natgillin/translations-raw huggingface dataset:
If necessary, subsamples can be analysed to determine degree of homogeneity.
numărul de șiraguri de ouă depozitate în vasele de cristalizare per cușcă de reproducere și per zi;
The test design relates to the selection of the number and spacing of the test concentrations, the number of vessels at each concentration, the number of larvae per vessel, the number of crystallising dishes and breeding cages.
caracteristicile fiecărui șirag de ouă (dimensiune, formă și fertilitate);
Designs for ECx, NOEC and a limit test are described below.
fecunditatea – numărul total de șiraguri de ouă per număr total de femele introduse în cușca de reproducere;
Design for analysis by regression
fertilitatea – numărul total de șiraguri de ouă per număr total de femele introduse în cușca de reproducere;
The effect concentration (ECx) and the concentration range over which the effect of the test chemical is of interest, should be spanned by the test, such that the endpoint is not extrapolated outside the bounds of the data generated.
estimate ale parametrilor studiați care semnifică toxicitate, de exemplu ECx (și intervalele de încredere asociate), NOEC și metodele statistice utilizate pentru determinarea lor;
Extrapolation much below the lowest or above the highest concentration should be avoided.
J. Amer.
A preliminary range-finding test according to Test Methods C.27 or C.28 may be helpful for selecting a suitable range of test concentrations.
Sedimentul formulat sau reconstituit, artificial sau sintetic, este un amestec de materiale utilizat pentru a simula componentele fizice ale sedimentului natural.
For an ECx approach, at least five concentrations and eight replicates for each concentration are required.
Apa acoperitoare este apa plasată peste sediment în vasul de testare.
For each concentration two breeding cages should be used (A and B).
Apa interstițială este apa care ocupă spațiul dintre sediment și particulele de sol.
The eight replicates are divided into two groups of four replicates to serve each breeding cage.
Apa adiționată este apa de testare la care s-a adăugat substanța chimică testată.
This merger of replicates is necessary due to the number of midges needed in the cage for sound reproduction assessments.
Recomandări pentru cultivarea Chironomus riparius
However, the 2nd generation has eight replicates again, which are initiated from the exposed populations in the breeding cages.
Larvele de Chironomus pot fi crescute în vase de cristalizare sau în recipiente mai mari.
The factor between concentrations should not be greater than two (an exception could be made in cases when the dose response curve has a shallow slope).
Pe fundul unui recipient se împrăștie nisip fin de cuarț într-un strat subțire, de circa 5 – 10 mm grosime.
The number of replicates at each treatment can be reduced to six (three for each breeding case) if the number of test concentrations with different responses is increased.
Un substrat adecvat (este suficient un strat mai subțire, de maximum câțiva mm) s-a dovedit a fi și Kieselgur (de exemplu Merck, articolul 8117).
Increasing the number of replicates or reducing the size of the test concentration intervals tends to lead to narrower confidence intervals around the ECX.
Apoi se adaugă apă adecvată până se atinge o înălțime de câțiva cm.
Design for estimation of a NOEC
Nivelurile apei trebuie să fie completate în funcție de necesități pentru a înlocui apa evaporată și a preveni uscarea.
For a NOEC approach, five test concentrations with at least eight replicates (4 for each breeding cage, A and B) should be used and the factor between concentrations should not be greater than two.
Apa poate fi înlocuită, dacă este necesar.
The number of replicates should be sufficient to ensure adequate statistical power to detect a 20 % difference from the control at the 5 % level of significance (α = 0,05).
Trebuie să se asigure o aerare ușoară.
For the development rate, fecundity and fertility an analysis of variance (ANOVA) is usually appropriate, followed by Dunnett's test or Williams' test (22-25).
Vasele în care sunt crescute larvele trebuie să fie păstrate într-o cușcă adecvată, pentru a nu permite ca adulții eclozați să scape.
For the emergence ratio and sex ratio the Cochran-Armitage, Fisher's exact (with Bonferroni correction), or Mantel-Haentzal tests may be appropriate.
Cușca trebuie să fie suficient de mare pentru a permite formarea roiurilor de adulți eclozați, altfel este posibil să nu apară copulația (dimensiunea minimă este de circa 30 × 30 × 30 cm).
A limit test may be performed (one test concentration and control(s)) if no effects are observed in the optional preliminary range-finding test up to a maximum concentration.
Cuștile trebuie să fie păstrate la temperatura camerei sau într-o încăpere cu mediu constant, la 20 ± 2 °C, cu o perioadă de expunere la lumină de 16 ore (intensitate de circa 1000 lux), cu 8 ore de întuneric.
The purpose of the limit test is to indicate that any toxic effects of the test chemical are found at levels greater than the limit concentration tested.
S-a raportat că o umiditate a aerului mai mică de 60 % umiditate relativă poate împiedica reproducerea.
For water, 100 mg/l and for sediment 1000 mg/kg (dry weight) are suggested.
Se poate utiliza orice apă naturală sau sintetică adecvată.
Usually, at least eight replicates for both the treatment and control are necessary.
În mod obișnuit se folosește apă de fântână, apă de la robinet declorurată și medii artificiale (de exemplu, mediu Elendt «M4» sau «M7», a se vedea mai jos).
Adequate statistical power to detect a 20 % difference from the control at the 5 % level of significance (α = 0,05) should be demonstrated.
Apa trebuie să fie aerată înainte de utilizare.
With metric responses (e.g. development rate), the t-test is a suitable statistical method if data meet the requirements of this test (normality, homogeneous variances).
Dacă este nevoie, apa de cultură poate fi reînnoită prin turnarea sau sifonarea cu atenție a apei uzate din vasele de cultură, fără să se distrugă eprubetele cu larve.
An unequal-variance t-test or a non-parametric test, such as the Wilcoxon-Mann-Whitney test may be used, if these requirements are not fulfilled.
Hrănirea larvelor
With the emergence ratio, Fisher's exact test is appropriate.
Larvele de Chironomus trebuie să fie hrănite cu hrană pentru pești sub formă de fulgi (TetraMin®, TetraPhyll® sau altă marcă similară de hrană pentru pești), în cantitate de aproximativ 250 mg pe zi pentru fiecare vas.
Preparation of the water-sediment system (water spiking)
Hrana poate fi furnizată sub formă de pulbere măcinată uscată sau sub formă de suspensie în apă:
a.
se adaugă 1 g de hrană sub formă de fulgi în 20 ml de apă de diluție și se amestecă pentru a obține un amestec omogen.
Formulated sediment (see paragraphs 13-14 and Appendix 3) is added to each test vessel and crystallising dish to form a layer of at least 1,5 cm (for the crystallising dish it may be somewhat lower) but maximally 3 cm.
Acest preparat poate fi administrat cu o rată de aproximativ 5 ml pe zi per vas. (se agită înainte de utilizare).
Water (see paragraph 15) is added so that the ratio of the depth of the sediment layer and the depth of the water does not exceed 1:4.
Larvele cu vârstă mai avansată pot primi mai mult.
After preparation of the test vessels the sediment-water system should be left under gentle aeration for approximately seven days prior to addition of the first instar larvae of the 1st or 2nd generation (see paragraph 14 and Appendix 3).
Hrănirea este ajustată în funcție de calitatea apei.
The sediment-water system of the crystallising dishes is not aerated during the test, since they do not need to support larval survival (before hatching the egg ropes are already collected).
Dacă mediul de cultură devine «tulbure», hrănirea trebuie redusă.
To avoid separation of sediment ingredients and re-suspension of fine material during addition of test water in the water column, the sediment can be covered with a plastic disc while water is poured onto it.
Adăugarea de hrană trebuie să fie atent monitorizată.
The disc is removed immediately afterwards.
Prea puțină mâncare va conduce la emigrarea larvelor spre coloana de apă, iar o cantitate prea mare de hrană va avea ca rezultat creșterea activității microbiene și concentrații reduse de oxigen.
Other devices may also be appropriate.
Ambele condiții pot conduce la scăderea ratelor de creștere.
Preparation of the water-sediment system (spiked sediment)
Se pot adăuga și câteva celule de alge verzi (de exemplu, Scenedesmus subspicatus, Chlorella vulgaris) atunci când se pregătesc noile vase de cultură.
b.
Hrănirea adulților eclozați
The spiked sediments prepared according to paragraph 16b are placed in the vessels and crystallising dish and overlying water is added to produce a sediment-water volume ratio of 1:4.
Unii cercetători au sugerat că se poate folosi ca hrană pentru adulții eclozați un tampon de vată îmbibat într-o soluție saturată de zaharoză.
The depth of the sediment layer should be in the range of 1,5 to 3 cm (it may be somewhat lower for the crystallising dish).
La 20 ± 2 °C, adulții vor începe să eclozeze în vasele de creștere a larvelor după aproximativ 13 – 15 zile.
To avoid separation of sediment ingredients and re-suspension of fine material during addition of test water in the water column, the sediment can be covered with a plastic disc while water is poured onto it, and the disc removed immediately afterwards.
Masculii sunt ușor de identificat după antenele plumoase și după corpul lor fin.
Appropriate equilibration time is sediment and chemical specific, and can be in the order of hours to days and in rare cases up to five weeks.
După ce adulții sunt prezenți în cușca de reproducere, toate vasele de creștere a larvelor trebuie să fie verificate de trei ori pe săptămână, pentru a observa depunerea de mase de ouă gelatinoase.
As this would leave time for degradation of many chemicals, equilibrium is not awaited but an equilibration period of 48 hours is recommended.
Dacă acestea apar, masele de ouă trebuie să fie înlăturate cu atenție.
However, when the degradation half-life of the chemical in sediment is known to be long (see paragraph 8), the equilibration time may be extended.
Ele trebuie să fie transferate într-un vas mic, care conține un eșantion din apa în care au crescut.
At the end of this further equilibration period, the concentration of the test chemical should be measured in the overlying water, the pore water and the sediment, at least at the highest concentration and a lower one (see paragraph 38).
Masele de ouă sunt utilizate pentru a începe un nou vas de cultură (de exemplu, 2 – 4 mase de ouă /vas) sau sunt folosite pentru teste de toxicitate.
These analytical determinations of the test chemical allow for calculation of a mass balance and expression of results based on measured concentrations.
Larvele în primul stadiu trebuie să eclozeze după 2 – 3 zile.
Test vessels should be covered (e.g. by glass plates).
Pregătirea de noi vase de cultură
If necessary, during the study the water levels may be topped up to the original volume in order to compensate for evaporation.
După constituirea culturilor, se poate pregăti un nou vas de cultură larvară o dată pe săptămână sau mai puțin frecvent, în funcție de cerințele de testare, prin înlăturarea vaselor mai vechi după ce chironomidele adulte au eclozat.
This should be performed using distilled or deionised water to prevent any build-up of salts.
Cu ajutorul acestui sistem, se va asigura o cantitate regulată de adulți, cu minimum de efort.
Crystallising dishes in the breeding cages are not covered and may, but do not need to be adjusted to compensate for water loss during the test period, since the egg ropes are only in contact with the water for about one day and the dishes are only used during a short phase of the test.
Pregătirea soluțiilor de testare «M4» și «M7»
Addition of test organisms
Elendt (1990) a descris mediul «M4».
Four to five days before adding the first instar larvae for the 1st generation, egg masses should be taken from the culture and placed in small vessels in culture medium.
Mediul «M7» este pregătit în același mod ca mediul «M4», cu excepția substanțelor indicate în tabelul 1 pentru care concentrațiile sunt de patru ori mai mici în cazul «M7» în raport cu «M4».
Aged medium from the stock culture or freshly prepared medium may be used.
Soluția de testare nu trebuie pregătită conform indicațiilor Elendt și Bias (1990) deoarece concentrațiile de NaSiO3 · 5H2O, NaNO3, KH2PO4 și K2HPO4 indicate pentru pregătirea soluțiilor stoc nu sunt adecvate.
In any case, a small amount of food, e.g. a few droplets of filtrate from a finely ground suspension of flaked fish food, should be added to the culture medium (see Appendix 2).
Pregătirea mediului «M7»
Only freshly laid egg masses should be used.
Fiecare soluție stoc (I) este preparată individual, iar din aceste soluții stoc (I) se prepară o soluție stoc combinată (II) (a se vedea tabelul 1).
Normally, the larvae begin to hatch a couple of days after the eggs are laid (2 to 3 days for C. riparius at 20 °C and 1 to 4 days for C. dilutus at 23 °C and C. yoshimatsui at 25 °C) and larval growth occurs in four instars, each of 4-8 days duration.
50 de ml din soluția stoc combinată (II) și cantitățile din fiecare soluție stoc de macronutrienți care sunt indicate în tabelul 2 sunt adăugate până la 1 litru cu apă deionizată pentru a pregăti mediul «M7».
First instar larvae (maximum 48 h post hatching) should be used in the test.
Se prepară o soluție stoc de vitamine, prin adăugarea a trei vitamine la apa deionizată, așa cum se indică în tabelul 3, iar 0,1 ml din soluția stoc de vitamine combinată se adaugă la mediul final «M7» cu puțin timp înainte de utilizare.
The instar stage of larvae can potentially be checked using head capsule width (7).
Soluția stoc combinată de vitamine se păstrează în stare înghețată, în mici alicote.
Twenty first instar larvae for the 1st generation are allocated randomly to each test vessel containing the sediment-water system, using a blunt pipette.
Mediul este aerat și stabilizat.
Aeration of the water is stopped whilst adding larvae to test vessels and should remain so for 24 hours following addition of larvae (see paragraph 32).
Soluții stoc de microelemente pentru mediile M4 și M7
According to the test design used (see paragraphs 19 and 20), the number of larvae used per concentration is at least 120 (6 replicates per concentration) for the ECX approach and 160 for the NOEC approach (8 replicates per concentration).
Soluții stoc (I)
In the spiked sediment design, exposure starts with the addition of the larvae.
Cantitate (mg) adăugată la 1 litru de apă deionizată
Spiking the overlying water
Pentru a prepara soluția stoc combinată (II):
Twenty-four hours after adding the first instar larvae for the 1st generation, the test chemical is spiked into the overlying water column, and slight aeration is again supplied (for possible amendments of the test design, see paragraph 7).
se amestecă următoarele cantități (ml) de soluții stoc (I) și se adaugă până la 1 litru cu apă deionizată
Small volumes of the test chemical stock solutions are applied below the surface of the water using a pipette.
Concentrații finale în soluțiile de testare (mg/l)
The overlying water should then be mixed with care not to disturb the sediment.
MnCl2 · 4H2O [1]
In the spiked water design, exposure starts with the spiking of the water (i.e. one day after addition of the larvae).
SrCl2 · 6H2O [1]
Collecting emerged adults
MoO4 · 2H2O [1]
Emerged midges of the 1st generation are collected at least once, but preferably twice a day (see point 36) from the test vessels using an aspirator, exhauster or similar device (see Appendix 5).
CuCl2 · 2H2O [1]
Special care should be taken not to damage the adults.
CaCl2 · 6H2O
The collected midges from four test vessels within one treatment are released into a breeding cage to which they had been previously assigned.
EDTA · 2H2O [1] [2]
At the day of first (male) emergence, crystallising dishes are spiked by pipetting a small volume of the test chemical stock solution below the water surface (spiked water design).
FeSO4 · 7H2O [1] [2]
The concentration of test chemical in the crystallising dish is nominally the same as in the treatment vessels which are assigned to that specific breeding cage.
Soluții stoc de macronutrienți pentru mediile M4 și M7
For the spiked sediment design, the crystallising dishes are prepared at around day 11 after the start of the exposure (i.e. addition of the 1st generation larvae) so that they can equilibrate for about 48 hours before the first egg ropes are produced.
Cantitate adăugată până la 1 litru cu apă deionizată
Egg ropes are collected from the crystallising dish in the breeding cage using tweezers or a blunt pipette.
Cantitate de soluții stoc de macronutrienți adăugate pentru pregătirea mediilor M4 și M7
Each egg rope is placed into a vessel containing culture medium from the crystallising dish it was collected from (e.g. a well of a 12-well micro-plate together with at least 2,5 ml of medium).
Concentrații finale în soluțiile de testare M4 și M7
The vessels with the egg ropes are covered with a lid to prevent significant evaporation.
Soluție stoc de vitamine pentru mediile M4 și M7
Egg ropes are kept for observation for at least six days after they have been produced so that they can be classified as fertile or infertile.
Toate cele trei soluții de vitamine sunt combinate pentru a se obține o singură soluție stoc de vitamine.
For starting the 2nd generation, at least three but preferably six fertile egg ropes are selected from each breeding cage and together with some food allowed to hatch.
Cantitate de soluție stoc de vitamine adăugată pentru prepararea mediilor M4 și M7
These egg ropes should have been produced at the peak of oviposition, which normally occurs around test day 19 in the controls.
Clorhidrat de tiamină
Ideally, the 2nd generation of all treatments is initiated on the same day, but due to chemical related effects on larval development, this may not always be possible.
Cianocobalamină (B12)
In such a case, the higher concentrations may be initiated later than the lower treatments and the (solvent) control.
Biotină
a.
Aceste substanțe diferă în M4 și M7, astfel cum s-a indicat mai sus.
1 hour before adding the first instar larvae to the test vessels.
Prepararea sedimentului formulat
Small volumes of the test chemical solutions are applied below the surface of the water using a pipette.
COMPOZIȚIA SEDIMENTULUI
After spiking, slight aeration is supplied.
Compoziția sedimentului formulat trebuie să fie următoarea:
b.
Mușchi de turbă (Sphagnum), cu pH cât mai apropiat posibil de valoarea 5,5 – 6, fără resturi vizibile de plante, fin măcinat (dimensiunea particulelor ≤ 1 mm) și uscat cu aer
In the spiked sediment design, the exposure vessels containing the sediment-water system for the 2nd generation are prepared in the same way as for the 1st generation.
4 – 5
Twenty first instar larvae (maximum 48 h post hatching) of the 2nd generation are allocated randomly to each test vessel containing the spiked sediment-water system, using a blunt pipette.
> 50 % dintre particule trebuie să se încadreze în intervalul 50 – 200 μm
Aeration of the water should be stopped while adding the first instar larvae to the test vessels and remain so for another 24 hours after addition of the larvae.
CaCO3, pulverizat, chimic pur
According to the test design used (see paragraphs 19 and 20), the number of larvae used per concentration is at least 120 (6 replicates per concentration) for the ECX approach and 160 for the NOEC approach (8 replicates per concentration).
0,05 – 0,1
It is necessary to feed the larvae in the test vessels, preferably daily or at least three times per week.
Conductivitate ≤ 10 μS/cm
Fish-food (a suspension in water or finely ground food, e.g. Tetra-Min or Tetra-Phyll; see details in Appendix 2) of 0,25 - 0,5 mg (0,35 - 0,5 mg for C. yoshimatsui) per larvae per day is an adequate amount of food for young larvae during the first 10 days of their development.
PREGĂTIRE
Slightly more food may be necessary for older larvae:
Suspensia este condiționată timp de cel puțin două zile, agitându-se ușor la 20 ± 2 °C, pentru stabilizarea pH-ului și stabilirea unei componente microbiene stabile.
0,5 - 1,0 mg per larvae per day should be sufficient for the rest of the test.
Se măsoară din nou pH-ul, care trebuie să fie de 6 ± 0,5.
The food ration should be reduced in all treatments and control if fungal growth is seen or if mortality is observed in controls.
Se măsoară încă o dată pH-ul amestecului final și se ajustează la 6,5 până la 7,5 cu CaCO3, dacă este necesar.
If fungal development cannot be stopped the test should be repeated.
Apoi, înainte de utilizarea sa într-un test de toxicitate pentru chironomide, se recomandă ca sedimentul formulat să fie condiționat timp de șapte zile în aceleași condiții care predomină în testul ulterior.
The toxicological relevance of exposure via ingestion is generally higher in chemicals with a high affinity for organic carbon or chemicals covalently binding to the sediment.
DEPOZITARE
Hence, when testing chemicals with such properties, the amount of food necessary to ensure survival and natural growth of the larvae may be added to the formulated sediment before the stabilisation period, depending on the regulatory demand.
Constituenții uscați destinați preparării sedimentului artificial pot fi depozitați într-un loc uscat și răcoros, la temperatura camerei.
To prevent deterioration of the water quality, plant material should be used instead of fish food, e.g. addition of 0,5 % (dry weight) finely ground leaves of stinging nettle (Urtica dioica), mulberry (Morus alba), white clover (Trifolium repens), spinach (Spinacia oleracea) or other plant material (Cerophyl or α-cellulose).
Sedimentul formulat (umed) nu trebuie să fie depozitat înainte de utilizarea sa în test.
Addition of the complete ration of an organic food source to the sediment before spiking is not trivial with respect to water quality and biological performance (21), nor a standardised method, but recent studies provide indications that this method works (19) (26).
El trebuie să fie folosit imediat după perioada de condiționare de 7 zile, cu care se încheie prepararea sa.
Adult midges in the breeding cage need no feeding normally, but fecundity and fertility are enhanced when a cotton wool pad soaked in a saturated sucrose solution is offered as a food source for emerged adults (34).
Caracteristicile chimice ale unei ape de diluție acceptabile
Gentle aeration of the overlying water in the test vessels is supplied 24 hours after addition of the first instar larvae of both generations and is continued throughout the test (care should be taken that the dissolved oxygen concentration does not fall below 60 % of ASV).
CONCENTRAȚII
Aeration is provided through a glass Pasteur pipette of which the outlet is fixed 2-3 cm above the sediment layer giving a few bubbles/sec.
Duritate ca CaCO3
When testing volatile chemicals, consideration should be given not to aerate the sediment-water system, while at the same time the validity criterion of minimal 60 % ASV (paragraph 10) should be fulfilled.
Totuși, trebuie notat faptul că dacă se bănuiește că există o interacțiune între ionii care determină duritatea apei și substanța chimică testată, trebuie să se utilizeze o apă cu duritate mai mică (astfel, în această situație nu trebuie să se folosească mediu Elendt M4).
Further guidance is provided in (16).
Orientări privind efectuarea testului
The test with C. riparius is conducted at a constant temperature of 20 °C (± 2 °C).
Exemplu de cușcă de reproducere:
For C. dilutus and C. yoshimatsui, recommended temperatures are 23 °C and 25 °C (± 2 °C), respectively.
A plasă în partea superioară și cel puțin pe una dintre părțile laterale ale cuștii (dimensiunea ochiurilor de aproximativ 1 mm)
A 16 hours photoperiod is used and the light intensity should be 500 to 1000 lux.
B deschidere pentru introducerea adulților eclozați în interiorul cuștii de reproducere și pentru îndepărtarea maselor de ouă depuse din vasele de cristalizare (nu se indică în acest grafic)