natgillin/translations-raw huggingface dataset:
This allows quantitative measurement (by luminescence detection) of luciferase gene induction, using well established light producing luciferase substrates, as an indicator of the activity of the Nrf2 transcription factor in cells following exposure to electrophilic substances.
Priprema ispitivane kemikalije i tvari koje služe kao kontrola
Test chemicals are considered positive in the KeratinoSens™ assay if they induce a statistically significant induction of the luciferase activity above a given threshold (i.e. > 1,5 fold or 50 % increase), below a defined concentration which does not significantly affect cell viability (i.e. below 1000 μM and at a concentration at which the cellular viability is above 70 % (9) (12)).
Ispitivana kemikalija i tvari koje služe kao kontrola pripremaju se na dan ispitivanja.
For this purpose, the maximal fold induction of the luciferase activity over solvent (negative) control (Imax) is determined.
Za test KeratinoSensTM ispitivane kemikalije otapaju se u dimetil sulfoksidu (DMSO) do konačne željene koncentracije (npr.
Furthermore, since cells are exposed to series of concentrations of the test chemicals, the concentration needed for a statistically significant induction of luciferase activity above the threshold (i.e. EC1,5 value) should be interpolated from the dose-response curve (see paragraph 32 for calculations).
200 mM).
Finally, parallel cytotoxicity measurements should be conducted to assess whether luciferase activity induction levels occur at sub-cytotoxic concentrations.
Otopine DMSO-a mogu se smatrati samosterilizirajućima te nije potrebna sterilna filtracija.
Prior to routine use of the ARE-Nrf2 luciferase assay that adheres to this test method, laboratories should demonstrate technical proficiency, using the ten Proficiency Substances listed in Appendix 2.
Ispitivana kemikalija koja nije topljiva u DMSO-u otapa se u sterilnoj vodi ili hranjivoj podlozi za uzgoj kulture i otopine se steriliziraju, npr. filtriranjem.
Performance standards (PS) (28) are available to facilitate the validation of new or modified in vitro ARE-Nrf2 luciferase test methods similar to the KeratinoSens™ assay and allow for timely amendment of this test method for their inclusion.
Za ispitivanu kemikaliju koja nema utvrđenu molekularnu masu (MM) priprema se radna otopina do zadane koncentracije (40 mg/mL ili 4 % (w/v)) u testu KeratinoSensTM.
Mutual Acceptance of Data (MAD) according to the OECD agreement will only be guaranteed for test methods validated according to the PS, if these test methods have been reviewed and included in the corresponding test guideline by OECD.
Ako se upotrebljavaju druga otapala, a ne DMSO, voda ili hranjiva podloga za uzgoj kulture, potrebno je navesti dovoljno znanstveno obrazloženje.
Currently, the only method covered by this test method is the scientifically valid KeratinoSensTM assay (9) (12) (13) (14).
Od radnih otopina ispitivane kemikalije u DMSO-u pripremaju se serijska razrjeđenja s pomoću DMSO-a kako bi se dobilo 12 glavnih koncentracija kemikalije koje će se ispitivati (od 0,098 do 200 mM u testu KeratinoSensTM).
The Standard Operating Procedures (SOP) for the KeratinoSensTM assay is available and should be employed when implementing and using the test method in the laboratory (15).
Za ispitivanu kemikaliju koja nije topljiva u DMSO-u razrjeđenja za dobivanje glavnih koncentracija pripremaju se s pomoću sterilne vode ili sterilne hranjive podloge za uzgoj kulture.
Laboratories willing to implement the test method can obtain the recombinant cell line used in the KeratinoSensTM assay by establishing a licence agreement with the test method developer.
Neovisno o upotrijebljenom otapalu glavne se koncentracije potom razrjeđuju dvadesetpeterostruko u hranjivoj podlozi za uzgoj kulture koja sadržava serum te se na kraju upotrebljavaju za tretiranje nakon još jednog četverostrukog razrjeđivanja tako da konačne koncentracije ispitivane kemikalije budu u rasponu od 0,98 do 2000 μM u testu KeratinoSensTM.
The following paragraphs provide with a description of the main components and procedures of the ARE-Nrf2 luciferase test method.
U opravdanim je slučajevima moguće upotrijebiti druge koncentracije (npr. u slučaju citotoksičnosti ili slabe topljivosti).
Preparation of the keratinocyte cultures
U testu KeratinoSensTM kao negativna kontrola (s otapalom) upotrebljava se DMSO (CAS br.
A transgenic cell line having a stable insertion of the luciferase reporter gene under the control of the ARE-element should be used (e.g. the KeratinoSens™ cell line).
67-68-5, čistoće ≥ 99 %), za koju se priprema šest jažica po pločici.
Upon receipt, cells are propagated (e.g. 2 to 4 passages) and stored frozen as a homogeneous stock.
Razrjeđuje se na isti način kako je opisano za glavne koncentracije u stavku 22., tako da konačna koncentracija negativne kontrole (s otapalom) bude 1 %, za koju je poznato da ne utječe na preživljavanje stanica te odgovara istoj koncentraciji DMSO-a u ispitanoj kemikaliji i pozitivnoj kontroli.
Cells from this original stock can be propagated up to a maximum passage number (i.e. 25 in the case of KeratinoSensTM) and are employed for routine testing using the appropriate maintenance medium (in the case of KeratinoSensTM this represents DMEM containing serum and Geneticin).
Za ispitivanu kemikaliju koja nije topljiva u DMSO-u i za koju su razrjeđenja pripremljena u vodi, koncentracija DMSO-a u svim jažicama konačne ispitne otopine mora se prilagoditi tako da iznosi 1 % kao i kod drugih ispitivanih kemikalija i tvari koje služe kao kontrola.
For testing, cells should be 80-90 % confluent, and care should be taken to ensure that cells are never grown to full confluence.
U testu KeratinoSensTM kao pozitivna kontrola upotrebljava se cimetni aldehid (CAS br. 14371-10-9, čistoće ≥ 98 %) te se za nju priprema serija od pet glavnih koncentracija u rasponu od 0,4 do 6,4 mM u DMSO-u (od radne otopine od 6,4 mM), koje se razrjeđuju kako je opisano za glavne koncentracije u stavku 22. tako da konačna koncentracija pozitivne kontrole bude u rasponu od 4 do 64 μM.
One day prior to testing cells are harvested, and distributed into 96-well plates (10000 cells/well in the case of KeratinoSensTM).
Mogu se upotrijebiti i druge prikladne pozitivne kontrole koje po mogućnosti daju srednje vrijednosti EC1,5, pod uvjetom da su dostupni prijašnji podaci na temelju kojih se mogu odrediti usporedivi kriteriji prihvatljivosti za analitičku seriju.
Attention should be paid to avoid sedimentation of the cells during seeding to ensure homogeneous cell number distribution across wells.
Primjena ispitivane kemikalije i tvari koje služe kao kontrola
If this is not the case, this step may give raise to high well-to-well variability.
Za svaku ispitivanu kemikaliju i tvar koja se upotrebljava za pozitivnu kontrolu potreban je jedan pokus za izvođenje predviđanja (pozitivnog ili negativnog), koji se sastoji od najmanje dva neovisna ponavljanja od kojih svako sadržava tri ponovljena uzorka (tj. n = 6).
For each repetition, three replicates are used for the luciferase activity measurements, and one parallel replicate used for the cell viability assay.
Ako se dvama neovisnim ponavljanjima dobiju nesukladni rezultati, trebalo bi provesti treće ponavljanje s tri ponovljena uzorka (tj. n = 9).
Preparation of the test chemical and control substances
Neovisna se ponavljanja provode u različite dane svaki put sa svježom radnom otopinom ispitivanih kemikalija i neovisno izdvojenim stanicama.
The test chemical and control substances are prepared on the day of testing.
Međutim, stanice mogu biti iz iste pasaže.
For the KeratinoSensTM assay, test chemicals are dissolved in dimethyl sulfoxide (DMSO) to the final desired concentration (e.g. 200 mM).
Nakon što se nasade kako je opisano u stavku 20., stanice se uzgajaju 24 sata na mikrotitracijskim pločicama s 96 jažica.
The DMSO solutions can be considered self-sterilising, so that no sterile filtration is needed.
Medij se potom uklanja i zamjenjuje svježom hranjivom podlogom za uzgoj kulture (150 μl hranjive podloge za uzgoj kulture koja sadržava serum, ali bez geneticina u slučaju testa KeratinoSensTM) u koju se dodaje 50 μl dvadesetpeterostruko razrijeđene ispitivane kemikalije i tvari koje služe za kontrolu.
Test chemical not soluble in DMSO is dissolved in sterile water or culture medium, and the solutions sterilised by e.g. filtration.
Najmanje jednu jažicu po pločici trebalo bi ostaviti praznu (bez stanica i tretiranja) radi određivanja osnovnih vrijednosti.
For a test chemical which has no defined molecular weight (MW), a stock solution is prepared to a default concentration (40 mg/mL or 4 % (w/v)) in the KeratinoSensTM assay.
Tretirane se pločice potom inkubiraju oko 48 sati na 37 ± 1 °C u prisutnosti 5 % CO2 u testu KeratinoSensTM.
In case solvents other than DMSO, water or the culture medium are used, sufficient scientific rationale should be provided.
Potrebno je paziti da ne dođe do isparavanja hlapljivih ispitivanih kemikalija te unakrsne kontaminacije jažica ispitivanim kemikalijama, npr. pokrivanjem pločica metalnom folijom prije inkubacije s ispitivanim kemikalijama.
Based on the stock DMSO solutions of the test chemical, serial dilutions are made using DMSO to obtain 12 master concentrations of the chemical to be tested (from 0,098 to 200 mM in the KeratinoSensTM assay).
Mjerenja aktivnosti luciferaze
For a test chemical not soluble in DMSO, the dilutions to obtain the master concentrations are made using sterile water or sterile culture medium.
Tri su faktora ključna za osiguranje pravilnih očitavanja luminiscencije:
Independent of the solvent used, the master concentrations, are then further diluted 25 fold into culture medium containing serum, and finally used for treatment with a further 4 fold dilution factor so that the final concentrations of the tested chemical range from 0,98 to 2000 μM in the KeratinoSensTM assay.
odabir osjetljivog luminometra,
Alternative concentrations may be used upon justification (e.g. in case of cytotoxicity or poor solubility).
upotreba formata pločice dovoljne visine da se izbjegne unakrsna kontaminacija svjetlom i
The negative (solvent) control used in the KeratinoSensTM assay is DMSO (CAS No. 67-68-5, ≥ 99 % purity), for which six wells per plate are prepared.
upotreba supstrata luciferaze koji emitira dovoljno svjetlosti da osigura dovoljnu osjetljivost i nisku varijabilnost.
It undergoes the same dilution as described for the master concentrations in paragraph 22, so that the final negative (solvent) control concentration is 1 %, known not to affect cell viability and corresponding to the same concentration of DMSO found in the tested chemical and in the positive control.
Prije ispitivanja trebalo bi provesti kontrolni pokus kako je opisano u Dodatku 3. kako bi se osiguralo ispunjavanje tih triju zahtjeva.
For a test chemical not soluble in DMSO, for which the dilutions were made in water, the DMSO level in all wells of the final test solution must be adjusted to 1 % as for the other test chemicals and control substances.
Nakon 48 sati izlaganja ispitivanoj kemikaliji i tvarima koje služe za kontrolu u testu KeratinoSensTM stanice se ispiru fiziološkom otopinom puferiranom fosfatnim puferom te se u svaku jažicu doda odgovarajući lizni pufer za očitavanje luminiscencije i ostavi 20 minuta na sobnoj temperaturi.
The positive control used in the case of the KeratinoSensTM assay is cinnamic aldehyde (CAS No. 14371-10-9, ≥ 98 % purity), for which a series of 5 master concentrations ranging from 0,4 to 6,4 mM are prepared in DMSO (from a 6,4 mM stock solution) and diluted as described for the master concentrations in paragraph 22, so that the final concentration of the positive control range from 4 to 64 μM.
Potom se pločice koje sadržavaju stanični lizat radi očitavanja stavljaju u luminometar koji je u testu KeratinoSensTM programiran tako da: i. u svaku jažicu dodaje supstrat luciferaze (tj.
Other suitable positive controls, preferentially providing EC1,5 values in the mid-range, may be used if historical data are available to derive comparable run acceptance criteria.
50 μl), ii. čeka jednu sekundu te iii. integrira aktivnost luciferaze dvije sekunde.
Application of the test chemical and control substances
Ako se upotrebljavaju drukčiji parametri, npr. ovisno o modelu luminometra, potrebno ih je obrazložiti.
For each test chemical and positive control substance, one experiment is needed to derive a prediction (positive or negative), consisting of at least two independent repetitions containing each three replicates (i.e. n = 6).
Nadalje, može se upotrijebiti i tinjavi supstrat pod uvjetom da je pokus za kontrolu kvalitete iz Dodatka 3. uspješno izveden.
In case of discordant results between the two independent repetitions, a third repetition containing three replicates should be performed (i.e. n = 9).
Procjena citotoksičnosti
Each independent repetition is performed on a different day with fresh stock solution of test chemicals and independently harvested cells.
Za test preživljavanja stanica KeratinoSensTM medij se nakon 48 sati izlaganja zamjenjuje svježim medijem koji sadržava MTT (3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolijev bromid, tiazolil plavi tetrazolijev bromid; CAS br.
Cells may come from the same passage however.
298-93-1) te se stanice inkubiraju četiri sata na 37 oC u prisutnosti 5 % CO2.
After seeding as described in paragraph 20, cells are grown for 24 hours in the 96-wells microtiter plates.
Potom se medij MTT uklanja i stanice se tijekom noći liziraju (npr. dodavanjem 10 %-tne otopine SDS-a u svaku jažicu).
The medium is then removed and replaced with fresh culture medium (150 μl culture medium containing serum but without Geneticin in the case of KeratinoSensTM) to which 50 μl of the 25 fold diluted test chemical and control substances are added.
Nakon protresanja fotometrom se mjeri apsorpcija na 600 nm.
At least one well per plate should be left empty (no cells and no treatment) to assess background values.
U testu KeratinoSensTM izračunavaju se sljedeći parametri:
The treated plates are then incubated for about 48 hours at 37 ± 1 °C in the presence of 5 % CO2 in the KeratinoSensTM assay.
najveći prosječni multiplikacijski faktor indukcije aktivnosti luciferaze (Imax) za svaku koncentraciju ispitane kemikalije i pozitivne kontrole,
Care should be taken to avoid evaporation of volatile test chemicals and cross-contamination between wells by test chemicals by e.g. covering the plates with a foil prior to the incubation with the test chemicals.
vrijednost EC1,5 koja predstavlja koncentraciju za koju je dobivena indukcija aktivnosti luciferaze iznad praga koji odgovara povećanju pomnoženom s 1,5 (tj. povećanju aktivnosti luciferaze od 50 %) i
Luciferase activity measurements
vrijednosti koncentracije IC50 i IC30 koje odgovaraju smanjenju preživljavanja stanica od 50 % i 30 %.
Three factors are critical to ensure appropriate luminescence readings:
multiplikacijski faktor indukcije aktivnosti luciferaze izračunava se s pomoću jednadžbe 1., a ukupni maksimalni multiplikacijski faktor indukcije (Imax) izračunava se kao prosjek pojedinačnih ponavljanja.
the choice of a sensitive luminometer,
Jednadžba 1.:
the use of a plate format with sufficient height to avoid light-cross-contamination; and
Multiplikacijski faktor indukcije
the use of a luciferase substrate with sufficient light output to ensure sufficient sensitivity and low variability.
Luzorak
Prior to testing, a control experiment setup as described in Appendix 3 should be carried out to ensure that these three points are met.
Lprazno
After the 48 hour exposure time with the test chemical and control substances in the KeratinoSensTM assay, cells are washed with a phosphate buffered saline, and the relevant lysis buffer for luminescence readings added to each well for 20 min at room temperature.
Lotapalo
Plates with the cell lysate are then placed in the luminometer for reading which in the KeratinoSensTM assay is programmed to: (i) add the luciferase substrate to each well (i.e. 50 μl), (ii) wait for 1 second, and (iii) integrate the luciferase activity for 2 seconds.
pri čemu je:
In case alternative settings are used, e.g. depending on the model of luminometer used, these should be justified.
L uzorak
Furthermore, a glow substrate may also be used provided that the quality control experiment of Appendix 3 is successfully fulfilled.
luminiscencija izmjerena u jažici koja sadržava ispitivanu kemikaliju
Cytotoxicity Assessment
L prazno
For the KeratinoSensTM cell viability assay, medium is replaced after the 48 hour exposure time with fresh medium containing MTT (3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, Thiazolyl blue tetrazolium bromide; CAS No. 298-93-1) and cells incubated for 4 hours at 37 °C in the presence of 5 % CO2.
luminiscencija izmjerena u praznoj jažici koja ne sadržava stanice i nije tretirana
The MTT medium is then removed and cells are lysed (e.g. by adding 10 % SDS solution to each well) overnight.
L otapalo
After shaking, the absorption is measured at i.e. 600 nm with a photometer.
prosječna vrijednost luminiscencije izmjerene u jažicama koje sadržavaju stanice i negativnu kontrolu (s otapalom)
The following parameters are calculated in the KeratinoSensTM assay:
,5 se izračunava linearnom interpolacijom s pomoću jednadžbe 2., a ukupan EC1,5 izračunava se kao geometrijska sredina pojedinačnih ponavljanja.
the maximal average fold induction of luciferase activity (Imax) value observed at any concentration of the tested chemical and positive control;
Jednadžba 2.:
the EC1,5 value representing the concentration for which induction of luciferase activity is above the 1,5 fold threshold (i.e. 50 % enhanced luciferase activity) was obtained; and
najniža koncentracija u μM pri kojoj je povećanje indukcije > 1,5 puta
the IC50 and IC30 concentration values for 50 % and 30 % reduction of cellular viability.
najviša koncentracija u μM pri kojoj je povećanje indukcije < 1,5 puta
Fold luciferase activity induction is calculated by Equation 1, and the overall maximal fold induction (Imax) is calculated as the average of the individual repetitions.
multiplikacijski faktor indukcije izmjerene pri najnižoj koncentraciji pri kojoj je povećanje indukcije > 1,5 puta (srednja vrijednost za tri jažice kao ponovljeni uzorak)
Equation 1:
multiplikacijski faktor indukcije izmjerene pri najvišoj koncentraciji pri kojoj je povećanje indukcije > 1,5 puta (srednja vrijednost za tri jažice kao ponovljeni uzorak)
Fold induction
Preživljavanje se izračunava s pomoću jednadžbe 3.:
Lsample
jednadžba 3.:
Lblank
Preživljavanje
Lsolvent
Vuzorak
where
Vprazno
L sample
Votapalo
is the luminescence reading in the test chemical well
V uzorak
L blank
apsorbancija izmjerena testom MTT u jažici koja sadržava ispitivanu kemikaliju
is the luminescence reading in the blank well containing no cells and no treatment
V prazno
L solvent
apsorbancija izmjerena testom MTT u praznoj jažici koja ne sadržava stanice i nije tretirana
is the average luminescence reading in the wells containing cells and solvent (negative) control
V otapalo
,5 is calculated by linear interpolation according to Equation 2, and the overall EC1,5 is calculated as the geometric mean of the individual repetitions.
prosječna apsorbancija izmjerena testom MTT u jažicama koje sadržavaju stanice i negativnu kontrolu (s otapalom)
Equation 2:
i IC30 izračunavaju se linearnom interpolacijom s pomoću jednadžbe 4., a ukupni IC50 i IC30 izračunavaju se kao geometrijska sredina pojedinačnih ponavljanja.
is the lowest concentration in μM with > 1,5 fold induction
Jednadžba 4.:
is the highest concentration in μM with < 1,5 fold induction
X smanjenje od % pri koncentraciji koju treba izračunati (50 i 30 za IC50 i IC30)
is the fold induction measured at the lowest concentration with > 1,5 fold induction (mean of three replicate wells)
najniža koncentracija u μM za koju je smanjenje preživljavanja > x %
is the fold induction at the highest concentration with < 1,5 fold induction (mean of three replicate wells)
najviša koncentracija u μM za koju je smanjenje preživljavanja > x %
Viability is calculated by Equation 3:
preživljavanje od % pri najnižoj koncentraciji za koju je smanjenje preživljavanja > x %
Equation 3:
preživljavanje od % pri najvišoj koncentraciji za koju je smanjenje preživljavanja < x %
Viability
Za svaku se koncentraciju koja pokazuje povećanje indukcije aktivnosti luciferaze > 1,5 puta izračunava statistička značajnost (npr. dvosmjernim Studentovim t-testom) uspoređivanjem vrijednosti luminiscencije za tri ponovljena uzorka s vrijednostima luminiscencije u jažicama koje sadržavaju (negativnu) kontrolu s otapalom kako bi se utvrdilo je li indukcija aktivnosti luciferaze statistički značajna (p < 0,05).
Vsample
Najniža koncentracija pri kojoj je povećanje indukcije aktivnosti luciferaze > 1,5 puta vrijednost je koja određuje EC1,5.
Vblank
U svakom se slučaju provjerava je li ta vrijednost niža od vrijednosti IC30, dakle je li pri koncentraciji koja određuje vrijednost EC1,5 smanjenje preživljavanja stanica manje od 30 %.
Vsolvent
Preporučuje se da se podaci vizualno provjeravaju s pomoću grafikona.
V sample
Ako se ne uočava jasna krivulja doza – odgovor ili ako dobivena krivulja doza – odgovor ima dvofazičan izgled (tj. dva puta presijeca prag od 1,5), pokus bi trebalo ponoviti kako bi se provjerilo je li taj rezultat specifičan za ispitivanu kemikaliju ili je riječ o analitičkom artefaktu.
is the MTT-absorbance reading in the test chemical well
U slučaju da je dvofazični odgovor obnovljiv u neovisnom pokusu, u izvješću bi trebalo navesti nižu vrijednost EC1,5 (koncentraciju pri kojoj krivulja prvi put presijeca prag od 1,5).
V blank
U rijetkim se slučajevima u kojima se iznad praga od 1,5 puta uočava indukcija koja nije statistički značajna, a nakon koje slijedi statistički značajna indukcija pri višoj koncentraciji, rezultati tog ponavljanja smatraju valjanima i pozitivnima jedino ako je statistički značajna indukcija iznad praga od 1,5 dobivena za koncentraciju koja nije citotoksična.
is the MTT-absorbance reading in the blank well containing no cells and no treatment
Konačno, za ispitivane kemikalije kod kojih se već i pri najnižoj ispitnoj koncentraciji od 0,98 μM javlja 1,5 puta ili veća indukcija, vrijednost EC1,5 < 0,98 utvrđuje se na temelju vizualnog pregleda krivulje doza – odgovor.
V solvent
Sljedeći bi kriteriji prihvatljivosti trebali biti ispunjeni kada se primjenjuje test KeratinoSensTM.
is the average MTT-absorbance reading in the wells containing cells and solvent (negative) control
Prvo, indukcija aktivnosti luciferaze dobivena s pozitivnom kontrolom, cimetnim aldehidom, trebala bi biti statistički značajna iznad praga od 1,5 (npr. na temelju T-testa) za najmanje jednu od ispitanih koncentracija (od 4 do 64 μM).
and IC30 are calculated by linear interpolation according to Equation 4, and the overall IC50 and IC30 are calculated as the geometric mean of the individual repetitions.
Drugo, vrijednost EC1,5 trebala bi biti unutar dvaju standardnih odstupanja prijašnje srednje vrijednosti ispitnog laboratorija (npr. između 7 μM i 30 μM na temelju podataka upotrijebljenih za validaciju), koju bi trebalo redovito ažurirati.
Equation 4:
Osim toga, prosječna indukcija u tri ponovljena uzorka za cimetni aldehid pri 64 μM trebala bi iznositi između 2 i 8.
X is the % reduction at the concentration to be calculated (50 and 30 for IC50 and IC30)
Ako nije ispunjen potonji kriterij, odnos doza – odgovor za cimetni aldehid trebalo bi pažljivo provjeriti, a testovi mogu biti prihvaćeni jedino ako postoji jasan odnos između doze i odgovora u kojemu se indukcija aktivnosti luciferaze povećava s povećanjem koncentracija za pozitivnu kontrolu.
is the lowest concentration in μM with > x % reduction in viability
Konačno, prosječan koeficijent varijacije očitanih vrijednosti luminiscencije za negativnu kontrolu (s otapalom) s DMSO-om trebao bi biti ispod 20 % u svakom ponavljanju koje obuhvaća šest jažica ispitanih kao triplikat.
is the highest concentration in μM with < x % reduction in viability
Ako je varijabilnost veća, rezultati se odbacuju.
is the % viability at the lowest concentration with > x % reduction in viability
Tumačenje rezultata i model predviđanja