și apendicele 5B);
Crucial points are the duration of the extraction and the gradient of good to moderate to bad conditions for the organisms.
se prelevează probe de sânge pentru determinarea vitelogeninei de la peștele-zebră și de la Pimephales promelas, ca alternativă putându-se preleva probe de la cap/coadă pentru determinarea vitelogeninei la peștele-zebră (apendicele 6);
The duration of extraction for ecotoxicological tests have to be as short as possible, because any population growth during the time of extraction would falsify the results.
pentru măsurarea VTG în cazul Oryzias latipes se prelevează probe din ficat (apendicele 6).
On the other hand the temperature and moisture conditions in the sample have to be always in a range that allows the mites to move.
CRITERII DE ACCEPTARE A TESTULUI
The heating of a soil sample leads to a desiccation of substrate.
Pentru ca rezultatele testului să fie acceptabile, trebuie să îndeplinească următoarele condiții:
If the desiccation is too quick, some mites might also desiccated before they managed to escape.
mortalitatea din vasele de control cu apă (sau cu solvent) nu trebuie să depășească 10 % la încheierea perioadei de expunere;
Therefore the following procedure is proposed (24) (25): Apparatus:
concentrația oxigenului dizolvat trebuie să fie pe parcursul întregii perioade de expunere de cel puțin 60 % din valoarea de saturație din aer (VSA);
Tullgren funnel or comparable methods like e.g. McFadyen (heating from above, sample is put over a funnel) Heating regime:
temperatura apei nu trebuie să difere cu mai mult de ± 1,5 °C între vasele de testare în niciun moment pe parcursul perioadei de expunere și trebuie să fie menținută într-un interval de 2 °C în limitele de temperatură specificate pentru speciile testate (apendicele 2);
25 °C for 12 h, 35 °C for 12 h, 45 °C for 24 hours (in total 48 h).
trebuie să existe dovezi care să demonstreze menținerea satisfăcătoare în soluție a concentrațiilor substanței chimice utilizate în test în intervalul de ± 20 % din valorile medii măsurate.
The temperature should be measured in the substrate.
Echipamentul obișnuit de laborator și în special următoarele:
Fixation liquid:
pH-metru și aparat de măsurare a oxigenului;
70 % ethanol
echipament pentru determinarea durității și alcalinității apei;
Details:
aparatură adecvată pentru controlul temperaturii, de preferat cu monitorizare continuă;
Take glass vial that was used for the test.
bazine din material chimic inert și de capacitate adaptată la încărcarea și densitatea populației recomandate (a se vedea apendicele 2);
Remove lid and wrap a piece of mesh or fabric around the opening.
substrat de reproducere pentru Pimephales promelas și peștele-zebră, apendicele 4 conține detaliile necesare;
The fabric should have a mesh size of 1,0 to 1,5 mm.
balanță cu precizie adecvată (adică precizie de ± 0,5 mg).
Fix the fabric with an elastic band.
În cadrul testului poate fi utilizat orice tip de apă în care specia testată supraviețuiește și crește o perioadă îndelungată corespunzătoare.
Carefully turn the vial upside down and place it in the extraction apparatus.
Trebuie să fie de calitate constantă pe durata testului.
The fabric prevents substrate from trickling in the fixation liquid but allows mites to leave the sample.
Trebuie să aibă un pH cuprins în intervalul 6,5 – 8,5, dar pe durata unui test pH-ul trebuie să se încadreze într-un interval de ± 0,5 unități.
End the extraction after 48 hours.
De exemplu, la fiecare trei luni trebuie măsurate metale grele (ex., Cu, Pb, Zn, Hg, Cd, și Ni), anioni și cationi majori (ex., Ca2+, Mg2+, Na+, K+, Cl– și SO42–), pesticide (ex., organofosforice totale și organoclorurate totale), carbon organic total și solide în suspensie în cazul în care apa de diluție este cunoscută ca având calitate constantă.
Remove fixation vials and count mites by means of a dissecting microscope.
Dacă s-a demonstrat că apa are calitate constantă pe parcursul unei perioade de cel puțin un an, analizele se pot efectua la intervale mai mari (de exemplu, la fiecare șase luni).
The extraction efficiency of the chosen method must have been proven once or twice a year using vessels containing a known number of juvenile and adult mites kept in untreated test substrate.
Anumite caracteristici chimice ale unei ape de diluție acceptabile sunt prezentate în apendicele 3.
Efficiency should be ≥ 90 % on average combined for all developmental stages.
Soluțiile de testare în concentrațiile alese se prepară prin diluarea unei soluții stoc.
Tullgren-type extracting device
Soluția stoc se prepară de preferință prin simpla amestecare sau agitare a substanței chimice de testare în apa de diluție utilizând mijloace mecanice (de exemplu, un agitator sau cu ajutorul ultrasunetelor).
Wire mesh barrier
Pentru obținerea unei soluții stoc cu o concentrație corespunzătoare se pot utiliza coloane de saturare (coloane de solubilitate).
How to prepare the test vial after the test is finished, before extraction
Nu se recomandă utilizarea unui solvent purtător.
Identification of Hypoaspis (Geolaelaps ) aculeifer
Cu toate acestea, în cazul în care este necesară utilizarea unui solvent, trebuie testat în paralel un vas de control cu solvent la aceeași concentrație ca cea a substanțelor chimice utilizate în tratamente.
Subclass/order/suborder:
În cazul substanțelor chimice care sunt dificil de testat, un solvent poate constitui cea mai bună soluție din punct de vedere tehnic;
Family:
trebuie consultat documentul de orientare al OCDE privind testarea toxicității acvatice a substanțelor și amestecurilor dificile (22).
Genus/subgenus/species:
Alegerea solventului va fi determinată de proprietățile chimice ale substanței chimice.
Author and Date:
Documentul de orientare al OCDE recomandă să nu se depășească o concentrație maximă de 100μl/l.
Literature used:
Cu toate acestea, o analiză recentă (23) a evidențiat îngrijorări suplimentare generate de utilizarea solvenților pentru testarea activității endocrine.
Deterministic characteristics:
Prin urmare, se recomandă reducerea la minimum concentrației solventului, dacă este necesar și dacă este posibil din punct de vedere tehnic (în funcție de proprietățile fizico-chimice ale substanței chimice utilizate în testare).
Tectum with rounded denticulate edge;
Va fi utilizat un sistem de testare cu flux continuu.
hypostomal grooves with more than 6 denticles;
Un astfel de sistem alimentează și diluează continuu o soluție stoc conținând substanța chimică utilizată în testare (de exemplu, pompă dozatoare, diluator proporțional, sistem de saturare) pentru a furniza o serie de concentrații în incintele de testare.
caudal dorsal setae of Z4 not very long;
Debitele soluțiilor stoc și ale apei de diluție trebuie verificate periodic, de preferință zilnic, pe durata testului și nu trebuie să varieze cu mai mult de 10 % pe parcursul întregului test.
dorsal setae setiform;
Trebuie evitată utilizarea unor tuburi din plastic de calitate inferioară sau a altor materiale care pot conține substanțe biologic active.
genital shield normal, not very enlarged and not reaching the anal shield;
În momentul selectării materialului pentru sistemul de testare cu flux continuu trebuie luată în considerare posibila absorbție a substanței de testare de către respectivul material.
posterior half of dorsal shield without unpaired setae;
Alegerea peștilor
legs II and IV with some thick macrosetae;
Peștii de testare trebuie selectați dintr-o populație de laborator, de preferință dintr-un singur stoc, care a fost aclimatizată timp de cel puțin două săptămâni înainte de test în condiții de calitate a apei și de expunere la lumină similare celor utilizate în test.
dorsal seta Z5 about two times longer than J5;
Este important ca rata de încărcare și densitatea populației (pentru definiții, a se vedea apendicele 1) să fie adecvate pentru speciile utilizate în cadrul testului (a se vedea apendicele 2).
fixed digit of chelicera with 12-14 teeth and movable digit with 2 teeth;
După o perioadă de aclimatizare de 48 de ore, se înregistrează mortalitățile și se aplică următoarele criterii:
Idiosoma 520-685 μm long.
mortalități mai mari de 10 % din populație în șapte zile:
Hypoaspis miles is also used in biological control and might get confused with H. aculeifer.
se respinge întregul lot;
The main difference is:
mortalități între 5 % și 10 % din populație:
H. miles belongs to subgenus Cosmolaelaps and has knife-like dorsal setae while H. aculeifer belongs to subgenus Geolaelaps and has setiform dorsal setae.
aclimatizare timp de alte șapte zile;
Hypoaspis aculeifer, dorsal shield with characteristic setae Hypoaspis aculeifer
dacă mortalitatea este mai mare de 5 % în timpul celei de a doua perioade de șapte zile, întregul lot se respinge;
Original drawings by F. Faraji
mortalități mai mici de 5 % din populație în șapte zile:
Hypoaspis miles After Hughes, 1976
se acceptă întregul lot
Hypoaspis aculeifer After Hughes, 1976
Peștii nu trebuie tratați de boli pe parcursul perioadei de aclimatizare, în perioada de preexpunere sau pe parcursul perioadei de expunere.
Leg IV (female)
Preexpunerea și selectarea peștilor
Leg II (female)
Se recomandă o perioadă de preexpunere de o săptămână pe parcursul căreia animalele sunt introduse în vase similare cu cele utilizate în cadrul testului propriu-zis.
Basic information on the biology of Hypoaspis (Geolaelaps) aculeifer
Peștii trebuie hrăniți ad libitum pe parcursul întregii perioade de reținere și în faza de expunere.
Hypoaspis aculeifer belongs to the family Lealapidae, order Acari (mites), class Arachnida, tribe Arthropoda.
Faza de expunere începe cu pești adulți dimorfici din punct de vedere sexual selectați dintr-o populație de animale de laborator mature din punct de vedere reproductiv (de exemplu, prezentând caracteristici sexuale secundare clare, vizibile în cazul Pimephales promelas și al Oryzias latipes) și care eliberează activ gameți.
They are living in all kinds of soil and feed on other mites, nematodes, enchytraeids and collembolans (26).
Exclusiv pentru o orientare generală (și fără ca acest fapt să fie luat în considerare independent de observarea stadiului efectiv de reproducere al unui anumit lot de pești), Pimephales promelas trebuie să aibă aproximativ 20 (± 2) de săptămâni, presupunând că au fost crescuți la o temperatură de 25 ± 2 °C pe parcursul întregii lor vieți.
In case of food shortage they switch to cannibalism (27).
Oryzias latipes trebuie să aibă aproximativ 16 (± 2) săptămâni, presupunând că au fost crescuți la o temperatură de 25 ± 2 C pe parcursul întregii lor vieți.
Predatory mites are segmented in idiosoma and gnathosoma.
Peștii-zebră trebuie să aibă aproximativ 16 (± 2) săptămâni, presupunând că au fost crescuți la o temperatură de 26 ± 2 °C pe parcursul întregii lor vieți.
A clear differentiation of the idiosoma in prosoma (head) and opisthosoma (abdomen) is missing.
PROTOCOLUL TESTULUI
The gnathosoma (head shield) contains the instruments for feeding such as palps and chelicera.
Se utilizează trei concentrații ale substanței chimice de testare, un vas de control (apă) și, dacă este necesar, un vas de control cu solvent.
The chelicers are trifurcated and tusked with teeth of different shape.
Datele pot fi analizate pentru a determina diferențele semnificative din punct de vedere statistic dintre răspunsurile corespunzătoare tratamentului și vaselor de control.
Beside ingestion the males are using their chelicers mainly to transfer the spermatophores to the females.
Aceste analize vor oferi informații cu privire la necesitatea efectuării unor teste suplimentare pe termen mai lung pentru a se detecta posibile efecte adverse (și anume, asupra supraviețuirii, dezvoltării, creșterii și reproducerii) ale substanței chimice, în loc de a fi utilizate în cadrul evaluării riscurilor (24).
A dorsal shield covers nearly completely the idiosoma.
În cazul peștelui-zebră și al Oryzias latipes, în cea de a 21-a zi a experimentului, sunt prelevate probe de la masculi și femele pentru fiecare nivel de tratament (5 masculi și 5 femele din fiecare dintre cele două vase duplicat) și din vasul sau vasele de control pentru a măsura vitelogenina și a evalua caracteristicile sexuale secundare, după caz.
A big part of the female idiosoma is occupied by the reproductive organs, which are in particular distinct shortly before egg deposition.
În cazul Pimephales promelas, în cea de a 21-a zi de expunere, sunt prelevate probe de la masculi și femele (2 masculi și 4 femele din fiecare dintre cele patru vase duplicat) și din vasul sau vasele de control pentru a măsura vitelogenina și a evalua caracteristicile sexuale secundare.
Ventrally, two shields can be found, the sternal and the genital shield.
În scopurile acestui test, cea mai mare concentrație de testare trebuie stabilită fie la concentrația maximă tolerată (CMT) obținută cu ajutorul unei metode de determinare a intervalului sau din alte date privind toxicitatea, fie la valoarea de 10 mg/l, fie la valoarea corespunzătoare solubilității maxime în apă, oricare este cea mai mică.
All legs are provided with bristles and thorns.
CMT este definită ca fiind cea mai mare concentrație de testare a substanței chimice având ca rezultat o rată a mortalității mai mică de 10 %.
The bristles are used to anchor when moving in or on top of the soil.
Utilizarea acestei metode presupune existența unor date empirice privind toxicitatea acută sau a altor date privind toxicitatea pe baza cărora poate fi estimată CMT.