natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Test vessels of both generations should be observed at least three times per week to make visual assessment of any abnormal behaviour of the larvae (e.g. leaving sediment, unusual swimming), compared to the control.
Muita apikaalisia ominaisuuksia, jotka tulee mitata, ovat kuoriutumisaste, eloonjääminen, pituus ja paino.
During the period of emergence, which starts about 12 days after insertion of the larvae for C. riparius and C. yoshimatsui (after 20 days for C. dilutus), emerged midges are counted and sexed at least once, but preferably twice a day (early morning and late afternoon).
Testimenetelmän voi muokata myös muille lajeille kuin edellä mainituille edellyttäen, että i) muut lajit validoidaan samalla tavalla kuin medaka, kolmipiikki ja seeprakala, ii) kontrollikalojen sukupuoli on eriytynyt testin lopuksi, iii) vitellogeniinipitoisuudet ovat tarpeeksi suuria, jotta merkitsevät kemikaaleihin liittyvät vaihtelut havaitaan, ja iv) testijärjestelmän herkkyys määritetään käyttämällä hormonitoimintaan vaikuttavia vertailukemikaaleja ((anti-)estrogeeneja, (anti-)androgeeneja, aromataasin estäjiä jne.).
After identification, the midges of the 1st generation are carefully removed from the vessels and transferred to a breeding cage.
Lisäksi kaikki validointiraportit, jotka liittyvät FSDT-tietoihin ja joissa on käytetty muita lajeja, olisi toimitettava OECD:n tarkastettaviksi, ja validoinnin tulos tulee olla hyväksyttävä.
Midges of the 2nd generation are removed and killed after identification.
JOHDANTO JA RAJOITUKSET
Any egg ropes deposited in the test vessels of the 1st generation should be collected individually and transferred with at least 2,5 ml native water to 12-well microplates (or other suitable vessels) which are covered with a lid to prevent significant evaporation.
Munimalla lisääntyvien selkärankaisten naaraiden maksa tuottaa yleensä vitellogeenia verenkierrossa olevan endogeenisen estrogeenin avulla (2).
The number of dead larvae and visible pupae that have failed to emerge should also be recorded.
Vitellogeniinin synteesi on hyvin vähäistä mutta havaittavissa nuorilla kaloilla ja aikuisilla koiraskaloilla, koska niiden verenkierrossa ei ole tarpeeksi estrogeenia.
Examples of a breeding cage, test vessel and exhauster are provided in Appendix 5.
Maksa voi kuitenkin syntetisoida ja erittää vitellogeniinia eksogeenisen estrogeenistimulaation vuoksi (3) (4) (5).
Reproduction
Vitellogeniinipitoisuutta mittaamalla pystytään havaitsemaan kemikaaleja, joilla on estrogeenisia, antiestrogeenisia ja androgeenisia vaikutustapoja, ja kemikaaleja, jotka häiritsevät steroidogeneesia, kuten aromataasin estäjät.
Effects on reproduction are assessed via the number of egg ropes produced by the 1st generation of midges and the fertility of these egg ropes.
Estrogeeniin vaikuttavien kemikaalien havaitseminen on mahdollista mittaamalla vitellogeniinin indusointia koiraskaloilla, ja sitä on dokumentoitu runsaasti tieteellisessä vertaisarvioidussa kirjallisuudessa.
Once per day the egg ropes are collected from the crystallising dish that is placed in each breeding container.
Vitellogeniinin indusointi on osoitettu myös aromatisoituville androgeeneille altistumisen jälkeen (6) (7).
The egg ropes should be collected and transferred with at least 2,5 ml native water to a 12-wells microplate (one egg rope in each well) or other suitable vessels, which are covered with a lid to prevent significant evaporation.
Kun naaraskalojen verenkierron estrogeenipitoisuus pienentyy esimerkiksi estämällä aromataasia muuntamasta endogeenista androgeenia luonnolliseksi estrogeeniksi, 17β-estradioliksi, myös aromataasia estäviä ominaisuuksia sisältävien kemikaalien tai laajemmin steroidogeneesin estäjien havaitsemisessa käytettävän vitellogeniinin pitoisuus pienenee (33).
The following characteristics are documented for each egg rope:
Estrogeenin/aromataasin estämisen aiheuttaman vitellogeniinivasteen biologinen merkityksellisyys on osoitettu ja se on dokumentoitu laajalti (8) (9).
day of production, size (normal, i.e. 1,0 ± 0,3 cm or small; typically ≤ 0,5 cm), and structure (normal = banana-form with spiralled egg string or abnormal, e.g. unspiralled egg string) and fertility (fertile or infertile).
On kuitenkin mahdollista, että vitellogeniinin tuotantoon naarailla voivat vaikuttaa myös yleinen myrkyllisyys ja muuhun kuin hormonijärjestelmään kohdistuvat myrkylliset vaikutustavat.
Over the course of six days after it was produced the fertility of an egg rope is assessed.
Useita mittausmenetelmiä on kehitetty onnistuneesti, ja ne on standardoitu vakiokäyttöön vitellogeniinin kvantifioimiseksi yksittäiseltä kalalta otetusta verestä, maksasta, koko ruumiista tai pään/pyrstön homogenaattinäytteistä.
An egg rope is considered fertile when at least one third of the eggs hatch.
Tämä koskee esimerkiksi seeprakalaa, kolmipiikkiä ja medakaa sekä myös rasvapäämutua, joka on osittain validoitu laji.
The total number of females added to the breeding cage is used to calculate the number of egg ropes per female and the number of fertile egg ropes per female.
Saatavilla on lajikohtaisia entsyymivälitteisiä immunosorbenttimääritysmenetelmiä (ELISA), joissa käytetään immunokemiaa vitellogeniinin kvantifioimisessa (5) (10) (11) (12) (13) (14) (15) (16).
If required, the number of eggs in an egg rope can be estimated non-destructively by using the ring count method (detailed in 32 and 33).
Medakalla ja seeprakalalla veren plasmasta, maksasta ja homogenaattinäytteistä mitattujen vitellogeniinipitoisuuksien välinen korrelaatio on hyvä, vaikka homogenaateista saatavat arvot ovat yleensä hieman pienempiä kuin plasman arvot (17) (18) (19).
Analytical measurements
Liitteessä 5 on esitetty suositeltavat näytteenottomenetelmät vitellogeniinianalyysia varten.
Concentration of the test chemical
Fenotyyppisen sukupuolijakauman (sukupuolten välisen suhteen) muutos on ominaisuus, joka kuvastaa sukupuolen vaihtumista.
As a minimum, samples of the overlying water, pore water and the sediment should be analysed at the start of exposure (in case of water spiking preferably one hour after application) and at the end of the test, at the highest concentration and a lower one.
Periaatteessa estrogeenit, antiestrogeenit, androgeenit, antiandrogeenit ja steroidogeneesia estävät kemikaalit voivat vaikuttaa kehittyvien kalojen sukupuolijakaumaan (20).
This applies to vessels from both generations.
On osoitettu, että sukupuolen vaihtuminen estrogeenin kaltaiselle kemikaalille altistumisen jälkeen on osittain palautuvaa seeprakalalla (21), kun taas androgeenin kaltaiselle kemikaalille altistumisen jälkeen se on pysyvää (30).
From the crystallising dishes in the breeding cage only the overlying water is analysed, since this is what the egg ropes come into contact with (for the spiked sediment design an analytical confirmation of the sediment concentration may be considered).
Sukupuolet määritellään seuraavasti:
Further measurements of sediment, pore water or overlying water during the test may be conducted if deemed necessary.
naaras, koiras, sekasukupuolinen (sekä oosyyttejä että spermatogeneettisia soluja yhdessä sukupuolirauhasessa) tai eriytymätön, ja yksittäisen kalan sukupuoli määritetään sukupuolirauhasten histologisella tutkimuksella.
These determinations of test chemical concentration inform on the behaviour/partitioning of the test chemical in the water-sediment system.
Ohjeita on lisäyksessä 7 ja OECD:n ohjeasiakirjassa, joka koskee hormonitoimintaan liittyvän histopatologian diagnosointia kalojen sukupuolirauhasissa (Guidance Document on the Diagnosis of Endocrine-Related Histopathology of Fish Gonads) (22).
Sampling of sediment and pore water at the start and during the test (see paragraph 39) requires additional test vessels to perform analytical determinations.
Geneettinen sukupuoli tutkitaan geneettisten merkkien avulla, jos niitä on tietyssä kalalajissa.
Measurements in sediment in the spiked water design might not be necessary if the partitioning of the test chemical between water and sediment has been clearly determined in a water/sediment study under comparable conditions (e.g. sediment to water ratio, type of application, organic carbon content of sediment), or if measured concentrations in the overlying water are shown to remain within 80 to 120 % of the nominal or measured initial concentrations..
Medakalla naaraan XX-geenit tai koiraan XY-geenit voidaan havaita polymeraasiketjureaktiolla (PCR:llä), tai Y-kromosomiin liittyvä DM-domeenin geeni (DMY) voidaan analysoida (DMY negatiivinen tai positiivinen), kuten kirjallisuusviitteissä (23) ja (24) on kuvattu.
When intermediate measurements are made (e.g. at day 7 and/or 14) and if the analysis needs large samples which cannot be taken from test vessels without influencing the test system, analytical determinations should be performed on samples from additional test vessels treated in the same way (including the presence of test organisms) but not used for biological observations.
Kolmipiikin osalta vastaava PCR-menetelmä geneettisen sukupuolen määrittämiseen on kuvattu lisäyksessä 10.
However, if the test chemical is demonstrated not to adsorb to filters, filtration may also be acceptable.
Kaksi keskeistä hormonitoimintaan kohdistuvaa ominaisuutta, vitellogeniini ja sukupuolijakauma, voivat yhdessä osoittaa, millainen hormonitoimintaan kohdistuva vaikutustapa kemikaalilla on (taulukko 1).
In some cases it might not be possible to analyse concentrations in the pore water as the sample volume may be too small.
Sukupuolijakauma on populaation kannalta oleellinen biomarkkeri (25) (26), ja joidenkin tarkasti määriteltyjen vaikutustapojen osalta FSDT-tuloksia voidaan käyttää vaarojen ja riskien arvioinnissa, mikäli sääntelyviranomainen pitää sitä tarkoituksenmukaisena.
Physical-chemical parameters
Tällaisia vaikutustapoja on estrogeeneilla, androgeeneilla ja steroidogeneesin estäjillä.
pH, dissolved oxygen in the test water and temperature of the water in the test vessels and crystallising dishes should be measured in an appropriate manner (see paragraph 10).
Hormonitoimintaan liittyvien ominaisuuksien reaktio kemikaalien erilaisille vaikutustavoille:
Hardness and ammonia should be measured in the controls and in one test vessel and crystallising dish at the highest concentration at the start and the end of the test.
↑= lisääntyy, ↓= vähenee, — = ei tutkittu
The purpose of this life-cycle test is to determine the effect of the test chemical on the reproduction and, for two generations, the development rate and the total number of fully emerged and alive male and female midges.
Viitteet
For the emergence ratio data of males and females should be pooled.
Heikko estrogeeniagonisti
If there are no statistically significant differences between the sensitivities in the development rate of the separate sexes, male and female results may be pooled for statistical analysis.
↑♀ tai ↑Eriyt.
Effect concentrations expressed as concentrations in the overlaying water (for spiked water) or in the sediment (for spiked sediment), are usually calculated based on measured concentrations at the beginning of the exposure (see paragraph 38).
Vahva estrogeeniagonisti
Therefore, for spiked water, the concentrations typically measured at the beginning of the exposure in the overlying water of the vessels for both generations and those of the crystallising dishes are averaged for each treatment.
↑♀ tai ↑Eriyt, ei ♂
For spiked sediment, the concentrations typically measured at the beginning of the exposure in the vessels for both generations (and optionally those of the crystallising dishes) are averaged for each treatment.
Estrogeeniantagonisti
To compute a point estimate, i.e. an ECx, the per-vessel and per-breeding cage statistics may be used as true replicates.
↓♀, ↑Eriyt.
In calculating a confidence interval for any ECx the variability among vessels should be taken into account, or it should be shown that this variability is so small that it can be ignored.
Androgeeniagonisti
When the model is fitted by Least Squares, a transformation should be applied to the per-vessel statistics in order to improve the homogeneity of variance.
↑ ♂, ei ♀
However, ECx values should be calculated after the response is transformed back to the original value (31).
Androgeeniantagonisti
When the statistical analysis aims at determining the NOEC by hypothesis testing, the variability among vessels needs to be taken into account, which is guaranteed by using ANOVA methods (e.g. Williams' and Dunnett's test procedures).
↑Sekasukup.
Williams' test would be appropriate when a monotonic dose-response is expected in theory and Dunnett's test would be appropriate where the monotonicity hypothesis does not hold.
Aromataasin estäjä
Alternatively, more robust tests (27) can be appropriate in situations where there are violations of the usual ANOVA assumptions (31).
FSDT ei kata kalan elinkaaren lisääntymisvaihetta, joten kemikaalit, joiden epäillään vaikuttavan pieninä pitoisuuksina ennemminkin lisääntymiseen kuin sukupuolikehitykseen, on tutkittava testillä, joka kattaa lisääntymisen.
Emergence ratio
Tässä testimenetelmässä käytetyt määritelmät on esitetty lisäyksessä 1.
Emergence ratios are quantal data, and can be analysed by the Cochran-Armitage test applied in a step-down manner where a monotonic dose-response is expected and these data are consistent with this expectation.
FSDT in vivo -testi on tarkoitettu havaitsemaan kemikaalit, joilla on androgeenisia ja estrogeenisia ominaisuuksia sekä antiandrogeenisia, antiestrogeenisia ja steroidogeneesia estäviä ominaisuuksia.
If not, a Fisher's exact or Mantel-Haentzal test with Bonferroni-Holm adjusted p-values can be used.
FSDT:n validointivaiheet (1 ja 2) kattoivat estrogeeniset, androgeeniset ja steroidogeneesia estävät kemikaalit.
If there is evidence of greater variability between replicates within the same concentration than a binomial distribution would indicate (often referenced to as “extra-binomial” variation), then a robust Cochran-Armitage or Fisher exact test such as proposed in (27), should be used.
Estrogeeni- ja androgeeniantagonistien vaikutukset FSDT:ssä on esitetty taulukossa 1, mutta näistä vaikutustavoista ei ole tällä hetkellä kovin paljon dokumentaatiota.
The sum of live midges (males plus females) emerged per vessel, ne, is determined and divided by the number of larvae introduced, na:
Tässä testissä kalat – alkaen hiljattain hedelmöittyneistä munista sukupuolisen eriytymisen päättymiseen saakka – altistetaan kolmelle pitoisuudelle kemikaalia, joka on liuotettu veteen.
ER emergence ratio
Testiolosuhteissa on käytettävä läpivirtausjärjestelmää, ellei se ole mahdotonta testikemikaalin saatavuuden tai luonteen (esimerkiksi vähäisen liukoisuuden) vuoksi.
number of live midges emerged per vessel
Testi aloitetaan asettamalla kaksi hiljattain hedelmöitynyttä munaa (ennen emosolun jakautumista) testiastioihin.
number of larvae introduced per vessel (normally 20)
Astioiden täyttäminen on kuvattu kunkin lajin osalta 27 kohdassa.
When ne is larger than na (i.e. when unintentionally more than the foreseen number of larvae where introduced) na should be made equal to ne.
Validoitujen kalalajien (medaka, kolmipiikki ja seeprakala) testi päättyy 60 päivän kuluttua kuoriutumisesta.
An alternative approach that is most appropriate for large sample sizes, when there is extra binomial variance, is to treat the emergence ratio as a continuous response and use procedures consistent with these ER data.
Testin päättyessä kaikki kalat lopetetaan inhimillisesti.
A large sample size is defined here as the number emerged and the number not emerging both exceeding five, on a per replicate (vessel) basis.
Jokaisesta kalasta otetaan biologinen näyte (veren plasma, maksa tai pää-/pyrstöhomogenaatti) vitellogeniinianalyysia varten, ja ruumis kiinnitetään kiinnitysaineella sukupuolirauhasten histologista arviointia varten.
To apply ANOVA methods, values of ER should first be transformed by the arcsin-sqrt transformation or Tukey-Freeman transformation to obtain an approximate normal distribution and to equalise variances.
Siinä määritetään fenotyyppinen sukupuoli, ja sukupuolirauhasten histopatologinen tutkimus (rauhasten kehitysvaiheen määritys, sekasukupuolisuuden aste) voidaan toteuttaa valinnaisesti.
The Cochran-Armitage, Fisher's exact (Bonferroni), or Mantel-Haentzal tests can be applied when using the absolute frequencies.
Lajeilla, joilla on asianmukaiset merkit sukupuolesta, otetaan biologinen näyte (perä- tai selkäevästä) geneettisen sukupuolen määritystä varten (lisäykset 9 ja 10).
The arcsin-sqrt transformation is applied by taking the inverse sine (sine– 1) of the square root of ER.
Tuloksia välittömän myrkyllisyyden testistä tai muusta lyhytaikaista myrkyllisyyttä koskevasta testistä [esimerkiksi testimenetelmä C.14 (34) ja OECD:n testiohje (TG) 210 (1)], tulisi olla saatavilla.
For emergence ratios, ECx-values are calculated using regression analysis (e.g. probit, logit or Weibull models (28)).
Tämä tarkoittaa sitä, että testiaineen vesiliukoisuus ja höyrynpaine tunnetaan, että käytettävissä on luotettava analyyttinen menetelmä aineen kvantifioimiseksi testiliuoksissa ja että menetelmän tarkkuus ja havaitsemisraja tunnetaan ja ne on raportoitu.
If regression analysis fails (e.g. when there are less than two partial responses), other non-parametric methods such as moving average or simple interpolation can be used.
Tarpeellisia tietoja ovat mm. rakennekaava, kemikaalin puhtaus, stabiilisuus vedessä tai valossa, pKa, Pow ja nopean biohajoavuuden testin (ks. testimenetelmä C.4) tulokset (35).
Development rate
Testin hyväksyttävyyskriteerit
Mean development time represents the mean time span between the introduction of larvae (day 0 of the test) and the emergence of the experimental cohort of midges (for calculation of the true development time, the age of larvae at the time of introduction should be considered).
Liuenneen hapen pitoisuus on vähintään 60 prosenttia ilman kyllästysarvosta koko altistusjakson ajan.
The development rate (unit: 1/day) is the reciprocal of the development time and represents that portion of larval development which takes place per day.
Veden lämpötila testiastioiden välillä vaihtelee enintään ± 1,5 °C milloin tahansa altistusjakson aikana ja pysyy sillä lämpötila-alueella, joka on määritelty kyseiselle testilajille (lisäys 2).
Development rate is preferred for the evaluation of these sediment toxicity studies as its variance is lower, and it is more homogeneous and closer to a normal distribution compared to the development time.
Käytettävissä tulee olla altistuksessa käytettävälle kemikaalille validoitu analyysimenetelmä, jonka havaitsemisraja on selvästi alle pienimmän nimellispitoisuuden.
Hence, more powerful parametric test procedures may be used with development rate unlike development time.
Lisäksi on kerättävä näyttöä, jolla osoitetaan, että testikemikaalin pitoisuudet liuoksessa ovat pysyneet hyväksyttävästi ± 20 prosentissa keskimääräisistä mitatuista arvoista.
For development rate as a continuous response, ECx-values can be estimated by regression analysis (e.g. (29) (30)).
Hedelmöityneiden munien eloonjäämisaste kontrolleissa ja – mikäli tarpeen – liuotinkontrolleissa on vähintään yhtä suuri kuin lisäyksessä 2 määritellyt rajat.
A NOEC for the mean development rate can be determined via ANOVA methods, e.g. Williams or Dunnett's test.
Kasvuun ja sukupuolijakaumaan testin päättyessä liittyvät hyväksymiskriteerit perustuvat kontrolliryhmistä saatuihin tietoihin (yhdistetty liuotin- ja vesikontrolli; jos ne ovat merkittävästi erilaisia, vain liuotinkontrolli).
Since males emerge earlier than females, i.e. have a higher development rate, it makes sense to calculate the development rate for each gender separately in addition to that for the total midges.
Medaka
For statistical testing, the number of midges observed on inspection day x are assumed to be emerged at the mean of the time interval between day x and day x – l (l = length of the inspection interval, usually 1 day).
Kolmipiikki
The mean development rate per vessel ( x
Kasvu
) is calculated according to:
Kalan märkäpaino, kuivattu imeyttämällä vesi paperiin
mean development rate per vessel
>75 mg
i index of inspection interval
Pituus (vakiopituus)
m maximum number of inspection intervals
Sukup.jakauma (% koiraita tai naaraita)
number of midges emerged in the inspection interval i
Kun käytetään liuotinta, sillä ei tulisi olla tilastollisesti merkitsevää vaikutusta eloonjäämiseen, eikä sen pitäisi aiheuttaa hormonitoimintaa häiritseviä vaikutuksia tai muita haittavaikutuksia elinkaaren varhaisvaiheisiin, kuten liuotinkontrollista käy ilmi.
total number of midges emerged at the end of experiment (= Σfi)
Jos havaitaan poikkeama testin hyväksymiskriteereistä, sen vaikutukset testin luotettavuuteen on otettava huomioon, ja nämä seikat on sisällytettävä tutkimusraporttiin.
development rate of the midges emerged in interval i
Testiastiat
day i
Kaikkia lasista, ruostumattomasta teräksestä tai muusta kemiallisesti inertistä materiaalista valmistettuja astioita voi käyttää.
inspection day (days since introduction of the larvae)
Astioiden tulee olla riittävän suuria, jotta jäljempänä esitetyt täyttötiheyteen liittyvät kriteerit täyttyvät.
length of inspection interval i (days, usually 1 day)
Suositellaan, että testiastiat sijoitetaan koealueelle satunnaistetusti.
Sex ratio
Satunnaistettu lohkoittainen järjestys, jossa jokaista pitoisuutta on jokaisessa lohkossa, on ensisijainen täydelliseen satunnaistamiseen nähden.
Sex ratios are quantal data and should therefore be evaluated by means of a Fisher's exact test or other appropriate methods.
Testiastiat olisi suojattava ei-toivotuilta häiriöiltä.
The natural sex ratio of C. riparius is one, i.e. males and females are equally abundant.
Suositeltavat kalalajit luetellaan lisäyksessä 2.
For both generations the sex ratio data should be treated identically.
Menettelyt uusien lajien lisäämiseksi on esitetty 2 kohdassa.
Since the maximum number of midges per vessel (i.e. 20) is too low for a meaningful statistical analysis, the total number of fully emerged and alive midges for each gender is summed over all vessels of one treatment.
Kutevan kalan hoito
These untransformed data are tested against the (solvent) control or pooled control data in a 2 × 2 contingency table.
Tarkempia tietoja kutevan kalan hoitamisesta hyväksyttävissä olosuhteissa on OECD:n testiohjeessa (TG) nro 210(1).
Reproduction, as fecundity, is calculated as the number of egg ropes per female.
Kuteva kala on ruokittava kerran tai kahdesti päivässä sopivalla ruoalla.
More specific, the total number of egg ropes produced in a breeding cage is divided by the total number of alive and undamaged females added to that cage.
Alkioiden ja toukkien käsittely
A NOEC for fecundity can be determined via ANOVA methods, e.g. Williams or Dunnett's test.
Aluksi alkioita ja toukkia voidaan altistaa pienemmissä lasista tai ruostumattomasta teräksestä valmistetuissa astioissa, jotka laitetaan varsinaiseen testiastiaan.
Fertility of the egg ropes is used to quantify the number of fertile egg ropes per female.
Astioiden sivujen tai päiden on oltava verkkoa, jotta testikemikaali pääsee virtaamaan astian läpi.
The total number of fertile egg ropes produced in a breeding cage is divided by the total number of alive and undamaged females added to that cage.
Pienten astioiden läpi johdetaan pyörteetön virtaus ripustamalla astiat varteen, jota voidaan nostaa ja laskea astiassa siten, että organismit ovat nestepinnan alla koko ajan.
A NOEC for fertility can be determined via ANOVA methods, e.g. Williams or Dunnett's test.
Jos munien säilytysastioita pidetään isossa testiastiassa telineissä, ritilöissä tai verkoissa, ne on poistettava toukkien kuoriutumisen jälkeen, mutta verkkopäädyt tai -sivut tulee kuitenkin pitää paikallaan kalojen karkaamisen estämiseksi.
The test report should provide the following information:
Jos toukkia täytyy siirtää, ne eivät saisi altistua ilmalle, eikä kalojen vapauttamiseen munien säilytysastioista tule käyttää haaveja.