natgillin/translations-raw huggingface dataset:
During the first hour in order to prevent a build up of pressure (due to the evolution of gaseous substances) and to avoid explosion, place the screw cap over the top of the vessel.
Ensimmäisen tunnin aikana pidetään kierrekorkki sulkematta pullon päällä, jottei kaasun muodostuksen vuoksi syntyisi painetta ja jotta vältyttäisiin räjähdyksiltä.
Do not close the vessel with the cap.
Pulloa ei saa sulkea korkilla.
After one hour close the vessel with the cap and leave in the oven (4.3) for 23 hours.
Tunnin kuluttua pullo suljetaan kierrekorkilla ja sen annetaan olla uunissa (4.3) 23 tunnin ajan.
On completion of hydrolysis, remove the bottle from the oven, carefully open the cap of the bottle and place the bottle in an ice-water bath.
Hydrolyysin jälkeen pullo otetaan uunista, avataan korkki varovasti ja asetetaan pullo jää-vesihauteeseen.
Leave to cool.
Annetaan jäähtyä.
Depending on the procedure for pH adjustment (5.3.3), quantitatively transfer the contents of the bottle to a 250 ml beaker or a 250 ml round-bottom flask, using citrate buffer (3.24).
Riippuen tavasta, jolla pH säädetään (5.3.3), siirretään pullon sisältö kvantitatiivisesti sitraattipuskurin avulla (3.24) 250 ml:n dekantterilasiin tai 250 ml:n pyörökolviin.
Adjustment of pH
pH:n säätäminen
Depending on the sodium tolerance of the amino acid analyser (4.9) proceed according to 5.3.3.1 or 5.3.3.2 for the pH adjustment.
Aminohappoanalysaattorin (4.9) natriuminsietokyvyn mukaan noudatetaan 5.3.3.1 tai 5.3.3.2 kohtaa pH:n säätämiseksi.
For Chromatographic Systems (4.9) requiring a low sodium concentration
Kromatografit (4.9), jotka edellyttävät alhaista natriumpitoisuutta
It is advisable to use an internal stock standard solution (3.27.3) when amino acid analysers requiring a low sodium concentration are employed (when the acid volume has to be reduced).
On suositeltavaa käyttää sisäisen standardin perusliuosta (3.27.3), jos käytetään aminohappoanalysaattoreita, jotka edellyttävät alhaista natriumpitoisuutta (kun hapon määrää on vähennettävä).
In this case add 2,00 ml of the internal stock standard solution (3.27.3) to the hydrolysate before the evaporation.
Tässä tapauksessa lisätään 2,00 ml sisäisen standardin perusliuosta (3.27.3) hydrolysaattiin ennen haihdutusta tai sen jälkeen.
Add 2 drops of 1-octanol (3.15) to the hydrolysate obtained in accordance with paragraph 5.3.2.3 or 5.3.2.4.
Lisätään 2 tippaa 1-oktanolia (3.15) 5.3.2.3 tai 5.3.2.4 kohdan mukaisesti saatuun hydrolysaattiin.
Using a rotary evaporator (4.7) reduce the volume to 5-10 ml under vacuum at 40 oC.
Haihdutetaan näyte 5–10 ml:aan pyöröhaihduttimella (4.7), jonka hauteen lämpötila on 40 oC.
If the volume is accidentally reduced to less than 5 ml the hydrolysate must be discarded and the analysis recommenced.
Jos tilavuus pienenee vahingossa alle viiden millilitran, hydrolysaatti on hylättävä ja analyysi aloitettava uudelleen.
Adjust the pH to 2,20 with sodium hydroxide solution (3.18) and proceed to paragraph 5.3.4.
pH säädetään arvoon 2,20 natriumhydroksidiliuoksella (3.18) ja jatketaan kohdasta 5.3.4.
For all other Amino Acid Analysers (4.9)
Muut aminohappoanalysaattorit (4.9):
Take the hydrolysates obtained in accordance with 5.3.2.3 or 5.3.2.4 and partly neutralise them by carefully adding with stirring, 17 ml of sodium hydroxide solution (3.17), ensuring that the temperature is kept below 40 oC.
Kohdan 5.3.2.3 tai 5.3.2.4 mukaisesti saatu hydrolysaatti neutraloidaan osittain lisäämällä varovasti koko ajan sekoittaen 17 ml natriumhydroksidiliuosta (3.17) ja huolehditaan siitä, että lämpötila on alle 40 oC.
Adjust the pH to 2,20 at room temperature using sodium hydroxide solution (3.17) and finally sodium hydroxide solution (3.18).
Lopullinen pH:n säätäminen 2,20:een tapahtuu huoneen lämpötilassa 3.17 kohdan mukaisen natriumhydroksidiliuoksen avulla ja lopuksi 3.18 kohdan mukaisella natriumhydroksidiliuoksella.
Proceed to 5.3.4.
Siirrytään 5.3.4 kohtaan.
Sample solution for chromatography
Näyteliuos kromatografiaa varten
Quantitatively transfer the pH adjusted hydrolysate (5.3.3.1 or 5.3.3.2) with citrate buffer (3.24) to a 200 ml graduated flask, and make up to the mark with buffer (3.24).
Siirretään kvantitatiivisesti hydrolysaatti, jonka pH on säädetty (5.3.3.1 tai 5.3.3.2.), sitraattipuskurilla (3.24) 200 ml:n mittapulloon ja täytetään merkkiin asti puskurilla (3.24).
If an internal standard has not already been used, add 2,00 ml of internal standard (3.27.3) and make up to the mark with citrate buffer (3.24).
Jos sisäistä standardia ei ole vielä käytetty, lisätään sitä 2,00 ml (3.27.3) ja täytetään merkkiin asti sitraattipuskurilla (3.24).
Proceed to the chromatography step (5.4).
Siirrytään kromatografiavaiheeseen (5.4).
If the sample solutions are not being examined the same day they must be stored below 5 oC.
Jos kromatografiaa ei tehdä samana päivänä, näyteliuokset säilytetään alle 5 oC:n lämpötilassa.
Before chromatography bring the extract (5.2) or hydrolysate (5.3.4) to room temperature.
Annetaan uutteen (5.2) tai hydrolysaatin (5.3.4) tasoittua huoneenlämpöisiksi ennen kromatografiaa.
Shake the mixture and filter a suitable amount through a 0,22 μm membrane filter (4.5).
Ravistellaan seosta ja suodatetaan sopiva määrä 0,2 μm:n kalvosuodattimen läpi (4.5).
The resulting clear solution is subjected to ion exchange chromatography, using an amino acid analyser (4.9).
Saatu kirkas liuos analysoidaan aminohappoanalysaattorilla käyttäen ioninvaihtokromatografiaa (4.9).
The injection may be performed manually or automatically.
Injektio voidaan suorittaa käsin tai automaattisesti.
It is important that the same quantity of solution ±0,5 % is added to the column for the analysis of standards and samples except when an internal standard is used, and that the sodium:amino acid ratios in the standard and sample solutions are as similar as is practicable.
On tärkeää, että kolonniin lisätään aina sama määrä (±0,5 %) vertailu- tai näyteliuosta, paitsi silloin kun käytetään sisäistä standardia, ja että natriumin ja aminohappojen suhde standardi- ja näyteliuoksissa on mahdollisimman lähellä toisiaan.
In general the frequency of calibration runs depends on the stability of the ninhydrin reagent and the analytical system.
Kalibrointiajojen tiheys riippuu ninhydriinireagenssin ja analysaattorin toiminnan stabiilisuudesta.
The standard or sample is diluted with citrate buffer (3.24) to give a peak area of the standard of 30 %-200 % of the sample amino acid peak area.
Standardi- tai näyteliuosta laimennetaan sitraattipuskurilla (3.24), siten, että standardiliuoksen antama piikin pinta-ala on 30–200 % näytteen aminohapon antaman piikin pinta-alasta.
The chromatography of amino acids will vary slightly according to the type of analyser employed and resin used.
Aminohappojen kromatografia vaihtelee jonkin verran käytetyn analysaattorin tyypin ja käytetyn hartsin mukaan.
The chosen system must be capable of separating the amino acids from each other and from the ninhydrin-positive materials.
Valitun menetelmän on mahdollistettava aminohappojen erottaminen toisistaan ja muista ninhydriinin kanssa reagoivista aineista.
In the range of operation the chromatographic system must give a linear response to changes in the amounts of amino acids added to the column.
Pylvääseen ruiskutettujen yhdisteiden pitoisuuden muutosten on käyttöalueella annettava lineaarinen vaste.
During the chromatography step the valley:peak height ratios mentioned below apply, when an equimolar solution (of the amino acids being determined) is analysed.
Analysoitaessa aminohappojen ekvimolaarisia liuoksia sovelletaan seuraavassa kappaleessa määriteltyjä laakson ja piikin välisiä suhteita.
This equimolar solution must contain at least 30 % of the maximum load of each amino acid which can be accurately measured with the amino acid analyser system (4.9).
Ekvimolaarisen liuoksen tulee sisältää vähintään 30 % kunkin aminohapon siitä enimmäismäärästä, joka voidaan määrittää tarkasti käytetyllä aminohappoanalysaattorilla (4.9).
For separation of threonine-serine the valley:peak height ratio of the lower of the two overlapping amino acids on the chromatogram must not exceed 2:10.
Kromatogrammissa treoniinin ja seriinin osittain päällekkäisten piikkien välisen laakson suhde matalamman piikin korkeuteen ei saa olla suurempi kuin 2:10.
(if only cyst(e)ine, methionine, threonine and lysine are determined, insufficient separation from adjoining peaks will adversely influence the determination).
(Jos määritetään ainoastaan kyst(e)iiniä, metioniiniä, treoniiniä ja lysiiniä, vierekkäisten piikkien riittämätön erottuminen toisistaan häiritsee määritystä.)
For all other amino acids the separation must be better than 1:10.
Muiden aminohappojen osalta erottumisen on oltava parempi kuin 1:10.
The system must ensure that lysine is separated from ‘lysine artifacts’ and ornithine.
Kromatografiajärjestelmän on pystyttävä erottamaan lysiini lysiiniartefaktoista ja ornitiinistä.
The area of the sample and standard peaks is measured for each individual amino acid and the amount (X), in g amino acid per kg sample, is calculated as follows:
Näytteen ja vertailuliuoksen piikkien pinta-ala mitataan kunkin yksittäisen aminohapon osalta ja määrä (X) lasketaan seuraavan kaavan mukaisesti; tulos ilmoitetaan grammoina aminohappoa näytekiloa kohden.
If an internal standard is used multiply by: D
Jos sisäistä standardia käytetään, kerrotaan kaava vielä termillä D
A peak area, hydrolysate or extract
A analysoitavan piikin pinta-ala, hydrolysaatti tai uute
B peak area, calibration standard solution
B analysoitavan piikin pinta-ala, standardiliuos
C peak area, internal standard in hydrolysate or extract
C sisäisen standardin piikin pinta-ala hydrolysaatissa tai uutteessa
D peak area, internal standard, calibration standard solution
D sisäisen standardin piikin pinta-ala kalibrointiliuoksessa
M molar weight of the amino acid being determined
M analysoitavan aminohapon molekyylipaino
c concentration of standard in μmol/ml
c standardin konsentraatio μmol/ml
m sample weight (g) (corrected to original weight if dried or defatted)
m näytteen paino grammoina (korjataan alkuperäiseen painoon, jos kuivattu tai rasva poistettu)
V ml total hydrolysate (5.3.4) or ml calculated total dilution volume of extract (6.1)
V ml kokonaishydrolysaattia (5.3.4) tai ml uutteen laskettua kokonaislaimennosta (6.1).
Cystine and cysteine are both determined as cysteic acid in hydrolysates of oxidised sample, but calculated as cystine (C6H12N2O4S2, M 240,30 g/mol) by using M 120,15 g/mol (= 0,5 x 240,30 g/mol).
Sekä kystiini että kysteiini määritetään kysteiinihappona hapetetun näytteen hydrolysaateista, mutta ne lasketaan kystiiniksi (C6H12N2O4S2, M 240,30 g/mol) käyttäen molekyylipainoa 120,15 g/mol (= 0,5 × 240,30 g/mol).
Methionine is determined as methionine sulphone in hydrolysates of oxidised sample, but calculated as methionine by using M of methionine: 149,21 g/mol.
Metioniini määritetään metioniinisulfonina hapetetun näytteen hydrolysaateista, mutta lasketaan metioniiniksi käyttäen metioniinin molekyylipainoa 149,21 g/mol.
Added free methionine is determined after extraction as methionine, for the calculation the same M is used.
Lisätty vapaa metioniini määritetään uuttamisen jälkeen metioniinina; laskennassa käytetään samaa molekyylipainoa.
The total dilution volume of extracts (F) for determination of free amino acids (5.2) is calculated as follows:
Uutteiden kokonaislaimennoksen tilavuus (F) vapaiden aminohappojen määrittämistä varten (5.2) lasketaan seuraavasti:
V Volume of final extract
V lopullisen uutteen määrä.
Evaluation of the method
Menetelmän arviointi
The method has been tested in an intercomparison made at international level in 1990 using four different feed (mixed pig feed, broiler compound, protein concentrate, premixture).
Menetelmä on testattu vuonna 1990 tehdyssä kansainvälisessä laboratorioiden välisessä vertailussa käyttäen neljää eri rehua (sikojen täysrehu, broilereiden täysrehu, valkuaistiiviste ja esiseos).
The results, after elimination of outliers, of mean and standard deviation are given in the tables in this point:
Tulosten keskiarvo ja standardipoikkeama poikkeavien arvojen poissulkemisen jälkeen on esitetty tämän kohdan taulukoissa.
Means in g/kg
Keskiarvot g/kg
n Number of participating laboratories.
n osallistuneiden laboratorioiden lukumäärä.
Reference material
Vertailuaine
Amino Acid
Aminohappo
Cyst(e)ine
Kyst(e)iini
Mixed Pig Feed
Sikojen täysrehu
Broiler Compound
Broilereiden täysrehu
Protein Concentrate
Valkuaistiiviste
Premixture
Esiseos
The repeatability expressed as ‘within laboratory standard deviation’ of the abovementioned intercomparison is given in the tables below:
Toistettavuus edellä mainitussa laboratorioiden välisessä vertailussa on ilmaistu muodossa ”laboratorion sisäinen standardipoikkeama” alla olevassa taulukossa.
Within Laboratory Standard Deviation (Sr) in g/kg
Laboratorion sisäinen standardipoikkeama (Sr) g/kg
Coefficient of Variation (%) for Within Laboratory Standard Deviation (Sr)
Variaatiokerroin (%) laskettuna laboratorion sisäisestä standardipoikkeamasta (Sr)
The results for between laboratory standard deviation by the abovementioned intercomparison are given in the table below:
Edellä mainitun vertailun laboratorioiden välisten standardipoikkeamien tulokset on esitetty seuraavassa taulukossa.
Between Laboratory Standard Deviation (SR) in g/kg
Standardointipoikkeama laboratorioiden välillä (SR) g/kg
Coefficient of Variation (%) for Between Laboratory Standard Deviation (SR)
Laboratorioiden välisistä standardipoikkeamista (SR) laskettu variaatiokerroin (%)
Use of reference materials
Vertailumateriaalin käyttö
The correct application of the method shall be verified by making replicate measurements of certified reference materials when available.
Menetelmän oikea soveltaminen tarkistetaan sertifioidulla vertailumateriaalilla, jos sellainen on saatavilla, tehdyllä kaksoismäärityksellä.
Calibration with certified amino acid calibration solution is recommended.
Kalibrointi sertifioidulla aminohappojen kalibrointiliuoksella on suotavaa.
Because of differences between amino acid analysers the final concentrations of the calibration solutions of standard amino acids (see 3.27.4 and 3.27.5) and of the hydrolysate (see 5.3.4) shall be taken as a guideline.
Aminohappoanalysaattoreiden välisten erojen vuoksi annettuja aminohappojen kalibrointiliuosten (3.27.4 ja 3.27.5) ja hydrolysaattien (5.3.4) lopullisia konsentraatioita on pidettävä suuntaa antavina.
The range of linear response of the apparatus has to be checked for all amino acids.
Laitteiston lineaarisen vasteen alue on tarkistettava kaikkien aminohappojen osalta.
The standard solution is diluted with citrate buffer to give peak areas in the middle of the range.
Standardiliuos laimennetaan sitraattipuskurilla siten, että piikit sijoittuvat alueen keskivaiheille.
Where high performance liquid chromatographic equipment is used to analyse the hydrolysates, the experimental conditions must be optimised in accordance with the manufacturer's recommendations.
Kun hydrolysaattien analysointiin käytetään suuren erotuskyvyn nestekromatografialaitteistoa, koeolosuhteet on optimoitava valmistajan suositusten mukaisesti.
By applying the method to feed containing more than 1 % chloride (concentrate, mineral feeds, supplementary feeds) underestimation of methionine could occur and special treatment has to be done.
Jos menetelmää sovelletaan rehuihin, jotka sisältävät enemmän kuin yhden prosentin kloridia (tiiviste, kivennäisaineita sisältävät ravinteet tai lisäravinteet), sillä saatetaan saada metioniinille liian pieniä arvoja, ja erityiskäsittely on tarpeen.
DETERMINATION OF TRYPTOPHAN
TRYPTOFAANIN MÄÄRITYS
The method makes the determination possible of the total and free tryptophan in feed.
Menetelmän avulla voidaan määrittää rehuissa olevan tryptofaanin kokonaismäärä ja vapaan tryptofaanin määrä.
It does not distinguish between D- and L- forms.
Menetelmällä ei voi erottaa D- ja L-muotoja toisistaan.
For the determination of the total tryptophan, the sample is hydrolysed under alkaline conditions with saturated barium hydroxide solution and heated to 110 oC for 20 hours.
Tryptofaanin kokonaismäärän määrittämiseksi näyte hydrolysoidaan emäksisissä olosuhteissa kyllästetyllä bariumhydroksidiliuoksella ja kuumennetaan 110 oC:ssa 20 tuntia.
After hydrolysis internal standard is added.
Hydrolyysin jälkeen lisätään sisäinen standardi.
For the determination of free tryptophan, the sample is extracted under mild acidic conditions in the presence of internal standard.
Vapaan tryptofaanin määrittämiseksi näytettä uutetaan lievästi happamissa olosuhteissa yhdessä sisäisen standardin kanssa.
The tryptophan and the internal standard in the hydrolysate or in the extract are determined by HPLC with fluorescence detection.
Tryptofaani ja sisäinen standardi hydrolysaatissa tai uutteessa määritetään HPLC:llä käyttäen fluoresenssidetektoria.
Double distilled water or water of equivalent quality must be used (conductivity < 10 μS/cm).
Veden on oltava kaksoistislattua tai vastaavan laatuista (johtokyky < 10 μS/cm).
Standard substance: tryptophan (purity/content ≥ 99 %) dried under vacuum over phosphorous pentoxide.
Standardi: tryptofaani (puhtaus/pitoisuus ≥ 99 %), kuivattu tyhjiössä fosforipentoksidin päällä.
Internal standard substance: α-methyl-tryptophan (purity/content ≥ 99 %), dried under vacuum over phosphorous pentoxide.
Sisäinen standardi: α-metyylitryptofaani (puhtaus/pitoisuus ≥ 99 %), kuivattu tyhjiössä fosforipentoksidin päällä.
Barium hydroxide octa-hydrate (care shall be taken not to expose the Ba(OH)2 .8 H2O excessively to air in order to avoid formation of BaCO3, which could disturb the determination) (see observation 9.3).
Bariumhydroksidioktahydraatti (on varottava, ettei Ba(OH)2 8 H2O joudu liiaksi kosketuksiin ilman kanssa; tällöin muodostuisi BaCO3:a, joka voi häiritä määritystä) (ks. huomautus 9.3).
Ortho-phosphoric acid, w (w/w) = 85 %.
Ortofosforihappo, w (w/w) = 85 %
Hydrochloric acid, ρ201,19 g/ml.
Kloorivetyhappo, ρ201,19 g/ml.
Methanol, equivalent to HPLC grade.
Metanoli, HPLC-laatua vastaava.
Dissolve 40,0 g NaOH (3.5) in water and make up to 1 litre with water (3.1).
Liuotetaan 40,0 g NaOH:ta (3.5) veteen ja täytetään 1 litraksi vedellä (3.1).
Hydrochloric acid, c = 6 mol/l:
Kloorivetyhappo, c = 6 mol/l:
Take 492 ml HCl (3.7) and make up to 1 litre with water.
Mitataan 492 ml HCl:ää (3.7) ja täytetään 1 litraksi vedellä.
Hydrochloric acid, c = 1 mol/l:
Kloorivetyhappo, c = 1 mol/l:
Take 82 ml HCl (3.7) and make up to 1 litre with water.
Mitataan 82 ml HCl:ää (3.7) ja täytetään 1 litraksi vedellä.
Hydrochloric acid, c = 0,1 mol/l:
Kloorivetyhappo, c = 0,1 mol/l:
Take 8,2 ml HCl (3.7) and make up to 1 litre with water.
Mitataan 8,2 ml HCl:ää (3.7) ja täytetään 1 litraksi vedellä.
Ortho-phosphoric acid, c = 0,5 mol/l:
Ortofosforihappo, c = 0,5 mol/l:
Take 34 ml ortho-phosphoric acid (3.6) and make up to 1 litre with water (3.1).
Mitataan 34 ml ortofosforihappoa (3.6) ja täytetään 1 litraksi vedellä (3.1).
Concentrated solution of tryptophan (3.2), c = 2,50 μmol/ml:
Väkevä tryptofaaniliuos (3.2), c = 2,50 μmol/ml:
In a 500 ml volumetric flask dissolve 0,2553 g tryptophan (3.2) in hydrochloric acid (3.13) and make up to the mark with hydrochloric acid (3.13).
Liuotetaan 500 ml:n mittapullossa 0,2553 g tryptofaania (3.2) kloorivetyhappoon (3.13) ja täytetään merkkiin asti kloorivetyhapolla (3.13).
Store at - 18 oC for a maximum of 4 weeks.
Säilyy –18 oC:ssa enintään 4 viikkoa.
Concentrated internal standard solution, c = 2,50 μmol/ml:
Konsentroitu sisäisen standardin liuos, c = 2,50 μmol/ml:
In a 500 ml volumetric flask dissolve 0,2728 g α-methyl-tryptophan (3.3) in hydrochloric acid (3.13) and make up to the mark with hydrochloric acid (3.13).
Liuotetaan 500 ml:n mittapullossa 0,2728 g α-metyylitryptofaania (3.3) kloorivetyhappoon (3.13) ja täytetään merkkiin asti kloorivetyhapolla (3.13).
Calibration standard solution of tryptophan and internal standard:
Tryptofaanin ja sisäisen standardin kalibrointistandardiliuos:
Take 2,00 ml concentrated solution of tryptophan (3.15), and 2,00 ml of concentrated internal standard (α-methyl-tryptophan) solution (3.16).
Mitataan 2,00 ml konsentroitua tryptofaaniliuosta (3.15) ja 2,00 ml konsentroitua sisäisen standardin (α-metyylitryptofaanin) liuosta (3.16).
Dilute with water (3.1) and methanol (3.8) to approximately the same volume and to approximately the same concentration of methanol (10 %-30 %) as the finished hydrolysate.
Laimennetaan vedellä (3.1) ja metanolilla (3.8) siten, että liuoksen tilavuus ja metanolipitoisuus on suunnilleen sama kuin valmiin hydrolysaatin (metanolia 10–30 %).
This solution must be prepared freshly before use.
Tämä liuos on valmistettava juuri ennen käyttöä.
Protect from direct sunlight during preparation.
Liuos suojataan suoralta auringonvalolta valmistuksen aikana.
Acetic acid
Etikkahappo.
1,1,1-trichloro-2-methyl-2-propanol.
1,1,1-Trikloori-2-metyyli-2-propanoli.
Ethanolamine w (w/w) > 98 %.
Etanoliamiini w (w/w) > 98 %.
Solution of 1 g 1,1,1-trichloro-2-methyl-2-propanol (3.19) in 100 ml methanol (3.8).
Valmistetaan liuos, jossa on 1 g 1,1,1-trikloori-2-metyyli-2-propanolia (3.19) 100 ml:ssa metanolia (3.8).
Adjust pH to 5,00 using ethanolamine (3.20).
Säädetään pH arvoon 5,00 etanoliamiinilla (3.20).
Make up to 1000 ml with water (3.1).
Täytetään 1 000 ml:ksi vedellä (3.1).
HPLC equipment with a spectrofluorometric detector.
HPLC-laitteisto, jossa on spektrofluorimetri-detektori.
Liquid chromatographic column, 125 mm x 4 mm, C18, 3 μm packing, or equivalent.
Nestekromatografiakolonni, 125 mm × 4 mm, C18, hartsin (pakkausaineen) hiukkaskoko 3 μm, tai vastaava.
Polypropylene flask, capacity 125 ml, with wide neck and screw cap.
Polypropyleenipullo, tilavuus 125 ml, jossa on leveä kaula ja kierretulppa.
Membrane filter, 0,45 μm.
Kalvosuodatin, 0,45 μm.
Autoclave, 110 (± 2) oC, 1,4 (±0,1) bar.
Autoklaavi, 110 (± 2) oC, 1,4 (±0,1) bar.
Vortex mixer.
Vortex-sekoitin.
Preparation of samples
Näytteiden valmistaminen
Samples with high fat content shall be extracted with light petroleum (3.9) prior to grinding.
Näytteet, joilla on suuri rasvapitoisuus, on uutettava petrolieetterillä (3.9) ennen jauhamista.
Determination of free tryptophan (extract)
Vapaan tryptofaanin määritys (uutteesta)
Weigh to the nearest 1 mg an appropriate amount (1-5 g) of the prepared sample (5.1), into a conical flask.
Punnitaan 1 mg:n tarkkuudella sopiva määrä (1–5 g) valmistettua näytettä (5.1) erlenmeyerkolviin.
Add 100,0 ml hydrochloric acid, (3.13) and 5,00 ml concentrated internal standard solution (3.16).
Lisätään 100,0 ml kloorivetyhappoa (3.13) ja 5,00 ml konsentroitua sisäisen standardin liuosta (3.16).
Shake or mix for 60 min. using a mechanical shaker or a magnetic stirrer (4.7).
Ravistellaan tai sekoitetaan 60 minuuttia mekaanisella ravistelijalla tai magneettisekoittimella (4.7).
Allow the sediment to settle and pipette 10,0 ml of the supernatant solution into a beaker.
Annetaan sakan laskeutua ja pipetoidaan 10,0 ml supernatanttiliuosta dekantterilasiin.
Add 5 ml ortho-phosphoric acid (3.14).
Lisätään 5 ml ortofosforihappoa (3.14).
Adjust the pH to 3 using sodium hydroxide (3.10).
Säädetään pH arvoon 3 natriumhydroksidilla (3.10).
Add sufficient methanol (3.8) to give a concentration of between 10 % and 30 % of methanol in the final volume.
Lisätään metanolia (3.8) niin että lopputilavuudessa on 10–30 % metanolia.
Transfer to a volumetric flask of appropriate volume and dilute with water to a volume necessary for the chromatography (approx. the same volume as the calibration standard solution (3.17)).
Siirretään liuos sopivankokoiseen mittapulloon ja laimennetaan vedellä sopivaan tilavuuteen kromatografiaa varten (suunnilleen sama tilavuus kuin kalibrointistandardiliuoksella (3.17)).
Filter a few ml of the solution through a 0,45 μm membrane filter (4.5) before injection on the HPLC column.
Suodatetaan muutama ml liuosta 0,45 μm:n kalvosuodattimen (4.5) läpi ennen HPLC-kolonniin injektointia.
Protect standard solution and extracts against direct sunlight.
Standardiliuos ja uutteet suojataan suoralta auringonvalolta.