natgillin/translations-raw huggingface dataset:
This merger of replicates is necessary due to the number of midges needed in the cage for sound reproduction assessments.
Eräät kokeen suorittajat ovat ehdottaneet, että kylläisessä sakkaroosiliuoksessa liotettu vanutuppo saattaa riittää kuoriutuneiden aikuisten ravinnoksi.
However, the 2nd generation has eight replicates again, which are initiated from the exposed populations in the breeding cages.
Kun lämpötila on 20 ± 2 °C, toukkien kasvatusastioista alkaa kuoriutua aikuisia noin 13–15 päivän kuluttua.
The factor between concentrations should not be greater than two (an exception could be made in cases when the dose response curve has a shallow slope).
Koiraat tunnistaa helposti niiden viuhkamaisista tuntosarvista ja hoikasta ruumiinrakenteesta.
The number of replicates at each treatment can be reduced to six (three for each breeding case) if the number of test concentrations with different responses is increased.
Munamassat
Increasing the number of replicates or reducing the size of the test concentration intervals tends to lead to narrower confidence intervals around the ECX.
Kun kasvatushäkissä on aikuisia, kaikista toukkien kasvatusastioista on tarkistettava kolme kertaa viikossa, onko niissä hyytelömäisiä munamassoja.
Design for estimation of a NOEC
Jos munamassoja on, ne on poistettava varovasti.
For a NOEC approach, five test concentrations with at least eight replicates (4 for each breeding cage, A and B) should be used and the factor between concentrations should not be greater than two.
Ne siirretään pieneen astiaan, jossa on pieni määrä kasvatusvettä.
The number of replicates should be sufficient to ensure adequate statistical power to detect a 20 % difference from the control at the 5 % level of significance (α = 0,05).
Munamassoja voi käyttää uuden viljelyastian perustamiseen (esimerkiksi 2–4 munamassaa astiaa kohden) tai myrkyllisyystesteihin.
For the development rate, fecundity and fertility an analysis of variance (ANOVA) is usually appropriate, followed by Dunnett's test or Williams' test (22-25).
Ensimmäisen kehitysvaiheen munatoukkien pitäisi kuoriutua 2–3 päivän kuluttua.
For the emergence ratio and sex ratio the Cochran-Armitage, Fisher's exact (with Bonferroni correction), or Mantel-Haentzal tests may be appropriate.
Uusien viljelyastioiden perustaminen
A limit test may be performed (one test concentration and control(s)) if no effects are observed in the optional preliminary range-finding test up to a maximum concentration.
Kun viljelmät on perustettu, uuden toukkaviljelyastian voi aloittaa testivaatimusten mukaan kerran viikossa tai harvemmin.
The purpose of the limit test is to indicate that any toxic effects of the test chemical are found at levels greater than the limit concentration tested.
Vanhat astiat poistetaan, kun aikuiset sääsket ovat kuoriutuneet.
For water, 100 mg/l and for sediment 1000 mg/kg (dry weight) are suggested.
Näin saadaan säännöllisesti aikuisia mahdollisimman vähäisellä vaivalla.
Usually, at least eight replicates for both the treatment and control are necessary.
Testiliuosten M4 ja M7 valmistaminen
Adequate statistical power to detect a 20 % difference from the control at the 5 % level of significance (α = 0,05) should be demonstrated.
Elendt (1990) on kuvannut M4-testiliuosta.
With metric responses (e.g. development rate), the t-test is a suitable statistical method if data meet the requirements of this test (normality, homogeneous variances).
M7-testiliuos valmistetaan kuten M4-liuos lukuun ottamatta taulukossa 1 mainittuja aineita, joiden osalta pitoisuudet ovat neljä kertaa pienemmät M7-liuoksessa kuin M4-liuoksessa.
An unequal-variance t-test or a non-parametric test, such as the Wilcoxon-Mann-Whitney test may be used, if these requirements are not fulfilled.
Testiliuosta ei tule valmistaa Elendtin ja Biasin (1990) mukaan, jos varastoliuoksissa käytetyt NaSiO3 ·- 5H2O-, NaNO3-, KH2PO4- ja K2HPO4-pitoisuudet eivät ole asianmukaisia.
With the emergence ratio, Fisher's exact test is appropriate.
M7-liuoksen valmistaminen
Preparation of the water-sediment system (water spiking)
Jokainen varastoliuos (I) valmistetaan erikseen, ja näistä varastoliuoksista (I) valmistetaan yhdistetty varastoliuos (II) (katso taulukko 1).
a.
M7-liuos valmistetaan näin:
Formulated sediment (see paragraphs 13-14 and Appendix 3) is added to each test vessel and crystallising dish to form a layer of at least 1,5 cm (for the crystallising dish it may be somewhat lower) but maximally 3 cm.
yhdistetystä varastoliuoksesta (II) otetaan 50 ml ja jokaisesta makroravinteiden varastoliuoksesta otetaan taulukossa 2 esitetty määrä, ja nämä määrät täytetään yhdeksi litraksi deionisoitua vettä.
Water (see paragraph 15) is added so that the ratio of the depth of the sediment layer and the depth of the water does not exceed 1:4.
Vitamiinivarastoliuos valmistetaan lisäämällä deionisoituun veteen kolme vitamiinia taulukon 3 mukaan, ja 0,1 ml yhdistettyä vitamiinivarastoliuosta lisätään lopulliseen M7-liuokseen hieman ennen käyttöä.
After preparation of the test vessels the sediment-water system should be left under gentle aeration for approximately seven days prior to addition of the first instar larvae of the 1st or 2nd generation (see paragraph 14 and Appendix 3).
Yhdistetty vitamiinien varastoliuos säilytetään jäädytettynä pienissä alikvooteissa.
The sediment-water system of the crystallising dishes is not aerated during the test, since they do not need to support larval survival (before hatching the egg ropes are already collected).
Liuos ilmastetaan ja stabiloidaan.
To avoid separation of sediment ingredients and re-suspension of fine material during addition of test water in the water column, the sediment can be covered with a plastic disc while water is poured onto it.
Hivenaineiden varastoliuokset M4- ja M7-liuosta varten
The disc is removed immediately afterwards.
Varastoliuokset (I)
Other devices may also be appropriate.
Määrä (mg), joka täytetään 1 litraksi deionisoitua vettä
Preparation of the water-sediment system (spiked sediment)
Yhdistetyn varastoliuoksen (II) valmistaminen:
b.
sekoita seuraavat määrät (ml) varastoliuoksia (I) ja täytä ne yhdeksi litraksi deionisoitua vettä
The spiked sediments prepared according to paragraph 16b are placed in the vessels and crystallising dish and overlying water is added to produce a sediment-water volume ratio of 1:4.
Lopulliset pitoisuudet testiliuoksissa (mg/l)
The depth of the sediment layer should be in the range of 1,5 to 3 cm (it may be somewhat lower for the crystallising dish).
MnCl2 · 4H2O [1]
To avoid separation of sediment ingredients and re-suspension of fine material during addition of test water in the water column, the sediment can be covered with a plastic disc while water is poured onto it, and the disc removed immediately afterwards.
SrCl2 · 6H2O [1]
Appropriate equilibration time is sediment and chemical specific, and can be in the order of hours to days and in rare cases up to five weeks.
CuCl2 · 2H2O [1]
As this would leave time for degradation of many chemicals, equilibrium is not awaited but an equilibration period of 48 hours is recommended.
CaCl2 · 6H2O
However, when the degradation half-life of the chemical in sediment is known to be long (see paragraph 8), the equilibration time may be extended.
EDTA · 2H2O [1] [2]
At the end of this further equilibration period, the concentration of the test chemical should be measured in the overlying water, the pore water and the sediment, at least at the highest concentration and a lower one (see paragraph 38).
FeSO4 · 7H2O [1] [2]
These analytical determinations of the test chemical allow for calculation of a mass balance and expression of results based on measured concentrations.
Makroravinteiden varastoliuokset M4- ja M7-liuosta varten
Test vessels should be covered (e.g. by glass plates).
Määrä, joka täytetään 1 litraksi deionisoitua vettä
If necessary, during the study the water levels may be topped up to the original volume in order to compensate for evaporation.
Lisätyn makroravinteiden varastoliuoksen määrä M4- ja M7-liuosten valmistuksessa
This should be performed using distilled or deionised water to prevent any build-up of salts.
Lopulliset pitoisuudet testiliuoksissa M4 ja M7
Crystallising dishes in the breeding cages are not covered and may, but do not need to be adjusted to compensate for water loss during the test period, since the egg ropes are only in contact with the water for about one day and the dishes are only used during a short phase of the test.
Vitamiinien varastoliuos M4- ja M7-liuosta varten
Addition of test organisms
Kaikki kolme vitamiiniliuosta yhdistetään yhdeksi vitamiinien varastoliuokseksi.
Four to five days before adding the first instar larvae for the 1st generation, egg masses should be taken from the culture and placed in small vessels in culture medium.
Lisätyn vitamiinien varastoliuoksen määrä M4- ja M7-liuosten valmistuksessa
Aged medium from the stock culture or freshly prepared medium may be used.
Tiamiinihydrokloridi
In any case, a small amount of food, e.g. a few droplets of filtrate from a finely ground suspension of flaked fish food, should be added to the culture medium (see Appendix 2).
Syaanikobalamiini (B12)
Only freshly laid egg masses should be used.
Biotiini
Normally, the larvae begin to hatch a couple of days after the eggs are laid (2 to 3 days for C. riparius at 20 °C and 1 to 4 days for C. dilutus at 23 °C and C. yoshimatsui at 25 °C) and larval growth occurs in four instars, each of 4-8 days duration.
Nämä aineet ovat erilaiset M4- ja M7-liuoksissa, kuten edellä kerrottiin.
First instar larvae (maximum 48 h post hatching) should be used in the test.
Nämä liuokset valmistetaan erikseen.
The instar stage of larvae can potentially be checked using head capsule width (7).
Sitten ne kaadetaan yhteen ja käsitellään välittömästi autoklaavissa.
Twenty first instar larvae for the 1st generation are allocated randomly to each test vessel containing the sediment-water system, using a blunt pipette.
Synteettisen sedimentin valmistus
Aeration of the water is stopped whilst adding larvae to test vessels and should remain so for 24 hours following addition of larvae (see paragraph 32).
SEDIMENTIN KOOSTUMUS
According to the test design used (see paragraphs 19 and 20), the number of larvae used per concentration is at least 120 (6 replicates per concentration) for the ECX approach and 160 for the NOEC approach (8 replicates per concentration).
Synteettisen sedimentin koostumuksen on oltava seuraavanlainen:
In the spiked sediment design, exposure starts with the addition of the larvae.
Rahkasuoturvetta, pH mahdollisimman tarkoin 5,5–6,0, ei näkyviä kasvijäänteitä, hienoksi jauhettuna (hiukkaskoko ≤ 1 mm) ja ilmakuivattuna
Spiking the overlying water
4–5
Twenty-four hours after adding the first instar larvae for the 1st generation, the test chemical is spiked into the overlying water column, and slight aeration is again supplied (for possible amendments of the test design, see paragraph 7).
> 50 prosenttia hiukkasista on oltava kokoa 50–200 μm
Small volumes of the test chemical stock solutions are applied below the surface of the water using a pipette.
CaCO3, jauhemainen, kemiallisesti puhdas
The overlying water should then be mixed with care not to disturb the sediment.
0,05–0,1
In the spiked water design, exposure starts with the spiking of the water (i.e. one day after addition of the larvae).
Johtavuus ≤ 10 μS/cm
Collecting emerged adults
VALMISTELUVAIHE
Emerged midges of the 1st generation are collected at least once, but preferably twice a day (see point 36) from the test vessels using an aspirator, exhauster or similar device (see Appendix 5).
Suspension annetaan vakioitua vähintään kahden päivän ajan sekoittamalla sitä varovasti lämpötilassa 20 ± 2 °C, jotta pH stabiloituu ja saadaan stabiili mikrobikomponentti.
Special care should be taken not to damage the adults.
Sen jälkeen pH mitataan uudelleen.
The collected midges from four test vessels within one treatment are released into a breeding cage to which they had been previously assigned.
Arvon pitäisi olla 6,0 ± 0,5.
At the day of first (male) emergence, crystallising dishes are spiked by pipetting a small volume of the test chemical stock solution below the water surface (spiked water design).
Lopullisen seoksen pH mitataan vielä kerran, ja se säädetään tarvittaessa CaCO3:lla alueelle 6,5–7,5.
The concentration of test chemical in the crystallising dish is nominally the same as in the treatment vessels which are assigned to that specific breeding cage.
On suositeltavaa, että synteettistä sedimenttiä sopeutetaan ennen surviaissääskillä tehtävää myrkyllisyystestiä seitsemän päivää samoille olosuhteille, jotka testissä vallitsevat.
For the spiked sediment design, the crystallising dishes are prepared at around day 11 after the start of the exposure (i.e. addition of the 1st generation larvae) so that they can equilibrate for about 48 hours before the first egg ropes are produced.
VARASTOINTI
Egg ropes are collected from the crystallising dish in the breeding cage using tweezers or a blunt pipette.
Synteettisen sedimentin kuivia ainesosia voi säilyttää kuivassa ja viileässä paikassa huoneenlämmössä.
Each egg rope is placed into a vessel containing culture medium from the crystallising dish it was collected from (e.g. a well of a 12-well micro-plate together with at least 2,5 ml of medium).
Valmistettua (märkää) sedimenttiä ei saa säilyttää ennen käyttöä tässä testissä.
The vessels with the egg ropes are covered with a lid to prevent significant evaporation.
Se on käytettävä heti valmistuksen lopussa olevan 7 päivän sopeutusajan jälkeen.
Egg ropes are kept for observation for at least six days after they have been produced so that they can be classified as fertile or infertile.
10–20.
For starting the 2nd generation, at least three but preferably six fertile egg ropes are selected from each breeding cage and together with some food allowed to hatch.
Hyväksyttävän laimennusveden kemialliset ominaisuudet
These egg ropes should have been produced at the peak of oviposition, which normally occurs around test day 19 in the controls.
AINESOSA
Ideally, the 2nd generation of all treatments is initiated on the same day, but due to chemical related effects on larval development, this may not always be possible.
PITOISUUDET
In such a case, the higher concentrations may be initiated later than the lower treatments and the (solvent) control.
Kovuus CaCO3:na
a.
Jos kovuusionien ja testikemikaalin välillä epäillään yhteisvaikutusta, on kuitenkin käytettävä pehmeämpää vettä (tässä tapauksessa ei saa käyttää Elendt M4 -liuosta).
In the spiked water design, the sediment-water system for the 2nd generation is prepared by spiking the test chemical into the overlying water column ca.
Testin toteuttamisohjeet
1 hour before adding the first instar larvae to the test vessels.
Esimerkki kasvatushäkistä:
Small volumes of the test chemical solutions are applied below the surface of the water using a pipette.
A Suojaverkko häkin päällä ja vähintään yhdellä sivulla (silmäkoko noin 1 mm)
After spiking, slight aeration is supplied.
B Aukko, josta kehittyneet aikuiset laitetaan kasvatushäkkiin ja poistetaan munitut munaryppäät kiteytysmaljoista (eivät näy tässä kuvassa) C Kasvatushäkki, vähimmäismitat:
b.
pituus 30 cm, korkeus 30 cm ja leveys 30 cm
In the spiked sediment design, the exposure vessels containing the sediment-water system for the 2nd generation are prepared in the same way as for the 1st generation.
Esimerkki testiastiasta:
Twenty first instar larvae (maximum 48 h post hatching) of the 2nd generation are allocated randomly to each test vessel containing the spiked sediment-water system, using a blunt pipette.
A Pasteur-pipetti ilmansyöttöön yläpuolisen veden päältä
Aeration of the water should be stopped while adding the first instar larvae to the test vessels and remain so for another 24 hours after addition of the larvae.
B Lasikansi, jolla estetään sääskien karkaaminen
It is necessary to feed the larvae in the test vessels, preferably daily or at least three times per week.
D Testiastia (laboratoriolasi, vähintään 600 ml)
Fish-food (a suspension in water or finely ground food, e.g. Tetra-Min or Tetra-Phyll; see details in Appendix 2) of 0,25 - 0,5 mg (0,35 - 0,5 mg for C. yoshimatsui) per larvae per day is an adequate amount of food for young larvae during the first 10 days of their development.
E Sedimenttikerros
Slightly more food may be necessary for older larvae:
Esimerkki imurista, jolla kerätään aikuiset sääsket (nuolet tarkoittavat ilman virtaussuuntaa)
0,5 - 1,0 mg per larvae per day should be sufficient for the rest of the test.
Lasiputken (A) aukko tulee päällystää sisäpuolelta pumpulilla ja verkolla (silmäkoko noin 1 mm), jotta sääsket eivät vaurioidu, kun niitä imetään imuriin.
The food ration should be reduced in all treatments and control if fungal growth is seen or if mortality is observed in controls.
C Läpinäkyvä säiliö (muovia tai lasia, pituus noin 15 cm) kerättyjä sääskiä varten.
If fungal development cannot be stopped the test should be repeated.
D Vulkanoidusta kumista valmistettu korkki, jonka putki lävistää (E).
The toxicological relevance of exposure via ingestion is generally higher in chemicals with a high affinity for organic carbon or chemicals covalently binding to the sediment.
Sääsket vapautetaan kasvatushäkistä avaamalla säiliön C korkki D.
Hence, when testing chemicals with such properties, the amount of food necessary to ensure survival and natural growth of the larvae may be added to the formulated sediment before the stabilisation period, depending on the regulatory demand.
E Putki (muovia tai lasia, sisähalkaisija noin 8 mm), johon aikuiset sääsket kerätään astiasta.
To prevent deterioration of the water quality, plant material should be used instead of fish food, e.g. addition of 0,5 % (dry weight) finely ground leaves of stinging nettle (Urtica dioica), mulberry (Morus alba), white clover (Trifolium repens), spinach (Spinacia oleracea) or other plant material (Cerophyl or α-cellulose).
Kaavakuva sukupolven kierron kattavasta testistä:
Addition of the complete ration of an organic food source to the sediment before spiking is not trivial with respect to water quality and biological performance (21), nor a standardised method, but recent studies provide indications that this method works (19) (26).
A 1. sukupolvi – testiastiat, jotka sisältävät sedimentti-vesijärjestelmän, kahdeksan rinnakkaisnäytettä ja 20 ensimmäisen kehitysvaiheen munatoukkaa astiaa kohti
Adult midges in the breeding cage need no feeding normally, but fecundity and fertility are enhanced when a cotton wool pad soaked in a saturated sucrose solution is offered as a food source for emerged adults (34).
B Neljä testiastiaa kumpaakin kasvatushäkkiä (A ja B) kohti
Gentle aeration of the overlying water in the test vessels is supplied 24 hours after addition of the first instar larvae of both generations and is continued throughout the test (care should be taken that the dissolved oxygen concentration does not fall below 60 % of ASV).
C Kasvatushäkit (A ja B) parveilua, parittelua ja munintaa varten
Aeration is provided through a glass Pasteur pipette of which the outlet is fixed 2-3 cm above the sediment layer giving a few bubbles/sec.
D Kiteytysmaljat munaryppäiden säilytystä varten
When testing volatile chemicals, consideration should be given not to aerate the sediment-water system, while at the same time the validity criterion of minimal 60 % ASV (paragraph 10) should be fulfilled.
E Mikrotitterilevyt, yksi kuoppa kutakin munarypästä kohti
Further guidance is provided in (16).
F 2. sukupolvi – testiastiat, jotka sisältävät sedimentti-vesijärjestelmän, kahdeksan rinnakkaisnäytettä ja 20 ensimmäisen kehitysvaiheen munatoukkaa astiaa kohti
The test with C. riparius is conducted at a constant temperature of 20 °C (± 2 °C).
KALOJEN SUKUPUOLIKEHITYSTÄ TUTKIVA TESTI
For C. dilutus and C. yoshimatsui, recommended temperatures are 23 °C and 25 °C (± 2 °C), respectively.
Tämä testimenetelmä vastaa OECD:n testiohjetta (TG) nro 234 (2011).
A 16 hours photoperiod is used and the light intensity should be 500 to 1000 lux.
Se perustuu vuonna 1998 tehtyyn päätökseen uudistaa ohjeita ja laatia uusia ohjeita mahdollisten hormonitoimintaa häiritsevien aineiden seulontaa ja testausta varten.
For the breeding cages an additional one hour dawn and dusk phase may be included.
Kalojen sukupuolikehitystä tutkivaa testiä (Fish Sexual Development Test, FSDT) pidettiin lupaavana testimenetelmänä, sillä se kattaa kalan elinkaaren herkän vaiheen, jossa kala reagoi sekä estrogeenin että androgeenin kaltaisiin kemikaaleihin.
Exposure duration
Testimenetelmälle tehtiin vuosina 2006–2010 laboratorioiden välinen validointi, jossa validoitiin medaka (Oryzias latipes), seeprakala (Danio rerio) ja kolmipiikki (Gasterosteus aculeatus).
Spiked water design:
Rasvapäämutu (Pimephales promelas) validoitiin osittain (41) (42) (43).
The exposure period of the 1st generation starts when the test chemical is spiked into the overlying water of the test vessels (which is one day after insertion of the larvae — for possible amendments of the exposure design, see paragraph 7).
Tähän tutkimussuunnitelmaan kuuluvat medaka, kolmipiikki ja seeprakala.
Exposure of the 2nd larval generation starts immediately, since they are inserted into a sediment-water system that has been already spiked.
Suunnitelma on periaatteessa OECD:n testiohjeen nro 210 (kalan elinkaaren varhaisvaiheen myrkyllisyystesti) (1) parannettu versio, jossa altistus jatkuu siihen saakka, kunnes kalojen sukupuoli on eriytynyt, mikä tapahtuu medakalla, kolmipiikillä ja seeprakalalla noin 60 päivän kuluttua mätimunien kuoriutumisesta (altistusjakso voi olla lyhyempi tai pidempi muilla lajeilla, jotka validoidaan tulevaisuudessa), ja johon lisätään hormonitoiminnan kannalta herkkiä tutkittavia ominaisuuksia.
The maximum exposure duration for the 1st generation is 27 days and for the 2nd generation 28 days (the 1st generation larvae spend one day in the vessels without exposure) for C. riparius and C. yoshimatsui.
FSDT-testissä arvioidaan elinkaaren varhaisvaiheen vaikutuksia ja mahdollisia haitallisia seurauksia, joita oletetuilla hormonitoimintaa häiritsevillä kemikaaleilla (kuten estrogeeneilla, androgeeneilla ja steroidogeneesin estäjillä) voi olla sukupuolikehitykseen.
Considering the overlap, the complete test duration is approximately 44 days.
Yhdistämällä kaksi keskeistä hormonitoimintaan liittyvää ominaisuutta, vitellogeniinin (VTG:n) pitoisuus ja fenotyyppinen sukupuolijakauma, testistä voidaan saada tietoa testikemikaalin vaikutustavasta.
For C. dilutus, maximum exposure durations are 64 and 65 days, for the 1st and 2nd generation, respectively.
Koska fenotyyppinen sukupuolijakauma muuttuu populaatiokohtaisesti, FSDT:tä voidaan käyttää vaarojen ja riskien arviointiin.
The total duration is approximately 100 days.
Jos testiä käytetään vaarojen tai riskien arvioinnissa, kolmipiikkiä ei tule kuitenkaan käyttää, koska tällä hetkellä käytettävissä olevat validointitiedot ovat osoittaneet, että tässä lajissa kemikaalien aiheuttamat muutokset fenotyyppisessä sukupuolijakaumassa olivat harvinaisia.
Spiked sediment design:
Suunnitelma perustuu siihen, että kaloja altistetaan veden kautta kemikaaleille sukupuolikehityksen kannalta labiilin vaiheen aikana, jolloin kalan oletetaan olevan herkimmillään hormonitoimintaa häiritsevien ja sukupuolikehitystä haittaavien kemikaalien vaikutuksille.
exposure starts with the addition of the larvae and is maximum 28 days for both generations for C. riparius and C. yoshimatsui and maximum 65 days for both generations for C. dilutus.
Merkkeinä hormonitoimintaan liittyvistä kehityksellisistä poikkeamista mitataan kahta keskeistä ominaisuutta, vitellogeniinipitoisuutta ja sukupuolijakaumaa (sukupuolten välistä suhdetta), jotka määritetään sukupuolirauhasten histologian perusteella.
Emergence
Sukupuolirauhasten histopatologia (oosyyttien ja spermatogeneettisten solujen arviointi ja määritys) on valinnaista.