natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Evaluation of stained γ3 and γ2-casein patterns (evidence of cows’ milk) by comparison of the pattern obtained from the sample with those obtained in the same gel from the reference standards containing 0 % and 1 % cows’ milk.
Värjättyjen γ3- ja γ2-kaseiinikuvioiden (näyttö lehmänmaidosta) arviointi vertaamalla näytteestä saatua kuviota kuvioihin, jotka on saatu samassa geelissä 0 % ja 1 % lehmänmaitoa sisältävistä vertailustandardeista.
Unless otherwise indicated, analytical grade chemicals must be used.
On käytettävä analyysilaatuisia kemikaaleja, ellei toisin mainita.
Water must be double-distilled or of equivalent purity.
Veden on oltava kahdesti tislattua tai puhtaudeltaan sitä vastaavaa.
Note: The following details apply to laboratory prepared polyacrylamide gels containing urea, of dimensions 265 × 125 × 0,25 mm. Where other sizes and types of gel are used, the separation conditions may have to be adjusted.
Huomautus: Seuraavia yksityiskohtaisia ohjeita sovelletaan laboratoriossa valmistettuihin ureaa sisältäviin polyakryyliamidigeeleihin, joiden mitat ovat 265 × 125 × 0,25 mm. Jos käytetään muunkokoisia ja -tyyppisiä geelejä, erotusolosuhteita voidaan joutua säätämään.
Isoelectric focusing
Isoelektrinen fokusointi
Reagents for production of the urea containing polyacrylamide gels
Reagenssit ureaa sisältävien polyakryyliamidigeelien valmistamiseksi
Stock gel solution
Geelin kantaliuos
Dissolve:
Liuotetaan
4,85 g acrylamide
4,85 g akryyliamidia
0,15 g N, N'-methylene-bis-acrylamide (BIS)
0,15 g N, N'-metyleeni-bis-akryyliamidia (BIS)
48,05 g urea
48,05 g ureaa
15,00 g glycerol (87 % w/w),
15,00 g glyserolia (87 % w/w)
in water and make up to 100 ml and store in a brown glass bottle in the refrigerator.
veteen ja täytetään 100 ml:aan, säilytetään ruskeassa lasipullossa jääkaapissa.
Note: A commercially available preblended acrylamide/BIS solution can be used in preference to the quoted fixed weights of the neurotoxic acrylamides.
Huomautus: Painoltaan määrättyjen hermomyrkyllisten akryyliamidien sijasta voi käyttää myös kaupallisesti saatavaa esisekoitettua akryyliamidi/BIS-liuosta.
Where such a solution contains 30 % w/v acrylamide and 0,8 % w/v BIS, a volume of 16,2 ml must be used for the formulation instead of the fixed weights.
Liuosta, jossa on 30 % w/v akryyliamidia ja 0,8 % w/v BIS:ä, käytetään 16,2 ml.
The shelf life of the stock solution is a maximum of 10 days; if its conductivity is more than 5 μS, de-ionize by stirring with 2 g Amberlite MB-3 for 30 minutes, then filter through a 0,45 μm membrane.
Varastoliuoksen säilyvyys on enintään 10 päivää; jos sen johtokyky on suurempi kuin 5 μS, on suoritettava ioninpoisto sekoittamalla sitä 2 g:n Amberlite MB-3 kanssa 30 minuutin ajan ja sitten suodatettava 0,45 μm:n kalvon läpi.
Gel solution
Geeliliuos
Prepare a gel solution by mixing additives and ampholytes with the stock gel solution (see 4.1.1).
Valmistetaan geeliliuos sekoittamalla varastoliuokseen lisäaineita ja amfolyyttejä (ks. 4.1.1).
9,0 ml stock solution
9,0 ml varastoliuosta
24 mg β-alanine
24 mg de β-alaniinia
500 μl ampholyte pH 3,5-9,5 [1]
500 μl amfolyyttiä, pH 3,5–9,5 [1]
250 μl ampholyte pH 5-7 [1] The produce Ampholine® pH 3,5-9,5 (Pharmacia) and Resolyte® pH 5-7 and pH 6-8 (BDH, Merck) have proved particularly suitable for obtaining the required separation of γ-caseins.
250 μl amfolyyttiä, pH 5–7 [1] Valmisteet Ampholine® pH 3,5–9,5 (Pharmacia) ja Resolyte® pH 5–7 ja pH 6–8 (BHD, Merck) ovat osoittautuneet erityisen sopiviksi γ-kaseiinien erottamiseksi.
250 μl ampholyte pH 6-8 [1] The produce Ampholine® pH 3,5-9,5 (Pharmacia) and Resolyte® pH 5-7 and pH 6-8 (BDH, Merck) have proved particularly suitable for obtaining the required separation of γ-caseins.
250 μl amfolyyttiä, pH 6–8 [1] Valmisteet Ampholine® pH 3,5–9,5 (Pharmacia) ja Resolyte® pH 5–7 ja pH 6–8 (BHD, Merck) ovat osoittautuneet erityisen sopiviksi γ-kaseiinien erottamiseksi.
Mix the gel solution and de-gas for two to three minutes in an ultrasonic bath or in vacuum.
Geeliliuosta sekoitetaan ja poistetaan ilmaa 2–3 minuutin ajan ultraäänihauteessa tai tyhjiössä.
Note: Prepare the gel solution immediately prior to pouring it (see 6.2).
Huomautus: Geeliliuos valmistetaan välittömästi ennen sen kaatamista (ks. 6.2).
Catalyst solutions
Katalyyttiliuokset
N, N, N' N' — tetramethylethylenediamine (Temed)
N, N, N', N'-tetrametyylietyleenidiamiini (TEMED)
40 % w/v ammonium persulphate (PER):
40 % w/v ammoniumpersulfaatti (PER):
Dissolve 800 mg PER in water and make up to 2 ml.
Liuotetaan 800 mg PER:ää veteen ja täytetään 2 ml:aan.
Note: Always use freshly prepared PER solution.
Huomautus: Aina on käytettävä juuri valmistettua PER-liuosta.
Contact fluid
Kontaktineste
Kerosene or liquid paraffin
Petroli tai parafiiniöljy.
Anode solution
Anodiliuos
Dissolve 5,77 g phosphoric acid (85 % w/w) in water and dilute to 100 ml.
Liuotetaan 5,77 g fosforihappoa (85 % w/w) veteen ja laimennetaan 100 ml:ksi.
Cathode solution
Katodiliuos
Dissolve 2,00 g sodium hydroxide in water and dilute to 100 ml with water.
Liuotetaan 2,00 g natriumhydroksia veteen ja laimennetaan 100 ml:ksi vedellä.
Sample preparation
Näytteen valmistus
Reagents for protein isolation
Reagenssit proteiinien eristämiseksi
Dilute acetic acid (25,0 ml of glacial acetic acid made up to 100 ml with water)
Laimea etikkahappo (25,0 ml jääetikkaa täytetään 100 ml:aan vedellä)
Protein dissolving buffer
Proteiinia liuottava puskuriliuos
Dissolve
Liuotetaan
5,75 g glycerol (87 % w/w)
5,75 g glyserolia (87 % w/w)
24,03 g urea
24,03 g ureaa
250 mg dithiothreitol,
250 mg ditiotreitolia
in water and make up to 50 ml
veteen ja täytetään 50 ml:aan.
Note: Store in a refrigerator, maximum shelf-life one week.
Huomautus: Säilytetään jääkaapissa, säilyvyys enintään 1 viikko.
Reagents for plasmin cleavage of caseins
Reagenssit kaseiinien pilkkomiseksi plasmiinilla
Ammonium carbonate buffer
Ammoniumkarbonaattipuskuri
Titrate a 0,2 mol/l ammonium hydrogencarbonate solution (1,58 g/100 ml water) containing 0,05 mol/l ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA, 1,46 g/100 ml with a 0,2 mol/l ammonium carbonate solution (1,92 g/100 ml water) containing 0,05 mol/l EDTA to ph 8.
Titrataan 0,2 mol/l ammoniumvetykarbonaattiliuos (1,58 g/100 ml vettä), joka sisältää 0,05 mol/l etyleenidiamiinitetraetikkahappoa (EDTA, 1,46 g/100 ml vettä), 0,2 mol/l ammoniumkarbonaattiliuoksella (1,92 g/100 ml vettä), joka sisältää 0,05 mol/l EDTA:a, siten että pH:ksi saadaan 8.
ε-Aminocaproic acid solution for enzyme inhibition
ε-Aminokapronihappoliuos entsyymi-inhibitiota varten
Dissolve 2,624 g ε-aminocaproic acid (6 amino-n-hexanoic acid) in 100 ml of 40 % (v/v) ethanol.
Liuotetaan 2,624 g ε-aminokapronihappoa (6-amino-n-heksaanihappoa) 100 ml:aan 40 % (v/v) etanolia.
Certified reference standards of a mixture of renneted ewes’ and goats’ skimmed milk containing 0 % and 1 % of cows’ milk are available from the Commission’s Institute for Reference Materials and Measurements, B-2440 Geel, Belgium
Varmennettuja vertailustandardeja juoksetetusta rasvattomasta uuhenmaidon ja vuohenmaidon seoksesta, joka sisältää 0 % ja 1 % lehmänmaitoa, on saatavana vertailumateriaalien ja -mittausten tutkimuslaitoksesta (IRMM), B-2440 Geel, Belgia.
Preparation of laboratory interim-standards of buffalos’ renneted milk containing 0 % and 1 % of cows’ milk
Laboratorion omien standardien valmistaminen puhvelin juoksutetusta maidosta, joka sisältää 0 % ja 1 % lehmänmaitoa.
Skimmed milk is prepared by centrifuging of either buffalo or bovine raw bulk milk at 37 °C at 2500 g for 20 minutes.
Rasvaton maito valmistetaan sentrifugoimalla joko puhvelin tai naudan käsittelemätöntä irtomaitoa 37 °C:ssa, 2500 g 20 minuutin ajan.
After cooling the tube and contents rapidly to 6 to 8 °C, the upper fat layer is removed completely.
Kun koeputki ja sen sisältö on jäähdytetty nopeasti lämpötilaan 6–8 °C, poistetaan ylempi rasvakerros kokonaan.
For the preparation of the 1 % standard add 5,00 ml of bovine skimmed milk to a 495 ml of buffalos’ skimmed milk in a 1 l beaker, adjust the pH to 6,4 by the addition of dilute lactic acid (10 % w/v).
1 % standardin valmistamiseksi lisätään 5,00 ml naudan rasvatonta maitoa 495 ml:aan puhvelin rasvatonta maitoa 1 l:n dekantterilasissa, säädetään pH:n arvoksi 6,4 laimeaa maitohappoa (10 % w/v) lisäämällä.
Adjust the temperature to 35 °C and add 100 μl of calf rennet (rennet activity 1: 10000, c. 3000 U/ml), stir for 1 minute and then leave the beaker covered with an aluminium foil at 35 °C for one hour to allow formation of the curd.
Säädetään lämpötila 35 °C:seen ja lisätään 100 μl vasikanjuoksetetta (juoksetteen aktiivisuus 1:10000, n. 3000 U/ml), sekoitetaan 1 minuutin ajan ja sen jälkeen dekantterilasi jätetään seisomaan alumiinifoliolla päällystettynä 35 °C:seen yhdeksi tunniksi juustomassan muodostamiseksi.
After the curd has formed, the whole renneted milk is freeze-dried without prior homogenization or draining of the whey.
Kun juustomassa on muodostunut, juoksettunut maito kylmäkuivataan kokonaisuudessaan ilman enempää homogenointia tai heran valuttamista.
After freeze-drying it is finely ground to produce a homogeneous powder.
Kylmäkuivauksen jälkeen se jauhetaan hienoksi homogeenisen jauheen saamiseksi.
For the preparation of the 0 % standard, carry out the same procedure using genuine buffalo skimmed milk.
0 % standardin valmistamiseksi suoritetaan sama menettely aitoa rasvatonta puhvelinmaitoa käyttäen.
The standards must be stored at –20 °C.
Standardeja on säilytettävä lämpötilassa –20 °C.
Note: It is advisable to check the purity of the buffalos’ milk by isoelectric focusing of the plasmin-treated caseins before preparation of the standards.
Huomautus: On suositeltavaa tarkistaa puhvelinmaidon puhtaus plasmiini-käsiteltyjen kaseiinien isoelektrisellä fokusoinnilla ennen standardien valmistamista.
Reagents for protein staining
Reagenssit proteiinien värjäykseen
Fixative
Kiinnitysaine
Dissolve 150 g trichloroacetic acid in water and make up to 1000 ml.
Liuotetaan 150 g trikloorietikkahappoa veteen ja täytetään 1000 ml:aan.
Destaining solution
Värinpoistoliuos
Dilute 500 ml methanol and 200 ml glacial acetic acid to 2000 ml with distilled water.
Laimennetaan 500 ml metanolia ja 200 ml jääetikkaa 2000 ml:ksi tislatulla vedellä.
Note: Prepare the destaining solution fresh every day; it can be prepared by mixing equal volumes of stock solutions of 50 % (v/v) methanol and 20 % (v/v) glacial acetic acid.
Huomautus: Joka päivä on valmistettava tuoreeksi värinpoistoliuos; se voidaan valmistaa sekoittamalla yhtä suuret tilavuudet varastoliuoksia, 50 % (v/v) metanolia ja 20 % (v/v) jääetikkaa.
Staining solutions
Värjäysliuokset
Staining solution (stock solution 1)
Värjäysliuos (kantaliuos 1)
Staining solution (stock solution 2)
Värjäysliuos (kantaliuos 2)
Dissolve 5,0 g copper sulphate pentahydrate in 1000 ml 20 % (v/v) acetic acid.
Liuotetaan 5,0 g kuparisulfaattipentahydraattia 1000 ml:aan 20 % (v/v) etikkahappoa.
Staining solution (working solution)
Värjäysliuos (työskentelyliuos)
Mix together 125 ml of each of the stock solutions (4.11.1, 4.11.2) immediately prior to staining.
Sekoitetaan yhteen 125 ml kumpaakin varastoliuosta (4.11.1, 4.11.2) välittömästi ennen värjäystä.
Note: The staining solution should be prepared on the day that it is used.
Huomautus: Värjäysliuos tulisi valmistaa sinä päivänä, jolloin sitä käytetään.
EQUIPMENT
LAITTEET JA TARVIKKEET
Glass plates (265 × 125 × 4 mm); rubber roller (width 15 cm); levelling table
lasilevyjä (265 × 125 × 4 mm); kumitela (leveys 15 cm); vaakatasopöytä
Gel carrier sheet (265 × 125 mm)
kantaja-arkki geelille (265 × 125 mm)
Covering sheet (280 × 125 mm).
peitearkki (280 × 125 mm).
Stick on strip of adhesive tape (280 × 6 × 0,25 mm) to each long edge (see Figure 1)
Kiinnitetään teippinauha (280 × 6 × 0,25 mm) kummallekin pitkälle sivulle (ks. kuva 1).
Electrofocusing chamber with cooling plate (e.g. 265 × 125 mm) and suitable power supply (≥ 2,5 kV) or automatic electrophoresis device
elektrofokusointikammio, jossa on jäähdytyslevy (esim. 265 × 125 mm) ja sopiva virtalähde (≥ 2,5 kV) tai automaattinen elektroforeesilaite.
Circulation cryostat, thermostatically controlled at 12 ± 0,5 °C
kiertokryostaatti, säädetty termostaatilla lämpötilaan 12 ±0,5 °C
Centrifuge, adjustable to 3000 g
sentrifugi, säädettävissä nopeuteen 3000 g
Electrode strips (≥ 265 mm long)
elektrodiliuskat (pituus ≥ 265 mm)
Plastic dropping bottles for the anode and cathode solutions
muovisia tippapulloja anodi- ja katodiliuoksille
Sample applicators (10 × 5 mm, viscose or low protein-adsorption filter paper)
näyteapplikaattoreita (10 × 5 mm, viskoosia tai suodatinpaperia, joka ei absorboi proteiineja)
Stainless steel scissors, scalpels and tweezers
ruostumatonta terästä olevia saksia, leikkausveitsiä ja pinsettejä
Stainless steel or glass staining and destaining dishes (e.g. 280 × 150 mm instrument trays)
ruostumatonta terästä olevia tai lasisia värjäys- ja värinpoistoastioita (esim. 280 × 150 mm instrumenttitarjottimia)
Adjustable rod homogenizer (10 mm shaft diameter), rpm range 8000 to 20000
säädettävissä oleva sauvahomogenisaattori (varren halkaisija 10 mm), rpm alueella 8000–20000
Magnetic stirrer
magneettisekoitin
Ultrasonic bath
ultraäänihaude
Film welder
kalvojen saumaukseen sopiva laite
25 μl micropipettes
mikropipettejä, 25 μl
Vacuum concentrator or freeze-dryer
tyhjiöhaihdutin tai kylmäkuivain
Thermostatically controlled water bath adjustable to 35 and 40 ± 1 °C with shaker
vesihaude, joka on termostaatilla säädeltävissä lämpötiloihin 35 ja 40 ± 1 °C, ravistelijalla varustettuna
Densitometer equipment reading at λ = 634 nm
tiheysmittari, luettavissa aallonpituudella λ = 634 nm
Isolation of caseins
Kaseiinien eristäminen
Weigh the amount equivalent to 5 g dry mass of cheese or the reference standards into a 100 ml centrifuge tube, add 60 ml distilled water and homogenize with a rod homogenizer (8000 to 10000 rpm).
Punnitaan 5:ttä g:aa juuston kuiva-ainetta vastaava määrä näytettä tai vertailustandardeja 100 ml:n sentrifugiputkeen, lisätään 60 ml tislattua vettä ja homogenoidaan sauvahomogenisaattorilla (8000–10000 rpm).
Adjust to pH 4,6 with dil. acetic acid (4.5.1) and centrifuge (5 minutes, 3000 g).
Säädetään pH-arvoon 4,6 laimealla etikkahapolla (4.5.1) ja sentrifugoidaan (5 min., 3000 g).
Decant the fat and whey, homogenize the residue at 20000 rpm in 40 ml distilled water adjusted to pH 4,5 with dil. acetic acid (4.5.1), add 20 ml dichloromethane (4.5.2), homogenize again and centrifuge (5 minutes, 3000 g).
Dekantoidaan rasva ja hera, homogenoidaan jäännös kierrosnopeudella 20000 rpm 40 ml:n kanssa tislattua vettä, jonka pH on säädetty arvoon 4,5 laimealla etikkahapolla (4.5.1), lisätään 20 ml dikloorimetaania (4.5.2), homogenoidaan jälleen ja sentrifugoidaan (5 min., 3000 g). Poistetaan lastalla kaseiinikerros, joka kelluu vesifaasin ja orgaanisen faasin välissä (ks. kuva 2) ja dekantoidaan molemmat faasit pois.
Remove the casein layer that lies between the aqueous and organic phases (see Figure 2) with a spatula and decant off both phases.
Homogenoidaan kaseiini uudelleen 40 ml:n tislattua vettä (ks. edellä) ja 20 ml:n dikloorimetaania (4.5.2) kanssa ja sentrifugoidaan. Toistetaan menettely, kunnes molemmat uuttofaasit ovat värittömiä (2–3 kertaa).
Homogenize the protein residue with 50 ml acetone (4.5.3) and filter through a medium-speed folded filter paper.
Pestään suodatinpaperille jäävä jäännös kahdesti kahdella erillisellä 25 ml:n annoksella asetonia ja annetaan kuivua ilmassa tai typpivirrassa; tämän jälkeen jauhetaan hienoksi huhmareessa. Huomautus: Eristetyt kuivat kaseiinit on säilytettävä lämpötilassa –20 °C.
Plasmin cleavage of β-caseins to intensify γ-caseins
Dispergoidaan 25 mg eristettyjä kaseiineja (6.1.1) 0,5 ml:aan ammoniumkarbonaattipuskuria (4.7.1) ja homogenoidaan 20 minuutin ajan esim. ultraäänellä.
Disperse 25 mg of isolated caseins (6.1.1) in 0,5 ml ammonium carbonate buffer (4.7.1) and homogenize for 20 minutes by e.g. using ultrasonic treatment.
Kuumennetaan lämpötilaan 40 °C ja lisätään 10 μl plasmiinia (4.7.2), sekoitetaan ja inkuboidaan tunnin ajan 40 °C:ssa jatkuvasti ravistellen.
Heat to 40 °C and add 10 μl plasmin (4.7.2), mix and incubate for one hour at 40 °C with continuous shaking.
Entsyymin inhiboimiseksi lisätään 20 μl ε-kapronihappoliuosta (4.7.3), tämän jälkeen lisätään 200 mg kiinteää ureaa ja 2 mg ditiotreitolia.
Preparation of the urea containing polyacrylamide gels
Ureaa sisältävien polyakryyliamidigeelien valmistus
With the aid of a few drops of water roll the gel carrier sheet (5.2) onto a glass plate (5.1), removing any extraneous water with paper towel or tissue.
Muutaman vesipisaran avulla levitetään geelin kantaja-arkki (5.2) lasilevyn (5.1) päälle ja kuivataan kaikki ylimääräinen vesi paperipyyhkeellä.
Roll the cover sheet (5.3) with spacers (0,25 mm) onto another glass plate in the same way.
Samoin levitetään peitearkki (5.3), jossa on välikkeet (0,25 mm), toisen lasilevyn päälle.
Lay the plate horizontally on a levelling table.
Asetetaan levy vaakasuoraan vaakatasopöydälle.
Add 10 μl Temed (4.1.3.1) to the prepared and de-aerated gel solution (4.1.2), stir and add 10 μl PER-solution (4.1.3.2), mix thoroughly and immediately pour out evenly onto the centre of the cover sheet.
Lisätään 10 μl TEMED:tä (4.1.3.1) valmistettuun ilmattomaan geeliliuokseen (4.1.2), sekoitetaan ja lisätään 10 μl PER-liuosta (4.1.3.2), sekoitetaan huolellisesti ja kaadetaan välittömästi tasaisesti peitearkin keskikohtaan.
Place one edge of the gel carrier plate (sheet side down) on the cover sheet plate and lower it slowly so that a gel film forms between the sheets and spreads out regularly and free of bubbles (Figure 3).
Asetetaan geelin kantajalevyn yksi reuna (arkkipuoli alaspäin) peitearkin päälle ja lasketaan sitä hitaasti niin, että geelikerros muodostuu arkkien väliin ja leviää tasaisesti ja ilman kuplien muodostumista (kuva 3).
Carefully lower the gel carrier plate completely using a thin spatula and place three more glass plates on top of it to act as weights.
Lasketaan varovasti geelin kantajalevy kokonaan alas ohutta lastaa käyttäen ja asetetaan vielä kolme lasilevyä sen päälle painoksi.
After polymerization is complete (about 60 minutes) remove the gel polymerized onto the gel carrier sheet along with the cover sheet by tipping the glass plates.
Kun polymeroituminen on tapahtunut (noin 60 min), poistetaan geelin kantaja-arkille polymeroitunut geeli yhdessä peitearkin kanssa lasilevyjä koputellen.
Clean the reverse of the carrier sheet carefully to remove gel residues and urea.
Puhdistetaan kantaja-arkin kääntöpuolelta huolellisesti geelijäännökset ja urea.
Weld the gel sandwich into a film tube and store in a refrigerator (maximum six weeks).
Saumataan geeli-sandwich kalvoon ja säilytetään jääkaapissa (enintään 6 viikkoa).
Note: The cover sheet with the spacers can be re-used.
Huomautus: Välikkeellistä peitearkkia voidaan käyttää uudelleen.
The polyacrylamide gel can be cut to smaller sizes, recommended when there are few samples or if an automatic electrophoresis device is used (two gels, size 4,5 × 5 cm).
Polyakryyliamidigeeli voidaan leikata pienempiin osiin, mitä suositellaan, kun näytteitä on ainoastaan muutama tai jos käytetään automaattista elektroforeesilaitetta (2 geeliä, koko 4,5 × 5 cm).
lsoelectric focusing
Isoelektrinen fokusointi
Set the cooling thermostat to 12 °C.
Säädetään jäähdyttävä termostaatti 12 °C:seen. Pyyhkäistään geelin kantaja-arkin kääntöpuoli petrolilla, tipautetaan sitten muutama pisara petrolia (4.2) jäähdytyslohkon keskelle. Sen jälkeen geeli-sandwich levitetään kantajapuoli alaspäin lohkon päälle siten, ettei muodostu kuplia. Pyyhkäistään ylimääräinen petroli pois ja poistetaan peitearkki.
Gel size 265 × 125 × 0,25 mm
Geelikoko 265 × 125 × 0,25 mm
Voltage
Jännite
Current
Sähkövirta
Volt-hours
Volttituntia
Pre-focusing
Esifokusointi
maximum 2500
2500 enint.
constant 4
vak. 4
Sample focusing [2]
Näytteen fokusointi [2]
Final focusing
Lopullinen fokusointi
maximum 5
5 enint.
maximum 6
6 enint.
maximum 7
7 enint.
Note: If thickness or width of the gels are changed, the values for current and power have to be suitably adjusted (e.g. double the values for electric current and power if a 265 × 125 × 0,5 mm gel is used).
Huomautus: Jos geelien paksuutta tai leveyttä muutetaan, sähkövirran ja tehon arvoja on säädettävä sopivasti (esim. sähkövirran ja tehon arvot on kaksinkertaistettava, jos käytetään 265 mm × 125 mm × 0,5 mm geeliä).
Example of a voltage programme for an automatic electrophoresis device (2 gels of 5,0 × 4,5 cm), electrodes without strips applied directly to the gel
Esimerkki automaattisen elektroforeesilaitteen jänniteohjelmasta (2 kooltaan 5,0 × 4,5 cm geeliä); elektrodit asetetaan suoraan geeliin ilman liuskoja.
Temp.
Lämpötila
Sample focusing
Näytteen fokusointi
Focusing
Fokusointi
Place sample applicator in step 2 at 0 Vh.
Asetetaan näyteapplikaattori vaiheessa 2, kun volttitunnit ovat 0 Vh.
Remove sample applicator in step 2 at 30 Vh.
Poistetaan näyteapplikaattori vaiheessa 2, kun volttitunnit ovat 30 Vh.
Protein staining
Proteiinien värjäys
Protein fixation
Proteiinien kiinnitys
Remove the electrode strips immediately after turning off the power and put the gel immediately into a staining/destaining dish filled with 200 ml fixative (4.9); leave for 15 minutes, shaking continuously.
Poistetaan elektrodinauhat välittömästi voimanlähteen sammuttamisen jälkeen ja asetetaan geeli välittömästi värjäys/värinpoistoastiaan, joka on täytetty 200 ml:lla kiinnitysainetta (4.9); jätetään 15 minuutiksi, jatkuvasti ravistellen.
Washing and staining the gel plate
Geelilevyn pesu ja värjäys
Thoroughly drain off the fixative and wash the gel plate twice for 30 seconds each time with 100 ml destaining solution (4.10).
Valutetaan kiinnitysaine huolellisesti pois ja pestään geelilevy kahdesti, 30 sekuntia kummallakin kerralla, 100 ml:lla värinpoistoliuosta (4.10).
Pour off the destaining solution and fill the dish with 250 ml staining solution (4.11.3); allow to stain for 45 minutes with gentle shaking.
Kaadetaan värinpoistoliuos pois ja täytetään astia 250 ml:lla värjäysliuosta (4.11.3); annetaan värjäytyä 45 minuuttia kevyesti ravistellen.
Destaining the gel plate
Geelilevyn värinpoisto
Pour off the staining solution, wash the gel plate twice using a 100 ml destaining solution (4.10) each time, then shake with 200 ml destaining solution for 15 minutes and repeat the destaining step at least two or three times until the background is clear and uncoloured.
Kaadetaan värjäysliuos pois, pestään geelilevy kahdesti käyttäen 100 ml värinpoistoliuosta (4.10) kummallakin kerralla, ravistellaan sitten 15 minuutin ajan 200 ml:ssa värinpoistoliuosta ja toistetaan värinpoistovaihe vähintään 2 tai 3 kertaa, kunnes tausta on kirkas ja väritön.
Then rinse the gel plate with distilled water (2 × 2 minutes) and dry in the air (2 to 3 hours) or with a hairdryer (10 to 15 minutes).
Huuhdellaan geelilevy sen jälkeen tislatulla vedellä (2 × 2 min.) ja kuivataan ilmassa (2–3 tuntia) tai hiustenkuivaajalla (10–15 min.).
Note 1: Carry out fixing, washing, staining and destaining at 20 °C.
Huomautus 1: Kiinnitys, pesu, värjäys ja värinpoisto on tehtävä 20 °C:ssa.
Do not use elevated temperatures.
Korkeampia lämpötiloja ei saa käyttää.
Note 2: If more sensitive silver staining (e.g. Silver Staining Kit, Protein, Pharmacia Biotech, Code No 17-1150-01) is preferred, plasmin-treated casein samples have to be diluted to 5 mg/ml.
Huomautus 2: Jos herkempää hopeavärjäystä (esim. Silver Staining Kit, Protein, Pharmacia Biotech, Code N:o 17–1150–01) pidetään parempana, plasmiinilla käsitellyt kaseiininäytteet on laimennettava 5 mg/ml:ksi.
Evaluation is performed by comparing the protein patterns of the unknown sample with reference standards on the same gel.
Arviointi suoritetaan vertaamalla tuntemattoman näytteen proteiinikuviota vertailustandardeihin samassa geelissä.