natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Homogenisation of organs
Ha a minták IPN-től mentesnek minősülő termelési egységekből származnak, az inokulumok IPN-vírus elleni antiszérummal végzett kezelése elhagyható.
In the laboratory, the fish tissue in the tubes shall be completely homogenised, either by stomacher, blender or mortar and pestle with sterile sand, and subsequently suspended in the original transport medium.
Minták előkészítése RT-PCR-en és RT-qPCR-en alapuló felügyeleti programokhoz
If a sample consists of a whole fish less than 4 cm long, it shall be minced with sterile scissors or scalpel after removal of the body behind the gut opening.
Ha a mintákat szállító tápfolyadékban gyűjtötték, az I.4.2. és I.4.3. pontban meghatározott eljárást kell végrehajtani.
If a sample consists of a whole fish with body length between 4 cm and 6 cm, the viscera including kidney shall be collected.
Centrifugálást követően a felülúszót össze kell gyűjteni és az RNS-t ki kell vonni.
If a sample consists of a whole fish more than 6 cm long, the tissue specimens shall be collected as described in point I.1.
Ha közvetlenül a centrifugálás után nem kerül sor további vizsgálatra, a mintákat azonnal le kell fagyasztani – 20 °C-ra vagy annál alacsonyabb hőmérsékletre.
The tissue specimens shall be minced with sterile scissors or scalpel and homogenised as described in the first paragraph of this point and suspended in transport medium.
Az RNS-stabilizáló reagensben tartósított halszövetek elemzéséhez a különböző hőmérsékleten tárolt minták esetében az alábbi időintervallumokon belül kell a további műveleteket elvégezni:
The final ratio between tissue material and transport medium shall be adjusted in the laboratory to 1:10.
37 °C-on tárolt minták: egy nap;
Centrifugation of homogenate
25 °C-on tárolt minták: egy hét;
The homogenate shall be centrifuged in a refrigerated centrifuge at 2 °C to 5 °C at 2000 to 4000 × g for 15 minutes and the supernatant collected and may be treated for either four hours at 15 °C or overnight at 4 to 8 °C with antibiotics.
4 °C-on tárolt minták: egy hónap;
If the sample has been shipped in a transport medium, the treatment of the supernatant with antibiotics may be omitted.
20 °C-on tárolt minták: határozatlan idő.
Where practical difficulties arise, such as incubator breakdown or problems with cell cultures, which make it impossible to inoculate cells within 48 hours after the collection of the fish tissue samples, the supernatant may be frozen at – 80 °C and virological examination may be carried out within 14 days.
Az RNS-stabilizáló reagensben összevont minták RNS-stabilizáló reagensben lévő egyedi mintaként kezelendők.
If the collected supernatant is stored at – 80 °C within 48 hours after the sampling, it may be reused only once for virological examination.
Az RNS-stabilizáló reagensben összevont minták esetében a mintamennyiség nem haladhatja meg a gyártó által az RNS kivonására szolgáló készleteknél – például Quiagen RNeasy Mini vagy hasonló – ajánlott mennyiséget.
Prior to the inoculation of the cells, the supernatant shall be mixed with equal parts of a suitably diluted pool of antisera to the indigenous serotypes of Infectious pancreatic necrosis (IPN) virus and incubated with this for a minimum of one hour at 15 °C or a maximum of 18 hours at 4 °C.
Nagyobb minták összevonása esetén a kivonási készleteknek vagy módszereknek igazodniuk kell az összevonáshoz.
The titre of the antiserum shall be at least 1/2000 in a 50 % plaque neutralisation test.
Az RNS-stabilizáló reagensben gyűjtött minták nem használhatók sejttenyésztéshez.
Treatment of all inocula with antiserum to IPN virus aims at preventing cytopathic effect (CPE) due to IPN virus from developing in inoculated cell cultures.
Minták összevonása RT-qPCR-vizsgálathoz
This will reduce the duration of the virological examinations as well as the number of cases in which occurrence of CPE would have to be considered potentially indicative of VHSV or IHNV.
Mivel a megadott RT-qPCR-protokollok hasonló vagy nagyobb érzékenységűek, mint a sejttenyésztési módszerek, elfogadható lehet a PCR-hez olyan felülúszót használni sejttenyésztő tápfolyadékban, amely legfeljebb 10 hal összevont szerveiből származó homogenizált halszövetmintából ered.
When samples come from production units, which are considered free from IPN, the treatment of inocula with antiserum to IPN virus may be omitted.
Mivel azonban a PCR-hez használt inokulum sokkal kisebb a sejttenyésztéshez használt inokulumnál, az anyagok kivonás céljából történő összegyűjtése előtt minden halszövetet körültekintően homogenizálni kell.
Sample preparation for RT-PCR and RT-qPCR based surveillance programmes
Ugyanez az elv alkalmazandó akkor is, ha a mintagyűjtés RNS-stabilizáló reagensekben történik.
If samples were collected in transport medium, the procedure set out in points I.4.2 and I.4.3 shall be carried out.
Ebben az esetben azonban gyakran nehezen gyűjthető reprezentatív anyag egy csőben akár 10 halból, az összevont mintánkénti halak számát ezért 2–5 egyedre kell csökkenteni.
After centrifugation, supernatant shall be collected and RNA extracted.
Sejttenyészeten végzett virológiai vizsgálat
If further examination is not to be undertaken directly after centrifugation, the samples shall be immediately frozen at – 20 °C or below.
Sejttenyészetek és tápfolyadékok
For the analysis of fish tissues preserved in RNA stabilization reagent, subsequent work shall be carried out within the following time scales for samples stored at different temperatures:
Naphalivadék – 2 sejtvonalat (BF-2) vagy szivárványospisztráng-ivarszerv – 2 sejtvonalat (RTG-2), illetve ponty epitheliomából vagy tűzcselléből származó sejteket (EPC-, ill.
samples stored at 37 °C: 1 day;
FHM-sejtek) kell tenyészteni 20–30 °C-on, megfelelő tápfolyadékban, nevezetesen Eagle-féle tápfolyadékban (MEM) vagy annak módosított változataiban, amelyeket 10 %-os magzati borjúszérummal és állandó koncentrációjú antibiotikumokkal kell kiegészíteni.
samples stored at 25 °C: 1 week;
A sejtek zárt ampullákban történő tenyésztése esetén a tápfolyadékot bikarbonáttal kell pufferolni.
samples stored at 4 °C: 1 month;
A halszövetmintával végzendő beoltásra használt sejttenyészeteknek frissnek, szokásos esetben – amennyiben lehetséges – egynapos, egyrétegű sejttenyészeteknek kell lenniük, azonban a 4–48 órás sejttenyészetek is elfogadhatók.
samples stored at – 20 °C: indefinitely
A sejteknek a beoltás során aktív növekedési fázisban kell lenniük.
Pooled samples in RNA stabilization reagent shall be treated like single samples in RNA stabilization reagent.
A sejttenyészetek beoltása
For samples pooled in RNA stabilization reagent, the sample amount shall not exceed that recommended by the manufacturer for extraction with RNA kits, such as RNeasy Mini kits (Qiagen) or similar.
Az antibiotikummal kezelt szervszuszpenziót két hígításban – mégpedig az elsődleges hígításban és azon kívül annak 1:10 arányú hígításaként – kell beoltani a sejttenyészetekbe, így a szövetminta 1:100, illetve 1:1000 arányú végső hígítását elérve a sejttenyésztő tápfolyadékban (a homológ interferencia elkerülése érdekében).
If larger samples are pooled, the extraction kits or methods must reflect this pooling.
Az I.5.1. pontban foglaltaknak megfelelően legalább két sejtvonalat kell beoltani.
Samples collected in RNA stabilization reagents shall not be used for cell cultivation.
Az inokulum mérete és a sejttenyésztő tápfolyadék mennyisége közötti aránynak 1:10 körülinek kell lennie.
As the RT-qPCR protocols given are of similar or higher sensitivity than the cell cultivation methods, it may be acceptable to use supernatant from homogenised fish tissue material of pooled organs from up to 10 fish in cell culture medium for PCR.
Amennyiben lehetséges, sejttenyésztő lemezeket kell használni.
However, due to the much smaller inoculum used for PCR compared to cell cultivation, all fish tissues shall be carefully homogenised before collating material for extraction.
A sejttenyészetek inkubálása
The same principle shall also be applied if samples are collected in RNA stabilization reagents.
A beoltott sejttenyészeteket 15 °C-on, hét–tíz napig kell inkubálni.
However, in that case it is often difficult to collect representative material from up to 10 fish in one tube, and the number of fish per pool shall therefore be reduced to 2 to 5.
Ha a sejttenyésztő tápfolyadék színe pirosról sárgára változik, az a tápfolyadék savasodását jelzi; ekkor a pH-értéket steril bikarbonátoldattal vagy ennek megfelelő anyaggal be kell állítani a sejtek vírusfertőzés iránti fogékonyságának biztosítása érdekében.
Virological examination on cell culture
Legalább hathavonként – vagy amennyiben a sejtek fogékonyságának csökkenése gyanítható – el kell végezni a fagyasztott VHSV- és IHNV-törzsek titrálását a sejttenyészetek fertőzés iránti fogékonyságának ellenőrzése céljából.
Cell cultures and media
Lehetőség szerint a III. szakaszban meghatározott eljárást kell alkalmazni.
Bluegill fry cell line -2 (BF-2) or Rainbow trout gonad cell line - 2 (RTG-2) and either Epithelioma papulosum cyprini (EPC) or Fathead minnow (FHM) cells shall be grown at 20 to 30 °C in suitable medium, namely Eagle's Minimum essential medium (MEM) or modifications thereof, with a supplement of 10 % foetal bovine serum and antibiotics in standard concentrations.
Mikroszkópos vizsgálat
When the cells are cultivated in closed vials, the medium shall be buffered with bicarbonate.
A beoltott sejttenyészeteket a CPE előfordulásának megállapítása céljából rendszeresen, legalább hetente háromszor kell vizsgálni 40–150-szeres nagyításban.
The medium used for cultivation of cells in open units may be buffered with tris(hydroxymethyl)aminomethane-HCl (Tris-HCl) (23 mM) and sodium bicarbonate (6 mM).
Nyilvánvaló CPE észlelése esetén a vírusazonosítási eljárást az I.6. pontnak megfelelően azonnal meg kell kezdeni.
The pH must be 7,6 ± 0,2.
Passzálás
The cell cultures to be used for inoculation with fish tissue material shall be young, normally 1 day old cell culture monolayers where possible; however, a range between 4 to 48 hours old may be accepted.
Ha az elsődleges, 7–10 napos inkubálást követően nem alakul ki CPE, akkor friss sejttenyészetekkel passzálást kell végezni, amelynek során az elsődleges sejttenyészetekéhez hasonló területet kell használni.
The cells must be actively growing at inoculation.
Az elsődleges tenyészetet képező összes tenyészetből/tenyésztőlemez-vájulatból származó tápfolyadék (felülúszó) azonos mennyiségeit 7–10 napos beoltást követően a sejtvonalaknak megfelelően össze kell gyűjteni.
Inoculation of cell cultures
Az összegyűjtött anyagot ezt követően be kell oltani hígítatlanul és az I.5.2. pontban foglaltak szerint 1:10 arányban hígítva az eredetivel megegyező sejttenyészetekbe (amely a felülúszó 1:10, illetve 1:100 arányú végső hígítását eredményezi).
Antibiotic-treated organ suspension shall be inoculated into cell cultures in two dilutions, namely the primary dilution and, in addition, a 1:10 dilution thereof, resulting in final dilutions of tissue material in cell culture medium of 1:100 and 1:1000, respectively, in order to prevent homologous interference.
Másik lehetőségként az elsődleges tenyészet azonos mennyiségeit képező tápfolyadék 10 %-át közvetlenül be kell oltani a friss sejttenyészetet tartalmazó vájulatba (vájulatból vájulatba történő passzálással).
At least two cell lines shall be inoculated as referred to in point I.5.1.
A beoltást megelőzheti a hígítások IPN-vírus elleni, az I.4.3. pontban foglaltak szerinti, megfelelően hígított antiszérummal végzett előinkubálása.
The ratio between inoculum size and volume of cell culture medium shall be about 1:10.
A beoltott sejttenyészeteket ezt követően 7–10 napig 15 °C-on inkubálni kell és az I.5.4. pontnak megfelelően meg kell vizsgálni.
For each dilution and each cell line, a minimum of about 2 cm2 cell area, corresponding to one well in a 24-well cell culture tray, shall be utilised.
Ha az inkubálás első három napjában toxikus CPE fordul elő, akkor már ebben a stádiumban passzálást kell végezni, de azután a sejteket hét napon át inkubálni kell, majd újra passzálást kell végezni, további hét napig tartó inkubálással.
Cell culture trays shall be used where possible.
Ha három nap után alakul ki toxikus CPE, a sejteket egyszer passzálni kell, és az elsődleges beoltástól számított 14 napos időtartam eléréséig inkubálni kell.
Incubation of cell cultures
Az inkubáció utolsó hét napján nem mutatkozhat toxicitásra utaló jel.
The inoculated cell cultures shall be incubated at 15 °C for seven to 10 days.
Ha az antibiotikumos kezelés ellenére előfordul bakteriális fertőzés, akkor a passzálás előtt 15–30 percig 2–5 °C-on és 2000–4000 × g fordulaton centrifugálást kell végezni, vagy a felülúszót 0,45 μm-es szűrőn (alacsony fehérjekötő-képességű membránon) át kell szűrni, vagy mindkét műveletet el kell végezni.
If the colour of the cell culture medium changes from red to yellow indicating medium acidification, pH adjustment with sterile bicarbonate solution or equivalent substances shall be performed to ensure cell susceptibility to virus infection.
Ezenkívül a passzálást ugyanazzal az eljárással kell végezni, mint a toxikus CPE észlelésekor az e pont negyedik bekezdésében ismertetett esetben.
At least every 6 months or if decreased cell susceptibility is suspected, titration of frozen stocks of VHSV and IHNV shall be performed to verify the susceptibility of the cell cultures to infection.
Ha nem fordul elő CPE, a próba negatívnak nyilvánítható.
The procedure set out in Section III shall be used, if possible.
Vírusazonosítás
Microscopy
Ha a sejttenyészetben CPE észlelhető, a tápfolyadékot (felülúszót) össze kell gyűjteni és a következő módszerek legalább egyikével kell megvizsgálni: enzimhez kötött immunszorbens próba (ELISA), immunfluoreszcens (IF-) próba, neutralizáció, reverz transzkriptáz polimeráz láncreakció (RT-PCR) vagy valós idejű reverz transzkriptáz polimeráz láncreakció (RT-qPCR).
Inoculated cell cultures shall be inspected regularly, at least three times a week, for the occurrence of CPE at 40 to 150 × magnification.
Ha e próbák nem teszik lehetővé a vírus egy héten belüli pontos azonosítását, akkor a felülúszót azonnali azonosítás céljából továbbítani kell a nemzeti referencialaboratóriumba vagy a 2006/88/EK irányelv VI. mellékletében említett, halbetegségekkel foglalkozó uniós referencialaboratóriumba.
If obvious CPE is observed, virus identification procedures in accordance with point I.6 shall be initiated immediately.
A vírusizolátum azonosításához kettősellenanyag-szendvics-ELISA próbát kell végezni.
Subcultivation
A mikrotiterlemezeket vájulatonként 50 μl (0,9 pg), IHNV vagy VHSV elleni nyúlantiszérumból származó, 15 mM nátrium-azidot tartalmazó (9,6 pH-értékű) karbonátpufferben hígított, bizonyított minőségű, A-proteinnel tisztított immunglobulinokkal kell érzékenyíteni, és 18 órától két hétig terjedő időszakra 4 °C-on inkubálni kell.
If no CPE has developed after the primary incubation for 7 to 10 days, subcultivation shall be performed to fresh cell cultures utilising a cell area similar to that of the primary culture.
Az 1 % Triton X-100-at tartalmazó minták mindegyikét és a pozitív kontrollokat hígító lemezen négyféle hígításban – hígítatlan, 1:4, 1:16 és 1:64 arányban – pufferoldattal (foszfáttal pufferelt sóoldattal, (PBS)-T-BSA, 1 %-os BSA) kell hígítani.
Aliquots of medium (supernatant) from all cultures or wells constituting the primary culture shall be pooled according to cell line 7 to 10 days after inoculation.
Az ELISA-lemezeket 0,05 % Tween-20 (PBS-T) detergenst tartalmazó foszfáttal pufferelt sóoldatban kell mosni, és minden hígításból 50 μl-t át kell mérni a hígító lemezről a mosott és érzékenyített ELISA-lemezre.
The pools shall then be inoculated into homologous cell cultures undiluted and diluted 1:10 (resulting in final dilutions of 1:10 and 1:100, respectively, of the supernatant) as described in point I.5.2.
Az ELISA-lemezeket ezután 37 °C-on 30 percig inkubálni kell.
Alternatively, aliquots of 10 % of the medium constituting the primary culture shall be inoculated directly into a well with fresh cell culture (namely, well to well subcultivation).
Ezt követően a lemezeket mosni kell és 37 °C-on 30 percig speciális monoklonális ellenanyagokkal (a VHSV kimutatásához IP5B11 típusú, az IHNV kimutatásához Hyb 136-3 típusú ellenanyagokkal) inkubálni kell.
The inoculation may be preceded by pre-incubation of the dilutions with the antiserum to IPN virus at appropriate dilution as described in point I.4.3.
50 μl, 1:1000 arányban PBS-T-BSA-ban hígított, tormaperoxidázzal (HRP-) konjugált nyúl antiegér-ellenanyagokat kell átvinni az ELISA-lemezre.
The inoculated cultures shall then be incubated for 7 to 10 days at 15 °C and inspected in accordance with point I.5.4.
Végezetül az újabb mosást követően vájulatonként 50 μl ortofenilén-diamin (OPD) hozzáadásával kell láthatóvá tenni a reakciókat.
If toxic CPE occurs within the first 3 days of incubation, subcultivation shall be performed at that stage, but the cells shall then be incubated for 7 days and sub cultivated again with further 7 days incubation.
Az ELISA-lemezeket 20 percig szobahőmérsékleten, sötétben kell inkubálni, és a reakciót vájulatonként 100 μl mennyiségű 0,5 M H2SO4 hozzáadásával le kell állítani.
When toxic CPE develops after 3 days, the cells shall be passed once and incubated to achieve the total of 14 days from the primary inoculation.
Az abszorbanciát ELISA-leolvasóban, 492–620 nm hullámhosszon kell mérni.
There must be no evidence of toxicity in the final 7 days of incubation.
A minták a vizsgálati eredményeknek, valamint a pozitív és a negatív kontrollok abszorbanciaértékeinek az összevetését követően nyilváníthatók pozitívnak vagy negatívnak.
If bacterial contamination occurs despite treatment with antibiotics, subcultivation shall be preceded by centrifugation at 2000 to 4000 × g for 15 to 30 minutes at 2 to 5 °C, or filtration of the supernatant through a 0,45 μm filter or both (low protein-binding membrane).
A hígítatlan anyag esetében 0,5-nél alacsonyabb kombinált abszorbanciájú (A) minták negatívnak, a 0,5 és 1,0 közötti A-értékekkel rendelkező minták kétesnek, az 1,0-nál magasabb A-értékkel rendelkező minták pedig pozitívnak tekintendők.
In addition to this, subcultivation shall follow the same procedures as described for toxic CPE in the fourth paragraph of this point.
Az e pontban említett ELISA próbák helyett más, igazoltan hasonló hatékonyságú ELISA próbák is alkalmazhatók.
If no CPE occurs, the test may be declared negative.
Immunfluoreszcens (IF-) próba
Virus identification
A VHSV és az IHNV jegyzékbe foglalt kórokozók azonosítását „Black” típusú 96 lyukú lemezeken, hagyományos 24 lyukú lemezeken vagy 24 lyukú lemezek vájulataiban lévő fedőlemezeken elszaporított sejtek fertőzésével kell végezni.
If evidence of CPE has been observed in a cell culture, medium (supernatant) shall be collected and examined by one or more of the following techniques: Enzyme-linked immunosorbent essay (ELISA), Immunofluorescence (IF), neutralisation, RT-PCR or RT-qPCR.
Az IHNV-nek, a VHSV-nek vagy mindkettőnek a sejtek fedőlemezeken történő megfertőzésével végzett azonosítása esetén az alábbi protokoll alkalmazandó:
If these tests have not allowed definitive identification of the virus within 1 week, the supernatant shall be forwarded to the national reference laboratory or to the EU reference laboratory for fish diseases referred to in Annex VI to Directive 2006/88/EC for immediate identification.
A fedőlemezeken a sejteket olyan sűrűségben kell beoltani, amely 24 órás tenyésztés után 60–90 %-os öszzefüggő sejtréteg kialakulásához vezet.
A double antibody sandwich ELISA shall be performed in order to identify the virus isolate.
Amennyiben lehetséges, erre a célra EPC-sejteket kell használni az üvegfelületekhez való erős tapadásuk miatt, de más sejtvonalak, például a BF-2, az RTG-2 vagy az FHM is használhatók.
Microwell plates shall be coated with 50 μl/well (0,9 pg) of proven quality protein-A purified immunoglobulins(Ig) from rabbit antisera against IHNV or VSHV diluted in carbonate buffer (pH 9,6) containing 15 mM sodium azide and incubated from 18 hours to 2 weeks at 4 °C.
150 μl sejttenyészet-felülúszót két különböző (1:10 és 1:1000 arányú) hígításban két példányban egynapos monorétegekre kell oltani és 15 °C-on 24 órán át inkubálni kell.
On a dilution plate, each sample containing 1 % Triton X-100 and the positive controls shall be diluted with buffer solution (namely, phosphate buffered saline (PBS)-T-BSA, 1 % BSA) in a 4-fold dilution: undiluted, 1:4, 1:16, 1:64.
Ezt követően a sejttenyésztő tápfolyadékot el kell távolítani, és a fertőzött sejt-monorétegeket 0,5 ml jéghideg (80 tömegszázalékos) vizes acetonoldattal kell fixálni.
The ELISA plates shall be washed in PBS containing 0,05 % Tween-20 (PBS-T) and 50 μl of each dilution shall be transferred from the dilution plate to the washed and coated ELISA-plate.
A fixálást vegyifülkében, 15 percig szobahőmérsékleten kell végezni, majd az acetonoldatot el kell távolítani, és a fedőlemezeket legalább 30 percig levegőn kell szárítani.
ELISA plates shall then be incubated for 30 minutes at 37 °C.
Ebben a szakaszban a lemezeket vagy azonnal fel kell dolgozni, vagy további felhasználás céljából – 20 °C-on kell tárolni.
Subsequently plates shall be washed and incubated for 30 minutes at 37 °C with specific monoclonal antibodies (namely for VHSV identification MAb IP5B11 and for IHNV Hyb 136-3, respectively).
Speciális monoklonális ellenanyagokat (a VHSV kimutatásához MAb IP5B11 típusú, az IHNV kimutatásához Hyb 136-3 típusú ellenanyagokat) 7,2 pH-értékű, a monoklonális ellenanyaggyártó által ajánlott hígítású 0,01 M PBST-ben kell hígítani; a fixált monoréteghez vájulatonként 50–100 μl-t kell adni, és a lemezeket 37 °C-on egy órán keresztül nedves kamrában kell inkubálni.
50 μl of horseradish-peroxidase (HRP) conjugated rabbit anti mouse antibodies diluted 1:1000 in PBS-T-BSA shall be transferred to the ELISA plate.
A fedőlemezeket 0,05 % Tween-20-at tartalmazó PBS-ben (PBS-T) háromszor óvatosan meg kell mosni, és a puffert az utolsó öblítés után teljesen el kell távolítani.
Finally, after renewed washing the reactions shall be developed adding 50 μl/well of ortho-phenylenediamine (OPD).
A sejteket ezt követően 37 °C-on egy órán keresztül elsődleges ellenanyagként fluoreszcein-izotiocianáttal (FITC) – vagy tetrametil-rodamin-5(-és-6-)izotiocianáttal (TRITC) konjugált – antiegér immunglobulin-ellenanyagokkal kell inkubálni, a beszállító útmutatása szerint kell hígítani, PBS-T-ben újra meg kell mosni, majd meg kell szárítani.
The ELISA plates shall be incubated for 20 minutes at room temperature in the dark and the reaction shall be stopped by adding 100 μl/well 0,5 M H2SO4.
A megfestett tenyészeteket glicerines sóoldattal fedett üveg tárgylemezekre kell helyezni, és azokat beeső ultraibolya (UV) fényben meg kell vizsgálni.
The absorbance shall be monitored at a wavelength of 492 and 620 nm in an ELISA reader.
Ehhez 10-, illetve 12-szeres okulárt és 25- vagy 40-szeres objektívet kell használni, > 0,7-es, illetve > 1,3-as numerikus rekeszértékkel.
Samples shall be designated positive or negative after comparing the test results to the absorbance values for the positive and negative controls.
A sejttenyészetek, a fixálás és a referenciaminőségű ellenanyagok tekintetében más, igazoltan hasonló hatékonyságú IF-módszerek is alkalmazhatók.
In general, samples with combined absorbance (A) < 0,5 for undiluted material shall be considered negative, samples with A values between 0,5 and 1,0 shall be considered suspicious and samples with A values > 1,0 shall be considered positive.
Neutralizáció
Other ELISA versions with a proven similar efficacy may be used instead of those referred to in this point.
A sejteket az összegyűjtött felülúszóból centrifugálással (2000–4000 × g) vagy alacsony fehérjekötő-képességű membránon (0,45 μm) keresztüli szűréssel kell eltávolítani, és a felülúszót a sejttenyésztő tápfolyadékban 1:100 és 1:10000 arányban kell hígítani.
Immunofluorescence- IF
A legalább kétféle felülúszó-hígítás egyenlő mennyiségeit a következő reagensek azonos mennyiségeivel össze kell keverni, és azokat 15 °C-on 60 percig külön-külön inkubálni kell: