natgillin/translations-raw huggingface dataset:
An equal volume of aprotinin buffer (6 micrograms/ml in PBS) is added to the microcapillary tube, and plasma is separated from the blood via centrifugation (5 minutes at 600 g).
Suvišno hranjenje treba izbjegavati, a kvalitetu vode i čistoću akvarija potrebno je redovito nadzirati i prema potrebi vraćati na početno stanje.
Plasma is collected in the test tubes and stored at – 20 °C until analysed for VTG or other proteins of interest.
Ispitivanje osposobljenosti
Procedure 3B:
Kao referentnu kemikaliju trebalo bi ispitati, po mogućnosti dva puta godišnje, 3,4-dikloroanilin (upotrijebljen u validacijskim studijama u 1. i 2.) u punom rasponu koncentracija-odgovora kako bi se provjerila osjetljivost soja ribe koji se upotrebljava.
Zebrafish, Blood Collection by Cardiac Puncture
Svaki laboratorij koji tek počinje primjenjivati ovo ispitivanje trebao bi upotrijebiti referentnu kemikaliju.
To avoid coagulation of blood and degradation of protein the samples are collected within Phosphate-buffered saline (PBS) buffer containing heparin (1000 units/ml) and the protease inhibitor aprotinin (2 TIU/ml).
Laboratoriji mogu upotrijebiti tu kemikaliju da dokažu svoju tehničku osposobljenost za provedbu ispitivanja prije dostavljanja podataka u regulatorne svrhe.
As ingredients for the buffer, heparin, ammonium-salt and lyophilised aprotinin are recommended.
Dobivanje jajašaca
For blood sampling, a syringe (1ml) with a fixed thin needle (e.g. Braun Omnikan-F) is recommended.
Jajašca zebrica mogu se dobiti iz skupina za mriješćenje (u posebnim akvarijima za mriješćenje) ili masovnim mriješćenjem (u akvarijima za držanje).
The syringe should be prefilled with buffer (approximately 100 microliter) to completely elute the small blood volumes from each fish.
U slučaju skupina za mriješćenje mužjaci i ženke (npr. u omjeru 2: 1) uzgojne skupine stavljaju se u akvarije za mriješćenje nekoliko sati prije mraka na dan prije ispitivanja.
The blood samples are taken by cardiac puncture.
Budući da u skupinama za mriješćenje zebrica mriješćenje povremeno može izostati, preporučuje se paralelno upotrebljavati najmanje tri akvarija za mriješćenje.
At first the fish should be anesthetized with MS-222 (100 mg/l).
Kako bi se izbjegla genetička pristranost, jajašca se sakupljaju iz najmanje tri uzgojne skupine, miješaju i nasumično odabiru.
The proper plane of anaesthesia allows the user to distinguish the heartbeat of the zebrafish.
Za sakupljanje jajašaca, ladice za mrijest stavljaju se u akvarije za mriješćenje ili akvarije za držanje prije mraka na dan prije ispitivanja ili prije svitanja na dan ispitivanja.
While puncturing the heart, keep the syringe piston under weak tension.
Kako bi se spriječilo da odrasle zebrice pojedu jajašca, ladice za mrijest pokrivaju se inertnom žičanom mrežicom odgovarajuće veličine oka (otprilike 2 ± 0,5 mm).
Collectable blood volumes range between 20 - 40 microliters.
Ako se to smatra potrebnim, na mrežicu se mogu pričvrstiti umjetne biljke od inertnog materijala (npr. plastika ili staklo) kao podražaj za mriješćenje (3., 4., 5., 23., 35.).
After cardiac puncture, the blood/buffer-mixture should be filled into the test tube.
Trebalo bi upotrebljavati iskušane plastične materijale koji ne otpuštaju svoje sastojke u vodu (npr. ftalati).
Plasma is separated from the blood via centrifugation (20 min; 5000 g) and should be stored at – 80°C until required for analysis.
Parenje, mriješćenje i oplodnja odvijaju se u 30 minuta nakon svitanja i ladice za mrijest s prikupljenim jajašcima mogu se pažljivo izvaditi.
Procedure 3C:
Nakon sakupljanja jajašaca iz ladica za mrijest preporučuje se isprati ih rekonstituiranom vodom.
SOP: Zebrafish, homogenisation of head & tail
Razlikovanje jajašaca
The fish are anaesthetised and euthanised in accordance with the test description.
Na 26 °C nakon otprilike 15 minuta dolazi do prvog brazdanja oplođenih jajašaca, a daljnjim istovremenim brazdanjima nastaju 4, 8, 16 i 32 stanice – blastomere (vidjeti Dodatak 3.) (35.).
The head and tail are cut of the fish in accordance with Figure 1.
U tim fazama oplođena jajašca mogu se lako prepoznati po razvoju blastule.
Important: All dissection instruments, and the cutting board should be rinsed and cleaned properly (e.g. with 96 % ethanol) between handling of each single fish to prevent “vitellogenin pollution” from females or induced males to uninduced males.
Dvadeset embrija po koncentraciji (jedan embrij po bunariću) izlaže se ispitivanoj kemikaliji.
For gonad histology
Izlaganje bi trebalo biti takvo da se ± 20 % nazivne koncentracije kemikalije zadrži tijekom cijelog ispitivanja.
Cut behind
Ako to nije moguće u statičkom sustavu, trebalo bi primijeniti prikladna razdoblja obnavljanja za polustatičko ispitivanje (npr. obnavljanje svaka 24 sata).
Cut behind dorsal fin
U tom slučaju koncentracije izlaganja treba provjeriti barem u najvišoj i najnižoj ispitnoj koncentraciji na početku i na kraju svakog razdoblja izlaganja (vidjeti stavak 36.).
For Vtg analysis
Ako se koncentracija izlaganja od ± 20 % nazivne koncentracije ne može održati, sve koncentracije treba mjeriti na početku i na kraju svakog razdoblja izlaganja (vidjeti stavak 36.).
The weight of the pooled head and tail from each fish is measured to the nearest mg.
Pri obnavljanju ispitne otopine treba paziti da embriji ostanu prekriveni malom količinom stare ispitne otopine kako bi se izbjeglo njihovo sušenje.
After being weighed, the parts are placed in appropriate tubes (e.g. 1,5 ml eppendorf) and frozen at – 80 °C until homogenisation or directly homogenised on ice with two plastic pistils.
Plan ispitivanja može se prilagoditi kako bi se ispunili zahtjevi za ispitivanje određenih tvari (npr. protočno (24.) ili pasivno doziranje (25.) za lako razgradive ili jako adsorptivne tvari (29.), ili drugo za hlapljive tvari (36., 37.)).
(Other methods can be used if they are performed on ice and the result is a homogenous mass).
U svakom slučaju treba paziti da stres za embrije bude što manji.
Keep working with the pistils until the mixture is homogeneous.
Obično je potrebno pet koncentracija ispitivane kemikalije koje se razlikuju za stalni faktor od najviše 2,2 da se zadovolje statistički zahtjevi.
Important note: New pistils are used for each fish.
Ako se upotrebljava manje od pet koncentracija, treba dati obrazloženje.
The samples are placed on ice until centrifugation at 4 °C at 50000 g for 30 min.
Najviša ispitna koncentracija trebala bi, po mogućnosti, izazvati smrtnost od 100 %, a najniža ispitna koncentracija ne bi trebala imati vidljive učinke, kako je opisano u stavku 28.
Use a pipette to dispense portions of 20 μl supernatant into at least two tubes by dipping the tip of the pipette below the fat layer on the surface and carefully sucking up the supernatant without fat- or pellet fractions.
Ispitivanjem za utvrđivanje raspona prije glavnog ispitivanja omogućuje se odabir odgovarajućeg raspona koncentracija.
The tubes are stored at – 80 °C until use.
Ispitivanje za utvrđivanje raspona obično se provodi s deset embrija po koncentraciji.
Homogenisation buffer:(50 mM Tris-HCl pH 7,4; 1 % Protease inhibitor cocktail (Sigma)): 12 ml Tris-HCl pH 7,4 + 120 μl Protease inhibitor cocktail.TRIS: TRIS-ULTRA PURE (ICN) e.g. from Bie & Berntsen, Denmark.Protease inhibitor cocktail: From Sigma (for mammalian tissue) Product number P 8340.NOTE: The homogenisation buffer should be used the same day as manufactured.
Sljedeće upute odnose se na ispitivanje s pločama s 24 bunarića.
Place on ice during use.
Ako se upotrebljavaju drugačije ispitne komore (npr. male Petrijeve zdjelice) ili se ispituje više koncentracija, upute se moraju na odgovarajući način prilagoditi.
VITELLOGENIN FORTIFICATION SAMPLES AND INTER-ASSAY REFERENCE STANDARD
Pojedinosti i vizualne upute za raspodjelu koncentracija u pločama s 24 bunarića dostupne su u stavku 27. i u Dodatku 4. slici 1.
On each day that VTG assays are performed, a fortification sample made using an inter-assay reference standard will be analysed.
Kontrole s vodom za razrjeđivanje potrebne su i kao negativna kontrola i kao kontrola unutar ploče.
The VTG used to make the inter-assay reference standard will be from a batch different from the one used to prepare calibration standards for the assay being performed.
Ako se primijeti više od jednog mrtvog embrija u kontroli unutar ploče, ploča se odbacuje, čime se smanjuje broj koncentracija za izračunavanje LC50.
The fortification sample will be made by adding a known quantity of the inter-assay standard to a sample of control male plasma.
Ako se cijela ploča odbaci, može biti teže procijeniti i razlikovati vidljive učinke, posebno ako je odbačena ploča kontrola s otapalom ili ploča s tretiranim embrijima.
The sample will be fortified to achieve a VTG concentration between 10 and 100 times the expected vitellogenin concentration of control male fish.
U prvom slučaju ispitivanje se mora ponoviti.
The sample of control male plasma that is fortified may be from an individual fish or may be a composite from several fish.
Za svaku šaržu jajašaca koja se upotrebljava za ispitivanje provodi se pozitivna kontrola s fiksnom koncentracijom od 4 mg/l 3,4-dikloroanilina.
A subsample of the unfortified control male plasma will be analysed in at least two duplicate wells.
Ako se upotrebljava otapalo, dodatna skupina od 20 embrija izlaže se otapalu u zasebnoj ploči s 24 bunarića te tako služi kao kontrola s otapalom.
The fortified sample also will be analysed in at least two duplicate wells.
Kako bi se ispitivanje smatralo prihvatljivim, trebalo bi dokazati da otapalo nema značajne učinke na vrijeme potrebno za valjenje ni na preživljavanje niti ima bilo kakve druge štetne učinke na embrije (usp. stavak 8. točku (c)).
The mean quantity of vitellogenin in the two unfortified control male plasma samples will be added to the calculated quantity of VTG added to fortification the samples to determine an expected concentration.
Početak izlaganja i trajanje ispitivanja
The ratio of this expected concentration to the measured concentration will be reported along with the results from each set of assays performed on that day.
Ispitivanje treba započeti što je prije moguće nakon oplodnje jajašaca i završiti nakon 96 sati izlaganja.
DECISION FLOWCHART FOR THE STATISTICAL ANALYSIS
Embriji bi trebali biti uronjeni u ispitne otopine prije nego što započne brazdanje blastodiska ili, najkasnije, do faze sa 16 stanica.
Rep means normally distributed
Kako bi se započelo s izlaganjem što je prije moguće, najmanje dvostruki broj jajašaca potreban po skupini predviđenoj za tretiranje nasumično se odabire i prenosi u odgovarajuće koncentracije i kontrole (npr. u zdjelice za kristalizaciju od 100 ml; jajašca bi trebala biti potpuno prekrivena) najkasnije 90 minuta nakon oplodnje.
Stept-down Jonckheere or Williams' test
Iskoristiva oplođena jajašca treba u roku od 180 minuta nakon oplodnje odvojiti od neoplođenih i prenijeti u ploče s 24 bunarića koje su prethodno kondicionirane 24 sata i zatim ponovno napunjene s 2 ml svježe pripremljene ispitne otopine po bunariću.
Normalising transform?
S pomoću stereomikroskopa (po mogućnosti povećanja ≥ 30 puta) odabiru se oplođena jajašca koja se brazdaju i pritom ne pokazuju očite nepravilnosti (npr. asimetrija, nastanak vezikula) ili ozljede koriona.
variance stabilising transform?
Za sakupljanje i odvajanje jajašaca vidjeti Dodatak 3. slike 1. i 3. te Dodatak 4. sliku 2.
Tamhane-Dunnett test on nested ANOVA
Raspodjela jajašaca u ploče s 24 bunarića
Dunnett test on nested ANOVA No
Jajašca se raspodjeljuju u ploče s bunarićima kako slijedi (vidjeti također Dodatak 4. sliku 1.):
Yes Yes
20 jajašaca u jednu ploču za svaku ispitnu koncentraciju,
No >=4 reps per conc
20 jajašaca u jednu ploču kao kontrola s otapalom (ako je potrebno),
<=3 reps per conc
20 jajašaca u jednu ploču kao pozitivna kontrola,
Dunn or Mann-Whitney test on rep means
4 jajašca u svaku od navedenih ploča u vodu za razrjeđivanje kao kontrola unutar ploče,
Dunn test on rep means Dunn or Mann-Whitney test
24 jajašca u jednu pločicu u vodu za razrjeđivanje kao negativna kontrola.
Dunn test <=3 reps per conc
Apikalna zapažanja koja se provode za svaki ispitni embrij jesu sljedeća: koagulacija embrija, izostanak formiranja somita, neodvajanje repa i izostanak otkucaja srca (tablica 1.).
>=4 reps per conc Tamhane-Dunnett test
Na temelju tih zapažanja utvrđuje se smrtnost: svaki pozitivan ishod u jednome od tih zapažanja znači da je embrij zebrice mrtav.
Nested ANOVA normal
Usto, svakodnevno se bilježi valjenje u tretiranim i kontrolnim skupinama, s početkom nakon 48 sati.
Nested ANOVA not normal
Zapažanja se bilježe svaka 24 sata do kraja ispitivanja.
variance stabilising transformation
Apikalna zapažanja akutne toksičnosti u embrija zebrica 24 sata – 96 sati nakon oplodnje.
Variances unequal Dunnett test
Vrijeme izlaganja
Variances equal
24 sata
Step-down Jonckheere test
48 sati
Rep means normal or not homogenous
72 sata
Rep means normal & homogenous
96 sati
Step-down trendtest on replicate means
Koagulacija embrija
Not monotone
Izostanak formiranja somita
Monotone
Neodvajanje korijena repa u bočnom prikazu
Determine whether Dose-Response is monotone
Izostanak otkucaja srca
C.49 Fish Embryo Acute Toxicity (FET) Test
Koagulacija embrija: Koagulirani su embriji mliječno bijele boje, a pod mikroskopom izgledaju tamni (vidjeti Dodatak 5. sliku 1.).
This test method (TM) is equivalent to OECD test guideline (TG) 236 (2013).
Broj koaguliranih embrija određuje se nakon 24, 48, 72 i 96 sati.
It describes a Fish Embryo Acute Toxicity (FET) test with the zebrafish (Danio rerio).
Izostanak formiranja somita: Pri temperaturi od 26 ± 1 °C nakon 24 sata u embrija zebrice koji se normalno razvija formirano je 20-ak somita (vidjeti Dodatak 5. sliku 2.).
This test is designed to determine acute toxicity of chemicals on embryonic stages of fish.
U embrija koji se normalno razvija uočljivi su spontani pokreti (s jedne na drugu stranu).
The FET-test is based on studies and validation activities performed on zebrafish (1)(2)(3)(4)(5)(6)(7)(8)(9)(10)(11)(12)(13)(14).
Spontani pokreti upućuju na formiranje somita.
The FET-test has been successfully applied to a wide range of chemicals exhibiting diverse modes of action, solubilities, volatilities, and hydrophobicities (reviewed in 15 and 16).
Nepostojanje somita bilježi se nakon 24, 48, 72 i 96 sati.
Newly fertilised zebrafish eggs are exposed to the test chemical for a period of 96 hrs.
Ako se somiti ne formiraju nakon 24 sata, to može biti znak općeg zastoja u razvoju.
Every 24 hrs, up to four apical observations are recorded as indicators of lethality (6): (i) coagulation of fertilised eggs, (ii) lack of somite formation, (iii) lack of detachment of the tail-bud from the yolk sac, and (iv) lack of heartbeat.
Najkasnije nakon 48 sati somiti bi trebali biti razvijeni.
At the end of the exposure period, acute toxicity is determined based on a positive outcome in any of the four apical observations recorded, and the LC50 is calculated.
U protivnom se zameci smatraju mrtvima.
Useful information about substance-specific properties include the structural formula, molecular weight, purity, stability in water and light, pKa and Kow, water solubility and vapour pressure as well as results of a test for ready biodegradability (TM C.4 (17) or TM C.29 (18)).
Neodvajanje repa: U embrija zebrice koji se normalno razvija odvajanje repa (vidjeti Dodatak 5. sliku 3.) od žumanjčane vrećice zamjećuje se nakon produljenja stražnjeg dijela embrionalnog tijela.
Solubility and vapour pressure can be used to calculate Henry's law constant, which will indicate whether losses due to evaporation of the test chemical may occur.
Neodvajanje repa bilježi se nakon 24, 48, 72 i 96 sati.
A reliable analytical method for the quantification of the substance in the test solutions with known and reported accuracy and limit of detection should be available.
Izostanak otkucaja srca: U embrija zebrice koji se normalno razvija pri temperaturi od 26 ± 1 °C otkucaji srca zamjećuju se nakon 48 sati (vidjeti Dodatak 5. sliku 4.).
If the test method is used for the testing of a mixture, its composition should, as far as possible, be characterised, e.g. by the chemical identity of its constituents, their quantitative occurrence and their substance-specific properties (see paragraph 4).
Bilježenje ove krajnje točke trebalo bi provoditi posebno pažljivo jer nepravilne otkucaje srca ne bi trebalo bilježiti kao smrtonosne.
Concerning substances that may be activated via metabolism, there is evidence that zebrafish embryos do have biotransformation capacities (19)(20)(21)(22).
Nadalje, vidljivi otkucaji srca bez cirkulacije u trbušnoj aorti (aorta abdominalis) ne smatraju se smrtonosnima.
However, the metabolic capacity of embryonic fish is not always similar to that of juvenile or adult fish.
Pri bilježenju ove krajnje točke embrije u kojih nisu vidljivi otkucaji srca trebalo bi promatrati pod povećanjem od najmanje 80 puta najmanje jednu minutu.
For instance, the protoxicant allyl alcohol (9) has been missed in the FET.
Izostanak otkucaja srca bilježi se nakon 48, 72 i 96 sati.
Therefore, if there are any indications that metabolites or other transformation products of relevance may be more toxic than the parent compound, it is also recommended to perform the test with these metabolites/transformation products and to also use these results when concluding on the toxicity of the test chemical, or alternatively perform another test which takes metabolism into further account.
Stope valjenja svih tretiranih i kontrolnih skupina trebalo bi bilježiti od 48 sati nadalje i uvrstiti u izvješća.
For substances with a molecular weight ≥ 3kDa, a very bulky molecular structure, and substances causing delayed hatch which might preclude or reduce the post-hatch exposure, embryos are not expected to be sensitive because of limited bioavailability of the substance, and other toxicity tests might be more appropriate.
Iako se valjenje ne primjenjuje kao krajnja točka za izračun LC50, njime se osigurava izloženost embrija bez potencijalne zaštitne funkcije koriona, što može pomoći u tumačenju podataka.
For the test results to be valid, the following criteria apply:
Dodaci 3. i 5. sadržavaju detaljan opis normalnog (35.) i primjere abnormalnog razvoja embrija zebrica.
The overall fertilisation rate of all eggs collected should be ≥ 70 % in the batch tested.
Analitička mjerenja
The water temperature should be maintained at 26 ± 1 °C in test chambers at any time during the test.
Na početku i na kraju ispitivanja mjere se pH, ukupna tvrdoća i vodljivost u kontroli/kontrolama i u najvišoj koncentraciji ispitivane kemikalije.
Overall survival of embryos in the negative (dilution-water) control, and, where relevant, in the solvent control should be ≥ 90 % until the end of the 96 hrs exposure.
U polustatičkim sustavima s obnavljanjem trebalo bi izmjeriti pH prije i nakon obnavljanja vode.
Exposure to the positive control (e.g. 4,0 mg/l 3,4-dichloroaniline for zebrafish) should result in a minimum mortality of 30 % at the end of the 96 hrs exposure.
Koncentracija otopljenog kisika mjeri se na kraju ispitivanja u negativnim kontrolama i u najvišoj ispitnoj koncentraciji s iskoristivim embrijima, gdje bi trebala biti u skladu s kriterijima valjanosti ispitivanja (vidjeti stavak 8. točku (f)).
Hatching rate in the negative control (and solvent control if appropriate) should be ≥ 80 % at the end of 96 hrs exposure.
Ako postoji mogućnost da temperatura nije jednaka u svim pločama s 24 bunarića, ona se mjeri u tri nasumično odabrane posude.
At the end of the 96 hrs exposure, the dissolved oxygen concentration in the negative control and highest test concentration should be ≥ 80 % of saturation.
Temperaturu bi trebalo bilježiti po mogućnosti stalno za vrijeme ispitivanja, a barem jednom dnevno.
An overview of recommended maintenance and test conditions is available in Appendix 2.
U statičkom sustavu koncentraciju ispitivane kemikalije trebalo bi mjeriti barem u najvišoj i najnižoj ispitnoj koncentraciji, a po mogućnosti u svim tretiranim skupinama, na početku i na kraju ispitivanja.
The following equipment is needed:
U polustatičkom ispitivanju (s obnavljanjem), ako se očekuje da će koncentracija ispitivane kemikalije ostati u granicama od ± 20 % nazivnih vrijednosti, preporučuje se da se barem najviša i najniža ispitna koncentracija analiziraju odmah nakon pripreme te neposredno prije obnavljanja.
Fish tanks made of chemically inert material (e.g. glass) and of a suitable capacity in relation to the recommended loading (see “Maintenance of brood fish”, paragraph 14);
U ispitivanju u kojem se predviđa da koncentracija ispitivane kemikalije neće ostati u granicama od ± 20 % nazivne vrijednosti moraju se analizirati sve ispitne koncentracije odmah nakon pripreme te neposredno prije obnavljanja.
Inverted microscope and/or binocular with a capacity of at least 80-fold magnification.
U slučaju nedostatne količine za analizu može biti korisno spojiti ispitne otopine ili upotrijebiti zamjenske komore koje su izrađene od istog materijala te imaju isti omjer volumena i površine kao ploče s 24 bunarića.
If the room used for recording observations cannot be adjusted to 26 ± 1 °C, a temperature-controlled cross movement stage or other methods to maintain temperature are necessary;
Preporučuje se da se rezultati svakako temelje na izmjerenim koncentracijama.
Test chambers; e.g., standard 24-well plates with a depth of approx.
Ako koncentracije ne ostanu unutar 80 – 120 % nazivne koncentracije, koncentracije koje imaju određeni učinak trebalo bi izraziti u odnosu na geometrijsku sredinu izmjerenih koncentracija; za više pojedinosti vidjeti 5. poglavlje Smjernica OECD-a za ispitivanje toksičnosti analitički zahtjevnih tvari i smjesa za vodene organizme (28.).
20 mm. (see “Test chambers”, paragraph 11);
ISPITIVANJE GRANIČNE KONCENTRACIJE
e.g., self-adhesive foil to cover the 24-well plates;
Uz primjenu postupaka opisanih u ovoj ispitnoj metodi može se provesti ispitivanje granične koncentracije pri koncentraciji od 100 mg/l ispitivane kemikalije ili pri granici topljivosti te kemikalije u ispitnom mediju (tj. pri nižoj od te dvije koncentracije) kako bi se dokazalo da je srednja smrtonosna koncentracija (LC50) viša od te koncentracije.
Incubator or air-conditioned room with controlled temperature, allowing to maintain 26 ± 1 °C in wells (or test chambers);
Ispitivanje granične koncentracije trebalo bi provesti s po 20 embrija u tretiranoj skupini, pozitivnoj kontroli i, prema potrebi, kontroli s otapalom, te 24 embrija u negativnoj kontroli.
Oxygen meter;
Ako je smrtnost pri ispitivanoj koncentraciji za 10 % veća od smrtnosti u negativnoj kontroli (ili kontroli s otapalom), trebalo bi provesti cjelovitu studiju.
Equipment for determination of hardness of water and conductivity;
Treba zabilježiti sve zamijećene učinke.
Spawn trap: instrument trays of glass, stainless steel or other inert materials; wire mesh (grid size 2 ± 0,5 mm) of stainless steel or other inert material to protect the eggs once laid; spawning substrate (e.g. plant imitates of inert material) (TM C.48, Appendix 4a (23));
Ako je smrtnost u negativnoj kontroli (ili kontroli s otapalom) veća od 10 %, ispitivanje nije valjano i treba ga ponoviti.
Pipettes with widened openings to collect eggs;
U ovom ispitivanju pojedinačni bunarići smatraju se neovisnim ponovljenim uzorcima za statističku analizu.
Glass vessels to prepare different test concentrations and dilution water (beakers, graduated flasks, graduated cylinders and graduated pipettes) or to collect zebrafish eggs (e.g. beakers, crystallisation dishes);
Izrađuje se grafički prikaz postotka embrija za koje je nakon 48 i/ili 96 sati utvrđen pozitivan ishod najmanje jednog apikalnog zapažanja u odnosu na ispitne koncentracije.
If alternative exposure systems, such as flow-through (24) or passive dosing (25) are used for the conduct of the test, appropriate facilities and equipment are needed.
Za izračun nagiba krivulje, vrijednosti srednje smrtonosne koncentracije (LC50) i granica pouzdanosti (95 %) trebalo bi primijeniti odgovarajuće statističke metode (38.) te proučiti Smjernice OECD-a o aktualnim pristupima u statističkoj analizi podataka o ekotoksičnosti (39.).