natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Adult females can be easily distinguished from males and other developmental stages by their larger size, bloated shape and their brown dorsal shield (males are slimmer and flat), immatures are white to cream-coloured.
Tämä biologinen testi toimii tiettyjen hormonijärjestelmään kohdistuvien vaikutustapojen in vivo -seulontamenetelmänä, ja sitä sovellettaessa on otettava huomioon asiakirjaan ’OECD Conceptual Framework for the Testing and Assessment of Endocrine Disrupting Chemicals’ (28) (hormonaalisten haitta-aineiden testausta ja arviointia koskeva toimintamalli) liittyvä konteksti.
The development of the mites follows approximately the pattern described below at 20 °C (figure):
JOHDANTO JA RAJOITUKSET
Egg 5d, Larva 2d, Protonymph 5d, Deutonymph 7d, preoviposition period of female 2d.
Munimalla lisääntyvien selkärankaisten naaraiden maksa tuottaa yleensä vitellogeniinia verenkierrossa olevan endogeenisen estrogeenin avulla.
Afterwards, the mites are adult.
Se on munankeltuaisen proteiinien esiaste, ja kun maksa on tuottanut sitä, se kulkeutuu verenkierrossa munasarjoihin, joissa kehittyvät munasolut ottavat sen sisäänsä ja muokkaavat sitä.
Figure
Epäkypsien naaras- ja koiraskalojen plasmassa vitellogeniinia on lähes mahdoton havaita, koska niillä ei ole riittävästi estrogeenia verenkierrossaan.
Development of Hypoaspis (Geolaelaps) aculeifer at 20 °C.
Maksa voi kuitenkin syntetisoida ja erittää vitellogeniinia eksogeenisen estrogeenistimulaation avulla.
(removal = females used for the test)
Vitellogeniinin mittauksella voidaan havaita kemikaaleja, joilla on erilaisia estrogeeniin liittyviä vaikutustapoja.
20 days
Estrogeeniin vaikuttavien kemikaalien havaitseminen on mahdollista mittaamalla vitellogeniinin indusointia koiraskaloilla, ja sitä on dokumentoitu runsaasti tieteellisessä vertaisarvioidussa kirjallisuudessa (esimerkiksi (7)).
The adult test animals are removed from the synchronised culture and introduced into the test vessels between the 28th and the 35th day after the parental females have started egg laying (i.e. 7 – 14 days after they became adult).
Vitellogeniinin indusointi on osoitettu myös aromatisoituville androgeeneille altistumisen jälkeen (8, 9).
This ensures that the test animals have already passed their preoviposition period and have been mated by males that are also present in the culture vessel.
Kun naaraskalojen verenkierron estrogeenipitoisuus pienentyy esimerkiksi estämällä aromataasia muuntamasta endogeenista androgeenia luonnolliseksi estrogeeniksi, 17β-estradioliksi, myös aromataasia estäviä ominaisuuksia sisältävien kemikaalien havaitsemisessa käytettävän vitellogeniinin pitoisuus pienenee (10, 11).
Observations in laboratory cultures suggest, that females mate immediately or shortly after becoming adult if males are present (Ruf, Vaninnen, pers. obs.).
Estrogeenin/aromataasin estämisen aiheuttaman vitellogeniinivasteen biologinen merkityksellisyys on osoitettu ja se on dokumentoitu laajalti.
The period of seven days is chosen to facilitate integration in laboratory routine and to buffer individual developmental variability among mites.
On kuitenkin mahdollista, että vitellogeniinin tuotantoon naarailla voivat vaikuttaa myös yleinen myrkyllisyys ja muuhun kuin hormonijärjestelmään kohdistuvat myrkylliset vaikutustavat (esimerkiksi hepatotoksisuus).
The oviposition should be started with at least the same number of females that is eventually needed for the test (If for example 400 females are needed in the test, at least 400 females should be allowed to oviposit for two to three days.
Useita mittausmenetelmiä on kehitetty onnistuneesti, ja ne on myös vakioitu rutiinikäyttöön.
At least 1200 eggs should be the starting point for the synchronised population (sex ratio ca.
Esimerkkinä tästä ovat lajikohtaiset entsyymivälitteiset immunosorbenttimääritysmenetelmät (ELISA), joissa käytetään immunokemiaa kvantifioitaessa vitellogeniinia yksittäisiltä kaloilta otetuista veri- tai maksanäytteistä (12, 13, 14, 15, 16, 17, 18).
0,5, mortality ca. 0,2).
Rasvapäämutun verestä, seeprakalan verestä tai pään/pyrstön homogenaatista sekä medakan maksasta otetaan näytteitä vitellogeniinin mittausta varten.
To avoid cannibalism, it is more feasible to keep not more than 20-30 ovipositing females in one vessel.
Medakalla verestä ja maksasta mitattujen vitellogeniiniarvojen välinen korrelaatio on hyvä (19).
Extraction methods
Lisäyksessä 6 on esitetty suositeltavat näytteenottomenetelmät vitellogeniinianalyysia varten.
For micro-arthropods a heat extraction is an appropriate method to separate specimens from the soil / substrate (see figure below).
Naarailla on kyky kehittää koiraan sekundaarisia sukupuoliominaisuuksia, kun ne altistuvat androgeenisesti vaikuttaville kemikaaleille vedessä.
The method is based on the activity of the organisms, so only mobile specimens will have the chance to be recorded.
Tieteellisessä kirjallisuudessa on useita tutkimuksia, joissa dokumentoidaan tämäntyyppisestä vasteesta rasvapäämutulla (20) ja medakalla (21).
The principle of the heat extraction is to make conditions for the organisms gradually worse in the sample, so that they will leave the substrate and fall in a fixing liquid (e.g. ethanol).
Koiraskalojen sekundaaristen sukupuoliominaisuuksien vähenemisen tulkinnassa on syytä olla varovainen heikon tilastollisen voiman takia, ja sen on perustuttava asiantuntijan arvioon ja näyttöön perustuvaan toimintatapaan.
Crucial points are the duration of the extraction and the gradient of good to moderate to bad conditions for the organisms.
Seeprakalan käyttöön tässä määrityksessä liittyy rajoituksia, koska sillä ei ole kvantifioitavia sekundaarisia sukupuoliominaisuuksia, jotka reagoivat androgeenisesti vaikuttaviin kemikaaleihin.
The duration of extraction for ecotoxicological tests have to be as short as possible, because any population growth during the time of extraction would falsify the results.
Rasvapäämutulla eksogeenisen androgeenialtistuksen pääindikaattori on naaraskalan kuonossa sijaitsevien kutukyhmyjen lukumäärä.
On the other hand the temperature and moisture conditions in the sample have to be always in a range that allows the mites to move.
Medakalla tärkein merkki eksogeenisesta altistumisesta androgeenisesti vaikuttaville kemikaaleille on naaraskalojen sukuelinpapillien lukumäärä.
The heating of a soil sample leads to a desiccation of substrate.
Lisäyksissä 5A ja 5B esitetään suositeltavat menetelmät rasvapäämutun ja medakan sukupuoliominaisuuksien arvioimiseksi.
If the desiccation is too quick, some mites might also desiccated before they managed to escape.
Tässä testimenetelmässä käytetyt määritelmät ovat lisäyksessä 1.
Therefore the following procedure is proposed (24) (25): Apparatus:
Määrityksessä lisääntymistilassa olevat koiras- ja naaraskalat altistetaan yhdessä testiastiassa.
Tullgren funnel or comparable methods like e.g. McFadyen (heating from above, sample is put over a funnel) Heating regime:
Kumpikin sukupuoli voidaan erottaa selvästi aikuisuuden ja lisääntymistilan perusteella, joten kukin tutkittava ominaisuus voidaan analysoida sukupuolikohtaisesti, ja myös sukupuolikohtainen herkkyys eksogeenisille kemikaaleille voidaan selvittää varmasti.
25 °C for 12 h, 35 °C for 12 h, 45 °C for 24 hours (in total 48 h).
Testin päätteeksi sukupuoli vahvistetaan sukupuolirauhasten makroskooppisella tutkimuksella, joka tehdään avaamalla kalan maha saksilla ventraalisesti.
The temperature should be measured in the substrate.
Yhteenveto oleellisista biologisen testin olosuhteista on lisäyksessä 2.
Fixation liquid:
Yleensä testi aloitetaan kalalla, joka on otettu kutuikäisestä populaatiosta;
Take glass vial that was used for the test.
Testi tehdään käyttäen kolmea kemikaalialtistuksen pitoisuutta ja vesikontrollia sekä tarvittaessa liuotinkontrollia.
Remove lid and wrap a piece of mesh or fabric around the opening.
Medakan ja seeprakalan kanssa käytetään kahta astiaa tai rinnakkaisnäytettä käsittelykertaa kohti (kukin astia sisältää viisi koirasta ja viisi naarasta), kun taas rasvapäämutun kanssa käytetään neljää astiaa tai rinnakkaisnäytettä käsittelykertaa kohti (kukin astia sisältää kaksi koirasta ja neljä naarasta).
The fabric should have a mesh size of 1,0 to 1,5 mm.
Tällä tavalla voidaan mukauttaa rasvapäämutukoiraan reviirikäyttäytyminen ja samalla säilyttää testin riittävä voima.
Fix the fabric with an elastic band.
Altistusta jatketaan 21 päivää, ja kaloista otetaan näytteet altistuksen päivänä 21.
Carefully turn the vial upside down and place it in the extraction apparatus.
Päivänä 21 tehtävän näytteenoton yhteydessä kalat lopetetaan inhimillisellä tavalla.
The fabric prevents substrate from trickling in the fixation liquid but allows mites to leave the sample.
Sekundaariset sukupuoliominaisuudet mitataan rasvapäämutulta ja medakalta (ks. lisäykset 5A ja 5B).
End the extraction after 48 hours.
vaihtoehtoisesti seeprakalalta voidaan ottaa pää/pyrstö vitellogeniinin määrittämistä varten (lisäys 6).
Remove fixation vials and count mites by means of a dissecting microscope.
Medakalta otetaan maksa vitellogeniinianalyysia varten (lisäys 6).
The extraction efficiency of the chosen method must have been proven once or twice a year using vessels containing a known number of juvenile and adult mites kept in untreated test substrate.
TESTIN HYVÄKSYTTÄVYYSKRITEERIT
Efficiency should be ≥ 90 % on average combined for all developmental stages.
Testitulokset ovat hyväksyttäviä, jos seuraavat ehdot täyttyvät:
Tullgren-type extracting device
kuolleisuus vesi- (tai liuotin)kontrolleissa on enintään 10 prosenttia altistusjakson lopussa.
Wire mesh barrier
liuenneen hapen pitoisuus on vähintään 60 prosenttia ilman kyllästysarvosta koko altistusjakson ajan.
How to prepare the test vial after the test is finished, before extraction
veden lämpötila testiastioiden välillä vaihtelee enintään ± 1,5 °C milloin tahansa testin aikana ja poikkeaa enintään 2 °C siitä lämpötila-alueesta, joka on määritelty kyseiselle testilajille (lisäys 2).
Identification of Hypoaspis (Geolaelaps ) aculeifer
saatavilla on oltava näyttöä, joka osoittaa, että testikemikaalin pitoisuudet liuoksessa ovat olleet ± 20 prosenttia keskimääräisistä mitatuista arvoista.
Subclass/order/suborder:
Tavalliset laboratoriolaitteet ja erityisesti seuraavat:
Family:
happi- ja pH-mittarit
Genus/subgenus/species:
laitteet veden kovuuden ja emäksisyyden mittaamiseen
Literature used:
säiliöitä, jotka ovat kemiallisesti inerttiä materiaalia ja riittävän suuria suhteessa suositeltuun lastaus- ja varastotiheyteen (ks. lisäys 2)
hypostomal grooves with more than 6 denticles;
Testissä voidaan käyttää mitä tahansa sellaista vettä, jossa testilaji selviytyy ja kasvaa riittävän pitkän ajan.
caudal dorsal setae of Z4 not very long;
Veden laadun pitäisi pysyä vakiona testin ajan.
dorsal setae setiform;
Veden pH:n on oltava välillä 6,5–8,5, mutta kunkin testin aikana se ei saa vaihdella minkään testin aikana enempää kuin 0,5 pH-yksikköä.
genital shield normal, not very enlarged and not reaching the anal shield;
Sen varmistamiseksi, ettei laimennusvesi vaikuta liikaa testituloksiin (esimerkiksi kompleksoimalla testattavaa ainetta), näytteitä on otettava säännöllisin väliajoin analyyseja varten.
posterior half of dorsal shield without unpaired setae;
Raskasmetallit (esimerkiksi Cu, Pb, Zn, Hg, Cd, Ni), tärkeimmät anionit ja kationit (esimerkiksi Ca2+, Mg2+, Na+, K+, Cl– ja SO42–), torjunta-aineet (esimerkiksi orgaanista fosforia ja orgaanista klooria sisältävien torjunta-aineiden kokonaispitoisuudet), orgaanisiin yhdisteisiin sitoutuneen hiilen kokonaispitoisuus ja suspendoituneet kiinteät aineet on määritettävä esimerkiksi kolmen kuukauden välein, jos laimennusveden laatu tiedetään suhteellisen vakioksi.
legs II and IV with some thick macrosetae;
Jos veden laadun on osoitettu pysyvän vakiona ainakin vuoden ajan, määrityksiä voidaan tehdä harvemmin (esimerkiksi kuuden kuukauden välein).
dorsal seta Z5 about two times longer than J5;
Lisäyksessä 3 luetellaan joitakin hyväksyttävän laimennusveden kemiallisia ominaisuuksia.
fixed digit of chelicera with 12-14 teeth and movable digit with 2 teeth;
Halutunpitoiset testiliuokset valmistetaan varastoliuoksista laimentamalla.
Idiosoma 520-685 μm long.
Varastoliuos valmistetaan mieluiten yksinkertaisesti sekoittamalla testattava aine laimennusveteen käyttäen mekaanisia menetelmiä (kuten sekoittamista tai ultraääntä).
Hypoaspis miles is also used in biological control and might get confused with H. aculeifer.
Saturaatiopylväitä (liukoisuuspylväitä) voi käyttää riittävän väkevän varastoliuoksen valmistamiseksi.
The main difference is:
Liuottimen käyttöä kantoaineena ei suositella.
H. miles belongs to subgenus Cosmolaelaps and has knife-like dorsal setae while H. aculeifer belongs to subgenus Geolaelaps and has setiform dorsal setae.
Testissä käytetään läpivirtaustestijärjestelmää.
Hypoaspis aculeifer, dorsal shield with characteristic setae Hypoaspis aculeifer
Tällainen järjestelmä annostelee ja laimentaa testiaineen varastoliuosta jatkuvasti (esimerkiksi annostelupumpulla, laimentimella, kyllästävällä järjestelmällä) testipitoisuuksien annostelemiseksi testiastioihin.
Original drawings by F. Faraji
Varastoliuosten ja laimennusveden virtausnopeudet on tarkistettava säännöllisin väliajoin, mieluiten kerran päivässä, ja virtausnopeus saa vaihdella enintään 10 prosenttia koko testin aikana.
Hypoaspis miles After Hughes, 1976
Heikkolaatuisten muoviletkujen tai muiden sellaisten materiaalien, jotka saattavat sisältää biologisesti aktiivisia kemikaaleja, käyttämistä on pyrittävä välttämään.
Hypoaspis aculeifer After Hughes, 1976
Kun valitaan materiaalia läpivirtausjärjestelmään, testikemikaalin mahdollinen imeytyminen tähän materiaaliin on otettava huomioon.
Leg IV (female)
Kalojen hoito
Basic information on the biology of Hypoaspis (Geolaelaps) aculeifer
On tärkeää, että kalojen lastaustiheys ja varastotiheys (ks. määritelmät lisäyksestä 1) ovat asianmukaiset käytettyjen testilajien kannalta (ks. lisäys 2).
Hypoaspis aculeifer belongs to the family Lealapidae, order Acari (mites), class Arachnida, tribe Arthropoda.
Kuolleiden kalojen määrä kirjataan 48 tunnin alkutotuttelun jälkeen, jonka jälkeen noudatetaan seuraavia periaatteita:
They are living in all kinds of soil and feed on other mites, nematodes, enchytraeids and collembolans (26).
jos kuolleisuus on yli 5 prosenttia näiden toisten seitsemän päivän aikana, koko erä hylätään.
In case of food shortage they switch to cannibalism (27).
Kalat eivät saa saada hoitoa sairauteen totuttelujakson, esialtistusjakson tai altistusjakson aikana.
Predatory mites are segmented in idiosoma and gnathosoma.
Esialtistus ja kalojen valinta
A clear differentiation of the idiosoma in prosoma (head) and opisthosoma (abdomen) is missing.
Yhden viikon esialtistusjakso on suositeltavaa, ja siinä eläimet sijoitetaan samanlaisiin astioihin kuin varsinaisessa testissä.
The gnathosoma (head shield) contains the instruments for feeding such as palps and chelicera.
Kaloja on ruokittava ad libitum koko hoitojakson ja altistusjakson ajan.
The chelicers are trifurcated and tusked with teeth of different shape.
Altistusjakso aloitetaan lisääntymiskypsiin koe-eläimiin kuuluvalla dimorfisella aikuisella kalalla (ts. jonka sekundaariset sukupuoliominaisuudet ovat rasvapäämutulla ja medakalla selvästi näkyvillä), joka kutee aktiivisesti.
Beside ingestion the males are using their chelicers mainly to transfer the spermatophores to the females.
Rasvapäämutujen osalta yleinen ohje (jonka lisäksi on tarkkailtava tietyn kalaerän varsinaista lisääntymistilaa) on se, että niiden iän on oltava 20 (± 2) viikkoa, kun oletetaan, että niitä on kasvatettu 25 ± 2 °C:n lämpötilassa niiden koko elinkaaren ajan.
A dorsal shield covers nearly completely the idiosoma.
Medakojen iän on oltava 16 (± 2) viikkoa, kun oletetaan, että niitä on kasvatettu 25 ± 2 °C:n lämpötilassa niiden koko elinkaaren ajan.
A big part of the female idiosoma is occupied by the reproductive organs, which are in particular distinct shortly before egg deposition.
Seeprakalojen iän on oltava 16 (± 2) viikkoa, kun oletetaan, että niitä on kasvatettu 26 ± 2 °C:n lämpötilassa niiden koko elinkaaren ajan.
Ventrally, two shields can be found, the sternal and the genital shield.
TESTISUUNNITELMA
All legs are provided with bristles and thorns.
Testissä käytetään kolmea pitoisuutta testikemikaalista, yhtä kontrollia (vettä) ja tarvittaessa yhtä liuotinkontrollia.
The bristles are used to anchor when moving in or on top of the soil.
Tiedot voidaan analysoida käsittely- ja kontrollivasteiden välisten, tilastollisesti merkitsevien erojen määrittämiseksi.
The second pair of legs is used not only for moving but also to clinch the prey.
Kokeen päivänä 21 kummankin käsittelytason (viisi koirasta ja viisi naarasta kummassakin rinnakkaisnäytteessä) seeprakala- ja medakakoirailta ja -naarailta ja verrokkiryhmän (-ryhmien) kaloilta otetaan näytteet vitellogeniinin ja sekundaaristen sukupuoliominaisuuksien mittaamista varten, mikäli tarpeen.
The thorns of the fourth pair of legs can serve as protection as well as “moving motor” (28).
Kokeen päivänä 21 rasvapäämutukoirailta ja -naarailta (kaksi koirasta ja neljä naarasta kaikissa neljässä rinnakkaisnäytteessä) ja verrokkiryhmän (-ryhmien) kaloilta otetaan näytteet vitellogeniinin ja sekundaaristen sukupuoliominaisuuksien mittaamista varten.
Males are 0,55 - 0,65 mm long and have a weight of 10 - 15 μg.
Tässä testissä suurimmaksi testipitoisuudeksi on valittava annostason määrittämistutkimuksista tai muista myrkyllisyystiedoista saatu suurin siedetty pitoisuus (MTC-arvo), tai 10 mg/l tai enimmäisliukoisuus vedessä sen mukaan, mikä arvo on pienin.
Females are 0,8 - 0,9 mm long and are weighing 50 - 60 μg (8) (28) (Fig 1).
MTC-arvo on kemikaalin suurin testauspitoisuus, jonka aiheuttama kuolleisuus on alle 10 prosenttia.
Figure 1
Tässä lähestymistavassa oletetaan, että käytettävissä on empiiristä tietoa välittömästä myrkyllisyydestä tai muita myrkyllisyystietoja, joiden perusteella MTC-arvo voidaan arvioida.
Female, male, protonymph and larvae of H. aculeifer.
MTC-arvon arviointi voi olla epätarkkaa, ja siinä tarvitaan yleensä asiantuntijan näkemystä.
At 23 °C, the mites become sexually mature after 16 days (females) and 18 days (males), respectively (6).
Testissä tarvitaan siis kolme testipitoisuutta, pitoisuusvälin vakiokerroin, joka saa olla enintään 10, sekä laimennusvesikontrolli (ja tarvittaessa liuotinkontrolli).
The females carry over the sperms by the solenostom where they will be then transferred to the ovar.
Pitoisuusvälin kertoimen vaihteluvälin suositellaan olevan 3,2–10.
In the ovar the sperms mature and will be stored.
Kalojen valinta ja punnitus
Fertilisation takes place only after maturation of the sperms in the ovar.
On tärkeää minimoida kalojen painon vaihtelu testin alussa.
The fertilised or unfertilised eggs will be deposited by the females in clumps or separately, preferably in crevices or holes.
Lisäyksessä 2 mainitaan, minkälainen kokovaihtelu sopii tähän testiin suositelluille eri lajeille.
Copulated females can bear juveniles of both sexes whereas from eggs of uncopulated females only male juveniles are hatching.
Testissä käytetyssä koko kalaerässä koiras- ja naaraskalojen yksilöllisten painojen vaihteluväli testin alussa tulee mahdollisuuksien mukaan pitää ± 20 prosentissa saman sukupuolen painon aritmeettisesta keskiarvosta.
During development to the adult four phases of development (egg — larvae, larvae — protonymph, protonymph — deutonymph, deutonymph — adult) are passed through.
Suositellaan, että osa erän kaloista punnitaan keskimääräisen painon arvioimiseksi.
The egg is milky white, hyaline, elliptical and approximately 0,37 mm long with a solid mantle.
Altistumisolosuhteet
According to (8), the larvae are between 0,42 - 0,45 mm in size.
Testi kestää 21 päivää esialtistusjakson jälkeen.
They have only three pairs of legs.
Suositeltu esialtistusjakso on yksi viikko.
In the head region palps and chelicers are developed.
Kaloja on ruokittava ad libitum sopivalla ravinnolla (lisäys 2) riittävän usein, jotta ne pysyvät hyvässä kunnossa.
The chelicers, having some few small denticles, are used to hatch from the egg.
On varottava, ettei vedessä kasva mikrobeja eikä se samennu.
After the first moult, 1 - 2 days after hatching, the protonymphs are developed.
Yleisohjeena mainittakoon, että päivittäinen annos voidaan jakaa kahteen tai kolmeen yhtä suureen annokseen, kun ruokintakertoja on useampia päivässä, ja ruokintakertojen välillä on oltava vähintään kolme tuntia aikaa.
They are also white, the size is 0,45 - 0,62 mm (8) and they have four pairs of legs.
Suurempi kerta-annos on hyväksyttävää antaa etenkin viikonloppuisin.
On the chelicers the teeth are completely present.
Kalat on pidettävä ravinnotta 12 tuntia ennen näytteenottoa/ruumiinavausta.
Beginning with that stadium the mites start to forage.
Kalanruoka on tarkastettava mahdollisten kontaminanttien, kuten orgaanista klooria sisältävien torjunta-aineiden, polysyklisten aromaattisten hiilivetyjen (PAH-yhdisteiden) ja polykloorattujen bifenyylien (PCB-yhdisteiden) varalta.
For that reason the cuticula of the prey is pierced with the chelicers and a secretion for the extra intestinal digestion is emitted into the prey.
Paljon fytoestrogeeneja sisältävää ruokaa on vältettävä, koska se heikentää testivastetta tunnetulle estrogeeniagonistille (ts. 17-beetaestradiolille).
The food mash can then be sucked by the mite.
Syömättä jäänyt ruoka ja ulosteet on poistettava testiastioista vähintään kaksi kertaa viikossa; kunkin säiliön pohja on esimerkiksi puhdistettava huolellisesti käyttämällä lappoa.
The chelicers can also be used to rip bigger particles out of food nuggets (28).
Valoisan ajan ja testiveden lämpötilan pitää olla sopivia käytetylle testilajille (lisäys 2).
After one further moult the deutonymphs are developed.
Analyyttisten määritysten ja mittausten taajuus
They are 0,60 - 0,80 mm (8) in size and yellow to light brown in colour.
Ennen altistusjakson aloittamista on varmistettava, että kemikaalin annostelujärjestelmä toimii asianmukaisesti.
Beginning with that phase they can be separated into females and males.
Kaikki analyysimenetelmät on määritettävä, ja kemiallisesta stabiiliudesta testijärjestelmässä on oltava riittävästi tietoa.
After further ecdysis, during which time the animals are inactive and the brown shield is developing (approx. after 14 days) the mites are adult (28) (29) (30).Their life span is between 48 and 100 days at 25 °C (27).
Testin aikana testikemikaalin pitoisuudet määritetään säännöllisin väliajoin seuraavasti:
Appendix 8
laimentimen ja myrkyllisen aineen varastoliuoksen virtausnopeudet on tarkistettava mieluiten päivittäin mutta vähintään kahdesti viikossa, ja ne saavat vaihdella enintään 10 prosenttia koko testin aikana.
Summary and time schedule of the main actions to be taken in order to perform the Hypoaspis test
Varsinaiset testikemikaalin pitoisuudet suositellaan mitattavan kaikista astioista testin alussa ja sen jälkeen viikon välein.
Time (days)
Suositellaan, että tulosten perusteina käytetään mitattuja pitoisuuksia.
test start = day 0
Jos testiaineen pitoisuus pysyy kuitenkin tyydyttävästi 20 prosentin sisällä nimellispitoisuudesta koko testin ajan, tulosten perustana voidaan käyttää nimellispitoisuuksia tai mitattuja pitoisuuksia.
Activity / task
Näytteet on mahdollisesti suodatettava (esim. 0,45 μm:n huokoskoon suotimella) tai sentrifugoitava.
Day – 35
Mikäli se on tarpeen, sentrifugointi on suositeltava menetelmä.
Twice or three times a week:
Monia yleisiä (esimerkiksi eloonjääneisyyttä) ja keskeisiä biologisia vasteita (kuten vitellogeniiniarvot) arvioidaan testin kuluessa tai sen päättyessä.
supply with sufficient food
Näiden ominaisuuksien mittaamista ja arviointia sekä tulosten käyttökelpoisuutta kuvataan jäljempänä.
Day – 5 (+/- 2)
Eloonjääneisyys
Prepare artificial soil
Kalat on tutkittava päivittäin testijakson aikana.
Day – 4 (+/- 2)
Kuolleisuus on kirjattava ja kuolleet kalat on poistettava testiastiasta mahdollisimman pian.
Determine WHC of artificial soil
Kuolleiden kalojen tilalle ei tule vaihtaa eläviä sen pikemmin kontrolli- kuin käsittelyastioihinkaan.