natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Careful consideration should be given to the inclusion of a pH buffer in the test medium (MOPS (4-morpholinepropane sulphonic acid, CAS No: 1132-61-2) in L. minor medium and NaHCO3 in L. gibba medium) when it is suspected that it might react with the test chemical and influence the expression of its toxicity.
Seejärel võib määrata tallusjate võsude üldpindala katsenõus, kasutades kalibreerimiseks teadaoleva pindalaga tasapinnalisi kujundeid.
Steinberg Medium (9) is also acceptable as long as the validity criteria are met.
Tuleks jälgida, et katsenõu servast tingitud interferents ei segaks määramist.
A modification of the Swedish standard (SIS) Lemna growth medium is recommended for culturing and testing with L. minor.
Teine, töömahukam meetod on teha katsenõust ja taimedest fotokoopia, lõigata välja kolooniate siluett ja määrata kolooniate pindala lehepindala analüsaatori või millimeetripaberi abil.
The composition of this medium is given in Appendix 4.
Võib kasutada ka muid määramismeetodeid (nt kolooniate silueti pindalale ja pindalaühikule vastavate paberi kaalude suhte määramine).
The growth medium, 20X — AAP, as described in Appendix 4, is recommended for culturing and testing with L. gibba.
Kuivmass:
Steinberg medium, as described in Appendix 4, is also suitable for L. minor, but may also be used for L. gibba as long as the validity criteria are met.
igast katsenõust kogutakse kõik kolooniad ja neid loputatakse destilleeritud või deioniseeritud veega.
Test solutions
Kolooniatelt eemaldatakse kuivatuspaberiga liigne vesi ja seejärel kuivatatakse neid 60 °C juures, kuni nende kaal enam ei muutu.
Test solutions are usually prepared by dilution of a stock solution.
Kuivmassi määramisel võetakse arvesse kõik juuretükid.
Stock solutions of the test chemical are normally prepared by dissolving the chemical in growth medium.
Kuivmassi väljendatakse täpsusega vähemalt 0,1 mg.
The highest tested concentration of the test chemical should not normally exceed the water solubility of the chemical under the test conditions.
Märgmass:
It should be noted however that Lemna spp. float on the surface and may be exposed to chemicals that collects at the water-air interface (e.g. poorly water-soluble or hydrophobic chemicals or surface-active chemicals).
kõik kolooniad viiakse eelnevalt kaalutud polüstüreenist (või muust inertsest materjalist) katseklaasidesse, mille ümaras põhjas on väikesed avad läbimõõduga 1 mm.
Under such circumstances exposure will result from material other than in solution and test concentrations may, depending on the characteristics of the test chemical, exceed water solubility.
Katseklaase tsentrifuugitakse 10 minutit toatemperatuuril kiirusel 3000 pööret minutis.
For test chemicals of low water solubility it may be necessary to prepare a concentrated stock solution or dispersion of the chemical using an organic solvent or dispersant in order to facilitate the addition of accurate quantities of the test chemical to the test medium and aid in its dispersion and dissolution.
Sel viisil kuivatatud kolooniaid sisaldavad katseklaasid kaalutakse uuesti ning märgmassi leidmiseks lahutatakse saadud tulemusest tühja katseklaasi mass.
Every effort should be made to avoid the use of such materials.
Mõõtmiste ja analüüside sagedus
There should be no phytotoxicity resulting from the use of auxiliary solvents or dispersants.
Staatilise katserežiimi puhul tuleks mõõta pH igas katsenõus katse alguses ja lõpus.
For example, commonly used solvents which do not cause phytotoxicity at concentrations up to 100 μl/l include acetone and dimethylformamide.
Poolstaatilise katserežiimi puhul tuleks mõõta värske katselahuse pH enne iga lahusevahetust ja määrata ka iga äratarvitatud lahuse pH.
If a solvent or dispersant is used, its final concentration should be reported and kept to a minimum (≤ 100 μl/l), and all treatments and controls should contain the same concentration of solvent or dispersant.
Valgustustihedust tuleks mõõta kasvukambri, inkubaatori või ruumi punktides, mis on valgusallikast samal kaugusel kui Lemna tallusjad võsud.
Further guidance on the use of dispersants is given in (8).
Valgustustihedust tuleks katse jooksul mõõta vähemalt üks kord.
Test and control groups
Söötme temperatuur kasvukambris, inkubaatoris või ruumis samades tingimustes hoitavas jäljendusnõus tuleks registreerida vähemalt üks kord päevas.
Prior knowledge of the toxicity of the test chemical to Lemna, e.g. from a range-finding test, will help in selecting suitable test concentrations.
Uuritava kemikaali sisaldus määratakse katse ajal sobiva ajavahemiku tagant.
In the definitive toxicity test, there should normally be at least five test concentrations arranged in a geometric series.
Staatilise katse puhul tuleb uuritava kemikaali sisaldus määrata vähemalt katse alguses ja lõpus.
Preferably the separation factor between test concentrations should not exceed 3.2, but a larger value may be used where the concentration-response curve is flat.
Poolstaatilise katse puhul, kus uuritava kemikaali sisaldus ei püsi eeldatavalt 20 % piires nominaalväärtusest, tuleb selle sisaldus määrata kõigis värskelt valmistatud katselahustes ja samades lahustes nende väljavahetamise ajal (vt punkt 33).
Justification should be provided if fewer than five concentrations are used.
Kui uuritava kemikaali mõõdetud algsisaldus erineb nominaalväärtusest enam kui 20 % võrra, kuid on olemas piisavad tõendid selle kohta, et algsisaldus on korratav ja püsiv (st jääb vahemikku 80–120 % algsisaldusest), võib kemikaali sisalduse määrata ainult suurimal ja väikseimal katses kasutataval kontsentratsioonil.
At least three replicates should be used at each test concentration.
Kõigil juhtudel on uuritava kemikaali sisaldus igal katses kasutataval kontsentratsioonil vaja enne katselahuse väljavahetamist määrata ainult ühes paralleelkultuuri nõus (või paralleelkultuuridest moodustatud koondproovis).
In setting the range of test concentrations (for range-finding and/or for the definitive toxicity test), the following should be considered:
Läbivoolukatse puhul kasutatakse sama proovivõturežiimi kui poolstaatilises katses, sealhulgas määramist katse alguses, kestel ja lõpus, kuid sel juhul ei ole äratarvitatud lahuse analüüsimine asjakohane.
To determine an ECx, test concentrations should bracket the ECx value to ensure an appropriate level of confidence.
Sellises katses tuleks iga päev kontrollida lahjenduslahuse ja uuritava kemikaali või uuritavat kemikaali sisaldava põhilahuse voolukiirust.
For example, if estimating the EC50, the highest test concentration should be greater than the EC50 value.
Kui kõrvalekalle sisalduse nominaalväärtusest või mõõdetud algväärtusest on suurem kui ± 20 %, tuleks tulemuste analüüsimisel võtta aluseks katse vältel esinevate väärtuste geomeetriline keskmine või mõni uuritava kemikaali sisalduse vähenemist kirjeldav mudel (8).
If the EC50 value lies outside of the range of test concentrations, associated confidence intervals will be large and a proper assessment of the statistical fit of the model may not be possible.
Piirsisalduskatse puhul kohaldatakse kõiki eespool kirjeldatud katsetingimusi ja nõuetele vastavuse kriteeriume; ainsa erandina nähakse ette, et uuritava kemikaaliga paralleelkultuure peaks olema kaks korda rohkem.
If the aim is to estimate the LOEC/NOEC, the lowest test concentration should be low enough so that growth is not significantly less than that of the control.
Kasvu analüüsimiseks kontroll- ja katserühmas võib keskväärtusi võrrelda statistilise testi (nt Studenti t-testi) abil.
In addition, the highest test concentration should be high enough so that growth is significantly lower than that in the control.
ANDMED JA KATSEPROTOKOLLI KOOSTAMINE
If this is not the case, the test will have to be repeated using a different concentration range (unless the highest concentration is at the limit of solubility or the maximum required limit concentration, e.g. 100 mg/l).
Tallusjate võsude arvu kahekordistumise aja Td leidmiseks ja katse nõuetele vastavuse sellekohase kriteeriumi täitmise kindlakstegemiseks (punkt 12) kasutatakse kontrollkultuuridest saadud andmeid ja järgmist valemit:
Every test should include controls consisting of the same nutrient medium, number of fronds and colonies, environmental conditions and procedures as the test vessels but without the test chemical.
kus μ on punktides 54–55 kirjeldatud viisil määratud keskmine kasvu erikiirus.
If an auxiliary solvent or dispersant is used, an additional control treatment with the solvent/dispersant present at the same concentration as that in the vessels with the test chemical should be included.
Katse eesmärk on teha kindlaks uuritava kemikaali mõju Lemna vegetatiivsele kasvule.
The number of replicate control vessels (and solvent vessels, if applicable) should be at least equal to, and ideally twice, the number of vessels used for each test concentration.
Kuna eelistused ja regulatiivsed vajadused eri jurisdiktsioonides on erinevad, kirjeldatakse käesolevas katsemeetodis kahte uuritavat muutujat.
If determination of NOEC is not required, the test design may be altered to increase the number of concentrations and reduce the number of replicates per concentration.
Keskmine kasvu erikiirus:
However, the number of control replicates must be at least three.
see uuritav muutuja arvutatakse lähtuvalt tallusjate võsude arvu logaritmi ja veel ühe uuritava muutuja (tallusjate võsude üldpindala, kuivmassi või märgmassi) logaritmitud väärtuse ööpäevasest muutusest kontrollkultuurides ja igas uuritava kemikaaliga rühmas.
Exposure
Seda nimetatakse mõnikord ka suhteliseks kasvukiiruseks (12).
Colonies consisting of 2 to 4 visible fronds are transferred from the inoculum culture and randomly assigned to the test vessels under aseptic conditions.
Saagis:
Each test vessel should contain a total of 9 to 12 fronds.
see uuritav muutuja arvutatakse lähtuvalt katse lõpuks toimunud tallusjate võsude arvu ja veel ühe uuritava muutuja (tallusjate võsude üldpindala, kuivmassi või märgmassi) väärtuse muutusest kontrollkultuurides ja igas uuritava kemikaaliga rühmas.
The number of fronds and colonies should be the same in each test vessel.
Käesolevas katsemeetodis sätestatud tingimuste kohase katse puhul on keskmisel kasvu erikiirusel põhinevad ECx väärtused (ErCx) üldjuhul suuremad kui saagisel põhinevad väärtused (EyCx), kuna asjaomaste lähenemisviiside matemaatiline alus on erinev.
Experience gained with this method and ring-test data have indicated that using three replicates per treatment, with each replicate containing 9 to 12 fronds initially, is sufficient to detect differences in growth of approximately 4 to 7 % of inhibition calculated by growth rate (10 to 15 % calculated by yield) between treatments (7).
Keskmise kasvu erikiiruse määratlus põhineb lemle üldisel piiramata eksponentsiaalsel kasvul kultuuris, kusjuures mürgisust hinnatakse kasvukiirusele avalduva mõju alusel ja see ei olene kontrollkultuuri absoluutsest kasvu erikiirusest, kontsentratsiooni ja mõju vahelise sõltuvuse kõvera tõusust ega katse kestusest.
A randomised design for location of the test vessels in the incubator is required to minimise the influence of spatial differences in light intensity or temperature.
EyCx väärtus sõltub katses kasutatud lemleliigi kasvu erikiirusest ja maksimaalsest kasvu erikiirusest, mis võib eri lemleliikidel ja isegi sama liigi eri kloonidel olla erinev.
A blocked design or random repositioning of the vessels when observations are made (or repositioning more frequently) is also required.
Seda uuritavat muutujat ei tohiks kasutada, kui võrreldakse lemleliikide või eri kloonide tundlikkust mürgiste kemikaalide suhtes.
If a preliminary stability test shows that the test chemical concentration cannot be maintained (i.e. the measured concentration falls below 80 % of the measured initial concentration) over the test duration (7 days), a semi-static test regime is recommended.
Ehkki keskmise kasvu erikiiruse kasutamine mürgisuse hindamiseks on teaduslikult paremini põhjendatud, käsitletakse käesolevas katsemeetodis mõnes jurisdiktsioonis kehtivate regulatiivsete nõuete järgimise võimaldamiseks ka saagisel põhinevat mürgisuse hindamist.
In this case, the colonies should be exposed to freshly prepared test and control solutions on at least two occasions during the test (e.g. days 3 and 5).
Mürgisuse hindamisel tuleks lähtuda tallusjate võsude arvust ja veel ühest mõõdetavast muutujast (tallusjate võsude üldpindala, kuivmass või märgmass), sest mõned kemikaalid võivad mõjutada muid mõõdetavaid muutujaid palju enam kui tallusjate võsude arvu.
The frequency of exposure to fresh medium will depend on the stability of the test chemical;
Ainult tallusjate võsude arvu kasutamisel jääks selline mõju avastamata.
a higher frequency may be needed to maintain near-constant concentrations of highly unstable or volatile chemicals.
Tallusjate võsude arv ja täiendavalt määratud mõõdetava muutuja (tallusjate võsude üldpindala, kuivmassi või märgmassi) väärtus kantakse iga mõõtmise puhul koos uuritava kemikaali kontsentratsiooni väärtusega tabelisse.
In some circumstances, a flow-through procedure may be required (8)(10).
Järgneval andmeanalüüsil, mille eesmärk on leida LOEC, NOEC või ECx, kasutatakse igast üksikust paralleelkultuurist saadud väärtusi, mitte katserühma kohta arvutatud keskmisi väärtusi.
The exposure scenario through a foliar application (spray) is not covered in this test method;
Iga kontrollkultuuri ja uuritava kemikaaliga kultuuri puhul arvutatakse teatava ajavahemiku keskmine kasvu erikiirus kasvu iseloomustavate muutujate – tallusjate võsude arvu ja veel ühe mõõdetava muutuja (tallusjate võsude üldpindala, kuivmassi või märgmassi) – logaritmitud väärtuse suurenemise alusel järgmise valemi abil:
instead, see (11).
on keskmine kasvu erikiirus ajavahemikul i–j,
Incubation conditions
on mõõdetava muutuja väärtus katse- või kontrollnõus ajahetkel i,
Continuous warm or cool white fluorescent lighting should be used to provide a light intensity selected from the range of 85-135 μE · m– 2s– 1 when measured in a photosynthetically active radiation (400-700 nm) at points the same distance from the light source as the Lemna fronds (equivalent to 6500-10000 lux).
on mõõdetava muutuja väärtus katse- või kontrollnõus ajahetkel j,
Any differences from the selected light intensity over the test area should not exceed the range of ± 15 %.
on ajavahemik i–j.
The method of light detection and measurement, in particular the type of sensor, will affect the measured value.
Keskmine kasvu erikiirus tuleks arvutada kogu katseaja kohta (eespool esitatud valemis tähistab katse algust ajahetk i ja katse lõppu ajahetk j).
Spherical sensors (which respond to light from all angles above and below the plane of measurement) and “cosine” sensors (which respond to light from all angles above the plane of measurement) are preferred to unidirectional sensors, and will give higher readings for a multi-point light source of the type described here.
Kontrollrühma ja uuritava kemikaali iga kontsentratsiooni puhul arvutatakse keskmise kasvu erikiiruse keskväärtus ja tulemuste hajuvus.
The temperature in the test vessels should be 24 ± 2 °C.
Peale selle hinnatakse kasvukiirust ka ajavahemike kaupa, näiteks logaritmitud kasvukõverate uurimise teel, et hinnata uuritava kemikaali mõju kokkupuuteaja jooksul.
However, deviation of more than 1,5 units would not invalidate the test when it can be shown that validity criteria are met.
Vastavalt konservatiivsele lähenemisviisile tuleks sel juhul võrrelda uuritava kemikaaliga kultuurides kasvu maksimaalse pidurdumiseni kulunud aja jooksul täheldatud kasvu erikiirust samal ajavahemikul kontrollkultuurides täheldatud kasvu erikiirusega.
Additional care is needed on pH drift in special cases such as when testing unstable chemicals or metals.
Iga katses kasutatava kontsentratsiooni (katserühma) puhul arvutatakse kasvukiiruse vähenemine Ir protsentides järgmise valemi abil:
See (8) for further guidance.
on keskmise kasvu erikiiruse vähenemise määr protsentides,
Duration
on μ keskväärtus kontrollrühmas,
The test is terminated 7 days after the plants are transferred into the test vessels.
on μ keskväärtus katserühmas.
At the start of the test, frond number in the test vessels is counted and recorded, taking care to ensure that protruding, distinctly visible fronds are accounted for.
Kemikaali mõju saagisele määratakse lähtuvalt kahe mõõdetava muutuja – tallusjate võsude arvu ja veel ühe mõõdetava muutuja (tallusjate võsude üldpindala, kuivmassi või märgmassi) – väärtusest, mis mõõdetakse igas katsekultuuris katse alguses ja lõpus.
Frond numbers appearing normal or abnormal, need to be determined at the beginning of the test, at least once every 3 days during the exposure period (i.e. on at least 2 occasions during the 7 day period), and at test termination.
Kuivmassi või märgmassi algväärtus määratakse tallusjate võsude proovist, mis võetakse katsenõude inokuleerimiseks kasutatavast kultuurist (vt punkt 20).
Changes in plant development, e.g. in frond size, appearance, indication of necrosis, chlorosis or gibbosity, colony break-up or loss of buoyancy, and in root length and appearance, should be noted.
Saagise vähenemise määra protsentides ( % Iy) võib iga katserühma puhul arvutada järgmiselt:
Significant features of the test medium (e.g. presence of undissolved material, growth of algae in the test vessel) should also be noted.
on saagise vähenemise määr protsentides,
In addition to determinations of frond number during the test, effects of the test chemical on one (or more) of the following measurement variables are also assessed:
on biomassi lõppväärtuse ja algväärtuse vahe kontrollrühmas,
total frond area,
on biomassi lõppväärtuse ja algväärtuse vahe katserühmas.
dry weight,
Kontsentratsiooni ja mõju vahelise sõltuvuse kõverate koostamine
fresh weight.
Tuleks koostada kontsentratsiooni ja mõju vahelise sõltuvuse kõverad, mis väljendavad uuritava muutuja väärtuse vähenemise keskmise protsentuaalse määra (punkti 56 või 57 kohaselt arvutatud % Ir või % Iy) sõltuvust uuritava kemikaali kontsentratsiooni logaritmitud väärtusest.
Total frond area has an advantage, in that it can be determined for each test and control vessel at the start, during, and at the end of the test.
ECx leidmine
Dry or fresh weight should be determined at the start of the test from a sample of the inoculum culture representative of what is used to begin the test, and at the end of the test with the plant material from each test and control vessel.
ECx (nt EC50) hinnanguliste väärtuste leidmisel tuleks lähtuda nii keskmisest kasvu erikiirusest (ErCx) kui ka saagisest (EyCx), mis peaksid kumbki omakorda põhinema tallusjate võsude arvul ja ühel täiendaval mõõdetaval muutujal (tallusjate võsude üldpindalal, kuivmassil või märgmassil).
If frond area is not measured, dry weight is preferred over fresh weight.
Selle põhjuseks on asjaolu, et teatavad uuritavad kemikaalid mõjutavad tallusjate võsude arvu ja muid mõõdetavaid muutujaid erinevalt.
Total frond area, dry weight and fresh weight may be determined as follows:
On võimalik kasutada kaalutud lineaarset regressiooni pärast mõjuandmete lineariseerivat teisendamist näiteks probit-, logit- või Weibulli jaotuse kujule (13), kuid tuleks siiski eelistada mittelineaarse regressiooni meetodeid, mis sobivad paremini vältimatute andmevigade ja sujuvast jaotusest kõrvalekallete puhul.
Total frond area:
Kasvu täielikule pidurdumisele või pidurdumise täielikule puudumisele lähedases olukorras võib kõnealune teisendamine andmevigu võimendada ja analüüsi segada (13).
The total frond area of all colonies may be determined by image analysis.
Tuleks silmas pidada, et probit-, logit- või Weibulli teisendusel põhinevad standardsed analüüsimeetodid on ette nähtud binaarsete tunnuste (nt suremus või elulemus) analüüsimiseks ning neid tuleb kasvukiiruse või saagise andmete analüüsimiseks kohandada.
A silhouette of the test vessel and plants can be captured using a video camera (i.e. by placing the vessel on a light box) and the resulting image digitised.
Konkreetsed meetodid ECx väärtuste leidmiseks pidevate andmete alusel on esitatud allikates 14, 15 ja 16.
By calibration with flat shapes of known area, the total frond area in a test vessel may then be determined.
Kui olemasolevad regressioonimudelid ja -meetodid ei ole katseandmete jaoks sobivad, võib EC50 hinnangulise väärtuse ja usalduspiiride leidmiseks kasutada ka lineaarset interpoleerimist koos andmete usaldusväärsuse iteratiivse kontrollimisega (bootstrapping) (17).
Care should be taken to exclude interference caused by the rim of the test vessel.
Et teha kindlaks LOEC ja selle alusel ka NOEC, on vaja võrrelda katserühmade keskväärtusi dispersioonanalüüsi (ANOVA) meetoditega.
An alternative but more laborious approach is to photocopy test vessels and plants, cut out the resulting silhouette of colonies and determine their area using a leaf area analyser or graph paper.
Selleks võib sobida Dunnetti või Williamsi test (18, 19, 20, 21).
Other techniques (e.g. paper weight ratio between silhouette area of colonies and unit area) may also be appropriate.
Lisajuhised NOEC määramiseks on esitatud allikas 16.
Dry weight:
Kõnealuse lemmeldega tehtava katse jaoks ei ole sobivat x väärtust veel kindlaks määratud.
All colonies are collected from each of the test vessels and rinsed with distilled or deionised water.
Sobiv väärtuste vahemik näib olevat 10–20 % (olenevalt uuritavast muutujast) ning soovitatavalt tuleks esitada nii EC10 kui ka EC20.
They are blotted to remove excess water and then dried at 60 °C to a constant weight.
Katseprotokoll
Any root fragments should be included.
füüsikaline iseloomustus ja asjakohased füüsikalis-keemilised omadused, sealhulgas vees lahustuvuse piirkontsentratsioon;
The dry weight should be expressed to an accuracy of at least 0,1 mg.
teaduslik nimetus, kloon (kui see on teada) ja päritolu.
Fresh weight:
kasutatud katserežiim (staatiline, poolstaatiline või läbivoolurežiim);
All colonies are transferred to pre-weighed polystyrene (or other inert material) tubes with small (1 mm) holes in the rounded bottoms.
katsesööde;
Tubes, containing the now dried colonies, are re-weighed and the fresh weight is calculated by subtracting the weight of the empty tube.
katsenõud ja nende katted, lahuste maht, kolooniate ja tallusjate võsude arv katsenõu kohta katse alguses;
Frequency of measurements and analytical determinations
kasutatud kontsentratsioonid (nominaalne ja asjakohane mõõdetud sisaldus) ja paralleelkultuuride arv kontsentratsiooni kohta;
If a static test design is used, the pH of each treatment should be measured at the beginning and at the end of the test.
põhi- ja katselahuste valmistamise meetodid, sh lahustite või dispergeerivate ainete kasutamise kirjeldus;
If a semi-static test design is used, the pH should be measured in each batch of “fresh” test solution prior to each renewal and also in the corresponding “spent” solutions.
katsetemperatuur;
Light intensity should be measured in the growth chamber, incubator or room at points the same distance from the light source as the Lemna fronds.
valgusallikas, valgustustihedus ja valguse ühtlus;
Measurements should be made at least once during the test.
katse- ja kontrollsöötmete pH väärtused;
The temperature of the medium in a surrogate vessel held under the same conditions in the growth chamber, incubator or room should be recorded at least daily.
uuritava kemikaali kontsentratsioonid ning kasutatud analüüsimeetod ja asjakohased kvaliteedihindamise andmed (valideerimisuuringud, analüüsiandmete standardhälbed või usalduspiirid);
During the test, the concentrations of the test chemical are determined at appropriate intervals.
tallusjate võsude arvu ja muude mõõdetavate muutujate – kuivmassi, märgmassi või tallusjate võsude pindala – määramise meetodid;
In static tests, the minimum requirement is to determine the concentrations at the beginning and at the end of the test.
kõik kõrvalekalded käesolevast katsemeetodist.