natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Rearing
mikä tahansa aine tai seos, jota testataan käyttämällä tätä testimenetelmää.
Righting Response
B.57.
Gait Abnormalities
H295R-STEROIDOGENEESIÄ KOSKEVA TESTI
Landing Foot Splay
Tämä testimenetelmä vastaa OECD:n testiohjetta 456 (2011).
Hindlimb Grip Strength
H295R-testillä on tarkoitus tunnistaa vierasaineet, joiden kohteena ovat ne endogeeniset komponentit, jotka muodostavat solunsisäisen biokemiallisen reitin, joka alkaa reaktiosarjalla kolesterolista E2:n ja/tai T:n tuottamiseen.
Bizarre Behaviour
H295R-testillä ei ole tarkoitus tunnistaa kemikaaleja, jotka vaikuttavat steroidogeneesiin hypotalamusta, aivolisäkettä ja sukupuolirauhasia koskevan akselin (HPG-akseli) vaikutusten vuoksi.
Chemical
On tehty tutkimuksia, joissa solulinjoja käytetään havaitsemaan vaikutuksia tiettyihin entsyymeihin ja reaktion välituotteina oleviin hormoneihin, kuten progesteroniin (2).
A substance or a mixture.
Tässä testimenetelmässä käytetyt määritelmät ja lyhenteet määritellään liitteessä.
Test Chemical
Yksityiskohtainen testiprotokolla, johon sisältyvät tiedot siitä, miten valmistetaan liuoksia, viljellään soluja ja toteutetaan testin eri aspekteja, on saatavilla OECD:n asiakirjassa ’Multi-Laboratory Validation of the H295R Steroidogenesis Assay to Identify Modulators of Testosterone and Estradiol Production’ olevassa liitteessä I–III (4).
Any substance or mixture tested using this test method.
Sukupuolisteroidihormonien biosynteesiin liittyy viisi erilaista entsyymiä, jotka katalysoivat kuusi erilaista reaktiota.
B.57 H295R STEROIDOGENESIS ASSAY
Kolesterolin entsymaattinen muuntaminen pregnonoloniksi sytokromin P450 (CYP) kolesterolin sivuketjun pilkkovalla entsyymillä (CYP11A) muodostaa ensimmäisen vaiheen sarjassa biokemiallisia reaktioita, jotka johtavat steroidien lopputuotteiden synteesiin.
This test method is equivalent to OECD Test Guideline (TG) 456 (2011).
Seuraavan kahden reaktion järjestyksestä riippuen steroidogeeninen reitti jakaantuu kahteen reittiin, Δ5-hydroksisteroidi-reittiin ja Δ4-ketosteroidi-reittiin, jotka lähenevät toisiaan androsteenidionin tuottamiseksi (kuva 1).
The OECD initiated a high-priority activity in 1998 to revise existing, and to develop new, test guidelines for the screening and testing of potential endocrine disrupting chemicals.
Androstenedioni muunnetaan testosteroniksi 17β-hydroksisteroididehydrogenaasin välityksellä (17β-HSD).
The 2002 OECD Conceptual Framework for Testing and Assessment of Endocrine Disrupting Chemicals comprises five levels, each level corresponding to a different level of biological complexity (1).
Testosteroni on reaktion välituotteena oleva hormoni ja lopputuote.
The in vitro H295R Steroidogenesis Assay (H295R) described in this test method utilises a human adreno-carcinoma cell line (NCI-H295R cells) and constitutes a level 2 “in vitro assay, providing mechanistic data”, to be used for screening and prioritisation purposes.
Steroidogeenisen reitin entsyymi on aromataasi, jäljempänä ’CYP19’.
The goal of the assay is to provide a YES/NO answer with regard to the potential of a chemical to induce or inhibit the production of T and E2;
CYP17:n lyaasiaktiivisuuden spesifiys eroaa substraattina toimivien välituotteiden osalta lajien välillä.
however, quantitative results may be obtained in some cases (see paragraphs 53 and 54).
Ihmisellä entsyymi suosii Δ5-hydroksisteroidi-reitin substraatteja, kuten pregnenoloni, ja rotilla Δ4-ketosteroidi-reitin substraatteja, kuten progesteroni (19).
The results of the assay are expressed as relative changes in hormone production compared with the solvent controls (SCs).
Tällaiset erot CYP17:n lyaasiaktiivisuudessa voivat selittää eräät lajiriippuvaiset erot reaktiossa kemikaaleihin, jotka muuttavat steroidogeneesiä in vivo -olosuhteissa (6).
The assay does not aim to provide specific mechanistic information concerning the interaction of the test chemical with the endocrine system.
H295-solujen on osoitettu vastaavan parhaiten aikuisen ihmisen lisämunaisen entsyymin ilmentymistä ja steroidituotannon kaavaa (20), mutta niiden tiedetään ilmentävän entsyymejä sekä Δ5-hydroksisteroidi-reitillä että Δ4-ketosteroidi-reitillä androgeenisynteesiä varten (7)(11)(13)(15).
Research has been conducted using the cell line to identify effects on specific enzymes and intermediate hormones such as progesterone (2).
Streoidogeeninen reitti H295R-soluissa
Definitions and abbreviations used in this test method are described in the Appendix.
Entsyymit on kirjoitettu kursiivilla, hormonit on lihavoitu ja nuolet osoittavat synteesin suunnan.
A detailed protocol including instructions on how to prepare solutions, cultivate cells and perform various aspects of the test is available as Appendix I-III to the OECD document “Multi-Laboratory Validation of the H295R Steroidogenesis Assay to Identify Modulators of Testosterone and Estradiol Production” (4).
Harmaa tausta osoittaa kortikosteroidin reitit/tuotteet.
Five different enzymes catalysing six different reactions are involved in sex steroid hormone biosynthesis.
Sukupuolisteroidireitit/tuotteet on ympyröity.
Enzymatic conversion of cholesterol to pregnenolone by the cytochrome P450 (CYP) cholesterol side-chain cleavage enzyme (CYP11A) constitutes the initial step in a series of biochemical reactions that culminate in synthesis of steroid end-products.
CYP = sytokromi P450;
Depending upon the order of the next two reactions, the steroidogenic pathway splits into two paths, the Δ5-hydroxysteroid pathway and Δ4-ketosteroid pathway, which converge in the production of androstenedione (Figure 1).
HSD = hydroksisteroididehydrogenaasi;
Androstenedione is converted to testosterone (T) by 17β-hydroxysteroid dehydrogenase (17β-HSD).
DHEA = dehydroepiandrosteroni.
Testosterone is both an intermediate and end-hormone product.
Ihmisen adreno-karsinooma-solulinja on hyödyllinen in vitro -malli, jolla selvitetään steroidihormonien synteesin vaikutuksia (2)(7)(8)(9)(10).
In the male, T can be converted to dihydrotestosterone (DHT) by 5α-reductase, which is found in the cellular membranes, nuclear envelope, and endoplasmic reticulum of target tissues of androgenic action such as prostate and seminal vesicles.
H295R-solulinja ilmentää geenejä, jotka koodaavat kaikkia steroidogeneesin pääasiallisia entsyymejä, jotka on esitetty edellä (11)(15) (kuva 1).
DHT is significantly more potent as an androgen than T and is also considered an end-product hormone.
Tämä on ainutlaatuista, koska näiden geenien in vivo ilmiasu on kudos, ja se on kehitysvaihespesifinen, ja tavallisesti yhdessäkään kudoksessa tai kehitysvaiheessa ei ilmene kaikkia steroidogeneesiin osallistuvia geenejä (2).
The H295R assay does not measure DHT (see paragraph 10).
H295R-soluilla on ihmisen sikiön erilaistumattomien lisämunuaissolujen fysiologiset ominaisuudet (11).
The enzyme in the steroidogenic pathway which converts androgenic chemicals into oestrogenic chemicals is aromatase (CYP19).
Nämä solut ovat ainutlaatuinen in vitro -järjestelmä, koska niillä on mahdollista tuottaa kaikkia aikuisen lisämunuaisten kuoressa ja sukurauhasissa olevia steroidihormoneja.
CYP19 converts T into 17β-oestradiol (E2) and androstenedione into oestrone.
Niillä voidaan siten testata vaikutuksia kumpaankin kortikosteroidin synteesiin ja sukupuolisteroidihormonien, kuten androgeenien ja estrogeenien tuotantoon, vaikka testi validoitiin ainoastaan T:n ja E2:n havainnointia varten.
E2 and T are considered end-product hormones of the steroidogenic pathway.
Testijärjestelmässä kirjatut muutokset, jotka liittyvät T:n ja E2:n tuotannon muutoksiin, voivat olla tulos testikemikaalien hyvin erilaisista vuorovaikutuksista steroidogeenisten toimintojen kanssa, joita ilmentävät H295-solut.
The specificity of the lyase activity of CYP17 differs for the intermediate substrates among species.
Näihin sisältyvät steroidihormonien tuotantoon, muuntamiseen tai poistamiseen osallistuvien entsyymien ilmentymisen, synteesin tai toiminnan modulointi (12)(13)(14).
In the human, the enzyme favours substrates of the Δ5-hydroxysteroid pathway (pregnenolone), whereas substrates in the Δ4-ketosteroid pathway (progesterone) are favoured in the rat (19).
Hormonituotannon inhibitio voi johtua suorasta kompetitiivisesta sitoutumisesta entsyymiin reitillä, kofaktoreiden, kuten NADPH:n (nikotiiniamidiadeniinidinukleotidifosfaatti) ja cAMP:in (syklinen adenosiinimonofosfaatti) vaikutuksesta ja/tai steroidiaineenvaihdunnan lisääntymisestä taikka tiettyjen entsyymien geenien ilmentymisen vaimenemisesta steroidogeneesiä koskevalla reitillä.
Such differences in the CYP17 lyase activity may explain some species-dependent differences in response to chemicals that alter steroidogenesis in vivo (6).
Vaikka inhibitio voi olla hormonituotannon suoraan ja epäsuoraan prosesseihin liittyvä toiminta, induktio liittyy siihen tyypillisesti epäsuorasti, eli se vaikuttaa kofaktoreiden, kuten NADPH:n ja cAMP:n välityksellä (kuten forskoliinin tapauksessa), steroidiaineenvaihduntaa alentamalla (13) ja/tai se voi johtaa steroidogeenisen geenin ilmentymän ylössäätymiseen.
The H295 cells have been shown to most closely reflect human adult adrenal enzyme expression and steroid production pattern (20), but are known to express enzymes for both the Δ5-hydroxysteroid and Δ4-ketosteroid pathways for androgen synthesis (7) (11) (13) (15).
H295R-testillä on useita etuja:
Steroidogenic pathway in H295R cells.
sillä voidaan havaita T:n ja E2:n tuotannon lisääntyminen ja vähentyminen
Enzymes are in italics, hormones are bolded and arrows indicate the direction of synthesis.
sen perusteella voidaan arvioida suoraan kemikaalin mahdollista vaikutusta solujen elinkykyyn/sytotoksisuuteen.
Gray background indicates corticosteroid pathways/products.
Tämä on tärkeä seikka, koska tällä voidaan todeta ero sytotokisuudesta johtuvien vaikutusten ja niiden vaikutusten välillä, jotka johtuvat suorasta vuorovaikutuksesta kemikaaleihin, joilla on steroidogeeninen reitti.
Sex steroid pathways/products are circled.
Tämä ei ole mahdollista kudosten eksplanttien järjestelmissä, jotka koostuvat useista solutyypeistä, joiden herkkyys ja toiminta vaihtelevat
CYP = cytochrome P450;
se ei edellytä eläinten käyttöä
HSD = hydroxysteroid dehydrogenase;
H295R-solulinja on saatavissa kaupallisesti.
DHEA = dehydroepiandrosterone.
Testin pääasialliset rajoitukset ovat seuraavat:
The human H295R adreno-carcinoma cell line is a useful in vitro model for the investigation of effects on steroid hormone synthesis (2) (7) (8) (9) (10).
sen metabolointikyky on tuntematon, mutta se on luultavasti melko rajallinen;
The H295R cell line expresses genes that encode for all the key enzymes for steroidogenesis noted above (11) (15) (Figure 1).
tästä syystä kemikaalit, jotka edellyttävät metabolista aktivointia, jätetään todennäköisesti pois tästä testistä
This is a unique property because in vivo expression of these genes is tissue and developmental stage-specific with typically no one tissue or one developmental stage expressing all of the genes involved in steroidogenesis (2).
koska H295R on peräisin lisämunuaisen kudoksesta, siinä on entsyymejä, jotka voivat tuottaa gluko- ja mineraalikortikoideja sekä sukupuolihormoneja;
H295R cells have physiological characteristics of zonally undifferentiated human foetal adrenal cells (11).
tästä syystä gluko- ja mineraalikortikoiden tuotannon vaikutus voi vaikuttaa testissä havaittavaan T:n ja E2:n tasoon
The cells represent a unique in vitro system in that they have the ability to produce all of the steroid hormones found in the adult adrenal cortex and the gonads, allowing testing for effects on both corticosteroid synthesis and the production of sex steroid hormones such as androgens and oestrogens, although the assay was validated only to detect T and E2.
sillä ei mitata DHT:tä ja tästä syystä ei oleteta, että sillä havaitaan kemikaaleja, jotka estävät 5-alfa-reduktaasin, missä tapauksessa voidaan käyttää Hershbergerin testiä (16)
Changes recorded by the test system in the form of alteration in the production of T and E2 can be the result of a multitude of different interactions of test chemicals with steroidogenic functions that are expressed by the H295R cells.
H295R-testillä ei tunnisteta kemikaaleja, jotka häiritsevät steroidogeneesiä vaikuttamalla hypotalamusta, aivolisäkettä ja sukupuolirauhasia koskevaan akseliin (HPG-akseli), koska tätä voidaan tutkia ainoastaan leikkaamattomilla eläimillä.
These include modulation of the expression, synthesis or function of enzymes involved in the production, transformation, or elimination of steroid hormones (12) (13) (14).
Testin tarkoituksena on havaita kemikaalit, jotka vaikuttavat T:n ja E2:n tuotantoon.
Inhibition of hormone production can be due to direct competitive binding to an enzyme in the pathway, impact on co-factors such as NADPH (Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate) and cAMP (cyclic Adenosine Monophosphate), and/or increase in steroid metabolism or suppression of gene expression of certain enzymes in the steroidogenesis pathway.
Testosteroni on myös reaktion välituote E2:n tuotantoreitillä.
While inhibition can be a function of both direct or indirect processes involved with hormone production, induction is typically of an indirect nature, such as by affecting co-factors such as NADPH and cAMP (as in the case of forskolin), decreasing steroid metabolism (13), and or up-regulating steroidogenic gene expression.
Tällä testillä voidaan havaita kemikaalit, jotka yleensä inhiboivat tai indusoivat stereidogeneesin reitin entsyymejä.
The H295R assay has several advantages:
Testi tehdään yleensä vakiomuotoisissa soluviljelyolosuhteissa käyttämällä 24-kuoppalevyjä.
It allows for the detection of both increases and decreases in the production of both T and E2;
Testin suorittamiseen voidaan käyttää vaihtoehtoisesti muita levykokoja;
It permits the direct assessment of the potential impact of a chemical on cell viability/cytotoxicity.
istutusta ja koeolosuhteita olisi kuitenkin vastaavasti mukautettava, jotta suorituskriteereitä noudatetaan.
This is an important feature as it allows for the discrimination between effects that are due to cytotoxicity from those due to the direct interaction of chemicals with steroidogenic pathways, which is not possible in tissue explants systems that consist of multiple cell types of varying sensitivities and functionalities;
Soluja sopeutetaan monikuoppalevyillä 24 tunnin ajan, jonka jälkeen ne altistetaan 48 tunnin ajan testikemikaalin seitsemälle pitoisuudelle ainakin kolmena näytekappaleena.
It does not require the use of animals;
Liuotinta sekä hormonituotannon tunnettua inhibiittoria ja indusoijaa käytetään vakiokonsentraatiossa negatiivisena ja positiivisena kontrollina.
The H295R cell line is commercially available.
Altistusjakson jälkeen kasvatusliuos poistetaan kustakin kuopasta.
The principle limitations of the assay are as follows:
Kunkin kuopan solujen elinkykyä analysoidaan välittömästi kasvatusliuoksen poistamisen jälkeen.
Its metabolic capability is unknown but probably quite limited;
Hormonipitoisuus kasvatusliuoksessa voidaan mitata käyttäen erilaisia menetelmiä, kuten kaupallisesti saatavilla olevia hormonimittaussarjoja ja/tai instrumenttitekniikoita, kuten nestekromatografiaa-massaspektrometriaa (LC-MS).
therefore, chemicals that need to be metabolically activated will probably be missed in this assay.
Tiedot ilmaistaan kerrannaismuutoksena suhteessa liuotinkontrolliin ja alhaisimman havaittavan vaikutuksen aiheuttavaan pitoisuuteen (LOEC).
Being derived from adrenal tissue, the H295R possesses the enzymes capable of producing the gluco-, and mineral-corticoids as well as the sex hormones;
Jos testi on negatiivinen, korkein testattu pitoisuus ilmoitetaan pitoisuutena, joka ei aiheuta havaittavaa vaikutusta (NOEC).
therefore, effects on the production of gluco-, and mineral corticoids could influence the levels of T and E2 observed in the assay.
Päätelmän siitä, vaikuttaako kemikaali steroidogeneesiin, olisi perustuttava vähintään kahteen toisistaan riippumattomaan testiin.
It does not measure DHT and, therefore, would not be expected to detect chemicals that inhibit 5α-reductase in which case the Hershberger assay (16) can be used.
Ensimmäinen testi voi olla haarukointitesti, jonka jälkeen pitoisuuksia mukautetaan tarvittaessa toista ja kolmatta testiajoa varten, jos havaitaan liukoisuutta tai sytotoksisuutta koskevia ongelmia tai jos kemikaalin aktiivisuus vaikuttaa olevan testattavien pitoisuuksien sarjan loppupäässä.
The H295R assay will not detect chemicals that interfere with steroidogenesis by affecting the hypothalamic-pituitary-gonadal axis (HPG) axis as this can only be studied in intact animals.
VILJELMÄÄ KOSKEVA MENETTELY
The purpose of the assay is the detection of chemicals that affect T and E2 production.
Solulinja
T is also an intermediate in the pathway to produce E2.
NCI-H295R-solut ovat kaupallisesti saatavilla American Type Culture Collections -organisaatiolta (ATCC) materiaalin siirtosopimuksen allekirjoittamisen jälkeen [14].
The assay can detect chemicals that typically inhibit or induce the enzymes of the steroidogenesis pathway.
Johdanto
The assay is usually performed under standard cell culture conditions in 24-well culture plates.
Koska E2:n kapasiteetti tuottaa soluja muuttuu iän/pasaasien myötä (2), solut olisi viljeltävä erityisen menetelmän perusteella, ennen kuin niitä käytetään.
Alternatively, other plate sizes can be used for conducting the assay;
Samalla olisi kirjattava pasaasinumero (jakamiskertojen määrä), sen jälkeen kun solut sulatetaan, sekä pasaasinumero, jolloin solut pakastettiin ja säilöttiin nestemäiseen typpeen.
however, seeding and experimental conditions should be adjusted accordingly to maintain adherence to the performance criteria.
Ensimmäinen numero osoittaa todellisen solun pasaasin numeron ja toinen numero sen pasaasin numeron, jolloin solut pakastettiin ja säilöttiin.
After an acclimation period of 24 h in multi-well plates, cells are exposed for 48 h to seven concentrations of the test chemical in at least triplicate.
Esimerkiksi solut, jotka pakastettiin pasaasin viisi jälkeen ja sulatettiin ja jaettiin sen jälkeen kolme kertaa (4 jakamiskertaa, jolloin juuri sulatetut solut lasketaan jakamiskerraksi 1), ennen kuin ne viljeltiin uudelleen, merkittäisiin pasaasinumerolla 4.5.
Solvent and a known inhibitor and inducer of hormone production are run at a fixed concentration as negative and positive controls.
Numerointijärjestelmää koskeva esimerkki sisältyy validointiraportin liitteeseen I (4).
At the end of the exposure period, the medium is removed from each well.
Kasvatusliuoksen kantaliuosta käytetään pohjana lopulliselle kasvatusliuokselle ja pakastusliuokselle.
Cell viability in each well is analysed immediately after removal of medium.
Lopullinen kasvatusliuos on tarpeellinen komponentti solujen viljelyssä.
Concentrations of hormones in the medium can be measured using a variety of methods including commercially available hormone measurement kits and/or instrumental techniques such as liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS).
Pakastusliuos on suunniteltu niin, että solut voidaan pakastaa ilman, että niille aiheutuu vaikutuksia pitkän aikavälin varastoinnista.
Data are expressed as fold change relative to the solvent control and the Lowest-Observed-Effect-Concentration (LOEC).
Seeruminkorviketta (Nu-serum) (tai vastaavaa seerumia, jolla on samanlaiset ominaisuudet ja jonka on osoitettu tuottavan tietoa, joka on testin suoritusta ja laadunvalvontaa koskevien edellytysten mukainen), joka on lopullisen kasvatusliuoksen ainesosa, olisi analysoitava ennen käyttöä T:n ja E2:n taustapitoisuuksien osalta.
If the assay is negative, the highest concentration tested is reported as the No-Observed-Effect-Concentration (NOEC).
Näiden liuosten valmistusta kuvataan validointiraportin liitteessä II (4).
Conclusions regarding the ability of a chemical to affect steroidogenesis should be based on at least two independent test runs.
Sen jälkeen, kun alkuperäisen ATCC-sarjan H295R-soluviljelmä otetaan käyttöön, soluja olisi kasvatettava viiden pasaasin ajan (eli solut jaetaan neljä kertaa).
The first test run may function as a range finding run with subsequent adjustment of concentrations for runs 2 and 3, if applicable, if solubility or cytotoxicity problems are encountered or the activity of the chemical seems to be at the end of the range of concentrations tested.
Pasaasin viisi solut pakastetaan nestemäiseen typpeen varastointia varten.
CULTURE PROCEDURE
Ennen kuin solut pakastetaan, näyte edellisen pasaasin 4 soluista tehdään laadunvalvontalevyllä (ks. 36 ja 37 kohta), jotta varmistetaan, täyttävätkö hormonien perustuotanto ja positiivisen kontrollin kemikaalien vaste taulukossa 5 määritellyt testin laadunvalvontakriteerit.
Cell Line
H295R-solut on viljeltävä, pakastettava ja säilytettävä nestemäisessä typessä, jotta varmistetaan, että viljelyä ja käyttöä varten on aina pasaasiltaan ja iältään asianmukaisia soluja.
The NCI-H295R cells are commercially available from the American Type Culture Collections (ATCC) upon signing a Material Transfer Agreement (MTA) [14].
Pasaasien enimmäismäärä sen jälkeen, kun viljelyyn on otettua uusien [15] tai pakastettujen [16] solujen erä, jonka käyttö H295R-testissä on hyväksyttävää, ei saisi ylittää 10 kertaa.
Introduction
Esimerkiksi hyväksyttävä jakamiskerta pakastetusta erästä peräisin olevien solujen viljelmälle jakamiskerralla 5 olisi 4.5 aina jakamiskertaan 10.5 saakka.
Due to changes in the E2 producing capacity of the cells with increasing age/passages (2), cells should be cultured following a specific protocol before they are used and the number of passages since the cells were defrosted as well as the passage number at which the cells were frozen and placed in liquid nitrogen storage should be noted.
Näistä pakastetuista eristä kasvatettavien solujen osalta olisi noudatettava 19 kohdassa kuvattua menetelmää.
The first number indicates the actual cell passage number and the second number describes the passage number at which the cells were frozen and placed in storage.
Nämä solut olisi viljeltävä vielä ainakin neljän (4) pasaasin ajan (pasaasinumero 4.5), ennen kuin niitä käytetään testaukseen.
For example, cells that were frozen after passage five and defrosted and then were split three times (4 passages counting the freshly thawed cells as passage 1) after they were cultured again would be labelled passage 4.5.
Pakastetusta varastosta peräisin olevat kasvatettavat solut
An example of a numbering scheme is illustrated in Appendix I to the validation report (4).
Pakastetusta erästä kasvatettavia soluja koskevaa menettelyä käytetään, kun uusi erä soluja poistetaan nestemäisen typen varastosta viljelyä ja testausta varten.
Stock medium is used as the base for the supplemented and freezing mediums.
Tämän menettelyn yksityiskohtia kuvataan validointiraportin liitteessä III (4).
Supplemented medium is a necessary component for culturing cells.
Solut siirretään nestemäisen typen varastosta, ne sulatetaan nopeasti, sijoitetaan sentrifugiputkeen lopulliseen kasvatusliuokseen, sentrifugoidaan huoneenlämmössä, suspensoidaan jälleen lopulliseen kasvatusliuokseen ja siirretään soluviljelypulloon.
Freezing medium is specifically designed to allow for impact-free freezing of cells for long-term storage.
Kasvatusliuos pitäisi vaihtaa seuraavana päivänä.
Prior to use, Nu-serum (or a comparable serum of equal properties that has been demonstrated to produce data that meets the test performance and Quality Control (QC) requirements), which is a constituent of supplemented media, should be analysed for background T and E2 concentrations.
H295R-soluja kasvatetaan inkubaattorissa 37 °C:ssa ja ilman seoksessa johon sisältyy 5 % CO2:ta normaali-ilmanpaineessa.
The preparation of these solutions is described in Appendix II to the validation report (4).
Kasvatusliuos vaihdetaan 2–3 kertaa viikossa.
After initiation of an H295R cell culture from an original ATCC batch, cells should be grown for five passages (i.e.the cells are split 4 times).
Kun solujen konfluenssi on noin 85–90 %, niiden pitäisi jakautua.