natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Hatching rate in the negative control (and solvent control if appropriate) should be ≥ 80 % at the end of 96 hrs exposure.
stopa valjenja u negativnoj kontroli (i, prema potrebi, kontroli s otapalom) trebala bi biti ≥ 80 % nakon 96 sati izlaganja;
At the end of the 96 hrs exposure, the dissolved oxygen concentration in the negative control and highest test concentration should be ≥ 80 % of saturation.
nakon 96 sati izlaganja koncentracija otopljenog kisika u negativnoj kontroli i najviša ispitna koncentracija trebale bi biti zasićenosti ≥ 80 %.
An overview of recommended maintenance and test conditions is available in Appendix 2.
U Dodatku 2. je pregled preporučenih uvjeta držanja i ispitivanja.
The following equipment is needed:
Potrebna je sljedeća oprema:
Fish tanks made of chemically inert material (e.g. glass) and of a suitable capacity in relation to the recommended loading (see “Maintenance of brood fish”, paragraph 14);
akvariji od kemijski inertnog materijala (npr. stakla) i odgovarajuće veličine s obzirom na preporučenu količinu punjenja (vidjeti ‚Držanje uzgojnih riba’, stavak 14.);
Inverted microscope and/or binocular with a capacity of at least 80-fold magnification.
invertni mikroskop i/ili binokularni mikroskop s povećanjem od barem 80 puta.
If the room used for recording observations cannot be adjusted to 26 ± 1 °C, a temperature-controlled cross movement stage or other methods to maintain temperature are necessary;
Ako se temperatura prostorije u kojoj se bilježe zapažanja ne može prilagoditi na 26 ± 1 °C, treba upotrijebiti pokretni stolić mikroskopa s kontrolom temperature ili druge metode za održavanje potrebne temperature;
Test chambers; e.g., standard 24-well plates with a depth of approx. 20 mm. (see “Test chambers”, paragraph 11);
ispitne komore; npr. standardne ploče s 24 bunarića dubine oko 20 mm (vidjeti ‚Ispitne komore’, stavak 11.);
e.g., self-adhesive foil to cover the 24-well plates;
sredstvo kao što je samoljepljiva folija za pokrivanje ploča s 24 bunarića;
Incubator or air-conditioned room with controlled temperature, allowing to maintain 26 ± 1 °C in wells (or test chambers);
inkubator ili prostorija s kontroliranom temperaturom kako bi se u bunarićima (ili u ispitnim komorama) mogla održati temperatura od 26 ± 1 °C;
Oxygen meter;
mjerač kisika;
Equipment for determination of hardness of water and conductivity;
oprema za određivanje tvrdoće vode i vodljivosti;
Spawn trap: instrument trays of glass, stainless steel or other inert materials; wire mesh (grid size 2 ± 0,5 mm) of stainless steel or other inert material to protect the eggs once laid; spawning substrate (e.g. plant imitates of inert material) (TM C.48, Appendix 4a (23));
ladica za mrijest: pladnjevi od stakla, nehrđajućeg čelika ili nekog drugog inertnog materijala; žičana mrežica (veličine oka 2 ± 0,5 mm) od nehrđajućeg čelika ili drugog inertnog materijala za zaštitu položenih jajašaca; supstrat za mriješćenje (npr. umjetne biljke od inertnog materijala) (ispitna metoda C.48., Dodatak 4.a (23.));
Pipettes with widened openings to collect eggs;
pipete s proširenim otvorima za sakupljanje jajašaca;
Glass vessels to prepare different test concentrations and dilution water (beakers, graduated flasks, graduated cylinders and graduated pipettes) or to collect zebrafish eggs (e.g. beakers, crystallisation dishes);
staklene posude za pripremu različitih ispitnih koncentracija i vode za razrjeđivanje (čaše, graduirane tikvice, graduirani cilindri i graduirane pipete) ili za prikupljanje jajašaca zebrica (npr. laboratorijske čaše, zdjelice za kristalizaciju);
If alternative exposure systems, such as flow-through (24) or passive dosing (25) are used for the conduct of the test, appropriate facilities and equipment are needed.
ako se u ispitivanju primjenjuju alternativni sustavi izlaganja, kao što su protočno ispitivanje (24.) ili pasivno doziranje (25.), potrebni su odgovarajući prostori i oprema.
Glass or polystyrene test chambers should be used (e.g. 24-well plates with a 2,5-5 ml filling capacity per well).
Trebalo bi upotrebljavati staklene ili polistirenske ispitne komore (npr. ploče s 24 bunarića, od kojih svaki ima kapacitet punjenja 2,5 – 5 ml).
In case adsorption to polystyrene is suspected (e.g., for non-polar, planar substances with high KOW), inert materials (glass) should be used to reduce losses due to adsorption (26).
Ako se sumnja na adsorpciju na polistiren (npr. za nepolarne, planarne tvari s visokim KOW), trebalo bi upotrijebiti inertne materijale (staklo) kako bi se smanjili gubici zbog adsorpcije (26.).
Test chambers should be randomly positioned in the incubator.
Ispitne komore trebale bi biti nasumično raspoređene u inkubatoru.
Water and test conditions
Voda i ispitni uvjeti
Dilution of the maintenance water is recommended to achieve hardness levels typical of a wide variety of surface waters.
Preporučuje se da se voda za držanje razrijedi tako da se postignu razine tvrdoće koje su tipične za niz različitih površinskih voda.
Dilution water should be prepared from reconstituted water (27).
Vodu za razrjeđivanje treba pripremiti od rekonstituirane vode (27.).
The resulting degree of hardness should be equivalent to 100-300 mg/l CaCO3 in order to prevent excessive precipitation of calcium carbonate.
Dobiveni stupanj tvrdoće trebao bi biti jednak 100 – 300 mg/l CaCO3 kako bi se spriječilo prekomjerno taloženje kalcijeva karbonata.
Other well-characterised surface or well water may be used.
Mogu se upotrebljavati i druge površinske vode i izvorske vode dobro poznatih svojstava.
The reconstituted water may be adapted to maintenance water of low hardness by dilution with deionised water up to a ratio of 1:5 to a minimum hardness of 30-35 mg/l CaCO3.
Rekonstituirana voda može se prilagoditi vodi za držanje male tvrdoće razrjeđivanjem deioniziranom vodom u omjeru 1: 5 do minimalne tvrdoće od 30 – 35 mg/l CaCO3.
The water is aerated to oxygen saturation prior to addition of the test chemical.
Voda se prozračuje do zasićenja kisikom prije dodavanja ispitivane kemikalije.
If the pH is not expected to remain in this range, then pH adjustment should be done prior to initiating the test.
Ako se očekuje da pH-vrijednost neće ostati unutar tog raspona, trebalo bi je podesiti prije početka ispitivanja.
The pH adjustment should be made in such a way that the stock solution concentration is not changed to any significant extent and that no chemical reaction or precipitation of the test chemical is caused.
Podešavanje pH trebalo bi izvesti tako da ne dođe do znatne promjene koncentracije matične otopine i da se ne izazove kemijska reakcija ili taloženje ispitivane kemikalije.
Use of hydrogen chloride (HCl) and sodium hydroxide (NaOH) to correct pH in the solutions containing the test chemical is recommended.
Za podešavanje pH u otopinama koje sadržavaju ispitivanu kemikaliju preporučuje se upotrijebiti klorovodik (HCl) i natrijev hidroksid (NaOH).
Test solutions of the selected concentrations can be prepared, e.g. by dilution of a stock solution.
Ispitne otopine u određenim koncentracijama mogu se pripremiti npr. razrjeđivanjem matične otopine.
The stock solutions should preferably be prepared by simply mixing or agitating the test chemical in the dilution water by mechanical means (e.g. stirring and/or ultra-sonification).
Matične otopine trebalo bi po mogućnosti pripremiti jednostavnim miješanjem ili mućkanjem ispitivane kemikalije u vodi za razrjeđivanje mehaničkim sredstvima (npr. miješanjem i/ili tretiranjem ultrazvukom).
If the test chemical is difficult to dissolve in water, procedures described in the OECD Guidance Document No. 23 for handling difficult substances and mixtures should be followed (28).
Ako se ispitivana kemikalija teško otapa u vodi, trebalo bi primijeniti postupke opisane u OECD-ovim Smjernicama br. 23 za postupanje s analitički zahtjevnim tvarima i smjesama (28.).
The use of solvents should be avoided, but may be required in some cases in order to produce a suitably concentrated stock solution.
Trebalo bi izbjegavati upotrebu otapala, iako će ona u nekim slučajevima možda biti potrebna kako bi se dobila matična otopina odgovarajuće koncentracije.
Where a solvent is used to assist in stock solution preparation, its final concentration should not exceed 100 μl/l and should be the same in all test vessels.
Ako se u pripremi matične otopine upotrebljava otapalo, njegova konačna koncentracija ne bi smjela biti viša od 100 μl/l i trebala bi biti jednaka u svim ispitnim posudama.
When a solvent is used, an additional solvent control is required.
Ako se upotrebljava otapalo, potrebna je dodatna kontrola s otapalom.
Maintenance of brood fish
Držanje uzgojnih riba
A breeding stock of unexposed, wild-type zebrafish with well-documented fertilisation rate of eggs is used for egg production.
Za proizvodnju jajašaca uzimaju se uzgojne neizlagane zebrice divljeg tipa s dobro dokumentiranom stopom oplodnje jajašaca.
Fish should be free of macroscopically discernible symptoms of infection and disease and should not have undergone any pharmaceutical (acute or prophylactic) treatment for 2 months before spawning.
Ribe ne bi smjele imati makroskopski vidljive simptome infekcije ili bolesti niti biti podvrgnute ikakvom farmaceutskom tretmanu (akutnom ili profilaktičkom) tijekom dva mjeseca prije mriješćenja.
Breeding fish are maintained in aquaria with a recommended loading capacity of 1 l water per fish and a fixed 12 - 16 hour photoperiod (29)(30)(31)(32)(33).
Uzgojne ribe drže se u akvariju s preporučenim kapacitetom punjenja od 1 l vode po ribi i fiksnim fotoperiodom od 12 – 16 sati (29., 30., 31., 32., 33).
Optimal filtering rates should be adjusted; excess filtering rates causing heavy perturbation of the water should be avoided.
Optimalnu jačinu filtriranja trebalo bi podesiti; prejako filtriranje koje uzrokuje veliko strujanje vode trebalo bi izbjegavati.
For feeding conditions, see Appendix 2.
Za hranjenje vidjeti Dodatak 2.
Surplus feeding should be avoided, and water quality and cleanness of the aquaria should be monitored regularly and be reset to the initial state, if necessary.
Suvišno hranjenje treba izbjegavati, a kvalitetu vode i čistoću akvarija potrebno je redovito nadzirati i prema potrebi vraćati na početno stanje.
Proficiency Testing
Ispitivanje osposobljenosti
As a reference chemical, 3,4-dichloroaniline (used in the validation studies (1)(2)), should be tested in a full concentration-response range to check the sensitivity of the fish strain used, preferably twice a year.
Kao referentnu kemikaliju trebalo bi ispitati, po mogućnosti dva puta godišnje, 3,4-dikloroanilin (upotrijebljen u validacijskim studijama u 1. i 2.) u punom rasponu koncentracija-odgovora kako bi se provjerila osjetljivost soja ribe koji se upotrebljava.
For any laboratory initially establishing this assay, the reference chemical should be used.
Svaki laboratorij koji tek počinje primjenjivati ovo ispitivanje trebao bi upotrijebiti referentnu kemikaliju.
A laboratory can use this chemical to demonstrate their technical competence in performing the assay prior to submitting data for regulatory purposes.
Laboratoriji mogu upotrijebiti tu kemikaliju da dokažu svoju tehničku osposobljenost za provedbu ispitivanja prije dostavljanja podataka u regulatorne svrhe.
Egg production
Dobivanje jajašaca
Zebrafish eggs may be produced via spawning groups (in individual spawning tanks) or via mass spawning (in the maintenance tanks).
Jajašca zebrica mogu se dobiti iz skupina za mriješćenje (u posebnim akvarijima za mriješćenje) ili masovnim mriješćenjem (u akvarijima za držanje).
In the case of spawning groups, males and females (e.g., at a ratio of 2:1) in a breeding group are placed in spawning tanks a few hours before the onset of darkness on the day prior to the test.
U slučaju skupina za mriješćenje mužjaci i ženke (npr. u omjeru 2: 1) uzgojne skupine stavljaju se u akvarije za mriješćenje nekoliko sati prije mraka na dan prije ispitivanja.
Since spawning groups of zebrafish may occasionally fail to spawn, the parallel use of at least three spawning tanks is recommended.
Budući da u skupinama za mriješćenje zebrica mriješćenje povremeno može izostati, preporučuje se paralelno upotrebljavati najmanje tri akvarija za mriješćenje.
To avoid genetic bias, eggs are collected from a minimum of three breeding groups, mixed and randomly selected.
Kako bi se izbjegla genetička pristranost, jajašca se sakupljaju iz najmanje tri uzgojne skupine, miješaju i nasumično odabiru.
For the collection of eggs, spawn traps are placed into the spawning tanks or maintenance tanks before the onset of darkness on the day prior to the test or before the onset of light on the day of the test.
Za sakupljanje jajašaca, ladice za mrijest stavljaju se u akvarije za mriješćenje ili akvarije za držanje prije mraka na dan prije ispitivanja ili prije svitanja na dan ispitivanja.
To prevent predation of eggs by adult zebrafish, the spawn traps are covered with inert wire mesh of appropriate mesh size (approx. 2 ± 0,5 mm).
Kako bi se spriječilo da odrasle zebrice pojedu jajašca, ladice za mrijest pokrivaju se inertnom žičanom mrežicom odgovarajuće veličine oka (otprilike 2 ± 0,5 mm).
If considered necessary, artificial plants made of inert material (e.g., plastic or glass) can be fixed to the mesh as spawning stimulus (3)(4)(5)(23)(35).
Ako se to smatra potrebnim, na mrežicu se mogu pričvrstiti umjetne biljke od inertnog materijala (npr. plastika ili staklo) kao podražaj za mriješćenje (3., 4., 5., 23., 35.).
Weathered plastic materials which do not leach (e.g., phthalates) should be used.
Trebalo bi upotrebljavati iskušane plastične materijale koji ne otpuštaju svoje sastojke u vodu (npr. ftalati).
Mating, spawning and fertilisation take place within 30 min after the onset of light and the spawn traps with the collected eggs can be carefully removed.
Parenje, mriješćenje i oplodnja odvijaju se u 30 minuta nakon svitanja i ladice za mrijest s prikupljenim jajašcima mogu se pažljivo izvaditi.
Rinsing eggs with reconstituted water after collection from spawning traps is recommended.
Nakon sakupljanja jajašaca iz ladica za mrijest preporučuje se isprati ih rekonstituiranom vodom.
Egg differentiation
Razlikovanje jajašaca
At 26 °C, fertilised eggs undergo the first cleavage after about 15 min and the consecutive synchronous cleavages form 4, 8, 16 and 32 cell blastomers (see Appendix 3)(35).
Na 26 °C nakon otprilike 15 minuta dolazi do prvog brazdanja oplođenih jajašaca, a daljnjim istovremenim brazdanjima nastaju 4, 8, 16 i 32 stanice – blastomere (vidjeti Dodatak 3.) (35.).
At these stages, fertilised eggs can be clearly identified by the development of a blastula.
U tim fazama oplođena jajašca mogu se lako prepoznati po razvoju blastule.
Twenty embryos per concentration (one embryo per well) are exposed to the test chemical.
Dvadeset embrija po koncentraciji (jedan embrij po bunariću) izlaže se ispitivanoj kemikaliji.
Exposure should be such that ± 20 % of the nominal chemical concentration are maintained throughout the test.
Izlaganje bi trebalo biti takvo da se ± 20 % nazivne koncentracije kemikalije zadrži tijekom cijelog ispitivanja.
If this is not possible in a static system, a manageable semi-static renewal interval should be applied (e.g. renewal every 24 hrs).
Ako to nije moguće u statičkom sustavu, trebalo bi primijeniti prikladna razdoblja obnavljanja za polustatičko ispitivanje (npr. obnavljanje svaka 24 sata).
In these cases exposure concentrations need to be verified as a minimum in the highest and lowest test concentrations at the beginning and the end of each exposure interval (see paragraph 36).
U tom slučaju koncentracije izlaganja treba provjeriti barem u najvišoj i najnižoj ispitnoj koncentraciji na početku i na kraju svakog razdoblja izlaganja (vidjeti stavak 36.).
If an exposure concentration of ± 20 % of the nominal concentrations cannot be maintained, all concentrations need to be measured at the beginning and the end of each exposure interval (see paragraph 36).
Ako se koncentracija izlaganja od ± 20 % nazivne koncentracije ne može održati, sve koncentracije treba mjeriti na početku i na kraju svakog razdoblja izlaganja (vidjeti stavak 36.).
Upon renewal, care should be taken that embryos remain covered by a small amount of old test solutions to avoid drying.
Pri obnavljanju ispitne otopine treba paziti da embriji ostanu prekriveni malom količinom stare ispitne otopine kako bi se izbjeglo njihovo sušenje.
The test design can be adapted to meet the testing requirements of specific substances (e.g,. flow-through (24) or passive dosing systems (25) for easily degradable or highly adsorptive substances (29), or others for volatile substances (36)(37)).
Plan ispitivanja može se prilagoditi kako bi se ispunili zahtjevi za ispitivanje određenih tvari (npr. protočno (24.) ili pasivno doziranje (25.) za lako razgradive ili jako adsorptivne tvari (29.), ili drugo za hlapljive tvari (36., 37.)).
In any case, care should be taken to minimise any stress to the embryos.
U svakom slučaju treba paziti da stres za embrije bude što manji.
Test chambers should be conditioned at least for 24 hrs with the test solutions prior to test initiation.
Ispitne komore trebalo bi kondicionirati s ispitnim otopinama najmanje 24 sata prije početka ispitivanja.
Test conditions are summarised in Appendix 2.
Ispitni uvjeti sažeto su opisani u Dodatku 2.
Normally, five concentrations of the test chemical spaced by a constant factor not exceeding 2,2 are required to meet statistical requirements.
Obično je potrebno pet koncentracija ispitivane kemikalije koje se razlikuju za stalni faktor od najviše 2,2 da se zadovolje statistički zahtjevi.
Justification should be provided, if fewer than five concentrations are used.
Ako se upotrebljava manje od pet koncentracija, treba dati obrazloženje.
The highest concentration tested should preferably result in 100 % lethality, and the lowest concentration tested should preferably give no observable effect, as defined in paragraph 28.
Najviša ispitna koncentracija trebala bi, po mogućnosti, izazvati smrtnost od 100 %, a najniža ispitna koncentracija ne bi trebala imati vidljive učinke, kako je opisano u stavku 28.
A range-finding test before the definitive test allows selection of the appropriate concentration range.
Ispitivanjem za utvrđivanje raspona prije glavnog ispitivanja omogućuje se odabir odgovarajućeg raspona koncentracija.
The range-finding is typically performed using ten embryos per concentration.
Ispitivanje za utvrđivanje raspona obično se provodi s deset embrija po koncentraciji.
The following instructions refer to performing the test in 24-well plates.
Sljedeće upute odnose se na ispitivanje s pločama s 24 bunarića.
If different test chambers (e.g. small Petri dishes) are used or more concentrations are tested, instructions have to be adjusted accordingly.
Ako se upotrebljavaju drugačije ispitne komore (npr. male Petrijeve zdjelice) ili se ispituje više koncentracija, upute se moraju na odgovarajući način prilagoditi.
Details and visual instructions for allocation of concentrations across 24-well plates are available in paragraph 27 and Appendix 4, Figure 1.
Pojedinosti i vizualne upute za raspodjelu koncentracija u pločama s 24 bunarića dostupne su u stavku 27. i u Dodatku 4. slici 1.
Dilution water controls are required both as negative control and as internal plate controls.
Kontrole s vodom za razrjeđivanje potrebne su i kao negativna kontrola i kao kontrola unutar ploče.
If more than 1 dead embryo is observed in the internal plate control, the plate is rejected, thus reducing the number of concentrations used to derive the LC50.
Ako se primijeti više od jednog mrtvog embrija u kontroli unutar ploče, ploča se odbacuje, čime se smanjuje broj koncentracija za izračunavanje LC50.
If an entire plate is rejected the ability to evaluate and discern observed effects may become more difficult, especially if the rejected plate is the solvent control plate or a plate in which treated embryos are also affected.
Ako se cijela ploča odbaci, može biti teže procijeniti i razlikovati vidljive učinke, posebno ako je odbačena ploča kontrola s otapalom ili ploča s tretiranim embrijima. U prvom slučaju ispitivanje se mora ponoviti.
A positive control at a fixed concentration of 4 mg/l 3,4-dichloroaniline is performed with each egg batch used for testing.
Za svaku šaržu jajašaca koja se upotrebljava za ispitivanje provodi se pozitivna kontrola s fiksnom koncentracijom od 4 mg/l 3,4-dikloroanilina.
In case a solvent is used, an additional group of 20 embryos is exposed to the solvent on a separate 24-well plate, thus serving as a solvent control.
Ako se upotrebljava otapalo, dodatna skupina od 20 embrija izlaže se otapalu u zasebnoj ploči s 24 bunarića te tako služi kao kontrola s otapalom.
To consider the test acceptable, the solvent should be demonstrated to have no significant effects on time to hatch, survival, nor produce any other adverse effects on the embryos (cf. paragraph 8c).
Kako bi se ispitivanje smatralo prihvatljivim, trebalo bi dokazati da otapalo nema značajne učinke na vrijeme potrebno za valjenje ni na preživljavanje niti ima bilo kakve druge štetne učinke na embrije (usp. stavak 8. točku (c)).
Start of exposure and duration of test
Početak izlaganja i trajanje ispitivanja
The test is initiated as soon as possible after fertilisation of the eggs and terminated after 96 hrs of exposure.
Ispitivanje treba započeti što je prije moguće nakon oplodnje jajašaca i završiti nakon 96 sati izlaganja.
The embryos should be immersed in the test solutions before cleavage of the blastodisc commences, or, at latest, by the 16 cell-stage.
Embriji bi trebali biti uronjeni u ispitne otopine prije nego što započne brazdanje blastodiska ili, najkasnije, do faze sa 16 stanica.
To start exposure with minimum delay, at least twice the number of eggs needed per treatment group are randomly selected and transferred into the respective concentrations and controls (e.g. in 100 ml crystallisation dishes; eggs should be fully covered) not later than 90 minutes post fertilisation.
Kako bi se započelo s izlaganjem što je prije moguće, najmanje dvostruki broj jajašaca potreban po skupini predviđenoj za tretiranje nasumično se odabire i prenosi u odgovarajuće koncentracije i kontrole (npr. u zdjelice za kristalizaciju od 100 ml; jajašca bi trebala biti potpuno prekrivena) najkasnije 90 minuta nakon oplodnje.
Viable fertilised eggs should be separated from unfertilised eggs and be transferred to 24-well plates pre-conditioned for 24 hrs and refilled with 2 ml/well freshly prepared test solutions within 180 minutes post fertilisation.
Iskoristiva oplođena jajašca treba u roku od 180 minuta nakon oplodnje odvojiti od neoplođenih i prenijeti u ploče s 24 bunarića koje su prethodno kondicionirane 24 sata i zatim ponovno napunjene s 2 ml svježe pripremljene ispitne otopine po bunariću.
By means of stereomicroscopy (preferably ≥30-fold magnification), fertilised eggs undergoing cleavage and showing no obvious irregularities during cleavage (e.g. asymmetry, vesicle formation) or injuries of the chorion are selected.
S pomoću stereomikroskopa (po mogućnosti povećanja ≥ 30 puta) odabiru se oplođena jajašca koja se brazdaju i pritom ne pokazuju očite nepravilnosti (npr. asimetrija, nastanak vezikula) ili ozljede koriona.
For egg collection and separation, see Appendix 3, Fig. 1 and 3 and Appendix 4, Fig. 2.
Za sakupljanje i odvajanje jajašaca vidjeti Dodatak 3. slike 1. i 3. te Dodatak 4. sliku 2.
Distribution of eggs over the 24-well plates
Raspodjela jajašaca u ploče s 24 bunarića
Eggs are distributed to well plates in the following numbers (see also Appendix 4, Fig. 1)
Jajašca se raspodjeljuju u ploče s bunarićima kako slijedi (vidjeti također Dodatak 4. sliku 1.):
20 eggs on one plate for each test concentration;
20 jajašaca u jednu ploču za svaku ispitnu koncentraciju,
20 eggs as solvent control on one plate (if necessary);
20 jajašaca u jednu ploču kao kontrola s otapalom (ako je potrebno),
20 eggs as positive control on one plate;
20 jajašaca u jednu ploču kao pozitivna kontrola,
4 eggs in dilution water as internal plate control on each of the above plates;
4 jajašca u svaku od navedenih ploča u vodu za razrjeđivanje kao kontrola unutar ploče,