natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Res., 14, 23-30.
Placă de control al calității înseamnă o placă cu 24 de godeuri care include două concentrații de martori pozitivi și negativi pentru a monitoriza performanța unui nou lot de celule sau pentru a furniza martorii pozitivi pentru probă la testarea substanțelor chimice.
OECD (2010), Multi-Laboratory Validation of the H295R Steroidogenesis Assay to Identify Modulators of Testosterone and Estradiol Production, OECD Series of Testing and Assessment No 132, ENV/JM/MONO(2010)31, Paris.
Test preliminar înseamnă un experiment independent, caracterizat printr-un nou set de soluții și martori.
OECD (2010), Peer Review Report of the H295R Cell-Based Assay for Steroidogenesis, OECD Series of Testing and Assessment No 133, ENV/JM/MONO(2010)32, Paris.
Mediu de stoc înseamnă baza pentru prepararea altor reactivi.
Chapter B.55 of this Annex:
Acesta constă într-un amestec 1:1 de mediu de cultură DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium) și amestec nutritiv F-12 Ham (DMEM/F12) în 15 mM tampon HEPES fără roșu fenol sau bicarbonat de sodiu.
Hershberger Bioassay in Rats:
Bicarbonatul de sodiu este adăugat ca tampon, a se vedea anexa II la raportul de validare (4).
A short-term Screening Assay for (Anti)Androgenic Properties.
Mediu de completare înseamnă mediu de stoc plus BD Nu-Serum și amestec premium ITS+, a se vedea anexa II la raportul de validare (4).
Appendix
Steroidogeneză înseamnă mecanismul de sinteză care conduce de la colesterol la diferiți hormoni steroizi.
Confluency refers to the coverage or proliferation that the cells are allowed over or throughout the culture medium.
Mai mulți intermediari din mecanismul de sinteză a steroizilor, cum ar fi progesteron și testosteron, sunt hormoni importanți în sine, dar sunt, de asemenea, precursori pentru hormoni ulteriori în mecanismul de sinteză.
CV refers to the coefficient of variation, and is defined as the ratio of the standard deviation of a distribution to its arithmetic mean.
T reprezintă testosteronul, unul dintre cei doi androgeni mai importanți din sistemele mamiferelor.
CYP stands for cytochrome P450 mono-oxygenases, a family of genes and the enzymes produced from them that are involved in catalysing a wide variety of biochemical reactions including the synthesis and metabolism of steroid hormones.
Substanță chimică de testat înseamnă orice substanță sau amestec de substanțe testat utilizând prezenta metodă de testare.
DPM are disintegration per minute.
Placă de test înseamnă placa pe care celulele H295R sunt expuse la substanțe chimice de testat.
It is the number of atoms in a given quantity of radioactive material that is detected to have decayed in one minute.
Plăcile de testare cuprinde martorul pentru solvent și substanța chimică de testat la șapte niveluri de concentrație, în trei exemplare.
E2 is 17β-oestradiol, the most important oestrogen in mammalian systems.
Tripsină 1X înseamnă o soluție diluată a enzimei tripsină, o serin-protează pancreatică, utilizată pentru a desprinde celulele de pe o placă de cultură de celule, a se vedea apendicele III la raportul de validare (4).
H295R cells are human adreno-carcinoma cells which have the physiological characteristics of zonally undifferentiated human foetal adrenal cells and which express all of the enzymes of the steroidogenesis pathway.
B.58.
They are available from the ATCC.
TESTE DE MUTAȚIE GENETICĂ PRIVIND CELULELE GERMINALE ȘI SOMATICE LA ROZĂTOARE TRANSGENICE
Freeze medium is used to freeze and to store frozen cells.
Prezenta metodă de testare este echivalentă cu Orientarea OCDE privind testarea (OT) nr. 488 (2013).
It consists of stock medium plus BD NuSerum and dimethyl sulfoxide.
Metodele de testare UE sunt disponibile pentru o gamă largă de teste de mutație in vitro care sunt în măsură să detecteze mutații genetice și/sau cromozomiale.
Linear Range is the range within the standard curve for a hormone measurement system where the results are proportional to the concentration of the analyte present in the sample.
Există metode de testare pentru parametri in vivo (de exemplu, aberații cromozomiale și sinteza neprogramată a ADN-ului);
LOQ stands for “Limit of Quantification”, and is the lowest quantity of a chemical that can be distinguished from the absence of that chemical (a blank value) within a stated confidence limit.
totuși, acestea nu măsoară mutațiile genetice.
For the purpose of this method, the LOQ is typically defined by the manufacturer of the test systems if not specified differently.
Testele de mutație la rozătoare transgenice (RTG) răspund nevoii de teste in vivo practice și disponibile pe scară largă pentru mutații genetice.
LOEC is the Lowest Observed Effect Concentration, the lowest concentration level at which the assay response is statistically different from that of the solvent control.
Testele de mutație RTG au fost examinate pe larg (24) (33).
NOEC is the No Observed Effect Concentration, which is the highest concentration tested if the assay does not provide a positive response.
Acestea utilizează șobolani și șoareci transgenici care prezintă mai multe copii de plasmidă integrată cromozomial sau vectori de navetă.
Passage is the number of times that cells are split after initiation of a culture from frozen stock.
Transgenele conțin gene reporter pentru detectarea diferitelor tipuri de mutații induse in vivo cu ajutorul substanțelor chimice de testat.
The initial passage that was started from the frozen stock is assigned the number one (1).
Mutațiile care apar la un rozător sunt marcate prin recuperarea transgenă și analizarea fenotipului genei reporter într-o gazdă bacteriană care nu prezintă gena reporter.
Cells that were split 1 time are labelled passage 2, etc.
Testele de mutație genică RTG măsoară mutațiile induse în gene neutre din punct de vedere genetic recuperate din aproape orice țesut al rozătoarelor.
PBS is Dulbecco's phosphate buffered saline.
Prin urmare, astfel de teste ocolesc multe dintre limitările existente asociate cu studiul in vivo al mutației genetice în gene endogene (de exemplu, țesuturi limitate adecvate pentru analize, selecție negativă/pozitivă față de mutații).
Quality Control, abbreviated QC, refers to the measures needed to assure valid data.
Datele existente sugerează că transgenele răspund la mutageni într-un mod similar cu genele endogene, în special în ceea ce privește detectarea substituțiilor de perechi de baze, a mutațiilor de secvențe și a unor mici deleții și inserții (24).
Quality control plate is a 24 well plate containing two concentrations of the positive and negative controls to monitor the performance of a new batch of cells or to provide the positive controls for the assay when testing chemicals.
Atelierele de lucru internaționale privind testarea genotoxicității (IWGT) au aprobat includerea testelor de mutație genică RTG pentru detectarea in vivo a mutațiilor genetice și au recomandat un protocol de punere în aplicare a acestora (15) (29).
Run is an independent experiment characterised by a new set of solutions and controls.
Prezenta metodă de testare se bazează pe recomandările respective.
Stock medium is the base for the preparation of other reagents.
Analizele ulterioare în sprijinul utilizării prezentului protocol pot fi consultate la nota (16).
It consists of a 1:1 mixture of Dulbecco's Modified Eagle's Medium and Ham's F-12 Nutrient mixture (DMEM/F12) in 15 mM HEPES buffer without phenol red or sodium bicarbonate.
Se estimează că, în viitor, ar putea fi posibil să se combine un test de mutație genică RTG cu un studiu de toxicitate cu doze repetate (capitolul B.57 din prezenta anexă).
Sodium bicarbonate is added as the buffer, see Appendix II to the validation report (4).
Cu toate acestea, sunt necesare date pentru a se asigura că sensibilitatea testelor de mutație genică RTG nu este afectată de perioada mai scurtă cu o zi dintre sfârșitul perioadei de administrare și data eșantionării, astfel cum este utilizată în studiul de toxicologie cu doze repetate, față de perioada 3 de zile utilizată în testele de mutație genică RTG.
Supplemented medium consist of stock medium plus BD Nu-Serum and ITS+ premium mix, see Appendix II to the validation report (4).
De asemenea, sunt necesare date pentru a indica faptul că performanța testului cu doze repetate nu este afectată negativ de utilizarea unei sușe de rozătoare transgenice, mai degrabă decât sușele de rozătoare tradiționale.
Steroidogenesis is the synthetic pathway leading from cholesterol to the various steroid hormones.
Atunci când astfel de date vor fi disponibile, metoda de testare va fi actualizată.
Several intermediates in the steroid synthesis pathway such as progesterone and testosterone are important hormones in their own right but also serve as precursors to hormones farther down the synthetic pathway.
Definițiile principalilor termeni sunt prevăzute în apendice.
T stands for testosterone, one of the two most important androgens in mammalian systems.
Testele de mutație genică RTG pentru care sunt disponibile date suficiente pentru a sprijini utilizarea acestora în prezenta metodă de testare sunt:
Test chemical is any substance or mixture tested using this test method.
șoarecele și șobolanul gpt delta (gpt și Spi–);
Test plate is the plate on which H295R cells are exposed to test chemicals.
șoarecele și șobolanul lacI (Big Blue®), astfel cum este efectuat în condiții standard.
Test plates contain the solvent control and the test chemical at seven concentration levels in triplicate.
În plus, testul de selecție pozitivă cII se poate utiliza pentru evaluarea mutațiilor în modelele Big Blue® și Muta™Mouse.
Trypsin 1X is a dilute solution of the enzyme trypsin, a pancreatic serine protease, used to loosen cells from a cell cultivation plate, see Appendix III to the validation report (4).
Mutageneza în modelele RTG este evaluată în mod normal ca frecvență a genelor mutante;
B.58 TRANSGENIC RODENT SOMATIC AND GERM CELL GENE MUTATION ASSAYS
cu toate acestea, dacă este necesar, analiza moleculară a mutațiilor poate furniza informații suplimentare (a se vedea punctul 24).
This test method is equivalent to OECD Test Guideline (TG) 488 (2013).
Testele de mutații genetice in vivo la rozătoare sunt deosebit de relevante pentru evaluarea riscului mutagen, întrucât răspunsurile testelor sunt dependente de metabolismul, farmacocinetica, procesele de reparare a ADN-ului și sinteza ADN-ului prin transleziune in vivo, deși acești parametri pot să varieze între specii, între țesuturi și între tipuri de daune asupra ADN-ului.
EU test methods are available for a wide range of in vitro mutation assays that are able to detect chromosomal and/or gene mutations.
Un test in vivo pentru mutații genetice este util pentru studierea ulterioară a unui efect mutagen detectat printr-un sistem in vitro și pentru urmărirea rezultatelor testelor utilizând alți parametri in vivo (24).
There are test methods for in vivo endpoints (i.e. chromosomal aberrations and unscheduled DNA synthesis);
Pe lângă faptul că este asociată cauzal cu inducerea cancerului, mutația genică este un parametru relevant pentru predicția bolilor necanceroase pe bază de mutații la nivelul țesuturilor somatice (12) (13), precum și a bolilor cu transmitere pe linia germinală.
Transgenic Rodent (TGR) mutation assays fulfil the need for practical and widely available in vivo tests for gene mutations.
În testele descrise la punctul 8, gena țintă este de origine bacteriană sau bacteriofagă, iar mijloacele de recuperare din ADN-ul genomic al rozătoarelor sunt prin încorporarea transgenei într-un bacteriofag λ sau un vector de transfer plasmidic.
The TGR mutation assays have been reviewed extensively (24) (33).
Procedura implică extracția de ADN genomic din țesutul de interes al rozătoarelor, prelucrarea in vitro a ADN-ului genomic (și anume, asamblarea de vectori λ sau ligarea și electroporarea plasmidelor pentru a recupera vectorul de transfer) și detectarea ulterioară a mutațiilor în gazde bacteriene în condiții adecvate.
They use transgenic rats and mice that contain multiple copies of chromosomally integrated plasmid or phage shuttle vectors.
Testele utilizează transgene neutre, care sunt ușor de recuperat din cele mai multe țesuturi.
The transgenes contain reporter genes for the detection of various types of mutations induced in vivo by test chemicals.
Experimentul de mutație genică RTG de bază implică tratarea rozătoarelor cu o substanță chimică pentru o perioadă de timp.
Mutations arising in a rodent are scored by recovering the transgene and analysing the phenotype of the reporter gene in a bacterial host deficient for the reporter gene.
Substanțele chimice pot fi administrate pe orice cale adecvată, inclusiv implantare (de exemplu, testarea unui dispozitiv medical).
TGR gene mutation assays measure mutations induced in genetically neutral genes recovered from virtually any tissue of the rodent.
Perioada totală în care un animal este tratat este numită perioadă de administrare.
These assays, therefore, circumvent many of the existing limitations associated with the study of in vivo gene mutation in endogenous genes (e.g. limited tissues suitable for analysis, negative/positive selection against mutations).
Administrarea este urmată, de regulă, de o perioadă de timp înainte de sacrificare în care nu se administrează substanțe chimice și în timpul căreia leziunile ADN nereparate sunt fixate în mutații stabile.
The weight of evidence suggests that transgenes respond to mutagens in a similar manner to endogenous genes, especially with regard to the detection of base pair substitutions, frameshift mutations, and small deletions and insertions(24).
În literatura de specialitate, această perioadă a fost numită în diferite surse fie timp de manifestare, fie timp de fixare sau timp de exprimare;
The International Workshops on Genotoxicity Testing (IWGT) have endorsed the inclusion of TGR gene mutation assays for in vivo detection of gene mutations, and have recommended a protocol for their implementation (15) (29).
sfârșitul acestei perioade este momentul eșantionării (15) (29).
This test method is based on these recommendations.
După ce animalul este sacrificat, ADN-ul genomic este izolat din țesutul/țesuturile de interes și purificat.
Further analysis supporting the use of this protocol can be found in (16).
De regulă, se colectează date pentru un singur țesut pentru fiecare animal din asamblări/ligări multiple, iar frecvența mutantului se evaluează, în general, utilizând un total cuprins între 105 și 107 unități formatoare de plăci sau unități formatoare de colonii.
It is anticipated that in the future it may be possible to combine a TGR gene mutation assay with a repeat dose toxicity study (Chapter B.7 of this Annex).
Atunci când se utilizează metode de selecție pozitive, unitățile formatoare de plăci totale se determină cu un set separat de plăci neselective.
However, data are required to ensure that the sensitivity of TGR gene mutation assays is unaffected by the shorter one day period of time between the end of the administration period and the sampling time, as used in the repeat dose toxicology study, compared to 3 days used in TGR gene mutation assays.
S-au dezvoltat metode de selecție pozitive pentru a facilita detectarea mutațiilor atât în gena gpt [șoarece și șobolan gpt delta, fenotip gpt— (20) (22) (28)], cât și în gena lacZ [Muta™Mouse sau șoarece plasmidic lacZ (3) (10) (11) (30)];
Data are also required to indicate that the performance of the repeat dose assay is not adversely affected by using a transgenic rodent strain rather than traditional rodent strains.
dimpotrivă, mutațiile genetice lacI la animale Big Blue® sunt detectate utilizând o metodă neselectivă care identifică genele mutante prin generarea de plăci colorate (albastre).
When these data are available, this test method will be updated.
Metodologia de selecție pozitivă se aplică, de asemenea, pentru a detecta mutații punctuale care apar în gena cII a vectorului de transfer bacteriofag λ [șoarece sau șobolan Big Blue® și Muta™Mouse (17)] și mutațiile de ștergere in genele λ red și gam [selecție Spi– la șoarece și șobolan gpt delta (21) (22) (28)].
Definitions of key terms are set out in the Appendix.
Frecvența genelor mutante se calculează prin împărțirea numărului de plachete/plasmide care conțin mutații în transgenă la numărul total de plachete/plasmide recuperate din aceeași probă de ADN.
TGR gene mutation assays for which sufficient data are available to support their use in this test method are:
În studiile de mutație genică RTG, frecvența genelor mutante este parametrul raportat.
lacZ bacteriophage mouse (Muta™Mouse); lacZ plasmid mouse;
În plus, frecvența mutației se poate determina, de asemenea, ca fracțiunea celulelor care prezintă mutații independente;
gpt delta (gpt and Spi–) mouse and rat;
calculul necesită corecție pentru expansiunea clonală prin secvențierea genelor mutante recuperate (24).
lacI mouse and rat (Big Blue®), as performed under standard conditions.
Mutațiile marcate în testele de punct de mutație lacI, lacZ, cII și gpt constau, în principal, în mutații de substituție a perechilor de bază, mutații de secvențe și mici inserții/deleții.
In addition, the cII positiveselection assay can be used for evaluating mutations in the Big Blue® and Muta™Mouse models.
Proporția relativă a acestor tipuri de mutație în cadrul mutațiilor spontane este similară cu cea observată la gena Hptr endogenă.
Mutagenesis in the TGR models is normally assessed as mutant frequency;
Deleții mari sunt detectate numai cu selecția Spi– și în testele de plasmide lacZ (24).
if required, however, molecular analysis of the mutations can provide additional information (see paragraph 24).
Mutațiile de interes sunt mutații in vivo care apar la șoarece sau la șobolan.
These rodent in vivo gene mutation tests are especially relevant to assessing mutagenic hazard in that the assays' responses are dependent upon in vivo metabolism, pharmacokinetics, DNA repair processes, and translesion DNA synthesis, although these may vary among species, among tissues and among the types of DNA damage.
Mutațiile in vitro și ex vivo care pot apărea în timpul recuperării, al replicării sau al reparării fage/plasmidice sunt relativ rare, iar în unele sisteme acestea pot fi identificate în mod specific sau pot fi excluse de sistemul de selecție gazdă/pozitiv bacterian.
An in vivo assay for gene mutations is useful for further investigation of a mutagenic effect detected by an in vitro system, and for following up results of tests using other in vivo endpoints (24).
Preparate
In addition to being causally associated with the induction of cancer, gene mutation is a relevant endpoint for the prediction of mutation-based non-cancer diseases in somatic tissues (12) (13) as well as diseases transmitted through the germline.
În prezent sunt disponibile o varietate de modele de detectare a mutațiilor genetice la șoareci transgenici, iar astfel de sisteme au fost utilizate pe scară mai largă decât modelele care utilizează șobolani transgenici.
If there is evidence that the test chemical, or a relevant metabolite, will not reach any of the tissues of interest, it is not appropriate to perform a TGR gene mutation assay.
În cazul în care șobolanul este în mod clar un model mai adecvat decât șoarecele (de exemplu, atunci când se studiază mecanismul carcinogenezei pentru o tumoră observată doar la șobolani, pentru corelarea cu un studiu de toxicitate pe șobolan sau dacă se știe că metabolismul șobolanului este mai reprezentativ pentru metabolismul uman), trebuie să se ia în considerare utilizarea modelelor cu șobolani transgenici.
In the assays described in paragraph 8, the target gene is bacterial or bacteriophage in origin, and the means of recovery from the rodent genomic DNA is by incorporation of the transgene into a λ bacteriophage or plasmid shuttle vector.
În spațiul pentru adăpostirea animalelor de experiență se asigură o temperatură de 22 °C (± 3 °C).
The procedure involves the extraction of genomic DNA from the rodent tissue of interest, in vitro processing of the genomic DNA (i.e. packaging of λ vectors, or ligation and electroporation of plasmids to recover the shuttle vector), and subsequent detection of mutations in bacterial hosts under suitable conditions.
Deși umiditatea relativă trebuie să fie de cel puțin 30 % și să nu depășească, de preferință, 70 %, cu excepția perioadelor de curățare a sălii, obiectivul ar fi menținerea unei umidități relative de 50-60 %.
The assays employ neutral transgenes that are readily recoverable from most tissues.
Iluminatul trebuie să fie artificial, cu o alternanță zilnică de 12 ore de lumină, urmate de 12 de ore de întuneric.
The basic TGR gene mutation experiment involves treatment of the rodent with a chemical over a period of time.
Alegerea tipului de hrană poate fi influențată de necesitatea de a asigura un amestec adecvat al substanței de testat, atunci când aceasta se administrează pe această cale.
Chemicals may be administered by any appropriate route, including implantation (e.g. medical device testing).
Animalele se adăpostesc în grupuri mici (cel mult cinci) de același sex, în cazul în care nu se preconizează un comportament agresiv.
The total period during which an animal is dosed is referred to as the administration period.
Animalele pot fi adăpostite individual, dacă acest lucru se justifică din punct de vedere științific.
Administration is usually followed by a period of time, prior to sacrifice, during which the chemical is not administered and during which unrepaired DNA lesions are fixed into stable mutations.
Animale adulte, mature sexual, tinere și sănătoase (cu vârsta de 8-12 săptămâni la începutul tratamentului) sunt repartizate aleatoriu în grupurile de control și de tratament.
In the literature, this period has been variously referred to as the manifestation time, fixation time or expression time;
Animalele sunt identificate individual.
the end of this period is the sampling time (15) (29).
Animalele sunt aclimatizate la condițiile de laborator timp de cel puțin cinci zile.
After the animal is sacrificed, genomic DNA is isolated from the tissue(s) of interest and purified.
La începutul studiului, variația greutății animalelor ar trebui să fie minimă și să nu depășească ± 20 % din greutatea medie a fiecărui sex.
Data for a single tissue per animal from multiple packaging/ligations are usually aggregated, and mutant frequency is generally evaluated using a total of between 105 and 107 plaque-forming or colony-forming units.
Prepararea dozelor
When using positive selection methods, total plaque-forming units are determined with a separate set of non-selective plates.
Substanțele chimice de testat în stare solidă trebuie dizolvate sau suspendate în solvenții sau vehicule corespunzătoare sau amestecate în hrană sau în apă înainte de a fi administrate animalelor.
Positive selection methods have been developed to facilitate the detection of mutations in both the gpt gene [gpt delta mouse and rat, gpt– phenotype (20) (22) (28)] and the lacZ gene [Muta™Mouse or lacZ plasmid mouse (3) (10) (11) (30)];
Substanțele chimice de testat în formă lichidă se pot administra direct sau se pot dilua înainte de administrare.
whereas, lacI gene mutations in Big Blue® animals are detected through a non-selective method that identifies mutants through the generation of coloured (blue) plaques.
Pentru expunerile prin inhalare, substanțele chimice de testat pot fi administrate sub formă de gaz, vapori sau aerosol solid/lichid, în funcție de proprietățile lor fizico-chimice.
Positive selection methodology is also in place to detect point mutations arising in the cII gene of the λ bacteriophage shuttle vector [Big Blue® mouse or rat, and Muta™Mouse (17)] and deletion mutations in the λ red and gam genes [Spi– selection in gpt delta mouse and rat (21) (22) (28)].
Se utilizează preparate proaspete de substanță de testat, cu excepția cazului în care datele de stabilitate demonstrează caracterul acceptabil al stocării.
Mutant frequencyis calculated by dividing the number of plaques/plasmids containing mutations in the transgene by the total number of plaques/plasmids recovered from the same DNA sample.
Condiții de testare
In TGR gene mutation studies, the mutant frequency is the reported parameter.
Solvent/vehicul