natgillin/translations-raw huggingface dataset:
if required, however, molecular analysis of the mutations can provide additional information (see paragraph 24).
međutim, ako je potrebno, molekularnom analizom mutacija mogu se pribaviti dodatni podaci (vidjeti stavak 24.).
These rodent in vivo gene mutation tests are especially relevant to assessing mutagenic hazard in that the assays' responses are dependent upon in vivo metabolism, pharmacokinetics, DNA repair processes, and translesion DNA synthesis, although these may vary among species, among tissues and among the types of DNA damage.
Ovakva in vivo ispitivanja genskih mutacija na glodavcima posebno su relevantna za ocjenjivanje opasnosti od pojave mutagenosti zato što omogućuju sagledavanje faktora in vivo metabolizma, farmakokinetku i procese popravka DNK-a i translezijske sinteze DNK-a, iako oni mogu varirati kod različitih životinjskih vrsta, različitih tkiva, kao i kod različitih vrsta oštećenja DNK-a.
An in vivo assay for gene mutations is useful for further investigation of a mutagenic effect detected by an in vitro system, and for following up results of tests using other in vivo endpoints (24).
Analiza in vivo isto je tako korisna za daljnja istraživanja mutagenih učinaka otkrivenih s pomoću određenog sustava in vitro, i za praćenje rezultata ispitivanja s pomoću drugih in vivo graničnih vrijednosti.
In addition to being causally associated with the induction of cancer, gene mutation is a relevant endpoint for the prediction of mutation-based non-cancer diseases in somatic tissues (12) (13) as well as diseases transmitted through the germline.
Osim toga što se neobvezno povezuje s pojavom raka, mutacija gena bitna je krajnja točka za predviđanje nekancerogenih bolesti temeljenih na mutacijama u somatskim tkivima (12) (13), kao i bolesti koje se prenose zametnom lozom.
If there is evidence that the test chemical, or a relevant metabolite, will not reach any of the tissues of interest, it is not appropriate to perform a TGR gene mutation assay.
Ako postoje dokazi da ispitivana tvar ili odgovarajući metabolit neće stići ni do jednog ciljnog tkiva, nije primjereno primjenjivati transgenske analize mutacije gena u glodavaca.
In the assays described in paragraph 8, the target gene is bacterial or bacteriophage in origin, and the means of recovery from the rodent genomic DNA is by incorporation of the transgene into a λ bacteriophage or plasmid shuttle vector.
U analizama opisanima u stavku 8. ciljni je gen bakterijskog ili bakteriofagnog podrijetla, a regeneracija iz genomskog DNK-a glodavca postiže se ugrađivanjem transgena u λ bakteriofagni ili plazmidni prijenosni vektor.
The procedure involves the extraction of genomic DNA from the rodent tissue of interest, in vitro processing of the genomic DNA (i.e. packaging of λ vectors, or ligation and electroporation of plasmids to recover the shuttle vector), and subsequent detection of mutations in bacterial hosts under suitable conditions.
Postupak uključuje ekstrakciju genomskog DNK-a iz ciljnog tkiva glodavca, in vitro obradu genomskog DNK-a (tj. pakiranje λ vektora, ili ligaciju i elektroporaciju plazmida za regeneraciju prijenosnog vektora), i naknadno utvrđivanje mutacija u bakterijskim domaćinima u odgovarajućim uvjetima.
The assays employ neutral transgenes that are readily recoverable from most tissues.
U analizama se upotrebljavaju neutralni transgeni koji se mogu brzo regenerirati iz većine tkiva.
The basic TGR gene mutation experiment involves treatment of the rodent with a chemical over a period of time.
Osnovni pokus transgenske analize mutacije gena u glodavaca uključuje tretiranje glodavca određenom kemikalijom tijekom određenog vremenskog razdoblja.
Chemicals may be administered by any appropriate route, including implantation (e.g. medical device testing).
Kemikalije se mogu primjenjivati odgovarajuće, uključujući implantaciju (tj. ispitivanje medicinskim napravama).
The total period during which an animal is dosed is referred to as the administration period.
Ukupno razdoblje tijekom kojeg se doza primjenjuje na životinju naziva se razdobljem primjene.
Administration is usually followed by a period of time, prior to sacrifice, during which the chemical is not administered and during which unrepaired DNA lesions are fixed into stable mutations.
Nakon razdoblja primjene slijedi vremensko razdoblje, prije žrtvovanja, tijekom kojeg se kemikalija ne primjenjuje i tijekom kojeg se nepopravljene lezije DNK-a pričvršćuju na stabilne mutacije.
In the literature, this period has been variously referred to as the manifestation time, fixation time or expression time;
U literaturi se to razdoblje različito naziva kao razdoblje tijekom kojeg dolazi do manifestacija, razdoblje fiksiranja ili razdoblje izražavanja;
the end of this period is the sampling time (15) (29).
kraj tog razdoblja vrijeme je uzimanja uzoraka (15) (29).
After the animal is sacrificed, genomic DNA is isolated from the tissue(s) of interest and purified.
Nakon žrtvovanja životinje genomski se DNK izolira iz određenog predmetnog tkiva (ili više tkiva) te pročišćava.
Data for a single tissue per animal from multiple packaging/ligations are usually aggregated, and mutant frequency is generally evaluated using a total of between 105 and 107 plaque-forming or colony-forming units.
Podaci u vezi s jednom određenom vrstom životinje iz različitih pakiranja/ligacija obično se agregiraju i učestalost mutacije općenito se procjenjuje upotrebom ukupnog broja između 105 i 107 jedinica koje stvaraju plakove ili jedinica koje stvaraju koloniju.
When using positive selection methods, total plaque-forming units are determined with a separate set of non-selective plates.
Kod upotrebe pozitivnih metoda selekcije ukupni broj jedinica koje stvaraju plakove utvrđuje se s pomoću odvojenih neselektivnih ploča.
Positive selection methods have been developed to facilitate the detection of mutations in both the gpt gene [gpt delta mouse and rat, gpt– phenotype (20) (22) (28)] and the lacZ gene [Muta™Mouse or lacZ plasmid mouse (3) (10) (11) (30)];
Metode pozitivne selekcije razvijene su za olakšavanje otkrivanja mutacija u genu gpt (delta gpt miša i štakora, fenotip gpt– (20) (22) (28)) i gena lacZ (Muta™Mouse ili lacZ kod plazmidnog miša (3) (10) (11) (30));
whereas, lacI gene mutations in Big Blue® animals are detected through a non-selective method that identifies mutants through the generation of coloured (blue) plaques.
dok se mutacije gena lacI u životinjama Big Blue® otkrivaju neselektivnom metodom kojom se utvrđuju mutanti stvaranjem obojenih (plavih) plakova.
Positive selection methodology is also in place to detect point mutations arising in the cII gene of the λ bacteriophage shuttle vector [Big Blue® mouse or rat, and Muta™Mouse (17)] and deletion mutations in the λ red and gam genes [Spi– selection in gpt delta mouse and rat (21) (22) (28)].
Metodologija pozitivne selekcije primjenjuje se i da bi se otkrile točkaste mutacije koje nastaju u genu cII u λ bakteriofagnom prijenosnom vektoru (Big Blue® miš ili štakor i Muta™Mouse (17)) i brisanje mutacija u λ crvenim i gama genima (Spi – selekcija u gpt delta mišu i štakoru (21) (22) (28)).
Mutant frequencyis calculated by dividing the number of plaques/plasmids containing mutations in the transgene by the total number of plaques/plasmids recovered from the same DNA sample.
Učestalost mutacije izračunava se diobom broja plakova/plazmida koji sadržavaju mutacije u transgenu, ukupnim brojem plakova/plazmida regeneriranih iz istog uzorka DNK-a.
In TGR gene mutation studies, the mutant frequency is the reported parameter.
Kod istraživanja transgenskih analiza mutacija gena u glodavaca učestalost mutacije jest parametar izvješćivanja.
In addition, a mutation frequency can be determined as the fraction of cells carrying independent mutations;
K tome, učestalost mutacije može se odrediti kao udio stanica koje nose neovisne mutacije;
this calculation requires correction for clonal expansionby sequencing the recovered mutants (24).
ovaj izračun zahtijeva korekcije u vezi s klonalnim širenjem, sekvenciranjem regeneriranih mutanata (24).
The mutations scored in the lacI, lacZ, cII and gpt point mutation assays consist primarily of base pair substitution mutations, frameshift mutations and small insertions/deletions.
Mutacije zabilježene u analizama točkastih mutacija lacI, lacZ, cII i gpt sastoje se primarno od zamijenjenih mutacija baznih parova, pomaka okvira mutacija i manjih unošenja/brisanja.
The relative proportion of these mutation types among spontaneous mutations is similar to that seen in the endogenous Hprt gene.
Relativni omjer tih vrsta mutacija kod spontanih mutacija sličan je onome koji je utvrđen kod endogenog gena Hprt.
Large deletions are detected only with the Spi– selectionand the lacZ plasmid assays (24).
Velika brisanja utvrđena su samo kod selekcije Spi – i analiza plazmida lacZ (24).
Mutations of interest are in vivo mutations that arise in the mouse or rat.
Mutacije koje su zanimljive in vivo su mutacije koje se pojavljuju u miša i štakora.
In vitro and ex vivo mutations, which may arise during phage/plasmid recovery, replication or repair, are relatively rare, and in some systems can be specifically identified, or excluded by the bacterial host/positive selection system.
In vitro i ex vivo mutacije koje se mogu pojaviti tijekom regeneriranja faga/plazmida, repliciranja ili popravka, razmjerno su rijetke i mogu se posebno identificirati u nekim sustavima ili izuzeti pozitivnim selekcijskim sustavom bakterijskog domaćina.
Preparations
Priprema
A variety of transgenic mouse gene mutation detection models are currently available, and these systems have been more widely used than transgenic rat models.
Trenutačno je dostupno više modela utvrđivanja transgenskih mutacija gena miša i ti su sustavi upotrijebljeni puno više od transgenskih modela za štakore.
If the rat is clearly a more appropriate model than the mouse (e.g. when investigating the mechanism of carcinogenesis for a tumour seen only in rats, to correlate with a rat toxicity study, or if rat metabolism is known to be more representative of human metabolism) the use of transgenic rat models should be considered.
Ako je štakor očigledno primjereniji model od miša (tj. kod istraživanja mehanizama kancerogeneze tumora primijećenog isključivo u štakora, za usporedbu s istraživanjem toksičnosti štakora ili za slučajeve kada je metabolizam štakora dokazano usporediviji s ljudskim metabolizmom) treba razmotriti upotrebu transgenskih modela štakora.
The temperature in the experimental animal room ideally should be 22 °C (± 3 °C).
Temperatura u prostoriji u kojoj se drže pokusne životinje trebala bi biti 22 °C (± 3 °C).
Although the relative humidity should be at least 30 % and preferably not exceed 70 % other than during room cleaning, the goal should be to maintain a relative humidity of 50-60 %.
Iako bi relativna vlaga trebala biti najmanje 30 %, a poželjno je da ne prijeđe 70 % osim tijekom čišćenja prostorije, cilj bi trebao biti 50 – 60 %.
Lighting should be artificial, with a daily sequence of 12 hours light, followed by 12 hours dark.
Svjetlost bi trebala biti umjetna, s tim da je redoslijed 12 sati svjetla, 12 sati tame.
The choice of diet may be influenced by the need to ensure a suitable admixture of a test chemical when administered by this route.
Na izbor prehrane može utjecati potreba da se osigura odgovarajuća mješavina ispitivane kemikalije ako se ona daje u hrani.
Animals should be housed in small groups (no more than five) of the same sex if no aggressive behaviour is expected.
Životinje treba držati u manjim skupinama (ne više od pet jedinki) istog spola ako se ne očekuje agresivno ponašanje.
Animals may be housed individually if scientifically justified.
Ako je to znanstveno opravdano, životinje se mogu držati u zasebnim nastambama.
Healthy young sexually mature adult animals (8-12 weeks old at start of treatment) are randomly assigned to the control and treatment groups.
Zdrave mlade seksualno zrele odrasle životinje (starosti 8 – 12 tjedana na početku tretmana) biraju se nasumce i raspodjeljuju u kontrolne skupine i skupine koje će se tretirati.
The animals are identified uniquely.
Životinje se označuju jedinstvenim oznakama.
The animals are acclimated to the laboratory conditions for at least five days.
Životinje se najmanje pet dana prilagođavaju laboratorijskim uvjetima.
At the commencement of the study, the weight variation of animals should be minimal and not exceed ± 20 % of the mean weight of each sex.
Na početku studije variranje tjelesne mase životinja treba biti što manje i ne smije prelaziti ± 20 % od odgovarajuće srednje vrijednosti mase svakog spola.
Solid test chemicals should be dissolved or suspended in appropriate solvents or vehicles or admixed in diet or drinking water prior to dosing of the animals.
Prije no što se doza daje životinjama, krute ispitivane tvari po potrebi treba otopiti ili suspendirati u odgovarajućim otapalima ili nosačima i razrijediti.
Liquid test chemicals may be dosed directly or diluted prior to dosing.
Tekuće ispitivane tvari mogu se dozirati izravno ili razrijediti prije doziranja.
For inhalation exposures, test chemicals can be administered as gas, vapour or a solid/liquid aerosol, depending on their physicochemical properties.
Za potrebe inhaliranja, kemikalije koje se upotrebljavaju kod ispitivanja mogu se primijeniti u obliku plina, pare ili krutog/tekućeg aerosola, ovisno o njihovim fizičko-kemijskim svojstvima.
Fresh preparations of the test chemical should be employed unless stability data demonstrate the acceptability of storage.
Ako prema podacima o stabilnosti skladištenje nije prihvatljivo, pripravke ispitivane tvari treba koristiti svježe.
Test Conditions
Uvjeti ispitivanja
Solvent/vehicle
Otapalo/nosač
The solvent/vehicle should not produce toxic effects at the dose volumes used, and should not be suspected of chemical reaction with the test chemical.
Pri visinama doza koje se upotrebljavaju, otapalo/nosač ne smije imati toksične učinke i ne smije postojati sumnja da bi mogao kemijski reagirati s ispitivanim tvarima.
If other than well-known solvents/vehicles are used, their inclusion should be supported with reference data indicating their compatibility.
Ako se upotrebljavaju otapala/nosači koji nisu dobro poznati, njihovo uključivanje u ispitivanje treba potkrijepiti referentnim podacima koji pokazuju njihovu sukladnost.
It is recommended that wherever possible, the use of an aqueous solvent/vehicle should be considered first.
Kad god je to moguće preporučuje se najprije razmotriti mogućnost primjene vodenog otapala/nosača.
Positive Controls
Pozitivna kontrola
Concurrent positive control animals should normally be used.
Obično treba upotrebljavati paralelne pozitivne kontrolne životinje.
However, for laboratories that have demonstrated competency (see paragraph 23) and routinely use these assays, DNA from previous positive control treated animals may be included with each study to confirm the success of the method.
Međutim, za laboratorije koji su dokazali tu sposobnost (vidjeti stavak 23.) i rutinski koriste te analize, DNK-ovi iz prethodnih pozitivnih kontrola tretiranih životinja mogu se uključiti sa svakim istraživanjem da bi se potvrdila uspješnost metode.
Such DNA from previous experiments should be obtained from the same species and tissues of interest, and properly stored (see paragraph 36).
Takav DNK iz prethodnih eksperimenata trebao bi se dobiti iz iste predmetne vrste i tkiva te bi se trebala primjereno pohraniti (vidjeti stavak 36.).
When concurrent positive controls are used, it is not necessary to administer them by the same route as the test chemical;
Kod primjene paralelnih pozitivnih kontrola nije neophodno primjenjivati ih istim putem kao i kemikaliju koja se upotrebljava za ispitivanje;
however, the positive controls should be known to induce mutations in one or more tissues of interest for the test chemical.
međutim, pozitivne kontrole trebale bi sa sigurnošću poticati mutacije u jednoj ili više vrsta tkiva na koje se odnosi ta kemikalija.
The doses of the positive control chemicals should be selected so as to produce weak or moderate effects that critically assess the performance and sensitivity of the assay.
Doze kemikalija pozitivne kontrole trebale bi se odabrati tako da proizvode slabe ili umjerene učinke kojima se kritički procjenjuju rezultati i osjetljivost analize.
Examples of positive control chemicals and some of their target tissues are included in Table 1.
Primjeri kemikalija pozitivne kontrole i nekih njihovih ciljnih tkiva uključeni su u tablici 1.
Examples of positive control chemicals and some of their target tissues
Primjeri kemikalija pozitivne kontrole i nekih njihovih ciljnih tkiva
Positive control chemical and CAS No
Kemikalije pozitivne kontrole i br. CAS
EINECS name and EINECS No
EINECS naziv i EINECS br.
Mutation Target Tissue
Ciljno tkivo mutacije
N-Ethyl-N-nitrosourea
N-etil-N-nitrozourea
[CAS No 759-73-9]
(CAS br. 759-73-9)
Direct acting mutagen
Spoj direktnog djelovanja
Liver, lung
Jetra, pluća
Bone marrow, colon, colonic epithelium, intestine, liver, lung, spleen, kidney, ovarian granulosa cells, male germ cells
Koštana srž, debelo crijevo, crijevni epitel, crijeva, jetra, pluća, slezena, bubreg, jajne granulozne stanice, zametne stanice mužjaka
Ethyl carbamate (urethane)
etil-karbamat (uretan)
[CAS No 51-79-6]
(CAS br. 51-79-6)
Urethane
Uretan
Mutagen, requires metabolism but produces only weak effects
Mutagen, treba metabolizam, no proizvodi samo slabe učinke
Bone marrow, forestomach, small intestine, liver, lung, spleen
Koštana srž, potrbušnica, tanko crijevo, jetra, pluća, slezena
2,4-Diaminotoluene
2,4 Diaminotoluen
[CAS No 95-80-7]
(CAS br. 95-80-7)
ethyl-m-phenylenediamine
etil-m-fenilendiamin
Mutagen, requires metabolism, also positive in the Spi– assay
Mutagen, treba metabolizam, isto tako pozitivan u analizi Spi-
Benzo[a]pyrene
Benzo[e]piren
[CAS No 50-32-8]
(CAS br. 50-32-8)
Benzo[def]chrysene
benzo[def]krizen
Mutagen, requires metabolism
Mutagen, treba metabolizam
Liver, omenta,
Jetra, trbušna maramica,
Bone marrow, breast, colon, forestomach, glandular stomach, heart, liver, lung, male germ cells
Koštana srž, dojka, debelo crijevo, potrbušnica, žljezdani želudac, srce, jetra, pluća, zametne stanice mužjaka
Negative controls
Negativne kontrole
Negative controls, treated with solvent or vehicle alone, and otherwise treated in the same way as the treatment groups, should be included for every sampling time.
Negativne kontrole, koje se tretiraju samo otapalom ili nosačem i koje su osim toga tretirane na jednak način kao i skupine koje se tretiraju, trebale bi biti uključene u svako uzorkovanje.
In the absence of historical or published control data showing that no deleterious or mutagenic effects are induced by the chosen solvent/vehicle, untreated controls should also be included for every sampling time in order to establish acceptability of the vehicle control.
U nedostatku povijesnih ili objavljenih kontrolnih podataka kojima se dokazuje da odabrano otapalo ili nosač nema štetne i mutagenske učinke, netretirane kontrolne skupine isto bi tako trebale biti uključene u svakom uzimanju uzoraka da bi se utvrdila prihvatljivost kontrole nosača.
Verification of laboratory proficiency
Provjera osposobljenosti laboratorija
Competency in these assays should be established by demonstrating the ability to reproduce expected results from published data (24) for:
Sposobnost primjene ovih analiza trebala bi se utvrditi dokazivanjem sposobnosti stvaranja očekivanih rezultata na temelju objavljenih podataka (24) za:
mutant frequencies with positive control chemicals (including weak responses) such as those listed in Table 1, non-mutagens, and vehicle controls;
učestalosti pojave mutanata s kemikalijama pozitivne kontrole (uključujući one sa slabim učincima) kao što su one navedene u tablici 1., ne-mutagenima, i kontrolama nosača;
and 2) transgene recovery from genomic DNA (e.g. packaging efficiency).
i 2) regeneriranjem transgena iz genomskog DNK-a (tj. učinkovitost pakiranja).
Sequencing of mutants
Sekvenciranje mutanata
For regulatory applications, DNA sequencing of mutants is not required, particularly where a clear positive or negative result is obtained.
Za regulatorne primjene sekvenciranje DNK-a mutanata nije neophodno, osobito kada se dobije jasan pozitivan ili negativan rezultat.
However, sequencing data may be useful when high inter-individual variation is observed.
Međutim, podaci o sekvenciranju mogu biti korisni kada se primijete velike varijacije između pojedinih jedinki.
In these cases, sequencing can be used to rule out the possibility of jackpots or clonal events by identifying the proportion of unique mutants from a particular tissue.
U tim se slučajevima sekvenciranje može upotrebljavati da bi se isključila mogućnost jackpota ili klonalnih manifestacija, identifikacijom omjera jedinstvenih mutanata iz određenog tkiva.
Sequencing approximately 10 mutants per tissue per animal should be sufficient for simply determining if clonal mutants contribute to the mutant frequency;
Sekvenciranje otprilike 10 mutanata po tkivu po životinji trebalo bi biti dostatno za jednostavno utvrđivanje doprinose li klonalni mutanti učestalosti mutanata;
sequencing as many as 25 mutants may be necessary to correct mutant frequency mathematically for clonality.
moguće je potrebno sekvenciranje i do 25 mutanata da bi se matematički ispravila učestalost mutanta u pogledu klonaliteta.
Sequencing of mutants also may be considered when small increases in mutant frequency (i.e. just exceeding the untreated control values) are found.
Sekvenciranje mutanata može se razmatrati i kada se utvrde mala povećanja učestalosti mutanata (tj. povećanja koja prelaze neobrađene kontrolne vrijednosti).
Differences in the mutant spectrum between the mutant colonies from treated and untreated animals may lend support to a mutagenic effect (29).
Razlike u spektru mutanta između kolonija mutanata u pogledu tretiranih i netretiranih životinja može potaknuti mutagenski učinak (29).
Also, mutation spectra may be useful for developing mechanistic hypotheses.
Isto tako, spektri mutacija mogu biti korisni za razvoj pretpostavki o mehanizmima.
When sequencing is to be included as part of the study protocol, special care should be taken in the design of such studies, in particular with respect to the number of mutants sequenced per sample, to achieve adequate power according to the statistical model used (see paragraph 43).
Kada se sekvenciranje uključuje kao dio protokola istraživanja, treba pridati posebnu pažnju osmišljavanju takvih istraživanja, posebno s obzirom na broj mutanata sekvenciranih po uzorku, da bi se ostvarila odgovarajuća pouzdanost u skladu s korištenim statističkim modelom (vidjeti stavak 43.).
The number of animals per group should be predetermined to be sufficient to provide statistical power necessary to detect at least a doubling in mutant frequency.
Broj životinja po skupini trebao bi se odrediti unaprijed, da bi se na odgovarajući način osigurala statistička valjanost neophodna za utvrđivanje barem dvostruke učestalosti mutanata.
Group sizes will consist of a minimum of five animals;
Skupine se prema veličini sastoje od najmanje pet životinja;
however, if the statistical power is insufficient, the number of animals should be increased as required.
međutim, ako je statistička valjanost nedovoljna, broj životinja trebao bi se prema potrebi povećati.
Male animals should normally be used.
Obično bi se trebali upotrebljavati mužjaci životinja.
There may be cases where testing females alone would be justified;
Može biti slučajeva kada je opravdano ispitivanje i samo na ženkama;
for example, when testing human female-specific drugs, or when investigating female-specific metabolism.
na primjer kod ispitivanja lijekova specifičnih za žene ili kod istraživanja ženskog metabolizma.
If there are significant differences between the sexes in terms of toxicity or metabolism, then both males and females will be required.
Ako postoje značajne razlike između spolova u pogledu toksičnosti ili metabolizma, tada su potrebni i mužjaci i ženke.
Administration Period
Razdoblje primjene