natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Store the supernatant at +4 °C and re-suspend the remaining cell pellet in 10 to 20 ml of lysis buffer.
Se depozitează supernatantul la +4 °C și se repune în suspensie fragmentele de celulă rămase în 10-20 ml de tampon de liză.
Sonicate and clarify, storing the supernatant at each stage, a total of three times.
Se agită cu ajutorul unui aparat cu ultrasunete și se clarifică, de trei ori în total, stocând supernatantul în fiecare stadiu.
Pool the supernatants and centrifuge at 24000 rpm (100,000 g) for 120 minutes at +4 °C over a 5 ml cushion of 40 % sucrose (w/v in PBS) using 30 ml Beckmann centrifuge tubes and an SW 28 rotor.
Se reunesc supernatanții și se centrifughează la 24000 rpm (100,000g) timp de 120 de minute la +4 °C peste un tampon de 5ml de sucroză la 40 % (m/v în PBS) cu ajutorul unor tuburi de centrifugare Beckmann de 30 ml și al unui rotor SW 28.
Discard the supernatant, drain the tubes thoroughly and re-suspend the pellet in PBS by sonication.
Se elimină supernatantul, se lasă tuburile să se scurgă bine și se repune în suspensie fragmentul în PBS prin sonicare.
Store the antigen in aliquots at –20 °C.
Se stochează antigenul în părți alicote la –20 °C.
Titration of BTV ELISA antigen:
Titrarea antigenului virusului BTV pentru ELISA:
Bluetongue ELISA antigen is titrated by the indirect ELISA.
Titrarea antigenului bolii limbii albastre pentru ELISA se face prin tehnica ELISA indirectă.
Twofold dilutions of antigen are titrated against a constant dilution (1/100) monoclonal antibody 3-17-A3.
Diluțiile duble succesive de antigen se titrează în funcție de o diluție constantă (1/100) de anticorp monoclonal 3-17-A3.
The protocol is as follows:
Protocolul este următorul:
Titrate a 1:20 dilution of BTV antigen in PBS across the microtitre plate in a twofold dilution series (50 μl/well) using a multichannel pipette.
Se titrează antigenul BTV diluat 1:20 în PBS pe o placă de microtitrare într-o serie de diluții duble succesive (50 µl/godeu) utilizând o pipetă multicanal.
Incubate for one hour at 37 °C on an orbital shaker.
Se incubează timp de o oră la 37 °C într-un agitator orbital.
Wash plates three times with PBS.
Se spală plăcile de trei ori cu PBS.
Add 50 μl of monoclonal antibody 3-17-A3 (diluted 1/100) to each well of the microtitre plate.
Se adaugă 50 µl de anticorp monoclonal 3-17-A3 (diluat la 1/100) în fiecare godeu al plăcii de microtitrare.
Add 50 μl of rabbit anti-mouse globulin conjugated to horseradish peroxidase, diluted to a pre-titrated optimal concentration, to each well of the microtitre plate.
Se adaugă 50 µl de globulină de iepure antișoarece conjugată cu peroxidază din hrean, diluată la o concentrație pretitrată optimă, în fiecare godeu al plăcii de microtitrare.
Add substrate and chromogen as described previously.
Se adaugă substrat și cromogen după indicațiile anterioare.
Stop the reaction after 10 minutes by the addition of 1 Molar sulphuric acid (50 μl/well).
Se întrerupe reacția după 10 minute prin adăugarea acidului sulfuric 1 M (50 µl/godeu).
In the competitive assay, the monoclonal antibody must be in excess, therefore a dilution of antigen is chosen which falls on the titration curve (not on the plateau region) which gives approximately 0,8 OD after 10 minutes.
În testul competitiv, anticorpul monoclonal trebuie să fie în exces, astfel, se alege o diluție a antigenului ce se găsește pe curba de titrare (nu în zona de platou) care dă aproximativ o DO de 0,8 după 10 minute.
The agar gel immuno-diffusion test shall be carried out according to the following protocol:
Testul de imunodifuzie în gel de agar se efectuează în conformitate cu protocolul următor:
Precipitating antigen is prepared in any cell culture system that supports the rapid multiplication of a reference strain of bluetongue virus.
Se prepară antigen precipitant în orice sistem de cultură celulară compatibil cu o multiplicare rapidă a tulpinii de referință a virusului bolii limbii albastre.
BHK or Vero cells are recommended.
Se recomandă celule BHK sau Vero.
Antigen is present in the supernatant fluid at the end of virus growth but requires 50 to 100-fold concentration to be effective.
Antigenul este prezent în fluidul supernatant la sfârșitul creșterii virale, dar trebuie să aibă o concentrație de 50 până la 100 de ori mai mare pentru a fi eficient.
This may be achieved by any standard protein concentration procedure; virus in the antigen may be inactivated by the addition of 0,3 % (v/v) beta-propiolactone.
Acest lucru se poate realiza prin orice procedură de concentrare proteică standard; antigenul viral poate fi inactivat prin adăugarea de beta-propiolactonă 0,3 % (v/v).
Known positive control serum:
Ser de control pozitiv cunoscut:
Using the international reference serum and antigen a national standard serum is produced, standardised for optimal proportion against the international reference serum, freeze-dried and used as the known control serum in each test.
Cu ajutorul antigenului si serului de referință internațional, se produce un ser național standard, standardizat pentru a obține o proporție optimă fata de serul de referință internațional, liofilizat și utilizat în fiecare test ca ser de control cunoscut.
Test serum
Ser de testare
Procedure 1 % agarose prepared in borate or sodium barbitol buffer, pH 8,5 to 9,0, is poured into a petri dish to a minimum depth of 3,0 mm. A test pattern of seven moisture-free wells, each 5,0 mm in diameter, is cut in the agar.
Procedură Se toarnă agaroză 1 % preparată în tampon de borat sau de barbitol de sodiu, pH de la 8,5 la 9 într-o placă Petri până la o grosime minimă de 3 mm. O secvență de testare din șapte godeuri lipsite de umiditate, fiecare cu un diametru de 5 mm, se taie în agar.
The pattern consists of one centre well and six wells arranged round it in a circle of radius 3 cm.
Secvența constă într-un godeu central si șase godeuri aranjate în jurul lui într-un cerc cu o rază de 3 cm.
The central well is filled with the standard antigen.
Godeul central este umplut cu antigenul standard.
Peripheral wells 2, 4 and 6 are filled with known positive serum, wells 1, 3 and 5 are filled with test sera.
Godeurile periferice 2, 4 și 6 sunt umplute cu ser pozitiv cunoscut, iar godeurile 1, 3 și 5 sunt umplute cu seruri de testat.
The system is incubated for up to 72 hours at room temperature in a closed humid chamber.
Sistemul este incubat o perioadă de până la 72 de ore la temperatura ambiantă, într-o etuvă umedă închisă.
Interpretation A test serum is positive if it forms a specific precipitin line with the antigen and forms a complete line of identity with the control serum.
Interpretare Un ser de testat este pozitiv în cazul în care formează o linie de precipitare specifică cu antigenul și formează o linie completă de identitate cu serul de control.
Epizootic haemorrhagic disease (EHD)
Boala hemoragică epizootică (EHD) Dacă testul ELISA de confirmare arată prezența anticorpilor virusului EHD la unul sau mai multe animale care au reacționat pozitiv la primul test, animalul (animalele) respectiv(e) se consideră ca fiind pozitiv(e) și se exclude (se exclud) din grup.
Precipitating antigen is prepared in any cell culture system that supports the rapid multiplication of the appropriate serotype(s) of epizootic haemorrhagic disease virus.
Se prepară antigen precipitant în orice sistem de cultură celulară compatibil cu o multiplicare rapidă a serotipului (serotipurilor) virusului bolii hemoragice epizootice.
Infectious bovine rhinotracheitis (IBR) / infectious pustular vulvo-vaginitis (IPV)
Rinotraheita infecțioasă bovină (IBR)/vulvovaginita pustuloasă infecțioasă (IPV)
The serum neutralisation test shall be carried out according to the following protocol:
Testul de seroneutralizare se efectuează în conformitate cu următorul protocol:
Serum All sera are heat-inactivated at 56 °C for 30 minutes before use.
Ser Toate serurile sunt inactivate la căldură (56 °C) pentru 30 de minute înainte de utilizare.
Procedure The constant virus-varying serum neutralisation test on microtitre plates employs MDBK or other susceptible cells.
Procedură Pentru testul de seroneutralizare constantă a diferitelor tipuri de virusuri, realizat pe plăci de microtitrare, se folosesc celulele MDBK sau alte celule susceptibile.
The Colorado, Oxford or any other reference strain of the virus is used at 100 TCID50 per 0,025 ml; inactivated undiluted serum samples are mixed with an equal volume (0,025 ml) of virus suspension.
Tulpina Colorado, Oxford sau orice altă tulpină de referință a virusului se folosește la o doză de 100 TCID50 per 0,025 ml; se amestecă eșantioane de ser nediluat inactivat cu un volum egal (0,025 ml) de suspensie virală.
The virus/serum mixtures are incubated for 24 hours at 37 °C in the microtitre plates before the MDBK cells are added.
Se incubează amestecurile de virus/ser la temperatura de 37 °C pentru 24 de ore în plăcile de microtitrare, înainte de adăugarea celulelor MDBK.
Cells are used at a concentration which forms a complete monolayer after 24 hours.
Celulele sunt folosite la o concentrație care formează un monostrat complet după 24 de ore.
Controls (i) virus infectivity assay, (ii) serum toxicity controls, (iii) uninoculated cell culture controls, (iv) reference antisera.
Controale (i) test de infecțiozitate a virusului, (ii) controale pentru toxicitatea serului; (iii) controale pentru culturi celulare neinoculate; (iv) antiseruri de referință.
Interpretation The results of the neutralisation test and the titre of the virus used in the test are recorded after three to six days incubation at 37 °C.
Interpretare Rezultatele testului de neutralizare și titrul virusului folosit la testare se înregistrează după trei până la șase zile de incubare la temperatura de 37 °C.
Serum titres are considered negative if there is no neutralisation at a dilution of 1/2 (undiluted serum).
Titrurile serului se consideră negative în cazul în care nu există neutralizare la diluție de 1/2 (ser nediluat).
Any other test recognised in the framework of Decision 2004/558/EC [10].Foot-and-mouth disease (FMD)
Orice alt test recunoscut în cadrul Deciziei 2004/558/CE [10].Febra aftoasă (FMD)
Collecting oesophageal/pharyngeal samples and testing shall be carried out according to the following protocol:
Colectarea eșantioanelor din esofag/faringe și testarea acestora se efectuează în conformitate cu următorul protocol:
Reagents Prior to sampling, transport medium is prepared.
Reactivi Înainte de prelevare, se prepară mediul de transport.
Two ml volumes are dispensed in as many containers as there are animals to be sampled.
Se repartizează un volum de 2 ml într-un număr de recipiente egal cu numărul de animale care vor fi testate.
The containers used must withstand freezing over solid CO2 or liquid nitrogen.
Containerele utilizate trebuie să reziste la congelare cu CO2 solid sau azot lichid.
Samples are obtained by the use of a specially-designed sputum collector or ’probang’.
Eșantioanele se obțin cu ajutorul unui colector de recoltat sputa sau „probang”.
To obtain a sample the probang cup is passed through the mouth, over the dorsum of the tongue and down into the upper part of the oesophagus.
Pentru a preleva un eșantion, se trece dispozitivul probang prin gură peste limbă și până la partea superioară a esofagului.
Attempts are made to scrape the surface epithelium of the upper oesophagus and pharynx by movements directed laterally and dorsally.
Se încearcă raclarea epiteliului la suprafața părții superioare a esofagului și a faringelui prin mișcări laterale și verticale.
The probang is then withdrawn, if possible after the animal has swallowed.
Dispozitivul probang este apoi retras, de preferință, după ce animalul a înghițit.
The cup must be full and contain a mixture of mucus, saliva, oesophageal fluid and cellular debris.
Dispozitivul probang trebuie să fie plin și să conțină un amestec de mucus, salivă, fluid esofagian și fragmente celulare.
Care must be taken to ensure that each specimen contains some visible cellular material.
Trebuie să se ia măsuri ca fiecare specimen să conțină material celular vizibil.
Very rough handling which causes bleeding must be avoided.
Trebuie evitate mișcările violente care pot provoca sângerări.
Samples from some animals may be heavily contaminated with ruminal contents.
Eșantioanele prelevate de la anumite animale pot fi puternic contaminate cu conținut ruminal.
Such samples must be discarded and the mouth of the animal flushed with water, or preferably physiological saline, before repeat sampling.
În acest caz, aceste eșantioane se elimină și se spală gura animalului cu apă sau cu lichid fiziologic înainte de repetarea operației de prelevare.
Treatmentof samples: Each sample collected in the probang cup is examined for quality and 2 ml added to an equal volume of transport medium in a container which can withstand freezing.
Tratamentul eșantioanelor Se examinează calitatea fiecărui eșantion colectat în dispozitivul probang și se adaugă 2 ml din acest conținut într-un volum egal de mediu de transport într-un recipient rezistent la congelare.
The containers are tightly closed, sealed, disinfected and labelled.
Recipientele sunt închise ermetic, sigilate, dezinfectate și etichetate.
The samples are kept cool (+4 °C) and examined within three to four hours or placed over dry ice (-69 °C) or liquid nitrogen and kept frozen until examined.
Eșantioanele se păstrează la rece (+4 °C) și se examinează după trei până la patru ore sau se plasează în gheață uscată (–69 °C) sau în azot lichid și se păstrează congelate până la examinare.
Between animals the probang is disinfected and washed in three changes of clean water.
Între două prelevări, dispozitivul probang se dezinfectează și se clătește de trei ori cu apă curată.
Testing for FMD virus: Samples are inoculated into cultures of primary bovine thyroid cell cultures using at least three tubes per sample.
Test de depistare a virusului FMD Eșantioanele se inoculează în culturi primare de celule tiroidiene bovine, folosindu-se cel puțin trei tuburi pentru fiecare eșantion.
Other susceptible cells such as primary bovine or porcine kidney cells can be used but it must be kept in mind that for some strains of FMD virus they are less sensitive.
Se pot folosi alte celule susceptibile, precum celulele primare renale de bovine sau porcine, dar ar trebui să se țină seama că aceste celule sunt mai puțin sensibile la anumite tulpini ale virusului FMD.
The tubes are incubated at 37 °C on a roller apparatus and examined daily for 48 hours for the presence of a cytopathic effect (CPE).
Eprubetele se incubează la 37 °C într-un dispozitiv pentru rotire și se examinează zilnic timp de 48 de ore pentru a detecta prezența efectului citopatic (CPE).
If negative, cultures are blind passaged onto new cultures and re-examined for 48 hours.
În cazul în care sunt negative, culturile se transfera în alte culturi și se reexaminează timp de 48 de ore.
The specificity of any CPE must be confirmed.
Trebuie să se confirme specificitatea oricărui CPE.
Recommended transport media:
Medii de transport recomandate:
0,08M phosphate buffer pH 7,2 containing 0,01 % bovine serum albumin, 0,002 % phenol red and antibiotics.
tampon fosfat de 0,08 M, la pH 7,2, conținând albumină din ser bovin 0,01 %, roșu fenol 0,002 % și antibiotice.
Tissue culture medium (such as Eagle's MEM) containing 0,04 M Hepes buffer, 0,01 % bovine serum albumin and antibiotics, pH 7,2.
Mediu de cultură tisulară (de exemplu, Eagle MEM) conținând tampon Hepes 0,04 M, albumină din ser bovin 0,01 % și antibiotice, pH 7,2.
Antibiotics (per ml final) must be added to the transport medium such as penicillin1000 IU, neomycin sulphate100 IU, polymyxin B sulphate50 IU, mycostatin100 IU.
Trebuie să se adauge antibiotice în cantitățile următoare pe ml final de mediu de transport, de exemplu penicilină 1000 UI, sulfat de neomicină 100 UI, sulfat de polimixină B 50 UI, micostatin 100 UI B.
The virus neutralisation test shall be carried out according to the following protocol:
Testul de seroneutralizare a virusului se efectuează în conformitate cu următorul protocol:
Reagents Stock FMDV antigen is prepared in cell cultures or on cattle tongues and stored at -70 °C or less or at -20 °C after the addition of 50 % glycerol.
Reactivi Se prepară antigenul stoc FMDV în culturi celulare sau pe limbi de bovine și se păstrează la o temperatură de –70 °C sau mai mică sau la o temperatură de –20 °C după adăugarea de glicerol la 50 %.
This is the stock antigen.
Acesta constituie antigenul stoc.
FMDV is stable under these conditions and titres vary little over a period of months.
În aceste condiții, virusul FMD este stabil și titrurile variază foarte puțin pe o perioadă de câteva luni.
Procedure The test is carried out in flat-bottomed tissue culture grade microtitre plates using susceptible cells such as IB-RS-2, BHK-21 or calf kidney cells.
Procedură Testul se realizează pe plăci de microtitrare cu fund plat, prevăzute pentru culturi tisulare, folosind celule susceptibile ca IB-RS-2, BHK-21 sau celule renale de vițel.
Sera for the test are diluted 1/4 in serum-free cell culture medium with the addition of 100 IU/ml neomycin or other suitable antibiotics.
Se diluează la 1/4 serurile de testare într-un mediu de culturi celulare fără ser, la care se adaugă 100 UI/ml de neomicină sau alte antibiotice adecvate.
Sera are inactivated at 56 °C for 30 minutes and 0.05 ml amounts are used to prepare a twofold series on microtitre plates using 0,05 ml diluting loops.
Serurile se inactivează la temperatura de 56 °C timp de 30 de minute și se folosesc volume de 0,05 ml din acestea pentru prepararea unor serii de diluții duble succesive pe plăci de microtitrare cu ajutorul unei anse de diluție de 0,05 ml.
Pre-titrated virus also diluted in serum-free culture medium and containing 100 TCID50/0.05 ml is then added to each well.
Se adaugă apoi în fiecare godeu virus pretitrat, diluat de asemenea în mediu de cultură fără ser, conținând 100 TCID50/0,05 ml.
Following incubation at 37 °C for one hour to allow neutralisation to take place, 0,05 ml of suspension cells containing 0,5 to 1.0 × 106 cells per 1 ml in cell culture medium containing serum free of FMD antibody is added to each well and the plates are sealed.
După incubarea la temperatura de 37 °C timp de o oră pentru a permite reacția de neutralizare, se adaugă în fiecare godeu 0,05 ml de suspensie celulară ce conține 0,5-1 × 106 celule la 1 ml într-un mediu de cultură celulară conținând ser fără anticorpi ai FMD, iar plăcile se sigilează.
Plates are incubated at 37 °C.
Plăcile se incubează la temperatura de 37 °C.
Monolayers are normally confluent within 24 hours.
Monostraturile devin în mod normal confluente în 24 de ore.
CPE is usually sufficiently advanced at 48 hours for a microscopic reading of the test.
CPE este în mod normal suficient de dezvoltat în 48 de ore pentru a permite o citire microscopică a testului.
At this time a final microscopic reading may be made or the plates may be fixed and stained for macroscopic reading, for instance using 10 % formol-saline and 0,05 % methylene blue.
În acest moment, se poate efectua o citire microscopică finală sau plăcile se pot fixa și colora în vederea unei citiri macroscopice, utilizând, de exemplu, soluție salină formolată 10 % și albastru de metilen 0,05 %.
Controls Controls in each test include homologous antiserum of known titre, a cell control, a serum toxicity control, a medium control, and a virus titration from which the actual amount of virus in the test is calculated.
Controale Controalele fiecărui test cuprind un antiser omolog de un titru cunoscut, un control al celulelor, un control de toxicitate a serului, un control al mediului și o titrare a virusului pe baza căreia se calculează cantitatea reală a virusului utilizată în test.
Interpretation Wells with evidence of CPE are considered to be infected and neutralisation titres are expressed as the reciprocal of the final dilution of serum present in the serum/virus mixtures at the 50 % end point estimated according to the Spearman-Karber method.
Interpretare Godeurile care prezintă CPE sunt considerate infectate și titrurile de neutralizare sunt exprimate ca reprezentând reciproca diluției finale de ser prezent în amestecurile de ser/virus la punctul final de 50 % estimat după metoda Spearman-Karber.
Tests are considered to be valid when the actual amount of virus used per well in the test is between 101,5 and 102,5 TCID50 and when the titre of the reference serum is within twofold of its expected titre, estimated from the mode of previous titrations.
Testele se consideră valide în cazul în care cantitatea reală de virus folosită pentru fiecare godeu este cuprinsă între 101,5 și 102,5 TCID50 și titrul serului de referință nu variază cu un factor mai mare de 2 față de titrul anticipat, estimat după modul titrărilor precedente.
When the controls are outside these limits the tests are repeated.
În cazul în care controalele se găsesc în afara acestor limite, se repetă testele.
An end point titre of 1/11 or less is taken as negative.
Un titru final de 1/11 sau mai mic se consideră negativ.
The detection and quantification of antibody by ELISA shall be carried out according to the following protocol:
Detectarea și cuantificarea anticorpului prin testul ELISA se efectuează în conformitate cu următorul protocol:
Reagents Rabbit antisera to 146S antigen of seven types of foot-and-mouth disease virus (FMDV) used at a predetermined optimum concentration in carbonate/bicarbonate buffer, pH 9,6.
Reactivi Antiseruri de iepure față de șapte tipuri de antigenul 146S al virusului febrei aftoase (FMDV) folosite la o concentrație optimă predeterminată într-un tampon de carbonat/bicarbonat cu pH 9,6.
Antigens are prepared from selected strains of virus grown on monolayers of BHK-21 cells.
Se prepară antigeni din tulpinile de virus selectate, cultivate pe monostraturi de celule BHK-21.
The unpurified supernatants are used and pretitrated according to the protocol but without serum, to give a dilution which after the addition of an equal volume of PBST (phosphate buffered saline containing 0,05 % Tween-20 and phenol red indicator) would give an optical density reading of between 1,2 and 1,5.
Se utilizează supernatanți nepurificați și se pretitrează conform protocolului, dar fără ser, pentru a da o diluție care, după adăugarea unui volum egal de PBST (tampon fosfat salin, conținând 0,05 % Tween-20 și indicator roșu fenol) ar da o densitate optică între 1,2 și 1,5.
The viruses can be used inactivated.
Virusurile pot fi folosite inactivate.
PBST is used as a diluent.
PBST este folosit ca diluant.
Guinea-pig antisera are prepared by inoculating guinea pigs with 146S antigen of each serotype.
Se prepară antiseruri de cobai prin inocularea cobailor cu antigen 146S din fiecare serotip.
A predetermined optimum concentration is prepared in PBST containing 10 % normal bovine serum and 5 % normal rabbit serum.
Se prepară o concentrație optimă predeterminată în PBST, ce conține 10 % ser bovin normal și 5 % ser normal de iepure.
Rabbit anti-guinea-pig immunoglobulin conjugated to horseradish peroxidase is used at a predetermined optimum concentration in PBST containing 10 % normal bovine serum and 5 % normal rabbit serum.
Se folosește imunoglobulină de iepure anticobai conjugată cu peroxidază din hrean la o concentrație optimă predeterminată în PBST, ce conține 10 % ser normal bovin și 5 % ser normal de iepure.
Test sera are diluted in PBST.
Serurile de testare se diluează în PBST.
ELISA plates are coated with 50 μl of rabbit antiviral sera overnight in a humidity chamber at room temperature.
Plăcile ELISA se acoperă cu 50 µl de seruri antivirale de iepure și se lasă peste noapte într-o încăpere umedă, la temperatura ambiantă.
Fifty microlitres of a duplicate, twofold series of each test serum starting at 1/4 are prepared in U-bottomed multiwell plates (carrier plates).
În plăci de microtitrare cu godeuri multiple și cu fundul rotund (plăci purtătoare), se prepară, la un volum de 50 microlitri, serii de diluții duble succesive, în duplicat, din fiecare ser de testare începând cu diluția 1/4.