natgillin/translations-raw huggingface dataset:
The eggs spawned onto the tray fall through the lattice and can be sampled 45-60 min after the start of illumination.
(Vaihtoehtoisesti seinämät voidaan kiinnittää sivuille.)
The transparent eggs are non-adhesive and can easily be counted by using transversal light.
Nuoli osoittaa maksaa.
When using five females per vessel, egg numbers up to 20 at a day can be regarded as low, up to 100 as medium and more than 100 as high numbers.
Maksa leikataan irti suoraan ja otetaan pois pihdeillä.
The spawning tray should be removed, the eggs collected and the spawning tray re-introduced in the test vessel, either as late as possible in the evening or very early in the morning.
Kuva 5
The time until re-introduction should not exceed one hour since otherwise the cue of the spawning substrate may induce individual mating and spawning at an unusual time.
Sisäelimet irrotetaan varovasti pihdeillä.
If a situation needs a later introduction of the spawning tray, this should be done at least 9 hours after start of the illumination.
Kuva 6
At this late time of the day, spawning is not induced any longer.
Sisäelinten molemmat päät ja mahdolliset suoliliepeen kiinnikkeet leikataan irti saksilla.
Appendix 4B
Kuva 7 (naaras)
SPAWNING SUBSTRATE FOR FATHEAD MINNOW
Menettely on naaraiden osalta samanlainen.
Two or three combined plastic/ceramic/glass or stainless steel spawning tiles and trays are placed in each of the test chamber (e.g. 80 mm length of grey semi-circular guttering sitting on a lipped tray of 130mm length) (see picture).
Kuva 8
Properly seasoned PVC or ceramic tiles have demonstrated to be appropriate for a spawning substrate (Thorpe et al, 2007).
Toimenpide on valmis.
It is recommended that the tiles are abraded to improve adhesion.
Menetelmä 2 B:
The tray should also be screened to prevent fish from access to the fallen eggs unless the egg adhesion efficiency has been demonstrated for the spawning substrate used.
Medaka (Oryzias latipes), maksan esikäsittely vitellogeniinialyysia varten
The base is designed to contain any eggs that do not adhere to the tile surface and would therefore fall to the bottom of the tank (or those eggs laid directly onto the flat plastic base).
Ota homogenaattipuskuria sisältävä pullo ELISA-pakkauksesta ja jäähdytä se jäämurskalla (liuoksen lämpötila: ≤ 4 °C).
All spawning substrates should be leached for a minimum of 12 hours, in dilution water, before use.
Jos käytetään EnBio ELISA -järjestelmän homogenaattipuskuria, sulata liuos huoneenlämmössä ja jäähdytä pullo sen jälkeen jäämurskalla.
Appendix 5A
Laske tarvittavan homogenaattipuskurin määrä maksan painon perusteella (lisää 50 μl homogenaattipuskuria maksan painomilligrammaa kohti).
ASSESSMENT OF SECONDARY SEX CHARACTERISTICS IN FATHEAD MINNOW FOR THE DETECTION OF CERTAIN ENDOCRINE ACTIVE CHEMICALS
Esimerkki: jos maksa painaa 4,5 mg, tarvittavan homogenaattipuskurin määrä on 225 μl.
Overview
Tee luettelo kutakin maksaa varten tarvittavan homogenaattipuskurin määrästä.
Potentially important characteristics of physical appearance in adult fathead minnows in endocrine disrupter testing include body colour (i.e., light/dark), coloration patterns (i.e., presence or absence of vertical bands), body shape (i.e., shape of head and pectoral region, distension of abdomen), and specialised secondary sex characteristics (i.e., number and size of nuptial tubercles, size of dorsal pad and ovipositor).
Maksan valmistelu esikäsittelyä varten
Nuptial tubercles are located on the head (dorsal pad) of reproductively-active male fathead minnows, and are usually arranged in a bilaterally-symmetric pattern (Jensen et al.
Ota maksan sisältävä 1,5 ml:n putki pakastimesta juuri ennen esikäsittelyä.
2001).
Koiraiden maksojen esikäsittely on tehtävä ennen naaraiden maksojen käsittelyä vitellogeniinikontaminaation välttämiseksi.
Control females and juvenile males and females exhibit no tubercle development (Jensen et al.
Lisäksi testiryhmät esikäsitellään seuraavassa järjestyksessä: kontrolli, liuotinkontrolli (tarvittaessa), pienin pitoisuus, keskisuuri pitoisuus, suurin pitoisuus ja positiivinen kontrolli.
2001).
Pakastimesta ei saa ottaa enempää maksanäytteitä sisältäviä 1,5 ml:n mikroputkia kuin yhdellä kerralla voidaan sentrifugoida.
There can be up to eight individual tubercles around the eyes and between the nares of the males.
Laita näytteet sisältävät 1,5 ml:n mikroputket jäätelineeseen näytenumeroiden mukaiseen järjestykseen (maksanäytteitä ei tarvitse sulattaa).
The greatest numbers and largest tubercles are located in two parallel lines immediately below the nares and above the mouth.
Esikäsittely
In many fish there are groups of tubercles below the lower jaw; those closest to the mouth generally occur as a single pair, while the more ventral set can be comprised of up to four tubercles.
Homogenaattipuskurin lisääminen
The actual numbers of tubercles is seldom more than 30 (range, 18-28; Jensen et al.
Tarkista luettelosta, kuinka paljon homogenaattipuskuria kutakin maksanäytettä kohti on käytettävä ja säädä mikropipetti (vaihteluväli: 100–1000 μl) tarvittavan määrän mukaisesti.
2001).
Kiinnitä mikropipettiin puhdas kärki.
The predominant tubercles (in terms of numbers) are present as a single, relatively round structure, with the height approximately equivalent to the radius.
Ota homogenaattipuskuri reagenssipullosta ja lisää puskuri maksanäytteen sisältävään 1,5 ml:n mikroputkeen.
Most reproductively-active males also have, at least some, tubercles which are enlarged and pronounced such that they are indistinguishable as individual structures.
Lisää edellä kuvatun menettelyn mukaisesti homogenaattipuskuri kaikkiin 1,5 ml:n mikroputkiin, jotka sisältävät maksanäytteen.
Some types of endocrine-disrupting chemicals can cause the abnormal occurrence of certain secondary sex characteristics in the opposite sex; for example, androgen receptor agonists, such as 17α-methyltestosterone or 17β-trenbolone, can cause female fathead minnows to develop nuptial tubercles (Smith 1974; Ankley et al.
Maksan homogenisointi
2001; 2003), while oestrogen receptor agonists may decrease number or size of nuptial tubercles in males (Miles-Richardson et al.
Kiinnitä mikroputkihomogenisaattoriin uusi homogenisointipää.
1999; Harries et al.
Työnnä pää 1,5 ml:n mikroputkeen.
2000).
Pidä homogenisaattoria siten, että maksa puristuu pään pinnan ja 1,5 ml:n mikroputken seinän väliin.
Below is a description of the characterisation of nuptial tubercles in fathead minnows based on procedures used at the U.S. Environmental Protection Agency lab in Duluth, MN.
Käytä homogenisaattoria 10–20 sekunnin ajan.
Specific products and/or equipment can be substituted with comparable materials available.
Jäähdytä 1,5 ml:n mikroputkea jäämurskalla toimenpiteen ajan.
Viewing is best accomplished using an illuminated magnifying glass or 3X illuminated dissection scope.
Nosta homogenisointipää 1,5 ml:n mikroputkesta ja anna sen levätä noin 10 sekuntia.
View fish dorsally and anterior forward (head toward viewer).
Tarkasta suspension tila sen jälkeen silmämääräisesti.
Place fish in small Petri dish (e.g. 100 mm in diameter), anterior forward, and ventral down.
Jos suspensiossa näkyy maksan palasia, toista vaiheet 3 ja 4 hyväksyttävän maksahomogenaatin saamiseksi.
Focus viewfinder to allow identification of tubercles.
Jäähdytä suspendoitua maksahomogenaattia jäätelineessä sentrifugointiin saakka.
Gently and slowly roll fish from side to side to identify tubercle areas.
Vaihda homogenisaattoriin uusi pää jokaista homogenaattia varten.
Count and score tubercles.
Homogenisoi kaikki maksat homogenaattipuskurilla edellä kuvatun menetelmän mukaisesti.
Repeat the observation on the ventral head surface by placing the fish dorsal anterior forward in the Petri dish.
Suspendoidun maksahomogenaatin sentrifugointi
Observations should be completed within 2 min for each fish.
Tarkista, että jäähdyttävän sentrifugikammion lämpötila on 5 °C.
Tubercle Counting and Rating
Laita suspendoidun maksahomogenaatin sisältävät 1,5 ml:n mikroputket jäähdyttävään sentrifugiin (säädä tasapaino tarvittaessa).
Six specific areas have been identified for assessment of tubercle presence and development in adult fathead minnows.
Sentrifugoi suspendoituja maksahomogenaatteja 5 °C:n lämpötilassa 10 minuuttia g-arvolla 13000.
A template was developed to map the location and quantity of tubercles present (see end of this appendix).
Jos supernatanttien erottelu on kuitenkin riittävä, keskipakoisvoimaa ja sentrifugointiaikaa voi tarvittaessa säätää.
The number of tubercles is recorded and their size can be quantitatively ranked as: 0- absence, 1-present, 2-enlarged and 3-pronounced for each organism (Fig.
Tarkista sentrifugoinnin jälkeen, että supernatanttien erottelu on riittävä (pintakerros: lipidit, välikerros: supernatantti, pohjakerros: maksakudos).
1).
Jos erottelu ei ole riittävä, sentrifugoi suspensio uudestaan samoissa olosuhteissa.
Rate 0 — absence of any tubercle.
Ota kaikki näytteet pois jäähdyttävästä sentrifugista ja aseta ne jäätelineeseen näytenumeron mukaiseen järjestykseen.
Rating 1 — present, is identified as any tubercle having a single point whose height is nearly equivalent to its radius.
Varo suspendoimasta eroteltuja kerroksia uudestaan sentrifugoinnin jälkeen.
Rating 2 — enlarged, is identified by tissue resembling an asterisk in appearance, usually having a large radial base with grooves or furrows emerging from the centre.
Supernatantin kerääminen
Tubercle height is often more jagged but can be somewhat rounded at times.
Laita putkitelineeseen neljä 0,5 ml:n mikroputkea supernatantin säilyttämistä varten.
Rating 3 — pronounced, is usually quite large and rounded with less definition in structure.
Ota mikropipetillä 30 μl jokaisesta supernatantista (joka on eroteltu välikerrokseen) ja tyhjennä määrä yhteen 0,5 ml:n mikroputkeen.
At times these tubercles will run together forming a single mass along an individual or combination of areas (B, C and D, described below).
Varo keräämästä pintakerroksessa olevia lipidejä tai pohjakerroksessa olevaa maksakudosta.
Coloration and design are similar to rating 2 but at times are fairly indiscriminate.
Kerää supernatantti ja tyhjennä se kahteen muuhun 0,5 ml:n mikroputkeen edellä kuvatulla tavalla.
Using this rating system generally will result in overall tubercle scores of < 50 in a normal control male possessing a tubercle count of 18 to 20 (Jensen et al.
Kerää loput supernatantista mikropipetillä (jos mahdollista: ≥ 100 μl).
2001).
Tyhjennä tämä määrä neljänteen 0,5 ml:n mikroputkeen.
The actual number of tubercles in some fish may be greater than the template boxes for a particular rating area.
Sulje 0,5 ml:n mikroputkien päät tulpalla ja kirjoita supernatantin määrä etikettiin.
If this happens, additional rating numbers may be marked within, to the right or to the left of the box.
Jäähdytä mikroputket välittömästi jäätelineessä.
The template therefore does not need to display symmetry.
Vaihda mikropipettiin uusi kärki jokaista supernatanttia varten.
An additional technique for mapping tubercles which are paired or joined vertically along the horizontal plane of the mouth could be done by double-marking two tubercle rating points in a single box.
Jos kärkeen kiinnittyy suuri määrä lipidejä, vaihda se uuteen välittömästi, jotta rasva ei kontaminoi maksanäytettä.
Mapping regions:
Tyhjennä kaikki sentrifugoidut supernatantit neljään 0,5 ml:n mikroputkeen edellä kuvatulla tavalla.
A — Tubercles located around eye.
Kun olet tyhjentänyt supernatantin 0,5 ml:n mikroputkiin, laita kaikki etiketöidyt putket putkitelineeseen ja pakasta ne välittömästi.
Mapped dorsal to ventral around anterior rim of eye.
Jos vitellogeniinipitoisuudet mitataan välittömästi esikäsittelyn jälkeen, pidä yksi 0,5 ml:n mikroputki (joka sisältää 30 μl supernatanttia) jäähdytettynä putkitelineessä ja vie se siihen työpisteeseen, jossa ELISA-määritys tehdään.
Commonly multiple in mature control males, not present in control females, generally paired (one near each eye) or single in females exposed to androgens.
Laita muut mikroputket putkitelineisiin ja pakasta ne.
Not present in control females with some occurrence and development in females exposed to androgens.
Säilytä maksahomogenaatin supernatanttia sisältävät 0,5 ml:n mikroputket – 70 °C:ssa siihen saakka, kun niitä käytetään ELISA-määrityksessä.
C — Tubercles located immediately anterior to nares, parallel to mouth.
Menetelmä 3A:
Generally enlarged or pronounced in mature control males.
Seeprakala, verinäytteen otto pyrstösuonesta
Present or enlarged in less developed males or androgen-treated females.
Pyrstöön tehdään välittömästi nukutuksen jälkeen poikittainen viilto, ja verinäyte otetaan pyrstösuonesta heparinisoituun mikrohematokriittikapillaariputkeen.
D — Tubercles located parallel along mouth line.
Verimäärä vaihtelee 5–15 mikrolitraan kalan koon mukaan.
Generally rated developed in control males.
Mikrokapillaariputkeen lisätään sama määrä aprotiniinipuskuria (6 mikrogrammaa/ml fosfaattipuskuroidussa suolaliuoksessa), ja plasma erotellaan verestä sentrifugoimalla (5 minuuttia g-arvolla 600).
Absent in control females but present in androgen-exposed females.
Plasma kerätään koeputkiin ja varastoidaan – 20 °C:ssä siihen saakka, kunnes siitä analysoidaan vitellogeniini tai muut tutkittavat proteiinit.
E — Tubercles located on lower jaw, close to mouth, usually small and commonly in pairs.
Menetelmä 3B:
Varying in control or treated males, and treated females.
Seeprakala, verinäytteen otto sydänpunktiolla
F — Tubercles located ventral to E. Commonly small and paired.
Veren koaguloitumisen ja proteiinin hajoamisen välttämiseksi näytteet otetaan fosfaattipuskuroituun suolaliuokseen, joka sisältää hepariinia (1000 yksikköä/ml) ja proteaasin estäjää, aprotiniinia (2 TIU/ml).
Present in control males and androgen-exposed females.
Hepariini-ammoniumsuola ja kylmäkuivattu aprotiniini ovat puskurin suositeltavia ainesosia.
Tubercle Template:
Näytteenotossa suositellaan käytettäväksi ruiskua (1 ml) ja kiinteää ohutneulaa (esimerkiksi Braun Omnikan-F).
Numerical Rating
Ruisku on esitäytettävä puskurilla (noin 100 mikrolitraa), jotta jokaisen kalan pieni verimäärä voidaan eluoida kunnolla.
Date
Verinäytteet otetaan sydänpunktiolla.
resent
Ensin kala on nukutettava MS-222:lla (100 mg/l).
Total Score
Kun anestesian taso on asianmukainen, näytteenottaja voi erottaa seeprakalan sydämensykkeen.
nlarged
Pidä ruiskun mäntä pienen paineen alaisena, kun punktoit sydäntä.
ronounced
Kerättävän veren määrä on 20–40 mikrolitraa.
Appendix 5B
Sydänpunktion jälkeen veri-puskuriseos on laitettava koeputkeen.
ASSESSMENT OF SECONDARY SEX CHARACTERISTICS IN MEDAKA FOR THE DETECTION OF CERTAIN ENDOCRINE ACTIVE CHEMICALS
Plasma erotellaan verestä sentrifugoimalla (20 minuuttia; g-arvo 5000), ja sitä on säilytettävä – 80 °C:ssa analysointiin saakka.
Below is a description of the measurement of papillary processes [1], which are the secondary sex characteristics in medaka (Oryzias latipes).
Menetelmä 3C:
After the excision of the liver (Appendix 6), the carcass is placed into a conical tube containing about 10 ml of 10 % neutral buffered formalin (upside: head, downside: tail).
Menettelytapaohje – seeprakala, pään ja pyrstön homogenisointi
If the gonad is fixed in a solution other than 10 % neutral buffered formalin, make a transverse cut across the carcass between anterior region of anal fin and anus using razor, taking care not to harm the gonopore and gonad itself (Fig.3).
Kalat nukutetaan ja lopetetaan testikuvauksen mukaisesti.
Place the cranial side of the fish body into the fixative solution to preserve the gonad, and the tail side of the fish body into the 10 % neutral buffered formalin as described above.
Kalan pää ja pyrstö leikataan kuvassa 1 näkyvällä tavalla.
After placing the fish body into 10 % neutral buffered formalin, grasp the anterior region of the anal fin with tweezers and fold it for about 30 seconds to keep the anal fin open.
Tärkeää: Kaikki dissektiovälineet ja leikkauspöytä on huuhdeltava ja puhdistettava kunnolla (esimerkiksi 96-prosenttisella etanolilla) jokaisen kalan käsittelyn jälkeen, jotta naaraiden tai niiden koiraiden, joille kemikaali on aiheuttanut vaikutuksia, vitellogeniini ei saastuta terveitä koiraita.
When grasping the anal fin with tweezers, grasp a few fin rays in the anterior region with care not to scratch the papillary processes.
Vitellogeniini- analyysiä varten
After keeping the anal fin open for about 30 seconds, store the fish body in 10 % neutral buffered formalin at room temperature until the measurement of the papillary processes (measurement should be conducted after fixing for at least 24 hours).
Sukurauhasten histologiaa varten
Measurement
Vitellogeniini- analyysiä varten
After fixing the fish body in the 10 % neutral buffered formalin for at least 24 hours, pick up the fish carcass from the conical tube and wipe the formalin on the filter paper (or paper towel).
Leikataan selkäevän takaa
Place the fish abdomen side up.
Jokaisen kalan pään ja pyrstön yhteispaino punnitaan lähimpään milligrammaan.
Then cut the anal fin using small dissection scissors carefully (it is preferable to cut the anal fin with small amount of pterygiophore).
Punnituksen jälkeen kalan osat laitetaan asianmukaisiin putkiin (esimerkiksi 1,5 ml:n Eppendorf-putkiin) ja jäädytetään – 80 °C:seen, jossa niitä säilytetään homogenisointiin saakka.
Grasp the anterior region of the severed anal fin with tweezers and put it on a glass slide with a several drops of water.
Ne voidaan myös homogenisoida suoraan jäällä kahdella muovisurvimella.
Then cover the anal fin with a cover glass.
Kun homogeeninen massa on valmis, siihen lisätään neljä kertaa kudoksen painon verran jääkylmää homogenisointipuskuria [1].
Be careful not to scratch the papillary processes when grasping the anal fin with tweezers.
Jatka työskentelyä survimilla, kunnes seos on homogeeninen.
Count the number of the joint plate with papillary processes using the counter under a biological microscope (upright microscope or inverted microscope).
Tärkeä huomautus: Jokaiselle kalalle käytetään uusia survimia.
The papillary processes are recognised when a small formation of processes is visible on the posterior margin of joint plate.
Näytteet laitetaan jäälle siihen saakka, kunnes ne sentrifugoidaan 4 °C:ssa (g-arvo 50000) 30 minuutin ajan.
Write the number of joint plate with papillary processes in each fin ray to the worksheet (e.g. first fin ray: 0, second fin ray: 10, third fin ray: 12, etc.) and enter the sum of this number on the Excel spreadsheet by individual fish.
Laita pipetillä 20 μl:n supernatanttiannoksia vähintään kahteen putkeen upottamalla pipetin kärki pinnan rasvakerroksen läpi ja vetämällä varovasti supernatanttia pipettiin ilman rasva- tai pellettifraktioita.
If necessary, take a photograph of the anal fin and count the number of joint plate with papillary processes on the photograph.
Putkia säilytetään – 80 °C:ssa siihen saakka, kunnes niitä käytetään.
After the measurement, put the anal fin into the conical tube described in (1) and store it.
VITELLOGENIININ RIKASTUSNÄYTTEET JA MÄÄRITYSTEN VÄLINEN VERTAILUAINE
Fig.1.
Niinä päivinä, kun tehdään vitellogeniinimäärityksiä, analysoidaan myös rikastusnäyte käyttämällä määritysten välistä vertailuainetta.
Diagram showing sexual difference in shape and size of the anal fin.
Määritysten välisen vertailuaineen valmistamisessa käytettävä vitellogeniini on peräisin eri erästä kuin se, jota käytettiin tehtävän määrityksen kalibrointistandardien tekemiseen.
A, male; B, female.
Rikastusnäyte tehdään lisäämällä tunnettu määrä määritysten välistä vertailuainetta kontrollikoiraan plasmanäytteeseen.
Fig.2.
Näytettä rikastetaan, jotta saadaan sellainen vitellogeniinipitoisuus, joka on 10–100 kertaa suurempi kuin kontrollikoiraan odotettu vitellogeniinipitoisuus.
A, Processes on joint plates of anal fin-ray.
Rikastettava kontrollikoiraan plasmanäyte voi olla peräisin yksittäiseltä kalalta, tai se voidaan yhdistää useilta kaloilta.
J.P., joint plate; A.S., axial space; P., process.
Rikastamattomasta kontrollikoiraan plasmasta otettu alanäyte analysoidaan vähintään kahdessa rinnakkaisessa kuopassa.
B, Distal extremity of fin-ray.
Myös rikastettu näyte analysoidaan vähintään kahdessa rinnakkaisessa kuopassa.
Actinotrichia (Act.) are on the tip.
Vitellogeniinin keskimääräinen määrä kahdessa rikastamattomassa kontrollikoiraan plasmanäytteessä lisätään siihen vitellogeniinin laskettuun määrään, joka on lisätty näytteiden rikastamiseen, odotetun pitoisuuden määrittämiseksi.
Fig.3.
Tämä odotetun pitoisuuden ja mitatun pitoisuuden välinen suhde ilmoitetaan kyseisenä päivänä tehtyjen määritysten tulosten mukana.
Photograph of fish body showing the cut site when the gonad is fixed in the fixing solution other than 10 % neutral buffered formalin.
VUOKAAVIO TILASTOLLISTA ANALYYSIA KOSKEVAN PÄÄTÖKSENTEON TUEKSI
In that case, the remaining body will be cut off between anterior region of anal fin and anal using razor (red bar), and the head side of fish body will be put into the fixing solution for gonad and the tail side of the fish body will be put into the 10 % neutral buffered formalin.
Dunnin tai Mann-Whitneyn testi rinnakkaisnäytteiden keskiarvoilla
Papillary processes normally appear only in adult males and are found on fin rays from the second to the seventh or eighth counting from the posterior end of the anal fin (Fig.1 and 2).
Dunnin testi rinnakkaisnäyt-teiden keskiarvoilla Ei
However, processes rarely appear on the first fin ray from the posterior end of the anal fin.
Dunnin testi <=3 rinnak. per pit.
This SOP covers the measurement of processes on the first fin ray (the fin ray number refers to the order from the posterior end of the anal fin in this SOP).
Rinnakkaisnäytteiden keskiarvot eivät ole normaal. tai homogeen.
RECOMMENDED PROCEDURES FOR SAMPLE COLLECTION FOR VITELLOGENIN ANALYSIS
Rinnakkaisnäytteiden keskiarvot normaalit ja homogeeniset
Care should be taken to avoid cross-contamination between VTG samples of males and females.
Jonckheeren tai Williamsin vertailutesti (step-down test)
Procedure 1A:
>=4 rinnak. per pit.
Fathead Minnow, Blood Collection from the Caudal Vein/Artery
Varianssia vakauttava muunnos?
After anaesthetisation, the caudal peduncle is partially severed with a scalpel blade and blood is collected from the caudal vein/artery with a heparinised microhematocrit capillary tube.
Sisäkk.
After the blood has been collected, the plasma is quickly isolated by centrifugation for 3 min at 15000 g (or alternatively for 10 min. at 15000 g at 4 °C).
<=4 rinnak. per pit.
If desired, percent haematocrit can be determined following centrifugation.
Tamhane-Dunnettin testi
The plasma portion is then removed from the microhematocrit tube and stored in a centrifuge tube with 0,13 units of aprotinin (a protease inhibitor) at – 80 °C until determination of VTG can be made.
ANOVA ei normaali Kyllä Ei
Depending on the size of the fathead minnow (which is sex-dependent), collectable plasma volumes generally range from 5 to 60 microliters per fish (Jensen et al.
Varianssit yhtäsuuret
2001).
Jonckheeren vertailutesti (step-down test)
Procedure 1B:
Rinnakkaisnäytteiden keskiarvojen jakauma normaali
Fathead Minnow, Blood Collection from Heart
Ei monotoninen
Alternatively, blood may also be collected by cardiac puncture using a heparinised syringe (1000 units of heparin per ml).
Monotoninen
The blood is transferred into Eppendorf tubes (held on ice) and then centrifuged (5 min, 7000 g, room temperature).
Määritä, onko annos-vastesuhde monotoninen
The plasma should be transferred into clean Eppendorf tubes (in aliquots if the volume of plasma makes this feasible) and promptly frozen at – 80 °C, until analysed (Panter et al., 1998).
C.49 Kalojen alkioilla tehtävä akuuttia toksisuutta koskeva testi (FET-testi)
Procedure 2A:
Tämä testimenetelmä vastaa OECD:n testiohjetta (TG) nro 236 (2013).
Test fish should be removed from the test chamber using the small spoon-net.
FET-testi perustuu seeprakaloilla toteutettuihin tutkimuksiin ja validointitoimiin (1) (2) (3) (4) (5) (6) (7) (8) (9) (10) (11) (12) (13) (14).