natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Normal laboratory equipment is required, specifically the following:
Näihin maa-ainesnäytteisiin lisätään ruokaa vain testin alussa mikrobien toiminnan helpottamiseksi.
drying cabinet;
Ruokaa lisätään yhtä paljon kuin testiviljelmiin.
stereomicroscope;
Testin aikana näihin astioihin ei ole tarpeen enää lisätä ruokaa.
pH-meter and photometer;
Ruokinta
suitable accurate balances;
Käytettävä ruoka on sellaista, jota änkyrimatopopulaatio voi käyttää ravinnokseen.
adequate equipment for temperature control;
Ruokintaan sopivaksi on todettu kaurahiutaleet, jotka suositellaan käsiteltäväksi autoklaavissa ennen käyttöä mikrobikontaminaation estämiseksi; myös kuumentamista voidaan käyttää.
adequate equipment for humidity control (not essential if exposure vessels have lids);
Ensimmäinen ruokinta tapahtuu sekoittamalla 50 mg jauhettuja kaurahiutaleita kussakin astiassa olevaan maa-ainekseen ennen matojen lisäämistä.
incubator or small room with air-conditioner;
Tämän jälkeen ruokaa annetaan viikoittain päivään 21 saakka.
tweezers, hooks or loops;
Päivänä 28 ruokintaa ei tehdä, sillä täysikasvuiset yksilöt on tässä vaiheessa poistettu, ja poikaset tarvitsevat tämän ajankohdan jälkeen melko vähän lisäruokaa.
photo basin.
Testin aikana ruokinta tapahtuu sijoittamalla 25 mg jauhettuja kaurahiutaleita maa-aineksen pinnalle niin varovasti, että madot eivät vahingoitu.
Preparation of the artificial soil
Sienten kasvun estämiseksi kaurahiutaleet peitetään pienellä määrällä maa-ainesta.
An artificial soil is used in this test (5)(7) with the following composition (based on dry weights, dried to a constant weight at 105 °C):
Jos kaikkea ruokaa ei syödä, annosta pienennetään.
10 % sphagnum peat, air-dried and finely ground (a particle size of 2 ± 1 mm is acceptable);
Testijärjestely pitoisuusalueen määritystestiä varten
it is recommended to check that a soil prepared with a fresh batch of peat is suitable for culturing the worms before it is used in a test;
Tarvittaessa pitoisuusalueen määritystesti toteutetaan esimerkiksi siten, että siinä on viisi testikemikaalipitoisuutta (0,1, 1,0, 10, 100 ja 1000 mg/kg maa-aineksen kuivapainoon nähden).
20 % kaolin clay (kaolinite content preferably above 30 %);
Jokaisesta käsittelystä riittää yksi rinnakkaisnäyte ja kontrolli.
approximately 0,3 to 1,0 % calcium carbonate (CaCO3, pulverised, analytical grade) to obtain a pH of 6,0 ± 0,5;
Pitoisuusalueen määritystestin kesto on kaksi viikkoa.
the amount of calcium carbonate to be added may depend principally on the quality/nature of the peat;
Testin lopussa arvioidaan matojen kuolleisuus.
approximately 70 % air-dried quartz sand (depending on the amount of CaCO3 needed), predominantly fine sand with more than 50 % of the particles between 50 and 200 microns.
Mato kirjataan kuolleeksi, jos se ei reagoi etupäähän annettuun mekaaniseen ärsytykseen.
It is advisable to demonstrate the suitability of an artificial soil for culturing the worms and for achieving the test validity criteria before using the soil in a definitive test.
Kuolleisuuden lisäksi voidaan kerätä muita tietoja, joista saattaa olla apua varsinaisessa testissä käytettävien pitoisuusalueiden valinnassa.
It is especially recommended to make such a check to ensure that the performance of the test is not compromised if the organic carbon content of the artificial soil is reduced, e.g. by lowering the peat content to 4-5 % and increasing the sand content accordingly.
Siksi on syytä kirjata muistiin muutokset täysikasvuisten yksilöiden käyttäytymisessä (esimerkiksi kyvyttömyys kaivautua maa-ainekseen tai makaaminen liikkumatta testiastian lasiseinämää vasten) ja morfologiassa (esimerkiksi avohaavat) sekä mahdollisten poikasten esiintyminen.
By such a reduction in organic carbon content, the possibilities of adsorption of test chemical to the soil (organic carbon) may be decreased and the availability of the test chemical to the worms may increase.
Viimeksi mainittu voidaan todeta lisäyksessä 6 kuvattua värjäysmenetelmää käyttämällä.
It has been demonstrated that Enchytraeus albidus can comply with the validity criteria on reproduction when tested in field soils with lower organic carbon content than mentioned above (e.g. 2,7 %) (15), and there is experience — though limited — that this can also be achieved in artificial soil with 5 % peat.
arvo voidaan todeta likimääräisesti laskemalla kuolleisuusdatan geometrinen keskiarvo.
When using natural soil in additional (e.g. higher tier) testing, the suitability of the soil and achieving the test validity criteria should also be demonstrated.
Kun pitoisuuden vaihteluväliä valitaan varsinaista testiä varten, lisääntymiselle aiheutuvat vaikutukset arvioidaan enintään 10-kertaisesti LC50-arvoa pienemmiksi.
The dry constituents of the soil are mixed thoroughly (e.g. in a large-scale laboratory mixer).
Tämä suhde on kuitenkin empiirinen, eikä välttämättä päde yksittäistapauksissa.
This should be done at least one week before starting the test.
Muista pitoisuusalueen määritystestissä tehdyistä havainnoista, kuten poikasten esiintymisestä, voi olla apua varsinaisessa testissä käytettävän testikemikaalin pitoisuusalueen tarkemmassa määrittämisessä.
The mixed soil should be stored for two days in order to equilibrate/stabilise the acidity.
arvon tarkkaa määrittämistä varten suositellaan, että testissä käytetään vähintään neljää rinnakkaisnäytettä jokaisesta testikemikaalin pitoisuudesta sekä riittävää määrää eri pitoisuuksia, jotta kyseisillä pitoisuuksilla saadaan aikaan vähintään neljä tilastollisesti merkittävää, toisistaan poikkeavaa keskimääräistä vastetta.
For the determination of pH a mixture of soil and 1 M potassium chloride (KCl) or 0,01 M calcium chloride (CaCl2) solution in a 1:5 ratio is used (see (16) and Appendix 3).
Jos käytössä on kontrolleja, käytetään vastaavaa määrää pitoisuuksia ja rinnakkaisnäytteitä.
If the soil is more acidic than the required range (see paragraph 11), it can be adjusted by addition of an appropriate amount of CaCO3.
Testijärjestely varsinaista lisääntymistestiä varten
If the soil is too alkaline it can be adjusted by the addition of more of the mixture, referred to in paragraph 11, but excluding the CaCO3.
Yhteistutkimuksen johdosta tehtyjen suositusten perusteella esitetään kolmea mahdollista testijärjestelyä (2):
The maximum water holding capacity (WHC) of the artificial soil is determined in accordance with procedures described in Appendix 2.
NOEC-arvoa määritettäessä testataan vähintään viisi pitoisuutta geometrisessa sarjassa.
One or two days before starting the test, the dry artificial soil is pre-moistened by adding enough de-ionised water to obtain approximately half of the final water content, that being 40 to 60 % of the maximum water holding capacity.
Jokaista testipitoisuutta kohti suositellaan neljää rinnakkaisnäytettä ja kahdeksaa kontrollia.
At the start of the test, the pre-moistened soil is divided into portions corresponding with the number of test concentrations (and reference chemical where appropriate) and controls used for the test.
Pitoisuudet on porrastettava kertoimella, joka saa olla enintään 1,8.
The moisture content is adjusted to 40-60 % of the maximum WHC by the addition of the test chemical solution and/or by adding distilled or de-ionised water (see paragraphs 19-21).
ECx-arvoa määritettäessä (esimerkiksi EC10, EC50) testataan vähintään viisi pitoisuutta, ja pitoisuudet on valittava siten, että ECx-arvo on kyseisellä pitoisuusalueella, jotta ECx saadaan interpoloimalla eikä ekstrapoloimalla.
The moisture content is determined at the beginning and at the end of the test (by drying to constant weight at 105 °C) and should be within the optimal range for the survival of the worms.
Jokaista testipitoisuutta kohti suositellaan vähintään neljää rinnakkaisnäytettä ja neljää kontrollirinnakkaisnäytettä.
A rough check of the soil moisture content can be obtained by gently squeezing the soil in the hand, if the moisture content is correct small drops of water should appear between the fingers.
Porrastuskerroin voi vaihdella ja olla enintään 1,8 odotetulla vaikutusalueella sekä yli 1,8 tätä suuremmilla ja pienemmillä pitoisuuksilla.
Selection and preparation of test animals
Yhdistetty lähestymistapa mahdollistaa sekä NOEC- että ECx-arvon määrittämisen.
The recommended test species is Enchytraeus albidus Henle 1837 (white potworm), a member of the family Enchytraeidae (order Oligochaeta, phylum Annelida).
Tällöin käytetään kahdeksaa käsittelypitoisuutta geometrisessa sarjassa.
E. albidus is one of the largest species of enchytraeids, with specimens of up to 35 mm in length being recorded (17)(18).
Jokaista käsittelyä kohti suositellaan neljää rinnakkaisnäytettä ja kahdeksaa kontrollia.
E. albidus has a world-wide distribution and is found in marine, freshwater and terrestrial habitats, mainly in decaying organic matter (seaweed, compost) and rarely in meadows (9).
Käytettävien täysikasvuisten matojen määrä astiaa kohti on 10 (ks. 23 kohta).
E. albidus is commercially available, as a fish food.
Viimeisen kerran ruokaa lisätään päivänä 21.
It should be checked whether the culture is contaminated by other, usually smaller, species (1) (19).
Päivänä 21 maa-ainesnäytteet tutkitaan varovasti käsin ja elävät täysikasvuiset madot todetaan ja lasketaan.
If contamination occurs, all worms should be washed with water in a petri dish.
Samalla kirjataan muistiin muutokset niiden käyttäytymisessä (esimerkiksi kyvyttömyys kaivautua maa-ainekseen tai makaaminen liikkumatta testiastian lasiseinämää vasten) ja morfologiassa (esimerkiksi avohaavat).
Large adult specimens of E. albidus should then be selected (using a stereomicroscope) to start a new culture and all other worms are discarded.
Tämän jälkeen kaikki täysikasvuiset poistetaan testiastioista ja testimaa-aineksesta.
E. albidus can be bred easily in a wide range of organic materials (see Appendix 4).
Jos testimaa-ainekseen on tuotettu munakoteloita, kotelot sisältävää maa-ainesta inkuboidaan vielä kolme viikkoa samoissa testiolosuhteissa, mutta ruokinta tehdään vain päivänä 35 (jolloin kuhunkin astiaan annostellaan 25 mg jauhettuja kaurahiutaleita).
The life-cycle of E. albidus is short since maturity is reached between 33 days (at 18 °C) and 74 days (at 12 °C) (1).
Kuuden viikon kuluttua vastakuoriutuneet madot lasketaan.
Only cultures that have been kept without problems in the laboratory for at least 5 weeks (one generation) will be used for the test.
Suositeltava menetelmä on rose bengal -värjäykseen (ks. lisäys 6) perustuva, mutta myös muut märkäerottamiseen (ei lämpöerottamiseen) perustuvat tekniikat ja kelluttaminen (ks. lisäys 6) on todettu sopiviksi (4), (10), (11), (20).
Other species of the Enchytraeus genus are also suitable, e.g. E. buchholzi Vejdovsky 1879 or E. crypticus Westheide & Graefe 1992 (see Appendix 5).
Rose bengal -värjäystä suositellaan siksi, että suspendoituneiden savihiukkasten aikaansaama sameus voi haitata märkäerottamista maa-ainessubstraatista.
If other species of Enchytraeus are used, they must be clearly identified and the rationale for the selection of the species should be reported.
Jos pitoisuusalueen määritystestissä ei havaita vaikutuksia suurimmalla pitoisuudella (esimerkiksi 1000 mg/kg), lisääntymistesti voidaan toteuttaa raja-annostestinä testipitoisuudella 1000 mg/kg, millä voidaan osoittaa, että NOEC-arvo lisääntymiselle on tätä pitoisuutta suurempi.
The animals used in the tests are adult worms.
Testin yhteenveto ja aikataulu
They should have eggs (white spots) in the clitellum region, and they should be approximately the same size (about 1 cm long).
Testin vaiheet voidaan tiivistää seuraavasti:
Synchronisation of the breeding culture is not necessary.
Aika
If the enchytraeids are not bred in the same soil type and under the conditions (including feeding) used for the final test they must be acclimatised for at least 24 hours and up to three days.
Päivä –7 tai aiemmin
A larger number of adults than that needed for performing the test should initially be acclimatised to allow scope for rejection of damaged or otherwise unsuitable specimens.
Keinomaan valmistus (kuivien ainesosien sekoitus)
At the end of the acclimatisation period, only worms containing eggs and exhibiting no behavioural abnormalities (e.g. trying to escape from the soil) are selected for the test.
Päivä –5
The worms are carefully removed using jeweller's tweezers, hooks or loops and placed in a petri dish containing a small amount of fresh water.
Keinomaan pH-arvon tarkistaminen
Reconstituted fresh water as proposed in Chapter C.20 of this Annex (Daphnia magna Reproduction Test) is preferred for this purpose since de-ionised, de-mineralised or tap water could be harmful to the worms.
Maan enimmäisvedenpidätyskyvyn mittaus
The worms are inspected under a stereomicroscope and any that do not contain eggs are discarded.
Päivät –5… –3
Care is taken to remove and discard any mites or springtails that might have infected the cultures.
Matojen lajittelu totuttelua varten
Healthy worms not used for the test are returned to the stock culture.
Päivät –3… 0
Preparation of test concentrations
Matojen annetaan tottua vähintään 24 tunnin ajan
Test chemical soluble in water
Päivä –1
A solution of the test chemical is prepared in deionised water in a quantity sufficient for all replicates of one test concentration.
Keinomaan esikostuttaminen ja jakaminen eriin
It is recommended to use an appropriate quantity of water to reach the required moisture content, i.e. 40 to 60 % of the maximum WHC (see paragraph 13).
Päivä 0
Each solution of test chemical is mixed thoroughly with one batch of pre-moistened soil before being introduced into the test vessel.
Kantaliuosten valmistaminen
Test chemical insoluble in water
Testikemikaalin applikointi
For chemicals insoluble in water but soluble in organic solvents, the test chemical can be dissolved in the smallest possible volume of a suitable vehicle (e.g. acetone).
Testisubstraatin punnitseminen testiastioihin
Only volatile solvents should be used.
Ruoan annostelu
The vehicle is sprayed on or mixed with a small amount, for example 2,5 g, of fine quartz sand.
Matojen siirtäminen astiaan
The vehicle is eliminated by evaporation under a fume hood for at least one hour.
Maa-aineksen pH-arvon ja kosteuspitoisuuden mittaaminen
This mixture of quartz sand and test chemical is added to the pre-moistened soil and thoroughly mixed after adding an appropriate amount of de-ionised water to obtain the moisture required.
Päivä 7
The final mixture is introduced into the test vessels.
Maa-aineksen kosteuspitoisuuden tarkistaminen
For chemicals that are poorly soluble in water and organic solvents, the equivalent of 2,5 g of finely ground quartz sand per test vessel is mixed with the quantity of test chemical to obtain the desired test concentration.
Ruokinta
This mixture of quartz sand and test chemical is added to the pre-moistened soil and thoroughly mixed after adding an appropriate amount of de-ionised water to obtain the required moisture content.
Päivä 14
The final mixture is divided between the test vessels.
Täysikasvuisten yksilöiden kuolleisuuden toteaminen
The procedure is repeated for each test concentration and an appropriate control is also prepared.
Poikasten lukumäärän arviointi
Chemicals should not normally be tested at concentrations higher than 1000 mg/kg dry mass of soil.
Päivä 21
Testing at higher concentrations may however be required in accordance with the objectives of a specific test.
Täysikasvuisten käyttäytymisen tarkkaileminen
PERFORMANCE OF THE TESTS
Täyskasvuisten poistaminen
Test groups and controls
Päivä 28
For each test concentration, an amount of test soil corresponding to 20 g dry weight is placed into the test vessel (see paragraphs 19-21).
Ei ruokintaa
Controls, without the test chemical, are also prepared.
Päivä 35
Food is added to each vessel in accordance with procedures described in paragraph 29.
Päivä 42
Ten worms are randomly allocated to each test vessel.
Poikasten laskenta
The worms are carefully transferred into each test vessel and placed on the surface of the soil using, for example, jeweller's tweezers, hooks or loops.
Tulosten käsittely
The number of replicates for test concentrations and for controls depends on the test design used (see paragraph 34).
Lisäyksessä 7 olevaa yhteenvetoa lukuun ottamatta tähän testimenetelmään ei kuulu tarkoin määriteltyä tilastollista menetelmää testitulosten analysointia varten.
The test vessels are positioned randomly in the test incubator and these positions are re-randomised weekly.
Pitoisuusalueen määritystestin keskeinen tutkittava ominaisuus on kuolleisuus.
If a vehicle is used for application of the test chemical, one control series containing quartz sand sprayed or mixed with solvent should be run in addition to the test series.
Muutokset käyttäytymisessä (esimerkiksi kyvyttömyys kaivautua maa-ainekseen tai makaaminen liikkumatta testiastian lasiseinämää vasten) ja morfologiassa (esimerkiksi avohaavat) sekä mahdollisten poikasten esiintyminen on kuitenkin myös syytä kirjata muistiin.
The solvent or dispersant concentration should be the same as that used in the test vessels containing the test chemical.
arvo määritetään normaalisti tilastollista koestusta (21) tai logistista regressiota käyttämällä.
A control series containing additional quartz sand (2,5 g per vessel) should be run for chemicals requiring administration in accordance with the procedures described in paragraph 21.
Tapauksissa, joihin tämä analyysimenetelmä ei sovellu (esimerkiksi silloin, kun osittaista kuolleisuutta havaitaan alle kolmessa pitoisuudessa), voidaan kuitenkin käyttää muita menetelmiä.
The test temperature is 20 ± 2 °C.
Näitä ovat esimerkiksi liukuva keskiarvo (22), viritetty Spearmanin ja Kärberin menetelmä (23) tai yksinkertainen interpolointi (esimerkiksi LC0:n ja LC100:n geometrinen keskiarvo laskettuna LC0:n neliöjuuresta kerrottuna LC100:lla).
To discourage worms from escaping from the soil, the test is carried out under controlled light-dark cycles (preferably 16 hours light and 8 hours dark) with illumination of 400 to 800 lux in the area of the test vessels.
Varsinaisessa testissä tutkittava ominaisuus on hedelmällisyys eli tuotettujen poikasten lukumäärä.
In order to check the soil humidity, the vessels are weighed at the beginning of the test and thereafter once a week.
Pitoisuusalueen määritystestin tavoin kaikki muut merkit kemikaalin vaarallisuudesta on kuitenkin kirjattava loppuraporttiin.
Weight loss is replenished by the addition of an appropriate amount of deionised water.
Tilastollinen analyysi edellyttää, että lisääntymisestä lasketaan aritmeettinen keskiarvo ja keskihajonta kutakin käsittelyä ja kontrollia kohti.
It should be noted that loss of water can be reduced by maintaining a high air-humidity (> 80 %) in the test incubator.
Varianssianalyysiä tehtäessä keskihajonta s ja vapausaste df voidaan korvata yhdistetyllä varianssianalyysistä saadulla varianssiestimaatilla ja sen vapausasteilla sillä ehdolla, että varianssi ei ole riippuvainen pitoisuudesta.
The moisture content and the pH, should be measured at the beginning and the end of both the range-finding test and the definitive test.
Tässä tapauksessa käytetään kontrollin ja käsittelyiden yksinkertaisia variansseja.
Measurements should be made in control and treated (all concentrations) soil samples prepared and maintained in the same way as the test cultures but not containing worms.
Kaupalliset tilasto-ohjelmistot laskevat nämä arvot yleensä käyttämällä astiakohtaisia tuloksia rinnakkaisnäytteinä.
Food should only be added to these soil samples at the start of the test to facilitate microbial activity.
Jos negatiivisista kontrolleista ja liuotinkontrolleista saadun datan yhdistäminen vaikuttaa järkevämmältä kuin testaaminen johonkin niistä verraten, ne on testattava, jotta voidaan todeta, etteivät ne eroa toisistaan merkittävästi (sopivista testeistä ks. 45 kohta ja lisäys 7).
The amount of food added should be the same as that added to the test cultures.
Muut tilastolliset testit ja interferenssi riippuvat siitä, ovatko rinnakkaisnäytteiden arvot normaalijakaumalla ja varianssiin nähden homogeenisia.
It is not necessary to add further food to these vessels during the test.
NOEC-estimointi
Feeding
Huomiota kiinnitetään ennen kaikkea testien voimaan.
A food capable of maintaining the enchytraeid population can be used.
Kun halutaan arvioida, noudattaako data suurin piirtein normaalijakaumaa, hyödynnetään esimerkiksi aiemmista yhteistutkimuksista saatua tietoa tai muuta historiallista tietoa.
Rolled oats, preferably autoclaved before use to avoid microbial contamination (heating is also appropriate), have been found to be a suitable feeding material.
Kriittisempi on varianssin homogeenisuus (homoskedastisuus).
Food is first provided by mixing 50 mg of ground rolled oats with the soil in each vessel before introducing the worms.
Muunnosten täytyy kuitenkin perustua historiallisesta tiedosta saatuun kokemukseen tutkittavana olevan datan asemasta.
Thereafter, food is supplied weekly up to Day 21.
Jos data on homogeenista, tehdään useita t-testejä, esimerkiksi Watsonin-Williamsin testi (α = 0,05, yksisuuntainen) (24), (25) tai joissakin tapauksissa Dunnettin testi (26), (27).
Feeding is not carried out on Day 28 since the adults have been removed at this stage and the juvenile worms need relatively little additional food beyond this point.
On syytä huomata, että jos rinnakkaisnäytteitä ei ole yhtä paljon, taulukon t-arvoja on korjattava Dunnettin ja Williamsin esittämillä tavoilla.
Feeding during the test comprises 25 mg of ground rolled oats per vessel placed carefully on the surface of the soil so as to avoid injuring the worms.
Jos homoskedastisuudessa on poikkeamia, voi olla tarpeen tutkia tarkemmin mahdollisia vaikutuksia variansseihin, jotta saadaan selville, voiko t-testejä käyttää testien voimasta tinkimättä (28).
In order to reduce fungal growth, the oats flakes should be buried in the soil by covering with small amounts of soil.
Vaihtoehtoisesti voidaan käyttää moninkertaista U-testiä, esimerkiksi Bonferroni-U-testiä Holmin mukaan (29).
If food remains uneaten the ration should be reduced.
Jos datassa ilmenee heteroskedastisuutta, mutta se vastaa muutoin taustalla olevaa monotonista annosvastetta, voidaan käyttää myös muuta parametritonta testiä, esimerkiksi Jonckheere-Terprstran testiä (30), (31) tai Shirleyn testiä (32), (33).
Design for the range-finding test
Viimeksi mainitut ovat yleensä suositeltavampia kuin t-testit, joissa varianssit ovat heterogeenisiä.
When necessary, a range-finding test is conducted with, for example, five test chemical concentrations of 0,1, 1,0, 10, 100, and 1000 mg/kg (dry weight of soil).
(Ks. myös lisäyksen 7 kaavio.)
One replicate for each treatment and control is sufficient.
Jos raja-arvotesti on tehty ja parametritestimenetelmien edellytykset (yleensä homogeenisuus) täyttyvät, voidaan käyttää parittaista Studentin t-testiä tai muussa tapauksessa Mann-Whitneyn U-testimenetelmää (29).
The duration of the range-finding test is two weeks.
ECx-pitoisuuden arviointi
At the end of the test, mortality of the worms is assessed.
Kaikkia ECx-arvoja laskettaessa käsittelykohtaisia keskiarvoja käytetään regressioanalyysissa (lineaarisessa tai epälineaarisessa) sen jälkeen, kun on muodostettu sopiva annosvastefunktio.
A worm is recorded as dead if it has no reaction to a mechanical stimulus at the anterior end.
Kun matojen kasvu on jatkuva vaste, ECx-arvot voidaan estimoida sopivalla regressioanalyysillä (35).
Additional information to mortality may also be useful in deciding on the range of concentrations to be used in the definitive test.
Sopivia funktioita dikotomisia tietoja varten (kuolleisuus/eloonjääminen ja tuotettujen jälkeläisten määrä) ovat tavanomaiset S-funktio, logistinen funktio tai Weibullin funktio, jotka sisältävät 2–4 parametria, joista osalla voidaan mallintaa myös hormeettisia vasteita.