natgillin/translations-raw huggingface dataset:
The samples with intact DNA will be used in this PCR-programme to detect the X- and Y-Genes.
DOC taustkontsentratsioon ei tohiks ületada ligikaudu 20 % DOC üldkontsentratsioonist pärast uuritava materjali lisamist.
Male DNA should show one double-band and female DNA should show one single band (after staining and gel-electrophoresis).
Kui see ei ole teostatav, võib DOC taustkontsentratsiooni mõnikord vähendada merevee vanandamisega enne katse tegemist.
For this programme-run one positive control for males (XY-sample) and one for females (XX-sample) should be included.
Kui seda meetodit kasutatakse ainult koos konkreetse kemikaali määramisega (sel viisil mõõdetakse primaarset lagundamist), peab uurija kirjandusest saadud lisateabe abil näitama, kas võib oletada ka lõplikku lagunduvust.
“PG 17,6” (lower/reverse) → GAT CGT CCC TCC ACA GAG AAG AGA
Tavalised laboriseadmed ja:
→ 45 sec at 55 °C
b. kitsa kaelaga 0,5–2 liitrised Erlenmeyeri kolvid;
Y-Gene-PCR-programme as “control” for X- and Y-Gene-PCR-programme:
d. membraanfiltrid 0,2–0,45 μm;
This PCR-programme verifies the results of the “X- and Y-Gene-PCR-programme”.
e. süsinikuanalüsaator;
The “male-samples” should show one band and the “female-samples” shouldn't show any band (after staining and gel-electrophoresis).
f. varustus spetsiifiliste analüüside jaoks (ei ole kohustuslik).
“DMTYa (upper/forward)” → GGC CGG GTC CCC GGG TG
Merevesi
“DMTYd (lower/reverse)” → TTT GGG TGA ACT CAC ATG G
Merevee proov võetakse hoolikalt puhastatud nõusse ja transporditakse laborisse eelistatavalt ühe või kahe päeva jooksul pärast võtmist.
Staining of the PCR-samples:
Transpordi ajal ei tohi proovi temperatuur tõusta oluliselt kõrgemale katses kasutatavast temperatuurist.
Staining solution:
Registreeritakse täpne proovivõtu koht ja kirjeldatakse merevee saasteainete ja toitainete sisaldust kõnealuses kohas.
50 % Glycerol
Eriti rannikulähedaste vete puhul esitatakse selles kirjelduses ka heterotroofsete mikroorganismide kolooniate arv, samuti lahustunud nitraadi, ammooniumi ja fosfaadi kontsentratsioon.
0,25 % Bromphenolblue
Merevee proovi enda kohta esitatakse järgmine teave:
0,25 % Xylenecyanol
võtmise kuupäev;
Pipette 1 μl of the staining solution into each single tube
proovivõtu sügavus;
Start of the Gel-Electrophoresis:
proovi välimus – sogane vms;
The prepared 1 % agarose gel will be transferred into a gel-electrophoresis-chamber filled with 1 × TAE-Buffer
temperatuur proovi võtmise ajal;
10 - 15 μl of each stained PCR-sample will be pipetted into an agarose gel slot
soolsus;
Also 5 - 15 μl of the 1kb-“Ladder”(Invitrogen) will be pipetted into a separate slot
ajavahemik proovivõtust kuni katseni.
Start the electrophoresis by 200 V
Kui lahustunud orgaanilise süsiniku sisaldus merevees on kõrge (punkt 8), soovitatakse merevett umbes üks nädal vanandada enne kasutamist.
Stop after 30-45 min
Merevett vanandatakse hoidmisega aeroobsetes tingimustes katse temperatuuril ja pimeduses või hajunud valguses.
Determination of the bands:
Vajaduse korral tuleb aeroobsete tingimuste säilitamiseks kergelt aereerida.
Clean the agarose gel in distilled H2O
Vanandamise ajal väheneb kergesti biolagundatava orgaanilise materjali sisaldus.
Now transfer the agarose gel into Ethidium bromide for 15 - 30 min
Laboritevahelises võrdluskatses (3) ei leitud vanandatud ja värskelt võetud mereveeproovide biolagundamise võimes mingeid erinevusi.
After that, a picture of the agarose gel should be taken in an UV-light-box
Enne kasutamist töödeldakse merevett suuremate osakeste eemaldamiseks näiteks filtrimisega läbi nailonfiltri või jämeda paberfiltri (mitte kasutada membraan- või klaasmikrokiud- (GF/C-)filtrit) või setitamise ja dekanteerimisega.
Finally the samples are analysed in comparison to the positive control-band (or bands) and the ladder
Kasutatud menetlust tuleb kirjeldada.
Appendix 10
Kui kasutatakse eeltöötlemist, tuleb see teha pärast vanandamist.
Guidance on tissue sampling for genetic sex determination by PCR method in the three-spined stickleback
Mineraaltoitainete põhilahused
Tissue sampling and DNA extraction
Analüüsipuhastest reaktiividest valmistatakse järgmised põhilahused.
DNA can be extracted using a variety of commercially available reagents and both manual and automated extraction systems.
kaaliumdivesinikortofosfaat, KH2PO4
The protocol used at the Cefas Weymouth laboratory is outlined below, and the alternative approaches have been added where appropriate.
8,50 g
With fine scissors, a small piece of tissue (10-20 mg) from the dorsolateral area (after removing the head and tail for VTG analysis), is removed from each individual fish.
dikaaliumvesinikortofosfaat, K2HPO4
The tissue is added into a tube and either placed directly in liquid nitrogen (for storage at – 80 °C) or filled with 70 % ethanol (for transport and subsequent storage at 4 °C).
21,75 g
The scissors are cleaned after each single fish in 70 % ethanol then in distilled water and dried with tissue paper.
dinaatriumvesinikortofosfaatdihüdraat, Na2HPO4 · 2H2O
The ethanol (if present) is removed by aspiration and the tissue is digested overnight with proteinase K in 400 μl of ATL buffer (Qiagen).
33,30 g
An aliquot (200 μl) of the digest is transferred to a 96-well S-block (Qiagen) and the DNA extracted in a 96-well format using the Qiagen Universal BioRobot and the QIamp Investigator BioRobot kit.
ammooniumkloriid, NH4Cl
The DNA is eluted in a 50 μl of DNase and RNase free water.
0,50 g
If using hard tissues to extract DNA (such as a spine or a pectoral fin) it may be necessary to homogenise the sample in the lysis buffer using a FastPrep® tissue lyser or equivalent tissue disruption system.
lahustatakse destilleeritud vees ja täiendatakse 1 liitrini.
Alternatively,
kaltsiumkloriid, CaCl2
the tissue is digested overnight with proteinase K in 400 μl of G2 lysis buffer (Qiagen) and DNA is extracted from 200 μl of the digest using either the EZ-1 DNA easy tissue kit and the EZ-1 biorobot or the DNA easy tissue mini kit.
27,50 g
The DNA is eluted in a 50 μl volume.
magneesiumsulfaatheptahüdraat, MgSO4 · 7H2O
The tissues are processed using the DNAzol reagent.
22,50 g
Briefly, tissue samples are lysed in 1ml of DNAzol for 10 minutes in a 1,5 ml micro centrifuge tube and then centrifuged at 13000 rpm for 5 minutes to remove any particulate matter.
raud(III)kloriidheksahüdraat, FeCl3 · 6H2O
The lysed sample is then transfered to a new 1,5 ml micro centrifuge tube containing 500 μl of 100 % molecular grade ethanol and then centrifuged at 13000 rpm for 10 minutes to precipitate the DNA.
0,25 g
The ethanol is removed and replaced with 400 μl of 70 % molecular grade ethanol, centrifuged at 13000 rpm for 5 minutes and the DNA pellet is dissolved in 50 μl molecular DNase and RNase free water.
Sadenemist lahuses d saab ära hoida ühe tilga kontsentreeritud soolhappe või 0,4 g etüleendiamiintetraäädikhappe (EDTA dinaatriumsool) lisamisega 1 liitri lahuse kohta.
Again, when using the hard tissues (pectoral fin) it may be necessary to homogenise the sample in the lysis buffer using a FastPrep® tissue lyser or equivalent tissue disruption system prior to extracting the DNA.
Kui põhilahuses tekib sade, asendatakse see värskelt valmistatud lahusega.
The DNA is stored at – 20 °C until required.
Uuritava keskkonna valmistamine
gloves must be worn during the procedures.
Eeltöödeldud merevee ühe liitri kohta lisatakse 1 ml kumbagi eespool kirjeldatud põhilahust.
Polymerase chain reaction (PCR) analysis
Merevees juba olemasolevatele mikroorganismidele ei lisata spetsiaalset inokulumi.
Amplifications were performed using 2,5 μl of the DNA extract in a 50 μl reaction volume using the Idh locus primers (as described by Peichel et al., 2004.
Mereveest saadud katsekeskkonnas (ja soovitatavalt ka esialgses merevee proovis) määratakse (soovi korral) kolooniat moodustavate heterotroofsete bakterite arv, näiteks kolooniate loendamisega mereveeagari plaadil.
Current Biology 1:1416-1424):
See on eriti soovitatav proovide puhul, mis on võetud rannikuveest või saastatud merealalt.
Forward primer
Heterotroofsete mikroobide aktiivsust kontrollitakse nii, et katse tehakse võrdlusainega.
Reverse primer
Kolbide ettevalmistamine
There are numerous suppliers of suitable PCR reagents.
Kõik klaasnõud peavad olema hoolikalt puhastatud (kuigi mitte tingimata steriilsed) näiteks soolhappe alkoholilahusega, loputatud ja kuivatatud, et vältida saastavaid jääke varasematest katsetest.
The method outlined below is that currently used at the Cefas Weymouth laboratory.
Puhastada tuleb ka kolvid, mida kasutatakse esimest korda.
Preparation of the “Reaction Mix” (50 μl per sample):
Uuritavat ainet hinnatakse samaaegselt kahes paralleelkatsekolvis ja lisaks tehakse samal ajal ühes kolvis katse võrdlusainega.
A mastermix is prepared as follows.
Analüüsi tühiproovide määramiseks tehakse tühikatse kahe paralleelkatsena, millesse ei panda ei uuritavat ainet ega võrdlusainet.
This can be prepared in advance and stored frozen at – 20 °C until required.
Uuritav aine lahustatakse katsekeskkonnas – ainet võib mugavalt lisada kontsentreeritud põhilahusena, et saada vajalik lähtekontsentratsioon, mis tavaliselt on 5–40 mg DOC/l.
Make sufficient mastermix for a negative control (molecular biology grade water only).
Võrdlusainega tehakse tavaliselt katse lähtekontsentratsioonil, mis vastab kontsentratsioonile 20 mg DOC/l.
Volume (stock conc.)/ sample
Kui kasutatakse uuritava kemikaali ja/või võrdluskemikaali põhilahuseid, tuleb tagada, et merevee soolsus katsekeskkonnas oluliselt ei muutuks.
® Reaction Buffer
Kui võib eeldada või ei saa välistada toksilist mõju, siis võib olla soovitatav lisada katse kavasse ka inhibeerimiskatse kahe paralleeliga.
Nucleotides (dATP, dCTP, dGTP, dTTP)
Ühte ja samasse nõusse lisatakse uuritavat ainet ja võrdlusainet, kusjuures võrdlemise võimaldamiseks on võrdlusaine kontsentratsioon tavaliselt sama kui kontrollkatses (st 20 mg DOC/l).
0,5 μl (25 mM each)
(Puuvillvatist korgid ei sobi lahustunud orgaanilise süsiniku analüüsi puhul.)
250 μM each
Nõud pannakse loksutile ja neid loksutatakse kogu katse jooksul pidevalt mõõduka kiirusega (nt 100 pööret minutis).
Forward Primer
Temperatuur hoitakse vahemikus 15–20 (± 2) °C ning nõusid varjatakse valguse eest, et vältida vetikate kasvu.
0,5μl (0,1 nmol/μl)
Tagatakse, et ruumi õhus ei oleks mürgiseid aineid.
Reverse Primer
Füüsikalis-keemiline kontrollkatse (soovi korral)
2,0μM
Kui kahtlustatakse abiootilist lagunemist või kadu, nt hüdrolüüsi (mis tekitab raskusi üksnes konkreetse aine määramise puhul), lendumist või adsorptsiooni, on soovitatav teha füüsikalis-keemiline kontrollkatse.
Molecular biology grade water
Seda võib teha elavhõbe(II)kloriidi (HgCl2) [10] (50–100 mg/l) lisamisega uuritava aine lahusesse, et peatada mikroobide tegevus.
GoTaq polymerase
Kui lahustunud orgaanilise süsiniku või konkreetse aine kontsentratsioon füüsikalis-keemilises kontrollkatses ikkagi väheneb, osutab see abiootiliste kõrvaldamismehhanismide mõjule.
Dispense 47,5 μl to a labelled 0,5 ml thin walled PCR tube.
(Kui kasutatakse elavhõbekloriidi, tuleks tähelepanu pöörata lahustunud orgaanilise süsiniku analüüsi segamise või katalüsaatori mürgitamise võimalusele.)
Add 2,5 μl of the purified DNA to the appropriately labelled tube.
Kolbide arv
Repeat for all samples and the negative control.
Tüüpilises katses kasutatakse järgmisi kolbe:
Over lay with 2 drops of mineral oil.
kolvid 1 ja 2 sisaldavad uuritavat ainet (uuritavat suspensiooni);
Alternatively, use a thermal cycler with a heated lid.
kolvid 3 ja 4 sisaldavad üksnes merevett (tühikatse);
Close the lids.
kolb 5 sisaldab võrdlusainet (määramise õigsuse kontroll);
Samples were denatured in a Peltier PTC-225 thermal cycler at 94 ± 2 °C for 5 minutes followed by 39 cycles of 94 ± 2 °C for 1 minute, 55 ± 2 °C for 1 minute, 72 ± 2 °C for 1 minute, and a final extension of 72 ± 2 °C for 10 minutes.
kolb 6 sisaldab uuritavat kemikaali ja võrdlusainet (mürgisuse kontroll – soovi korral);
Preparation of the agarose gel (2 %):
kolb 7 sisaldab uuritavat kemikaali ja steriliseerivat vahendit (abiootiline steriilne kontroll – soovi korral).
Traditionally the PCR products are resolved on a 20 % agarose gel containing ethidium bromide.
Lahustunud orgaanilise süsiniku analüüs
Capillary based electrophoresis systems can also be used.
Katse ajal võetakse sobivate ajavahemike järel (1. liide) proovid lahustunud orgaanilise süsiniku analüüsiks.
Weigh 2 g agarose in 100 ml 1 × TAE-buffer
Alati võetakse proovid katse alguses (0-päev) ja 60. päeval.
Heat in a microwave (ca.
Kokku on lagunemise ajast sõltuvuse graafiku koostamiseks vaja katse ajal võtta vähemalt viis proovi.
2-3 min) to dissolve the agarose.
Proovivõtu kindlat ajagraafikut ei ole võimalik ette näha, kuna biolagunemine võib toimuda mitmesuguse kiirusega.
Add 2 drops of ethidium bromide final concentration 0,5 μg/ml
Igast proovist määratakse lahustunud orgaaniline süsinik kaks korda.
Transfer the hot solution into the gel casting equipment.
Proovi vajalik maht sõltub spetsiifilisest analüüsimeetodist, kasutatavast süsinikuanalüsaatorist ja meetodist, mis valitakse proovi töötlemiseks enne süsiniku määramist (punktid 25 ja 26, membraanfiltrimine või tsentrifuugimine).
Allow the gel to harden
Enne proovi võtmist tuleb katsekeskkonda hästi segada, et materjal, mis võib olla kleepunud kolvi seina külge, lahustuks või läheks üle suspensiooni.
Gel-Electrophoresis:
Kohe pärast proovi võtmist filtritakse proov läbi membraani või tsentrifuugitakse.
Transferred the agarose gel to the electrophoresis equipment and submerge in 1 × TAE-buffer
Vajaduse korral säilitatakse filtritud või tsentrifuugitud proove 2–4 °C juures kuni 48 tundi või allpool – 18 °C pikemat aega (kui on teada, et see ei mõjuta ainet, viiakse pH enne säilitamist 2 juurde).
Load 20 μl of each sample to a separate well, adding a molecular weight marker (100 bp DNA ladder, Promega) to a spare well.
Membraanfiltreid (0,2–0,45 μm) saab kasutada siis, kui on tõendatud, et need filtrimise ajal ei vabasta süsinikku ega adsorbeeri ainet; sobivad näiteks polükarbonaatmembraanfiltrid.
Electrophoresis is performed at 120 V for 30-45 minutes.
Mõned membraanfiltrid on hüdrofiilsuse suurendamiseks immutatud pindaktiivsete ainetega ja neist võib vabaneda olulises koguses lahustunud süsinikku.
Visualisation of the amplification products
Selliseid filtreid tuleb ette valmistada keetmisega deioniseeritud vees kolme järjestikuse ajavahemiku jooksul, iga kord üks tund.
If the ethidium bromide was incorporated in to the agarose gel as described above, the DNA products are visualised under a UV source.
Pärast keetmist hoitakse filtreid deioniseeritud vees.
Alternatively the agarose gel is stained by covering the gel in a dilute solution of ethidium bromide (0,5 μg/ml in water) for 30 minutes prior to visualisation.
Filtraadi esimesed 20 ml visatakse ära.
Appendix 11
Membraanfiltrimise asemel võib proove tsentrifuugida.
Guidance for artificial fertilisation procedure for the three-spined stickleback
Proovi tsentrifuugitakse kiirendusega 40000 m·s– 2 (umbes 4000 g) 15 minutit, eelistatavalt jahutusega tsentrifuugis.
The purpose of this section is to describe the procedures to obtain fertilised eggs from the three-spined stickleback in view of using them in the FSDT.
Orgaanilise süsiniku üldsisalduse (TOC) ja lahustunud orgaanilise süsiniku (DOC) lahutamine tsentrifuugimisega ei õnnestu väga väikese sisalduse juures, kuna sellega kas ei kõrvaldata kõiki baktereid või läheb osa bakterite rakuplasmas olevast süsinikust lahusesse.
Procedures
Kõrgematel kontsentratsioonidel (> 10 mg C/l) näib tsentrifuugimise viga olevat suhteliselt väike.
Obtaining sperm from the males
Proovide võtmise sagedus
A well-coloured male of the desired population is euthanised.
Kui analüüs tehakse kohe pärast proovi võtmist, võib järgmise proovi võtmise aja hinnata analüüsi tulemuse põhjal.
The testes are dissected from each side of the fish.
Kui proove säilitatakse, et teha analüüs hiljem (vt punkt 24), võetakse proove rohkem kui viis minimaalselt nõutavat proovi.
The testes are generally heavily pigmented, rod shaped structures that are readily apparent at the lateral midline of the body.
Tehke viimaste proovide analüüsid kõigepealt, siis võite järk-järgult valida analüüsi tegemiseks varasemaid proove niimoodi, et saada korralik biolagunemise kõver suhteliselt väikse arvu analüüside tegemisega.
Use either of the following methods:
Kui katse lõpuks ei ole lagunemist toimunud, ei ole rohkem proove vaja analüüsida, ja sellel juhul võib analüüsiks proovide „tagurpidine” valimine aidata analüüsikulusid oluliselt vähendada.
Using a pair of fine scissors, begin at the cloaca and make a 1-1,5 cm incision with a single snip angled at about 45 degrees.
Kui enne 60 päeva möödumist jõuab lagunemise kõver platoole, siis lõpetatakse katse.
Use a scalpel to make a small incision in the side of the fish slightly posterior to the pelvis and just ventral of the lateral plates.
Kui 60. päevaks on lagunemine selgelt alanud, kuid ei ole platoole jõudnud, tuleb katset pikendada.
The testes are removed using fine forceps and placed into a petri dish.
Analüüsi tulemused kantakse lisatud andmelehele (2. liide) ja nii uuritava aine kui ka võrdlusaine biolagundamise väärtused arvutatakse järgmise võrrandi abil:
Each testis is covered with 100 μl freshly made Hank's final solution.
lahustunud orgaanilise süsiniku lagunemine või konkreetse aine kadumine keskkonnast protsentides ajahetkeks t,
The testes are finely diced by using a razor blade or scalpel.
lahustunud orgaanilise süsiniku või konkreetse aine algkontsentratsioon katsekeskkonnas,
This will release sperm and give the Hank's solution a milky appearance.
lahustunud orgaanilise süsiniku või konkreetse aine algkontsentratsioon katsekeskkonnas ajahetkeks t,
The fluid containing sperm is added into a tube, while trying not to include any pieces of testes tissue when pipetting.
lahustunud orgaanilise süsiniku või konkreetse aine algkontsentratsioon katsekeskkonnas tühikatses,
800 μl of Hank's final solution are added into the tube and mixed well.
lahustunud orgaanilise süsiniku või konkreetse aine algkontsentratsioon katsekeskkonnas tühikatses ajahetkeks t.
If required, the male can be preserved by fixing in 100 % ethanol or other desired fixative.
Lagunemine väljendatakse lahustunud orgaanilise süsiniku kõrvaldamise protsendina (lõplik lagunemine) või konkreetse aine kõrvaldamise protsendina (primaarne lagunemine) ajahetkeks t.
This is particularly important if the study is assigning parental origin of offsprings.
Lahustunud orgaanilise süsiniku kontsentratsioonid arvutatakse täpsusega 0,1 mg/l ja Dt keskväärtused ümardatakse ülespoole lähima täisarvulise protsendini.
Although most of the stock solutions required can be made in advance, stock 5 and subsequently the final solution, should be made up fresh on the day of use.
Lagunemise käik esitatakse graafiliselt, nagu on näidatud joonisel punktis „Tulemuste nõuetekohasus ja tõlgendamine”.
Stock 1
Kui tulemusi on piisavalt, arvutatakse kõverast ootefaas (tL) ja aeg, mis kulub ootefaasi lõpust kuni 50 % biolagunemise saavutamiseni (t50).
8,00 g
Katseprotokollis tuleb esitada järgmine teave:
0,40 g
Uuritav aine:
Distilled water (DW)
füüsikaline olek ja vajaduse korral füüsikalis-keemilised omadused;
100 ml
identifitseerimisandmed.
Stock 2
proovivõtu koht ja selle kirjeldus;
HPO4 (anhydrous)
merevee saastatus (kolooniate arv) ja toitainete (nitraat, ammoonium, fosfaat, kui see on asjakohane) sisaldus;
0,358 g
proovi iseloomustavad andmed (proovivõtu kuupäev, sügavus, proovi välimus, temperatuur, soolsus, lahustunud orgaaniline süsinik (soovi korral), proovi võtmise ja katses kasutamise vaheline ajavahemik;
0,60 g
meetod, mida kasutati merevee vanandamiseks (kui vanandati);
Stock 3
meetod, mida kasutati merevee eeltöötluseks (filtrimine/sedimentatsioon);
0,72 g
lahustunud orgaanilise süsiniku määramise meetod;
50 ml
spetsiifilise analüüsi meetod (soovi korral);
Stock 4
meetod, mida kasutati merevee heterotroofide arvu määramiseks (plaadil loendamise meetod või muu meetod) (soovi korral);
MgSO4.7H2O
muud meetodid (soovi korral) merevee iseloomustamiseks (ATP mõõtmine jne).
1,23 g
analüüsiandmed andmelehel (2. liide);
Stock 5 (freshly prepared)
lagunemise käik esitatakse graafikuna diagrammil, mis näitab ootefaasi (tL), tõusu ja aega (alates ootefaasi lõpust), mis kulub 50 % lagunemise saavutamiseks (t50).
0,35 g
Ootefaasi pikkuse võib hinnata graafiliselt, nagu on näidatud joonisel punktis „Tulemuste nõuetekohasus ja tõlgendamine”;
10 ml
mugavam on võtta ootefaasiks aeg, mis kulub 10 % lagunemiseks;
If you already have some of the above salts but with different water content (i.e. 2H2O instead of anhydrous) you can still use it but first adjust weight based on molecular weight).
lagunemise protsent pärast 60 päeva, või katse lõpus.
For Hank's final solution combine in the following order:
Tulemuste arutelu.
stock 1
Tulemuste arutelu ja tõlgendamine
1,0 ml
Kui võrdlusainetega saadud tulemused on ebatüüpilised, tuleb katset korrata muu mereveeprooviga.
stock 2
Kuigi inhibeerimiskatsete tulemusi ei saa alati üheselt tõlgendada, kuna uuritav aine annab ka ise panuse lahustunud orgaanilise süsiniku kogusesse, on lahustunud orgaanilise süsiniku kõrvaldamise üldkiiruse oluline vähenemine kontrolliga võrreldes selge tunnus mürgise mõju kohta.
0,1 ml
Kuna katses kasutatakse suhteliselt suurt uuritava aine kontsentratsiooni võrreldes enamiku looduses esinevate kontsentratsioonidega (ja seega on uuritava aine ja muude süsinikuallikate suhtarv ebasoodne), peetakse seda meetodit eelkatseks, mis näitab, kas aine on kergesti biolagunduv või ei ole.
stock 3
Sellest tulenevalt ei tähenda madal katsetulemus tingimata seda, et aine ei ole merevees biolagunev; see näitab, et biolagundatavuse kindlakstegemiseks on vaja teha rohkem uuringuid.
8,6 ml
Järgmisel joonisel on esitatud lagunemiskatse teoreetiline kõver, mis näitab, kuidas saab hinnata ootefaasi („lag phase”) pikkust tL ja ajavahemikku t50, mis algab ajahetkest tL ja on vajalik 50 % lagunemise saavutamiseks.
stock 4
See meetod on kinnise pudeli katse (5) mereveevariant ning see on lõpuni viimistletud Euroopa Komisjoni ja Taani veekvaliteedi instituudi korraldatud laboritevahelise võrdluskatsega (3).
stock 5
Samuti kui loksutatava kolvi meetodi mereveevariandi puhul, ei tohiks käesoleva meetodi tulemusest teha järeldust kiire biolagunduvuse kohta; meetodiga saadakse konkreetset teavet biolagunduvuse kohta merekeskkonnas.
Mix well before use.
Eelnevalt kindlaksmääratud kogus uuritavat ainet, tavaliselt 2–10 mg ühe liitri kohta, lahustatakse katsekeskkonnas (võib kasutada ühte või mitut kontsentratsiooni).
Fertilisation
Lahust hoitakse täidetud suletud pudelis pimeduses konstantsel temperatuuril vannis või termokambris temperatuuril 15–20 (± 1) °C.
Large, gravid females are identified from the desired population;
Juhul, kui katse eesmärk on modelleerida keskkonnaolukordi, võib katse teha väljaspool seda normaalset temperatuurivahemikku, tingimusel et temperatuuri kontrollimine on vajalikul viisil seadistatud.
females are ready for squeezing only when you can see eggs protruding from the cloaca.
Lagunemist jälgitakse 28 päeva jooksul hapniku analüüside abil.
Ready females have the characteristic “head up” posture.
Laboritevaheline võrdluskatse näitas, et kui katset pikendati üle 28 päeva, ei saadud enamikul juhtudel mingit kasulikku teavet, kuna tekkisid rängad segavad asjaolud.
Gently run a finger or thumb down the side of the fish towards the tail to encourage the expulsion of an egg sack into a fresh petri dish.
Tühikatse bioloogilise hapnikutarbe (BHT) väärtused olid väga kõrged, arvatavasti mikroorganismide kasvu tõttu pudeli seintel, kuna pudeleid ei loksutata, samuti nitrifikatsiooni tõttu.
Repeat on the other side and return the fish to its tank.
Seega on soovituslik kestus 28 päeva, kuid kui tühikatse BHT väärtus jääb 30 protsendi juurde (punktid 15 ja 40), siis võiks katset pikendada.
The eggs can be spread out (forming a monolayer) using a fine paintbrush.
Empiiriline valem on vajalik teoreetilise hapnikutarbe (THT) arvutamiseks (vt 3. liide);