natgillin/translations-raw huggingface dataset:
The examination of Member States' National Reform Programmes contained in the Joint Employment Report shows that Member States should make every effort to boost demand for labour, enhance labour supply, skills and competences, enhance the functioning of labour market, foster social inclusion, combat poverty and promote equal opportunities.
ON HYVÄKSYNYT TÄMÄN PÄÄTÖKSEN:
Member States should explore the use of the European Social Fund when implementing the employment guidelines.
1 artikla
The employment guidelines should remain stable to ensure a focus on their implementation.
Päätöksen (EU) 2015/1848 liitteessä vahvistetut jäsenvaltioiden työllisyyspolitiikan suuntaviivat pidetään voimassa vuonna 2016, ja jäsenvaltioiden on otettava ne huomioon työllisyyspolitiikassaan.
Any updating of the employment guidelines should therefore remain strictly limited.
2 artikla
In the light of an assessment of the developments of the labour markets and the social situation since the adoption of the employment guidelines in 2015, no update is necessary.
Tämä päätös on osoitettu kaikille jäsenvaltioille.
The reasons for their adoption in 2015 remain valid, therefore those guidelines should be maintained,
Tehty Luxemburgissa 13 päivänä lokakuuta 2016.
The guidelines for the employment policies of the Member States, as set out in the Annex to Decision (EU) 2015/1848, are maintained for 2016 and shall be taken into account by the Member States in their employment policies.
Lausunto annettu 15. syyskuuta 2016 (ei vielä julkaistu virallisessa lehdessä).
Article 2
EUVL C 264, 20.7.2016, s. 134.
This Decision is addressed to the Member States.
Lausunto annettu 16. helmikuuta 2016.
Done at Luxembourg, 13 October 2016.
Neuvoston suositus (EU) 2015/1184, annettu 14 päivänä heinäkuuta 2015, jäsenvaltioiden ja Euroopan unionin talouspolitiikan laajoista suuntaviivoista (EUVL L 192, 18.7.2015, s. 27).
For the Council
Neuvoston päätös (EU) 2015/1848, annettu 5 päivänä lokakuuta 2015, jäsenvaltioiden työllisyyspolitiikan suuntaviivoista vuodelle 2015 (EUVL L 268, 15.10.2015, s. 28).
The President
Komission esittämän älykästä, kestävää ja osallistavaa kasvua koskevan Eurooppa 2020 -strategian, jäljempänä ’Eurooppa 2020 –strategia’, avulla unioni pystyy ohjaamaan taloutensa kohti älykästä, kestävää ja osallistavaa kasvua yhdistettynä työllisyyden, tuottavuuden ja sosiaalisen yhteenkuuluvuuden korkeaan tasoon.
Opinion of 15 September 2016 (not yet published in the Official Journal).
Viisi yleistavoitetta muodostavat yhteiset jäsenvaltioiden toimia ohjaavat tavoitteet, ja niissä otetaan huomioon jäsenvaltioiden suhteelliset lähtökohdat ja kansalliset olosuhteet sekä unionin lähtökohdat ja tavoitteet.
OJ C 264, 20.7.2016, p.
Neuvosto hyväksyi 14 päivänä heinäkuuta 2015 suosituksen (EU) 2015/1184 [4] jäsenvaltioiden ja unionin talouspolitiikan laajoista suuntaviivoista.
134.
Lisäksi neuvosto hyväksyi 5 päivänä lokakuuta 2015 päätöksen (EU) 2015/1848 [5] jäsenvaltioiden työllisyyspolitiikan suuntaviivoista vuodelle 2015, jäljempänä ’työllisyyspolitiikan suuntaviivat’.
Opinion of 16 February 2016.
Nämä suuntaviivat yhdessä muodostavat Eurooppa 2020 -strategian täytäntöönpanon yhdennetyt suuntaviivat, jäljempänä ’yhdennetyt Eurooppa 2020 -suuntaviivat’.
Council Recommendation (EU) 2015/1184 of 14 July 2015 on broad guidelines for the economic policies of the Member States and of the European Union (OJ L 192, 18.7.2015, p.
Euroopan työllisyysstrategia on keskeisessä asemassa pantaessa täytäntöön Eurooppa 2020 -strategiaan sisältyviä työllisyys- ja työmarkkinatavoitteita.
Council Decision (CFSP) 2016/1839
Neuvoston päätös (YUTP) 2016/1839,
of 17 October 2016
annettu 17 päivänä lokakuuta 2016,
On the basis of a review of Decision 2010/638/CFSP, those restrictive measures should be extended until 27 October 2017.
Päätöksen 2010/638/YUTP uudelleentarkastelun perusteella kyseisiä rajoittavia toimenpiteitä olisi jatkettava 27 päivään lokakuuta 2017.
Article 2
Tehty Luxemburgissa 17 päivänä lokakuuta 2016.
Done at Luxembourg, 17 October 2016.
Puheenjohtaja
For the Council
Neuvoston päätös 2010/638/YUTP, annettu 25 päivänä lokakuuta 2010, Guinean tasavaltaan kohdistuvista rajoittavista toimenpiteistä (EUVL L 280, 26.10.2010, s. 10).
The President
Tätä päätöstä sovelletaan 27 päivään lokakuuta 2017.
Commission Implementing Decision (EU) 2016/1840
Komission täytäntöönpanopäätös (EU) 2016/1840,
of 14 October 2016
annettu 14 päivänä lokakuuta 2016,
amending Annex IV to Council Directive 2009/156/EC as regards methods for African horse sickness diagnosis
neuvoston direktiivin 2009/156/EY liitteen IV muuttamisesta afrikkalaisen hevosruton diagnosoinnin osalta
(notified under document C(2016) 6509)
(tiedoksiannettu numerolla C(2016) 6509)
Having regard to Council Directive 2009/156/EC of 30 November 2009 on animal health conditions governing the movement and importation from third countries of equidae [1], and in particular Article 20 thereof,
ottaa huomioon eläinten terveyttä koskevista vaatimuksista elävien hevoseläinten siirtämisen ja kolmansista maista tapahtuvan tuonnin osalta 30 päivänä marraskuuta 2009 annetun neuvoston direktiivin 2009/156/EY [1] ja erityisesti sen 20 artiklan
Annex IV to Directive 2009/156/EC sets out diagnostic methods for African horse sickness to be used, when necessary, for testing equidae prior to their movement within the Union or imports from non-EU countries.
Direktiivin 2009/156/EY liitteessä IV vahvistetaan afrikkalaisen hevosruton diagnosointimenetelmät, joita käytetään tarvittaessa hevoseläinten testaamiseen ennen niiden siirtämistä unionin sisällä tai tuontia EU:n ulkopuolisista maista.
Since the adoption of Directive 2009/156/EC, laboratory capacities to carry out advanced, highly sensitive and efficient tests for the diagnosis of African horse sickness have developed.
Direktiivin 2009/156/EY antamisen jälkeen laboratoriovalmiudet edistyneiden, herkkyystasoltaan erinomaisten ja tehokkaiden testien tekemiseksi afrikkalaisen hevosruton diagnosointia varten ovat kehittyneet.
In parallel, the Chapter related to the diagnosis of African horse sickness in the Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals of the World Organisation for Animal Health (OIE) [2] has been amended to reflect that development.
Samaan aikaan Maailman eläintautijärjestön OIE:n maaeläinten diagnostisia testejä ja rokotteita käsittelevän käsikirjan lukua [2], joka koskee afrikkalaisen hevosruton diagnosointia, on päivitetty tätä kehitystä vastaavasti.
As part of their 2014 work programme, the European Union Reference Laboratory for African horse sickness [3] produced a report on the technical assessment of the diagnostic methods described in Annex IV to Directive 2009/156/EC.
Euroopan unionin vertailulaboratorio afrikkalaista hevosruttoa varten [3] laati osana vuoden 2014 työohjelmaansa raportin direktiivin 2009/156/EY liitteessä IV kuvailtujen diagnosointimenetelmien teknisestä arvioinnista.
The assessment, which was presented to the Commission in May 2015, concluded that the competitive enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) is no longer available, indirect ELISA is not in common use but could be provided in 4-6 months after the request and that the blocking ELISA is commercially available and commonly used for analysis of samples during the Proficiency Test exercises organised by the European Union Reference Laboratory for African horse sickness.
Arviointi esiteltiin komissiolle toukokuussa 2015 ja sen päätelmänä oli, että kompetitiivinen entsyymi-immunologinen määritys (ELISA) ei ole enää käytettävissä, että epäsuora ELISA-testi ei ole yleisessä käytössä mutta voitaisiin saada käyttöön 4–6 kuukauden kuluttua pyynnöstä ja että esto-ELISA-testi on kaupallisesti saatavilla ja yleisessä käytössä analysoitaessa näytteitä laboratorion pätevyyttä koskevissa testeissä, joita afrikkalaista hevosruttoa varten nimetty Euroopan unionin vertailulaboratorio järjestää.
In addition, the report points out that the nucleic acid recognition by reverse-transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) methods have advantages over serological diagnostic methods, because they allow for the detection of the disease at an early stage of infection.
Raportissa huomautetaan myös, että nukleiinihappojen tunnistus käänteiskopiointiin perustuvilla polymeraasiketjureaktiomenetelmillä (RT-PCR) tarjoaa etuja serologisiin diagnoosimenetelmiin verrattuna, sillä niiden avulla tauti voidaan havaita tartunnan varhaisvaiheessa.
The report also indicates that outside the Union there are a number of OIE reference laboratories and other laboratories with specific African horse sickness expertise that have implemented at least one of the real-time RT-PCR methods for the detection of African horse sickness genome.
Kaikki käytettävissä olevat reaaliaikaiset RT-PCR-menetelmät ovat riittävän herkkiä afrikkalaisen hevosruton genomin havaitsemiseksi, mutta laboratorioissa käytetään yleisimmin menetelmää, joka kuvaillaan julkaisussa Agüeron et al.
On the 24-25 November 2015, the Joined Workshop of African Horse Sickness/Bluetongue European Union Reference Laboratories together with national reference laboratories held in Ascot, United Kingdom, recommended the inclusion in Annex IV to Directive 2009/156/EC of real time reverse transcription (RRT)-polymerase chain reaction (PCR) methods for the detection of the African horse sickness virus.
, oli erityisesti tarkoitettu sen varmistamiseen, että afrikkalaisen hevosruton riskialueilta tulevat hevoset voidaan kuljettaa turvallisesti OIE:n maaeläinten terveyttä koskevan säännöstön [6] mukaisen vähimmäiskaranteeniajan jälkeen.
The method described by Guthrie et al.
Samalla liitteeseen olisi sisällytettävä julkaisuissa Agüero et al.
was specifically designed to ensure that horses from areas at risk of African horse sickness can be transported safely after the minimum quarantine period required in accordance with the Terrestrial Animal Health Code [6] of the OIE.
ja Guthrie et al.
It is therefore appropriate to incorporate in Annex IV to Directive 2009/156/EC methods for agent identification and for the detection of antibody as complementary methods for a rapid diagnosis of African horse sickness.
kuvaillut reaaliaikaiset RT-PCR menetelmät, jotta nämä taudinaiheuttajien tunnistamiseen tarkoitetut testit olisivat käytettävissä ennen siirtämistä tapahtuvaa testausta varten.
Annex IV to Directive 2009/156/EC should be therefore amended by deletion of the competitive ELISA test and by an updating the procedures for the indirect and blocking ELISA tests in accordance with Chapter 2.5.1. of the Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals of the OIE, Edition 2016 based on the Version adopted by the World Assembly of Delegates of the OIE in May 2012 [7].
Sen vuoksi direktiiviä 2009/156/EY olisi muutettava.
At the same time, real-time RT-PCR procedures as described by Agüero et al.
Tässä päätöksessä säädetyt toimenpiteet ovat pysyvän kasvi-, eläin-, elintarvike- ja rehukomitean lausunnon mukaiset,
as well as by Guthrie et al.
ON HYVÄKSYNYT TÄMÄN PÄÄTÖKSEN:
should be included in that Annex to make those agent identification tests available for the purpose of pre-movement testing.
1 artikla
Directive 2009/156/EC should therefore be amended accordingly.
Korvataan direktiivin 2009/156/EY liite IV tämän päätöksen liitteellä.
Article 1
Tehty Brysselissä 14 päivänä lokakuuta 2016
Annex IV to Directive 2009/156/EC is replaced by the text set out in the Annex to this Decision.
Komission puolesta
This Decision is addressed to the Member States.
EUVL L 192, 23.7.2010, s. 1.
Done at Brussels, 14 October 2016.
Neuvoston direktiivi 92/35/ETY, annettu 29 päivänä huhtikuuta 1992, afrikkalaisen hevosruton valvontasäännöistä ja torjuntatoimenpiteistä (EYVL L 157, 10.6.1992, s. 19).
For the Commission
Invest., 20, 325–328.
Member of the Commission
2013;189(1):30–35
OJ L 192, 23.7.2010, p. 1.
Ks. alaviite 2.
Council Directive 92/35/EEC of 29 April 1992 laying down control rules and measures to combat African horse sickness (OJ L 157, 10.6.1992, p. 19).
LIITE
Journal of Virological Methods.
AFRIKKALAINEN HEVOSRUTTO
http://www.oie.int/fileadmin/Home/eng/Health_standards/tahc/current/chapitre_ahs.pdf
A OSA
See footnote 2.
Serologiset testit
ANNEX
Jäljempänä kuvailtu serologinen menetelmä muodostuu entsyymi-immunologisista määrityksistä (ELISA), jotka perustuvat OIE:n maaeläinten diagnostisia testejä ja rokotteita käsittelevän käsikirjan vuoden 2016 laitoksen, sellaisena kuin sen on hyväksynyt OIE:n kokous toukokuussa 2012, 2.5.1 luvun B jakson 2 kohtaan.
‘ANNEX IV
Virusproteiini VP7 on merkittävä afrikkalaisen hevosruton viruksen (AHRV) immunodominantti antigeeni, joka on konservoitunut ja todettavissa kaikissa yhdeksässä AHRV:n serotyypissä.
AFRICAN HORSE SICKNESS
AHRV:n rekombinantit VP7-proteiinit ovat osoittautuneet stabiileiksi ja vaarattomiksi ja soveltuvat käytettäviksi antigeeneinä ELISA-menettelyissä AHRV:n vasta-aineiden määrityksessä, ja ne tarjoavat korkean herkkyyden ja spesifisyyden (Laviada et al., 1992b [1]; Maree ja Paweska, 2005).
DIAGNOSIS
Epäsuora ELISA ja esto-ELISA ovat ne kaksi AHR-VP7-testiä, jotka soveltuvat afrikkalaisen hevosruton (AHR) serologiseen diagnosointiin.
PART A
Epäsuora ELISA-testi afrikkalaisen hevosruton viruksen (AHRV) vasta-aineiden osoittamiseksi
Serological tests
Tässä menetelmässä käytettävä konjugaatti on piparjuuriperoksidaasikonjugoitu hevosen gammaglobuliinia vastaan tehty antiseerumi, joka reagoi hevosten, muulien ja aasien seerumin kanssa.
The serological method described hereinafter are enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA) based on point 2 of Section B in Chapter 2.5.1 of the Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals, Edition 2016 as adopted by the World Assembly of Delegates of the OIE in May 2012.
Julkaisussa Maree & Paweska (2005) [2] kuvaillussa menetelmässä käytetään konjugaattina proteiinia G, joka reagoi myös seepran seerumin kanssa.
The VP7 viral protein is an immuno-dominant major antigen of the African horse sickness virus (AHSV) and is conserved across the nine AHSV serotypes.
Espanjassa sijaitseva laitos Centro de Investigación en Sanidad Animal (CISA) voi toimittaa antigeeniä 4–6 kuukauden kuluessa pyynnöstä.
Recombinant AHSV-VP7 proteins have been shown to be stable and innocuous and suitable to be used as antigens in ELISA procedures for determination of AHSV antibodies with a high degree of sensitivity and specificity (Laviada et al., 1992b [1]; Maree and Paweska, 2005).
Testimenettely
The indirect ELISA and the blocking ELISA are the two AHS-VP7 ELISA tests suitable for serological diagnosis of African horse sickness (AHS).
Kiinteä faasi
Indirect ELISA for the detection of antibodies to African horse sickness virus (AHSV)
ELISA-levyt pinnoitetaan karbonaatti/bikarbonaattipuskurissa (pH 9,6) laimennetulla AHRV-4:n rekombinantilla VP7:llä.
The conjugate used in this method is a horseradish peroxidase anti-horse gamma-globulin reacting with the serum of horses, mules and donkeys.
Levyjä inkuboidaan yön yli 4 °C:ssa.
The method described by Maree & Paweska (2005) [2] uses protein G as conjugate that also reacts with zebra serum.
Levyt pestään viiteen kertaan tislatulla vedellä, jossa on 0,01 % (v/v) Tween 20:tä (pesuliuos).
The antigen may be provided by the Centro de Investigación en Sanidad Animal (CISA), Spain, within 4 to 6 months of request.
Levyjä taputetaan varovasti imukykyisen materiaalin päällä, jotta kaikki neste saadaan imeytettyä pois.
Test procedure
Levyille annostellaan liuosta, jossa on fosfaattipuskuroitua suolaliuosta (PBS), pH 7,2, ja 5 % (w/v) rasvatonta maitoa (kuivattu rasvaton maito Nestlé Dry Skim MilkTM), 200 μl/kuoppa, ja annetaan olla 1 tunti lämpötilassa 37 °C.
Solid phase
Estoliuos poistetaan, ja levyjä taputetaan varovasti imukykyisen materiaalin päällä, jotta kaikki neste saadaan pois.
Coat ELISA plates with recombinant AHSV-4 VP7 diluted in carbonate/bicarbonate buffer, pH 9,6.
Testinäytteet
Incubate plates overnight at 4 °C.
Testattavat seeruminäytteet sekä positiiviset ja negatiiviset kontrolliseerumit laimennetaan suhteessa 1:25 liuoksella, jonka koostumus on PBS + 5 % (w/v) rasvatonta maitoa + 0,05 % (v/v) Tween 20:tä, ja pipetoidaan 100 μl kuoppaa kohti.
Wash the plates five times with distilled water containing 0,01 % (v/v) Tween 20 (washing solution).
Inkuboidaan 1 tunnin ajan 37 °C:ssa.
Gently tap the plates onto absorbent material to remove any residual wash.
Titrausta varten tehdään kaksoislaimennosten sarja alkaen laimennussuhteesta 1:25 (100 μl/kuoppa), yksi seerumi levyriviä kohti, ja sama toistetaan positiivisten ja negatiivisten kontrollien kanssa.
Block the plates with phosphate buffered saline (PBS) pH 7,2 + 5 % (w/v) skimmed milk (Nestlé Dry Skim MilkTM), 200 μl/well, for 1 hour at 37 °C.
Konjugaatti
Remove the blocking solution and gently tap the plates onto absorbent material.
Lsätään 100 μl/kuoppa piparjuuriperoksidaasi(HRP)-konjugoitua hevosen gammaglobuliinia vastaan tehtyä antiseerumia, joka on esilaimennettu (PBS + 5 % maito + 0,05 % Tween 20, pH 7,2).
Test samples
Kromogeeni/substraatti
Serum samples to be tested, and positive and negative control sera, are diluted 1 in 25 in PBS + 5 % (w/v) skimmed milk + 0,05 % (v/v) Tween 20, 100 μl per well.
Lisätään 200 μl/kuoppa kromogeeni-substraattiliuosta [10 ml 80,6 mM DMAB (dimetyyli-aminobentsaldehydi) + 10 ml 1,56 mM MBTH (3-metyyli-2-bentso-tiatsoliinihydratsonihydrokloridi) + 5 μl H2O2].
Incubate for 1 hour at 37 °C.
Värimuutos pysäytetään lisäämällä 50 μl 3 N H2SO4:ää noin 5–10 minuutin jälkeen (ennen kuin negatiivinen kontrolli alkaa värjäytyä).
For titration, make a twofold dilution series from 1 in 25 (100 μl/well), one serum per plate column, and do the same with positive and negative controls.
Muita kromogeeneja, kuten ABTS (2,2′-atsino-bis-[3-etyylibentsotiatsoliini-6-sulfonihappo]), TMB (tetrametyylibentsidiini) tai OPD (ortofenyleenidiamiini), voidaan myös käyttää.
Conjugate
Levyt luetaan aallonpituudella 600 nm (tai 620 nm).
Dispense 100 μl/well of horseradish-peroxidase (HRP) -conjugated anti-horse gamma-globulin diluted in PBS + 5 % milk + 0,05 % Tween 20, pH 7,2.
Tulosten tulkinta
Chromogen/Substrate
Raja-arvo lasketaan lisäämällä negatiivisen kontrollin arvoon 0,06.
Add 200 μl/well of chromogen/substrate solution (10 ml of 80,6 mM DMAB (dimethyl aminobenzaldehyde) + 10 ml of 1,56 mM MBTH (3-methyl-2-benzo-thiazoline hydrazone hydrochlorid) + 5 μl H2O2).
(0,06 on 30 negatiivisen seerumin ryhmällä saatu vakiopoikkeama.)
Colour development is stopped by adding 50 μl of 3N H2SO4 after approximately 5 to 10 minutes (before the negative control begins to be coloured).
Raja-arvon alittavan absorbanssin antavia testinäytteitä pidetään negatiivisina.
Other chromogens such as ABTS (2,2′-Azino-bis-[3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid]), TMB (tetramethyl benzidine), or OPD (ortho-phenyldiamine) can also be used.
Raja-arvon +0,15 ylittävän absorbanssin antavia testinäytteitä pidetään positiivisina.
Read the plates at 600 nm (or 620 nm).
Testinäytteitä, joiden absorbanssi on edellä mainittujen välillä, pidetään epävarmoina, ja jotain muuta menetelmää on käytettävä tuloksen vahvistamiseksi.
Interpretation of the results
Esto-ELISA-testi afrikkalaisen hevosruton viruksen (AHRV) vasta-aineiden osoittamiseksi
Calculate the cut-off value by adding 0,06 to the value of the negative control (0,06 is the standard deviation derived with a group of 30 negative sera).
Kompetitiivista esto-ELISA-testiä käytetään spesifisten AHRV-vasta-aineiden osoittamiseksi kaikkien hevoseläinten (hevosten, aasien, seeprojen ja niiden risteymien) seerumista.
Test samples giving absorbance values lower than the cut-off are regarded as negative.
Sen avulla voidaan välttää epäsuoraa ELISAa käytettäessä toisinaan esiintyvä spesifisyysongelma.
Test samples giving absorbance values greater than the cut-off + 0,15 are regarded as positive.
Kokeen periaate on, että ELISA-levyyn sitoutuneen rekombinantin VP7-proteiinin ja ARH-VP7:lle spesifisen konjugoidun monoklonaalisen vasta-aineen (Mab) reaktio estetään.
Test samples giving intermediate absorbance values are considered to be inconclusive and a second technique must be employed to confirm the result.
Testiseerumeissa oleva vasta-aine estää antigeenin ja monoklonaalisen vasta-aineen välisen reaktion, mikä heikentää syntyvää väriä.
Blocking ELISA for the detection of antibodies to African horse sickness virus (AHSV)
Koska testissä käytetty monoklonaalinen vasta-aine toteaa myös VP7-antigeenin, testi on hyvin herkkä ja spesifinen.
The competitive blocking ELISA is designed to detect specific AHSV antibodies in sera from animals of any equine species, i.e. horses, donkeys, zebra and their crosses, preventing the problem of specificity experienced occasionally using the indirect ELISAs.
Kompetitiivinen esto-ELISA on kaupallisesti saatavilla.
The principle of the test is the blocking of the reaction between the recombinant VP7 protein absorbed to the ELISA plate and a conjugated AHS-VP7 specific monoclonal antibody (Mab).
Kiinteä faasi
Antibody in the test sera will block the reaction between the antigen and the Mab resulting in a reduction in colour.
ELISA-levyt pinnoitetaan 50–100 ng:llä karbonaatti/bikarbonaattipuskurissa (pH 9,6) laimennettua AHRV-4:n rekombinanttia VP7:ää.
Because the Mab is directed against the VP7, the assay will give a high level of sensitivity and specificity.
Levyjä inkuboidaan yön yli 4 °C:ssa.
The competitive blocking ELISA is commercially available.
Levyt pestään kolmesti fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella (PBS 0,1 ×), jossa on 0,135 M NaCl:a ja 0,05 % (v/v) Tween-20:tä (PBST).
Solid Phase
Levyjä taputetaan varovasti imukykyisen materiaalin päällä, jotta kaikki neste saadaan imeytettyä pois.
Coat ELISA plates with 50-100 ng of recombinant AHSV-4 VP7 diluted in carbonate/bicarbonate buffer, pH 9,6.
Testinäytteet ja kontrollit
Incubate overnight at 4 °C.
Testattavat seeruminäytteet sekä positiiviset ja negatiiviset kontrolliseerumit laimennetaan suhteessa 1:5 laimenteella, joka sisältää 0,35 M NaCl:a, 0,05 % (v/v) Tween 20:tä ja 0,1 % Kathonia, siten, että lopputilavuus on 100 μl/kuoppa.
Wash the plates three times with phosphate buffered saline (PBS) 0,1× containing 0,135 M NaCl and 0,05 % (v/v) Tween 20 (PBST).
Titrausta varten valmistetaan testiseerumeista kaksoislaimennosten sarja (1:10–1:280) kahdeksaan kuoppaan (100 μl/kuoppa), yksi seerumi levyriviä kohti, ja sama toistetaan positiivisten ja negatiivisten kontrollien kanssa.
Gently tap the plates on to absorbent material to remove any residual wash.
Inkuboidaan 1 tunnin ajan 37 °C:ssa.
Test samples and controls
Levyt pestään viidesti fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella (PBS 0,1 ×), jossa on 0,135 M NaCl:a ja 0,05 % (v/v) Tween-20:tä (PBST).
Serum samples to be tested, and positive and negative control sera, are diluted 1 in 5 in diluent containing 0,35 M NaCl, 0,05 % (v/v) Tween 20 and 0,1 % Kathon, 100 μl per well.
Lisätään piparjuuriperoksidaasikonjugoitua VP7:n monoklonaalista vasta-ainetta 100 μl/kuoppa.
For titration, make a twofold dilution series of the test sera from 1 in 10 to 1 in 280 across 8 wells (100 μl/well), one serum per plate column, and do the same with positive and negative controls.
Tämä monoklonaalinen vasta-aine on edeltä käsin laimennettu suhteessa 1/5000–1/15000 liuoksessa, joka sisältää suhteessa 1:1 ainetta StabiliZyme Select® Stabilizer (SurModics.
Incubate for 1 hour at 37 °C.
Reference: SZ03) ja tislattua vettä.
Wash the plates five times with phosphate buffered saline (PBS) 0,1× containing 0,135 M NaCl and 0,05 % (v/v) Tween 20 (PBST).
Inkuboidaan 30 minuutin ajan 37 °C:ssa.
Dispense 100 μl/well of horseradish peroxidase-conjugated Mab anti-VP7.
Lisätään kromogeeni-substraattiliuosta [1 ml ABTS (2,2′-atsino-bis-[3-etyylibentsotiatsoliini-6-sulfonihappo]) (5 mg/ml) + 9 ml substraatti-puskuria (0,1 M fosfaattisitraattipuskuria, jonka pH on 4 ja jossa on 0,03 % H2O2:ta)] 100 μl kuoppaa kohden ja inkuboidaan 10 minuuttia huoneenlämmössä.
In advance, this Mab has been diluted 1/5000-1/15000 in a 1/1 solution of StabiliZyme Select® Stabilizer (SurModics.
Värimuutos pysäytetään lisäämällä 2 % (w/v) SDS:ää (natriumdodekyylisulfaatti) 100 μl kuoppaa kohden.
Reference: SZ03) in distilled water.
Lukema