natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Equipment
Pentru a verifica umiditatea solului, vasele se cântăresc la începutul testului, iar apoi o dată pe săptămână.
The test vessels should be made of glass or other chemically inert material.
Pierderea în greutate se compensează prin adăugarea unei cantități adecvate de apă deionizată.
Glass jars (e.g. volume: 0,20 - 0,25 litre; diameter: ≈ 6 cm) are suitable.
Trebuie remarcat că pierderea de apă poate fi redusă prin menținerea unei umidități mari a aerului (> 80 %) în incubatorul de testare.
The vessels should have transparent lids (e.g. glass or polyethylene) that are designed to reduce water evaporation whilst allowing gas exchange between the soil and the atmosphere.
Conținutul de umiditate și pH-ul trebuie măsurate la începutul și la sfârșitul testului atât în cazul testului de stabilire a intervalului, cât și în cazul testului final.
The lids should be transparent to allow light transmission.
Trebuie efectuate măsurători în eșantioanele de sol de control și tratate (la toate concentrațiile), preparate și menținute în aceleași condiții ca și culturile de testare, dar fără să conțină viermi.
Normal laboratory equipment is required, specifically the following:
La aceste eșantioane se adaugă hrană numai la începutul testului pentru a facilita activitatea microbiană.
drying cabinet;
Cantitatea de hrană adăugată trebuie să fie identică cu cea adăugată în culturile de testare.
stereomicroscope;
Nu este necesar să se mai adauge hrană în aceste vase pe parcursul testului.
pH-meter and photometer;
Hrănire
suitable accurate balances;
Poate fi utilizată o hrană care poate întreține populația de enchitreide.
adequate equipment for temperature control;
S-a constatat că fulgii de ovăz, de preferat autoclavați înainte de utilizare pentru a evita contaminarea microbiană (încălzirea este, de asemenea, adecvată), reprezintă o hrană corespunzătoare.
adequate equipment for humidity control (not essential if exposure vessels have lids);
La început, hrana se administrează amestecând 50 mg de fulgi de ovăz măcinați cu solul din fiecare vas înainte de a introduce viermii.
incubator or small room with air-conditioner;
Apoi, hrana se administrează zilnic până în ziua 21.
tweezers, hooks or loops;
În ziua 28 nu se mai administrează hrană, deoarece în această etapă adulții vor fi fost scoși iar viermii tineri au nevoie de hrană suplimentară relativ puțină după acest moment.
photo basin.
Hrana din timpul testului constă în 25 mg de fulgi de ovăz măcinați pentru fiecare vas, așezați cu atenție pe suprafața solului pentru a evita rănirea viermilor.
Preparation of the artificial soil
Pentru a evita creșterea ciupercilor, fulgii de ovăz trebuie îngropați în sol prin acoperirea lor cu mici cantități de sol.
An artificial soil is used in this test (5)(7) with the following composition (based on dry weights, dried to a constant weight at 105 °C):
Dacă hrana rămâne neconsumată, rația trebuie redusă.
10 % sphagnum peat, air-dried and finely ground (a particle size of 2 ± 1 mm is acceptable);
Proiectul testului de stabilire a intervalului
it is recommended to check that a soil prepared with a fresh batch of peat is suitable for culturing the worms before it is used in a test;
Atunci când este necesar, se realizează un test de stabilire a intervalului cu, de exemplu, cinci concentrații ale substanțelor chimice de testare de 0,1, 1,0, 10, 100 și 1000 mg/kg (greutate uscată a solului).
20 % kaolin clay (kaolinite content preferably above 30 %);
Este suficientă o probă duplicat pentru fiecare tratament și pentru fiecare probă de control.
approximately 0,3 to 1,0 % calcium carbonate (CaCO3, pulverised, analytical grade) to obtain a pH of 6,0 ± 0,5;
Durata testului de stabilire a intervalului este de două săptămâni.
the amount of calcium carbonate to be added may depend principally on the quality/nature of the peat;
La sfârșitul testului, se evaluează mortalitatea viermilor.
approximately 70 % air-dried quartz sand (depending on the amount of CaCO3 needed), predominantly fine sand with more than 50 % of the particles between 50 and 200 microns.
Un vierme este înregistrat ca fiind mort dacă nu are nicio reacție la un stimul mecanic la capătul anterior.
It is advisable to demonstrate the suitability of an artificial soil for culturing the worms and for achieving the test validity criteria before using the soil in a definitive test.
Pentru a decide intervalul de concentrații pentru testul final, pot fi utile și alte informații pe lângă mortalitate.
It is especially recommended to make such a check to ensure that the performance of the test is not compromised if the organic carbon content of the artificial soil is reduced, e.g. by lowering the peat content to 4-5 % and increasing the sand content accordingly.
Modificările comportamentului adulților (de exemplu, incapacitatea de a săpa în sol, poziția nemișcată pe peretele de sticlă al vasului de testare) și ale morfologiei lor (de exemplu, prezența unor răni deschise) ar trebui, prin urmare, să fie consemnate împreună cu eventuala prezență a viermilor tineri.
By such a reduction in organic carbon content, the possibilities of adsorption of test chemical to the soil (organic carbon) may be decreased and the availability of the test chemical to the worms may increase.
Aceasta din urmă poate fi determinată prin utilizarea metodei colorării descrise în apendicele 6.
It has been demonstrated that Enchytraeus albidus can comply with the validity criteria on reproduction when tested in field soils with lower organic carbon content than mentioned above (e.g. 2,7 %) (15), and there is experience — though limited — that this can also be achieved in artificial soil with 5 % peat.
se poate determina cu aproximație prin calcularea mediei geometrice a datelor legate de mortalitate.
When using natural soil in additional (e.g. higher tier) testing, the suitability of the soil and achieving the test validity criteria should also be demonstrated.
La stabilirea intervalului de concentrații pentru testul final, efectele asupra reproducerii se presupun a fi mai mici decât LC50 cu un factor de maximum 10.
The dry constituents of the soil are mixed thoroughly (e.g. in a large-scale laboratory mixer).
Cu toate acestea, este vorba despre o relație empirică și, în orice caz specific, aceasta ar putea fi diferită.
This should be done at least one week before starting the test.
Observațiile suplimentare din timpul testului de stabilire a intervalului precum prezența viermilor tineri poate ajuta la rafinarea intervalului de concentrații ale substanței chimice de testare care vor fi utilizate pentru testul final.
The mixed soil should be stored for two days in order to equilibrate/stabilise the acidity.
Pentru o determinare precisă a LC50, se recomandă efectuarea testului utilizând cel puțin patru probe duplicat pentru fiecare dintre concentrațiile substanței chimice de testare și un număr adecvat de concentrații pentru a cauza cel puțin patru răspunsuri medii semnificativ diferite din punct de vedere statistic la aceste concentrații.
For the determination of pH a mixture of soil and 1 M potassium chloride (KCl) or 0,01 M calcium chloride (CaCl2) solution in a 1:5 ratio is used (see (16) and Appendix 3).
Dacă este cazul, se utilizează un număr similar de concentrații și de probe duplicat pentru probele de control.
If the soil is more acidic than the required range (see paragraph 11), it can be adjusted by addition of an appropriate amount of CaCO3.
Proiectul testului de reproducere final
If the soil is too alkaline it can be adjusted by the addition of more of the mixture, referred to in paragraph 11, but excluding the CaCO3.
Sunt propuse trei proiecte de test, pe baza recomandărilor formulate în cadrul unui ring test (2).
The maximum water holding capacity (WHC) of the artificial soil is determined in accordance with procedures described in Appendix 2.
Pentru stabilirea valorii NOEC, trebuie testate cel puțin cinci concentrații într-o serie geometrică.
One or two days before starting the test, the dry artificial soil is pre-moistened by adding enough de-ionised water to obtain approximately half of the final water content, that being 40 to 60 % of the maximum water holding capacity.
Se recomandă utilizarea a patru probe duplicat pentru fiecare concentrație de testare și opt vase de control.
At the start of the test, the pre-moistened soil is divided into portions corresponding with the number of test concentrations (and reference chemical where appropriate) and controls used for the test.
Concentrațiile trebuie să fie spațiate printr-un factor care să nu depășească valoarea de 1,8.
The moisture content is adjusted to 40-60 % of the maximum WHC by the addition of the test chemical solution and/or by adding distilled or de-ionised water (see paragraphs 19-21).
Pentru determinarea ECx (de exemplu EC10, EC50), trebuie testate cel puțin cinci concentrații, iar concentrațiile trebuie să încadreze ECx pentru a permite interpolarea și nu extrapolarea ECx.
The moisture content is determined at the beginning and at the end of the test (by drying to constant weight at 105 °C) and should be within the optimal range for the survival of the worms.
Se recomandă cel puțin patru probe duplicat pentru fiecare concentrație de testare și patru probe duplicat de control.
A rough check of the soil moisture content can be obtained by gently squeezing the soil in the hand, if the moisture content is correct small drops of water should appear between the fingers.
Factorul de separare poate varia, putând fi mai mic sau egal cu 1,8 în gama de efecte prevăzută și mai mare de 1,8 la concentrații mai ridicate sau mai scăzute.
Selection and preparation of test animals
O abordare combinată permite determinarea valorilor NOEC și ECx.
The recommended test species is Enchytraeus albidus Henle 1837 (white potworm), a member of the family Enchytraeidae (order Oligochaeta, phylum Annelida).
Trebuie utilizate opt concentrații de tratament într-o serie geometrică.
E. albidus is one of the largest species of enchytraeids, with specimens of up to 35 mm in length being recorded (17)(18).
Se recomandă utilizarea a patru replici pentru fiecare tratament și opt controale.
E. albidus has a world-wide distribution and is found in marine, freshwater and terrestrial habitats, mainly in decaying organic matter (seaweed, compost) and rarely in meadows (9).
Trebuie utilizați câte 10 viermi adulți pentru fiecare vas de testare (a se vedea punctul 23).
E. albidus is commercially available, as a fish food.
În ziua 21, probele de sol se verifică ușor cu mâna pentru a observa și a număra viermii adulți vii, iar modificările comportamentului (de exemplu, incapacitatea de a săpa în sol, poziția nemișcată pe peretele de sticlă al vasului de testare) și ale morfologiei (de exemplu, prezența unor răni deschise) se consemnează.
It should be checked whether the culture is contaminated by other, usually smaller, species (1) (19).
Ulterior, toți viermii adulți se scot din vasele de testare și din solul de testare.
If contamination occurs, all worms should be washed with water in a petri dish.
Solul de testare conținând eventual coconii produși se incubează timp de trei săptămâni suplimentare în aceleași condiții de testare, cu excepția faptului că hrănirea are loc abia în ziua 35 (adică, 25 mg de fulgi de ovăz măcinați pentru fiecare vas).
Large adult specimens of E. albidus should then be selected (using a stereomicroscope) to start a new culture and all other worms are discarded.
După șase săptămâni, se numără viermii nou eclozați.
E. albidus can be bred easily in a wide range of organic materials (see Appendix 4).
Se recomandă metoda bazată pe colorarea cu roșu Bengal (a se vedea apendicele 6), deși s-au dovedit a fi adecvate și alte tehnici de extracție umedă (dar fără căldură) și de flotație (a se vedea apendicele 6) (4)(10)(11)(20).
The life-cycle of E. albidus is short since maturity is reached between 33 days (at 18 °C) and 74 days (at 12 °C) (1).
Se recomandă colorarea cu roșu Bengal deoarece extracția umedă dintr-un substrat de sol poate fi împiedicată de turbiditatea cauzată de particulele de argilă în suspensie.
Only cultures that have been kept without problems in the laboratory for at least 5 weeks (one generation) will be used for the test.
În cazul în care nu se observă niciun efect la cea mai mare concentrație în cadrul testului de stabilire a intervalului (și anume 1000 mg/kg), testul de reproducere poate fi realizat sub forma unui test la valori-limită, utilizând o concentrație de testare de 1000 mg/kg pentru a demonstra că NOEC pentru reproducere este mai mare decât această valoare.
Other species of the Enchytraeus genus are also suitable, e.g. E. buchholzi Vejdovsky 1879 or E. crypticus Westheide & Graefe 1992 (see Appendix 5).
Rezumatul și calendarul testului
If other species of Enchytraeus are used, they must be clearly identified and the rationale for the selection of the species should be reported.
Etapele testului pot fi rezumate după cum urmează:
The animals used in the tests are adult worms.
Timp
They should have eggs (white spots) in the clitellum region, and they should be approximately the same size (about 1 cm long).
Ziua –7 sau mai devreme
Synchronisation of the breeding culture is not necessary.
Pregătirea solului artificial (amestecul de constituenți uscați)
If the enchytraeids are not bred in the same soil type and under the conditions (including feeding) used for the final test they must be acclimatised for at least 24 hours and up to three days.
Ziua –5
A larger number of adults than that needed for performing the test should initially be acclimatised to allow scope for rejection of damaged or otherwise unsuitable specimens.
Verificarea pH-ului solului artificial
At the end of the acclimatisation period, only worms containing eggs and exhibiting no behavioural abnormalities (e.g. trying to escape from the soil) are selected for the test.
Se măsoară WHC maximă a solului
The worms are carefully removed using jeweller's tweezers, hooks or loops and placed in a petri dish containing a small amount of fresh water.
Ziua –5 până la –3
Reconstituted fresh water as proposed in Chapter C.20 of this Annex (Daphnia magna Reproduction Test) is preferred for this purpose since de-ionised, de-mineralised or tap water could be harmful to the worms.
Sortarea viermilor pentru aclimatizare
The worms are inspected under a stereomicroscope and any that do not contain eggs are discarded.
Ziua – 3 până la 0
Care is taken to remove and discard any mites or springtails that might have infected the cultures.
Aclimatizarea viermilor timp de cel puțin 24 de ore
Healthy worms not used for the test are returned to the stock culture.
Ziua –1
Preparation of test concentrations
Preumezirea solului artificial și distribuirea în loturi
Test chemical soluble in water
Ziua 0
A solution of the test chemical is prepared in deionised water in a quantity sufficient for all replicates of one test concentration.
Prepararea soluțiilor stoc
It is recommended to use an appropriate quantity of water to reach the required moisture content, i.e. 40 to 60 % of the maximum WHC (see paragraph 13).
Aplicarea substanței chimice de testare
Each solution of test chemical is mixed thoroughly with one batch of pre-moistened soil before being introduced into the test vessel.
Cântărirea substratului de testare în vasele de testare
Test chemical insoluble in water
Amestecarea hranei în sol
For chemicals insoluble in water but soluble in organic solvents, the test chemical can be dissolved in the smallest possible volume of a suitable vehicle (e.g. acetone).
Introducerea viermilor
Only volatile solvents should be used.
Măsurarea pH-ului și a conținutului de umiditate din sol
The vehicle is sprayed on or mixed with a small amount, for example 2,5 g, of fine quartz sand.
Ziua 7
The vehicle is eliminated by evaporation under a fume hood for at least one hour.
Verificarea conținutului de umiditate din sol
This mixture of quartz sand and test chemical is added to the pre-moistened soil and thoroughly mixed after adding an appropriate amount of de-ionised water to obtain the moisture required.
Hrană
The final mixture is introduced into the test vessels.
Ziua 14
For chemicals that are poorly soluble in water and organic solvents, the equivalent of 2,5 g of finely ground quartz sand per test vessel is mixed with the quantity of test chemical to obtain the desired test concentration.
Determinarea mortalității adulților
This mixture of quartz sand and test chemical is added to the pre-moistened soil and thoroughly mixed after adding an appropriate amount of de-ionised water to obtain the required moisture content.
Estimarea numărului de viermi tineri
The final mixture is divided between the test vessels.
Ziua 21
The procedure is repeated for each test concentration and an appropriate control is also prepared.
Observarea comportamentului adulților
Chemicals should not normally be tested at concentrations higher than 1000 mg/kg dry mass of soil.
Scoaterea adulților
Testing at higher concentrations may however be required in accordance with the objectives of a specific test.
Ziua 28
PERFORMANCE OF THE TESTS
Fără hrană
Test groups and controls
Ziua 35
For each test concentration, an amount of test soil corresponding to 20 g dry weight is placed into the test vessel (see paragraphs 19-21).
Ziua 42
Controls, without the test chemical, are also prepared.
Numărarea viermilor tineri
Food is added to each vessel in accordance with procedures described in paragraph 29.
Tratamentul rezultatelor
Ten worms are randomly allocated to each test vessel.
Cu toate că în apendicele 7 este furnizată o prezentare generală, în cadrul prezentei metode de testare nu este oferită nicio orientare statistică definitivă pentru analiza rezultatelor testului.
The worms are carefully transferred into each test vessel and placed on the surface of the soil using, for example, jeweller's tweezers, hooks or loops.
În cadrul testului de stabilire a intervalului, punctul final principal este mortalitatea.
The number of replicates for test concentrations and for controls depends on the test design used (see paragraph 34).
Cu toate acestea, modificările comportamentului (de exemplu, incapacitatea de a săpa în sol; poziția nemișcată pe peretele de sticlă al vasului de testare) și ale morfologiei (de exemplu, prezența unor răni deschise) viermilor adulți trebuie, de asemenea, înregistrate împreună cu prezența eventualilor viermi tineri.
The test vessels are positioned randomly in the test incubator and these positions are re-randomised weekly.
De obicei, trebuie aplicată analiza probit (21) sau regresia logistică pentru determinarea LC50.
If a vehicle is used for application of the test chemical, one control series containing quartz sand sprayed or mixed with solvent should be run in addition to the test series.
Cu toate acestea, în cazurile în care această metodă de analiză nu este adecvată (de exemplu, dacă sunt disponibile mai puțin de trei concentrații având ca efect mortalitatea parțială), pot fi utilizate metode alternative.
The solvent or dispersant concentration should be the same as that used in the test vessels containing the test chemical.
Aceste metode ar putea include mediile mobile (22), metoda simplificată Spearman-Karber (23) sau simpla interpolare (de exemplu, media geometrică a LC0 și LC100, calculată prin înmulțirea rădăcinii pătrate a LC0 cu LC100).
A control series containing additional quartz sand (2,5 g per vessel) should be run for chemicals requiring administration in accordance with the procedures described in paragraph 21.
În cadrul testului final, punctul final principal este fecunditatea (adică numărul de viermi tineri produși).
The test temperature is 20 ± 2 °C.
Cu toate acestea, ca și în cazul testului de stabilire a intervalului, toate celelalte semne de nocivitate trebuie înregistrate în raportul final.
To discourage worms from escaping from the soil, the test is carried out under controlled light-dark cycles (preferably 16 hours light and 8 hours dark) with illumination of 400 to 800 lux in the area of the test vessels.
Pentru a calcula rezultatele reproducerii, analiza statistică necesită cunoașterea mediei aritmetice și a abaterii standard per tratament și per probă de control.
In order to check the soil humidity, the vessels are weighed at the beginning of the test and thereafter once a week.
Dacă s-a efectuat o analiză a varianței, abaterea standard, s, și gradele de libertate, df, pot fi înlocuite de estimarea varianței combinate obținute din ANOVA și, respectiv, de gradele sale de libertate, cu condiția ca varianța să nu depindă de concentrație.
Weight loss is replenished by the addition of an appropriate amount of deionised water.
În acest caz, se utilizează varianțele unice ale probelor de control și ale probelor supuse tratamentului.
It should be noted that loss of water can be reduced by maintaining a high air-humidity (> 80 %) in the test incubator.
Respectivele valori se calculează de obicei cu ajutorul unui software statistic comercial utilizând ca duplicat rezultatele pentru fiecare vas.
The moisture content and the pH, should be measured at the beginning and the end of both the range-finding test and the definitive test.
În cazul în care combinarea datelor pentru probele de control negative și pentru probele de control cu solvent pare rezonabilă în locul testării în raport cu una dintre ele, acestea trebuie testate pentru a vedea dacă nu diferă în mod semnificativ (pentru teste adecvate, a se vedea punctul 45 și apendicele 7).
Measurements should be made in control and treated (all concentrations) soil samples prepared and maintained in the same way as the test cultures but not containing worms.
Testarea statistică și inferența suplimentare depind de distribuția normală și omogenitatea în ceea ce privește varianța ale valorilor duplicate.
Food should only be added to these soil samples at the start of the test to facilitate microbial activity.
Estimarea NOEC
The amount of food added should be the same as that added to the test cultures.
Ar fi de preferat aplicarea unor teste puternice.
It is not necessary to add further food to these vessels during the test.
Trebuie utilizate informații, de exemplu, din experiența anterioară din cadrul ring testelor sau alte date istorice cu privire la distribuția aproximativ normală a datelor.
Feeding
Omogenitatea varianței (omoscedasticitatea) este mai critică.
A food capable of maintaining the enchytraeid population can be used.
Experiența arată că varianța crește adesea odată cu creșterea mediei.
Rolled oats, preferably autoclaved before use to avoid microbial contamination (heating is also appropriate), have been found to be a suitable feeding material.
În aceste cazuri, o transformare a datelor ar putea duce la omoscedasticitate.
Food is first provided by mixing 50 mg of ground rolled oats with the soil in each vessel before introducing the worms.
Cu toate acestea, o astfel de transformare ar trebui să se bazeze mai degrabă pe experiența cu datele istorice decât pe datele studiate.
Thereafter, food is supplied weekly up to Day 21.
Cu date omogene, ar trebui efectuate teste t multiple cum ar fi testul lui Williams (α = 0,05, unilateral) (24)(25) sau, în anumite cazuri, testul lui Dunnett (26)(27).
Feeding is not carried out on Day 28 since the adults have been removed at this stage and the juvenile worms need relatively little additional food beyond this point.
Trebuie remarcat faptul că, în cazul unei duplicări inegale, valorile t din tabel trebuie corectate astfel cum sugerează Dunnett și Williams.
Feeding during the test comprises 25 mg of ground rolled oats per vessel placed carefully on the surface of the soil so as to avoid injuring the worms.
Uneori, din cauza variației mari, răspunsurile nu cresc/descresc în mod regulat.
In order to reduce fungal growth, the oats flakes should be buried in the soil by covering with small amounts of soil.
În acest caz de abatere puternică de la monotonicitate, testul lui Dunnett este mai adecvat.
If food remains uneaten the ration should be reduced.
Dacă există abateri de la omoscedasticitate, ar putea fi rezonabilă examinarea mai îndeaproape a posibilelor efecte asupra varianțelor pentru a decide dacă testele t pot fi aplicate fără a pierde mult din putere (28).