natgillin/translations-raw huggingface dataset:
The second pair of legs is used not only for moving but also to clinch the prey.
Sunt necesare trei concentrații de testare, diferențiate printr-un factor constant care nu depășește valoarea 10, și un control cu apă de diluție (și un control cu solvent, dacă este necesar).
The thorns of the fourth pair of legs can serve as protection as well as “moving motor” (28).
Se recomandă ca factorii de diferențiere să se încadreze în intervalul 3,2 și 10.
Males are 0,55 - 0,65 mm long and have a weight of 10 - 15 μg.
Selectarea și cântărirea peștilor pentru testare
Females are 0,8 - 0,9 mm long and are weighing 50 - 60 μg (8) (28) (Fig 1).
Este important ca diferențele de greutate a peștilor să fie reduse la minimum la începutul testului.
Figure 1
În apendicele 2 sunt prezentate intervalele recomandate de mărime corespunzătoare diferitelor specii pentru acest test.
Female, male, protonymph and larvae of H. aculeifer.
Pentru întregul lot de pești utilizați în cadrul testului, intervalul greutăților individuale ale masculilor și femelelor la începutul testului trebuie menținut, dacă este posibil, în limite de ± 20 % din media aritmetică a greutății fiecărui sex.
At 23 °C, the mites become sexually mature after 16 days (females) and 18 days (males), respectively (6).
Se recomandă cântărirea unui subeșantion din stocul de pești înainte de testare pentru a estima greutatea medie.
The females carry over the sperms by the solenostom where they will be then transferred to the ovar.
Condiții de expunere
In the ovar the sperms mature and will be stored.
Durata testului este de 21 de zile după o perioadă de preexpunere.
Fertilisation takes place only after maturation of the sperms in the ovar.
Perioada de preexpunere recomandată este de o săptămână.
The fertilised or unfertilised eggs will be deposited by the females in clumps or separately, preferably in crevices or holes.
Peștii trebuie hrăniți ad libitum cu hrană corespunzătoare (apendicele 2) într-o cantitate suficientă pentru menținerea condiției fizice.
Copulated females can bear juveniles of both sexes whereas from eggs of uncopulated females only male juveniles are hatching.
Trebuie evitată proliferarea microbilor și apariția turbidității apei.
During development to the adult four phases of development (egg — larvae, larvae — protonymph, protonymph — deutonymph, deutonymph — adult) are passed through.
Ca orientare generală, rația zilnică poate fi împărțită în două sau trei porții egale administrate de mai multe ori pe zi, la intervale de cel puțin trei ore.
The egg is milky white, hyaline, elliptical and approximately 0,37 mm long with a solid mantle.
Se acceptă o singură rație mai mare în special în weekenduri.
According to (8), the larvae are between 0,42 - 0,45 mm in size.
Peștii nu trebuie hrăniți timp de 12 ore înainte de prelevarea probelor/necropsie.
They have only three pairs of legs.
Hrana peștilor trebuie evaluată pentru a detecta contaminanți precum pesticide organoclorurate, hidrocarburi aromatice policiclice (HAP), bifenili policlorurați (BPC).
In the head region palps and chelicers are developed.
Trebuie evitate alimente cu un nivel înalt de fitoestrogeni care ar compromite răspunsul în cadrul testului la un agonist de estrogen cunoscut (de exemplu, 17-beta estradiol).
The chelicers, having some few small denticles, are used to hatch from the egg.
Hrana neconsumată și materiile fecale trebuie înlăturate din vasele de testare cel puțin de două ori pe săptămână, de exemplu prin curățarea cu grijă a fundului fiecărui bazin cu ajutorul unui sifon.
After the first moult, 1 - 2 days after hatching, the protonymphs are developed.
Perioada de expunere la lumină și temperatura apei trebuie să fie adecvate pentru specia testată (apendicele 2).
They are also white, the size is 0,45 - 0,62 mm (8) and they have four pairs of legs.
Frecvența determinărilor și măsurătorilor analitice
On the chelicers the teeth are completely present.
Înainte de începerea perioadei de expunere, trebuie asigurată funcționarea corespunzătoare a sistemului de alimentare cu substanța chimică.
Beginning with that stadium the mites start to forage.
Trebuie stabilite toate metodele analitice necesare, incluzând cunoștințe suficiente privind stabilitatea substanței chimice în sistemul de testare.
For that reason the cuticula of the prey is pierced with the chelicers and a secretion for the extra intestinal digestion is emitted into the prey.
Pe parcursul testului, concentrațiile substanței chimice de testare sunt determinate la intervale regulate, astfel:
The food mash can then be sucked by the mite.
debitul diluantului și cel al soluției stoc toxice trebuie verificate, de preferat zilnic, însă de cel puțin două ori pe săptămână, iar aceste fluxuri nu trebuie să varieze cu mai mult de 10 % pe întreaga durată a testului.
The chelicers can also be used to rip bigger particles out of food nuggets (28).
Se recomandă măsurarea concentrațiilor efective ale substanței chimice de testare în toate vasele la începutul testului și, ulterior, săptămânal.
After one further moult the deutonymphs are developed.
Se recomandă ca rezultatele să fie fundamentate pe concentrațiile măsurate.
They are 0,60 - 0,80 mm (8) in size and yellow to light brown in colour.
Cu toate acestea, în cazul în care concentrația substanței chimice de testare în soluție a fost menținută în mod satisfăcător pe tot parcursul testului într-un interval de ±20 % din concentrația nominală, rezultatele pot fi fundamentate fie pe valorile nominale, fie pe cele măsurate.
Beginning with that phase they can be separated into females and males.
Poate fi necesară filtrarea probelor (de exemplu, cu ajutorul unui filtru cu pori de 0,45μμm) sau centrifugarea lor.
After further ecdysis, during which time the animals are inactive and the brown shield is developing (approx. after 14 days) the mites are adult (28) (29) (30).Their life span is between 48 and 100 days at 25 °C (27).
Dacă este necesară, procedura recomandată este centrifugarea.
Appendix 8
Cu toate acestea, dacă materialul de testare nu se absoarbe în filtre, filtrarea este de asemenea acceptabilă.
Summary and time schedule of the main actions to be taken in order to perform the Hypoaspis test
Pe parcursul testului, oxigenul dizolvat, temperatura și pH-ul trebuie măsurate în toate vasele de testare cel puțin o dată pe săptămână.
Time (days)
Duritatea și alcalinitatea totale trebuie măsurate cel puțin o dată pe săptămână în vasele de control și în vasul cu cea mai înaltă concentrație.
test start = day 0
Este de preferat ca temperatura să fie monitorizată continuu cel puțin într-unul dintre vasele de testare.
Activity / task
O serie de răspunsuri biologice generale (de exemplu, supraviețuirea) și esențiale (de exemplu, nivelurile de vitelogenină) sunt evaluate pe parcursul testului sau la încheierea acestuia.
Day – 35
Măsurarea și evaluarea acestor parametri și utilitatea lor sunt descrise în continuare.
to – 28
Supraviețuire
Transfer females from stock culture to clean vessels to start synchronisation
Peștii trebuie examinați zilnic pe parcursul perioadei de testare și orice caz de deces trebuie înregistrat, iar peștii morți trebuie îndepărtați cât mai rapid posibil.
2 days later:
Peștii morți nu trebuie înlocuiți în vasele de control sau în vasele de tratament.
removal of females
Sexul peștilor morți în timpul testului trebuie stabilit printr-o evaluare macroscopică a gonadelor.
Twice or three times a week:
Comportament și aspect
supply with sufficient food
Trebuie notat orice comportament anormal (în raport cu grupul de control);
Day – 5 (+/- 2)
acesta ar putea include semne ale toxicității generale, inclusiv hiperventilația, înotul necoordonat, pierderea echilibrului, imobilitate sau hrănire atipice.
Prepare artificial soil
În plus, trebuie observate anomaliile externe (precum hemoragia, modificările de culoare).
Day – 4 (+/- 2)
Astfel de semne de toxicitate trebuie luate în considerare cu atenție în timpul interpretării datelor, deoarece ele pot indica concentrații la care biomarkerii activității endocrine nu sunt fiabili.
Determine WHC of artificial soil
Aceste observații referitoare la comportament pot furniza, de asemenea, informații calitative utile pentru potențialele viitoare cerințe în materie de testare a peștilor.
Dry over night
De exemplu, a fost observată o agresivitate teritorială la masculii normali sau la femele masculinizate de Pimephales promelas prin expunere la androgenice;
Next day:
în cazul peștelui-zebră, comportamentul caracteristic de împerechere și de eliberare de gameți după răsăritul soarelui este redus sau stânjenit de expunerea la estrogenice sau la antiandrogenice.
weigh samples and calculate WHC
Deoarece anumite elemente legate de aspect (în primul rând culoarea) se pot modifica rapid în timpul manipulării, este important să se realizeze observații calitative înainte de eliminarea animalelor din sistemul de testare.
Day – 4 (+/– 2)
Experiența de până în prezent în ceea ce privește Pimephales promelas sugerează că anumite substanțe chimice care acționează la nivel endocrin pot induce inițial modificări ale următoarelor caracteristici exterioare:
Pre moisture artificial soil to achieve 20 - 30 % of WHC
culoarea corpului (deschisă sau închisă), modele de colorație (prezența unor dungi verticale) și forma corpului (regiunea capului și regiunea pectorală).
Start test:
Prin urmare, trebuie realizate observații privind aspectul fizic al peștilor pe parcursul testului și la încheierea studiului.
add test chemical to artificial soil
Eutanasierea peștilor
Introduce 10 females to each replicate
În ziua 21, adică la încheierea perioadei de expunere, peștii trebuie eutanasiați cu ajutorul unor cantități corespunzătoare de tricaină [metan sulfonat de tricaină, metacaină, MS-222 (CAS 886-86-2), 100-500 mg/l, tamponată cu 300 mg/l NaHCO3 (bicarbonat de sodiu, CAS 144-55-8) pentru a reduce iritația mucoaselor; apoi sunt prelevate probe de sânge sau de țesut pentru determinarea vitelogeninei, conform explicațiilor din secțiunea privind vitelogenina.
Weigh each replicate
Observarea caracteristicilor sexuale secundare
Set up abiotic controls for moisture content and pH, 2 replicates for each treatment
Anumite substanțe chimice care acționează la nivel endocrin pot induce modificări ale caracteristicilor sexuale secundare specializate (numărul de tuberculi nupțiali la masculul de Pimephales promelas, procesele papilare la masculul de Oryzias latipes).
Dry moisture controls over night
În special, substanțele chimice cu anumite moduri de acțiune pot cauza apariția anormală a unor caracteristici sexuale secundare la animalele de sex opus;
weigh moisture controls
de exemplu, agoniști ai receptorilor androgenici, cum ar fi trenbolonul, metiltestosteronul și dihidrotestosteronul pot cauza dezvoltarea de tuberculi nupțiali proeminenți la femelele de Pimephales promelas sau dezvoltarea de procese papilare la femelele de Oryzias latipes (11, 20, 21).
measure pH of dried abiotic controls
De asemenea, s-a raportat faptul că agoniștii receptorilor estrogenici pot reduce numărul de tuberculi nupțiali și dimensiunea depozitelor subcutanate dorsale ale masculilor adulți (25, 26).
Day 3, 6, 9, 12 (approx.)
Aceste observații morfologice macroscopice pot furniza informații calitative și cantitative utile pentru potențialele viitoare cerințe privind testarea peștilor.
Supply each replicate with sufficient amount of prey organisms
Numărul și dimensiunea tuberculilor nupțiali ai Pimephales promelas și ale procesele papilare ale Oryzias latipes pot fi cuantificate direct sau, mai practic, în eșantioanele conservate.
Weigh each replicate and eventually add evaporated water
Procedurile recomandate pentru evaluarea caracteristicilor sexuale secundare la Pimephales promelas și la Oryzias latipes sunt disponibile în apendicele 5A și, respectiv, apendicele 5B.
Terminate test, set up extraction with all replicates plus extraction efficiency controls
Vitelogenina (VTG)
Dry water content controls over night
Se prelevează sânge din artera/vena caudală cu un tub capilar microhematocrit heparinizat sau, alternativ, printr-o puncție cardiacă cu ajutorul unei seringi.
weigh water content controls
În funcție de mărimea peștelui, volumul de sânge prelevat se încadrează în general între 5 și 60 μl pe individ în cazul Pimephales promelas și între 5 și 15 μl pe individ în cazul peștelui-zebră.
measure pH of dried controls
Plasma este separată de sânge prin centrifugare și este depozitată cu inhibitori de protează la o temperatură de – 80 °C până ce este analizată pentru a măsura vitelogenina.
Day 16
Alternativ, în cazul Oryzias latipes se va utiliza ficatul, iar în cazul peștelui-zebră, omogenatul de cap/coadă poate fi utilizat ca țesut-sursă pentru determinarea vitelogeninei (apendicele 6).
Terminate extraction
Măsurarea VTG trebuie să se bazeze pe o metodă ELISA omoloagă validată, utilizând un standard omolog de VTG și anticorpi omologi.
Day 16 +
Se recomandă utilizarea unei metode capabile să detecteze nivelurile de VTG de ordinul a câteva ng/ml de plasmă (sau ng/mg de țesut), care reprezintă nivelul de fond la masculii neexpuși.
Record number of adults and juveniles in extracted material
Controlul calității măsurării vitelogeninei se va realiza prin utilizarea de soluții standard, de probe-martor și, cel puțin, de teste duplicat.
Report results on template tables
Pentru fiecare metodă ELISA, trebuie realizat un test al efectului matricial (efectul de diluție a probei) pentru a determina factorul de diluție minimă a probei.
Report testing procedure in test protocol sheets
Fiecare placă ELISA utilizată pentru testele VTG trebuie să includă următoarele probe de control al calității:
C.37.
cel puțin 6 soluții standard de calibrare care acoperă intervalul de concentrații de vitelogenină preconizate și cel puțin o probă-martor de testare de legare nespecifică (analizată în duplicat).
AY FISH ASSAY:
Absorbanța acestor probe-martor trebuie să fie mai mică de 5 % din absorbanța maximă a soluțiilor standard de calibrare.
A SHORT-TERM SCREENING FOR OESTROGENIC AND ANDROGENIC ACTIVITY, AND AROMATASE INHIBITION
Vor fi analizate cel puțin două alicote (duplicate godeu) din fiecare diluție a probei.
This test method is equivalent to OECD test guideline (TG) 230 (2009).
Duplicatele godeu care diferă cu un procent mai mare de 20 % trebuie reanalizate.
The need to develop and validate a fish assay capable of detecting certain endocrine active chemicals originates from the concerns that environmental levels of chemicals may cause adverse effects in both humans and wildlife due to the interaction of these chemicals with the endocrine system.
Coeficientul de corelație (R2) al curbelor de calibrare trebuie să fie mai mare de 0,99.
In 1998, the OECD initiated a high-priority activity to revise existing guidelines and to develop new guidelines for the screening and testing of potential endocrine disrupters.
Cu toate acestea, o corelație mare nu este suficientă pentru a garanta o predicție adecvată a concentrației pentru toate intervalele.
One element of the activity was to develop a Test Guideline for the screening of chemicals active on the endocrine system of fish species.
În plus față de o corelație suficient de mare pentru curba de calibrare, concentrația fiecărei soluții standard, calculată pornind de la curba de calibrare, trebuie să se încadreze între 70 și 120 % din concentrația sa nominală.
The 21-day Fish Endocrine Screening Assay underwent an extensive validation programme consisting of inter-laboratory studies with selected chemicals to demonstrate the relevance and reliability of the assay for the detection of oestrogenic and aromatase inhibiting chemicals (1, 2, 3, 4, 5) in the three fish species investigated (the fathead minnow, the Japanese medaka and the zebrafish);
În cazul în care concentrațiile nominale tind să se îndepărteze de linia de regresie a calibrării (de exemplu, spre concentrații mai mici), poate fi necesară împărțirea curbei de calibrare în intervale de concentrații mici și mari sau utilizarea unui model neliniar pentru a ajusta în mod adecvat datele privind absorbanța.
the detection of androgenic activity is possible in the fathead minnow and the medaka, but not in the zebrafish.
În cazul împărțirii curbei, ambele segmente de linie trebuie să aibă valoarea R2 > 0,99.
This test method does not allow the detection of anti-androgenic chemicals.
Limita de detecție (LOD) este definită ca fiind cea mai mică concentrație a soluției standard analitice, iar limita de cuantificare (LOQ) este definită ca fiind cea mai mică concentrație a soluției standard analitice înmulțită cu cel mai mic factor de diluție.
The validation work has been peer-reviewed by a panel of experts nominated by the National Coordinators of the Test Guideline Programme (6).
În fiecare zi în care sunt efectuate măsurări ale vitelogeninei va fi analizată o probă fortificată utilizând un standard de referință interteste (apendicele 7).
The assay is not designed to identify specific mechanisms of hormonal disruption because the test animals possess an intact hypothalamic-pituitary-gonadal (HPG) axis, which may respond to chemicals that impact on the HPG axis at different levels.
Raportul dintre concentrația preconizată și concentrația măsurată va fi raportat împreună cu rezultatele fiecărui set de teste efectuate în ziua respectivă.
The Fish Short Term Reproduction assay (OECD TG 229) includes fecundity and, as appropriate, gonadal histopathology for the fathead minnow, as well as all endpoints included in this test method.
Evaluarea răspunsurilor biomarkerilor prin analiza varianței (ANOVA)
OECD TG 229 provides a screening of chemicals which affect reproduction through various mechanisms including endocrine modalities.
Pentru a identifica potențiala activitate endocrină a unei substanțe chimice, răspunsurile grupurilor tratate sunt comparate cu cele ale grupurilor de control utilizând analiza varianței (ANOVA).
This should be considered prior to selecting the most appropriate test method.
În cazul în care se utilizează un solvent de control, trebuie efectuat un test statistic corespunzător între apa de diluție și solventul de control pentru fiecare parametru studiat.
This test method describes an in vivo screening assay where sexually mature male and spawning female fish are held together and exposed to a chemical during a limited part of their life-cycle (21 days).
Orientări cu privire la interpretarea datelor referitoare la apa de diluție și solventul de control în cadrul analizei statistice ulterioare sunt disponibile în OCDE, 2006c (27).
At termination of the 21-day exposure period, depending on the species used, one or two biomarker endpoint(s) are measured in males and females as indicators of oestrogenic, aromatase inhibition or androgenic activity of the test chemical;
Toate datele privind răspunsurile biologice trebuie analizate și raportate separat per sex.
these endpoints are vitellogenin and secondary sexual characteristics.
Dacă nu sunt îndeplinite ipotezele necesare pentru metodele parametrice – distribuție anormală (de exemplu, testul Shapiro-Wilk) sau varianță eterogenă (testul Barlett sau testul Levene) – trebuie luată în considerare transformarea datelor în scopul omogenizării varianțelor înainte de efectuarea analizei varianței sau efectuarea unei analize ponderate a varianței.
Vitellogenin is measured in fathead minnow, Japanese medaka and zebrafish, whereas secondary sex characteristics are measured in fathead minnow and Japanese medaka only.
Testul Dunnett (parametric) care permite comparații multiple pe perechi sau testul Mann-Whitney cu ajustare Bonferroni (neparametrică) poate fi utilizat pentru un raport doză-răspuns nemonoton.
This bioassay serves as an in vivo screening assay for certain endocrine modes of action and its application should be seen in the context of the “OECD Conceptual Framework for the Testing and Assessment of Endocrine Disrupting Chemicals” (28).
Pot fi utilizate alte teste statistice (de exemplu, testul Jonckheere-Terpstra sau testul Williams), în cazul în care raportul doză-răspuns este aproximativ monoton.
INITIAL CONSIDERATIONS AND LIMITATIONS
În apendicele 8 este furnizată o diagramă statistică care ajută la luarea unei decizii cu privire la alegerea testului statistic cel mai adecvat pentru a fi utilizat.
Vitellogenin is normally produced by the liver of female oviparous vertebrates in response to circulating endogenous oestrogen.
Informații suplimentare pot fi obținute și din Documentul OCDE privind metodele actuale de analiză statistică a datelor de ecotoxicitate (27).
It is a precursor of egg yolk proteins and, once produced in the liver, travels in the bloodstream to the ovary, where it is taken up and modified by developing eggs.
Raportarea rezultatelor testului
Vitellogenin is almost undetectable in the plasma of immature female and male fish because they lack sufficient circulating oestrogen;
Datele studiului trebuie să includă:
however, the liver is capable of synthesizing and secreting vitellogenin in response to exogenous oestrogen stimulation.
Facilitatea de testare:
The measurement of vitellogenin serves for the detection of chemicals with various oestrogenic modes of action.
Personalul responsabil și responsabilitățile sale în cadrul studiului
The detection of oestrogenic chemicals is possible via the measurement of vitellogenin induction in male fish, and it has been abundantly documented in the scientific peer-reviewed literature (e.g. (7)).
Fiecare laborator trebuie să își fi demonstrat competența prin utilizarea unei game de substanțe chimice reprezentative
Vitellogenin induction has also been demonstrated following exposure to aromatizable androgens (8, 9).
Caracterizarea substanței chimice de testare
A reduction in the circulating level of oestrogen in females, for instance through the inhibition of the aromatase converting the endogenous androgen to the natural oestrogen 17β-estradiol, causes a decrease in the vitellogenin level, which is used to detect chemicals having aromatase inhibiting properties (10, 11).
Natura fizică și proprietățile fizico-chimice relevante
The biological relevance of the vitellogenin response following oestrogenic/aromatase inhibition is established and has been broadly documented.
Metoda și frecvența preparării concentrațiilor de testare
However, it is possible that production of VTG in females can also be affected by general toxicity and non-endocrine toxic modes of action, e.g. hepatotoxicity.
Informații privind stabilitatea și biodegradabilitatea
Several measurement methods have been successfully developed and standardised for routine use.
Solventul:
This is the case of species-specific Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) methods using immunochemistry for the quantification of vitellogenin produced in small blood or liver samples collected from individual fish (12, 13, 14, 15, 16, 17, 18).
Caracterizarea solventului (natura, concentrația utilizată)
Fathead minnow blood, zebrafish blood or head/tail homogenate, and medaka liver are sampled for VTG measurement.
Justificarea alegerii solventului (în cazul în care acesta nu este apa)
In medaka, there is a good correlation between VTG measured from blood and from liver (19).
Animalele pentru testare:
Appendix 6 provides the recommended procedures for sample collection for vitellogenin analysis.
Specia și subspecia
Kits for the measurement of vitellogenin are widely available;
Furnizorul și unitatea specifică a furnizorului
such kits should be based on a validated species-specific ELISA method.
Vârsta peștilor la începutul testului și stadiul de reproducere/de eliberare a gameților
Secondary sex characteristics in male fish of certain species are externally visible, quantifiable and responsive to circulating levels of endogenous androgens;
Detalii cu privire la procedura de aclimatizare a animalelor
this is the case for the fathead minnow and the medaka — but not for zebrafish, which does not possess quantifiable secondary sex characteristics.
Greutatea corporală a peștilor la începutul expunerii (dintr-un subeșantion din stocul de pești)
Females maintain the capacity to develop male secondary sex characteristics, when they are exposed to androgenic chemicals in water.
Condiții de testare: