natgillin/translations-raw huggingface dataset:
In general, the anticipated route of human exposure should be considered when designing an assay.
Măsurarea consumului de hrană se face cel puțin săptămânal.
Therefore, other routes of exposure (such as drinking water, subcutaneous, intravenous, topical, inhalation, intratracheal, dietary, or implantation) may be acceptable where they can be justified.
În cazul în care substanța de testat se administrează în apa de băut, consumul de apă trebuie măsurat la fiecare schimbare a apei și cel puțin o dată pe săptămână.
Intraperitoneal injection is not recommended since it is not a physiologically relevant route of human exposure.
Animalele care prezintă indicatori neletali de toxicitate excesivă trebuie să fie eutanasiate înainte de finalizarea perioadei de testare (23).
The maximum volume of liquid that can be administered by gavage or injection at one time depends on the size of the test animal.
Colectarea de țesuturi
The volume should not exceed 2 ml/100 g body weight.
Justificarea pentru colectarea de țesuturi trebuie să fie clar definită.
The use of volumes greater than this should be justified.
Întrucât este posibil să se studieze inducția mutației în aproape orice țesut, selecția țesuturilor colectate trebuie să se bazeze pe motivul pentru efectuarea studiului și pe orice date existente privind mutagenitatea, carcinogenitatea sau toxicitatea pentru substanța chimică care face obiectul studiului.
Except for irritating or corrosive chemicals, which will normally reveal exacerbated effects at higher concentrations, variability in test volume should be minimised by adjusting the concentration to ensure a constant volume at all dose levels.
Factorii importanți de luat în considerare trebuie să includă calea de administrare (pe baza căii/căilor de expunere probabilă/probabile la om), distribuția preconizată în țesuturi și eventuale mecanisme de acțiune.
Sampling Time
În absența oricăror informații de context, ar trebui să se colecteze mai multe țesuturi somatice, după cum pot fi de interes.
Somatic Cells
Acestea ar trebui să reprezinte țesuturi cu proliferare rapidă, țesuturi cu proliferare lentă și țesuturi de la locul de contact.
The sampling time is a critical variable because it is determined by the period needed for mutations to be fixed.
În plus, spermatozoizii din vasele deferente/epididimul caudal și celulele germinale în curs de dezvoltarea din tubii seminiferi (conform descrierii de la punctele 32 și 33) ar trebui să fie colectați și stocați în cazul în care ar putea fi necesară o viitoare analiză privind mutagenitatea celulelor germinale.
This period is tissue-specific and appears to be related to the turnover time of the cell population, with bone marrow and intestine being rapid responders and the liver being much slower.
Trebuie să se consemneze greutatea organelor, iar pentru organele mari, trebuie să se realizeze prelevări din aceeași zonă de la toate animalele.
A suitable compromise for the measurement of mutant frequencies in both rapidly and slowly proliferating tissues is 28 consecutive daily treatments (as indicated in paragraph 26) and sampling three days after the final treatment;
Stocarea țesuturilor și a AND-ului
although the maximum mutant frequency may not manifest itself in slowly proliferating tissues under these conditions.
Țesuturile (sau omogenatele tisulare) trebuie să fie păstrate la temperaturi sub – 70 °C și să fie utilizate pentru izolarea ADN-ului în termen de 5 ani.
If slowly proliferating tissues are of particular importance, then a later sampling time of 28 days following the 28 day administration period may be more appropriate (16) (29).
ADN-ul izolat, păstrat în frigider la 4 °C în tampon adecvat, ar trebui să fie utilizat în mod optim pentru analiza mutației în termen de 1 an.
In such cases, the later sampling time would replace the 3 day sampling time, and would require scientific justification.
Selecția țesuturilor pentru analiza genelor mutante
Germ Cells
Alegerea țesuturilor trebuie să se bazeze pe considerente precum:
TGR assays are well-suited for the study of gene mutation induction in male germ cells (7) (8) (27), in which the timing and kinetics of spermatogenesis have been well-defined (27).
calea de administrare sau locul primului contact (de exemplu, stomacul glandular, în cazul administrării orale, plămânul în cazul administrării prin inhalare sau pielea în cazul aplicării topice);
The low numbers of ova available for analysis, even after super-ovulation, and the fact that there is no DNA synthesis in the oocyte, preclude the determination of mutation in female germ cells using transgenic assays (31).
și 2. parametrii farmacocinetici observați în studiile de toxicitate generală, care indică dispunerea, reținerea sau acumularea țesutului sau organele țintă pentru toxicitate.
The sampling times for male germ cells should be selected so that the range of exposed cell types throughout germ cell development is sampled, and so that the stage targeted in the sampling has received sufficient exposure.
În cazul în care studiile sunt realizate pentru a urmări studiile de carcinogenitate, trebuie să se ia în considerare țesuturile țintă pentru carcinogenitatea.
The time for the progression of developing germ cells from spermatogonial stem cells to mature sperm reaching the vas deferens/cauda epididymisis ~ 49 days for the mouse (36) and ~70 days for the rat (34) (35).
Alegerea țesuturilor pentru analiză ar trebui să maximizeze detectarea substanțelor chimice care sunt mutageni cu acțiune directă in vitro, metabolizați rapid, foarte reactivi sau slab absorbiți sau pentru care țesutul țintă este determinat de calea de administrare (6).
Following a 28-day exposure with a subsequent three day sampling period, accumulated sperm collected from the vas deferens/cauda epididymis (7)(8) will represent a population of cells exposed during approximately the latter half of spermatogenesis, which includes the meiotic and postmeiotic period, but not the spermatogonial or stem cell period.
În absența unor informații de bază și luând în considerare locul de contact datorat căii de administrare, ficatul și cel puțin un țesut cu divizare rapidă (de exemplu, stomacul glandular, măduva osoasă), trebuie să fie evaluate pentru mutagenitate.
In order to adequately sample cells in the vas deferens/cauda epididymis that were spermatogonial stem cells during the exposure period, an additional sampling time at a minimum of 7 weeks (mice) or 10 weeks (rat), after the end of treatment is required.
În cele mai multe cazuri, cerințele de mai sus pot fi îndeplinite prin analizarea a două țesuturi atent selectate, dar în unele cazuri ar putea fi necesare trei sau mai multe țesuturi.
Cells extruded from seminiferous tubules after a 28 + 3 day regimen comprise a mixed population enriched for all stages of developing germ cells (7) (8).
În cazul în care există motive de preocupare specifică privind efectele asupra celulelor germinale, inclusiv răspunsuri pozitive în celulele somatice, trebuie să se evalueze țesuturile celulelor germinale pentru determinarea mutațiilor.
Sampling these cells for gene mutation detection does not provide as precise an assessment of the stages at which germ cell mutations are induced as can be obtained from sampling spermatozoa from the vas deferens/cauda epididymis (since there is a range of germ cell types sampled from the tubules, and there will be some somatic cells contaminating this cell population).
Metode de măsurare
However, sampling cells from seminiferous tubules in addition to spermatozoa from the vas deferens/cauda epididymis following only a 28 + 3 day sampling regimen would provide some coverage of cells exposed across the majority of phases of germ cell development, and may be useful for detecting some germ cell mutagens.
Metodele standard de laborator sau metodele publicate pentru detectarea genelor mutante sunt disponibile pentru modelele transgenice recomandate:
General clinical observations should be made at least once a day, preferably at the same time(s) each day and considering the peak period of anticipated effects after dosing.
bacteriofag și plasmidă lambda lacZ (30);
The health condition of the animals should be recorded.
șoarece lacI (2) (18);
At least twice daily, all animals should be observed for morbidity and mortality.
șoarece delta gpt (22);
All animals should be weighed at least once a week, and at sacrifice.
șobolan delta gpt (28);
Measurements of food consumption should be made at least weekly.
Modificările trebuie să fie justificate și documentate în mod corespunzător.
If the test chemical is administered via the drinking water, water consumption should be measured at each change of water and at least weekly.
Date din mai multe asamblări pot fi agregate și utilizate pentru a ajunge la un număr adecvat de plăci sau colonii.
Animals exhibiting non-lethal indicators of excess toxicity should be euthanatised prior to completion of the test period (23).
Cu toate acestea, necesitatea unui număr mare de reacții de asamblare pentru a ajunge la numărul adecvat de plachete poate fi un indiciu de ADN de proastă calitate.
Tissue Collection
În astfel de cazuri, datele trebuie să fie luate în considerare cu atenție deoarece acestea ar putea să nu fie fiabile.
The rationale for tissue collection should be defined clearly.
Numărul total optim de plachete sau colonii per probă de ADN este guvernat de probabilitatea statistică de detectare a unui număr suficient de gene mutante, la o anumită frecvență spontană a genelor mutante.
Since it is possible to study mutation induction in virtually any tissue, the selection of tissues to be collected should be based upon the reason for conducting the study and any existing mutagenicity, carcinogenicity or toxicity data for the chemical under investigation.
În general, sunt necesare cel puțin 125000 — 300000 de plachete dacă frecvența spontană a genelor mutante este de ordinul a 3 × 10–5 (15).
Important factors for consideration should include the route of administration (based on likely human exposure route(s)), the predicted tissue distribution, and the possible mechanism of action.
Pentru testul Big Blue® lacI, este important să se demonstreze că întreaga serie de fenotipuri mutante de culoare poate fi detectată prin includerea unor martori corespunzători de culoare în același timp cu fiecare alcătuire de plăci.
In the absence of any background information, several somatic tissues as may be of interest should be collected.
Țesuturile și probele rezultate (elemente) trebuie prelucrate și analizate utilizând un concept bloc, în care elemente de la grupul martor pentru vehicul/solvent, grupul martor pozitiv (dacă este utilizat) sau ADN martor pozitiv (dacă este cazul) și fiecare grup de tratament sunt prelucrate împreună.
These should represent rapidly proliferating, slowly proliferating and site of contact tissues.
Prelucrarea rezultatelor
In addition, spermatozoa from the vas deferens/cauda epididymis and developing germ cells from the seminiferous tubules (as described in paragraphs 32 and 33) should be collected and stored in case future analysis of germ cell mutagenicity is required.
Datele pentru fiecare animal trebuie să fie prezentate sub formă de tabel.
Organ weights should be obtained, and for larger organs, the same area should be collected from all animals.
Unitatea experimentală este animalul.
Storage of Tissues and DNA
Raportul trebuie să includă numărul total de unități formatoare de plăci (ufp) sau unități formatoare de colonii (ufc), numărul de gene mutante și frecvența genelor mutante pentru fiecare țesut de la fiecare animal.
Tissues (or tissue homogenates) should be stored at or below – 70 °C and be used for DNA isolation within 5 years.
În cazul în care există mai multe reacții de asamblare/salvare, trebuie să se raporteze numărul de reacții per probă de ADN.
Isolated DNA, stored refrigerated at 4 °C in appropriate buffer, should be used optimally for mutation analysis within 1 year.
Deși trebuie să se păstreze datele pentru fiecare reacție în parte, trebuie să se raporteze doar valorile totale ale ufp sau ufc.
Selection of Tissues for Mutant Analysis
Trebuie să se raporteze datele cu privire la toxicitate și semne clinice în conformitate cu punctul 34.
The choice of tissues should be based on considerations such as:
Orice rezultate de secvențiere trebuie să fie prezentate pentru fiecare mutant analizat și trebuie să se arate calculele de frecvență a mutației care rezultă pentru fiecare animal și țesut.
the route of administration or site of first contact (e.g. glandular stomach if administration is oral, lung if administration is through inhalation, or skin if topical application has been used);
Evaluarea și interpretarea rezultatelor statistice
and 2) pharmacokinetic parameters observed in general toxicity studies, which indicate tissue disposition, retention or accumulation, or target organs for toxicity.
Există o serie de criterii pentru determinarea unui rezultat pozitiv, cum ar fi o creștere dependentă de doză a frecvenței mutante sau o creștere clară a frecvenței mutante într-un singur grup de doză în comparație cu grupul martor pentru solvent/vehicul.
If studies are conducted to follow up carcinogenicity studies, target tissues for carcinogenicity should be considered.
Pentru a furniza date suficiente pentru analiza doză-răspuns, se analizează cel puțin trei grupuri de doze tratate.
The choice of tissues for analysis should maximise the detection of chemicals that are direct-acting in vitro mutagens, rapidly metabolised, highly reactive or poorly absorbed, or those for which the target tissue is determined by route of administration (6).
În timp ce relevanța biologică a rezultatelor trebuie să fie considerată primordială, se pot utiliza metode statistice adecvate ca instrument în evaluarea rezultatelor testelor (4) (14) (15) (25) (26).
In the absence of background information and taking into consideration the site of contact due to route of administration, the liver and at least one rapidly dividing tissue (e.g. glandular stomach, bone marrow) should be evaluated for mutagenicity.
Testele statistice utilizate trebuie să ia în considerare animalul ca unitate experimentală.
In most cases, the above requirements can be achieved from analyses of two carefully selected tissues, but in some cases, three or more would be needed.
O substanță chimică de testat pentru care rezultatele nu îndeplinesc criteriile de mai sus, în orice tip de țesut, este considerată nemutagenă în cadrul testului.
If there are reasons to be specifically concerned about germ cell effects, including positive responses in somatic cells, germ cell tissues should be evaluated for mutations.
Pentru relevanța biologică a unui rezultat negativ, trebuie confirmată expunerea țesutului.
Methods of Measurement
Pentru analizele de secvențiere a ADN-ului, sunt disponibile o serie de abordări statistice pentru a contribui la interpretarea rezultatelor (1) (5) (9) (19).
Standard laboratory or published methods for the detection of mutants are available for the recommended transgenic models:
Analizarea faptului dacă valorile observate se situează în interiorul sau în afara intervalului martor istoric poate oferi orientare în evaluarea semnificației biologice a răspunsului (32).
lacZ lambda bacteriophage and plasmid (30);
date de identificare și nr.
lacI mouse (2) (18);
CAS, dacă se cunosc;
gpt delta mouse (22);
sursa, numărul lotului, dacă sunt disponibile;
gpt delta rat (28);
natura fizică și puritatea;
Modifications should be justified and properly documented.
proprietățile fizico-chimice relevante pentru desfășurarea studiului;
Data from multiple packagings can be aggregated and used to reach an adequate number of plaques or colonies.
stabilitatea substanței de testat, dacă se cunoaște.
However, the need for a large number of packaging reactions to reach the appropriate number of plaques may be an indication of poor DNA quality.
Solvent/vehicul:
In such cases, data should be considered cautiously because they may be unreliable.
justificarea alegerii vehiculului;
The optimal total number of plaques or colonies per DNA sample is governed by the statistical probability of detecting sufficient numbers of mutants at a given spontaneous mutant frequency.
solubilitatea și stabilitatea substanței de testat în solvent/vehicul, dacă se cunosc;
In general, a minimum of 125000 to 300000 plaques is required if the spontaneous mutant frequency is in the order of 3 × 10–5 (15).
prepararea formulărilor hranei, a apei potabile sau inhalărilor;
For the Big Blue® lacI assay, it is important to demonstrate that the whole range of mutant colour phenotypes can be detected by inclusion of appropriate colour controls concurrent with each plating.
determinările analitice asupra formulărilor (de exemplu, stabilitatea, omogenitatea, concentrațiile nominale).
Tissues and the resulting samples (items) should be processed and analysed using a block design, where items from the vehicle/solvent control group, the positive control group (if used) or positive control DNA (where appropriate), and each treatment group are processed together.
specia/sușa utilizată și o justificare pentru alegerea acestora;
Treatment of Results
numărul, vârsta și sexul animalelor;
Individual animal data should be presented in tabular form.
sursa, condițiile de adăpost, hrana etc.;
The experimental unit is the animal.
greutatea fiecărui animal la începutul testului, inclusiv intervalul de greutate, greutatea medie și deviația standard pentru fiecare grup.
The report should include the total number of plaque-forming units (pfu) or colony-forming units (cfu), the number of mutants, and the mutant frequency for each tissue from each animal.
datele privind martorii pozitivi și negativi (solvent/vehicul);
If there are multiple packaging/rescue reactions, the number of reactions per DNA sample should be reported.
datele din studiul de stabilire a intervalului dozelor;
While data for each individual reaction should be retained, only the total pfu or cfu need be reported.
detalii privind prepararea substanței de testat;
Data on toxicity and clinical signs as per paragraph 34 should be reported.
justificarea căii de administrare alese;
Any sequencing results should be presented for each mutant analysed, and resulting mutation frequency calculations for each animal and tissue should be shown.
metodele de măsurare a toxicității pentru animale, inclusiv, după caz, analize histopatologice sau hematologice și frecvența cu care s-au efectuat observațiile și cu care s-a măsurat greutatea corporală a animalelor;
Statistical Evaluation and Interpretation of Results
metodele de verificare pentru a constata dacă substanța de testat a ajuns în țesutul țintă sau în circulația generală, în cazul în care se obțin rezultate negative;
There are several criteria for determining a positive result, such as a dose-related increase in the mutant frequency, or a clear increase in the mutant frequency in a single dose group compared to the solvent/vehicle control group.
doză efectivă (mg/kg greutate corporală/zi), calculată din concentrația substanței chimice de testat (ppm) în hrană/apă potabilă și consum, dacă este cazul;
At least three treated dose groups should be analysed in order to provide sufficient data for dose-response analysis.
detalii privind calitatea hranei și a apei;
While biological relevance of the results should be the primary consideration, appropriate statistical methods may be used as an aid in evaluating the test results (4) (14) (15) (25) (26).
descrierea detaliată a regimului de dozare și a metodelor de eșantionare și justificările pentru alegerile făcute;
Statistical tests used should consider the animal as the experimental unit.
metoda de eutanasiere;
A test chemical for which the results do not meet the above criteria in any tissue is considered non-mutagenic in this assay.
metodele de izolare și conservare a țesuturilor;
For biological relevance of a negative result, tissue exposure should be confirmed.
metodele de izolare a ADN-ului genomic la rozătoare, salvarea transgenei din ADN-ul genomic și transferul ADN-ului transgenic la o gazdă bacteriană;
For DNA sequencing analyses, a number of statistical approaches are available to assist in interpreting the results (1) (5) (9) (19).
sursa și numărul lotului pentru toate celulele, trusele și reactivii (după caz);
Consideration of whether the observed values are within or outside of the historical control range can provide guidance when evaluating the biological significance of the response (32).
metodele de numărare de mutanților;
identification data and CAS no, if known;
metodele de analiză moleculară a mutanților și utilizarea acestora în corectarea clonalității și/sau calcularea frecvențelor mutațiilor, dacă este cazul.
source, lot number if available;
Rezultate:
physical nature and purity;
starea animalelor înaintea și pe întreaga durată a testului, inclusiv simptomele de toxicitate;
physiochemical properties relevant to the conduct of the study;
valorile greutății corporale și a organelor la sacrificare;
stability of the test chemical, if known;
pentru fiecare țesut/animal, numărul genelor mutante, numărul de plăci sau colonii evaluate, frecvența genelor mutante;
Solvent/vehicle:
pentru fiecare țesut/grup de animale, numărul de reacții de asamblare pe probă de ADN, numărul total de gene mutante, frecvența medie a genelor mutante, deviația standard;
justification for choice of vehicle;
relația doză-răspuns, dacă este posibil;
solubility and stability of the test chemical in the solvent/vehicle, if known;
pentru fiecare țesut/animal, numărul de gene mutante independente și frecvența medie a mutațiilor, în cazul în care a fost efectuată analiza moleculară a mutațiilor;
preparation of dietary, drinking water or inhalation formulations;
date concomitente și date istorice privind martorii negativi cu intervale, valori medii și deviații standard;
analytical determinations on formulations (e.g. stability, homogeneity, nominal concentrations);
date concomitente privind martorii pozitivi (sau date neconcomintente privind martorii pozitivi ADN);
species/strain used and justification for the choice;
determinări analitice, în cazul în care sunt disponibile (de exemplu, concentrațiile de ADN utilizate în asamblare, date privind secvențierea ADN-ului);
number, age and sex of animals;
analizele statistice și metodele aplicate.
source, housing conditions, diet, etc.;
Concluzii
individual weight of the animals at the start of the test, including body weight range, mean and standard deviation for each group;
Skopek (1987), Statistical Test for the Comparison of Samples from Mutational Spectra, J. Mol.
positive and negative (vehicle/solvent) control data;
, A more Efficient Big Blue® Protocol Improves Transgene Rescue and Accuracy in an Adduct and Mutation Measurement, Mutation Res., 518:
data from the range-finding study;
Gossen and J. Vijg (1995), Plasmid-based Transgenic Mouse Model for Studying in vivo Mutations Nature, 377(6550):
details of test chemical preparation;
Gorelick (1995), Statistical Design and Analysis of Mutation Studies in Transgenic Mice, Environ.
rationale for route of administration;
Gorelick (1996), Mutational Spectra in Transgenic Animal Research: Data Analysis and Study Design Based upon the Mutant or Mutation Frequency, Environ.
methods for measurement of animal toxicity, including, where available, histopathological or haematological analyses and the frequency with which animal observations and body weights were taken;
Brooks, B. Burlinson, J. Mirsalis, B. Myhr, L. Recio and V. Thybaud (1999), Transgenic Mouse Mutation Assay Systems can Play an important Role in Regulatory Mutagenicity Testing in vivo for the Detection of Site-of-contact Mutagens, Mutagenesis, 14(1):
methods for verifying that the test chemical reached the target tissue, or general circulation, if negative results are obtained;
Soper(1995), Temporal and Molecular Characteristics of Mutations Induced by Ethylnitrosourea in Germ Cells Isolated from Seminiferous Tubules and in Spermatozoa of lacZ Transgenic Mice, Proc.