natgillin/translations-raw huggingface dataset:
DETERMINING RENNET WHEY SOLIDS IN SKIMMED MILK POWDER
Sama lõssipulber, millele on lisatud 50 massiprotsenti standardkoostisega laabivadakupulbrit (s.t [50])
PURPOSE: DETECTING THE ADDITION OF RENNET WHEY SOLIDS TO SKIMMED MILK POWDER
Mõõtepipetid, mis võimaldavad mõõta 10 ml (ISO 648, klass A või ISO/R 835), või doseerimisseade, millega saab mõõta 10,0 ml kahe minuti jooksul.
REFERENCES: INTERNATIONAL STANDARD ISO 707
Pumbasüsteem, mis võimaldab saada kahekomponendilist gradienti
The content of rennet whey solids is defined as the percentage by mass as determined by caseinomacropeptide content by the procedure described.
Sisesti ruumala 100 μl käsitsi või automaatseks sisestamiseks
Samples are analysed for caseinomacropeptide A by a reversed-phase high-performance liquid chromatography procedure (HPLC procedure).
Kolonn Agilent Technologies Zorbax 300 SB-C3 (pikkus 25 cm, siseläbimõõt 0,46 cm) või samaväärne suurepooriline silikageeliga täidetud pöördfaaskolonn
Evaluation of the result is obtained by reference to standard samples consisting of skimmed milk powder with and without a known percentage of whey powder.
Muudetava lainepikkusega UV-detektor, mis võimaldab teha mõõtmisi 210 nm juures (vajaduse korral võib kasutada suuremat lainepikkust kuni 220 nm), tundlikkusega 0,02 Å
Results higher than 1 % (m/m) show that rennet whey solids are present.
Integraator, mis võimaldab integreerida ühise nulljooneni või miinimumist miinimumini.
Acetonitrile should be of spectroscopic or HPLC quality.
Märkus: kolonniga saab töötada toatemperatuuril, kui see ei kõigu rohkem kui 1 °C, vastasel korral varieerub kaseiini makropeptiidi A retentsiooniaeg liiga palju.
Eluents A and B
Proovi hoitakse tingimustes, mis välistavad selle riknemise või koostise muutumise.
Eluent A: 150 ml of acetonitrile (CH3CN), 20 ml of isopropanol (CH3CHOHCH3), and 1,00 ml of trifluoroacetic acid (TFA, CF3COOH) are placed in a 1000 ml volumetric flask.
Kaaluda tsentrifuugianumasse (6.2) või sobivasse suletavasse anumasse (50 ml) 2,00 ± 0 001 g uuritavat proovi.
Make up to 1000 ml with water.
Märkus: segu puhul kasutada uuritava proovi kaalutist, mis pärast rasvast vabastamist vastab kogusele 2,00 g.
Eluent B: 550 ml of acetonitrile, 20 ml of isopropanol and 1,00 ml of TFA are placed in a 1000 ml volumetric flask.
Magnetseguriga (6.4) tugevasti segades lisada kahe minuti jooksul ühtlase kiirusega 10,0 ml 25 °C trikloroäädikhapet (5.1).
Conservation of the column
Tsentrifuugida (6.2) 10 minutit 2200 g juures või filtrida läbi paberi (6.6), visates filtraadist ära esimesed 5 ml.
After the analyses the column is flushed with eluent B (via a gradient) and subsequently flushed with acetonitrile (via a gradient for 30 minutes).
Pöördfaasiline HPLC välistab valepositiivsete tulemuste saamise hapukoorepeti pulbri sisalduse tõttu.
The column is stored in acetonitrile.
Enne pöördfaasilise HPLC analüüsi läbiviimist tuleb optimeerida gradiendi tingimused.
Skimmed milk powder meeting the requirements for public storage (i.e. [0]).
Umbes 6 ml surnud ruumalaga (ruumala lahuste ühinemispunktist kuni injektori silmuseni, viimane kaasa arvatud) gradientsüsteemide puhul on optimaalne kaseiini makropeptiidi A retentsiooniaeg 26 ± 2 minutit.
The same skimmed milk powder adulterated with 5 % (m/m) rennet-type whey powder of standard composition (i.e. [5]).
Väiksema surnud ruumalaga (näiteks 2 ml) gradientsüsteemide puhul on optimaalne retentsiooniaeg 22 minutit.
The same skimmed milk powder adulterated with 50 % (m/m) rennet-type whey powder of standard composition (i.e. [50])
Võtta standardproovide (5.4) lahuseid, millest osa sisaldab 50 % laabivadakut.
Graduated pipettes, allowing delivery of 10 ml (ISO 648, Class A, or ISO/R 835), or a dispensing system capable of delivering 10,0 ml in two minutes
Sisestada HPLC-seadmesse 100 μl supernatanti või filtraati (8.3.3) tabelis 1 esitatud proovigradiendi tingimustel.
Binary gradient pumping system
Tabel 1
Injector, hand or automatic, with a 100 μl capacity
Proovigradiendi tingimused kromatograafilise analüüsi optimeerimiseks
Agilent Technologies Zorbax 300 SB-C3 column (length 25 cm, 0,46 cm internal diameter) or an equivalent wide-pore silica based reversed-phase column
Aeg
Variable wavelength UV detector, permitting measurements at 210 nm (if necessary, a higher wavelength up to 220 nm may be used) with a sensitivity of 0,02 Å
Voolutuskiirus
Integrator capable of setting the integration to common baseline or valley-to-valley
Kõver
Note: Operation of the column at room temperature is possible, provided that the room temperature does not fluctuate more than 1 °C, otherwise too much variation in the retention time of CMPA takes place.
lineaarne
Store the sample in conditions which preclude any deterioration or change in composition.
Kahe kromatogrammi võrdlus peab andma kaseiini makropeptiidi A piigi asukoha.
Weigh 2,00 ± 0,001 g of test sample into a centrifuge tube (6.2) or suitable stoppered flask (50 ml).
Järgmist valemit kasutades saab välja arvutada normaalgradiendi puhul kasutatava esialgse lahuse koostise (vt 8.4.3): % B = 10 – 2,5 + (13,5 + (RTcmpA – 26) / 6) × 30 / 27 % B = 7,5 + (13,5 + (RTcmpA – 26) / 6) × 1,11
Note: In the case of mixtures, weigh such an amount of the test sample that the defatted sample portion corresponds to 2,00 g.
kus
Add 10,0 ml of the trichloroacetic acid solution of ca.
RT cmpA : kaseiini makropeptiidi A retentsiooniaeg proovigradiendis
25 °C (5.1) constantly over two minutes, while stirring vigorously with the aid of the magnetic stirrer (6.4).
10 : % B proovigradiendi alguses
Centrifuge (6.2) 2200 g for 10 minutes, or filter through paper (6.6), discarding the first 5 ml of filtrate
2,5 : % B normaalgradiendi keskel, millest lahutatakse % B normaalgradiendi alguses
The reversed-phase HPLC method excludes the possibility false-positive results due to the presence of acid buttermilk powder.
13,5 : proovigradiendi keskpunkti saavutamise aeg
Before the reversed phase HPLC-analysis is carried out, the gradient conditions should be optimised.
26 : kaseiini makropeptiidi A nõutav retentsiooniaeg
A retention time of 26 ± 2 minutes for CMPA is optimal for gradient systems having a dead volume of about 6 ml (volume from the point where the solvents come together to the volume of the injector loop, inclusive).
6 : proovi- ja normaalgradiendi tõusude suhe
Gradient systems having a lower dead volume (e.g. 2 ml) should use 22 minutes as an optimal retention time
30 : % B proovigradiendi alguses, millest lahutatakse % B 27 minuti pärast
Take solutions of the standard samples (5.4) without and with 50 % rennet whey.
27 : proovigradiendi läbijooksuaeg.
Inject 100 μl of supernatant or filtrate (8.3.3) into the HPLC apparatus operating at the scouting gradient conditions given in Table 1.
Võtta uuritavate proovide lahused.
Table 1
Süstida HPLC-seadmesse täpselt mõõdetult 100 μl supernatanti või filtraati (8.3.3) eluendi (5.2) voolukiirusel 1,0 ml/minutis.
Scouting gradient conditions for optimisation of the chromatography
Eluendi koostis analüüsi alguses saadakse punkti 8.4.2 kohaselt.
Time
Harilikult on see ligikaudu A:B = 76:24 (5.2).
Flow
Kohe pärast sisestamist alustada lineaargradienti, mille tulemuseks on 5 % võrra suurem B kogus 27 minuti pärast.
Curve
Seejärel alustada lineaargradienti, mille tulemusel on eluendis viie minuti pärast 90 % B.
linear
Seda eluendi koostist hoida viis minutit ja pärast seda taastada lineaargradiendiga viie minuti jooksul esialgne koostis.
Comparison of the two chromatograms should reveal the location of the peak of CMPΑ.
Sõltuvalt pumbasüsteemi mahutavusest võib järgmist analüüsi alustada 15 minutit pärast algtingimuste saavutamist.
Using the formula given below, the initial solvent composition to be used for the normal gradient (see 8.4.3) can be calculated % B = 10 – 2,5 + (13,5 + (RTcmpA – 26) / 6) * 30 / 27 % B = 7,5 + (13,5 + (RTcmpA – 26) / 6) * 1,11
Märkus 1.
Where:
Seda on võimalik saavutada, muutes esimese gradiendi alg- ja lõpptingimusi. % B erinevus esimese gradiendi alg- ja lõpptingimustel peab siiski olema 5 % B.
RT cmpA : retention time of CMPΑ in the scouting gradient
Märkus 2.
10 : the initial % B of the scouting gradient
Eluentidest tuleb õhk piisavalt hästi eemaldada ja need peavad sellisena püsima.
2,5 : % B at midpoint minus % B at initial in the normal gradient
See on oluline gradientpumbasüsteemi tõrgeteta toimimiseks.
13,5 : midpoint time of the scouting gradient
Kaseiini makropeptiidi A piigi retentsiooniaja standardhälve peab olema alla 0,1 minuti (n = 10).
26 : required retention time of CMPΑ
Märkus 3.
6 : ratio of slopes of the scouting and normal gradient
Iga viienda proovi järel tuleb sisestada standardproov [5] ja arvutada selle alusel uus tundlikkustegur R (9.1.1).
30 : % B at initial minus % B at 27 minutes in the scouting gradient
Uuritava proovi (E) kromatograafilise analüüsi tulemused saadakse kromatogrammina, millel kaseiini makropeptiidi A piik tehakse kindlaks 26minutilise retentsiooniaja alusel.
Inject 100 μl of accurately measured supernatant or filtrate (8.3.3) into the HPLC apparatus operating at a flow rate of 1,0 ml of eluent solution (5.2) per minute.
Kui nulljoone asukoht on vale, tuleb analüüsi või integreerimist korrata.
The composition of the eluent of the start of the analysis is obtained from 8.4.2.
Märkus: kui kaseiini makropeptiidi A piik on muudest piikidest piisavalt hästi eraldunud, tuleb nulljoon kindlaks määrata miinimumist miinimumini, muudel juhtudel kasutada vertikaalide tõmbamist ühise nulljooneni, mille alguspunkt peab olema kaseiini makropeptiidi A piigi läheduses (seega mitte ajahetkel t = 0 min!).
It is normally close to A:B = 76:24 (5.2).
Standardi ja proovide puhul tuleb kasutada sama tüüpi integreerimist ning ühise nulljoone puhul tuleb kontrollida selle sobivust proovidele ja standardile.
Immediately after the injection a linear gradient is started, which results in a 5 % higher percentage of B after 27 minutes.
Enne kvantitatiivset interpreteerimist tuleb kontrollida iga kromatogrammi kuju, et avastada võimalikud kõrvalekalded, mis on tingitud seadme või kolonni puudulikust tööst või uuritava proovi päritolust ja omadustest.
Subsequently a linear gradient is started, which brings the eluent composition to 90 % B in five minutes.
Kasutada täpselt sama meetodit, mida on kirjeldatud standardproovide (5.4.1–5.4.2) puhul punktides 8.2–8.4.4.
This composition is maintained for five minutes, after which the composition is changed, via a linear gradient in five minutes to the initial composition.
Kasutada värskelt valmistatud lahuseid, sest kaseiini makropeptiid laguneb toatemperatuuril 8 % trikloroäädikhappe keskkonnas.
Depending on the internal volume of the pumping system, the next injection can be made 15 minutes after reaching the initial conditions.
Temperatuuril 4 °C püsib lahus stabiilsena 24 tundi.
Note 1.
Pikkade analüüsiseeriate korral on automaatsisesti puhul soovitatav kasutada jahutatud proovialust.
The retention time of the CMPA should be 26 ± 2 minutes.
Märkus: Punkti 8.4.2 võib vahele jätta, kui eelmistest analüüsidest on teada algtingimustele vastav % B.
This can be achieved by varying the initial and end conditions of the first gradient.
Standardproovi [5] kromatogramm peab vastama joonisele 1.
However, the difference in the % B for the initial and end conditions of the first gradient shall remain 5 % B.
Sellel joonisel eelneb kaseiini makropeptiidi A piigile kaks väikest piiki.
Note 2.
Piigid peavad eristuma samal määral.
The eluents should be degassed sufficiently and should also remain degassed.
Enne proovide kromatograafilist analüüsi sisestada 100 μl standardproovi, mis ei sisalda laabivadakut [0] (5.4.1).
This is essential for proper functioning of the gradient pumping system.
Kromatogrammil ei tohi olla kaseiini makropeptiidi A retentsiooniajale vastavat piiki.
The standard deviation for the retention time of the CMPA peak should be smaller than 0,1 minutes (n = 10).
Määrata tundlikkustegurid R, sisestades samas mahus filtraati (8.5.1) nagu uuritavate proovide puhul.
Note 3.
Tundlikkusteguri R arvutamine
Every five samples the reference sample [5] should be injected and used to calculate a new response factor R. (9.1.1).
Kaseiini makropeptiidi A piik: R = W/H
The results of the chromatographic analysis of the test sample (E) are obtained in the form of a chromatogram in which the CMPA peak is identified by its retention time of about 26 minutes
R = kaseiini makropeptiidi A piigi tundlikkustegur,
The integrator (6.11.6) automatically calculates the peak height H of the CMPA peak.
H = kaseiini makropeptiidi A piigi kõrgus,
The baseline location should be checked in every chromatogram.
W = standardproovi [5] vadakusisaldus.
The analysis or the integration should be repeated if the baseline was incorrectly located.
Proovis sisalduva laabivadakupulbri protsendi arvutamine
Note: If the CMPA peak is sufficiently separated from other peaks valley-to-valley baseline allocation should be used, otherwise use dropping perpendiculars to a common baseline, which should have starting point close to the CMPA peak (thus not at t = 0 min!).Use for the standard and the samples the same type integration type and check in case of common baseline its consistency for the samples and the standard.
W(E) = proovis [E] sisalduva laabivadaku massiprotsent,
It is essential to examine the appearance of each chromatogram prior to quantitative interpretation, in order to detect any abnormalities due either to malfunctioning of the apparatus or the column, or to the origin and nature of the sample analysed.
R = kaseiini makropeptiidi A piigi tundlikkustegur (9.1.1),
Apply exactly the procedure described from point 8.2 to point 8.4.4 to the standard samples (5.4.1 to 5.4.2).
H(E) = proovi [E] kaseiini makropeptiidi A piigi kõrgus.
Use freshly prepared solutions, because CMP degrades in an 8 % trichloroacetic acid environment at room temperature.
Kui W(E) on suurem kui 1 % ning kui retentsiooniaegade erinevus proovi ja standardproovi [5] puhul on väiksem kui 0,2 minutit, näitab see, et proov sisaldab laabivadakupulbrit.
At 4 °C the solution remains stable for 24 hours.
Ei ole määratud.
In the case of long series of analyses the use of a cooled sample tray in the automatic injector is desirable
Lineaarsus
Note: 8.4.2. may be omitted if the % B at initial conditions is known from previous analyses.
Laabivadaku kontsentratsioonide vahemikus 0–16 % peavad tulemused olema lineaarses seoses korrelatsioonikoefitsiendiga > 0,99.
The chromatogram of the reference sample [5] should be analogous to Figure.
1 % piir hõlmab korratavusest tulenevalt määramatust.
In this figure the CMPA peak is preceded by two small peaks.
Ni–4.6 standard
It is essential to obtain a similar separation.
Neeldumine (220 nm)
Prior to chromatographic determination of the samples inject 100 μl of the standard sample without rennet whey [0] (5.4.1)
Aeg (min)
The chromatogram should not show a peak at the retention time of the CMPA peak.
Analüütiliste meetodite täpsusnäitajad.
Determine the response factors R by injecting the same volume of filtrate (8.5.1) as used for the samples.
Võrdluskatse läbiviimise meetod.“
Calculation of the response factor R:
Lisatakse järgmised lisad.
CMPA peak: R = W/H
VII LISA
R = the response factor of the CMPA peak
Eraladustuslepingute alusel ladustatud lõssipulbri analüüsi meetodid
H = the height of the CMPA peak
Rasvata kuivainete (v.a sool) sisaldus
W = the quantity of whey in the standard sample [5].
Soolasisaldus
Calculation of the percentage of rennet whey powder in the sample
Kasutatava meetodi kiidab heaks makseasutus.
W(E) = the percentage (m/m) of rennet whey in the sample (E).
VII LISA
H(E) = the height of the CMPA peak of the sample (E)
VIII LISA
If W(E) is greater than 1 % and the difference between the retention time and that of the standard sample [5] is smaller than 0,2 minutes then rennet whey solids are present.
Eraladustuslepingute alusel ladustatud juustu analüüsi meetodid
Not determined.
Selle tagamiseks, et juust, mis peaks olema valmistatud üksnes lamba-, kitse- või pühvlipiimast või lamba-, kitse- ja pühvlipiima segust, ei sisaldaks lehmapiima kaseiini, kasutatakse liites esitatud analüüsimeetodit.
Linearity
Lehmapiima kaseiini sisaldust peetakse tõendatuks, kui uuritavas proovis on lehmapiima kaseiini sama palju või rohkem kui liites kehtestatud standardproovis, mis sisaldab 1 % lehmapiima.
From 0 to 16 % of rennet whey a linear relationship should be obtained with a coefficient of correlation > 0,99.
Meetodeid lehmapiima kaseiini tuvastamiseks lõikes 1 osutatud juustudes võib kasutada tingimusel, et:
The 1 % limit includes the uncertainty due to reproducibility.
avastamispiir on 0,5 % või väiksem;
Ni—4.6 standard
valepositiivseid tulemusi ei esine ja
Absorbance (220 nm)
lehmapiima kaseiin on nõutava tundlikkusega tuvastatav isegi pärast pikka laagerdusaega, mis võib esineda tavalistes kaubandustingimustes.
time (Minutes)
Kui mõni eespool nimetatud nõuetest ei ole täidetud, tuleb kasutada liites esitatud meetodeid.
International IDF Standard 135B/1991.
Liide
Milk and milk products.
MEETOD LEHMAPIIMA JA LEHMAPIIMA KASEINAADI MÄÄRAMISEKS JUUSTUS, MIS ON VALMISTATUD LAMBA-, KITSE- VÕI PÜHVLIPIIMAST VÕI LAMBA-, KITSE- JA PÜHVLIPIIMA SEGUST
Precision characteristics of analytical methods.
RAKENDATAVUS
Outline of collaborative study procedure.’
Lehmapiima ja lehmapiima kaseinaadi määramine lamba-, kitse- või pühvlipiimast või lamba-, kitse- ja pühvlipiima segust valmistatud juustus γ-kaseiinide isoelektrilise fookustamise abil pärast lüüsimist plasmiiniga.
the following Annexes are added:
RAKENDUSALA
ANNEX VI
Käesolev tundlik ja spetsiifiline meetod sobib töötlemata ja kuumtöödeldud lehmapiima ning lehmapiima kaseinaadi tuvastamiseks laagerdumata ja laagerdunud juustus, mis on valmistatud lamba-, kitse- või pühvlipiimast või lamba-, kitse- ja pühvlipiima segust.
Methods of analysis of butter under private storage
See meetod ei sobi võltsimise tuvastamiseks, kui piima või juustu on võltsitud lehmapiimast eraldatud kuumtöödeldud vadakuvalgu kontsentraadiga.
Non Fat Solids (excluding salt)
Kaseiinide eraldamine juustust ja etalonainetest
Salt
Eraldatud kaseiinide lahustamine ja lõhustamine plasmiiniga (EC.3.4.21.7)
The method to be applied shall be approved by the paying agency.
Plasmiiniga töödeldud kaseiinide isoelektriline fookustamine karbamiidi juuresolekul ja valkude värvimine
ANNEX VII
Värviga töödeldud γ3- ja γ2-kaseiini mustrite (tõend lehmapiima olemasolust) võrdlemine mustritega, mis on saadud katsetes 0 % ja 1 % lehmapiima sisaldavate etalonainetega samas geelis.
Methods of analysis of skimmed milk powder under private storage
Kui ei ole öeldud teisiti, tuleb kasutada analüütiliselt puhtaid kemikaale.
ANNEX VIII
Vesi peab olema kahekordselt destilleeritud või samaväärse puhtusastmega.
Methods of analysis of cheeses under private storage
Märkus: järgnev eeskiri kehtib laboris valmistatud karbamiidisisaldusega polüakrüülamiidgeelide puhul mõõtmetega 265 × 125 × 0,25 mm.
The method of analysis laid down in the Appendix shall be used to ensure that cheese made exclusively from ewe's milk, goat's milk or buffalo milk or from a mixture of ewe's milk, goat's milk and buffalo milk does not contain cow's milk casein.
Kui kasutatakse muud tüüpi ja teistsuguse suurusega geele, tuleb lahutustingimusi vastavalt kohandada.
Cow's milk casein is considered to be present if the cow's milk casein content of the analysed sample is equal to or higher than the content of the reference sample containing 1 % cow's milk as laid down in the Appendix.
Isoelektriline fookustamine
Methods for detecting cow's milk casein in cheeses referred to in paragraph 1 may be used provided that:
Reaktiivid karbamiidi sisaldavate polüakrüülamiidgeelide valmistamiseks
the detection limit is maximum 0,5 % and
Geeli põhilahus
there are no false-positive results and
Lahustada vees:
cow's milk casein is detectable with the required sensitivity even after long ripening periods, as may occur in usual commercial conditions.
4,85 g akrüülamiidi,
If any of the above mentioned requirements is not met, the methods laid down in the Appendix shall be used.
0,15 g N,N′-metüleenbisakrüülamiidi (BIS),
Appendix
48,05 g karbamiidi,
METHOD FOR THE DETECTION OF COW'S MILK AND CASEINATE IN CHEESES FROM EWE'S MILK, GOAT'S MILK OR BUFFALO MILK OR MIXTURES OF EWE'S MILK, GOAT'S MILK AND BUFFALO MILK
15,00 g 87massiprotsendilist glütserooli,
SCOPE
täiendada ruumalani 100 ml ning säilitada külmikus tumedas klaaspudelis.
Detection of cow's milk and caseinate in cheeses made from ewe's milk, goat's milk, buffalo milk or mixtures of ewe's, goat's and buffalo milk by isoelectric focusing of γ-caseins after plasminolysis.
Märkus: neurotoksilise akrüülamiidi määratletud kaalutiste asemel on parem kasutada müügil olevat akrüülamiidi ja BISi eelvalmistatud lahust.
FIELD OF APPLICATION
Kui valmislahus sisaldab 30 % massikontsentratsioonis akrüülamiidi ja 0,8 % massikontsentratsioonis BISi, tuleb eespool nimetatud segu valmistamiseks võtta nimetatud kaalutiste asemel 16,2 ml valmislahust.
The method is suitable for sensitive and specific detection of native and heat-treated cow's milk and caseinate in fresh and ripened cheeses made from ewe's milk, goat's milk, buffalo milk or mixtures of ewe's, goat's and buffalo milk.
Põhilahuse säilivusaeg on kuni 10 päeva; kui põhilahuse juhtivus on suurem kui 5 μS, tuleb see deioniseerida, segades seda 2 g ioonvahetiga Amberlite MB-3 kolmekümne minuti jooksul ja filtreerides seejärel läbi 0,45 m membraani.
It is not suitable for the detection of milk and cheese adulteration by heat-treated bovine whey protein concentrates.
Geeli lahus
Isolation of caseins from cheese and the reference standards
Segada geeli põhilahus (vt 4.1.1) lisandite ja amfolüütidega (*):
Dissolving of the isolated caseins and submitting to plasmin (EC.3.4.21.7) cleavage
9,0 ml põhilahust;
Isoelectric focusing of plasmin-treated caseins in the presence of urea and staining of proteins
24 mg β-alaniini;
Evaluation of stained γ3 and γ2 -casein patterns (evidence of cow's milk) by comparison of the pattern obtained from the sample with those obtained in the same gel from the reference standards containing 0 % and 1 % cow's milk.
500 μl amfolüüti, pH 3,5–9,5;
Unless otherwise indicated, analytical grade chemicals shall be used.
250 μl amfolüüti, pH 5–7;
Water shall be double-distilled or of equivalent purity.
250 μl amfolüüti, pH 6–8.
Note: The following details apply to laboratory prepared polyacrylamide gels containing urea, of dimensions 265 × 125 × 0,25 mm.
Segada geeli lahus ning degaseerida see ultrahelivannis või vaakumis kahe kuni kolme minuti jooksul.
Where other sizes and types of gel are used, the separation conditions may have to be adjusted.
Märkus: geeli lahus valmistada vahetult enne selle valamist kattekilele (vt 6.2).
Isoelectric focusing
Katalüsaatori lahused
Reagents for production of the urea containing polyacrylamide gels
N,N,N′,N′-tetrametüületüleendiamiin (TEMED)
Stock gel solution
40 % massikontsentratsiooniga ammooniumpersulfaadi lahus (PER):
Dissolve:
lahustada 800 mg PERi vees ja täiendada ruumalani 2 ml.
4,85 g acrylamide
Märkus: alati tuleb kasutada värskelt valmistatud PERi lahust.
0,15 g N, N′-methylene-bis-acrylamide (BIS)
Kontaktvedelik
48,05 g urea
Petrool või vedel parafiin
15,00 g glycerol (87 % w/w),
Anoodilahus
in water and make up to 100 ml and store in a brown glass bottle in the refrigerator.
Lahustada 5,77 g 85massiprotsendilist fosforhapet vees ja täiendada ruumalani 100 ml.
Note: A commercially available pre-blended acrylamide/BIS solution may be used in preference to the quoted fixed weights of the neurotoxic acrylamides.
Katoodilahus
Where such a solution contains 30 % w/v acrylamide and 0,8 % w/v BIS, a volume of 16,2 ml shall be used for the formulation instead of the fixed weights.
Lahustada 2,00 g naatriumhüdroksiidi vees ja täiendada veega ruumalani 100 ml.
The shelf life of the stock solution is a maximum of 10 days; if its conductivity is more than 5 μS, de-ionize by stirring with 2 g Amberlite MB-3 for 30 minutes, then filter through a 0,45 μm membrane.
Proovi ettevalmistamine
Gel solution
Reaktiivid valgu eraldamiseks