natgillin/translations-raw huggingface dataset:
While the complete Nieuwkoop and Faber (8) guide should be consulted for comprehensive information on staging tadpoles, one can reliably determine stage using prominent morphological landmarks.
Kaikkien testien tilastollista merkitsevyyttä arvioidaan merkitsevyystasolla 0,05.
The following table can be used to simplify and standardise the staging process throughout the study by identifying those prominent morphological landmarks associated with different stages, assuming that development is normal.
Kuvassa 4 on vuokaavio, joka koskee tilastollisten testien tekemistä jatkuvista tiedoista.
Prominent morphological staging landmarks based on Neuwkoop and Faber guidance
Vuokaavio jatkuviin vastetietoihin sovellettavista tilastollisista lähestymistavoista.
Craniofacial structure
Muita selvän myrkyllisyyden merkkejä ovat verenvuoto, epänormaali käyttäytyminen, epänormaalit uintikuviot, ruokahaluttomuus ja muut sairaudesta kertovat kliiniset merkit.
Olfactory nerve morphology
Muiden subletaalien myrkyllisyyden merkkien osalta laadulliset arvioinnit voivat olla tarpeen, ja niissä on otettava aina huomioon puhtaan veden kontrolliryhmä.
Tail length
Liuotinkontrollit
For test initiation, all tadpoles should be at stage 51.
Liuottimen käyttöä on harkittava vasta viimesijaisena keinona, kun kaikki muut kemikaalin annosteluvaihtoehdot on kokeiltu.
The most prominent morphological staging landmark for that stage is hind limb morphology, which is demonstrated in Figure 1.
Jos liuotinta käytetään, sen kanssa on käytettävä puhtaan veden kontrollia.
Hind limb morphology of a stage 51 X. laevis tadpole
Testin lopuksi on arvioitava liuottimen mahdolliset vaikutukset.
In addition to the developmental stage selection, an optional size selection of the experimental animals may be used.
Tämä tehdään vertailemalla liuotinkontrolliryhmää ja puhtaan veden kontrolliryhmää tilastollisesti.
For this purpose, the whole body length (not SVL) should be measured at day 0 for a sub-sample of approximately 20 NF stage 51 tadpoles.
Oleellisimmat ominaisuudet, jotka tässä analyysissa tulee ottaa huomioon, ovat kehitysvaihe, kuonon ja peräaukon välinen pituus sekä märkäpaino, koska muuhun kuin kilpirauhaseen kohdistuva myrkyllisyys saattaa vaikuttaa niihin.
After calculation of the mean whole body length for this group of animals, minimum and maximum limits for the whole body length of experimental animals can be set by allowing a range of the mean value ± 3 mm (mean values of whole body length range between 24,0 and 28,1 mm for stage 51 tadpoles).
Jos näissä ominaisuuksissa havaitaan tilastollisesti merkitseviä eroja puhtaan veden kontrolliryhmän ja liuotinkontrolliryhmän välillä, tutkimuksen päätepisteet vastemittausten osalta on määritettävä käyttämällä puhtaan veden kontrollia.
However, developmental staging is the primary parameter in determining the readiness of each test animal.
Jos kontrolliryhmien välillä ei ole tilastollisesti merkitsevää eroa kaikkien mitattujen vastemuuttujien osalta, tutkimuksen päätepisteet vastemittausten osalta on määritettävä käyttäen yhdistettyjä laimennusvesi- ja liuotinkontrolleja.
Tadpoles exhibiting grossly visible malformations or injuries should be excluded from the assay.
Käsittelyryhmät, jotka saavuttavat vähintään kehitysvaiheen 60
Tadpoles that meet the stage criteria described above are held in a tank of clean culture water until the staging process is completed.
Ensimmäinen toimintatapa on ottaa märkäpainon ja/tai kuonon ja peräaukon välisen pituuden tilastollisissa analyyseissa huomioon vain ne sammakonpoikaset, joiden kehitysvaihe on aiempi tai vastaava kuin vaihe 60.
Once the staging is completed, the larvae are randomly distributed to exposure treatment tanks until each tank contains 20 larvae.
Tästä toimintatavasta ajatellaan saatavan riittävän vankkoja tietoja mahdollisten kasvuun kohdistuvien vaikutusten vakavuudesta, kunhan vain pieni osuus koe-eläimistä poistetaan analyyseista (≤20 prosenttia).
Each treatment tank is then inspected for animals with abnormal appearance (e.g., injuries, abnormal swimming behaviour, etc.).
Jos suurempi määrä sammakonpoikasista on ylittänyt kehitysvaiheen 60 (≤20 prosenttia) yhdessä tai useammassa nimellispitoisuudessa, on tehtävä kaikilla sammakonpoikasilla, kaksisuuntainen ANOVA, joka perustuu hierarkkiseen varianssirakenteeseen, jotta voidaan arvioida kemikaalikäsittelyjen kasvuun kohdistuvat vaikutukset samalla kun otetaan huomioon myöhäisvaiheen kehityksen vaikutus kasvuun.
Overtly unhealthy looking tadpoles should be removed from the treatment tanks and replaced with larvae newly selected from the pooling tank.
Lisäyksessä 3 on ohjeet painon ja pituuden kaksisuuntaisesta ANOVA-analyysista.
For more in-depth information on test termination procedures and processing of tadpoles, refer to the OECD Guidance Document on Amphibian Thyroid Histology (9).
Series on Testing and Assessment.
The random procedure used should give each organism on test equal probability of being selected.
E 1439–98.
Tadpoles not selected are returned to the tank of origin and the selected tadpoles are humanely euthanised in 150 to 200 mg/l e.g. MS-222, appropriately buffered with sodium bicarbonate to achieve pH 7,0.
467–599.
The euthanised tadpoles are rinsed in water and blotted dry, followed by body weight determination to the nearest milligram.
21 päivän mittaisen AMA-tutkimuksen koeolosuhteet
Hind limb length, snout to vent length, and developmental stage (using a binocular dissection microscope) are determined for each tadpole.
Koe-eläin
Day 21 Measurements (Test Termination)
Xenopus laevis -toukat
At test termination (day 21), the remaining tadpoles are removed from the test tanks and humanely euthanised in 150 to 200 mg/l e.g. MS-222, appropriately buffered with sodium bicarbonate, as above.
Toukkavaihe testin alussa
Tadpoles are rinsed in water and blotted dry, followed by body weight determination to the nearest milligram.
Nieuwkoopin ja Faberin vaihe 51
Developmental stage, SVL, and hind limb lengths are measured for each tadpole.
Altistusaika
Since follicular cell height is stage dependent (10), the most appropriate sampling approach for histological analyses is to use stage-matched individuals, whenever possible.
Kehitysvaihe ja kokonaispituus (valinnainen)
In order to select stage-matched individuals, all larvae should first be staged prior to selection and subsequent processing for data collection and preservation.
Testipitoisuudet
This is necessary because normal divergence in development will result in differential stage distributions within each replicate tank.
Vähintään kolme pitoisuutta, joiden väli on suurin piirtein yksi suuruusluokka
Animals selected for histopathology (n = 5 from each replicate) should be matched to the median stage of the controls (pooled replicates) whenever possible.
Altistusmenetelmä
If there are replicate tanks with more than five larvae at the appropriate stage, then five larvae are randomly selected.
Läpivirtaus (ensisijainen) ja/tai staattinen menetelmä, jossa liuos ei vaihdu
If there are replicate tanks with less than five larvae at the appropriate stage, then randomly selected individuals from the next lower or upper developmental stage should be sampled to reach a total sample size of five larvae per replicate.
Testausjärjestelmän virtausnopeus
Preferably, the decision to sample additional larvae from either the next lower or upper developmental stage should be made based on an overall evaluation of the stage distribution in the control and chemical treatments.
25 ml/min (koko tilavuus vaihtuu noin 2,7 h:n välein)
That is, if the chemical treatment is associated with a retardation of development, then additional larvae should be sampled from the next lower stage.
Ensisijaiset ominaisuudet / määrityspäivät
In turn, if the chemical treatment is associated with an acceleration of development, then additional larvae should be sampled from the next upper stage.
Päivät 7 ja 21
In cases of severe alterations of tadpole development due to treatment with a test chemical, there might be no overlap of the stage distribution in the chemical treatments with the calculated control median developmental stage.
Kilpirauhasen histologia
In only these cases, the selection process should be modified by using a stage different from the control median stage to achieve a stage-matched sampling of larvae for thyroid histopathology.
Laimennusvesi-/laboratoriokontrolli
Furthermore, if stages are indeterminate (i.e., asynchrony), then 5 tadpoles from each replicate should be randomly chosen for histological analysis.
Dekloorattu vesijohtovesi (hiilisuodatettu) tai vastaava laboratoriolähde
The rationale underlying sampling of any larvae that are not at a stage equivalent to the control median developmental stage should be reported.
Toukkien tiheys
Determination of Biological Endpoints
20 toukkaa / testiastia (5/l)
During the 21 day exposure phase, measurement of primary endpoints is performed on days 7 and 21, however daily observation of test animals is necessary.
Testiliuos/testiastia
Table 3 provides an overview of the measurement endpoints and the corresponding observation time points.
4–10 l (vettä vähintään 10–15 cm) / lasinen tai ruostumattomasta teräksestä valmistettu testiastia (esim. 22,5 cm × 14 cm × 16,5 cm)
More detailed information for technical procedures for measurement of apical endpoints and histological assessments is available in the OECD guidance documents (9).
Rinnakkaisnäyte
Observation time points for primary endpoints in the AMA
4 rinnakkaistestiastiaa / testipitoisuus ja kontrolli
Apical Endpoints
Hyväksyttävä kuolleisuus kontrolleissa
Daily
≤ 10 % rinnakkaisnäytetestiastiaa kohti
Mortality
Kilpirauhasen kiinnitys
Hind Limb Length
Kiinnitettyjen lkm
Snout-Vent Length
Kaikki sammakonpoikaset (5 / rinnakkaisnäyte arvioidaan alustavasti)
Wet Body Weight
Alue
Thyroid Gland Histology
Pää tai koko ruumis
Developmental stage, hind limb length, SVL and wet weight are the apical endpoints of the AMA, and each is briefly discussed below.
Kiinnitysneste
Further technical information for collecting these data is available in the guidance documents referenced including procedures for computer-assisted analysis which are recommended for use.
Davidsonin kiinnitysneste
The developmental stage of X. laevis tadpoles is determined using the staging criteria of Nieuwkoop and Faber (8).
Ravinto
Developmental stage data are used to determine if development is accelerated, asynchronous, delayed or unaffected.
Sera Micron® tai vastaava
Acceleration or delay of development is determined by making a comparison between the median stage achieved by the control and treated groups.
Määrä/antotiheys
Asynchronous development is reported when the tissues examined are not malformed or abnormal, but the relative timing of the morphogenesis or development of different tissues is disrupted within a single tadpole.
Ks. taulukosta 1 ohjeet ruokinnasta Sera Micron® -ravinnolla
Differentiation and growth of the hind limbs are under control of thyroid hormones and are major developmental landmarks already used in the determination of developmental stage.
Valaistus
Hind limb development is used qualitatively in the determination of developmental stage, but is considered here as a quantitative endpoint.
Valojaksot
Therefore, hind limb length is measured as an endpoint to detect effects on the thyroid axis (Figure 2).
Intensiteetti
For consistency, hind limb length is measured on the left hind limb.
600–2000 luksia (veden pinnalta mitattuna)
Hind limb length is evaluated both at day 7 and at day 21 of the test.
Veden lämpötila
On day 7, measuring hind limb length is straightforward, as illustrated in Figure 2.
6,5–8,5
However, measuring hind limb length on day 21 is more complicated due to bends in the limb.
Liuenneen hapen pitoisuus
Therefore, measurements of hind limb length at day 21 should originate at the body wall and follow the midline of the limb through any angular deviations.
> 3,5 mg/l (> 40 % ilman kyllästysarvosta)
Changes in hind limb length at day 7, even if not evident at day 21, are still considered significant for potential thyroid activity.
Analyyttisen kemian näytteenottoaikataulu
Length measurements are acquired from digital photographs using image analysis software as described in the OECD Guidance Document on Amphibian Thyroid Histology (9).
Kerran viikossa (neljä näytteenottokertaa / testi)
Body Length and Wet Weight
Raakatietojen ja yhteenvetotietojen raportointitaulukot
Determinations of snout to vent length (SVL) (Figure 2) and wet weight are included in the test protocol to assess possible effects of test chemicals on the growth rate of tadpoles in comparison to the control group and are useful in detecting generalised toxicity to the test chemical.
Yleiset tiedot testikemikaalista
Because the removal of adherent water for weight determinations can cause stressful conditions for tadpoles and may cause skin damage, these measurements are performed on the day 7 sub-sampled tadpoles and all remaining tadpoles at test termination (day 21).
Kemialliset tiedot
For consistency, use the cranial aspect of the vent as the caudal limit of the measurement.
Syötä testikemikaali, pitoisuusyksiköt ja käsittelyt
Snout to vent length (SVL) is used to assess tadpole growth as illustrated in Figure 2.
Pitoisuusyksiköt:
Types of body length measurements and (B) Hind limb length measurements for X. laevis tadpoles (1)
Käsittely 1
While developmental stage and hind limb length are important endpoints to evaluate exposure-related changes in metamorphic development, developmental delay cannot, by itself, be considered a diagnostic indicator of anti-thyroidal activity.
Käsittely 2
Some changes may only be observable by routine histopathological analysis.
Käsittely 3
Diagnostic criteria include thyroid gland hypertrophy/atrophy, follicular cell hypertrophy, follicular cell hyperplasia, and as additional qualitative criteria:
Käsittely 4
follicular lumen area, colloid quality and follicular cell height/shape.
Päivämäärä (päivä 0):
Severity grading (4 grades) should be reported.
Syötä päivämäärä (kk/pp/vv)
Information on obtaining and processing samples for histological analysis and for performing histologic analyses on tissue samples is available in “Amphibian Metamorphosis Assay: Part 1 — Technical guidance for morphologic sampling and histological preparation” and “Amphibian Metamorphosis Assay: Part 2 — Approach to reading studies, diagnostic criteria, severity grading and atlas” (9).
Päivämäärä (päivä 7):
Laboratories performing the assay for the first time(s) should seek advice from experienced pathologists for training purpose prior to undertaking histological analysis and evaluation of the thyroid gland.
Päivämäärä (päivä 21):
Overt and significant changes in apical endpoints indicating developmental acceleration or asynchrony may preclude the necessity to perform histopathological analysis of the thyroid glands.
Raakatietojen keruulomakkeet päiville 7 ja 21
However, absence of overt morphological changes or evidence of developmental delay warrants histological analyses.
PÄIVÄ X
All test tanks should be checked daily for dead tadpoles and the numbers recorded for each tank.
PVM 00.00.00
The date, concentration and tank number for any observation of mortality should be recorded.
Käsittelyn numero
Dead animals should be removed from the test tank as soon as observed.
Rinnakkaisnäytteen numero
Mortality rates exceeding 10 % may indicate inappropriate test conditions or toxic effects of the test chemical.
Yksilön numero
Additional Observations
Yksilön tunniste
Cases of abnormal behaviour and grossly visible malformations and lesions should be recorded.
Kuono-peräaukko-pituus (mm)
Abnormal behaviour would include, for example, floating on the surface, lying on the bottom of the tank, inverted or irregular swimming, lack of surfacing activity, and being nonresponsive to stimulus.
Päivien 7 ja 21 ominaisuustietojen lasketut yhteenvedot
In addition, gross differences in food consumption between treatments should be recorded.
Solun laskelmat liittyvät taulukkoon 2 syötettyihin tietoihin.
Gross malformations and lesions could include morphological abnormalities (e.g. limb deformities), hemorrhagic lesions, bacterial or fungal infections, to name a few.
Paino (mg)
These determinations are qualitative and should be considered akin to clinical signs of disease/stress and made in comparison to control animals.
KÄS
If the occurrence or rate of occurrence is greater in exposed tanks than in the controls, then these should be considered as evidence for overt toxicity.
RINN
Data Collection
MEDIAANI
All data should be collected using electronic or manual systems which conform to good laboratory practices (GLP).
KESKIARVO
Characterisation of the test chemical:
KESK.HAJ.
physical-chemical properties;
Päivittäiset kuolleisuustiedot
information on stability and biodegradability;
Solun laskelmat liittyvät taulukkoon 1 syötettyihin tietoihin.
Chemical information and data:
Testipäivä
method and frequency of preparation of dilutions.
Rinnakkaisnäytteiden luku
Test chemical information includes actual and nominal concentrations of the test chemical, and in some cases, non-parent chemical, as appropriate.
Käsittelyn luku
Test chemical measurements may be required for stock solutions as well as for test solutions;
Taulukko 5
Solvent (if other than water):
Veden laatukriteerit
justification of the choice of solvent, and characterisation of solvent (nature, concentration used);
Altistusjärjestelmä (läpivirtaus/staattinen)
Operational records:
Valovoima:
these consist of observations pertaining to the functioning of the test system and the supporting environment and infrastructure.
Valoisa-pimeä-sykli
Typical records include:
Elintarvikkeet:
ambient temperature, test temperature, photoperiod, status of critical components of the exposure system (e.g. pumps, cycle counters, pressures), flow rates, water levels, stock bottle changes, and feeding records.
Ruokintatiheys:
General water quality parameters include:
Veden pH:
pH, DO, conductivity, total iodine, alkalinity, and hardness;
Testiveden jodipitoisuus:
Deviations from the test method:
Taulukko 6
this information should include any information or narrative descriptions of deviations from the test method;
Yhteenveto kemiallisista tiedoista
Biological observations and data:
Kemiallinen nimi:
these include daily observations of mortality, food consumption, abnormal swimming behaviour, lethargy, loss of equilibrium, malformations, lesions, etc.
Taulukko 7
Data reporting
Kontrollieläimen tunniste – rinnakkaisnäyte 1
Appendix 2 contains daily data collection spreadsheets that can be used as guidance for raw data entry and for calculations of summary statistics.
Annoseläimen tunniste – rinnakkaisnäyte 1
Additionally, reporting tables are provided that are convenient for communicating summaries of endpoint data.
Kontrollieläimen tunniste – rinnakkaisnäyte 2
Reporting tables for histological assessments can be found in Appendix 2.
Annoseläimen tunniste – rinnakkaisnäyte 2
Performance Criteria and Test Acceptability/Validity
Yhteensä:
Generally, gross deviations from the test method will result in unacceptable data for interpretation or reporting.
Taulukko 8
Therefore, the following criteria in Table 4 have been developed as guidance for determining the quality of the test performed, the general performance of the control organisms.
Muut histopatologiset kriteerit
Table 4
Follikkelin ontelon alue suurentunut
Acceptable limits
Histopatologisten löydösten kuvaukset
Test concentrations
Kuvaus:
Maintained at ≤ 20 % CV (variability of measured test concentration) over the 21 day test
Taulukko 10
Mortality in controls
Yhteenvetoraportointitaulukon malli AMA-tutkimuksen päivälle x (7 tai 21)
≤ 10 % — mortality in any one replicate in the controls should not exceed 2 tadpoles
Valvonta
Minimum median developmental stage of controls at end of test
Annos 1
Spread of development stage in control group
Annos 2
The 10th and the 90th percentile of the development stage distribution should not differ by more than 4 stages
Annos 3
Dissolved Oxygen
Ominaisuus
≥ 40 % air saturation [8]
Rinnakkaisnäyte
pH should be maintained between 6,5-8,5.
Keskiarvo
The inter-replicate/inter-treatment differentials should not exceed 0,5.
p-arvo
± 1 °C — the inter-replicate/inter-treatment differentials should not exceed 0,5 °C
Keskiarvo:
Test concentrations without overt toxicity
Märkäpaino:
Replicate performance
Taulukko 11
≤ 2 replicates across the test can be compromised
Kehitysvaihetietojen yhteenvetoraportointitaulukon malli AMA-tutkimuksen päivälle × (7 tai 21)
Special conditions for use of a solvent
Mediaani
If a carrier solvent is used, both a solvent control and clean water control should be used and results reported
Minimi
Special conditions for static renewal system
Jos suurempi määrä sammakonpoikasista on ylittänyt kehitysvaiheen 60 (≤ 20 prosenttia) yhdessä tai useammassa nimellispitoisuudessa, on tehtävä kaikilla sammakonpoikasilla kaksisuuntainen ANOVA, joka perustuu hierarkkiseen varianssirakenteeseen, jotta voidaan arvioida kemikaalikäsittelyjen kasvuun kohdistuvat vaikutukset samalla kun otetaan huomioon myöhäisvaiheen kehityksen vaikutus kasvuun.
Representative chemical analyses before and after renewal should be reported
Kaikkia tietoja suositellaan käytettäväksi, mutta huomioon tulee ottaa myöhäisvaiheen kehityksen vaikutus.
Ammonia levels should be measured immediately prior to renewal
Tämä voidaan tehdä kaksisuuntaisella ANOVAlla, joka perustuu hierarkkiseen varianssirakenteeseen.
All water quality parameters listed in Table 1of Appendix 1 should be measured immediately prior to renewal
MAA-AINEKSESSA TEHTÄVÄ HYPPYHÄNTÄISTEN LISÄÄNTYMISTESTI
Renewal period should not exceed 72 hours
Tämä testimenetelmä vastaa OECD:n testiohjetta (TG) nro 232 (2009).
Appropriate feeding schedule (50 % of the daily food ration of commercial tadpole feed)
Tämä testimenetelmä on kehitetty siksi, että voidaan arvioida kemikaalien vaikutuksia maaperässä elävien hyppyhäntäisten lisääntymiseen.
Test Validity
Se perustuu nykyisiin menetelmiin (1) (2).
The following requirements should be met to deem a test acceptable/valid:
Partenogeneettisesti lisääntyvä Folsomia candida ja suvullisesti lisääntyvä Folsomia fimetaria ovat kaksi helpoiten saatavilla olevaa hyppyhäntäisten lajia.
Valid experiment in a test determined to be negative for thyroid activity:
Niitä voi kasvattaa ja niitä on myös kaupallisesti saatavilla.
For any given treatment (including controls), mortality cannot exceed 10 %.
Kun arvioitavana on tiettyjä elinympäristöjä, joissa näitä kahta lajia ei esiinny, menetelmä on laajennettavissa myös muihin hyppyhäntäislajeihin, jos ne täyttävät testin validiteettikriteerit.
For any given replicate, mortality cannot exceed three tadpoles, otherwise the replicate is considered compromised
Maaperässä hyppyhäntäiset ovat ekologisesti merkittäviä lajeja ympäristömyrkyllisyyden testaukseen.
At least two treatment levels, with all four uncompromised replicates, should be available for analysis
Hyppyhäntäiset ovat kuusijalkaisia, ja niiden ohut ulkoinen tukiranka läpäisee ilmaa ja vettä erittäin hyvin.
At least two treatment levels without overt toxicity should be available for analysis
Ne kuuluvat niveljalkaisiin, mutta niiden altistumisreitti ja -nopeus on eri kuin kastemadoilla ja änkyrimadoilla.
Valid experiment in a test determined to be positive for thyroid activity:
Hyppyhäntäispopulaation tiheys on yleensä 105 m– 2 maaperässä ja lehtikarikekerroksissa monissa maanpäällisissä ekosysteemeissä (3) (4).
Mortality of no more than two tadpoles/replicate in the control group can occur
Aikuisten koko on yleensä 0,5–5 mm, ja niiden osuus maaperäeläinten kokonaisbiomassasta ja maahengityksestä on pieni, arviolta 1–5 prosenttia (5).
Decision logic for the conduct of the AMA
Niiden tärkein tehtävä onkin toimia mahdollisina prosessien säätelijöinä saalistamalla mikrobeja ja pieneliöitä.