natgillin/translations-raw huggingface dataset:
The general experimental design entails exposing stage 51 Xenopus laevis tadpoles to a minimum of three different concentrations of a test chemical and a dilution water control for 21 days.
Histopatoloogiliseks analüüsiks valitud loomi (n = 5 igast paralleelkatsenõust) tuleks võrrelda kontrollkatse (ühendatud paralleelkatsed) mediaanses arengustaadiumis olevate loomadega, kui see on võimalik.
There are four replicates of each test treatment.
Kui paralleelkatsenõus on rohkem kui viis kullest sobivas staadiumis, valitakse viis kullest juhuvalikuga.
Larval density at test initiation is 20 tadpoles per test tank for all treatment groups.
Kui paralleelkatsenõus on vähem kui viis kullest sobivas staadiumis, võetakse lähimast madalamast või kõrgemast arengustaadiumist viis juhuslikult valitud kullest, et jõuda valimi üldsuuruseni viis kullest paralleelkatse kohta.
The observational endpoints are hind limb length, snout to vent length (SVL), developmental stage, wet weight, thyroid histology, and daily observations of mortality.
Eelistatavalt tuleks otsus – võtta valimisse täiendavaid vastseid lähimast madalamast või kõrgemast arengustaadiumist – teha üldise hinnangu põhjal, milline on kulleste jaotus arengustaadiumide järgi kontrollkatsenõudes ja kemikaaliga kokkupuute uurimise nõudes.
Test Species
See tähendab, et kui kemikaaliga kokkupuude pidurdab arengut, peaksid täiendavad kullesed olema võetud lähimast madalamast staadiumist.
Xenopus laevis is routinely cultured in laboratories worldwide and is easily obtainable through commercial suppliers.
Kui kemikaaliga kokkupuude aga kiirendab arengut, peaksid täiendavad kullesed olema võetud lähimast kõrgemast staadiumist.
Reproduction can be easily induced in this species throughout the year using human chorionic gonadotropin (hCG) injections and the resultant larvae can be routinely reared to selected developmental stages in large numbers to permit the use of stage-specific test protocols.
Kui kokkupuude uuritava kemikaaliga tekitab suuri muutusi kulleste arengus, ei tarvitse kemikaaliga kokkupuutesse viidud rühmadel olla arengustaadiumide jaotuse poolest kontrollkatse arvutatud mediaanse arengustaadiumiga kattuvust.
It is preferred that larvae used in the assay are derived from in-house adults.
Ainult sellistel juhtudel tuleks valimismeetodit muuta ja kasutada kontrollrühma mediaansest staadiumist erinevat arengustaadiumi, et saada arengustaadiumi järgi sobitatud proovid kulleste kilpnäärme histopatoloogia uurimiseks.
As an alternative although this is not the preferred procedure, eggs or embryos may be shipped to the laboratory performing the test and allowed to acclimate;
Lisaks sellele, kui arengustaadiume ei saa määrata (nt asünkroonia tõttu), tuleks igast paralleelkatsenõust võtta juhuslikult viis kullest histoloogilise analüüsi jaoks.
the shipping of larval stages for use in the test is unacceptable.
Aruandes tuleks selgitada, milliste põhimõtete alusel võeti valimisse kullesed, kes on muus arengustaadiumis kui kontrollrühma mediaanne arengustaadium.
Equipment and Supplies
Bioloogiliste näitajate määramine
The following equipment and supplies are needed for the conduct of this assay:
äevase kokkupuuteetapi ajal mõõdetakse tähtsamaid näitajaid 7. ja 21. päeval, kuid katseloomi on vaja jälgida iga päev.
Exposure system (see description below);
Tabelis 3 on antud ülevaade mõõdetavatest näitajatest ja vastavatest vaatlusaegadest.
Glass or stainless steel aquaria (see description below);
Üksikasjalikum teave, kuidas apikaalsete näitajate mõõtmisi ja histoloogilisi hindamisi tehniliselt teostatakse, on esitatud OECD juhenddokumendis (9).
Breeding tanks;
Tähtsaimate näitajate määramise ajad kahepaiksete metamorfoosi katses.
Temperature controlling apparatus (e.g., heaters or coolers (adjustable to 22° ± 1 °C));
Apikaalsed näitajad
Thermometer;
Iga päev
Binocular dissection microscope;
Suremus
Digital camera with at least 4 megapixel resolution and micro function;
Tagajäseme pikkus
Image digitising software;
Vahemaa ninamikust kuni pärakuavani
Petri dish (e.g. 100 × 15 mm) or transparent plastic chamber of comparable size;
Keha märgmass
Analytical balance capable of measuring to 3 decimal places (mg);
Kilpnäärme histoloogia
Dissolved oxygen meter;
Kahepaiksete metamorfoosi katse apikaalsed näitajad on arengustaadium, tagajäseme pikkus, ninamiku-pärakuava vahekaugus ja märgmass ning igaüht neist on lühidalt vaadeldud allpool.
pH meter;
Täpsem tehniline lisateave neid näitajaid käsitlevate andmete kogumise ja arvuti abil analüüsimise kohta on esitatud viidatud juhenddokumentides, mida on soovitatav kasutada.
Light intensity meter capable of measuring in lux units;
laevis'e kulleste arengustaadium määratakse vastavalt Nieuwkoopi ja Faberi (8) esitatud arengustaadiumide määramise kriteeriumidele.
Miscellaneous laboratory glassware and tools;
Arengustaadiumi andmeid kasutatakse selleks, et teha kindlaks, kas areng on kiirenenud, muutunud asünkroonseks, aeglustunud või jäänud mõjutamata.
Adjustable pipettes (10 to 5000 μl) or assorted pipettes of equivalent sizes;
Arengu kiirenemine või aeglustumine määratakse kindlaks kontrollrühma ja katserühmade kulleste saavutatud mediaanse arengustaadiumi võrdlemisel.
Test chemical in sufficient quantities to conduct the study, preferably of one lot;
Asünkroonse arenguga on tegemist siis, kui uuritud koed ei ole väärmoodustistega ega ebanormaalsed, kuid ühe kullese morfogeneesi suhteline ajastus või eri kudede arengu ajastus on häiritud.
Analytical instrumentation appropriate for the chemical on test or contracted analytical services.
Kilpnäärmehormoonide kontrolli all olevad tagajäseme diferentseerumine ja kasv on peamised arengunäitajad, mida on juba kasutatud arengustaadiumi määramisel.
Chemical Testability
Tagajäseme areng on arengustaadiumi määramisel kvalitatiivne näitaja, kuid siin vaadeldakse seda kvantitatiivse näitajana.
The AMA is based upon an aqueous exposure protocol whereby test chemical is introduced into the test chambers via a flow-through system.
Seepärast mõõdetakse tagajäseme pikkus kui näitaja, mis võimaldab kindlaks teha mõju kilpnäärmeteljele (joonis 2).
Flow-through methods however, introduce constraints on the types of chemicals that can be tested, as determined by the physicochemical properties of the chemical.
Kooskõla tagamiseks mõõdetakse vasema tagajäseme pikkust.
Therefore, prior to using this protocol, baseline information about the chemical should be obtained that is relevant to determining the testability, and the OECD Guidance Document on Aquatic Toxicity Testing of Difficult Substances and Mixtures (4) should be consulted.
Tagajäseme pikkust hinnatakse nii katse 7. kui ka 21. päeval.
Characteristics which indicate that the chemical may be difficult to test in aquatic systems include:
päeval mõõdetakse tagajäset lihtsalt, nagu on näidatud joonisel 2.
high octanol water partitioning coefficients (log Kow), high volatility, susceptibility to hydrolysis, and susceptibility to photolysis under ambient laboratory lighting conditions.
päeval on tagajäseme pikkuse mõõtmine aga keerulisem, kuna tagajäsemel on paindekohad.
Other factors may also be relevant to determining testability and should be determined on a case by case basis.
Seepärast tuleks tagajäseme pikkuse mõõtmisel 21. päeval alustada kehaseinast ja mõõta piki jäseme keskjoont, järgides kõiki jäseme kõverusi.
If a successful test is not possible for the chemical using a flow-through test system, a static renewal system may be employed.
Muutusi tagajäseme pikkuses 7. päeval, isegi kui neid ei ole 21. päeval, peetakse ikkagi oluliseks kilpnäärmele avalduva võimaliku mõju kindlakstegemisel.
If neither system is capable of accommodating the test chemical, then the default is to not test it using this protocol.
Pikkuse mõõtmise tulemused saadakse digifotolt, kasutades kujutise analüüsi tarkvara, mida on kirjeldatud OECD juhenddokumendis kahepaiksete kilpnäärme histoloogilise uuringu kohta (9).
Exposure System
Kehapikkus ja märgkaal
A flow-through diluter system is preferred, when possible, over a static renewal system.
Ninamiku-pärakuava vahekauguse (SVL) (joonis 2) ja märgmassi mõõtmine on võetud katse-eeskirja, et hinnata uuritava kemikaali võimalikku mõju kulleste kasvukiirusele, võrreldes kontrollrühmaga, ja see on kasulik uuritava kemikaali üldise mürgisuse tuvastamisel.
If physical and/or chemical properties of any of the test chemicals are not amenable to a flow-through diluter system, then an alternative exposure system (e.g., static-renewal) can be employed.
Kuna vee eemaldamine kulleste kehamassi määramiseks võib kullestel tekitada stressi ja põhjustada nahavigastusi, tehakse need mõõtmised 7. päeval valitud kulleste alarühmas ja kõigi ülejäänud kulleste puhul katse lõpus (21. päev).
The system components should have water-contact components of glass, stainless steel, and/or Polytetrafluoroethylene.
Kooskõla huvides kasutatakse pärakuava koljupoolset serva sabapikkuse mõõtmisel piirina.
However, suitable plastics can be utilised if they do not compromise the study.
Kulleste kasvu hindamiseks kasutatakse ninamiku-pärakuava vahekaugust (SVL), nagu on näidatud joonisel 2.
Exposure tanks should be glass or stainless steel aquaria, equipped with standpipes that result in an approximate tank volume between 4,0 and 10,0 l and minimum water depth of 10 to 15 cm.
laevis'e kulleste kehapikkust iseloomustavad mõõtmised (A) ja tagajäseme pikkuse mõõtmine (B) (1).
The system should be capable of supporting all exposure concentrations and a control, with four replicates per treatment.
Kuigi arengustaadium ja tagajäseme pikkus on olulised näitajad, mille järgi hinnatakse kemikaaliga kokkupuutest tingitud muutusi metamorfilises arengus, ei saa arengu aeglustumist iseendast pidada kilpnäärmeaktiivsuse vastaseks diagnostiliseks indikaatoriks.
The flow rate to each tank should be constant in consideration of both the maintenance of biological conditions and chemical exposure (e.g. 25 ml/min).
Mõned muutused võivad olla nähtavad üksnes põhjaliku histopatoloogilise analüüsiga.
The treatment tanks should be randomly assigned to a position in the exposure system in order to reduce potential positional effects, including slight variations in temperature, light intensity, etc.
Diagnostiliste kriteeriumide hulka kuuluvad kilpnäärme hüpertroofia/atroofia, folliikulirakkude hüpertroofia ja hüperplaasia ning täiendavate kvalitatiivsete kriteeriumidena: folliikuli valendiku ristlõikepindala, kolloidsus ja folliikulirakkude kõrgus ja kuju.
Fluorescent lighting should be used to provide a photoperiod of 12 hr light:
Registreeritakse mõju olulisus (neli astet).
12 hr dark at an intensity that ranges from 600 to 2000 lux (lumen/m2) at the water surface.
Teave histoloogiliseks analüüsiks vajalike proovide saamise ja töötlemise ning koeproovide histoloogilise analüüsi kohta on esitatud juhenddokumentides „Amphibian Metamorphosis Assay:
Water temperature should be maintained at 22° ± 1 °C, pH maintained between 6,5 to 8,5, and the dissolved oxygen (DO) concentration > 3,5 mg/l (> 40 % of the air saturation) in each test tank.
Part 1 – Technical guidance for morphologic sampling and histological preparation” ning „Amphibian Metamorphosis Assay: Part 2 – Approach to reading studies, diagnostic criteria, severity grading and atlas” (9).
As a minimum water temperature, pH and dissolved oxygen should be measured weekly;
Labor, milles katset tehakse esimest korda (esimesi kordi), peaks pöörduma õppimiseks ja nõuannete saamiseks kogenud patoloogi poole, enne kui ta asub tegema histoloogilist analüüsi ja hindama kilpnääret.
temperature should preferably be measured continuously in at least one test vessel.
Apikaalsete näitajate ilmsed ja olulised muutused, mis näitavad arengu kiirendamist või asünkroonsust, võivad muuta kilpnäärme histopatoloogilise analüüsi mittevajalikuks.
Appendix 1 outlines the experimental conditions under which the protocol should be executed.
Selgete morfoloogiliste muutuste või arengupeetust näitavate tõendite puudumine tähendavad siiski, et on vaja teha histoloogiline analüüs.
Any water that is locally available (e.g. springwater or charcoal-filtered tap water) and permits normal growth and development of X. laevis tadpoles could be used.
Surnud loomad tuleks katsenõudest kohe eemaldada, kui neid märgatakse.
Because local water quality can differ substantially from one area to another, analysis of water quality should be undertaken, particularly, if historical data on the utility of the water for raising Xenopus is not available.
Suremuse määr üle 10 % võib osutada sobimatutele katsetingimustele või uuritava kemikaali mürgisusele.
Iodide Concentration in Test Water
Normaalse käitumisega kullesed hõljuvad veesambas, saba peast kõrgemal, sabauim peksleb korrapäraselt kindlas rütmis, nad tõusevad aeg-ajalt pinnale, nende lõpusekatted liiguvad ja nad reageerivad ärritajatele.
In order for the thyroid gland to synthesise TH, sufficient iodide needs to be available to the larvae through a combination of aqueous and dietary sources.
Ebanormaalse käitumise näideteks on pinnal hõljumine, nõu põhjas lebamine, ümberpööratud või ebakorrapärane ujumine, pinnale mittetõusmine ja ärritajatele mitte reageerimine.
Currently, there are no empirically derived guidelines for minimal iodide concentrations.
Lisaks tuleks protokollis registreerida suured erinevused sööda tarbimises eri kontsentratsiooniga katsenõudes.
However, iodide availability may affect the responsiveness of the thyroid system to thyroid active agents and is known to modulate the basal activity of the thyroid gland, an aspect that deserves attention when interpreting the results from thyroid histopathology.
Olulisteks väärarenditeks ja kahjustusteks võivad olla morfoloogilised kõrvalekalded (näiteks deformeerunud jäsemed), hemorraagilised lesioonid, bakteri- või seennakkused, kui nimetada vaid mõnda.
Therefore, measured aqueous iodide concentrations from the test water should be reported.
Sellised otsustused on kvalitatiivsed ja neid tuleks käsitleda kui haiguse või stressi kliinilisi tunnuseid võrdluses kontrollrühma loomadega.
Based on the available data from the validation studies, the protocol has been demonstrated to work well when test water iodide (I-) concentrations ranged between 0,5 and 10 μg/l.
Kui selliste tunnuste esinemine või esinemismäär on kemikaaliga kokkupuute uurimise nõudes suurem kui kontrollrühmas, tuleks neid käsitada selge mürgisuse tunnustena.
Ideally, the minimum iodide concentration in the test water should be 0,5 μg/l.
Andmete kogumine
If the test water is reconstituted from deionised water, iodine should be added at a minimum concentration of 0,5 μg/l.
Kõik andmed tuleks koguda elektrooniliste või käsitsi mõõtmise süsteemide abil, mis vastavad heale laboritavale.
Any additional supplementation of the test water with iodine or other salts should be noted in the report.
uuritava kemikaali iseloomustus:
Holding of animals
füüsikalis-keemilised omadused;
Adult Care and Breeding
teave stabiilsuse ja biolagunevuse kohta;
Adult care and breeding is conducted in accordance with standard guidelines and the reader is directed to the standard guide for performing the Frog Embryo Teratogenesis Assay (FETAX) (6) for more detailed information.
keemiline teave ja andmed:
Such standard guidelines provide an example of appropriate care and breeding methods, but strict adherence is not required.
Uuritavat kemikaali võib olla vajalik määrata nii põhilahuses kui ka uuritavates lahustes;
To induce breeding, pairs (3-5) of adult females and males are injected with human chorionic gonadotropin (hCG).
lahusti (kui kandeaine on muu kui vesi):
Female and male specimens are injected with approximately 800 IU-1000 IU and 600 IU-800 IU, respectively, of hCG dissolved in 0,6-0,9 % saline solution.
lahusti valiku põhjendus ja lahusti omadused (nimetus, kasutatud lahusti kontsentratsioon);
Breeding pairs are held in large tanks, undisturbed and under static conditions in order to promote amplexus.
andmed katse läbiviimise kohta:
The bottom of each breeding tank should have a false bottom of stainless steel or plastic mesh which permits the egg masses to fall to the bottom of the tank.
need hõlmavad tähelepanekuid katsesüsteemi, toetava keskkonna ja taristu toimimise kohta.
Frogs injected in the late afternoon will usually deposit most of their eggs by mid morning of the next day.
Tüüpilised andmed hõlmavad järgmist:
After a sufficient quantity of eggs are released and fertilised, adults should be removed from the breeding tanks.
ruumi temperatuur, katsenõude temperatuur, valgustusperiood, kokkupuutesüsteemi oluliste osade (nt pumbad, tsükliloendajad, rõhud) toimimine, voolukiirused, veetasemed, varulahusepudeli vahetamised ja andmed söötmise kohta.
Larval Care and Selection
Üldised vee kvaliteedi näitajad on järgmised:
After the adults are removed from the breeding tanks, the eggs are collected and evaluated for viability using a representative sub-set of the embryos from all breeding tanks.
pH, lahustunud hapniku sisaldus, elektrijuhtivus, joodi üldsisaldus, leelisus ja karedus;
The best individual spawn(s) (2-3 recommended to evaluate the quality of the spawns) should be retained based upon embryo viability and the presence of an adequate number (minimum of 1500) of embryos.
kõrvalekalded katsemeetodist:
All the organisms used in a study should originate from a single spawning event (i.e., the spawns should not be co-mixed).
selles osas tuleks esitada teave või selgitused kõigi katsemeetodist kõrvalekaldumiste kohta;
The embryos are transferred into a large flat pan or dish and all obvious dead or abnormal eggs (see definition in (5)) are removed using a pipette or eyedropper.
bioloogilised tähelepanekud ja andmed:
The sound embryos from each of the three spawns are transferred into three separate hatching tanks.
need hõlmavad iga päev tehtud tähelepanekuid surmajuhtumite, sööda tarbimise, ebanormaalse ujumise, letargia, tasakaalukaotuste, väärarendite, vigastuste jne kohta.
Four days after being placed in the hatching tanks, the best spawn, based on viability and hatching success, is selected and the larvae are transferred into an appropriate number of rearing tanks at 22° ± 1 °C.
Ettenähtud ajavahemike järel kogutavad tähelepanekud ja andmed hõlmavad järgmist:
In addition, some additional larvae are moved into extra tanks for use as replacements in the event that mortalities occur in the rearing tanks during the first week.
arengustaadium, tagajäseme pikkus, ninamiku-pärakuava vahekaugus ja märgkaal;
This procedure maintains consistent organism density and thereby reduces developmental divergence within the cohort of a single spawn.
statistilise analüüsi meetodid ja kasutatud meetodite õigustus;
All rearing tanks should be siphoned clean daily.
statistilise analüüsi tulemused, eelistatavalt tabelitena;
As a precaution, vinyl or nitrile gloves are preferred to latex gloves.
histoloogilised andmed:
Mortalities should be removed daily and replacement larvae should be added back to maintain the organism density during the first week.
need hõlmavad jutustavat kirjeldust, samuti konkreetseid tähelepanekuid, millele on omistatud raskusastme ja esinemissageduse hindepunktid, nagu on üksikasjalikult kirjeldatud histopatoloogia juhenddokumendis;
Feeding should occur at least twice per day.
konkreetset juhtumit käsitlevad tähelepanekud:
During the pre-exposure phase, tadpoles are acclimated to the conditions of the actual exposure phase, including the type of food, temperature, light-dark cycle and the culture medium.
sellised tähelepanekud peaksid hõlmama jutustavat kirjeldust kõigest uuringu käigus nähtust, mis ei kuulu eespool kirjeldatud kategooriatesse.
Therefore, it is recommended that the same culture/dilution water be used during the pre-exposure phase and the exposure phase.
Andmete esitamine
If a static culture system is used for maintaining tadpoles during the pre-exposure phase, the culture medium should be replaced completely at least twice per week.
Iga päev kogutavate andmete tabelid on esitatud 2. liites; neid võib kasutada lähteandmete sisestamise ja kokkuvõtvate statistiliste arvutuste tegemise suunisena.
Crowding, caused by high larval densities during the pre-exposure period, should be avoided because such effects could markedly affect tadpole development during the subsequent testing phase.
Lisaks on esitatud aruandetabelid, milles on mugav esitada määratavaid näitajaid käsitlevaid koondandmeid.
Therefore, the rearing density should not exceed approximately four tadpoles/l culture medium (static exposure system) or 10 tadpoles/l culture medium (with e.g. 50 ml/min flow rate in the pre-exposure or culturing system).
liites on esitatud ka histoloogilise hindamise aruandetabelid.
Under these conditions, tadpoles should develop from stages 45/46 to stage 51 within twelve days.
Uuringu kvaliteedi kriteeriumid ja uuringu vastuvõetavus/nõuetekohasus
Representative tadpoles of this stock population should be inspected daily for developmental stage in order to estimate the appropriate time point for initiation of exposure.
Üldiselt tähendavad suured kõrvalekalded katsemeetodist, et andmeid ei saa kasutada tõlgendamiseks ega katsearuandes esitamiseks.
Care should be used to minimise stress and trauma to the tadpoles, especially during movement, cleaning of aquaria, and manipulation of larvae.
Seepärast on töötatud välja allpool tabelis 4 esitatud kriteeriumid, mis aitavad määrata tehtud uuringu kvaliteeti ja hinnata üldist katseloomade olukorda.
Stressful conditions/activities should be avoided such as loud and/or incessant noise, tapping on aquaria, vibrations in the aquaria, excessive activity in the laboratory, and rapid changes in environmental media (light availability, temperature, pH, DO, water flow rates, etc.)
Tabel 4.
If tadpoles do not develop to stage 51 within 17 days after fertilisation, excessive stress should be considered as a potential culprit.
Kahepaiksete metamorfoosi katse kvaliteedi kriteeriumid
Larval Culture and Feeding
Kriteerium
Tadpoles are fed with e.g. the commercial tadpole feed used in the validation studies (see also appendix 1) throughout the pre-exposure period (after Nieuwkoop and Faber (NF) stage 45/46 (8)) and during the entire test period of 21 days, or other diet that has demonstrated to allow equal performance of the Amphibian Metamorphosis Assay.
Lubatavad piirid
The feeding regime during the pre-exposure period should be carefully adjusted to meet the demands of the developing tadpoles.
Uuritava kemikaali kontsentratsioonid
That is, small portions of food should be provided to the newly hatched tadpoles several times per day (at least twice).
Katses mõõdetud kontsentratsiooni varieerumine (KV) püsib 21 päeva jooksul vahemikus ≤ 20 %
Excess food should be avoided in order i) to maintain water quality and ii) to prevent the clogging of gill filters with food particles and detritus.
Suremus kontrollrühmades
For the tadpole feed used in the validation studies, the daily food rations should be increased along with tadpole growth to approximately 30 mg/animal/day shortly before test initiation.
≤ 10 % – kontrollrühma paralleelkatsetes ei tohiks suremus olla suurem kui 2 kullest rühma kohta
This commercially available feed has been shown in the validation studies to support proper growth and development of X. laevis tadpoles, and is a fine particulate that stays suspended in the water column for a long period of time and is subject to washing out with the flow.
Kontrollrühmade minimaalne mediaanne arengustaadium katse lõpus
Therefore, the total daily amount of food should be divided into smaller portions and fed at least twice daily.
Kontrollrühma arengustaadiumide jaotus
For this feed the feeding regime is outlined in Table 1.
Arengustaadiumide jaotuse 10. ja 90. protsentiil ei tohiks erineda rohkem kui 4 staadiumi võrra
Feeding rates should be recorded.
Lahustunud hapniku kontsentratsioon
It can be fed dry or as a stock solution prepared in dilution water.
≥ 40 % õhu küllastuskontsentratsioonist [8]
Such a stock solution should be freshly prepared every other day and stored at 4 °C when not in use.
pH peaks olema hoitud vahemikus 6,5–8,5.