natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Pore water or interstitial water is the water occupying space between sediment or soil particles.
matojen keskimäärä liuotinkontrolleissa
Spiked sediment is sediment to which test chemical has been added.
laboratorioiden välinen keskiarvo
Composition of the recommended reconstituted water
Matojen keskimääräinen yhteenlaskettu kuivapaino rinnakkaisnäytettä kohti kontrolleissa ja liuotinkontrolleissa testin lopussa;
Dissolve 11,76 g CaCl2·2H2O in deionised water;
matojen yhteenlaskettu kuivapaino rinnakkais-näytettä kohti (liuotinkontrollit)
make up to 1 l with deionised water
NOEC- ja LOEC-arvoille;
Magnesium sulphate solution
SD = standard deviation = keskihajonta;
Dissolve 4,93 g MgSO4·7H2O in deionised water;
pienin havaittava ero kontrolliarvoista hypoteesitestauksen aikana;
Sodium bicarbonate solution
käytetään tilastollisen voiman mittaamiseen
Dissolve 2,59 g NaHCO3 in deionised water;
biologinen parametri
Potassium chloride solution
laboratorioiden välinen keskiarvo (mg/kg)
Dissolve 0,23 g KCl in deionised water;
laboratorioiden välinen kerroin
All chemicals must be of analytical grade.
geometrinen ka. (mg/kg)
The conductivity of the distilled or deionised water should not exceed 10 μScm– 1.
matojen kokonaismäärä
25 ml each of solutions (a) to (d) are mixed and the total volume made up to 1 l with deionised water.
matojen kuivapaino yhteensä
The sum of the calcium and magnesium ions in these solutions is 2,5 mmol/l.
kuolleisuus/eloonjääminen
The proportion Ca:Mg ions is 4:1 and Na:K ions 10:1.
lisääntyminen (matojen määrän kasvu rinnakkaisnäytettä kohti)
The acid capacity KS4.3 of this solution is 0,8 mmol/l.
kasvu (biomassan kasvu rinnakkaisnäytettä kohti)
Aerate the dilution water until oxygen saturation is achieved, then store it for approximately two days without further aeration before use.
C.36 MAA-AINEKSESSA TEHTÄVÄ HARSOSÄÄSKENPETOPUNKIN (HYPOASPIS (GEOLAELAPS) ACULEIFER) LISÄÄNTYMISTESTI
REFERENCE
Tämä testimenetelmä vastaa OECD:n testiohjetta (TG) nro 226 (2008).
Chapter C.1 of this Annex, Fish Acute Toxicity Test.
Tämä testimenetelmä on tarkoitettu käytettäväksi arvioitaessa maaperässä olevien kemikaalien vaikutuksia maaperässä elävien punkkilajien Hypoaspis (Geolaelaps) aculeifer Canestrini (Acari: Laelapidae) lisääntymiskyvylle, jolloin voidaan arvioida populaation ominaiskasvunopeudelle koituvaa inhibitiovaikutusta (1), (2).
Physical-chemical characteristics of an acceptable dilution water
Lisääntymiskyky tarkoittaa tässä testijakson lopussa havaittuja poikasia.
Adopted from OECD (1992) (1)
H. aculeifer edustaa uutta ravintotasoa lajilla, jolle testimenetelmiä on jo olemassa.
Concentrations
Tämän testimenetelmän tarkoitusta varten katsotaan riittäväksi lisääntymistesti, jossa lisääntymiskierron eri vaiheita ei eroteta toisistaan tai kvantifioida.
Particulate matter
Kemikaaleille, joiden altistusskenaario on jokin muu kuin maaperän kautta tapahtuva, jokin muu lähestymistapa voi sopia paremmin (3).
Total organic carbon
Hypoaspis (Geolaelaps) aculeifer -lajin katsotaan olevan maaperän eläimistön ja etenkin petopunkkien merkityksellinen edustaja.
< 2 μg/l
Sitä tavataan kaikkialla maailmassa (5), ja sitä on helppo kerätä ja kasvattaa laboratoriossa.
Unionised ammonia
Yhteenveto H. aculeifer -lajin biologiasta on lisäyksessä 7.
< 1 μg/l
Punkkilajin ekologiasta ja sen käytöstä ympäristömyrkyllisyyden tutkimuksessa on saatavilla taustatietoa (4), (5), (6), (7), (8), (9), (10), (11), (12).
Residual chlorine
Täysikasvuiset naaraat altistetaan maa-ainekseen sekoitetun testikemikaalin eri pitoisuuksille.
< 10 μg/l
Testin alussa jokaisessa rinnakkaisnäyteastiassa on 10 täysikasvuista naarasta.
Total organophosphorous pesticides
Koiraita ei oteta testiin, sillä kokemus on osoittanut, että jos koiraita on läsnä, naaraat pariutuvat välittömästi tai lähes välittömästi sen jälkeen, kun ne ovat kuoriutuneet deutonymfivaiheesta.
< 50 ng/l
Lisäksi koiraiden ottaminen testiin pidentäisi testiä niin, että eri ikävaiheita jouduttaisiin erottamaan toisistaan, mikä on varsin suuritöistä.
Total organochlorine pesticides plus polychlorinated biphenyls
Varsinainen pariutuminen ei siis kuulu tähän testiin.
Total organic chlorine
Naaraat otetaan testattaviksi 28–35 vuorokautta sen jälkeen, kun munintavaihe on alkanut synkronoinnissa (ks. lisäys 4), sillä naaraiden voidaan tällöin katsoa jo pariutuneen ja ohittaneen munintaa edeltävään vaiheen.
Recommended artificial sediment — guidance on preparation and storage
Tärkeintä mittaussuuretta varten todetaan poikasten lukumäärä testiastiaa kohti sekä lisäksi elossa olevien naaraiden lukumäärä.
Sediment constituents
Testikemikaalista pitäisi olla käytettävissä seuraavat tiedot: vesiliukoisuus, log Kow, maa-vesi-jakaantumiskerroin sekä höyrynpaine.
Constituent
Lisätiedot testikemikaalin kulkeutumisesta maaperässä, kuten bioottinen ja abioottinen hajoamisnopeus, ovat myös suotavia.
Characteristics
Jotta testitulosta voidaan pitää luotettavana, seuraavien kriteerien on täytyttävä käsittelemättömissä kontrolleissa:
% of sediment dry weight
Aikuisten naaraiden keskimääräinen kuolleisuus testin lopussa saa olla enintään 20 prosenttia
Peat
Nuorten eläinten keskimäärän rinnakkaisnäytettä (johon siirrettiin 10 aikuista naarasta) kohti testin lopussa on oltava vähintään 50
Sphagnum moss peat, degree of decomposition:
Punkinpoikasten määrälle rinnakkaisnäytettä kohti lasketun variaatiokertoimen on oltava alle 30 prosenttia varsinaisen testin lopussa.
“medium”, air dried, no visible plant remains, finely ground (particle size ≤ 0,5 mm)
Vertailukemikaalin NOEC-arvo ja/tai ECx-arvo on määritettävä, jotta voidaan osoittaa, että laboratorion testiolosuhteet ovat asianmukaiset, sekä todeta, että testiorganismien vasteessa ei tapahdu ajan kuluessa muutosta.
Quartz sand
Sopiva vertailukemikaali, jonka on osoitettu vaikuttavan populaation kokoon, on dimetoaatti (CAS 60-51-5) (4).
Grain size:
Vaihtoehtoisesti vertailukemikaalina voidaan käyttää boorihappoa (CAS 10043-35-3).
≤ 2 mm, but > 50 % of the particles should be in the range of 50-200 μm
Tästä kemikaalista on saatu vähemmän kokemusta.
75 - 76
Testi voidaan järjestää kahdella tavalla:
Kaolinite clay
Vertailukemikaalia voidaan testata samanaikaisesti kun jokaisen testikemikaalin myrkyllisyys todetaan yhdestä pitoisuudesta, jonka on osoitettava etukäteen annosvastetutkimuksessa vähentävän jälkeläisten määrää > 50 prosenttia.
Kaolinite content ≥ 30 %
Tässä tapauksessa rinnakkaisnäytteitä on oltava sama määrä kuin kontrolleissa (ks. 29 kohta).
Food source
Vaihtoehtoisesti vertailukemikaali voidaan testata 1–2 kertaa vuodessa annosvastetestillä.
e.g. Urtica powder (Folia urticae), leaves of Urtica dioica (stinging nettle), finely ground (particle size ≤ 0,5 mm);
Pitoisuuksien ja rinnakkaisnäytteiden määrä sekä porrastuskerroin ovat erilaiset eri järjestämistavoissa (ks. 29 kohta), mutta molemmissa vasteen olisi oltava 10–90 prosenttia (porrastuskerroin 1,8).
in accordance with pharmacy standards, for human consumption; in addition to dry sediment
Dimetoaatin jälkeläisten määrään perustuvan EC50:n on oltava välillä 3,0–7,0 mg tehoainetta maa-aineskiloa kohti (kuivapaino).
0,4 - 0,5 %
Tähän mennessä boorihapolla saatujen tulosten perusteella jälkeläisten määrään perustuvan EC50:n on oltava välillä 100–500 mg maa-aineskiloa kohti (kuivapaino).
Organic carbon
Testiastiat ja -laitteet
Adjusted by addition of peat and sand
Käytettävät testiastiat on valmistettu lasista tai muusta kemiallisesti inertistä materiaalista, niiden halkaisija on 3–5 cm (maa-aineksen korkeus ≥1,5 cm) ja niissä on tiiviisti sulkeutuva kansi.
Calcium carbonate
Suositeltavimpia ovat kierrekannet, jolloin astioita voi tuulettaa kahdesti viikossa.
CaCO3, pulverised, chemically pure, in addition to dry sediment
Vaihtoehtoisesti voidaan käyttää kantta, joiden läpi kaasut voivat vaihtua suoraan substraatin ja ilmakehän välillä, esimerkiksi harsoa.
Deionised Water
Kosteuspitoisuus on pidettävä korkeana koko testin ajan, minkä vuoksi on erittäin tärkeää valvoa jokaisen koeastian painoa koko testin ajan ja lisätä vettä tarvittaessa.
Conductivity ≤ 10 μS/cm, in addition to dry sediment
Tämä on erityisen tärkeää silloin, jos käytössä ei ole kierrekansia.
30 - 50
Jos käytetään läpinäkymätöntä testiastiaa, kannen on oltava materiaalia, josta valo pääsee läpi (esimerkiksi läpinäkyvä, rei'itetty kansi) mutta joka estää punkkeja poistumasta.
If elevated ammonia concentrations are expected, e.g. if the test chemical is known to inhibit nitrification, it may be useful to replace 50 % of the nitrogen-rich urtica powder by cellulose (e.g., α-Cellulose powder, chemically pure, particle size ≤ 0,5 mm; (1) (2)).
Testiastian koko ja tyyppi määräytyvät talteenottomenetelmän mukaan (aiheesta tarkemmin lisäyksessä 5).
Preparation
Jos lämpöerottamista käytetään suoraan testiastiaan, pohjaan voidaan lisätä silmäkooltaan sopiva pohjaverkko (joka suljetaan erottamiseen saakka), ja maa-aineksen syvyys on oltava riittävä lämpötila- ja kosteusgradientin muodostumiseen.
The peat is air dried and ground to a fine powder.
Testissä tarvitaan myös vakiolaboratoriolaitteisto, erityisesti seuraavat:
A suspension of the required amount of peat powder in deionised water is prepared using a high-performance homogenising device.
astioita, mieluiten lasisia, joissa on kierrekannet
The pH of this suspension is adjusted to 5,5 ± 0,5 with CaCO3.
harjoja punkkien siirtämistä varten
The suspension is conditioned for at least two days with gentle stirring at 20 ± 2 °C, to stabilise pH and establish a stable microbial component. pH is measured again and should be 6,0 ± 0,5.
pH-mittari ja luksimittari
Then the peat suspension is mixed with the other constituents (sand and kaolin clay) and deionised water to obtain an homogeneous sediment with a water content in a range of 30–50 per cent of dry weight of the sediment.
asianmukaiset ilmankosteuden valvontalaitteet (ei oleellinen, jos altistusastiat on peitetty kansilla)
The pH of the final mixture is measured again and is adjusted to 6,5 to 7,5 with CaCO3 if necessary.
lämpökaappi, jonka lämpötilaa voi säätää, tai pieni huone
However, if ammonia development is expected, it may be useful to keep the pH of the sediment below 7,0 (e.g. between 6,0 and 6,5).
talteenottovälineet (ks. lisäys 5) (13)
Samples of the sediment are taken to determine the dry weight and the organic carbon content.
katkaisijalla varustettu ripustettava paneelivalaisin
If ammonia development is expected, the formulated sediment may be conditioned for seven days under the same conditions which prevail in the subsequent test (e.g. sediment-water ratio 1 : 4, height of sediment layer as in test vessels) before it is spiked with the test chemical, i.e. it should be topped with water, which should be aerated.
keräilypurkkeja talteenotettuja punkkeja varten.
At the end of the conditioning period, the overlying water should be removed and discarded.
Tässä kokeessa käytetään keinomaata.
Thereafter, the spiked quartz sand is mixed with the sediment for each treatment level, the sediment is distributed to the replicate test vessels, and topped with the test water.
Keinomaan ainesosat ovat seuraavat (kaikki arvot perustuvat kuivamassaan):
The vessels are then incubated at the same conditions which prevail in the subsequent test.
5 % rahkaturvetta, joka on ilmakuivattu ja jauhettu hienoksi (hiukkaskoko 2 ± 1 on hyväksyttävä)
This is where the equilibration period starts.
noin 74 % ilmakuivattua teollisuushiekkaa (tarvittavan CaCO3-määrän mukaan), ensisijaisesti hienoa hiekkaa, jonka hiukkasista yli puolet on kooltaan 50–200 mikronia.
The overlying water should be aerated.
Hiekan tarkkaan määrään vaikuttaa CaCO3-määrä (ks. jäljempänä);
It can be mixed initially with the peat suspension (see above).
niiden yhteismäärän tulisi olla 75 prosenttia.
However, excessive degradation of the food source prior to addition of the test organisms — e.g. in case of long equilibration period — can be avoided by keeping the time period between food addition and start of exposure as short as possible.
1,0 prosenttia kalsiumkarbonaattia (CaCO3, jauhemainen, analyyttinen laatu), jotta maan pH-arvoksi saadaan 6,0 ±0,5;
In order to ensure that the food is spiked with the test chemical, the food source should be mixed with the sediment not later than on the day the test chemical is spiked to the sediment.
lisättävän kalsiumkarbonaatin määrään saattaa vaikuttaa etenkin turpeen laatu/tyyppi (ks. huomautus 1).
Storage
CaCO3:n tarvittavaan määrään vaikuttavat maa-ainesalustan ainekset, ja se on määritettävä mittaamalla maa-aineksen osanäytteiden pH-arvo juuri ennen testiä (14).
The dry constituents of the artificial sediment may be stored in a dry, cool place or at room temperature.
Keinomaan turvepitoisuus poikkeaa muissa maaperän organismeja käyttävissä testimenetelmissä käytetystä pitoisuudesta, joka on useimmiten 10 prosenttia turvetta (esimerkiksi (15)).
The prepared sediment spiked with the test chemical should be used in the test immediately.
EPPOn mukaan tyypillisessä maatalousmaassa on orgaanista ainetta kuitenkin enintään 5 prosenttia, ja turvepitoisuuden vähentäminen kuvastaa siis luonnonmaan heikentynyttä kykyä sitouttaa testikemikaalia orgaaniseen hiileen.
Samples of spiked sediment may be stored under the conditions recommended for the particular test chemical until analysis.
Tarvittaessa (esimerkiksi tiettyihin testaustarkoituksiin) testi- ja/tai kasvatusalustana voidaan käyttää myös luonnonmaata, joka on peräisin saastumattomilta alueilta.
In co-operation with R. Nagel and B. Karaoglan.
Luonnonmaata käytettäessä siitä on kuitenkin mainittava vähintään seuraavat tiedot: alkuperä (keräyspaikka), pH, rakenne (hiukkaskokojakauma) ja orgaanisen aineksen pitoisuus.
Culture methods for Lumbriculus variegatus
Maannoksen maaperäluokituksen mukainen tyyppi ja nimi mainitaan myös, jos nämä ovat tiedossa, eikä maa-aineksessa saa olla minkäänlaisia epäpuhtauksia.
Lumbriculus variegatus (MÜLLER), Lumbriculidae, Oligochaeta is an inhabitant of freshwater sediments and is widely used in ecotoxicological testing.
Jos testikemikaali on metalli tai organometalli, on luonnonmaalle määritettävä myös kationinvaihtokyky (CEC).
It can easily be cultured under laboratory conditions.
Erityistä huomiota on kiinnitettävä hyväksyttävyyskriteerien täyttymiseen, sillä luonnonmaasta on tyypillisesti saatavan vähän taustatietoa.
An outline of culture methods is given in the following.
Jos maa-aines on vaadittua vaihteluväliä happamampaa (ks. 10 kohta), happamuutta voidaan säätää lisäämällä tarvittava määrä CaCO3:a.
Culture methods
Jos maa-aines on liian emäksistä, happamuutta voidaan säätää lisäämällä ensimmäistä kolmea ainesosaa sisältävää, 10 kohdassa mainittua seosta, mutta jättämällä pois CaCO3.
Culture conditions for Lumbriculus variegatus are outlined in detail in Phipps et al.
Kahdesta seitsemään vuorokautta ennen testin aloittamista kuiva keinomaa esikostutetaan lisäämällä tislattua tai deionisoitua vettä noin puoleen lopullisesta vesipitoisuudesta eli 40–60 prosenttiin enimmäisvedenpidätyskyvystä.
A short summary of these conditions is given below.
Kosteuspitoisuus säädetään 40–60 prosenttiin enimmäisvedenpidätyskyvystä lisäämällä testikemikaalia liuoksena ja/tai lisäämällä tislattua tai deionisoitua vettä (ks. 16-18 kohdat).
A major advantage of L. variegatus is its quick reproduction, resulting in rapidly increasing biomass in laboratory cultured populations (e.g. (1), (3), (4), (5)).
Maa-aineksen kosteuspitoisuus on vielä tarkistettava likimääräisesti puristamalla maa-ainesta varovasti kädessä.
The worms can be cultured in large aquaria (57 - 80 l) at 23 °C with a 16 L:8 D photoperiod (100 – 1000 lx) using daily renewed natural water (45 - 50 l per aquarium).
Sormien välistä pitäisi tihkua pieniä vesipisaroita, jos kosteuspitoisuus on oikea.
The substrate is prepared by cutting unbleached brown paper towels into strips, which may then be blended with culture water for a few seconds to result in small pieces of paper substrate.
Maaperän kosteuspitoisuus määritetään testin alussa ja lopussa kuivaamalla maa-aines vakiopainoon 105 °C:ssa standardin ISO 11465 (17) ja määrittämällä maa-aineksen pH-arvo lisäyksen 3 tai standardin ISO 10390 (14) mukaisesti.
This substrate can then directly be used in the Lumbriculus culture aquaria by covering the bottom area of the tank, or be stored frozen in deionised water for later use.
Nämä mittaukset tehdään myös ylimääräisissä näytteissä, joissa ei ole punkkeja ja jotka on otettu kontrollimaa-aineksesta sekä jokaisesta maaperän testipitoisuudesta.
Each worm culture is started with 500 – 1000 worms, and fed a 10 ml suspension containing 6 g of trout starter food 3 times per week under renewal or flow-through conditions.
Testissä käytettävä laji on Hypoaspis (Geolaelaps) aculeifer (Canestrini, 1883).
Static or semi-static cultures should receive lower feeding rates to prevent bacterial and fungal growth. .
Testin aloittamiseen tarvitaan synkronisoidusta kohortista peräisin olevia täysikasvuisia naaraspunkkeja.
Under these conditions the number of individuals in the culture generally doubles in approximately 10 to 14 d.
Punkit otetaan testiin noin 7–14 vuorokautta sen jälkeen, kun niistä on tullut täysikasvuisia ja 28–35 vuorokautta sen jälkeen, kun muninta on alkanut synkronoinnissa (ks. 3 kohta ja lisäys 4).
Alternatively Lumbriculus variegatus can also be cultured in a system consisting of a layer of quartz sand as used for the artificial sediment (1 - 2 cm depth), and reconstituted water.
Tiedot punkkien alkuperästä tai toimittajasta sekä laboratorioviljelmän ylläpidosta kirjataan muistiin.
Glass or stainless steel containers with a height of 12 to 20 cm can be used as culture vessels.
Jos punkkeja pidetään laboratorioviljelmässä, punkkien laji olisi syytä varmistaa vähintään kerran vuodessa.
The water body should be gently aerated (e.g. 2 bubbles per second) via a pasteur pipette positioned approx.
Tunnistuslomake on lisäyksessä 6.
2 cm above the sediment surface.
Testikemikaali lisätään maa-ainekseen.
To avoid accumulation e.g. of ammonia, the overlying water should be exchanged using a flow-through system, or, at least once a week, manually.
Orgaanisten liuottimien, joilla helpotetaan maa-aineksen käsittelyä testikemikaalilla, valintaperusteena on vähäinen myrkyllisyys punkeille.
The oligochaetes can be held at room temperature with a photo period of 16 hours light (intensity 100 – 1000 lx) and 8 hours dark.
Testijärjestelyyn sisällytetään sopiva liuotinkontrolli (ks. 29 kohta).
In the semi-static culture (water renewal once per week), the worms are fed with TetraMin twice a week (e.g. 0,6 - 0,8 mg per cm2 of sediment surface), which can be applied as a suspension of 50 mg TetraMin per ml de-ionized water.
Suositeltavaa on käyttää vettä riittävästi, jotta saavutetaan tarvittava kosteuspitoisuus, eli 40–60 prosenttia enimmäisvedenpidätyskyvystä (ks. 12 kohta).
Lumbriculus variegatus can be removed from the cultures e.g. by transferring substrate with a fine mesh net, or organisms using a fire polished wide mouth (approximately 5 mm diameter) glass pipette, to a separate beaker.
Tällaista kantoainetta käytettäessä kaikissa testipitoisuuksissa ja kontrollissa on oltava sama vähimmäismäärä kantoainetta.
If substrate is co-transferred to this beaker, the beaker containing worms and substrate is left overnight under flow-through conditions, which will remove the substrate from the beaker, while the worms remain at the bottom of the vessel.
Kantoaine poistetaan haihduttamalla hiekkaa vetokaapissa vähintään tunnin ajan.
They can then be introduced to newly prepared culture tanks, or processed further for the test as outlined in (3) and (4), or in the following.
Kvartsihiekan ja testikemikaalin seos lisätään esikostutettuun maahan ja sekoitetaan huolellisesti sopivaan määrään deionisoitua vettä, jotta saadaan tarvittava kosteuspitoisuus.
An issue to be regarded critically when using L. variegatus in sediment tests is its reproduction mode (architomy or morphallaxis, e.g. (6)).
Huomaa, että jotkin liuottimet voivat olla myrkyllisiä punkeille.
This asexual reproduction results in two fragments, which do not feed for a certain period until the head or tail part is regenerated (e.g., (7), (8)).
Tämän vuoksi on suositeltavaa käyttää ylimääräistä vesikontrollia, jossa ei käytetä kantoainetta, jos liuottimen myrkyllisyyttä punkeille ei tunneta.
This means that in L. variegatus exposure via ingestion of contaminated sediment does not take place continuously.
Vesikontrolli voidaan jättää pois, jos on riittävällä tavalla osoitettu, että liuottimella ei (testissä käytettyinä pitoisuuksina) ole vaikutuksia punkeille.
Therefore, a synchronisation should be performed to minimise uncontrolled reproduction and regeneration, and subsequent high variation in test results.
Huonosti veteen ja orgaanisiin liuottimiin liukeneva testikemikaali
Such variation can occur, when some individuals, which have fragmented and therefore do not feed for a certain time period, are less exposed to the test chemical than other individuals, which do not fragment during the test (9), (10), (11).
Jos kemikaali liukenee heikosti veteen ja orgaanisiin liuottimiin, haluttu testipitoisuus saadaan sekoittamalla testikemikaaliin 2,5 grammaa vastaava määrä hienoksi jauhettua kvartsihiekkaa testiastiaa kohden (esimerkiksi 10 grammaa hienoa kvartsihiekkaa neljää rinnakkaisnäytettä kohti).
10 to 14 days before the start of exposure, the worms should be artificially fragmented (synchronisation).
Substraatin kokonaishiekkapitoisuutta säädetään tämän määrän mukaan.
Large (adult) worms, which preferably do not show signs of recent morphallaxis should be selected for synchronisation.
Tämä kvartsihiekan ja testikemikaalin seos lisätään esikostutettuun maahan ja sekoitetaan hyvin sopivaan määrään deionisoitua vettä, jotta saadaan tarvittava kosteuspitoisuus.
These worms can be placed onto a glass slide in a drop of culture water, and dissected in the median body region with a scalpel.
Suositeltavaa on sijoittaa jokaiseen kontrolli- ja käsittelyastiaan kymmenen täysikasvuista naarasta ja 20 grammaa keinomaata (kuivapaino).
Care should be taken that the posterior ends are of similar size.
Testiorganismit on lisättävä kahden tunnin kuluttua lopullisen testisubstraatin valmistamisesta (eli testin kohteen lisäämisestä).
The posterior ends should then be left to regenerate new heads in a culture vessel containing the same substrate as used in the culture and reconstituted water until the start of exposure.
Kun punkit on lisätty maa-ainekseen, niille annetaan ruokaa, ja jokaisen testiastian alkupaino mitataan, jotta sitä voidaan käyttää vertailuarvona maa-aineksen kosteuspitoisuuden seurannassa koko testin ajan 24 kohdassa kuvatulla tavalla.
Regeneration of new heads is indicated when the synchronised worms are burrowing in the substrate (presence of regenerated heads may be confirmed by inspecting a representative subsample under a binocular microscope).
Tämän jälkeen testiastiat peitetään, kuten 8 kohdassa on kuvattu, ja sijoitetaan testikammioon.
The test organisms are thereafter expected to be in a similar physiological state.
Jokaista testikemikaalin 15–18 kohdassa kuvattua applikointimenetelmää varten valmistetaan sopiva kontrollinäyte.
This means, that when reproduction by morphallaxis occurs in synchronised worms during the test, virtually all animals are expected to be equally exposed to the spiked sediment.
Kontrolleihin lisätään siis tarvittaessa orgaanisia liuottimia, kvartsihiekkaa tai muuta kantoainetta samana pitoisuutena tai saman verran kuin käsittelyihin.
Feeding of the synchronised worms should be done once as soon as the worms are starting to burrow in the substrate, or 7 d after dissection.
Jos testikemikaalin lisäämisessä käytetään liuotinta tai muuta kantoainetta ja liuottimen myrkyllisyyttä ei tunneta, on lisäksi valmistettava kontrolli, jossa ei käytetä kantoainetta tai testikemikaalia (ks. 17 kohta).
The feeding regimen should be comparable to the regular cultures, but it may be advisable to feed the synchronised worms with the same food source as is to be used in the test.
Testauslämpötilan on oltava 20 °C ± 2 °C.
The worms should be held at test temperature, at 20 ± 2 °C.
Lämpötila kirjataan vähintään kerran päivässä ja sitä säädetään tarvittaessa.