“If starting from field collected, non-sterile plants, collect M. sibiricum turions in the autumn. Place the turions into a 20-l aquarium containing 5 cm of sterile sediment that is covered with silica sand or for example by Turface® and 18 l of reagent water. Aerate the aquarium and maintain at a temperature of 15 °C and a fluence rate of 200 to 300 μmol m– 2 s– 1 for 16 h per day. The plant culture in the aquarium may be maintained as a backup source of plants in case the sterile plant cultures are destroyed by mechanical malfunction in the growth cabinet, contamination, or other reason. The plants grown in the aquarium are not sterile and sterile cultures cannot be maintained in a batch culturing system. To sterilize the culture, plants are removed from the aquarium and rinsed under flowing deionized water for about 0,5 h. Under aseptic conditions in a laminar airflow cabinet, the plants are disinfected for less than 20 min (until most of the plant tissue is bleached and just the growing apex is still green) in a 3 % (w/v) sodium hypochlorite solution containing 0,01 % of a suitable surfactant. Agitate the disinfectant and plant material. Segments with several nodes are transferred into sterile culture tubes containing 45 ml of sterilized modified Andrews' medium and capped with plain culture tube closures. Only one plant segment is placed into each test chamber. Laboratory sealant film is used to secure the closure to the culture vessel. Once a sterile culture has been established, plant segments containing several nodes should be transferred to new test chambers containing fresh liquid nutrient media every ten to twelve days. As demonstrated by culturing on agar plates, the plants must be sterile and remain sterile for eight weeks before testing can be initiated.”
‚Ako se počinje raditi s nesterilnim biljkama Myriophyllum sibiricum prikupljenima u prirodi, treba prikupljati njihove pupove (turione) u jesen. Pupove treba staviti u akvarije od 20 l koji sadržavaju 5 cm sterilnog sedimenta prekrivenog silikatnim pijeskom ili primjerice materijalom Turface® i 18 l vode odgovarajuće čistoće. Akvariji se prozračuju i drže na temperaturi od 15 °C s brzinom protoka od 200 do 300 μmol m– 2 s– 1 16 sati dnevno. Biljne kulture u akvariju mogu se držati kao rezervni izvor biljaka u slučaju da sterilne biljne kulture budu uništene zbog mehaničkih neispravnosti u odjeljku za uzgoj kulture, zbog kontaminacije, ili iz drugih razloga. Biljke koje se uzgajaju u akvariju nisu sterilne i sterilne kulture ne mogu se držati u šaržnom sustavu za uzgoj kultura. Za sterilizaciju kulture biljke se uklanjaju iz akvarija i ispiru u tekućoj deioniziranoj vodi oko pola sata. Zatim se dezinficiraju u aseptičkim uvjetima u komorama sa laminarnim protokom zraka manje od 20 minuta (dok većina biljnog tkiva ne izbijeli i samo vrh koji raste ostane zelen) u otopini s masenim udjelom natrijeva hipoklorita od 3 % i s 0,01 % odgovarajuće površinski aktivne tvari. Dezinfekcijsko sredstvo i biljni materijal se miješaju. Segmenti s više nodija prenose se u sterilne epruvete za uzgoj kultura koje sadržavaju po 45 ml steriliziranoga modificiranog Andrewsova medija i začepljene su jednostavnim čepovima za epruvete. U svaku ispitnu komoru stavlja se samo jedan biljni segment. Na posude za uzgoj kultura nanosi se laboratorijski film za brtvljenje. Kad se uspostavi sterilna kultura, biljne segmente koji sadržavaju više nodija treba prenositi u nove ispitne komore sa svježim tekućim hranjivim medijima svakih deset do dvanaest dana. Biljke moraju biti sterilne, što se dokazuje uzgojem kultura na agarnim podlogama, i ostati sterilne osam tjedana prije početka ispitivanja.’