natgillin/translations-raw huggingface dataset:
no detection of WSD has occurred during the period of 2 years that follows the completion of the measures set out in paragraphs (a) and (b) and suspicions during this period have been ruled out according to the procedures established in point II.3.
Jos näytteitä on käytännön ongelmien vuoksi mahdotonta käsitellä 48 tunnin kuluessa kalojen kudosaineksen keräämisestä, kudosnäytteet voidaan jäädyttää kuljetuselatusaineessa – 20 °C:seen ja suorittaa virologinen tutkimus 14 päivän kuluessa.
Samples of integumental epidermis, either dissected or contained within walking legs, pleopods, mouthparts or gills of the test animal shall be fixed in 95 % ethanol prior to the preparation of samples for two-step PCR.
Kalakudoksen saa kuitenkin jäädyttää ja sulattaa vain kerran ennen tutkimusta.
Other samples, fixed for histology and transmission electron microscopy may be collected to support diagnostic data arising from PCR.
Jokaisen kalakudosnäytteen jäädyttämisen syistä on pidettävä kirjaa.
Diagnostic methods to obtain or maintain disease-free status with regard to WSD
Putkissa olevat kalakudokset on homogenoitava täydellisesti laboratoriossa joko stomacher-homogenisaattorin, sekoittimen tai huhmaren ja steriiliä hiekkaa sisältävän morttelin avulla ja sen jälkeen suspendoitava alkuperäiseen kuljetuselatusaineeseen.
The diagnostic method to be used to obtain or to maintain disease-free status with regard to WSD following the detailed methods and procedures set out in Part 6 of Annex II, shall be two-step PCR.
Jos näyte koostuu alle 4 cm pitkästä kokonaisesta kalasta, se on leikattava steriileillä saksilla tai skalpellilla pieniksi palasiksi sen jälkeen, kun suolen aukon takana oleva osa ruumiista on poistettu.
In the case of a positive result of the two-step PCR, the result shall be corroborated by the sequencing of the amplicon before the initial control measures provided for in Article 28 of Directive 2006/88/EC are implemented, if possible under practical conditions by the demonstration of pathognomonic signs of WSD in those susceptible hosts selected, via histology and transmission electron microscopy.
Jos näyte koostuu 4–6 cm pitkästä kokonaisesta kalasta, on kerättävä sisälmykset, munuaiset mukaan lukien.
Official investigation and diagnostic methods to rule out the suspicion of or to confirm the presence of infection with WSD
Jos näyte koostuu yli 6 cm pitkästä kokonaisesta kalasta, kudosnäytteet on kerättävä I.1 kohdan mukaisesti.
When the presence of infection with WSD is required to be confirmed or the suspicion of such infection is required be ruled out in accordance with Article 28 of Directive 2006/88/EC, the following inspection, sampling and testing procedure shall be complied with:
Kudosnäytteet on leikattava steriileillä saksilla tai skalpellilla pieniksi palasiksi tämän kohdan ensimmäisessä kohdassa kuvatun mukaisesti ja suspendoitava kuljetuselatusaineeseen.
the official investigation shall include at least one health inspection and one sampling of 10 crustaceans when clinical or post-mortem signs consistent with infection with WSD are observed or 150 crustaceans when clinical or post-mortem signs are not observed.
Kudosaineen ja kuljetuselatusaineen lopullinen suhde on säädettävä laboratoriossa suhteeseen 1:10.
The samples shall be tested using the diagnostic method set out in point II.2 (two-step PCR);
Homogenaatti on sentrifugoitava jäähdyttävässä sentrifugissa 2–5 °C:ssa kierrosnopeudella 2000–4000 × g 15 minuutin ajan, ja supernatantti on kerättävä talteen, ja sitä voidaan käsitellä joko neljä tuntia 15 °C:ssa tai yön yli 4–8 °C:ssa antibiooteilla.
the presence of WSD shall be considered as confirmed when two-step PCR followed by sequencing, following the detailed methods and procedures set out in this Part 6 of Annex II, is positive for WSSV and, when pathognomonic signs of WSD are present in the selected hosts.
Jos näyte on lähetetty elatusaineessa, supernatantin käsittely antibiooteilla voidaan jättää pois.
The suspicion of WSD may be ruled out, if those tests reveal no further evidence of the presence of WSD.
Jos esiintyy käytännön ongelmia (esimerkiksi inkubaattori menee rikki tai soluviljelyn kanssa on ongelmia), joiden takia on mahdotonta inokuloida soluja 48 tunnin kuluessa kalojen kudosaineksen keräämisestä, supernatantti voidaan jäädyttää – 80 °C:seen ja virologinen tutkimus voidaan suorittaa 14 päivän kuluessa.
Table 6 A
Jos talteen kerätty supernatantti varastoidaan – 80 °C:seen 48 tunnin kuluessa näytteenotosta, se voidaan käyttää uudelleen vain kerran virologista tutkimusta varten.
Surveillance scheme for Member States, zones and compartments for the 2-year control period which precedes the achievement of WSD disease-free status as referred to in point I.2.1
Ennen inokulaatiota soluihin supernatantti on sekoitettava tilavuudeltaan yhtä suureen määrään tarpeen mukaan laimennettua antiseerumiseosta, joka koostuu kotoperäisinä esiintyvien kalojen tarttuvan haimakuoliotaudin (IPN) virusserotyyppien vasta-aineista, ja inkuboitava tällaisena vähintään tunti 15 °C:ssa tai enintään 18 tuntia 4 °C:ssa.
Number of crustaceans in the sample
Antiseerumin titterin on oltava vähintään 1/2000 50-prosenttisessa plakkineutralisaatiokokeessa.
Table 6 B
Käsittelemällä kaikki inokulaatit IPN-viruksen antiseerumilla pyritään estämään IPN-viruksen aiheuttaman sytopaattisen vaikutuksen (CPE) kehittyminen inokuloiduissa soluviljelmissä.
Surveillance schemes for Member States, zones or compartments to maintain WSD disease-free status as referred to in point I.3
Tämä lyhentää virologisten tutkimusten kestoa sekä vähentää sellaisten tapausten lukumäärää, joissa sytopaattisen vaikutuksen ilmeneminen olisi katsottava VHS- tai IHN-viruksen mahdolliseksi indikaatioksi.
The samples must be collected no sooner than 3 weeks after the transfer of the fish from fresh to saltwater.
Jos näytteet ovat lähtöisin IPN-vapaiksi katsotuista tuotantoyksiköistä, inokulaatteja ei tarvitse käsitellä IPN-viruksen antiseerumilla.
Ovarian or seminal fluid of broodstock shall be collected at the time of maturation, in connection with stripping.
Jos näytteet on kerätty kuljetuselatusaineeseen, on suoritettava I.4.2 ja I.4.3 kohdassa vahvistettu menettely.
Samples must be taken from the number of fish that will ensure the detection of VHSV or IHNV with a 95 % confidence if the design prevalence is 5 %.
Sentrifugoinnin jälkeen supernatantti on kerättävä ja RNA uutettava.
Samples must be taken from the number of fish that will ensure detection of VHSV or IHNV with a 95 % confidence if the design prevalence is 10 %.
Jos heti sentrifugoinnin jälkeen ei ole tarkoitus suorittaa jatkotutkimuksia, näytteet on välittömästi jäädytettävä enintään – 20 °C:n lämpötilassa.
Samples must be taken from the number of fish that will ensure the detection of VHSV or IHNV with a 95 % confidence if the design prevalence is 10 %.
RNA-stabilointireagenssissa säilytettyjen kalakudosten analyysia varten jatkotoimet eri lämpötiloissa varastoiduille näytteille on suoritettava seuraavissa määräajoissa:
There shall be minimum one sample for every health inspection.
37 °C:ssa säilytetyt näytteet: yksi päivä;
Samples must be taken from the number of fish that will ensure the detection of KHV with a 95 % confidence if the design prevalence is 5 %.
25 °C:ssa säilytetyt näytteet: yksi viikko;
Shall not apply to farms only rearing rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) or brown trout (Salmo trutta) or both and where the water supply is exclusively based on fresh water sources not housing Atlantic salmon (Salmo salar).
4 °C:ssa säilytetyt näytteet: yksi kuukausi;
Samples must be collected and stored and examined during two 1 month test periods per year (namely spring and autumn) or when appropriate in accordance with practical considerations.
20 °C:ssa säilytetyt näytteet: rajoittamaton
Maximum number of fish per pool: 5.
RNA-stabilointireagenssiin yhdistetyt yhteisnäytteet on käsiteltävä kuten RNA-stabilointireagenssissa olevat yksittäiset näytteet.
Samples must be collected and examined during two 1 month test periods per year (namely spring and autumn) or when appropriate in accordance with practical considerations.
RNA-stabilointireagenssiin yhdistettyjen näytteiden osalta näytteen määrä ei saa ylittää määrää, jota valmistaja suosittelee eristämiseen RNA-kitin avulla, kuten RNeasy Mini kits (Qiagen) tai vastaava.
ANNEX II
Jos suurempia näytteitä yhdistetään yhteisnäytteeksi, eristämiskiteissä tai -menetelmissä on otettava yhdistäminen huomioon.
This Annex sets out the detailed procedures for the diagnostic methods to be used for the laboratory examination in the eradication and surveillance programmes set out in Annex I to this Decision, and in order to confirm or rule out the suspected presence of the following non-exotic diseases listed in Part II to Annex IV to Directive 2006/88/EC (‘the listed diseases’) in accordance with Article 57 (b) to that Directive:
Koska annetut RT-qPCR-protokollat ovat yhtä herkkiä tai herkempiä kuin soluviljelymenetelmät, PCR-menetelmää varten voi olla hyväksyttävää käyttää enintään 10 kalan yhdistettyjen elinten homogenoidusta kalakudosaineesta saatua supernatanttia soluviljelyelatusaineessa.
Infectious hematopoietic necrosis (IHN)
Koska PCR-menetelmää varten käytetyn inokulaatin määrä on paljon pienempi verrattuna soluviljelyyn, kaikki kalakudokset on homogenoitava huolellisesti ennen aineksen kokoamista eristämistä varten.
For the purpose of this Annex, ‘transport medium’ means a cell culture medium with 10 % calf serum and with 200 iu penicillin, 200 μg streptomycin, and 200 μg kanamycin per millilitre or with other antibiotics of proven efficacy.
Samaa periaatetta on sovellettava myös, jos näytteet kerätään RNA-stabilointireagensseihin.
PART 1
Soluviljelmien virologinen tutkimus
DETAILED DIAGNOSTIC METHODS AND PROCEDURES FOR THE SURVEILLANCE AND CONFIRMATION OF IHN AND VHS
Bluegill fry -solulinjaa 2 (BF-2, isoaurinkoahvenen poikaset) tai Rainbow trout gonad -solulinjaa 2 (RTG-2, kirjolohen sukurauhaset) ja joko Epithelioma papulosum cyprini -soluja (EPC) tai Fathead minnow -soluja (FHM, paksupäämutu) on kasvatettava 20–30 °C:ssa sopivassa elatusaineessa, esimerkiksi Eaglen MEM-elatusaineessa tai sen muunnelmissa, johon on lisätty 10 prosenttia naudan sikiön seerumia ja antibiootteja standardipitoisuuksina.
I. Diagnostic methods and procedures for the surveillance of VHS and IHN
Kun soluja viljellään suljetuissa pulloissa, elatusaine on puskuroitava bikarbonaatilla.
When sampling and laboratory examination for the purpose of obtaining or maintaining disease-free health status with regard to IHN or VHS as set out in Section I of Part 1 of Annex I are carried out, using the diagnostic methods set out in points II.1 and II.2 of Part 1 of that Annex, the detailed diagnostic methods and procedures set out in following points I.1 to I.6 shall apply.
Avoimissa yksiköissä kasvatettavissa soluviljelmissä käytettävä elatusaine voidaan puskuroida tris(hydroksimetyyli)aminometaani-suolahapolla (Tris-HCl) (23 mM) ja natriumbikarbonaatilla (6 mM). pH:n on oltava 7,6 ± 0,2.
Tissues for virological examination on cell culture
Solujen on kasvettava aktiivisesti inokulaatiossa.
Before shipment or transfer to the laboratory, pieces of the organs to be examined shall be removed from the fish with sterile dissection tools and transferred to sterile plastic tubes containing transport medium.
Soluviljelmiin on inokuloitava antibioottikäsiteltyä elinsuspensiota kahtena laimennuksena eli primaarilaimennuksena ja lisäksi sen 1:10 laimennoksena, joka on tulosta kudosaineksen lopullisesta laimennuksesta soluviljelyelatusaineeseen suhteessa 1:100 ja 1:1000 homologisen interferenssin estämiseksi.
The quantity of fish material suitable for virological examination on cell culture and by RT-qPCR is dependent on fish size.
Vähintään kaksi solulinjaa on inokuloitava I.5.1 kohdan mukaisesti.
Thus, whole alevin (body length < 4 cm), viscera including kidney (4 cm < body length < 6 cm) or, for larger size fish, kidney, spleen, heart and/or encephalon, and ovarian fluid from brood fish at the time of spawning shall be the tissues to be sampled.
Inokulaatin koon ja soluviljelyelatusaineen tilavuuden suhteen on oltava noin 1:10.
Ovarian or seminal fluid or organ pieces from a maximum of 10 fish may be collected in one sterile tube containing at least 4 ml transport medium and represent one pooled sample.
Kutakin laimennosta ja solulinjaa kohti käytettävän solualueen on oltava vähintään noin 2 cm2, joka vastaa yhtä kuoppaa 24-kuoppaisessa soluviljelyastiassa.
The virological examination on cell culture shall be started as soon as possible and no later than 48 hours after the collection of the samples.
Inokuloituja soluviljelmiä on inkuboitava 15 °C:ssa 7–10 päivää.
In exceptional cases, the virological examination may be started at the latest within 72 hours after the collection of the material, provided that the material to be examined is protected by a transport medium and that the temperature requirements during transportation can be fulfilled.
Jos soluviljelmän elatusaineen väri muuttuu punaisesta keltaiseksi osoittaen elatusaineen happamoitumista, pH-arvoa on säädettävä steriilin bikarbonaattiliuoksen tai vastaavien aineiden avulla solun virusinfektioherkkyyden varmistamiseksi.
Samples for reversed transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR or RT-qPCR) analysis
Jäädytetyt VHS- ja IHN-virusten kantaliuos on soluviljelmien infektioherkkyyden tarkistamiseksi titrattava vähintään kuuden kuukauden välein tai jos epäillään solujen herkkyyden vähentyneen.
Samples shall be taken from the fish in accordance with the procedure described in point I.1.1 using a sterile instrument and transferred to a sterile plastic tube containing transport medium.
Edellä III jaksossa vahvistettua menettelyä on käytettävä, jos mahdollista.
Tissue from 10 fish may be collected in one tube and shall represent one pooled sample.
Inokuloidut soluviljelmät on tarkastettava säännöllisesti (vähintään 3 kertaa viikossa) sytopaattisen vaikutuksen ilmenemisen havaitsemiseksi 40–150-kertaisella suurennuksella.
However, in case the amount of inoculum is small, tissue from up to five fish may be used.
Jos havaitaan selvää sytopaattista vaikutusta, viruksen tunnistamismenetelmät on aloitettava välittömästi I.6 kohdan mukaisesti.
Alternatively, samples may be pooled in RNA stabilization reagents, such as 0,2 g tissue/ml reagent according to the recommendation from the manufacturers, although each fish shall be processed individually and shall not be pooled in the samples because of the small amount of material to be used for extraction.
Jatkoviljely
Whole fish may also be sent to the laboratory.
Jos sytopaattista vaikutusta ei ole kehittynyt 7–10 päivän primaarisen inkubaation jälkeen, tuoreille soluviljelmille on suoritettava jatkoviljely, jossa käytetään vastaavaa solualuetta kuin primaariviljelmässä.
However, freezing of the samples shall be avoided.
Vaihtoehtoisesti 10 prosentin osanäytteet primaariviljelmän muodostavasta elatusaineesta on inokuloitava suoraan tuoretta soluviljelmää sisältävään kuoppaan (kuopasta kuoppaan -jatkoviljely).
The temperature of a sample during transit must never exceed 10 °C and ice must still be present in the transport box at receipt or one or more freeze blocks must still be partly or completely frozen.
Inokulointia voi edeltää kaikkien laimennosten esi-inkubointi IPN-viruksen antiseerumin kanssa sopivana laimennuksena, kuten I.4.3 kohdassa esitetään.
Whole fish may be sent to the laboratory if the temperature requirements referred to in the first paragraph during transportation can be fulfilled.
Tämän jälkeen inokuloituja viljelmiä inkuboidaan 7–10 päivän ajan 15 °C:ssa tarkkailun alaisena siten kuin I.5.4 osassa esitetään.
Live fish may also be shipped.
Siinä tapauksessa, että myrkyllinen sytopaattinen vaikutus kehittyy kolmen päivän jälkeen, solut on vaihdettava kerran ja inkubaatiota jatkettava, kunnes 14 vuorokautta on kulunut ensimmäisestä inokulaatiosta.
Collection of supplementary diagnostic material
Seitsemänä viimeisenä inkubaatiopäivänä ei saa ilmetä myrkyllisyyttä.
When approved by the diagnostic laboratory, other fish tissues may be collected as well and prepared for supplementary examinations.
Jos bakteerikontaminaatiota tapahtuu antibioottikäsittelystä huolimatta, jatkoviljelyä ennen on suoritettava sentrifugaatio (2000–4000 × g, 15–30 minuuttia 2–5 °C:ssa) ja/tai supernatantin suodattaminen 0,45 μm:n kalvolla (jolla on heikko proteiineja sitova ominaisuus) tai molemmat.
Preparation of samples for cell culture examination and RT-qPCR
Tämän lisäksi jatkoviljelyssä on noudatettava samoja menettelyjä kuin myrkyllisen sytopaattisen vaikutuksen osalta kuvataan tämän kohdan neljännessä alakohdassa.
Freezing in exceptional cases
Jos sytopaattista vaikutusta ei ilmene, testiä voidaan pitää negatiivisena.
Where practical difficulties arise, which make it impossible to process the samples within 48 hours after the collection of the fish tissues, it may be acceptable to freeze the tissue specimens in transport medium at – 20 °C or below and to carry out virological examination within 14 days.
Viruksen tunnistaminen
Records shall be kept with details on the reason for each freezing of fish tissue samples.
Jos virusta ei pystytä varmuudella tunnistamaan näissä testeissä viikon kuluessa, supernatantti on toimitettava direktiivin 2006/88/EY liitteessä VI tarkoitettuun kansalliseen vertailulaboratorioon tai EU:n kalatauteja tutkivaan vertailulaboratorioon välitöntä tunnistusta varten.
Homogenisation of organs
Virusisolaatin tunnistamiseksi on suoritettava DAS-ELISA.
In the laboratory, the fish tissue in the tubes shall be completely homogenised, either by stomacher, blender or mortar and pestle with sterile sand, and subsequently suspended in the original transport medium.
Microwell-levyt on peitettävä 50 μl/kuoppa (0,9 pg) tutkittua laatua olevasta kanin antiseerumista IHN- tai VSH-viruksia vastaan saaduilla proteiini A:lla puhdistetuilla immunoglobuliineilla (Ig) laimennettuna karbonaattipuskurilla (pH 9,6), jossa on 15 mM natriumatsidia, ja inkuboitava 18 tuntia – 2 viikkoa 4 °C:ssa.
If a sample consists of a whole fish less than 4 cm long, it shall be minced with sterile scissors or scalpel after removal of the body behind the gut opening.
Laimennuslevyllä kukin näyte, jossa on 1 % Triton X-100:aa, ja positiivikontrollit on laimennettava puskuriliuoksella (eli fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella (PBS)-T-BSA, 1 % BSA) 4-kertaiseksi laimennossarjaksi: laimentamaton, 1:4, 1:16, 1:64.
If a sample consists of a whole fish with body length between 4 cm and 6 cm, the viscera including kidney shall be collected.
ELISA-levyt on pestävä PBS:ssä, joka sisältää 0,05 % Tween-20:ta (PBS-T), ja 50 μl kutakin laimennosta on siirrettävä laimennuslevyltä pestylle ja päällystetylle ELISA-levylle.
If a sample consists of a whole fish more than 6 cm long, the tissue specimens shall be collected as described in point I.1.
Sitten ELISA-levyt on inkuboitava 30 minuutin ajan 37 °C:ssa.
The tissue specimens shall be minced with sterile scissors or scalpel and homogenised as described in the first paragraph of this point and suspended in transport medium.
Sen jälkeen levyt on pestävä ja inkuboitava 30 minuutin ajan 37 °C:ssa spesifisillä monoklonaalisilla vasta-aineilla (eli VHS-viruksen tunnistamista varten MAb IP5B11 ja IHN-viruksen tunnistamista varten Hyb 136–3).
The final ratio between tissue material and transport medium shall be adjusted in the laboratory to 1:10.
ELISA-levylle on siirrettävä 50μl piparjuuriperoksidaasi (HRP) -konjugoituja kanin anti-hiiri-vasta-aineita, jotka on laimennettu suhteessa 1:1000 PBS-T-BSA:ssa.
Centrifugation of homogenate
Uuden pesun jälkeen on kehitettävä reaktioita lisäämällä o-fenyleenidiamiinia (OPD) 50 μl/kuoppa.
If the sample has been shipped in a transport medium, the treatment of the supernatant with antibiotics may be omitted.
Absorbanssia on seurattava aallonpituudella 492 ja 620 nm ELISA-lukijassa.
Where practical difficulties arise, such as incubator breakdown or problems with cell cultures, which make it impossible to inoculate cells within 48 hours after the collection of the fish tissue samples, the supernatant may be frozen at – 80 °C and virological examination may be carried out within 14 days.
Näytteet on merkittävä positiivisiksi tai negatiivisiksi sen jälkeen, kun testin tuloksia on verrattu positiivi- ja negatiivikontrollien absorbanssiarvoihin.
If the collected supernatant is stored at – 80 °C within 48 hours after the sampling, it may be reused only once for virological examination.
Negatiivisina pidetään yleensä näytteitä, joiden yhteenlaskettu absorbanssi (A) on < 0,5 laimentamattomassa aineksessa, epäilyttävinä pidetään näytteitä, joiden A-arvot ovat 0,5–1,0, ja positiivisina pidetään näytteitä, joiden A-arvot ovat > 1,0.
Prior to the inoculation of the cells, the supernatant shall be mixed with equal parts of a suitably diluted pool of antisera to the indigenous serotypes of Infectious pancreatic necrosis (IPN) virus and incubated with this for a minimum of one hour at 15 °C or a maximum of 18 hours at 4 °C.
Vaihtoehtoisesti voidaan käyttää muita yhtä tehokkaiksi osoitettuja ELISA-versioita.
The titre of the antiserum shall be at least 1/2000 in a 50 % plaque neutralisation test.
peitelaseille on istutettava soluja tiheydellä, joka johtaa 60–90-prosenttiseen peittoon 24 tunnin viljelyn jälkeen.
Treatment of all inocula with antiserum to IPN virus aims at preventing cytopathic effect (CPE) due to IPN virus from developing in inoculated cell cultures.
EPC-soluja on mahdollisuuksien mukaan käytettävä tähän tarkoitukseen, koska ne kiinnittyvät voimakkaasti lasipintoihin, mutta myös muita solulinjoja voidaan käyttää (esim. BF-2, RTG-2 tai FHM).
This will reduce the duration of the virological examinations as well as the number of cases in which occurrence of CPE would have to be considered potentially indicative of VHSV or IHNV.
150 μl soluviljelmien supernatanttia on inokuloitava kahtena eri laimennoksena (1:10 ja 1:1000) duplikaattina yhden vuorokauden ikäisiin yksikerroksisiin soluviljelmiin ja inkuboitava 15 °C:ssa 24 tunnin ajan;
When samples come from production units, which are considered free from IPN, the treatment of inocula with antiserum to IPN virus may be omitted.
sen jälkeen soluviljelyelatusaine on poistettava ja tartutettujen solujen yksikerroksiset viljelmät on kiinnitettävä 0,5 ml:llä jääkylmää vesipitoista asetoniliuosta (80 % vol:vol).
Sample preparation for RT-PCR and RT-qPCR based surveillance programmes
Kiinnityksen on tapahduttava vetokaapissa 15 minuutin ajan huoneenlämpötilassa, minkä jälkeen asetoniliuos on poistettava ja peitelasit on ilmakuivattava vähintään 30 minuutin ajan.
If samples were collected in transport medium, the procedure set out in points I.4.2 and I.4.3 shall be carried out.
Tässä vaiheessa levyt on käsiteltävä välittömästi tai säilytettävä – 20 °C:ssa jatkokäyttöä varten;
After centrifugation, supernatant shall be collected and RNA extracted.
spesifit monoklonaaliset vasta-aineet (VHS-viruksen tunnistamista varten Mab IP5B11 ja IHN-viruksen tunnistamista varten Hyb 136–3) on laimennettava 0,01 M:iin PBST:tä, pH 7,2, monoklonaalisten vasta-aineiden toimittajan suosittamalla laimennuksella; Kiinnitettyyn yksikerrosviljelmään on lisättävä 50–100 μl/kuoppa, ja levyt on inkuboitava yhden tunnin ajan 37 °C:ssa kosteassa tilassa;
If further examination is not to be undertaken directly after centrifugation, the samples shall be immediately frozen at – 20 °C or below.
peitelasit on pestävä varovasti kolmeen kertaan puskuroidulla suolaliuoksella (PBS), jossa on 0,05 prosenttia Tween-20:tä (PBS-T), ja puskuriliuos on oltava täysin poistettu viimeisen huuhtelun jälkeen.
samples stored at 37 °C: 1 day;
Värjäytyneet viljelmät on kiinnitettävä lasilevyille käyttämällä glyserolisuolaliuosta, ja niitä on tarkasteltava tulevan ultraviolettisäteilyn (UV) alla.
samples stored at 25 °C: 1 week;
On käytettävä 10 × tai 12 × -okulaaria ja × 25 tai × 40 -objektiivilinssejä, joiden vastaavat numeeriset aukot ovat > 0,7 ja > 1,3.
samples stored at 4 °C: 1 month;
Vaihtoehtoisesti voidaan käyttää muita yhtä tehokkaiksi osoitettuja IF-menetelmiä soluviljelyn, kiinnityksen ja vertailulaatua olevien vasta-aineiden osalta.