natgillin/translations-raw huggingface dataset:
120,4 mg/kg (95 % of the minimum incorporation rate for 85 % pure stigmasterol),
120,4 mg/kg (a legkisebb hozzákeverési arány 95 %-a a 85 %-os tisztaságú sztigmaszerinre),
82,9 mg/kg (70 % of the minimum incorporation rate for 95 % pure stigmasterol),
82,9 mg/kg (a legkisebb hozzákeverési arány 70 %-a a 95 %-os tisztaságú sztigmaszerinre),
84,3 mg/kg (70 % of the minimum incorporation rate for 85 % pure stigmasterol).
84,3 mg/kg (a legkisebb hozzákeverési arány 70 %-a a 85 %-os tisztaságú sztigmaszerinre).
The tracer concentration of the sample giving the lowest result is used in conjunction with interpolation respectively between 118,5 mg/kg and 82,9 mg/kg or 120,4 mg/kg and 84,3 mg/kg.
A legalacsonyabb eredményt adó minta jelölőanyag-koncentrációját a 118,5 mg/kg és 82,9 mg/kg közötti, illetve a 120,4 mg/kg és 84,3 mg/kg közötti interpolációval együtt használjuk.
The incorporation rate for sitosterol is 600 g of at least 90 % pure sitosterol per tonne of concentrated butter, i.e. 540 mg/kg
A szitoszterin esetében a hozzákeverési arány 600 g legalább 90 %-os tisztaságú szitoszterin a vajkoncentrátum minden tonnájára, vagyis 540 mg/kg
480,9 mg/kg (95 % of the minimum incorporation rate for 90 % pure sitosterol),
480,9 mg/kg (a legkisebb hozzákeverési arány 95 %-a a 90 %-os tisztaságú szitoszerinre),
345,9 mg/kg (70 % of the minimum incorporation rate for 90 % pure sitosterol).
345,9 mg/kg (a legkisebb hozzákeverési arány 70 %-a a 90 %-os tisztaságú szitoszerinre).
The tracer concentration in the sample giving the lowest result is used in conjunction with interpolation between 480,9 mg/kg and 345,9 mg/kg.
A legalacsonyabb eredményt adó minta jelölőanyag-koncentrációját a 480,9 mg/kg és 345,9 mg/kg közötti interpolációval együtt használjuk.
Chromatogram of resolution test mixture
A felbontóképességet ellenőrző keverék kromatogramja
Complete resolution is preferable, i.e. the peak trace for lanosterol should return to baseline before leaving for the sitosterol peak although incomplete resolution is tolerable.
A teljes felbontsási kép a kïvánatos, vagyis a lanoszterinnek megfelelő kromatográfiás csúcsnak előbb vissza kell térnie as alapvonalra, mielőtt a szitoszterint jelző másik csúcs elindulna, habár a nem egészen teljes felbontás is elfogadható.
FID Detector response
FID detektoron (lángionizációs mérőn) kapott válasz
Time (mins)
Idő (perc)
Note: Integration of the stigmasterol peak should include any tailing as defined by points 1, 2 and 3.
Megjegyzés: A sztigmaszterin csúcs integrálásakor az 1., 2., valmint 3. pontok által meghatározott kilógó (elmosódott) értékeket is bele kell számolni
Figure 2a
ábra
Figure 2b
ábra
Stigmasterol standard
Sztigmaszterin standard
Butter sample denatured with stigmasterol
Sztigmaszterin denaturált vajminta Sztigmasztanol
FID detector response
FID detektoron (lángionizációs mérőn) kapott válasz
Betulin (internal standard)
Betulin (belső standard)
(mins)
0Idő (perc)
Note: β-sitosterol often contains an impurity (identified as stigmastanol) which elutes immediately after β-sitosterol.
Megjegyzés: A β-szitoszterin gyakran tartalmaz szennyeződéseket (sztigmaszterunként azonosïtható), amelyek azonnal a β-szitoszterin után eluálodnak.
The areas of these two peaks should be summed when evaluating the total β-sitosterol present.
Ennélfogva ennek a két csúcsnak a területét össze kell adni, amikor a jelenlévő összes β-szitoszterin mennyiséget értékeljük.
Figure 3a
ábra
Figure 3b
ábra
Sitosterol standard
Sztigmaszterin standard
Butter sample denatured with β-Sitosterol
Sztigmaszterin denaturált vajminta
(Article 6)
(6. cikk)
REFERENCE METHOD FOR THE DETECTION OF COWS’ MILK AND CASEINATE IN CHEESES FROM EWES’ MILK, GOATS’ MILK OR BUFFALOS’ MILK OR MIXTURES OF EWES’, GOATS’ AND BUFFALOS’ MILK
JUHTEJBŐL, KECSKETEJBŐL VAGY BIVALYTEJBŐL, ILLETVE JUH-, KECSKE- ÉS BIVALYTEJ ELEGYÉBŐL KÉSZÍTETT SAJTOKBAN TALÁLHATÓ TEHÉNTEJ ÉS KAZEINÁT KIMUTATÁSÁRA ALKALMAS REFERENCIA-MÓDSZER
Detection of cows’ milk and caseinate in cheeses made from ewes’ milk, goats’ milk, buffalos’ milk or mixtures of ewes’, goats’ and buffalos’ milk by isoelectric focusing of γ-caseins after plasminolysis.
Juhtejből, kecsketejből vagy bivalytejből, illetve juh-, kecske- és bivalytej elegyéből készített sajtokban található tehéntej és kazeinátok kimutatása a γ-kazeinekre alkalmazott, plazmolízist követő izoelektromos fókuszálással.
The method is suitable for sensitive and specific detection of native and heat-treated cows’ milk and caseinate in fresh and ripened cheeses made from ewes’ milk, goats’ milk, buffalos’ milk or mixtures of ewes’, goats’ and buffalos’ milk.
Ez a módszer alkalmas a kezeletlen és hőkezelt tehéntej, valamint kazeinát nagy érzékenységű és specifikus kimutatására juhtejből, kecsketejből vagy bivalytejből, illetve juh-, kecske- és bivalytej elegyéből készített friss és érlelt sajtokban.
It is not suitable for the detection of milk and cheese adulteration by heat-treated bovine whey protein concentrates.
Nem alkalmas azonban a tej és a sajt hőkezelt tehéntejsavófehérje-koncentrátumokkal történt hamisításának kimutatására.
PRINCIPLE OF THE METHOD
A MÓDSZER ELVE
Isolation of caseins from cheese and the reference standards
A kazeinek izolálása a sajtból és a referenciastandardból.
Dissolving of the isolated caseins and submitting to plasmin (EC.3.4.21.7) cleavage
Az izolált kazeinek feloldása és alávetése a plazminos (EC.3.4.21.7.) bontásnak.
Isoelectric focusing of plasmin-treated caseins in the presence of urea and staining of proteins
Izoelektromos fókuszálás alkalmazása a plazminnal kezelt kazeinekre karbamid jelenlétében, és a fehérjék megfestése.
Evaluation of stained γ3 and γ2-casein patterns (evidence of cows’ milk) by comparison of the pattern obtained from the sample with those obtained in the same gel from the reference standards containing 0 % and 1 % cows’ milk.
A megfestett (a tehéntej jelenlétét bizonyító) γ3 és γ2-kazeinmintázatoknak az értékelése a vizsgálati mintából nyert mintázatok és az ugyanazon a gélen, a 0 %, illetve az 1 % tehéntejet tartalmazó referenciastandardokból kapott mintázatok összehasonlításával.
Unless otherwise indicated, analytical grade chemicals must be used.
Ellenkező rendelkezés hiányában, analitikai tisztaságú vegyszereket kell alkalmazni.
Water must be double-distilled or of equivalent purity.
A víznek kétszeresen desztilláltnak vagy azzal egyenértékű tisztaságúnak kell lennie.
Note: The following details apply to laboratory prepared polyacrylamide gels containing urea, of dimensions 265 × 125 × 0,25 mm. Where other sizes and types of gel are used, the separation conditions may have to be adjusted.
Megjegyzés: A következő részletek a laboratóriumban elkészített, karbamidtartalmú poliakrilamid gélekre vonatkoznak, amelyek méretei 265 × 125 × 0,25 mm. Ha más nagyságú vagy más típusú gélt használunk, a leválasztási körülményeket külön be kell állítani.
Isoelectric focusing
Izoelektromos fókuszálás
Reagents for production of the urea containing polyacrylamide gels
Vegyszerek a karbamidtartalmú poliakrilamid gél előállításához
Stock gel solution
Géltörzsoldat
Dissolve:
Oldjuk fel a következőket vízben:
4,85 g acrylamide
4,85 g akrilamid
0,15 g N, N'-methylene-bis-acrylamide (BIS)
0,15 g N, N'-metilén-bisz-akrilamid (BIS)
48,05 g urea
48,05 g karbamid
15,00 g glycerol (87 % w/w),
15,00 g glicerin (87 % m/m),
in water and make up to 100 ml and store in a brown glass bottle in the refrigerator.
töltsük fel 100 ml-re, és hűtőszekrényben, barna üvegben tároljuk.
Note: A commercially available preblended acrylamide/BIS solution can be used in preference to the quoted fixed weights of the neurotoxic acrylamides.
Megjegyzés: A fent említett fix tömegű, neurotoxikus akrilamidok helyett előnyösebb lehet a kereskedelemben kapható, előre bekevert akrilamid/BIS-oldat használata.
Where such a solution contains 30 % w/v acrylamide and 0,8 % w/v BIS, a volume of 16,2 ml must be used for the formulation instead of the fixed weights.
Ha az ilyen oldat 30 % vegyesszázalék (m/v) akrilamidot és 0,8 % m/v BIS-t tartalmaz, 16,2 ml térfogatot kell belőle felhasználni a fix tömegek helyett.
The shelf life of the stock solution is a maximum of 10 days; if its conductivity is more than 5 μS, de-ionize by stirring with 2 g Amberlite MB-3 for 30 minutes, then filter through a 0,45 μm membrane.
A törzsoldat eltarthatósági ideje legfeljebb 10 nap; ha vezetőképessége több mint 5 μS, 2 g Amberlite MB-3 vegyszerrel kell 30 percen keresztül történő keverés útján ionmentesíteni, majd egy 0,45 μm pórusátmérőjű membránszűrőn átszűrni.
Gel solution
Géloldat
Prepare a gel solution by mixing additives and ampholytes with the stock gel solution (see 4.1.1).
Készítsük el a géloldatot úgy, hogy az adalékanyagokat és az amfolitokat elkeverjük a géltörzsoldattal (lásd a 4.1.l. pontot).
9,0 ml stock solution
9,0 ml törzsoldat
24 mg β-alanine
24 mg β-alanin
500 μl ampholyte pH 3,5-9,5 [1]
500 µl 3,5–9,5 pH közötti amfolit [1]
250 μl ampholyte pH 5-7 [1] The produce Ampholine® pH 3,5-9,5 (Pharmacia) and Resolyte® pH 5-7 and pH 6-8 (BDH, Merck) have proved particularly suitable for obtaining the required separation of γ-caseins.
250 μl 5–7 pH közötti amfolit [1] Az Ampholine® pH 3,5–9,5-es (Pharmacia) és a Resolyte® pH 5–7, valamint pH 6–8-as (BDH, Merck) termékek különösen alkalmasnak bizonyultak a γ -kazeinek kívánt szeparációjának elérésére.
Mix the gel solution and de-gas for two to three minutes in an ultrasonic bath or in vacuum.
Keverjük össze a géloldatot, és vákuumban vagy ultrahangos fürdőben gázmentesítsük két vagy három percen át.
Note: Prepare the gel solution immediately prior to pouring it (see 6.2).
Megjegyzés: A géloldatot közvetlenül a kiöntés előtt készítsük el (lásd a 6.2. pontot).
Catalyst solutions
Katalizátoroldatok
N, N, N' N' — tetramethylethylenediamine (Temed)
N, N, N' N' – tetrametil-etilén-diamin (Temed).
40 % w/v ammonium persulphate (PER):
40 % m/v ammónium-perszulfát (PER):
Dissolve 800 mg PER in water and make up to 2 ml.
Oldjunk fel vízben 800 mg PER-t, és töltsük fel vízzel 2 ml-re.
Note: Always use freshly prepared PER solution.
Megjegyzés: Mindig frissen készített PER-oldatot használjunk.
Contact fluid
Kontaktfolyadék
Kerosene or liquid paraffin
Világítópetróleum vagy folyékony paraffin
Anode solution
Anódoldat
Dissolve 5,77 g phosphoric acid (85 % w/w) in water and dilute to 100 ml.
Oldjunk fel vízben 5,77 g foszforsavat (85 % m/m), és töltsük fel vízzel 100 ml-re.
Cathode solution
Katódoldat
Dissolve 2,00 g sodium hydroxide in water and dilute to 100 ml with water.
Oldjunk fel vízben 2,00 g nátrium-hidroxidot, és hígítsuk fel vízzel 100 ml-re.
Reagents for protein isolation
Vegyszerek a fehérjék izolálására
Dilute acetic acid (25,0 ml of glacial acetic acid made up to 100 ml with water)
Hígított ecetsav (25,0 ml jégecet vízzel 100 ml-re hígítva)
Protein dissolving buffer
Proteinoldó puffer
Dissolve
Oldjuk fel vízben a következőket:
5,75 g glycerol (87 % w/w)
5,75 g glicerin (87 % m/m)
24,03 g urea
24,03 g karbamid
250 mg dithiothreitol,
250 mg ditio-treitol,
in water and make up to 50 ml
és töltsük fel 50 ml-re.
Note: Store in a refrigerator, maximum shelf-life one week.
Megjegyzés: Hűtőszekrényben tárolva eltarthatósági ideje legfeljebb egy hét.
Reagents for plasmin cleavage of caseins
A kazeinek plazminos bontására használt vegyszerek
Ammonium carbonate buffer
Ammónium-karbonát-puffer
Titrate a 0,2 mol/l ammonium hydrogencarbonate solution (1,58 g/100 ml water) containing 0,05 mol/l ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA, 1,46 g/100 ml with a 0,2 mol/l ammonium carbonate solution (1,92 g/100 ml water) containing 0,05 mol/l EDTA to ph 8.
Titráljunk 0,05 mol/l etilén-diamin-tetraecetsavat (EDTA, 1,46 g/100 ml) tartalmazó 0,2 mol/l ammónium-hidrogénkarbonát-oldatot (1,58 g/100 ml víz) 0,05 mol/l EDTA-t tartalmazó 0,2 mol/l ammónium-karbonát-oldattal (1,92 g/100 ml víz) 8 pH-ig.
ε-Aminocaproic acid solution for enzyme inhibition
ε-aminokapronsav-oldat enzimgátlásra
Dissolve 2,624 g ε-aminocaproic acid (6 amino-n-hexanoic acid) in 100 ml of 40 % (v/v) ethanol.
Oldjunk fel 2,624 g ε-aminokapronsavat (6-amino-n-hexánsav) 100 ml 40 térfogatszázalékos etil-alkoholban.
Certified reference standards of a mixture of renneted ewes’ and goats’ skimmed milk containing 0 % and 1 % of cows’ milk are available from the Commission’s Institute for Reference Materials and Measurements, B-2440 Geel, Belgium
Bizonylattal ellátott, 0 %, illetve 1 % tehéntejet tartalmazó, tejoltóenzimmel kezelt fölözött juhtej- és kecsketejkeverék referenciastandardot a Referenciaanyagok és Mérések Bizottsági Intézeténél (B-2440 Geel, Belgium) lehet beszerezni.
Preparation of laboratory interim-standards of buffalos’ renneted milk containing 0 % and 1 % of cows’ milk
Tejoltóenzimmel kezelt bivalytejből előállított, 0 % és 1 % tehéntejet tartalmazó laboratóriumi belső standard készítése
Skimmed milk is prepared by centrifuging of either buffalo or bovine raw bulk milk at 37 °C at 2500 g for 20 minutes.
A fölözött tejet nyers, ömlesztett bivalytejből, illetve szarvasmarhatejből 37 °C-on, 2500 g-vel 20 percen át történő centrifugálással készítjük.
After cooling the tube and contents rapidly to 6 to 8 °C, the upper fat layer is removed completely.
A centrifugacsövet a tartalmával együtt hirtelen 6–8 °C-ra lehűtjük, majd a felső, zsíros réteget teljes egészében eltávolítjuk.
For the preparation of the 1 % standard add 5,00 ml of bovine skimmed milk to a 495 ml of buffalos’ skimmed milk in a 1 l beaker, adjust the pH to 6,4 by the addition of dilute lactic acid (10 % w/v).
Az 1 %-os standard elkészítéséhez 1 literes főzőpohárban adjunk 5,00 ml fölözött szarvasmarhatejet 495 ml fölözött bivalytejhez, pH-ját 10 vegyesszázalékos hígított tejsav hozzáadásával állítsuk be 6,4-re.
Adjust the temperature to 35 °C and add 100 μl of calf rennet (rennet activity 1: 10000, c. 3000 U/ml), stir for 1 minute and then leave the beaker covered with an aluminium foil at 35 °C for one hour to allow formation of the curd.
A hőmérsékletet állítsuk be 35 °C-ra és adjunk hozzá 100 μl borjúgyomorból nyert oltóenzimet (aktivitása 1:10000, c. 3000 U/ml), egy percen keresztül kavarjuk, majd a főzőpoharat alufóliával letakarva hagyjuk egy órán át 35 °C-on pihenni az alvadék kialakulásának elősegítésére.
After the curd has formed, the whole renneted milk is freeze-dried without prior homogenization or draining of the whey.
Miután az alvadék kialakult, a teljes beoltott tejet előzetes homogenizálás és a savó leszívása nélkül fagyasztva szárítjuk.
After freeze-drying it is finely ground to produce a homogeneous powder.
A fagyasztva szárítást követően az anyagot finomra daráljuk, amíg homogén port nem kapunk.
For the preparation of the 0 % standard, carry out the same procedure using genuine buffalo skimmed milk.
A 0 %-os standard elkészítéséhez ugyanezt a műveletsort a tiszta fölözött bivalytejjel kell elvégezni.
The standards must be stored at –20 °C.
A standardokat –20 °C-on kell tárolni.
Note: It is advisable to check the purity of the buffalos’ milk by isoelectric focusing of the plasmin-treated caseins before preparation of the standards.
Megjegyzés: Ajánlatos a bivalytej tisztaságát a standardok elkészítése előtt a plazminos emésztéssel előkészített kazeinek izoelektromos fókuszálásával ellenőrizni.
Reagents for protein staining
A fehérje festéséhez használt vegyszerek
Fixative
Fixálószer
Dissolve 150 g trichloroacetic acid in water and make up to 1000 ml.
Oldjunk fel vízben 150 g triklórecetsavat, és töltsük fel vízzel 1000 ml-re.
Destaining solution
Festékeltávolító oldat
Dilute 500 ml methanol and 200 ml glacial acetic acid to 2000 ml with distilled water.
Oldjunk fel 500 ml metil-alkoholt és 200 ml jégecetet 2000 ml desztillált vízben.
Note: Prepare the destaining solution fresh every day; it can be prepared by mixing equal volumes of stock solutions of 50 % (v/v) methanol and 20 % (v/v) glacial acetic acid.
Megjegyzés: A festékeltávolító oldatot minden nap frissen készítsük el; elkészíthető 50 % térfogatszázalékos metilalkohol- és 20 térfogatszázalékos jégecettörzsoldat egyenlő mennyiségeinek az összekeverésével.
Staining solutions
Festékoldatok
Staining solution (stock solution 1)
Festékoldat (1. törzsoldat)
Staining solution (stock solution 2)
Festékoldat (2. törzsoldat)
Dissolve 5,0 g copper sulphate pentahydrate in 1000 ml 20 % (v/v) acetic acid.
Oldjunk fel 5,0 g rézszulfát-pentahidrátot 1000 ml 20 térfogatszázalékos jégecetben.
Staining solution (working solution)
Festékoldat (munkaoldat)
Mix together 125 ml of each of the stock solutions (4.11.1, 4.11.2) immediately prior to staining.
Közvetlenül festés előtt öntsünk össze 125 ml-t mindkét törzsoldatból (4.11.1., 4.11.2.).
Note: The staining solution should be prepared on the day that it is used.
Megjegyzés: A festékoldatot a felhasználás napján kell elkészíteni.
Glass plates (265 × 125 × 4 mm); rubber roller (width 15 cm); levelling table
Üveglemezek (265 × 125 × 4 mm); gumihenger (15 cm széles); szintező asztal
Gel carrier sheet (265 × 125 mm)
Géltartó lemez (265 × 125 mm)
Covering sheet (280 × 125 mm).
Fedőlemez (280 × 125 mm).
Stick on strip of adhesive tape (280 × 6 × 0,25 mm) to each long edge (see Figure 1)
Mindkét hosszanti végére ragasszunk fel egy-egy csíkban ragasztószalagot (280 × 6 × 0,25 mm) (lásd az 1. ábrát)
Electrofocusing chamber with cooling plate (e.g. 265 × 125 mm) and suitable power supply (≥ 2,5 kV) or automatic electrophoresis device
Elektrofókuszáló kamra hűtőlemezzel (pl. 265 × 125 mm) és megfelelő áramellátással (≥ 2,5 kV) vagy automata elektroforézis-készülék
Circulation cryostat, thermostatically controlled at 12 ± 0,5 °C
Cirkulációs kriosztát, termosztátos vezérléssel 12 ±0,5 °C-on
Centrifuge, adjustable to 3000 g
3000 g-ig állítható centrifuga
Electrode strips (≥ 265 mm long)
Elektródacsíkok (≥ 265 mm hosszban)
Plastic dropping bottles for the anode and cathode solutions
Műanyag csepegtetőpalackok az anód- és a katódoldat számára
Sample applicators (10 × 5 mm, viscose or low protein-adsorption filter paper)
Mintafelvivő eszköz (10 × 5 mm, viszkózus vagy alacsony fehérjeadszorpciós szűrőpapír)
Stainless steel scissors, scalpels and tweezers
Rozsdamentes acélolló, szike és műszerészcsipesz
Stainless steel or glass staining and destaining dishes (e.g. 280 × 150 mm instrument trays)
Rozsdamentes acél vagy üvegfestő- és festékeltávolító-edények (például 280 × 150 mm műszertálca)
Adjustable rod homogenizer (10 mm shaft diameter), rpm range 8000 to 20000
Szabályozható rúdhomogenizátor (10 mm tengelyátmérővel), percenkénti fordulatszám-tartomány 8000–20000 között
Ultrasonic bath
Ultrahangos fürdő
Film welder
Filmhegesztő gép
25 μl micropipettes
25 μl-es mikropipetta
Vacuum concentrator or freeze-dryer
Vákuumbepárló vagy fagyasztva-szárító
Thermostatically controlled water bath adjustable to 35 and 40 ± 1 °C with shaker
Termosztatikus vezérlésű, 35 és 40 ±1 °C-ra állítható vízfürdő rázógéppel
Densitometer equipment reading at λ = 634 nm
Denzitométer, λ = 634 nm-es leolvasóval felszerelve
Isolation of caseins
Kazeinek izolálása
Weigh the amount equivalent to 5 g dry mass of cheese or the reference standards into a 100 ml centrifuge tube, add 60 ml distilled water and homogenize with a rod homogenizer (8000 to 10000 rpm).
Egy 100 milliliteres centrifugacsőbe mérjünk ki 5 g szárazanyag-mennyiségnek megfelelő sajtot vagy a referenciastandardot, adjunk hozzá 60 ml desztillált vizet és homogenizáljuk a rúdhomogenizátorral (8000–10000-es percenkénti fordulatszám között).
Adjust to pH 4,6 with dil. acetic acid (4.5.1) and centrifuge (5 minutes, 3000 g).
Állítsuk be hígított ecetsavval (4.5.1.) 4,6 pH-ra, és centrifugáljuk (5 perc, 3000 g).
Decant the fat and whey, homogenize the residue at 20000 rpm in 40 ml distilled water adjusted to pH 4,5 with dil. acetic acid (4.5.1), add 20 ml dichloromethane (4.5.2), homogenize again and centrifuge (5 minutes, 3000 g).
A zsírt és a savót öntsük le, a maradékot pedig 20000-es percenkénti fordulatszámon homogenizáljuk 40 ml desztillált vízben, amelynek a pH-ját előzetesen hígított ecetsavval (4.5.1.) 4,5 pH-ra állítottuk be, adjunk hozzá 20 ml diklórmetánt (4.5.2.), ismét homogenizáljuk és centrifugáljuk (5 perc, 3000 g).
Remove the casein layer that lies between the aqueous and organic phases (see Figure 2) with a spatula and decant off both phases.
Egy spatulával távolítsuk el a kazeinréteget, amely a vizes és a szerves fázis között található (lásd a 2. ábrát), és dekantáljuk mindkét fázist.
Rehomogenize the casein in 40 ml distilled water (see above) and 20 ml dichloromethane (4.5.2) and centrifuge.
A kazeint ismét homogenizáljuk 40 ml desztillált vízben (a fentiek szerint), és 20 ml diklórmetánnal (4.5.2.) centrifugáljuk.
Repeat this procedure until both extraction phases are colourless (two to three times).
Addig ismételjük ezt a műveletet, amíg mindkét extraháló fázis színtelen nem lesz (két-három alkalommal).
Homogenize the protein residue with 50 ml acetone (4.5.3) and filter through a medium-speed folded filter paper.
A fehérjemaradékot 50 ml acetonban (4.5.3.) homogenizáljuk, és egy közepes átfolyási sebességű, redős papírszűrőn szűrjük át.
Wash the residue on the filter with two separate 25 ml portions of acetone each time and allow to dry in the air or a stream of nitrogen, then pulverize finely in a mortar.
A szűrőn maradt maradékot két, külön 25 ml-es adagban acetonnal mossuk le, hagyjuk a levegőn megszáradni, vagy nitrogénnel szárítsuk, majd törjük finom porrá egy mozsárban.
Note: Dry casein isolates should be kept at –20 °C.
Megjegyzés: A száraz kazeinizolátumokat –20 °C hőmérsékleten kell tartani.
Plasmin cleavage of β-caseins to intensify γ-caseins
A β-kazeinek plazminos bontása a γ-kazeinek kifejezettebbé tétele érdekében
Disperse 25 mg of isolated caseins (6.1.1) in 0,5 ml ammonium carbonate buffer (4.7.1) and homogenize for 20 minutes by e.g. using ultrasonic treatment.
Oszlassunk el 25 mg izolált kazeint (6.1.1.) 0,5 ml ammónium-karbonát-pufferben (4.7.1.) és 20 percig homogenizáljuk, például ultrahangos kezeléssel.
Heat to 40 °C and add 10 μl plasmin (4.7.2), mix and incubate for one hour at 40 °C with continuous shaking.
Melegítsük fel 40 °C-ra, és adjunk hozzá 10 μl plazmint (4.7.2.), keverjük össze, majd folyamatos rázatás mellett inkubáljuk egy órán át 40 °C-on.
To inhibit the enzyme add 20 μl ε-aminoproic acid solution (4.7.3), then add 200 mg of solid urea and 2 mg of dithiothreitol.
Az enzim késleltetése érdekében adjunk hozzá 20 μl ε-aminokapronsav-oldatot (4.7.3.), majd 200 mg szilárd karbamidot és 2 mg ditio-treitolt.
Note: To obtain more symmetry in the focused casein bands it is advisable to freeze-dry the solution after adding the ε-aminocaproic acid and then dissolving the residues in 0,5 ml protein dissolving buffer (4.6).
Megjegyzés: A fókuszált kazeincsíkok nagyobb szimmetriájának elérése érdekében ajánlatos az oldatot a ε-aminokapronsav hozzáadását követően liofilizálni, majd a maradékot 0,5 ml proteinoldó-pufferben oldani (4.6.).
Preparation of the urea containing polyacrylamide gels
A karbamidtartalmú poliakrilamid gél elkészítése
With the aid of a few drops of water roll the gel carrier sheet (5.2) onto a glass plate (5.1), removing any extraneous water with paper towel or tissue.
Néhány csepp víz segítségével terítsük ki a géltartó lemezt (5.2.) egy üveglapra (5.1.) egy papírtörölközővel vagy itatóssal eltávolítva a felesleges vizet.
Roll the cover sheet (5.3) with spacers (0,25 mm) onto another glass plate in the same way.
A fedőlemezt (5.3.) egy másik üveglapra terítsük ki a távtartókkal (0,25 mm) együtt azonos módon.
Lay the plate horizontally on a levelling table.
Fektessük a lapot vízszintesen egy szintező asztalra.
Add 10 μl Temed (4.1.3.1) to the prepared and de-aerated gel solution (4.1.2), stir and add 10 μl PER-solution (4.1.3.2), mix thoroughly and immediately pour out evenly onto the centre of the cover sheet.
Adjunk hozzá az előkészített és légmentesített géloldathoz (4.1.2.) 10 μl Temed-oldatot (4.1.3.1.), keverjük össze és adjunk még hozzá 10 μl PER-oldatot (4.1.3.2.), ezt is alaposan keverjük össze, majd azonnal öntsük ki egyenletesen a fedőlemez közepére.