natgillin/translations-raw huggingface dataset:
A.S., axial space;
Rikastud proov valmistatakse teadaoleva koguse võrdlusstandardi lisamisega kontrollrühma isaskalade plasmaproovile.
P., process.
Proovi rikastatakse nii, et saavutatakse vitellogeniini kontsentratsioon, mis on 10–100 korda suurem kui kontrollrühma isaskalade plasmas olev eeldatav kontsentratsioon.
B, Distal extremity of fin-ray.
Kontrollrühma isaskalade plasma, mida rikastatakse, võib pärineda kas ühelt või mitmelt kalalt.
Actinotrichia (Act.) are on the tip.
Kontrollrühma isaskalade rikastamata plasma osaproovi analüüsitakse vähemalt kahes paralleelaugus.
Fig.3.
Rikastatud plasmat analüüsitakse samuti vähemalt kahes paralleelaugus.
Photograph of fish body showing the cut site when the gonad is fixed in the fixing solution other than 10 % neutral buffered formalin.
Eeldatava kontsentratsiooni määramiseks liidetakse kontrollrühma isaskalade kahes rikastamata proovis sisalduva vitellogeniinikoguse keskväärtusele rikastamisel lisatud arvutuslik vitellogeniinikogus.
In that case, the remaining body will be cut off between anterior region of anal fin and anal using razor (red bar), and the head side of fish body will be put into the fixing solution for gonad and the tail side of the fish body will be put into the 10 % neutral buffered formalin.
Eeldatava kontsentratsiooni ja mõõdetud kontsentratsiooni suhtarv esitatakse koos samal päeval tehtud määramiste tulemustega.
Papillary processes normally appear only in adult males and are found on fin rays from the second to the seventh or eighth counting from the posterior end of the anal fin (Fig.1 and 2).
Paralleelide keskväärtuste jaotus ei ole normaalne või ühtlane Dunni test paralleelide keskväärtustega
However, processes rarely appear on the first fin ray from the posterior end of the anal fin.
≥ 4 paralleeli konts. kohta
This SOP covers the measurement of processes on the first fin ray (the fin ray number refers to the order from the posterior end of the anal fin in this SOP).
dispersiooni stabiliseeriv teisendus?
Recommended procedures for sample collection for vitellogenin analysis
dispersiooni stabiliseeriv teisendus?
Care should be taken to avoid cross-contamination between VTG samples of males and females.
≥ 4 parall. konts. kohta
Procedure 1A:
Määrata, kas doosi-toime sõltuvus on monotoonne
Fathead Minnow, Blood Collection from the Caudal Vein/Artery
Dispersioonid on võrdsed
After anaesthetisation, the caudal peduncle is partially severed with a scalpel blade and blood is collected from the caudal vein/artery with a heparinised microhematocrit capillary tube.
Ei ole monotoonne
After the blood has been collected, the plasma is quickly isolated by centrifugation for 3 min at 15000 g (or alternatively for 10 min. at 15000 g at 4 °C).
Astmeliselt Jonckheere või Williamsi test
If desired, percent hematocrit can be determined following centrifugation.
Trenditest astmeliselt paralleelide keskväärtustele
The plasma portion is then removed from the microhematocrit tube and stored in a centrifuge tube with 0,13 units of aprotinin (a protease inhibitor) at – 80 °C until determination of vitellogenin can be made.
Jah Jah
Depending on the size of the fathead minnow (which is sex-dependent), collectable plasma volumes generally range from 5 to 60 microlitres per fish (Jensen et al.
Pesastatud norm-jaotusega ANOVA
2001).
Dunni või Mann-Whitney test
Procedure 1B:
Dunnetti test pesastatud ANOVA kohta Dunnetti test
Fathead Minnow, Blood Collection from Heart
Dispersioonid on võrdsed Ei
Alternatively, blood may also be collected by cardiac puncture using a heparinized syringe (1000 units of heparin per ml).
Astmeliselt Jonckheere’i või Williamsi test
The blood is transferred into Eppendorf tubes (held on ice) and then centrifuged (5 min, 7000 g, room temperature).
Jätta vee kontroll kõrvale
The plasma should be transferred into clean Eppendorf tubes (in aliquots if the volume of plasma makes this feasible) and promptly frozen at – 80 °C, until analyzed (Panter et al., 1998).
≥ 4 paralleeli konts. kohta
Procedure 2A:
Trenditest astmeliselt paralleelide keskväärtustele
Japanese Medaka, Excision of the Liver in Medaka
KAHEPAIKSETE METAMORFOOSI KATSE
Removal of the test fish from the test chamber
Käesolev katsemeetod on samaväärne OECD katsejuhendiga nr 231 (2009).
Test fish should be removed from the test chamber using the small spoon-net.
Vajadus töötada välja ja valideerida katse, mille abil saaks välja selgitada kemikaale, mis avaldavad mõju selgroogsete loomade kilpnäärmesüsteemile, tuleneb kartustest, et kemikaalid võivad juba keskkonnas oleva kontsentratsiooni juures avaldada kahjulikku mõju nii inimestele kui ka elusloodusele.
Be careful not to drop the test fish into other test chambers.
OECD algatas 1998. aastal prioriteetse tegevussuunana olemasolevate katsejuhendite läbivaatamise ja uute väljatöötamise, et sõeluuringutega selgitada välja kemikaalid, mis võivad kahjustada endokriinsüsteemi, ja teha kindlaks nende mõju.
In principle, the test fish should be removed in the following order:
Üks tegevussuund oli töötada välja katsejuhend sõeluuringu tegemiseks, millega selgitatakse välja kemikaale, mis mõjutavad selgroogsete kilpnäärmesüsteemi.
control, solvent control (where appropriate), lowest concentration, middle concentration, highest concentration and positive control.
Tehti ettepanek tõhustada selleks suukaudse kordusdoosi toksilisuse 28-päevast uuringut närilistel (vt käesoleva lisa peatükk B.7) ja kahepaiksete metamorfoosi katset (Amphibian Metamorphosis Assay, AMA).
In addition, all males should be removed from one test chamber before the remaining females are removed.
Tõhustatud katsemeetod B.7 on läbinud valideerimise ja läbivaadatud katsemeetod on avaldatud.
The sex of each test fish is identified on the basis of external secondary sex characteristics (e.g. the shape of the anal fin).
Kahepaiksete metamorfoosi katse on läbinud ulatusliku valideerimisprogrammi, mis hõlmas laborisiseseid ja laboritevahelisi uuringuid, millega tõendati katsemeetodi asjakohasust ja usaldusväärsust (1, 2).
Place the test fish in a container for transport and carry it to the workstation for excision of the liver.
Seejärel läbis katse valideerimine vastastikuse hindamise sõltumatute ekspertide rühma poolt (3).
Check the labels of the test chamber and the transport container for accuracy and to confirm that the number of fish that have been removed from the test chamber and that the number of fish remaining in the test chamber are consistent with expectation.
Käesolev katsemeetod põhineb kogemustel, mis on saadud kilpnääret mõjutavate kemikaalide väljaselgitamiseks kasutatava meetodi valideerimisel, ning mujal OECD riikides tehtud töödel.
If the sex cannot be identified by the fish's external appearance, remove all fish from the test chamber.
Kahepaiksete metamorfoosi katse on sõeluuring, mis on ette nähtud selliste kemikaalide empiiriliseks kindlakstegemiseks, mis võivad takistada hüpotalamuse-ajuripatsi-kilpnäärme telje normaalset talitlust.
In this case, the sex should be identified by observing the gonad or secondary sex characteristics under a stereoscopic microscope.
Nimetatud katse kujutab endast üldistatud selgroogsete mudelit, kuivõrd see põhineb hüpotalamuse-ajuripatsi-kilpnäärme telje evolutsioonis konserveerunud struktuuridel ja funktsioonidel.
Excision of the liver
See on oluline katse, kuna kahepaiksete metamorfoos on hästi uuritud ja kilpnäärmest sõltuv protsess, mis reageerib hüpotalamuse-ajuripatsi-kilpnäärme telge mõjutavatele kemikaalidele ja on ainus olemasolev meetod, millega saab uurida kilpnäärme aktiivsust looma morfoloogilise arengu käigus.
Transfer the test fish from the container for transport to the anaesthetic solution using the small spoon-net.
Katse üldise korralduse kohaselt viiakse Xenopus laevis'e kullesed arengustaadiumis 51 kokkupuutesse uuritava kemikaali vähemalt kolme eri kontsentratsiooniga ja kontrolliks ka lahjendusveega 21 päeva jooksul.
After the test fish is anaesthetised, transfer the test fish on the filter paper (or a paper towel) using tweezers (commodity type).
Iga kokkupuuteuuring tehakse nelja paralleelkatsega.
When grasping the test fish, apply the tweezers to the sides of the head to prevent breaking the tail.
Kulleste tihedus katse alustamise ajal on 20 kullest katseakvaariumi kohta iga katserühma puhul.
Wipe the water on the surface of the test fish on the filter paper (or the paper towel).
Uuritavad näitajad on tagajäseme pikkus, vahemaa ninamikust kuni pärakuavani (snout to vent length, SVL), arengustaadium, märgkaal, kilpnäärme histoloogia ja igapäevased tähelepanekud surmajuhtumite kohta.
Then make a small transverse incision partway between the ventral neck region and the mid-abdominal region using dissection scissors.
Katses kasutatav liik
Insert the dissection scissors into the small incision, and incise the abdomen from a point caudal to the branchial mantle to the cranial side of the anus along the midline of the abdomen.
Xenopus laevis't kasvatatakse plaaniliselt kogu maailma laborites ja see liik on kaubanduslikult kergesti kättesaadav.
Be careful not to insert the dissection scissors too deeply so as to avoid damaging the liver and gonad.
Selle liigi esindajateesindajate paljunemist on kerge aastaringselt esile kutsuda inimese kooriongonadotropiini süstimisega ja saadavaid vastseid võib regulaarselt kasvatada valitud arengustaadiumideni suurtes kogustes, mis võimaldab kasutada konkreetse arengujärguga seotud katse-eeskirja.
Conduct the following operations under the stereoscopic microscope.
Katses on soovitatav kasutada vastseid, kes on saadud samas laboris elavatelt täiskasvanud konnadelt.
Place the test fish abdomen side up on the paper towel (glass Petri dish or slide glass are also available).
Vähem soovitatava asendusvõimalusena võib katse tegemist kavandav labor tellida mune või looteid ja lasta neil aklimatiseeruda;
Extend the walls of the abdominal cavity with precision tweezers and exteriorise the internal organs.
vastse-järkudes noorloomade tellimine katses kasutamiseks on lubamatu.
It is also acceptable to exteriorise the internal organs by removing one side of the wall of the abdominal cavity if necessary.
Seadmed ja vajalikud vahendid
Expose the connected portion of the liver and gallbladder using another pair of precision tweezers.
Käesoleva katse tegemiseks on vaja järgmisi seadmeid ja vahendeid:
Then grasp the bile duct and cut off the gallbladder.
süsteem kemikaaliga kokkupuutesse viimiseks (vt kirjeldus allpool);
Be careful not to break the gallbladder.
klaasist või roostevabast terasest akvaariumid (vt kirjeldus allpool);
Grasp the oesophagus and excise the gastrointestinal tract from the liver in the same way.
paljundusnõud;
Be careful not to leak the contents of the gastrointestinal tract.
temperatuuri kontrollimise seade (nt jahutid või kütteseadmed, mis on reguleeritavad temperatuurile 22 ± 1 °C);
Excise the caudal gastrointestinal tract from the anus and remove the tract from the abdominal cavity.
termomeeter;
Trim the mass of fat and other tissues from the periphery of the liver.
binokulaarne lahkamismikroskoop;
Be careful not to scratch the liver.
mikroskoobiga ühendatav digitaalne fotoaparaat vähemalt 4-megapikslise lahutusvõimega;
Grasp the hepatic portal area using the precision tweezers and remove the liver from the abdominal cavity.
kujutise digiteerimise tarkvara;
Place the liver on the slide glass.
Petri tass (nt 100 × 15 mm) või võrreldava suurusega läbipaistvast plastikust kamber;
Using the precision tweezers, remove any additional fat and extraneous tissue (e.g., abdominal lining), if needed, from the surface of the liver.
analüütiline kaal, millega on võimalik kaaluda kolme kümnendkoha (mg) täpsusega;
Measure the liver weight with 1.5 ml microtube as a tare using an electronic analytical balance.
lahustunud hapniku kontsentratsiooni mõõtja;
Record the value on the worksheet (read: 0,1 mg).
pH-meeter;
Confirm the identification information on the microtube label.
valgustatuse mõõtja, mis võimaldab mõõta tulemust luksides;
Close the cap of the microtube containing the liver.
mitmesugused klaasist laborinõud ja muud vahendid;
Store it in a cooling rack (or ice rack).
reguleeritavad pipetid (10–5000 μl) või valik muid sama suurusvahemiku pipette;
Following the excision of one liver, clean the dissection instruments or replace them with clean ones.
uuritav kemikaal piisavas koguses uuringu läbiviimiseks, eelistatavalt ühest partiist;
Remove livers from all of the fish in the transport container as described above.
analüüsivahendid, mis sobivad uuritava kemikaali määramiseks või leping analüüsiteenuste saamiseks.
After the livers have been excised from all of the fish in the transport container (i.e., all males or females in a test chamber), place all liver specimens in a tube rack with a label for identification and store it in a freezer.
Kemikaali uuritavus
When the livers are donated for pre-treatment shortly after the excision, the specimens are carried to the next workstation in a cooling rack (or ice rack).
Kahepaiksete metamorfoosi katse põhineb veekaudse kokkupuute eeskirjal, mille puhul uuritav kemikaal viiakse katsekambritesse läbivoolusüsteemi kaudu.
Following liver excision, the fish carcass is available for measurement of secondary sex characteristics.
Läbivoolumeetoditega saab aga uurida ainult piiratud hulka kemikaalitüüpe, ja uuritavus oleneb kemikaali füüsikalis-keemilistest omadustest.
Specimen
Seepärast tuleb enne käesoleva eeskirja kasutamist koguda kemikaali kohta teavet, mis on vajalik tema uuritavuse kindlakstegemiseks, ning tutvuda OECD juhendiga, milles käsitletakse veekeskkonna jaoks mürgisuse määramist uurimisel raskusi valmistavate ainete ja segude (4) puhul.
Store the liver specimens taken from the test fish at ≤ – 70 °C if they are not used for the pre-treatment shortly after the excision.
Omadused, mis näitavad, et kemikaali mõju veesüsteemides võib olla raske uurida:
A cut is made just anterior to pectoral fins with scissors.
kõrge oktanooli-vee jaotuskoefitsient (log Kow), suur lenduvus, kalduvus hüdrolüüsiks, kalduvus fotolüüsiks tavalistes labori valgustustingimustes.
Figure 2
Ka muud tegurid võivad olla asjakohased uuritavuse seisukohast ja neid tuleks määrata iga juhtumi puhul eraldi.
The midline of abdomen is incised with scissors to a point approximately 2 mm cranial to the anus.
Kui uuritavat kemikaali ei ole võimalik korralikult uurida läbivoolukatse süsteemis, võib kasutada staatilist uuendussüsteemi.
Figure 3
Kui uuritavat kemikaali ei ole võimalik uurida kummagi süsteemi abil, siis tuleb loobuda selle uurimisest käesoleva eeskirja järgi.
The abdominal walls are spread with forceps for exposure of the liver and other internal organs.
Kokkupuutesüsteem
(Alternatively, the abdominal walls may be pinned laterally).
Võimaluse korral tuleb eelistada läbivooluga lahjendussüsteemi staatilise uuendussüsteemi ees.
Figure 4
Kui uuritava kemikaali füüsikalised või keemilised omadused ei sobi läbivooluga lahjendussüsteemi kasutamiseks, võib selle asemel kasutada muud kemikaaliga kokkupuute süsteemi (nt staatilist uuendussüsteemi).
The liver is bluntly dissected and excised using forceps.
Süsteemi kõik veega kokkupuutuvad osad peaksid olema klaasist, roostevabast terasest või polütetrafluoroetüleenist.
Figure 5
Kasutada võib ka sobivaid plastikuid, kui need ei kahjusta tulemuste usaldusväärsust.
The intestines are gently retracted using forceps.
Kokkupuutenõudeks peaksid olema klaasist või roostevabast terasest akvaariumid, mis on varustatud püsttorudega, mis tagavad nõus oleva vee ligikaudse ruumala vahemikus 4,0–10,0 liitrit ja minimaalse veesügavuse 10–15 cm.
Testis 6
Süsteem peaks võimaldama kasutada kõiki kokkupuutekontsentratsioone ja teha kontrollkatset, nelja paralleelkatsega iga doosirühma kohta.
Both ends of the intestines and any mesenteric attachments are severed using scissors.
Voolukiirus igas nõus peaks olema konstantne, nii et oleks võimalik säilitada bioloogilisi tingimusi kui ka kemikaaliga kokkupuute tingimusi (nt 25 ml/min).
Testis 7 (female)
Kokkupuutenõud tuleks kokkupuutesüsteemis kohtadele paigutada juhuvaliku alusel, et vähendada asukoha, sealhulgas temperatuuri, valgustuse intensiivsuse jm väikeste erinevuste võimalikku mõju.
The completed procedure.
Igas katsenõus tuleks vesi hoida temperatuuril 22 ± 1 °C, pH vahemikus 6,5–8,5 ning lahustunud hapniku (DO) kontsentratsioon > 3,5 mg/l (> 40 % õhu küllastuskontsentratsioonist).
Procedure 2 B:
Vee temperatuuri, pH-d ja lahustunud hapniku kontsentratsiooni tuleks mõõta vähemalt kord nädalas;
Japanese Medaka (Oryzias latipes), Liver Pre-treatment for Vitellogenin Analysis
temperatuuri tuleks eelistatavalt mõõta pidevalt vähemalt ühes katseanumas.
Take the bottle of homogenate buffer from the ELISA kit and cool it with crushed ice (temperature of the solution: ≤ 4 °C).
liites on kirjeldatud katsetingimusi, mida tuleks kasutada käesoleva eeskirja järgi katse tegemisel.
If homogenate buffer from EnBio ELISA system is used, thaw the solution at room temperature, and then cool the bottle with crushed ice.
Lisateavet läbivooluga kokkupuutesüsteemi ja/või staatilise uuendussüsteemi koostamise kohta võib leida katsejuhendis ASTM Standard Guide for Conducting Acute Toxicity Tests on Test Materials with Fishes, Macroinvertebrates, and Amphibians (5) ja üldistes veekeskkonna suhtes mürgisuse määramise juhendites.
Calculate the volume of homogenate buffer for the liver on the basis of its weight (add 50 μl of homogenate buffer per mg liver weight for homogenate).
Vee kvaliteet
For example, if the weight of the liver is 4,5 mg, the volume of homogenate buffer for the liver is 225 μl.
Kasutada võib iga kohapeal kättesaadavat vett (nt allikavesi või aktiivsöel filtritud kraanivesi), mis võimaldab X. laevis'e kulleste normaalset kasvu ja arengut.
Prepare a list of the volume of homogenate buffer for all livers.
Kuna kohaliku vee kvaliteet võib olenevalt asukohast oluliselt erineda, tuleb teha vee kvaliteedi analüüs, eriti juhul, kui puuduvad varasemad andmed selle vee kasutamise kohta Xenopus'e kasvatamiseks.
Preparation of the liver for pre-treatment
Erilist tähelepanu tuleks pöörata sellele, et vesi ei sisaldaks vaske, kloori ja kloramiini, mis on konnade ja kulleste jaoks mürgised.
Take the 1,5 ml microtube containing the liver from the freezer just before the pre-treatment.
Lisaks soovitatakse vees analüüsida (joogivee desinfitseerimise kõrvalsaaduste) fluoriidi, perkloraadi ja kloraadi sisaldust, kuna kõik need anioonid on kilpnäärmes joodi transportiva süsteemi substraadid ja nendest ükskõik millise kõrgem sisaldus muudab uuringu tulemuse mitte usaldatavaks.
In addition, the pre-treatment for test groups should be conducted in the following order:
Jodiidi kontsentratsioon katsevees
The number of 1,5 ml microtubes containing liver samples taken from the freezer at a given time should not exceed the number that can be centrifuged at that time.
Selleks et kilpnääre saaks sünteesida kilpnäärmehormoone, peab vastsele olema vee ja sööda kaudu kättesaadav piisav kogus jodiidi.
Arrange the 1,5 ml microtubes containing liver samples in the order of specimen number on the ice rack (no need to thaw the liver).
Praegu ei ole empiirilisi suuniseid minimaalse jodiidi kontsentratsiooni kohta.
Operation of the pre-treatment
Siiski võib jodiidi kättesaadavus mõjutada kilpnäärmesüsteemi reageerimisvõimet kilpnääret aktiveerivatele teguritele ja on teada, et see mõjutab kilpnäärme baasaktiivsust; see aspekt väärib tähelepanu kilpnäärme histopatoloogia alaste tulemuste tõlgendamisel.
Addition of the homogenization buffer
Seepärast tuleb katsearuandes ära märkida katseks kasutatud vees mõõdetud jodiidi kontsentratsioonid.
Check the list for the volume of the homogenate buffer to be used for a particular sample of liver and adjust the micropipette (volume range: 100-1000 μl) to the appropriate volume.
Olemasolevate valideerimisuuringute tulemuste põhjal on käesolev eeskiri andnud häid tulemusi, kui jodiidi (I–) sisaldus katseks kasutatud vees oli vahemikus 0,5–10 μg/l.
Attach a clean tip to the micropipette.
Ideaaljuhul peaks jodiidi kontsentratsioon katseks kasutatud vees olema vähemalt 0,5 μg/l.
Take the homogenate buffer from the reagent bottle and add the buffer to the 1,5 ml microtube containing the liver.
Kui katseks kasutatav vesi saadakse deioniseeritud veest kunstlikult, tuleks sellele lisada jodiidi minimaalses kontsentratsioonis 0,5 μg/l.
Add the homogenate buffer to all of 1,5 ml microtubes containing the liver according to the procedure described above.
Katsearuandesse tuleks märkida joodi või muude soolade täiendav lisamine katseks kasutatud vette.
There is no need to change the micropipette tip to a new one.
Loomade pidamine
However, if the tip is contaminated or suspected to be contaminated, the tip should be changed.
Täiskasvanute hooldus ja järglaste saamine
Homogenisation of the liver
Täiskasvanud konnade hooldamine ja nendelt järglaste saamine toimub vastavalt üldistele suunistele ja lugeja leiab selle kohta üksikasjalikuma teabe konnaloote teratogeneesi katse (Frog Embryo Teratogenesis Assay, FETAX) juhendist (6).
Attach a new pestle for homogenisation to the microtube homogeniser.
Sellistes üldistes suunistes on esitatud näide sobivate hooldamis- ja järglaste saamise meetodite kohta, kuid ranget kinnipidamist neist suunistest ei nõuta.
Insert the pestle into the 1,5 ml microtube.
Paljunemise algatamiseks süstitakse kolmele kuni viiele täiskasvanud emas- ja isaslooma paarile inimese kooriongonadotropiini (hCG).
Hold the microtube homogeniser to press the liver between the surface of the pestle and the inner wall of the 1,5 ml microtube.
Emas- ja isasisenditele süstitakse vastavalt ligikaudu 800–1000 RÜd ja 600–800 RÜd hCG-d, mis on lahustatud 0,6–0,9 % soolalahuses.
Operate the microtube homogeniser for 10 to 20 seconds.
Paljunduspaare hoitakse suurtes nõudes, häirimata ja püsivates tingimustes, et esile kutsuda kopulatsiooni (ampleks).
Cool the 1,5 ml microtube with crushed ice during the operation.
Igas paljundusnõus peaks olema roostevabast terasest või plastikvõrgust topeltpõhi, läbi mille munamassid kukuvad nõu põhjale.
Lift up the pestle from the 1,5 ml microtube and leave it at rest for about 10 seconds.
Hilisel pärastlõunal süstitud konnad koevad enamiku mune järgmise päeva hommikupoolikul.
Then conduct a visual check of the state of the suspension.
Kui on koetud ja viljastatud piisav kogus mune, eemaldatakse täiskasvanud isendid paljundusnõust.
If pieces of liver are observed in the suspension, repeat the operations (3) and (4) to prepare satisfactory liver homogenate.
Vastsete eest hoolitsemine ja vastsete valimine
Cool the suspended liver homogenate on the ice rack until centrifugation.
Pärast täiskasvanud isendite eemaldamist paljundusnõust kogutakse munad ja hinnatakse nende eluvõimet, kasutades esindavat loodete valikut kõikidest paljundusnõudest.
Change the pestle to the new one for each homogenate.
Parim kudu (parimad kudud) (soovitatakse valida 2-3 kudu nende kvaliteedi hindamiseks) valitakse välja loodete elujõulisuse ja piisava arvu (vähemalt 1500 loodet) põhjal ja tuleks säilitada.
Homogenise all livers with homogenate buffer according to the procedure described above.
Kõik uuringus kasutatavad organismid peavad pärinema ühest kudemissündmusest (s.o kudusid ei tohi kokku segada).
Centrifugation of the suspended liver homogenate
Looted viiakse üle suurele lamedale vaagnale või pannile ning kõik ilmselt surnud või ebanormaalsed munad (vt määratlus (5)) kõrvaldatakse pipeti või silmapipeti abil.
Confirm the temperature of the refrigerated centrifuge chamber at ≤ 5 °C.
Kõigi kolme kudu terved looted viiakse üle kolme eraldi koorumisnõusse.
Insert the 1,5 ml microtubes containing the suspended liver homogenate in refrigerated centrifuge (adjust the balance if necessary).
Neli päeva pärast koorumisnõusse üleviimist valitakse välja parim kudu, arvestades elujõulisust ja koorumise edukust, ning vastsed kantakse üle kasvatusnõudesse, mida võetakse vajalik arv ja milles temperatuur on 22 ± 1 °C.
However, if the supernatants are adequately separated, centrifugal force and time may be adjusted as needed.
Selliselt toimides hoitakse isendite tihedust ühtlasena ja sellega vähendatakse ühe kudu kohordis esinevaid arenguerinevusi.