natgillin/translations-raw huggingface dataset:
All these data can be compared to available data from the validation studies (1, 2, 3) to ensure laboratory proficiency.
Alusta on suunniteltava siten, että kaikki mätimunat, jotka eivät kiinnity laatan pintaan ja putoaisivat muutoin astian pohjalle, jäävät sille (samoin kuin munat, jotka lasketaan suoraan sileälle muovialustalle).
In general, VTG measurements should be considered positive if there is a statistically significant increase in VTG in males (p < 0,05), or a statistically significant decrease in females (p < 0,05) at least at the highest dose tested compared to the control group, and in the absence of signs of general toxicity.
Kaikkia kutualustoja on huuhdeltava vähintään 12 tuntia laimennusvedessä ennen käyttöä.
A positive result is further supported by the demonstration of a biologically plausible relationship between the dose and the response curve.
Lisäys 5A
As mentioned earlier, the VTG decrease may not entirely be of endocrine origin; however a positive result should generally be interpreted as evidence of endocrine activity in vivo, and should normally initiate actions for further clarification.
RASVAPÄÄMUDUN SEKUNDAARISTEN SUKUPUOLIOMINAISUUKSIEN ARVIOINTI TIETTYJEN HORMONIJÄRJESTELMÄÄN VAIKUTTAVIEN KEMIKAALIEN HAVAITSEMISEKSI
Gonadal histopathology evaluation may be required by regulatory authorities to determine the reproductive fitness of the test animals and to allow a weight of evidence assessment of the test results.
Yleiskatsaus
Performance of gonadal histopathology may not be necessary in cases where either, VTG or secondary sex characteristics is positive (i.e. VTG increase or decrease, or induction of secondary sex characteristics).
Hormonitoimintaa häiritsevien aineiden testauksessa mahdollisesti tärkeitä fyysiseen ulkonäköön liittyviä piirteitä täysikasvuisilla rasvapäämuduilla ovat väri (vaalea/tumma), värityskuviot (onko esimerkiksi pystysuoria raitoja vai ei), kalan muoto (pään ja rinnan alueen muoto, vatsan pullistuneisuus) sekä erikoistuneet sekundaariset sukupuoliominaisuudet (kutukyhmyjen lukumäärä ja koko, niskakyhmyn koko, munanasetin).
OECD (2006b).
Kutukyhmyt sijaitsevat sukukypsien rasvapäämutukoiraiden päässä (niskakyhmyssä), ja ne ovat useimmiten järjestäytyneet molemmin puolin symmetriseksi kuvioksi (Jensen ja muut 2001).
OECD (2007).
Kontrollinaarailla sekä nuorilla koirailla ja naarailla kyhmyt eivät ole kehittyneet (Jensen ja muut 2001).
Owens JW (2007).
Koiraiden silmien ympärillä ja sierainten välissä voi olla jopa kahdeksan yksittäistä kyhmyä.
OECD (2008).
Monilla kaloilla kyhmyryhmiä on alaleuan alapuolella.
Sumpter J.P. and S. Jobling (1995).
Suuta lähimpänä sijaitsee yleensä yksittäinen kyhmypari, kun taas lähempänä vatsapuolta voi olla jopa neljästä kyhmystä muodostuva sarja.
Ankley G.T., et al.
Useimmilla sukukypsillä koirailla on ainakin joitakin kyhmyjä, jotka ovat siinä määrin laajentuneita ja korostuneita, ettei niistä voi erottaa yksittäisiä rakenteita.
Part C Pharmacology, toxicology and endocrinology; 123(2):113-25.
Jäljempänä on kuvaus rasvapäämutujen kutukyhmyjen luonnehdinnasta, joka perustuu Yhdysvaltain ympäristönsuojeluviraston laboratoriossa (Duluth, MN) käytettyihin menettelyihin.
Application of an ELISA to quantify vitellogenin concentrations in fathead minnows (Pimephales promelas) exposed to endocrine disrupting chemicals.
Tietyt tuotteet ja/tai laitteet voidaan korvata saatavilla olevilla samantyyppisillä materiaaleilla.
CEFIC-EMSG research report reference AQ001.
Kalojen tutkimisessa on parhainta käyttää valollista suurennuslasia tai valollista dissektiomikroskooppia (3X).
CEFIC, Brussels, Belgium.
Tutki kalaa selkäpuolelta ja siten, että sen etupää on eteenpäin (pää tutkijaa kohti).
Fenske M., et al.
Aseta kala pieneen petrimaljaan (halkaisija esimerkiksi 100 mm) etupää eteenpäin ja vatsapuoli alaspäin.
Development and validation of a homologous zebrafish (Danio rerio Hamilton- Buchanan) vitellogenin enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and its application for studies on estrogenic chemicals.
Tarkenna etsintä, jotta pystyt tunnistamaan kyhmyt.
Comp.
Käännä kalaa varovasti ja hitaasti puolelta toiselle kyhmyalueiden tunnistamiseksi.
Biochem.
Laske ja pisteytä kyhmyt.
Phys.
Tutki myös pään pinta vatsapuolelta asettamalla kala petrimaljaan selkäpuoli alaspäin etupää eteenpäin.
C 129 (3): 217-232.
Jokaisen kalan tutkimus on tehtävä kahdessa minuutissa.
Holbech H., et al.
Kyhmyjen laskeminen ja arviointi
Development of an ELISA for vitellogenin in whole body homogenate of zebrafish (Danio rerio).
Täysikasvuisilta rasvapäämuduilta on tunnistettu kuusi aluetta, joilla kyhmyjen esiintymistä ja kehittymistä voidaan arvioida.
Comparative Biochemistry and Physiology.
On laadittu myös malli, johon kyhmyjen sijainti ja lukumäärä voidaan merkitä (ks. tämän lisäyksen loppu).
Part C Pharmacology, toxicology and endocrinology; 130: 119-131 (16) Rose J., et al.
Kyhmyjen lukumäärä merkitään muistiin, ja niiden kokoa voidaan arvioida määrällisesti seuraavasti: 0 – ei kyhmyjä, 1 – kyhmyjä, 2 – laajentuneita kyhmyjä ja 3 – korostuneita kyhmyjä kunkin organismin osalta (kuva 1).
Vitellogenin induction by 17β-estradiol and 17α-ethinylestradiol in male zebrafish (Danio rerio).
Luokka 0 – kyhmyjä ei ole.
C 131: 531-539.
Luokka 1 – kyhmyjä: tähän luokkaan kuuluvat kaikki kyhmyt, joissa on yksi piste, jonka korkeus on miltei sama kuin sen säde.
Brion F., et al.
Luokka 2 – laajentuneita kyhmyjä: Tähän luokkaan kuuluu sellainen kudos, jonka ulkonäkö muistuttaa asteriskia.
Development and validation of an enzyme-linked immunosorbent assay to measure vitellogenin in the zebrafish (Danio rerio).
Tällaisessa kyhmyssä on yleensä laaja säteittäinen pohja, jossa on keskeltä reunoille päin suuntautuvia uria tai vakoja.
Environmental Toxicology and Chemistry; vol 21: 1699-1708.
Kyhmyn huippu on usein muita epätasaisempi, mutta joskus se voi olla myös hieman pyöristynyt.
Yokota H., et al.
Luokka 3 – korostunut: Tähän luokkaan kuuluvat kyhmyt ovat tavallisesti varsin suuria ja pyöreitä, ja niiden rakenne on muita epäselvempi.
Development of an ELISA for determination of the hepatic vitellogenin in Medaka (Oryzias latipes).
Toisinaan tällaiset kyhmyt yhtyvät muodostaen yhtenäisen massan yhdelle alueelle tai useammalle alueelle (B, C ja D, kuvattu jäljempänä).
Jpn J Environ Toxicol 4:87–98.
Kyhmyjen väri ja muoto vastaavat luokkaa 2, mutta joskus ne ovat melko epämääräisiä.
(19) Tatarazako N., et al.
Tätä arviointimenetelmää käyttämällä kyhmyjen kokonaispistemäärä on yleensä < 50 normaalilla kontrollikoiraalla, jolla on 18–20 kutukyhmyä (Jensen ja muut 2001).
Journal of Health Science 50:301-308.
Joidenkin kalojen kutukyhmyjen todellinen määrä voi olla suurempi kuin mallin ruuduissa tietyllä pisteytysalueella.
Effects of the androgenic growth promoter 17-beta-trenbolone on fecundity and reproductive endocrinology of the fathead minnow.
Jos näin on, pisteytysnumeroita voi lisätä laatikon oikealle tai vasemmalle puolelle.
Environmental Toxicology and Chemistry; 22(6): 1350-60.
Mallin ei siis tarvitse näyttää symmetriseltä.
Seki M, et al (2004).
Toinen tapa merkitä muistiin parilliset kyhmyt tai sellaiset kyhmyt, jotka ovat yhtyneet pystysuunnassa yhteen suun vaakasuuntaista tasoa pitkin, on merkitä yhteen ruutuun kahdet arviointipisteet.
Fish full life-cycle testing for androgen methyltestosterone on medaka (Oryzias latipes).
Merkitsemisalueet:
OECD (2010).
A – Silmän ympärillä sijaitsevat kyhmyt.
Guidance Document on Fish Gonadal Histopathology.
Merkitään selkäpuolelta vatsan puolelle silmän etureunan ympäriltä.
OECD Environmental Health and Safety Publications Series on Testing and Assessment No. 123, Paris.
Sukukypsillä kontrollikoirailla näitä on tavallisesti useita; kontrollinaarailla näitä ei ole; androgeeneille altistuneilla naarailla on yleensä yksi pari kyhmyjä (yksi kummankin silmän lähellä) tai yksittäinen kyhmy.
OECD (2000) Guidance Document on Aquatic Toxicity Testing of Difficult Substances and Mixtures.
B-Sierainten (aistikanavahuokosten) välissä sijaitsevat kyhmyt.
Paris
Kontrollikoirailla ne ovat yleensä parilliset, kehittyneet ylemmän luokituksen (2 – laajentuneet kyhmyt tai 3 – korostuneet kyhmyt) mukaan.
Hutchinson T.H., et al.
Kontrollinaarailla näitä kyhmyjä ei ole; androgeeneille altistuneilla naarailla niitä voi esiintyä ja kehittyä jonkin verran.
Aquatic Toxicology, 76; pp.69–92.
C – Sierainten edessä suun vieressä sijaitsevat kyhmyt.
(2006b).
Sukukypsillä kontrollikoirailla ne ovat yleensä laajentuneet tai korostuneet.
Screening and testing for endocrine disruption in fish-biomarkers as “signposts”, not “traffic lights,” in risk assessment.
Nuoremmilla koirailla tai androgeenikäsitellyillä naarailla näitä esiintyy, voivat olla laajentuneita.
Environmental Health Perspectives; 114 Suppl 1:106-14.
D – Suulinjan suuntaisesti sijaitsevat kyhmyt.
Miles-Richardson S.R., et al.
Arvioidaan yleensä kehittyneiksi kontrollikoirailla.
Effects of waterborne exposure to 17β-estradiol on secondary sex characteristics and gonads of the fathead minnow (Pimephales promelas).
Näitä kyhmyjä ei ole kontrollinaarailla, kun taas androgeeneille altistuneilla naarailla niitä on.
Aquat.
E – Alaleuassa suun lähellä sijaitsevat kyhmyt, jotka ovat yleensä pieniä ja tavallisesti pareittain.
Toxicol.
Niitä esiintyy vaihtelevasti kontrollikoirailla tai käsitellyillä koirailla sekä käsitellyillä naarailla.
47, 129-145.
F – Alaleuassa E:stä vatsaan päin sijaitsevat kyhmyt, jotka ovat yleensä pieniä ja tavallisesti pareittain.
Martinovic D., et al.
Niitän esiintyy kontrollikoirailla ja androgeeneille altistuneilla naarailla.
Characterization of reproductive toxicity of vinclozolin in the fathead minnow and co-treatment with an androgen to confirm an anti-androgenic mode of action.
Kyhmyjen kirjaamismalli:
Environ.
Numeerinen pisteytys
Toxicol.
Päiväys
Chem.
1 – esiintyy
27, 478-488.
Kokonaispistemäärä
OECD (2006c), Current Approaches in the Statistical Analysis of Ecotoxicity Data: A Guidance to Application, OECD Environmental Health and Safety Publications, Series on Testing and Assessment No.54, OECD, Paris.
2 – laajentuneet
(29) US EPA (2008), Peer-Review Results for the Fish Short-Term Reproduction Assay, dated 30 January 2008, US Environmental Protection Agency, Washington DC.
3 – korostuneet
OECD (2012), OECD Conceptual Framework for Testing and Assessment of Endocrine Disrupters, OECD Environmental Health and Safety Publications, Series on Testing and Assessment No. 150, OECD, Paris.
Lisäys 5B
ABBREVIATIONS & DEFINITIONS:
MEDAKAN SEKUNDAARISTEN SUKUPUOLIOMINAISUUKSIEN ARVIOINTI TIETTYJEN HORMONIJÄRJESTELMÄÄN VAIKUTTAVIEN KEMIKAALIEN HAVAITSEMISEKSI
a substance or a mixture
Jäljempänä on kuvaus sukuelinpapilleista [1], jotka ovat sekundaarisia sukupuoliominaisuuksia medakalla (Oryzias latipes).
coefficient of variation
Maksan poistamisen (lisäys 6) jälkeen kalan ruumis asetetaan kartiomaiseen putkeen (pää ylöspäin, pyrstö alaspäin), joka sisältää noin 10 ml 10-prosenttista neutraalia puskuroitua formaliinia.
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay
Jos sukurauhanen on kiinnitetty muuhun kuin 10-prosenttisella neutraalilla puskuroituun formaliiniin, leikkaa ruumis partaterällä poikittain peräevän etuosan ja peräaukon välistä varovasti, jotta gonopori ja sukurauhanen eivät vaurioidu (kuva 3).
HPG axis
Laita kalan ruumiin kallonpuoleinen osa kiinnitysliuokseen sukurauhasen säilömiseksi ja pyrstönpuoleinen osa 10-prosenttiseen neutraaliin puskuroituun formaliiniin edellä kuvatun mukaisesti.
hypothalamic-pituitary-gonadal axis
Kun kalan ruumis on laitettu 10-prosenttiseen neutraaliin puskuroituun formaliiniin, tartu peräevän etuosaan pinseteillä ja pidä sitä taitettuna noin 30 sekunnin ajan, jotta peräevä pysyy auki.
Loading rate
Kun tartut peräevään pinseteillä, käsittele etuosan eväpoimuja varovasti, jotta sukuelinpapillit eivät vaurioidu.
the wet weight of fish per volume of water.
Kun peräevä on ollut auki noin 30 sekunnin ajan, laita kalan ruumis 10-prosenttiseen neutraaliin puskuroituun formaliiniin ja säilytä sitä huoneenlämmössä sukuelinpapillien mittaukseen saakka (mittaus on tehdaan, kun kiinnityksestä on kulunut vähintään 24 tuntia).
MTC
Mittaus
Maximum Tolerated Concentration, representing about 10 % of the LC50
Kun kalan ruumis on ollut kiinnitettynä 10-prosenttiseen neutraaliin puskuroituun formaliiniin vähintään 24 tuntia, ota se pois kartiomaisesta putkesta ja pyyhi formaliini suodatinpaperiin (tai paperipyyhkeeseen).
Stocking density
Aseta kala pöydälle vatsapuoli ylöspäin.
is the number of fish per volume of water.
Irrota peräevä varovasti pienillä dissektiosaksilla (peräevä kannattaa leikata siten, että sen mukana tulee myös hieman rintaevän tukiluuta).
vitellogenin is a phospholipoglycoprotein precursor to egg yolk protein that normally occurs in sexually active females of all oviparous species.
Tartu irrotetun peräevän etuosaan pinseteillä ja aseta muutamin vesitipoin kostutetulle lasilevylle.
EXPERIMENTAL CONDITIONS FOR THE FISH ENDOCRINE SCREENING ASSAY
Peitä peräevä peitinlasilla.
(Pimephales promelas)
Kun tartut peräevään pinseteillä, ole varovainen, etteivät sukuelinpapillit vaurioidu.
Medaka (Oryzias latipes)
Laske niiden liitoslevyjen määrä, joissa on sukuelinpapilleja, käyttämällä biomikroskoopin näytetasoa (pystymikroskooppi tai käänteismikroskooppi).
Test type
Sukuelinpapillit ovat tunnistettavissa liitoslevyn takaosassa näkyvästä pienestä papillimuodostelmasta.
Flow-through
Merkitse kunkin eväpoimun liitoslevyssä olevien sukuelinpapillien määrä lomakkeeseen (ts. ensimmäinen eväpoimu: 0, toinen eväpoimu: 10, kolmas eväpoimu: 12 jne.) ja kirjoita kokonaislukumäärä Excel-työkirjaan kunkin yksittäisen kalan osalta.
Water temperature
Ota peräevästä tarvittaessa valokuva ja laske siitä niiden liitoslevyjen lukumäärä, joissa on sukuelinpapilleja.
Illumination quality
Laita peräevä mittauksen jälkeen 1 kohdassa kuvattuun kartioputkeen ja varastoi se.
Fluorescent bulbs (wide spectrum)
Kuva 1.
Light intensity
Piirros, josta näkee peräevän muotoon ja kokoon liittyvät sukupuolierot.
10-20 μE/m2/s, 540-1000 lux, or 50-100 ft-c (ambient laboratory levels)
A, uros; B, naaras.
Photoperiod (dawn / dusk transitions are optional, however not considered necessary) 16 h light, 8 h dark
Kuva 2.
12-16 h light, 12-8 h dark
A: Peräevän eväpoimun liitoslevyissä olevia sukuelinpapilleja.
< 5 g per l
J.P.
Test chamber size
= liitoslevy; A.S. = aksiaalinen väli; P. = papilli.
10 l (minimum)
B: Eväpoimun distaalinen pää.
2 l (minimum)
Actinotrichium-säikeet (Act.) ovat kärjessä.
5 l (minimum)
Kuva 3.
Test solution volume
Kuva kalan ruumiista, jossa näkyy leikkauskohta, kun sukurauhanen on kiinnitetty muulla kuin 10-prosenttisella neutraalilla puskuroidulla formaliinilla.
8 l (minimum)
Tässä tapauksessa jäljellä oleva ruumis leikataan kahtia peräevän etuosan ja peräaukon välistä partaterällä (punainen viiva).
1,5 l (minimum)
Kalan ruumiin päänpuoleinen osa laitetaan sukurauhasen kiinnitysliuokseen ja pyrstöosa 10-prosenttiseen neutraaliin puskuroituun formaliiniin.
4 l (minimum)
Sukuelinpapilleja on yleensä vain täysikasvuisilla koirailla, ja ne sijaitsevat toisen ja seitsemännen tai kahdeksannen eväpoimun välissä peräevän takapäästä laskettuna (kuvat 1 ja 2).
Volume exchanges of test solutions
Papilleja on kuitenkin harvoin peräevän takapäästä katsottuna ensimmäisessä eväpoimussa.
Minimum of 6 daily
Tämä menettelytapaohje kattaa ensimmäisessä eväpoimussa olevien papillien mittauksen (tässä ohjeessa eväpoimun numero tarkoittaa poimujen järjestystä peräevän takapäästä katsottuna).
Minimum of 5 daily
SUOSITELLUT NÄYTTEENOTTOMENETELMÄT VITELLOGENIINIANALYYSIA VARTEN
Age of test organisms
Näytteenotossa on oltava huolellinen koiraiden ja naaraiden vitellogeniininäytteiden välisen ristikontaminaation välttämiseksi.
See paragraph 21
Menetelmä 1A:
Approximate wet weight of adult fish (g)
Rasvapäämutu, verinäytteen otto pyrstösuonesta
Females: 1,5 ± 20 %
Nukutuksen jälkeen pyrstö leikataan osittain auki skalpellilla ja verinäyte otetaan pyrstösuonesta heparinisoituun mikrohematokriittikapillaariputkeen.
Males: 2,5 ± 20 %
Kun verinäyte on otettu, plasma eristetään nopeasti sentrifugoimalla näytettä kolme minuuttia g-arvolla 15000 (tai 4 °C:n lämpötilassa 10 minuuttia g-arvolla 15000).
Females: 0,35 ± 20 %
Haluttaessa hematokriittien prosenttiosuus voidaan määrittää sentrifugoinnin jälkeen.
Males: 0,35 ± 20 %
Sen jälkeen plasma poistetaan mikrohematokriittiputkesta ja sitä säilytetään – 80 °C:n lämpötilassa sentrifugiputkessa, jossa on 0,13 yksikköä aprotiniinia (proteaasin estäjää), siihen saakka, kunnes vitellogeniinimääritys voidaan tehdä.
Females: 0,65 ± 20 %
Rasvapäämudun (sukupuolen mukaan määräytyvän) koon mukaan kerättävä plasmamäärä on yleensä 5–60 mikrolitraa kalaa kohti (Jensen ja muut 2001).
Males: 0,4 ± 20 %
Menetelmä 1B:
No. of fish per test vessel
Rasvapäämutu, verinäytteen otto sydämestä
6 (2 males and 4 females)
Verinäyte voidaan ottaa vaihtoehtoisesti myös sydänpunktiolla, jossa käytetään heparinisoitua ruiskua (1000 yksikköä hepariinia millilitrassa).
6 (3 males and 3 females)
Veri siirretään Eppendorf-putkiin (jotka pidetään jäällä) ja sentrifugoidaan (5 minuuttia, g-arvo 7000, huonelämpötila).
10 (5 males and 5 females)
Plasma on siirrettävä puhtaisiin Eppendorf-putkiin (alikvooteissa, jos se on plasman tilavuuden perusteella mahdollista) ja jäädytettävä nopeasti – 80 °C:seen, jossa sitä säilytetään analysointiin saakka (Panter ja muut 1998).
No. of treatments
Menetelmä 2A:
= 3 (plus appropriate controls)
Medaka, maksan poisto
No. vessels per treatment
Kalan ottaminen pois testiastiasta
4 minimum
Kala otetaan pois testiastiasta pienen haavin avulla.
2 minimum
Ole varovainen, ettei kala putoa muihin testiastioihin.
No. of fish per test concentration
Periaatteessa kalat on otettava pois astioista seuraavassa järjestyksessä: kontrolli, liuotinkontrolli (tarvittaessa), pienin pitoisuus, keskisuuri pitoisuus, suurin pitoisuus ja positiivinen kontrolli.
16 adult females and 8 males (4 females and 2 males in each replicate vessel)
Lisäksi kaikki koiraat on otettava pois kustakin testiastiasta ennen naaraita.
12 adult females and 12 males (3 females and 3 males in each replicate vessel)
Kunkin kalan sukupuoli on tunnistettavissa ulkoisten sekundaaristen sukupuoliominaisuuksien (kuten peräevän muodon) perusteella.
10 adult females and 10 males (5 females and 5 males in each replicate vessel)
Laita kala kuljetussäiliöön ja vie se työpisteeseen, jossa maksan poisto tehdään.
Feeding regime
Tarkista testiastian ja kuljetussäiliön merkintöjen oikeellisuus, jotta voit vahvistaa, että testiastiasta otettujen ja siihen jääneiden kalojen lukumäärät ovat odotuksenmukaisia.
Live or frozen adult or nauplii brine shrimp two or three times daily (ad libitum), commercially available food or a combination of the above
Jos kalan sukupuolta ei voi määrittää ulkonäön perusteella, ota kaikki kalat pois testiastiasta.
Brine shrimp nauplii two or three times daily (ad libitum), commercially available food or a combination of the above
Tässä tapauksessa sukupuoli on määritettävä tutkimalla sukurauhasia tai sekundaarisia sukupuoliominaisuuksia stereomikroskoopilla.
Brine shrimp nauplii two or three times daily (ad libitum),commercially available food or a combination of the above
Maksan poistaminen
None unless DO concentration falls below 60 % air saturation
Siirrä kala kuljetussäiliöstä nukutusliuokseen pienen haavin avulla.
Dilution water
Kun kala on nukutettu, siirrä se suodatinpaperin (tai paperipyyhkeen) päälle (tavallisilla) pinseteillä.
Clean surface, well or reconstituted water or dechlorinated tap water
Tartu pinseteillä kalaan sen pään molemmin puolin, jotta pyrstöosa ei rikkoonnu.
Pre- exposure period
Kuivaa kalan pinta vedestä suodatinpaperiin (tai paperipyyhkeeseen).
7-14 days recommended
Tee sen jälkeen dissektiosaksilla pieni poikittainen viilto vatsan puolelle kaulan alueen ja vatsan keskiosan väliin.
Chemical exposure duration
Laita dissektiosakset pienen viillon sisään ja avaa vatsa keskiviivaa pitkin kiduskannen pyrstönpuoleisesta päästä peräaukon kallonpuoleiseen päähän.
Biological endpoints
Varo työntämästä saksia liian syvälle, jotta maksa ja sukurauhanen eivät vaurioidu.
survival
Tee seuraavat toimenpiteet stereomikroskoopin avulla.
behaviour
Laita kala vatsapuoli ylöspäin paperipyyhkeen päälle (myös lasista petrimaljaa tai lasista näytelevyä voi käyttää).
fecundity
Levitä vatsaontelon seinämiä tarkkuuspinseteillä, jotta saat sisäelimet esiin.
sex characteristics
Sisäelimet voi ottaa esiin myös poistamalla toisen puolen vatsaontelon seinämästä, jos tarpeen.
optionally gonadal histopathology
Ota maksan ja sappirakon yhtyneet osat esiin käyttämällä toista tarkkuuspinsettiparia.
Test acceptability
Tartu sappitiehen ja leikkaa sappirakko irti.
Dissolved oxygen ≥ 60 % of saturation; mean temperature of 25 ± 2 °C; 90 % survival of fish in the controls; measured test concentrations within 20 % of mean measured values per treatment level.
Ole varovainen, jotta sappirakko ei mene rikki.
Dissolved oxygen ≥ 60 % of saturation; mean temperature of 26 ± 2 °C; 90 % survival of fish in the controls; measured test concentrations within 20 % of mean measured values per treatment level.
Tartu sen jälkeen ruokatorveen ja leikkaa ruoansulatuskanava irti maksasta samalla tavalla.
SOME CHEMICAL CHARACTERISTICS OF ACCEPTABLE DILUTION WATER
Ole varovainen, jotta ruoansulatuskanavan sisältö ei vuoda ulos.
COMPONENT
Irrota ruoansulatuskanavan pyrstönpuoleinen osa peräaukosta ja ota kanava pois vatsaontelosta.
CONCENTRATIONS
Poista rasva ja muut kudokset maksan reunoilta.
< 20 mg/l
Varo naarmuttamasta maksaa.
< 2 mg/l
Tartu maksan porttialueeseen tarkkuuspinseteillä ja ota maksa pois vatsaontelosta.
Unionised ammonia
Aseta maksa näytelevylle.
< 1 μg/l
Poista tarvittaessa maksan pinnalta tarkkuuspinseteillä kaikki mahdollinen rasva ja ulkopuoliset kudokset (esimerkiksi vatsakalvo).
< 10 μg/l
Punnitse maksa elektronisella analyysivaa'alla käyttäen 1,5 ml:n mikroputkea taarana.
Total organophosphorus pesticides
Merkitse paino lomakkeeseen (lukema: 0,1 mg).
< 50 ng/l
Varmista, että mikroputken etiketissä on oikeat tiedot.
< 25 ng/l
Sulje maksan sisältävä mikroputki tulpalla.
Appendix 4A
Aseta putki jäähdytystelineeseen (tai jäätelineeseen).
SPAWNING SUBSTRATE FOR ZEBRAFISH
Kun yhdeltä kalalta on poistettu maksa, puhdista dissektiovälineet tai vaihda ne puhtaisiin.
Spawning tray
Poista maksa kaikilta kuljetussäiliössä olevilta kaloilta edellä kuvatulla tavalla.
all glass instrument dish, for example 22 × 15 × 5,5 cm (l × w × d), covered with a removable stainless steel wire lattice (mesh width 2mm).
Kun kaikilta kuljetussäiliön kaloilta (ts. kaikilta testiastian koirailta tai naarailta) on poistettu maksa, laita kaikki maksanäytteet putkitelineeseen, varmista, että putkissa on tunniste-etiketit ja laita putkiteline sen jälkeen pakastimeen.
The lattice should cover the opening of the instrument dish at a level below the brim.
Jos maksat toimitetaan esikäsittelyyn heti niiden irrottamisen jälkeen, näytteet on kuljetettava seuraavaan työpisteeseen jäähdytystelineessä (tai jäätelineessä).
On the lattice, spawning substrate should be fixed.
Maksan irrottamisen jälkeen kalan ruumiista voi tutkia sukurauhasten histopatologian ja mitata sekundaariset sukupuoliominaisuudet.
It should provide structure for the fish to move into.
Näyte
For example, artificial aquaria plants made of green plastic material are suitable (NB: possible adsorption of the test chemical to the plastic material should be considered).
Säilytä kaloilta otetut maksanäytteet – 70 °C:n lämpötilassa, jos niitä ei käytetä esikäsittelyyn pian irrottamisen jälkeen.
The plastic material should be leached out in sufficient volume of warm water for sufficient time to ensure that no chemicals may be disposed to the test water.
Viilto tehdään saksilla aivan rintaevien edestä.
When using glass materials it should be ensured that the fish are neither injured nor cramped during their vigorous actions.
Vatsan keskiviiva leikataan saksilla auki pisteeseen, joka sijaitsee noin kaksi millimetriä kallosta peräaukkoon päin.
The distance between the tray and the glass panes should be at least 3 cm to ensure that the spawning is not performed outside the tray.
Vatsaontelon seinämät levitetään pihdeillä, jotta maksa ja muut sisäelimet saadaan esiin.