natgillin/translations-raw huggingface dataset:
All endpoints of the OECD test guideline have been validated on the fathead minnow, and a subset of endpoints has been validated in the Japanese medaka (i.e. vitellogenin and secondary sex characteristics) and the zebrafish (i.e. vitellogenin).
Katse võib lugeda nõuetekohaseks, kui on tõendatud, et lahusti ei mõjuta märkimisväärselt koorumiseni kuluvat ajavahemikku ega elulemust ega avalda embrüotele muud negatiivset mõju (vt punkti 8 alapunkt c).
The validation work has been peer-reviewed by a panel of experts nominated by the National Coordinators of the OECD Test Guideline Programme (6) in part, and by an independent panel of experts commissioned by the United States Environmental Protection Agency (29).
Kokkupuute algus ja katse kestus
The assay is not designed to identify specific mechanisms of hormonal disruption because the test animals possess an intact hypothalamic-pituitary-gonadal (HPG) axis, which may respond to chemicals that impact on the HPG axis at different levels.
Katset alustatakse võimalikult kiiresti pärast marjaterade viljastamist ja see lõpetatakse 96 tunni pikkuse kokkupuuteperioodi lõppedes.
This test method describes an in vivo screening assay where sexually mature male and spawning female fish are held together and exposed to a chemical during a limited part of their life-cycle (21 days).
Embrüod peaksid olema ümbritsetud katselahusest enne blastodiski lõigustumise algust või hiljemalt 16-rakulisse staadiumisse jõudmise ajaks.
At termination of the 21-day exposure period, two biomarker endpoints are measured in males and females as indicators of endocrine activity of the test chemical; these endpoints are vitellogenin and secondary sexual characteristics.
Kokkupuute alustamiseks võimalikult väikese viivitusega valitakse juhuslikult vähemalt kaks korda suurem arv marjateri, kui on vajalik kõikide katserühmade jaoks, ja viiakse need hiljemalt 90 minutit pärast viljastamist eri kontsentratsiooniga lahustesse ja kontroll-lahustesse (nt 100 ml kristalliseerimisnõusse; marjaterad peaksid olema täielikult kaetud).
Vitellogenin is measured in fathead minnow, Japanese medaka and zebrafish, whereas secondary sex characteristics are measured in fathead minnow and Japanese medaka.
Elujõulised viljastatud marjaterad tuleks eraldada viljastamata marjateradest ja viia 24-kannulistele plaatidele, mida on eelnevalt 24 tundi katsetingimustes hoitud ja mille kannud on 180 minuti jooksul pärast viljastamist uuesti täidetud 2 ml värskelt valmistatud katselahusega.
Additionally, quantitative fecundity is monitored daily throughout the test.
Stereomikroskoobi abil (soovitatavalt ≥ 30-kordse suurendusega) valitakse välja lõigustuvad viljastatud marjaterad, millel ei täheldata nähtavaid lõigustumishäireid (nt asümmeetriat, vesiikulite moodustumist) ega koorioni kahjustusi.
Gonads are also preserved and histopathology may be evaluated to assess the reproductive fitness of the test animals and to add to the weight of evidence of other endpoints.
Marjaterade kogumist ja eraldamist on kirjeldatud 3. liites joonistel 1 ja 3 ning 4. liites joonisel 2.
This bioassay serves as an in vivo reproductive screening assay and its application should be seen in the context of the “OECD Conceptual Framework for the Testing and Assessment of Endocrine Disrupting Chemicals” (30).
Marjaterade jaotamine 24-kannulistele plaatidele
In this Conceptual Framework the Fish Short Term Reproduction Assay is proposed at Level 3 as an in vivo assay providing data about selected endocrine mechanism(s)/pathway(s).
Marjaterad jaotatakse kannudega plaatidele järgmiselt (vt ka 4. liite joonis 1):
Vitellogenin (VTG) is normally produced by the liver of female oviparous vertebrates in response to circulating endogenous oestrogen.
20 marjatera ühele plaadile iga katsekontsentratsiooni kohta;
It is a precursor of egg yolk proteins and, once produced in the liver, travels in the bloodstream to the ovary, where it is taken up and modified by developing eggs.
20 marjatera ühele lahustiga kontrollplaadile (vajaduse korral);
Vitellogenin is almost undetectable in the plasma of immature female and male fish because they lack sufficient circulating oestrogen; however, the liver is capable of synthesising and secreting vitellogenin in response to exogenous oestrogen stimulation.
20 marjatera ühele positiivse kontrolli plaadile;
The measurement of vitellogenin serves for the detection of chemicals with various oestrogenic modes of action.
4 marjatera lahjendusvees plaadisisese kontrollina igale eespool nimetatud plaadile;
The detection of oestrogenic chemicals is possible via the measurement of vitellogenin induction in male fish, and it has been abundantly documented in the scientific peer-reviewed literature (e.g. (7)).
24 marjatera lahjendusvees ühele negatiivse kontrolli plaadile.
Vitellogenin induction has also been demonstrated following exposure to aromatisable androgens (8, 9).
Iga katses kasutatava embrüo puhul tehtavad lõppnäitajate vaatlused hõlmavad järgmist: embrüo koaguleerumine, somiitide moodustumata jäämine, saba eraldumata jäämine ja südamelöökide puudumine (tabel 1).
A reduction in the circulating level of oestrogen in females, for instance through the inhibition of the aromatase converting the endogenous androgen to the natural oestrogen 17β-estradiol, causes a decrease in the VTG level which is used to detect chemicals having aromatase inhibiting properties (10, 11).
Nende vaatluste tulemusi kasutatakse letaalsuse kindlakstegemiseks: ükskõik millise kõnealuse vaatluse positiivne tulemus tähendab seda, et asjaomane vöödilise daanio embrüo on surnud.
The biological relevance of the vitellogenin response following oestrogenic/aromatase inhibition is established and has been broadly documented.
Peale selle registreeritakse katse- ja kontrollrühmades alates esimese 48 tunni möödumisest iga päev koorumise määr.
However, it is possible that production of VTG in females can also be affected by general toxicity and non-endocrine toxic modes of action, e.g. hepatotoxicity.
Vaatlustulemused registreeritakse iga 24 tunni järel, kuni katse on lõppenud.
Several measurement methods have been successfully developed and standardised for routine use.
Lõppnäitajate vaatlused ägeda mürgisuse hindamiseks vöödilise daanio embrüotel 24–96 tundi pärast viljastamist
This is the case of species-specific Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) methods using immunochemistry for the quantification of VTG produced in small blood or liver samples collected from individual fish (12, 13, 14, 15, 16, 17, 18).
Kokkupuuteaeg
Fathead minnow blood, zebrafish blood or head/tail homogenate, and medaka liver are sampled for VTG measurement.
24 tundi
In medaka, there is a good correlation between VTG measured from blood and from liver (19).
48 tundi
Appendix 6 provides the recommended procedures for sample collection for VTG analysis.
72 tundi
Kits for the measurement of VTG are widely available; such kits should be based on a validated species-specific ELISA method.
96 tundi
Secondary sex characteristics in male fish of certain species are externally visible, quantifiable and responsive to circulating levels of endogenous androgens; this is the case for the fathead minnow and the medaka — but not for zebrafish which does not possess quantifiable secondary sex characteristics.
Embrüote koaguleerumine
Females maintain the capacity to develop male secondary sex characteristics, when they are exposed to androgenic chemicals in water.
Somiitide moodustumata jäämine
Several studies are available in the scientific literature to document this type of response in fathead minnow (20) and medaka (21).
Sabaalgme eraldumata jäämine külgvaates
A decrease in secondary sex characteristics in males should be interpreted with caution because of low statistical power, and should be based on expert judgement and weight of evidence.
Südamelöökide puudumist
There are limitations to the use of zebrafish in this assay, due to the absence of quantifiable secondary sex characteristics responsive to androgenic acting chemicals.
Embrüote koaguleerumine: koaguleerunud embrüod on piimjasvalged ja näevad mikroskoobi all välja tumedad (vt 5. liite joonis 1).
In the fathead minnow, the main indicator of exogenous androgenic exposure is the number of nuptial tubercles located on the snout of the female fish.
Koaguleerunud embrüote arv tehakse kindlaks pärast 24, 48, 72 ja 96 tunni möödumist.
In the medaka, the number of papillary processes constitutes the main marker of exogenous exposure to androgenic chemicals in female fish.
Somiitide moodustumata jäämine: normaalselt arenevas vöödilise daanio embrüos moodustub esimese 24 tunni jooksul temperatuuril 26 ± 1 °C umbes 20 somiiti (vt 5. liite joonis 2).
Appendix 5A and Appendix 5B indicate the recommended procedures to follow for the evaluation of sex characteristics in fathead minnow and in medaka, respectively.
Normaalselt arenenud embrüo liigutab end spontaanselt (kokkutõmbed küljelt küljele).
The 21-day fish assay includes the evaluation of quantitative egg production and preservation of gonads for optional histopathology examination.
Spontaansed liigutused annavad tunnistust somiitide moodustumisest.
Some regulatory authorities may require this additional endpoint for a more complete evaluation of the reproductive fitness of the test animals, or in cases where vitellogenin and secondary sex characteristics did not respond to the chemical exposure.
Somiitide puudumine registreeritakse pärast 24, 48, 72 ja 96 tunni möödumist.
Although some endpoints may be highly diagnostic (e.g. VTG induction in males and tubercle formation in females), not all endpoints (e.g. fecundity and gonad histopathology) in the assay are intended to unequivocally identify specific cellular mechanisms of action.
Somiitide moodustumata jäämine esimese 24 tunni jooksul võib olla tingitud arengu üldisest pidurdumisest.
Rather, the suite of endpoints, collectively, allows inferences to be made with regard to possible endocrine disturbances and thus provide guidance for further testing.
Somiidid peaksid olema tekkinud hiljemalt 48 tunni jooksul.
Although not endocrine specific, fecundity, due to its demonstrated sensitivity across known endocrine active chemicals (5), is an important endpoint to include because when it and other endpoints are unaffected one is more confident that a compound is not likely endocrine active.
Vastasel juhul loetakse asjaomane embrüo surnuks.
However, when fecundity is affected it will contribute heavily in weight of evidence inferences.
Saba eraldumata jäämine: normaalselt arenevas vöödilise daanio embrüos täheldatakse saba eraldumist rebukotist (vt 5. liite joonis 3) pärast embrüo keha tagaosa pikenemist.
Guidance on data interpretation and acceptance of test results is provided further in this test method.
Saba eraldumata jäämine registreeritakse pärast 24, 48, 72 ja 96 tunni möödumist.
Definitions used in this test method are given in Appendix 1.
Südamelöökide puudumine: normaalselt arenevas vöödilise daanio embrüos on südamelöögid temperatuuril 26 ± 1 °C vaadeldavad pärast 48 tunni möödumist (vt 5. liite joonis 4).
In the assay, male and female fish in a reproductive status are exposed together in test vessels.
Selle lõppnäitaja registreerimisel tuleb olla eriti hoolikas, kuna ebakorrapäraseid südamelööke ei tohiks registreerida letaalsuse ilminguna.
Their adult and reproductive status enables a clear differentiation of each sex, and thus a sex-related analysis of each endpoint, and ensures their sensitivity towards exogenous chemicals.
Peale selle ei peeta letaalseks ilminguks nähtavaid südamelööke ilma ringluseta kõhuaordis.
At test termination, sex is confirmed by macroscopic examination of the gonads following ventral opening of the abdomen with scissors.
Selle lõppnäitaja registreerimiseks tuleks embrüoid, kellel südamelöögid puuduvad, jälgida vähemalt 80-kordsel suurendusel vähemalt ühe minuti vältel.
An overview of the relevant bioassay conditions are provided in Appendix 2.
Südamelöökide puudumine registreeritakse pärast 48, 72 ja 96 tunni möödumist.
The assay is normally initiated with fish sampled from a population that is in spawning condition; senescent animals should not be used.
Koorumise määr nii katse- kui ka kontrollrühmades tuleks registreerida alates esimese 48 tunni möödumisest ja esitada see katseprotokollis.
Guidance on the age of fish and on the reproductive status is provided in the section on Selection of fish.
Ehkki koorumist ei kasutata lõppnäitajana LC50 arvutamiseks, võib see näitaja aidata andmeid tõlgendada, kuna koorumisega tagatakse embrüo kokkupuude kemikaaliga, ilma et koorioni võimalik kaitsefunktsioon seda takistaks.
The assay is conducted using three chemical exposure concentrations as well as a water control, and a solvent control if necessary.
Vöödilise daanio embrüo normaalset arengut (35) ja ebanormaalse arengu näiteid on üksikasjalikult kirjeldatud ja kujutatud 3. ja 5. liites.
Two vessels or replicates per treatment are used for zebrafish (each vessel containing 5 males and 5 females).
Analüütilised mõõtmised
Four vessels or replicates per treatment are used for fathead minnow (each vessel containing 2 males and 4 females).
Katse alguses ja lõpus mõõdetakse kontrollrühma(de)s ja uuritava kemikaali suurima kontsentratsiooniga rühmas pH, üldkaredus ja juhtivus.
This is to accommodate the territorial behaviour of male fathead minnow while maintaining sufficient power of the assay.
Uuendamisel põhinevas poolstaatilises süsteemis tuleks pH mõõta enne ja pärast vee vahetamist.
Four vessels or replicates per treatment are used for medaka (each vessel containing 3 males and 3 females).
Lahustunud hapniku sisaldus mõõdetakse katse lõpus negatiivses kontrollis ja suurimal katses kasutatud kontsentratsioonil, mille juures embrüod on elujõulised; nendes rühmades peab see olema vastavuses katse nõuetekohasuse kriteeriumidega (vt punkti 8 alapunkt f).
The exposure is conducted for 21-days and sampling of fish is performed at day 21 of exposure.
Kui on kahtlus, et temperatuur 24-kannuliste plaatide lõikes kõigub, mõõdetakse temperatuur kolmes juhuslikult valitud nõus.
Quantitative fecundity is monitored daily.
Soovitatavalt tuleks temperatuuri katse vältel registreerida pidevalt või vähemalt kord päevas.
On sampling at day 21, all animals are killed humanely.
Staatilises süsteemis tuleks uuritava kemikaali sisaldus mõõta katse alguses ja lõpus vähemalt väikseimal ja suurimal katses kasutataval kontsentratsioonil, kuid soovitatavalt igal katsekontsentratsioonil.
Secondary sex characteristics are measured in fathead minnow and medaka (see Appendix 5A and Appendix 5B); blood samples are collected for determination of VTG in zebrafish and fathead minnow, alternatively head/tail can be collected for the determination of VTG in zebrafish (Appendix 6); liver is collected for VTG analysis in medaka (Appendix 6); gonads are fixed either in whole or dissected for potential histopathological evaluation (22).
Poolstaatilises (uuendamisega) katses, kus uuritava kemikaali sisaldus püsib eeldatavalt vahemikus ± 20 % nominaalväärtusest, soovitatakse seda analüüsida vähemalt suurimal ja väikseimal katsekontsentratsioonil pärast värske lahuse valmistamist ja vahetult enne lahuse uuendamist.
TEST ACCEPTANCE CRITERIA
Katsete puhul, kus uuritava kemikaali sisaldus ei püsi eeldatavalt vahemikus ± 20 % nominaalväärtusest, tuleb seda analüüsida kõikidel katsekontsentratsioonidel pärast värske lahuse valmistamist ja vahetult enne lahuse uuendamist.
For the test results to be acceptable the following conditions apply:
Kui lahust ei ole analüüsimiseks piisavalt, võib olla kasu katselahuste ühtekoondamisest või selliste asenduskambrite kasutamisest, mis on samast materjalist kui 24-kannulised plaadid ja millel on sama ruumala ja pindala suhe.
the mortality in the water (or solvent) controls should not exceed 10 per cent at the end of the exposure period;
On tungivalt soovitatav, et tulemused põhineksid mõõdetud kontsentratsioonidel.
the dissolved oxygen concentration should be at least 60 per cent of the air saturation value (ASV) throughout the exposure period;
Kui kontsentratsioonid ei püsi vahemikus 80–120 % nominaalväärtusest, tuleks mõju avaldumise kontsentratsioone väljendada kontsentratsiooni mõõdetud väärtuste geomeetrilise keskmise suhtes; seda on üksikasjalikumalt kirjeldatud OECD juhenddokumendi „Aquatic Toxicity Testing of Difficult Substances and Mixtures“ („Raskesti uuritavate ainete ja segude veekeskkonnas avalduva mürgisuse uurimine“) (28) 5. peatükis.
the water temperature should not differ by more than ± 1,5 °C between test vessels at any one time during the exposure period and be maintained within a range of 2 °C within the temperature ranges specified for the test species (Appendix 2);
PIIRSISALDUSKATSE
evidence should be available to demonstrate that the concentrations of the test chemical in solution have been satisfactorily maintained within ±20 % of the mean measured values;
Käesolevas katsemeetodis kirjeldatud korra alusel võib teha piirsisalduskatse uuritava kemikaali kontsentratsioonil 100 mg/l või katsekeskkonnas lahustuvuse piirkontsentratsioonil (olenevalt sellest, kumb neist on väiksem) ja selle abil tõendada, et kemikaali LC50 on sellest kontsentratsioonist suurem.
evidence that fish are actively spawning in all replicates prior to initiating chemical exposure and in control replicates during the test.
Piirsisalduskatses tuleks kasutada nii katserühma kui ka positiivse kontrolli ja vajaduse korral lahustiga kontrolli puhul 20 embrüot ning negatiivse kontrolli puhul 24 embrüot.
oxygen and pH meters;
Mis tahes täheldatud mõju tuleks registreerida.
equipment for determination of water hardness and alkalinity;
Kui negatiivse (või lahustiga) kontrolli puhul on suremus suurem kui 10 %, loetakse katsetulemused kehtetuks ja katset tuleks korrata.
adequate apparatus for temperature control and preferably continuous monitoring;
Käesoleva katsemeetodi puhul käsitletakse iga üksikut kannu statistilises analüüsis sõltumatu paralleelproovina.
tanks made of chemically inert material and of a suitable capacity in relation to the recommended loading and stocking density (see Appendix 2);
Selliste embrüote protsentuaalne osakaal, mille puhul vähemalt ühe lõppnäitaja vaatluse tulemus on 48 ja/või 96 tunni möödudes positiivne, kantakse graafikule sõltuvuses katsekontsentratsioonist.
spawning substrate for fathead minnow and zebrafish, Appendix 4 gives the necessary details.
Saadud kõvera tõusude, LC50 ja usaldusnivoole 95 % vastavate usalduspiiride arvutamiseks tuleks kasutada sobivaid statistikameetodeid (38) ja tutvuda OECD juhenddokumendiga „Current Approaches in the Statistical Analysis of Ecotoxicity Data“ („Praegused meetodid ökotoksilisuse andmete statistiliseks analüüsiks“) (39).
suitably accurate balance (i.e. accurate to ± 0,5 mg).
kemikaali identimisandmed, näiteks IUPACi või CASi nimetus, CASi number, SMILESi või InChI kood, struktuurivalem, puhtus, võimaluse ja vajaduse korral lisandite keemiline määratlus jne, sealhulgas vajaduse korral orgaanilise süsiniku sisaldus;
Any water in which the test species shows suitable long-term survival and growth may be used as test water.
Katseorganismid:
The pH of the water should be within the range 6,5 to 8,5, but during a given test it should be within a range of ± 0,5 pH units.
kasutatud katserežiim (nt uuendamisega poolstaatiline režiim);
In order to ensure that the dilution water will not unduly influence the test result (for example by complexion of test chemical); samples should be taken at intervals for analysis.
valgustusperiood;
Measurements of heavy metals (e.g. Cu, Pb, Zn, Hg, Cd, and Ni), major anions and cations (e.g. Ca2+, Mg2+, Na+, K+, Cl–, and SO42–), pesticides (e.g. total organophosphorus and total organochlorine pesticides), total organic carbon and suspended solids should be made, for example, every three months where dilution water is known to be relatively constant in quality.
katseplaan (nt katsekambrite arv, kontrollide liigid);
If water quality has been demonstrated to be constant over at least one year, determinations can be less frequent and intervals extended (e.g. every six months).
vee kvaliteedinäitajad kalade pidamisel (nt pH, karedus, temperatuur, juhtivus, lahustunud hapniku sisaldus);
Some chemical characteristics of acceptable dilution water are listed in Appendix 3.
lahustunud hapniku sisaldus, pH, üldkaredus, temperatuur ja juhtivus katselahustes katse alguses ja 96 tundi hiljem;
The stock solution should preferably be prepared by simply mixing or agitating the test chemical in dilution water by using mechanical means (e.g. stirring or ultrasonication).
põhilahuste ja katselahuste valmistamise meetod ning lahuse uuendamise sagedus;
Saturation columns (solubility columns) can be used for achieving a suitable concentrated stock solution.
lahusti kasutamise põhjendus ja lahusti valiku põhjendus, kui lahustina ei kasutata vett;
However, in case a solvent is necessary, a solvent control should be run in parallel, at the same solvent concentration as the chemical treatments.
nominaalsed katsekontsentratsioonid ja kõik katsenõudes oleva uuritava kemikaali sisalduse määramise tulemused; tuleks esitada ka meetodiga saavutatav tuvastamise tõhusus ja määramispiir;
For difficult to test chemicals, a solvent may be technically the best solution; the OECD guidance document on aquatic toxicity testing of difficult substances and mixtures should be consulted (23).
tõendid selle kohta, et üldist elulemust käsitlevad nõuetekohasuse kriteeriumid on kontrollrühmades täidetud;
The choice of solvent will be determined by the chemical properties of the substance or mixture.
marjaterade viljastamise määr;
The OECD guidance document recommends a maximum of 100 μl/l, which should be observed.
koorumise määr katse- ja kontrollrühmades.
However a recent review (24) highlighted additional concerns when using solvents for endocrine activity testing.
suurim kontsentratsioon, mille puhul katse vältel ei täheldata suremust;
Therefore it is recommended that the solvent concentration, if necessary, is minimised wherever technically feasible (dependent on the physical-chemical properties of the test chemical).
väikseim kontsentratsioon, mille puhul suremus katse vältel on 100 %;
A flow-through test system will be used.
kumulatiivne suremus soovitatavatel vaatlusaegadel iga kontsentratsiooni juures;
Such a system continually dispenses and dilutes a stock solution of the test chemical (e.g. metering pump, proportional diluter, saturator system) in order to deliver a series of concentrations to the test chambers.
suremuse näitajana LC50 väärtus 96 tunni (ja soovi korral 48 tunni) möödudes, võimaluse korral koos usalduspiiridega usaldusnivool 95 %;
The flow rates of stock solutions and dilution water should be checked at intervals, preferably daily, during the test and should not vary by more than 10 % throughout the test.
kontsentratsiooni ja katse lõpuks täheldatava suremuse vahelise sõltuvuse graafik;
Care should be taken to avoid the use of low-grade plastic tubing or other materials that may contain biologically active chemicals.
suremus kontrollrühmades (negatiivne kontroll, plaadisisesed kontrollid, positiivne kontroll ja lahusti kasutamisel lahustiga kontroll);
When selecting the material for the flow-through system, possible adsorption of the test chemical to this material should be considered.
kõigi nelja lõppnäitaja vaatluse tulemusi kajastavad andmed;
Test fish should be selected from a laboratory population, preferably from a single stock, which has been acclimated for at least two weeks prior to the test under conditions of water quality and illumination similar to those used in the test.
võimalike morfoloogiliste ja füsioloogiliste kõrvalekallete esinemissagedus ja kirjeldus (näited on esitatud 5. liite joonisel 2);
It is important that the loading rate and stocking density (for definitions, see Appendix 1) be appropriate for the test species used (see Appendix 2).
katse käigus esinenud vahejuhtumid, mis võisid mõjutada tulemusi;
mortalities of greater than 10 % of population in seven days: reject the entire batch;
andmete statistiline analüüs ja töötlemine (probitanalüüs, logistilise regressiooni mudel ja geomeetriline keskmine seoses LC50-ga);