natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Animals to be introduced into the Union which pass through an assembly centre must, within six days of arrival at the assembly centre, be loaded and dispatched directly to the border of the exporting country:
VIII Unionin alueelle tuotaviksi tarkoitetut, keräyskeskuksen kautta kulkevat eläimet on kuuden päivän kuluessa keräyskeskukseen saapumisesta lastattava ja kuljetettava suoraan viejämaan rajalle seuraavasti:
without coming into contact with cloven-hoofed animals other than animals which fulfil the health conditions established for the introduction of the relevant category of animal into the Union;
ilman, että ne joutuvat kosketuksiin sellaisten sorkkaeläinten kanssa, jotka eivät täytä kyseisen eläinluokan osalta tuonnille unionin alueelle asetettuja terveysedellytyksiä;
segregated into consignments so that no consignment contains both animals for breeding or production and animals for immediate slaughter;
ne on jaettuna lähetyksiin siten, että missään lähetyksessä ei ole samanaikaisesti jalostus- tai tuotantoeläimiä ja viipymättä teurastettaviksi tarkoitettuja eläimiä;
in transport vehicles or containers which have first been cleansed and disinfected with a disinfectant officially authorised in the exporting country as effective for the control of foot-and-mouth disease and which are so constructed that faeces, urine, litter or fodder cannot flow or fall out during transportation.
ne on kuljetettava kuljetusvälineissä tai konteissa, jotka on ensin puhdistettu ja desinfioitu desinfiointiaineella, joka on viejämaassa virallisesti hyväksytty suu- ja sorkkataudin tehokkaasti torjuvana desinfiointiaineena, ja jotka on varustettu siten, ettei niistä kuljetuksen aikana voi valua tai pudota ulosteita, virtsaa, kuivikkeita tai rehua.
Where the conditions for the export of animals to the Union require that a test is carried out within a specified period before loading, that period must include any period of assembly, up to six days, from the date of arrival of the animals at the approved assembly centre.
IX Kun unioniin vietäviä eläimiä koskevat vaatimukset edellyttävät testausta tietyssä määräajassa ennen lastausta, kyseiseen määräaikaan lasketaan kuuluvaksi enintään kuuden päivän pituinen keräysaika, joka alkaa eläinten saapumisesta hyväksyttyyn keräyskeskukseen.
The exporting third country shall determine the procedure for official supervision of approved assembly centres and shall ensure that such supervision is carried out.
Tiedot on saatettava säännöllisesti ajan tasalle.
The approved assembly centres must be regularly inspected by the competent authority of the third country in order to check that the requirements for approval set out in points I to XI continue to be fulfilled.
XI Viejänä toimivan kolmannen maan on määritettävä hyväksyttyihin keräyskeskuksiin sovellettavat viralliset valvontamenettelyt ja varmistettava, että valvontaa toteutetaan. XII Kolmannen maan toimivaltaisen viranomaisen on säännöllisesti tarkastettava hyväksytyt keräyskeskukset sen selvittämiseksi, täyttyvätkö I–XI kohdassa esitetyt hyväksynnälle asetetut vaatimukset edelleen.
If those inspections show that those conditions are no longer complied with, the approval of the centre must be suspended.
Jos tarkastuksissa ilmenee, että edellytykset eivät enää täyty, keskuksen hyväksyntä on peruutettava.
The approval may be restored only when the competent authority of the third country is satisfied that the centre fully complies with the conditions set out in points I to XI.
Hyväksyntä voidaan palauttaa ainoastaan, jos kolmannen maan toimivaltainen viranomainen pystyy varmistamaan, että keskus täyttää kaikki I–XI kohdassa esitetyt edellytykset.
Protocols for the standardisation of materials and testing procedures
materiaaleja ja testausmenettelyjä koskevat standardointiprotokollat
Tuberculosis (TBL)
Tuberkuloosi (TBL)
The single intradermal tuberculin test using bovine tuberculin shall be carried out according to Annex B to Directive 64/432/EEC.
Yksittäisessä nahansisäisessä tuberkuliinitutkimuksessa käytetään boviinituberkuliinia, ja se tehdään direktiivin 64/432/ETY liitteen B mukaisesti.
In the case of Suidae animals, the single intradermal tuberculin test using avian tuberculin shall be carried out according to Annex B to 64/432/EEC, except that the site of injection shall be the loose skin at the base of the ear.
Sikaeläinten heimon eläinten yksittäisessä nahanalaisessa tuberkuliinitutkimuksessa käytetään aviäärituberkuliinia, ja se tehdään direktiivin 64/432/ETY liitteen B mukaisesti, paitsi että pistopaikka on korvan tyven irtonainen nahka.
Brucellosis (Brucella abortus) (BRL)
Luomistauti eli bruselloosi (Brucella abortus) (BRL)
The serum agglutination test, complement fixation test, buffered brucella antigen test and enzyme linked immuno-absorbent assays tests (ELISA) shall be carried out according to Annex C to Directive 64/432/EEC.
Seroagglutinaatiotesti, komplementin sitoutumistesti, puskuroitu brusella-antigeenitesti ja entsyymi-immunologinen määritys (ELISA-testi) on tehtävä direktiivin 64/432/ETY liitteen C mukaisesti.
Brucellosis (Brucella melitensis) (BRL)
Luomistauti eli bruselloosi (Brucella melitensis) (BRL)
Tests shall be carried out according to Annex C to Directive 91/68/EEC.
Testi on tehtävä direktiivin 91/68/ETY liitteen C mukaisesti.
Enzootic Bovine Leukosis (EBL)
Nautojen tarttuva leukoosi (EBL)
The agar gel immuno-diffusion test and the enzyme linked immuno-absorbent assay test (ELISA) shall be carried out according to paragraphs A and C of Chapter II of Annex D to Directive 64/432/EEC.
Agargeeli-immunodiffuusiotutkimus ja entsyymi-immununologinen määritys (ELISA-testi) on tehtävä direktiivin 64/432/ETY liitteessä D olevan II luvun A ja C kohdan mukaisesti.
Bluetongue (BTG)
Bluetongue-tauti (BTG)
The blocking or competitive ELISA test shall be carried out according to the following protocol:
Esto-ELISA- tai kilpaileva (kompetitiivinen) ELISA-testi on tehtävä seuraavalla tavalla:
The competitive ELISA using monoclonal antibody 3-17-A3 is capable of identifying antibodies to all known serotypes of bluetongue virus (BTV).
Kilpailevalla ELISA-testillä, jossa käytetään monoklonaalista 3-17-A3-vasta-ainetta, voidaan havaita kaikki bluetongue-tautiviruksen (BTV) tunnetut serotyypit.
The principle of the test is the interruption of the reaction between BTV antigen and a group-specific monoclonal antibody (3-17-A3) by the addition of test serum.
Testissä on periaatteena, että BTV-antigeenin ja ryhmäspesifisen monoklonaalisen vasta-aineen (3-17-A3) reaktio keskeytetään lisäämällä testiseerumia.
Antibodies to BTV present in the test serum block the reactivity of the monoclonal antibody (Mab) and result in a reduction in the expected colour development after the addition of enzyme labelled anti-mouse antibody, and chromogen/ substrate.
Testiseerumissa olevat BTV-vasta-aineet estävät monoklonaalisen vasta-aineen (MAb) reagoinnin ja heikentävät odotettua värimuutosta entsyymimerkityn hiirivasta-aineen ja kromogeenin/substraatin lisäämisen jälkeen.
Sera can be tested at a single dilution of 1:5 (spot test – Appendix 1) or may be titrated (serum titration – Appendix 2) to give dilution end-point.
Seerumit voidaan testata yhtenä 1:5 laimennoksena (spot-testimenetelmä – lisäys 1) tai ne voidaan titrata (seerumin titrausmenetelmä – lisäys 2) kunnes saadaan positiivisen reaktion laimennuspäätepiste.
Material and Reagents:
Aineet ja reagenssit:
Appropriate ELISA microtitre plates.
Tarkoituksenmukaiset ELISA-mikrotiitterilevyt.
Antigen: supplied as a cell extracted concentrate, prepared as described below, and stored at either –20 °C or –70 °C.
Antigeeni: soluista erotettuna konsentraattina, valmistetaan jäljempänä kuvatulla tavalla ja säilytetään joko –20 °C:ssa tai –70 °C:ssa.
Blocking buffer: phosphate buffered saline (PBS) containing 0,3 % BTV negative adult bovine serum, 0,1 % (v/v) Tween-20 (supplied as polyoxyethylene sorbiton monolaurate syrup) in PBS.
Estopuskuri: 0,3 % BTV-negatiivista täysikasvuisen naudan seerumia sisältävää fosfaattipuskuroitua suolaliuosta (PBS), 0,1 % (v/v) Tween-20:tä (polyoksietyleeni-sorbitoni-monolauraatti-siirapin muodossa) PBS:ssa.
Monoclonal antibody: 3-17-A3 (supplied as hybridoma tissue-culture supernatant) directed against the group-specific polypeptide VP7, stored at -20 °C or freeze-dried and diluted 1/100 with blocking buffer before use.
Monoklonaalinen vasta-aine: 3-17-A3 (hybridomakudosviljelmän supernatanttina), kohdistettu ryhmäspesifistä VP7 polypeptidiä vastaan, varastoidaan –20 °C:ssa tai kylmäkuivataan, laimennetaan estopuskurilla 1/100 ennen käyttöä.
Conjugate: rabbit anti-mouse globulin (adsorbed and eluted) conjugated to horseradish peroxidase and kept in the dark at 4 °C.
Konjugaatti: kanin antihiiriglobuliini (absorboituna ja eluoituna), retikkaperoksidaasiin konjugoituna ja säilytettynä pimeässä 4 °C:ssa.
Chromogen and substrate: Orthophenylene diamine (OPD-chromogen) at a final concentration of 0,4 mg/ml in sterile distilled water.
Kromogeeni ja substraatti: ortofenyleenidiamiini (OPD-kromogeeni) loppupitoisuutena 0,4 mg/ml steriilissä tislatussa vedessä.
Hydrogen peroxide (30 %w/v-substrate) 0,05 % v/v added immediately before use (5μl H2 O2 per 10 ml OPD).
Vetyperoksidi (30 % w/v-substraatti) 0,05 % v/v lisätään välittömästi ennen käyttöä (5μl H2O2 / 10 ml OPD).
(Handle OPD with care - wear rubber gloves - suspected mutagen).
(OPD:tä on käsiteltävä varoen – on käytettävää kumikäsineitä – tuotetta epäillään mutageeniseksi.)
1 Molar sulphuric acid: 26,6 ml of acid added to 473,4 ml of distilled water.
Rikkihappoa, 1 M: 26,6 ml happoa lisätään 473,4 ml:aan tislattua vettä.
(Remember Acid must be added to water, never water to acid.)
(Huom: happo on aina lisättävä veteen, ei koskaan vettä happoon.)
Orbital shaker.
Orbital-ravistelija.
ELISA plate reader (the test may be read visually).
ELISA-levynlukija (testi voidaan lukea silmämääräisesti).
Test format
Testitapa
Cc: conjugate control (no serum/ no monoclonal antibody); C++: strong positive serum control; C+: weak positive serum control; C-: negative serum control; Cm: monoclonal antibody control (no serum).
Cc: konjugaattikontrolli (ei seerumia / ei monoklonaalista vasta-ainetta); C++: vahva positiivinen seerumikontrolli; C+: heikko positiivinen seerumikontrolli; C-: negatiivinen seerumikontrolli; Cm: monoklonaalinen vasta-ainekontrolli (ei seerumia).
APPENDIX 1:
LISÄYS 1
Spot dilution (1:5) format (40 sera/plate)
Spot-laimennuksen (1:5) testikaavake (40 seerumia/levy)
Test Sera
Testiseerumit
APPENDIX 2:
LISÄYS 2
Serum titration format (10 sera/plate)
Seerumititraation testikaavake (10 seerumia/levy)
Test protocol:
Testitapa:
Mab control (Cm) Columns 1 and 2, rows G and H are the monoclonal antibody control and contain BTV antigen, monoclonal antibody and conjugate.
MAb-kontrolli (Cm) Sarakkeet 1 ja 2, rivit G ja H ovat monoklonaalinen vasta-ainekontrolli, joka sisältää BTV-antigeenia, monoklonaalista vasta-ainetta ja konjugaattia.
These wells represent maximum colour.
Kuopista näkyy enimmäisväri.
The mean of the optical density readings from this control represents the 0 % inhibition value.
Tämän kontrollin optisen tiheyden keskiarvo vastaa 0 prosentin inhibitioarvoa.
Positive control (C++, C+) Columns 1 and 2, rows C-D-E-F.
Positiivinen kontrolli (C++, C+) Sarakkeet 1 ja 2, rivit C-D-E-F.
These wells contain BTV antigen, BTV strong and weak positive antiserum respectively, Mab and conjugate.
Nämä kuopat sisältävät BTV-antigeenia, BTV:n vahvaa ja heikkoa positiivista antiseerumia, MAb:ta ja konjugaattia.
Negative control (C-) Wells 2A and 2B are the negative controls, which contain BTV antigen, BTV negative antiserum, Mab and conjugate.
Negatiivinen kontrolli (C-) Kuopat 2A ja 2B ovat negatiivisia kontrolleja, jotka sisältävät BTV-antigeenia, BTV:n negatiivista antiseerumia, MAb:ta ja konjugaattia.
Test sera For large-scale serological surveys and rapid screening, sera may be tested at a single dilution of 1:5 (Appendix 1).
Testiseerumit Laajamittaisissa serologisissa tutkimuksissa ja nopeissa seulontatesteissä seerumit voidaan testata yhtenä laimennoksena 1:5 (lisäys 1).
Alternatively, 10 sera may be tested over a dilution range from 1:5 to 1:640 (Appendix 2).
Vaihtoehtoisesti 10 seerumia voidaan testata laimennusvälillä 1:5–1:640 (lisäys 2).
This will give some indication of the titre of antibody in the test sera.
Tulokseksi saadaan tietoja testiseerumien vasta-aineiden pitoisuuksista.
Dilute BTV antigen to pre-titrated concentration in PBS, sonicate briefly to disperse aggregated virus (if sonicator is not available, pipette vigorously) and add 50 μl to all wells of the ELISA plate.
BTV-antigeeni laimennetaan pitoisuudeltaan esititrattuun puskuroituun suolaliuokseen (PBS). Sonikoidaan hetken aikaa yhteen kasautuneiden virusten hajottamiseksi (ellei tätä laitetta ole käytettävissä, pipetoidaan voimakkaasti) ja liuosta annostellaan 50 μl ELISA-levyn jokaiseen kuoppaan.
Tap sides of plate to disperse antigen.
Reunoja naputtamalla antigeeni jaetaan tasaisesti levylle.
Incubate at 37 °C for 60 minutes on an orbital shaker.
Inkuboidaan 37 °C:ssa 60 minuuttia orbital-ravistelijassa.
Wash plates three times by flooding and emptying the wells with non-sterile PBS and blot dry on absorbent paper.
Levyt pestään kolmeen kertaan huuhtelemalla ja kuopat tyhjennetään epästeriilillä puskuroidulla suolaliuoksella (PBS) ja kuivataan imupaperilla.
Control wells: Add 100 μl of blocking buffer to Cc wells.
Kontrollikuopat: Lisätään 100 μl estopuskuria Cc-kuoppiin.
Add 50 ul of positive and negative control sera, at a dilution of 1:5 (10 μ l sera + 40 μl blocking buffer), to respective wells C-, C+ and C++.
Lisätään 50 μl positiivisia ja negatiivisia kontrolliseerumeita laimennoksena 1:5 (10 μl seerumeita +40 μl estopuskuria) kuoppiin C-, C+ ja C++.
Add 50μl blocking buffer to Mab control wells.
Lisätään 50 μl estopuskuria MAb-kontrollikuoppiin.
Spot titration method: Add a 1:5 dilution of each test serum in blocking buffer to duplicate wells of columns 3 to 12 (10 μl sera +40 μl blocking buffer),
Spot-titrausmenetelmä: Jokaista testiseerumia lisätään laimennoksena 1:5 (10 μl seerumeita +40 μl estopuskuria) estopuskurissa kahteen rinnakkaiskuoppaan riveillä 3–12.
Serum titration method: Prepare a two-fold dilution series of each test sample (1:5 to 1:640) in blocking buffer across eight wells of single columns 3 to 12.
Seerumin titrausmenetelmä: Kustakin testinäytteestä valmistetaan 1:2 laimennossarja (1:5–1:640) estopuskurissa poikki levyn kahdeksaan kuoppaan käyttäen yhtä kuoppariviä (riveille 3–12).
Immediately after the addition of the test sera, dilute Mab 1:100 in blocking buffer and add 50 μl to all wells of the plate except for the blank control.
Heti testiseerumien lisäämisen jälkeen MAb laimennetaan 1:100 estopuskurilla ja levyn kaikkiin kuoppiin sokeakoekuoppaa lukuun ottamatta lisätään 50 μl.
Wash three times with PBS and blot dry.
Levyt pestään kolmeen kertaan PBS:llä ja kuivataan imupaperilla.
Dilute rabbit anti-mouse concentrate to 1/5000 in blocking buffer and add 50 μl to all wells of the plate.
Kanin hiirivasta-aineen konsentraatti laimennetaan suhteessa 1/5000 estopuskuriin ja levyn kaikkiin kuoppiin lisätään 50 μl.
Thaw the O-Phenylenediamine dihydrochloride (OPD) and immediately before use add 5 μl of 30 % hydrogen peroxide to each 10 ml of OPD.
Ortofenyleenidiamiinidihydrokloridi (OPD) sulatetaan ja välittömästi ennen käyttöä lisätään 5 μl 30-prosenttista vetyperoksidia jokaista OPD:n 10 ml:aa kohti.
Add 50 μl to all wells of the plate.
Levyn jokaiseen kuoppaan lisätään 50 μl.
Allow colour to develop for approximately 10 minutes and stop the reaction with 1 Molar sulphuric acid (50 μl per well).
Värin muuttumista odotetaan noin 10 minuuttia ja reaktio keskeytetään 1 M:lla rikkihappoa (50 μl/kuoppa).
Colour should develop in the Mab control wells and in those wells containing sera with no antibody to BTV.
Värin pitäisi muuttua MAb-kontrollikuopissa ja BTV-vasta-aineettomissa seerumikuopissa.
Examine and record the plates either visually or using a spectrophotometric reader.
Levyt tutkitaan joko silmämääräisesti tai spektrofotometrin avulla ja tulokset kirjataan.
Analysis of results:
Tulosten määritys:
Using the software package print out the optical density (OD) values, and the percentage inhibition (PI) for test and control sera based on the mean value recorded in the antigen control wells.
Tietokoneohjelmiston avulla tulostetaan OD-arvot (optinen tiheys) ja inhibitioprosentti (PI) testi- ja kontrolliseerumeille vertaamalla tuloksia antigeenikontrollikuoppien keskiarvoihin.
The date expressed as OD and PI values are used to determine whether the test has performed within acceptable limits.
OD- ja PI-arvoja käytetään arvioitaessa, onko testitulos hyväksyttävissä rajoissa.
If a computer software package is not available print out the OD values using the ELISA printer.
Jos tietokoneohjelmistoa ei ole käytettävissä, OD-arvot tulostetaan ELISA-tulostimella.
Calculate the mean OD value for the antigen control wells, which is equivalent to the 100 % value.
100 %:n arvoa vastaava OD-arvon keskiarvo lasketaan antigeenikontrollikuopille.
Determine the 50 % OD value and manually calculate the positivity and negativity of each sample.
50 %:n OD-arvo määritetään ja kunkin näytteen positiivisuus ja negatiivisuus lasketaan manuaalisesti.
Percentage inhibition (PI) value = 100 – (OD of each test control/Mean OD of Cm) × 100.
Inhibitioprosentti (PI) -arvo = 100 – (kunkin testikontrollin OD / Cm:n OD:n keskiarvo) × 100.
The duplicate negative control serum wells and the duplicate blank wells must record PI values between +25 % and –25 %, and between +95 % and +105 %, respectively.
Negatiivista kontrolliseerumia sisältävien rinnakkaiskuoppien PI-arvojen olisi oltava välillä +25 % ja –25 % ja rinnakkaisten nollakoekuoppien PI-arvojen välillä +95 % ja +105 %.
The strong and weak positive control sera must record PI values between +81 % and +100 %, and between +51 % and +80 %, respectively.
Vahvojen positiivisen kontrolliseerumien PI-arvojen olisi oltava välillä +81 % ja +100 % ja heikkojen positiivisten kontrolliseerumien välillä +51 % ja +80 %.
The diagnostic threshold for test sera is 50 % (PI 50 % or OD 50 %).
Testiseerumien diagnostinen raja-arvo on 50 % (PI 50 % tai OD 50 %).
Samples recording PI values >50 % are recorded negative.
Näytteet, joiden PI-arvot ovat > 50 %, ovat negatiivisia.
Samples that record PI values above and below the threshold for the duplicate wells are considered doubtful; such samples may be re-tested in the spot test and/or titration.
Rinnakkaiskuoppien raja-arvot ylittäviä tai alittavia näytteitä pidetään epäilyttävinä. Tällaiset näytteet voidaan testata uudelleen spot-testillä ja/tai titraamalla.
Visual reading: Positive and negative samples are easily discernible by eye; weakly positive or strong negative samples may be more difficult to interpret by eye.
Silmämääräinen tulosten luku: Positiiviset ja negatiiviset näytteet erottaa silmämääräisesti helposti; heikkojen positiivisten tai vahvojen negatiivisten näytteiden silmämääräinen tulkinta saattaa olla vaikeampaa.
Preparation of BTV ELISA antigen:
BTV-ELISA-antigeenin esikäsittely:
Wash 40-60 roux of confluent BHK-21 cells three times with serum-free Eagle's medium and infect with bluetongue virus serotype 1 in serum-free Eagle's medium.
40–60 Roux-pulloa, joissa on BHK-21-soluviljelmää, pestään kolme kertaa seerumittomalla Eagle-kasvualustalla ja infektoidaan BTV:n serotyypin 1 avulla seerumittomalla Eagle-kasvualustalla.
Incubate at 37 °C and examine daily for cytopathic effect (CPE).
Inkuboidaan 37 °C:ssa ja solutuhovaikutus (CPE) tutkitaan päivittäin.
When CPE are complete in 90 % to 100 % of the cell sheet of each roux, harvest the virus by shaking any still-attached cells from the glass.
Kun CPE tulee esille 90–100 prosenttisesti jokaisen Roux-pullon solulevyllä, virus kerätään ravistamalla solut irti seinämästä.
Centrifuge at 2000 to 3000 rpm to pellet the cells.
Solut sentrifugoidaan pohjalle nopeudella 2000–3000 kierrosta minuutissa.
Discard the supernatant and re-suspend the cells in approximately 30 ml of PBS containing 1 % ‘Sarkosyl’ and 2 ml phenylmethylsulphonyl fluoride (lysis buffer).
Supernatantti heitetään pois ja solut suspendoidaan uudelleen noin 30 ml:ssa puskuroitua suolaliuosta (PBS), jossa on 1 % ”Sarkosyliä” ja 2 ml fenyylimetyylisulfonyylifluoridia (lysis-puskuri).
This may cause the cells to form a gel and more lysis buffer may be added to reduce this effect.
Tämä voi aiheuttaa solujen hyytelöitymistä, jolloin on lisättävä enemmän lysis-puskuria.
(NB: phenylmethylsulphonyl fluoride is harmful - handle with extreme caution.)
(Huom: Fenyylimetyylisulfonyylifluoridi on vaarallista, sitä on käsiteltävä äärimmäisen huolellisesti.)
Disrupt the cells for 60 seconds using an ultrasonic probe at an amplitude of 30 microns.
Soluja sonikoidaan 60 sekuntia 30 mikronin amplitudilla toimivan ultraäänisondin avulla.
Centrifuge at 10000 rpm for 10 minutes.
Sentrifugoidaan kymmenen minuutin ajan nopeudella 10000 kierrosta minuutissa.
Store the supernatant at +4 °C and re-suspend the remaining cell pellet in 10 to 20 ml of lysis buffer.
Supernatantti varastoidaan +4 °C:seen ja pohjalla oleva solunappi suspendoidaan uudelleen 10–20 ml:aan lysis-puskuria.
Sonicate and clarify, storing the supernatant at each stage, a total of three times.
Sonikoidaan ja sentrifioidaan. Supernatantti kerätään talteen kussakin vaiheessa, kaikkiaan kolme kertaa.
Pool the supernatants and centrifuge at 24000 rpm (100,000 g) for 120 minutes at +4 °C over a 5 ml cushion of 40 % sucrose (w/v in PBS) using 30 ml Beckmann centrifuge tubes and an SW 28 rotor.
Kerätyt supernatantit yhdistetään ja sentrifugoidaan nopeudella 24000 kierrosta minuutissa (100,000 g) 120 minuutin ajan +4 °C:n lämpötilassa 5 ml:n tyynyllä 40 %:sta sakkaroosia (w/v PBS:ssä) käyttäen Beckmannin 30 ml:n sentrifugiputkia ja SW 28 -roottoria.
Discard the supernatant, drain the tubes thoroughly and re-suspend the pellet in PBS by sonication.
Supernatantti heitetään pois, putket tyhjennetään hyvin ja solunappi suspendoidaan uudelleen puskuroidussa suolaliuoksessa (PBS) ultraäänen avulla.
Store the antigen in aliquots at –20 °C.
Antigeeni varastoidaan määräosissa –20 °C:ssa.
Titration of BTV ELISA antigen:
BTV-ELISA-antigeenin titraus:
Bluetongue ELISA antigen is titrated by the indirect ELISA.
Bluetongue-taudin ELISA-antigeeni titrataan epäsuoralla ELISA-tekniikalla.
Twofold dilutions of antigen are titrated against a constant dilution (1/100) monoclonal antibody 3-17-A3.
Antigeenin kaksoislaimennokset titrataan monoklonaaliseen vasta-aineen 3-17-A3 vakiolaimennoksella (1/100).
The protocol is as follows:
Testitapa on seuraava:
Titrate a 1:20 dilution of BTV antigen in PBS across the microtitre plate in a twofold dilution series (50 μl/well) using a multichannel pipette.
BTV-antigeeni laimennetaan 1:20 PBS:llä mikrotiitterilevyllä kaksoislaimennosten (50 μl/kuoppa) sarjana käyttäen monikanavapipettiä.
Incubate for one hour at 37 °C on an orbital shaker.
Inkuboidaan orbital-ravistelijassa tunnin ajan 37 °C:ssa.
Wash plates three times with PBS.
Levyt pestään puskuroidulla suolaliuoksella (PBS) kolme kertaa.
Add 50 μl of monoclonal antibody 3-17-A3 (diluted 1/100) to each well of the microtitre plate.
Monoklonaalista vasta-ainetta 3-17-A3 (laimennos 1/100) lisätään 50 μl mikrotiitterilevyn jokaiseen kuoppaan.
Add 50 μl of rabbit anti-mouse globulin conjugated to horseradish peroxidase, diluted to a pre-titrated optimal concentration, to each well of the microtitre plate.
Mikrotiitterilevyn jokaiseen kuoppaan pannaan 50 μl kanin hiirivasta-aineglobuliinia konjugoituneena retikka-peroksidaasiin, joka on laimennettu esititrattuun optimaaliseen pitoisuuteen.
Add substrate and chromogen as described previously.
Lisätään substraatti ja kromogeeni kuten edellä.
Stop the reaction after 10 minutes by the addition of 1 Molar sulphuric acid (50 μl/well).
Reaktio pysäytetään 10 minuutin kuluttua lisäämällä 1 M:sta rikkihappoa (50 μl/kuoppa).