natgillin/translations-raw huggingface dataset:
This test method is equivalent to OECD Test Guideline (TG) 488 (2013).
A mutációs gyakoriságot úgy számítjuk ki, hogy a transzgénben mutációkat tartalmazó plakkok/plazmidok számát elosztjuk az azonos DNS-mintából kinyert összes plakk/plazmid számával.
EU test methods are available for a wide range of in vitro mutation assays that are able to detect chromosomal and/or gene mutations.
A TGR génmutációs vizsgálatokban a mutációs gyakoriság a jegyzőkönyvezett paraméter.
There are test methods for in vivo endpoints (i.e. chromosomal aberrations and unscheduled DNA synthesis);
Ezen túlmenően, a mutációs gyakoriságot a független mutációkat hordozó sejtek hányadaként is meg lehet határozni;
Transgenic Rodent (TGR) mutation assays fulfil the need for practical and widely available in vivo tests for gene mutations.
A lacI, lacZ, cII és a gpt pontmutációs tesztekben kimutatott mutációk főként bázispár szubsztitúciós mutációk, frameshift mutációk és kis inszerciók/deléciók.
The TGR mutation assays have been reviewed extensively (24) (33).
Az ilyen típusú mutációk relatív aránya a spontán mutációk között hasonló ahhoz, mint amit az endogén Hprt-génben megfigyeltek.
They use transgenic rats and mice that contain multiple copies of chromosomally integrated plasmid or phage shuttle vectors.
A nagy deléciókat csak a Spi– szelekcióval és a lacZ plazmid vizsgálatokkal lehet kimutatni (24).
The transgenes contain reporter genes for the detection of various types of mutations induced in vivo by test chemicals.
Az érdeklődésre számot tartó mutációk az egérben vagy patkányban in vivo előforduló mutációk.
Mutations arising in a rodent are scored by recovering the transgene and analysing the phenotype of the reporter gene in a bacterial host deficient for the reporter gene.
Az in vitro és ex vivo mutációk, amelyek a fág/plazmid kinyerés, replikáció vagy javítás során fordulhatnak elő, viszonylag ritkák, és egyes rendszerekben konkrétan beazonosíthatók vagy a bakteriális gazda/pozitív szelekciós rendszerrel kizárhatók.
TGR gene mutation assays measure mutations induced in genetically neutral genes recovered from virtually any tissue of the rodent.
Előkészületek
These assays, therefore, circumvent many of the existing limitations associated with the study of in vivo gene mutation in endogenous genes (e.g. limited tissues suitable for analysis, negative/positive selection against mutations).
Jelenleg már többféle transzgenikus egéren végzett génmutáció-detektálási modell is létezik, és ezeket a rendszereket szélesebb körben használják, mint a transzgenikus patkányos modelleket.
The weight of evidence suggests that transgenes respond to mutagens in a similar manner to endogenous genes, especially with regard to the detection of base pair substitutions, frameshift mutations, and small deletions and insertions(24).
Ha a patkány egyértelműen alkalmasabb modell, mint az egér (például amikor olyan daganat karcinogenezisének mechanizmusát vizsgáljuk, amely csak patkányokban fordul elő, amikor patkányon végzett toxicitási vizsgálattal való összehasonlításra van szükség, vagy ha a patkány anyagcseréjéről ismert, hogy jobban reprezentálja az emberi anyagcserét), meg kell fontolni a transzgenikus patkányos modellek használatát.
The International Workshops on Genotoxicity Testing (IWGT) have endorsed the inclusion of TGR gene mutation assays for in vivo detection of gene mutations, and have recommended a protocol for their implementation (15) (29).
A kísérleti állatokat ideálisan 22 °C (± 3 °C) hőmérsékletű helyiségben kell tartani.
This test method is based on these recommendations.
Bár a helyiség relatív páratartalmának legalább 30 %-nak kell lennie, illetve a takarítás időtartamától eltekintve lehetőleg nem haladhatja meg a 70 %-ot, célértékként az 50–60 % relatív páratartalom fenntartására kell törekedni.
Further analysis supporting the use of this protocol can be found in (16).
A világítás legyen mesterséges, naponta 12 órás világos időszakkal, amelyet 12 órás sötét periódusok kövessenek.
It is anticipated that in the future it may be possible to combine a TGR gene mutation assay with a repeat dose toxicity study (Chapter B.7 of this Annex).
A takarmány megválasztását a vizsgált vegyi anyaggal való megfelelő keveredés igénye is befolyásolhatja, ha a vizsgált vegyi anyagot ezen az úton adjuk be.
However, data are required to ensure that the sensitivity of TGR gene mutation assays is unaffected by the shorter one day period of time between the end of the administration period and the sampling time, as used in the repeat dose toxicology study, compared to 3 days used in TGR gene mutation assays.
Az állatokat azonos nemű állatokból álló kis csoportokban (legfeljebb öt állat) kell elhelyezni, amennyiben nem várható agresszív viselkedés.
Data are also required to indicate that the performance of the repeat dose assay is not adversely affected by using a transgenic rodent strain rather than traditional rodent strains.
Ha tudományos szempontból indokolt, az állatok egyedileg is elhelyezhetők.
When these data are available, this test method will be updated.
Az egészséges, fiatal, ivarérett felnőtt (a kezelés kezdetén 8–12 hetes) állatokat véletlenszerűen soroljuk be a kontroll- és a kezelési csoportokba.
Definitions of key terms are set out in the Appendix.
Az állatokat egyenként azonosítani kell.
TGR gene mutation assays for which sufficient data are available to support their use in this test method are:
Az állatokat legalább öt napig szoktatni kell a laboratóriumi körülményekhez.
lacZ bacteriophage mouse (Muta™Mouse); lacZ plasmid mouse;
A vizsgálat kezdetén az állatok testtömege lehetőleg csak minimálisan térjen el egymástól, és a nemenkénti átlagos értéktől maximum ± 20 %-kal különbözhet.
gpt delta (gpt and Spi–) mouse and rat;
A dózisok előkészítése
lacI mouse and rat (Big Blue®), as performed under standard conditions.
Az állatoknak történő adagolás előtt a szilárd halmazállapotú vizsgált vegyi anyagokat fel kell oldani vagy szuszpendálni kell megfelelő oldószerekben vagy vivőanyagokban, vagy bele kell keverni a takarmányba vagy az ivóvízbe.
In addition, the cII positiveselection assay can be used for evaluating mutations in the Big Blue® and Muta™Mouse models.
A folyékony vizsgált vegyi anyagok közvetlenül vagy az adagolás előtt hígított formában alkalmazhatók.
Mutagenesis in the TGR models is normally assessed as mutant frequency;
Belélegzéses expozíció esetén a vizsgált vegyi anyagok fizikai-kémiai tulajdonságaiktól függően gáz, gőz vagy szilárd/folyadék aeroszol formában adagolhatók.
if required, however, molecular analysis of the mutations can provide additional information (see paragraph 24).
A vizsgált vegyi anyagból mindig friss készítményeket kell alkalmazni, kivéve akkor, ha az anyag tárolás során való stabilitása bizonyított.
These rodent in vivo gene mutation tests are especially relevant to assessing mutagenic hazard in that the assays' responses are dependent upon in vivo metabolism, pharmacokinetics, DNA repair processes, and translesion DNA synthesis, although these may vary among species, among tissues and among the types of DNA damage.
Vizsgálati körülmények
An in vivo assay for gene mutations is useful for further investigation of a mutagenic effect detected by an in vitro system, and for following up results of tests using other in vivo endpoints (24).
Oldószer/Vivőanyag
In addition to being causally associated with the induction of cancer, gene mutation is a relevant endpoint for the prediction of mutation-based non-cancer diseases in somatic tissues (12) (13) as well as diseases transmitted through the germline.
Az oldószer/vivőanyag nem okozhat toxikus hatásokat a választott dózisok mellett, és nem alkalmazható olyan anyag, amelyről feltehető, hogy kémiai reakcióba fog lépni a vizsgált vegyi anyaggal.
If there is evidence that the test chemical, or a relevant metabolite, will not reach any of the tissues of interest, it is not appropriate to perform a TGR gene mutation assay.
Ha nem jól ismert oldószert/vivőanyagot alkalmazunk, akkor felhasználását alá kell támasztani a kompatibilitását bizonyító referenciaadatokkal.
In the assays described in paragraph 8, the target gene is bacterial or bacteriophage in origin, and the means of recovery from the rodent genomic DNA is by incorporation of the transgene into a λ bacteriophage or plasmid shuttle vector.
Amennyiben lehetséges, először valamilyen vizes oldószer/vivőanyag használatát ajánlatos megfontolni.
The procedure involves the extraction of genomic DNA from the rodent tissue of interest, in vitro processing of the genomic DNA (i.e. packaging of λ vectors, or ligation and electroporation of plasmids to recover the shuttle vector), and subsequent detection of mutations in bacterial hosts under suitable conditions.
Pozitív kontrollok
The assays employ neutral transgenes that are readily recoverable from most tissues.
Általában szükséges párhuzamos pozitív kontrollállatokat használni.
The basic TGR gene mutation experiment involves treatment of the rodent with a chemical over a period of time.
Azokban a laboratóriumokban azonban, amelyek igazolták a szakértelmüket (lásd a 23. bekezdést) és rendszeresen végzik ezeket a vizsgálatokat, a módszer sikerességének igazolására a korábban pozitív kontrollal kezelt állatokból származó DNS is felhasználható.
Chemicals may be administered by any appropriate route, including implantation (e.g. medical device testing).
Az ilyen korábbi kísérletekből származó DNS-eket ugyanabból a fajból és célszövetből kell venni, és megfelelően kell tárolni (lásd a 36. bekezdést).
The total period during which an animal is dosed is referred to as the administration period.
A pozitív kontroll céljára felhasznált vegyi anyagok dózisait úgy kell megválasztani, hogy olyan, gyenge vagy mérsékelt hatást váltsanak ki, amely kritikus a vizsgálati eljárás működése és érzékenysége szempontjából.
Administration is usually followed by a period of time, prior to sacrifice, during which the chemical is not administered and during which unrepaired DNA lesions are fixed into stable mutations.
A pozitív kontroll céljára felhasználható vegyi anyagokra és a hozzájuk tartozó célszövetekre az 1. táblázat tartalmaz példákat.
In the literature, this period has been variously referred to as the manifestation time, fixation time or expression time;
Példák a pozitív kontroll céljára felhasználható vegyi anyagokra és azok célszöveteire
the end of this period is the sampling time (15) (29).
Pozitív kontroll vegyi anyag és CAS-száma
After the animal is sacrificed, genomic DNA is isolated from the tissue(s) of interest and purified.
EINECS-név és EINECS-szám
Data for a single tissue per animal from multiple packaging/ligations are usually aggregated, and mutant frequency is generally evaluated using a total of between 105 and 107 plaque-forming or colony-forming units.
Jellemzők
When using positive selection methods, total plaque-forming units are determined with a separate set of non-selective plates.
Mutációs célszövet
Positive selection methods have been developed to facilitate the detection of mutations in both the gpt gene [gpt delta mouse and rat, gpt– phenotype (20) (22) (28)] and the lacZ gene [Muta™Mouse or lacZ plasmid mouse (3) (10) (11) (30)];
Egér
whereas, lacI gene mutations in Big Blue® animals are detected through a non-selective method that identifies mutants through the generation of coloured (blue) plaques.
N-etil-N-nitrózurea
Positive selection methodology is also in place to detect point mutations arising in the cII gene of the λ bacteriophage shuttle vector [Big Blue® mouse or rat, and Muta™Mouse (17)] and deletion mutations in the λ red and gam genes [Spi– selection in gpt delta mouse and rat (21) (22) (28)].
[CAS-szám: 759-73-9]
Mutant frequencyis calculated by dividing the number of plaques/plasmids containing mutations in the transgene by the total number of plaques/plasmids recovered from the same DNA sample.
Közvetlenül ható mutagén
In TGR gene mutation studies, the mutant frequency is the reported parameter.
Máj, tüdő
In addition, a mutation frequency can be determined as the fraction of cells carrying independent mutations;
Csontvelő, vastagbél, vastagbél-epithelium, belek, máj, tüdő, lép, vese, petefészek granulosa sejtek, hím csírasejtek
this calculation requires correction for clonal expansionby sequencing the recovered mutants (24).
Etil-karbamát (uretán)
The mutations scored in the lacI, lacZ, cII and gpt point mutation assays consist primarily of base pair substitution mutations, frameshift mutations and small insertions/deletions.
[CAS-szám: 51-79-6]
The relative proportion of these mutation types among spontaneous mutations is similar to that seen in the endogenous Hprt gene.
Uretán
Large deletions are detected only with the Spi– selectionand the lacZ plasmid assays (24).
Mutagén, metabolizmust igényel, de csak gyenge hatása van
Mutations of interest are in vivo mutations that arise in the mouse or rat.
Csontvelő, előgyomor, vékonybél, máj, tüdő, lép
In vitro and ex vivo mutations, which may arise during phage/plasmid recovery, replication or repair, are relatively rare, and in some systems can be specifically identified, or excluded by the bacterial host/positive selection system.
2,4-diamino-toluén
Preparations
[CAS-szám: 95-80-7]
A variety of transgenic mouse gene mutation detection models are currently available, and these systems have been more widely used than transgenic rat models.
etil-m-fenilén-diamin
If the rat is clearly a more appropriate model than the mouse (e.g. when investigating the mechanism of carcinogenesis for a tumour seen only in rats, to correlate with a rat toxicity study, or if rat metabolism is known to be more representative of human metabolism) the use of transgenic rat models should be considered.
Mutagén, metabolizmust igényel, pozitív az Spi– vizsgálatban is
The temperature in the experimental animal room ideally should be 22 °C (± 3 °C).
Máj
Although the relative humidity should be at least 30 % and preferably not exceed 70 % other than during room cleaning, the goal should be to maintain a relative humidity of 50-60 %.
Benzo[a]pirén
Lighting should be artificial, with a daily sequence of 12 hours light, followed by 12 hours dark.
[CAS-szám: 50-32-8]
The choice of diet may be influenced by the need to ensure a suitable admixture of a test chemical when administered by this route.
Benzo[def]krizén
Animals should be housed in small groups (no more than five) of the same sex if no aggressive behaviour is expected.
Mutagén, metabolizmust igényel
Animals may be housed individually if scientifically justified.
Máj, omenta
The animals are acclimated to the laboratory conditions for at least five days.
Minden mintavételi időpontban negatív kontrollokat is kell használni, amelyeket csak oldószerrel és vivőanyaggal kezeltünk, és a kezelésük egyébiránt ugyanolyan módon történik, mint a kezelési csoportoké.
At the commencement of the study, the weight variation of animals should be minimal and not exceed ± 20 % of the mean weight of each sex.
Ha nem állnak rendelkezésre olyan történeti vagy publikált kontrolladatok, amelyek igazolják, hogy a választott oldószer/vivőanyag nem idéz elő ártalmas vagy mutagén hatásokat, a vivőanyag kontroll elfogadhatóságának megállapítása érdekében kezeletlen kontrollokat is alkalmazni kell minden mintavételi időpontban.
Preparation of doses
A laboratórium jártasságának igazolása
Solid test chemicals should be dissolved or suspended in appropriate solvents or vehicles or admixed in diet or drinking water prior to dosing of the animals.
A szakértelmet ezekben a vizsgálatokban a publikált adatok alapján várható eredmények reprodukálására való képesség demonstrálásával kell megállapítani (24) a következő területeken:
Liquid test chemicals may be dosed directly or diluted prior to dosing.
A mutációk szekvenálása
For inhalation exposures, test chemicals can be administered as gas, vapour or a solid/liquid aerosol, depending on their physicochemical properties.
Jogszabályi célú alkalmazás esetében a mutációk DNS-szekvenálása nem szükséges, különösen, ha a kapott eredmény egyértelműen pozitív vagy negatív.
Fresh preparations of the test chemical should be employed unless stability data demonstrate the acceptability of storage.
A szekvenálási adatok azonban hasznosak lehetnek, ha nagy interindividuális variáció figyelhető meg.
Test Conditions
Ezekben az esetekben a szekvenálást arra lehet használni, hogy kizárja a jackpot vagy klonális eseményeket az egyedi mutációk arányának egy adott szövetben való azonosításával.
Solvent/vehicle
Állatonként és szövetenként körülbelül 10 mutáció szekvenálásának elegendőnek kell lennie annak egyszerű megállapításához, hogy a klonális mutációk hozzájárultak-e a mutációs gyakorisághoz;
The solvent/vehicle should not produce toxic effects at the dose volumes used, and should not be suspected of chemical reaction with the test chemical.
akár 25 mutáció szekvenálására lehet viszont szükséges a mutációs gyakoriság klonalitással való matematikai korrekciójához.
If other than well-known solvents/vehicles are used, their inclusion should be supported with reference data indicating their compatibility.
A mutációk szekvenálása akkor is megfontolandó, amikor a mutációs gyakoriság kismértékű növekedését (azaz éppen csak meghaladja a kezeletlen kontroll értékeket) figyelik meg.
It is recommended that wherever possible, the use of an aqueous solvent/vehicle should be considered first.
A mutációs spektrumnak a kezelt és a kezeletlen állatokból származó mutáns telepek közötti különbségei alátámasztják a mutagén hatást (29).
Positive Controls
A mutációs spektrumok hasznosak lehetnek a mechanisztikus hipotézisek kifejlesztése során is.
Concurrent positive control animals should normally be used.
Ha a szekvenálást bele kell foglalni a vizsgálati protokollba, nagy figyelmet kell fordítani az ilyen vizsgálatok elrendezésére, különös tekintettel a mintánként szekvenált mutációk számára, hogy elérjük az alkalmazott statisztikai modell szerinti megfelelő erőt (lásd a 43. bekezdést).
However, for laboratories that have demonstrated competency (see paragraph 23) and routinely use these assays, DNA from previous positive control treated animals may be included with each study to confirm the success of the method.
Az állatok száma és neme
Such DNA from previous experiments should be obtained from the same species and tissues of interest, and properly stored (see paragraph 36).
A csoportméret legalább öt állat, de ha a statisztikai erő nem elegendő, az állatok számát szükség szerint növelni kell.
When concurrent positive controls are used, it is not necessary to administer them by the same route as the test chemical;
Alapesetben hím állatokat kell használni.
however, the positive controls should be known to induce mutations in one or more tissues of interest for the test chemical.
Ha jelentős különbségek vannak a nemek között toxicitás vagy anyagcsere szempontjából, akkor hímekre és nőstényekre is szükség lesz.
The doses of the positive control chemicals should be selected so as to produce weak or moderate effects that critically assess the performance and sensitivity of the assay.
Adagolási időszak
Examples of positive control chemicals and some of their target tissues are included in Table 1.
Megfigyelések szerint a mutációk a kezelések során egyre inkább felhalmozódnak, ezért ismételt dózisú kezelésre van szükség naponkénti kezeléssel 28 napon keresztül.
Examples of positive control chemicals and some of their target tissues
Ez általában elfogadhatónak tekinthető a gyenge mutagének által előidézett mutációk elegendő felhalmozódásához, illetve megfelelő expozíciós időt biztosít a mutációknak a lassan osztódó szervekben való kimutatásához.
Positive control chemical and CAS No
Egyes értékelésekhez alternatív kezelési sémák is megfelelőek lehetnek, de ezeket az alternatív adagolási sémákat tudományosan meg kell indokolni a protokollban.
EINECS name and EINECS No
A kezelések nem lehetnek rövidebbek, mint az összes releváns metabolizáló enzim teljes indukciójához szükséges idő, és a rövidebb kezelések több, a különböző proliferációs sebességű szerveknek megfelelő mintavételi időpontot tehetnek szükségessé.
Characteristics
Valamennyi rendelkezésre álló információt (pl. általános toxicitás, metabolizmus és farmakokinetika) fel kell használni a protokoll igazolása során, különösen, ha a protokoll eltér a fenti szabványajánlásoktól.
Mutation Target Tissue
Bár a 8 hétnél hosszabb kezelési idők növelhetik a vizsgálat érzékenységét, ezeket világosan meg kell magyarázni és indokolni, mivel a hosszú kezelési idők a mutációs gyakoriság látszólagos növekedését okozhatják a klonális expanziónak köszönhetően (29).
Mouse
Dózisszintek
N-Ethyl-N-nitrosourea
A dózisszinteket az általános toxicitást mérő dózisbehatároló vizsgálat eredményeire kell alapozni, amelyet azonos expozíciós módon végeztünk el, vagy pedig a korábbi szubakut toxicitási vizsgálatok eredményeire.
[CAS No 759-73-9]
A dózistartományok meghatározásához ugyanazon rágcsálótörzsből származó nem transzgenikus állatokat lehet használni.
Direct acting mutagen
A fő vizsgálat során annak érdekében, hogy dózis-válasz adatokat lehessen gyűjteni, a teljes vizsgálatnak egy negatív kontrollcsoportot is tartalmaznia kell (lásd a 22. bekezdést), valamint legalább három, egymástól megfelelő távolságra elhelyezkedő dózisszintet, kivéve, ha a határdózist használjuk (lásd a 28. bekezdést).
Liver, lung
A felső dózis a maximális tolerálható dózis (MTD) legyen.
Bone marrow, colon, colonic epithelium, intestine, liver, lung, spleen, kidney, ovarian granulosa cells, male germ cells
Az MTD az a dózis, amely olyan egyértelmű toxicitásjeleket vált ki, hogy annál magasabb adagok, azonos adagolás mellett, várhatóan halált okoznak.
Ethyl carbamate (urethane)
A kis nem mérgező dózisban specifikus biológiai aktivitást mutató vegyi anyagok (mint például a hormonok és a mitogének), valamint azok a vegyi anyagok, amelyek a toxikokinetikai tulajdonságok telítődését mutatják, kivételek lehetnek a dózismeghatározási követelmények alól, és eseti alapon kell őket értékelni.
[CAS No 51-79-6]
Az alkalmazott dózisoknak át kell fogniuk a maximálistól a már csak kissé vagy egyáltalán nem toxikusig terjedő tartományt.
Urethane
Határdózis-vizsgálat
2,4-Diaminotoluene
14 napos vagy annál rövidebb adagolási időszak esetén a határdózis 2000 mg/testtömeg kg/nap (a 28 napi kezeléstől eltérő adagolási rendeket tudományosan meg kell indokolni a protokollban, lásd a 26. bekezdést).
[CAS No 95-80-7]
A dózisok beadása
ethyl-m-phenylenediamine
A vizsgált vegyi anyagot rendszerint gyomorszondán keresztül inkubációs kanül segítségével, vagy hasüregbe adott injekció segítségével adjuk be.
Mutagen, requires metabolism, also positive in the Spi– assay
A vizsgálat tervezése során általánosságban az emberi expozíció várható útvonalát figyelembe kell venni.
Liver
Ezért az egyéb expozíciós útvonalak (például ivóvíz, szubkután, intravénás, külsőleg, inhalációs, intratracheális, étrendi vagy implantáció) is elfogadhatók lehetnek, amennyiben azokat meg lehet indokolni.
Benzo[a]pyrene
Az intraperitoneális injekció nem ajánlott, mivel az nem egy fiziológiailag releváns emberi expozíciós útvonal.
[CAS No 50-32-8]
A gyomorszondán keresztül vagy injekcióval egyszerre beadható maximális folyadékmennyiség a kísérleti állat méretétől függ.
Benzo[def]chrysene
A térfogat nem haladhatja meg a 2 ml/100 g testtömeg mennyiséget.
Mutagen, requires metabolism
Az ennél nagyobb mennyiségek használatát meg kell indokolni.
Liver, omenta,
A magasabb koncentrációban rendszerint fokozottabb hatást kiváltó irritáló vagy maró vegyi anyagok kivételével a koncentráció megfelelő beállításával a minimálisra kell csökkenteni a vizsgált anyag mennyiségének változásait, hogy a mennyiség valamennyi adagolási szinten konstans legyen.
Bone marrow, breast, colon, forestomach, glandular stomach, heart, liver, lung, male germ cells
Mintavételi időpontok