natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Any observed effects should be recorded.
Izostanak otkucaja srca po definiciji je teško pokazati na mikrofotografiji.
If mortality exceeds 10 % in the negative control (or solvent control), the test becomes invalid and should be repeated.
Na izostanak otkucaja srca upućuje nekontrahirano srce (dvostruka strelica).
In this test, the individual wells are considered independent replicates for statistical analysis.
Nepomičnost krvnih stanica u npr. trbušnoj aorti (→ u isječku) nije pokazatelj izostanka otkucaja srca.
The percentages of embryos for which at least one of the apical observations is positive at 48 and/or 96 hrs are plotted against test concentrations.
Zamjetan je i izostanak formiranja somita u ovog embrija (*, homogen umjesto segmentiranog izgleda mišićnog tkiva).
For calculation of the slopes of the curve, LC50 values and the confidence limits (95 %), appropriate statistical methods should be applied (38) and the OECD Guidance Document on Current Approaches in the Statistical Analysis of Ecotoxicity Data should be consulted (39).
Da bi se zabilježio izostanak otkucaja srca, embrije je potrebno promatrati najmanje jednu minutu pod povećanjem od najmanje 80 puta.
chemical identification, such as IUPAC or CAS name, CAS number, SMILES or InChI code, structural formula, purity, chemical identity of impurities as appropriate and practically feasible, etc. (including the organic carbon content, if appropriate).
C.50.
Test organisms:
Ispitivanje toksičnosti na klasastom krocnju (Myriophyllum spicatum) u sustavu bez sedimenta
test procedure used (e.g., semi-static renewal);
Ova ispitna metoda odgovara Smjernici OECD-a za ispitivanje 238 (2014.).
photoperiod;
Namijenjena je za procjenu toksičnosti kemikalija za klasasti krocanj (Myriophyllum spicatum), podvodnu vodenu dvosupnicu, vrstu iz porodice krocanja.
test design (e.g., number of test chambers, types of controls);
Temelji se na postojećoj ASTM-ovoj ispitnoj metodi (1.) modificiranoj za ispitni sustav bez sedimenta (2.) radi procjene intrinzične ekotoksičnosti ispitivanih kemikalija (neovisno o raspodjeli ispitivane kemikalije u vodi i sedimentu).
water quality characteristics in fish maintenance (e.g. pH, hardness, temperature, conductivity, dissolved oxygen);
Ispitni sustav bez sedimenta analitički je manje složen (samo vodena faza) i rezultati se mogu analizirati paralelno i/ili u usporedbi s rezultatima dobivenima ispitivanjem na Lemna sp.
dissolved oxygen concentration, pH, total hardness, temperature and conductivity of the test solutions at the start and after 96 hrs;
(3.); usto, zbog potrebnih sterilnih uvjeta minimalizirani su učinci mikroorganizama i alga (apsorpcija / razgradnja kemikalije itd.).
method of preparation of stock solutions and test solutions as well as frequency of renewal;
Ovo ispitivanje ne zamjenjuje druga ispitivanja toksičnosti u vodi, već bi im trebalo biti nadopuna radi cjelovitije procjene opasnosti i rizika za vodene biljke.
justification for use of solvent and justification for choice of solvent, if other than water;
Ispitna je metoda validirana međulaboratorijskim testom (4.).
the nominal test concentrations and the result of all analyses to determine the concentration of the test chemical in the test vessels; the recovery efficiency of the method and the limit of quantification (LoQ) should also be reported;
Opisani su detalji ispitivanja s obnavljanjem (polustatičko) i bez obnavljanja (statičko) ispitne otopine.
evidence that controls met the overall survival validity criteria;
Ovisno o ciljevima ispitivanja i regulatornim zahtjevima, preporučuje se primjena polustatičke metode, npr. za tvari koje se brzo gube iz otopine zbog hlapljenja, adsorpcije, fotorazgradnje, hidrolize, taloženja ili biorazgradnje.
fertilisation rate of the eggs;
Dodatne smjernice dostupne su u literaturi (5.).
hatching rate in treatment and control groups.
Ova ispitna metoda primjenjuje se za tvari za koje je ispitna metoda validirana (vidjeti pojedinosti u izvješću o međulaboratorijskom testu (4.)), formulacije ili poznate smjese; ako se ispituje smjesa, trebalo bi što detaljnije opisati kemijski identitet i količinu njezinih sastojaka.
maximum concentration causing no mortality within the duration of the test;
Ispitivanjem toksičnosti na klasastom krocnju (Myriophyllum spicatum) u sustavu bez sedimenta nadopunjuje se ispitivanje toksičnosti na klasastom krocnju u sustavu voda-sediment (6.).
minimum concentration causing 100 % mortality within the duration of the test;
Prije primjene ove ispitne metode za ispitivanje smjese koje je namijenjeno u regulatornu svrhu trebalo bi razmotriti mogu li se tom metodom osigurati odgovarajući rezultati za tu svrhu, i zašto.
cumulative mortality for each concentration at the recommended observation times;
Kulturama klasastog krocnja (Myriophyllum spicatum) koje stalno rastu (samo u modificiranom Andrewsovom mediju, vidjeti Dodatak 2.) omogućuje se da rastu kao monokulture u različitim koncentracijama ispitivane kemikalije u sustavu bez sedimenta 14 dana.
the LC50 values at 96 hrs (and optionally at 48 hrs) for mortality with 95 % confidence limits, if possible;
Cilj je ispitivanja kvantificirati učinke kemikalije na vegetativni rast tijekom tog razdoblja ocjenjivanjem odabranih mjernih varijabli.
graph of the concentration-mortality curve at the end of the test;
Mjerne varijable su rast tj. povećanje duljine izdanka, bočnih grana i korijenja, povećanje svježe i suhe mase te povećanje broja pršljena.
mortality in the controls (negative controls, internal plate controls, as well as positive control and any solvent control used);
Usto, promatraju se i prepoznatljive kvalitativne promjene ispitnih organizama, kao što su izobličenje, kloroza, koja je prepoznatljiva po žutoj boji, i nekroza, prepoznatljiva po bijeloj ili smeđoj boji.
data on the outcome of each of the four apical observations;
Da bi se kvantificirali učinci kemikalije, rast u ispitnim otopinama uspoređuje se s rastom u kontrolama te se utvrđuje koncentracija koja uzrokuje određeni postotak (x %) inhibicije rasta i izražava se kao ECx; ‚x’ može biti bilo koja vrijednost, ovisno o regulatornim zahtjevima, npr.
incidence and description of morphological and physiological abnormalities, if any (see examples provided in Appendix 5, Figure 2);
EC10, EC20, EC50.
incidents in the course of the test which might have influenced the results;
Treba napomenuti da su procjene EC10 i EC20 pouzdane i primjerene samo u ispitivanjima u kojima su koeficijenti varijacije za kontrolne biljke niži od razine učinka koji se procjenjuje, tj. za pouzdanu procjenu EC20 koeficijent varijacije trebao bi biti < 20 %.
statistical analysis and treatment of data (probit analysis, logistic regression model and geometric mean for LC50);
Trebalo bi odrediti prosječnu specifičnu brzinu rasta (na temelju procjena duljine glavnog izdanka i triju drugih mjernih varijabli) i prirast (na temelju povećanja duljine glavnog izdanka i triju drugih mjernih varijabli) netretiranih i tretiranih biljaka.
slope and confidence limits of the regression of the (transformed) concentration-response curve.
Na temelju specifične brzine rasta (r) i prirasta (y) zatim se određuju ErCx (npr. ErC10, ErC20, ErC50) odnosno EyCx (npr. EyC10, EyC20, EyC50).
Any deviation from the test method and relevant explanations.
Usto se mogu statistički odrediti i najniža koncentracija s vidljivim učinkom (LOEC) i najviša koncentracija bez vidljivog učinka (NOEC).
Discussion and interpretation of results.
Mora biti raspoloživa analitička metoda odgovarajuće osjetljivosti za kvantifikaciju ispitivane kemikalije u ispitnom mediju.
OECD (2011) Validation Report (Phase 1) for the Zebrafish Embryo Toxicity Test: Part I and Part II.
Za određivanje ispitnih uvjeta korisno je imati podatke o ispitivanoj kemikaliji kao što su strukturna formula, čistoća i nečistoće, topljivost u vodi, stabilnost u vodi i na svjetlosti, konstanta disocijacije kiseline (pKa), koeficijent razdjeljenja oktanol/voda (Kow), tlak pare i biorazgradivost.
Series on Testing and Assessment No. 157, OECD, Paris.
Topljivost u vodi i tlak pare mogu se upotrijebiti za izračunavanje konstante Henryjeva zakona, iz koje se može zaključiti mogu li se u razdoblju ispitivanja očekivati značajni gubitci ispitivane kemikalije.
OECD (2012) Validation Report (Phase 2) for the Zebrafish Embryo Toxicity Test: Part I and Part II (Annexes).
Tako se može zaključiti treba li poduzeti određene mjere za kontrolu tih gubitaka.
Series on Testing and Assessment No. 179, OECD, Paris.
Ako podaci o topljivosti i stabilnosti ispitivane kemikalije nisu pouzdani, preporučuje se da se topljivost i stabilnost procijene u uvjetima ispitivanja, tj. u uzgojnom mediju te pri temperaturi i osvjetljenju koji će se upotrebljavati tijekom ispitivanja.
Belanger, S. E., Rawlings J. M. and Carr G. J. (2013).
Kontrola pH-vrijednosti ispitnog medija posebno je važna, npr. pri ispitivanju metala ili tvari koje su hidrolitički nestabilne.
Use of Fish Embryo Toxicity Tests for the Prediction of Acute Fish Toxicity to Chemicals.
Dodatne smjernice za ispitivanje kemikalija čija fizikalno-kemijska svojstva otežavaju ispitivanje nalaze se u Smjernicama OECD-a (5.).
Environmental Toxicology and Chemistry 32: 1768-1783. .
Da bi ispitivanje bilo valjano, vrijeme udvostručenja duljine glavnog izdanka u kontroli mora biti kraće od 14 dana.
Pharmacol.: 149 (2), 196-209
Taj se kriterij može ispuniti primjenom statičkog ili polustatičkog ispitivanja uz medije i ispitne uvjete opisane u ovoj metodi.
Chapter C.4 of this Annex: Ready Biodegradability.
Srednji koeficijent varijacije za prirast na temelju mjerenja svježe mase izdanka (od početka do kraja ispitivanja) i dodatnih mjernih varijabli (vidjeti stavak 37.) u kontrolnim kulturama ne prelazi 35 % između ponovljenih uzoraka.
Chapter C.29 of this Annex: Ready Biodegradability, CO2 in sealed vessels.
Više od 50 % ponovljenih uzoraka kontrolne skupine održavaju se sterilnima, tj. bez vidljivih onečišćenja drugim organizmima kao što su alge, gljivice i bakterije (bistra otopina), tijekom razdoblja izlaganja od 14 dana.
Chapter C.48 of this Annex: Fish Short Term Reproduction Assay.. See Appendix 4a.
Napomena: smjernice o tome kako procijeniti sterilnost dostupne su u izvješću o međulaboratorijskom testu (4.).
35, 4097–4102.
REFERENTNA KEMIKALIJA
Available: [http://www.iso.org].
Referentna kemikalija (ili više njih), kao što je 3,5-diklorofenol, koji je upotrijebljen u međulaboratorijskom testu (4.), može se ispitati radi provjere ispitnog postupka; prema podacima iz međulaboratorijskog testa srednje su vrijednosti EC50 3,5-diklorofenola za različite varijable odgovora (vidjeti stavke 37. – 41. ove ispitne metode) između 3,2 mg/l i 6,9 mg/l (za pojedinosti o intervalu pouzdanosti za te vrijednosti vidjeti izvješće o međulaboratorijskom testu).
Series on Testing and Assessment No. 23, OECD, Paris.
Preporučljivo je da se referentna kemikalija ispita barem dvaput godišnje ili, ako se ispitivanje provodi rjeđe, istovremeno s određivanjem toksičnosti ispitivane kemikalije.
European Commission (2007) Commission recommendation 2007/526/EC of 18 June 2007 on guidelines for the accommodation and care of animals used for experimental and other scientific purposes (notified under document number C(2007) 2525) [http://eur-lex.europa.eu/LexUriServ/LexUriServ.do?uri=OJ:L:2007:197:0001:0089:EN:PDF]
Sva oprema koja dolazi u dodir s ispitnim medijima trebala bi biti izrađena od stakla ili drugog kemijski inertnog materijala.
European Union (2010) Directive 2010/63/EU of the European Parliament and Council of 22 September 2010 on the protection of animals used for scientific purposes (OJ L 276, 20.10.2010, p.
Staklenu opremu koja se upotrebljava za uzgoj i ispitivanje trebalo bi očistiti od kemijskih onečišćivača koji bi mogli dospjeti u ispitni medij i trebala bi biti sterilna.
33).
Ispitne posude trebale bi biti dovoljno duge da izdanci u kontrolnim posudama mogu rasti u vodenoj fazi, a da ne dosegnu površinu ispitnog medija na kraju ispitivanja.
http://eur-lex.europa.eu/LexUriServ/LexUriServ.do?uri=OJ:L:2010:276:0033:0079:EN:PDF
Preporučuju se staklene epruvete s debelim stijenkama od borosilikatnog stakla, bez izljeva na vrhu, unutarnjeg promjera približno 20 mm, duljine približno 250 mm, s aluminijskim čepovima.
Chapter C.2 of this Annex: Daphnia sp., Acute Immobilistaion Test.
Budući da modificirani Andrewsov medij sadržava saharozu (koja potiče rast gljivica i bakterija), ispitne otopine moraju se pripremati u sterilnim uvjetima.
Series on Testing and Assessment No. 54.
Sve tekućine i oprema steriliziraju se prije upotrebe.
OECD, Paris.
Sterilizacija se provodi tretiranjem zagrijanim zrakom (210 °C) 4 sata ili tretiranjem u autoklavu 20 minuta na 121 °C.
Detailed review paper “Fish embryo toxicity assays”.
Usto, sve tikvice, zdjelice, zdjele i ostala oprema tretiraju se plamenom na sterilnoj radnoj površini neposredno prije upotrebe.
UBA report under contract no.
Kulture i ispitne posude ne smiju se držati zajedno.
20385422 German Federal Environment Agency, Berlin.
To je najlakše postići ako se upotrebljavaju odvojene uzgojne komore, inkubatori ili prostorije.
Apical endpoint
Trebalo bi se moći kontrolirati osvjetljenje i temperaturu te ih održavati na stalnoj razini.
Causing effect at population level.
Ispitni organizam
Blastula
Klasasti krocanj (Myriophyllum spicatum), podvodna vodena dvosupnica, vrsta je iz porodice krocanja.
A cellular formation around the animal pole that covers a certain part of the yolk.
Između lipnja i kolovoza njezini sitni ružičasto-bijeli cvjetići izlaze iznad površine vode.
A substance or a mixture
Biljke su ukorijenjene u tlu sustavom čvrstih rizoma.
Epiboly
Mogu se pronaći u cijeloj sjevernoj hemisferi u eutrofičnim, no neonečišćenim vodama stajaćicama bogatijima kalcijem i s muljevitim supstratom.
is a massive proliferation of predominantly epidermal cells in the gastrulation phase of the embryo and their movement from the dorsal to the ventral side, by which entodermal cell layers are internalised in an invagination-like process and the yolk is incorporated into the embryo.
Klasasti krocanj bolje uspijeva u slatkim vodama, no može se pronaći i u bočatim vodama.
Flow-through test
Za ispitivanje toksičnosti u sustavu bez sedimenta potrebne su sterilne biljke.
A test with continued flow of test solutions through the test system during the duration of exposure.
Ako laboratorij koji provodi ispitivanje nema potrebne kulture klasastog krocnja, može preuzeti sterilni biljni materijal iz drugog laboratorija ili prikupiti (nesterilni) biljni materijal u prirodi odnosno nabaviti ga od komercijalnog dobavljača; za biljke prikupljene u prirodi potrebna je taksonomska provjera vrste.
Internal Plate Control
Ako se biljke prikupljaju u prirodi ili nabavljaju od komercijalnog dobavljača, potrebno ih je sterilizirati (1.) te držati u kulturi u istom mediju kakav će se upotrebljavati u ispitivanju najmanje osam tjedana prije upotrebe.
Internal control consisting of 4 wells filled with dilution water per 24-well plate to identify potential contamination of the plates by the manufacturer or by the researcher during the procedure, and any plate effect possibly influencing the outcome of the test (e.g. temperature gradient).
Na mjestima na kojima se prikupljaju polazne kulture ne smije biti očitih izvora onečišćenja.
International Union of Pure and Applied Chemistry
Pri prikupljanju klasastog krocnja u prirodi treba posebno pripaziti da se prikuplja odgovarajuća vrsta, posebno u regijama u kojima može hibridizirati s drugim vrstama krocnja (Myriophyllum).
Maintenance water
Ako se kulture nabavljaju iz drugog laboratorija, treba ih držati u sličnim uvjetima najmanje tri tjedna.
Water in which the husbandry of the adult fish is performed.
Uvijek treba navesti podrijetlo biljnog materijala i vrstu koja se upotrebljava za ispitivanje.
Median Lethal Concentration (LC50)
Biljke koje će se upotrijebiti za ispitivanje trebalo bi pažljivo odabrati jer će njihova kvaliteta i jednolikost znatno utjecati na rezultate ispitivanja.
The concentration of a test chemical that is estimated to be lethal to 50 % of the test organisms within the test duration.
Trebalo bi upotrebljavati mlade biljke koje brzo rastu i nemaju vidljivih oštećenja ni promjena boje (kloroza).
Semi-static renewal test
Pojedinosti o pripremi ispitnih organizama navedene su u Dodatku 4.
A test with regular renewal of the test solutions after defined periods (e.g., every 24 hrs).
Uzgoj kulture
Simplified Molecular Input Line Entry Specification
Kako bi rjeđe bilo potrebno održavati kulture (npr. kad određeno vrijeme nisu planirana ispitivanja s krocnjem), kulture se mogu držati pod smanjenim osvjetljenjem i na nižoj temperaturi (50 μE m 2 s 1, 20 ± 2 °C).
Somite
Pojedinosti o uzgoju navedene su u Dodatku 3.
In the developing vertebrate embryo, somites are masses of mesoderm distributed laterally to the neural tube, which will eventually develop dermis (dermatome), skeletal muscle (myotome), and vertebrae (sclerotome).
Najmanje 14 dana – 21 dan prije ispitivanja dovoljan broj ispitnih organizama aseptički se prenosi u svježi sterilni medij i uzgaja 14 dana – 21 dan u ispitnim uvjetima kao pretkultura.
Static test
Pojedinosti za pripremu pretkulture navedene su u Dodatku 4.
A test in which test solutions remain unchanged throughout the duration of the test.
Za klasati krocanj u ispitnom sustavu bez sedimenta preporučuje se samo jedan hranjivi medij, kako je opisano u Dodatku 2.
Any substance or mixture tested using this test method
Za uzgoj kulture klasastog krocnja i ispitivanje na njemu preporučuje se modifikacija Andrewsova medija kako je opisano u (1.).
Substances of unknown or variable composition, complex reaction products or biological materials
Modificirani Andrewsov medij pripravlja se od pet odvojeno pripremljenih hranjivih matičnih otopina s dodatkom 3 % saharoze.
MAINTENANCE, BREEDING AND TYPICAL CONDITIONS FOR ZEBRAFISH EMBRYO ACUTE TOXICITY TESTS
Pojedinosti o pripremi medija navedene su u Dodatku 2.
Zebrafish (Danio rerio)
Za dobivanje ispitnih otopina potreban je deseterostruko koncentrirani modificirani Andrewsov medij (uz razrjeđivanje prema potrebi).
Origin of species
Sastav medija naveden je u Dodatku 2.
India, Burma, Malakka, Sumatra
Ispitne se otopine obično pripremaju razrjeđivanjem matične otopine.
Sexual dimorphism
Matične otopine ispitivane kemikalije obično se pripremaju otapanjem kemikalije u demineraliziranoj (tj. destiliranoj ili deioniziranoj) vodi.
Females: protruding belly, when carrying eggs
Hranjive tvari dodaju se iz deseterostruko koncentriranoga modificiranog Andrewsova medija.
Males: more slender, orange tint between blue longitudinal stripes (particularly evident at the anal fin)
Matične otopine ispitivane kemikalije mogu biti sterilizirane u autoklavu na 121 °C 20 minuta ili sterilnom filtracijom, ako tehnika sterilizacije ne denaturira ispitivanu kemikaliju.
Dry flake food (max.
Ispitne otopine mogu biti pripremljene i u sterilnoj demineraliziranoj vodi ili mediju, u sterilnim uvjetima.
3 % fish weight per day) 3 - 5 times daily; additionally brine shrimp (Artemia spec.) nauplii and/or small daphnids of appropriate size obtained from an uncontaminated source.
Pri odabiru postupka sterilizacije matičnih otopina ispitivane kemikalije trebalo bi uzeti u obzir termostabilnost i adsorpciju na različitim površinama.
Feeding live food provides a source of environmental enrichment and therefore live food should be given wherever possible.
Zbog toga se preporučuje da se matične otopine pripremaju u sterilnim uvjetima, tj. koristeći se sterilnim materijalom za otapanje ispitivane kemikalije u sterilnim uvjetima (npr. sterilizacija plamenom, sterilizacija u komorama sa laminarnim protokom itd.) u sterilnoj vodi.
To guarantee for optimal water quality, excess food and faeces should be removed approx. one hour after feeding.
Ova tehnika pripreme sterilnih matičnih otopina valjana je i za tvari i za smjese.
Approximate weight of adult fish
Najviša ispitna koncentracija ispitivane kemikalije u pravilu ne bi smjela biti viša od topljivosti te kemikalije u vodi u ispitnim uvjetima.
Females: 0,65 ± 0,13 g
Za ispitivane kemikalije slabe topljivosti u vodi možda će biti potrebno pripremiti koncentriranu matičnu otopinu ili disperziju kemikalije s pomoću organskog otapala ili dispergenta kako bi se olakšalo dodavanje točnih količina ispitivane kemikalije u ispitni medij te ubrzalo njezinu disperziju i otapanje.
Males: 0,5 ± 0,1 g
Treba svakako nastojati izbjeći upotrebu takvih materijala.
Maintenance of parental fish
Pomoćna otapala ili dispergenti koji se upotrijebe ne bi smjeli djelovati fitotoksično.
Illumination
Neka od otapala u širokoj uporabi koja nemaju fitotoksično djelovanje u koncentracijama do 100 μl/l su aceton i dimetilformamid.
Fluorescent bulbs (wide spectrum); 10-20 μE/m2/s, 540-1080 lux, or 50-100 ft-c (ambient laboratory levels); 12-16 hrs photoperiod
Ako se upotrebljava otapalo ili dispergent, treba navesti njegovu konačnu koncentraciju, koju treba svesti na najmanju moguću mjeru (≤ 100 μl/l), te voditi računa da sve tretirane i kontrolne skupine sadržavaju istu koncentraciju otapala odnosno dispergenta.
26 ± 1 °C
Dodatne smjernice o upotrebi dispergenata dostupne su u literaturi (5.).
Water quality
Ispitne i kontrolne skupine
O2 ≥ 80 % saturation, hardness: e.g. ~30-300 mg/l CaCO3, NO3-: ≤ 48mg/l, NH4+ and NO2-: < 0,001 mg/l, residual chlorine < 10 μg/l, total organic chlorine < 25 ng/l, pH = 6,5 – 8,5
Prethodna saznanja o toksičnosti ispitivane kemikalije za klasasti krocanj na temelju ispitivanja za utvrđivanje raspona mogu pomoći u odabiru prikladnih ispitnih koncentracija.
Further water quality criteria
U glavnom ispitivanju toksičnosti u pravilu je potrebno pet (kao u testu inhibicije rasta Lemna sp., poglavlje C.26. ovog Priloga) do sedam ispitnih koncentracija raspoređenih u geometrijskom nizu; treba ih odabrati tako da vrijednosti NOEC i EC50 budu unutar raspona koncentracija (vidjeti u nastavku).
Particulate matter < 20 mg/l, total organic carbon < 2 mg/l, total organophosphorus pesticides < 50 ng/l, total organochlorine pesticides plus polychlorinated biphenyls < 50 ng/l
Ispitne se koncentracije po mogućnosti ne bi smjele razlikovati za faktor veći od 3,2; no vrijednost može biti i veća ako je krivulja koncentracija-odgovor ravna.
Tank size for maintenance
Ako se upotrebljava manje od pet koncentracija, treba dati obrazloženje.
e.g. 180 l, 1 fish/l
Potrebno je najmanje pet ponovljenih uzoraka za svaku ispitnu koncentraciju.
Water purification
Pri određivanju raspona ispitnih koncentracija (za ispitivanje za utvrđivanje raspona i/ili glavno ispitivanje toksičnosti) trebalo bi uzeti u obzir sljedeće:
Permanent (charcoal filtered); other possibilities include combinations with semi-static renewal maintenance or flow-through system with continuous water renewal
da bi se pri određivanju ECx osigurala primjerena razina pouzdanosti, vrijednost ECx mora biti između najviše i najniže ispitne koncentracije.
Recommended male to female ratio for breeding
Primjerice, ako se procjenjuje EC50, najviša ispitna koncentracija trebala bi biti viša od EC50.
2:1 (or mass spawning)
Ako je vrijednost EC50 izvan raspona ispitnih koncentracija, pripadajući intervali pouzdanosti bit će veliki i možda neće biti moguće ispravno ocijeniti statističku prikladnost modela.
Spawning tanks
Ako je cilj procijeniti LOEC/NOEC, najniža ispitna koncentracija trebala bi biti dovoljno niska da rast ne bude znatno manji od rasta u kontroli.
e.g. 4 l tanks equipped with steel grid bottom and plant dummy as spawning stimulant; external heating mats, or mass spawning within the maintenance tanks
Isto tako, najviša ispitna koncentracija trebala bi biti dovoljno visoka da rast bude znatno manji nego u kontroli.
Egg structure and appearance
U protivnom je ispitivanje potrebno ponoviti s drugim rasponom koncentracija (osim ako je najviša koncentracija na granici topljivosti ili jednaka maksimalnoj predviđenoj graničnoj koncentraciji, npr.
Stable chorion (i.e. highly transparent, non-sticky, diameter ~ 0,8–1,5 mm)
100 mg/l).