natgillin/translations-raw huggingface dataset:
As ingredients for the buffer, heparin ammonium salt and lyophilised aprotinin are recommended.
Kao sastojci za pufer preporučuju se amonijev heparin i liofilizirani aprotinin.
For blood sampling, a syringe (1 ml) with a fixed thin needle (e.g. Braun Omnikan-F) is recommended.
Za uzimanje uzorka krvi preporučuje se šprica (1 ml) s fiksnom tankom iglom (primjerice Braun Omnikan-F).
The syringe should be prefilled with buffer (approximately 100 μl) to completely elute the small blood volumes from each fish.
Špricu je potrebno prethodno napuniti puferom (približno 100 μl) kako bi se iz svake ribe u potpunosti eluirale male količine krvi.
The blood samples are taken by cardiac puncture.
Uzorci krvi uzimaju se punkcijom srca.
At first the fish should be anesthetized with MS-222 (100 mg/l).
Ribi je prvo potrebno dati anestetik MS-222 (100 mg/l).
The proper plane of anaesthesia allows the user to distinguish the heartbeat of the zebrafish.
Pri odgovarajućem stupnju anestezije korisnik može razlikovati otkucaje srca zebrice.
While puncturing the heart, keep the syringe piston under weak tension.
Pri punkciji srca klip šprice treba biti blago napet.
Collectable blood volumes range between 20 - 40 microliters.
Izvađene količine krvi kreću se od 20 do 40 mikrolitara.
After cardiac puncture, the blood/buffer-mixture should be filled into the test tube.
Nakon punkcije srca smjesu krvi i pufera potrebno je staviti u ispitnu epruvetu.
Plasma is separated from the blood via centrifugation (20 min; 5000 g) and should be stored at – 80 °C until required for analysis.
Plazma se odvaja od krvi centrifugiranjem (20 minuta; 5000 g) i do analize čuva na – 80 °C.
Procedure 3C:
Postupak 3.C:
Zebrafish, homogenisation of head & tail
zebrica, homogenizacija glave i repa
The fish are anaesthetised and euthanised in accordance with the test description.
Ribe se anesteziraju i usmrćuju u skladu s opisom ispitivanja.
The head and tail are cut of the fish in accordance with Figure 1.
Glava i rep režu se u skladu sa slikom 1.
All dissection instruments, and the cutting board should be rinsed and cleaned properly (e.g. with 96 % ethanol) between handling of each single fish to prevent “vitellogenin pollution” from females or induced males to uninduced males.
Sve instrumente za seciranje i podlogu za rezanje potrebno je pravilno isprati i očistiti (primjerice 96-postotnim etanolom) između rukovanja svakom ribom kako bi se spriječilo da ženke ili inducirani mužjaci kontaminiraju neinducirane mužjake vitelogeninom.
Cut behind
Rez iza
Cut behind dorsal fin
Histol. Analiza gonada
For Vtg analysis
Analiza Vtg -a
For gonad histology
Analiza Vtg -a
The weight of the pooled head and tail from each fish is measured to the nearest mg.
Zajednička masa glave i repa svake ribe mjeri se s točnošću do miligrama.
After being weighed, the parts are placed in appropriate tubes (e.g. 1,5 ml eppendorf) and frozen at – 80 °C until homogenisation or directly homogenised on ice with two plastic pistils.
Nakon vaganja dijelovi se stavljaju u odgovarajuće cijevi (npr. u Eppendorfovu epruvetu od 1,5 ml) i zamrzavaju na – 80 °C do homogenizacije ili se izravno homogeniziraju na ledu s dvama plastičnim tučcima.
(Other methods can be used if they are performed on ice and the result is a homogenous mass).
(Mogu se primjenjivati i druge metode ako se provode na ledu i ako je rezultat homogena masa.) Važno:
The tubes should be numbered properly so that the head and tail from the fish can be related to their respective body-section used for gonad histology.
Epruvete je potrebno pravilno označiti brojevima kako bi se glava i rep mogli povezati s pripadajućim tijelom koje se upotrebljava za histologiju gonade.
When a homogenous mass is achieved, 4 x the tissue weight of ice-cold homogenisation buffer is added.
Kad se dobije homogena smjesa, dodaje se (težinski) četiri puta toliko zamrznutog pufera za homogenizaciju.
Keep working with the pistils until the mixture is homogeneous.
Nastavlja se rad s tučcima dok smjesa ne postane homogena.
New pistils are used for each fish.
za svaku se ribu upotrebljavaju novi tučci.
The samples are placed on ice until centrifugation at 4 °C at 50000 × g for 30 min.
Uzorci se stavljaju na led do centrifugiranja na 4 °C pri 50000 × g 30 minuta.
Use a pipette to dispense portions of 20 μl supernatant into at least two tubes by dipping the tip of the pipette below the fat layer on the surface and carefully sucking up the supernatant without fat- or pellet fractions.
Pipetom stavite 20 μl supernatanta u najmanje dvije epruvete tako da vrh pipete umočite ispod površinskog sloja masti i pažljivo usišite supernatant bez masti ili dijelova taloga.
The tubes are stored at – 80 °C until use.
Cijevi se do upotrebe pohranjuju na – 80 °C.
Homogenisation buffer:(50 mM Tris-HCl pH 7,4; 1 % Protease inhibitor cocktail (Sigma)):
Homogenizacijski pufer:(50 mM Tris-HCl pH 7,4; 1-postotni koktel inhibitora proteaze (Sigma)):
12 ml Tris-HCl pH 7,4 + 120 μl Protease inhibitor cocktail.TRIS:
12 ml Tris-HCl pH 7,4 + 120 μl koktela inhibitora proteaze.TRIS:
TRIS-ULTRA PURE (ICN) e.g. from Bie & Berntsen, Denmark.Protease inhibitor cocktail:
TRIS-ULTRA PURE (ICN), primjerice proizvođača Bie & Berntsen, Danska.Koktel inhibitora proteaze:
From Sigma (for mammalian tissue) Product number P 8340.Note:
proizvođača Sigma (za tkivo sisavaca), broj proizvoda P 8340.Napomena:
The homogenisation buffer should be used the same day as manufactured.
homogenizacijski pufer potrebno je upotrijebiti na dan njegove izrade.
Place on ice during use.
Tijekom upotrebe držite na ledu.
Vitellogenin fortification samples and inter-assay reference standard
Uzorci s pojačanom razinom vitelogenina i referentni standard među testovima
On each day that vitellogenin assays are performed, a fortification sample made using an inter-assay reference standard will be analysed.
Svakog dana provođenja testova vitelogenina analizirat će se uzorak s pojačanom razinom izrađen s pomoću referentnog standarda među testovima.
The vitellogenin used to make the inter-assay reference standard will be from a batch different from the one used to prepare calibration standards for the assay being performed.
Vitelogenin za izradu referentnog standarda među testovima bit će iz različite serije od one za izradu standarda kalibracije za provođenje testa.
The fortification sample will be made by adding a known quantity of the inter-assay standard to a sample of control male plasma.
Uzorak s pojačanom razinom izradit će se dodavanjem poznate količine standarda među testovima uzorku plazme kontrolnih mužjaka.
The sample will be fortified to achieve a vitellogenin concentration between 10 and 100 times the expected vitellogenin concentration of control male fish.
Uzorak se pojačava radi postizanja koncentracije vitelogenina koja je od 10 do 100 puta veća od očekivane koncentracije vitelogenina kontrolnih mužjaka riba.
The sample of control male plasma that is fortified may be from an individual fish or may be a composite from several fish.
Uzorak plazme kontrolnih mužjaka koji se pojačava može potjecati od jedne ribe ili nekoliko riba.
A subsample of the unfortified control male plasma will be analysed in at least two duplicate wells.
Poduzorak nepojačane plazme kontrolnih mužjaka analizirat će se u najmanje dvije dvostruke jažice.
The fortified sample also will be analysed in at least two duplicate wells.
I pojačani uzorak analizirat će se u najmanje dvije dvostruke jažice.
The mean quantity of vitellogenin in the two unfortified control male plasma samples will be added to the calculated quantity of vitellogenin added to fortification the samples to determine an expected concentration.
Srednja količina vitelogenina iz dva nepojačana uzorka plazme kontrolnih mužjaka dodat će se izračunanoj količini vitelogenina koja je dodana uzorcima s pojačanom razinom; na taj se način određuje očekivana koncentracija.
The ratio of this expected concentration to the measured concentration will be reported along with the results from each set of assays performed on that day.
Omjer te očekivane i izmjerene koncentracije bilježit će se uz rezultate svakog kompleta testova provedenog tog dana.
Decision flowchart for the statistical analysis
Grafikon odluke za statističku analizu
Dunnett test on nested ANOVA
Dunnov test na s rednjoj vrijednosti ponavljanja
No Yes
>=4 ponav. po konc.
Dunn or Mann-Whitney test on rep means
Test trendova postupnims nižavanjem na s rednjoj vrijednosti ponavljanja
variance stabilising transform
Distribucijasrednje vrijednosti ponavljanja nije normalna
>=4 reps per conc
Varijance jednake Ne Da Da
No Normalising transform?
Dunnov test na srednjoj vrijednosti ponavljanja
Tamhane-Dunnett test >=4 reps per conc
Srednja vrijednost ponavljanja nije normalna ili nije homogena
Variances equal
>=4 ponav. po konc
Not monotone
Nije monotonično
Stept-down Jonckheere or Williams' test
Ugniježđena ANOVA nije normalna Ne Da Ne Da
Step-down trendtest on replicate means
Pretvorba radistabilizacije varijanci?
Monotone
Dunnettov test
Tamhane-Dunnett test on nested ANOVA
Dunn ili Mann-Whitneyjev test na s rednjojvrijednosti ponavljanja
Dunn test on rep means
Tamhane-Dunnettov test na ugniježđenaj ANOVA-i
Dunn or Mann-Whitney test
Jonckheereov ili Williamsov test postupnim snižavanjem
Nested ANOVA normal
Monotonično
Rep means normally distributed
>=4 ponav. po konc.
Step-down Jonckheere test
<=3 ponav. po konc.
Rep means normal or not homogenous
Ugniježđena ANOVA normalna
Rep means normal & homogenous
Izos taviti kontrolus vodom
Determine whether Dose-Response is monotone
Distribucijasrednje vrijednosti ponavljanja nije normalna
THE AMPHIBIAN METAMORPHOSIS ASSAY
ANALIZA METAMORFOZE VODOZEMACA
This test method is equivalent to OECD test guideline (TG) 231 (2009).
Ova ispitna metoda odgovara Smjernici OECD-a za ispitivanje (TG) 213 (2009.).
The need to develop and validate an assay capable of detecting chemicals active in the thyroid system of vertebrate species originates from concerns that environmental levels of chemicals may cause adverse effects in both humans and wildlife.
Potreba za razvojem i potvrdom analize kojom se mogu otkriti aktivne kemikalije u tiroidnom sustavu kralježnjaka potječe iz zabrinutosti da razine kemikalija u okolišu mogu izazvati štetne učinke na ljude i na životinjski svijet.
In 1998, the OECD initiated a high-priority activity to revise existing TGs and to develop new TGs for the screening and testing of potential endocrine disrupters.
U 1998. OECD je započeo djelovanje visokog prioriteta radi revizije postojećih Smjernica za ispitivanje te radi razvoja novih Smjernica za preventivno ispitivanje i ispitivanje potencijalnih endokrinih ometača.
One element of the activity was to develop a TG for the screening of chemicals active on the thyroid system of vertebrate species.
Jedan od elementa aktivnosti bilo je razvijanje Smjernice za preventivno ispitivanje kemikalija koje djeluju na tiroidni sustav kralježnjaka.
Both an enhancement of the Repeated dose 28-day oral toxicity study in rodents (Chapter B.7 of this Annex) and the Amphibian Metamorphosis Assay (AMA) were proposed.
Predloženo je i poboljšanje 28-dnevnog ispitivanja oralne toksičnosti na glodavcima uz primjenu ponavljanih doza (Poglavlje B.7 ovog Priloga) i analize metamorfoze vodozemaca (AMA).
The enhanced test method B.7 underwent validation and a revised test method has been issued.
Poboljšana ispitna metoda B.7 podvrgnuta je validaciji i izdana je revidirana ispitna metoda.
The Amphibian Metamorphosis Assay (AMA) underwent an extensive validation programme which included intra- and inter-laboratory studies demonstrating the relevance and reliability of the assay (1, 2).
Analiza metamorfoze vodozemaca (AMA) bila je podvrgnuta opsežnom programu validacije koji je uključivao intralaboratorijske i interlaboratorijske studije kojima su dokazane relevantnost i pouzdanost analize (1., 2.).
Subsequently, the validation of the assay was subject to peer-review by a panel of independent experts (3).
Nakon toga validacija analiza bila je predmet recenzije skupine nezavisnih stručnjaka (3.).
This test method is the outcome of the experience gained during the validation studies for the detection of thyroid active chemicals, and of work conducted elsewhere in OECD member countries.
Ova ispitna metoda rezultat je iskustva stečenog tijekom validacijskih studija za otkrivanje kemikalija koje aktivno djeluju na štitnjaču i rada obavljenog na drugim mjestima u zemljama članicama OECD-a.
The Amphibian Metamorphosis Assay (AMA) is a screening assay intended to empirically identify chemicals which may interfere with the normal function of the hypothalamic-pituitary-thyroid (HPT) axis.
Analiza metamorfoze vodozemaca (AMA) jest preventivna analiza namijenjena empirijskoj identifikaciji kemikalija koje mogu ometati normalnu funkciju osovine hipotalamus-hipofiza-štitnjača (HPT).
The AMA represents a generalised vertebrate model to the extent that it is based on the conserved structures and functions of the HPT axis.
AMA predstavlja opći model kralježnjaka u onoj mjeri u kojoj se temelji na očuvanim strukturama i funkcijama HPT osovine.
It is an important assay because amphibian metamorphosis provides a well-studied, thyroid-dependent process which responds to chemicals active within the HPT axis, and it is the only existing assay that detects thyroid activity in an animal undergoing morphological development.
To je važna analiza jer metamorfoza vodozemaca pruža dobro proučavan proces ovisan o štitnjači, koji reagira na kemikalije aktivne u okviru HPT osovine te je jedina postojeća analiza kojom se otkriva aktivnost štitnjače u životinje koja prolazi morfološki razvoj.
The general experimental design entails exposing stage 51 Xenopus laevis tadpoles to a minimum of three different concentrations of a test chemical and a dilution water control for 21 days.
Opći plan pokusa podrazumijeva izlaganje 51. stadija Xenopus laevis punoglavaca najmanje trima različitim koncentracijama ispitivane kemikalije i kontroli s vodom za razrjeđenje za 21 dan.
There are four replicates of each test treatment.
Postoje četiri ponavljanja svake ispitne obrade.
Larval density at test initiation is 20 tadpoles per test tank for all treatment groups.
Gustoća ličinaka na početku ispitivanja jest 20 punoglavaca po ispitnom spremniku za sve skupine obrade.
The observational endpoints are hind limb length, snout to vent length (SVL), developmental stage, wet weight, thyroid histology, and daily observations of mortality.
Krajnji učinci promatranja jesu duljina stražnjih udova, duljina od vrha njuške do kloake (SVL), stadij razvoja, mokra masa, histologija štitnjače te svakodnevno promatranje smrtnosti.
Test Species
Ispitne vrste
Xenopus laevis is routinely cultured in laboratories worldwide and is easily obtainable through commercial suppliers.
Xenopus laevis rutinski se uzgaja u laboratorijima diljem svijeta i lako ju je nabaviti od komercijalnih dobavljača.
Reproduction can be easily induced in this species throughout the year using human chorionic gonadotropin (hCG) injections and the resultant larvae can be routinely reared to selected developmental stages in large numbers to permit the use of stage-specific test protocols.
Razmnožavanje ove vrste može se lako potaknuti cijele godine primjenom injekcija humanog korionskog gonadotropina (hCG) i rezultirajuće ličinke mogu se rutinski uzgajati do odabranih stadija razvoja u velikom broju kako bi se omogućila upotreba ispitnih protokola po određenim stadijima.
It is preferred that larvae used in the assay are derived from in-house adults.
Poželjno je da ličinke koje se upotrebljavaju u analizi potječu od odraslih jedinaka uzgojenih u laboratoriju.
As an alternative although this is not the preferred procedure, eggs or embryos may be shipped to the laboratory performing the test and allowed to acclimate;
Kao druga mogućnost, iako to nije poželjan postupak, jajašca ili embriji mogu se poslati u laboratorij koji obavlja ispitivanja i može im se dopustiti da se aklimatiziraju;
the shipping of larval stages for use in the test is unacceptable.
slanje u stadiju razvoja ličinke za upotrebu u ispitivanju neprihvatljivo je.
Equipment and Supplies
Oprema i potrepštine
The following equipment and supplies are needed for the conduct of this assay:
Za obavljanje ove analize potrebna je sljedeća oprema i potrepštine:
Exposure system (see description below);
sustav izlaganja (vidi opis u nastavku);
Glass or stainless steel aquaria (see description below);
akvariji od stakla ili nehrđajućeg čelika (vidi opis u nastavku);
Breeding tanks;
posude za uzgoj;
Temperature controlling apparatus (e.g., heaters or coolers (adjustable to 22° ± 1 °C));
uređaji za kontroliranje temperature (npr. grijači ili hladnjaci (podesivi na 22 °± 1 °C));
Thermometer;
termometar;
Binocular dissection microscope;
binokularni mikroskop za seciranje;
Digital camera with at least 4 megapixel resolution and micro function;
digitalni fotoaparat s najmanje četirima megapikselima razlučivosti i mikrofunkcijom;
Image digitising software;
softver za digitalizaciju slike;
Petri dish (e.g. 100 × 15 mm) or transparent plastic chamber of comparable size;
Petrijeva zdjelica (npr. 100 × 15 mm) ili prozirna plastična posuda usporedive veličine;
Analytical balance capable of measuring to 3 decimal places (mg);
analitička vaga s mogućnošću očitavanja do triju decimalnih mjesta (mg);
Dissolved oxygen meter;
mjerač otopljenog kisika;
pH meter;
mjerač pH-vrijednosti;
Light intensity meter capable of measuring in lux units;
mjerač intenziteta svjetlosti s mogućnošću mjerenja u luksima;
Miscellaneous laboratory glassware and tools;
razne laboratorijske staklene posude i alati;
Adjustable pipettes (10 to 5000 μl) or assorted pipettes of equivalent sizes;
podesive pipete (od 10 do 5000 μl) ili razne pipete odgovarajućih veličina;
Test chemical in sufficient quantities to conduct the study, preferably of one lot;
ispitivana kemikalija u dostatnim količinama za provođenje studije, po mogućnosti od jedne serije;
Analytical instrumentation appropriate for the chemical on test or contracted analytical services.
analitički instrumenti prikladni za kemikaliju na ispitivanju ili ugovorene analitičke usluge.
Chemical Testability
Kemijska ispitljivost
The AMA is based upon an aqueous exposure protocol whereby test chemical is introduced into the test chambers via a flow-through system.
AMA se temelji na protokolu vodenog izlaganja, pri čemu se ispitivana kemikalija uvodi u ispitne posude preko protočnog sustava.
Flow-through methods however, introduce constraints on the types of chemicals that can be tested, as determined by the physicochemical properties of the chemical.
Međutim, protočnim metodama uvode se ograničenja na vrste kemikalija koje se mogu ispitati, kako je određeno fizikalno-kemijskim svojstvima kemikalije.
Therefore, prior to using this protocol, baseline information about the chemical should be obtained that is relevant to determining the testability, and the OECD Guidance Document on Aquatic Toxicity Testing of Difficult Substances and Mixtures (4) should be consulted.
Stoga, prije upotrebe ovog protokola potrebno je dobiti osnovne podatke o kemikaliji koja je bitna za određivanje ispitljivosti i potrebno je proučiti Smjernicu OECD-a o ispitivanju toksičnosti teških tvari i smjesa u vodi (4).
Characteristics which indicate that the chemical may be difficult to test in aquatic systems include:
Značajke koje ukazuju na to da može biti teško ispitati kemikaliju u vodenim sustavima uključuju:
high octanol water partitioning coefficients (log Kow), high volatility, susceptibility to hydrolysis, and susceptibility to photolysis under ambient laboratory lighting conditions.
visoke koeficijente razdjeljenja oktanol/voda (log Kow), visoku hlapljivost, osjetljivost na hidrolizu i osjetljivost na fotolizu u laboratorijskim uvjetima okolnog osvjetljenja.
Other factors may also be relevant to determining testability and should be determined on a case by case basis.
Ostali faktori mogu biti jednako tako važni za određivanje ispitljivosti i potrebno ih je utvrditi za svaki slučaj zasebno.
If a successful test is not possible for the chemical using a flow-through test system, a static renewal system may be employed.
Ako uspješno ispitivanje nije moguće za kemikaliju primjenom protočnog sustava ispitivanja, može se upotrebljavati statički sustav s obnavljanjem.
If neither system is capable of accommodating the test chemical, then the default is to not test it using this protocol.
Ako nijedan sustav ne može prihvatiti ispitivanu kemikaliju, onda se podrazumijeva da se tu kemikaliju neće ispitivati s pomoću ovog protokola.
Exposure System
Sustav izlaganja
A flow-through diluter system is preferred, when possible, over a static renewal system.
Protočnom sustavu razrjeđivanja daje se prednost nad statičkim sustavom s obnavljanjem.
If physical and/or chemical properties of any of the test chemicals are not amenable to a flow-through diluter system, then an alternative exposure system (e.g., static-renewal) can be employed.
Ako fizička i/ili kemijska svojstava bilo kojeispitivane kemikalije nisu prikladna za protočni sustav razrjeđivanja, tada se može primijeniti alternativni sustav izlaganja (npr. statički sustav s obnavljanjem).
The system components should have water-contact components of glass, stainless steel, and/or Polytetrafluoroethylene.
Sustavne komponente trebaju imati komponente koje su u dodiru s vodom od stakla, nehrđajućeg čelika i/ili politetrafluoroetilena.
However, suitable plastics can be utilised if they do not compromise the study.
Međutim, mogu se upotrebljavati prikladni plastični materijali ako se time ne ugrožava studija.
Exposure tanks should be glass or stainless steel aquaria, equipped with standpipes that result in an approximate tank volume between 4,0 and 10,0 l and minimum water depth of 10 to 15 cm.
Spremnici za izlaganja trebali bi biti akvariji od stakla ili nehrđajućeg čelika, opremljeni cijevnim nastavcima koji rezultiraju približnim volumenom spremnika između 4,0 i 10,0 litara i minimalnom dubinom vode od 10 do 15 cm.
The system should be capable of supporting all exposure concentrations and a control, with four replicates per treatment.
Sustav bi trebao moći podržati sve koncentracije izlaganja i kontrolu s četirima ponavljanjima po obradi.
The flow rate to each tank should be constant in consideration of both the maintenance of biological conditions and chemical exposure (e.g. 25 ml/min).
Brzina protoka za svaki spremnik trebala bi biti konstantna s obzirom na održavanje bioloških uvjeta i izlaganje kemikalije (npr. 25 ml/min).
The treatment tanks should be randomly assigned to a position in the exposure system in order to reduce potential positional effects, including slight variations in temperature, light intensity, etc. Fluorescent lighting should be used to provide a photoperiod of 12 hr light:
Spremnike za obradu potrebno je nasumice rasporediti na položaj u sustavu izlaganja kako bi se smanjili potencijalni učinci položaja, uključujući manja odstupanja temperature, intenziteta svjetlosti itd. Fluorescentnu rasvjetu potrebno je upotrebljavati za dobivanje fotoperioda od 12 sati svjetla:
12 hr dark at an intensity that ranges from 600 to 2000 lux (lumen/m2) at the water surface.
12 sati mraka uz intenzitet koji varira od 600 do 2000 luksa (lumen/m2) na površini vode.
Water temperature should be maintained at 22° ± 1 °C, pH maintained between 6,5 to 8,5, and the dissolved oxygen (DO) concentration > 3,5 mg/l (> 40 % of the air saturation) in each test tank.
Temperaturu vode potrebno je održavati na 22 ° ± 1 °C, pH-vrijednost održavati između 6,5 i 8,5, a koncentraciju otopljenog kisika (DO) > 3,5 mg/l (> 40 % zasićenosti kisikom) u svakom ispitnom spremniku.
As a minimum water temperature, pH and dissolved oxygen should be measured weekly;
Kao minimalnu temperaturu vode, pH-vrijednost i otopljeni kisik potrebno je mjeriti tjedno;
temperature should preferably be measured continuously in at least one test vessel.
poželjno je stalno mjeriti temperaturu u najmanje jednoj ispitnoj posudi.
Appendix 1 outlines the experimental conditions under which the protocol should be executed.
U Dodatku 1. navode se pokusni uvjeti u skladu s kojima je potrebno izvršiti protokol.