natgillin/translations-raw huggingface dataset:
The maximum FL value should not be greater than 9999.
kunkin ajon ja kunkin rinnakkaismittauksen osalta taulukkomuotoiset tulokset yksittäisistä testikemikaaleista ja kontrolleista (mukaan lukien yksittäiset tulokset, keskiarvot ja keskihajonnat)
The maximum fluorescence leakage intensity should fall within the linear range of the spectrofluorometer used.
tulosten perusteella tehty luokitus (tehdyt luokitukset) ja tiedot käytetystä ennustemallista ja/tai käytetyistä päätöksentekokriteereistä
Interpretation of results and Prediction model
Tulosten tarkastelussa pitäisi käsitellä myös näkökohtia, jotka liittyvät siihen, ettei vakuuttavaa tulosta ole saatu (kohta 35: FL20 > 100 mg/ml), sekä lisätestaukseen.
The amount of FL is proportional to the chemical-induced damage to the tight junctions.
Päätelmät
The percentage of FL for each tested concentration of chemical is calculated from the FL values obtained for the test chemical with reference to FL values from the NC (reading from the confluent monolayer of cells treated with the NC) and a maximum leakage control (reading for the amount of FL through an insert without cells).
Saatavilla osoitteessaSaatavilla osoitteessa [http://www.unece.org/trans/danger/publi/ghs/ghs_rev03/03files_e.html]
The mean maximum leakage fluorescence intensity = x
Tässä liitteessä oleva B.5 luku, Akuutti silmän ärsyttävyys/syövyttävyys
The mean 0 % leakage fluorescence intensity (NC) = y
Saatavilla osoitteessaSaatavilla osoitteessa http://ecvam-dbalm.jrc.ec.europa.eu
The mean 100 % leakage is obtained by subtracting the mean 0 % leakage from the mean maximum leakage,
OECD (2005), Guidance Document on the Validation and International Acceptance of New or Updated Test Methods for Hazard Assessment, OECD Series on Testing and Assessment No.
i.e. x – y = z
KAAVIO INSERTTIKALVOLLA FLUORESEIINIVUOTOTESTIMENETELMÄÄ VARTEN KASVATETUISTA MDCK-SOLUISTA
The percentage leakage for each fixed dose is obtained by subtracting the 0 % leakage to the mean fluorescence intensity of the three replicate readings (m), and dividing this value by the 100 % leakage, i.e. %FL = [(m-y) / z] × 100 %, where:
Insertin puoliläpäisevälle kalvolle kasvatetaan konfluentti MDCK-solukerros.
m the mean fluorescence intensity of the three replicate measurements for the concentration involved
Insertit asetetaan 24-kuoppaisten levyjen kuoppiin.
% FL the percent of the fluorescein which leaks through the cell layer
Kuvan lähde: Wilkinson, P.J.
FLD = [(A-B) / (C-B)] × (MC – MB) + MB
EU:n CLP-asetu
A % damage (20 % fluorescein leakage)
Spektrofluorometrilla mitattu solukerroksen läpi kulkeneen fluoreseiinin määrä.
B % fluorescein leakage < A
GHS (Yhdistyneiden kansakuntien (YK) kemikaalien maailmanlaajuisesti yhdenmukaistettu luokitus- ja merkintäjärjestelmä)
C % fluorescein leakage > A
Järjestelmä, jossa ehdotetaan kemikaalien (aineet ja seokset) luokitusta fysikaalisten, terveyteen ja ympäristöön liittyvien vaarojen standardityyppien ja -tasojen mukaisesti ja osoitetaan niille vaaraviestinnän tunnukset, kuten kuvamerkit, huomiosanat, vaaralausekkeet, turvalausekkeet ja turvatiedotteet, jotta voidaan välittää tietoa kemikaalien kielteisistä vaikutuksista ihmisten (mukaan luettuina työnantajat, työntekijät, kuljettajat, kuluttajat ja pelastushenkilöstö) ja ympäristön suojelemiseksi.
Concentration (mg/ml) of C
GHS:n luokka 1
Concentration (mg/ml) of B
Herkkyys on tärkeää ottaa huomioon arvioitaessa testimenetelmän merkityksellisyyttä (8).
The cut-off value of FL20 for predicting chemicals as ocular corrosives/severe irritants is given below:
Kemikaali
C&L: classification and labelling.
Käsittelemätön näyte, jossa on kaikki testijärjestelmän osat, mukaan luettuina liuotin tai kantaja-aine, ja joka prosessoidaan testikemikaalilla käsiteltyjen ja muiden kontrollinäytteiden kanssa perusvastetason määrittämiseksi näytteille, joissa testikemikaali on liuotettu samaan liuottimeen tai kantaja-aineeseen.
UN GHS C&L
Kun tällainen näyte testataan samanaikaisesti negatiivisen kontrollin kanssa, se osoittaa myös, reagoiko liuotin tai kantaja-aine testijärjestelmän kanssa.
In order to identify water soluble chemicals (substances and mixtures) (3) (6) (7) as “inducing serious eye damage” (UN GHS/EU CLP Category 1) or as an “ocular corrosive or severe irritant” (U.S. EPA Category I), the test chemical should induce an FL20 value of ≤ 100 mg/ml.
Se on testimenetelmän suorituskyvyn mitta ja yksi merkityksellisyyden osa-alueista.
The mean maximum fluorescein leakage value (x) should be higher than 4000 (see paragraph 31), the mean 0 % leakage (y) should be equal or lower than 300, and the mean 100 % leakage (z) should fall between 3700 and 6000.
Vaiheittainen testausstrategia
Data
Jos testikemikaali ärsytyskykyä ei voida määrittää olemassa olevien tietojen perusteella, toteutetaan vaiheittainen testaus eläimillä, kunnes luokitus voidaan määritellä aukottomasti.
For each run, data from individual replicate wells (e.g. fluorescence intensity values and calculated percentage FL data for each test chemical, including classification) should be reported in tabular form.
On syytä pitää mielessä, että validoidun testimenetelmän suorituskyky tarkkuuden ja luotettavuuden osalta ei välttämättä ole riittävä, jotta se voitaisiin hyväksyä ehdotettuun tarkoitukseen (8).
In addition, means ± SD of individual replicate measurements in each run should be reported.
Väärien negatiivisten tulosten osuus
Purity and composition of the substance or mixture (in percentage(s) by weight), to the extent this information is available;
Ennen kuin laboratorio alkaa käyttää tähän testimenetelmään perustuvaa menetelmää rutiininomaisesti, sen pitäisi osoittaa tekninen pätevyytensä määrittämällä oikein taulukossa 1 suositeltujen kahdeksan aineen silmäsyövyttävyysluokitus.
Physical-chemical properties relevant to the conduct of the study (e.g. physical state, volatility, pH, stability, water solubility, chemical class);
Nämä kemikaalit on valittu siten, että ne edustavat kattavasti erilaisia vasteita silmän paikalliselle ärsytykselle/syövytykselle, ja nämä puolestaan perustuvat kanin silmällä tehtyyn in vivo -testiin (TG 405, TM B.5(5)) (eli luokat 1, 2A, 2B tai ei luokitusta YK:n GSH-järjestelmässä).
Storage conditions;
Muita valintakriteerejä olivat se, että kemikaaleja on kaupallisesti saatavana, se, että saatavana on laadukkaita in vivo -vertailutietoja, ja se, että fluoreseiinitestimenetelmästä on laadukasta tietoa.
Duration of exposure to the test chemical;
Prometatsiinihydrokloridi
Duration of incubation with fluorescein;
Amiini/amidiini, heterosyklinen, orgaaninen rikkiyhdiste
Description of evaluation criteria used;
Natriumhydroksidi (10 %)
Reference to historical data of the model (e.g. negative and positive controls, benchmark chemicals, if applicable);
Emäs
Information on the technical proficiency demonstrated by the laboratory;
Natriumlauryylisulfaatti (15 %)
Tabulation of data from individual test chemicals and controls for each run and each replicate measurement (including individual results, means and SDs);
Karboksyylihappo (suola)
The derived classification(s) with reference to the prediction model and/or decision criteria used;
arboksibentsaldehydi
Should include considerations regarding a non-conclusive outcome (paragraph 35: FL20 > 100 mg/ml) and further testing;
Karboksyylihappo, aldehydi
Conclusions
Luokka 2(A)
Available at: [http://www.unece.org/trans/danger/publi/ghs/ghs_rev03/03files_e.html]
Ei syövyttävä / ei vakavasti ärsyttävä
Chapter B.5 of this Annex, Acute Eye Irritation/Corrosion
Ei syövyttävä / ei vakavasti ärsyttävä
Available at: [http://ecvam-dbalm.jrc.ec.europa.eu
Luokka 2(B)
OECD (2005), Guidance Document on the Validation and International Acceptance of New or Updated Test Methods for Hazard Assessment, OECD Series on Testing and Assessment No. 34.
Perustuu tuloksiin, jotka on saatu kanin silmällä tehdyllä in vivo -testillä (OECD TG 405, TM B.5) käyttäen YK:n GHS-järjestelmää ja EU:n CLP-asetusta.
DIAGRAM OF MDCK CELLS GROWN ON AN INSERT MEMBRANE FOR THE FL TEST METHOD
Perustuu fluoreseiinivuotomenetelmällä saatuihin tuloksiin (INVITTOX-protokolla nro 71(6)).
A confluent layer of MDCK cells is grown on the semi-permeable membrane of an insert.
B.62 Nisäkkäiden emäksinen in vivo -komeettakoe
The inserts are placed into the wells of 24 well plates.
Tämä testimenetelmä (TM) vastaa OECD:n testiohjetta (TG) nro 489 (2016).
Figure taken from: Wilkinson, P.J.
Emäksistä in vivo -komeettakoetta (’Comet-koe’, jäljempänä ’komeettakoe’, eli yhden solun geelielektroforeesi) käytetään DNA-säikeen katkeamien havaitsemiseen soluissa tai tumissa, jotka on eristetty potentiaalisesti genotoksiselle materiaalille / genotoksisille materiaaleille altistettujen eläinten, useimmiten jyrsijöiden, erilaisista kudoksista.
EPA Category I
Monet asiantuntijaryhmät ovat arvioineet komeettakoetta ja julkaisseet suosituksia (1) (2) (3) (4) (5) (6) (7) (8) (9) (10).
Chemicals that produce corrosive (irreversible destruction of ocular tissue) or corneal involvement or irritation persisting for more than 21 days (2).
Tämä testimenetelmä kuuluu geneettisen toksikologian testimenetelmiin.
EU CLP (Regulation (EC) No1272/2008 on Classification, Labelling and Packaging of Substances and Mixtures)
On laadittu OECD:n asiakirja, jossa ytimekkäitä tietoja geneettistä toksikologiaa koskevista testeistä sekä katsaus näihin testimenetelmiin tehtyihin viimeaikaisiin muutoksiin (1).
Implements in the European Union (EU) the UN GHS system for the classification of chemicals (substances and mixtures).
Komeettakokeen tarkoituksena on tunnistaa DNA-vaurioita aiheuttavia kemikaaleja.
Can be estimated by the determination of the concentration at which the tested chemical causes 20 % of the fluorescein leakage through the cell layer.
Komeettakokeella voidaan havaita emäksisissä olosuhteissa (pH > 13) yhden ja kahden säikeen katkeamia, jotka johtuvat esimerkiksi suorasta vuorovaikutuksesta DNA:n kanssa, emäksen labiileista kohdista tai DNA:n korjauksesta johtuvista väliaikaisista DNA-säikeen katkeamista.
Fluorescein leakage
Nämä säikeiden katkeamat voivat korjaantua ilman pysyviä vaikutuksia, ne voivat johtaa solun kuolemaan tai ne voivat korjaantua mutaatiossa, joka johtaa pysyvään elinkykyiseen muutokseen.
the amount of fluorescein which passes through the cell layer, measured spectrofluorometrically.
Ne voivat myös johtaa kromosomimuutokseen, joka yhteydessä myös moniin ihmisen sairauksiin, kuten syöpään.
GHS (Globally Harmonized System of Classification and Labeling of Chemicals by the United Nation (UN))
Jyrsijöiden in vivo -komeettakokeen muodollinen validointikoe tehtiin 2006–2012, ja sitä koordinoi JaCVAM (Japanin vaihtoehtoisten menetelmien validointikeskus) yhdessä ECVAM:n (vaihtoehtoisten menetelmien eurooppalaisen validointikeskuksen), ICCVAM:n (vaihtoehtoisten menetelmien validoinnin virastojenvälisen koordinointikomitean) ja NICEATM:n (NTP Interagency Center for the Evaluation of Alternative Toxicological Methods) kanssa (12).
A system proposing the classification of chemicals (substances and mixtures) according to standardised types and levels of physical, health and environmental hazards, and addressing corresponding communication elements, such as pictograms, signal words, hazard statements, precautionary statements and safety data sheets, so that to convey information on their adverse effects with a view to protect people (including employers, workers, transporters, consumers and emergency responders) and the environment.
Testimenetelmän kuvaus sisältää komeettakokeen käyttöä koskevat suositukset ja rajoitukset ja perustuu validointikokeessa käytettyyn lopulliseen protokollaan (12) sekä muihin olennaisiin julkaistuihin ja julkaisemattomiin (laboratorioiden tekijänoikeuksien alaisiin) tietoihin.
GHS Category 1
Keskeisten termien määritelmät esitetään lisäyksessä 1.
Used in the context of the UN GHS as a mixture or solution composed of two or more substances in which they do not react.
Komeettakoe on menetelmä, jolla mitataan DNA-säikeen katkeamia eukaryoottisoluissa.
Not-classified
Agaroosiin upotetuille yksittäisille soluille/tumille tehdään lyysis, jossa käytetään puhdistusainetta ja jossa suolapitoisuus on korkea.
Chemicals that are not classified as UN GHS Categories 1, 2A, or 2B; EU CLP Categories 1 or 2; or U.S. EPA Categories I, II, or III ocular irritants.
Lyysisvaiheessa solun ja tuman kalvot sulavat, mikä mahdollistaa kierteisten DNA-ketjujen vapautumisen; näitä kutsutaan yleisesti nukleoideiksi ja DNA-fragmenteiksi.
A chemical that causes irreversible tissue damage to the eye. (b) Chemicals that are classified as UN GHS Category 1; EU CLP Category 1; or U.S.
Kun elektroforeesi tehdään korkeassa pH:ssa, syntyy komeettaa muistuttavia rakenteita, jotka voidaan havaita voidaan havaita fluoresenssimikroskoopilla, käyttämällä sopivia fluoresoivia väriaineita; DNA-fragmentit siirtyvät niiden koosta riippuen komeetan ”ytimestä” sen ”pyrstöön”, ja se, kuinka suuri komeetan pyrstö on suhteessa koko komeetan kokoon (ydin ja pyrstö), kertoo DNA:n hajoamisen asteesta (13) (14) (15).
EPA Category I ocular irritants.
Emäksinen in vivo -komeettakoe soveltuu erityisen hyvin genotoksisen vaaran arviointiin, sillä kokeessa vasteet riippuvat ADME-prosessista in vivo (absorption, distribution, metabolism and excretion eli absorptio, leviäminen, metabolismi ja eritys) ja myös DNA:n korjaantumisprosesseista.
Ocular irritant
Nämä voivat vaihdella lajien, kudosten ja DNA-vaurion tyypin mukaan.
A chemical that produces a reversible change in the eye following application to the anterior surface of the eye; (b) Chemicals that are classified as UN GHS Categories 2A, or 2B; EU CLP Category 2; or U.S. EPA Categories II or III ocular irritants.
Eläinten hyvinvointia ja erityisesti eläinten käytön vähentämistä koskevien vaatimusten täyttämiseksi (noudattaen 3R-periaatetta – replacement, reduction, refinement eli korvaaminen, vähentäminen ja parantaminen) tämä koe voidaan yhdistää myös muihin toksikologisiin tutkimuksiin, esimerkiksi toistuvan annoksen toksisuutta koskeviin tutkimuksiin (10) (16) (17), tai päätetapahtuma voidaan yhdistää muihin genotoksisuuden päätetapahtumiin, esimerkkinä nisäkkäiden erytrosyyttimikrotumatesti in vivo (18) (19) (20).
Ocular severe irritant
Komeettakokeessa käytetään useimmiten jyrsijöitä, joskin siihen on käytetty myös muita eläinlajeja, nisäkkäitä ja muita kuin nisäkkäitä.
A chemical that causes tissue damage in the eye following application to the anterior surface of the eye that is not reversible within 21 days of application or causes serious physical decay of vision. (b) Chemicals that are classified as UN GHS Category 1; EU CLP Category 1; or U.S.
Muiden lajien kuin jyrsijöiden käyttö on perusteltava tieteellisesti ja eettisesti tapauskohtaisesti, ja vahvana suosituksena on, että komeettakokeessa käytetään muita lajeja kuin jyrsijöitä vain, jos koetta ei tehdä ainoana kokeena vaan se tehdään osana toista toksisuuskoetta.
EPA Category I ocular irritants.
Altistamisreittiä ja tutkittavaa altistettavaa kudosta / tutkittavia altistettavia kudoksia valittaessa päätöksenteon tulisi perustua kaikkeen saatavana/olemassa olevaan tietoon testikemikaaleista; tällaisia tietoja ovat esimerkiksi ihmisen suunniteltu/odotettava altistumisreitti, metabolismi ja leviäminen, potentiaaliset vaikutukset kosketuspaikassa, hälyttävät rakenteelliset seikat, muut genotoksisuus- tai toksisuustiedot sekä tutkimuksen tarkoitus.
Positive control A replicate containing all components of a test system and treated with a chemical known to induce a positive response.
Siispä testikemikaalien genotoksisuuspotentiaalia voidaan arvioida soveltuvin osin kohdekudoksessa/-kudoksissa ilmenevien karsinogeenisten ja/tai muiden toksisten vaikutusten perusteella.
A sub-set of the list of Reference Chemicals that can be used by a naïve laboratory to demonstrate proficiency with the validated reference test method.
Kattavin validointi kokeelle on tehty käyttämällä urosrottien somaattisia kudoksia yhteistyötutkimuksissa, esimerkiksi JaCVAM (12) ja Rothfuss et al., 2010 (10).
Relevance incorporates consideration of the accuracy (concordance) of a test method (8).
JaCVAMin kansainvälisessä validointitutkimuksessa käytetiin maksaa ja mahalaukkua.
Replacement test
Maksaa käytettiin siksi, että se on aktiivisin elin kemikaalien metabolismissa ja usein myös karsinogeenisten vaikutusten kohteena.
A test which is designed to substitute for a test that is in routine use and accepted for hazard identification and/or risk assessment, and which has been determined to provide equivalent or improved protection of human or animal health or the environment, as applicable, compared to the accepted test, for all possible testing situations and chemicals.
Mahalaukkua käytettiin siksi, että se on yleensä ensimmäinen elin, jonka kanssa kemikaalit päätyvät kosketuksiin suun kautta tapahtuvan altistuksen jälkeen, joskin ruoansulatuskanavan muut alueet, kuten pohjukaissuoli (duodenum) ja tyhjäsuoli (jejunum), pitäisi myös lukea kemikaalin kanssa kosketuksiin joutuviksi kudoksiksi ja niillä voi olla ihmisten kohdalla olennaisempi merkitys kuin jyrsijän rauhasmahalla.
The proportion of all positive/active chemicals that are correctly classified by the test.
On pidettävä huolta siitä, etteivät nämä kudokset altistu liian suurille testikemikaalipitoisuuksille (21).
It is a measure of accuracy for a test method that produces categorical results, and is an important consideration in assessing the relevance of a test method (8).
Menetelmää voidaan periaatteessa soveltaa mihin tahansa kudokseen, josta saadaan analysoitavia yhden solun/tuman suspensioita.
Is the production of tissue damage in the eye, or serious physical decay of vision, following application of a test chemical to the anterior surface of the eye, which is not fully reversible within 21 days of application.
Monien laboratorioiden tekijänoikeuksien alaiset tiedot osoittavat, että menetelmää voidaan soveltaa onnistuneesti moniin eri kudoksiin, ja monet julkaisut osoittavat, että menetelmää voidaan soveltaa muihin elimiin tai kudoksiin kuin maksaan ja mahalaukkuun, kuten tyhjäsuoleen (22), munuaiseen (23) (24), ihoon (25) (26) tai virtsarakkoon (27) (28), keuhkoihin ja bronkoalveolaarisiin lavaatiosoluihin (olennaista tutkimuksissa, joissa tutkitaan sisäänhengitettyjä kemikaaleja) (29) (30), ja lisäksi on tehty testejä, joissa on käytetty monia elimiä (31) (32).
An untreated sample containing all components of a test system, including the solvent or vehicle that is processed with the test chemical-treated and other control samples to establish the baseline response for the samples treated with the test chemical dissolved in the same solvent or vehicle.
Vaikka sukusoluihin kohdistuvat genotoksiset vaikutukset saattavatkin olla kiinnostavia, on huomattava, ettei tässä testimenetelmässä kuvattua vakiomuotoista emäksistä komeettakoetta pidetä sopivana keinona mitata DNA-säikeiden katkeamista kypsissä sukusoluissa.
The proportion of all negative/inactive chemicals that are correctly classified by the test.
Koska kirjallisuuskatsauksessa komeettakokeen käytöstä sukusoluihin kohdistuvan genotoksisuuden tutkimiseen todettiin DNA-vaurioiden olevan lähtötilanteessa korkeita ja vaihtelevia (33), on välttämätöntä tehdä muutoksia protokollaan ja parantaa standardointia ja validointitutkimuksia, ennen kuin testimenetelmään voidaan sisällyttää kypsille sukusoluille (kuten siittiöille) tehtävä komeettakoe.
It is a measure of accuracy for a test method that produces categorical results and is an important consideration in assessing the relevance of a test method.
Myöskään tämän testimenetelmän mukainen suositeltu altistusohjelma ei ole optimaalinen, ja mielekkään analyysin tekeminen DNA-säikeiden katkeamista kypsissä siittiöissä edellyttäisi pidempiä altistuksia ja näytteenottoaikoja.
Used in the context of the UN GHS as chemical elements and their compounds in the natural state or obtained by any production process, including any additive necessary to preserve the stability of the product and any impurities deriving from the process used, but excluding any solvent which may be separated without affecting the stability of the substance or changing its composition.
Komeettakokeella mitattuja genotoksisia vaikutuksia kiveksen soluissa erilaistumisen eri vaiheissa on kuvattu kirjallisuudessa (34) (35).
It is important to note that a validated test method may not have sufficient performance in terms of accuracy and reliability to be found acceptable for the proposed purpose (8).
On kuitenkin huomattava, että gonadeissa on seos somaattisia soluja ja sukusoluja.
PROFICIENCY CHEMICALS FOR THE FL TEST METHOD
Tästä syystä positiiviset tulokset koko gonadissa (kiveksessä) eivät välttämättä kerro sukusoluille aiheutuneista vaurioista, mutta ne kertovat kuitenkin sen, että testikemikaali(t) ja/tai sen/niiden metaboliitit ovat päätyneet gonadiin asti.
Prior to routine use of this test method, laboratories should demonstrate technical proficiency by correctly identifying the ocular corrosivity classification of the 8 chemicals recommended in Table 1.
Komeettakokeen vakiokoeolosuhteissa ei voida havaita luotettavasti ristisidoksia.
These chemicals were selected to represent the range of responses for local eye irritation/corrosion, which is based on results in the in vivo rabbit eye test (TG 405, TM B.5(5)) (i.e., Categories 1, 2A, 2B, or no classification according to the UN GHS).
Tietyissä muutetuissa koeolosuhteissa voidaan mahdollisesti havaita DNA–DNA- ja DNA–proteiini-ristisidoksia sekä muita emäsmuutoksia, kuten emäksen hapettumista (23) (36) (37) (38) (39).
However, considering the validated usefulness of the FL assay (i.e., to identify ocular corrosives/severe irritants only), there are only two test outcomes for classification purposes (corrosive/severe irritant or non-corrosive/non-severe irritant) to demonstrate proficiency.
Tarvittavien protokollamuutosten asianmukainen luonnehtiminen edellyttäisi kuitenkin lisätyötä.
Other selection criteria were that chemicals are commercially available, there are high quality in vivo reference data available, and there are high quality data from the FL test method.
Siksi ristisidoksia muodostavien aineiden havaitseminen ei ole tässä kuvatun kokeen päätarkoitus.
For this reason, the proficiency chemicals were selected from the “Fluorescein Leakage Assay Background Review Document as an Alternative Method for Eye Irritation Testing” (8), which was used for the retrospective validation of the FL test method.
Koe ei sovellu edes muutettuna aneugeenien havaitsemiseen.
Recommended chemicals for demonstrating technical proficiency with FL
Tämänhetkisen tietotason vuoksi in vivo -komeettakokeeseen liittyy useita lisärajoituksia (ks. lisäys 3).
Abbreviations: CAS NR = Chemical Abstracts Service Registry Number
Odotuksena on, että testimenetelmää arvioidaan tulevaisuudessa ja tarkistetaan tarvittaessa saatujen kokemusten valossa.
CAS NR
MENETELMÄN PERIAATE
Corrosive/Severe Irritant
Annostelu ja näytteenotto kuvataan yksityiskohtaisesti kohdissa 36–40.
Promethazine hydrochloride
Valitulla näytteenottohetkellä / valituilla näytteenottohetkillä tutkimuksen kohteena olevat kudokset leikataan, yhden solun/tuman suspensiot valmistetaan ja ne upotetaan näytelasille pehmeään agariin.
Amine/Amidine, Heterocyclic, Organic sulphur compound
Solun ja/tai tuman kalvo poistetaan käsittelemällä soluja/tumia lyysispuskurilla ja ne altistetaan vahvalle emäkselle (esimerkiksi pH ≥ 13), jotta DNA purkautuu ja irronneet DNA-ketjut ja -fragmentit vapautuvat.
Sodium hydroxide (10 %)
Tämän jälkeen agarissa olevalle tuman DNA:lle tehdään elektroforeesi.
Alkali
Normaalit fragmentoitumattomat DNA-molekyylit jäävät paikoilleen sinne, missä tuman DNA on agarissa, kun taas fragmentoitunut DNA ja irtonaiset DNA-ketjut liikkuvat kohti anodia.
Sodium lauryl sulfate (15 %)
Elektroforeesin jälkeen DNA:ta tarkastellaan käyttämällä sopivaa fluoresoivaa väriainetta.
Carboxylic acid (salt)
Valmisteet analysoidaan käyttämällä mikroskooppia sekä täysin automatisoitua tai puoliautomaattista kuvananalysointijärjestelmää.
arboxy-benzaldehyde
Se, kuinka paljon ja kuinka kauas DNA:ta on liikkunut elektroforeesin aikana, kertoo DNA-fragmenttien määrästä ja koosta.