natgillin/translations-raw huggingface dataset:
The QC test is conducted in a 24-well plate and follows the same incubation, dosing, cell viability/cytotoxicity, hormone extraction and hormone analysis procedures described in paragraphs 38 through 46 for testing chemicals.
Ha a sejtéletképességet/citotoxicitást nem kell azonnal mérni, 200 μl PBS-t (Ca2+ és Mg2+ ionokkal) adunk az egyes lyukakhoz.
The QC plate contains blanks, solvent controls, and two concentrations of a known inducer (forskolin, 1, 10 μM) and inhibitor (prochloraz, 0,1, 1 μM) of E2 and T synthesis.
A táptalajokat – 80 °C-on fagyasztjuk le a hormonkoncentrációk elemzését célzó további feldolgozásig (lásd a 44–46. bekezdést).
In addition, MeOH is used in select wells as a positive control for the viability/cytotoxicity assay.
Bár a T és az E2 a – 80 °C-on tartott táptalajban általában legalább 3 hónapig stabil marad, minden laboratóriumnak dokumentálnia kell a hormonok stabilitását a tárolás során.
A detailed description of the plate layout is provided in Table 4.
A táptalaj eltávolítása után azonnal meghatározzuk a sejtek életképességét és a citotoxicitást az egyes expozíciós lemezeken.
The criteria to be met on the QC plate are listed in Table 5.
A sejtek életképességének meghatározása
The minimum basal hormone production for T and E2 should be met in both the solvent control and blank wells.
Szabadon választott sejtéletképességi/citotoxicitási vizsgálatot lehet használni a vizsgált vegyi anyag sejtek életképességére gyakorolt potenciális hatásának meghatározására.
Table 4 Quality control plate layout for testing performance of unexposed H295R cells and cells exposed to known inhibitors (PRO = prochloraz) and stimulators (FOR = forskolin) of E2 and T production.
A vizsgálatnak alkalmasnak kell lennie arra, hogy pontosan mérje az adott lyukban lévő életképes sejtek százalékos arányát, vagy igazolni kell, hogy a vizsgálat közvetlenül összehasonlítható (lineáris függvénye) a Live/Dead® Assay-vel (lásd a validálási jelentés III. függelékét (4)).
After termination of the exposure experiment and removal of medium, a 70 % methanol solution will be added to all MeOH wells to serve as a positive control for cytotoxicity (see cytotoxicity assay in Appendix III to the validation report (4))
Egy másik vizsgálatról, az MTT-vizsgálatról [3-(4,5-dimetil-tiazol-2-il)-2,5-difenil-tetrazólium-bromid] (18) kimutatták, hogy ugyanolyan jól működik.
Blank [23]
A sejtek életképességének a fenti módszerek alkalmazásával történő értékelése egy relatív mérés, amely nem szükségszerűen mutat lineáris kapcsolatot a lyukban lévő sejtek abszolút számával.
Blank [23](+ MeOH) [24]
Ezért az elemzőnek el kell végeznie minden lyuk szubjektív képi értékelését is, illetve digitális képeket kell készítenie és archiválnia kell azokat az SC-kről és a két legnagyobb nem citotoxikus koncentrációról a valós sejtsűrűség későbbi értékelése céljára, amennyiben erre lenne szükség.
(+ MeOH) [24]
Ha a vizuális ellenőrzés során úgy tűnik, vagy ha az életképességi/citotoxicitási vizsgálat azt mutatja, hogy a sejtek száma megnövekedett, a látszólagos növekedést ellenőrizni kell.
Table 5
Ha a sejtszám növekedése megerősítésre kerül, ezt jelezni kell a vizsgálati jegyzőkönyvben.
Performance criteria for the Quality Control Plate
A sejtek életképességét az SC-k átlagos válaszához viszonyítva fejezzük ki, amelyet 100 %-ban életképes sejtekből állónak tekintünk, és kiszámítása az alkalmazott sejtéletképességi/citotoxicitási vizsgálatnak megfelelően történik.
Basal Production of hormone in the solvent control (SC)
Az MTT-vizsgálat esetében a következő képletet lehet használni:
≥ 5 times the LOQ
életképes sejtek % = (válasz a lyukban – átlagos válasz a MeOH-kezelt lyukakban [= 100 % halott]) ÷ (átlagos válasz az SC-lyukakban – átlagos válasz a MeOH-kezelt lyukakban [= 100 % halott])
≥ 2,5 times the LOQ
Az SC-k átlagos életképességéhez (= 100 %-os életképesség) viszonyított 80 %-nál alacsonyabb életképességet mutató lyukakat nem kell figyelembe venni az adatok végső elemzésénél.
Induction (10 μM forskolin)
A szteroidogenezis csaknem 20 %-os citotoxicitás mellett történő gátlását gondosan mérlegelni kell annak biztosítása érdekében, hogy nem a citotoxicitás az oka a gátlásnak.
≥ 1,5 times the SC
Hormonanalízis
≥ 7,5 times the SC
Minden laboratórium az általa kiválasztott hormonmérési rendszert használhatja a T és az E2 analíziséhez.
Inhibition (1μM prochloraz)
Az egyes kezelési csoportok táptalajának tartalék alikvotjait hígítások készítésére lehet használni, hogy a koncentrációt a standard görbe lineáris részébe hozzuk.
≤ 0,5 times the SC
Amint az a 29. bekezdésben kihangsúlyozásra került, a laboratóriumoknak a QC-futtatások vagy a vegyi anyagok vizsgálata előtt belső hormon kontrollal kezelt kiegészített táptalaj elemzésével bizonyítania kell, hogy a hormonmérési rendszere (pl. ELISA, RIA, LC-MS, LC-MS/MS) megfelel a QC-kritériumoknak.
CHEMICAL EXPOSURE PROCEDURE
Annak érdekében, hogy a vizsgálati rendszer összetevői ne zavarják a hormonok mérését, szükség lehet a hormonok kivonására a táptalajból a mérés előtt (az extrakció szükséges vagy nem szükséges voltának eldöntését megalapozó feltételeket lásd a 30. bekezdésben).
The pre-incubated cells are removed from the incubator (paragraph 21) and checked under a microscope to assure that they are in good condition (attachment, morphology) prior to dosing.
Az extrakciót javasolt a validálási jelentés III. függelékben foglalt eljárásoknak megfelelően elvégezni (4).
The cells are placed in a bio-safety cabinet and the supplemented medium removed and replaced with new supplemented medium (1 ml/well).
Amennyiben kereskedelmi tesztkészletet használunk a hormontermelés mérésére, a hormonanalízist a vizsgálati készlet gyártójának kézikönyvében megadottak szerint kell végezni.
DMSO is the preferred solvent for this test method.
A legtöbb gyártó egyedülálló eljárással rendelkezik a hormonanalízisek elvégzésére.
However, if there are reasons for using other solvents the scientific rationale should be described.
A minták hígításait úgy kell módosítani, hogy az oldószer kontrollok várható hormonkoncentrációi az adott vizsgálat standard görbéje lineáris tartományának középpontjába essenek (a validálási jelentés III. függeléke (4)).
Cells are exposed to the test chemical by adding 1 μl of the appropriate stock solution in DMSO (see Appendix II to the validation report (4)) per 1 ml supplemented medium (well volume).
A standard görbe lineáris részén kívüli értékeket el kell utasítani.
This results in a final concentration of 0,1 % DMSO in the wells.
A végső hormonkoncentráció kiszámítása az alábbiak szerint történik:
To assure adequate mixing it is generally preferred that the appropriate stock solution of the test chemical in DMSO is mixed with supplemented medium to yield the desired final concentration for each dose, and the mixture added to each well immediately after removal of old medium.
Példa:
If this option is used, the concentration of DMSO (0,1 %) should remain consistent among all wells.
Kivont anyag:
The wells containing the greatest two concentrations are visually assessed for formation of precipitates or cloudiness as an indication of incomplete solubility of the test chemical by using a stereo microscope.
450 μl táptalaj
If such conditions (cloudiness, formation precipitates) are observed, wells containing the next lesser concentrations are examined as well (and so forth) and concentrations that did not completely go into solution are to be excluded from further evaluation and analysis.
Rekonstituálva:
The plate is returned to the incubator at 37 °C under a 5 % CO2 in air atmosphere for 48 hours.
250 μl vizsgálati pufferben
The test chemical plate layout is shown in Table 6.
Hígítás a vizsgálatban:
Stocks 1 -7 show placement of increasing doses of test chemical.
1:10 (ahhoz, hogy a minta a standard görbe lineáris tartományába kerüljön)
Table 6
Hormonkoncentráció a vizsgálatban:
Dosing schematic for the exposure of H295R cells to test chemicals in a 24 well plate
150 pg/ml (már hozzáigazítva a vizsgált minta ml-enkénti koncentrációjához)
Stock 4
Kinyerési fok:
Stock 1
Végső hormonkoncentráció =
Stock1
(hormonkoncentráció (ml-enként) ÷ kinyerési fok) × (hígítási faktor)
Stock 5
(150 pg/ml) ÷ (0,89) × (250 μl/450 μl) ×10 = 936,3 pg/ml
Stock 2
A tesztkoncentrációk megválasztása
Stock 6
A legalább két, egymástól független futtatást kell a vizsgálatból végezni.
Stock 3
Ha az első futtatás eredményei nem egyértelműek (azaz az SC-hez viszonyított valahányszoros változás csak egyetlen koncentrációban statisztikailag szignifikáns) vagy pozitívak (azaz a valahányszoros változás két vagy több szomszédos koncentrációban is statisztikailag szignifikáns), a vizsgálatot a 7. táblázatnak megfelelően a kiválasztott vizsgálati koncentráció finomításával meg kell ismételni.
Stock 7
A második és harmadik futtatásban (ha van ilyen) alkalmazott tesztkoncentrációkat az első futtatás eredményei alapján ki kell igazítani, a hatást kiváltó koncentrációkat 1/2 log koncentráció intervallumokkal közrefogva (pl. ha 0,001, 0,01, 0,1, 1, 10, 100, 1000 μM eredeti futtatása indukciót eredményezett az 1 és 10 μM koncentrációknál, a második futtatásban a vizsgált koncentrációknak 0,1, 0,3, 1, 3, 10, 30, 100 μM-nak kell lenniük), kivéve, ha alacsonyabb koncentrációkat kell alkalmazni a LOEC eléréséhez.
After 48 hours the exposure plates are removed from the incubator and every well is checked under the microscope for cell condition (attachment, morphology, degree of confluence) and signs of cytotoxicity.
Az utóbbi esetben a második futtatásban legalább öt, az első futtatásban vizsgált legalacsonyabb koncentráció alatti koncentrációt kell használni fél-logaritmikus skála segítségével.
The medium from each well is split into two equal amounts (approximately 490 μl each) and transferred to two separate vials appropriately labelled (i.e. one aliquot to provide a spare sample for each well).
Ha a második futtatás nem erősíti meg az első futtatást (azaz statisztikai szignifikancia nem fordul elő a korábban pozitívan vizsgált koncentráció ± 1 koncentráció-növekmény értéknél), egy harmadik kísérletet kell végezni az eredeti vizsgálati körülmények mellett.
To prevent cells from drying out, medium is removed a row or column at a time and replaced with the medium for the cell viability/cytotoxicity assay.
Az első futtatás nem egyértelmű eredményeit negatívnak tekintjük, ha a két következő futtatás egyike sem erősítette meg a megfigyelt hatást.
If cell viability/cytotoxicity is not to be measured immediately, 200 μl PBS with Ca2+ and Mg2+ is added to each well.
A nem egyértelmű eredményeket pozitív válasznak (hatás) tekintjük, ha a választ legalább még egy futtatással meg lehet erősíteni ± 1 koncentrációnövekményen belül (az adatok értelmezési eljárását lásd az 55. bekezdésben).
The media are frozen at – 80 °C until further processing to analyse hormone concentrations (see paragraphs 44-46).
táblázat
While T and E2 in medium kept at – 80 °C are generally stable for at least 3 months, hormone stability during storage should be documented within each laboratory.
A lehetséges kimenetelek döntési mátrixa
Immediately after removing the medium, cell viability/cytotoxicity is determined for each exposure plate.
futtatás
Cell Viability Determination
futtatás
A cell viability/cytotoxicity assay of choice can be used to determine the potential impact of the test chemical on cell viability.
futtatás
The assay should be able to provide a true measure of the percentage of viable cells present in a well, or it should be demonstrated that it is directly comparable to (a linear function of) the Live/Dead® Assay (see Appendix III to the validation report (4)).
Döntés
An alternative assay that has been shown to work equally well is the MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide] test (18).
Kimenetel
The assessment of cell viability using the above methods is a relative measurement that does not necessarily exhibit linear relationships with the absolute number of cells in a well.
Pozitív
Therefore, a subjective parallel visual assessment of each well by the analyst should be conducted, and digital pictures of the SCs and the two greatest non-cytotoxic concentrations are to be taken and archived to enable later assessment of true cell density if this should be required.
Megerősítés [26]
If by visual inspection or as demonstrated by the viability/cytotoxicity assay there appears to be an increase in cell number, the apparent increase needs to be verified.
Finomítás [27]
If an increase in cell numbers is verified, this should be stated in the test report.
Kétes [28]
Cell viability will be expressed relative to the average response in the SCs, which is considered 100 % viable cells, and is calculated as appropriate for the cell viability/cytotoxicity assay that is used.
A tesztlemez minőség-ellenőrzése
For the MTT assay, the following formula may be used:
A QC-lemezre vonatkozó kritériumokon túlmenően a párhuzamos lyukak közötti eltérésekre, az ismételt kísérletekre, a hormonmérési rendszerek linearitására és érzékenységére, az ugyanazon minta párhuzamos hormonmérései közötti variabilitásra, és a hormoncsúcsoknak a táptalaj extrakciója (ha van ilyen; az extrakciós követelmények tekintetében lásd a 30. bekezdést) utáni százalékos visszanyerésére vonatkozó egyéb minőségi kritériumokat is teljesíteni kell, amelyeket a 8. táblázat tartalmaz.
% viable cells = (response in well – average response in MeOH treated [= 100 % dead] wells) ÷ (average response in SC wells – average response in MeOH treated [= 100 % dead] wells)
Az adatoknak az egyes paraméterekre meghatározott elfogadható tartományon belül kell esnie, hogy figyelembe vehessük azokat a további értékelés során.
Wells with viability lower than 80 %, relative to the average viability in the SCs (= 100 % viability), should not be included in the final data analysis.
Amennyiben ezek a feltételek nem teljesülnek, a táblázatban meg kell jegyezni, hogy a szóban forgó minta esetében a QC-kritériumok nem teljesültek, és a mintát újra kell elemezni vagy ki kell zárni az adathalmazból.
Inhibition of steroidogenesis occurring in the presence of almost 20 % cytotoxicity should be carefully evaluated to ensure that cytotoxicity is not the cause for the inhibition.
táblázat
Hormone Analysis
A H295R-vizsgálati tesztlemez paramétereinek elfogadható tartományai és/vagy variációja (%).
Each laboratory can use a hormone measurement system of its choice for the analysis of T and E2.
LOQ: a hormonmérési rendszer meghatározási határa; SC: oldószerkontroll; DPM:
Spare aliquots of medium from each treatment group may be used to prepare dilutions to bring the concentration within the linear part of the standard curve.
percenkénti bomlás Összehasonlítandó
As noted in paragraph 29, each laboratory should demonstrate the conformance of their hormone measurement system (e.g. ELISA, RIA, LC-MS, LC-MS/MS) with the QC criteria by analysing supplemented medium spiked with an internal hormone control prior to conducting QC runs or testing of chemicals.
Bazális hormontermelés az SC-kben
In order to ensure that the components of the test system do not interfere with measurement of hormones, the hormones may need to be extracted from the media prior to their measurement (see paragraph 30 for the conditions under which an extraction is or is not required).
Az LOQ valahányszorosa
It is recommended to conduct extraction following the procedures in Appendix III to the validation report (4).
≥ 5-ször
If a commercial test kit is being used to measure the hormone production, the hormone analysis should be conducted as specified in the manuals provided by the test kit manufacturer.
≥ 2,5-szer
Most manufacturers have a unique procedure by which the hormone analyses are conducted.
Expozíciós követelmények – Lemezen belüli relatív szórás az SC-k esetében (párhuzamos lyukak)
Dilutions of samples need to be adjusted such that expected hormone concentrations for the solvent controls fall within the centre of the linear range of the standard curve of the individual assay (Appendix III to the validation report (4)).
Abszolút koncentrációk
Values outside of the linear portion of the standard curve should be rejected.
Expozíciós követelmények – Lemezek közötti relatív szórás az SC-k esetében (megismételt kísérletek)
Example:
Hormonmérési rendszer – Érzékenység
Extracted:
Kimutatható valahányszoros növekedés az OK-hoz viszonyítva
450 μl medium
Hormonmérési rendszer – Ismételt mérés relatív szórása az SC-k esetében [29]
Reconstituted in:
Táptalaj extrakciója – A belső 3H standard kinyerése (ha van ilyen)
250 μl assay buffer
≥ 65 % nominális
Dilution in Assay:
ADATELEMZÉS ÉS JEGYZŐKÖNYVEZÉS
1:10 (to bring the sample within the linear range of the standard curve)
Adatelemzés
Hormone Concentration in Assay:
A vegyi anyag által módosított hormontermelés relatív növekedésének/csökkenésének értékeléséhez az eredményeket normalizálni kell az egyes tesztlemezek átlagos SC-értékéhez, és az eredményeket az SC-khez viszonyított változtatásban kell kifejezni minden tesztlemezen.
150 pg/ml (already adjusted to concentration per ml sample assayed)
Minden adatot átlag ± 1 szórás formában kell kifejezni.
Recovery:
Az adatok elemzése során csak az olyan lyukakból származó hormonadatokat kell figyelembe venni, ahol a citotoxicitás alacsonyabb volt 20 %-nál.
Final hormone concentration =
A relatív változásokat a következő módon kell kiszámítani:
(Hormone concentration (per ml) ÷ recovery) (dilution factor)
Relatív változás = (hormonkoncentráció a lyukban) ÷ (oldószeres kontroll lyukak átlagos hormonkoncentrációja).
(150 pg/ml) ÷ (0,89) × (250 μl/450 μl) × 10 = 936,3 pg/ml
Ha a lyuk vizuális ellenőrzése során úgy tűnik, vagy ha a 42. bekezdésben leírt életképességi/citotoxicitási vizsgálat azt mutatja, hogy a sejtek száma megnövekedett, a látszólagos növekedést ellenőrizni kell.
Selection of test concentrations
Statisztikai elemzések végzése előtt a normalitásra és a szóráshomogenitásra vonatkozó feltételezéseket ki kell értékelni.
A minimum of two independent runs of the assay should be conducted.
A normalitást standard probability plotok használatával vagy más megfelelő statisztikai módszerrel (pl. Shapiro-Wilk-teszt) kell értékelni.
If the chemical is soluble, and not cytotoxic at any of the tested concentrations, and the first run was negative for all concentrations, then it is to be confirmed in one more run using the same conditions as the first run was conducted (Table 7).
Ha az adatok normális vagy megközelítőleg normális eloszlásúak, a vegyi anyag koncentrációcsoportjai és az SC-k közötti különbségeket egy paraméteres teszttel (pl. Dunnett-teszt) kell elemezni, ahol a koncentráció a független és a válasz (valahányszoros változás) a függő változó.
If the results of the first run are equivocal (i.e. the fold-change is statistically significant from the SC at only one concentration) or positive (i.e. the fold change at two or more adjacent concentrations is statistically significant), the test should be repeated as indicated in Table 7 by refining the selected test concentrations.
Ha az adatok nem normális eloszlásúak, egy megfelelő nem-paraméteres tesztet kell alkalmazni (pl. Kruskal Wallis, Steel's Many-one rank teszt).
Test concentrations in runs two and three (if applicable) should be adjusted on the basis of the results of the initial run bracketing concentrations that elicited an effect using 1/2-log concentration spacing (e.g. if the original run of 0,001, 0,01, 0,1, 1, 10, 100, 1000 μM resulted in inductions at 1 and 10 μM, the concentrations tested in the second run should be 0,1, 0,3, 1, 3, 10, 30, 100 μM), unless lower concentrations need to be employed to achieve a LOEC.
A különbségeket p ≤ 0,05 esetén tekintjük szignifikánsnak.
In the latter case, at least five concentrations below the lowest concentration tested in the first run should be used in the second run using a 1/2-log scale.
Az egyes lyukak statisztikai értékelését az átlagos értékek alapján végezzük el, amelyek független párhuzamos adatpontokat testesítenek meg.
If the second run does not confirm the first run (i.e. statistical significance does not occur at the previously positively tested Live/Deadconcentration ± 1 concentration-increment), a third experiment is to be conducted using the original testing conditions.
Mivel nagy a dózisok közötti távolság az első futtatásban (log10-skála), várható, hogy sok esetben nem lehetséges egyértelmű koncentráció-válasz kapcsolatokat leírása, ha a két legnagyobb dózis a szigmoid görbe lineáris részén van.
Equivocal results in the first run are considered negative if the observed effect could not be confirmed in any of the two subsequent runs.
Ezért az első futtatás vagy bármely más adathalmaz esetében, ahol ez a feltétel bekövetkezik (például ahol a maximális hatékonyság nem becsülhető), I. típusú rögzített változós statisztikákat kell alkalmazni a fent leírtak szerint.
Equivocal results are considered as positive responses (effect) when the response can be confirmed in at least one more run within a ± 1 concentration increment (see section 55 for the Data Interpretation Procedure).
Ha több mint két adatpont fekszik a görbe lineáris részén és ha a maximális hatékonyságot ki lehet számítani – amint az egyes 2. futtatások esetében várható, amelyek az expozíciós koncentrációk fél-log távolságát használják – probit, logit vagy egyéb megfelelő regressziós modellt kell használni a hatékony koncentrációk (pl. EC50 és EC20) kiszámításához.
Table 7
Az eredményeket mind grafikus (átlag ± 1 szórást képviselő oszlopdiagramok), mind táblázatos (LOEC/NOEC, hatásirány, és a maximális válasz ereje, amely a dózis-válasz adatok részét képezi) formátum biztosítani kell (lásd a példát a 3. ábrán).
Decision matrix for possible outcome scenarios
Az adatok értékelése csak akkor tekinthető érvényesnek, ha az legalább két, egymástól függetlenül végzett futtatáson alapul.
Run 1
Egy kísérlet vagy futtatás akkor tekinthető függetlennek, ha azt másik időpontban, új oldatokkal és kontrollokkal végeztük el.
Run 2
A 2. és 3. futtatásban (ha szükséges) alkalmazott koncentrációtartományt ki lehet igazítani az 1. futtatás eredményei alapján, hogy jobban meghatározza a LOEC-t tartalmazó dózis-válasz tartományt (lásd a 47. bekezdést).
Run 3
ábra
Decision
Példa a H295R-vizsgálat során nyert adatok bemutatására és értékelésére grafikus és táblázatos formában.
Scenario
A csillagok az oldószeres kontrollhoz viszonyított statisztikailag szignifikáns különbségeket jelzik (p< 0,05).
Positive
megfigyelhető hatást okozó legalacsonyabb koncentráció;
Confirm [26]
Maximális változás:
Stop
a bármilyen koncentráció mellett megfigyelt válasz legnagyobb erőssége az SC-válasz átlagához (= 1) képest.
Refine [27]
Koleszterin
Equivocal [28]
OH Pregnenolon
Quality Control of the Test Plate
Progeszteron
In addition to meeting the criteria for the QC plate, other quality criteria that pertain to acceptable variation between replicate wells, replicate experiments, linearity and sensitivity of hormone measurement systems, variability between replicate hormone measures of the same sample, and percentage recovery of hormone spikes after extraction of medium (if applicable; see Paragraph 30 regarding extraction requirements) should be met and are provided in Table 8.
OH progeszteron
Data should fall within the acceptable ranges defined for each parameter to be considered for further evaluation.
Androsztendion
Table 8
ösztradiol
Acceptable ranges and/or variation (%) for H295R assay test plate parameters.
ezoxikortikoszteron
(LOQ: Limit of Quantification of the hormone measurement system.
Dezoxikortizol
CV: Coefficient of variation; SC: Solvent Control; DPM: Disintegrations per minute)
Kortikoszteron
Comparison Between
Kortizol
Basal hormone production in SCs
Aldoszteron
Fold-greater than LOQ
Vegyi anyag
≥ 5-fold
Maximális változás
≥ 2,5-fold
0,15-szörös
Exposure Experiments — Within Plate CV for SCs (Replicate Wells)
Letrozol
Absolute Concentrations
zeres
Exposure Experiments — Between Plate CV for SCs (Replicate Experiments)
Az adatok értelmezési eljárása
Fold-Change
A vizsgált vegyi anyagot akkor ítéljük pozitívnak, ha a valahányszoros indukció két szomszédos koncentrációban legalább két független futtatás során statisztikailag eltér (p ≤ 0,05) a kontroll oldószertől (7. táblázat).