natgillin/translations-raw huggingface dataset:
The approval may be restored only when the competent authority of the third country is satisfied that the centre fully complies with the conditions set out in points I to XI.
Csak akkor adható meg újra az engedélyezés, ha a harmadik ország illetékes hatósága meggyőződött arról, hogy az állomás az I–XI. pontban megállapított feltételeknek teljes mértékben eleget tesz.
Protocols for the standardisation of materials and testing procedures
Az anyagok és vizsgálati eljárások szabványosításáról szóló jegyzőkönyvek
(referred to in Article 5)
(az 5. cikkben említve)
Tuberculosis (TBL)
Tuberkulózis (TBL)
The single intradermal tuberculin test using bovine tuberculin shall be carried out according to Annex B to Directive 64/432/EEC.
Szarvasmarha-tuberkulin felhasználásával történő egyszeri intradermális tuberkulinpróbát végeznek a 64/432/EGK irányelv B. mellékletének megfelelően.
In the case of Suidae animals, the single intradermal tuberculin test using avian tuberculin shall be carried out according to Annex B to 64/432/EEC, except that the site of injection shall be the loose skin at the base of the ear.
Sertésfélék esetében madártuberkulin felhasználásával történő egyszeri intradermális tuberkulinpróbát végeznek a 64/432/EGK irányelv B. mellékletének megfelelően, kivéve, hogy a befecskendezés helye a fültőnél lévő laza bőr.
Brucellosis (Brucella abortus) (BRL)
Brucellózis (Brucella abortus) (BRL)
The serum agglutination test, complement fixation test, buffered brucella antigen test and enzyme linked immuno-absorbent assays tests (ELISA) shall be carried out according to Annex C to Directive 64/432/EEC.
A szérumagglutinációs tesztet, a komplementkötési próbát, a tárgylemez-agglutinációs próbát és az ELISA (enzyme linked immuno-absorbent assays) próbát a 64/432/EGK irányelv C. mellékletének megfelelően végzik el.
Brucellosis (Brucella melitensis) (BRL)
Brucellózis (Brucella melitensis) (BRL)
Tests shall be carried out according to Annex C to Directive 91/68/EEC.
A vizsgálatokat a 91/68/EGK irányelv C. melléklete szerint végzik el.
Enzootic Bovine Leukosis (EBL)
Szarvasmarhák enzootiás leukózisa (EBL)
The agar gel immuno-diffusion test and the enzyme linked immuno-absorbent assay test (ELISA) shall be carried out according to paragraphs A and C of Chapter II of Annex D to Directive 64/432/EEC.
Az agargél-immundifúziós próbát és az ELISA (enzyme linked immuno-absorbent assay) próbát a 64/432/EGK irányelv D. melléklete II. fejezete A. és C. bekezdésének megfelelően végzik el.
Bluetongue (BTG)
Kéknyelv betegség (BTG)
The blocking or competitive ELISA test shall be carried out according to the following protocol:
A blokkoló vagy kompetitív ELISA-próbát a következő eljárásnak megfelelően végzik el:
The competitive ELISA using monoclonal antibody 3-17-A3 is capable of identifying antibodies to all known serotypes of bluetongue virus (BTV).
A 3-17-A3 monoklonális ellenanyagot alkalmazó kompetitív ELISA képes a kéknyelvbetegség-vírus (BTV) valamennyi ismert szerotípusa elleni ellenanyag azonosítására.
The principle of the test is the interruption of the reaction between BTV antigen and a group-specific monoclonal antibody (3-17-A3) by the addition of test serum.
A próba elve a BTV antigén és a csoportspecifikus monoklonális ellenanyag (3-17-A3) közötti reakció megszakítása a vizsgálandó szérum hozzáadásával.
Antibodies to BTV present in the test serum block the reactivity of the monoclonal antibody (Mab) and result in a reduction in the expected colour development after the addition of enzyme labelled anti-mouse antibody, and chromogen/ substrate.
A vizsgálandó szérumban lévő BTV-ellenanyagok blokkolják a monoklonális ellenanyag (Mab) reaktivitását, és ez a várt színreakció csökkenését eredményezi az enzimmel jelölt anti-egér ellenanyag és a kromogén/szubsztrát hozzáadása után.
Sera can be tested at a single dilution of 1:5 (spot test – Appendix 1) or may be titrated (serum titration – Appendix 2) to give dilution end-point.
A szérumok vizsgálhatók egyetlen, 1:5 hígítás mellett (színreakció – 1. függelék) vagy titrálhatók (szérumtitrálás – 2. függelék), így megadható a hígítás végpontja.
Inhibition values higher than 50 % may be regarded as positive.
Az 50 %-nál magasabb inhibíciós értékek pozitívnak tekinthetők.
Material and Reagents:
Anyagok és reagensek:
Appropriate ELISA microtitre plates.
Megfelelő ELISA mikrotitráló lemezek.
Antigen: supplied as a cell extracted concentrate, prepared as described below, and stored at either –20 °C or –70 °C.
Antigén: sejtkivonat-koncentrátumként megadva, a lent leírtak szerint elkészítve, és –20 °C-on vagy –70 °C-on tárolva.
Blocking buffer: phosphate buffered saline (PBS) containing 0,3 % BTV negative adult bovine serum, 0,1 % (v/v) Tween-20 (supplied as polyoxyethylene sorbiton monolaurate syrup) in PBS.
Blokkoló puffer: foszfát-pufferes sóoldat (PBS), amely 0,3 % BTV-negatív felnőtt szarvasmarha-szérumot, 0,1 tf% Tween-20 (polioxietilén-szorbiton-monolaureát szirup formájában adva) tartalmaz PBS-ben.
Monoclonal antibody: 3-17-A3 (supplied as hybridoma tissue-culture supernatant) directed against the group-specific polypeptide VP7, stored at -20 °C or freeze-dried and diluted 1/100 with blocking buffer before use.
Monoklonális ellenanyag: 3-17-A3 (hibridóma szövettenyészet felülúszója formájában adva), amely a VP7 csoportspecifikus polipeptid ellen irányul, –20 °C-on tárolva vagy fagyasztva szárítva, használat előtt a blokkoló pufferrel 1:100 arányban hígítva.
Conjugate: rabbit anti-mouse globulin (adsorbed and eluted) conjugated to horseradish peroxidase and kept in the dark at 4 °C.
Konjugátum: nyúl anti-egér globulin (abszorbeálva és eluálva) tormaperoxidázzal konjugálva és 4 °C-on, fénytől elzárva tartva.
Chromogen and substrate: Orthophenylene diamine (OPD-chromogen) at a final concentration of 0,4 mg/ml in sterile distilled water.
Kromogén és szubsztrát: ortofenilén-diamin (OPD-kromogén) 0,4 mg/ml végső koncentrációban steril desztillált vízben.
Hydrogen peroxide (30 %w/v-substrate) 0,05 % v/v added immediately before use (5μl H2 O2 per 10 ml OPD).
Hidrogén-peroxidot (30 v% - szubsztrát) adnak közvetlenül hozzá 0,05 tf%-ban a felhasználás előtt (5 μl H2O2/10 ml OPD).
(Handle OPD with care - wear rubber gloves - suspected mutagen).
(Az OPD óvatosan kezelendő – gumikesztyű viselése ajánlott – feltételezhetően mutagén).
1 Molar sulphuric acid: 26,6 ml of acid added to 473,4 ml of distilled water.
1 mólos kénsav: 26,6 ml sav, 473,4 ml desztillált vízhez adva. (Figyelem!
(Remember Acid must be added to water, never water to acid.)
Mindig a savat kell a vízhez önteni, sosem a vizet a savhoz.)
Orbital shaker.
Körkörös rázógép.
ELISA plate reader (the test may be read visually).
ELISA-lemezleolvasó (a próba eredménye vizuálisan értékelhető).
Test format
A próba formátuma
Cc: conjugate control (no serum/ no monoclonal antibody); C++: strong positive serum control; C+: weak positive serum control; C-: negative serum control; Cm: monoclonal antibody control (no serum).
Cc: konjugátumkontroll (nincs benne szérum/nincs benne monoklonális ellenanyag); C++: erősen pozitív szérumkontroll; C+: gyengén pozitív szérumkontroll; C-: negatív szérumkontroll; Cm: monoklonális ellenanyagkontroll (nincs benne szérum).
APPENDIX 1:
1. FÜGGELÉK
Spot dilution (1:5) format (40 sera/plate)
Pontszerű hígítási (1:5) formátum (40 szérum lemezenként)
Controls
Kontrollok
Test Sera
Vizsgálandó szérumok
APPENDIX 2:
2. FÜGGELÉK
Serum titration format (10 sera/plate)
Szérum-titrálási formátum (10 szérum lemezenként)
Test protocol:
Vizsgálati eljárás:
Conjugate control (Cc) Wells 1A and 1B are a blank control consisting of BTV antigen and conjugate.
Konjugátum-kontroll (Cc) Az 1A és 1B vájat BTV antigénből és konjugátumból álló vak kontroll.
This may be used to blank the ELISA reader.
Ez az ELISA-leolvasó vakvizsgálatára használható.
Mab control (Cm) Columns 1 and 2, rows G and H are the monoclonal antibody control and contain BTV antigen, monoclonal antibody and conjugate.
Mab-kontroll (Cm) Az 1. és 2. oszlop G és H sora monoklonális ellenanyagkontrollként szolgál és BTV antigént, monoklonális ellenanyagot és konjugátumot tartalmaz.
These wells represent maximum colour.
E vájatok a maximális színreakciót jelenítik meg.
The mean of the optical density readings from this control represents the 0 % inhibition value.
Az ebből a kontrollból leolvasott optikai sűrűség átlaga adja meg a 0 %-os inhibíciós értéket.
Positive control (C++, C+) Columns 1 and 2, rows C-D-E-F.
Pozitív kontroll (C++, C+) Az 1. és 2. oszlop C-D-E-F sora.
These wells contain BTV antigen, BTV strong and weak positive antiserum respectively, Mab and conjugate.
E vájatok BTV antigént, BTV erősen, illetve gyengén pozitív antiszérumot, Mab-ot és konjugátumot tartalmaznak.
Negative control (C-) Wells 2A and 2B are the negative controls, which contain BTV antigen, BTV negative antiserum, Mab and conjugate.
Negatív kontroll (C-) A 2A és 2B vájat negatív kontroll, amely BTV antigént, BTV negatív antiszérumot, Mab-ot és konjugátumot tartalmaz.
Test sera For large-scale serological surveys and rapid screening, sera may be tested at a single dilution of 1:5 (Appendix 1).
Vizsgálandó szérumok Az átfogó szerológiai felmérések és gyors szűrővizsgálatok esetén a szérumok egyetlen, 1:5-ös hígítás mellett is megvizsgálhatók (1. függelék).
Alternatively, 10 sera may be tested over a dilution range from 1:5 to 1:640 (Appendix 2).
Alternatív módon megvizsgálható egy 10 szérumból álló, 1:5-ös hígítástól 1:640-es hígításig terjedő hígítási sor (2. függelék).
This will give some indication of the titre of antibody in the test sera.
Ezzel hozzávetőleges információ nyerhető a vizsgált szérumok ellenanyagtiteréről is.
Dilute BTV antigen to pre-titrated concentration in PBS, sonicate briefly to disperse aggregated virus (if sonicator is not available, pipette vigorously) and add 50 μl to all wells of the ELISA plate.
Hígítson fel PBS-ben BTV antigént az előtitrálási koncentrációra, röviden ultrahangozza az összecsapódott vírus diszpergálása céljából (ha nem áll rendelkezésre ultrahangképző berendezés, pipettázza erősen az oldatot), és tegyen abból 50 μl-t az ELISA-lemez minden vájatába.
Tap sides of plate to disperse antigen.
Finoman ütögesse meg a lemez oldalát, hogy szétoszlassa az antigént.
Incubate at 37 °C for 60 minutes on an orbital shaker.
Inkubálja a rázógépen 60 percig, 37 °C-on.
Wash plates three times by flooding and emptying the wells with non-sterile PBS and blot dry on absorbent paper.
Mossa át a lemezeket háromszor olyan módon, hogy a vájatokat felönti nem steril PBS-szel, majd azt leönti róluk, és itatóspapírra fektetve szárítsa fel.
Control wells: Add 100 μl of blocking buffer to Cc wells.
Kontroll-vájatok: Adjon 100 μl blokkoló puffert a Cc vájatokhoz.
Add 50 ul of positive and negative control sera, at a dilution of 1:5 (10 μ l sera + 40 μl blocking buffer), to respective wells C-, C+ and C++.
Adjon 50 μl pozitív és negatív kontrollszérumot 1:5 hígítás mellett (10 μl szérum +40 μl blokkoló puffer) a megfelelő C-, C+ és C++ vájatokba.
Add 50μl blocking buffer to Mab control wells.
Adjon 50 μl blokkoló puffert a Mab kontrollvájatokhoz.
Spot titration method: Add a 1:5 dilution of each test serum in blocking buffer to duplicate wells of columns 3 to 12 (10 μl sera +40 μl blocking buffer),
Pontszerű titrálási módszer: Adjon 1:5 arányú hígítást valamennyi vizsgálandó szérumhoz blokkoló pufferral úgy, hogy a 3–12 oszlop vájatait megkétszerezi (10 μl szérum +40 μl blokkoló puffer),
Serum titration method: Prepare a two-fold dilution series of each test sample (1:5 to 1:640) in blocking buffer across eight wells of single columns 3 to 12.
Szérumtitrálási módszer: készítsen kétszeres hígítási sort valamennyi vizsgálandó szérumból (1:5–1:640) blokkoló pufferban a 3–12 egyszeres oszlop nyolc vájatában.
Immediately after the addition of the test sera, dilute Mab 1:100 in blocking buffer and add 50 μl to all wells of the plate except for the blank control.
Közvetlenül a vizsgálandó szérumok hozzáadása után hígítsa a Mab-ot blokkoló pufferben 1:100 arányban és a lemez valamennyi vájatába tegyen abból 50 μl-t, kivéve a vak kontrollt.
Wash three times with PBS and blot dry.
Mossa át háromszor PBS-szel és itassa szárazra.
Dilute rabbit anti-mouse concentrate to 1/5000 in blocking buffer and add 50 μl to all wells of the plate.
Hígítson nyúl anti-egér koncentrátumot 1:5000 arányban blokkoló pufferban és a lemez valamennyi vájatába tegyen abból 50 μl-t.
Thaw the O-Phenylenediamine dihydrochloride (OPD) and immediately before use add 5 μl of 30 % hydrogen peroxide to each 10 ml of OPD.
Olvassza fel az O-fenilén-diamin dihidrokloridot (OPD) és közvetlenül felhasználás előtt adjon 5 μl 30 %-os hidrogén-peroxidot minden 10 ml OPD-hez.
Add 50 μl to all wells of the plate.
A lemez minden vájatába tegyen abból 50 µl-t.
Allow colour to develop for approximately 10 minutes and stop the reaction with 1 Molar sulphuric acid (50 μl per well).
Hagyja körülbelül 10 percig, hogy kialakuljon a színreakció, majd 1 mólos kénsavval (50 μl vájatonként) állítsa le.
Colour should develop in the Mab control wells and in those wells containing sera with no antibody to BTV.
Színreakciónak kell kialakulnia a Mab kontrollvájatokban és azokban a vájatokban, amelyek olyan szérumot tartalmaznak, amelyekben nincs BTV ellenanyag.
Examine and record the plates either visually or using a spectrophotometric reader.
Vizsgálja meg a lemezeket vizuálisan vagy spektrofotometriás leolvasóval, és az eredményeket jegyezze fel.
Analysis of results:
Az eredmények analízise:
Using the software package print out the optical density (OD) values, and the percentage inhibition (PI) for test and control sera based on the mean value recorded in the antigen control wells.
A szoftvercsomag felhasználásával nyomtassa ki az optikai sűrűség (OD) értékeket és a százalékos inhibíciót (PI) a vizsgálandó és a kontrollszérumokra vonatkozóan az antigénkontroll-vájatokban regisztrált átlagértékek alapján.
The date expressed as OD and PI values are used to determine whether the test has performed within acceptable limits.
Az OD és PI értékek formájában kifejezett adatok felhasználásával meghatározható, hogy a vizsgálat a megengedett határértékek között ment-e végbe.
If a computer software package is not available print out the OD values using the ELISA printer.
Ha nem áll rendelkezésre számítógépes szoftvercsomag, az ELISA-nyomtatóval nyomtassa ki az OD értékeket.
Calculate the mean OD value for the antigen control wells, which is equivalent to the 100 % value.
Számítsa ki azt az antigénkontroll-vájatokra vonatkozó átlag OD-értéket, amely megfelel a 100 %-os értéknek.
Determine the 50 % OD value and manually calculate the positivity and negativity of each sample.
Határozza meg az 50 %-os OD-értéket és manuális úton számítsa ki valamennyi minta pozitivitását és negativitását.
Percentage inhibition (PI) value = 100 – (OD of each test control/Mean OD of Cm) × 100.
Százalékos inhibíciós (PI) érték = 100 - (az egyes vizsgálati kontrollok OD-ja/a Cm átlag OD-ja) × 100.
The duplicate negative control serum wells and the duplicate blank wells must record PI values between +25 % and –25 %, and between +95 % and +105 %, respectively.
A kétszeres negatív kontrollszérum-vájatoknak és a kétszeres vakvájatoknak +25 % és –25 %, illetve +95 % és +105 % közötti PI értékeket kell mutatniuk.
Failure to be within these limits does not invalidate the plate but does suggest that background colour is developing.
Amennyiben az érték nem e határértékek közé esik, az még nem zárja ki a vizsgálatból a lemezt, hanem háttérszín kialakulását sejteti.
The strong and weak positive control sera must record PI values between +81 % and +100 %, and between +51 % and +80 %, respectively.
Az erősen és gyengén pozitív kontrollszérumoknak +81 % és +100 %, illetve +51 % és +80 % közötti PI értékeket kell mutatniuk.
The diagnostic threshold for test sera is 50 % (PI 50 % or OD 50 %).
A vizsgálandó szérumok diagnosztikai küszöbértéke 50 % (PI 50 % vagy OD 50 %).
Samples recording PI values >50 % are recorded negative.
Az 50 %-nál kisebb PI-értékeket mutató mintákat negatívként regisztrálják.
Samples that record PI values above and below the threshold for the duplicate wells are considered doubtful; such samples may be re-tested in the spot test and/or titration.
A kétszeres vájatokra vonatkozó küszöb feletti és alatti PI értékeket mutató minták kétségesnek tekintendők; ezek a minták színreakciós vizsgálattal és/vagy titrálással újra megvizsgálhatók.
Positive samples may also be titrated to provide an indication of the degree of positivity.
A pozitív minták is titrálhatók annak érdekében, hogy meghatározzák a pozitivitás fokát.
Visual reading: Positive and negative samples are easily discernible by eye; weakly positive or strong negative samples may be more difficult to interpret by eye.
Vizuális leolvasás: A pozitív és negatív mintákat könnyű szabad szemmel megkülönböztetni; a gyengén pozitív vagy erősen negatív minták szabad szemmel való értékelése már nehezebb lehet.
Preparation of BTV ELISA antigen:
A BTV ELISA-antigén előkészítése:
Wash 40-60 roux of confluent BHK-21 cells three times with serum-free Eagle's medium and infect with bluetongue virus serotype 1 in serum-free Eagle's medium.
Mosson át háromszor 40–60 Roux-palacknyi összefolyó BHK-21 sejtekből álló sejttenyészetet szérummentes Eagle-féle tápközeggel, majd fertőzze meg 1-es szerotípusú kéknyelvbetegség-vírussal, szérummentes Eagle-féle tápközegben.
Incubate at 37 °C and examine daily for cytopathic effect (CPE).
Inkubálja 37 °C-on és vizsgálja meg naponta, hogy jelentkezik-e citopatogén hatás (CPE).
When CPE are complete in 90 % to 100 % of the cell sheet of each roux, harvest the virus by shaking any still-attached cells from the glass.
Amikor valamennyi Roux-palackban a sejtréteg 90–100 %-ában teljes CPE mutatkozik, az üvegre tapadt sejtek lerázásával gyűjtse be a vírust.
Centrifuge at 2000 to 3000 rpm to pellet the cells.
Centrifugálja 2000–3000-es percenkénti fordulatszámmal, a sejtek pelletizálása céljából.
Discard the supernatant and re-suspend the cells in approximately 30 ml of PBS containing 1 % ‘Sarkosyl’ and 2 ml phenylmethylsulphonyl fluoride (lysis buffer).
Öntse el a felülúszót, szuszpendálja újra a sejteket körülbelül 30 ml PBS-ben, amely 1 %-ban „Sarkosylt” és 2 ml fenil-metil-szulfonil-fluoridot tartalmaz (lízis-puffer).
This may cause the cells to form a gel and more lysis buffer may be added to reduce this effect.
A sejtek ettől gélt alkothatnak, ez a jelenség további lízis-puffer hozzáadásával csökkenthető.
(NB: phenylmethylsulphonyl fluoride is harmful - handle with extreme caution.)
(Megjegyzés: a fenil-metil-szulfonil-fluorid egészségre káros – kezelje különleges elővigyázatossággal!)
Disrupt the cells for 60 seconds using an ultrasonic probe at an amplitude of 30 microns.
Roncsolja a sejteket 60 másodpercen át ultrahangos szonda felhasználásával, 30 mikronos amplitúdón.
Centrifuge at 10000 rpm for 10 minutes.
Centrifugáljon 10000-es percenkénti fordulatszámon, 10 percig.
Store the supernatant at +4 °C and re-suspend the remaining cell pellet in 10 to 20 ml of lysis buffer.
Tartsa a felülúszót +4 °C-on és szuszpendálja újra a megmaradt sejtpelletet 10–20 ml lízis-pufferben.
Sonicate and clarify, storing the supernatant at each stage, a total of three times.
Ultrahangozza és tisztítsa meg a szuszpenziót, tartsa meg a felülúszót valamennyi lépésben, összesen három alkalommal.
Pool the supernatants and centrifuge at 24000 rpm (100,000 g) for 120 minutes at +4 °C over a 5 ml cushion of 40 % sucrose (w/v in PBS) using 30 ml Beckmann centrifuge tubes and an SW 28 rotor.
Elegyítse a felülúszókat és centrifugálja 24000-es percenkénti (100,000 g) fordulatszámmal 120 percig +4 °C-on 5 ml 40 %-os szacharózoldatra (v% PBS-ben) rétegezve, 30 ml-es Beckmann-centrifugacső és SW 28-as rotor felhasználásával.
Discard the supernatant, drain the tubes thoroughly and re-suspend the pellet in PBS by sonication.
Öntse el a felülúszót, alaposan csepegtesse le a csöveket és szuszpendálja újra a pelletet PBS-ben ultrahangozással.
Store the antigen in aliquots at –20 °C.
Tárolja az antigént előre kimért egyenlő adagokban, –20 °C-on.
Titration of BTV ELISA antigen:
A BTV ELISA-antigén titrálása:
Bluetongue ELISA antigen is titrated by the indirect ELISA.
A kéknyelv betegség ELISA antigénjét indirekt ELISA segítségével titrálják.
Twofold dilutions of antigen are titrated against a constant dilution (1/100) monoclonal antibody 3-17-A3.
Az antigén kétszeres hígítását egy állandó hígítású (1:100) monoklonális ellenanyaggal (3-17-A3) szemben titrálják.
The protocol is as follows:
Az eljárás a következő:
Titrate a 1:20 dilution of BTV antigen in PBS across the microtitre plate in a twofold dilution series (50 μl/well) using a multichannel pipette.
Titráljon egy 1:20 hígítású BTV antigént PBS-ben a mikrotitráló lemez hosszában egy kétszeres hígítású sorozatban (50 μl vájatonként), többcsatornás pipetta felhasználásával.
Incubate for one hour at 37 °C on an orbital shaker.
Inkubálja egy órán át 37 °C-on körkörös rázógépen.
Wash plates three times with PBS.
Mossa át a lemezeket háromszor PBS-szel.
Add 50 μl of monoclonal antibody 3-17-A3 (diluted 1/100) to each well of the microtitre plate.
Tegyen 50 μl (1:100 hígítású) 3-17-A3 monoklonális ellenanyagot a mikrotitráló lemez minden vájatába.
Add 50 μl of rabbit anti-mouse globulin conjugated to horseradish peroxidase, diluted to a pre-titrated optimal concentration, to each well of the microtitre plate.
Tegyen 50 μl, tormaperoxidázhoz konjugált, az előre titrált optimális koncentrációra hígított nyúl anti-egér globulint a mikrotitráló lemez minden vájatába.
Add substrate and chromogen as described previously.
Adjon hozzá szubsztrátot és kromogént az előbb leírtak szerint.
Stop the reaction after 10 minutes by the addition of 1 Molar sulphuric acid (50 μl/well).
Állítsa le a reakciót 10 perc múlva 1 mólos kénsav hozzáadásával (50 μl vájatonként).
In the competitive assay, the monoclonal antibody must be in excess, therefore a dilution of antigen is chosen which falls on the titration curve (not on the plateau region) which gives approximately 0,8 OD after 10 minutes.
A kompetitív vizsgálatban a monoklonális ellenanyagnak túlsúlyban kell lenni, ezért olyan antigén-hígítást kell választani, amely a titrációs görbére esik (nem a platótartományra), és 10 perc elteltével körülbelül 0,8 OD értéket ad.
The agar gel immuno-diffusion test shall be carried out according to the following protocol:
Az agargél-immundiffúziós próbákat az alábbi eljárás szerint kell végrehajtani:
Antigen:
Antigén:
Precipitating antigen is prepared in any cell culture system that supports the rapid multiplication of a reference strain of bluetongue virus.
A precipitáló antigént valamely olyan sejtkultúrában állítják elő, amely elősegíti a kéknyelvbetegség-vírus referenciatörzsének gyors szaporodását.
BHK or Vero cells are recommended.
BHK- vagy Vero-sejtek használata ajánlott.
Antigen is present in the supernatant fluid at the end of virus growth but requires 50 to 100-fold concentration to be effective.
A vírusszaporítás végén a felülúszó folyadékban van antigén, de 50–100-szoros koncentráció szükséges ahhoz, hogy hatékony legyen.
This may be achieved by any standard protein concentration procedure; virus in the antigen may be inactivated by the addition of 0,3 % (v/v) beta-propiolactone.
Ez bármely standard fehérjekoncentrációs eljárással elérhető; az antigénben lévő vírus 0,3 (v/v)%-os béta-propiolakton hozzáadásával inaktiválható.
Known positive control serum:
Ismert pozitivitású kontrollszérum:
Using the international reference serum and antigen a national standard serum is produced, standardised for optimal proportion against the international reference serum, freeze-dried and used as the known control serum in each test.
A nemzetközi referencia-szérum és -antigén felhasználásával nemzeti standard szérumot állítanak elő, az optimális arány elérése céljából a nemzetközi referencia-szérummal szemben standardizálják, fagyasztva szárítják, és ismert kontrollszérumként használják minden próba során.
Test serum
Vizsgálandó szérum