natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Total RNA extraction
Az amplifikált termék specifikusságát illető gyanú felmerülése esetén mindenesetre másik ISAV-specifikus próbát kell végezni az eredmény ellenőrzése érdekében.
Purified RNA shall be re-suspended in distilled RNase-free water (namely water treated with 0,1 % diethyl pyrocarbonate).
Ennek a próbának az Európai Unióból, az Európai Szabadkereskedelmi Társulásból és az Észak-Amerikából származó izolátumokra kell kiterjednie.
The concentration and purity of the extracted RNA shall be estimated by measuring the optical density at 260 nm and at 280 nm.
Lehetőség szerint az egylépcsős módszert kell alkalmazni, ugyanis az egycsöves próba csökkenti a keresztfertőződés kockázatát.
An alternative approach may be to include internal controls targeted against the virus genome as referred to in point II.1.3.
Forward primer: 5′-CTACACAGCAGGATGCAGATGT-3′;
RT-PCR for ISAV detection
reverz primer: 5′-CAGGATGCCGGAAGTCGAT-3′;
Several RT-PCR methods may be used for ISAV genome amplification.
valamint próba: 5′-FAM- CATCGTCGCTGCAGTTC – MGBNFQ-3′.
A two-step RT-PCR may be performed whereby the RT and the PCR reactions steps are run in two separate tubes.
Ciklusparaméterek: 1 ciklus 50 °C-on 30 percig, 1 ciklus 95 °C-on 15 percig, 40 ciklus 94 °C-on 15 másodpercig, 60 °C-on 60 másodpercig; szükség esetén kiigazítandó.
However, a one-step reaction, where the two reactions are run in one tube, may also be performed.
PCR-termékek amplifikált szekvenálása
The one-step method shall be used where possible, as the one tube assay minimises the risk of cross-contamination as no transfer of content have to be made and it is regarded to be as sensitive as the two-step method.
Forward primer (ILAs6-3F): 5′-ATGAGGGAGGTAGCATTGCA-3′;
The primers and assay described in this point, namely the ILA1 or ILA2 primer pair that target segment 8 and which have been found suitable for detection of ISAV in outbreaks and in carrier fish, shall be used.
reverz primer (ILAs6-2R): 5′-CATGCTTTCCAACCTGCTAGGA-3′.
The ILA2 reverse primer does not match isolates from North America and an alternative primer set shall be used in those cases.
Ciklusparaméterek (egylépcsős RT-PCR): 1 ciklus 50 °C-on 30 percig, 1 ciklus 94 °C-on 15 percig, 40 ciklus 94 °C-on 30 másodpercig, 55 °C-on 30 másodpercig, 72 °C-on 60 másodpercig, 1 ciklus 72 °C-on 5 percig; szükség esetén kiigazítandó.
Forward primer (ILA1): 5′-GGCTATCTACCATGAACGAATC-3′;
Alternatív módszerként a HPR 6. szegmensben történő szekvenálására szolgáló módszer is alkalmazható:
Reverse primer (ILA2): 5′-GCCAAGTGTAAGTAGCACTCC-3′.
reverz primer: 5′-GAT-GGT-GGA-ATT-CTA-CCT-CTA-GAC-TTG-TA-3′.
Cycling conditions: one cycle of 50 °C for 30 minutes, 1 cycle of 94 °C for 15 minutes, 40 cycles of 94 °C for 30 seconds, 55 °C for 30 seconds, 72 °C for 60 seconds; one cycle of 72 °C for 5 min.
A termék mérete: HPR0 esetén 304 nt.
Product size 155 bp.
Az e pontban ismertetett próbákéhoz hasonló érzékenységű és specifikusságú RT-PCR-próbák is alkalmazhatók.
However, other RT-PCR versions of proven similar efficacy may be used instead.
Az amplifikált RT-PCR-termék tisztaságát a szekvenálás előtt gélelektroforézissel kell ellenőrizni.
RT-qPCR for ISAV detection
Ha csak egy tiszta fragmens jelenik meg, azt közvetlenül a polimeráz láncreakcióból kell megtisztítani.
The use of RT-qPCR may increase specificity and probably also sensitivity.
Ha több amplifikált fragmens fordul elő, a lényeges fragmenst gélelektroforézissel kell megtisztítani.
The method can be performed more rapidly as no gel electrophoresis step is required and it reduces the risk of cross contamination as it is possible to estimate the amount of viral genomic RNA within the sample tube.
A PCR-fragmensek oldatokból vagy agarózgélből történő kitisztítását a gyártó útmutatása szerint PCR-fragmensekhez alkalmazott affinitásoszlopok segítségével kell végezni.
A drawback of the RT-qPCR assay is that it is often not possible to sequence amplified products.
A szekvenálást szekvenálásra szakosodott külső cégeknél kell végezni amplifikált primerek használatával.
However, if there is doubt on the specificity of the amplified product, another ISAV specific assay must be run to verify the result.
A szekvenálás eredményeit a szekvenciákra és az USA Országos Biotechnológiai Információs Központjának (NCMI) nukleotid-adatbázisában lévő egyéb ismert szekvenciákkal való összehasonlításra irányuló BLAST keresés segítségével kell elemezni.
This assay shall cover isolates from the European Union, the European Free Trade Association and North America.
Az ISAV sejttenyészeteken végzett izolálása
The one-step method shall be used where possible, because the one tube assay minimises the risk of cross-contamination.
Minták előkészítése
Forward primer: 5′- CTACACAGCAGGATGCAGATGT -3′;
A szövetek – 80 °C-on tárolhatók.
Reverse primer: 5′- CAGGATGCCGGAAGTCGAT -3′;
A szöveteket a vizsgálat előtt csak egyszer lehet lefagyasztani és felolvasztani.
and probe: 5′-FAM- CATCGTCGCTGCAGTTC – MGBNFQ-3′.
Felügyeleti és járványvédelmi okokból vizsgálatot a lehető leggyorsabban el kell végezni.
Cycling conditions: one cycle of 50 °C for 30 minutes, one cycle of 95 °C for 15 minutes, 40 cycles of 94 °C for 15 seconds, 60 °C for 60 seconds; it shall be adjusted if necessary.
Minden mintát (szállítóoldatban tárolt szövetelegyet) validált homogenizáló készülék segítségével teljesen homogenizálni kell, majd és 0–6 °C között 2000–4000 × g fordulaton 15 percig centrifugálni kell, a felülúszót le kell szűrni (0,45 μm), és az IPNV endemikusan előforduló szerotípusai elleni antiszérumokból összeállított, megfelelően hígított ugyanilyen térfogatú eleggyel inkubálni kell.
Sequencing of amplified PCR products
50 %-os plakkredukciós vírusneutralizációs próbában az antiszérum titerének legalább 1:2000-nek kell lennie.
Forward primer (ILAs6-3F): 5′-ATGAGGGAGGTAGCATTGCA -3′;
A keveréket egy óráig kell inkubálni 15 °C-on.
Reverse primer (ILAs6-2R): 5′-CATGCTTTCCAACCTGCTAGGA -3′.
Ez adja az inokulumot.
Cycling conditions (One-step RT-PCR): one cycle of 50 °C for 30 minutes, one cycle of 94 °C for 15 minutes, 40 cycles of 94 °C for 30 seconds, 55 °C for 30 seconds, 72 °C for 60 seconds, one cycle of 72 °C for 5 minutes; it shall be adjusted if necessary.
Az összes inokulumnak a fertőző hasnyálmirigy-elhalás vírus (IPN-vírus) (Európa egyes részein a halminták 50 %-ában előforduló vírus) elleni antiszérummal végzett kezelése az IPN-vírus által előidézett citopatogén hatás (CPE) kialakulásának megelőzését célozza a beoltott sejttenyészetekben.
Alternatively, the following method for sequencing HPR in segment 6 may be used:
Ilyen kezelés a virológiai vizsgálatok időtartamának, valamint azon esetek számának csökkentése érdekében végezhető, amikor a CPE előfordulását az ISAV-ra utaló esetleges jelzésként kellene értékelni.
Forward primer: 5′-GAC-CAG-ACA-AGC-TTA-GGT-AAC-ACA-GA-3′;
Ha a minták IPN-től mentesnek minősülő termelési egységekből származnak, az inokulumok IPN-vírus elleni antiszérummal végzett kezelése elhagyható.
Reverse primer: 5′-GAT-GGT-GGA-ATT-CTA-CCT-CTA-GAC-TTG-TA-3′;
Sejttenyészetekre oltás
Product size: 304 nt if HPR0.
Az ISAV elsődleges izolálásához atlanti lazac veséjéből vett sejteket (ASK-sejteket) kell használni.
RT-PCR assays with similar sensitivities and specificities to the assays described in this point may also be used.
Más, igazolt hatékonyságú és érzékenységű sejtvonalak is használhatók az ISAV izolálására, figyelembe véve a törzsek változékonyságát és a különböző törzsek azon képességét, hogy különböző sejtvonalakban szaporodjanak.
The purity of the amplified RT-PCR product shall be checked by gel electrophoresis before sequencing.
Úgy tűnik, hogy az ASK-sejtek alacsony passzálási szint alkalmazása esetén elősegítik a jelenleg ismert vírusizolátumok izolációját és növekedését.
If only one pure fragment appears, it shall be purified directly from the PCR reaction.
Az ASK-sejtekben erőteljesebb citopatogén hatás (CPE) jelentkezhet, mint más fogékony sejtvonalaknál, például az SHK-1 sejtvonalnál (a lazac fejveséje–1).
If multiple amplified fragments are present, the fragment of interest shall be purified by gel electrophoresis.
ASK-sejteket (legfeljebb 65 passzázsszámú) kell növeszteni mikrotiterlemezeken 10 % magzati borjúszérumot, 2 térfogatszázalék 200 mM L-glutamint és 0,08 térfogatszázalék 50 mM 2-merkaptoetanolt tartalmazó L-15 tápfolyadékban.
The purification of PCR fragments from solutions or agarose gels shall be made using PCR fragment affinity spin columns, according to the manufacturer's instructions.
Az antiszérummal kezelt szervszuszpenziót fiatal, aktívan növekvő sejttenyészetekbe kell oltani úgy, hogy a szövetminta végső hígítása a tápoldatban 1:1000 legyen.
Sequencing shall be performed using amplification primers at external specialised sequencing companies.
Minden szervszuszpenzióból 40 μl inokulumot kell a 2 ml tápfolyadékot tartalmazó vájulatba adagolni.
The results shall be analysed with the search tool BLAST and the sequences shall be compared with other known sequences in the US National Centre for Biotechnical Information (NCBI) nucleotide database.
A keresztfertőződés kockázatának minimalizálása érdekében külön 12 vagy 24 lyukú lemezeket kell használni a különböző halgazdaságokból származó mintákhoz.
Sequencing must eliminate any doubt on the specificity of an amplified RT-PCR product.
Egy lemezt beoltatlanul kell hagyni, amely negatív kontrollként fog szolgálni.
ISAV isolation on cell cultures
Pozitív kontrollként egy külön lemezt be kell oltani az ISAV referenciaizolátumával, a következők szerint.
Preparation of samples
100 μl ISAV-törzspreparátumot (minimális titer: 107 szövettenyészet-fertőző adag az 50 %-os végpontnál (TCID50 ml– 1)) be kell oltani az első vájulatba, majd el kell keverni.
The tissue may be kept at – 80 °C.
Ezen anyag adott mennyiségét át kell helyezni az első vájulatból a második vájulatba, hogy 1:10 hígítást adjon, és el kell keverni.
The tissue shall only be frozen and thawed once before examination.
Ezt a műveletet az egész lemezen meg kell ismételni, hogy hat 10-szeres hígítás keletkezzen.
For surveillance and control purposes, the examination shall be undertaken as fast as possible.
A törzs-ISAV – 80 °C-on legalább két évig tárolható, de a felolvasztást követően három napon belül fel kell használni.
Each sample (tissue pool in transport solution) shall be completely homogenised using a validated homogeniser, centrifuged at 2000 to 4000 × g for 15 minutes at 0 to 6 °C, and the supernatant shall be filtered (0,45 μm) and incubated with an equal volume of a suitably diluted pool of antisera to the indigenous serotypes of IPNV.
Ügyelni kell a vizsgálati lemezek pozitív kontrollanyaggal való keresztfertőződésének megakadályozására.
The titre of the antiserum must be at least 1:2000 in a 50 % plaque neutralisation test.
E kockázat elkerülése érdekében a pozitív kontrollokat a vizsgálati lemezektől elkülönítve kell elkészíteni és kezelni.
The mixture shall be incubated for one hour at 15 °C.
Az ASK-sejtek ISAV-izolátumokkal szembeni érzékenységére irányuló, hathavonkénti vizsgálat felválthatja a pozitív kontroll minden egyes beoltáskor történő alkalmazását.
This shall represent the inoculum.
A mintákat 15 ± 2 °C-on kell inkubálni legfeljebb 15 napig.
Treatment of all inocula with antiserum to Infectious pancreatic necrosis virus (a virus which in some parts of the Europe occurs in 50 % of fish samples) aims at preventing cytopatic effect (CPE) due to IPN virus from developing in inoculated cell cultures.
Mikroszkóp használatával az inkubálást követő 5–7. és 12–14. napon a sejttenyészeteket kétszer meg kell vizsgálni a CPE tekintetében.
To reduce the duration of the virological examinations as well as the number of cases in which occurrence of CPE would have to be considered potentially indicative of ISAV, such treatment may be carried out.
Ha bármely elegy CPE-t mutat, a vírusazonosítási eljárást a II.2.4. pontnak megfelelően azonnal meg kell kezdeni.
When samples come from production units which are considered free from IPN, the treatment of inocula with antiserum to IPN virus may be omitted.
Ha a 14. napig nem figyelhető meg CPE, indirekt fluoreszcens ellenanyag-vizsgálatot (IFAT), hemadszorpciós próbát vagy RT-PCR-t kell végezni.
Inoculation on cell cultures
A 13–15. nap között passzálást kell végezni.
Atlantic salmon kidney (ASK) cells shall be used for primary ISAV isolation.
A tenyészetből származó felülúszót megfelelő hígításban (1:10) a mikrotiterlemezek friss, aktívan növekvő sejteket tartalmazó vájulataiba kell tenni, majd 14 ± 2 °C-on legfeljebb 18 napig inkubálni kell.
Other cell lines of proven efficacy and sensitivity in isolating ISAV may be used, taking into consideration strain variability and the ability of different strains to replicate in different cell lines.
A sejttenyészeteket a CPE tekintetében kétszer, a beoltást követő 5–7. és a 14–18. nap között mikroszkóp alatt meg kell vizsgálni.
The ASK cells seem to support isolation and growth of the hitherto known virus isolates, as long as a low passage level is used.
Ha a 14–18. napig nem figyelhető meg CPE, hemadszorpciós próbát vagy RT-PCR-t kell végezni.
A more distinct cytopathic effect (CPE) may appear in ASK cells than in other susceptible cell lines like SHK-1 (Salmon head kidney-1).
Ha az inkubálás első hét napjában citotoxicitás alakul ki, már ebben a stádiumban passzálást kell végezni, és a sejteket 14–18 napon át inkubálni kell, majd újra passzálást kell végezni, és a sejteket 14–18 napig ismét inkubálni kell.
ASK (pass 65 or lower) cells shall be grown in L-15 medium containing 10 % foetal bovine serum, 2 % (vol:vol) 200 mM L-glutamine, and 0,08 % (vol:vol) 50 mM 2-mercaptoethanol in multi-well plates.
Ha a citotoxicitás hét nap után alakul ki, egyszer kell passzálást végezni, és a sejteket az első beoltástól számított 28–36 napos teljes inkubációs idő eléréséig kell inkubálni.
Antiserum-treated organ suspension shall be inoculated into young actively growing cell cultures to give a final dilution of tissue material to culture medium of 1:1000.
Ha bakteriális fertőzés alakul ki az elsődleges tenyészetben, a tesztet ismét el kell végezni a – 80 °C-on tárolt szövethomogenizátum felhasználásával.
For each organ, suspension 40 μl of inoculum shall be added to one well containing 2 ml of culture medium.
A beoltást megelőzően a szövethomogenizátumot 4000 × g fordulaton, 15–30 percig, 0–6 °C közötti hőmérsékleten centrifugálni kell, és a felülúszót 0,22 μm-es szűrőn át kell szűrni.
To minimise the risk of cross-contamination, separate 12- or 24-well plates shall be used for samples from different fish farm sites.
Ha a bakteriális fertőzés a passzálási szakaszban lép fel, a felülúszót 0,22 μm-es szűrőn át kell szűrni, friss sejtekre kell oltani, és további 14–18 napig inkubálni kell.
One plate shall be left uninoculated to serve as a negative control.
Vírusazonosítási vizsgálatok
A separate plate shall be inoculated with a reference isolate of ISAV as a positive control, as follows.
Ha bármely szakaszban CPE jelei mutatkoznak, vagy ha egy hemadszorpciós próba pozitív, vírusazonosítást kell végezni.
One hundred μl of a stock preparation of ISAV (minimum titre 107 Tissue culture infective dose at the 50 % end point (TCID50 ml– 1)) shall be inoculated into the first well and mixed.
Az ISAV azonosítására szolgáló módszerként a II.1. pont szerinti RT-PCR vagy a II.2.6. pont szerinti immunfluoreszcens (IF-) próba választható.
A volume of this material shall be transferred from the first well to the second well to make a 1:10 dilution and mixed.
Ha úgy tűnik, hogy más vírusok is jelen lehetnek, kiegészítő vírusazonosítási vizsgálatokat kell végezni.
This shall be repeated across the plate to make six 10-fold dilutions.
Ha e vizsgálatok eredményeként a vírus végleges azonosítása sikertelen, akkor a felülúszót azonnali azonosítás céljából továbbítani kell:
Stock ISAV may be stored at – 80 °C for at least 2 years but once thawed must be used within 3 days.
az Állat-egészségügyi Világszervezet (OIE) ISA-val foglalkozó referencialaboratóriumába, vagy
Care shall be taken to prevent cross-contamination of test plates with positive control material.
egy nemzeti referencialaboratóriumba vagy a 2006/88/EK irányelv VI. mellékletében említett, halbetegségekkel foglalkozó uniós referencialaboratóriumba.
To avoid that risk, positive controls shall be set up and handled separately from test plates.
Hemadszorpció
A sensitivity test every 6 months of ASK cells towards ISAV isolates may replace the use of including a positive control at each inoculation.
Az ISAV sejttenyészetben történő szaporítása nem mindig eredményez CPE-t, ezért minden vájulatot az e pontban foglaltak szerint RT-PCR-próbának vagy hemadszorpciós próbának, vagy a II.2.6. pontban foglaltak szerinti IF-próbának kell alávetni.
Samples shall be incubated at 15 ± 2 °C for up to 15 days.
A sejttenyésztő tápfolyadékot minden vájulatból – beleértve a pozitív és negatív kontrollokat is – ki kell venni, és felcímkézett steril csövekbe kell helyezni.
Using a microscope, cell cultures shall be examined for CPE twice, between 5 to 7 and 12 to 14 days following inoculation.
Minden vájulathoz 500 μl 0,2 térfogat-százalékos mosott nyúl- vagy lóvörösvértest-szuszpenziót vagy 0,05 térfogat-százalékos mosott szivárványospisztráng- vagy atlantilazacvörösvértest-szuszpenziót kell adni, és szobahőmérsékleten 45 percig kell inkubálni.
If any pool shows CPE, virus identification procedures shall be initiated immediately in accordance with point II.2.4.
A vörösvértesteket el kell távolítani és minden vájulatot kétszer át kell mosni L-15 tápfolyadékkal.
If no CPE is observed by day 14, an Indirect fluorescent antibody test (IFAT), haemadsorption or RT-PCR shall be performed.
Mikroszkóp alatt minden vájulatot meg kell vizsgálni.
Subcultivation shall be carried out between days 13 to 15.
Az ASK-sejtek felületére tapadó vörösvértest-csoportok az ortomixovírussal történt valószínű fertőződést jeleznek.
Culture supernatant shall be added to wells containing fresh actively growing cells in appropriate dilution (1/10) in multi-well plates and incubated at 14 ± 2 °C for up to 18 days.
Ha a hemadszorpciós próba pozitív, a II.2.4. pontnak megfelelően azonnal el kell végezni a vírusazonosítási vizsgálatot.
Using a microscope, cell cultures shall be examined for CPE twice, between days five to seven and days 14 to 18 following inoculation.
Immunfluoreszcens (IF-) próba
If no CPE is observed by days 14 to 18, a haemadsorption or an RT-PCR test shall be performed.
ASK-sejteket (legfeljebb 65 passzázsszámú) kell növeszteni mikrotiterlemezeken 10 % magzati borjúszérumot, 2 térfogatszázalék 200 mM L-glutamint és 0,08 térfogatszázalék 50 mM 2-merkaptoetanolt tartalmazó L-15 tápfolyadékban, és azokat 50 %-nál nagyobb konfluencia esetén kell felhasználni.
If cytotoxicity occurs within the first 7 days of incubation, subcultivation shall be performed at that stage, and the cells shall be incubated for 14 to 18 days and sub cultivated again with a further period of 14 to 18 days incubation.
Más, igazolt hatékonyságú sejtvonalak vagy tápfolyadékok is használhatók.
If cytotoxicity occurs after 7 days, subcultivation shall be performed once and the cells shall be incubated to achieve the total period of 28 to 36 days incubation from the primary inoculation.
Egyenként 225 μl vélelmezetten vírusfertőzött tenyészetből származó felülúszót kell bevinni két vájulatba, össze kell keverni, majd 225 μl-t – 1:5 arányú hígításban – át kell vinni két másik vájulatba.
If bacterial contamination occurs in the primary culture, the test shall be set up again using the tissue homogenate stored at – 80 °C.
Két további vájulatot kontroll céljára beoltatlanul kell hagyni.
Prior to inoculation, the tissue homogenate shall be centrifuged at 4000 × g for 15 to 30 minutes at 0 to 6 °C and the supernatant shall be filtered at 0,22 μm.
Az egyes halgazdaságokból származó mintákat külön lemezeken kell kezelni, csakúgy, mint a víruskontrollt.
If bacterial contamination occurs during the subcultivation step the supernatant shall be filtered at 0,22 μm, inoculated onto fresh cells and incubated for a further 14 to 18 days.
A víruskontrollt az ISAV referenciaizolátumának felhasználásával kell létrehozni.
Virus identification tests
A lemezeket 14 ± 2 °C-on inkubálni kell és mikroszkóppal legfeljebb hét napig kell vizsgálni.
If evidence of CPE is observed at any stage, or if a haemadsorption test is positive, virus identification shall be carried out.
Ha korai CPE állapítható meg, vagy ha hét napon belül nem figyelhető meg CPE, a következő lépés a fixálás.
The methods of choice for the identification of ISAV shall be RT-PCR in accordance with point II.1 and Immunofluorescence (IF) in accordance with point II.2.6.
A vájulatokat foszfáttal pufferelt sóoldattal (PBS) át kell mosni, és 80 %-os acetonban, szobahőmérsékleten, 20 percig végzett inkubálással kell fixálni.
If it is considered that other viruses may be present, supplementary virus identification tests shall be carried out.
A lemezeket levegőn meg kell szárítani, és azonnal meg kell festeni, vagy megfestés előtt 0–6 °C között legfeljebb 24 óráig kell tárolni.
If those tests have not resulted in a definitive identification of the virus within 1 week, the supernatant shall be forwarded for immediate identification to:
A párhuzamos vájulatokat meg kell festeni ISAV-val szembeni 3H6F8 és 1OC9F5 monoklonális ellenanyag keverékével vagy más, igazoltan hatékony és specifikus monoklonális ellenanyaggal, PBS-sel kell hígítani és 37 ± 4 °C-on 30 percig inkubálni kell.
the World Organisation for Animal Health (OIE) reference laboratory for ISA, or;
A monoklonális ellenanyagot el kell távolítani, és a lemezeket 0,05 % Tween 20-at tartalmazó PBS-sel háromszor át kell mosni.
a national reference laboratory or the EU reference laboratory for fish diseases as referred to in Annex VI to Directive 2006/88/EC.
PBS-sel hígított antiegér IgG fluoreszcein-izotiocianát (FITC) konjugátumot kell adni minden vájulathoz, és 37 ± 4 °C-on 30 percig inkubálni kell.
Haemadsorption
A monoklonális ellenanyag és az FITC-konjugátum különböző tételeinek hígítását minden laboratóriumban optimalizálni kell.
As replication of ISAV in cell cultures does not always result in a CPE, every well shall be subject to an RT-PCR test or a haemadsorption test in accordance with this point, or an IF test in accordance with point II.2.6.
Az ellenanyagot el kell távolítani és a lemezeket 0,05 % Tween 20-at tartalmazó PBS-sel háromszor át kell mosni.
Cell culture medium shall be removed from each well, including those of positive and negative controls, and placed in labelled sterile tubes.
A vájulatokat haladéktalanul meg kell vizsgálni az FITC gerjesztéséhez megfelelő szűrővel felszerelt, fluoreszcens mikroszkópos vizsgálatra előkészített inverz mikroszkóppal.
500 μl of a 0,2 % (vol:vol) suspension of washed rabbit or horse red blood cells, or a 0,05 % (vol:vol) suspension of washed rainbow trout or Atlantic salmon red blood cells, shall be added to each well and incubated at room temperature for 45 minutes.
A próbát pozitívnak kell tekinteni, ha fluoreszcens sejtek figyelhetők meg.
The red blood cells shall be removed and each well shall be washed twice with L-15 medium.
Ahhoz, hogy a próba érvényes legyen, a pozitív kontrolloknak pozitív, a negatívaknak negatív eredményűnek kell lenniük.
Each well shall be examined using a microscope.
Egyéb szövetek vizsgálata
The presence of clusters of red blood cells attaching to the surface of ASK cells shall be indicative of presumptive infection with an orthomyxovirus.
A II.2.6. pontban említett módszer halakból származó más szöveteken, például májból, lépből és szívből származó szöveteken is alkalmazható, feltéve, hogy megfelelő mennyiségű endotél sejtet, leukocitát vagy limfocitát lehet a tárgylemezre felvinni.
If a haemadsorption test is positive, a virus identification test shall be performed immediately in accordance with point II.2.4.
A festési eljárás minden szövet esetében ugyanaz, bár egyes szöveteknél előnyös lehet a propidium-jodiddal végzett festés elhagyása, és a lenyomatban található sejttípusok meghatározásához ilyenkor a fáziskontraszt-megvilágításra kell támaszkodni.
Immunofluorescence (IF)
Szövettani vizsgálat