natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Male DNA should show one double-band and female DNA should show one single band (after staining and gel-electrophoresis).
Vertailuaine testataan yleensä aloituspitoisuudella, joka vastaa liuenneen orgaanisen hiilen pitoisuutta 20 mg/l.
For this programme-run one positive control for males (XY-sample) and one for females (XX-sample) should be included.
Jos testi- ja/tai vertailuaineista käytetään varastoliuoksia, varmista, ettei merivesiväliaineen suolaisuus ole muuttunut kovin paljoa.
“PG 17,6” (lower/reverse) → GAT CGT CCC TCC ACA GAG AAG AGA
Lisää testi- ja vertailuaineet samaan astiaan.
→ 45 sec at 55 °C
(Puuvillakorkit eivät käy, jos käytetään liuenneen orgaanisen hiilen analyysia.)
Y-Gene-PCR-programme as “control” for X- and Y-Gene-PCR-programme:
Valvo lämpötilaa (15–20 °C, vaihteluväli ± 2 °C), ja suojaa astiat valolta, jotta niissä ei ala kasvaa levää.
This PCR-programme verifies the results of the “X- and Y-Gene-PCR-programme”.
Varmista, ettei ilmassa ole myrkyllisiä aineita.
The “male-samples” should show one band and the “female-samples” shouldn't show any band (after staining and gel-electrophoresis).
Fysikaalis-kemiallinen kontrollitesti (valinnainen)
“DMTYa (upper/forward)” → GGC CGG GTC CCC GGG TG
Jos on syytä epäillä abioottisen hajoamisen tai häviämisen mekanismeja, joita ovat esimerkiksi hydrolyysi (ongelma vain ominaisanalyysin yhteydessä), haihtuminen tai adsorptio, kannattaa tehdä fysikaalis-kemiallinen kontrollikoe.
“DMTYd (lower/reverse)” → TTT GGG TGA ACT CAC ATG G
Se voidaan tehdä lisäämällä elohopea(II)kloridia (HgCl2) [10] (50–100 mg/l) testiainetta sisältäviin astioihin mikrobitoiminnan pysäyttämiseksi.
Staining of the PCR-samples:
Jos liuenneen orgaanisen hiilen pitoisuus tai aineen ominaispitoisuus pienenevät merkittävästi fysikaalis-kemiallisessa kontrollitestissä, se viittaa abioottisiin poistomekanismeihin.
Staining solution:
(Elohopeakloridia käytettäessä on kiinnitettävä huomiota häiriöihin tai katalyytteihin kohdistuvaan myrkyllisyyteen liuenneen orgaanisen hiilen pitoisuutta koskevissa analyyseissa.)
50 % Glycerol
Pullojen määrä
0,25 % Bromphenolblue
Tyypillisessä ajossa käytetään seuraavia pulloja:
0,25 % Xylenecyanol
Pullot 1 & 2 sisältävät testiainetta (testisuspensio)
Pipette 1 μl of the staining solution into each single tube
Pullot 3 & 4 sisältävät vain merivettä (nollanäyte)
Start of the Gel-Electrophoresis:
Pullo 5 sisältää vertailuainetta (menettelyn kontrolli)
The prepared 1 % agarose gel will be transferred into a gel-electrophoresis-chamber filled with 1 × TAE-Buffer
Pullo 6 sisältää testi- ja vertailuaineita (myrkyllisyyskontrolli) – valinnainen
10 - 15 μl of each stained PCR-sample will be pipetted into an agarose gel slot
Pullo 7 sisältää testiainetta ja sterilisoivaa ainetta (abioottinen steriili kontrolli) – valinnainen.
Also 5 - 15 μl of the 1kb-“Ladder”(Invitrogen) will be pipetted into a separate slot
DOC-analyysi
Start the electrophoresis by 200 V
Ota testin aikana sopivin väliajoin näytteitä DOC-analyysia varten (lisäys 1).
Stop after 30-45 min
Ota näytteet aina testin alkaessa (päivänä 0) ja päivänä 60.
Determination of the bands:
Näytteitä tarvitaan yhteensä vähintään viisi, jotta hajoamista voidaan kuvata ajallisesti.
Clean the agarose gel in distilled H2O
Näytteenottoa varten ei voida asettaa kiinteää aikaväliä, koska biohajoamisen nopeus vaihtelee.
Now transfer the agarose gel into Ethidium bromide for 15 - 30 min
Tee DOC-määritys rinnakkaisnäyttein jokaisesta näytteestä.
After that, a picture of the agarose gel should be taken in an UV-light-box
Tarvittavaan näytemäärään vaikuttavat analyysimenetelmä (ominaisanalyysi), käytettävä hiilianalysaattori sekä näytteiden käsittelyyn ennen hiilimääritystä valittu menetelmä (kalvosuodatus vai sentrifugointi) (25 ja 26 kohta).
Finally the samples are analysed in comparison to the positive control-band (or bands) and the ladder
Varmista ennen näytteenottoa, että testiväliaine on sekoitettu hyvin ja että kaikki pullon seinämiin mahdollisesti kiinnittynyt aines on liuennut tai suspendoitunut.
Appendix 10
Tee kalvosuodatus tai sentrifugointi heti näytteenoton jälkeen.
Guidance on tissue sampling for genetic sex determination by PCR method in the three-spined stickleback
Jos tarpeen, suodatettuja tai sentrifugoituja näytteitä voi säilyttää 2–4 °C:ssä enintään 48 tuntia tai alle – 18 °C:ssa pidemmän aikaa (jos tiedetään, ettei aine muutu; säädä pH-arvoksi 2 ennen säilytystä).
Tissue sampling and DNA extraction
Kalvosuodattimet (0,2-0–0,45 μm) ovat sopivia, jos on varmaa, ettei niistä vapaudu hiiltä ja etteivät ne adsorboi ainetta suodatusvaiheessa (esimerkiksi polykarbonaatista valmistetut kalvosuodattimet sopivat).
DNA can be extracted using a variety of commercially available reagents and both manual and automated extraction systems.
Jotkin kalvosuodattimet on kyllästetty pinta-aktiivisilla aineilla hydrofiilisyyden parantamiseksi, ja niistä voi vapautua huomattavia määriä liuennutta hiiltä.
The protocol used at the Cefas Weymouth laboratory is outlined below, and the alternative approaches have been added where appropriate.
Valmistele tällaiset suodattimet keittämällä ne deionisoidussa vedessä tunnin ajan, ja toista käsittely kolme kertaa.
With fine scissors, a small piece of tissue (10-20 mg) from the dorsolateral area (after removing the head and tail for VTG analysis), is removed from each individual fish.
Säilytä suodattimet keittämisen jälkeen deionisoidussa vedessä.
The tissue is added into a tube and either placed directly in liquid nitrogen (for storage at – 80 °C) or filled with 70 % ethanol (for transport and subsequent storage at 4 °C).
Ensimmäiset 20 ml suodosta heitetään pois.
The scissors are cleaned after each single fish in 70 % ethanol then in distilled water and dried with tissue paper.
Näytteiden sentrifugointi voidaan valita vaihtoehdoksi kalvosuodatukselle.
The ethanol (if present) is removed by aspiration and the tissue is digested overnight with proteinase K in 400 μl of ATL buffer (Qiagen).
Sentrifugoi näytteet nopeudella 40000 m.s– 2 (~ 4000 g) 15 minuutin ajan mieluiten jäähdytetyssä sentrifugissa.
An aliquot (200 μl) of the digest is transferred to a 96-well S-block (Qiagen) and the DNA extracted in a 96-well format using the Qiagen Universal BioRobot and the QIamp Investigator BioRobot kit.
TOC:n (orgaanisen hiilen kokonaismäärän) ja DOC:n (TOC/DOC) osuuksia hyvin pieniä pitoisuuksia sentrifugoitaessa ei voida määrittää luotettavasti, koska kaikki bakteerit eivät välttämättä poistu tai bakteeriplasman orgaaninen hiili liukenee uudelleen.
The DNA is eluted in a 50 μl of DNase and RNase free water.
Suurempien testipitoisuuksien (> 10 mg hiiltä litrassa) sentrifugointivirhe vaikuttaa olevan verrattain pieni.
If using hard tissues to extract DNA (such as a spine or a pectoral fin) it may be necessary to homogenise the sample in the lysis buffer using a FastPrep® tissue lyser or equivalent tissue disruption system.
Näytteenottotiheys
Alternatively,
Jos analyysit tehdään heti näytteenoton jälkeen, määritä seuraava näytteenottoajankohta analyyttisen määrityksen tuloksen perusteella.
the tissue is digested overnight with proteinase K in 400 μl of G2 lysis buffer (Qiagen) and DNA is extracted from 200 μl of the digest using either the EZ-1 DNA easy tissue kit and the EZ-1 biorobot or the DNA easy tissue mini kit.
Jos näytteet säilötään (24 kohta) myöhemmin tehtävää analyysia varten, ota vaadittua vähimmäismäärää (viisi) enemmän näytteitä.
The DNA is eluted in a 50 μl volume.
Analysoi viimeiset näytteet ensiksi.
The tissues are processed using the DNAzol reagent.
Kun näytteet valitaan analyysiin näytteenottojärjestykseen nähden päinvastaisessa järjestyksessä asteittain (’takaperin’), on mahdollista saada hyvä kuva biohajoamiskäyrästä, ja samalla tarvitaan melko vähän analyyttisia määrityksiä.
Briefly, tissue samples are lysed in 1ml of DNAzol for 10 minutes in a 1,5 ml micro centrifuge tube and then centrifuged at 13000 rpm for 5 minutes to remove any particulate matter.
Jos hajoamista ei ole tapahtunut testin loppuun mennessä, lisänäytteitä ei tarvitse analysoida, ja tällaisessa tilanteessa analyysikustannuksissa saatetaan säästää huomattavasti päinvastaisen järjestyksen noudattamisen ansiosta.
The lysed sample is then transfered to a new 1,5 ml micro centrifuge tube containing 500 μl of 100 % molecular grade ethanol and then centrifuged at 13000 rpm for 10 minutes to precipitate the DNA.
Jos hajoamiskäyrässä havaitaan tasannevaihe ennen päivää 60, lopeta testi.
The ethanol is removed and replaced with 400 μl of 70 % molecular grade ethanol, centrifuged at 13000 rpm for 5 minutes and the DNA pellet is dissolved in 50 μl molecular DNase and RNase free water.
Jos hajoaminen on selvästi alkanut päivään 60 mennessä mutta jos tasannevaihetta ei ole saavutettu, jatka koetta.
Again, when using the hard tissues (pectoral fin) it may be necessary to homogenise the sample in the lysis buffer using a FastPrep® tissue lyser or equivalent tissue disruption system prior to extracting the DNA.
Merkitse analyysin tulokset liitteenä olevaan tietolomakkeeseen (lisäys 2), ja laske sekä testi- että vertailuaineen biohajoavuusarvot seuraavalla yhtälöllä:
The DNA is stored at – 20 °C until required.
hajoaminen DOC-poistumaprosenttina tai tietyn aineen poistumaprosenttina ajassa t
gloves must be worn during the procedures.
DOC:n tai tietyn aineen aloituspitoisuus testiväliaineessa
Polymerase chain reaction (PCR) analysis
DOC:n tai tietyn aineen pitoisuus testiväliaineessa ajassa t
Amplifications were performed using 2,5 μl of the DNA extract in a 50 μl reaction volume using the Idh locus primers (as described by Peichel et al., 2004.
DOC:n tai tietyn aineen aloituspitoisuus nollanäytteessä
Current Biology 1:1416-1424):
DOC:n tai tietyn aineen pitoisuus nollanäytteessä ajassa t.
Forward primer
Ilmoita hajoaminen DOC-poistumaprosenttina (lopullinen hajoaminen) tai tietyn aineen poistumaprosenttina ajassa t. Laske DOC-pitoisuudet lähimpään 0,1 mg:aan litraa kohti, ja pyöristä Dt-arvojen keskiarvot lähimpään kokonaiseen prosenttilukuun.
Reverse primer
Testiraportissa on esitettävä seuraavat tiedot:
There are numerous suppliers of suitable PCR reagents.
Testiaine:
The method outlined below is that currently used at the Cefas Weymouth laboratory.
fysikaalinen olomuoto ja fysikaalis-kemialliset ominaisuudet, jos niillä on merkitystä
Preparation of the “Reaction Mix” (50 μl per sample):
tunnistetiedot.
A mastermix is prepared as follows.
näytteenottopaikan sijainti ja kuvaus;
This can be prepared in advance and stored frozen at – 20 °C until required.
saaste- ja ravinnetila (pesäkeluku sekä nitraatti, ammonium ja fosfaatti, jos tarpeen)
Make sufficient mastermix for a negative control (molecular biology grade water only).
näytteen ominaisuudet (näytteenottopäivä ja -syvyys, ulkonäkö, lämpötila, suolaisuus, DOC (valinnainen), näytteenoton ja testissä käyttämisen välinen viive
Volume (stock conc.)/ sample
meriveden (mahdollisessa) vanhentamisessa käytetty menetelmä
® Reaction Buffer
meriveden esikäsittelyssä (suodatus/sedimentointi) käytetty menetelmä
Nucleotides (dATP, dCTP, dGTP, dTTP)
DOC-määrityksessä käytetty menetelmä
0,5 μl (25 mM each)
ominaisanalyysissa käytetty menetelmä (valinnainen)
250 μM each
meriveden heterotrofien lukumäärän määrittämisessä käytetty menetelmä (pesäkeluvun laskeminen tai jokin muu menetelmä) (valinnainen)
Forward Primer
muut meriveden luonnehtimisessa käytetyt menetelmät (valinnainen) (ATP-mittaukset jne.).
0,5μl (0,1 nmol/μl)
tietolomakkeella (lisäys 2) raportoidut analyysitiedot
Reverse Primer
hajoamistestin eteneminen esitetään graafisesti kaavakuvassa, jossa näkyy lag-vaihe (tL), kulmakerroin ja aika (lag-vaiheen lopusta alkaen), joka kului 50 prosentin poistuman (t50) saavuttamiseen.
2,0μM
Lag-vaihe voidaan arvioida graafisesti kohdassa ’Validiteetti ja tulosten tulkinta’ olevan kuvan mukaisesti, tai se voidaan ilmoittaa helpommin aikana, joka kului 10 prosentin hajoamisen saavuttamiseen.
Molecular biology grade water
hajoamisen prosenttiosuus mitattuna 60 päivän kuluttua tai testin lopussa.
GoTaq polymerase
Tulosten pohdinta.
Dispense 47,5 μl to a labelled 0,5 ml thin walled PCR tube.
Validiteetti ja tulosten tulkinta
Add 2,5 μl of the purified DNA to the appropriately labelled tube.
Vertailuaineista (esimerkiksi natriumbentsoaatti, natriumasetaatti tai aniliini) saatujen tulosten tulisi olla verrattavissa rengastestissä (3) saatuihin tuloksiin (ks. kohta ’Vertailuaineet’, 7 kohta).
Repeat for all samples and the negative control.
Jos vertailuaineista saadut tulokset ovat epätyypillisiä, testi on toistettava käyttämällä toista merivesinäytettä.
Over lay with 2 drops of mineral oil.
Vaikka inhibitiotestien tuloksia ei aina voida tulkita suoraviivaisesti, koska testiaine vaikuttaa liuenneen orgaanisen hiilen pitoisuuteen, sen kokonaispitoisuuden poistumanopeuden merkittävä pieneneminen kontrolliin verrattuna on positiivinen merkki myrkyllisistä vaikutuksista.
Alternatively, use a thermal cycler with a heated lid.
Koska käytetyt testipitoisuudet ovat varsin suuria verrattuna useimpiin luonnollisiin järjestelmiin (ja koska testiaineiden ja muiden hiililähteiden pitoisuuksien välinen suhde on siksi epäsuotuisa), menetelmää on pidettävä alustavana testinä, jota voidaan käyttää sen osoittamiseksi, onko aine nopeasti biohajoava vai ei.
Close the lids.
Toisaalta jos testin tulokseksi saadaan pieniä arvoja, se ei välttämättä tarkoita, etteikö testiaine olisi biohajoava meriympäristössä.
Samples were denatured in a Peltier PTC-225 thermal cycler at 94 ± 2 °C for 5 minutes followed by 39 cycles of 94 ± 2 °C for 1 minute, 55 ± 2 °C for 1 minute, 72 ± 2 °C for 1 minute, and a final extension of 72 ± 2 °C for 10 minutes.
Sen sijaan tällainen tulos viittaa siihen, että asian selvittämiseksi tarvitaan lisää tutkimuksia.
Preparation of the agarose gel (2 %):
Muut kuin parametritestit
Traditionally the PCR products are resolved on a 20 % agarose gel containing ethidium bromide.
Tämä menetelmä on meriveteen sovellettava muunnos suljetun pullon testistä (5), ja sen viimeisteli tanskalainen vedenlaatua tutkiva laitos, joka järjesti rengastestin Euroopan komission puolesta (3).
Capillary based electrophoresis systems can also be used.
Kuten merivedellä tehtävässä ravistuspullomenetelmässä, myöskään tämän testin tuloksia ei tule pitää merkkeinä nopeasta biohajoavuudesta, vaan niitä on käytettävä pikemminkin keinona hankkia tietoa aineiden biohajoavuudesta meriympäristössä.
Weigh 2 g agarose in 100 ml 1 × TAE-buffer
Ennalta määritetty määrä testiainetta liuotetaan testiväliaineeseen pitoisuutena, joka on yleensä 210 mg testiainetta litrassa (yhtä tai useampaa pitoisuutta voidaan käyttää).
Heat in a microwave (ca.
Liuosta pidetään täytetyssä suljetussa pullossa pimeässä ja hauteessa, jonka lämpötila on vakio, tai kotelossa, jonka lämpötilaksi on säädetty 15–20 °C (vaihteluväli ± 1 °C).
2-3 min) to dissolve the agarose.
Kun tutkimuksen tavoitteena on simuloida ympäristötilanteita, testit voidaan tehdä tämän normaalin lämpötila-alueen ulkopuolellakin, kunhan lämpötilansäätöön tehdään tarvittavat mukautukset.
Add 2 drops of ethidium bromide final concentration 0,5 μg/ml
Hajoamista seurataan happianalyyseilla 28 päivän ajanjaksolla.
Transfer the hot solution into the gel casting equipment.
Rengastesti osoitti, että kun testiä jatkettiin yli 28 päivää, useimmissa tapauksissa ei saatu hyödyllistä tietoa vakavien häiriöiden takia.
Allow the gel to harden
Nollanäytteen biokemiallisen hapenkulutuksen (BOD) arvot olivat erittäin suuret luultavasti pullon seinämien bakteerikasvuston, sekoituksen puuttumisen ja nitrifikaation takia.
Gel-Electrophoresis:
Näin ollen testin suositeltu kesto on 28 päivää, mutta jos nollanäytteen BOD-arvo on edelleen 30 prosentin rajan sisällä (15 ja 40 kohta), testiä voidaan pidentää.
Transferred the agarose gel to the electrophoresis equipment and submerge in 1 × TAE-buffer
Jotta teoreettinen hapenkulutus (ThOD) voidaan laskea (ks. lisäys 3), on tiedettävä aineen empiirinen kaava.
Load 20 μl of each sample to a separate well, adding a molecular weight marker (100 bp DNA ladder, Promega) to a spare well.
Muussa tapauksessa on määritettävä aineen kemiallinen hapenkulutus (COD) vertailuarvoksi.
Electrophoresis is performed at 120 V for 30-45 minutes.
COD-arvon käyttämistä ei suositella, koska jotkin aineet eivät hapetu täysin COD-testissä.
Visualisation of the amplification products
Aineen liukoisuuden tulisi olla vähintään 2 mg/l, joskin periaatteessa myös huonommin liukenevia aineita voidaan testata (esimerkiksi käyttämällä ultraäänikäsittelyä), kuten myös haihtuvia aineita.
If the ethidium bromide was incorporated in to the agarose gel as described above, the DNA products are visualised under a UV source.
Tieto testiaineen myrkyllisyydestä bakteereille, esimerkiksi mitattuna lyhytaikaisissa soluhengitystesteissä (4), voi olla hyödyllinen asianmukaisia testipitoisuuksia valittaessa, ja se voi olla olennainen pienten biohajoavuusarvojen oikean tulkinnan kannalta.
Alternatively the agarose gel is stained by covering the gel in a dilute solution of ethidium bromide (0,5 μg/ml in water) for 30 minutes prior to visualisation.
Nämä tiedot eivät kuitenkaan aina riitä biohajoavuustesteistä saatujen tulosten tulkintaan, ja 27 kohdassa kuvattu menettely voi olla sopivampi.
Appendix 11
Tähän tarkoitukseen voidaan käyttää (esimerkiksi) aniliinia, natriumasetaattia tai natriumbentsoaattia.
Guidance for artificial fertilisation procedure for the three-spined stickleback
Näiden aineiden on hajottava vähintään 60-prosenttisesti (niiden ThOD-arvosta) melko lyhyessä ajassa.
The purpose of this section is to describe the procedures to obtain fertilised eggs from the three-spined stickleback in view of using them in the FSDT.
Muussa tapauksessa suositellaan, että testi toistetaan käyttämällä toista merivesinäytettä.
Procedures
Euroopan komission rengastestissä, joissa merivesinäytteitä otettiin eri paikoista ja eri aikoina vuodesta, natriumbentsoaatin osalta lag-vaihe (tL) oli 0–2 päivää ja 50 prosentin biohajoamisen saavuttamiseen tarvittu aika (t50), lag-vaihe pois lukien, oli 1–4 päivää.
Obtaining sperm from the males
Aniliinin osalta tL-arvo oli 0–7 päivää ja t50-arvo 2–12 päivää.
A well-coloured male of the desired population is euthanised.
TOISTETTAVUUS
The testes are dissected from each side of the fish.
Menetelmien toistettavuus todettiin Euroopan komission rengastestissä (3).
The testes are generally heavily pigmented, rod shaped structures that are readily apparent at the lateral midline of the body.
Tavallinen laboratoriolaitteisto ja lisäksi:
Use either of the following methods:
250–300 ml:n BOD-pulloja, joissa on lasikorkit, tai kapeakaulaisia 250 ml:n pulloja, joissa on lasikorkit
Using a pair of fine scissors, begin at the cloaca and make a 1-1,5 cm incision with a single snip angled at about 45 degrees.
useita 2, 3 ja 4 litran pulloja, joissa on litran merkit, kokeen valmisteluun ja BOD-pullojen täyttämiseen
Use a scalpel to make a small incision in the side of the fish slightly posterior to the pelvis and just ventral of the lateral plates.
vesihaude tai tila, jonka lämpötila on vakio, jotta pulloja voidaan pitää vakiolämpötilassa (± 1 °C) ja pimeässä
The testes are removed using fine forceps and placed into a petri dish.
laitteisto liuenneen hapen analysointiin
Each testis is covered with 100 μl freshly made Hank's final solution.
kalvosuodattimia, 0,2–0,45 μm (valinnainen)
The testes are finely diced by using a razor blade or scalpel.
ominaisanalyysia varten tarvittava laitteisto (valinnainen).
This will release sperm and give the Hank's solution a milky appearance.
Kerää merivesinäyte huolellisesti puhdistettuun säiliöön ja kuljeta se laboratorioon mieluiten yhden tai kahden päivän kuluessa keräämisestä.
The fluid containing sperm is added into a tube, while trying not to include any pieces of testes tissue when pipetting.
Kuljetuksen aikana näytteen lämpötila ei saa ylittää testissä käytettävää lämpötilaa kovin paljoa.
800 μl of Hank's final solution are added into the tube and mixed well.
Määritä näytteenottopaikka tarkasti ja kuvaa myös sen saastumis- ja ravinnetilaa.
If required, the male can be preserved by fixing in 100 % ethanol or other desired fixative.
Sisällytä luonnehdintaan etenkin rannikkovesien tai saastuneiden vesien osalta heterotrofinen pesäkeluku sekä liuenneen nitraatin, ammoniumin ja fosfaatin pitoisuusmääritykset.
This is particularly important if the study is assigning parental origin of offsprings.
näytteen ulkonäkö – sameus jne.
Although most of the stock solutions required can be made in advance, stock 5 and subsequently the final solution, should be made up fresh on the day of use.
liuennut orgaaninen hiili (DOC)
Stock 1
Jos näytteen DOC-pitoisuuden havaitaan olevan suuri tai jos oletetaan, että nollanäytteen BOD-arvo olisi 28 päivän kuluttua enemmän kuin 30 prosenttia vertailuaineiden arvosta, on suositeltavaa, että meriveden annetaan vanhentua noin viikon ajan ennen käyttöä.
8,00 g
Näytettä vanhennetaan säilyttämällä sitä aerobisissa olosuhteissa testilämpötilassa joko pimeässä tai hajavalossa.
0,40 g
Rengastestissä (3) vanhennettujen ja tuoreena kerättyjen merivesinäytteiden hajoavuuspotentiaalissa ei havaittu eroa.
Distilled water (DW)
Esikäsittele merivesi ennen käyttöä suurhiukkasten poistamiseksi esimerkiksi suodattamalla se nailonsuodattimen tai karkean paperisuodattimen läpi (ei kalvo- tai lasikuitusuodattimien läpi) tai sedimentoimalla ja dekantoimalla.
100 ml
Ilmoita käytetty menetelmä.
Stock 2
Esikäsittele vesi vanhentamisen jälkeen, jos sitä on käytetty.
HPO4 (anhydrous)
Valmista seuraavat varastoliuokset analyyttisen puhtaita reagensseja käyttäen:
0,358 g
Lisää yhteen litraan esikäsiteltyä merivettä 1 ml jokaista edellä mainittua varastoliuosta.
0,60 g
Liuenneen hapen kyllästetty pitoisuus suolaisuuden ja lämpötilan funktiona voidaan lukea nomogrammista, joka on tämän testimenetelmän liitteenä (lisäys 4).
Stock 3
Määritä (valinnaisesti) pesäkkeitä muodostavien heterotrofien määrä merivesitestiväliaineessa (ja mielellään myös alkuperäisissä merivesinäytteissä) esimerkiksi laskemalla pesäkeluku Marine Agaria käyttäen.
0,72 g
Testipullojen valmistelu
50 ml
Tee kaikki tarvittavat käsittelyt, mukaan luettuina meriveden vanhentaminen ja esikäsittely, valitussa testilämpötilassa (välillä 15–20 °C), ja varmista, että kaikki lasiastiat ovat puhtaita mutta eivät steriilejä.
Stock 4
Valmistele rinnakkaiset ryhmät BOD-pulloja, joiden avulla voidaan toteuttaa rinnakkaisia koesarjoja testi- ja vertailuaineen BOD-arvojen määritystä varten.
MgSO4.7H2O
Tee kaikki analyysit rinnakkaisnäytepulloilla (nollanäytteet, vertailu- ja testiaineet), ts. valmista jokaista määritystä varten kaksi pulloa.
1,23 g
Tee analyysit vähintään päivinä 0, 5, 15 ja 28 (neljä määritystä).
Stock 5 (freshly prepared)
Happianalyyseissa neljään määritykseen tarvitaan yhteensä 3 × 2 × 4 = 24 pulloa (nollanäyte, vertailuaine ja testiaine) ja siis noin kahdeksan litraa testiväliainetta (yhtä testiainepitoisuutta varten).
0,35 g
Valmista testi- ja vertailuaineista erilliset liuokset riittävän suuriin pulloihin (11 kohta).
10 ml
Lisää osittain täytettyihin suuriin pulloihin ensin testi- ja vertailuaineet joko suoraan tai käyttämällä konsentroitua varastoliuosta.
If you already have some of the above salts but with different water content (i.e. 2H2O instead of anhydrous) you can still use it but first adjust weight based on molecular weight).
Lisää sen jälkeen testiväliainetta halutun lopullisen pitoisuuden saavuttamiseksi.
For Hank's final solution combine in the following order:
Jos testi- ja/tai vertailuaineista käytetään varastoliuoksia, varmista, ettei merivesiväliaineen suolaisuus ole muuttunut kovin paljoa.
stock 1
Valitse testi- ja vertailuaineiden pitoisuudet ottamalla huomioon seuraavat seikat:
1,0 ml
liuenneen hapen liukoisuus merivedessä testissä vallitsevan lämpötilan ja suolaisuuden yhteydessä (ks. liitteenä oleva nomogrammi, lisäys 4)
stock 2
testiaineen odotettu biohajoavuus.
0,1 ml
Kun lämpötila on 15–20 °C ja kun suolaisuus on 32 tuhannesosaa (valtamerivesi), liuennen hapen liukoisuus on noin 8,1 ja 7,4 mg/l.
stock 3
Meriveden hapenkulutus (nollanäytteen soluhengitys) on 2 mg O2/l tai enemmän, jos merivesi ei ole vanhentunut.