natgillin/translations-raw huggingface dataset:
The items should be thoroughly washed to ensure that no organic or inorganic contaminants may interfere with the algal growth or composition of the test solutions.
Aparaturu je potrebno temeljito oprati kako organski i anorganski onečišćivači ne bi utjecali na rast algi ili na sastav ispitnih otopina.
The test vessels will normally be glass flasks of dimensions that allow a sufficient volume of culture for measurements during the test and a sufficient mass transfer of CO2 from the atmosphere (see paragraph 30).
Ispitne su posude u pravilu staklene tikvice dovoljnih dimenzija da se osigura potreban volumen kulture za mjerenja tijekom ispitivanja i dovoljan prijenos mase CO2 iz atmosfere (vidjeti stavak 30.).
Note that the liquid volume must be sufficient for analytical determinations (see paragraph 37).
Valja napomenuti da volumen tekućine mora biti dovoljan za analitička određivanja (vidjeti stavak 37.).
In addition some or all of the following equipment may be required:
Osim toga, potrebna je sljedeća oprema (djelomično ili u cijelosti):
Culturing apparatus:
Inkubator za uzgoj:
a cabinet or chamber is recommended, in which the chosen incubation temperature can be maintained at ± 2 °C.
preporučuje se ormar ili komora u kojoj se može održavati odabrana temperatura inkubacije na ± 2 °C.
Light measurement instruments:
Instrumenti za mjerenje svjetlosti:
it is important to note that the method of measurement of light intensity, and in particular the type of receptor (collector), may affect the measured value.
važno je napomenuti da metoda mjerenja intenziteta svjetlosti, a posebno vrsta prijamnika (senzora), može utjecati na izmjerenu vrijednost.
Measurements should preferably be made using a spherical (4 π) receptor (which responds to direct and reflected light from all angles above and below the plane of measurement), or a 2 π receptor (which responds to light from all angles above the measurement plane).
Mjerenja po mogućnosti treba provoditi s pomoću sferičnog (4 π) prijamnika (koji reagira na izravnu i reflektiranu svjetlost iz svih kutova iznad i ispod mjerne ravnine) ili prijamnika 2 π (koji reagira na svjetlost iz svih kutova iznad mjerne ravnine).
Apparatus to determine algal biomass.
Aparatura za određivanje biomase algi.
Cell count, which is the most frequently used surrogate parameter for algal biomass, may be made using an electronic particle counter, a microscope with counting chamber, or a flow cytometer.
Broj stanica, najčešće upotrebljavani zamjenski parametar za biomasu algi, može se odrediti s pomoću elektroničkog brojača čestica, mikroskopa s komorom za brojenje ili protočnog citometra.
Other biomass surrogates can be measured using a flow cytometer, fluorimeter, spectrophotometer or colorimeter.
Ostali se zamjenski parametri za biomasu mogu mjeriti s pomoću protočnog citometra, fluorimetra, spektrofotometra i kolorimetra.
A conversion factor relating cell count to dry weight is useful to calculate.
Korisno je izračunati faktor pretvorbe broja stanica u masu suhe tvari.
In order to provide useful measurements at low biomass concentrations when using a spectrophotometer, it may be necessary to use cuvettes with a light path of at least 4 cm.
Da bi se kod mjerenja spektrofotometrom dobile upotrebljive mjerne vrijednosti pri niskim koncentracijama biomase, ponekad je potrebno upotrijebiti kivete s putom svjetlosti od najmanje 4 cm.
Several species of non-attached microalgae and cyanobacteria may be used.
Može se upotrijebiti nekoliko vrsta slobodnoplivajućih mikroalgi i cijanobakterija.
The strains listed in Appendix 2 have been shown to be suitable using the test procedure specified in this test method.
Za sojeve navedene u Dodatku 2. dokazano je da su prikladni za ispitni postupak iz ove ispitne metode.
If other species are used, the strain and/or origin should be reported.
Ako se upotrebljavaju druge vrste, treba navesti soj i/ili podrijetlo.
Confirm that exponential growth of the selected test alga can be maintained throughout the test period under the prevailing conditions.
Treba se uvjeriti da se eksponencijalni rast odabranih ispitnih algi može održati tijekom cjelokupnog razdoblja ispitivanja u odgovarajućim ispitnim uvjetima.
Growth medium
Uzgojni medij
Two alternative growth media, the OECD and the AAP medium, are recommended.
Preporučuju se dva alternativna uzgojna medija, OECD i AAP.
The compositions of these media are shown in Appendix 3.
Sastav tih medija prikazan je u Dodatku 3.
Note that the initial pH value and the buffering capacity (regulating pH increase) of the two media are different.
Valja napomenuti da ta dva medija imaju različitu početnu pH-vrijednost i puferski kapacitet (za regulaciju povećanja pH-vrijednosti).
Therefore the results of the tests may be different depending on the medium used, particularly when testing ionising chemicals.
Stoga se kod ispitivanja mogu dobiti različiti rezultati ovisno o mediju koji se upotrebljava, posebno kad se ispituju ionizirajuće kemikalije.
Initial biomass concentration
Početna koncentracija biomase
The initial biomass in the test cultures must be the same in all test cultures and sufficiently low to allow exponential growth throughout the incubation period without risk of nutrient depletion.
Početna biomasa mora biti jednaka u svim ispitnim kulturama i mora biti dovoljno niska da se može postići eksponencijalni rast tijekom čitavog razdoblja inkubacije bez bojazni da bi se mogle iscrpiti zalihe nutrijenata.
The initial biomass should not exceed 0,5 mg/l as dry weight.
Početna biomasa ne smije biti viša od 0,5 mg/l suhe mase.
The following initial cell concentrations are recommended:
Preporučuju se sljedeće početne koncentracije stanica:
5 × 103 – 104 cells/ml
5 × 103 – 104 stanica/ml
2-5 × 103 cells/ml
2 – 5 × 103 stanica/ml
104 cells/ml
104 stanica/ml
5 × 104 – 105 cells/ml
5 × 104 – 105 stanica/ml
Concentrations of test chemical
Koncentracije ispitivane kemikalije
The concentration range in which effects are likely to occur may be determined on the basis of results from range-finding tests.
Raspon koncentracija u kojemu se mogu očekivati učinci može se odrediti na temelju rezultata ispitivanja za određivanje raspona.
For the final definitive test at least five concentrations, arranged in a geometric series with a factor not exceeding 3.2, should be selected.
Za konačno, glavno ispitivanje treba odabrati najmanje pet koncentracija raspoređenih u geometrijskom nizu uz faktor do najviše 3,2.
For test chemicals showing a flat concentration response curve a higher factor may be justified.
Kod ispitivanih kemikalija čija je krivulja koncentracija-odgovor ravna ponekad je opravdano upotrebljavati viši faktor.
The concentration series should preferably cover the range causing 5-75 % inhibition of algal growth rate.
Niz koncentracija trebao bi po mogućnosti obuhvatiti područje u kojemu se javlja inhibicija rasta algi od 5 do 75 %.
Replicates and controls
Ponavljanja i kontrole
The test design should include three replicates at each test concentration.
U planu ispitivanja treba predvidjeti po tri ponavljanja pri svakoj ispitnoj koncentraciji.
If determination of the NOEC is not required, the test design may be altered to increase the number of concentrations and reduce the number of replicates per concentration.
Ako nije potrebno odrediti NOEC, plan ispitivanja može se promijeniti tako da se poveća broj koncentracija i smanji broj ponavljanja po koncentraciji.
The number of control replicates must be at least three, and ideally should be twice the number of replicates used for each test concentration.
Broj kontrolnih ponavljanja mora biti najmanje tri, a u idealnom slučaju dvostruko veći od broja ponavljanja za svaku ispitnu koncentraciju.
A separate set of test solutions may be prepared for analytical determinations of test chemical concentrations (see paragraphs 36 and 38).
Za analitička određivanja koncentracija ispitivane kemikalije može se pripremiti zaseban niz ispitnih otopina (vidjeti stavke 36. i 38.).
When a solvent is used to solubilise the test chemical, additional controls containing the solvent at the same concentration as used in the test cultures must be included in the test design.
Ako se za otapanje ispitivane kemikalije upotrebljava otapalo, potrebno je predvidjeti dodatne kontrole koje sadržavaju istu koncentraciju otapala kao ispitne kulture.
Preparation of inoculum culture
Priprema kulture inokuluma
In order to adapt the test alga to the test conditions and ensure that the algae are in the exponential growth phase when used to inoculate the test solutions, an inoculum culture in the test medium is prepared 2-4 days before start of the test.
Kulturu inokuluma u ispitnom mediju treba pripremiti dva do četiri dana prije početka ispitivanja, kako bi se ispitne alge prilagodile uvjetima ispitivanja i bile u fazi eksponencijalnog rasta u trenutku kad se primjenjuju za inokulaciju ispitnih otopina.
The algal biomass should be adjusted in order to allow exponential growth to prevail in the inoculum culture until the test starts.
Biomasu algi treba prilagoditi tako da kultura inokuluma može eksponencijalno rasti do početka ispitivanja.
Incubate the inoculum culture under the same conditions as the test cultures.
Kulturu inokuluma potrebno je inkubirati u istim uvjetima kao ispitne kulture.
Measure the increase in biomass in the inoculum culture to ensure that growth is within the normal range for the test strain under the culturing conditions.
Mjerenjem povećanja biomase u kulturi inokuluma treba se uvjeriti da je rast u granicama normale za ispitivani soj u uvjetima uzgoja.
An example of the procedure for algal culturing is described in Appendix 4.
Primjer postupka uzgoja kulture algi opisan je u Dodatku 4.
To avoid synchronous cell divisions during the test a second propagation step of the inoculum culture may be required.
Ponekad može biti potrebno provesti još jedan korak razmnožavanja kulture inokuluma da bi se izbjegla istodobna dijeljenja stanica za vrijeme ispitivanja.
Preparation of test solutions
Priprema ispitnih otopina
All test solutions must contain the same concentrations of growth medium and initial biomass of test alga.
Sve ispitne otopine moraju sadržavati istu koncentraciju uzgojnog medija i istu početnu biomasu ispitnih algi.
Test solutions of the chosen concentrations are usually prepared by mixing a stock solution of the test chemical with growth medium and inoculum culture.
Ispitne otopine odabranih koncentracija uglavnom se pripremaju miješanjem radne otopine ispitivane kemikalije s uzgojnim medijem i kulturom inokuluma.
Stock solutions are normally prepared by dissolving the chemical in test medium.
Radne otopine u pravilu se pripremaju otapanjem kemikalije u ispitnom mediju.
Solvents, e.g. acetone, t-butyl alcohol and dimethyl formamide, may be used as carriers to add chemicals of low water solubility to the test medium (2)(3).
Ako je ispitivana kemikalija slabo topljiva u vodi, kao nosači za dodavanje kemikalije u ispitni medij mogu se upotrebljavati otapala, npr. aceton, t-butil alkohol i dimetilformamid (2) (3).
The concentration of solvent should not exceed 100 μl/l, and the same concentration of solvent should be added to all cultures (including controls) in the test series.
Koncentracija otapala ne smije biti viša od 100 μm/l i mora biti jednaka u svim kulturama u ispitnom nizu (uključujući kontrole).
Incubation
Inkubacija
Cap the test vessels with air-permeable stoppers.
Ispitne se posude začepe zrakopropusnim čepovima.
The vessels are shaken and placed in the culturing apparatus.
Posude se protresu i stave u inkubator za uzgoj.
During the test it is necessary to keep the algae in suspension and to facilitate transfer of CO2.
Alge se tijekom ispitivanja moraju držati u suspenziji i mora se omogućiti prijenos CO2.
To this end constant shaking or stirring should be used.
To se postiže stalnim tresenjem ili miješanjem.
The cultures should be maintained at a temperature in the range of 21 to 24 °C, controlled at ± 2 °C.
Kulture treba držati na temperaturi između 21 i 24 °C, uz toleranciju ± 2 °C.
For species other than those listed in Appendix 2, e.g. tropical species, higher temperatures may be appropriate, providing that the validity criteria can be fulfilled.
Kod vrsta koje nisu navedene u Dodatku 2., npr. tropskih vrsta, mogu biti primjerene više temperature, pod uvjetom da se mogu ispuniti kriteriji valjanosti.
It is recommended to place the flasks randomly and to reposition them daily in the incubator.
Preporučuje se da se tikvice nasumično rasporede u inkubatoru i svakodnevno razmještaju.
The pH of the control medium should not increase by more than 1,5 units during the test.
pH-vrijednost kontrolnog medija tijekom ispitivanja ne smije se povećati za više od 1,5 jedinica.
For metals and chemicals that partly ionise at a pH around the test pH, it may be necessary to limit the pH drift to obtain reproducible and well defined results.
Kod metala i kemikalija koji djelomično ioniziraju pri pH-vrijednosti koja je približna ispitnoj pH-vrijednosti ponekad je nužno ograničiti pomak pH-vrijednosti kako bi se dobili obnovljivi i dobro definirani rezultati.
A drift of < 0,5 pH units is technically feasible and can be achieved by ensuring an adequate CO2 mass transfer rate from the surrounding air to the test solution, e.g. by increasing the shaking rate.
Pomak od < 0,5 pH jedinica tehnički je izvediv i može se postići osiguravanjem odgovarajućeg prijenosa mase CO2 iz okolnog zraka u ispitnu otopinu, npr. povećanjem brzine tresenja.
Another possibility is to reduce the demand for CO2 by reducing the initial biomass or the test duration.
Druga je mogućnost da se smanji potrošnja CO2 smanjenjem početne biomase ili trajanja ispitivanja.
The surface where the cultures are incubated should receive continuous, uniform fluorescent illumination e.g. of “cool-white” or “daylight” type.
Površina na kojoj se kulture inkubiraju mora primati neprekidno i ravnomjerno fluorescentno svjetlo, npr. hladno bijelo ili dnevno svjetlo.
Strains of algae and cyanobacteria vary in their light requirements.
Različiti sojevi algi i cijanobakterija imaju različite potrebe za svjetlošću.
The light intensity should be selected to suit the test organism used.
Intenzitet svjetlosti potrebno je prilagoditi ispitnim organizmima.
For the recommended species of green algae, select the light intensity at the level of the test solutions from the range of 60-120 μE · m– 2 · s– 1 when measured in the photosynthetically effective wavelength range of 400-700 nm using an appropriate receptor.
Intenzitet svjetlosti na razini ispitnih otopina za preporučene vrste zelenih algi treba odabrati unutar područja od 60 do 120 · μE m– 2 s– 1, mjereno u fotosintetički učinkovitom spektralnom području od 400 do 700 nm primjenom odgovarajućeg prijamnika.
Some species, in particular Anabaena flos-aquae, grow well at lower light intensities and may be damaged at high intensities.
Neke vrste, posebno Anabena flos-aquae, dobro rastu na svjetlosti slabijeg intenziteta i jaka ih svjetlost može oštetiti.
For such species an average light intensity in the range 40-60 μE · m– 2 · s– 1 should be selected.
Kod tih vrsta treba odabrati prosječni intenzitet svjetlosti u području od 40 do 60 μE m– 2 s– 1.
(For light-measuring instruments calibrated in lux, an equivalent range of 4440 - 8880 lux for cool white light corresponds approximately to the recommended light intensity 60-120 μE · m– 2 · s– 1).
(Kod instrumenata za mjerenje intenziteta svjetlosti baždarenih u luksima područje od 4440 do 8880 luksa za hladno bijelo svjetlo približno odgovara preporučenom intenzitetu svjetlosti od 60 do 120 μE m– 2 s– 1).
Maintain the light intensity within ±15 % from the average light intensity over the incubation area.
Intenzitet svjetlosti treba održavati unutar ±15 % prosječnog intenziteta svjetlosti na inkubacijskom području.
Test duration
Trajanje ispitivanja
Test duration is normally 72 hours.
Ispitivanje u pravilu traje 72 sata.
However, shorter or longer test durations may be used provided that all validity criteria in paragraph 11 can be met.
Ipak, ispitivanje može trajati i duže ili kraće, pod uvjetom da su zadovoljeni svi kriteriji valjanosti iz stavka 11.
Measurements and analytical determinations
Mjerenja i analitička određivanja
The algal biomass in each flask is determined at least daily during the test period.
Biomasa algi u svakoj tikvici određuje se najmanje jedanput dnevno tijekom ispitivanja.
If measurements are made on small volumes removed from the test solution by pipette, these should not be replaced.
Ako se mjerenja provode na malom volumenu pipetiranom iz ispitne otopine, izvađenu otopinu nije potrebno nadomjestiti.
Measurement of biomass is done by manual cell counting by microscope or an electronic particle counter (by cell counts and/or biovolume).
Mjerenje biomase provodi se ručnim brojenjem stanica pod mikroskopom ili elektroničkim brojačem čestica (za broj stanica i/ili biovolumen).
Alternative techniques, e.g. flow cytometry, in vitro or in vivo chlorophyll fluorescence (5) (6), or optical density can be used if a satisfactory correlation with biomass can be demonstrated over the range of biomass occurring in the test.
Mogu se primjenjivati i alternativne tehnike, npr. protočna citometrija, flourescencija klorofila in vitro ili in vivo (5) (6) ili optička gustoća, pod uvjetom da se može dokazati zadovoljavajuća korelacija s biomasom unutar područja biomasa koje se javljaju u ispitivanju.
Measure the pH of the solutions at the beginning and at the end of the test.
pH-vrijednost otopina potrebno je izmjeriti na početku i na kraju ispitivanja.
Provided an analytical procedure for determination of the test chemical in the concentration range used is available, the test solutions should be analysed to verify the initial concentrations and maintenance of the exposure concentrations during the test.
Ako je raspoloživ analitički postupak za određivanje ispitivane kemikalije u rasponu koncentracija koje se upotrebljavaju u ispitivanju, ispitne otopine potrebno je analizirati kako bi se provjerile početne koncentracije i ujednačenost koncentracija izloženosti tijekom ispitivanja.
Analysis of the concentration of the test chemical at the start and end of the test of a low and high test concentration and a concentration around the expected EC50 may be sufficient where it is likely that exposure concentrations will vary less than 20 % from nominal values during the test.
Ponekad je dovoljno analizirati koncentraciju ispitivane kemikalije u jednoj niskoj i jednoj visokoj ispitnoj koncentraciji na početku i na kraju ispitivanja te koncentraciju oko očekivane vrijednosti EC50 ako se očekuje da će koncentracije izloženosti tijekom ispitivanja odstupati manje od 20 % od nazivnih vrijednosti.
Analysis of all test concentrations at the beginning and at the end of the test is recommended where concentrations are unlikely to remain within 80-120 % of the nominal concentration.
Ako nije vjerojatno da će koncentracije ostati unutar 80 do 120 % nazivne vrijednosti, preporučuje se analiza svih ispitnih koncentracija na početku i na kraju ispitivanja.
For volatile, unstable or strongly adsorbing test chemicals, additional samplings for analysis at 24 hour intervals during the exposure period are recommended in order to better define loss of the test chemical.
U slučaju hlapljivih, nestabilnih i vrlo adsorptivnih ispitivanih kemikalija preporučuje se da se tijekom razdoblja izloženosti obave dodatna uzorkovanja za analizu u razmacima od 24 sata kako bi se mogao bolje odrediti gubitak ispitivane kemikalije.
For these chemicals, extra replicates may be needed.
Kod takvih kemikalija mogu biti potrebna dodatna ponavljanja.
In all cases, determination of test chemical concentrations need only be performed on one replicate vessel at each test concentration (or the contents of the vessels pooled by replicate).
U svakom slučaju, koncentraciju ispitivane kemikalije treba određivati samo na jednoj posudi u svakoj ispitnoj koncentraciji (ili na združenom sadržaju posuda ponavljanja).
The test media prepared specifically for analysis of exposure concentrations during the test should be treated identically to those used for testing, i.e. they should be inoculated with algae and incubated under identical conditions.
S ispitnim medijima koji su posebno pripremljeni za analizu koncentracija izlaganja tijekom ispitivanja treba postupati jednako kao s medijima na kojima se provodi ispitivanje, tj. treba ih inokulirati algama i inkubirati u jednakim uvjetima.
If analysis of the dissolved test chemical concentration is required, it may be necessary to separate algae from the medium.
Ponekad je za analizu koncentracije otopljene ispitivane kemikalije potrebno odvojiti alge od medija.
Separation should preferably be made by centrifugation at a low g-force, sufficient to settle the algae.
Odvajanje se po mogućnosti provodi laganim centrifugiranjem gdje je g-sila tek tolika da se postigne taloženje algi.
If there is evidence that the concentration of the chemical being tested has been satisfactorily maintained within ± 20 % of the nominal or measured initial concentration throughout the test, analysis of the results can be based on nominal or measured initial values.
Ako postoje dokazi da se koncentracija ispitivane kemikalije tijekom ukupnog trajanja ispitivanja na zadovoljavajući način održava u granicama ± 20 % nazivne ili izmjerene početne koncentracije, analiza rezultata može se temeljiti na nazivnim ili izmjerenim početnim vrijednostima.
If the deviation from the nominal or measured initial concentration is not within the range of ± 20 %, analysis of the results should be based on geometric mean concentration during exposure or on models describing the decline of the concentration of the test chemical (3) (7).
Ako odstupanje od nazivne ili izmjerene početne koncentracije nije unutar područja od ± 20 %, analiza rezultata mora se temeljiti na srednjoj geometrijskoj koncentraciji tijekom izlaganja ili modelima koji opisuju opadanje koncentracije ispitivane kemikalije (20) (8).
The alga growth inhibition test is a more dynamic test system than most other short-term aquatic toxicity tests.
Test inhibicije rasta algi dinamičniji je ispitni sustav nego što je to većina testova kratkotrajne toksičnosti u vodi.
As a consequence, the actual exposure concentrations may be difficult to define, especially for adsorbing chemicals tested at low concentrations.
Stoga je ponekad teško odrediti stvarne koncentracije izlaganja, što posebno vrijedi za ispitivanja adsorptivnih kemikalija u niskim koncentracijama.
In such cases, disappearance of the test chemical from solution by adsorption to the increasing algal biomass does not mean that it is lost from the test system.
U tom slučaju nestanak ispitivane kemikalije iz otopine adsorpcijom na rastuću biomasu algi ne znači gubitak kemikalije iz ispitnog sustava.
When the result of the test is analysed, it should be checked whether a decrease in concentration of the test chemical in the course of the test is accompanied by a decrease in growth inhibition.
Kod analize rezultata ispitivanja treba provjeriti je li smanjenje koncentracije ispitivane kemikalije tijekom ispitivanja praćeno smanjenjem inhibicija rasta.
If this is the case, application of a suitable model describing the decline of the concentration of the test chemical (7) may be considered.
Ako je to slučaj, može se razmotriti primjena prikladnog modela koji opisuje opadanje koncentracije ispitivane kemikalije (7).
If not, it may be appropriate to base the analysis of the results on the initial (nominal or measured) concentrations.
U protivnom će možda biti primjereno provesti analizu rezultata na temelju početnih (nazivnih ili izmjerenih) koncentracija.
Microscopic observation should be performed to verify a normal and healthy appearance of the inoculum culture and to observe any abnormal appearance of the algae (as may be caused by the exposure to the test chemical) at the end of the test.
Mikroskopskim pregledom trebalo bi se uvjeriti u normalan i zdrav izgled kulture inokuluma te uočiti eventualne promjene u izgledu algi (one koje mogu biti posljedica izlaganja ispitivanoj kemikaliji) na kraju ispitivanja.