natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Gonads are also preserved and histopathology may be evaluated to assess the reproductive fitness of the test animals and to add to the weight of evidence of other endpoints.
Važno je da gustoća punjenja i gustoća nasada (za definicije vidjeti Dodatak 1.) odgovaraju upotrijebljenoj ispitnoj vrsti (vidjeti Dodatak 2.).
This bioassay serves as an in vivo reproductive screening assay and its application should be seen in the context of the “OECD Conceptual Framework for the Testing and Assessment of Endocrine Disrupting Chemicals” (30).
smrtnost iznad 10 % populacije u sedam dana: odbacuje se čitava skupina,
In this Conceptual Framework the Fish Short Term Reproduction Assay is proposed at Level 3 as an in vivo assay providing data about selected endocrine mechanism(s)/pathway(s).
smrtnost između 5 i 10 % populacije: prilagodba još sedam dana; ako je smrtnost tijekom drugih sedam dana veća od 5 %, odbacuje se čitava skupina,
Vitellogenin (VTG) is normally produced by the liver of female oviparous vertebrates in response to circulating endogenous oestrogen.
smrtnost ispod 5 % populacije u sedam dana: skupina se prihvaća.
It is a precursor of egg yolk proteins and, once produced in the liver, travels in the bloodstream to the ovary, where it is taken up and modified by developing eggs.
Ribe se ne smije liječiti tijekom razdoblja prilagodbe, razdoblja prije izlaganja ili tijekom razdoblja izlaganja.
Vitellogenin is almost undetectable in the plasma of immature female and male fish because they lack sufficient circulating oestrogen; however, the liver is capable of synthesising and secreting vitellogenin in response to exogenous oestrogen stimulation.
Razdoblje prije izlaganja i odabir riba
The measurement of vitellogenin serves for the detection of chemicals with various oestrogenic modes of action.
Preporučuje se jednotjedno do dvotjedno razdoblje prije izlaganja, pri čemu se životinje smještaju u posude slične ispitnim posudama.
The detection of oestrogenic chemicals is possible via the measurement of vitellogenin induction in male fish, and it has been abundantly documented in the scientific peer-reviewed literature (e.g. (7)).
Ribe je potrebno hraniti ad libitum tijekom razdoblja držanja i faze izlaganja.
Vitellogenin induction has also been demonstrated following exposure to aromatisable androgens (8, 9).
Faza izlaganja započinje spolno dimorfnom odraslom ribom iz laboratorijske skupine reproduktivno zrelih životinja (primjerice s jasno vidljivim sekundarnim spolnim obilježjima kad je riječ o debeloglavoj gavčici i medaki) koja je u aktivnom mrijestu.
A reduction in the circulating level of oestrogen in females, for instance through the inhibition of the aromatase converting the endogenous androgen to the natural oestrogen 17β-estradiol, causes a decrease in the VTG level which is used to detect chemicals having aromatase inhibiting properties (10, 11).
Prema općim smjernicama (koje se uzima u obzir uz promatranje stvarnog reproduktivnog statusa predmetne skupine riba) debeloglave gavčice trebale bi biti stare približno 20 (±2) tjedana pod pretpostavkom da su tijekom životnog vijeka uzgajane na temperaturi od 25 ±2 °C.
The biological relevance of the vitellogenin response following oestrogenic/aromatase inhibition is established and has been broadly documented.
Medake bi trebale biti stare približno 16 (±2) tjedana pod pretpostavkom da su tijekom životnog vijeka uzgajane na temperaturi od 25 ±2 °C.
However, it is possible that production of VTG in females can also be affected by general toxicity and non-endocrine toxic modes of action, e.g. hepatotoxicity.
Zebrice bi trebale biti stare približno 16 (±2) tjedana pod pretpostavkom da su tijekom životnog vijeka uzgajane na temperaturi od 26 ±2 °C.
Several measurement methods have been successfully developed and standardised for routine use.
Proizvodnju jajašaca trebalo bi svakodnevno procjenjivati tijekom razdoblja prije izlaganja.
This is the case of species-specific Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) methods using immunochemistry for the quantification of VTG produced in small blood or liver samples collected from individual fish (12, 13, 14, 15, 16, 17, 18).
Preporučuje se zapažanje mriješćenja u svim akvarijima s ponovljenim uzorcima prije uključivanja u fazu izlaganja.
Fathead minnow blood, zebrafish blood or head/tail homogenate, and medaka liver are sampled for VTG measurement.
U ovoj se fazi ne mogu dati kvantitativne smjernice o poželjnoj dnevnoj proizvodnji jajašaca, no prilično se često opaža prosječan mrijest od >10 jajašaca po ženki po danu za svaku vrstu.
In medaka, there is a good correlation between VTG measured from blood and from liver (19).
Za raspoređivanje ponovljenih uzoraka na različite razine izlaganja trebalo bi primijeniti nasumični blokni raspored s obzirom na proizvodnju jajašaca kako bi se osigurala ravnomjerna raspodjela ponovljenih uzoraka.
Appendix 6 provides the recommended procedures for sample collection for VTG analysis.
PLAN ISPITIVANJA
Kits for the measurement of VTG are widely available; such kits should be based on a validated species-specific ELISA method.
Upotrebljavaju se tri koncentracije ispitivane kemikalije, jedna kontrola (voda) te, prema potrebi, jedna kontrola s otapalom.
Secondary sex characteristics in male fish of certain species are externally visible, quantifiable and responsive to circulating levels of endogenous androgens; this is the case for the fathead minnow and the medaka — but not for zebrafish which does not possess quantifiable secondary sex characteristics.
Podaci se mogu analizirati radi utvrđivanja statistički značajnih razlika među odgovorima u tretiranim i kontrolnim skupinama.
Females maintain the capacity to develop male secondary sex characteristics, when they are exposed to androgenic chemicals in water.
Zahvaljujući tim analizama utvrdit će se je li potrebno daljnje, dugotrajnije ispitivanje štetnih učinaka kemikalije (na preživljavanje, razvoj, rast i reprodukciju), umjesto u svrhu procjene rizika (25.).
Several studies are available in the scientific literature to document this type of response in fathead minnow (20) and medaka (21).
U zebrica 21. dana pokusa uzimaju se uzorci mužjaka i ženki iz svake skupine tretirane određenom koncentracijom (pet mužjaka i pet ženki u svakom od dvaju ponovljenih uzoraka) i iz kontrole ili više njih u svrhu mjerenja vitelogenina.
A decrease in secondary sex characteristics in males should be interpreted with caution because of low statistical power, and should be based on expert judgement and weight of evidence.
U medaka 21. dana pokusa uzimaju se uzorci mužjaka i ženki iz svake skupine tretirane određenom koncentracijom (tri mužjaka i tri ženke u svakom od četiri ponovljena uzorka) i iz kontrole ili više njih u svrhu mjerenja vitelogenina i sekundarnih spolnih obilježja.
There are limitations to the use of zebrafish in this assay, due to the absence of quantifiable secondary sex characteristics responsive to androgenic acting chemicals.
U debeloglave gavčice 21. dana izlaganja uzimaju se uzorci mužjaka i ženki (dva mužjaka i četiri ženke u svakom od četiri ponovljena uzorka) i iz kontrole ili više njih u svrhu mjerenja vitelogenina i sekundarnih spolnih obilježja.
In the fathead minnow, the main indicator of exogenous androgenic exposure is the number of nuptial tubercles located on the snout of the female fish.
Potrebna je kvantitativna procjena plodnosti, a tkiva gonada potrebno je fiksirati u cjelini ili secirane za eventualnu histopatološku procjenu, prema potrebi.
In the medaka, the number of papillary processes constitutes the main marker of exogenous exposure to androgenic chemicals in female fish.
Odabir ispitnih koncentracija
Appendix 5A and Appendix 5B indicate the recommended procedures to follow for the evaluation of sex characteristics in fathead minnow and in medaka, respectively.
Za potrebe ovog ispitivanja najvišu ispitnu koncentraciju potrebno je odrediti s pomoću maksimalne tolerirane koncentracije (MTK) utvrđene tablicom ili s pomoću ostalih podataka o toksičnosti, ili 10 mg/l, ili maksimalne topljivosti u vodi, što god od toga je najmanje.
The 21-day fish assay includes the evaluation of quantitative egg production and preservation of gonads for optional histopathology examination.
MTK se definira kao najviša ispitna koncentracija kemikalije čija je posljedica smrtnost manja od 10 %.
Some regulatory authorities may require this additional endpoint for a more complete evaluation of the reproductive fitness of the test animals, or in cases where vitellogenin and secondary sex characteristics did not respond to the chemical exposure.
Ovaj pristup pretpostavlja da postoje empirijski podaci o akutnoj toksičnosti ili drugi podaci o toksičnosti iz kojih se može procijeniti MTK.
Although some endpoints may be highly diagnostic (e.g. VTG induction in males and tubercle formation in females), not all endpoints (e.g. fecundity and gonad histopathology) in the assay are intended to unequivocally identify specific cellular mechanisms of action.
Procjena MTK-a može biti neprecizna pa je u pravilu potrebna stručna procjena.
Rather, the suite of endpoints, collectively, allows inferences to be made with regard to possible endocrine disturbances and thus provide guidance for further testing.
Potrebne su tri ispitne koncentracije, raspoređene s pomoću stalnog faktora koji ne premašuje 10, te kontrola s vodom za razrjeđivanje (i po potrebi kontrola s otapalom).
Although not endocrine specific, fecundity, due to its demonstrated sensitivity across known endocrine active chemicals (5), is an important endpoint to include because when it and other endpoints are unaffected one is more confident that a compound is not likely endocrine active.
Preporučuje se raspon faktora raspoređivanja od 3,2 do 10.
However, when fecundity is affected it will contribute heavily in weight of evidence inferences.
Odabir i vaganje ispitnih riba
Guidance on data interpretation and acceptance of test results is provided further in this test method.
Važno je da se razlike u težini riba na početku testa svedu na najmanju moguću mjeru.
Definitions used in this test method are given in Appendix 1.
Odgovarajući rasponi veličina za različite vrste preporučene za ovo ispitivanje navedeni su u Dodatku 2.
In the assay, male and female fish in a reproductive status are exposed together in test vessels.
Za cijelu skupinu riba koja se upotrebljava u ovom ispitivanju pojedinačne težine mužjaka i ženki na početku ispitivanja trebale bi se po mogućnosti kretati u rasponu od ±20 % aritmetičke srednje težine za ribe istog spola.
Their adult and reproductive status enables a clear differentiation of each sex, and thus a sex-related analysis of each endpoint, and ensures their sensitivity towards exogenous chemicals.
Prije početka ispitivanja preporučuje se vaganje pod-uzorka riblje populacije radi procjene srednje težine.
At test termination, sex is confirmed by macroscopic examination of the gonads following ventral opening of the abdomen with scissors.
Nakon razdoblja prije izlaganja ispitivanje traje 21 dan.
An overview of the relevant bioassay conditions are provided in Appendix 2.
Preporučuje se jednotjedno do dvotjedno razdoblje prije izlaganja.
The assay is normally initiated with fish sampled from a population that is in spawning condition; senescent animals should not be used.
Ribe je potrebno hraniti ad libitum odgovarajućom hranom (Dodatak 2.) u količinama dovoljnima za zadržavanje tjelesne forme.
Guidance on the age of fish and on the reproductive status is provided in the section on Selection of fish.
Treba paziti da ne dođe do povećanja broja mikroba i zamućenja vode.
The assay is conducted using three chemical exposure concentrations as well as a water control, and a solvent control if necessary.
Opća je smjernica da se dnevna količina hrane može podijeliti u dvije ili tri jednake porcije za višekratno hranjenje tijekom dana, pri čemu razmak između hranjenja mora biti najmanje tri sata.
Two vessels or replicates per treatment are used for zebrafish (each vessel containing 5 males and 5 females).
Prihvatljiva je i jedna velika porcija, posebno tijekom vikenda.
Four vessels or replicates per treatment are used for fathead minnow (each vessel containing 2 males and 4 females).
Ribe ne bi trebalo hraniti 12 sati prije uzorkovanja/seciranja.
This is to accommodate the territorial behaviour of male fathead minnow while maintaining sufficient power of the assay.
Hranu za ribe potrebno je procijeniti u smislu postojanja kontaminanata poput organoklornih pesticida, policikličkih aromatskih ugljikovodika (PAH) i polikloriranih bifenola (PCB).
Four vessels or replicates per treatment are used for medaka (each vessel containing 3 males and 3 females).
Potrebno je izbjegavati hranu s povišenom razinom fitoestrogena koji bi utjecali na reakciju na test na poznati agonist estrogena (primjerice 17b- estradiol).
The exposure is conducted for 21-days and sampling of fish is performed at day 21 of exposure.
Nepojedenu hranu i izmet potrebno je uklanjati iz ispitnih posuda najmanje dvaput tjedno, primjerice pažljivim čišćenjem dna svakog akvarija s pomoću sifona.
Quantitative fecundity is monitored daily.
Prije početka razdoblja izlaganja potrebno je osigurati pravilno funkcioniranje sustava dovoda kemikalije.
On sampling at day 21, all animals are killed humanely.
Potrebno je utvrditi sve potrebne analitičke metode, uključujući dostatna saznanja o kemijskoj stabilnosti u ispitnom sustavu.
Secondary sex characteristics are measured in fathead minnow and medaka (see Appendix 5A and Appendix 5B); blood samples are collected for determination of VTG in zebrafish and fathead minnow, alternatively head/tail can be collected for the determination of VTG in zebrafish (Appendix 6); liver is collected for VTG analysis in medaka (Appendix 6); gonads are fixed either in whole or dissected for potential histopathological evaluation (22).
Tijekom ispitivanja, koncentracije ispitivane kemikalije utvrđuju se u redovnim intervalima kako slijedi: protoke razrjeđivača i toksične matične otopine potrebno je provjeravati po mogućnosti svakodnevno, a najmanje dvaput tjedno; one ne bi trebale varirati više od 10 % tijekom cijelog ispitivanja.
TEST ACCEPTANCE CRITERIA
Preporučuje se mjerenje stvarnih koncentracija ispitivane kemikalije u svim posudama na početku ispitivanja, a potom svakog tjedna.
For the test results to be acceptable the following conditions apply:
Preporučuje se da se rezultati temelje na izmjerenim koncentracijama.
the mortality in the water (or solvent) controls should not exceed 10 per cent at the end of the exposure period;
Međutim, ako je tijekom cijelog ispitivanja koncentracija ispitivane kemikalije u otopini uspješno zadržana unutar ±20 % nazivne koncentracije, tada se rezultati mogu temeljiti na nazivnim ili izmjerenim vrijednostima.
the dissolved oxygen concentration should be at least 60 per cent of the air saturation value (ASV) throughout the exposure period;
U pojedinim je slučajevima uzorke potrebno filtrirati (primjerice s pomoću veličine pora 0,45 μm) ili centrifugirati.
the water temperature should not differ by more than ± 1,5 °C between test vessels at any one time during the exposure period and be maintained within a range of 2 °C within the temperature ranges specified for the test species (Appendix 2);
U slučaju potrebe preporučuje se centrifugiranje.
evidence should be available to demonstrate that the concentrations of the test chemical in solution have been satisfactorily maintained within ±20 % of the mean measured values;
Ipak, ako se ispitivani materijal ne adsorbira na filtre, prihvatljivo je i filtriranje.
evidence that fish are actively spawning in all replicates prior to initiating chemical exposure and in control replicates during the test.
Tijekom ispitivanja potrebno je mjeriti otopljeni kisik, temperaturu i pH-vrijednost u svim ispitnim posudama najmanje jednom tjedno.
oxygen and pH meters;
Brojne opće (primjerice preživljavanje) i temeljne biološke reakcije (primjerice razine VTG-a) procjenjuju se tijekom testa ili po njegovu završetku.
equipment for determination of water hardness and alkalinity;
Potrebno je dnevno kvantitativno praćenje plodnosti.
adequate apparatus for temperature control and preferably continuous monitoring;
Mjerenje i procjena tih krajnjih točaka i njihova korist opisuju se u nastavku.
tanks made of chemically inert material and of a suitable capacity in relation to the recommended loading and stocking density (see Appendix 2);
Preživljavanje
spawning substrate for fathead minnow and zebrafish, Appendix 4 gives the necessary details.
Ribe je tijekom razdoblja ispitivanja potrebno svakodnevno pregledavati i evidentirati smrtnost te u najkraćem mogućem roku uklanjati uginule ribe.
suitably accurate balance (i.e. accurate to ± 0,5 mg).
Uginule ribe ne nadomještaju se novima ni u kontrolnim ni u ispitnim posudama.
Any water in which the test species shows suitable long-term survival and growth may be used as test water.
Spol riba koje su uginule tijekom ispitivanja potrebno je utvrditi makroskopskom procjenom gonada.
The pH of the water should be within the range 6,5 to 8,5, but during a given test it should be within a range of ± 0,5 pH units.
Ponašanje i izgled
In order to ensure that the dilution water will not unduly influence the test result (for example by complexion of test chemical); samples should be taken at intervals for analysis.
Potrebno je evidentirati svako neuobičajeno ponašanje (u odnosu na kontrole), što može uključivati znakove opće toksičnosti, uključujući hiperventilaciju, nekoordinirano plivanje, gubitak ravnoteže te atipično mirovanje ili hranjenje.
Measurements of heavy metals (e.g. Cu, Pb, Zn, Hg, Cd, and Ni), major anions and cations (e.g. Ca2+, Mg2+, Na+, K+, Cl–, and SO42–), pesticides (e.g. total organophosphorus and total organochlorine pesticides), total organic carbon and suspended solids should be made, for example, every three months where dilution water is known to be relatively constant in quality.
Potrebno je evidentirati i vanjske abnormalnosti (poput krvarenja, gubitka boje).
If water quality has been demonstrated to be constant over at least one year, determinations can be less frequent and intervals extended (e.g. every six months).
Pri tumačenju podataka potrebno je pažljivo razmotriti te znakove toksičnosti jer mogu ukazivati na koncentracije pri kojima biomarkeri endokrine aktivnosti nisu pouzdani.
Some chemical characteristics of acceptable dilution water are listed in Appendix 3.
Ta zapažanja ponašanja mogu biti i korisne informacije za određivanje potencijalnih budućih zahtjeva za ispitivanje na ribama.
The stock solution should preferably be prepared by simply mixing or agitating the test chemical in dilution water by using mechanical means (e.g. stirring or ultrasonication).
Primjerice, teritorijalna agresivnost u normalnih mužjaka ili maskuliniziranih ženki uočena je u debeloglave gavčice u slučajevima izloženosti androgenima, a karakteristično parenje i mriješćenje zebrica u zoru s pojavom svjetla smanjeno je ili narušeno nakon izloženosti estrogenima ili antiandrogenima.
Saturation columns (solubility columns) can be used for achieving a suitable concentrated stock solution.
S obzirom na to da se neki aspekti izgleda (ponajprije boja) mogu pri rukovanju brzo promijeniti, važno je obaviti zapažanja prije uklanjanja životinja iz ispitnog sustava.
However, in case a solvent is necessary, a solvent control should be run in parallel, at the same solvent concentration as the chemical treatments.
Iz dosadašnjeg iskustva s debeloglavim gavčicama poznato je da neke endokrino aktivne kemikalije mogu u početku prouzročiti promjene u sljedećim vanjskim obilježjima: boji tijela (svijetla ili tamna), uzorcima boje (postojanje okomitih pruga) i obliku tijela (glava i prsno područje).
For difficult to test chemicals, a solvent may be technically the best solution; the OECD guidance document on aquatic toxicity testing of difficult substances and mixtures should be consulted (23).
Stoga je zapažanja o fizičkom izgledu riba potrebno obavljati tijekom ispitivanja i po završetku studije.
The choice of solvent will be determined by the chemical properties of the substance or mixture.
Plodnost
The OECD guidance document recommends a maximum of 100 μl/l, which should be observed.
Potrebno je svakodnevno bilježiti kvantitativna zapažanja o mriješćenju u ponovljenim uzorcima.
However a recent review (24) highlighted additional concerns when using solvents for endocrine activity testing.
Proizvodnju jajašaca treba zabilježiti kao broj jajašaca po preživjeloj ženki po danu u ponovljenom uzorku.
Therefore it is recommended that the solvent concentration, if necessary, is minimised wherever technically feasible (dependent on the physical-chemical properties of the test chemical).
Jajašca se svakodnevno uklanjaju iz ispitnih komora.
A flow-through test system will be used.
U ispitne komore za debeloglavu gavčicu i zebricu treba staviti supstrate za mriješćenje kako bi se ribama omogućili normalni uvjeti mriješćenja.
Such a system continually dispenses and dilutes a stock solution of the test chemical (e.g. metering pump, proportional diluter, saturator system) in order to deliver a series of concentrations to the test chambers.
U Dodatku 4. nalaze se dodatne informacije o preporučenim supstratima za mriješćenje za zebricu (Dodatak 4.A) i debeloglavu gavčicu (4.B).
The flow rates of stock solutions and dilution water should be checked at intervals, preferably daily, during the test and should not vary by more than 10 % throughout the test.
Ne smatra se potrebnim osigurati supstrat za mriješćenje za medaku.
Care should be taken to avoid the use of low-grade plastic tubing or other materials that may contain biologically active chemicals.
Humano usmrćivanje riba
When selecting the material for the flow-through system, possible adsorption of the test chemical to this material should be considered.
Po završetku izlaganja, odnosno 21. dana, ribe je potrebno usmrtiti odgovarajućom količinom anestetika trikaina (Tricaine metan sulfonat, Metacain, MS-222 (CAS 886-86-2), 100-500 mg/l puferiran s 300 mg/l NaHCO3 (natrijev bikarbonat, CAS 144-55-8) kako bi se smanjila iritacija sluznice; nakon toga uzimaju se uzorci krvi ili tkiva radi određivanja VTG-a, kako se opisuje u odjeljku o vitelogeninu.
Test fish should be selected from a laboratory population, preferably from a single stock, which has been acclimated for at least two weeks prior to the test under conditions of water quality and illumination similar to those used in the test.
Zapažanja u pogledu sekundarnih spolnih obilježja
It is important that the loading rate and stocking density (for definitions, see Appendix 1) be appropriate for the test species used (see Appendix 2).
Neke endokrino aktivne kemikalije mogu prouzročiti promjene posebnih sekundarnih spolnih obilježja (broj izraslina u spolno zrelih mužjaka debeloglave gavčice, papilarni procesi u mužjaka medake).
mortalities of greater than 10 % of population in seven days: reject the entire batch;
Naime, kemikalije s određenim načinom djelovanja mogu prouzročiti neuobičajenu pojavu sekundarnih spolnih obilježja u životinja suprotnog spola: primjerice, agonisti receptora za androgene, poput trenbolona, metiltestosterona i dihidrotestosterona, u spolno zrelih ženki debeloglave gavčice mogu prouzročiti pojavu izraženih izraslina odnosno papilarnih procesa u ženki medake (11., 20., 21.).
mortalities of between 5 % and 10 % of population: acclimation for seven additional days; if more than 5 % mortality during second seven days, reject the entire batch;
Poznato je i da agonisti receptora estrogena mogu prouzročiti smanjenje broja izraslina i veličine zadebljanja na potiljku odraslih mužjaka debeloglave gavčice (26. i 27.).
mortalities of less than 5 % of population in seven days: accept the batch.
Ta makromorfološka zapažanja mogu biti korisni kvalitativni i kvantitativni podaci za određivanje potencijalnih budućih zahtjeva za ispitivanje na ribama.