natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Slides should be randomly placed onto the platform of a submarine-type electrophoresis unit containing sufficient electrophoresis solution such that the surfaces of the slides are completely covered (the depth of covering should also be consistent from run to run).
Jos kaikki hyväksyttävyysperusteet täyttyvät, testikemikaalia pidetään selvästi positiivisena, jos
In another type of comet assay electrophoresis units i.e. with active cooling, circulation and high capacity power supply a higher solution covering will result in higher electric current while the voltage is kept constant.
a. ainakin yksi testiannoksista ilmentää tilastollisesti merkitsevää kasvua samanaikaiseen negatiiviseen kontrolliin verrattuna
A balanced design should be used to place slides in the electrophoresis tank to mitigate the effects of any trends or edge effect within the tank and to minimize batch-to-batch variability, i.e., in each electrophoresis run, there should be the same number of slides from each animal in the study and samples from the different dosage groups, negative and positive controls, should be included.
c. mikä tahansa tuloksista on aiempien negatiivisten kontrollitietojen jakauman ulkopuolella tietyn lajin, kantaja-aineen, reitin, kudoksen ja annostelutavan osalta.
The slides should be left for at least 20 minutes for the DNA to unwind, and then subjected to electrophoresis under controlled conditions that will maximize the sensitivity and dynamic range of the assay (i.e. lead to acceptable levels of % tail DNA for negative and positive controls that maximize sensitivity).
Kun kaikki nämä perusteet täyttyvät, testikemikaalin katsotaan voivan aiheuttaa DNA:n säikeiden katkeamista testijärjestelmässä tutkituissa kudoksissa.
The level of DNA migration is linearly associated with the duration of electrophoresis, and also with the potential (V/cm).
Jos kriteereistä täyttyy vain yksi tai kaksi, ks. 62 kohta.
Based on the JaCVAM trial this could be 0,7 V/cm for at least 20 minutes.
Jos kaikki hyväksyttävyysperusteet täyttyvät, testikemikaalia pidetään selvästi negatiivisena, jos
The duration of electrophoresis is considered a critical variable and the electrophoresis time should be set to optimize the dynamic range.
b. kasvu ei riipu pitoisuudesta, kun sitä arvioidaan asianmukaisella trenditestillä
Longer electrophoresis times (e.g. 30 or 40 minutes to maximize sensitivity) usually lead to stronger positive responses with known mutagens.
c. kaikki tulokset ovat aiemman negatiivisten kontrollitietojen jakauman sisällä tietyn lajin, kantaja-aineen, reitin, kudoksen ja annostelutavan osalta
However longer electrophoresis times may also lead to excessive migration in control samples.
d. on saatu suoraa tai välillistä näyttöä kohdekudoksen/-kudosten altistumisesta tai toksisuudesta kohdekudokselle/-kudoksille.
In each experiment the voltage should be kept constant, and the variability in the other parameters should be within a narrow and specified range, for example in the JaCVAM trial 0,7 V/cm delivered a starting current of 300 mA.
Tällöin katsotaan, että testikemikaali ei kykene aiheuttamaan DNA-säikeiden katkeamista tässä testijärjestelmässä tutkituissa kudoksissa.
The depth of buffer should be adjusted to achieve the required conditions and maintained throughout the experiment.
Jos vaste ei ole selvästi negatiivinen eikä selvästi positiivinen (eli jos kaikki 59 tai 60 kohdassa luetellut perusteet eivät täyty), tuloksen biologisen merkityksellisyyden määrittämiseksi asiantuntijan pitäisi arvioida tietoja ja/tai pitäisi tehdä lisätutkimuksia, jos se on tieteellisesti perusteltua.
The current at the start and end of the electrophoresis period should be recorded.
Ylimääräisten solujen arvioinnista (tarvittaessa) tai kokeen toistamisesta mahdollisesti optimoiduissa olosuhteissa (esimerkiksi annosväli, muut annostelureitit, muut näytteenottoajat tai muut kudokset) voisi olla hyötyä.
The optimum conditions should therefore be determined during the initial demonstration of proficiency in the laboratory concerned with each tissue studied.
Päätelmää positiivisuudesta tai negatiivisuudesta ei joissain erittäin harvoissa tapauksissa voida tehdä tietojen pohjalta edes lisätutkimusten jälkeen.
The temperature of the electrophoresis solution through unwinding and electrophoresis should be maintained at a low temperature, usually 2-10 °C (10).
Niitä pidetään tästä syystä epäselvinä tapauksina.
The temperature of the electrophoresis solution at the start of unwinding, the start of electrophoresis, and the end of electrophoresis should be recorded.
Positiivisen tai epäselvän tuloksen biologisen merkityksellisyyden arviointi vaatii tietoa sytotoksisuudesta kohdekudoksessa (ks. 54–55 kohta).
After completion of electrophoresis, the slides should be immersed/rinsed in the neutralization buffer for at least 5 minutes.
Kun sytotoksisuudesta on selvää näyttöä ja havainnot ovat positiivisia tai epäselviä, tutkimus on katsottava genotoksisuuden osalta epäselväksi, ellei saatavana ole riittävästi tietoa, joka tukee lopullisen johtopäätöksen tekemistä.
Gels can be stained and scored “fresh” (e.g. within 1-2 days) or can be dehydrated for later scoring (e.g. within 1-2 weeks after staining) (56).
Jos tutkimuksen tulos on negatiivinen ja toksisuudesta on merkkejä kaikilla testatuilla annoksilla, lisätutkimusten tekeminen ei-toksisilla annoksilla saattaa olla suositeltavaa.
However, the conditions should be validated during the demonstration of proficiency and historical data should be obtained and retained separately for each of these conditions.
lähde, erän numero, jos saatavilla
In case of the latter, slides should be dehydrated by immersion into absolute ethanol for at least 5 minutes, allowed to air dry, and then stored, either at room temperature or in a container in a refrigerator until scored.
testikemikaalin stabiilisuus, viimeinen käyttöpäivä tai uudelleenanalysointipäivä, jos se on tiedossa.
Methods of Measurement
Liuotin/kantaja-aine:
Comets should be scored quantitatively using an automated or semi-automated image-analysis system.
liuottimen/kantaja-aineen valintaperusteet
The slides will be stained with an appropriate fluorescent stain e.g. SYBR Gold, Green I, propidium iodide or ethidium bromide and measured at a suitable magnification (e.g. 200x) on a microscope equipped with epi-fluorescence and appropriate detectors or a digital (e.g. CCD) camera.
annosformulaatioiden valmistelu
Cells may be classified into three categories as described in the atlas of comet images (57), namely scorable, non-scorable and “hedgehog” (see paragraph 56 for further discussion).
formulaatioiden analyyttiset määritelmät (esimerkiksi stabiilius, homogeenisyys, nimelliset pitoisuudet).
Only scorable cells (clearly defined head and tail with no interference with neighbouring cells) should be scored for % tail DNA to avoid artefacts.
käytetty laji/kanta sekä tieteelliset ja eettiset perustelut sen valinnalle
There is no need to report the frequency of non-scorable cells.
lähde, elinolosuhteet, ravinto, virikkeet jne.
The frequency of hedgehogs should be determined based on the visual scoring (since the absence of a clearly-defined head will mean they are not readily detected by image analysis) of at least 150 cells per sample (see paragraph 56 for further discussion) and separately documented.
eläinten yksilöllinen paino testin alussa ja lopussa, myös painon vaihteluväli, keskiarvo ja keskihajonta kussakin ryhmässä.
All slides for analysis, including those of positive and negative controls, should be independently coded and scored “blinded” so the scorer is unaware of the treatment condition.
mahdolliset raja-annostutkimuksen tulokset (jos sellainen on tehty)
For each sample (per tissue per animal), at least 150 cells (excluding hedgehogs — see paragraph 56) should be analysed.
antotavan valintaperusteet
Scoring 150 cells per animal in at least 5 animals per dose (less in the concurrent positive control — see paragraph 29) provides adequate statistical power according to the analysis of Smith et al., 2008 (5).
injektiokohta (tutkimuksissa, joissa annostelu tapahtuu ihonalaisesti tai suonensisäisesti)
If slides are used, this could be from 2 or 3 slides scored per sample when five animals per group are used.
näytteiden valmistelumenetelmät, jos ne ovat saatavana, histopatologiset analyysit erityisesti positiivisen komeettavasteen antavan kemikaalin osalta
Several areas of the slide should be observed at a density that ensures there is no overlapping of tails.
kudoksen valintaperusteet
Scoring at the edge of slides should be avoided.
menettelyt, joilla varmistetaan, että testikemikaali välittyi kohdekudokseen tai verenkiertoon, jos saadaan negatiivisia tuloksia
DNA strand breaks in the comet assay can be measured by independent endpoints such as % tail DNA, tail length and tail moment.
yksityiskohdat ravinnon ja veden laadusta
All three measurements can be made if the appropriate image software analyser system is used.
yksityiskohtaiset tiedot käsittely- ja näytteenottoaikataulusta ja perustelut valinnoille (esimerkiksi toksikokineettiset tiedot, jos niitä on saatavana)
However, the % tail DNA (also known as % tail intensity) is recommended for the evaluation and interpretation of results (12) (40) (41) (42), and is determined by the DNA fragment intensity in the tail expressed as a percentage of the cell's total intensity (13).
kivunlievitysmenetelmä, analgesia
Tissue damage and cytotoxicity
kudosten eristämis- ja säilömismenetelmät
Positive findings in the comet assay may not be solely due to genotoxicity, target tissue toxicity may also result in increases in DNA migration (12) (41).
yhden solun/tuman suspension valmistamismenetelmät
Conversely, low or moderate cytotoxicity is often seen with known genotoxins (12), showing that it is not possible to distinguish DNA migration induced by genotoxicity versus that induced by cytotoxicity in the comet assay alone.
kaikkien reagenssien lähde ja eränumerot (jos mahdollista)
However, where increases in DNA migration are observed, it is recommended that an examination of one or more indicators of cytotoxicity is performed as this can aid in interpretation of the findings.
sytotoksisuuden arviointimenetelmät
Increases in DNA migration in the presence of clear evidence of cytotoxicity should be interpreted with caution.
elektroforeesiolosuhteet
Many measures of cytotoxicty have been proposed and of these histopathological changes are considered a relevant measure of tissue toxicity.
käytetyt värjäystekniikat
Observations such as inflammation, cell infiltration, apoptotic or necrotic changes have been associated with increases in DNA migration, however, as demonstrated by the JaCVAM validation trial (12) no definitive list of histopathological changes that are always associated with increased DNA migration is available.
komeettojen arviointi- ja mittausmenetelmät.
Changes in clinical chemistry measures (e.g. AST, ALT), can also provide useful information on tissue damage and additional indicators such as caspase activation, TUNEL stain, Annexin V stain, etc. may also be considered.
yleiset kliiniset havainnot, jos sellaisia on, ennen testijaksoa ja sen ajalta kustakin eläimestä
However, there are limited published data where the latter have been used for in vivo studies and some may be less reliable than others.
näyttö sytotoksisuudesta, jos tutkimus on tehty
Hedgehogs (or clouds, ghost cells) are cells that exhibit a microscopic image consisting of a small or non-existent head, and large diffuse tails and are considered to be heavily damaged cells, although the etiology of the hedgehogs is uncertain (see Appendix 3).
yli viikon tutkimuksista: yksittäisten eläinten painot tutkimuksen aikana, mukaan lukien painon vaihteluväli, keskiarvo ja normaalijakauma kunkin ryhmän osalta ruoan kulutus
Due to their appearance, % tail DNA measurements by image analysis are unreliable and therefore hedgehogs should be evaluated separately.
annos-vastesuhde, kun se on ilmeinen
The occurrence of hedgehogs should be noted and reported and any relevant increase thought to be due to the test chemical should be investigated and interpreted with care.
kunkin kudoksen/eläimen osalta pyrstön DNA-pitoisuus ( %) kunkin kudoksen/eläimen osalta, pyrstön DNA-pitoisuus ( %) (tai muut toimenpiteet, jos sellaisia on valittu) ja mediaani näytelevyä kohti, eläinkohtaiset keskiarvot ja ryhmäkohtaiset keskiarvot
Knowledge of the potential mode of action of the test chemicals may help with such considerations.
rinnakkaiset ja aikaisemmat negatiivista kontrollia koskevat tiedot, joihin sisältyvät vaihteluvälit, keskiarvot/mediaanit ja keskihajonta kunkin arvioidun kudoksen osalta
The animal is the experimental unit and therefore both individual animal data and summarized results should be presented in tabular form.
rinnakkaiset ja aikaisemmat positiivisilla kontrolleilla saadut tulokset
Due to the hierarchical nature of the data it is recommended that the median %tail DNA for each slide is determined and the mean of the median values is calculated for each animal (12).
muiden kudosten kuin maksan osalta annos-vastekäyrä positiivista kontrollia käytettäessä.
The mean of the individual animal means is then determined to give a group mean.
Nämä voivat olla peräisin tiedoista, jotka on kerätty pätevyyden osoittamisen aikana (ks. 16–17 kohta), ja niiden lisäksi pitäisi esittää perustelut, jotka sisältävät viittaukset ajankohtaiseen kirjallisuuteen, jotta voidaan arvioida suuruusluokan asianmukaisuutta ja kontrollivasteiden hajanaisuutta kyseisessä kudoksessa
All of these values should be included in the report.
tilastolliset analyysit ja käytetyt menetelmät sekä perusteet, joiden perusteella vaste katsotaan positiiviseksi, negatiiviseksi tai epäselväksi
Alternative approaches (see paragraph 53) may be used if scientifically and statistically justified.
ns. siilien esiintymistiheys kussakin ryhmässä ja eläimessä.
Statistical analysis can be done using a variety of approaches (58) (59) (60) (61).
Durand (1990), Heterogeneity in radiation-induced DNA damage and repair in tumor and normal cells using the ”Comet” assay, Radiation Research, Vol.
When selecting the statistical methods to be used, the need for transformation (e.g. log or square root) of the data and/or addition of a small number (e.g. 0,001) to all (even non-zero) values to mitigate the effects of zero cell values, should be considered as discussed in the above references.
122/1, s. 86–94.
Details of analysis of treatment/sex interactions when both sexes are used, and subsequent analysis of data where either differences or no differences are found is given in Appendix 2.
Tässä liitteessä oleva B.8 luku: Subakuutti toksisuus hengityksen kautta: 28-päiväinen tutkimus.
Data on toxicity and clinical signs should also be reported.
Tässä liitteessä oleva B.29 luku: Subkrooninen toksisuus hengitysteiden kautta: 90-päiväinen tutkimus.
The concurrent negative control is considered acceptable for addition to the laboratory historical negative control database as described in paragraph 16
OECD (2002), ”Guidance Document on the Recognition, Assessment and Use of Clinical Signs as Humane Endpoints for Experimental Animals Used in Safety Evaluation”, OECD Environment, Health and Safety Publications (EHS), Series on Testing and Assessment, No.
Concurrent positive controls (see paragraph 29) should induce responses that are compatible with those generated in the historical positive control database and produce a statistically significant increase compared with the concurrent negative control.
19, OECD Publishing, Paris.
Adequate numbers of cells and doses have been analysed (paragraphs 52 and 36-38).
Emäksinen yhden solun geelielektroforeesi
The criteria for the selection of highest dose are consistent with those described in paragraph 36.
Herkkä tekniikka, jolla havaitaan primaarinen DNA-vaurio yksittäisessä solussa/tumassa.
Providing that all acceptability criteria are fulfilled, a test chemical is considered to be clearly positive if:
Komeetta
at least one of the test doses exhibits a statistically significant increase compared with the concurrent negative control,
Komeettaa muistuttava muoto, jonka nukleoidit saavat sen jälkeen, kun ne on altistettu yhdelle elektroforeesikentälle: tuma muodostaa ytimen, ja pyrstö muodostuu DNA:sta, joka kulkeutuu ulos tumasta sähkökentässä.
any of the results are outside the distribution of the historical negative control data for a given species, vehicle, route, tissue, and number of administrations.
Koostumukseltaan tuntematon tai vaihteleva aine (UVCB)
When all of these criteria are met, the test chemical is then considered able to induce DNA strand breakage in the tissues studied in this test system.
Koostumukseltaan tuntemattomat tai vaihtelevat aineet, kompleksit reaktiotuotteet tai biologiset materiaalit.
If only one or two of these criteria are satisfied, see paragraph 62.
Kriittinen muuttuja/parametri
Providing that all acceptability criteria are fulfilled, a test chemical is considered clearly negative if:
Protokollan muuttuja, jossa tapahtuvalla pienellä muutoksella voi olla suuri vaikutus kokeen lopputulokseen.
there is no concentration-related increase when evaluated with an appropriate trend test.
Kriittiset muuttujat voivat olla kudoskohtaisia.
all results are inside the distribution of the historical negative control data for a given species, vehicle, route, tissue, and number of administrations.
Kriittisiä muuttujia ei pidä muuttaa varsinkaan kokeessa ottamatta huomioon sitä, miten muutos muuttaa kokeessa saatavaa vastetta, niin kuin esimerkiksi positiivisten ja negatiivisten kontrollien suuruusluokka ja vaihtelu osoittavat.
direct or indirect evidence supportive of exposure of, or toxicity to, the target tissue(s) has been demonstrated.
Pyrstön koko tai pyrstön DNA-pitoisuus (%)
The test chemical is then considered unable to induce DNA strand breakage in the tissues studied in this test system.
YHDISTELYKOE SUKUPUOLIEROJEN MÄÄRITTÄMISEKSI IN VIVO -KOMEETTAKOKEESSA:
In case the response is neither clearly negative nor clearly positive (i.e. not all the criteria listed in paragraphs 59 or 60 are met) and in order to assist in establishing the biological relevance of a result, the data should be evaluated by expert judgement and/or further investigations conducted, if scientifically justified.
Tässä koemallissa testataan vähintään viisi urosta ja viisi naarasta kullakin pitoisuudella, minkä vuoksi mallissa käytetään vähintään 40:tä eläintä (20:tä urosta ja 20:tä naarasta, joihin lisätään asiaankuuluvat positiiviset kontrollit.)
Scoring additional cells (where appropriate) or performing a repeat experiment possibly using optimised experimental conditions (e.g. dose spacing, other routes of administration, other sampling times or other tissues) could be useful.
Analyysissa jaotellaan tietojen vaihtelu sukupuolten väliseksi vaihteluksi, pitoisuuksien väliseksi vaihteluksi sekä vaihteluksi, joka liittyy sukupuolten ja pitoisuuksien yhdysvaikutukseen.
In rare cases, even after further investigations, the data set will preclude making a conclusion of positive or negative results, and will therefore be concluded as equivocal.
Täydelliset tiedot menetelmästä annetaan useissa vakiintuneissa tilastollisissa oppikirjoissa (ks. viitteet) ja tilastopakettien tukitoiminnoissa.
To assess the biological relevance of a positive or equivocal result, information on cytotoxicity at the target tissue is required (see paragraphs 54-55).
KOKEEN NYKYISET RAJOITUKSET
source, lot number if available;
Tietyntyyppiset DNA-vauriot voivat olla lyhytaikaisia eli korjaantua liian nopeasti ollakseen havaittavissa, kun viimeisestä annoksesta on kulunut 24 tuntia tai enemmän.
stability of the test chemical, limit date for use, or date for re-analysis if known.
Lyhytaikaisten vaurioiden tyypeistä ja tällaisia vaurioita todennäköisesti aiheuttavista kemikaaleista ei ole luetteloa, eikä tiedetä, millä aikavälillä tällainen vahinkotyyppi on havaittavissa.
Solvent/vehicle:
Optimaalinen näytteenottoaika voi olla myös kemikaali- tai reittikohtainen, ja näytteenottoajat pitäisikin määrittää kineettisten tietojen pohjalta (esimerkiksi aika, Tmax, jossa saavutetaan huippupitoisuus plasmassa tai kudoksessa), kun tällaisia tietoja on saatavana.
justification for choice of solvent/vehicle;
Useimmissa validointitutkimuksissa, jotka tukevat tätä testimetodia, määritetään ruumiinavausajankohdan olevan 2–3 tuntia viimeisen annoksen jälkeen.
preparation of dose formulations;
Julkaistussa kirjallisuudessa useimmissa tutkimuksissa viimeinen annos on annettu 2–6 tuntia ennen eläimen lopettamista.
analytical determinations on formulations (e.g. stability, homogeneity, nominal concentrations).
Siksi näiden kokemusten pohjalta testimenetelmässä suositellaan, että muuhun viittaavien tietojen puuttuessa viimeinen annos pitäisi antaa määriteltynä ajankohtana 2–6 tuntia ennen ruumiinavausta.
species/strain used and scientific and ethical justifications for the choice;
Missään tutkimuksessa ei tarkastella sitä, miten herkästi testi havaitsee lyhytaikaiset DNA-vauriot sen mukaan, onko annos on annettu ruoan tai juomaveden mukana vai ruokintaletkun kautta.
source, housing conditions, diet, enrichment, etc.;
Ruoan ja juomaveden kautta annetun annoksen on havaittu aiheuttavan DNA-vaurioita, mutta sen sijaan tällaisia raportteja on suhteellisen vähän ruokintaletkun ja ihonalaisen annostelun osalta, vaikka näistä annostelutavoista on paljon enemmän kokemusta.
individual weight of the animals at the start and at the end of the test, including body weight range, mean and standard deviation for each group.
Siten kokeen herkkyys saattaa olla heikompi sellaisten kemikaalien osalta, jotka aiheuttavat lyhtyaikaista vauriota ruoassa tai juomavedessä annettuina.
results from the range-finding study (if conducted);
Muista kudoksista kuin maksasta ja mahalaukusta ei ole tehty laboratorioiden välisiä tutkimuksia, minkä vuoksi ei ole annettu suositusta siitä, miten muissa kudoksissa kuin maksassa saavutetaan herkkä ja toistettavissa oleva vaste, kuten odotetut positiivisten ja negatiivisten kontrollien vaihteluvälit.
rationale for route of administration;
Maksan osalta ei onnistuttu saamaan aikaan sopimusta negatiivisen kontrolliarvon alarajan asettamisesta.
site of injection (for subcutaneous or intravenous studies);
Vaikka monet julkaisut osoittavatkin, että in vitro -sytotoksisuudella on häiritsevä vaikutus, tilanteesta in vivo on julkaistu hyvin vähän tietoa, minkä vuoksi yhtä ainutta sytotoksisuuden mittaa ei voida suositella.
methods for sample preparation, where available, histopathological analyses, especially for a chemical giving a positive comet response;
DNA:n siirtymisen lisääntymiseen on liitetty histopatologisten muutosten, kuten tulehduksen, solujen infiltraation, apoptoottisten tai nekroottisten muutosten kaltaisia löydöksiä, mutta kuten JaCVAMin validointikoe (OECD, 2014) osoitti, nämä muutokset eivät aina johda positiivisiin komeettahavaintoihin eikä saatavana siten ole ehdotonta luetteloa histopatologisista muutoksista, jotka liittyisivät aina DNA:n siirtymisen lisääntymiseen.
rationale for tissue selection;
Siilien (eli pilvien tai haamusolujen) on aiemmin esitetty viittaavan sytotoksisuuteen, mutta niiden etiologiasta ei ole kuitenkaan varmuutta.
methods for verifying that the test chemical reached the target tissue, or general circulation, if negative results are obtained;
Olemassa on tietoja, jotka viittaavat siihen, että ne voivat johtua testikemikaaliin liittyvästä sytotoksisuudesta, mekaanisesta / entsyymin aiheuttamasta vahingosta, joka on saanut alkunsa näytteen valmistelun aikana (Guerard et al., 2014), ja/tai testikemikaalin genotoksisuuden rajummasta vaikutuksesta.
details of diet and water quality;
Muut tiedot näyttävät osoittavan, että ne johtuvat laajoista mutta mahdollisesti korjaantuvista DNA-vaurioista (Lorenzo et al., 2013).
detailed description of treatment and sampling schedules and justifications for the choices (e.g. toxicokinetic data, where available);
Kudoksia tai solujen tumia on onnistuttu pakastamaan myöhempää analyysia varten.