natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Females maintain the capacity to develop male secondary sex characteristics, when they are exposed to androgenic chemicals in water.
Rasvapäämudulle ja seeprakalalle on asetettava testiastiaan kutualusta, jotta kalat voivat kutea tavanomaisissa olosuhteissa.
Several studies are available in the scientific literature to document this type of response in fathead minnow (20) and medaka (21).
Lisäyksessä 4 on seeprakalalle (lisäys 4A) ja rasvapäämudulle (lisäys 4B) suositeltavia kutualustoja koskevia lisätietoja.
A decrease in secondary sex characteristics in males should be interpreted with caution because of low statistical power, and should be based on expert judgement and weight of evidence.
Medaka ei tarvitse kutualustaa.
There are limitations to the use of zebrafish in this assay, due to the absence of quantifiable secondary sex characteristics responsive to androgenic acting chemicals.
Kalojen humaani lopettaminen
In the fathead minnow, the main indicator of exogenous androgenic exposure is the number of nuptial tubercles located on the snout of the female fish.
Testipäivänä 21 eli altistuksen päättyessä kalat on lopetettava tarkoituksenmukaisella määrällä trikaiinia (trikaiinimetaanisulfonaatti, Metacain MS-222 (CAS 886-86-2), 100–500 mg/l, puskuroitu 300 mg/l:n vahvuisella NaHCO3:lla (natriumbikarbonaatti, CAS 144-55-8), limakalvoärsytyksen vähentämiseksi.
In the medaka, the number of papillary processes constitutes the main marker of exogenous exposure to androgenic chemicals in female fish.
Sen jälkeen kaloilta otetaan veri- tai kudosnäytteet vitellogeniinimääritystä varten, kuten vitellogeniinia koskevassa osiossa on selitetty.
Appendix 5A and Appendix 5B indicate the recommended procedures to follow for the evaluation of sex characteristics in fathead minnow and in medaka, respectively.
Sekundaaristen sukupuoliominaisuuksien havainnointi
The 21-day fish assay includes the evaluation of quantitative egg production and preservation of gonads for optional histopathology examination.
Jotkin hormonijärjestelmään vaikuttavat kemikaalit voivat aiheuttaa muutoksia tietyissä erikoistuneissa sekundaarisissa sukupuoliominaisuuksissa (kutukyhmyjen lukumäärä rasvapäämutukoirailla ja sukuelinpapillien lukumäärä medakakoirailla).
Some regulatory authorities may require this additional endpoint for a more complete evaluation of the reproductive fitness of the test animals, or in cases where vitellogenin and secondary sex characteristics did not respond to the chemical exposure.
Kemikaalit, joilla on tiettyjä vaikutustapoja, voivat erityisesti aiheuttaa sen, että vastakkaisen sukupuolen eläimillä esiintyy sekundaarisia sukupuoliominaisuuksia.
Although some endpoints may be highly diagnostic (e.g. VTG induction in males and tubercle formation in females), not all endpoints (e.g. fecundity and gonad histopathology) in the assay are intended to unequivocally identify specific cellular mechanisms of action.
Esimerkiksi androgeenireseptorin agonistit, kuten trenboloni, metyylitestosteroni ja dihydrotestosteroni, voivat aiheuttaa korostuneiden kutukyhmyjen kehittymisen rasvapäämutunaaraille tai sukuelinpapillien kehittymisen medakanaaraille (11, 20, 21).
Rather, the suite of endpoints, collectively, allows inferences to be made with regard to possible endocrine disturbances and thus provide guidance for further testing.
On myös raportoitu, että estrogeenireseptorin antagonistit saattavat vähentää kutukyhmyjen määrää ja pienentää selänpuoleista niskakyhmyä aikuisilla rasvapäämutukoirailla (26, 27).
Although not endocrine specific, fecundity, due to its demonstrated sensitivity across known endocrine active chemicals (5), is an important endpoint to include because when it and other endpoints are unaffected one is more confident that a compound is not likely endocrine active.
Näistä morfologisista havainnoista voidaan saada myös hyödyllistä laadullista ja määrällistä tietoa kaloilla testausta koskevia mahdollisia tulevia vaatimuksia varten.
However, when fecundity is affected it will contribute heavily in weight of evidence inferences.
Rasvapäämudun kutukyhmyjen ja medakan sukuelinpapillien lukumäärä ja koko voidaan määrittää suoraan tai käytännöllisemmin preparoiduilta yksilöiltä.
Guidance on data interpretation and acceptance of test results is provided further in this test method.
Suositellut menetelmät rasvapäämudun ja medakan sekundaaristen sukupuoliominaisuuksien arvioimiseen on esitetty lisäyksessä 5A ja lisäyksessä 5B.
Definitions used in this test method are given in Appendix 1.
Vitellogeniini (VTG)
In the assay, male and female fish in a reproductive status are exposed together in test vessels.
Verinäyte otetaan pyrstösuonesta heparinisoituun mikrohematokriitti-kapillaariputkeen tai vaihtoehtoisesti sydänpunktiolla, joka tehdään ruiskulla.
Their adult and reproductive status enables a clear differentiation of each sex, and thus a sex-related analysis of each endpoint, and ensures their sensitivity towards exogenous chemicals.
Kerättävän veren määrä vaihtelee kalan koon mukaan yleensä välillä 5–60 μl rasvapäämutuyksilöä kohti ja välillä 5–15 μl seeprakalayksilöä kohti.
At test termination, sex is confirmed by macroscopic examination of the gonads following ventral opening of the abdomen with scissors.
Plasma erotetaan verestä sentrifugoimalla, ja sitä säilytetään proteaasin estäjien kanssa – 80 °C:ssa vitellogeniinin analysointiin saakka.
An overview of the relevant bioassay conditions are provided in Appendix 2.
Toinen vaihtoehto on se, että vitellogeniinin määrityksen kudoslähteenä käytetään medakan maksaa ja seeprakalan pää-/pyrstöhomogenaattia (lisäys 6).
The assay is normally initiated with fish sampled from a population that is in spawning condition; senescent animals should not be used.
Vitellogeniinin mittauksen on perustuttava validoituun homologiseen ELISA-menetelmään, jossa käytetään homologista vitellogeniinistandardia ja homologisia vasta-aineita.
Guidance on the age of fish and on the reproductive status is provided in the section on Selection of fish.
On suositeltavaa käyttää sellaista menetelmää, jolla pystytään havaitsemaan jopa niin alhaisia vitellogeniinitasoja kuin vain muutama ng/ml plasmassa (tai ng/mg kudoksessa), mitä pidetään altistumattomien koiraskalojen taustapitoisuutena.
The assay is conducted using three chemical exposure concentrations as well as a water control, and a solvent control if necessary.
Vitellogeniinianalyysin laatu varmistetaan käyttämällä standardeja, nollakokeita ja vähintään kaksinkertaista analyysia.
Two vessels or replicates per treatment are used for zebrafish (each vessel containing 5 males and 5 females).
Jokaisen ELISA-menetelmän yhteydessä on tehtävä matriisivaikutustesti (vaikutus näytteen laimentumiseen), jotta voidaan määrittää näytteen vähimmäislaimennuskerroin.
Four vessels or replicates per treatment are used for fathead minnow (each vessel containing 2 males and 4 females).
Jokaisesta näytelaimennoksesta analysoidaan vähintään kaksi alikvoottia (kaksi rinnakkaiskuoppaa).
This is to accommodate the territorial behaviour of male fathead minnow while maintaining sufficient power of the assay.
Rinnakkaiskuopat, joiden arvot eroavat toisistaan yli 20 prosenttia, on analysoitava uudelleen.
Four vessels or replicates per treatment are used for medaka (each vessel containing 3 males and 3 females).
Kalibrointikäyrien korrelaatiokertoimen (R2) on oltava yli 0,99.
The exposure is conducted for 21-days and sampling of fish is performed at day 21 of exposure.
Suuri korrelaatio ei kuitenkaan yksinään riitä takaamaan pitoisuuden asianmukaista ennustamista kaikissa vaihteluväleissä.
Quantitative fecundity is monitored daily.
Sen lisäksi, että korrelaatio kalibrointikäyrään on riittävän suuri, kunkin standardin pitoisuuden on – kalibrointikäyrästä laskettuna oltava 70–120 prosenttia sen nimellispitoisuudesta.
On sampling at day 21, all animals are killed humanely.
Jos nimellispitoisuuksissa on havaittavissa kalibroinnin regressiolinjasta poispäin suuntautuva trendi (esimerkiksi pienemmillä pitoisuuksilla), voi olla tarpeen jakaa kalibrointikäyrä alempaan ja ylempään vaihteluväliin tai käyttää epälineaarista mallia, jotta absorbanssitiedot saadaan sovitettua asianmukaisesti.
Secondary sex characteristics are measured in fathead minnow and medaka (see Appendix 5A and Appendix 5B); blood samples are collected for determination of VTG in zebrafish and fathead minnow, alternatively head/tail can be collected for the determination of VTG in zebrafish (Appendix 6); liver is collected for VTG analysis in medaka (Appendix 6); gonads are fixed either in whole or dissected for potential histopathological evaluation (22).
Jos käyrä jaetaan, kummankin linjan segmentin R2 on oltava > 0,99.
TEST ACCEPTANCE CRITERIA
Havaitsemisrajaksi (LOD) määritetään pienimmän määritysstandardin pitoisuus, ja määritysrajaksi (LOQ) määritetään pienimmän määritysstandardin pitoisuus kerrottuna pienimmällä laimennuskertoimella.
For the test results to be acceptable the following conditions apply:
Niinä päivinä, kun tehdään vitellogeniinimäärityksiä, analysoidaan myös rikastusnäyte käyttämällä määritysten välistä vertailuainetta (lisäys 7).
the mortality in the water (or solvent) controls should not exceed 10 per cent at the end of the exposure period;
Odotuksenmukaisen pitoisuuden ja mitatun pitoisuuden välinen suhde ilmoitetaan kyseisenä päivänä tehtyjen määritysten tulosten mukana.
the dissolved oxygen concentration should be at least 60 per cent of the air saturation value (ASV) throughout the exposure period;
Sukurauhasten histopatologinen arviointi
the water temperature should not differ by more than ± 1,5 °C between test vessels at any one time during the exposure period and be maintained within a range of 2 °C within the temperature ranges specified for the test species (Appendix 2);
Sääntelyviranomaiset saattavat vaatia sukurauhasten histopatologista tutkimusta kohde-elimen tutkimiseksi HPG-akselilla kemiallisen altistuksen jälkeen.
evidence should be available to demonstrate that the concentrations of the test chemical in solution have been satisfactorily maintained within ±20 % of the mean measured values;
Tätä varten sukurauhaset kiinnitetään joko kokonaisina tai dissekoituina.
evidence that fish are actively spawning in all replicates prior to initiating chemical exposure and in control replicates during the test.
Jos histopatologiaa vaaditaan, sukurauhasista etsitään erityisesti hormonijärjestelmään liittyviä vasteita, kun testikemikaalin vaikutusta hormonijärjestelmään arvioidaan.
oxygen and pH meters;
Muilla sukurauhasvaurioilla, kuten munasolujen atresialla, testikulaarisella degeneraatiolla ja kehitysvaihemuutoksilla, voi olla erilaisia syitä.
equipment for determination of water hardness and alkalinity;
Kalojen sukurauhasten histopatologiaa koskevassa ohjeasiakirjassa ilmoitetaan menettelyt, joita käytetään sukurauhasten dissekointiin, kiinnittämiseen, lohkomiseen ja histopatologiseen arviointiin (22).
adequate apparatus for temperature control and preferably continuous monitoring;
Biomarkkerivasteiden arviointi varianssianalyysilla (ANOVA)
tanks made of chemically inert material and of a suitable capacity in relation to the recommended loading and stocking density (see Appendix 2);
Jotta voidaan tunnistaa kemikaalin mahdollinen vaikutus, käsittely- ja kontrolliryhmien vasteita verrataan käyttämällä varianssianalyysia (ANOVA).
spawning substrate for fathead minnow and zebrafish, Appendix 4 gives the necessary details.
Jos käytetään liuotinkontrollia, on tehtävä asianmukainen tilastollinen testi laimennusvesi- ja liuotinkontrollien välillä kunkin tutkittavan ominaisuuden osalta.
suitably accurate balance (i.e. accurate to ± 0,5 mg).
Ohjeita siitä, miten laimennusvesi- ja liuotinkontrolleja koskevia tietoja käsitellään tilastollisessa analyysissa, on OECD:n asiakirjassa 2006c (28).
Any water in which the test species shows suitable long-term survival and growth may be used as test water.
Kaikki tiedot biologisesta vasteesta on analysoitava ja raportoitava kummastakin sukupuolesta erikseen.
The pH of the water should be within the range 6,5 to 8,5, but during a given test it should be within a range of ± 0,5 pH units.
Jos parametristen menetelmien edellyttämät vaatimukset eivät täyty – epänormaali jakauma (esimerkiksi Shapiro-Wilkin testi) tai heterogeeninen varianssi (Bartlettin testi tai Levenen testi) – on harkittava mittaustulosten muuntamista varianssien homogenisoimiseksi ennen ANOVA-analyysia tai painotetun ANOVAn tekemistä.
In order to ensure that the dilution water will not unduly influence the test result (for example by complexion of test chemical); samples should be taken at intervals for analysis.
Monivertailuihin liittyvää Dunnettin testiä (parametrinen) tai Mann-Whitneyn testiä ja Bonferronin korjausta (ei-parametrinen) voidaan käyttää ei-monotonisten annosvasteiden yhteydessä.
Measurements of heavy metals (e.g. Cu, Pb, Zn, Hg, Cd, and Ni), major anions and cations (e.g. Ca2+, Mg2+, Na+, K+, Cl–, and SO42–), pesticides (e.g. total organophosphorus and total organochlorine pesticides), total organic carbon and suspended solids should be made, for example, every three months where dilution water is known to be relatively constant in quality.
Muita tilastollisia testejä voidaan käyttää (esimerkiksi Jonckheere-Terpstran testi tai Williamsin testi), jos annosvaste on jotakuinkin monotoninen.
If water quality has been demonstrated to be constant over at least one year, determinations can be less frequent and intervals extended (e.g. every six months).
Lisäyksessä 8 on tilastollinen vuokaavio, joka on tarkoitettu avuksi, kun päätetään, mikä on tarkoituksenmukaisin tilastollinen testi käytettäväksi.
Some chemical characteristics of acceptable dilution water are listed in Appendix 3.
Lisätietoja on myös ekotoksisuustietojen tilastollisessa analyysissa sovellettavia nykyisiä lähestymistapoja koskevassa OECD:n asiakirjassa ”Current Approaches to Statistical Analysis of Ecotoxicity Data” (28).
The stock solution should preferably be prepared by simply mixing or agitating the test chemical in dilution water by using mechanical means (e.g. stirring or ultrasonication).
Testitulosten raportointi
Saturation columns (solubility columns) can be used for achieving a suitable concentrated stock solution.
Tutkimustietoihin on sisällytettävä seuraavat seikat:
However, in case a solvent is necessary, a solvent control should be run in parallel, at the same solvent concentration as the chemical treatments.
Testauslaitos:
For difficult to test chemicals, a solvent may be technically the best solution; the OECD guidance document on aquatic toxicity testing of difficult substances and mixtures should be consulted (23).
vastuuhenkilöstö ja heidän tutkimusta koskevat vastuualueensa
The choice of solvent will be determined by the chemical properties of the substance or mixture.
jokaisen laboratorion pätevyys on osoitettava käyttämällä monenlaisia edustavia kemikaaleja
The OECD guidance document recommends a maximum of 100 μl/l, which should be observed.
testikemikaalin luonnehdinta
However a recent review (24) highlighted additional concerns when using solvents for endocrine activity testing.
fysikaalinen olomuoto ja fysikaalis-kemialliset ominaisuudet, jos niillä on merkitystä
Therefore it is recommended that the solvent concentration, if necessary, is minimised wherever technically feasible (dependent on the physical-chemical properties of the test chemical).
testipitoisuuksien valmistusmenetelmä ja valmistustiheys
A flow-through test system will be used.
tiedot stabiiliudesta ja biohajoavuudesta
Such a system continually dispenses and dilutes a stock solution of the test chemical (e.g. metering pump, proportional diluter, saturator system) in order to deliver a series of concentrations to the test chambers.
liuottimen luonnehdinta (tyyppi, käytetty pitoisuus)
The flow rates of stock solutions and dilution water should be checked at intervals, preferably daily, during the test and should not vary by more than 10 % throughout the test.
liuottimen valinnan perustelut (jos muu kuin vesi)
Care should be taken to avoid the use of low-grade plastic tubing or other materials that may contain biologically active chemicals.
laji ja kanta
When selecting the material for the flow-through system, possible adsorption of the test chemical to this material should be considered.
toimittaja ja toimittajan tilat
Test fish should be selected from a laboratory population, preferably from a single stock, which has been acclimated for at least two weeks prior to the test under conditions of water quality and illumination similar to those used in the test.
kalan ikä testin alussa ja sen lisääntymis-/kututila
It is important that the loading rate and stocking density (for definitions, see Appendix 1) be appropriate for the test species used (see Appendix 2).
tarkat tiedot eläinten totutusmenetelmästä
mortalities of greater than 10 % of population in seven days: reject the entire batch;
kalan paino altistuksen alussa (kalaerän osan punnituksen perusteella)
mortalities of between 5 % and 10 % of population: acclimation for seven additional days; if more than 5 % mortality during second seven days, reject the entire batch;
käytettävä testimenetelmä (testin tyyppi, kalamäärä, kalatiheys jne.)
mortalities of less than 5 % of population in seven days: accept the batch.
varastoliuosten valmistusmenetelmä ja virtausnopeus
Fish should not receive treatment for disease during the acclimation period, in the pre-exposure period, or during the exposure period.
nimellistestipitoisuudet, testiliuosten viikoittain mitatut pitoisuudet ja käytetyt analyysimenetelmät, mitattujen arvojen keskiarvot ja keskihajonnat testiastioissa ja todisteet siitä, että mittaukset koskevat testikemikaalin pitoisuuksia todellisessa liuoksessa
Pre-exposure and selection of fish
laimennusveden ominaisuudet (mukaan luettuina pH, kovuus, alkalisuus, lämpötila, liuenneen hapen pitoisuus, jäännösklooripitoisuudet, orgaanisen hiilen kokonaismäärä, suspendoituneet kiinteät aineet ja muut tehdyt mittaukset)
The one to two-week pre-exposure period is recommended with animals placed in vessels similar to the actual test.
testiastioissa olevan veden laatu: pH, kovuus, lämpötila ja liuenneen hapen pitoisuus
Fish should be fed ad libitum throughout the holding period and during the exposure phase.
tarkat tiedot ruokinnasta (esimerkiksi rehu(je)n tyyppi, lähde, annettu määrä ja antotiheys) sekä analyysit merkittävistä kontaminanteista, mikäli saatavilla (esimerkiksi PCB-yhdisteet, PAH-yhdisteet ja orgaanista klooria sisältävät torjunta-aineet)
The exposure phase is started with sexually dimorphic adult fish from a laboratory supply of reproductively mature animals (e.g. with clear secondary sexual characteristics visible as far as fathead minnow and medaka are concerned), and actively spawning.
näyttö siitä, että kontrollit täyttävät testin hyväksyttävyyskriteerit
For general guidance only (and not to be considered in isolation from observing the actual reproductive status of a given batch of fish), fathead minnows should be approximately 20 (± 2) weeks of age, assuming they have been cultured at 25 ± 2 °C throughout their lifespan.
kuolleisuutta koskevat tiedot testipitoisuuksissa ja kontrolleissa
Japanese medaka should be approximately 16 (± 2) weeks of age, assuming they have been cultured at 25 ± 2 °C throughout their lifespan.
käytetyt tilastolliset analyysitekniikat, aineiston käsittely ja käytettyjen tekniikoiden perustelut
Zebrafish should be approximately 16 (± 2) weeks of age, assuming they have been cultured at 26 ± 2 °C throughout their lifespan.
paljain silmin näkyviä morfo-biologisia havaintoja, mukaan luettuina sekundaariset sukupuoliominaisuudet, mätimunatuotantoa ja vitellogeniinia koskevat tiedot
Egg production should be assessed daily during the pre-exposure phase.
tulokset aineiston analyyseista mieluiten taulukkoina ja graafisessa muodossa
It is recommended that spawning be observed in all replicate tanks prior to inclusion in the exposure phase of the assay.
tiedot kalojen mahdollisista epätavallisista reaktioista ja testikemikaalin aiheuttamista mahdollisista näkyvistä vaikutuksista
Quantitative guidance on desirable daily egg production cannot be provided at this stage, but it is relatively common to observe average spawns of > 10 eggs/female/day for each species.
TESTITULOSTEN TULKINTAA JA HYVÄKSYMISTÄ KOSKEVAT OHJEET
A randomised block design according to egg production output should be used to allocate replicates to the various experimental levels to ensure balanced distribution of replicates.
Tämä kohta sisältää joitakin seikkoja, jotka on otettava huomioon, kun eri tutkittavia ominaisuuksia koskevia testituloksia tulkitaan.
TEST DESIGN
Tuloksia on tulkittava varoen, jos testikemikaali vaikuttaa aiheuttavan ilmeistä toksisuutta tai vaikuttavan koe-eläimen yleiskuntoon.
Three concentrations of the test chemical, one control (water) and, if needed, one solvent control are used.
Testipitoisuuksien vaihteluvälin asettamisessa on varottava ylittämästä suurinta siedettyä pitoisuutta, jotta aineiston järkevä tulkinta on mahdollista.
The data may be analysed in order to determine statistically significant differences between treatment and control responses.
On tärkeää, että testissä on vähintään yksi käsittely, jossa ei ilmene merkkejä myrkyllisistä vaikutuksista.
These analyses will inform whether further longer term testing for adverse effects (namely, survival, development, growth and reproduction) is required for the chemical, rather than for use in risk assessment (25).
Sairauden ja myrkyllisten vaikutusten merkit on arvioitava ja raportoitava perinpohjaisesti.
For zebrafish, on day 21 of the experiment, males and females from each treatment level (5 males and 5 females in each of the two replicates) and from the control(s) are sampled for the measurement of vitellogenin.
On esimerkiksi mahdollista, että naarailla vitellogeniinin tuotantoon voivat vaikuttaa myös yleinen toksisuus ja muuhun kuin hormonijärjestelmään kohdistuvat myrkylliset vaikutustavat (esimerkiksi hepatotoksisuus).
For medaka, on day 21 of the experiment, males and females from each treatment level (3 males and 3 females in each of the four replicates) and from the control(s) are sampled for the measurement of vitellogenin and secondary sex characteristics.
Vaikutusten tulkintaa voidaan kuitenkin vahvistaa muilta käsittelytasoilta saaduilla tuloksilla, joita ei voida perustella systeemisellä toksisuudella.
For fathead minnow, on day 21 of exposure, males and females (2 males and 4 females in each of the four replicates) and from the control(s) are sampled for the measurement of vitellogenin and secondary sex characteristics.
Testituloksen hyväksyttävyyden kannalta on otettava huomioon muutamia seikkoja.
Quantitative assessment of fecundity is required, and gonadal tissues should be fixed in whole or dissected for potential histopathological evaluation, if required.
Perusohje on, että kontrolliryhmien koiraiden ja naaraiden vitellogeniinitasot on eriytettävä ja eroteltava rasvapäämudulla ja seeprakalalla noin kolmeen suuruusluokkaan ja medakalla noin yhteen suuruusluokkaan.
Selection of test concentrations
Validointiraporteissa (1, 2, 3, 4) on esimerkkejä kontrolli- ja käsittelyryhmistä saatujen arvojen vaihteluvälistä.
For the purposes of this test, the highest test concentration should be set by the maximum tolerated concentration (MTC) determined from a range finder or from other toxicity data, or 10 mg/l, or the maximum solubility in water, whichever is lowest.
Kontrolliryhmän koirailla tavatut suuret vitellogeniiniarvot voivat heikentää testin herkkyyttä ja sen kykyä havaita heikkoja estrogeeniagonisteja.
The MTC is defined as the highest test concentration of the chemical which results in less than 10 % mortality.
Kontrolliryhmän naarailla tavatut pienet vitellogeniiniarvot voivat niin ikään heikentää testin herkkyyttä ja sen kykyä havaita aromataasin estäjiä ja estrogeeniantagonisteja.
Using this approach assumes that there are existing empirical acute toxicity data or other toxicity data from which the MTC can be estimated.
Nämä ohjeet on laadittu validointitutkimusten perusteella.