natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Box I.16: Registration number (railway wagons or container and lorries), flight number (aircraft) or name (ship).
Rubrica I.16: numărul de înregistrare (vagoane de tren sau container și camioane), numărul zborului (aeronava) sau numele (vapor).
Box I.19: Use the appropriate Harmonised System (HS) code of the World Customs Organisation: 01.01.01 or 01.01.06.19
Rubrica I.19: se utilizează codul corespunzător din Sistemul armonizat (SA) al Organizației Mondiale a Vămilor: 01.01.01 sau 01.01.06.19.
Box I.31: Species: horse, ass, mule, hinny, zebra (including their crossings).
Rubrica I.31: specia: cal, măgar, catâr, bardou, zebră (inclusiv încrucișările între acestea).
Identification system: Until 31 December 2009 shall correspond to an identification number as described in Article 2 of Commission Decision 2000/68/EC, and as of 1 January 2010 to the unique life number as described in Article 2(2)(d) of and Section 1(A)(4) of Annex I to Commission Regulation (EC) No 504/2008.
Sistem de identificare: până la 31 decembrie 2009 corespunde numărului de identificare prezentat la articolul 2 din Decizia 2000/68/CE a Comisiei, iar de la 1 ianuarie 2010 numărului unic de identificare pe viață descris la articolul 2 litera (d) și în anexa I secțiunea 1 partea A punctul 4 din Regulamentul (CE) nr. 504/2008 al Comisiei.
The information in points II.1. to II.6. is not required where there is a bilateral agreement in accordance with Article 6 of Directive 2009/156/EC.
Informațiile de la punctele II.1-II.6 nu sunt obligatorii în cazul în care există un acord bilateral încheiat în conformitate cu articolul 6 din Directiva 2009/156/CE.
This certificate is valid for 10 days.
Prezentul certificat este valabil 10 zile.
The colour of the stamp and signature must be different from that of the other particulars in the certificate.
Culoarea ștampilei și a semnăturii trebuie să fie diferită de cea a altor mențiuni din certificat.
Official veterinarian or official inspector
Medic veterinar oficial sau inspector oficial
Name (in Capital):
Nume (cu majuscule):
Qualification and title
Funcție și titlu:
Local Veterinary Unit:
Unitate veterinară locală:
No of the related LVU
Nr. unității veterinare locale corespunzătoare:
AFRICAN HORSE SICKNESS
PESTA CABALINĂ AFRICANĂ
DIAGNOSIS
DIAGNOSTICARE
Reagents for the enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA) described below may be obtained from the European Community Reference Laboratory or the OIE Reference Laboratories for African horse sickness.
Reactivii pentru metodele de imunoabsorbție enzimatică (ELISA) descrise în cele ce urmează pot fi obținuți de la laboratorul comunitar de referință sau de la laboratoarele de referință ale OIE pentru pesta cabalină africană.
COMPETITIVE ELISA FOR THE DETECTION OF ANTIBODIES TO AFRICAN HORSE SICKNESS VIRUS (AHSV) (PRESCRIBED TEST)
TEST ELISA COMPETITIV PENTRU DETECTAREA PREZENȚEI ANTICORPILOR VIRUSULUI PESTEI CABALINE AFRICANE (VPCA) (TEST OBLIGATORIU)
Competitive ELISA is used to detect specific AHSV antibodies in sera from any species of equidae.
Testul ELISA competitiv este utilizat pentru detectarea prezenței anticorpilor specifici ai virusului pestei cabaline africane în serurile provenite de la toate speciile de ecvidee.
The broad spectrum, polyclonal, immune anti-AHSV guinea-pig serum (hereinafter referred to as ‘guinea-pig antiserum’) is serogroup specific and is able to detect all known serotypes of AHS virus.
Antiserul de cobai împotriva VPCA (denumit în continuare „antiser de cobai”) este un antiser cu spectru larg, policlonal și imun; este specific serogrupului și permite detectarea tuturor serotipurilor cunoscute ale virusului acestei boli.
The principle of the test is the interruption of the reaction between AHSV antigen and a guinea-pig antiserum by a test serum sample.
Principiul de testare este întreruperea reacției dintre antigenul VPCA și un antiser de cobai pe un eșantion de ser de testat.
AHSV antibodies in the test serum sample will compete with those in the guinea-pig antiserum resulting in a reduction in the expected colour (following the addition of enzyme labelled anti-guinea-pig antibody and substrate).
Anticorpii VPCA din eșantionul de ser de testat sunt în competiție cu cei ai antiserului de cobai, ceea ce antrenează o atenuare a culorii preconizate (după adăugarea unui anticorp anticobai marcat cu o enzimă și a substratului).
Sera can be tested at a single dilution of 1 in 5 (spot test method) or may be titrated (serum titration method) to give dilution end-points.
Serurile pot fi testate la o singură diluție de 1/5 (metoda testului punctual) sau pot fi titrate (metoda de titrare a serului) pentru obținerea unei serii de diluții.
Inhibition values higher than 50 % may be regarded as positive.
Valorile de inhibiție mai mari de 50 % pot fi considerate pozitive.
The test protocol described hereinafter is used in the Regional Reference Laboratory for African horse sickness in Pirbright, United Kingdom.
Protocolul de testare descris anterior este utilizat de laboratorul regional de referință pentru pesta cabalină africană din Pirbright, Regatul Unit.
Test procedure
Descrierea testului
Preparation of plates
Pregătirea plăcilor
Coat ELISA plates with AHSV antigen extracted from infected cell cultures and diluted in carbonate/bicarbonate buffer, pH 9,6.
Se depune pe plăci ELISA antigenul VPCA extras din culturi de celule infectate, diluat într-un tampon carbonat-bicarbonat cu pH 9,6.
Incubate the ELISA plates overnight at 4 °C.
Se incubează plăcile ELISA peste noapte la 4 °C.
Wash plates three times by flooding and emptying the wells with phosphate buffered saline (PBS), pH 7, 2 to 7,4 pH, and blot dry on adsorbent paper.
Se spală plăcile de trei ori prin clătire și golirea godeurilor cu o soluție salină tamponată cu fosfat (SSTF) cu pH 7,2-7,4, apoi se usucă pe sugativă.
Control wells
Godeuri de control
Titrate the positive control sera in a twofold dilution series, from 1 in 5 to 1 in 640, across column 1 in blocking buffer (PBS containing 0,05 % (v/v) Tween-20, 5,0 % (w/v) skimmed-milk powder (Cadbury’s MarvelTM) and 1 % (v/v) adult bovine serum) to give a final volume of 50 μl/well.
Se titrează serurile de control pozitive într-o serie de diluții în baza doi, de la 1/5 la 1/640, în coloana 1, într-un tampon de blocare SSTF cu conținut de 0,05 % (v/v) de Tween-20, 5,0 % (m/v) de lapte praf degresat (Cadbury’s MarvelTM) și 1 % (v/v) de ser de bovine adulte, pentru a obține un volum final de 50 μl pentru fiecare godeu.
Add 50 μl of the negative control serum at a dilution of 1 in 5 (10 μl serum + 40 μl blocking buffer) to wells A and B of column 2.
Se adaugă 50 μl de ser de control negativ într-o diluție de 1/5 (10 μl ser + 40 μl tampon de blocare) în godeurile A și B din coloana 2.
Add 100 μl/well of blocking buffer to wells C and D of column 2 (blank).
Se adaugă 100 μl de tampon de blocare în godeurile C și D din coloana 2 (control orb).
Add 50 μl of blocking buffer to wells E, F, G and H of column 2 (guinea pig control).
Se adaugă 50 μl tampon de blocare în godeurile E, F, G și H din coloana 2 (control cu ser de cobai).
Spot test method
Metoda testului punctual
Add a 1 in 5 dilution of each test serum in blocking buffer to duplicate wells of columns 3 to 12 (10 μl sera + 40 μl blocking buffer).
Se adaugă la tamponul de blocare o diluție de 1/5 din fiecare ser de testat pentru dublarea godeurilor din coloanele de la 3 la 12 (seruri de 10 μl + 40 μl tampon de blocare).
Serum titration method
Metoda de titrare a serului
Prepare a twofold dilution series of each test sample (1 in 5 to 1 in 640) in blocking buffer across eight wells of single columns (3 to 12).
Se prepară o serie de diluții în baza doi din fiecare eșantion de testat (de la 1/5 la 1/640) într-un tampon de blocare în opt godeuri în fiecare dintre coloanele de la 3 la 12.
then
apoi
Add 50 μl of guinea pig antisera, pre-diluted in blocking buffer, to all wells except the blank wells of the ELISA plate (all wells now contain a final volume of 100 μl).
Se adaugă 50 μl antiser de cobai, diluat în prealabil într-un tampon de blocare, în toate godeurile, cu excepția godeurilor de control orb din placa ELISA (toate godeurile conțin acum un volum final de 100 μl).
Incubate for 1 hour at 37 °C on an orbital shaker.
Se incubează timp de 1 oră la 37 °C într-un agitator rotativ.
Wash plates three times and blot dry as before.
Se spală plăcile de trei ori și se usucă în modul menționat anterior.
Add 50 μl of rabbit anti-guinea-pig horseradish peroxidase (HRP) conjugate pre-diluted in blocking buffer to each well.
Se adaugă în fiecare godeu 50 μl ser de iepure anticobai conjugat cu peroxidază de hrean, diluat în prealabil într-un tampon de blocare.
Chromogen
Cromogen
Prepare the chromogen OPD (OPD = ortho-phenyldiamine) solution according to the manufacturers’ instructions (0,4 mg/ml in sterile distilled water) just before use.
Se prepară soluția cromogen OFD (OFD = ortofenildiamină) conform instrucțiunilor fabricantului (0,4 mg/ml în apă distilată sterilă) cu puțin timp înainte de utilizare.
Add substrate (hydrogen peroxide = H2O2) to give a final concentration of 0,05 % (v/v) (1 in 2000 of a 30 % solution of H2O2).
Se adaugă un substrat (peroxid de hidrogen = H2O2), pentru a obține o concentrație finală de 0,05 % (v/v) (1/2000 dintr-o soluție la 30 % de H2O2).
Add 50 μl of the OPD solution to each well and leave plates on the bench for 10 minutes at ambient temperature.
Se adaugă 50 μl din soluția OFD în fiecare godeu și se lasă plăcile pe suport timp de 10 minute la temperatura ambiantă.
Stop the reaction by the addition of 50 μl/well of 1M sulphuric acid (H2SO4).
Se oprește reacția prin adăugarea a 50 μl de acid sulfuric 1M (H2SO4) în fiecare godeu.
Reading
Citire
Read spectrophotometrically at 492 nm.
Citire prin spectrofotometrie la 492 nm.
Expression of results
Exprimarea rezultatelor
Using a software package print out the optical density (OD) values, and the percentage inhibition (PI) for test and control sera based on the mean value recorded in the four guinea pig control wells.
Cu ajutorul unui program de calculator, se stabilesc valorile de densitate optică (DO) și valoarea procentuală de inhibiție (PI) pentru serurile de testare și serurile de control, pe baza valorii medii înregistrate în cele patru godeuri care conțin serurile de cobai de control.
The data expressed as OD and PI values are used to determine whether the test has performed within acceptable limits.
Valorile DO și PI se utilizează pentru a stabili dacă testul a fost efectuat în limite acceptabile.
The upper control limits (UCL) and lower control limits (LCL) for the guinea pig control are between OD values 1,4 and 0,4 respectively.
Limitele superioare și inferioare ale serurilor de cobai de control se situează respectiv între valorile 1,4 și 0,4 de DO.
The end-point titre for the positive control based on 50 % PI should be 1 in 240 (within a range from 1 in 120 to 1 in 480).
Titrul punctului terminal de control pozitiv pe baza unui PI de 50 % ar trebui să fie 1/240 (între 1/120 și 1/480).
Any plate that fails to conform to the above criteria must be rejected.
Plăcile care nu sunt în conformitate cu criteriile menționate anterior trebuie respinse.
However, if the positive control serum titre is greater than 1 in 480 and the test samples are still negative then the negative test samples can be accepted.
Cu toate acestea, în cazul în care titrul serului de control pozitiv este mai mare de 1/480 și eșantioanele testate sunt, totuși, negative, eșantioanele negative cunoscute pot fi acceptate.
The duplicate negative control serum wells and the duplicate blank wells should record PI values between + 25 % and – 25 %, and between + 95 % and + 105 %, respectively.
Godeurile duplicat cu ser de control negativ și godeurile duplicat de control orb ar trebui să prezinte valori PI cuprinse între + 25 % și – 25 %, respectiv între + 95 % și + 105 %.
Failure to be within these limits does not invalidate the plate but does suggest that background colour is developing.
Nerespectarea acestor limite nu conduce la invalidarea rezultatelor plăcii, însă sugerează că este în curs formarea unei culori de fond.
The diagnostic threshold (cut-off value) for test sera is 50 % (PI 50 %).
Pragul de diagnostic (valoarea-limită) pentru serurile testate este de 50 % (PI 50 %).
Samples recording PI values greater than 50 % are recorded as positive.
Eșantioanele care prezintă valori PI mai mari de 50 % sunt considerate pozitive.
Samples recording PI values lower than 50 % are recorded as negative.
Eșantioanele care prezintă valori PI mai mici de 50 % sunt considerate negative.
Samples that record PI values above and below the threshold for the duplicate wells are considered doubtful.
Eșantioanele care prezintă valori PI superioare sau inferioare pragului pentru godeurile duplicat sunt considerate neconcludente.
Such samples may be re-tested in the spot test and by titration.
Aceste eșantioane pot fi testate din nou printr-un test punctual sau prin titrare.
Positive samples may also be titrated to provide an indication of the degree of positivity.
Eșantioanele pozitive pot fi și ele titrate pentru a furniza o indicație cu privire la gradul de pozitivitate.
Spot test layout
Analiză punctuală
–ve cont negative control.
C- control negativ.
+ ve cont positive control.
C+ control pozitiv.
GP cont guinea pig control.
CC control cu cobai.
Test sera
Seruri testate
Blank
orb
INDIRECT ELISA FOR THE DETECTION OF ANTIBODIES TO AFRICAN HORSE SICKNESS VIRUS (AHSV) (PRESCRIBED TEST)
TEST ELISA INDIRECT PENTRU DETECTAREA PREZENȚEI ANTICORPILOR PESTEI CABALINE AFRICANE (VPCA) (TEST OBLIGATORIU)
The test described hereinafter is in accordance with the test description in Chapter 2.1.11 of the OIE Manual of Standards for Diagnostic Tests and Vaccines, fourth edition, 2000.
Testul descris în continuare este în conformitate cu descrierea din capitolul 2.1.11 din Manualul de standarde pentru teste de diagnosticare și vaccinuri al OIE, ediția a patra, 2000.
The recombinant VP7 protein has been used as antigen for AHS virus antibody determination with a high index of sensitivity and specificity.
Proteina recombinantă VP7 a fost utilizată ca antigen pentru detectarea prezenței anticorpilor virusului pestei cabaline africane; metoda este foarte sensibilă și foarte specifică.
Other advantages are that it is stable and not infective.
Această proteină prezintă, de asemenea, avantajul de a fi stabilă și neinfecțioasă.
Solid phase
Faza solidă
ELISA plates are coated with recombinant AHSV-4 VP7 diluted in carbonate/bicarbonate buffer, pH 9,6.
Plăcile ELISA se sensibilizează cu proteina recombinantă VP7 a VPCA de serotip 4, diluată într-un tampon carbonat/bicarbonat cu pH 9,6.
Incubate plates overnight at 4 °C.
Se incubează plăcile peste noapte la 4 °C.
Wash the plates five times with distilled water containing 0,01 % (v/v) Tween 20 (washing solution).
Se clătesc plăcile de cinci ori cu apă distilată cu conținut de 0,01 % (v/v) Tween-20 (soluție de spălare).
Gently tap the plates onto absorbent material to remove any residual wash.
Se scutură ușor plăcile pe un material absorbant pentru a îndepărta orice urmă de apă.
Block the plates with phosphate buffered saline (PBS) + 5 % (w/v) skimmed milk (Nestlé Dry Skim MilkTM), 200 μl/well, for 1 hour at 37 °C.
Se saturează plăcile cu o soluție SSTF + 5 % (m/v) de lapte praf degresat (lapte NestléTM), câte 200 μl în fiecare godeu timp de o oră la 37 °C.
Remove the blocking solution and gently tap the plates onto absorbent material.
Se înlătură soluția de saturare și se scutură ușor plăcile pe un material absorbant.
Test samples
Eșantioane
Serum samples to be tested, and positive and negative control sera, are diluted 1 in 25 in PBS + 5 % (w/v) skimmed milk + 0,05 % (v/v) Tween 20, 100 μl per well.
Serurile de testat și serurile pozitiv și negativ de control se diluează la 1/25 într-o soluție SSTF + 5 % (m/v) de lapte degresat + 0,05 % (v/v) Tween-20; se aplică apoi 100 μl în fiecare godeu.
Incubate for 1 hour at 37 °C.
Se incubează timp de o oră la 37 °C.
For titration, make a twofold dilution series from 1 in 25 (100 μl/well), one serum per plate column, and do the same with positive and negative controls.
Pentru titrare, se efectuează serii de diluție în baza doi începând de la 1/25 (100 μl/godeu), utilizându-se câte o coloană a plăcii pentru fiecare ser; se procedează la fel pentru controalele pozitiv și negativ.
Wash the plates as described in step 2.1.1.2.
Se clătesc plăcile în conformitate cu descrierea din etapa 2.1.1.2.
Conjugate
Conjugat
Dispense 100 μl/well of horseradish-peroxidase (HRP) -conjugated anti-horse gamma-globulin diluted in PBS + 5 % milk + 0,05 % Tween 20, pH 7,2.
Se depun în fiecare godeu câte 100 μl de anticorpi anti-cal conjugați cu peroxidază de hrean; anticorpii se diluează într-o SSTF + 5 % lapte degresat + 0,05 % Tween-20 cu pH 7,2.
Cromogen/Substrate
Cromogen/substrat
Add 200 μl/well of chromogen/substrate solution (10 ml of 80,6 mM DMAB (dimethyl aminobenzaldehyde) + 10 ml of 1,56 mM MBTH (3-methyl-2-benzo-thiazoline hydrazone hydrochlorid) + 5 μl H2O2)
Se adaugă 200 μl/godeu de soluție de cromogen/substrat [10 ml de 80,6 mM de DMAB (dimetilaminobenzaldehidă) + 10 ml de 1,56 mM de MBTH (3-metil-2-benzotiazolină de hidroclorură de hidrazonă) + 5 μl de H2O2].
Colour development is stopped by adding 50 μl of 3N H2SO4 after approximately 5 to 10 minutes (before the negative control begins to be coloured).
Se blochează reacția colorimetrică după aproximativ 5-10 minute (înainte să înceapă să se coloreze controlul negativ) prin adăugarea a 50 μl de H2SO4 3N.
Other chromogens such as ABTS (2,2'-Azino-bis-[3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid]), TMB (tetramethyl benzidine), or OPD (ortho-phenyldiamine) can also be used.
Se pot utiliza și alți cromogeni, cum ar fi ABTS [2,2’-azino-bis-(3-etilbenzotiazolină-6-acid sulfonic)], TMB (tetrametil de benzidină) sau OFD (ortofenil diamină).
Read the plates at 600 nm (or 620 nm).
Se citește placa la 600 nm (sau 620 nm).
Interpretation of the results
Interpretarea rezultatelor
Calculate the cut-off value by adding 0,6 to the value of the negative control (0,6 is the standard deviation derived with a group of 30 negative sera).
Se calculează valoarea pragului adăugând 0,6 la valoarea controlului negativ (0,6 este abaterea standard calculată pe baza unui grup de 30 de seruri negative).
Test samples giving absorbance values lower than the cut-off are regarded as negative.
Eșantioanele testate care prezintă o valoare de absorbție inferioară pragului sunt considerate negative.
Test samples giving absorbance values greater than the cut-off + 0,15 are regarded as positive.
Eșantioanele testate care prezintă o valoare de absorbție superioară pragului + 0,15 sunt considerate pozitive.
Test samples giving intermediate absorbance values are doubtful and a second technique must be employed to confirm the result.
Eșantioanele testate care prezintă o valoare de absorbție intermediară sunt neconcludente și trebuie utilizată o a doua tehnică pentru confirmarea rezultatului.
BLOCKING ELISA FOR THE DETECTION OF ANTIBODIES TO AFRICAN HORSE SICKNESS VIRUS (AHSV) (PRESCRIBED TEST)
TESTUL ELISA DE BLOCARE PENTRU DETECTAREA PREZENȚEI ANTICORPILOR VIRUSULUI PESTEI CABALINE AFRICANE (VPCA) (TEST OBLIGATORIU)
The blocking ELISA is designed to detect specific AHSV antibodies in sera from any susceptible species.
Testul ELISA de blocare are ca scop detectarea prezenței anticorpilor specifici virusului pestei cabaline africane în serurile provenite de la orice specie susceptibilă la acest virus.
is the major, antigenic, viral protein of AHSV, and is conserved within the nine serotypes.
constituie proteina antigenică principală a VPCA, fiind prezentă în toate cele 9 serotipuri.
Because the monoclonal antibody (Mab) is also directed against the VP7, the assay will give a high level of sensitivity and specificity.
Deoarece anticorpul monoclonal este îndreptat tot împotriva proteinei VP7, testul va fi foarte sensibil și foarte specific.
Further, the recombinant VP7 antigen is completely innocuous and therefore guarantees a high degree of safety.
De asemenea, antigenul recombinant VP7 este total inofensiv și, prin urmare, foarte sigur.
The principal of the test is the interruption of the reaction between the recombinant VP7, as the antigen bound to the ELISA plate and the conjugated Mab specific for the VP7.
Principiul testului este întreruperea reacției dintre proteina recombinantă VP7, în calitate de antigen legat de placa ELISA, și anticorpul monoclonal conjugat, specific proteinei VP7.
Antibody in the test sera will block the reaction between the antigen and the Mab resulting in a reduction in colour.
Anticorpii din serurile de testat vor bloca reacția dintre antigen și anticorpul monoclonal, ceea ce va duce la atenuarea culorii.
The test described hereinafter is carried out in the European Community Reference Laboratory for African horse sickness in Algete, Spain.
Testul descris în continuare este utilizat de laboratorul comunitar de referință pentru pesta cabalină africană din Algete, Spania.
ELISA plates
Plăcile ELISA
Coat ELISA plates with recombinant AHSV-4 VP7 diluted in carbonate/bicarbonate buffer, pH 9,6. Incubate overnight at 4 °C.
Se depune pe plăci ELISA antigenul VPCA de serotip 4 cu proteina recombinantă VP7, diluată într-un tampon carbonat/bicarbonat cu pH 9,6 și se incubează peste noapte la 4 °C.
Wash the plates five times with phosphate buffered saline (PBS) containing 0,05 % (v/v) Tween 20 (PBST).
Se spală plăcile de 5 ori cu o soluție salină tamponată cu fosfat (SSTF) cu conținut de 0,05 % (v/v) de Tween-20.
Stabilise the plate by treatment with a stabilising solution (in order to allow long term storage at 4 °C without loss of activity) and blot dry onto absorbent material.
Se stabilizează placa prin tratare cu ajutorul unei soluții de stabilizare (pentru a permite păstrarea pe termen lung la 4 °C fără pierdere de activitate) și se usucă pe sugativă.
Test samples and controls
Eșantioane și controale
For screening dilute test sera and controls 1 in 10 directly on the plate in PBST to give a final volume 100 μl/well.
Depistare Se diluează serurile de testat și serurile de control în proporție de 1 la 10 direct pe placă în SSTF pentru a obține un volum final de 100 μl în fiecare godeu.
For titration prepare a twofold dilution series of test sera and positive controls (100 μl/well) from 1 in 10 to 1 in 1280 across eight wells.
Titrare Se pregătește o serie de diluții în baza doi de seruri de testat și de control pozitive (100 μl în fiecare godeu) de la 1/10 la 1/1280, care se depun în opt godeuri.
Negative control is tested at 1 in 10 dilution.
Controlul negativ este testat la o diluție de 1/10.
Add 50 μl/well of pre-diluted horseradish-peroxidase (HRP) -conjugated Mab (monoclonal antibodies specific for VP7) to each well and mix gently to ensure homogeneity.
Se adaugă 50 μl de anticorp monoclonal diluat în prealabil (anticorp monoclonal conjugat cu peroxidază de hrean) în fiecare godeu și se amestecă ușor pentru a omogeniza.
Incubate for 30 minutes at 37 °C.
Se incubează timp de 30 de minute la 37 °C.
Wash the plates five times with PBST and blot dry as above.
Se spală plăcile de 5 ori cu SSTF și se usucă pe sugativă cum s-a descris anterior.
Chromogen/Substrate
Cromogen/substrat
Add 100 μl/well of chromogen/substrate solution (1 ml of ABTS (2,2′-Azino-bis-[3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid]) 5 mg/ml + 9 ml of substrate buffer (0,1 M Phosphate-Citrate buffer of pH 4 containing 0,03 % H2O2] and incubate for 10 minutes at room temperature.
Se adaugă în fiecare godeu 100 μl din soluția următoare de cromogen/substrat: 1 ml de ABTS [2,2’-azino-bis-(3-etilbenzotiazolină-6-acid sulfonic)] cu 5 mg/ml + 9 ml de tampon de substrat (0,1 M de tampon de fosfat-citrat cu pH 4 cu conținut de 0,03 % de H2O2), apoi se incubează timp de 10 minute la temperatura ambiantă.
Colour development is stopped by adding 100 μl/well of 2 % (w/v) SDS (sodium dodecyl sulphate).
Se stopează formarea culorii prin adăugarea în fiecare godeu a 100 μl de DSS (dodecil sulfat de sodiu) la 2 % (m/v).
Read at 405 nm in an ELISA reader.
Se citește la 405 nm într-un cititor de plăci ELISA.
Assay validation
Valabilitatea testului