natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Species and strain
kontrollinaarailla näitä ei ole; androgeeneille altistuneilla naarailla on yleensä yksi pari kyhmyjä (yksi kummankin silmän lähellä) tai yksittäinen kyhmy.
Supplier and specific supplier facility
B Sierainten (aistikanavahuokosten) välissä sijaitsevat kyhmyt.
Details of animal acclimation procedure
Kontrollinaarailla näitä kyhmyjä ei ole; androgeeneille altistuneilla naarailla niitä voi esiintyä ja kehittyä jonkin verran.
Body weight of the fish at the start of the exposure (from a sub-sample of the fish stock)
C Sierainten edessä suun vieressä sijaitsevat kyhmyt.
Test Conditions:
Sukukypsillä kontrollikoirailla yleensä laajentuneet tai korostuneet.
Test procedure used (test-type, loading rate, stocking density, etc.);
Nuoremmilla koirailla tai androgeenikäsitellyillä naarailla näitä esiintyy, voivat olla laajentuneita.
Method of preparation of stock solutions and flow-rate;
D Suulinjan suuntaisesti sijaitsevat kyhmyt.
The nominal test concentrations, weekly measured concentrations of the test solutions and analytical method used, means of the measured values and standard deviations in the test vessels and evidence that the measurements refer to the concentrations of the test chemical in true solution;
Arvioidaan yleensä kehittyneiksi kontrollikoirailla.
Dilution water characteristics (including pH, hardness, alkalinity, temperature, dissolved oxygen concentration, residual chlorine levels, total organic carbon, suspended solids and any other measurements made)
Näitä kyhmyjä ei ole kontrollinaarailla, kun taas androgeeneille altistuneilla naarailla niitä on.
Water quality within test vessels:
E Alaleuassa suun lähellä sijaitsevat kyhmyt, yleensä pieniä ja tavallisesti pareittain.
pH, hardness, temperature and dissolved oxygen concentration;
Esiintyvät vaihtelevasti kontrollikoirailla tai käsitellyillä koirailla sekä käsitellyillä naarailla.
Detailed information on feeding (e.g. type of food(s), source, amount given and frequency and analyses for relevant contaminants if available (e.g. PCBs, PAHs and organochlorine pesticides).
F Alaleuassa selkäpuolella sijaitsevat kyhmyt.
Evidence that the controls met the acceptance criteria of the test;
Yleensä pieniä ja parillisia.
Data on mortalities occurring in any of the test concentrations and control;
Esiintyy kontrollikoirailla ja androgeeneille altistuneilla naarailla.
Statistical analytical techniques used, treatment of data and justification of techniques used;
2 – laajentuneita kyhmyjä Kokonaispisteet 3 – korostuneita kyhmyjä A X1 X1 X1 X1 B X1 X1 X1 X1 C X1 X1 X1 X1 X1 X1 X1 X1 X1 X1 D X1 X1 X1 X1 X1 X1 X1 X1 X1 X1 E X1 X1 F X1 X1 X1 X1
Data on biological observations of gross morphology, including secondary sex characteristics and vitellogenin;
Lisäys 5B
Results of the data analyses preferably in tabular and graphical form;
Maksan poistamisen (lisäys 6) jälkeen kalan ruumis asetetaan kartiomaiseen putkeen (pää ylöspäin, pyrstö alaspäin), joka sisältää noin 10 ml 10-prosenttista neutraalia puskuroitua formaliinia.
Incidence of any unusual reactions by the fish and any visible effects produced by the test chemical
Pvm.
This section contains a few considerations to be taken into account in the interpretation of test results for the various endpoints measured.
Kun tartut peräevään pinseteillä, käsittele etuosan tiettyjä eväpoimuja varovasti, jotta sukuelinpapillit eivät vaurioidu.
It is important to have at least one treatment where there are no signs of toxic effects.
Aseta kala pöydälle vatsapuoli ylöspäin.
For example, it is possible that production of VTG in females can also be affected by general toxicity and non-endocrine toxic modes of action, e.g. hepatotoxicity.
Sukuelinpapillit ovat tunnistettavissa liitoslevyn takaosassa näkyvästä pienestä papillimuodostelmasta.
Examples of the range of values encountered in control and treatment groups are available in the validation reports (1, 2, 3, 4).
Kuva 1.
High VTG values in control males could compromise the responsiveness of the assay and its ability to detect weak oestrogen agonists.
Piirros, josta näkee peräevän muotoon ja kokoon liittyvät sukupuolierot.
Low VTG values in control females could compromise the responsiveness of the assay and its ability to detect aromatase inhibitors and oestrogen antagonists.
A:
The validation studies were used to build that guidance.
koiras, B:
If a laboratory has not performed the assay before or substantial changes (e.g. change of fish strain or supplier) have been made it is advisable that a technical proficiency study is conducted.
naaras.
It is recommended that chemicals covering a range of modes of action or impacts on a number of the test endpoints are used.
Kuva 2.
In practice, each laboratory is encouraged to build its own historical control data for males and females and to perform a positive control chemical for estrogenic activity (e.g. 17β-estradiol at 100 ng/l, or a known weak agonist) resulting in increased VTG in male fish, a positive control chemical for aromatase inhibition (e.g. fadrozole or prochloraz at 300 μg/l) resulting in decreased VTG in female fish, and a positive control chemical for androgenic activity (e.g. 17β-trenbolone at 5 μg/l) resulting in induction of secondary sex characteristics in female fathead minnow and medaka.
A:
All these data can be compared to available data from the validation studies (1, 2, 3) to ensure laboratory proficiency.
Peräevän eväpoimun liitoslevyissä olevia sukuelinpapilleja.
In general, vitellogenin measurements should be considered positive if there is a statistically significant increase in VTG in males (p < 0,05), or a statistically significant decrease in females (p < 0,05) at least at the highest dose tested compared to the control group, and in the absence of signs of general toxicity.
J.P., liitoslevy;
A positive result is further supported by the demonstration of a biologically plausible relationship between the dose and the response curve.
A.S., aksiaalinen väli;
As mentioned earlier, the vitellogenin decrease may not entirely be of endocrine origin;
P., papilli.
however a positive result should generally be interpreted as evidence of endocrine activity in vivo, and should normally initiate actions for further clarification.
B:
Vitellogenin induction by 17β-estradiol and 17β-ethinylestradiol in male zebrafish (Danio rerio).
Eväpoimun distaalinen pää.
Development of an ELISA for determination of the hepatic vitellogenin in Medaka (Oryzias latipes).
Actinotrichium-säikeet (Act.) ovat kärjessä.
Fish full life-cycle testing for androgen methyltestosterone on medaka (Oryzias latipes).
Kuva 3.
Screening and testing for endocrine disruption in fish-biomarkers as “signposts”, not “traffic lights”, in risk assessment.
Kuva kalan ruumiista, jossa näkyy leikkauskohta, kun sukupuolirauhanen on kiinnitetty muulla kuin 10-prosenttisella neutraalilla puskuroidulla formaliinilla.
Effects of waterborne exposure to 17β-estradiol on secondary sex characteristics and gonads of the fathead minnow (Pimephales promelas).
Tässä tapauksessa jäljellä oleva ruumis leikataan kahtia peräevän etuosan ja peräaukon välistä partaterällä (punainen viiva).
Villeneuve and G.T.
Kalan ruumiin päänpuoleinen osa laitetaan sukupuolirauhasen kiinnitysliuokseen ja pyrstöosa 10-prosenttiseen neutraaliin puskuroituun formaliiniin.
Ankley.
Sukuelinpapilleja on yleensä vain täysikasvuisilla koirailla, ja ne sijaitsevat toisen ja seitsemännen tai kahdeksannen eväpoimun välissä peräevän takapäästä laskettuna (kuvat 1 ja 2).
Abbreviations & definitions
Papilleja on kuitenkin harvoin peräevän takapäästä katsottuna ensimmäisessä eväpoimussa.
Chemical
Tämä menettelytapaohje kattaa ensimmäisessä eväpoimussa olevien papillien mittauksen (tässä ohjeessa eväpoimun numero tarkoittaa poimujen järjestystä peräevän takapäästä katsottuna).
A substance or a mixture
Suositellut näytteenottomenetelmät vitellogeniinianalyysia varten
Coefficient of variation.
Näytteenotossa on oltava huolellinen koiraiden ja naaraiden vitellogeniininäytteiden välisen ristikontaminaation välttämiseksi.
Loading rate
Rasvapäämutu, verinäytteen otto pyrstösuonesta
Wet weight of fish per volume of water.
Nukutuksen jälkeen pyrstö leikataan osittain auki skalpellilla ja verinäyte otetaan pyrstösuonesta heparinisoituun mikrohematokriittikapillaariputkeen.
Stocking density
Kun verinäyte on otettu, plasma eristetään nopeasti sentrifugoimalla näytettä kolme minuuttia 15000 g:ssä (tai 10 minuuttia 15000 g:ssä 4 °C:n lämpötilassa).
Number of fish per volume of water.
Haluttaessa hematokriittien prosenttiosuus voidaan määrittää sentrifugoinnin jälkeen.
VTG (Vitellogenin)
Sen jälkeen plasma poistetaan mikrohematokriittiputkesta ja säilötään sentrifugiputkeen, jossa on 0,13 yksikköä aprotiniinia (proteaasin estäjää) – 80 °C:n lämpötilassa siihen saakka, kunnes vitellogeniinimääritys voidaan tehdä.
Phospholipoglycoprotein precursor to egg yolk protein that normally occurs in sexually active females of all oviparous species.
Rasvapäämutun (sukupuolen mukaan määräytyvän) koon mukaan kerättävä plasmamäärä on yleensä 5–60 mikrolitraa kalaa kohti (Jensen et al.
HPG axis
2001).
Hypothalamic-pituitary-gonadal axis.
Menetelmä 1B:
MTC
Rasvapäämutu, verinäytteen otto sydämestä
Maximum Tolerated Concentration, representing about 10 % of the LC50.
Verinäyte voidaan ottaa vaihtoehtoisesti myös sydänpunktiolla, jossa käytetään heparinisoitua ruiskua (1000 yksikköä hepariinia millilitrassa).
Experimental conditions for the fish endocrine screening assay
Veri siirretään Eppendorf-putkiin (jotka pidetään jäissä) ja sentrifugoidaan (5 minuuttia, 7000 g, huonelämpötila).
Recommended species
Plasma on siirrettävä puhtaisiin Eppendorf-putkiin (alikvooteissa, jos se on plasman tilavuuden perusteella mahdollista) ja jäädytettävä nopeasti – 80 °C:ssä analysointiin saakka (Panter et al., 1998).
Medaka (Oryzias latipes)
Kalan ottaminen pois testiastiasta
Zebrafish
Kala otetaan pois testiastiasta pienen haavin avulla.
Test type
Ole varovainen, jotta kala ei putoa muihin testiastioihin.
Flow-through
Periaatteessa kalat on otettava pois astioista seuraavassa järjestyksessä:
Water temperature
Kiinnitä mikropipettiin puhdas kärki.
Illumination quality
(2) Ota homogenaattipuskuri reagenssipullosta ja lisää puskuri maksanäytteen sisältävään 1,5 ml:n mikroputkeen.
Fluorescent bulbs (wide spectrum)
Lisäksi kaikki koiraat on otettava pois yhdestä testiastiasta ennen naaraiden ottamista.
Light intensity 10-20 μE/m2/s, 540-1000 lux, or 50-100 ft-c (ambient laboratory levels)
Kunkin kalan sukupuoli on tunnistettavissa ulkoisten sekundaaristen sukupuoliominaisuuksien (kuten peräevän muodon) perusteella.
10-20 μE/m2/s, 540-1000 lux, or 50-100 ft-c (ambient laboratory levels)
Laita kala kuljetussäiliöön ja vie se työpisteeseen, jossa maksan poisto tehdään.
Photoperiod (dawn/dusk transitions are optional, however not considered necessary)
Tarkista testiastian ja kuljetussäiliön merkinnät, jotta voit vahvistaa, että testiastiasta otettujen kalojen lukumäärä ja siihen jääneiden kalojen lukumäärä ovat oikeat.
16 h light, 8 h dark
Jos kalan sukupuolta ei voi määrittää sen ulkonäön perusteella, ota kaikki kalat pois testiastiasta.
12-16 h light, 12-8 h dark
Tässä tapauksessa sukupuoli on määritettävä tutkimalla sukupuolirauhasia tai sekundaarisia sukupuoliominaisuuksia stereomikroskoopilla.
< 5 g per l
Maksan poistaminen
Test chamber size
Siirrä kala kuljetussäiliöstä nukutusliuokseen pienen haavin avulla.
10 l (minimum)
Kun kala on nukutettu, siirrä se suodatinpaperin (tai paperipyyhkeen) päälle (tavallisilla) pinseteillä.
2 l (minimum)
Tartu pinseteillä kalaan sen pään molemmin puolin, jotta pyrstöosa ei rikkoonnu.
5 l (minimum)
Kuivaa kalan pinta vedestä suodatinpaperiin (tai paperipyyhkeeseen).
Test solution volume
Tee sen jälkeen pieni poikittainen viilto vatsanpuoleisen niskan alueen ja vatsan keskiosan välistä dissektiosaksilla.
8 l (minimum)
Laita dissektiosakset pienen viillon sisään ja avaa vatsa keskiviivaa pitkin kiduskannen pyrstönpuoleisesta päästä peräaukon kallonpuoleiseen päähän.
l (minimum)
Varo työntämästä saksia liian syvälle, jotta maksa ja sukupuolirauhanen eivät vaurioidu.
4 l (minimum)
Tee seuraavat toimenpiteet stereomikroskoopin avulla.
Volume exchanges of test solutions
Laita kala vatsapuoli ylöspäin paperipyyhkeen päälle (myös lasista petrimaljaa tai lasista näytelevyä voi käyttää).
Minimum of 6 daily
Levitä vatsaontelon seinämiä tarkkuuspinseteillä, jotta saat sisäelimet esiin.
Minimum of 5 daily
Sisäelimet voi ottaa esiin myös poistamalla toisen puolen vatsaontelon seinämästä, jos tarpeen.
Age of test organisms See paragraph 20
Ota maksan ja sappirakon yhtyneet osat esiin käyttämällä toista tarkkuuspinsettiparia.
See paragraph 20
Tartu sappitiehen ja leikkaa sappirakko irti.
See paragraph 20 12.
Ole varovainen, jotta sappirakko ei mene rikki.
Approximate wet weight of adult fish (g) Females:
Tartu sen jälkeen ruokatorveen ja leikkaa ruoansulatuskanava irti maksasta samalla tavalla.
1,5 ± 20 %
Ole varovainen, jotta ruoansulatuskanavan sisältö ei vuoda ulos.
Males:
Irrota ruoansulatuskanavan pyrstönpuoleinen osa peräaukosta ja ota kanava pois vatsaontelosta.
2,5 ± 20 %
Poista rasva ja muut kudokset maksan reunoilta.
Females:
Varo naarmuttamasta maksaa.
0,35 ± 20 %
Tartu maksan porttialueeseen tarkkuuspinseteillä ja ota maksa pois vatsaontelosta.
0,65 ± 20 %
Aseta maksa näytelevylle.
0,4 ± 20 %
Poista maksan pinnalta tarkkuuspinseteillä kaikki mahdollinen rasva ja ulkopuoliset kudokset (esimerkiksi vatsakalvo) tarvittaessa.
No. of fish per test vessel
Punnitse maksa elektronisella analyysivaa'alla käyttäen 1,5 ml:n mikroputkea taarana.
6 (2 males and 4 females)
Merkitse paino lomakkeeseen (lukema: 0,1 mg).
10 (5 males and 5 females)
Varmista, että mikroputken etiketissä on oikeat tiedot.
= 3 (plus appropriate controls)
Aseta putki jäähdytystelineeseen (tai jäätelineeseen).
No. vessels per treatment
Kun yhdeltä kalalta on poistettu maksa, puhdista dissekointivälineet tai vaihda ne puhtaisiin.
4 minimum
Poista maksa kaikilta kuljetussäiliössä olevilta kaloilta edellä kuvatulla tavalla.
2 minimum
Kun kaikilta kuljetussäiliön kaloilta (ts. kaikilta testiastian koirailta tai naarailta) on poistettu maksa, laita kaikki maksanäytteet putkitelineeseen, varmista, että putkissa on tunniste-etiketit ja laita putkiteline sen jälkeen pakastimeen.
No. of fish per test concentration
Jos maksat toimitetaan esikäsittelyyn heti niiden irrottamisen jälkeen, näytteet on kuljetettava seuraavaan työpisteeseen jäähdytystelineessä (tai jäätelineessä).
16 adult females and 8 males (4 females and 2 males in each replicate vessel)
Maksan irrottamisen jälkeen kalan ruumiista voi tutkia sekundaariset sukupuoliominaisuudet.
10 adult females and 10 males (5 females and 5 males in each replicate vessel)
Näyte
Feeding regime
Säilytä kaloilta otetut maksanäytteet ≤ – 70 °C:n lämpötilassa, jos niitä ei käytetä esikäsittelyyn pian irrottamisen jälkeen.
Live or frozen adult or nauplii brine shrimp two or three times daily (ad libitum), commercially available food or a combination of the above
Viilto tehdään saksilla aivan rintaevien edestä.
Brine shrimp nauplii two or three times daily (ad libitum), commercially available food or a combination of the above
Kuvio 2
None unless DO concentration falls below 60 % air saturation
Vatsan keskiviiva leikataan saksilla auki pisteeseen, joka sijaitsee noin kaksi millimetriä kallosta peräaukkoon päin.
Clean surface, well or reconstituted water or dechlorinated tap water
Kuva 3.
Pre-exposure period
Vatsaontelon seinämät levitetään pihdeillä, jotta maksa ja muut sisäelimet saadaan esiin.
7 days recommended
(Vaihtoehtoisesti seinämät voidaan kiinnittää sivuille.)
Chemical exposure duration
Kuva 4.
Biological endpoints
Maksa leikataan irti suoraan ja otetaan pois pihdeillä.
survival
Kuva 5
behaviour
Sisäelimet irrotetaan varovasti pihdeillä.
sex characteristics
Kuva 6
VTG
Sisäelinten molemmat päät ja mahdolliset suoliliepeen kiinnikkeet leikataan irti saksilla.
Test acceptability
Kuva 7 (naaras)
Dissolved oxygen > 60 % of saturation;
Menettely on naaraiden osalta samanlainen.
mean temperature of 25 ± 2 °C;
Kuva 8
90 % survival of fish in the controls;
Valmis toimenpide.
measured test concentrations within 20 % of mean measured values per treatment level.
Menetelmä 2B:
mean temperature of 24 ± 2 °C;
Medaka (Oryzias latipes), maksan esikäsittely vitellogeniinianalyysia varten
mean temperature of 26 ± 2 °C;
Ota homogenaattipuskuria sisältävä pullo ELISA-pakkauksesta ja jäähdytä se jäämurskalla (liuoksen lämpötila: ≤ 4 °C).
Some chemical characteristics of acceptable dilution water
Jos käytetään EnBio ELISA -järjestelmän homogenaattipuskuria, sulata liuos huoneenlämmössä ja jäähdytä pullo sen jälkeen jäämurskalla.
< 20 mg/l
Laske tarvittavan homogenaattipuskurin määrä maksan painon perusteella (lisää 50 μl homogenaattipuskuria maksan painomilligrammaa kohti homogenaattia varten).
< 2 mg/l
Esimerkki:
Total organophosphorus pesticides
jos maksa painaa 4,5 mg, tarvittavan homogenaattipuskurin määrä on 225 μl.
Appendix 4A
Tee luettelo kutakin maksaa varten tarvittavan homogenaattipuskurin määrästä.
Spawning substrate for zebrafish
Maksan valmistelu esikäsittelyä varten (1) Ota maksan sisältävä 1,5 ml:n putki pakastimesta vasta vähän ennen esikäsittelyä.
Spawning tray
Koiraiden maksojen esikäsittely on tehtävä ennen naaraiden maksojen käsittelyä vitellogeniinikontaminaation välttämiseksi.
all glass instrument dish, for example 22 × 15 × 5,5 cm (l × w × d), covered with a removable stainless steel wire lattice (mesh width 2 mm).
Lisäksi testiryhmien esikäsittely on tehtävä seuraavassa järjestyksessä: kontrolli, liuotinkontrolli (tarvittaessa), pienin pitoisuus, keskisuuri pitoisuus, suuri pitoisuus ja positiivinen kontrolli.
The lattice should cover the opening of the instrument dish at a level below the brim.
Pakastimesta ei saa ottaa enempää maksanäytteitä sisältäviä 1,5 ml:n mikroputkia kuin yhdellä kerralla voidaan sentrifugoida.
On the lattice, spawning substrate should be fixed.
(4) Laita näytteet sisältävät 1,5 ml:n mikroputket jäätelineeseen näytenumeroiden mukaiseen järjestykseen (maksanäytteitä ei tarvitse sulattaa).
It should provide structure for the fish to move into.
Esikäsittely
For example, artificial aquaria plants made of green plastic material are suitable (NB: possible adsorption of the test chemical to the plastic material should be considered).
Homogenointipuskurin lisääminen (1) Tarkista luettelosta, kuinka paljon homogenaattipuskuria kutakin maksanäytettä kohti on käytettävä ja säädä mikropipetti (tilavuuden vaihteluväli: 100–1000 μl) tarvittavan määrän mukaisesti.
The plastic material should be leached out in sufficient volume of warm water for sufficient time to ensure that no chemicals may be disposed to the test water.
Lisää homogenaattipuskuri kaikkiin 1,5 ml:n mikroputkiin, jotka sisältävät maksanäytteen, edellä kuvatun menettelyn mukaisesti.
When using glass materials it should be ensured that the fish are neither injured nor cramped during their vigorous actions.
Mikropipettiin ei tarvitse vaihtaa välillä uutta kärkeä.
The distance between the tray and the glass panes should be at least 3 cm to ensure that the spawning is not performed outside the tray.
Jos kärki kontaminoituu tai jos epäilet sen kontaminoituneen, se pitää kuitenkin vaihtaa.
The eggs spawned onto the tray fall through the lattice and can be sampled 45-60 min after the start of illumination.
2.
The transparent eggs are non-adhesive and can easily be counted by using transversal light.
Maksan homogenisointi (1) Kiinnitä mikroputkihomogenisaattoriin uusi homogenisointipää.
When using five females per vessel, egg numbers up to 20 at a day can be regarded as low, up to 100 as medium and more than 100 as high numbers.
Pidä homogenisaattoria siten, että maksa puristuu pään pinnan ja 1,5 ml:n mikroputken seinän väliin.
The spawning tray should be removed, the eggs collected and the spawning tray re-introduced in the test vessel, either as late as possible in the evening or very early in the morning.
Nosta homogenisointipää 1,5 ml:n mikroputkesta ja anna sen levätä noin 10 sekuntia.
The time until re-introduction should not exceed one hour since otherwise the cue of the spawning substrate may induce individual mating and spawning at an unusual time.
Tarkasta suspension tila sen jälkeen silmämääräisesti.
If a situation needs a later introduction of the spawning tray, this should be done at least 9 hours after start of the illumination.
Jos suspensiossa näkyy maksan palasia, toista vaiheet 3 ja 4 hyväksyttävän maksahomogenaatin saamiseksi.
At this late time of the day, spawning is not induced any longer.
Jäähdytä suspendoitua maksahomogenaattia jäätelineessä sentrifugointiin saakka.
All spawning substrates should be leached for a minimum of 12 hours, in dilution water, before use.
Ota kaikki näytteet pois jäähdyttävästä sentrifugista ja aseta ne jäätelineeseen näytenumeron mukaiseen järjestykseen.
Appendix 5A
Varo suspendoimasta eroteltuja kerroksia uudestaan sentrifugoinnin jälkeen.
Nuptial tubercles are located on the head (dorsal pad) of reproductively-active male fathead minnows, and are usually arranged in a bilaterally-symmetric pattern (Jensen et al.
Varo keräämästä pintakerroksessa olevia lipidejä tai pohjakerroksessa olevaa maksakudosta.
The greatest numbers and largest tubercles are located in two parallel lines immediately below the nares and above the mouth.
Jäähdytä mikroputket välittömästi jäätelineessä.
In many fish there are groups of tubercles below the lower jaw;
Vaihda mikropipettiin uusi kärki jokaista supernatanttia varten.
those closest to the mouth generally occur as a single pair, while the more ventral set can be comprised of up to four tubercles.
Jos kärkeen kiinnittyy suuri määrä lipidejä, vaihda se uuteen välittömästi, jotta rasva ei kontaminoi maksanäytettä.
The actual numbers of tubercles is seldom more than 30 (range, 18-28; Jensen et al.
Tyhjennä kaikki sentrifugoidut supernatantit neljään 0,5 ml:n mikroputkeen edellä kuvatulla tavalla.
2001).
Kun olet tyhjentänyt supernatantin 0,5 ml:n mikroputkiin, laita kaikki etiketöidyt putket putkitelineeseen ja pakasta ne välittömästi.
The predominant tubercles (in terms of numbers) are present as a single, relatively round structure, with the height approximately equivalent to the radius.
Jos vitellogeniinipitoisuudet mitataan välittömästi esikäsittelyn jälkeen, pidä yksi 0,5 ml:n mikroputki (joka sisältää 30 μl supernatanttia) jäähdytettynä putkitelineessä ja vie se siihen työpisteeseen, jossa ELISA-määritys tehdään.
Most reproductively-active males also have, at least some, tubercles which are enlarged and pronounced such that they are indistinguishable as individual structures.
Laita muut mikroputket putkitelineisiin ja pakasta ne.
Some types of endocrine-disrupting chemicals can cause the abnormal occurrence of certain secondary sex characteristics in the opposite sex;
Hävitä jäämät supernatantin keräämisen jälkeen asianmukaisesti.
for example, androgen receptor agonists, such as 17β-methyltestosterone or 17β-trenbolone, can cause female fathead minnows to develop nuptial tubercles (Smith 1974; Ankley et al.
Näytteiden säilytys
2001; 2003), while oestrogen receptor agonists may decrease number or size of nuptial tubercles in males (Miles-Richardson et al.
Säilytä maksahomogenaatin supernatanttia sisältävät 0,5 ml:n mikroputket ≤ – 70 °C:ssa siihen saakka, kun niitä käytetään ELISA-määrityksessä.
1999; Harries et al.
Menetelmä 3A:
2000).
Seeprakala, verinäytteen otto pyrstösuonesta
Below is a description of the characterization of nuptial tubercles in fathead minnows based on procedures used at the U.S. Environmental Protection Agency lab in Duluth, MN.
Pyrstöön tehdään välittömästi nukutuksen jälkeen poikittainen viilto, ja verinäyte otetaan pyrstösuonesta heparinisoituun mikrohematokriittikapillaariputkeen.
Specific products and/or equipment can be substituted with comparable materials available.
Verimäärä vaihtelee välillä 5–15 μl kalan koon mukaan.
Viewing is best accomplished using an illuminated magnifying glass or 3X illuminated dissection scope.
Mikrokapillaariputkeen lisätään sama määrä aprotiniinipuskuria (6 μgml fosfaattipuskuroidussa suolaliuoksessa), ja plasma erotellaan verestä sentrifugoimalla (5 minuuttia 600 g:ssä).