natgillin/translations-raw huggingface dataset:
ASK (pass 65 or lower) shall be grown in a L-15 medium containing 10 % foetal bovine serum, 2 % (vol:vol) 200 mM L-glutamine, and 0,08 % (vol:vol) 50 mM 2-mercaptoethanol in multi-well plates and used at greater than 50 % confluence.
A paraffinba ágyazott metszeteket 5 μm vastagságúra kell vágni, majd azokat hematoxilin és eozin használatával meg kell festeni.
Other cell lines or growth medium of proven efficacy may also be used.
A klinikailag beteg atlanti lazacok szövettani változásai különfélék, de többek között a következők lehetnek:
225 μl of putative virus-infected culture supernatant shall be added to each of two wells, mixed and 225 μl transferred to two further wells, namely a 1:5 dilution.
számos vörösvértest a szív vénás öblében és a kopoltyú lemezes szerkezetű hajszálereiben, miközben a hajszálerekben vörösvértesttrombusok is képződnek;
Two additional wells shall be left uninoculated to act as controls.
multifokálistól konfluensig terjedő bőrvérzés vagy hepatocita nekrózis vagy mindkettő a máj nagyobb edényeitől bizonyos távolságra; vörösvértestek multifokális halmozódása a máj kitágult szinuszoidjaiban;
Samples from each fish farm site shall be handled on separate plates, as shall the virus control.
vörösvértestek felhalmozódása a belek kötőszöveti rétegének véredényeiben, és végső esetben a kötőszöveti rétegben fellépő vérzés;
A virus control shall be established using a reference isolate of ISAV.
a lép kötőszöveti vázának kitágulása a vörösvértestek felhalmozódása miatt;
Plates shall be incubated at 14 ± 2 °C and examined microscopically for up to 7 days.
enyhe multifokális szövetközi vérzés, illetve kiterjedt, diffúz szövetközi vérzés és tubuláris nekrózis a vérzéses területeken, vörösvértestek felhalmozódása a gomolyokban és a vesében;
When early CPE is observed, or if no CPE is observed within 7 days, the next step shall be fixation.
eritrofagocitózis a lépben, valamint másodlagos vérzések a májban és a vesében.
Wells shall be washed with Phosphate buffered saline (PBS) and fixed by incubation with 80 % acetone for 20 minutes at room temperature.
Immunhisztokémiai vizsgálat (IHC)
Plates shall be air-dried and stained immediately or stored at 0 to 6 °C for no more than 24 hours prior to staining.
A formalinban fixált szövetekből származó paraffinmetszeteken ISAV-nukleoproteinnel szembeni poliklonális ellenanyagot kell használni.
Replicate wells shall be stained with a mix of monoclonal antibodies (MAb) 3H6F8 and 1OC9F5 against ISAV, or other MAb of proven efficacy and specificity, diluted in PBS and incubated at 37 ± 4 °C for 30 minutes.
A vizsgálandó szervek a következők: középvese és szív (a mindhárom kamrát és a billentyűket magában foglaló átmeneti terület).
MAb shall be removed and plates washed three times with 0,05 % Tween 20 in PBS.
A patológiai tünetek miatt gyanús eseteket pozitív IHC segítségével kell ellenőrizni.
Anti-mouse IgG Fluorescein isothiocyanate (FITC) conjugate diluted in PBS shall be added to each well and incubated at 37 ± 4 °C for 30 minutes.
A szövettani metszeteket standard módszereknek megfelelően kell előkészíteni.
The dilutions of different batches of MAb and FITC conjugate shall be optimised in each laboratory.
A szövetmetszetek előkészítése
Antibody shall be removed and plates shall be washed three times with 0,05 % Tween 20 in PBS.
A szöveteket standard protokollok szerint semleges, foszfáttal pufferelt 10 %-os formalinban legalább egy napig kell fixálni, fokozatos etanolsorozatban kell vízteleníteni, xilénben kell kitisztítani és paraffinba kell ágyazni.
Wells shall be examined immediately using an inverted microscope set up for fluorescence microscopy with a suitable filter for excitation of FITC.
Megközelítőleg 5 μm vastagságú (IHC esetében poli-L-lizin bevonatú lemezekre helyezett) szöveteket 56–58 °C-on (legfeljebb 60 °C-on) 20 percig kell hevíteni, xilénben kell viasztalanítani, fokozatos etanolsorozatban kell rehidratálni, és a (2) pontnak megfelelően patomorfológiai és IHC-vizsgálat céljából hematoxilinnel és eozinnal kell megfesteni.
A test shall be considered positive if fluorescent cells are observed.
Az IHC esetében alkalmazandó festési eljárás
For a test to be valid, the positive controls shall score positive and the negative controls shall score negative.
Ha e határozat másként nem rendelkezik, minden inkubációt szobahőmérsékleten, mozgó platformon kell elvégezni:
Examination of other tissues
az antigént a metszetek 6,0 pH-értékű, 0,1 M citrátpufferben 2 × 6 percig történő forralásával, majd 50 mM TBS-ben (TBS; Trisz-HCl 50 mM, NaCl 150 mM, pH: 7,6) feloldott 5 % zsírmentes tejporral és 2 % kecskeszérummal 20 percig történő blokkolásával kell kinyerni;
The technique referred to in point II.2.6 may be applied to other fish tissues such as liver, spleen and heart providing a reasonable quantity of endothelial cells, leucocytes or lymphocytes can be deposited on the slide.
a metszeteket ezt követően egy éjszakán át 1 % zsírmentes tejporral kevert TBS-ben hígított elsődleges ellenanyaggal (ISAV-nukleoproteinnel szembeni monospecifikus nyúl ellenanyaggal) kell inkubálni, majd 0,1 %-os Tween 20-szal TBS-ben háromszor át kell mosni;
The staining procedure shall remain the same for each tissue, although for some tissues it may be preferable to omit the propidium iodide staining and rely on the phase illumination to identify the cell types present in the imprint.
a kötött ellenanyagok kimutatásához a metszeteket nyúl immunglobulinnal szembeni, alkalikus foszfatázzal konjugált ellenanyagokkal kell inkubálni 60 percig.
Histology
A végső mosást követően Fast Red (1 mg ml– 1) oldószert és naftol AS-MX foszfátot (0,2 mg ml– 1), valamint 0,1 M TBS-ben (pH: 8,2) 1 mM levamizolt kell hozzáadni, és 20 percig állni kell hagyni.
Paraffin-embedded sections shall be cut at 5 μm and stained using haematoxylin and eosin.
A metszeteket ezt követően a Harris-féle hematoxilinnel történő kontrasztfestés előtt csapvízben át kell mosni és vizes beágyazó tápfolyadékba kell helyezni.
Histological changes in clinically diseased Atlantic salmon are variable, but may include the following:
Az ISAV-pozitív és ISAV-negatív szövetmetszeteket minden konfigurációba fel kell venni kontrollként.
numerous erythrocytes in the central venous sinus and lamellar capillaries of the gills, where erythrocyte thrombi also may be formed;
Az IHC eredményének értelmezése
multifocal to confluent petechiae or hepatocyte necrosis or both at some distance from larger vessels in the liver; multifocal accumulation of erythrocytes in dilated hepatic sinusoids;
Az IHC-vizsgálat eredményének értelmezése az a) és b) pontban foglaltak szerint történik:
accumulation of erythrocytes in blood vessels of the intestinal lamina propria and eventually haemorrhage into the lamina propria;
a kontrollmetszetek pozitívnak tekintendők, ha megfigyelhető, hogy a kontrollmetszetek citoplazmatikusan és intranukleárisan jól láthatóan vörös(es) színűre festődnek a szívbelhártya véredényeiben lévő endotél sejtekkel.
spleen stroma distended by erythrocyte accumulation;
A vizsgálati mintaként használt metszet csak akkor tekintendő pozitívnak, ha megállapítható, hogy az endotél sejtek intranukleárisan egyértelműen vörösre festődnek;
slight multifocal to extensive diffuse interstitial haemorrhage with tubular necrosis in the haemorrhagic areas, erythrocyte accumulation in the glomeruli in the kidney;
a kontrollmetszetek akkor tekintendők negatívnak, ha nem megy végbe jelentős színreakció.
erythrophagocytosis in the spleen and secondary haemorrhages in liver and kidney.
Mivel az intranukleáris elhelyezkedés az ortomixovírus nukleoproteinjének a vírus egyik szaporodási szakasza során jelentkező sajátossága, de a citoplazma párhuzamosan bekövetkező festődése gyakran domináns, a citoplazmatikus és az egyéb, nem intranukleáris elhelyezkedésű festődési mintázatok nem tekintendők specifikusnak és meggyőzőnek.
Immunohistochemistry (IHC)
A legerőteljesebb pozitív festődési reakciók rendszerint a szív és a vese endotél sejtjeiben következnek be.
Polyclonal antibody against ISAV nucleoprotein shall be used on paraffin sections from formalin-fixed tissue.
Elképzelhető, hogy az igen nagy kiterjedésű vérzéses sérüléseken belül az endotél sejtek lízise miatt csupán enyhe endotél festődési reakció megy végbe, de ez akár el is maradhat.
The organs to be examined shall be mid-kidney and heart (transitional area including all three chambers and valves).
A MARTEILIA REFRINGENS-FERTŐZÉS FELÜGYELETÉRE ÉS MEGERŐSÍTÉSÉRE SZOLGÁLÓ RÉSZLETES DIAGNOSZTIKAI MÓDSZEREK ÉS ELJÁRÁSOK
Suspected cases due to pathological signs shall be verified with a positive IHC.
I. A Marteilia refringens-fertőzés diagnosztizálására szolgáló részletes diagnosztikai módszerek és eljárások
Histological sections shall be prepared in accordance with standard methods.
A Marteilia refringens-fertőzés tekintetében bizonyos egészségügyi státusoknak az I. melléklet 4. része I. szakaszában meghatározott megszerzése vagy fenntartása céljából, illetve az említett, jegyzékbe foglalt betegség jelenlétének megerősítése vagy gyanújának kizárása céljából a 2006/88/EK irányelv 57. cikkének b) pontja szerint – az I. melléklet 4. részének III. szakaszában foglalt diagnosztikai módszerekkel – végzett mintavétel és laboratóriumi vizsgálat során az e rész I.1., I.2. és I.3. pontjában meghatározott részletes diagnosztikai módszerek és eljárások alkalmazandók.
Preparation of tissue sections
Mintavételi eljárás
The tissues shall be fixed in neutral phosphate-buffered 10 % formalin for at least 1 day, dehydrated in a graded ethanol series, cleared in xylene and embedded in paraffin, according to standard protocols.
Annak érdekében, hogy nagyobb eséllyel lehessen találni fertőzött állatokat, elsősorban nyitott vagy frissen elhullott puhatestű egyedekből kell mintát venni.
Approximately 5 μm thick sections (for IHC placed on poly-L-lysine-coated slides) shall be heated at 56 °C to 58 °C (maximum 60 °C) for 20 minutes, dewaxed in xylene, rehydrated through a graded ethanol series, and stained with haematoxylin and eosin for pathomorphology and IHC in accordance with point (2).
A mintavételt követően az osztrigákat vagy kékkagylókat – ha a mintában vannak nyitott puhatestűek – legfeljebb 24 óráig vagy – ha a mintában nincsenek nyitott puhatestűek – legfeljebb 72 óráig 4 °C-on vagy hűtött jégen, az osztrigák vagy kékkagylók jellegére és származására vonatkozó részletes adatokkal felcímkézett műanyag tasakban kell tárolni.
Staining procedure for IHC
A nyitott vagy frissen elhullott puhatestűeket más puhatestűektől elkülönítetten kell tárolni.
All incubations shall be carried out at room temperature on a rocking platform, unless otherwise provided for in this decision:
A Marteilia refringens szövettani vizsgálattal végzett diagnosztizálásához többek között kopoltyú- és szívszövetek 3–5 mm vastagságú metszetét kell használni.
antigen retrieval shall be done by boiling sections in 0,1 M citrate buffer pH 6,0 for 2 × 6 minutes followed by blocking with 5 % non-fat dry milk and 2 % goat serum in 50 mM TBS (TBS; Tris/HCl 50 mM, NaCl 150 mM, pH 7,6) for 20 minutes;
Egyes vizsgálatokhoz, többek között a szövetlenyomat-vizsgálathoz és a polimeráz láncreakcióhoz (PCR) emésztőmirigy-darabot kell használni.
sections shall then be incubated overnight with primary antibody (monospecific rabbit antibody against ISAV nucleoprotein) diluted in TBS with 1 % non-fat dry milk, followed by three washes in TBS with 0,1 % Tween 20;
Mikroszkópos módszerek
for detection of bound antibodies, sections shall be incubated with Alkaline phosphatase-conjugated antibodies to rabbit IgG for 60 minutes.
Citológiai vizsgálat (lenyomatok citológiai vizsgálata)
Following a final wash, Fast Red (1 mg ml– 1) and Naphthol AS-MX phosphate (0,2 mg ml– 1) with 1 mM Levamisole in 0,1 M TBS (pH 8,2) shall be added to develop for 20 minutes.
Az emésztőmirigy-szövetek nedvszívó papíron történő szárítását követően üveg tárgylemezen több lenyomatot kell készíteni.
Sections shall then be washed in tap water before counterstaining with Harris haematoxylin and mounted in aqueous mounting medium.
A tárgylemezeket – a gyártó útmutatásának megfelelően – levegőn kell megszárítani, metanolban vagy abszolút etanolban kell fixálni, és kereskedelmi forgalomban kapható vérfestő készlettel (például Diff-Quick®/Hemacolor®) kell megfesteni.
ISAV positive and ISAV negative tissue sections shall be included as controls in every setup.
A tárgylemezekre csapvízben történő öblítésüket és szárításukat követően megfelelő szintetikus gyantával fedőlemezt kell helyezni.
Interpretation of the result of IHC
A tárgylemezeket először 200-szoros nagyításban, azt követően pedig olajimmerzió alkalmazásával 1000-szeres nagyításban kell megfigyelni.
The interpretation of the result of the IHC test shall be as set out in points (a) and (b):
Pozitív eredménynek az számít, ha 30–40 μm méretű sejtek figyelhetők meg.
control sections shall be considered as positive, when it is observed that the control sections have clearly visible red-coloured (reddish) cytoplasmic and intranuclear staining of endothelia cells in blood vessels of endocardium.
A citoplazma festődése bazofil, a sejtmagé eozinofil.
A test sample section shall only be regarded as positive if such clear, intranuclear red staining of endothelial cells is found;
A nagy, erősen megfestődött (fénytörő) szemcsék körül hASKány gyűrűk, a nagyobb sejtekben sejten belüli sejtek formációja figyelhető meg.
control sections shall be considered as negative if they don't have any significant colour reaction.
A módszer nem parazitafaj-specifikus.
Since the intranuclear localisation is particular to the orthomyxovirus nucleoprotein during a stage of virus replication but concurrent cytoplasmic staining is often dominant, cytoplasmic and other staining patterns without intranuclear localisation shall be considered as nonspecific or inconclusive.
A kopoltyúkból, az emésztőmirigyből, a köpenyből és az ivarmirigyből származó szövetek metszeteit legalább 24 óráig Davidson-féle fixálóban kell fixálni, ezt paraffinbeágyazásos szövettani vizsgálat és (például hematoxilinnel és eozinnal való) festés céljából történő rendes feldolgozás követi.
The strongest positive staining reactions are usually obtained in endothelial cells of heart and kidney.
A megfigyeléseket egyre részletesebb, legfeljebb 1000-szeres nagyításban kell végezni.
Endothelial staining reactions within very extensive haemorrhagic lesions may be slight or absent, possibly because of lysis of infected endothelial cells.
Pozitív eredménynek az számít, ha 4–40 μm méretű sejtek figyelhetők meg.
DETAILED DIAGNOSTIC METHODS AND PROCEDURES FOR THE SURVEILLANCE AND CONFIRMATION OF INFECTION WITH MARTEILIA REFRINGENS
A korai szakaszokban sokmagvú, gömb alakútól hosszúkásig változó alakú sejtek alakulnak ki.
I. Detailed diagnostic methods and procedures for the diagnosis of infection with Marteilia refringens
Ezek főként a nyelőcső hámszövetében és a gyomorban, néha pedig a szájvitorlákban találhatók.
When sampling and laboratory examination are carried out for the purpose of obtaining or maintaining a health status with regard to infection with Marteilia refringens as set out in Section I of Part 4 of Annex I or to confirm or rule out the presence of that listed disease in accordance with Article 57(b) of Directive 2006/88/EC, using the diagnostic methods set out in Section II of Part 4 of Annex I, the detailed diagnostic methods and procedures set out in points I.1, I.2 and I.3 of this Part shall apply.
A spóraképződés sejten belüli sejtosztódással jár, és az emésztőmirigy csövecskéiben és vezetékeiben megy végbe.
Sampling procedure
A spóraképződés során fénytörő szemcsék jelennek meg, de a korai szakaszokban nem figyelhetők meg.
Gaping or freshly dead individual molluscs shall be sampled by priority, to increase the chances of finding infected animals.
A fertőzés késői szakaszaiban spóratokok figyelhetők meg szabadon az emésztőszervek belső üregeiben.
Once sampled, oysters or mussels shall be maintained at 4 °C or on refrigerated ice for no more than 24 hours if samples include gaping molluscs and no more than 72 hours if not, in a plastic bag including a label with details related to the nature and the origin of the oysters or mussels.
A szemcsék színe sötét narancssárgától mélyvörösig terjedhet.
Gaping or freshly dead molluscs shall be maintained separately from other molluscs.
Molekuláris módszerek
A 3 to 5 mm thick section of tissues including gills and heart tissue shall be used for the diagnostic of Marteilia refringens by histology.
Az I.3.2. pontban ismertetett PCR-protokollokkal való felhasználásra alkalmas és általában kiváló minőségű DNS-t előállító, kereskedelmi forgalomban kapható DNS-kivonási készletek használata megengedett.
A piece of digestive gland shall be used for some tests, including imprints and polymerase chain reaction (PCR).
Polimeráz láncreakció (PCR)
Microscopic techniques
Számos PCR-protokoll kidolgozására és közzétételére került sor.
Cytology (imprint cytology)
A belső átíródó génszakasz (ITS1) régióját célzó PCR-primerek alkalmazandók, mivel azok csak a Marteilia refringens kórokozót képesek amplifikálni.
After drying digestive gland tissues on absorbent paper, several imprints shall be made on a glass slide.
A PCR-t 50 μl térfogatban kell elvégezni.
Slides shall be air-dried, fixed in methanol or in absolute ethanol and stained using a commercially available blood-staining kit such as Diff-Quik®/Hemacolor®, in accordance with the manufacturer's instructions.
A PCR-elegyek puffert (500 mM KCl, 100 mM Tris-HCl [pH: 25 °C-on 9,0] és 1 % Triton® X-100), 2,5 mM MgCl2-t, 0,2 mM dNTP-keveréket, 1 μM forward és reverz primert, 0,02 egység μl– 1 Taq DNS-polimerázt és 10–100 ng kivont DNS-t tartalmaznak.
After rinsing in tap water and drying, the slides shall be mounted with a cover-slip using an appropriate synthetic resin.
A DNS 94 °C-on öt percig végzett denaturálását követően 30 ciklust kell lefuttatni az alábbiak szerint: 94 °C-on egy percig végzett denaturálás, 55 °C-on egy percig tartó primerkötődés, valamint 72 °C-on egy percig végzett elongáció kilobázispáronként.
The slides shall be observed first at × 200 magnification and then under oil immersion at × 1000 magnification.
72 °C-on 10 percig tartó végső elongációs szakaszt kell végrehajtani.
A positive result shall be the observation of cells ranging in size up to between 30 to 40 μm.
A Marteilia refringens kimutatásához az ITS1 régiót célzó primerekkel (5′-CCG-CAC-ACG-TTC-TTC-ACT-CC-3′ és 5′-CTC-GCG-AGT-TTC-GAC-AGA-CG-3′) kell PCR-t végrehajtani.
The cytoplasm stains basophilic, whereas the nucleus stains eosinophilic.
A pozitív kontrolloknak erősen fertőzött gazdaszervezetből származó genomikus DNS-ből vagy a célzott régióra kiterjedő gyűrűs DNS-ből kell állniuk.
Pale halos around large, strongly stained (refringent) granules and, in larger cells, cell within cell arrangements are observed.
A negatív kontrolloknak nem fertőzött gazdaszervezetekből származó genomikus DNS-ből és cél-DNS nélküli PCR-reagensekből kell állniuk.
The technique is not parasite species specific.
Pozitív eredmény a várt méretben (412 bp) jelentkező pozitív PCR-amplifikáció; mindemellett valamennyi negatív kontrollnak negatívnak és valamennyi pozitív kontrollnak pozitívnak kell lennie.
Sections of tissue that include gills, digestive gland, mantle, and gonad shall be fixed for at least 24 hours in Davidson's fixative followed by normal processing for paraffin histology and staining, for example with haematoxylin and eosin.
In situ hibridizáció (ISH)
Observations shall be made at increasing magnifications up to × 1000.
Számos ISH-protokoll kidolgozására és közzétételére került sor.
A positive result shall be the observation of cells ranging in size from 4 up to 40 μm.
Az rRNS génkomplexum kis alegységét (SSU) célzó próba alkalmazandó, mivel az a szövettani vizsgálat vonatkozásában validált próba.
Early stages consist of multinucleate, spheric to elongated cells.
A kopoltyúkból és az emésztőmirigyből származó szövetek metszeteit legalább 24 óráig Davidson-féle fixálóban kell fixálni, ezt paraffinbeágyazásos szövettani vizsgálat céljából történő rendes feldolgozás követi.
These are mainly found in the epithelium of oesophagus and stomach and sometimes of labial palps.
5 μm nagyságú metszeteket kell vágni és azokat amino-alkil-szilán bevonatú tárgylemezekre kell helyezni, amelyeket ezt követően egy éjszakán át 40 °C-on sütőben kell sütni.
Sporulation involves divisions of cells within cells and takes place in the digestive gland tubules and ducts.
A metszeteket 10 percre xilénbe merítve viasztalanítani kell.
Refringent granules appear in the course of sporulation, but are not observed in early stages.
Ezt a lépést egyszer meg kell ismételni, majd az oldószert egymás után kétszer 10 percig abszolútetanol-fürdőben merítéssel kell eltávolítani.
In late phases of infection, sporangia are observed free in the lumen of the digestive tract.
A metszeteket ezt követően fokozatos etanolsorozatba merítéssel kell rehidratálni.
The granules can range from deep orange to deep red.
A metszeteket TE-pufferben (Tris [50 mM], EDTA [10 mM]) K-proteinázzal (100 μg ml – 1) kell kezelni 37 °C-on 30 percig.
Molecular techniques
A tárgylemezeket fokozatos etanolsorozatba merítéssel kell vízteleníteni, és azt követően levegőn kell megszárítani.
DNA extraction kits, which are available commercially and usually produce high quality DNA suitable for use with the PCR protocols as described in point I.3.2, may be used.
A metszeteket 100 μl hibridizációs pufferrel (4 × SSC [standard citrátsó-oldat], 50 % formamid, 1 × Denhardt-féle oldat, 250 μg ml – 1 élesztő tRNS, 10 % dextrán-szulfát) kell inkubálni, amely a digoxigenin-jelölt próbából 10 ng-t (az I.3.2. pontban ismertetett módon, a CCG-GTG-CCA-GGT-ATA-TCT-CG és a TTC-GGG-TGG-TCT-TGA-AAG-GC primerek használatával előkészített PCR-reakcióelegyből 1 μl-t) tartalmaz.
Polymerase chain reaction (PCR)
A metszeteket in situ műanyag fedőlemezzel kell bevonni és 95 °C-on öt percre hevítőblokkra kell helyezni.
Several PCR protocols have been developed and published.
Ezt követően a tárgylemezeket a 42 °C-on nedves kamrában végzendő éjszakai hibridizáció előtt egy percig jégen kell hűteni.
PCR primers that target the internal transcribed spacer (ITS1) region shall be used as they are able to amplify only M. refringens.
A metszeteket kétszer öt percig 2 × SSC oldatban szobahőmérsékleten, valamint 42 °C-on egyszer 10 percig 0,4 × SSC oldatban át kell mosni.
PCR shall be carried out in a 50 μl volume.
A kimutatási lépéseket a gyártó útmutatásának megfelelően kell végrehajtani.
PCR mixtures shall contain buffer (500 mM KCl, 100 mM Tris/HCl [pH 9,0 at 25 °C] and 1 % Triton® X-100), 2,5 mM MgCl2, 0,2 mM dNTP mix, 1 μM forward and reverse primers, 0,02 units μl– 1 Taq DNA polymerase, and 10 to100 ng of extracted DNA.
A tárgylemezeket ezt követően steril desztillált vízben (dH2O) át kell öblíteni.
After denaturation of DNA at 94 °C for five minutes, 30 cycles shall be run as follows: denaturation at 94 °C for one minute, annealing at 55 °C for one minute, and elongation at 72 °C for one minute per kilo-base pair.
A metszeteken Bismarck Brown Yellow festékkel kontrasztfestést kell végezni, azokat desztillált vízben át kell öblíteni, és vizes beágyazó tápfolyadékot alkalmazva fedőlemezeket kell rájuk helyezni.
A final elongation step of 10 minutes at 72 °C shall be performed.
Pozitív kontrollként az ismerten fertőzött gazdaszervezetekből származó metszeteket, negatív kontrollként az ismerten nem fertőzött gazdaszervezetekből származó metszeteket kell használni.
For the detection of M. refringens, PCR shall be performed with primers that target the ITS1 region (5′-CCG-CAC-ACG-TTC-TTC-ACT-CC-3′ and 5′-CTC-GCG-AGT-TTC-GAC-AGA-CG-3′).
Pozitív eredménynek minősül a lila-fekete jelölésű Marteilia refringens-sejtek jelenléte az ismert célszöveteken belül; mindemellett valamennyi negatív kontrollnak negatívnak és valamennyi pozitív kontrollnak pozitívnak kell lennie.
Positive controls shall consist of genomic DNA from a highly infected host or plasmidic DNA including the target region.
Szekvenálás