natgillin/translations-raw huggingface dataset:
For thorough evaluation, which would be needed to conclude a negative outcome, all three of the following experimental conditions should be conducted using a short term treatment with and without metabolic activation and long term treatment without metabolic activation (see paragraphs 43, 44 and 45):
Kaikki objektilasit, myös positiiviset ja negatiiviset kontrollit, on koodattava toisistaan riippumattomasti ennen mikroskooppitutkimusta kromosomipoikkeavuuksista.
Cells should be exposed to the test chemical without metabolic activation for 3-6 hours, and sampled at a time equivalent to about 1,5 normal cell cycle lengths after the beginning of treatment (18),
Koska fiksaatio johtaa usein joidenkin metafaasissa olevien solujen kromosomien menettämiseen, lasketuissa soluissa tulisi olla sentromeerejä modaalista lukumäärää vastaava määrä ± 2.
Cells should be exposed to the test chemical with metabolic activation for 3-6 hours, and sampled at a time equivalent to about 1,5 normal cell cycle lengths after the beginning of treatment (18),
Kustakin pitoisuudesta ja kontrollista on laskettava vähintään 300 hyvin levinnyttä metafaasia sen päättelemiseksi, että testikemikaali on selvästi negatiivinen (ks. 45 kohta).
Cells should be continuously exposed without metabolic activation until sampling at a time equivalent to about 1,5 normal cell cycle lengths.
Nämä 300 solua jaetaan tasan rinnakkaisnäytteisiin, jos käytetään rinnakkaisviljelmiä.
Certain chemicals (e.g. nucleoside analogues) may be more readily detected by treatment/sampling times longer than 1,5 normal cell cycle lengths (24).
Jos käytetään yhtä viljelmää pitoisuutta kohti (ks. 21 kohta), viljelmästä on laskettava vähintään 300 hyvin levinnyttä metafaasia.
In the event that any of the above experimental conditions lead to a positive response, it may not be necessary to investigate any of the other treatment regimens.
Tämän 300 solun laskennan ansiosta testin tilastollista voimaa lisätään ja lisäksi nolla-arvoja havaitaan harvoin (niitä oletetaan olevan vain viisi prosenttia) (44).
Chromosome preparation
Laskettujen metafaasien määrää voidaan vähentää, kun havaitaan korkea määrä soluja, joissa on kromosomipoikkeavuuksia ja testikemikaalia pidetään selkeästi positiivisena.
Cell cultures are treated with colcemid or colchicine usually for one to three hours prior to harvesting.
Solut, joissa on rakenteellisia kromosomipoikkeavuuksia mukaan lukien ja ilman aukkoja (gaps), lasketaan.
Each cell culture is harvested and processed separately for the preparation of chromosomes.
Katkeamiset (breaks) ja aukot määritellään liitteessä 1 lähteiden (45) ja (46) perusteella.
Chromosome preparation involves hypotonic treatment of the cells, fixation and staining.
Kromatidityyppiset ja kromosomityyppiset poikkeavuudet on kirjattava erikseen ja luokiteltava alatyypin mukaan (katkeamiset, vaihdokset).
In monolayers, mitotic cells (identifiable as being round and detaching from the surface) may be present at the end of the 3-6 hour treatment.
Laboratoriossa käytettävillä menettelyillä varmistetaan, että kromosomipoikkeavuuden analyysin tekevät hyvin koulutetut laskijat ja niitä vertaisarvioidaan tarvittaessa.
Because these mitotic cells are easily detached, they can be lost when the medium containing the test chemical is removed.
Vaikka testillä pyritään ensisijaisesti toteamaan rakenteelliset kromosomipoikkeavuudet, on tärkeää rekisteröidä myös polyploidian ja endoreduplikaation esiintymistaajuudet, mikäli näitä esiintyy.
If there is evidence for a substantial increase in the number of mitotic cells compared with controls, indicating likely mitotic arrest, then the cells should be collected by centrifugation and added back to cultures, to avoid losing cells that are in mitosis, and at risk for chromosome aberration, at the time of harvest.
(Ks. 2 kohta).
Analysis
Laboratorion pätevyys
All slides, including those of the positive and negative controls, should be independently coded before microscopic analysis for chromosomal aberrations.
Jotta voidaan vahvistaa riittävä kokemus testin suorittamisesta ennen kuin sitä käytetään rutiinitestaukseen, laboratoriossa on teetettävä sarja kokeita positiivisilla vertailukemikaaleilla, jotka toimivat eri mekanismien kautta, ja erilaisia negatiivisia kontrolleja (käyttäen erilaisia liuottimia/kantaja-aineita).
Since fixation procedures often result in a proportion of metaphase cells which have lost chromosomes, the cells scored should, therefore, contain a number of centromeres equal to the modal number +/- 2.
Näiden positiivisten ja negatiivisten kontrollien vasteiden olisi oltava yhdenmukaisia lähdekirjallisuuden kanssa.
At least 300 well-spread metaphases should be scored per concentration and control to conclude a test chemical as clearly negative (see paragraph 45).
Tätä ei sovelleta laboratorioihin, joilla on kokemusta, eli joista on 37 kohdassa määritelty laboratoriokohtainen tietokanta.
The 300 cells should be equally divided among the replicates, when replicate cultures are used.
Tiettyjä positiivisia kontrollikemikaaleja (ks. 26 kohdassa oleva taulukko 1) on tutkittava lyhyillä ja pitkillä käsittelyillä ilman metabolista aktivaatiota, ja myös lyhyellä käsittelyllä metabolisen aktivaatiojärjestelmän läsnäollessa, jotta pätevyys havaita klastogeenisia kemikaaleja osoitetaan ja metabolisen aktivaatiojärjestelmän tehokkuus määritetään.
When single cultures are used per concentration (see paragraph 21), at least 300 well spread metaphases should be scored in this single culture.
Valittujen kemikaalien eri pitoisuudet on valittava siten, että ne aiheuttavat toistettavissa olevia ja pitoisuuteen liittyviä lisääntymisiä taustaan verrattuna, koejärjestelmän herkkyyden ja dynaamisen alueen osoittamiseksi.
Scoring 300 cells has the advantage of increasing the statistical power of the test and in addition, zero values will be rarely observed (expected to be only 5 %) (44).
Aiemmat kontrollitiedot
The number of metaphases scored can be reduced when high numbers of cells with chromosome aberrations are observed and the test chemical considered as clearly positive.
Laboratorion on määritettävä:
Cells with structural chromosomal aberration(s) including and excluding gaps should be scored.
aiempien positiivisten kontrollien vaihteluväli ja jakauma
Breaks and gaps are defined in Appendix 1 according to (45) (46).
aiempien negatiivisten kontrollien (käsittelemättömien ja liuotinkontrollien) vaihteluväli ja jakauma.
Chromatid- and chromosome-type aberrations should be recorded separately and classified by sub-types (breaks, exchanges).
Kun ensimmäisen kerran saadaan tietoja aiemman negatiivisen kontrollin jakaumasta, rinnakkaisten negatiivisten kontrollien pitäisi olla julkaistujen kontrollitietojen mukaisia, jos sellaisia on olemassa.
Procedures in use in the laboratory should ensure that analysis of chromosomal aberrations is performed by well-trained scorers and peer-reviewed if appropriate.
Kun kontrollin jakaumaan lisätään enemmän kokeellista tietoa, rinnakkaisten negatiivisten kontrollien tulisi mieluiten sijoittua kyseisen jakauman 95 %:n kontrollirajojen sisälle (44) (47).
Although the purpose of the test is to detect structural chromosomal aberrations, it is important to record polyploidy and endoreduplication frequencies when these events are seen.
Laboratorion aikaisempien negatiivisten kontrollien tietokanta on aluksi luotava vähintään 10 kokeelle, mutta sen olisi mieluiten koostuttava vähintään 20 kokeesta, jotka on suoritettu vastaavissa koeolosuhteissa.
(See paragraph 2).
Laboratorioiden on käytettävä laadunvalvontamenetelmiä, kuten valvontakortteja (esim. C-kortteja tai X-bar-kortteja (48)), positiivisten ja negatiivisten kontrollitietojensa vaihtelevuuden määrittämiseksi ja osoittaakseeen, että laboratorio ”hallitsee” menetelmän (44).
Proficiency of the laboratory
Lisäsuosituksia aikaisempien tietojen muodostamisesta ja käytöstä (esimerkiksi perusteet tietojen sisällyttämiseksi aikaisempiin tietoihin tai jättämiseksi pois niistä sekä kokeiden hyväksyttävyysperusteet) annetaan lähdekirjallisuudessa (47).
In order to establish sufficient experience with the test prior to using it for routine testing, the laboratory should have performed a series of experiments with reference positive chemicals acting via different mechanisms and various negative controls (using various solvents/vehicle).
Mahdollisissa koejärjestelyn muutoksissa on otettava huomioon järjestelyn yhdenmukaisuus laboratorion olemassa olevien aikaisempia kontrolleja koskevan tietokannan kanssa.
These positive and negative control responses should be consistent with the literature.
Jos havaitaan merkittäviä epäjohdonmukaisuuksia, on luotava uusi aiempien kontrollien tietokanta.
This is not applicable to laboratories that have experience, i.e. that have an historical data base available as defined in paragraph 37.
Negatiivisten kontrollitietojen tulisi koostua kromosomipoikkeavuuksia sisältävien solujen esiintymistaajuudesta yhdessä viljelmässä tai rinnakkaisten viljelmien summasta, kuten 21 kohdassa kuvataan.
A selection of positive control chemicals (see Table 1 in paragraph 26) should be investigated with short and long treatments in the absence of metabolic activation, and also with short treatment in the presence of metabolic activation, in order to demonstrate proficiency to detect clastogenic chemicals and determine the effectiveness of the metabolic activation system.
Rinnakkaisten negatiivisten kontrollien olisi mieluiten sijoituttava laboratorion aikaisempien negatiivisten kontrollien tietokannan 95 %:n kontrollirajojen sisälle (44) (47).
A range of concentrations of the selected chemicals should be chosen so as to give reproducible and concentration-related increases above the background in order to demonstrate the sensitivity and dynamic range of the test system.
Jos rinnakkaisia negatiivisia kontrolleja koskevat tiedot jäävät 95 %:n kontrollirajojen ulkopuolelle, ne voidaan hyväksyä aikaisemman kontrollien jakaumaan edellyttäen, etteivät ne ole äärimmäisiä harha-arvoja ja on näyttöä siitä, että testijärjestelmä on ”hallinnassa” (ks. 37 kohta), sekä siitä, ettei kyse ole teknisestä tai inhimillisestä virheestä.
Historical control data
Tulosten esittäminen
The laboratory should establish:
On arvioitava niiden solujen prosenttiosuus, joissa on kromosomipoikkeavuuksia.
A historical positive control range and distribution,
Kromatidityyppiset ja kromosomityyppiset poikkeavuudet (katkeamiset, vaihdokset) on lueteltava erikseen ja niiden lukumäärät ja esiintymistaajuudet altistetuissa viljelmissä ja kontrolliviljelmissä on mainittava.
A historical negative (untreated, solvent) control range and distribution.
Aukot (gaps) rekisteröidään erikseen ja raportoidaan, mutta niitä ei lasketa mukaan kromosomipoikkeavuuksien kokonaistaajuuteen.
When first acquiring data for an historical negative control distribution, concurrent negative controls should be consistent with published control data, where they exist.
Polyploidian ja/tai endoreduplikoituneita kromosomeja sisältävien solujen prosenttiosuus raportoidaan, kun tämä havaitaan.
As more experimental data are added to the control distribution, concurrent negative controls should ideally be within the 95 % control limits of that distribution (44) (47).
Lisäksi pääasiallisissa kromosomipoikkeavuustesteissä on rekisteröitävä kaikissa testiviljelmissä sekä negatiivisissa ja positiivisissa kontrolliviljelmissä tehdyt samanaikaiset sytotoksisuusmittaukset.
The laboratory's historical negative control database should initially be built with a minimum of 10 experiments but would preferably consist of at least 20 experiments conducted under comparable experimental conditions.
Kustakin viljelmästä on esitettävä tiedot erikseen.
Laboratories should use quality control methods, such as control charts (e.g. C-charts or X-bar charts (48)), to identify how variable their positive and negative control data are, and to show that the methodology is ‘under control’ in their laboratory (44).
Kaikista tiedoista on lisäksi esitettävä yhteenveto taulukkomuodossa.
Further recommendations on how to build and use the historical data (i.e. criteria for inclusion and exclusion of data in historical data and the acceptability criteria for a given experiment) can be found in the literature (47).
Hyväksyttävyysperusteet
Any changes to the experimental protocol should be considered in terms of their consistency with the laboratory's existing historical control databases.
Testin hyväksyttävyysperusteet ovat seuraavat:
Any major inconsistencies should result in the establishment of a new historical control database.
rinnakkainen negatiivinen kontrolli katsotaan hyväksyttäväksi laboratorion aikaisempien negatiivisten kontrollien tietokantaan 39 kohdan mukaisesti
Negative control data should consist of the incidence of cells with chromosome aberrations from a single culture or the sum of replicate cultures as described in paragraph 21.
rinnakkaisten positiivisten kontrollien (ks. 26 kohta) on indusoitava vasteita, jotka ovat yhteensopivia aikaisempien positiivisten kontrollien tietokannan vasteiden kanssa ja tuotettava tilastollisesti merkittävä lisääntyminen verrattuna rinnakkaiseen negatiiviseen kontrolliin
Concurrent negative controls should ideally be within the 95 % control limits of the distribution of the laboratory's historical negative control database (44) (47).
solujen proliferaatiota koskevien kriteereiden on täytyttävä liuotinkontrollissa (17 ja 18 kohta)
Where concurrent negative control data fall outside the 95 % control limits they may be acceptable for inclusion in the historical control distribution as long as these data are not extreme outliers and there is evidence that the test system is ‘under control’ (see paragraph 37) and evidence of absence of technical or human failure.
testi suoritettiin kaikissa kolmessa koeolosuhteessa, ellei jokin niistä tuottanut positiivisia tuloksia (ks. 28 kohta)
Presentation of the results
riittävä määrä soluja ja pitoisuuksia on analysoitavissa (31 ja 21 kohta)
The percentage of cells with structural chromosomal aberration(s) should be evaluated.
suurimman pitoisuuden valintaperusteet vastaavat 22, 23 ja 24 kohdassa kuvattuja perusteita.
Chromatid- and chromosome-type aberrations classified by sub-types (breaks, exchanges) should be listed separately with their numbers and frequencies for experimental and control cultures.
Tulosten arviointi ja tulkinta
Gaps are recorded and reported separately but not included in the total aberration frequency.
Mikäli kaikki hyväksyttävyysperusteet täyttyvät, testikemikaali katsotaan selvästi positiiviseksi, jos jossakin tarkastelluista koeolosuhteista (ks. 28 kohta):
Percentage of polyploidy and/or endoreduplicated cells are reported when seen.
vähintään yksi testipitoisuuksista aiheuttaa tilastollisesti merkittävän lisääntymisen verrattuna rinnakkaiseen negatiiviseen kontrolliin
Concurrent measures of cytotoxicity for all treated, negative and positive control cultures in the main aberration experiment(s) should be recorded.
b. kasvu riippuu annoksesta, kun sitä arvioidaan asianmukaisella trenditestillä
Individual culture data should be provided.
jokin tuloksista on aikaisempien negatiivisen kontrollin tietojen jakauman ulkopuolella (esim. Poissonin jakaumaan perustuvat 95 prosentin kontrollirajat; ks. 39 kohta).
Additionally, all data should be summarised in tabular form.
Kun kaikki nämä perusteet täyttyvät, testikemikaalin katsotaan voivan indusoida kromosomipoikkeavuuksia viljellyissä nisäkässoluissa tässä testijärjestelmässä.
Acceptability Criteria
Lähdekirjallisuudessa on suosituksia sopivimmille tilastomenetelmille (49) (50) (51).
Acceptance of a test is based on the following criteria:
Mikäli kaikki hyväksyttävyysperusteet täyttyvät, testikemikaali katsotaan selvästi negatiiviseksi, jos kaikissa tarkastelluissa koeolosuhteissa (ks. 28 kohta):
The concurrent negative control is considered acceptable for addition to the laboratory historical negative control database as described in paragraph 39.
a. mikään testipitoisuuksista ei aiheuta tilastollisesti merkittävää lisääntymistä verrattuna samanaikaiseen negatiiviseen kontrolliin
Concurrent positive controls (see paragraph 26) should induce responses that are compatible with those generated in the historical positive control data base and produce a statistically significant increase compared with the concurrent negative control.
pitoisuudesta riippuvaa lisääntymistä ei esiinny asianmukaisella trenditestillä arvioituna
Cell proliferation criteria in the solvent control should be fulfilled (paragraphs 17 and 18).
kaikki tulokset ovat aikaisempien negatiivisten kontrollitietojen jakauman sisällä (esimerkiksi Poissonin jakaumaan perustuvat 95 prosentin kontrollirajat; ks. 39 kohta).
All three experimental conditions were tested unless one resulted in positive results (see paragraph 28).
Tällöin katsotaan, ettei testikemikaali voi indusoida kromosomipoikkeavuuksia viljellyissä nisäkässoluissa tässä testijärjestelmässä.
Adequate number of cells and concentrations are analysable (paragraphs 31 and 21).
Selvästi positiivista tai negatiivista vastetta ei tarvitse vahvistaa.
The criteria for the selection of top concentration are consistent with those described in paragraphs 22, 23 and 24.
Jos vaste ei ole selvästi negatiivinen eikä selvästi positiivinen yllä kuvatulla tavalla tai tuloksen biologisen merkityksellisyyden vahvistaminen kaipaa tukea, tietoja tulee arvioida asiantuntija-arviossa ja /tai lisätutkimuksissa.
Evaluation and interpretation of results
Lisäsolujen laskeminen (tarvittaessa) tai kokeen toistaminen käyttäen mahdollisesti modifioituja koeolosuhteita (esimerkiksi pitoisuusvälit, muut metaboliset aktivaatiojärjestelmät [kuten S9-jakeen pitoisuus tai alkuperä]) saattaa olla hyödyllistä.
Providing that all acceptability criteria are fulfilled, a test chemical is considered to be clearly positive if, in any of the experimental conditions examined (see paragraph 28):
Saatujen tietojen pohjalta ei harvinaisissa tapauksissa lisätutkimustenkaan jälkeen voida saada positiivisia tai negatiivisia tuloksia, ja sen vuoksi testikemikaalin vaste jää epäselväksi.
at least one of the test concentrations exhibits a statistically significant increase compared with the concurrent negative control,
Polyploidisten solujen määrän suureneminen saattaa osoittaa, että testikemikaaleilla pystytään estämään mitoottisia prosesseja ja aiheuttamaan numeerisia kromosomipoikkeavuuksia (52).
the increase is dose-related when evaluated with an appropriate trend test,
Endoreduplikoituneita kromosomeja sisältävien solujen määrän suureneminen saattaa osoittaa, että testikemikaalit kykenevät estämään solusyklin etenemisen (53) (54) (ks. 2 kohta).
any of the results are outside the distribution of the historical negative control data (e.g. Poisson-based 95 % control limits; see paragraph 39).
Siksi polyploidiset solut ja endoreduplikoituneita kromosomeja sisältävät solut on rekisteröitävä erikseen.
When all of these criteria are met, the test chemical is then considered able to induce chromosomal aberrations in cultured mammalian cells in this test system.
alkuperä, erän numero, viimeinen käyttöpäivä, jos saatavilla
Recommendations for the most appropriate statistical methods can be found in the literature (49) (50) (51).
itse testikemikaalin stabiilius, jos tiedossa
Providing that all acceptability criteria are fulfilled, a test chemical is considered clearly negative if, in all experimental conditions examined (see paragraph 28):
testikemikaalin liukoisuus ja stabiliteetti liuottimessa, jos tiedossa
none of the test concentrations exhibits a statistically significant increase compared with the concurrent negative control,
pH-arvon mittaus, osmolaliteetin ja saostumisen mittaus viljelynesteessä, johon testikemikaalia lisättiin, kun tätä tarvitaan.
there is no concentration-related increase when evaluated with an appropriate trend test,
Yhdestä ainesosasta koostuva aine:
all results are inside the distribution of the historical negative control data (e.g. Poisson-based 95 % control limits; see paragraph 39).
ulkonäkö, vesiliukoisuus ja muut merkitykselliset fysikaalis-kemialliset ominaisuudet
The test chemical is then considered unable to induce chromosomal aberrations in cultured mammalian cells in this test system.
kemialliset tunnistetiedot, kuten IUPAC- tai CAS-nimi, CAS-numero, SMILES- tai InChI-koodi. rakennekaava, puhtaus, tarvittaessa epäpuhtauksien kemikaaliset tunnistetiedot sen mukaan kuin käytännössä on mahdollista ja niin edelleen.
There is no requirement for verification of a clearly positive or negative response.
Useista ainesosista koostuvat aineet, koostumukseltaan tuntemattomat tai vaihtelevat aineet ja seokset:
In case the response is neither clearly negative nor clearly positive as described above or in order to assist in establishing the biological relevance of a result, the data should be evaluated by expert judgement and/or further investigations.
luonnehditaan mahdollisimman tarkoin ainesosien kemiallinen koostumuksen (ks. edellä), esiintymistiheyden ja fysikaalis-kemiallisten ominaisuuksien avulla.
Scoring additional cells (where appropriate) or performing a repeat experiment possibly using modified experimental conditions (e.g. concentration spacing, other metabolic activation conditions (i.e. S9 concentration or S9 origin)) could be useful.
Liuotin:
In rare cases, even after further investigations, the data set will preclude making a conclusion of positive or negative results, and therefore the test chemical response will be concluded to be equivocal.
liuottimen valintaperusteet
An increase in the number of polyploid cells may indicate that the test chemicals have the potential to inhibit mitotic processes and to induce numerical chromosomal aberrations (52).
liuottimen osuus lopullisessa viljelynesteessä on myös ilmoitettava.
An increase in the number of cells with endoreduplicated chromosomes may indicate that the test chemicals have the potential to inhibit cell cycle progress (53) (54) (see paragraph 2).
Solut:
Therefore, incidence of polyploid cells and cells with endoreduplicated chromosomes should be recorded separately.
solujen tyyppi ja lähde
source, lot number, limit date for use, if available
karyotyypin ominaisuudet ja käytetyn solutyypin soveltuvuus
stability of the test chemical itself, if known;
mykoplasman puuttuminen solulinjojen osalta
solubility and stability of the test chemical in solvent, if known.
solulinjojen osalta tiedot solysyklistä, kaksinkertaistumisajasta tai proliferaatioindeksistä
measurement of pH, osmolality and precipitate in the culture medium to which the test chemical was added, as appropriate.
verenluovuttajien sukupuoli, ikä ja kaikki merkitykselliset tiedot luovuttajasta, tieto siitä, onko testissä altistettu kokoverta vai eristettyjä lymfosyyttejä, käytetty mitogeeni
Mono-constituent substance:
solulinjojen osalta siirrostusten lukumäärä, jos saatavilla
physical appearance, water solubility, and additional relevant physicochemical properties;
solulinjojen osalta soluviljelymenetelmät
chemical identification, such as IUPAC or CAS name, CAS number, SMILES or InChI code, structural formula, purity, chemical identity of impurities as appropriate and practically feasible, etc.
solulinjojen osalta kromosomien modaalinen lukumäärä.
Multi-constituent substance, UVCBs and mixtures:
Testiolosuhteet:
characterised as far as possible by chemical identity (see above), quantitative occurrence and relevant physicochemical properties of the constituents.
metafaasin estämiseen käytetty kemikaali, sen pitoisuus ja solujen altistuksen kesto
Solvent:
testikemikaalin pitoisuus ilmaistuna lopullisena pitoisuutena viljelynesteessä (esim. μg tai mg/mL tai mM viljelynesteessä)
justification for choice of solvent.
pitoisuuksien ja viljelmien lukumäärän valintaperusteet, joihin sisältyvät esim. sytotoksisuustiedot ja liukoisuusrajoitukset
percentage of solvent in the final culture medium should also be indicated.
kasvatusväliaineen koostumus, tarvittaessa hiilidioksidipitoisuus, kosteustaso
Cells:
viljelynesteeseen lisätyn liuottimen ja testikemikaalin pitoisuus (ja/tai tilavuus)
type and source of cells
inkubointilämpötila
karyotype features and suitability of the cell type used;
inkubointiaika