natgillin/translations-raw huggingface dataset:
For the breeding cages an additional one hour dawn and dusk phase may be included.
C cuști de reproducere cu dimensiuni de minimum 30 cm lungime, 30 cm înălțime și 30 cm lățime
Exposure duration
Exemplu de vas de testare:
Spiked water design:
A pipetă Pasteur pentru alimentarea cu aer a apei acoperitoare
The exposure period of the 1st generation starts when the test chemical is spiked into the overlying water of the test vessels (which is one day after insertion of the larvae — for possible amendments of the exposure design, see paragraph 7).
B capac din sticlă pentru prevenirea evadării chironomidelor eclozate
Exposure of the 2nd larval generation starts immediately, since they are inserted into a sediment-water system that has been already spiked.
C suprafața stratului de apă
The maximum exposure duration for the 1st generation is 27 days and for the 2nd generation 28 days (the 1st generation larvae spend one day in the vessels without exposure) for C. riparius and C. yoshimatsui.
D vas de testare (pahar de laborator din sticlă de minimum 600 ml)
Considering the overlap, the complete test duration is approximately 44 days.
E strat de sediment
For C. dilutus, maximum exposure durations are 64 and 65 days, for the 1st and 2nd generation, respectively.
Exemplu de exhaustor pentru capturarea chironomidelor adulte (săgețile indica direcția fluxului de aer):
The total duration is approximately 100 days.
În interior, deschiderea tubului de sticlă (A) este acoperită cu bumbac și o plasă (dimensiunea ochiurilor de aproximativ 1 mm) pentru a preveni deteriorarea chironomidelor atunci când acestea sunt aspirate în exhaustor
Spiked sediment design:
C recipient transparent (din plastic sau din sticlă, cu o lungime de aproximativ 15 cm) pentru chironomidele capturate
exposure starts with the addition of the larvae and is maximum 28 days for both generations for C. riparius and C. yoshimatsui and maximum 65 days for both generations for C. dilutus.
D dop din cauciuc vulcanizat, perforat cu tub (E).
Emergence
Pentru eliberarea chironomidelor în cușca de reproducere, sonda D se eliberează din recipientul C
Development time and the total number of fully emerged and alive male and female midges are determined for both generations.
E tub (din plastic sau din sticlă, cu un diametru interior de aproximativ 8 mm) pentru colectarea chironomidelor adulte din vas
Males are easily identified by their plumose antennae and thin body posture.
Prezentare schematică a unui test care cuprinde ciclul de viață:
Test vessels of both generations should be observed at least three times per week to make visual assessment of any abnormal behaviour of the larvae (e.g. leaving sediment, unusual swimming), compared to the control.
A prima generație – vasele de testare car conțin un sistem sediment-apă, opt replici, 20 de larve în primul stadiu larvar per vas
During the period of emergence, which starts about 12 days after insertion of the larvae for C. riparius and C. yoshimatsui (after 20 days for C. dilutus), emerged midges are counted and sexed at least once, but preferably twice a day (early morning and late afternoon).
B patru vase de testare pentru fiecare cușcă de reproducere, A și B
After identification, the midges of the 1st generation are carefully removed from the vessels and transferred to a breeding cage.
C cuști de reproducere (A și B) pentru formare de roiuri, împerechere și depunere de ouă
Midges of the 2nd generation are removed and killed after identification.
D vase de cristalizare pentru depunerea șiragurilor de ouă
Any egg ropes deposited in the test vessels of the 1st generation should be collected individually and transferred with at least 2,5 ml native water to 12-well microplates (or other suitable vessels) which are covered with a lid to prevent significant evaporation.
E microplăci, câte una pentru fiecare șirag de ouă
The number of dead larvae and visible pupae that have failed to emerge should also be recorded.
F a doua generație – vase de testare care conțin un sistem sediment-apă, opt replici, 20 de larve în primul stadiu larvar per vas
Examples of a breeding cage, test vessel and exhauster are provided in Appendix 5.
TEST DE DEZVOLTARE SEXUALĂ A PEȘTILOR
Reproduction
Prezenta metodă de testare este echivalentă cu Orientarea OCDE privind testarea (test guideline – TG) nr.
Effects on reproduction are assessed via the number of egg ropes produced by the 1st generation of midges and the fertility of these egg ropes.
234 (2011).
Once per day the egg ropes are collected from the crystallising dish that is placed in each breeding container.
Ea se bazează pe o decizie din 1998 de dezvoltare a unor noi metode de testare sau de actualizare a metodelor de testare existente pentru screeningul și testarea potențialelor perturbatori endocrini.
The egg ropes should be collected and transferred with at least 2,5 ml native water to a 12-wells microplate (one egg rope in each well) or other suitable vessels, which are covered with a lid to prevent significant evaporation.
Testul de dezvoltare sexuală a peștilor (Fish Sexual Development Test – FSDT) a fost identificat ca o metodă de testare promițătoare care acoperă un stadiu de viață la pești receptiv la substanțe chimice estrogenice și androgenice.
The following characteristics are documented for each egg rope:
Metoda de testare a făcut obiectul unei validări interlaboratoare în perioada 2006 – 2010, prin ea fiind validate Oryzias latipes, peștele-zebră (Danio rerio) și ghidrinul (Gasterosteus aculeatus), Pimephales promelas fiind parțial validată (41)(42)(43).
day of production, size (normal, i.e. 1,0 ± 0,3 cm or small; typically ≤ 0,5 cm), and structure (normal = banana-form with spiralled egg string or abnormal, e.g. unspiralled egg string) and fertility (fertile or infertile).
Acest protocol include Oryzias latipes, ghidrinul și peștele-zebră.
Over the course of six days after it was produced the fertility of an egg rope is assessed.
Protocolul reprezintă, în principiu, o îmbunătățire a Orientării TG nr.
An egg rope is considered fertile when at least one third of the eggs hatch.
210 a OCDE Fish, Early Life Stage Toxicity Test (Pește, Test de toxicitate în primele stadii de viață) (1), în cadrul căreia expunerea se continuă până când peștii se diferențiază sexual, adică aproximativ la 60 de zile de la eclozare (days post-hatch – dph) pentru Oryzias latipes, ghidrin și peștele-zebră (perioada de expunere poate fi mai scurtă sau mai lungă pentru alte specii, care vor fi validate în viitor) și la care se adaugă parametri studiați care reflectă starea endocrină.
The total number of females added to the breeding cage is used to calculate the number of egg ropes per female and the number of fertile egg ropes per female.
FSDT evaluează efectele în primele stadii de viață și potențialele efecte negative ale substanțelor chimice presupuse a avea un efect de perturbare endocrină (de exemplu estrogeni, androgeni și inhibitori de steroidogeneză) asupra dezvoltării sexuale.
If required, the number of eggs in an egg rope can be estimated non-destructively by using the ring count method (detailed in 32 and 33).
Combinația celor doi parametri endocrini studiați principali, concentrația de vitelogenină (VTG) și raportul fenotipic între sexe permite testului să indice modul de acțiune al substanței chimice testate.
Analytical measurements
Ca urmare a schimbării populațional relevante în raportul fenotipică al sexelor, FSDT poate fi utilizat pentru evaluarea pericolelor și a riscurilor.
Concentration of the test chemical
Cu toate acestea, în cazul în care testul este utilizat pentru evaluarea pericolelor sau a riscurilor, nu trebuie să se folosească ghidrinul deoarece datele de validare disponibile până în prezent au arătat că pentru această specie modificările raportului fenotipic al sexelor de către substanțele chimice testate au fost rare.
As a minimum, samples of the overlying water, pore water and the sediment should be analysed at the start of exposure (in case of water spiking preferably one hour after application) and at the end of the test, at the highest concentration and a lower one.
Protocolul se bazează pe pești expuși prin intermediul apei la substanțe chimice în timpul perioadei sexuale labile în care se așteaptă ca peștele să fie mai sensibil la efectele substanțelor chimice cu efect de perturbare endocrină care interferează cu dezvoltarea sexuală.
This applies to vessels from both generations.
Doi parametri studiați principali sunt măsurați ca indicatori ai anomaliilor de dezvoltare cauzate de efecte endocrine, concentrația de VTG și raportul între sexe (proporția sexelor) determinate prin intermediul histologiei gonadelor.
From the crystallising dishes in the breeding cage only the overlying water is analysed, since this is what the egg ropes come into contact with (for the spiked sediment design an analytical confirmation of the sediment concentration may be considered).
Histopatologia gonadală (evaluarea și determinarea stadiilor ovocitelor și a celulelor spermatogenetice) este opțională.
Further measurements of sediment, pore water or overlying water during the test may be conducted if deemed necessary.
În plus, sexul genetic este determinat ori de câte ori este posibil (de exemplu, pentru Oryzias latipes și ghidrin).
These determinations of test chemical concentration inform on the behaviour/partitioning of the test chemical in the water-sediment system.
Prezența unui marker al sexului genetic constituie un avantaj considerabil deoarece crește puterea datelor statistice referitoare la raportul sexelor și permite detectarea inversării sexului fenotipic individual.
Sampling of sediment and pore water at the start and during the test (see paragraph 39) requires additional test vessels to perform analytical determinations.
Alți parametri studiați apicali care ar trebui măsurați includ rata de eclozare, supraviețuirea, lungimea și greutatea corporală.
Measurements in sediment in the spiked water design might not be necessary if the partitioning of the test chemical between water and sediment has been clearly determined in a water/sediment study under comparable conditions (e.g. sediment to water ratio, type of application, organic carbon content of sediment), or if measured concentrations in the overlying water are shown to remain within 80 to 120 % of the nominal or measured initial concentrations..
Metoda de testare ar putea fi adaptabilă la alte specii decât cele menționate mai sus, cu condiția ca celelalte specii să fie supuse unui proces de validare echivalent celui realizat pentru Oryzias latipes, ghidrin și peștele-zebră, ca peștii de control să fie diferențiați sexual la sfârșitul testului, ca nivelurile de VTG să fie suficient de mari pentru a detecta variații semnificative determinate de substanțe chimice și ca sensibilitatea sistemului de testare să fie stabilită utilizând substanțe chimice de referință cu activitate endocrină [(anti)estrogenice, (anti)androgenice, inhibitori de aromatază etc].
However, if the test chemical is demonstrated not to adsorb to filters, filtration may also be acceptable.
Vitelogenina (VTG) este produsă în mod normal de ficatul femelelor vertebrate ovipare ca răspuns la estrogenul endogen circulant (2).
pH, dissolved oxygen in the test water and temperature of the water in the test vessels and crystallising dishes should be measured in an appropriate manner (see paragraph 10).
Măsurarea VTG servește la detectarea substanțelor chimice cu moduri de acțiune estrogenice, antiestrogenice, androgenice și a substanțelor chimice care interferează cu steroidogeneza, ca de exemplu inhibitorii de aromatază.
Hardness and ammonia should be measured in the controls and in one test vessel and crystallising dish at the highest concentration at the start and the end of the test.
Detectarea substanțelor chimice estrogenice este posibilă prin măsurarea inducției de VTG la peștii masculi și a fost amplu documentată în literatura științifică de specialitate revizuită inter pares.
The purpose of this life-cycle test is to determine the effect of the test chemical on the reproduction and, for two generations, the development rate and the total number of fully emerged and alive male and female midges.
Inducția de VTG a fost demonstrată și în urma expunerii la androgeni aromatizabili (6)(7).
For the emergence ratio data of males and females should be pooled.
O reducere a nivelului de estrogen circulant la femele, de exemplu prin inhibarea aromatazei care transformă androgenul endogen în estrogenul natural 17β-estradiol, determină o diminuare a concentrației de VTG, care este utilizată pentru detectarea substanțelor chimice cu proprietăți de inhibare a aromatazei sau, în sens mai larg, a inhibitorilor steroidogenezei (33).
If there are no statistically significant differences between the sensitivities in the development rate of the separate sexes, male and female results may be pooled for statistical analysis.
Relevanța biologică a răspunsului VTG ca urmare a inhibării estrogenice/a aromatazei este stabilită și a fost amplu documentată (8)(9).
Effect concentrations expressed as concentrations in the overlaying water (for spiked water) or in the sediment (for spiked sediment), are usually calculated based on measured concentrations at the beginning of the exposure (see paragraph 38).
Cu toate acestea, este posibil ca producția de VTG la femele să fie, de asemenea, afectată de toxicitatea generală și de modurile de acțiune toxice neendocrine.
Therefore, for spiked water, the concentrations typically measured at the beginning of the exposure in the overlying water of the vessels for both generations and those of the crystallising dishes are averaged for each treatment.
Mai multe metode de măsurare au fost dezvoltate și standardizate cu succes pentru utilizarea de rutină în vederea cuantificării VTG în eșantioanele de sânge, ficat, organism întreg sau omogenat din cap/coadă colectate de la pești individuali.
For spiked sediment, the concentrations typically measured at the beginning of the exposure in the vessels for both generations (and optionally those of the crystallising dishes) are averaged for each treatment.
Acesta este cazul pentru peștele-zebră, ghidrini și Oryzias latipes, precum și pentru specia parțial validată Pimephales promelas;
To compute a point estimate, i.e. an ECx, the per-vessel and per-breeding cage statistics may be used as true replicates.
există disponibile metode testare prin imunoadsorbție cu anticorpi marcați enzimatic (ELISA) specifice de specie, care utilizează imunochimia pentru cuantificarea VTG (5)(10)(11)(12)(13)(14)(15)(16).
In calculating a confidence interval for any ECx the variability among vessels should be taken into account, or it should be shown that this variability is so small that it can be ignored.
Pentru Oryzias latipes și peștele-zebră există o corelație bună între VTG măsurată din eșantioane de plasmă sanguină, ficat și omogenat, deși acestea din urmă tinde să arate valori ușor mai mici decât plasma (17)(18)(19).
When the model is fitted by Least Squares, a transformation should be applied to the per-vessel statistics in order to improve the homogeneity of variance.
Apendicele 5 conține procedurile recomandate pentru prelevările de eșantioane efectuate în scopul analizării VTG.
However, ECx values should be calculated after the response is transformed back to the original value (31).
Schimbarea raportului fenotipic al sexelor (proporția sexelor) constituie un parametru studiat care reflectă inversarea sexelor.
When the statistical analysis aims at determining the NOEC by hypothesis testing, the variability among vessels needs to be taken into account, which is guaranteed by using ANOVA methods (e.g. Williams' and Dunnett's test procedures).
În principiu, substanțele chimice cu efect estrogenic, antiestrogenic, androgenic, antiandrogenic și de inhibare a steroidogenezei pot afecta raportul sexelor la peștii în dezvoltare (20).
Williams' test would be appropriate when a monotonic dose-response is expected in theory and Dunnett's test would be appropriate where the monotonicity hypothesis does not hold.
S-a arătat că această inversare a sexelor este parțial reversibilă în cazul peștelui-zebră (21) în urma expunerii la o substanță chimică cu efect estrogenic, în timp ce inversarea sexelor în urma expunerii la substanțe chimice cu efect androgenic este permanentă (30).
Alternatively, more robust tests (27) can be appropriate in situations where there are violations of the usual ANOVA assumptions (31).
Sexul este definit ca femelă, mascul, hermafrodit (ovocite și celule spermatogenetice într-o singură gonadă) sau nediferențiat, determinat la pești individuali prin examinarea histologică a gonadelor.
Emergence ratio
Orientări sunt furnizate în apendicele 7 și în documentul intitulat OECD Guidance Document on the Diagnosis of Endocrine-Related Histopathology of Fish Gonads (Document OCDE de orientare privind diagnosticul histopatologiei influențate endocrin a gonadelor de pește) (22).
Emergence ratios are quantal data, and can be analysed by the Cochran-Armitage test applied in a step-down manner where a monotonic dose-response is expected and these data are consistent with this expectation.
Sexul genetic este examinat prin markeri genetici atunci când aceștia există la o anumită specie de pești.
If not, a Fisher's exact or Mantel-Haentzal test with Bonferroni-Holm adjusted p-values can be used.
În ceea ce privește Oryzias latipes, genele de femele XX sau de masculi YY pot fi detectate prin metoda reacției în lanț a polimerazei (PCR) sau poate fi analizată gena domeniului DM legată de Y (DMY) (DMY negativ sau pozitiv) astfel cum se descrie în (23)(24).
If there is evidence of greater variability between replicates within the same concentration than a binomial distribution would indicate (often referenced to as “extra-binomial” variation), then a robust Cochran-Armitage or Fisher exact test such as proposed in (27), should be used.
În ceea ce privește ghidrinul, există o metodă echivalentă metodei PCR pentru determinarea sexului genetic, descrisă în apendicele 10.
The sum of live midges (males plus females) emerged per vessel, ne, is determined and divided by the number of larvae introduced, na:
În cazul în care sexul genetic poate fi legat în mod individual de sexul fenotipic, puterea testului este îmbunătățită și, prin urmare, sexul genetic trebuie determinat la specii cu markeri ai sexului genetic documentați.
ER emergence ratio
Cei doi parametri studiați endocrini principali, VTG și raportul sexelor, pot demonstra, în combinație, modul de acțiune endocrin (MOA) al substanței chimice (tabelul 1).
number of live midges emerged per vessel
Raportul sexelor este un biomarker relevant pentru populație (25)(26) și pentru unele moduri de acțiune bine definite, rezultatele FSDT pot fi utilizate în scopul evaluării pericolelor și a riscurilor dacă se consideră necesar de către agenția de reglementare.
number of larvae introduced per vessel (normally 20)
Aceste moduri de acțiune sunt în prezent cele cu efect estrogenic, androgenic și de inhibare a steroidogenezei.
When ne is larger than na (i.e. when unintentionally more than the foreseen number of larvae where introduced) na should be made equal to ne.
Reacția parametrilor endocrini studiați la diferite moduri de acțiune ale substanțelor chimice:
An alternative approach that is most appropriate for large sample sizes, when there is extra binomial variance, is to treat the emergence ratio as a continuous response and use procedures consistent with these ER data.
↑ = creștere, ↓ = scădere, — = neinvestigată
A large sample size is defined here as the number emerged and the number not emerging both exceeding five, on a per replicate (vessel) basis.
Referințe
To apply ANOVA methods, values of ER should first be transformed by the arcsin-sqrt transformation or Tukey-Freeman transformation to obtain an approximate normal distribution and to equalise variances.
Agonist estrogenic slab
The Cochran-Armitage, Fisher's exact (Bonferroni), or Mantel-Haentzal tests can be applied when using the absolute frequencies.
↑♀ sau ↑Nedif
The arcsin-sqrt transformation is applied by taking the inverse sine (sine– 1) of the square root of ER.
Agonist estrogenic puternic
For emergence ratios, ECx-values are calculated using regression analysis (e.g. probit, logit or Weibull models (28)).
↑♀ sau ↑Nedif, Nr. ♂
If regression analysis fails (e.g. when there are less than two partial responses), other non-parametric methods such as moving average or simple interpolation can be used.
Antagonist estrogenic
Development rate
↓♀, ↑Nedif
Mean development time represents the mean time span between the introduction of larvae (day 0 of the test) and the emergence of the experimental cohort of midges (for calculation of the true development time, the age of larvae at the time of introduction should be considered).
Agonist androgenic
The development rate (unit: 1/day) is the reciprocal of the development time and represents that portion of larval development which takes place per day.
↑ ♂, Nr. ♀
Development rate is preferred for the evaluation of these sediment toxicity studies as its variance is lower, and it is more homogeneous and closer to a normal distribution compared to the development time.
Antagonist androgenic
Hence, more powerful parametric test procedures may be used with development rate unlike development time.
↑Hermafrodit
For development rate as a continuous response, ECx-values can be estimated by regression analysis (e.g. (29) (30)).
Inhibitor al aromatazei
A NOEC for the mean development rate can be determined via ANOVA methods, e.g. Williams or Dunnett's test.
FSDT nu cuprinde stadiul de viață reproductiv al peștilor și, prin urmare, substanțele chimice care se presupune că afectează reproducerea la concentrații mai mici decât dezvoltarea sexuală trebuie să fie examinate în cadrul unui test care să cuprindă reproducerea.
Since males emerge earlier than females, i.e. have a higher development rate, it makes sense to calculate the development rate for each gender separately in addition to that for the total midges.
Definițiile utilizate în scopul acestei metode de testare sunt prezentate în apendicele 1.
For statistical testing, the number of midges observed on inspection day x are assumed to be emerged at the mean of the time interval between day x and day x – l (l = length of the inspection interval, usually 1 day).
Testul FSDT in vivo este destinat detectării substanțelor chimice cu proprietăți androgenice și estrogenice, precum și cu proprietăți antiandrogenice, antiestrogenice și de inhibare a steroidogenezei.
The mean development rate per vessel ( x
Fazele de validare a FSDT (1 și 2) au cuprins substanțele chimice cu proprietăți estrogenice, androgenice și de inhibare a steroidogenezei.
) is calculated according to:
Efectele în cadrul FSDT ale antagoniști estrogenici și androgenici sunt ilustrate în tabelul 1, dar aceste MOA sunt mai puțin documentate în prezent.
mean development rate per vessel
În cadrul testului, sunt expuși pești, din ouă recent fertilizate, până la finalizarea diferențierii sexuale, la cel puțin trei concentrații ale substanței chimice testate dizolvate în apă.
i index of inspection interval
Testul trebuie să se desfășoare în flux continuu, cu excepția cazului în care nu este posibil din cauza disponibilității sau naturii (de exemplu, solubilitate limitată) a substanței testate.
m maximum number of inspection intervals
Testul începe cu introducerea ouălor nou fertilizate (înainte de divizarea discului embrionar) în camerele de testare.
number of midges emerged in the inspection interval i
Încărcarea camerelor este descrisă pentru fiecare specie la punctul 27.
total number of midges emerged at the end of experiment (= Σfi)
Pentru speciile de pești validate, Oryzias latipes, ghidrinul și peștele-zebră, testul se termină la 60 dph.
development rate of the midges emerged in interval i
La terminarea testului, toți peștii sunt eutanasiați.
day i
Un eșantion biologic (plasmă sanguină, ficat sau omogenat cap/coadă) este colectată pentru analiza VTG din fiecare pește, iar partea rămasă este fixată pentru evaluarea histologică a gonadelor în vederea determinării sexul fenotipic;