natgillin/translations-raw huggingface dataset:
APPLICABILITY OF THE TEST
Biomassi algkontsentratsioon kuivmassina ei tohiks olla suurem kui 0,5 mg/l.
This test method is most easily applied to water-soluble chemicals which, under the conditions of the test, are likely to remain in the water.
Soovitatakse kasutada järgmisi rakkude algkontsentratsioone:
For testing of chemicals that are volatile, strongly adsorbing, coloured, having a low solubility in water or chemicals that may affect the availability of nutrients or minerals in the test medium, certain modifications of the described procedure may be required (e.g., closed system, conditioning of the test vessels).
5 × 103 – 104 rakku/ml;
Guidance on some appropriate modifications is given in (2) (3) and (4).
2 – 5 × 103 rakku/ml;
DESCRIPTION OF THE TEST METHOD
104 rakku/ml;
Test vessels and other apparatus which will come into contact with the test solutions should be made entirely of glass or other chemically inert material.
5 × 104 – 105 rakku/ml.
The items should be thoroughly washed to ensure that no organic or inorganic contaminants may interfere with the algal growth or composition of the test solutions.
Uuritava kemikaali kontsentratsioon
The test vessels will normally be glass flasks of dimensions that allow a sufficient volume of culture for measurements during the test and a sufficient mass transfer of CO2 from the atmosphere (see paragraph 30).
Kontsentratsioonivahemiku, mille puhul mõju tõenäoliselt avaldub, võib määratleda sellise vahemiku leidmiseks tehtud katsete tulemuste põhjal.
Note that the liquid volume must be sufficient for analytical determinations (see paragraph 37).
Lõpliku katse tegemisel kasutatakse vähemalt viit kontsentratsiooni, mis moodustavad geomeetrilise jada, mille tegur ei ole suurem kui 3,2.
In addition some or all of the following equipment may be required:
Kui uuritava kemikaali mõju sõltuvus kontsentratsioonist on nõrk, võib olla õigustatud suurema teguri kasutamine.
Culturing apparatus:
Kontsentratsioonide jada peaks eelistatult hõlmama vahemikku, mille puhul vetikate kasvukiirus väheneb 5–75 % võrra.
a cabinet or chamber is recommended, in which the chosen incubation temperature can be maintained at ± 2 °C.
Paralleel- ja kontrollkultuurid
Light measurement instruments:
Katseplaanis tuleks ette näha kolm paralleelkultuuri iga kasutatava kontsentratsiooni kohta.
it is important to note that the method of measurement of light intensity, and in particular the type of receptor (collector), may affect the measured value.
Kui ei nõuta täheldatavat toimet mitteavaldava kontsentratsiooni (NOEC) kindlakstegemist, võib katseplaani muuta nii, et suurendatakse kasutatavate kontsentratsioonide arvu ja vähendatakse paralleelkultuuride arvu iga kontsentratsiooni kohta.
Measurements should preferably be made using a spherical (4 π) receptor (which responds to direct and reflected light from all angles above and below the plane of measurement), or a 2 π receptor (which responds to light from all angles above the measurement plane).
Paralleelseid kontrollkultuure peab olema vähemalt kolm ja parimal juhul võiks neid olla kaks korda rohkem kui paralleelkultuure iga kasutatava kontsentratsiooni kohta.
Apparatus to determine algal biomass.
Uuritava kemikaali kontsentratsioonide määramiseks võib valmistada eraldi katselahuste seeria (vt punktid 36 ja 38).
Cell count, which is the most frequently used surrogate parameter for algal biomass, may be made using an electronic particle counter, a microscope with counting chamber, or a flow cytometer.
Kui uuritava kemikaali lahustamiseks kasutatakse lahustit, tuleb katseplaanis ette näha täiendavad kontrollkultuurid, mis sisaldavad lahustit samas kontsentratsioonis kui uuritava kemikaaliga kultuurid.
Other biomass surrogates can be measured using a flow cytometer, fluorimeter, spectrophotometer or colorimeter.
Inokulum-kultuuri valmistamine
A conversion factor relating cell count to dry weight is useful to calculate.
Et võimaldada katsevetikatel kohaneda katsetingimustega ja tagada, et katselahuste inokuleerimisel on vetikad eksponentsiaalse kasvu faasis, valmistatakse 2–4 päeva enne katse algust katsesöötmel põhinev inokulum-kultuur.
In order to provide useful measurements at low biomass concentrations when using a spectrophotometer, it may be necessary to use cuvettes with a light path of at least 4 cm.
Vetikate biomassi kogust tuleks kohandada nii, et inokulum-kultuuris oleks enne katse algust ülekaalus eksponentsiaalne kasv.
Test organisms
Inokulum-kultuuri inkubeeritakse samades tingimustes kui katsekultuure.
Several species of non-attached microalgae and cyanobacteria may be used.
Et veenduda, et katses kasutatav tüvi kasvab kultiveerimistingimustes normaalselt, mõõdetakse biomassi suurenemist inokulum-kultuuris.
The strains listed in Appendix 2 have been shown to be suitable using the test procedure specified in this test method.
Üks vetikate kultiveerimise meetodi näide on esitatud 4. liites.
If other species are used, the strain and/or origin should be reported.
Rakkude sünkroonse jagunemise ärahoidmiseks katse ajal võib olla vajalik inokulum-kultuuri teistkordne ümberkülvamine.
Confirm that exponential growth of the selected test alga can be maintained throughout the test period under the prevailing conditions.
Katselahuste valmistamine
Growth medium
Kõigis katselahustes peab söötme kontsentratsioon ja katsevetikate biomassi algkontsentratsioon olema ühesugune.
The compositions of these media are shown in Appendix 3.
Põhilahuse saamiseks lahustatakse uuritav kemikaal tavaliselt katsesöötmes.
Note that the initial pH value and the buffering capacity (regulating pH increase) of the two media are different.
Vees raskesti lahustuvate kemikaalide lisamiseks katsesöötmesse võib kasutada lahusteid, näiteks atsetooni, t-butüülalkoholi või dimetüülformamiidi (2, 3).
Therefore the results of the tests may be different depending on the medium used, particularly when testing ionising chemicals.
Lisatud lahusti kontsentratsioon ei tohiks olla suurem kui 100 μl/l ja see peaks olema sama kõigis katseseeria kultuurides, sealhulgas kontrollkultuurides.
Modification of the growth media may be necessary for certain purposes, e.g. when testing metals and chelating agents or testing at different pH values.
Inkubeerimine
Use of a modified medium should be described in detail and justified (3) (4).
Katsenõud suletakse õhku läbi laskvate korkidega.
Initial biomass concentration
Nõusid loksutatakse ja need asetatakse kultiveerimisseadmesse.
The initial biomass in the test cultures must be the same in all test cultures and sufficiently low to allow exponential growth throughout the incubation period without risk of nutrient depletion.
Katse ajal on vaja hoida vetikaid suspensioonis ja soodustada CO2 ülekannet lahusesse.
The initial biomass should not exceed 0,5 mg/l as dry weight.
Selleks tuleks kultuure pidevalt loksutada või segada.
The following initial cell concentrations are recommended:
Kultuure tuleks kasvatada temperatuurivahemikus 21–24 °C ning temperatuuri tuleks hoida täpsusega ± 2 °C.
5 × 103 – 104 cells/ml
Kui kasutatakse 2. liites loetlemata liike (nt troopilised liigid), võib valida kõrgema temperatuuri, kui see ei takista nõuetele vastavuse kriteeriumide täitmist.
2-5 × 103 cells/ml
Kolvid soovitatakse paigutada inkubaatoris juhuslikult ja muuta iga päev nende paigutust.
104 cells/ml
Kontrollsöötme pH ei tohiks katse ajal tõusta rohkem kui 1,5 ühikut.
5 × 104 – 105 cells/ml
Kui uuritakse metalle või kemikaale, mis katses kasutatavale pH-le lähedasel pH väärtusel osaliselt ioniseeruvad, võib reprodutseeritavate ja üheselt tõlgendatavate tulemuste saamiseks olla vaja piirata pH muutumise ulatust.
Concentrations of test chemical
Tehniliselt on võimalik saavutada olukord, kus pH muutus on väiksem kui 0,5 ühikut, kui tagatakse piisav CO2 massiülekanne ümbritsevast õhust katselahusesse, näiteks loksutamiskiiruse suurendamise teel.
The concentration range in which effects are likely to occur may be determined on the basis of results from range-finding tests.
Teine võimalus on vähendada CO2 tarvet, vähendades algset biomassi või lühendades katse kestust.
For the final definitive test at least five concentrations, arranged in a geometric series with a factor not exceeding 3.2, should be selected.
Pinda, kus kultuure inkubeeritakse, tuleks valgustada pidevalt ja ühtlaselt luminofoorlambiga, mille valgus on näiteks külmvalge või päevavalguse spektriga.
For test chemicals showing a flat concentration response curve a higher factor may be justified.
Vetikate ja tsüanobakterite tüvede valgusevajadus on erinev.
The concentration series should preferably cover the range causing 5-75 % inhibition of algal growth rate.
Valgustustihedus tuleks valida lähtuvalt kasutatavast katseorganismist.
Replicates and controls
Soovitatavate rohevetikaliikide puhul valitakse valgustustiheduseks katselahuste tasapinnal 60–120 μE m– 2 s– 1, mõõdetuna sobiva anduri abil fotosünteesiks sobivas lainepikkuste vahemikus 400–700 nm.
The test design should include three replicates at each test concentration.
Mõne liigi, eriti Anabaena flos-aquae tsüanobakterid kasvavad hästi väiksema valgustustiheduse juures ja suurem valgustustihedus võib neid kahjustada.
If determination of the NOEC is not required, the test design may be altered to increase the number of concentrations and reduce the number of replicates per concentration.
Sellise liigi puhul tuleks valida keskmiseks valgustustiheduseks 40–60 μE m– 2 s– 1.
The number of control replicates must be at least three, and ideally should be twice the number of replicates used for each test concentration.
Katse kestus
A separate set of test solutions may be prepared for analytical determinations of test chemical concentrations (see paragraphs 36 and 38).
Katse kestab tavaliselt 72 tundi.
When a solvent is used to solubilise the test chemical, additional controls containing the solvent at the same concentration as used in the test cultures must be included in the test design.
Võib siiski kasutada ka lühema või pikema kestusega katseid tingimusel, et on võimalik täita kõiki punkti 11 kohaseid nõuetele vastavuse kriteeriume.
Preparation of inoculum culture
Mõõtmised ja analüüsid
In order to adapt the test alga to the test conditions and ensure that the algae are in the exponential growth phase when used to inoculate the test solutions, an inoculum culture in the test medium is prepared 2-4 days before start of the test.
Vetikate biomassi igas kolvis määratakse katse ajal vähemalt üks kord ööpäevas.
The algal biomass should be adjusted in order to allow exponential growth to prevail in the inoculum culture until the test starts.
Kui mõõtmiseks kasutatakse katselahusest pipetiga võetud väikesi vedelikukoguseid, ei viida neid enam katselahusesse tagasi.
Incubate the inoculum culture under the same conditions as the test cultures.
Biomassi mõõdetakse kas mikroskoobi abil rakkude loendamise teel või elektroonilise osakeste loenduriga (määratakse rakkude arv ja/või biomaht).
Measure the increase in biomass in the inoculum culture to ensure that growth is within the normal range for the test strain under the culturing conditions.
Võib kasutada ka alternatiivmeetodeid, näiteks läbivoolutsütomeetriat, klorofülli fluorestsentsi määramist in vitro või in vivo (5, 6) või optilise tiheduse mõõtmist, kui on võimalik tõendada, et katses esinevas biomassivahemikus on asjaomaste parameetrite ja biomassi vahel piisav korrelatsioon.
An example of the procedure for algal culturing is described in Appendix 4.
Lahuste pH-d mõõdetakse katse alguses ja lõpus.
To avoid synchronous cell divisions during the test a second propagation step of the inoculum culture may be required.
Kui on olemas meetod uuritava kemikaali määramiseks katses kasutatavas kontsentratsioonivahemikus, tuleks kontrollida kemikaali algsisaldust katselahuses ja selle sisalduse püsimist katse vältel.
Preparation of test solutions
Kui kontsentratsiooni muutus katse vältel on eeldatavalt alla 20 % nominaalväärtusest, võib piisata uuritava kemikaali sisalduse määramisest katse alguses ja lõpus ühel väiksel ja ühel suurel kontsentratsioonil ja eeldatavale EC50-le lähedasel kontsentratsioonil.
All test solutions must contain the same concentrations of growth medium and initial biomass of test alga.
Kui kontsentratsioon tõenäoliselt ei püsi vahemikus 80–120 % nominaalväärtusest, soovitatakse määrata uuritava kemikaali sisaldus katse alguses ja lõpus igal kasutataval kontsentratsioonil.
Test solutions of the chosen concentrations are usually prepared by mixing a stock solution of the test chemical with growth medium and inoculum culture.
Kui uuritav kemikaal on lenduv, ebapüsiv või tugevasti adsorbeeruv, soovitatakse katse ajal võtta määramiseks iga 24 tunni järel lisaproove, et paremini jälgida uuritava kemikaali kadu.
Stock solutions are normally prepared by dissolving the chemical in test medium.
Selliste kemikaalide puhul võib olla vaja kasutada täiendavaid paralleelkultuure.
Solvents, e.g. acetone, t-butyl alcohol and dimethyl formamide, may be used as carriers to add chemicals of low water solubility to the test medium (2)(3).
Kõikidel juhtudel on uuritava kemikaali sisaldust igal kasutataval kontsentratsioonil vaja määrata ainult ühes paralleelkultuuris (või paralleelkultuuridest kokku segatud ühes proovis).
The concentration of solvent should not exceed 100 μl/l, and the same concentration of solvent should be added to all cultures (including controls) in the test series.
Söötmeid, mis on spetsiaalselt valmistatud kokkupuutekontsentratsiooni määramiseks katse ajal, tuleks käidelda täpselt samal viisil kui katses kasutatavaid söötmeid, st need inokuleeritakse vetikatega ja neid inkubeeritakse samades tingimustes.
Incubation
Kui on vaja määrata uuritava lahustunud kemikaali sisaldust, võib olla vaja eraldada söötmest vetikad.
Cap the test vessels with air-permeable stoppers.
Eraldamiseks tuleks eelistatult kasutada tsentrifuugimist väikesel kiirendusel, millest piisab vetikate sadestamiseks.
The vessels are shaken and placed in the culturing apparatus.
Kui on tõendatud, et uuritava kemikaali sisaldus ei kõigu katse vältel nominaalväärtuse või mõõdetud algväärtusega võrreldes rohkem kui ± 20 %, võib tulemuste analüüsimisel võtta aluseks nominaalväärtuse või mõõdetud algväärtuse.
During the test it is necessary to keep the algae in suspension and to facilitate transfer of CO2.
Kui kõrvalekalle sisalduse nominaalväärtusest või mõõdetud algväärtusest on suurem kui ± 20 %, tuleks tulemuste analüüsimisel võtta aluseks katse vältel esinevate väärtuste geomeetriline keskmine või mõni uuritava kemikaali sisalduse vähenemist kirjeldav mudel (3, 7).
To this end constant shaking or stirring should be used.
Vetikate kasvu pidurdumise katse on dünaamilisem kui enamik muid veeorganismidele avalduva lühiajalise mürgisuse määramise katseid.
The cultures should be maintained at a temperature in the range of 21 to 24 °C, controlled at ± 2 °C.
Seepärast võib tegeliku kokkupuutekontsentratsiooni kindlakstegemine olla raskendatud, eriti kui uuritakse adsorbeeruvat kemikaali väiksel kontsentratsioonil.
For species other than those listed in Appendix 2, e.g. tropical species, higher temperatures may be appropriate, providing that the validity criteria can be fulfilled.
Sellisel juhul ei tähenda uuritava kemikaali kadu lahusest seoses vetikate suurenevale biomassile adsorbeerumisega, et kemikaal on katsesüsteemist kadunud.
It is recommended to place the flasks randomly and to reposition them daily in the incubator.
Katsetulemuste analüüsimisel tuleks kontrollida, kas uuritava kemikaali sisalduse vähenemisega katse ajal kaasneb kasvu pidurdumise vähenemine.
The pH of the control medium should not increase by more than 1,5 units during the test.
Kui see on nii, võib kaaluda uuritava kemikaali sisalduse vähenemist kirjeldava sobiva mudeli rakendamist (7).
For metals and chemicals that partly ionise at a pH around the test pH, it may be necessary to limit the pH drift to obtain reproducible and well defined results.
Kui kasvu pidurdumine ei vähene, võib olla sobiv võtta tulemuste analüüsimisel aluseks nominaalsisaldus või mõõdetud algsisaldus.
A drift of < 0,5 pH units is technically feasible and can be achieved by ensuring an adequate CO2 mass transfer rate from the surrounding air to the test solution, e.g. by increasing the shaking rate.
Muud vaatlused
Another possibility is to reduce the demand for CO2 by reducing the initial biomass or the test duration.
Inokulum-kultuuri tuleks vaadelda mikroskoobi all, et veenduda, et kultuur näeb välja normaalne ja elujõuline, ning katse lõpus tuleks vetikakultuuri samal viisil uurida morfoloogiliste muutuste tuvastamiseks, mis võivad olla põhjustatud kokkupuutest uuritava kemikaaliga.
The surface where the cultures are incubated should receive continuous, uniform fluorescent illumination e.g. of “cool-white” or “daylight” type.
Piirsisalduskatse
For the recommended species of green algae, select the light intensity at the level of the test solutions from the range of 60-120 μE · m– 2 · s– 1 when measured in the photosynthetically effective wavelength range of 400-700 nm using an appropriate receptor.
Piirsisalduskatse puhul kohaldatakse kõiki eespool kirjeldatud katsetingimusi ja nõuetele vastavuse kriteeriume; ainsa erandina nähakse ette, et uuritava kemikaaliga paralleelkultuure peaks olema vähemalt kuus.
Some species, in particular Anabaena flos-aquae, grow well at lower light intensities and may be damaged at high intensities.
Kontroll- ja katserühmas mõõdetud muutujate analüüsil võib keskväärtusi võrrelda statistilise testi (nt Studenti t-testi) abil.
For such species an average light intensity in the range 40-60 μE · m– 2 · s– 1 should be selected.
Kui kahe rühma andmete hajuvused on erinevad, tuleks kasutada ebavõrdse hajuvuse suhtes kohandatud t-testi.
(For light-measuring instruments calibrated in lux, an equivalent range of 4440 - 8880 lux for cool white light corresponds approximately to the recommended light intensity 60-120 μE · m– 2 · s– 1).
Kasvukõverate koostamine
Maintain the light intensity within ±15 % from the average light intensity over the incubation area.
Katsenõus oleva biomassi kogust võib väljendada mõõtmisel kasutatud asendusparameetri (nt rakkude arv, fluorestsents) ühikutes.
Test duration
Katse- ja kontrollkultuurides määratud biomassi ja uuritava kemikaali kontsentratsioonid ning mõõtmise ajad, mis registreeritakse vähemalt täistunni täpsusega, kantakse tabelisse ja nende andmete põhjal koostatakse kasvukõverad.
Test duration is normally 72 hours.
Siin kirjeldatud esimeses etapis võib olla kasulik kasutada nii logaritmilist kui ka lineaarset skaalat, kuid logaritmiline skaala on kohustuslik ja võimaldab katse kestel esinevaid kasvukiiruse muutusi üldjuhul paremini esitada.
However, shorter or longer test durations may be used provided that all validity criteria in paragraph 11 can be met.
Tuleb silmas pidada, et logaritmilisel skaalal saadakse eksponentsiaalse kasvu puhul sirge, mille tõus väljendab kasvu erikiirust.
Measurements and analytical determinations
Kasvukõverate abil kontrollitakse, kas kontrollkultuurid kasvavad kogu katse jooksul eksponentsiaalselt ja eeldatava kiirusega.
The algal biomass in each flask is determined at least daily during the test period.
Iga andmepunkti ja graafikute kuju hinnatakse kriitiliselt ning veendutakse, et töötlemata andmetes ei ole vigu ja katse on läbi viidud korrektselt.
If measurements are made on small volumes removed from the test solution by pipette, these should not be replaced.
Eelkõige kontrollitakse andmepunkte, mille puhul kõrvalekalle näib tulenevat süstemaatilisest veast.
Measurement of biomass is done by manual cell counting by microscope or an electronic particle counter (by cell counts and/or biovolume).
Kui on võimalik tuvastada viga katse läbiviimisel või vea esinemist võib pidada väga tõenäoliseks, tähistatakse asjaomane andmepunkt võõrväärtusena ja jäetakse järgnevast statistilisest analüüsist välja.
Alternative techniques, e.g. flow cytometry, in vitro or in vivo chlorophyll fluorescence (5) (6), or optical density can be used if a satisfactory correlation with biomass can be demonstrated over the range of biomass occurring in the test.
Vastuvõetavaks põhjuseks loetakse ainult (harva esinevaid) vigu katse läbiviimisel, mitte aga vähest täpsust.
Measure the pH of the solutions at the beginning and at the end of the test.
Kõnealuse probleemi puhul on statistiliste meetodite kasutusvõimalused võõrväärtuste kindlakstegemiseks piiratud ja need ei asenda eksperdihinnangut.
Provided an analytical procedure for determination of the test chemical in the concentration range used is available, the test solutions should be analysed to verify the initial concentrations and maintenance of the exposure concentrations during the test.
Katseandmete esitamisel graafikul või tabelis on soovitatav esitada koos teiste andmepunktidega ka võõrväärtustele vastavad (ja sellisena tähistatud) punktid.
Analysis of the concentration of the test chemical at the start and end of the test of a low and high test concentration and a concentration around the expected EC50 may be sufficient where it is likely that exposure concentrations will vary less than 20 % from nominal values during the test.
Uuritavad muutujad
Analysis of all test concentrations at the beginning and at the end of the test is recommended where concentrations are unlikely to remain within 80-120 % of the nominal concentration.
Katse eesmärk on teha kindlaks uuritava kemikaali mõju vetikate kasvule.
For volatile, unstable or strongly adsorbing test chemicals, additional samplings for analysis at 24 hour intervals during the exposure period are recommended in order to better define loss of the test chemical.
Kuna eelistused ja regulatiivsed vajadused eri jurisdiktsioonides on erinevad, kirjeldatakse käesolevas katsemeetodis kahte uuritavat muutujat.
For these chemicals, extra replicates may be needed.
Et tagada katsetulemuste vastuvõetavus kõikides jurisdiktsioonides, tuleks vaadeldava mõju hindamisel kasutada mõlemat allpool kirjeldatud muutujat (a ja b).
In all cases, determination of test chemical concentrations need only be performed on one replicate vessel at each test concentration (or the contents of the vessels pooled by replicate).
Keskmine kasvu erikiirus
The test media prepared specifically for analysis of exposure concentrations during the test should be treated identically to those used for testing, i.e. they should be inoculated with algae and incubated under identical conditions.
see uuritav muutuja arvutatakse katse ajal toimunud biomassi juurdekasvu logaritmitud väärtuste alusel ja seda väljendatakse kasvukiirusena ööpäevas.
If analysis of the dissolved test chemical concentration is required, it may be necessary to separate algae from the medium.
Saagis
Separation should preferably be made by centrifugation at a low g-force, sufficient to settle the algae.
see uuritav muutuja on biomassi koguste vahe katse lõpus ja alguses.
If there is evidence that the concentration of the chemical being tested has been satisfactorily maintained within ± 20 % of the nominal or measured initial concentration throughout the test, analysis of the results can be based on nominal or measured initial values.
Tuleks silmas pidada, et nende kahe uuritava muutuja abil arvutatud mürgisuse väärtused ei ole võrreldavad, ning seda erinevust tuleb katsetulemuste kasutamisel arvesse võtta.
If the deviation from the nominal or measured initial concentration is not within the range of ± 20 %, analysis of the results should be based on geometric mean concentration during exposure or on models describing the decline of the concentration of the test chemical (3) (7).
Käesolevas katsemeetodis sätestatud tingimuste kohase katse puhul on keskmisel kasvu erikiirusel põhinevad ECx väärtused (ErCx) üldjuhul suuremad kui saagisel põhinevad väärtused (EyCx), kuna asjaomaste lähenemisviiside matemaatiline alus on erinev.
The alga growth inhibition test is a more dynamic test system than most other short-term aquatic toxicity tests.
Seda erinevust ei tohiks tõlgendada kahe kõnealuse uuritava muutuja tundlikkuse erinevusena; asjaomased väärtused on lihtsalt matemaatiliselt erinevad.