natgillin/translations-raw huggingface dataset:
X concentration of 3,5-dichlorophenol (mg/l)
Lisäyksessä 4 kuvattua 20X-AAP-viljelyainetta suositetaan käytettäväksi testauksessa, jossa viljellään ja käytetään L. gibba -lajia.
Y inhibition (%)
L. minor -lajille soveltuu myös lisäyksessä 4 kuvattu Steinbergin viljelyaine, mutta sitä voidaan käyttää myös L. gibba -lajin viljelyssä, jos validiteettivaatimukset täyttyvät.
inhibition heterotrophic respiration using a nitrifying sludge
Testiliuokset
inhibition nitrification using a nitrifying sludge
Testiliuokset valmistetaan yleensä laimentamalla kantaliuosta.
Chapter C.26 is replaced by the following:
Testikemikaalin kantaliuokset valmistetaan tavallisesti liuottamalla kemikaali viljelyaineeseen.
26 LEMNA SPECIES GROWTH INHIBITION TEST
Testikemikaalin suurin testattu pitoisuus ei yleensä saa ylittää kyseisen kemikaalin vesiliukoisuutta testiolosuhteissa.
This test method is equivalent to OECD Test Guideline (TG) 221 (2006).
On kuitenkin huomattava, että Lemna-suvun lajit kelluvat pinnalla ja voivat altistua kemikaaleille, jotka kerääntyvät veden ja ilman rajapintaan (esimerkiksi huonosti veteen liukenevat tai hydrofobiset kemikaalit taikka pinta-aktiiviset kemikaalit).
It is designed to assess the toxicity of chemicals to freshwater aquatic plants of the genus Lemna (duckweed).
Tällaisissa olosuhteissa kasvit altistuvat muille kuin liuoksessa olevalle aineille, ja testipitoisuudet voivat testikemikaalin ominaisuuksista riippuen ylittää vesiliukoisuuden.
It is based on existing methods (1)(2)(3)(4)(5)(6) but includes modifications of those methods to reflect recent research and consultation on a number of key issues.
Jos testikemikaali liukenee huonosti veteen, voi olla tarpeen valmistaa kyseisestä kemikaalista väkevä kantaliuos tai dispersio käyttämällä orgaanista liuotinta tai dispergointiainetta, joilla voidaan helpottaa tarkkojen testikemikaalimäärien lisäämistä testiviljelyaineeseen sekä testikemikaalin dispersiota ja liukenemista.
This Test Method has been validated by an international ring-test (7).
Tällaisten aineiden käyttöä on vältettävä mahdollisimman pitkälle.
This test method describes toxicity testing using Lemna gibba and Lemna minor, both of which have been extensively studied and are the subject of the standards referred to above.
Jos liuottimia tai dispergointiaineita käytetään apuna testiliuosten valmistuksessa, niistä ei saa aiheutua fytotoksisuutta.
The taxonomy of Lemna spp. is difficult, being complicated by the existence of a wide range of phenotypes.
Asetoni ja dimetyyliformamidi ovat esimerkkejä yleisesti käytetyistä liuottimista, jotka eivät aiheuta fytotoksisuutta pitoisuuden ollessa enintään 100 μl·l.
Although genetic variability in the response to toxicants can occur with Lemna, there are currently insufficient data on this source of variability to recommend a specific clone for use with this test method.
Jos liuotinta tai dispergointiainetta käytetään, sen lopullinen pitoisuus on ilmoitettava ja pidettävä mahdollisimman pienenä (≤ 100 μl/l), ja liuoksen tai dispergointiaineen pitoisuuden on oltava sama kaikissa käsitellyissä ja kontrolliliuoksissa.
It should be noted that the test is not conducted axenically but steps are taken at stages during the test procedure to keep contamination by other organisms to a minimum.
Dispergointiaineiden käytöstä annetaan lisäohjeita kirjallisuusviitteessä (8).
Details of testing with renewal (semi-static and flow-through) and without renewal (static) of the test solution are described.
Testi- ja kontrolliryhmät
Depending on the objectives of the test and the regulatory requirements, it is recommended to consider the application of semi-static and flow through methods, e.g. for chemicals that are rapidly lost from solution as a result of volatilisation, photodegradation, precipitation or biodegradation.
Sopivat testipitoisuudet on helpompi valita, jos testikemikaalin myrkyllisyydestä Lemna-lajeille on saatavilla aiempia tietoja esimerkiksi alustavista pitoisuusalueen määrityskokeista.
Further guidance is given in (8).
Lopullisessa myrkyllisyystestissä on yleensä oltava vähintään viisi testipitoisuutta, jotka muodostavat geometrisen sarjan.
Exponentially growing plant cultures of the genus Lemna are allowed to grow as monocultures in different concentrations of the test chemical over a period of seven days.
Testipitoisuuksien suhdeluvun ei tulisi olla suurempi kuin 3,2, mutta suurempikin suhdeluku sallitaan, jos pitoisuus-vastekäyrä on laakea.
The objective of the test is to quantify chemical-related effects on vegetative growth over this period based on assessments of selected measurement variables.
Vähemmän kuin viiden pitoisuuden käyttö on perusteltava.
Frond number is the primary measurement variable.
Jokaisesta testipitoisuudesta on tehtävä vähintään kolme toistoa.
At least one other measurement variable (total frond area, dry weight or fresh weight) is also measured, since some chemicals may affect other measurement variables much more than frond numbers.
Valittaessa testin pitoisuusaluetta (pitoisuusalueen määritystä ja/tai lopullista myrkyllisyystestiä varten) on otettava huomioon seuraavat näkökohdat:
To quantify chemical-related effects, growth in the test solutions is compared with that of the controls and the concentration bringing about a specified x % inhibition of growth (e.g. 50 %) is determined and expressed as the ECx (e.g. EC50)
ECx-pitoisuuden määrittämiseksi testipitoisuudet on valittava siten, että ECx-arvo on kyseisellä pitoisuusalueella, jotta saavutettaisiin riittävä luottamustaso.
The test endpoint is inhibition of growth, expressed as logarithmic increase in measurement variable (average specific growth rate) during the exposure period.
Esimerkiksi EC50-pitoisuutta arvioitaessa suurimman testipitoisuuden on ylitettävä EC50-arvo.
An additional response variable used in this Test Method is yield, which may be needed to fulfil specific regulatory requirements in some countries.
Jos EC50-arvo on testin pitoisuusalueen ulkopuolella, vastaavat luottamusvälit ovat suuria, jolloin voi olla mahdotonta arvioida mallin tilastollista sopivuutta.
It is defined as measurement variables at the end of the exposure period minus the measurement variables at the start of the exposure period.
Jos tavoitteena on arvioida LOEC- tai NOEC-pitoisuus, pienimmän testipitoisuuden on oltava niin pieni, että kasvu ei ole merkittävästi vähäisempää kuin kontrolliryhmässä.
An analytical method, with adequate sensitivity for quantification of the chemical in the test medium, should be available.
Suurimman testipitoisuuden on myös oltava niin suuri, että kasvu on huomattavasti vähäisempää kuin kontrolliryhmässä.
Information on the test chemical which may be useful in establishing the test conditions includes the structural formula, purity, water solubility, stability in water and light, pKa, Kow, vapour pressure and biodegradability.
Muussa tapauksessa testi on toistettava käyttämällä toista pitoisuusaluetta (jollei suurin pitoisuus ole liukoisuusrajalla tai jollei se ole suurin vaadittu rajapitoisuus, esimerkiksi 100 mg/l).
Water solubility and vapour pressure can be used to calculate Henry's Law constant, which will indicate if significant losses of the test chemical during the test period are likely.
Jokaiseen testiin on kuuluttava kontrolliryhmä, jossa ravinneliuos, versojen ja kolonioiden lukumäärä, ympäristöolosuhteet ja menettelyt ovat samat kuin testiryhmässä mutta ilman testikemikaalia.
This will help indicate whether particular steps to control such losses should be taken.
Jos apuna käytetään liuotinta tai dispergointiainetta, testiin on kuuluttava ylimääräinen kontrollikäsittely, jossa liuottimen tai dispergointiaineen pitoisuus on sama kuin testikemikaalia sisältävissä astioissa.
Where information on the solubility and stability of the test chemical is uncertain, it is recommended that these be assessed under the conditions of the test, i.e. growth medium, temperature, lighting regime to be used in the test.
Toistoissa kontrolliastioiden (ja liuotinta käytettäessä liuotinta sisältävien astioiden) lukumäärän on oltava vähintään yhtä suuri kuin kunkin testipitoisuuden testaamiseen käytettyjen astioiden lukumäärä ja mielellään kaksinkertainen.
When pH control of the test medium is particularly important, e.g. when testing metals or chemicals which are hydrolytically unstable, the addition of a buffer to the growth medium is recommended (see paragraph 21).
Jos NOEC-pitoisuutta ei tarvitse määrittää, testimenetelmää voidaan muuttaa lisäämällä pitoisuuksien määrää ja vähentämällä toistojen määrää pitoisuutta kohden.
Further guidance for testing chemicals with physical-chemical properties that make them difficult to test is provided in (8).
Kontrollitoistoja on kuitenkin oltava vähintään kolme.
For the test to be valid, the doubling time of frond number in the control must be less than 2,5 days (60 h), corresponding to approximately a seven-fold increase in seven days and an average specific growth rate of 0,275 d– 1.
Altistus
Using the media and test conditions described in this Test Method, this criterion can be attained using a static test regime (5).
Koloniat, jotka koostuvat 2–4 näkyvästä versosta, siirretään siirrosviljelmästä ja jaetaan satunnaisesti koeastioihin aseptisissa olosuhteissa.
It is also anticipated that this criterion will be achievable under semi-static and flow-through test conditions.
Jokaisessa koeastiassa on oltava yhteensä 9–12 versoa.
Calculation of the doubling time is shown in paragraph 49.
Versoja ja kolonioita on oltava yhtä monta kaikissa koeastioissa.
Reference chemical(s), such as 3,5-dichlorophenol used in the international ring test (7), may be tested as a means of checking the test procedure.
Tästä testimenetelmästä saadut kokemukset ja yhteistutkimusten (ring tests) tulokset ovat osoittaneet, että jos jokaista käsittelyä kohden tehdään kolme toistoa, joissa kaikissa on aluksi 9–12 versoa, käsittelyjen välillä voidaan jo havaita kasvueroja, jotka vastaavat 4–7 prosentin inhibitiota, jos se lasketaan kasvunopeuden perusteella (ja 10–15 prosentin inhibitiota, jos se lasketaan tuotoksen perusteella) (7).
It is advisable to test a reference chemical at least twice a year or, where testing is carried out at a lower frequency, in parallel to the determination of the toxicity of a test chemical.
Koeastiat on sijoitettava inkubaattoriin satunnaistetusti, jotta valon voimakkuuden ja lämpötilan spatiaalisista eroista johtuvat vaikutukset olisivat mahdollisimman pienet.
All equipment in contact with the test media should be made of glass or other chemically inert material.
Vaatimuksena on myös, että jokaisella havainnointikerralla käytetään lohkoittaista järjestystä tai astioiden satunnaistettua uudelleensijoittelua (joka voidaan tehdä useamminkin)
Glassware used for culturing and testing purposes should be cleaned of chemical contaminants that might leach into the test medium and should be sterile.
Jos alustava stabiiliustesti osoittaa, että testikemikaalin pitoisuutta ei voida pitää yllä testin ajan eli 7 päivää (toisin sanoen mitattu pitoisuus vähenee alle 80 prosenttiin mitatusta alkupitoisuudesta), on suositeltavaa käyttää semistaattista testijärjestelmää.
The test vessels should be wide enough for the fronds of different colonies in the control vessels to grow without overlapping at the end of the test.
Siinä tapauksessa koloniat on altistettava vasta valmistetuille testi- ja kontrolliliuoksille ainakin kahdesti testin aikana (esimerkiksi päivinä 3 ja 5).
It does not matter if the roots touch the bottoms of the test vessels, but a minimum depth of 20 mm and minimum volume of 100 ml in each test vessel is advised.
Testikemikaalin stabiiliudesta riippuu, kuinka usein koloniat on altistettava vastavalmistetulle viljelyaineelle.
The choice of test vessels is not critical as long as these requirements are met.
Testattaessa hyvin epästabiileja tai haihtuvia kemikaaleja pitoisuuksien pitäminen lähes vakioina voi vaatia useampia altistuskertoja.
Glass beakers, crystallising dishes or glass petri dishes of appropriate dimensions have all proved suitable.
Joissakin tapauksissa voi olla tarpeen käyttää läpivirtausmenetelmää (8), (10).
Test vessels must be covered to minimise evaporation and accidental contamination, while allowing necessary air exchange.
Inkubaatio-olosuhteet
Suitable test vessels, and particularly covers, must avoid shadowing or changes in the spectral characteristics of light.
Testissä käytetään tasaista lämpimän- tai kylmänvalkoista loistevaloa, jotta valon voimakkuudeksi saadaan 85–135 μE · m– 2s– 1, kun se mitataan fotosyynteesille suotuisalla aallonpituusalueella (400–700 nm) pisteissä, jotka ovat samalla etäisyydellä valolähteestä kuin Lemna-versot (tämä vastaa voimakkuusaluetta 6500–10000 luksia).
The cultures and test vessels should not be kept together.
Valon voimakkuus ei saa vaihdella enempää kuin ± 15 prosenttia testialueen yläpuolella.
This is best achieved using separate environmental growth chambers, incubators, or rooms.
Valoilmaisin- ja valonmittausmenetelmä ja erityisesti anturityyppi vaikuttavat mittausarvoon.
Illumination and temperature must be controllable and maintained at a constant level (see paragraphs 35-36).
Pallomaiset anturit (jotka reagoivat valoon mistä tahansa kulmasta mittaustason ylä- ja alapuolelta) ja kosinikorjaimella varustetut anturit (jotka reagoivat valoon mistä tahansa kulmasta mittaustason yläpuolelta) ovat suositeltavampia kuin yksisuuntaiset anturit.
Test organism
Ensin mainitut antavat suurempia lukemia mitattaessa tässä kuvatun kaltaista monipisteistä valonlähdettä.
The organism used for this test is either Lemna gibba or Lemna minor.
Lämpötilan on oltava koeastioissa 24 ± 2 °C.
Short descriptions of duckweed species that have been used for toxicity testing are given in Appendix 2.
Tätä suurempi poikkeama ei kuitenkaan mitätöi testiä, jos validiteettivaatimusten voidaan osoittaa täyttyvän.
Plant material may be obtained from a culture collection, another laboratory or from the field.
Erityistapauksissa, esimerkiksi testattaessa epästabiileja kemikaaleja tai metalleja, on kiinnitettävä erityistä huomiota pH:n vaihteluun.
If collected from the field, plants should be maintained in culture in the same medium as used for testing for a minimum of eight weeks prior to use.
Tästä annetaan lisäohjeita kirjallisuusviitteessä (8).
Field sites used for collecting starting cultures must be free of obvious sources of contamination.
Kesto
If obtained from another laboratory or a culture collection they should be similarly maintained for a minimum of three weeks.
Testi päättyy seitsemän päivän kuluttua kasvien siirtämisestä koeastioihin.
The source of plant material and the species and clone (if known) used for testing should always be reported.
Testin alussa lasketaan ja kirjataan koeastioissa olevien versojen lukumäärä.
Monocultures, that are visibly free from contamination by other organisms such as algae and protozoa, should be used.
Tällöin on laskettava kaikki esiin työntyvät ja selvästi näkyvät versot.
Healthy plants of L. minor will consist of colonies comprising between two and five fronds whilst healthy colonies of L. gibba may contain up to seven fronds.
Normaaleilta ja epänormaaleilta vaikuttavien versojen määrä lasketaan testin alussa, vähintään joka kolmas päivä altistuksen aikana (eli ainakin kaksi kertaa seitsemän päivän jakson aikana) sekä kokeen päättyessä.
The quality and uniformity of the plants used for the test will have a significant influence on the outcome of the test and should therefore be selected with care.
Kasvien kehityksessä tapahtuvat muutokset rekisteröidään.
Young, rapidly growing plants without visible lesions or discoloration (chlorosis) should be used.
Niitä ovat esimerkiksi versojen koossa ja ulkonäössä tapahtuvat muutokset, merkit nekroosista, kloroosista tai kupruisuudesta, kolonian hajoaminen tai kelluvuuden heikkeneminen sekä muutokset juurien pituudessa ja ulkonäössä.
Good quality cultures are indicated by a high incidence of colonies comprising at least two fronds.
Lisäksi on rekisteröitävä testiviljelyaineen erityiset ominaisuudet (esimerkiksi liukenemattoman materiaalin esiintyminen ja levien kasvu koeastiassa).
A large number of single fronds are indicative of environmental stress, e.g. nutrient limitation, and plant material from such cultures should not be used for testing.
Versojen lukumäärän laskemisen lisäksi testin aikana arvioidaan myös testikemikaalin vaikutuksia yhteen (tai useampaan) seuraavista mittausmuuttujista:
Cultivation
versojen kokonaispinta-ala;
To reduce the frequency of culture maintenance (e.g. when no Lemna tests are planned for a period), cultures can be held under reduced illumination and temperature (4 — 10 °C).
kuivapaino;
Details of culturing are given in Appenxix 3.
tuorepaino.
Obvious signs of contamination by algae or other organisms may require surface sterilisation of a sub-sample of Lemna fronds, followed by transfer to fresh medium (see Appendix 3).
Versojen kokonaispinta-alaan liittyy se etu, että se voidaan määrittää jokaisesta testi- ja kontrolliastiasta testin alussa, sen aikana ja sen lopussa.
In this eventuality the remaining contaminated culture should be discarded.
Kuiva- tai tuorepaino on määritettävä testin alussa siirrosviljelmästä otetusta näytteestä, jonka on oltava edustava näyte testin käynnistämiseen käytetystä materiaalista, sekä testin lopussa jokaisesta testi- ja kontrolliastiasta otetusta kasvimateriaalista.
At least seven days before testing, sufficient colonies are transferred aseptically into fresh sterile medium and cultured for 7 - 10 days under the conditions of the test.
Jos versojen pinta-alaa ei mitata, on parempi mitata kuivapaino tuorepainon sijasta.
Test medium
Versojen kokonaispinta-ala, kuivapaino ja tuorepaino voidaan määrittää seuraavasti:
Different media are recommended for Lemna minor and Lemna gibba, as described below.
Versojen kokonaispinta-ala:
Careful consideration should be given to the inclusion of a pH buffer in the test medium (MOPS (4-morpholinepropane sulphonic acid, CAS No: 1132-61-2) in L. minor medium and NaHCO3 in L. gibba medium) when it is suspected that it might react with the test chemical and influence the expression of its toxicity.
Kaikkien kolonioiden versojen kokonaispinta-ala voidaan määrittää kuva-analyysillä.
Steinberg Medium (9) is also acceptable as long as the validity criteria are met.
Koeastiasta ja kasveista voidaan ottaa siluettikuva videokameralla (esimerkiksi sijoittamalla koeastia valolaatikon päälle), ja näin saatu kuva digitalisoidaan.
A modification of the Swedish standard (SIS) Lemna growth medium is recommended for culturing and testing with L. minor.
Koeastiassa olevien versojen kokonaispinta-ala voidaan määrittää tekemällä kalibrointi tunnetun pinta-alan tasokuvioiden avulla.
The composition of this medium is given in Appendix 4.
Tällöin on huolehdittava siitä, että koeastian reunan aiheuttamat vaikutukset eivät vääristä määritystä.
The growth medium, 20X — AAP, as described in Appendix 4, is recommended for culturing and testing with L. gibba.
Vaihtoehtoisena mutta työläämpänä menetelmänä on valokuvata koeastiat ja kasvit, leikata näin saatu kolonioiden siluetti ja määrittää niiden pinta-ala käyttämällä lehtialan analysaattoria.
Steinberg medium, as described in Appendix 4, is also suitable for L. minor, but may also be used for L. gibba as long as the validity criteria are met.
Muutkin tekniikat voivat olla käyttökelpoisia (esimerkiksi kolonioiden siluetin pinta-alan ja tietyn pinta-alayksikön välinen painosuhde paperin painon mukaan laskettuna).
Test solutions
Kuivapaino:
Test solutions are usually prepared by dilution of a stock solution.
Jokaisesta koeastiasta kerätään kaikki koloniat, jotka huuhdotaan tislatulla tai deionisoidulla vedellä.
Stock solutions of the test chemical are normally prepared by dissolving the chemical in growth medium.
Kolonioissa oleva ylimääräinen vesi imeytetään paperiin, minkä jälkeen niitä kuivataan 60 °C:ssa, kunnes niiden paino on vakio.
The highest tested concentration of the test chemical should not normally exceed the water solubility of the chemical under the test conditions.
Juurenpalaset on otettava mukaan.
It should be noted however that Lemna spp. float on the surface and may be exposed to chemicals that collects at the water-air interface (e.g. poorly water-soluble or hydrophobic chemicals or surface-active chemicals).
Kuivapaino on ilmoitettava vähintään 0,1 mg:n tarkkuudella.
Under such circumstances exposure will result from material other than in solution and test concentrations may, depending on the characteristics of the test chemical, exceed water solubility.
Tuorepaino:
For test chemicals of low water solubility it may be necessary to prepare a concentrated stock solution or dispersion of the chemical using an organic solvent or dispersant in order to facilitate the addition of accurate quantities of the test chemical to the test medium and aid in its dispersion and dissolution.
Kaikki koloniat siirretään ennalta punnittuihin polystyreeniputkiin (tai muihin inerttiä materiaalia oleviin putkiin), joiden pyöreissä pohjissa on pieniä (1 mm) aukkoja.
Every effort should be made to avoid the use of such materials.
Putkia sentrifugoidaan kierrosluvulla 3000 rpm huoneenlämmössä 10 minuutin ajan.
There should be no phytotoxicity resulting from the use of auxiliary solvents or dispersants.
Putket, jotka sisältävät näin kuivatut koloniat, punnitaan uudelleen, ja tuorepaino lasketaan vähentämällä punnitustuloksesta tyhjän putken paino.
For example, commonly used solvents which do not cause phytotoxicity at concentrations up to 100 μl/l include acetone and dimethylformamide.
Mittausten ja analyyttisten määritysten tiheys
If a solvent or dispersant is used, its final concentration should be reported and kept to a minimum (≤ 100 μl/l), and all treatments and controls should contain the same concentration of solvent or dispersant.
Käytettäessä staattista testimenetelmää kunkin käsittelyn liuoksen pH on mitattava testin alussa ja lopussa.
Further guidance on the use of dispersants is given in (8).
Jos testimenetelmä on semistaattinen, pH on mitattava jokaisesta erästä ’tuoretta’ testiliuosta ennen kutakin vaihtoa ja myös vastaavista ’käytetyistä’ liuoksista.
Test and control groups
Valon voimakkuus kasvatuskaapissa, inkubaattorissa tai huoneessa on mitattava pisteistä, jotka ovat samalla etäisyydellä valolähteestä kuin Lemna-versot.
Prior knowledge of the toxicity of the test chemical to Lemna, e.g. from a range-finding test, will help in selecting suitable test concentrations.
Mittaukset on tehtävä ainakin kerran testin aikana.
In the definitive toxicity test, there should normally be at least five test concentrations arranged in a geometric series.
Viljelyaineen lämpötila surrogaattiastiassa, jota säilytetään kasvatuskaapissa, inkubaattorissa tai huoneessa samoissa olosuhteissa, on mitattava vähintään kerran päivässä.
Preferably the separation factor between test concentrations should not exceed 3.2, but a larger value may be used where the concentration-response curve is flat.
Testikemikaalin pitoisuudet määritetään testin aikana sopivin väliajoin.
Justification should be provided if fewer than five concentrations are used.
Staattisissa testeissä vähimmäisvaatimuksena on määrittää pitoisuudet testin alussa ja lopussa.
At least three replicates should be used at each test concentration.
Semistaattisissa testeissä, joissa testikemikaalin pitoisuuden ei oleteta pysyvän ± 20 prosentin rajoissa nimellispitoisuudesta, on analysoitava kaikki vastavalmistetut testiliuokset ja samat liuokset käytettyinä kunkin vaihdon yhteydessä (ks. 33 kohta).
In setting the range of test concentrations (for range-finding and/or for the definitive toxicity test), the following should be considered:
Kuitenkin niissä testeissä, joissa testikemikaalin mitattu alkupitoisuus ei ole ± 20 prosentin rajoissa nimellispitoisuudesta, mutta joissa voidaan antaa riittävä näyttö siitä, että alkupitoisuudet ovat toistettavissa ja stabiileja (toisin sanoen 80–120 prosenttia alkupitoisuudesta), kemialliset määritykset voidaan tehdä ainoastaan suurimmista ja pienimmistä testipitoisuuksista.