natgillin/translations-raw huggingface dataset:
As a general rule, one culture flask (75 cm2) of 80-90 % confluent cells will supply sufficient cells for one to 1,5 (24-well) plates at a target density of 200000 to 300000 cells per ml of medium resulting in approximately 50-60 % confluency in the wells at 24 hours (Figure 2).
U pravilu, jedna tikvica s kulturom (75 cm2) 80 – 90 % konfluentnih stanica imat će dovoljno stanica za jednu do 1,5 pločicu (24 jažice) ciljne gustoće od 200000 do 300000 stanica po ml medija, što će dovesti do konfluencije od 50 – 60 % u jažicama u 24 sata (slika 2.).
This is typically the optimal cell density for hormone production in the assay.
To je u pravilu optimalna gustoća stanica za proizvodnju hormona u testu.
At higher densities, T as well as E2 production patterns are altered.
Pri većim gustoćama mijenjaju se uzorci proizvodnje hormona T i E2.
Before conducting the assay the first time, it is recommended that different seeding densities between 200000 and 300000 cells per ml be tested, and the density resulting in 50-60 % confluency in the well at 24 hours be selected for further experiments.
Prije prvog provođenja testa preporučuje se ispitivanje različitih gustoća razmnožavanja između 200000 i 300000 stanica po ml te odabir gustoće za konfluenciju od 50 – 60 % u jažici tijekom 24 sata.
Photomicrograph of H295R cells at a seeding density of 50 % in a 24 well culture plate at 24 hours taken at the edge (A) and centre (B) of a well
Fotomikrograf stanica H295R pri gustoći razmnožavanja od 50 % na pločici s 24 jažice u 24 sata zabilježen na rubu (A) i u središtu (B) jažice.
Necropsy P animals
Nekropsija životinja P
Pre-mating
Prije parenja
Post-mating
Nakon parenja
6 weeks
6 tjedana
Pregnancy
Skotnost
Lactation
Laktacija
In-utero development
Razvoj u maternici
Pre-weaning
Prije odbijanja od sise
Post-weaning
Nakon odbijanja od sise
Parental generation
Roditeljska generacija
Designation
Oznaka
Animals/cohort
Životinje/kohorta
Approximate age at necropsy (weeks)
Približna starost pri nekropsiji (u tjednima)
Target is 20 litters per group
Cilj je 20 legala po skupini
Surplus
Višak
Reproductive
Za razmnožavanje
Immunotoxicity
Imunotoksičnost
Spares
Pričuva
20 M + 20 F
20 M + 20 Ž
10 M + 10 F @
10 M + 10 Ž @
14 or 20-25 if triggered
14 ili 20 - 25 ako je započeta
@ one per litter and representative of 20 litters in total where possible
@ jedna po leglu i, gdje je to moguće, reprezentativno za ukupno 20 legala
QUALITY CONTROL REQUIREMENTS
ZAHTJEVI U POGLEDU KONTROLE KVALITETE
It is critical that exact volumes of solutions and samples are delivered into the wells during dosing because these volumes determine the concentrations used in the calculations of assay results.
Ključno je dodavanje točnih količina otopina i uzoraka u jažice tijekom doziranja jer se na taj način utvrđuju koncentracije koje se upotrebljavaju u izračunima rezultata testa.
Prior to the initiation of cell culture and any subsequent testing, each laboratory should demonstrate the sensitivity of its hormone measurement system (paragraphs 29-31).
Svaki bi laboratorij prije započinjanja stanične kulture i bilo kakvog naknadnog ispitivanja trebao dokazati osjetljivost svog sustava mjerenja hormona (stavci 29. do 31.).
If antibody-based hormone measurement assays are to be used, the chemicals to be tested should be analysed for their potential to interfere with the measurement system used to quantify T and E2 as outlined in paragraph 32 prior to initiating testing.
Ako se upotrebljavaju testovi mjerenja hormona na temelju antitijela, kemikalije koje treba ispitati prije prvog ispitivanja treba analizirati s obzirom na njihov potencijal narušavanja sustava mjerenja koji se upotrebljava za mjerenje hormona T i E2 kako je navedeno u stavku 32.
DMSO is the recommended solvent for the assay.
DMSO je preporučeno otapalo za test.
If an alternative solvent is utilised, the following should be determined:
Ako se upotrebljava alternativno otapalo, treba utvrditi sljedeće:
The cytotoxicity as a function of the concentration of solvent.
citotoksičnost kao funkciju koncentracije otapala.
It is recommended that the maximum allowable solvent concentration should not exceed a 10 × dilution of the least cytotoxic concentration of the solvent.
Preporučuje se da najveća dopuštena koncentracija otapala ne premašuje deseterostruku najmanju citotoksičnu koncentraciju otapala.
Prior to conducting testing for the first time, the laboratory should conduct a qualifying experiment demonstrating that the laboratory is capable of maintaining and achieving appropriate cell culture and experimental conditions required for chemical testing as described in paragraphs 33-35.
Prije prvog ispitivanja laboratorij bi trebao provesti kvalifikacijski pokus kojim dokazuje svoju sposobnost održavanja i postizanja odgovarajućih uvjeta u pogledu stanične kulture i pokusa nužnih za ispitivanje kemikalije kako je opisano u stavcima 33. do 35.
When initiating testing using a new batch, a control plate should be run before using a new batch of cells to evaluate the performance of the cells as described in paragraphs 36 and 37.
Pri pokretanju ispitivanja na novoj seriji kontrolnu pločicu treba ispitati prije upotrebe nove serije kako bi se ocijenio učinak stanica kako je opisano u stavcima 36. i 37.
Performance of the Hormone Measurement System
Učinak sustava mjerenja hormona
Method sensitivity, accuracy, precision and cross-reactivity with sample matrix
Osjetljivost, točnost i preciznost metode i unakrsna reaktivnost s matricom uzorka
Each laboratory may use a hormone measurement system of its choice for the analysis of the production of T and E2 by H295R cells so long as it meets performance criteria, including the Limit of Quantification (LOQ).
Svaki laboratorij može za analizu proizvodnje hormona T i E2 stanica H295R upotrebljavati sustav mjerenja hormona po izboru u skladu s kriterijima učinka, uključujući granicu kvantifikacije (LOQ).
Nominally these are 100 pg/ml for T and 10 pg/ml for E2, which are based on the basal hormone levels observed in the validation studies.
Nominalno oni iznose 100 pg/ml za hormon T i 10 pg/ml za hormon E2, koji se temelje na osnovnim razinama hormona iz validacijskih studija.
However, greater or lower levels may be appropriate depending upon the basal hormone levels achieved in the performing laboratory.
Međutim, više ili niže razine mogu biti odgovarajuće ovisno o osnovnim razinama hormona ostvarenima u laboratoriju koji provodi ispitivanje.
Prior to initiation of QC plate and test runs, the laboratory should demonstrate that the hormone assay to be used can measure hormone concentrations in supplemented medium with sufficient accuracy and precision to meet the QC criteria specified in Tables 1 and 5 by analysing supplemented medium spiked with an internal hormone control.
Prije prve upotrebe pločice za kontrolu kvalitete i početka ispitivanja laboratorij bi trebao analizom dopunjenog medija s dodatkom interne hormonske kontrole dokazati da se hormonskim testom koji treba upotrebljavati mogu mjeriti koncentracije hormona u dopunjenom mediju dovoljno točno i precizno u skladu s kriterijima za kontrolu kvalitete navedenima u tablicama 1. i 5.
Supplemented medium should be spiked with at least three concentrations of each hormone (e.g. 100, 500 and 2500 pg/ml of T; 10, 50 and 250 pg/ml of E2; or the lowest possible concentrations based upon the detection limits of the chosen hormone measurement system can be used for the lowest spike concentrations for T and E2) and analysed.
U dodatni medij treba dodati najmanje tri koncentracije svakog hormona (npr. 100, 500 i 2500 pg/ml hormona T, odnosno 10, 50 i 250 pg/ml hormona E2; ili je za najniže koncentracije dodatka za hormone T i E2 moguće upotrijebiti najniže moguće koncentracije na temelju graničnih vrijednosti otkrivanja odabranog sustava mjerenja hormona) i analizirati.
Measured hormone concentrations of non-extracted samples should be within 30 % of nominal concentrations, and variation between replicate measurements of the same sample should not exceed 25 % (see also Table 8 for additional QC criteria).
Izmjerene koncentracije hormona neekstrahiranih uzoraka trebale bi biti unutar 30 % nominalnih koncentracija, a varijacije između ponovljenih mjerenja istog uzorka ne smiju premašivati 25 % (vidjeti i tablicu 8. za dodatne kriterije u pogledu kontrole kvalitete).
If these QC criteria are fulfilled it is assumed that the selected hormone measurement assay is sufficiently accurate, precise and does not cross-react with components in the medium (sample matrix) such that a significant influence on the outcome of the assay would be expected.
Ako su ti kriteriji u pogledu kontrole kvalitete ispunjeni, pretpostavlja se da je odabrani test mjerenja hormona dovoljno točan, precizan te da nije unakrsno reaktivan s komponentama u mediju (matrica uzorka) tako da bi se mogao očekivati znatan utjecaj na ishod testa.
In this case, no extraction of samples prior to measurement of hormones is required.
U tom slučaju nije potrebna ekstrakcija uzoraka prije mjerenja hormona.
In the case that the QC criteria in Tables 1 and 8 are not fulfilled, a significant matrix effect may be occurring, and an experiment with extracted spiked medium should be conducted.
U slučaju da kriteriji u pogledu kontrole kvalitete iz tablica 1. i 8. nisu ispunjeni, može doći do znatnog učinka matrice te treba provesti pokus s pomoću ekstrahiranog medija s dodatkom.
An example of an extraction procedure is described in Appendix II to the validation report (4).
Primjer postupka ekstrakcije opisuje se u Dodatku 2. izvješću o validaciji (4).
Measurements of the hormone concentrations in the extracted samples should be made in triplicate.
Mjerenja koncentracija hormona u ekstrahiranim uzorcima treba provesti u tri primjerka [17].
If it can be shown that after extraction the components of the medium do not interfere with the hormone detection method as defined by the QC criteria, all further experiments should be conducted using extracted samples.
Ako se može dokazati da nakon ekstrakcije komponente medija ne ometaju metodu otkrivanja hormona kako je definirana kriterijima za kontrolu kvalitete, sva daljnja ispitivanja treba provoditi upotrebljavajući ekstrahirane uzorke.
If the QC criteria cannot be met after extraction, the utilised hormone measurement system is not suitable for the purpose of the H295R Steroidogenesis Assay, and an alternative hormone detection method should be used.Standard curve
Ako je kriterije za kontrolu kvalitete nemoguće ispuniti nakon ekstrakcije, upotrijebljeni sustav mjerenja hormona ne odgovara svrsi testa steroidogeneze H295R te treba upotrijebiti drugu metodu otkrivanja hormona.Standardna krivulja
The hormone concentrations of the solvent controls (SC) should be within the linear portion of the standard curve.
Koncentracije hormona kontrola otapala trebale bi se nalaziti unutar linearnog dijela standardne krivulje.
Preferably, the SC values should fall close to the centre of the linear portion to ensure that induction and inhibition of hormone synthesis can be measured.
Poželjno je da se vrijednosti kontrola otapala nalaze blizu središta linearnog dijela kako bi se osigurala mogućnost mjerenja indukcije i inhibicije sinteze hormona.
Dilutions of medium (or extracts) to be measured are to be selected accordingly.
Otopine medija (ili ekstrakata) koje treba mjeriti treba odabrati u skladu s tim.
The linear relationship is to be determined by a suitable statistical approach.
Linearni odnos treba utvrditi odgovarajućim statističkim pristupom.
Chemical interference test
Ispitivanje interferencije kemikalije
If antibody-based assays such as Enzyme-Linked Immunosorbent Assays (ELISAs) and Radio-Immuno Assays (RIAs) are going to be used to measure hormones, each chemical should be tested for potential interference with the hormone measurement system to be utilised prior to initiation of the actual testing of chemicals (Appendix III to the validation report (4)) because some chemicals can interfere with these tests (17).
Ako će se za mjerenje hormona upotrebljavati testovi na osnovi antitijela poput imunoenzimskih testova (ELISA) i radioimunoloških testova (RIA), svaku kemikaliju prije početka stvarnog ispitivanja kemikalija treba ispitati radi potencijalne interferencije sa sustavom mjerenja hormona koji treba upotrijebiti (Dodatak III. izvješću o validaciji (4)) zato što neke kemikalije mogu ometati navedena ispitivanja (17).
If interference occurs that is ≥ 20 % of basal hormone production for T and/or E2 as determined by hormone analysis, the Chemical Hormone Assay Interference Test (such as described in Appendix III to the validation report (4) section 5.0) should be run on all test chemical stock solution dilutions to identify the threshold dose at which significant (≥ 20 % ) interference occurs.
Ako interferencija iznosi ≥ 20 % osnovne proizvodnje hormona T i E2 utvrđene analizom hormona, treba provesti ispitivanje interferencije testa hormona kemikalije (kako je opisano u odjeljku 5.0 Dodatka III. izvješću o validaciji (4)) na svima osnovnim otopinama ispitivane kemikalije kako bi se utvrdila granična doza pri kojoj dolazi do znatne interferencije (≥ 20 %).
If interference is less than 30 %, results may be corrected for the interference.
Ako interferencija iznosi manje od 30 %, podaci se mogu ispraviti za interferenciju.
If interference exceeds 30 %, the data are invalid and the data at these concentrations should be discarded.
Ako interferencija iznosi više od 30 %, podaci su nevažeći te treba odbaciti podatke pri tim koncentracijama.
If significant interference of a test chemical with a hormone measurement system occurs at more than one non-cytotoxic concentration, a different hormone measurement system should be used.
Ako do znatne interferencije ispitivane kemikalije sa sustavom mjerenja hormona dođe kod više necitotoksičnih koncentracija, treba upotrebljavati drugi sustav mjerenja hormona.
In order to avoid interference from contaminating chemicals it is recommended that hormones are extracted from the medium using suitable solvent, possible methods can be found in the validation report (4).
Kako bi se izbjegla interferencija kontaminirajućih kemikalija, preporučuje se ekstrakcija hormona iz medija s pomoću odgovarajućeg otapala, a moguće se metode nalaze u izvješću o validaciji (4).
Performance criteria for hormone measurement systems
Kriteriji učinka za sustave mjerenja hormona
Measurement Method Sensitivity
Osjetljivost mjerne metode
Limit of Quantification (LOQ)
Granica kvantifikacije (LOQ)
Hormone Extraction Efficiency (only when extraction is needed)
Učinkovitost ekstrakcije hormona (samo u slučaju potrebe)
The average recovery rates (based on triplicate measures) for the spiked amounts of hormone should not deviate more than 30 % from amount that was added.
Prosječna brzina obnavljanja (na temelju trostrukih mjera) količina hormona s dodatkom ne smije se razlikovati više od 30 % od dodane količine.
Chemical Interference (only antibody based systems)
Interferencija kemikalije (samo sustavi na temelju antitijela)
No substantial (≥ 30 % of basal hormone production of the respective hormone) cross-reactivity with any of the hormones produced by the cells should occur [19] [20]
Ne smije doći do znatne (≥ 30 % osnovne proizvodnje hormona odgovarajućeg hormona) unakrsne reaktivnosti niti s jednim hormonom koji proizvode stanice [19] [20]
Laboratory Proficiency Test
Ispitivanje osposobljenosti laboratorija
Before testing unknown chemicals, a laboratory should demonstrate that it is capable of achieving and maintaining appropriate cell culture and test conditions required for the successful conduct of the assay by running the laboratory proficiency test.
Prije ispitivanja nepoznatih kemikalija laboratorij bi, provođenjem ispitivanja osposobljenosti, trebao dokazati da može postići i održati odgovarajuću staničnu kulturu i ispitne uvjete nužne za uspješno provođenje testa.
As the performance of an assay is directly linked to the laboratory personnel conducting the assay, these procedures should be partly repeated if a change in laboratory personnel occurs.
S obzirom na to da je provođenje testa izravno povezano s osobljem laboratorija koje ga provodi, te postupke treba djelomično ponoviti ako dođe do promjene osoblja.
Separate plates are run for all chemicals using the format as shown in Table 6.
Za sve se kemikalije upotrebljavaju zasebne pločice s pomoću formata navedenih u tablici 6.
One QC plate (Table 4, paragraphs 36-37) should be included with each daily run for the proficiency chemicals.
Jednu pločicu za kontrolu kvalitete kemikalija za ispitivanje osposobljenosti (tablica 4., stavci 36. i 37.) treba uključiti u svakodnevno ispitivanje.
Proficiency chemicals and exposure concentrations
Kemikalije za ispitivanje osposobljenosti i koncentracije izlaganja
Proficiency chemical
Kemikalija za ispitivanje osposobljenosti
Test Concentrations [μM]
Ispitne koncentracije [μM]
Prochloraz
Prokloraz
Aminoglutethimide
Aminoglutetimid
Bisphenol A
Bisfenol A
Exposure of H295R to proficiency chemicals should be conducted in 24 well plates during the laboratory proficiency test.
Izlaganje stanica H295R kemikalijama za ispitivanje osposobljenosti treba provesti na pločicama s 24 jažice tijekom ispitivanja osposobljenosti laboratorija.
Dosing is in μM for all test chemical doses.
Doziranje je u μM za sve doze ispitivane kemikalije.
Doses should be administered in DMSO at 0,1 % v/v per well.
Doze treba primijeniti u DMSO-u pri 0,1 % v/v po jažici.
All test concentrations should be tested in triplicate wells (Table 6).
Sve ispitne koncentracije treba ispitati u trostrukim jažicama (tablica 6.).
Separate plates are run for each chemical.
Za svaku se kemikaliju upotrebljava zasebna pločica.
One QC plate is included with each daily run.
Jedna pločica za kontrolu kvalitete uključena je u svakodnevno ispitivanje.
Cell viability and hormone analyses should be conducted as provided in paragraphs 42 through 46.
Analize vitalnosti stanica i hormona treba provoditi kako je predviđeno stavcima 42. do 46.
The threshold value (lowest observed effect concentration, LOEC) and classification decision should be reported and compared with the values in Table 3.
Graničnu vrijednost (najniža koncentracija s vidljivim učinkom, LOEC) i odluku o klasifikaciji treba prijaviti i usporediti s vrijednostima u tablici 3.
The data are considered acceptable if they meet the LOEC and decision classification in Table 3.
Podaci se smatraju prihvatljivima ako su u skladu s LOEC-om i klasifikacijom odluke u tablici 3.
Threshold values (LOECs) and decision classifications for Proficiency Chemicals
Granične vrijednosti (LOEC-ovi) i klasifikacije odluke za kemikalije za ispitivanje osposobljenosti
n/a:
Nije primjenjivo:
not applicable as no changes should occur after exposure to non-cytotoxic concentrations of negative control.
Nije primjenjivo jer ne bi trebalo doći ni do kakvih promjena nakon izlaganja necitotoksičnim koncentracijama negativne kontrole.
CAS No
Br. CAS
Decision Classification
Klasifikacija odluke
+ [22] (Inhibition)
+ [22](inhibicija)
+ (Inhibition)
+ (inhibicija)
+ (Induction)
+ (indukcija)
n/a
Nije primjenjivo
Quality Control Plate
Pločica za kontrolu kvalitete
The quality control (QC) plate is used to verify the performance of the H295R cells under standard culture conditions, and to establish a historical database for hormone concentrations in solvent controls, positive and negative controls, as well as other QC measures over time.
Pločica za kontrolu kvalitete upotrebljava se za provjeru učinka stanica H295R u standardnim uvjetima kulture te za uspostavu povijesne baze podataka koncentracija hormona u kontrolama otapala, pozitivnih i negativnih kontrola, kao i ostalih vrijednosti kontrole kvalitete tijekom vremena.
H295R cell performance should be assessed using a QC plate for each new ATCC batch or after using a previously frozen stock of cells for the first time unless the laboratory proficiency test (paragraphs 32-34) has been run with that batch of cells.
Učinak stanica H295R treba procjenjivati s pomoću pločice za kontrolu kvalitete za svaku novu ATCC-ovu seriju ili nakon prve upotrebe prethodno zamrznute zalihe stanica, osim ako je ispitivanje osposobljenosti laboratorija (stavci 32. do 34.) provedeno na toj seriji stanica.
A QC plate provides a complete assessment of the assay conditions (e.g. cell viability, solvent controls, negative and positive controls, as well as intra- and inter-assay variability) when testing chemicals and should be part of each test run.
Pločica za kontrolu kvalitete pruža cjelovitu procjenu uvjeta testa (npr. vitalnost stanica, kontrole otapala, negativne i pozitivne kontrole, kao i varijabilnost unutar testa i između testova) kod ispitivanja kemikalija te bi trebala biti dijelom svakog ispitivanja.
The QC test is conducted in a 24-well plate and follows the same incubation, dosing, cell viability/cytotoxicity, hormone extraction and hormone analysis procedures described in paragraphs 38 through 46 for testing chemicals.
Ispitivanje kontrole kvalitete provodi se na pločici s 24 jažice te slijedi jednake postupke inkubacije, doziranja, vitalnosti stanica/citotoksičnosti, ekstrakcije i analize hormona opisane u stavcima 38. do 46. za ispitivanje kemikalija.
The QC plate contains blanks, solvent controls, and two concentrations of a known inducer (forskolin, 1, 10 μM) and inhibitor (prochloraz, 0,1, 1 μM) of E2 and T synthesis. In addition, MeOH is used in select wells as a positive control for the viability/cytotoxicity assay.
Pločica za kontrolu kvalitete sadržava praznine, kontrole otapala i dvije koncentracije poznatog induktora (forskolin, 1, 10 μM) i inhibitor (prokloraz, 0,1, 1 μM) sinteze hormona E2 i T. Osim toga, MeOH se upotrebljava u odabranim jažicama kao pozitivna kontrola za test vitalnosti/citotoksičnosti.
A detailed description of the plate layout is provided in Table 4.
Detaljan opis izgleda pločice naveden je u tablici 4.
The criteria to be met on the QC plate are listed in Table 5.
Kriteriji koje treba ispuniti na pločici za kontrolu kvalitete navedeni su u tablici 5.
The minimum basal hormone production for T and E2 should be met in both the solvent control and blank wells.
Minimalnu osnovnu proizvodnju hormona za hormone T i E2 treba postići u kontroli otapala i praznim jažicama.
After termination of the exposure experiment and removal of medium, a 70 % methanol solution will be added to all MeOH wells to serve as a positive control for cytotoxicity (see cytotoxicity assay in Appendix III to the validation report (4))
Nakon završetka pokusa s izlaganjem i uklanjanja medija, 70 %-tna otopina metanola dodat će se svim jažicama s metanolom kako bi služile kao pozitivna kontrola za citotoksičnost (vidjeti test citotoksičnosti u Dodatku III. izvješću o validaciji (4))
Blank [23]
Praznina [23]
Blank [23](+ MeOH) [24]
Praznina [23](+ MeOH) [24]
(+ MeOH) [24]
(+ MeOH) [24]
Performance criteria for the Quality Control Plate
Kriteriji učinka pločice za kontrolu kvalitete
Basal Production of hormone in the solvent control (SC)
Osnovna proizvodnja hormona u kontroli otapala
≥ 5 times the LOQ
≥ 5 puta granica kvantifikacije
≥ 2,5 times the LOQ
≥ 2,5 puta granica kvantifikacije
Induction (10 μM forskolin)
Indukcija (10 μM forskolina)
≥ 1,5 times the SC
≥ 1,5 puta kontrole otapala
≥ 7,5 times the SC
≥ 7,5 puta kontrole otapala
Inhibition (1μM prochloraz)
Inhibicija (1μM prokloraza)
≤ 0,5 times the SC
≥ 0,5 puta kontrole otapala
CHEMICAL EXPOSURE PROCEDURE
POSTUPAK IZLAGANJA KEMIKALIJI
The pre-incubated cells are removed from the incubator (paragraph 21) and checked under a microscope to assure that they are in good condition (attachment, morphology) prior to dosing.
Preinkubirane stanice uklanjaju se iz inkubatora (stavak 21.) te se prije doziranja pod mikroskopom provjerava jesu li u dobrom stanju (prianjanje, morfologija).
The cells are placed in a bio-safety cabinet and the supplemented medium removed and replaced with new supplemented medium (1 ml/well).
Stanice se stavljaju u kabinet za biološku sigurnost, uklanja se dopunjeni medij i dodaje se novi dopunjeni medij (1 ml/jažica).
DMSO is the preferred solvent for this test method.
DMSO je poželjno otapalo za ovu ispitnu metodu.