natgillin/translations-raw huggingface dataset:
At the concentration producing a precipitate, care should be taken to assure that the precipitate does not interfere with the conduct of the test (e.g. staining or scoring).
Klastogeni aktivni bez metaboličke aktivacije
The determination of solubility in the culture medium prior to the experiment may be useful.
Metil metansulfonat
If no precipitate or limiting cytotoxicity is observed, the highest test concentration should correspond to 10 mM, 2 mg/ml or 2 μl/ml, whichever is the lowest (39) (40) (41).
Mitomicin C
When the test chemical is not of defined composition, e.g. a substance of unknown or variable composition, complex reaction products or biological material (UVCB) (42), environmental extract etc., the top concentration may need to be higher (e.g. 5 mg/ml), in the absence of sufficient cytotoxicity, to increase the concentration of each of the components.
itrokinolin-N-oksid
It should be noted however that these requirements may differ for human pharmaceuticals (43).
Citozin arabinozid
Controls
Klastogeni koji zahtijevaju metaboličku aktivaciju
Concurrent negative controls (see paragraph 15), consisting of solvent alone in the treatment medium and treated in the same way as the treatment cultures, should be included for every harvest time.
Benzo(a)piren
Concurrent positive controls are needed to demonstrate the ability of the laboratory to identify clastogens under the conditions of the test protocol used and the effectiveness of the exogenous metabolic activation system, when applicable.
Ciklofosfamid
Examples of positive controls are given in the table 1 below.
POSTUPAK
Alternative positive control chemicals can be used, if justified.
Tretiranje ispitivanom kemikalijom
Because in vitro mammalian cell tests for genetic toxicity are sufficiently standardized, the use of positive controls may be confined to a clastogen requiring metabolic activation.
Stanice koje se razmnožavaju tretiraju se ispitivanom kemikalijom uz prisutnost i odsutnost sustava metaboličke aktivacije.
Provided it is done concurrently with the non-activated test using the same treatment duration, this single positive control response will demonstrate both the activity of the metabolic activation system and the responsiveness of the test system.
Vrijeme izdvajanja stanica iz kulture
Long term treatment (without S9) should however have its own positive control as the treatment duration will differ from the test using metabolic activation.
Za temeljito ocjenjivanje, koje će biti potrebno za donošenje zaključka o negativnom ishodu, trebalo bi provesti sva tri sljedeća pokusna uvjeta uz primjenu kratkotrajnog tretiranja s metaboličkom aktivacijom i bez nje i dugotrajnog tretiranja bez metaboličke aktivacije (vidjeti stavke 43., 44. i 45.).
Each positive control should be used at one or more concentrations expected to give reproducible and detectable increases over background in order to demonstrate the sensitivity of the test system (i.e. the effects are clear but do not immediately reveal the identity of the coded slides to the reader), and the response should not be compromised by cytotoxicity exceeding the limits specified in the test method.
Stanice bi trebalo tri sata do šest sati izlagati ispitivanoj kemikaliji bez metaboličke aktivacije i uzorkovati ih po isteku vremena koje odgovara vremenu približno 1,5 uobičajenog staničnog ciklusa od početka tretiranja (18.).
Reference chemicals recommended for assessing laboratory proficiency and for selection of positive controls
Stanice bi trebalo tri sata do šest sati izlagati ispitivanoj kemikaliji s metaboličkom aktivacijom i uzorkovati ih po isteku vremena koje odgovara vremenu približno 1,5 uobičajenog staničnog ciklusa od početka tretiranja (18.).
Category
Stanice bi trebalo neprekidno izlagati bez metaboličke aktivacije do uzorkovanja po isteku vremena koje odgovara vremenu približno 1,5 uobičajenog staničnog ciklusa.
Clastogens active without metabolic activation
Određene kemikalije (npr. nukleozidne analoge) lakše je otkriti ako je vrijeme tretiranja/uzorkovanja dulje od 1,5 uobičajenog staničnog ciklusa (24.).
Methyl methanesulphonate
Ako bilo koji od gore navedenih pokusnih uvjeta dovede to pozitivnog odgovora, možda neće biti potrebno istražiti ni jedan drugi postupak tretiranja.
Mitomycin C
Priprema kromosoma
itroquinoline-N-Oxide
Stanične kulture tretiraju se kolcemidom ili kolhicinom obično jedan sat do tri sata prije izdvajanja stanica.
Cytosine arabinoside
Stanice za pripremu kromosoma izdvajaju se i obrađuju iz svake stanične kulture zasebno.
Clastogens requiring metabolic activation
Priprema kromosoma uključuje hipotoničko tretiranje stanica, fiksiranje i bojenje.
Benzo(a)pyrene
U slučaju jednog sloja, na kraju tretiranja u trajanju od tri sata do šest sati mogu biti prisutne mitotske stanice (prepoznatljive kao okrugle stanice koje se odvajaju od površine).
Cyclophosphamide
Budući da se te mitotičke stanice lako odvajaju, mogu se izgubiti pri odstranjivanju podloge s ispitivanom kemikalijom.
PROCEDURE
Ako postoji dokaz o znatnom povećanju broja mitotskih stanica u odnosu na kontrole, čime se ukazuje na vjerojatno zaustavljanje mitoze, te stanice trebalo bi prikupiti centrifugiranjem i ponovno dodati kulturama kako bi se u trenutku izdvajanja stanica izbjegao gubitak stanica koje se nalaze u fazi mitoze i koje su u opasnosti od kromosomskih aberacija.
Treatment with test chemical
Analiza
Proliferating cells are treated with the test chemical in the presence and absence of a metabolic activation system.
Sva predmetna stakalca, uključujući i stakalca pozitivnih i negativnih kontrola, trebalo bi prije mikroskopske analize radi utvrđivanja kromosomskih aberacija nezavisno kodirati.
Culture harvest time
Budući da postupak fiksiranja često za posljedicu ima određeni udio metafaznih stanica koje su izgubile kromosome, stanice koje se pregledavaju trebale bi stoga sadržavati broj centromera jednak modalnom broju +/– 2.
For thorough evaluation, which would be needed to conclude a negative outcome, all three of the following experimental conditions should be conducted using a short term treatment with and without metabolic activation and long term treatment without metabolic activation (see paragraphs 43, 44 and 45):
Za svaku koncentraciju i kontrolu trebalo bi pregledati najmanje 300 dobro vidljivih metafaza kako bi se zaključilo da je ispitivana kemikalija jasno negativna (vidjeti stavak 45.).
Cells should be exposed to the test chemical without metabolic activation for 3-6 hours, and sampled at a time equivalent to about 1,5 normal cell cycle lengths after the beginning of treatment (18),
Ako se upotrebljavaju ponovljene kulture, 300 stanica trebalo bi jednakomjerno raspodijeliti među ponovljenim kulturama.
Cells should be exposed to the test chemical with metabolic activation for 3-6 hours, and sampled at a time equivalent to about 1,5 normal cell cycle lengths after the beginning of treatment (18),
Ako se upotrebljava jedna kultura po koncentraciji (vidjeti stavak 21.), trebalo bi pregledati najmanje 300 dobro vidljivih metafaza u toj jednoj kulturi.
Cells should be continuously exposed without metabolic activation until sampling at a time equivalent to about 1,5 normal cell cycle lengths.
Prednost vrednovanja 300 stanica jest povećanje statističke snage ispitivanja; osim toga, rijetko se zapažaju nulte vrijednosti (očekuje se da će iznositi samo 5 %) (44.).
Certain chemicals (e.g. nucleoside analogues) may be more readily detected by treatment/sampling times longer than 1,5 normal cell cycle lengths (24).
Broj metafaza koje se pregledavaju može se smanjiti ako se opazi veliki broj stanica s kromosomskim aberacijama i ako se ispitivana kemikalija smatra jasno pozitivnom.
In the event that any of the above experimental conditions lead to a positive response, it may not be necessary to investigate any of the other treatment regimens.
Trebalo bi pregledati stanice sa strukturnim kromosomskim aberacijama uključujući i isključujući kromosomske prekide.
Chromosome preparation
Lomovi i prekidi definirani su u Dodatku 1. u skladu s (45. i 46.).
Cell cultures are treated with colcemid or colchicine usually for one to three hours prior to harvesting.
Aberacije kromatidnog i kromosomskog tipa trebalo bi bilježiti odvojeno i klasificirati prema podtipovima (lomovi, zamjene).
Each cell culture is harvested and processed separately for the preparation of chromosomes.
U postupcima koji se primjenjuju u laboratoriju trebalo bi osigurati da analizu kromosomskih aberacija provode dobro osposobljeni analitičari te da je, prema potrebi, pregledaju stručnjaci.
Chromosome preparation involves hypotonic treatment of the cells, fixation and staining.
Iako je svrha ovog ispitivanja otkrivanje strukturnih kromosomskih aberacija, važno je zabilježiti učestalost poliploidije i endoreduplikacije u slučaju da se opaze te pojave.
In monolayers, mitotic cells (identifiable as being round and detaching from the surface) may be present at the end of the 3-6 hour treatment.
(Vidjeti stavak 2.)
Because these mitotic cells are easily detached, they can be lost when the medium containing the test chemical is removed.
Osposobljenost laboratorija
If there is evidence for a substantial increase in the number of mitotic cells compared with controls, indicating likely mitotic arrest, then the cells should be collected by centrifugation and added back to cultures, to avoid losing cells that are in mitosis, and at risk for chromosome aberration, at the time of harvest.
Kako bi se utvrdilo dostatno iskustvo u ispitivanju prije njegove uporabe za rutinsko ispitivanje, laboratorij bi trebao provesti niz pokusa s referentnim pozitivnim kemikalijama uz primjenu različitih mehanizama i različitih negativnih kontrola (uključujući uporabu različitih otapala/nosača).
Analysis
Odgovori pozitivnih i negativnih kontrola trebali bi biti u skladu s literaturom.
All slides, including those of the positive and negative controls, should be independently coded before microscopic analysis for chromosomal aberrations.
To se ne odnosi na laboratorije s iskustvom, odnosno laboratorije s bazom prijašnjih podataka koja je stavljena na raspolaganje u skladu s definicijom iz stavka 37.
Since fixation procedures often result in a proportion of metaphase cells which have lost chromosomes, the cells scored should, therefore, contain a number of centromeres equal to the modal number +/- 2.
Odabir kemikalija pozitivnih kontrola (vidjeti tablicu 1. iz stavka 26.) trebalo bi istražiti primjenom kratkotrajnih i dugotrajnih tretiranja bez metaboličke aktivacije, kao i primjenom kratkotrajnog tretiranja s metaboličkom aktivacijom kako bi se dokazala osposobljenost za otkrivanje klastogenih kemikalija i utvrdila učinkovitost sustava metaboličke aktivacije.
At least 300 well-spread metaphases should be scored per concentration and control to conclude a test chemical as clearly negative (see paragraph 45).
Potrebno je izabrati raspon koncentracija odabranih kemikalija pri kojima će doći do ponovljivih povećanja u odnosu na pozadinske vrijednosti, koja su povezana s koncentracijom, kako bi se dokazala osjetljivost i dinamički raspon ispitnog sustava.
The 300 cells should be equally divided among the replicates, when replicate cultures are used.
Podaci o prijašnjim kontrolama
When single cultures are used per concentration (see paragraph 21), at least 300 well spread metaphases should be scored in this single culture.
Laboratorij bi trebao uspostaviti:
Scoring 300 cells has the advantage of increasing the statistical power of the test and in addition, zero values will be rarely observed (expected to be only 5 %) (44).
raspon i distribuciju prijašnjih pozitivnih kontrola,
The number of metaphases scored can be reduced when high numbers of cells with chromosome aberrations are observed and the test chemical considered as clearly positive.
raspon i distribuciju prijašnjih negativnih kontrola (netretirane kulture, kontrole s otapalom).
Cells with structural chromosomal aberration(s) including and excluding gaps should be scored.
Pri prvom prikupljanju podataka za distribuciju prijašnjih negativnih kontrola istodobne negativne kontrole trebale bi biti u skladu s objavljenim podacima o kontrolama, ako oni postoje.
Breaks and gaps are defined in Appendix 1 according to (45) (46).
Nakon što se distribuciji kontrola doda još podataka o pokusima, istodobne negativne kontrole trebale bi u idealnim okolnostima biti unutar kontrolnih granica od 95 % te distribucije (44. i 47.).
Chromatid- and chromosome-type aberrations should be recorded separately and classified by sub-types (breaks, exchanges).
Baza podataka o prijašnjim negativnim kontrolama laboratorija trebala bi u početku obuhvaćati najmanje deset pokusa, međutim bilo bi poželjno da se sastoji od najmanje 20 pokusa provedenih u usporedivim pokusnim uvjetima.
Procedures in use in the laboratory should ensure that analysis of chromosomal aberrations is performed by well-trained scorers and peer-reviewed if appropriate.
Laboratoriji bi trebali primjenjivati metode za kontrolu kvalitete, kao što su kontrolni dijagrami (npr.
Although the purpose of the test is to detect structural chromosomal aberrations, it is important to record polyploidy and endoreduplication frequencies when these events are seen.
C-dijagrami ili X-stupčasti dijagrami 48.), kako bi utvrdili koliko su promjenjivi njihovi podaci o pozitivnim i negativnim kontrolama i dokazali da je u njihovom laboratoriju metodologija ‚pod kontrolom’ (44.).
(See paragraph 2).
Daljnje preporuke o tome kako uspostaviti i upotrebljavati ranije podatke (npr. kriterije za uključivanje podataka u ranije podatke i za isključivanje iz njih i kriterije prihvatljivosti za određeni pokus) nalaze se u literaturi (47.).
Proficiency of the laboratory
Svaku izmjenu pokusnog protokola trebalo bi razmotriti s obzirom na to je li u skladu s postojećim bazama podataka laboratorija o prijašnjim kontrolama.
In order to establish sufficient experience with the test prior to using it for routine testing, the laboratory should have performed a series of experiments with reference positive chemicals acting via different mechanisms and various negative controls (using various solvents/vehicle).
Svaka veća nesukladnost trebala bi dovesti do uspostave nove baze podataka o prijašnjim kontrolama.
These positive and negative control responses should be consistent with the literature.
Podaci o negativnim kontrolama trebali bi se sastojati od podataka o pojavnosti stanica s kromosomskim aberacijama iz jedne kulture ili zbroja ponovljenih kultura kako je opisano u stavku 21.
This is not applicable to laboratories that have experience, i.e. that have an historical data base available as defined in paragraph 37.
Istodobne negativne kontrole trebale bi u idealnim okolnostima biti unutar kontrolnih granica od 95 % za distribuciju baze podataka laboratorija o prijašnjim negativnim kontrolama (44. i 47.).
A selection of positive control chemicals (see Table 1 in paragraph 26) should be investigated with short and long treatments in the absence of metabolic activation, and also with short treatment in the presence of metabolic activation, in order to demonstrate proficiency to detect clastogenic chemicals and determine the effectiveness of the metabolic activation system.
Ako su podaci o istodobnim negativnim kontrolama izvan kontrolnih granica od 95 %, njihovo je uključivanje u distribuciju prijašnjih kontrola prihvatljivo sve dok ti podaci nisu ekstremne netipične vrijednosti i ako postoje dokazi o tome da je sustav ispitivanja ‚pod kontrolom’ (vidjeti stavak 37.) i dokazi o nepostojanju tehničke ili ljudske pogreške.
A range of concentrations of the selected chemicals should be chosen so as to give reproducible and concentration-related increases above the background in order to demonstrate the sensitivity and dynamic range of the test system.
PREDSTAVLJANJE REZULTATA
Historical control data
Trebalo bi ocijeniti postotak stanica sa strukturnim kromosomskim aberacijama.
The laboratory should establish:
Aberacije kromatidnog i kromosomskog tipa, klasificirane prema podtipovima (lomovi, zamjene), trebalo bi navesti odvojeno s njihovim brojem i učestalošću za pokusne i kontrolne kulture.
A historical positive control range and distribution,
Kromosomski prekidi bilježe se i navode u izvješću odvojeno, ali se ne uključuju u ukupnu učestalost aberacija.
A historical negative (untreated, solvent) control range and distribution.
Postotak poliploidnih i/ili endoredupliciranih stanica bilježi se ako su zapažene takve stanice.
When first acquiring data for an historical negative control distribution, concurrent negative controls should be consistent with published control data, where they exist.
Trebalo bi zabilježiti i rezultate istodobnog mjerenja citotoksičnosti za sve tretirane, negativne i pozitivne kontrolne kulture u glavnim pokusima za dokazivanje aberacija.
As more experimental data are added to the control distribution, concurrent negative controls should ideally be within the 95 % control limits of that distribution (44) (47).
Potrebno je navesti podatke o pojedinačnim kulturama.
The laboratory's historical negative control database should initially be built with a minimum of 10 experiments but would preferably consist of at least 20 experiments conducted under comparable experimental conditions.
Osim toga, sve je podatke potrebno sažeto prikazati u obliku tablice.
Laboratories should use quality control methods, such as control charts (e.g. C-charts or X-bar charts (48)), to identify how variable their positive and negative control data are, and to show that the methodology is ‘under control’ in their laboratory (44).
Kriteriji prihvatljivosti
Further recommendations on how to build and use the historical data (i.e. criteria for inclusion and exclusion of data in historical data and the acceptability criteria for a given experiment) can be found in the literature (47).
Prihvatljivost ispitivanja temelji se na sljedećim kriterijima:
Any changes to the experimental protocol should be considered in terms of their consistency with the laboratory's existing historical control databases.
smatra se da je istodobnu negativnu kontrolu prihvatljivo dodati u bazu podataka o prijašnjim negativnim kontrolama laboratorija kako je opisano u stavku 39.,
Any major inconsistencies should result in the establishment of a new historical control database.
istodobnim pozitivnim kontrolama (vidjeti stavak 26.) trebalo bi izazvati odgovore koji su u skladu s onima generiranima u bazi povijesnih podataka o prijašnjim pozitivnim kontrolama i dovesti do statistički značajnog povećanja u odnosu na istodobnu negativnu kontrolu,
Negative control data should consist of the incidence of cells with chromosome aberrations from a single culture or the sum of replicate cultures as described in paragraph 21.
trebalo bi ispuniti kriterije proliferacije stanica u kontroli s otapalom (stavci 17. i 18.),
Concurrent negative controls should ideally be within the 95 % control limits of the distribution of the laboratory's historical negative control database (44) (47).
ispitana su sva tri pokusna uvjeta, osim ako je jedan za posljedicu imao pozitivne rezultate (vidjeti stavak 28.),
Where concurrent negative control data fall outside the 95 % control limits they may be acceptable for inclusion in the historical control distribution as long as these data are not extreme outliers and there is evidence that the test system is ‘under control’ (see paragraph 37) and evidence of absence of technical or human failure.
odgovarajući broj stanica i koncentracija prikladan je za analizu (stavci 31. i 21.),
Presentation of the results
kriteriji za odabir najviše koncentracije u skladu su s kriterijima opisanima u stavcima 22., 23. i 24.
The percentage of cells with structural chromosomal aberration(s) should be evaluated.
Ocjenjivanje i tumačenje rezultata
Chromatid- and chromosome-type aberrations classified by sub-types (breaks, exchanges) should be listed separately with their numbers and frequencies for experimental and control cultures.
Pod uvjetom da su ispunjeni svi kriteriji prihvatljivosti, ispitivana kemikalija smatra se jasno pozitivnom ako je u bilo kojem od ispitanih pokusnih uvjeta (vidjeti stavak 28.):
Gaps are recorded and reported separately but not included in the total aberration frequency.
najmanje pri jednoj ispitnoj koncentraciji zapaženo statistički značajno povećanje u odnosu na istodobnu negativnu kontrolu;
Percentage of polyploidy and/or endoreduplicated cells are reported when seen.
b. odgovarajući test trenda pokazuje da je povećanje povezano s dozom;
Concurrent measures of cytotoxicity for all treated, negative and positive control cultures in the main aberration experiment(s) should be recorded.
bilo koji od rezultata nije uključen u distribuciju podataka o prijašnjim negativnim kontrolama (npr. kontrolnih granica od 95 % prema Poissonovoj distribuciji; vidjeti stavak 39.).
Individual culture data should be provided.
Kada su ispunjeni svi ti uvjeti, smatra se da ispitivana kemikalija može izazvati kromosomske aberacije u uzgojenim stanicama sisavaca u tom sustavu ispitivanja.
Additionally, all data should be summarised in tabular form.
Preporuke za najprikladnije statističke metode nalaze se u literaturi (49., 50. i 51.).
Acceptability Criteria
Pod uvjetom da su ispunjeni svi kriteriji prihvatljivosti, ispitivana kemikalija smatra se jasno negativnom ako u svim ispitanim pokusnim uvjetima (vidjeti stavak 28.):
Acceptance of a test is based on the following criteria:
a. ni pri jednoj ispitnoj koncentraciji nije zapaženo statistički znatno povećanje u odnosu na istodobnu negativnu kontrolu,
The concurrent negative control is considered acceptable for addition to the laboratory historical negative control database as described in paragraph 39.
nema povećanja povezanog s koncentracijom pri ocjenjivanju prikladnim testom trenda,
Concurrent positive controls (see paragraph 26) should induce responses that are compatible with those generated in the historical positive control data base and produce a statistically significant increase compared with the concurrent negative control.
svi su rezultati u okviru distribucije podataka o prijašnjim negativnim kontrolama (npr. kontrolnih granica od 95 % prema Poissonovoj distribuciji; vidjeti stavak 39.).
Cell proliferation criteria in the solvent control should be fulfilled (paragraphs 17 and 18).
Tada se smatra da ispitivana kemikalija ne može izazvati kromosomske aberacije u uzgojenim stanicama sisavaca u tom sustavu ispitivanja.
All three experimental conditions were tested unless one resulted in positive results (see paragraph 28).
Jasno pozitivan ili negativan odgovor nije potrebno provjeravati.
Adequate number of cells and concentrations are analysable (paragraphs 31 and 21).
Ako odgovor nije ni jasno pozitivan ni jasno negativan kako je opisano gore ili kako bi se pridonijelo utvrđivanju biološke relevantnosti rezultata, podatke bi trebalo ocjenjivati na temelju stručne prosudbe i/ili daljnjih istraživanja.
The criteria for the selection of top concentration are consistent with those described in paragraphs 22, 23 and 24.
Vrednovanje dodatnih stanica (ako je to prikladno) ili ponavljanje pokusa uz moguću primjenu izmijenjenih pokusnih uvjeta (npr. rasporeda koncentracija, ostalih uvjeta metaboličke aktivacije (npr.
Evaluation and interpretation of results
S9 koncentracije ili S9 podrijetla)) mogu biti korisni.
Providing that all acceptability criteria are fulfilled, a test chemical is considered to be clearly positive if, in any of the experimental conditions examined (see paragraph 28):
U rijetkim slučajevima, čak i nakon daljnjih istraživanja, neće biti moguće na temelju dobivenih podataka donijeti zaključak o pozitivnim ili negativnim rezultatima, te će se stoga zaključiti da je odgovor na ispitivanu kemikaliju dvosmislen.
at least one of the test concentrations exhibits a statistically significant increase compared with the concurrent negative control,
Povećanje broja poliploidnih stanica može značiti da ispitivana kemikalija može inhibirati mitotske procese i izazvati numeričke kromosomske aberacije (52.).