natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Therefore it is recommended that the solvent concentration, if necessary, is minimised wherever technically feasible (dependent on the physical-chemical properties of the test chemical).
hypotalamus-aivolisäke-sukurauhasakseli.
A flow-through test system will be used.
suurin siedetty pitoisuus, noin 10 prosenttia LC50-arvosta.
Such a system continually dispenses and dilutes a stock solution of the test chemical (e.g. metering pump, proportional diluter, saturator system) in order to deliver a series of concentrations to the test chambers.
Kalojen hormonijärjestelmään kohdistuvan seulontatutkimuksen koeolosuhteet
The flow rates of stock solutions and dilution water should be checked at intervals, preferably daily, during the test and should not vary by more than 10 % throughout the test.
Suositellut lajit
Care should be taken to avoid the use of low-grade plastic tubing or other materials that may contain biologically active chemicals.
Rasvapäämutu
When selecting the material for the flow-through system, possible adsorption of the test chemical to this material should be considered.
Seeprakala
Holding of fish
Testityyppi
Test fish should be selected from a laboratory population, preferably from a single stock, which has been acclimated for at least two weeks prior to the test under conditions of water quality and illumination similar to those used in the test.
Läpivirtaus
mortalities of greater than 10 % of population in seven days:
Loistelamppu (laajakirjoinen)
reject the entire batch;
10–20 μE/m2/s, 540–1000 luksia, tai 50–100 ft-c (laboratorion ympäristötasot)
mortalities of between 5 % and 10 % of population:
Valoisa aika (valoisan ja pimeän väliset siirtymät valinnaisia, niitä ei kuitenkaan pidetä tarpeellisina)
acclimation for seven additional days;
16 h valoisaa, 8 h pimeää
if more than 5 % mortality during second seven days, reject the entire batch;
12–16 h valoisaa, 8 h pimeää
mortalities of less than 5 % of population in seven days:
< 5 g litraa kohti
accept the batch
Testiastian koko
Fish should not receive treatment for disease during the acclimation period, in the pre-exposure period, or during the exposure period.
10 l (vähintään)
Pre-exposure and selection of fish
2 l (vähintään)
A one-week pre-exposure period is recommended, with animals placed in vessels similar to the actual test.
5 l (vähintään)
Fish should be fed ad libitum throughout the holding period and during the exposure phase.
Testiliuoksen tilavuus
The exposure phase is started with sexually dimorphic adult fish from a laboratory supply of reproductively mature animals (e.g. with clear secondary sexual characteristics visible as far as fathead minnow and medaka are concerned), and actively spawning.
8 l (vähintään)
For general guidance only (and not to be considered in isolation from observing the actual reproductive status of a given batch of fish), fathead minnows should be approximately 20 (± 2) weeks of age, assuming they have been cultured at 25 ± 2 °C throughout their lifespan.
1,5 l (vähintään)
Japanese medaka should be approximately 16 (± 2) weeks of age, assuming they have been cultured at 25 ± 2 °C throughout their lifespan.
4 l (vähintään)
Zebrafish should be approximately 16 (± 2) weeks of age, assuming they have been cultured at 26 ± 2 °C throughout their lifespan.
Testiliuosten tilavuuden muutokset
TEST DESIGN
Vähintään kuusi päivässä
Three concentrations of the test chemical, one control (water) and, if needed, one solvent control are used.
Vähintään viisi päivässä
The data may be analysed in order to determine statistically significant differences between treatment and control responses.
Katso edellä kohta 20.
These analyses will inform whether further longer term testing for adverse effects (namely, survival, development, growth and reproduction) is required for the chemical, rather than for use in risk assessment (24).
Koiraat:
For zebrafish and medaka, on day 21 of the experiment, males and females from each treatment level (5 males and 5 females in each of the two replicates) and from the control(s) are sampled for the measurement of vitellogenin and secondary sex characteristics, where applicable.
Naaraat:
For fathead minnow, on day 21 of exposure, males and females (2 males and 4 females in each of the four replicates) and from the control(s) are sampled for the measurement of vitellogenin and secondary sex characteristics.
Kalojen lkm. testiastiaa kohti
For the purposes of this test, the highest test concentration should be set by the maximum tolerated concentration (MTC) determined from a range finder or from other toxicity data, or 10 mg/l, or the maximum solubility in water, whichever is lowest.
6 (2 koirasta ja 4 naarasta)
The MTC is defined as the highest test concentration of the chemical which results in less than 10 % mortality.
10 (5 koirasta ja 5 naarasta)
Using this approach assumes that there are existing empirical acute toxicity data or other toxicity data from which the MTC can be estimated.
Käsittelyjen lkm
Estimating the MTC can be inexact and typically requires some professional judgment.
= 3 (sekä asianmukaiset kontrollit)
Three test concentrations, spaced by a constant factor not exceeding 10, and a dilution-water control (and solvent control if necessary) are required.
Astioiden lkm. käsittelyä kohti
A range of spacing factors between 3,2 and 10 is recommended.
Vähintään 4
Selection and weighing of test fish
Vähintään 2
It is important to minimise variation in weight of the fish at the beginning of the assay.
Kalojen lkm. testipitoisuutta kohti
Suitable size ranges for the different species recommended for use in this test are given in Appendix 2.
16 täysikasvuista naarasta ja 8 koirasta (4 naarasta ja 2 koirasta jokaisessa rinnakkaisnäyteastiassa)
For the whole batch of fish used in the test, the range in individual weights for male and female fish at the start of the test should be kept, if possible, within ± 20 % of the arithmetic mean weight of the same sex.
10 täysikasvuista naarasta ja 10 koirasta (5 naarasta ja 5 koirasta jokaisessa rinnakkaisnäyte-astiassa)
It is recommended to weigh a subsample of the fish stock before the test in order to estimate the mean weight.
Ruokinta
Conditions of exposure
Eläviä tai pakastettuja täysikasvuisia suolalehtijalkaisia tai niiden nauplius-toukkia 2–3 kertaa päivässä (ad libitum), kaupallisesti saatavaa ruokaa tai edellisten yhdistelmä
The test duration is 21 days, following a pre-exposure period.
Suolalehtijalkaisia tai niiden nauplius-toukkia 2–3 kertaa päivässä (ad libitum), kaupallisesti saatavaa ruokaa tai edellisten yhdistelmä
The recommended pre-exposure period is one week.
Ei tarpeen, ellei liuenneen hapen pitoisuus ole alle 60 % ilman kyllästysarvosta
Fish should be fed ad libitum with an appropriate food (Appendix 2) at a sufficient rate to maintain body condition.
Puhdas pinta-, kaivo- tai synteettinen vesi tai dekloorattu hanavesi
Care should be taken to avoid microbial growth and water turbidity.
Esialtistusjakso
As a general guidance, the daily ration may be divided into two or three equal portions for multiple feeds per day, separated by at least three hours between each feed.
Suositus 7 päivää
A single larger ration is acceptable particularly for weekends.
Kemikaalialtistuksen kesto
Food should be withheld from the fish for 12 hours prior to sampling/necropsy.
Biologiset ominaisuudet
Fish food should be evaluated for the presence of contaminants such as organochlorine pesticides, polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs), polychlorinated biphenyls (PCBs).
eloonjääneisyys
Food with an elevated level of phytoestrogens that would compromise the response of the assay to known oestrogen agonist (e.g. 17-beta estradiol) should be avoided.
käyttäytyminen
Uneaten food and faecal material should be removed from the test vessels at least twice weekly, e.g. by carefully cleaning the bottom of each tank using a siphon.
sekundaariset sukupuoliominaisuudet
The photoperiod and water temperature should be appropriate for the test species (see Appendix 2).
Testin hyväksyttävyys
Frequency of analytical determinations and measurements
Liuennut happi >60 % kyllästysarvosta;
Prior to initiation of the exposure period, proper function of the chemical delivery system should be ensured.
keskilämpötila 25 ± 2 °C;
All analytical methods needed should be established, including sufficient knowledge on the chemical stability in the test system.
kontrollikalojen eloonjääneisyys 90 %;
During the test, the concentrations of the test chemical are determined at regular intervals, as follows:
mitatut testipitoisuudet 20 %:n sisällä keskimääräisistä mitatuista arvoista käsittelytasoa kohti.
the flow rates of diluent and toxicant stock solution should be checked preferably daily but as a minimum twice per week, and should not vary by more than 10 % throughout the test.
keskilämpötila 24 ± 2 °C;
It is recommended that the actual test chemical concentrations be measured in all vessels at the start of the test and at weekly intervals thereafter.
keskilämpötila 26 ± 2 °C;
It is recommended that results be based on measured concentrations.
Joitakin hyväksyttävän laimennusveden kemiallisia ominaisuuksia
However, if concentration of the test chemical in solution has been satisfactorily maintained within ± 20 % of the nominal concentration throughout the test, then the results can either be based on nominal or measured values.
< 20 mg/1
Samples may need to be filtered (e.g., using a 0,45 μm pore size) or centrifuged.
< 2 mg/1
If needed, then centrifugation is the recommended procedure.
Orgaanista fosforia sisältävien torjunta-aineiden kokonaismäärä
However, if the test material does not adsorb to filters, filtration may also be acceptable.
Lisäys 4A
During the test, dissolved oxygen, temperature, and pH should be measured in all test vessels at least once per week.
Kutulevy Lasinen instrumenttitarjotin (koko esimerkiksi 22 × 15 × 15,5 cm (p × l × s)), jonka päällä irrotettava ruostumaton teräsristikko (silmäkoko 2 mm).
Total hardness and alkalinity should be measured in the controls and one vessel at the highest concentration at least once per week.
Ristikon tulee peittää instrumenttitarjotin hieman reunojen alapuolelta.
Temperature should preferably be monitored continuously in at least one test vessel.
Kutualusta on kiinnitettävä ristikkoon.
A number of general (e.g. survival) and core biological responses (e.g. vitellogenin levels) are assessed over the course of the assay or at termination of the assay.
Siitä on muodostuttava rakenne, johon kalat voivat siirtyä.
Measurement and evaluation of these endpoints and their utility are described below.
Sopivia rakenteita ovat esimerkiksi vihreästä muovimateriaalista valmistetut keinotekoiset akvaariokasvit (huom. testikemikaalin adsorptoituminen muovimateriaaliin on muistettava ottaa huomioon).
Survival
Muovimateriaalia on huuhdeltava runsaassa lämpimässä vedessä riittävän kauan, jotta varmistetaan, ettei testiveteen joudu kemikaaleja.
Fish should be examined daily during the test period and any mortality should be recorded and the dead fish removed as soon as possible.
Lasimateriaaleja käytettäessä on varmistettava, etteivät kalat vahingoitu ja että niillä on riittävästi tilaa rajuihinkin liikkeisiin.
Dead fish should not be replaced in either the control or treatment vessels.
Tarjottimen ja lasilevyjen välisen etäisyyden on oltava vähintään kolme senttimetriä sen varmistamiseksi, ettei kuteminen tapahdu tarjottimen ulkopuolella.
Sex of fish that die during the test should be determined by macroscopic evaluation of the gonads.
Tarjottimelle lasketut mätimunat putoavat ristikon läpi, ja ne voidaan kerätä näytteenottoa varten 45–60 minuutin kuluttua valojen sytyttämisestä.
Behaviour and appearance
Läpinäkyvät mätimunat eivät ole tahmeita, ja ne on helppo laskea poikittaisvalossa.
Any abnormal behaviour (relative to controls) should be noted;
Kun astiassa on viisi naarasta, kahtakymmentä munaa päivässä voidaan pitää pienenä määränä, sataa munaa kohtalaisena määränä ja yli sataa munaa suurena määränä.
this might include signs of general toxicity including hyperventilation, uncoordinated swimming, loss of equilibrium, and atypical quiescence or feeding.
Kutualusta on poistettava astiasta ja munat on kerättävä joko mahdollisimman myöhään illalla tai varhain aamulla, ja alusta on laitettava sen jälkeen takaisin testiastiaan.
Additionally external abnormalities (such as haemorrhage, discoloration) should be noted.
Alusta on laitettava takaisin astiaan tunnin kuluessa sen poisottamisesta, sillä muutoin kutualusta saattaa houkutella kalat parittelemaan tai kutemaan yksilöllisesti epätavallisiin aikoihin.
Such signs of toxicity should be considered carefully during data interpretation since they may indicate concentrations at which biomarkers of endocrine activity are not reliable.
Jos tilanne vaatii kutualustan laittamista takaisin myöhemmin, se on tehtävä vähintään yhdeksän tunnin kuluttua valojen sytyttämisestä.
Such behavioural observations may also provide useful qualitative information to inform potential future fish testing requirements.
Niin myöhäiseen vuorokaudenaikaan se ei aiheuta enää kutemista.
For example, territorial aggressiveness in normal males or masculinised females has been observed in fathead minnows under androgenic exposure;
Lisäys 4B
in zebrafish, the characteristic mating and spawning behaviour after the dawn onset of light is reduced or hindered by oestrogenic or anti-androgenic exposure.
Rasvapäämutun kutualusta
Because some aspects of appearance (primarily colour) can change quickly with handling, it is important that qualitative observations be made prior to removal of animals from the test system.
Jokaiseen testiastiaan asetetaan kaksi tai kolme muovista/keramiikasta/lasista tai ruostumattomasta teräksestä valmistettua kutulaattaa ja -levyä (esimerkiksi 80 mm pitkä harmaa puoliympyrän muotoinen katos 130 mm pitkän huulletun levyn päälle) (ks. kuva).
Experience to date with fathead minnows suggests that some endocrine active chemicals may initially induce changes in the following external characteristics:
Asianmukaisesti katetut PVC- tai keramiikkalaatat ovat osoittautuneet sopiviksi kutualustoiksi (Thorpe et al., 2007).
body colour (light or dark), coloration patterns (presence of vertical bands), and body shape (head and pectoral region).
Laattoja kannattaa karhentaa hieman, jotta munat kiinnittyvät niihin paremmin.
Therefore observations of physical appearance of the fish should be made over the course of the test, and at conclusion of the study
Tarjotin on suojattava siten, etteivät kalat pääse laskettujen mätimunien luokse, ellei ole osoitettu, että munat kiinnittyvät käytettyyn alustaan pitävästi.
Humane killing of fish
Pohja on suunniteltu siten, että kaikki munat, jotka eivät kiinnity laatan pintaan, putoavat astian pohjalle (tai ne munat, jotka lasketaan suoraan sileälle muovipinnalle).
At day 21, i.e. at termination of the exposure, the fish should be euthanized with appropriate amounts of Tricaine (Tricaine methane sulfonate, Metacain, MS-222 (CAS 886-86-2), 100-500 mg/l buffered with 300 mg/l NaHCO3 (sodium bicarbonate, CAS 144-55-8) to reduce mucous membrane irritation; blood or tissue is then sampled for vitellogenin determination, as explained in the Vitellogenin section.
Kaikkia kutualustoja on huuhdeltava vähintään 12 tuntia laimennusvedessä ennen käyttöä.
Observation of secondary sex characteristics
Lisäys 5A
Some endocrine active chemicals may induce changes in specialised secondary sex characteristics (number of nuptial tubercles in male fathead minnow, papillary processes in male medaka).
Rasvapäämutun sekundaaristen sukupuoliominaisuuksien arviointi tiettyjen hormonijärjestelmään vaikuttavien kemikaalien havaitsemiseksi
Notably, chemicals with certain modes of action may cause abnormal occurrence of secondary sex characteristic in animals of the opposite sex;
Yleistä
for example, androgen receptor agonists, such as trenbolone, methyltestosterone and dihydrotestosterone, can cause female fathead minnows to develop pronounced nuptial tubercles or female medaka to develop papillary processes (11, 20, 21).
Täysikasvuisilla rasvapäämutuilla mahdollisesti tärkeitä fyysiseen ulkonäköön liittyviä piirteitä hormonitoimintaa häiritseviä aineita testattaessa ovat väri (vaalea/tumma), värityskuviot (onko esimerkiksi pystysuoria raitoja vai ei), kalan muoto (pään ja rinnan alueen muoto, vatsan pullistuneisuus) sekä erikoistuneet sekundaariset sukupuoliominaisuudet (kutukyhmyjen lukumäärä ja koko, niskakyhmyn koko, munanasetin).
It also has been reported that oestrogen receptor agonists can decrease nuptial tubercle numbers and size of the dorsal nape pad in adult males (25, 26).
Kutukyhmyt sijaitsevat sukukypsien rasvapäämutukoiraiden päässä (niskakyhmy), ja ne ovat useimmiten järjestäytyneet molemmin puolin symmetriseksi kuvioksi (Jensen et al.
Such gross morphological observations may provide useful qualitative and quantitative information to inform potential future fish testing requirements.
2001).
The number and size of nuptial tubercles in fathead minnow and papillary processes in medaka can be quantified directly or more practically in preserved specimens.
Kontrollinaarailla sekä nuorilla koirailla ja naarailla kyhmyt eivät ole kehittyneet (Jensen et al.
Recommended procedures for the evaluation of secondary sex characteristics in fathead minnow and medaka are available from Appendix 5A and Appendix 5B, respectively.
2001).
Vitellogenin (VTG)
Koiraiden silmien ympärillä ja sierainten välissä voi olla jopa kahdeksan yksittäistä kyhmyä.
Blood is collected from the caudal artery/vein with a heparinised microhematocrit capillary tubule, or alternatively by cardiac puncture with a syringe.
Eniten kyhmyjä on kahdella samansuuntaisella viivalla heti sierainten alapuolella ja suun yläpuolella, ja ne ovat myös suurimpia kyhmyjä.
Depending upon the size of the fish, collectable blood volumes generally range from 5 to 60 μl per individual for fathead minnows and 5-15 μl per individual for zebrafish.
Monilla kaloilla kyhmyryhmiä on alaleuan alapuolella.
Plasma is separated from the blood via centrifugation, and stored with protease inhibitors at – 80 °C, until analysed for vitellogenin.
Suuta lähimpänä sijaitsee yleensä yksittäinen kyhmypari, kun taas lähempänä vatsapuolta voi olla jopa neljästä kyhmystä muodostuvia sarjoja.
Alternatively, in medaka the liver will be used, and in zebrafish the head/tail homogenate can be used as tissue-source for vitellogenin determination (Appendix 6).
Kyhmyjen todellinen määrä on harvoin yli 30 (vaihteluväli 18–28; Jensen et al.
The measurement of VTG should be based upon a validated homologous ELISA method, using homologous VTG standard and homologous antibodies.
2001).
It is recommended to use a method capable to detect VTG levels as low as few ng/ml plasma (or ng/mg tissue), which is the background level in unexposed male fish.
Useimmat kyhmyt (määrän kannalta) ovat yksittäisiä, pyöreähköjä rakenteita, joiden korkeus vastaa suurin piirtein niiden sädettä.
Quality control of vitellogenin analysis will be accomplished through the use of standards, blanks and at least duplicate analyses.
Useimmilla sukukypsillä koirailla on ainakin joitakin kyhmyjä, jotka ovat siinä määrin laajentuneita ja korostuneita, ettei niistä voi erottaa yksittäisiä rakenteita.
For each ELISA method, a test for matrix effect (effect of sample dilution) should be run to determine the minimum sample dilution factor.
Tietyntyyppiset hormonitoimintaa häiritsevät kemikaalit voivat aiheuttaa sen, että tiettyjä sekundaarisia sukupuoliominaisuuksia alkaa esiintyä vastakkaisella sukupuolella.
Each ELISA plate used for VTG assays should include the following quality control samples:
Esimerkiksi androgeenireseptorin agonistit, kuten 17β-metyylitestosteroni tai 17β-trenboloni, voivat aiheuttaa kutukyhmyjen kehittymisen rasvapäämutunaaraille (Smith 1974; Ankley et al.
at least 6 calibration standards covering the range of expected vitellogenin concentrations, and at least one non-specific binding assay blank (analysed in duplicate).
2001; 2003), kun taas estrogeenireseptorin agonistit saattavat vähentää koiraiden kutukyhmyjen määrää tai pienentää niiden kokoa (Miles-Richardson et al.
Absorbance of these blanks should be less than 5 % of the maximum calibration standard absorbance.
1999; Harries et al.
The ratio of the expected concentration to the measured concentration will be reported along with the results from each set of assays performed on that day.
Jokaisen kalan tutkimus tulisi saada tehtyä kahdessa minuutissa.
Evaluation of Biomarker Responses by Analysis of Variance (ANOVA)
Kyhmyjen laskeminen ja arviointi
To identify potential endocrine activity of a chemical, responses are compared between treatments and control groups using analysis of variance (ANOVA).
Täysikasvuisilta rasvapäämutuilta on tunnistettu kuusi aluetta, joilta kyhmyjen esiintymistä ja kehittymistä voidaan arvioida.
Where a solvent control is used, an appropriate statistical test should be performed between the dilution water and solvent controls for each endpoint.
On laadittu myös malli, johon kyhmyjen sijainti ja lukumäärä voidaan merkitä (ks. tämän lisäyksen loppu).
Guidance on how to handle dilution water and solvent control data in the subsequent statistical analysis can be found in OECD, 2006c (27).
Kyhmyjen lukumäärä merkitään muistiin, ja niiden kokoa voidaan arvioida määrällisesti seuraavasti:
All biological response data should be analysed and reported separately by sex.
0 – ei kyhmyjä, 1 – kyhmyjä, 2 – laajentuneita kyhmyjä ja 3 – korostuneita kyhmyjä kunkin organismin osalta (kuva 1).
If the required assumptions for parametric methods are not met — non-normal distribution (e.g. Shapiro-Wilk's test) or heterogeneous variance (Bartlett's test or Levene's test), consideration should be given to transforming the data to homogenise variances prior to performing the ANOVA, or to carrying out a weighted ANOVA.
Luokka 0 – kyhmyjä ei ole.
Dunnett's test (parametric) on multiple pair-wise comparisons or a Mann-Whitney with Bonferroni adjustment (non-parametric) may be used for non-monotonous dose-response.
Luokka 1 – kyhmyjä: Tähän luokkaan kuuluvat kaikki kyhmyt, joissa on yksi piste, jonka korkeus on miltei sama kuin sen säde (halkaisija).
Other statistical tests may be used (e.g. Jonckheere-Terpstra test or Williams test) if the dose-response is approximately monotone.
Luokka 2 – laajentuneita kyhmyjä: Tähän luokkaan kuuluu sellainen kudos, jonka ulkonäkö muistuttaa asteriskia.
A statistical flowchart is provided in Appendix 8 to help in the decision on the most appropriate statistical test to be used.
Tällaisessa kyhmyssä on yleensä laaja säteittäinen pohja, jossa on keskeltä reunoille päin suuntautuvia uria tai vakoja.
Additional information can also be obtained from the OECD Document on Current Approaches to Statistical Analysis of Ecotoxicity Data (27).
Kyhmyn korkeus on usein muita epätasaisempi, mutta joskus se voi olla myös hieman pyöristynyt.
Reporting of test results
Luokka 3 – korostunut: Tähän luokkaan kuuluvat kyhmyt ovat tavallisesti varsin suuria ja pyöreitä, ja niiden rakenne on muita epäselvempi.
Study data should include:
Toisinaan tällaiset kyhmyt yhtyvät muodostaen yhtenäisen massan yhdelle alueelle tai useammalle alueelle (B, C ja D, kuvattu jäljempänä).
Responsible personnel and their study responsibilities
Tätä arviointimenetelmää käyttämällä kyhmyjen kokonaispistemäärä on yleensä < 50 normaalilla kontrollikoiraalla, jolla on 18–20 kutukyhmyä (Jensen et al.
Each laboratory should have demonstrated proficiency using a range of representative chemicals
2001).
Characterisation of test chemical
Joidenkin kalojen kutukyhmyjen todellinen määrä voi olla suurempi kuin mallin ruuduissa (lisäys A) tietyllä pisteytysalueella.
Physical nature and relevant physicochemical properties
Jos näin on, pisteytysnumeroita voi lisätä laatikon oikealle tai vasemmalle puolelle.
Solvent:
Merkitsemisalueet:
Characterization of solvent (nature, concentration used)
A Silmän ympärillä sijaitsevat kyhmyt.
Justification of choice of solvent (if other than water)
Merkitään selkäpuolelta vatsan puolelle silmän etureunan ympäriltä.
Test animals:
Sukukypsillä kontrollikoirailla näitä on tavallisesti useita;