natgillin/translations-raw huggingface dataset:
However, if there are reasons for using other solvents the scientific rationale should be described.
Međutim, ako postoje razlozi za upotrebu drugih otapala, treba opisati znanstvenu podlogu.
Cells are exposed to the test chemical by adding 1 μl of the appropriate stock solution in DMSO (see Appendix II to the validation report (4)) per 1 ml supplemented medium (well volume).
Stanice se izlažu ispitivanoj kemikaliji dodavanjem 1 μl odgovarajuće osnovne otopine u DMSO-u (vidjeti Dodatak II. izvješću o validaciji (4)) po 1 ml dopunjenog medija (volumen jažice).
This results in a final concentration of 0,1 % DMSO in the wells.
Posljedica je toga konačna koncentracija od 0,1 % DMSO-a u jažicama.
To assure adequate mixing it is generally preferred that the appropriate stock solution of the test chemical in DMSO is mixed with supplemented medium to yield the desired final concentration for each dose, and the mixture added to each well immediately after removal of old medium.
Kako bi se osiguralo odgovarajuće miješanje, u pravilu je poželjno miješanje odgovarajuće osnovne otopine ispitivane kemikalije u DMSO-u s dopunjenim medijem radi postizanja željene konačne koncentracije za svaku dozu te dodavanje smjese u svaku jažicu neposredno nakon uklanjanja starog medija.
If this option is used, the concentration of DMSO (0,1 %) should remain consistent among all wells.
Ako se upotrebljava ova mogućnost, koncentracija u jažicama DMSO-a (0,1 %) trebala bi biti jednaka.
The wells containing the greatest two concentrations are visually assessed for formation of precipitates or cloudiness as an indication of incomplete solubility of the test chemical by using a stereo microscope.
Jažice s dvije najviše koncentracije vizualno se procjenjuju stereomikroskopom s obzirom na nastanak taloga ili oblaka kao pokazatelja nedovršenog otapanja ispitivane kemikalije.
If such conditions (cloudiness, formation precipitates) are observed, wells containing the next lesser concentrations are examined as well (and so forth) and concentrations that did not completely go into solution are to be excluded from further evaluation and analysis.
Ako se uoče takvi uvjeti (oblaci, nastanak taloga), pregledavaju se i jažice sa sljedećim nižim koncentracijama itd., a koncentracije koje nisu u potpunosti prešle u otopinu treba isključiti iz daljnje evaluacije i analize.
The plate is returned to the incubator at 37 °C under a 5 % CO2 in air atmosphere for 48 hours.
Pločica se vraća u inkubator na 37 °C s 5 %-tnim CO2 u zraku na 48 sati.
The test chemical plate layout is shown in Table 6.
Izgled pločice s ispitivanom kemikalijom naveden je u tablici 6.
Stocks 1 -7 show placement of increasing doses of test chemical.
Zalihe 1. do 7. predstavljaju smještaj rastućih doza ispitivane kemikalije.
Dosing schematic for the exposure of H295R cells to test chemicals in a 24 well plate
Shema doziranja za izlaganje stanica H295R ispitivanim kemikalijama na pločici s 24 jažice
Stock 4
zaliha
Stock 1
zaliha
Stock1
zaliha
Stock 5
zaliha
Stock 2
zaliha
Stock 6
zaliha
Stock 3
zaliha
Stock 7
zaliha
After 48 hours the exposure plates are removed from the incubator and every well is checked under the microscope for cell condition (attachment, morphology, degree of confluence) and signs of cytotoxicity.
Nakon 48 sati pločice za izlaganje vade se iz inkubatora te se svaka jažica provjerava pod mikroskopom kako bi se utvrdilo stanje stanica (prianjanje, morfologija, stupanj konfluencije) i znakovi citotoksičnosti.
The medium from each well is split into two equal amounts (approximately 490 μl each) and transferred to two separate vials appropriately labelled (i.e. one aliquot to provide a spare sample for each well).
Medij iz svake jažice dijeli se u dvije jednake količine (približno 490 μl svaka) i premješta u dvije zasebne, odgovarajuće označene posude (tj. jedan alikvot kao rezervni uzorak za svaku jažicu).
To prevent cells from drying out, medium is removed a row or column at a time and replaced with the medium for the cell viability/cytotoxicity assay.
Kako bi se spriječilo isušivanje stanica, medij se uklanja redak po redak ili stupac po stupac i zamjenjuje medijem za test vitalnosti stanica/citotoksičnost.
If cell viability/cytotoxicity is not to be measured immediately, 200 μl PBS with Ca2+ and Mg2+ is added to each well.
Ako se vitalnost stanica/citotoksičnost ne mjeri odmah, u svaku se jažicu dodaje 200 μl fiziološke otopine s fosfatnim pulferom s Ca2+ i Mg2+.
Immediately after removing the medium, cell viability/cytotoxicity is determined for each exposure plate.
Neposredno nakon uklanjanja medija vitalnost stanica/citotoksičnost utvrđuje se za svaku pločicu za izlaganje.
Cell Viability Determination
Utvrđivanje vitalnosti stanica
A cell viability/cytotoxicity assay of choice can be used to determine the potential impact of the test chemical on cell viability.
Radi utvrđivanja potencijalnog učinka ispitivane kemikalije na vitalnost stanica moguće je upotrijebiti test vitalnost stanica/citotoksičnosti po izboru.
The assay should be able to provide a true measure of the percentage of viable cells present in a well, or it should be demonstrated that it is directly comparable to (a linear function of) the Live/Dead® Assay (see Appendix III to the validation report (4)).
Testom bi se trebalo moći doći do podataka o pravoj vrijednosti postotka vitalnih stanica prisutnih u jažici ili treba dokazati da se on može izravno usporediti s (linearnom funkcijom) testa Live/Dead® (vidjeti Dodatak III. izvješću o validaciji (4)).
An alternative assay that has been shown to work equally well is the MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide] test (18).
Alternativni test za koji je dokazano da je jednako učinkovit test je MTT [3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difenil tetrazol bromid] (18).
The assessment of cell viability using the above methods is a relative measurement that does not necessarily exhibit linear relationships with the absolute number of cells in a well.
Procjena vitalnosti stanica s pomoću prethodno navedenih metoda relativna je vrijednost kojom se nužno ne ukazuje na linearne odnose s apsolutnim brojem stanica u jažici.
Therefore, a subjective parallel visual assessment of each well by the analyst should be conducted, and digital pictures of the SCs and the two greatest non-cytotoxic concentrations are to be taken and archived to enable later assessment of true cell density if this should be required.
Zato bi analitičar istodobno trebao obaviti subjektivnu procjenu svake jažice i zabilježiti digitalne fotografije kontrole otapala i dvije najviše necitotoksične koncentracije i pohraniti ih za kasniju procjenu stvarne gustoće stanica prema potrebi.
If by visual inspection or as demonstrated by the viability/cytotoxicity assay there appears to be an increase in cell number, the apparent increase needs to be verified.
Ako se vizualnim pregledom utvrdi ili testom vitalnosti stanica/citotoksičnosti dokaže povećanje broja stanica, to povećanje treba potvrditi.
If an increase in cell numbers is verified, this should be stated in the test report.
Ako se povećanje broja stanica potvrdi, to treba navesti u izvješću o ispitivanju.
Cell viability will be expressed relative to the average response in the SCs, which is considered 100 % viable cells, and is calculated as appropriate for the cell viability/cytotoxicity assay that is used.
Vitalnost stanica izrazit će se u odnosu na prosječnu reakciju u kontrolama otapala, što se smatra 100 % vitalnim stanicama te se izračunava prema potrebi za test vitalnost stanica/citotoksičnosti koji se upotrebljava.
For the MTT assay, the following formula may be used:
Za test MTT moguće je upotrijebiti sljedeću formulu:
% viable cells = (response in well – average response in MeOH treated [= 100 % dead] wells) ÷ (average response in SC wells – average response in MeOH treated [= 100 % dead] wells)
% vitalnih stanica = (reakcija u jažici – prosječna reakcija u jažicama tretiranima metanolom (= 100 % mrtve)) ÷ (prosječna reakcija u jažicama s kontrolom otapala – prosječna reakcija u jažicama tretiranima metanolom (= 100 % mrtve))
Wells with viability lower than 80 %, relative to the average viability in the SCs (= 100 % viability), should not be included in the final data analysis.
Stanice čija je vitalnost manja od 80 % u odnosu na prosječnu vitalnost u kontrolama otapala (= 100 % vitalnosti) ne treba uključiti u analizu konačnih podataka.
Inhibition of steroidogenesis occurring in the presence of almost 20 % cytotoxicity should be carefully evaluated to ensure that cytotoxicity is not the cause for the inhibition.
Inhibiciju steroidogeneze koja se javlja u prisutnosti gotovo 20 % citotoksičnosti treba detaljno procijeniti kako bi se osiguralo da citotoksičnost nije uzrok inhibicije.
Hormone Analysis
Analiza hormona
Each laboratory can use a hormone measurement system of its choice for the analysis of T and E2.
Svaki laboratorij za analizu hormona T i E2 može upotrebljavati sustav mjerenja hormona po izboru.
Spare aliquots of medium from each treatment group may be used to prepare dilutions to bring the concentration within the linear part of the standard curve.
Rezervne alikvote medija iz svake skupine za tretiranje moguće je upotrijebiti za pripremu otopina kako bi se koncentracija vratila unutar linearnog dijela standardne krivulje.
As noted in paragraph 29, each laboratory should demonstrate the conformance of their hormone measurement system (e.g. ELISA, RIA, LC-MS, LC-MS/MS) with the QC criteria by analysing supplemented medium spiked with an internal hormone control prior to conducting QC runs or testing of chemicals.
Kako je navedeno u stavku 29., svaki bi laboratorij trebao dokazati sukladnost svojeg sustava mjerenja hormona (npr. ELISA, RIA, LC-MS, LC-MS/MS) s kriterijima za kontrolu kvalitete analizom dopunjenog medija kojem je dodana interna kontrola hormona prije provedbe kontrole kvalitete ili ispitivanja kemikalija.
In order to ensure that the components of the test system do not interfere with measurement of hormones, the hormones may need to be extracted from the media prior to their measurement (see paragraph 30 for the conditions under which an extraction is or is not required).
Kako bi se osiguralo da sastavni dijelovi ispitnog sustava ne utječu na mjerenje hormona, hormone treba ekstrahirati iz medija prije mjerenja (vidjeti stavak 30. za uvjete u kojima ekstrakcija jest ili nije potrebna).
It is recommended to conduct extraction following the procedures in Appendix III to the validation report (4).
Preporučuje se da se ekstrakcija obavi nakon postupaka iz Dodatka III. izvješću o validaciji (4).
If a commercial test kit is being used to measure the hormone production, the hormone analysis should be conducted as specified in the manuals provided by the test kit manufacturer.
Ako se za mjerenje proizvodnje hormona upotrebljava komercijalni komplet za ispitivanje, analizu hormona treba provesti kako je navedeno u uputama koje osigurava proizvođač kompleta.
Most manufacturers have a unique procedure by which the hormone analyses are conducted.
Većina proizvođača ima jedinstveni postupak za analizu hormona.
Dilutions of samples need to be adjusted such that expected hormone concentrations for the solvent controls fall within the centre of the linear range of the standard curve of the individual assay (Appendix III to the validation report (4)).
Otopine uzoraka treba prilagoditi tako da se očekivane koncentracije hormona za kontrole otapala nalaze unutar središta linearnog raspona standardne krivulje pojedinačnog testa (Dodatak III. izvješću o validaciji (4)).
Values outside of the linear portion of the standard curve should be rejected.
Vrijednosti izvan linearnog dijela standardne krivulje treba odbaciti.
Final hormone concentrations are calculated as follows:
Konačne koncentracije hormona izračunavaju se kako slijedi:
Extracted:
Ekstrahirano:
450 μl medium
450 μl
Reconstituted in:
Rekonstruirano u:
250 μl assay buffer
250 μl testnog pufera
Dilution in Assay:
Otopina u testu:
1:10 (to bring the sample within the linear range of the standard curve)
1:10 (kako bi se uzorak nalazio unutar linearnog raspona standardne krivulje)
Hormone Concentration in Assay:
Koncentracija hormona u testu:
150 pg/ml (already adjusted to concentration per ml sample assayed)
150 pg/ml (već prilagođeno koncentraciji po ml testiranog uzorka)
Recovery:
Obnavljanje:
Final hormone concentration =
Konačna koncentracija hormona =
(Hormone concentration (per ml) ÷ recovery) (dilution factor)
(Koncentracija hormona (po ml) ÷ obnavljanje) (faktor razrjeđivanja)
(150 pg/ml) ÷ (0,89) × (250 μl/450 μl) × 10 = 936,3 pg/ml
(150 pg/ml) ÷ (0,89) × (250 μl/450 μl) × 10 = 936,3 pg/ml
Selection of test concentrations
Odabir ispitnih koncentracija
A minimum of two independent runs of the assay should be conducted.
Test treba provesti u dva neovisna pokusa.
If the results of the first run are equivocal (i.e. the fold-change is statistically significant from the SC at only one concentration) or positive (i.e. the fold change at two or more adjacent concentrations is statistically significant), the test should be repeated as indicated in Table 7 by refining the selected test concentrations.
Ako su rezultati prvog pokusa dvosmisleni (tj. promjena omjera statistički je značajna iz kontrole otapala samo kod jedne koncentracije) ili pozitivni (tj. promjena omjera pri dvije susjedne koncentracije ili više njih statistički je značajna), ispitivanje treba ponoviti kako je navedeno u tablici 7. rafiniranjem odabranih ispitnih koncentracija.
Test concentrations in runs two and three (if applicable) should be adjusted on the basis of the results of the initial run bracketing concentrations that elicited an effect using 1/2-log concentration spacing (e.g. if the original run of 0,001, 0,01, 0,1, 1, 10, 100, 1000 μM resulted in inductions at 1 and 10 μM, the concentrations tested in the second run should be 0,1, 0,3, 1, 3, 10, 30, 100 μM), unless lower concentrations need to be employed to achieve a LOEC.
Ispitne koncentracije u drugom i trećem pokusu (prema potrebi) treba prilagoditi na temelju rezultata početnog pokusa kojima se izdvajaju koncentracije kojima je postignut učinak rasporedom koncentracije polovičnog logaritma (npr. ako je prvotni pokus od 0,001, 0,01, 0,1, 1, 10, 100, 1000 μM uzrokovao indukcije pri 1 i 10 μM, koncentracije koje se ispituju u drugom pokusu trebale bi biti 0,1, 0,3, 1, 3, 10, 30, 100 μM)), osim ako su za postizanje LOEC-a potrebne niže koncentracije.
In the latter case, at least five concentrations below the lowest concentration tested in the first run should be used in the second run using a 1/2-log scale.
U potonjem slučaju u drugom pokusu treba s pomoću skale polovičnog logaritma upotrijebiti najmanje pet koncentracija ispod najniže koncentracije ispitivane u prvom pokusu.
If the second run does not confirm the first run (i.e. statistical significance does not occur at the previously positively tested Live/Deadconcentration ± 1 concentration-increment), a third experiment is to be conducted using the original testing conditions.
Ako se prvi pokus ne potvrdi drugim (tj. statistički značaj ne pojavljuje se kod prethodno pozitivno ispitanoj koncentraciji ± 1 pomak koncentracije), treba provesti treći pokus u izvornim uvjetima ispitivanja.
Equivocal results in the first run are considered negative if the observed effect could not be confirmed in any of the two subsequent runs.
Dvosmisleni rezultati u prvom pokusu smatraju se negativnima ako uočeni učinak nije moguće potvrditi u bilo kojem od dvaju naknadnih pokusa.
Equivocal results are considered as positive responses (effect) when the response can be confirmed in at least one more run within a ± 1 concentration increment (see section 55 for the Data Interpretation Procedure).
Dvosmisleni rezultati smatraju se pozitivnim reakcijama (pozitivnim učinkom) ako je reakciju moguće potvrditi u barem još jednom pokusu unutar pomaka koncentracije ± 1 (vidjeti odjeljak 55. za postupak tumačenja podataka).
Decision matrix for possible outcome scenarios
Matrica odluke za moguće scenarije ishoda
Run 1
pokus
Run 2
pokus
Run 3
pokus
Confirm [26]
Potvrditi [26]
Stop
Zaustavljanje
Refine [27]
Rafinirati [27]
Equivocal [28]
Dvosmislen [28]
Quality Control of the Test Plate
Kontrola kvalitete ispitne pločice
In addition to meeting the criteria for the QC plate, other quality criteria that pertain to acceptable variation between replicate wells, replicate experiments, linearity and sensitivity of hormone measurement systems, variability between replicate hormone measures of the same sample, and percentage recovery of hormone spikes after extraction of medium (if applicable; see Paragraph 30 regarding extraction requirements) should be met and are provided in Table 8.
Osim sukladnosti s kriterijima pločice za kontrolu kvalitete, treba ispuniti i ostale kriterije u pogledu kvalitete navedene u tablici 8. koji se odnose na prihvatljivu varijaciju između ponovljenih jažica, ponovljene pokuse, linearnost i osjetljivost sustava mjerenja hormona, varijabilnost između ponovljenih vrijednosti hormona istog uzorka te postotak obnavljanja hormonskih dodataka nakon ekstrakcije medija (prema potrebi; vidjeti stavak 30. o zahtjevima u pogledu ekstrakcije).
Data should fall within the acceptable ranges defined for each parameter to be considered for further evaluation.
Podaci bi se trebali kretati unutar prihvatljivih raspona utvrđenih za svaki parametar da bi se razmatrali za daljnju evaluaciju.
If these criteria are not met, the spreadsheet should note that QC criteria were not met for the sample in question, and the sample should be re-analysed or dropped from the data set.
Ako ti kriteriji nisu ispunjeni, u tabelarni prikaz treba unijeti da za predmetni uzorak nisu ispunjeni kriteriji za kontrolu kvalitete te uzorak treba ponovno analizirati ili izostaviti iz podataka.
Acceptable ranges and/or variation (%) for H295R assay test plate parameters.
Prihvatljivi rasponi i/ili varijacije (%) za parametre pločica testa H295R.
(LOQ: Limit of Quantification of the hormone measurement system. CV: Coefficient of variation; SC: Solvent Control; DPM: Disintegrations per minute)
LOQ: granica kvantifikacije sustava mjerenja hormona. CV:
Comparison Between
koeficijent varijacije;
Basal hormone production in SCs
dezintegracije po minuti Usporedba između T E2
Fold-greater than LOQ
Osnovna proizvodnja hormona u kontrolama otapala Omjer veći od granice kvantifikacije
≥ 5-fold
≥ 5-struko
≥ 2,5-fold
≥ 2,5-struko
Exposure Experiments — Within Plate CV for SCs (Replicate Wells)
Pokusi izlaganja – unutar CV-a pločice za SC-ove (ponovljene jažice)
Absolute Concentrations
Apsolutne koncentracije
Exposure Experiments — Between Plate CV for SCs (Replicate Experiments)
Pokusi izlaganja – između CV-a pločice za SC-ove (ponovljeni pokusi)
Fold-Change
Promjena omjera
Hormone Measurement System — Sensitivity
Sustav mjerenja hormona – osjetljivost
Detectable fold-decrease relative to SC
Vidljivo smanjenje omjera u odnosu na SC-ove
Hormone Measurement System — Replicate Measure CV for SCs [29]
Sustav mjerenja hormona – CV ponovljenog mjerenja za SC-ove [29]
Medium Extraction — Recovery of Internal 3H Standard (If Applicable)
Ekstrakcija medija – obnavljanje internog standarda 3H (prema potrebi)
≥ 65 % Nominal
≥ 65 % nominalno
DATA ANALYSIS AND REPORTING
ANALIZA PODATAKA I IZVJEŠĆIVANJE
Data Analysis
Analiza podataka
To evaluate the relative increase/decrease in chemically altered hormone production, the results should be normalised to the mean SC value of each test plate, and results expressed as changes relative to the SC in each test plate.
Radi evaluacije relativnog povećanja/smanjenja kemijski izmijenjene proizvodnje hormona rezultate treba svesti na srednju vrijednost kontrole otapala svake ispitne pločice te ih izraziti kao promjene u odnosu na kontrolu otapala u svakoj ispitnoj pločici.
All data are to be expressed as mean ± 1 standard deviation (SD).
Sve podatke treba izraziti kao srednje ± 1 standardno odstupanje.
Only hormone data from wells where cytotoxicity was less than 20 % should be included in the data analysis.
U analizu podataka treba uključiti samo podatke o hormonima iz jažica u kojima je citotoksičnost bila manja od 20 %.
Relative changes should be calculated as follows:
Relativne promjene treba računati kako slijedi:
Relative Change = (Hormone concentration in each well) ÷ (Mean hormone concentration in all solvent control well).
Relativna promjena = (koncentracija hormona u svakoj jažici) ÷ (srednja koncentracija hormona u svim jažicama kontrole otapala).
If by visual inspection of the well or as demonstrated by the viability/cytotoxicity assay described in paragraph 42 there appears to be an increase in cell number, the apparent increase needs to be verified.
Ako se vizualnim pregledom jažice utvrdi ili testom vitalnosti stanica/citotoksičnosti opisanim u stavku 42. dokaže povećanje broja stanica, to povećanje treba potvrditi.
Prior to conducting statistical analyses, the assumptions of normality and variance homogeneity should be evaluated.
Pretpostavke o normalnosti i homogenosti varijanci treba procijeniti prije provođenja statističkih analiza.
Normality should be evaluated using standard probability plots or other appropriate statistical method (e.g. Shapiro-Wilk's test).
Normalnost treba procijeniti s pomoću ploha standardne vjerojatnosti ili druge odgovarajuće statističke metode (npr. Shapiro-Wilkov test).
If the data (fold changes) are not normally distributed, transformation of the data should be attempted to approximate a normal distribution.
Ako podaci (promjene omjera) nisu normalno distribuirani, treba pokušati transformaciju podataka radi približavanja normalnoj distribuciji.
If the data are normally distributed or approximate a normal distribution, differences between chemical concentration groups and SCs should be analysed using a parametric test (e.g. Dunnett's Test) with concentration being the independent, and response (fold-change) being the dependent variable.
Ako su podaci normalno distribuirani ili blizu normalnoj distribuciji, razlike između skupina koncentracije kemikalije i kontrola otapala treba analizirati s pomoću parametrijskog testa (npr. Dunnettov test) pri čemu je koncentracija neovisna, a reakcija (promjena omjera) ovisna varijabla.
If data are not normally distributed, an appropriate non-parametric test should be used (e.g. Kruskal Wallis, Steel's Many-one rank test).
Ako podaci nisu normalno distribuirani, treba upotrijebiti neparametarski test (npr. Kruskal-Wallisov test, Steelov Many-one rank test).
Differences are considered significant at p ≤ 0,05.
Razlike se smatraju bitnima pri p ≤ 0,05.
Statistical evaluations are done based on average values for each well that represent independent replicate data points.
Statističke procjene daju se na temelju prosječnih vrijednosti za svaku jažicu koja predstavlja neovisne ponovljene točke podataka.
It is anticipated that due to the large spacing of doses in the first run (log10 scale) in many cases it will not be possible to describe clear concentration-response relationships where the two greatest doses will be on the linear portion of the sigmoid curve.
Očekuje se da zbog velikog razmaka između doza u prvom pokusu (skala log10) u brojnim slučajevima neće biti moguće opisati jasne odnose između koncentracije i doze kad se dvije najviše doze nalaze na linearnom dijelu sigmoidne krivulje.
Therefore, for the first run or any other data sets where this condition occurs (e.g. where no maximum efficacy can be estimated) type I fixed variable statistics as described above will be applied.
Zato će se za prvi pokus i sve ostale komplete podataka u takvom slučaju (npr. kad nije moguće procijeniti maksimalnu efikasnost) primijeniti gore opisana statistika fiksne varijable vrste I.