natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Detection of cow's milk and caseinate in cheeses made from ewe's milk, goat's milk, buffalo milk or mixtures of ewe's, goat's and buffalo milk by isoelectric focusing of γ-caseins after plasminolysis.
Detekcija kravljeg mlijeka i kazeinata u sirevima od ovčjeg, kozjeg ili bivoljeg mlijeka ili od mješavina ovčjeg, kozjeg i bivoljeg mlijeka izoelektričnim fokusiranjem γ-kazeina nakon plazminolize.
The method is suitable for sensitive and specific detection of native and heat-treated cow's milk and caseinate in fresh and ripened cheeses made from ewe's milk, goat's milk, buffalo milk or mixtures of ewe's, goat's and buffalo milk.
Metoda je prikladna za osjetljivu i specifičnu detekciju sirovog i toplinski obrađenog kravljeg mlijeka i kazeinata u svježim ili zrelim sirevima od ovčjeg, kozjeg i bivoljeg mlijeka, ili od mješavina ovčjeg, kozjeg i bivoljeg mlijeka.
It is not suitable for the detection of milk and cheese adulteration by heat-treated bovine whey protein concentrates.
Nije primjerena za otkrivanje patvorenja mlijeka i sira toplinski obrađenim koncentratima bjelančevina sirutke od kravljeg mlijeka.
Isolation of caseins from cheese and the reference standards
Izolacija kazeina iz sira i referentni standardi
Dissolving of the isolated caseins and submitting to plasmin (EC.3.4.21.7) cleavage
Otapanje izoliranih kazeina i njihovo podvrgavanje plazminskom cijepanju (EC.3.4.21.7)
Isoelectric focusing of plasmin-treated caseins in the presence of urea and staining of proteins
Izoelektrično fokusiranje plazminski obrađenih kazeina u prisutnosti ureje i bojenje bjelančevina
Evaluation of stained γ3 and γ2 -casein patterns (evidence of cow's milk) by comparison of the pattern obtained from the sample with those obtained in the same gel from the reference standards containing 0 % and 1 % cow's milk.
Ocjenjivanje obojenih obrazaca γ3- i γ2-kazeina (dokaz kravljeg mlijeka) na temelju usporedbe obrasca dobivenog iz uzorka s obrascima dobivenim u istom gelu iz referentnih standarda koji sadržavaju 0 % i 1 % kravljeg mlijeka
Unless otherwise indicated, analytical grade chemicals shall be used.
Ako nije navedeno drukčije, moraju se upotrebljavati kemikalije analitičke čistoće.
Water shall be double-distilled or of equivalent purity.
Voda mora biti dvostruko destilirana ili jednake čistoće.
Note: The following details apply to laboratory prepared polyacrylamide gels containing urea, of dimensions 265 × 125 × 0,25 mm.
Napomena: Sljedeći detalji odnose se na laboratorijski pripravljene poliakrilamidne gelove koji sadržavaju ureju, dimenzija 265 × 125 × 0,25 mm.
Where other sizes and types of gel are used, the separation conditions may have to be adjusted.
U slučajevima kad se upotrebljavaju druge veličine i vrste gelova, možda treba podesiti uvjete razdvajanja.
Isoelectric focusing
Izoelektrično fokusiranje
Reagents for production of the urea containing polyacrylamide gels
Reagensi za proizvodnju poliakrilamidnih gelova koji sadržavaju ureju
Stock gel solution
Osnovna otopina gela
Dissolve:
Otopite:
4,85 g acrylamide
4,85 g akrilamida,
0,15 g N, N′-methylene-bis-acrylamide (BIS)
0,15 g N, N′-metilen-bis-akrilamida (BIS),
48,05 g urea
48,05 g ureje,
15,00 g glycerol (87 % w/w),
15,00 g glicerola (87 % w/w)
in water and make up to 100 ml and store in a brown glass bottle in the refrigerator.
u vodi, dopunite do 100 ml i pohranite u smeđoj staklenoj bočici u hladnjak.
Note: A commercially available pre-blended acrylamide/BIS solution may be used in preference to the quoted fixed weights of the neurotoxic acrylamides.
Napomena: Umjesto navedenih fiksnih masa neurotoksičnih akrilamida može se upotrijebiti gotova mješavina otopina akrilamida/BIS-a, koja je dostupna na tržištu.
Where such a solution contains 30 % w/v acrylamide and 0,8 % w/v BIS, a volume of 16,2 ml shall be used for the formulation instead of the fixed weights.
Ako takva otopina sadržava 30 % w/v akrilamida i 0,8 % w/v BIS-a, umjesto navedenih fiksnih masa za pripravak upotrebljava se količina od 16,2 ml.
The shelf life of the stock solution is a maximum of 10 days; if its conductivity is more than 5 μS, de-ionize by stirring with 2 g Amberlite MB-3 for 30 minutes, then filter through a 0,45 μm membrane.
Rok valjanosti osnovne otopine je najviše 10 dana; ako je njena vodljivost veća od 5 μS, otopinu treba deionizirati miješajući je 30 minuta s 2 g Amberlita MB-3 i potom profiltrirati kroz membranu od 0,45 μm.
Gel solution
Otopina gela
Prepare a gel solution by mixing additives and ampholytes (*) with the stock gel solution (see 4.1.1).
Pripremite otopinu gela miješanjem aditiva i amfolita (*) s osnovnom otopinom gela (vidjeti 4.1.1.).
9,0 ml stock solution
9,0 ml osnovne otopine
24 mg β-alanine
24 mg β-alanina
500 μl ampholyte pH 3,5-9,5
500 μl amfolita pH 3,5-9,5
250 μl ampholyte pH 5-7
250 μl amfolita pH 5-7
250 μl ampholyte pH 6-8
250 μl amfolita pH 6-8
Mix the gel solution and de-gas for two to three minutes in an ultrasonic bath or in vacuum.
Otopinu gela pomiješajte i otplinjavajte dvije do tri minute u ultrazvučnoj kupelji ili vakuumu.
Note: Prepare the gel solution immediately prior to pouring it (see 6.2).
Napomena: Otopinu gela pripremite neposredno prije uporabe (vidjeti 6.2.).
Catalyst solutions
Otopine katalizatora
N, N, N′ N′ — tetramethylethylenediamine (Temed)
N, N, N′ N′ – tetrametiletilendiamin (Temed).
40 % w/v ammonium persulphate (PER):
40 % w/v amonijev persulfat (PER):
Dissolve 800 mg PER in water and make up to 2 ml.
Otopite 800 mg PER-a u vodi i dopunite do 2 ml.
Note: Always use freshly prepared PER solution.
Napomena: Uvijek upotrebljavajte svježe pripremljenu otopinu PER-a.
Contact fluid
Kontaktna tekućina
Kerosene or liquid paraffin
Kerozin ili tekući parafin
Anode solution
Anodna otopina
Dissolve 5,77 g phosphoric acid (85 % w/w) in water and dilute to 100 ml.
Otopite 5,77 g fosforne kiseline (85 % w/w) u vodi i razrijedite do 100 ml.
Cathode solution
Katodna otopina
Dissolve 2,00 g sodium hydroxide in water and dilute to 100 ml with water.
Otopite 2,00 g natrijeva hidroksida u vodi i razrijedite vodom do 100 ml.
Sample preparation
Priprema uzorka
Reagents for protein isolation
Reagensi za izolaciju bjelančevina
Dilute acetic acid (25,0 ml of glacial acetic acid made up to 100 ml with water)
Razrijeđena octena kiselina (25,0 ml ledene octene kiseline razrijedite vodom do 100 ml)
Protein dissolving buffer
Pufer za rastapanje bjelančevina
Dissolve
Otopite:
5,75 g glycerol (87 % w/w)
5,75 g glicerola (87 % w/w),
24,03 g urea
24,03 g ureje,
250 mg dithiothreitol,
250 mg ditiotreitola
in water and make up to 50 ml
u vodi i nadopunite do 50 ml.
Note: Store in a refrigerator, maximum shelf-life one week.
Napomena: Spremite pufer u hladnjak; maksimalni rok trajanja jest tjedan dana.
Reagents for plasmin cleavage of caseins
Reagensi za plazminsko cijepanje kazeina
Ammonium carbonate buffer
Pufer amonijeva karbonata
Titrate a 0,2 mol/l ammonium hydrogencarbonate solution (1,58 g/100 ml water) containing 0,05 mol/l ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA, 1,46 g/100 ml with a 0,2 mol/l ammonium carbonate solution (1,92 g/100 ml water) containing 0,05 mol/l EDTA to pH 8.
Titrirajte 0,2 mol/l otopine amonijeva hidrogen-karbonata (1,58 g/100 ml vode), koja sadržava 0,05 mol/l etilen-diamin-tetraoctene kiseline (EDTA, 1,46 g/100 ml), s 0,2 mol/l otopine amonijeva karbonata (1,92 g/100 ml vode), koja sadržava 0,05 mol/l kiseline EDTA do pH 8.
Bovine plasmin (EC. 3.4.21.7), activity at least 5 U/ml
Plazmin kravljeg mlijeka (EC. 3.4.21.7), aktivnosti najmanje 5 U/ml
ε-Aminocaproic acid solution for enzyme inhibition
Otopina ε-aminokapronske kiseline za inhibiranje enzima
Dissolve 2,624 g ε-aminocaproic acid (6 amino-n-hexanoic acid) in 100 ml of 40 % (v/v) ethanol.
Otopite 2,624 g ε-aminokapronske kiseline (6-amino-n-heksanske kiseline) u 100 ml 40 %-tnog (v/v) etanola.
Certified reference standards of a mixture of renneted ewe's and goat's skimmed milk containing 0 % and 1 % of cow's milk are available from the Commission's Institute for Reference Materials and Measurements, B-2440 Geel, Belgium
Potvrđeni referentni standardi za mješavinu usirenog obranog ovčjeg i kozjeg mlijeka koja sadržava 0 % i 1 % kravljeg mlijeka dostupni su na Institutu Komisije za referentne materijale i mjerenja, B-2440, Geel, Belgija.
Preparation of laboratory interim-standards of buffalo's renneted milk containing 0 % and 1 % of cow's milk
Priprema privremenih laboratorijskih standarda za usireno bivolje mlijeko koje sadržava 0 % i 1 % kravljeg mlijeka.
Skimmed milk is prepared by centrifuging of either buffalo or bovine raw bulk milk at 37 °C at 2500 g for 20 minutes.
Obrano se mlijeko priprema centrifugiranjem 2500 g bivoljeg ili kravljeg sirovog mlijeka na temperaturi od 37 °C u trajanju od 20 minuta.
After cooling the tube and contents rapidly to 6 to 8 °C, the upper fat layer is removed completely.
Nakon brzog hlađenja epruvete i sadržaja na 6 do 8 °C, potpuno uklonite gornji sloj masti.
For the preparation of the 1 % standard add 5,00 ml of bovine skimmed milk to a 495 ml of buffalo's skimmed milk in a 1 l beaker, adjust the pH to 6,4 by the addition of dilute lactic acid (10 % w/v).
Za pripremu standarda od 1 % dodajte 5,00 ml obranog kravljeg mlijeka u 495 ml obranog bivoljeg mlijeka u laboratorijskoj čaši od 1 l, podesite pH na 6,4 dodavanjem razrijeđene mliječne kiseline (10 % w/v).
Adjust the temperature to 35 °C and add 100 μl of calf rennet (rennet activity 1: 10000, c. 3000 U/ml), stir for 1 minute and then leave the beaker covered with an aluminium foil at 35 °C for one hour to allow formation of the curd.
Podesite temperaturu na 35 °C i dodajte 100 μl telećeg sirila (aktivnost sirila 1: 10000, oko 3000 U/ml), miješajte 1 minutu i potom ostavite posudu pokrivenu aluminijskom pločom jedan sat na temperaturi od 35 °C da bi se mogao formirati gruš.
After the curd has formed, the whole renneted milk is freeze-dried without prior homogenization or draining of the whey.
Nakon formiranja gruša, cijelo usireno mlijeko liofilizira se bez prethodne homogenizacije ili cijeđenja sirutke.
After freeze-drying it is finely ground to produce a homogeneous powder.
Nakon liofilizacije, sitno ga sameljite da biste dobili homogeni prah.
For the preparation of the 0 % standard, carry out the same procedure using genuine buffalo skimmed milk.
Za pripremu standarda od 0 % provodi se isti postupak uz uporabu isključivo obranog bivoljeg mlijeka.
The standards shall be stored at – 20 °C.
Standardi se čuvaju na temperaturi od – 20 °C.
Note: It is advisable to check the purity of the buffalo milk by isoelectric focusing of the plasmin-treated caseins before preparation of the standards.
Napomena: Prije pripreme standarda preporuča se provjeriti čistoću bivoljeg mlijeka metodom izoelektričnog fokusiranja kazeina razgrađenih djelovanjem plazmina.
Reagents for protein staining
Reagensi za bojenje bjelančevina
Fixative
Fiksator
Dissolve 150 g trichloroacetic acid in water and make up to 1000 ml.
Otopite 150 g triklorooctene kiseline u vodi i dopunite do 1000 ml.
Destaining solution
Otopina za odbojavanje
Dilute 500 ml methanol and 200 ml glacial acetic acid to 2000 ml with distilled water.
Razrijedite 500 ml metanola i 200 ml ledene octene kiseline destiliranom vodom do količine od 2000 ml.
Note: Prepare the destaining solution fresh every day; it can be prepared by mixing equal volumes of stock solutions of 50 % (v/v) methanol and 20 % (v/v) glacial acetic acid.
Napomena: Svaki dan pripremite svježu otopinu za odbojavanje; možete je pripremiti miješanjem jednakih količina osnovnih otopina 50 %-tnog (v/v) metanola i 20 %-tne (v/v) ledene octene kiseline.
Staining solutions
Otopine za bojenje
Staining solution (stock solution 1)
Otopina za bojenje (osnovna otopina 1)
Dissolve 3,0 g Coomassie Brilliant Blue G-250 (C.I. 42655) in 1000 ml 90 % (v/v) methanol using a magnetic stirrer (approximately 45 minutes), filter through two medium-speed folded filters.
Otopite 3,0 g boje Coomassie Brilliant Blue G-250 (C.I. 42655) u 1000 ml 90 %-tnog (v/v) metanola s pomoću magnetske miješalice (oko 45 minuta), filtrirajte kroz dva naborana filtra srednje brzine.
Staining solution (stock solution 2)
Otopina za bojenje (osnovna otopina 2)
Dissolve 5,0 g copper sulphate pentahydrate in 1000 ml 20 % (v/v) acetic acid.
Otopite 5,0 g bakrenog sulfata pentahidrata u 1000 ml 20 %-tne (v/v) octene kiseline.
Staining solution (working solution)
Otopina za bojenje (radna otopina)
Mix together 125 ml of each of the stock solutions (4.11.1, 4.11.2) immediately prior to staining.
Pomiješajte po 125 ml od svake osnovne otopine (4.11.1., 4.11.2.) neposredno prije bojenja.
Note: The staining solution should be prepared on the day that it is used.
Napomena: Otopina za bojenje priprema se na dan kad se koristi.
Glass plates (265 × 125 × 4 mm); rubber roller (width 15 cm); levelling table
Staklene ploče (265 × 125 × 4 mm); gumeni valjak (širine 15 cm); stol s nagibnom radnom površinom
Gel carrier sheet (265 × 125 mm)
Noseća ploča za gel (265 × 125 mm)
Covering sheet (280 × 125 mm).
Pokrivna ploča (280 × 125 mm).
Stick on strip of adhesive tape (280 × 6 × 0,25 mm) to each long edge (see Figure 1)
Na sve duge bridove (vidjeti sliku 1.) nanesite ljepljivu traku (280 × 6 × 0,25 mm).
Electrofocusing chamber with cooling plate (e.g. 265 × 125 mm) and suitable power supply (≥ 2,5 kV) or automatic electrophoresis device
Komora za elektrofokusiranje s rashladnom pločom (npr. 265 × 125 mm) i odgovarajućim električnim napajanjem (≥ 2,5 kV) ili uređajem za automatsku elektroforezu
Circulation cryostat, thermostatically controlled at 12 ± 0,5 °C
Cirkulacijski kriostat, termostatski reguliran na 12 ± 0,5 °C
Centrifuge, adjustable to 3000 g
Centrifuga, podesiva do 3000 g
Electrode strips (≥ 265 mm long)
Elektrodne trake (duljine ≥ 265 mm)
Plastic dropping bottles for the anode and cathode solutions
Plastične boce s kapaljkom za anodnu i katodnu otopinu
Sample applicators (10 × 5 mm, viscose or low protein-adsorption filter paper)
Aplikatori za uzorke (10 × 5 mm, od viskoze ili od filtar-papira koji slabo adsorbira bjelančevine)
Stainless steel or glass staining and destaining dishes (e.g. 280 × 150 mm instrument trays)
Posude za bojenje i odbojavanje od nehrđajućeg čelika ili stakla (npr. plitice za instrumente dimenzija 280 × 150 mm)
Adjustable rod homogenizer (10 mm shaft diameter), rpm range 8000 to 20000
Podesivi štapni homogenizator (promjera osovine 10 mm), raspona brzine od 8000 do 20000 o/min
Film welder
Uređaj za zavarivanje ploče
25 μl micropipettes
Mikropipete od 25 μl.
Vacuum concentrator or freeze-dryer
Vakuumski koncentrator ili liofilizator
Thermostatically controlled water bath adjustable to 35 and 40 ± 1 °C with shaker
Vodena kupelj, termostatski regulirana između 35 i 40 ± 1 °C s vibracijskom miješalicom
Densitometer equipment reading at λ = 634 nm
Denzitometar za očitavanje na valnoj duljini λ = 634 nm
Isolation of caseins
Izolacija kazeina
Weigh the amount equivalent to 5 g dry mass of cheese or the reference standards into a 100 ml centrifuge tube, add 60 ml distilled water and homogenize with a rod homogenizer (8000 to 10000 rpm).
Odvagnite količinu koja je ekvivalent 5 g suhe mase sira ili referentnih standarda u epruvetu za centrifugiranje od 100 ml, dodajte 60 ml destilirane vode i homogenizirajte štapnim homogenizatorom (8000 do 10000 o/min).
Adjust to pH 4,6 with dil. acetic acid (4.5.1) and centrifuge (5 minutes, 3000 g).
Podesite pH na 4,6 pomoću razrijeđene octene kiseline (4.5.1.) i centrifugirajte (5 minuta, 3000 g).
Decant the fat and whey, homogenize the residue at 20000 rpm in 40 ml distilled water adjusted to pH 4,5 with dil. acetic acid (4.5.1), add 20 ml dichloromethane (4.5.2), homogenize again and centrifuge (5 minutes, 3000 g).
Dekantirajte mast i sirutku, ostatak homogenizirajte na 20000 o/min u 40 ml destilirane vode čija je pH vrijednost od 4,5 podešena pomoću razrijeđene octene kiseline (4.5.1.); dodajte 20 ml diklorometana (4.5.2.), ponovno homogenizirajte i centrifugirajte (5 minuta, 3000 g).
Remove the casein layer that lies between the aqueous and organic phases (see Figure 2) with a spatula and decant off both phases.
Špatulom uklonite sloj kazeina koji se nalazi između vodene i organske faze (vidjeti sliku 2.) i dekantirajte obje faze.
Rehomogenise the casein in 40 ml distilled water (see above) and 20 ml dichloromethane (4.5.2) and centrifuge.
Kazein ponovo homogenizirajte u 40 ml destilirane vode (vidjeti gore) i 20 ml diklorometana (4.5.2.) i centrifugirajte.
Repeat this procedure until both extraction phases are colourless (two to three times).
Ponavljajte postupak sve dok obje faze ekstrakcije ne postanu bezbojne (dva do tri puta).
Homogenize the protein residue with 50 ml acetone (4.5.3) and filter through a medium-speed folded filter paper.
Ostatak bjelančevina homogenizirajte pomoću 50 ml acetona (4.5.3.) i filtrirajte kroz naborani filtar-papir srednje brzine filtracije.
Wash the residue on the filter with two separate 25 ml portions of acetone each time and allow to dry in the air or a stream of nitrogen, then pulverize finely in a mortar.
Ostatak na filtru isperite dva puta, svaki put upotrebljavajući po 25 ml acetona, ostavite da se osuši na zraku ili u struji dušika te fino usitnite u tarioniku.
Note: Dry casein isolates should be kept at –20 °C.
Napomena: Suhe izolate kazeina treba držati na temperaturi od – 20 °C.
Plasmin cleavage of β-caseins to intensify γ-caseins
Plazminsko cijepanje β-kazeina radi intenzifikacije γ-kazeina
Disperse 25 mg of isolated caseins (6.1.1) in 0,5 ml ammonium carbonate buffer (4.7.1) and homogenize for 20 minutes by e.g. using ultrasonic treatment.
Disperzirajte 25 mg izoliranih kazeina (6.1.1.) u 0,5 ml puferske otopine amonijeva karbonata (4.7.1.) i homogenizirajte 20 minuta, npr. ultrazvučnim postupkom.
Heat to 40 °C and add 10 μl plasmin (4.7.2), mix and incubate for one hour at 40 °C with continuous shaking.
Zagrijte do 40 °C i dodajte 10 μl plazmina (4.7.2.), promiješajte i inkubirajte jedan sat na 40 °C uz neprestano tresenje.
To inhibit the enzyme add 20 μl ε-aminoproic acid solution (4.7.3), then add 200 mg of solid urea and 2 mg of dithiothreitol.
Radi inhibicije enzima dodajte 20 μl otopine ε-aminokapronske kiseline (4.7.3.) te potom dodajte 200 mg ureje u krutom obliku i 2 mg ditiotreitola.
Note: To obtain more symmetry in the focused casein bands it is advisable to freeze-dry the solution after adding the ε-aminocaproic acid and then dissolving the residues in 0,5 ml protein dissolving buffer (4.6).
Napomena: Radi postizanja veće simetrije fokusiranih kazeinskih vrpci, preporučuje se liofiliziranje otopine nakon dodavanja ε-aminokapronske kiseline i potom otapanje ostatka u 0,5 ml pufera za otapanje bjelančevina (4.6.).
Preparation of the urea containing polyacrylamide gels
Priprema poliakrilamidnih gelova koji sadržavaju ureju
With the aid of a few drops of water roll the gel carrier sheet (5.2) onto a glass plate (5.1), removing any extraneous water with paper towel or tissue.
S pomoću nekoliko kapi vode i valjka noseću ploču za gel (5.2.) stavite na staklenu ploču (5.1.), a višak vode uklonite papirnatim ubrusom ili ručnikom.
Roll the cover sheet (5.3) with spacers (0,25 mm) onto another glass plate in the same way.
Na isti način pokrivnu ploču (5.3.) s odstojnicima (0,25 mm) stavite na drugu staklenu ploču.
Lay the plate horizontally on a levelling table.
Položite ploču vodoravno na stol s nagibnom radnom površinom.
Add 10 μl Temed (4.1.3.1) to the prepared and de-aerated gel solution (4.1.2), stir and add 10 μl PER-solution (4.1.3.2), mix thoroughly and immediately pour out evenly onto the centre of the cover sheet.
Dodajte 10 μl Temeda (4.1.3.1.) u pripremljenu i deaeriranu otopinu gela (4.1.2.), promiješajte i dodajte 10 μl otopine PER (4.1.3.2.), dobro izmiješajte i jednakomjerno razlijte po sredini pokrivne ploče.
Place one edge of the gel carrier plate (sheet side down) on the cover sheet plate and lower it slowly so that a gel film forms between the sheets and spreads out regularly and free of bubbles (Figure 3).
Stavite jedan rub noseće ploče za gel (ploča okrenuta prema dolje) na pokrivnu ploču i preostali dio polagano spuštajte tako da se između dvije plohe stvori tanki sloj gela koji će se jednakomjerno raširiti bez stvaranja mjehurića (slika 3.).
Carefully lower the gel carrier plate completely using a thin spatula and place three more glass plates on top of it to act as weights.
Pažljivo spustite noseću ploču do kraja, koristeći se pritom tankom špatulom, i na nju položite još tri staklene ploče koje će poslužiti kao utezi.
After polymerization is complete (about 60 minutes) remove the gel polymerized onto the gel carrier sheet along with the cover sheet by tipping the glass plates.
Po završetku polimerizacije (oko 60 minuta), gel koji se polimerizirao na nosećoj ploči maknite zajedno s pokrivnom pločom, laganim nakretanjem staklenih ploča.
Clean the reverse of the carrier sheet carefully to remove gel residues and urea.
Pažljivo očistite naličje noseće ploče da biste uklonili ostatake gela i ureje.
Weld the gel sandwich into a film tube and store in a refrigerator (maximum six weeks).
Zatvorite „gel-sendvič” u cjevastu foliju i pohranite u hladnjak (najviše šest tjedana).
Note: The cover sheet with the spacers can be re-used.
Napomena: Pokrivna ploča s odstojnicima može se ponovo upotrebljavati.
The polyacrylamide gel can be cut to smaller sizes, recommended when there are few samples or if an automatic electrophoresis device is used (two gels, size 4,5 × 5 cm).
Poliakrilamidni gel može se razrezati na manje dijelove, što se preporučuje u slučaju manjeg broja uzoraka ili ako se upotrebljava uređaj za automatsku elektroforezu (dva gela, dimenzija 4,5 × 5 cm).
lsoelectric focusing
Izoelektrično fokusiranje
Set the cooling thermostat to 12 °C.
Termostat za hlađenje podesite na 12 °C.
Wipe off the reverse of the gel carrier sheet with kerosene, then drip a few drops of kerosene (4.2) onto the centre of the cooling block.
Kerozinom očistite stražnju stranu noseće ploče za gel i potom dodajte nekoliko kapljica kerozina (4.2.) u sredinu rashladnog bloka.
Then roll the gel sandwich, carrier side down, onto it, taking care to avoid bubbles.
Zatim na njega stavite gel-sendvič s nosećom stranom okrenutom prema dolje i povaljajte ga valjkom, pazeći da se pritom ne stvaraju mjehurići.
Wipe off any excess kerosene and remove the cover sheet.
Obrišite višak kerozina i skinite pokrivnu ploču.
Soak the electrode strips with the electrode solutions (4.3, 4.4), cut to gel length and place in the positions provided (distance of electrodes 9,5 cm).
Elektrodne trake natopite elektrodnim otopinama (4.3., 4.4.), izrežite ih prema duljini gela i položite na predviđena mjesta (razmak između elektroda 9,5 cm).
Conditions for isoelectric focusing:
Uvjeti za izoelektrično fokusiranje:
Gel size 265 × 125 × 0,25 mm
Veličina gela 265 × 125 × 0,25 mm
Step
Faza
Current
Jakost
Volt-hours
Volt-sati
Pre-focusing
Predfokusiranje
maximum
maksimalna
constant 4
konstantna 4
Sample focusing
Fokusiranje uzorka
Final focusing
Konačno fokusiranje
Note: If thickness or width of the gels are changed, the values for current and power have to be suitably adjusted (e.g. double the values for electric current and power if a 265 × 125 × 0,5 mm gel is used).
Napomena: Ako se promijeni debljina ili širina gela, vrijednosti za jakost i snagu treba podesiti u skladu s promjenom (npr. udvostručiti vrijednosti jakosti i snage ako se upotrebljava gel dimenzija 265 × 125 × 0,5 mm).
Example of a voltage programme for an automatic electrophoresis device (2 gels of 5,0 × 4,5 cm), electrodes without strips applied directly to the gel
Primjer naponskog režima za uređaj za automatsku elektroforezu (2 gela dimenzija 5,0 × 4,5 cm); elektrode bez traka nanesene izravno na gel
Focusing
Fokusiranje
Place sample applicator in step 2 at 0 Vh.
Postavite aplikator za uzorak u fazi 2. pri 0 Vh.
Remove sample applicator in step 2 at 30 Vh.
Uklonite aplikator za uzorak u fazi 2. pri 30 Vh.
Protein staining
Bojenje bjelančevina
Protein fixation
Fiksacija bjelančevina