natgillin/translations-raw huggingface dataset:
10-20.
Iga kala kehaosa nummerdatakse ja fikseeritakse sobiva fikseeriva lahusega histoloogiliseks hindamiseks (22).
Chemical Characteristics of an Acceptable Dilution water
Selle meetodi kasutamisel hinnatakse vitellogeniin ja histopatoloogia iga üksiku kala puhul eraldi ja vitellogeniini sisalduse võimaliku muutuse võib siduda kala fenotüübikohase või geneetilise sooga (jaapani riisikala ja ogalik).
CONSTITUENT
Täiendava teabe saamiseks vt homogeenimise juhised (5. liide) ja vitellogeniini kvantitatiivse määramise juhend (6. liide).
CONCENTRATIONS
Maksa homogenaadi meetod vitellogeniini määramiseks
Hardness as CaCO3
Maks lõigatakse välja ja säilitatakse – 70 °C juures või madalamal temperatuuril.
However, it should be noted that if there is an interaction suspected between hardness ions and the test chemical, lower hardness water should be used (and thus, Elendt Medium M4 should not be used in this situation).
Maksa eemaldamiseks ja eeltöötluseks soovitatud meetodid on esitatud OECD katsejuhendis nr 229 (37) või käesoleva lisa peatükis C.37 (38).
Guidance for test performance
Iga kala maks seejärel homogeenitakse eraldi, nagu on kirjeldatud OECD katsejuhendis nr 229 ja käesoleva lisa peatükis C.37.
A gauze on the top and at least one side of the cage (mesh size ca.
Sellise lähenemisviisi kasutamisel saab iga kala jaoks määrata vitellogeniini ja sugunäärmete histoloogia.
1 mm)
Vereplasma meetod vitellogeniini määramiseks
B aperture for placing the emerged adults inside the breeding cage and to remove the laid egg ropes from the crystallisation dishes (not shown in this graphic)
Veri, mis on kogutud tuimastatud kalast südamepunktsiooniga, sabaveenist või sabalõike abil, tsentrifuugitakse 4 C juures plasma kogumiseks.
C breeding cage size minimum 30 cm length, 30 cm height and 30 cm width
Plasma säilitatakse – 70 C või madalama temperatuuri juures kuni kasutamiseni.
Example of a test vessel:
Terve kala surmatakse valutult ja fikseeritakse histoloogia uurimiseks.
A pasteur pipette for air supply of the overlying water
Nii plasmaproovid kui ka kalad nummerdatakse ükshaaval, et vitellogeniini sisalduse saaks siduda kala sooga.
B glass lid to prevent emerged midges from escaping
Kala lõikamine vitellogeniini mõõtmiseks pea/saba homogenaadist ja keskmise osa histoloogiliseks hindamiseks.
C water surface layer
Geneetilise soo määramine
D test vessel (glass beaker minimum 600 ml)
Bioloogiline proov geneetilise soo määramiseks võetakse üksikkaladelt, kes kuuluvad liikidesse, mille isenditel on soomarkerid.
E sediment layer
Jaapani riisikala puhul võetakse pärakuuim või seljauim.
Example of an exhauster for capturing adult midges (arrows indicate air flow direction):
liites on esitatud üksikasjalik kirjeldus, sealhulgas koeproovide võtmise ja PCR-meetodiga soo määramise kohta.
A glass tube (inner diameter ca.
liites on esitatud koeproovide võtmise ja PCR-meetodiga soo määramise kirjeldus ogaliku puhul.
5 mm) connected to a self-priming pump B cork of vulcanised rubber, perforated with glass tube (A).
Vitellogeniini määramine
On the inside, the opening of glass tube (A) is covered with some cotton and a gauze (mesh size ca.
Vitellogeniin tuleks määrata kvantitatiivse ja analüütiliselt valideeritud meetodiga.
1 mm) to prevent damaging the midges when they are sucked into the exhauster
Laboris kasutatava meetodi puhul peaks olema teada selle tulemuste katsetevaheline ja laboritevaheline varieeruvus.
C transparent container (plastic or glass, length ca.
Laborisiseste ja laboritevaheliste varieeruvuse põhjuseks on (kõige tõenäolisemalt) kalapopulatsioonide erinev arenguaste.
15 cm) for captured midges
Võttes arvesse vitellogeniini määramise varieeruvust, tuleb üksnes selle alusel leitud täheldatavat toimet mitteavaldava kontsentratsiooni (NOEC) väärtusesse suhtuda suure ettevaatusega.
D cork of vulcanised rubber, perforated with tube (E).
Vitellogeniini sünteesi hindamiseks käesolevas katses kasutatud kalaliikide puhul on mitmesuguseid meetodeid.
To release midges into the breeding cage, cork D is released from container C
Küllaltki tundlik ja spetsiifiline meetod on selle valgu kontsentratsioonide mõõtmine ensüümimmuunsorptsioonanalüüsiga (ELISA).
E tube (plastic or glass, inner diameter ca.
Tuleks kasutada sama liigi vitellogeniini suhtes saadud (homoloogseid) antikehasid ja kõige olulisemaid homoloogseid standardeid.
8 mm) to collect adult midges from vessel
Soo määramine
Schematic presentation of a life-cycle test:
Sõltuvalt vitellogeniini määramiseks proovi võtmise meetodist pannakse kas terve kala või iga kala allesjäänud keskmine osa eelnevalt märgistatud töötlemiskassetti ja fikseeritakse fikseeriva lahusega, mis sobib kala soo histoloogiliseks määramiseks (ja soovi korral ka sugunäärmete arengustaadiumi hindamiseks).
A 1st generation — test vessels containing a sediment-water system, eight replicates, 20 first instar larvae per vessel
Fikseerimise ja parafiini sisse valamise juhendid on esitatud 7. liites ja OECD juhenddokumendis „Guidance Document on the Diagnosis of Endocrine-Related Histopathology of Fish Gonads” (Juhenddokument kalade endokriinsüsteemiga seotud sugunäärmete histopatoloogia diagnoosimiseks) (22).
B four test vessels for each breeding cage, A and B
Pärast töötlemist valatakse kalad parafiinplokkidesse.
C breeding cages (A and B) for swarming, mating and oviposition
Üksikud kalad tuleks parafiinplokki paigutada pikisuunas.
D crystallising dishes for deposition of egg ropes
Igast kalast tehakse vähemalt kuus pikisuunalist frontaaltasandi lõiget (paksusega 3–5 μm), milles on näha mõlema sugunäärme koed.
E micro plates, one well for each egg rope
Nende lõigete vahekaugus peaks olema ligikaudu 50 μm isas- ja 250 μm emasloomade puhul.
F 2nd generation — test vessels containing a sediment-water system, eight replicates, 20 first instar larvae per vessel
Kuna aga igas parafiinplokis on sageli nii isas- kui ka emasloomi (kui plokis on rohkem kui üks kala), peaks plokkidest tehtavate lõigete vahekaugus olema ligikaudu 50 μm, kuni iga isase sugunäärmetest on saadud vähemalt kuus lõiget.
C.41.
Seejärel võib suurendada lõigete vahekauguse kuni ligikaudu 250 μm-ni emaskalade puhul.
FISH SEXUAL DEVELOPMENT TEST
Lõiked värvitakse hematoksüliini ja eosiini abil, ning uuritakse valgusmikroskoobiga soo määramiseks (isane, emane, vahesugu või diferentseerumata).
This test method is equivalent to OECD test guideline (TG) 234 (2011).
Vahesugu on määratletud rohkem kui ühe munaraku leidumisega niisas kuue analüüsitud lõike kohta või spermatogeneesirakkude leidumisega (jah/ei) munasarjades.
It is based on a decision from 1998 to develop new or update existing test methods for the screening and testing of potential endocrine disrupters.
Munasarjade ja munandite histopatoloogia ja arengustaadiumi määramine on vabatahtlik, kuid kui seda tehakse, tuleks andmeid statistiliselt analüüsida ja need esitada.
The Fish Sexual Development Test (FSDT) was identified as a promising test method covering a sensitive fish life stage responsive to both oestrogen and androgen-like chemicals.
Tuleks märkida, et mõnel kalaliigil (nt jaapani riisikalal ja mõnikord vöötdaaniol) ei ole looduslikult täielikult väljaarenenud sugunäärmete paari, ja siis võib kalal olla ainult üks sugunääre.
The test method went through an inter-laboratory validation exercise from 2006 to 2010, where Japanese medaka (Oryzias latipes), zebrafish (Danio rerio) and three spined stickleback (Gasterosteus aculeatus) were validated and fathead minnow (Pimephales promelas) was partially validated (41) (42) (43).
Kõik niisugused tähelepanekud tuleks registreerida.
This protocol includes Japanese medaka, the three-spined stickleback and zebrafish.
Geneetilise soo määramine üksikul jaapani riisikalal põhineb isast määrava geeni DMY olemasolu või puudumise määramisel; DMY asub Y-kromosoomis.
The protocol is in principle an enhancement of OECD TG 210 Fish, Early Life Stage Toxicity Test (1), where the exposure is continued until the fish are sexually differentiated, i.e. about 60 days post-hatch (dph) for Japanese medaka, the three-spined stickleback and zebrafish (the exposure period can be shorter or longer for other species that are validated in the future), and endocrine-sensitive endpoints are added.
Riisikala genotüübilise soo võib teha kindlaks näiteks päraku- või seljauimetüki DNA-st eraldatud DMY-geeni sekveneerimisega.
The combination of the two core endocrine endpoints, vitellogenin (VTG) concentration and phenotypic sex ratio enable the test to indicate the mode of action of the test chemical.
Koepreparaatide valmistamise ja PCR-meetodi kasutamise juhendid on esitatud 9. liites.
Due to the population-relevant change in phenotypic sex ratio, the FSDT can be used for hazard and risk assessment.
Ka üksiku ogaliku geneetiline sugu määratakse PCR-meetodiga, mida on kirjeldatud 10. liites.
However, if the test is used for hazard or risk assessment, the stickleback should not be used because the validation data available so far showed that in this species the alterations of phenotypic sex ratio by the test chemicals were uncommon.
Vahesoo (vt mõisted, 1. liide) esinemine tuleks märkida katseprotokollis.
The protocol is based on fish exposed via water to chemicals during the sex labile period in which the fish is expected to be most sensitive to the effects of endocrine disrupting chemicals that interfere with sexual development.
Teisesed sootunnused
Two core endpoints are measured as indicators of endocrine-associated developmental aberrations, the VTG concentrations and sex ratios (proportions of sex) determined via gonad histology.
Sellistel liikidel nagu jaapani riisikala on teisesed sootunnused endokriinsüsteemi kontrolli all;
Gonadal histopathology (evaluation and staging of oocytes and spermatogenetic cells) is optional.
seepärast tuleks kemikaaliga kokkupuute lõpus teha võimaluse korral kala füüsilise välimuse vaatlus.
Additionally, the genetic sex is determined whenever possible (e.g. in Japanese medaka and the three spined stickleback).
Jaapani riisikala puhul on nn papillaari moodustumine pärakuuime tagaosas emaskaladel androgeenisõltuv.
The presence of a genetic sex marker is a considerable advantage as it increases the power of the sex ratio statistics and enables the detection of individual phenotypic sex reversal.
Käesoleva lisa peatükis C.37 (38) on esitatud asjakohased fotod isaskalade ja androgeeniga mõjutatud emaskalade teiseste sootunnuste kohta.
Other apical endpoints that should be measured include hatching rate, survival, length and body weight.
On oluline, et uuritav näitaja määrataks kõige usaldusväärsema statistilise testiga.
The test method might be adaptable to other species than those mentioned above provided that the other species undergo a validation equal to the one accomplished for Japanese medaka, the three-spined stickleback and zebrafish, that the control fish are sexually differentiated at the end of the test, that VTG levels are sufficiently high to detect significant chemical-related variations, and that sensitivity of the test system is established using endocrine active reference chemicals ((anti)-oestrogens, (anti)-androgens, aromatase inhibitors etc).
Eksperimentaalne ühik on paralleelkatse, kuid paralleelkatsete vaheline hajuvus peaks olema statistilises analüüsis arvesse võetud.
In addition, any validation report(s) referring to FSDT data using other species should be reviewed by the OECD, and the validation outcome should be considered as satisfactory.
liites on esitatud otsustamisskeem; see peaks aitama kasutada kõige kohasemat statistilist testi, millega võetaks arvesse katsega saadud andmete omadusi.
Initial considerations and limitations
Statistilise olulisuse tase on 0,05 kõigi määratavate näitajate puhul.
VTG is normally produced by the liver of female oviparous vertebrates in response to circulating endogenous oestrogen (2).
Sooline jaotumine ja geneetiline sugu
The VTG synthesis is very limited, though detectable, in immature fish and adult male fish because they lack sufficient circulating oestrogen.
Soolises jaotumises tuleks analüüsiga otsida olulist mõju (NOEC/LOEC lähenemisviis), mida on avaldanud kokkupuude kemikaaliga; kui doosi-toime sõltuvus on monotoonne, siis sobib Jonckheere'i-Terpstra (trendi-)test.
However, the liver is capable of synthesising and secreting VTG in response to exogenous oestrogen stimulation (3) (4) (5).
Mittemonotoonse mõju puhul tuleb rakendada paariviisi võrdlemist:
The measurement of VTG serves for the detection of chemicals with oestrogenic, anti-oestrogenic, androgenic modes of action and chemicals that interfere with steroidogenesis as for example aromatase inhibitors.
kui saadakse normaaljaotus ja homogeenne dispersioon, tuleb kasutada Dunnetti testi.
The detection of oestrogenic chemicals is possible via the measurement of VTG induction in male fish, and it has been abundantly documented in the scientific peer-reviewed literature.
Heterogeense dispersiooni puhul kasutatakse Tamhane-Dunnetti testi.
VTG induction has also been demonstrated following exposure to aromatisable androgens (6) (7).
Muudel juhtudel kasutatakse Mann-Whitney täpset testi koos Bonferroni-Holmi kohandusega.
A reduction in the circulating level of oestrogen in females, for instance through the inhibition of the aromatase converting the endogenous androgen to the natural oestrogen 17β-oestradiol, causes a decrease in the VTG concentration, which is used to detect chemicals having aromatase inhibiting properties or steroidogenesis inhibitors more broadly (33).
liites on esitatud soolise jaotumise andmete statistilise töötlemise otsustamisskeem.
The biological relevance of the VTG response following oestrogenic/aromatase inhibition is established and has been broadly documented (8) (9).
Soolise jaotumise andmed tuleks esitada tabelis: isaste, emaste, vahesoo ja diferentseerumata suguelunditega isendite osakaal igal uuritava kemikaali kontsentratsioonil ± standardhälve.
However, it is possible that production of VTG in females can also be affected by general toxicity and non-endocrine toxic modes of action.
Esile tuleks tõsta statistiline olulisus.
Several measurement methods have been successfully developed and standardised for routine use to quantify VTG in blood, liver, whole body or head/tail homogenate samples collected from individual fish.
Kalade sugulise arengu katse valideerimise 2. etapi aruandes (42) on esitatud sellekohased näited.
This is the case for zebrafish, three-spined stickleback and Japanese medaka and also the partially validated species fathead minnow;
Geneetiline sugu tuleks esitada protsendina fenotüübi poolest isaste, emaste, vahesoost või sootunnuste osas diferentseerumata kalade hulgas.
species-specific Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) methods using immunochemistry for the quantification of VTG are available (5) (10) (11) (12) (13) (14) (15) (16).
Vitellogeniini kontsentratsioonid
In Japanese medaka and zebrafish, there is a good correlation between VTG measured from blood plasma, liver and homogenate samples although homogenates tend to show slightly lower values than plasma (17) (18) (19).
Vitellogeniini kontsentratsioonis tuleks analüüsiga otsida olulist mõju (NOEC/LOEC lähenemisviis), mida on avaldanud kokkupuude kemikaaliga.
Appendix 5 provides the recommended procedures for sample collection for VTG analysis.
Parem on kasutada Dunnetti testi kui t-testi koos Bonferroni parandusega.
Change in the phenotypic sex ratio (proportions of sex) is an endpoint reflecting sex reversal.
Kui kasutatakse Bonferroni parandust, siis on eelistatav Bonferroni-Holmi parandus.
In principle, oestrogens, anti-oestrogens, androgens, anti-androgens and steroidogenesis inhibiting chemicals can affect the sex ratio of developing fish (20).
Vitellogeniini kontsentratsiooni tuleks vaadelda logaritmilisel kujul, et saavutada normaaljaotus ja dispersiooni homogeensus.
It has been shown that this sex reversal is partly reversible in zebrafish (21) following oestrogen-like chemical exposure, whereas sex reversal following androgen-like chemical exposure is permanent (30).
Seejärel, kui kontsentratsiooni-toime sõltuvus on monotoonne, tuleks kõikidest eespool kirjeldatutest eelistada Jonckheere'i-Terpstra testi.
The sex is defined as female, male, intersex (both oocytes and spermatogenetic cells in one gonad) or undifferentiated, determined in individual fish via histological examination of the gonads.
Kui kasutatakse t-teste või Dunnetti testi, ei ole jätkamiseks vaja ANOVA olulisuse F-testi.
Guidance is given in Appendix 7 and in the OECD Guidance Document on the Diagnosis of Endocrine-Related Histopathology of Fish Gonads (22).
Üksikasjad on esitatud 8. liites otsustusskeemis.
Genetic sex is examined via genetic markers when they exist in a given fish species.
Tulemused tuleks esitada tabelis:
In Japanese medaka the female XX or male XY genes can be detected by Polymerase Chain-Reaction (PCR), or the Y-linked DM domain gene (DMY) can be analysed (DMY negative or positive) as described in (23) (24).
isaskalade, emaskalade, vahesoost kalade ja diferentseerumata suguelunditega kalade puhul mõõdetud keskmine kontsentratsioon ± standardhälve.
In three-spined stickleback, there is an equivalent PCR method for genetic sex determination described in Appendix 10.
Esile tuleks tuua statistiline olulisus fenotüübiliste emaste ja fenotüübiliste isaste puhul.
Where the genetic sex can be individually linked to the phenotypic sex, the power of the test is improved and therefore genetic sex should be determined in species with documented genetic sex markers.
Uuritava kemikaali tegelikud kontsentratsioonid
The two core endocrine endpoints, VTG and sex ratio, can in combination demonstrate the endocrine mode of action (MOA) of the chemical (Table 1).
Uuritava kemikaali tegelikke kontsentratsioone katsekambrites tuleks analüüsida sellise sagedusega, nagu on öeldud punktis 34.
The sex ratio is a population relevant biomarker (25) (26) and for some well defined modes of action, the FSDT results may be used for hazard and risk assessment purposes when deemed appropriate by the regulatory agency.
Tulemused tuleks esitada tabelites: keskmine kontsentratsioon ± standardhälve paralleelkatsete põhjal, samuti kontsentratsiooni põhjal;
These modes of action are at present oestrogens, androgens and steroidogenesis inhibitors.
lisada teave proovide arvu kohta ja tõsta esile suured, ± 20 % kõrvalekalded keskmisest uuritava kemikaali kontsentratsioonist.
Reaction of the endocrine endpoints to different modes of action of chemicals
Kalade sugulise arengu katse valideerimise 2. etapi aruandest (42) võib leida sellekohased näited.
↑ = increasing, ↓ = decreasing, — = not investigated
Katse tulemuste tõlgendamisel tuleks olla ettevaatlik, kui uuritavates lahustes mõõdetud uuritava kemikaali kontsentratsioonid on analüütilise meetodi määramispiiri lähedal.
References
Kasutatud katsemeetod (läbivoolukatse või poolstaatiline uuendamisega katse);
Weak oestrogen agonist
katse kava, sealhulgas uuritava kemikaali kontsentratsioonid, põhilahuse valmistamise meetod (lisas), uuendamise sagedus (kui kasutatakse lahustit, siis selle nimetus ja kontsentratsioon);
↑♀ or ↑Undiff
uuritava kemikaali nominaalsed kontsentratsioonid, katsekambrites mõõdetud väärtuste keskmised ja nende standardhälbed ning nende mõõtmismeetod (kasutatud analüüsimeetod tuleb esitada lisas); tõendid selle kohta, et mõõdeti uuritava kemikaali kontsentratsiooni tegelikus lahuses;
Strong oestrogen agonist
vee kvaliteet katsekambrites:
↑♀ or ↑Undiff, No ♂
üksikasjalik teave söötmise kohta (nt sööda (söötade) tüüp, päritolu, antud kogus ja söötmise sagedus ning saasteainete analüüs (nt polüklorobifenüülid, polüaromaatsed süsivesinikud ja kloororgaanilised pestitsiidid), kui see on asjakohane.
Oestrogen antagonist
Tõendid selle kohta, et kontrollkatsed vastasid nõuetekohasuse kriteeriumidele:
↓♀, ↑Undiff.
koorumismäära käsitlevad andmed tuleks esitada tabelites protsendina iga paralleelkatse ja uuritava kontsentratsiooni kohta.
Androgen agonist
Võõrväärtused, mis ei vasta heakskiitmise kriteeriumidele (kontrollides), tuleks esile tõsta.
↑♂, No ♀
Ellujäämismäär tuleks esitada tabelites protsendina iga paralleelkatse ja uuritava kontsentratsiooni kohta.
Androgen antagonist
Võõrväärtused, mis ei vasta katse nõuetekohasuse kriteeriumidele (kontrollides), tuleks esile tõsta.
↑Intersex
Selgelt tuleb esitada otsitavate näitajate jaoks saadud tulemused:
Aromatase inhibitor
embrüote ellujäämine ja koorumise õnnestumine;
The FSDT does not cover the reproductive life stage of the fish and therefore chemicals that are suspected to affect reproduction at lower concentrations than sexual development should be examined in a test that covers reproduction.
välised anomaaliad;
Definitions for the purpose of this Test Method are given in Appendix 1.
pikkus ja mass;
The in vivo FSDT is intended to detect chemicals with androgenic and oestrogenic properties as well as anti-androgenic, anti-oestrogenic and steroidogenesis inhibiting properties.
vitellogeniini mõõtmised (ng homogenaadi g kohta, ng plasma kohta või ng maksa mg kohta);
The FSDT validation phases (1 and 2) did cover oestrogenic, androgenic and steroidogenesis inhibiting chemicals.
sugunäärmete histoloogia, sooline jaotumine, geneetilise soo andmed;
The effects in the FSDT of oestrogen- and androgen antagonists can be seen in Table 1 but these MOA are less documented at present time.
kalade ebatavalised reaktsioonid ja nähtavad muutused, mida on põhjustanud uuritav kemikaal.
In the test, fish are exposed, from newly fertilised egg until the completion of sexual differentiation, to at least three concentrations of the test chemical dissolved in water.
Tulemused tuleks esitada kujul: keskväärtus ± standardhälve (SD) või standardviga (SE).
The test conditions should be flow-through unless not possible due to the availability or nature (e.g. limited solubility) of the test chemical.
Statistika tuleks käsitleda vähemalt LOEC ja NOEC väärtuste ja usaldusvahemike esitamise juures.
The test starts with the placing of newly fertilised eggs (before cleavage of the blastodisc) in the test chambers.
Järgida tuleks statistiliste töötluste skeemi (8. liide).
The loading of the chambers is described for each species in paragraph 27.
Sumpter, 1996, „Inhibition of testicular growth in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) exposed to estrogenic alkylphenolic chemicals”, Environmental Toxicology and Chemistry 15, pp. 194-202.
For the validated fish species, Japanese medaka, the three-spined stickleback and zebrafish, the test is terminated at 60 dph.
Sumpter, J.P. and S. Jobling, 1995, „Vitellogenesis As A Biomarker for Estrogenic Contamination of the Aquatic Environment”, Environmental Health Perspectives 103, pp. 173-178.
At test termination, all fish are euthanised humanely.
Hutchinson, S. Maddix, and H. Trip (1999), „An in vivo testing system for endocrine disruptors in fish early life stages using induction of vitellogenin”, Environmental Toxicology and Chemistry 18, pp. 337-347.
A biological sample (blood plasma, liver or head/tail homogenate) is collected for VTG analysis from each fish and the remaining part is fixed for histological evaluation of the gonads to determine the phenotypic sex;
Pedersen, and P. Bjerregaard (2001a), „Development of an ELISA for vitellogenin in whole body homogenate of zebrafish (Danio rerio)”, Comparative Biochemistry and Physiology C-Toxicology & Pharmacology 130, pp. 119-131.
optionally, histopathology (e.g. staging of gonads, severity of intersex) can be performed.
Andersen, L., P. Bjerregaard, and B. Korsgaard ( 2003), „Vitellogenin induction and brain aromatase activity in adult male and female zebrafish exposed to endocrine disrupters”, Fish Physiology and Biochemistry 28, pp. 319-321.
A biological sample (the anal- or the dorsal fin) for the determination of the genetic sex is taken in species possessing appropriate markers (Appendices 9 and 10).
Petersen (2003), „Gonad development and vitellogenin production in zebrafish (Danio rerio) exposed to ethinylestradiol and methyltestosterone”, Aquatic Toxicology 65, pp. 397-411.