natgillin/translations-raw huggingface dataset:
is the % viability at the highest concentration with < x % reduction in viability
Predviđanje na temelju testa KeratinoSensTM smatra se pozitivnim ako su ispunjena sva četiri sljedeća uvjeta u dva od dva ponavljanja ili u ta ista dva od tri ponavljanja; u protivnom se predviđanje na temelju testa KeratinoSensTM smatra negativnim (slika 1.):
For each concentration showing > 1,5 fold luciferase activity induction, statistical significance is calculated (e.g. by a two-tailed Student's t-test), comparing the luminescence values for the three replicate samples with the luminescence values in the solvent (negative) control wells to determine whether the luciferase activity induction is statistically significant (p < 0,05).
Imax veće je od (>) 1,5 puta i statistički se znatno razlikuje od vrijednosti dobivene za (negativnu) kontrolu s otapalom (kako je utvrđeno dvostranim Studentovim t-testom za neuparene podatke);
The lowest concentration with > 1,5 fold luciferase activity induction is the value determining the EC1,5 value.
preživljavanje stanica veće je od (>) 70 % pri najnižoj koncentraciji za koju je povećanje indukcije luciferaze veće od 1,5 puta povećanja (tj. pri koncentraciji koja određuje EC1,5);
It is checked in each case whether this value is below the IC30 value, indicating that there is less than 30 % reduction in cellular viability at the EC1,5 determining concentration.
vrijednost EC1,5 manja je od (<) 1000 μM (ili < 200 μg/ml za ispitivane kemikalije čija molekularna masa nije utvrđena);
It is recommended that data are visually checked with the help of graphs.
općenito se uočava jasan odnos između doze i odgovora za indukciju luciferaze (ili dvofazičan odgovor kako je navedeno u stavku 33.).
If no clear dose-response curve is observed, or if the dose-response curve obtained is biphasic (i.e. crossing the threshold of 1,5 twice), the experiment should be repeated to verify whether this is specific to the test chemical or due to an experimental artefact.
Ako su u određenom ponavljanju ispunjena sva tri prva uvjeta, ali se ne može uočiti jasan odnos između doze i odgovora za indukciju luciferaze, tada bi se trebalo smatrati da je rezultat tog ponavljanja nejasan te mogu biti potrebna dodatna ispitivanja (slika 1.).
In case the biphasic response is reproducible in an independent experiment, the lower EC1,5 value (the concentration when the threshold of 1,5 is crossed the first time) should be reported.
Osim toga, i negativan rezultat dobiven s koncentracijama < 1000 μM (ili < 200 μg/ml za ispitivane kemikalije čija molekularna masa nije utvrđena) isto bi tako trebalo smatrati nejasnim (vidjeti stavak 11.).
In the rare cases where a statistically non-significant induction above 1,5 fold is observed followed by a higher concentration with a statistically significant induction, results from this repetition are only considered as valid and positive if the statistically significant induction above the threshold of 1,5 was obtained for a non-cytotoxic concentration.
Slika 1.
Finally, for test chemicals generating a 1,5 fold or higher induction already at the lowest test concentration of 0,98 μM, the EC1,5 value of < 0,98 is set based on visual inspection of the dose-response curve.
Model predviđanja koji se upotrebljava u testu KeratinoSensTM.
The following acceptance criteria should be met when using the KeratinoSensTM assay.
Predviđanje na temelju testa KeratinoSensTM trebalo bi razmatrati u okviru IATA-e te u skladu s odredbama stavaka 9. i 11.
First, the luciferase activity induction obtained with the positive control, cinnamic aldehyde, should be statistically significant above the threshold of 1,5 (e.g. using a T-test) in at least one of the tested concentrations (from 4 to 64 μM).
U rijetkim slučajevima, ispitivane kemikalije koje induciraju aktivnost luciferaze vrlo blizu citotoksičnih razina mogu u nekim ponavljanjima biti pozitivne pri razinama koje nisu citotoksične (tj. koncentracija koja određuje EC1,5 niža je od (<) vrijednosti IC30), a u drugim ponavljanjima samo pri razinama koje su citotoksične (tj. koncentracija koja određuje EC1,5 veća je od (>) vrijednosti IC30).
Second, the EC1,5 value should be within two standard deviations of the historical mean of the testing facility (e.g. between 7 μM and 30 μM based on the validation dataset) which should be regularly updated.
Takve bi ispitivane kemikalije trebalo ponovno ispitati užom analizom odnosa između doze i odgovora primjenjujući niži faktor razrjeđenja (npr.
In addition, the average induction in the three replicates for cinnamic aldehyde at 64 μM should be between 2 and 8.
1,33 ili Ö2 (= 1,41) puta između jažica) kako bi se utvrdilo je li do indukcije došlo na citotoksičnim razinama ili nije (9.).
If the latter criterion is not fulfilled, the dose-response of cinnamic aldehyde should be carefully checked, and tests may be accepted only if there is a clear dose-response with increasing luciferase activity induction at increasing concentrations for the positive control.
fizički izgled, topljivost u vodi, topljivost u DMSO-u, molekularna masa te dodatna relevantna fizikalno-kemijska svojstva, u mjeri u kojoj su podaci dostupni;
Finally, the average coefficient of variation of the luminescence reading for the negative (solvent) control DMSO should be below 20 % in each repetition which consists of 6 wells tested in triplicate.
fizički izgled, topljivost u vodi, topljivost u DMSO-u te dodatna relevantna fizikalno-kemijska svojstva, u mjeri u kojoj su podaci dostupni;
If the variability is higher, results should be discarded.
fizički izgled, topljivost u vodi, topljivost u DMSO-u, molekularna masa te dodatna relevantna fizikalno-kemijska svojstva, u mjeri u kojoj su podaci dostupni i gdje je primjenjivo;
Interpretation of results and prediction model
Negativna kontrola (s nosačem)
A KeratinoSensTM prediction is considered positive if the following 4 conditions are all met in 2 of 2 or in the same 2 of 3 repetitions, otherwise the KeratinoSensTM prediction is considered negative (Figure 1):
kemijske identifikacijske oznake, kao što su IUPAC ili CAS naziv(i), CAS broj(evi) i/ili druge identifikacijske oznake,
the Imax is higher than (>) 1,5 fold and statistically significantly different as compared to the solvent (negative) control (as determined by a two-tailed, unpaired Student's t-test);
fizički izgled, molekularna masa te dodatna relevantna fizikalno-kemijska svojstva u slučaju da su upotrijebljene negativne kontrole / nosači drukčiji od onih koji su navedeni u ovoj ispitnoj metodi, u mjeri u kojoj su podaci dostupni,
the cellular viability is higher than (>) 70 % at the lowest concentration with induction of luciferase activity above 1,5 fold (i.e. at the EC1,5 determining concentration);
obrazloženje za odabir otapala za svaku ispitivanu kemikaliju.
the EC1,5 value is less than (<) 1000 μM (or < 200 μg/ml for test chemicals with no defined MW);
Uvjeti primjene ispitne metode
there is an apparent overall dose-response for luciferase induction (or a biphasic response as mentioned under paragraph 33).
opis upotrijebljene ispitne metode,
If in a given repetition, all of the three first conditions are met but a clear dose-response for the luciferase induction cannot be observed, then the result of that repetition should be considered inconclusive and further testing may be required (Figure 1).
upotrijebljena stanična linija, uvjeti njezina skladištenja i izvor (npr. objekt iz kojeg su dobiveni),
In addition, a negative result obtained with concentrations < 1000 μM (or < 200 μg/ml for test chemicals with no defined MW) should also be considered as inconclusive (see paragraph 11).
broj pasaža i stupanj konfluencije stanica upotrijebljenih za ispitivanje,
Figure 1
metoda brojenja stanica koja je upotrijebljena za nasađivanje prije ispitivanja i mjere koje su poduzete kako bi se osigurao ujednačen raspored broja stanica (vidjeti stavak 20.),
Prediction model used in the KeratinoSensTM assay.
upotrijebljeni luminometar (npr. model), uključujući postavke instrumenta, upotrijebljeni supstrat luciferaze te dokaz o primjerenom mjerenju luminiscencije na temelju kontrolnog ispitivanja opisanog u Dodatku 3,
A KeratinoSensTM prediction should be considered in the framework of an IATA and in accordance with the provision of paragraphs 9 and 11
postupak koji je primijenjen za dokazivanje osposobljenosti laboratorija za izvođenje ispitne metode (npr. ispitivanjem tvari koje služe za dokazivanje osposobljenosti) ili za dokazivanje obnovljive primjene ispitne metode tijekom vremena.
Such test chemicals shall be retested with more narrow dose-response analysis using a lower dilution factor (e.g. 1,33 or √2 (= 1,41) fold dilution between wells), to determine if induction has occurred at cytotoxic levels or not (9).
broj primijenjenih ponavljanja i ponovljenih uzoraka,
Physical appearance, water solubility, DMSO solubility, molecular weight, and additional relevant physicochemical properties, to the extent available;
koncentracije ispitivane kemikalije, postupak primjene i vrijeme izloženosti (ako je drukčije od preporučenog),
Physical appearance, water solubility, DMSO solubility and additional relevant physicochemical properties, to the extent available;
tablični prikaz vrijednosti Imax, EC1,5 i preživljavanja (tj.
Physical appearance, water solubility, DMSO solubility, molecular weight, and additional relevant physicochemical properties, to the extent available and where applicable;
IC50, IC30) dobivenih za ispitivanu kemikaliju te za pozitivnu kontrolu pri svakom ponavljanju, kao i srednje vrijednosti (Imax: prosjek; EC1,5 i preživljavanje: geometrijska sredina), te standardno odstupanje izračunato s pomoću podataka iz svih ponavljanja i klasifikacija ispitivane kemikalije prema modelu predviđanja,
Negative (vehicle) control
koeficijent varijacije vrijednosti luminiscencije očitanih za negativnu kontrolu u svakom pokusu,
Chemical identification, such as IUPAC or CAS name(s), CAS number(s), and/or other identifiers;
grafički prikaz krivulja doza – odgovor za indukciju aktivnosti luciferaze i za preživljavanje,
Physical appearance, molecular weight, and additional relevant physicochemical properties in the case other negative controls / vehicles than those mentioned in this test method are used and to the extent available;
opis svih drugih relevantnih zapažanja, ako je primjenjivo.
Justification for choice of solvent for each test chemical.
rasprava o rezultatima dobivenima testom KeratinoSensTM,
Test method conditions
rasprava o rezultatima ispitne metode u kontekstu IATA-e ako su dostupni drugi relevantni podaci.
Description of test method used;
Dostupno na: http://www.unece.org/trans/danger/publi/ghs/ghs_rev05/05files_e.html.
Cell line used, its storage conditions and source (e.g. the facility from which they were obtained);
OECD Environment, Health and Safety publications, Series on Testing and Assessment No.
Passage number and level of confluence of cells used for testing;
OECD, Paris.
Cell counting method used for seeding prior to testing and measures taken to ensure homogeneous cell number distribution (cf. paragraph 20);
Poglavlje B.42. ovog Priloga: Preosjetljivost kože: Analiza lokalnih limfnih čvorova.
Luminometer used (e.g. model), including instrument settings, luciferase substrate used, and demonstration of appropriate luminescence measurements based on the control test described in Appendix 3;
Poglavlje B.50. ovog Priloga: Preosjetljivost kože: Analiza lokalnih limfnih čvorova: DA.
The procedure used to demonstrate proficiency of the laboratory in performing the test method (e.g. by testing of proficiency substances) or to demonstrate reproducible performance of the test method over time.
Poglavlje B.51. ovog Priloga: Preosjetljivost kože: Analiza lokalnih limfnih čvorova: BrdU-ELISA.
Test procedure
Recommendation on the KeratinoSensTM assay for skin sensitisation testing, str.
Number of repetitions and replicates used;
42.
Test chemical concentrations, application procedure and exposure time used (if different than the one recommended)
Dostupno na: http://ihcp.jrc.ec.europa.eu/our_labs/eurl-ecvam/eurl-ecvam-recommendations/recommendation-keratinosens-skin-sensitisation.
Tabulation of Imax, EC1,5 and viability values (i.e. IC50, IC30) obtained for the test chemical and for the positive control for each repetition as well as the mean values (Imax: average; EC1,5 and viability values: geometric mean) and SD calculated using data from all individual repetitions and an indication of the rating of the test chemical according to the prediction model;
DB-ALM (INVITTOX) (2013) Protocol 155: KeratinoSensTM, str.
Coefficient of variation obtained with the luminescence readings for the negative control for each experiment;
17.
A graph depicting dose-response curves for induction of luciferase activity and viability;
Dostupno na: http://ecvam-dbalm.jrc.ec.europa.eu/beta/index.cfm/methodsAndProtocols/index
Description of any other relevant observations, if applicable.
OECD Guidelines for Chemical Testing No.
Discussion of the results obtained with the KeratinoSensTM assay;
Pojam je često međusobno zamjenjiv s pojmom ‚podudarnost’ u smislu udjela točnih ishoda ispitne metode (29.).
Consideration of the test method results within the context of an IATA, if other relevant information is available.
element antioksidacijskog odgovora (naziva se i EpRE, element odgovora na elektrofile) je element odgovora smješten u uzvodnoj promotorskoj regiji mnogih citoprotektivnih gena i gena faze II.
Available at: http://www.unece.org/trans/danger/publi/ghs/ghs_rev05/05files_e.html.
Ako ga aktivira Nfr2, posreduje u transkripcijskoj indukciji tih gena.
OECD Environment, Health and Safety publications, Series on Testing and Assessment No. 168.
interpolirana koncentracija za indukciju luciferaze pomnoženu s 1,5.
OECD, Paris.
koncentracija pri kojoj je preživljavanje stanica smanjeno za 30 %.
Chapter B.42 of this Annex: Skin sensitization: Local Lymph Node assay.
koncentracija pri kojoj je preživljavanje stanica smanjeno za 50 %.
Chapter B.50 of this Annex: Skin sensitization: Local Lymph Node assay: DA.
Keap1 (Kelch-like ECH-associated protein 1) senzorski protein koji može regulirati aktivnost faktora Nrf2.
Chapter B.51 of this Annex: Skin sensitization: Local Lymph Node assay: BrdU-ELISA.
U neinduciranim uvjetima senzorski protein Keap1 ciljano djeluje na transkripcijski faktor Nrf2 radi njegove ubikvitinacije i proteolitičke razgradnje u proteasomu.
Recommendation on the KeratinoSensTM assay for skin sensitisation testing, 42 pp.
Kovalentna modifikacija reaktivnih cisteinskih ostataka proteina Keap 1 s malim molekulama može dovesti do disocijacije faktora Nrf2 od proteina Keap1 (8) (10) (11).
Available at: http://ihcp.jrc.ec.europa.eu/our_labs/eurl-ecvam/eurl-ecvam-recommendations/recommendation-keratinosens-skin-sensitisation.
Nrf2 (nuclear factor (erythroid-derived 2)-like 2) transkripcijski faktor koji je uključen u put antioksidacijskog odgovora.
DB-ALM (INVITTOX) (2013) Protocol 155: KeratinoSensTM., 17 pp.
Kada Nrf2 nije ubikvitiniran, razvija se u citoplazmi i translocira u jezgru, gdje se veže s ARE-om u uzvodnoj promotorskoj regiji mnogih citoprotektivnih gena pokrećući njihovu transkripciju (8., 10., 11).
Available: http://ecvam-dbalm.jrc.ec.europa.eu/beta/index.cfm/methodsAndProtocols/index
Relevantnost uključuje i razmatranje o točnosti (sukladnosti) ispitne metode (29.).
OECD Guidelines for Chemical Testing No. 457.
Ocjenjuje se izračunavanjem obnovljivosti unutar jednog laboratorija i između više njih te ponovljivosti unutar jednog laboratorija (29.).
The term is often used interchangeably with “concordance”, to mean the proportion of correct outcomes of a test method (29).
podudarnost rezultata dobivenih ispitivanjem iste kemikalije uz primjenu istog ispitnog protokola (vidjeti ‚pouzdanost’) (29.).
Antioxidant response element (also called EpRE, electrophile response element), is a response element found in the upstream promoter region of many cytoprotective and phase II genes.
udio svih pozitivnih/aktivnih kemikalija koje su pravilno razvrstane primjenom ispitne metode.
When activated by Nfr2, it mediates the transcriptional induction of these genes.
To je mjera točnosti ispitne metode koja daje kategorijske rezultate i važan je čimbenik za ocjenu relevantnosti ispitne metode (29.).
Interpolated concentration for a 1,5 fold luciferase induction.
ponovljeni uzorak koji ne sadržava ispitivanu kemikaliju, ali sadržava sve ostale komponente ispitnog sustava te otapalo koje se upotrebljava u ispitivanju.
Concentration effecting a reduction of cellular viability by 30 %.
Upotrebljava se za utvrđivanje polazne reakcije za uzorke koji se tretiraju ispitivanom kemikalijom otopljenom u istom otapalu.
Concentration effecting a reduction of cellular viability by 50 %.
udio svih negativnih/neaktivnih kemikalija koje su pravilno razvrstane primjenom ispitne metode.
Maximal induction factor of luciferase activity compared to the solvent (negative) control measured at any test chemical concentration.
To je mjera točnosti ispitne metode koja daje kategorijske rezultate i važan je čimbenik za ocjenu relevantnosti ispitne metode (29.).
Kelch-like ECH-associated protein 1, is a sensor protein that can regulate the Nrf2 activity.
Ispitna metoda nije nikada valjana u apsolutnom smislu nego samo u odnosu na određenu svrhu (29.).
Under un-induced conditions the Keap1 sensor protein targets the Nrf2 transcription factor for ubiquitinylation and proteolytic degradation in the proteasome.
Preosjetljivost kože in vitro: Test luciferaze ARE-Nrf2
Covalent modification of the reactive cysteine residues of Keap 1 by small molecules can lead to dissociation of Nrf2 from Keap1 (8) (10) (11).
Prije rutinske primjene ove ispitne metode laboratoriji bi trebali dokazati svoju tehničku osposobljenost tako što će za deset tvari koje su u tablici 1. preporučene za dokazivanje osposobljenosti dobiti očekivano predviđanje na temelju testa KeratinoSens™ te za najmanje osam od deset tvari za dokazivanje osposobljenosti dobiti vrijednosti EC1,5 i IC50 koje su unutar odgovarajućeg referentnog raspona.
Nuclear factor (erythroid-derived 2)-like 2, is a transcription factor involved in the antioxidant response pathway.
Tvari za dokazivanje tehničke osposobljenosti izabrane su tako da predstavljaju niz odgovora povezanih s opasnostima od izazivanja preosjetljivosti kože.
When Nrf2 is not ubiquitinylated, it builds up in the cytoplasm and translocates into the nucleus, where it combines to the ARE in the upstream promoter region of many cytoprotective genes, initiating their transcription (8) (10) (11).
Drugi kriteriji za odabir bili su komercijalna dostupnost tvari, dostupnost visokokvalitetnih referentnih podataka dobivenih in vivo te dostupnost visokokvalitetnih in vitro podataka dobivenih s pomoću testa KeratinoSensTM.
Relevance incorporates consideration of the accuracy (concordance) of a test method (29).
Preporučene tvari za dokazivanje tehničke osposobljenosti za izvođenje testa KeratinoSensTM
It is assessed by calculating intra- and inter-laboratory reproducibility and intra-laboratory repeatability (29).
Tvari za dokazivanje tehničke osposobljenosti
The agreement among results obtained from testing the same chemical using the same test protocol (see reliability) (29).
Predviđanje in vivo [1]
The proportion of all positive / active chemicals that are correctly classified by the test method.
Predviđanje [2] KeratinoSensT
It is a measure of accuracy for a test method that produces categorical results, and is an important consideration in assessing the relevance of a test method (29).
Referentni raspon [3] EC1,5 (μM)
A replicate containing all components of a test system except of the test chemical, but including the solvent that is used.
Referentni raspon [3] IC50 (μM)
It is used to establish the baseline response for the samples treated with the test chemical dissolved in the same solvent.
Izopropanol
The proportion of all negative / inactive chemicals that are correctly classified by the test method.
Tvar koja ne izaziva preosjetljivost
It is a measure of accuracy for a test method that produces categorical results and is an important consideration in assessing the relevance of a test method (29).
Salicilna kiselina
A test method is never valid in an absolute sense, but only in relation to a defined purpose (29).
Mliječna kiselina
In Vitro Skin Sensitisation: ARE-Nrf2 Luciferase Test Method
Cinamil alkohol
Prior to routine use of this test method, laboratories should demonstrate technical proficiency by correctly obtaining the expected KeratinoSens™ prediction for the 10 Proficiency Substances recommended in Table 1 and by obtaining the EC1,5 and IC50 values that fall within the respective reference range for at least 8 out of the 10 proficiency substances.
Tvar koja izaziva preosjetljivost (slaba)
These Proficiency Substances were selected to represent the range of responses for skin sensitisation hazards.
25 – 175
Other selection criteria were commercial availability, availability of high quality in vivo reference, and availability of high quality in vitro data from the KeratinoSens™ assay.
Etilen glikol dimetakrilat
Recommended substances for demonstrating technical proficiency with the KeratinoSens™ assay
5 – 125
Proficiency Substances
erkaptobenzotiazol
In Vivo Prediction [1]
Tvar koja izaziva preosjetljivost (umjerena)
KeratinoSens™ Prediction [2]
25 – 250
,5 (μM) Reference Range [3]
Metildibromoglutaronitril
(μM ) Reference Range [3]
Tvar koja izaziva preosjetljivost (jaka)
Isopropanol
20 – 100
Non-sensitiser
etilaminofenol sulfat
Salicylic acid
20 – 200
Lactic acid
2,4-dinitro-klorbenzen
Cinnamyl alcohol
Tvar koja izaziva preosjetljivost (ekstremno jaka)
Sensitiser (weak)
5 – 20
25 - 175
Predviđanja opasnosti (i jakosti) in vivo temelje se na podacima dobivenima s pomoću metode LLNA (13.).
Ethylene glycol dimethacrylate
Jakost in vivo utvrđena je prema kriterijima koje je predložio ECETOC (24.).
5 - 125
Predviđanje na temelju testa KeratinoSensTM trebalo bi razmatrati u okviru IATA-e te u skladu s odredbama stavaka 9. i 11. ove ispitne metode.
ercaptobenzothiazole
Na temelju vrijednosti zapaženih u prijašnjim ispitivanjima (12.).
Sensitiser (moderate)
KONTROLA KVALITETE MJERENJA LUMINISCENCIJE
25 - 250
Osnovni pokus za osiguravanje optimalnog mjerenja luminiscencije u testu KeratinoSensTM
Methyldibromo glutaronitrile
Da bi se osiguralo dobivanje pouzdanih rezultata s pomoću luminometra, ključna su sljedeća tri parametra:
Sensitiser (strong)
dovoljna osjetljivost koja osigurava stabilnu pozadinu u kontrolnim jažicama,
20 - 100
nepostojanje gradijenta na pločici uzrokovanog dugim vremenom očitavanja i
ethylaminophenol sulfate
u susjednim jažicama ne dolazi do kontaminacije luminiscencijom iz jažica u kojima se odvija snažna aktivnost.
20 - 200
Kako bi se osiguralo primjereno mjerenje luminiscencije, preporučuje se da se prije provođenja testa ispita kontrolna pločica postavljena kako je opisano u nastavku (analiza triplikata).
2,4-Dinitro-chlorobenzene
Raspored jažica na pločici za prvi preliminarni pokus
Sensitiser (extreme)
Prazno
5 - 20
EGDMA etilen glikol dimetakrilat (CAS br.: 97-90-5), kemikalija koja izaziva jaku indukciju
The in vivo hazard (and potency) predictions are based on LLNA data (13).
CA cimetni aldehid, pozitivna kontrola (CAS br.: 104-55-2)
The in vivo potency is derived using the criteria proposed by ECETOC (24).
Analiza kontrole kvalitete trebala bi pokazati sljedeće:
A KeratinoSens™ prediction should be considered in the framework of an IATA and in accordance with the provisions of paragraphs 9 and 11 of this test method.
jasan odnos između doze i odgovora u retku D, s vrijednošću Imax > dvadeseterostrukog povećanja u odnosu na pozadinu (u većini se slučajeva postižu vrijednosti Imax između 100 i 300),
Based on the historical observed values (12).
nepostojanje odnosa između doze i odgovora u retcima C i E (vrijednosti indukcije nisu veće od 1,5 (idealno bi bilo da nisu iznad 1,3) zbog moguće kontaminacije svjetlom, posebno uz snažno aktivne jažice u retku s EGDMA-om,
QUALITY CONTROL OF LUMINESCENCE MEASUREMENTS
nema statistički značajne razlike između redaka A, B, C, E, F i G (tj. nema gradijenta na pločici) i