natgillin/translations-raw huggingface dataset:
It permits the direct assessment of the potential impact of a chemical on cell viability/cytotoxicity.
Paralleelselt tehakse katsed lahusti ja teada oleva pidurdaja või aktiveerija ühe kindla kontsentratsiooniga; need on negatiivne ja positiivne kontroll.
This is an important feature as it allows for the discrimination between effects that are due to cytotoxicity from those due to the direct interaction of chemicals with steroidogenic pathways, which is not possible in tissue explants systems that consist of multiple cell types of varying sensitivities and functionalities;
Kokkupuuteperioodi lõpus eemaldatakse igast süvendist katsekeskkond.
It does not require the use of animals;
Rakkude elujõulisust igas süvendis kontrollitakse kohe pärast katsekeskkonna eemaldamist.
The H295R cell line is commercially available.
Hormoonide keskmist kontsentratsiooni katsekeskkonnas saab mõõta eri meetoditega; võib kasutada müügil olevaid hormoonide mõõtmise komplekte ja/või kasutada instrumentaalseid meetodeid, näiteks vedelikkromatograafia-mass-spektromeetriat (LC-MS).
The principle limitations of the assay are as follows:
Andmed väljendatakse suhtelise muutusena (kordades), võrreldes muutust lahusti kontrolli ja vähima täheldatavat toimet avaldava kontsentratsiooniga (lowest-observed-effect-concentration, LOEC).
Its metabolic capability is unknown but probably quite limited;
Kui katse tulemus on negatiivne, teatatakse kõrgeim uuritud kontsentratsioon kui täheldatavat toimet mitteavaldav kontsentratsioon (no-observed-effect-concentration, NOEC).
therefore, chemicals that need to be metabolically activated will probably be missed in this assay.
Järeldus kemikaali võime kohta mõjutada steroidogeneesi peaks põhinema vähemalt kahel teineteisest sõltumatul katsel.
Being derived from adrenal tissue, the H295R possesses the enzymes capable of producing the gluco-, and mineral-corticoids as well as the sex hormones;
Esimese katse võib teha doosivahemiku otsimise katsena, edaspidi kohandatakse katsetes 2 ja 3 (kui need tehakse) kontsentratsioone, kui tekivad raskused lahustuvuse ja tsütotoksilisusega või kui kemikaali toime hakkab avalduma alles uuritud kontsentratsioonide vahemiku äärel.
therefore, effects on the production of gluco-, and mineral corticoids could influence the levels of T and E2 observed in the assay.
RAKUKULTUURI KASVATAMINE
It does not measure DHT and, therefore, would not be expected to detect chemicals that inhibit 5α-reductase in which case the Hershberger assay (16) can be used.
Rakuliin
The H295R assay will not detect chemicals that interfere with steroidogenesis by affecting the hypothalamic-pituitary-gonadal axis (HPG) axis as this can only be studied in intact animals.
NCI-H295R-rakke saab osta Ameerika rakukultuuride kollektsioonist (American Type Culture Collections, ATCC) materjali üleandmise lepingu (Material Transfer Agreement, MTA) [14] allakirjutamisel.
The purpose of the assay is the detection of chemicals that affect T and E2 production.
Sissejuhatus
T is also an intermediate in the pathway to produce E2.
Kuna rakkude võime toota E2 muutub rakkude vanuse või passaažide arvu suurenemisega (2), tuleks rakke enne nende kasutamist kasvatada teatavate eeskirjade järgi, ning üles tuleks märkida passaažide arv pärast rakkude ülessulatamist ja passaaži number, mille juures rakud külmutati ja pandi vedelasse lämmastikku.
The assay can detect chemicals that typically inhibit or induce the enzymes of the steroidogenesis pathway.
Esimene number on tegelik rakupassaaži number ja teine number näitab rakupassaaži, milles rakud külmutati ja pandi hoiule.
The assay is usually performed under standard cell culture conditions in 24-well culture plates.
Näiteks rakud, mis külmutati pärast viiendat passaaži ning sulatati ja seejärel eraldati aluselt kolm korda (4 passaaži, kui loeme värskelt sulatatud rakud passaažiks 1) pärast seda, kui neid oli jälle kasvatatud, saavad märgise 4.5.
Alternatively, other plate sizes can be used for conducting the assay;
Nummerdamisskeemi kohta on esitatud näide valideerimisaruande I liites (4).
however, seeding and experimental conditions should be adjusted accordingly to maintain adherence to the performance criteria.
Säilituskeskkonda kasutatakse täiendatud keskkonna ja külmutamiskeskkonna alusena.
After an acclimation period of 24 h in multi-well plates, cells are exposed for 48 h to seven concentrations of the test chemical in at least triplicate.
Täiendatud keskkond on rakkude kasvatamise vajalik komponent.
Solvent and a known inhibitor and inducer of hormone production are run at a fixed concentration as negative and positive controls.
Külmutamiskeskkond on spetsiaalselt välja töötatud selleks, et rakke saaks kahjustamatult külmutada pikaajaliseks säilitamiseks.
At the end of the exposure period, the medium is removed from each well.
Enne kasutamist tuleks Nu-seerumit (vm sarnaste omadustega seerumit, mille kohta on näidatud, et see vastab katse tegemise ja kvaliteedikontrolli nõuetele), mis on lisatud keskkonna osa, analüüsida, et teha kindlaks T ja E2 taustkontsentratsioon.
Cell viability in each well is analysed immediately after removal of medium.
Nende lahuste valmistamist on kirjeldatud valideerimisaruande II liites (4).
Concentrations of hormones in the medium can be measured using a variety of methods including commercially available hormone measurement kits and/or instrumental techniques such as liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS).
Pärast H295R-rakkude kultuuri alustamist ATCC-originaalpartiist tuleb rakke kasvatada viie passaaži jooksul (st rakke eraldatakse aluselt 4 korda).
Data are expressed as fold change relative to the solvent control and the Lowest-Observed-Effect-Concentration (LOEC).
Viienda passaaži rakud külmutatakse seejärel säilitamiseks vedelas lämmastikus.
If the assay is negative, the highest concentration tested is reported as the No-Observed-Effect-Concentration (NOEC).
Enne rakkude külmutamist kasvatatakse eelmise, neljanda passaaži rakke kvaliteedikontrolli plaadil (vt punktid 36 ja 37), millega kontrollitakse, et hormoonide baasproduktsioon ja reageering positiivse kontrolli kemikaalidele vastaksid katse kvaliteedikontrolli kriteeriumidele, mis on esitatud tabelis 5.
Conclusions regarding the ability of a chemical to affect steroidogenesis should be based on at least two independent test runs.
H295R-rakke tuleb kasvatada, külmutada ja hoida vedelas lämmastikus selle tagamiseks, et alati on kättesaadavad vajaliku passaaži/vajalikus vanuses rakud kasvatamiseks ja kasutamiseks.
The first test run may function as a range finding run with subsequent adjustment of concentrations for runs 2 and 3, if applicable, if solubility or cytotoxicity problems are encountered or the activity of the chemical seems to be at the end of the range of concentrations tested.
H295R-katse puhul lubatav passaažide maksimaalne arv pärast uue [15] või külmutatud [16] rakupartii kultuuri võtmist ei tohiks olla üle 10.
CULTURE PROCEDURE
Näiteks sobivad rakukultuuride passaažid, mis on võetud 5. passaažis külmutatud partiist, on 4.5 kuni 10.5.
Cell Line
Külmutatud partiist alustatud rakukultuuri puhul tuleb järgida punktis 19 kirjeldatud korda.
The NCI-H295R cells are commercially available from the American Type Culture Collections (ATCC) upon signing a Material Transfer Agreement (MTA) [14].
Neid rakke tuleks kasvatada vähemalt neljas (4) täiendavas passaažis (passaaž 4.5), enne kui neid kasutatakse katses.Rakkude võtmine külmutatud varukultuurist
Introduction
Rakkude külmutatud varukultuurist võtmise korda tuleb kasutada siis, kui uus partii rakke võetakse välja vedela lämmastikuga hoidlast kasvatamiseks ja katses kasutamiseks.
Due to changes in the E2 producing capacity of the cells with increasing age/passages (2), cells should be cultured following a specific protocol before they are used and the number of passages since the cells were defrosted as well as the passage number at which the cells were frozen and placed in liquid nitrogen storage should be noted.
Toimimise üksikasjad on esitatud valideerimisuuringu III liites (4).
The first number indicates the actual cell passage number and the second number describes the passage number at which the cells were frozen and placed in storage.
Rakud eemaldatakse vedela lämmastikuga hoidlast, sulatatakse kiiresti, pannakse tsentrifuugitopsis olevasse täiendatud keskkonda, tsentrifuugitakse toatemperatuuril, suspendeeritakse uuesti täiendatud keskkonnas ja viiakse üle kultuurikolbi.
For example, cells that were frozen after passage five and defrosted and then were split three times (4 passages counting the freshly thawed cells as passage 1) after they were cultured again would be labelled passage 4.5.
Keskkonda tuleks järgmisel päeval vahetada.
An example of a numbering scheme is illustrated in Appendix I to the validation report (4).
H295R-rakke kasvatatakse inkubaatoris 37 °C juures õhuatmosfääris, mis sisaldab 5 % CO2, ja keskkonda uuendatakse 2–3 korda nädalas.
Stock medium is used as the base for the supplemented and freezing mediums.
Kui rakukultuur saavutab ligikaudu 85–90 % laatumise (konfluentsuse), tuleb kultuur eraldada aluselt.
Supplemented medium is a necessary component for culturing cells.
Rakkude aluselt eraldamine on vajalik nende tervise ja kasvu tagamiseks, et need oleksid biokatse tegemiseks vajalikus seisundis.
Freezing medium is specifically designed to allow for impact-free freezing of cells for long-term storage.
Rakke loputatakse kolm korda fosfaatpuhvrit sisaldava soolalahusega (mis ei sisalda Ca2+ ega Mg2+) ja vabastatakse rakud kultuurikolvist, milleks lisatakse sobivat ensüümi, mis aitab rakkudel eralduda, nt trüpsiiniga fosfaatpuhvrit sisaldava soolalahusega (mis ei sisalda Ca2+ ega Mg2+).
Prior to use, Nu-serum (or a comparable serum of equal properties that has been demonstrated to produce data that meets the test performance and Quality Control (QC) requirements), which is a constituent of supplemented media, should be analysed for background T and E2 concentrations.
Kohe pärast rakkude eraldumist kultuurikolvist tuleks ensüümi toime peatada, milleks lisatakse kolm korda suurem kogus täiendatud keskkonda, kui selle lahuse maht, mida kasutati ensüümiga töötlemisel.
The preparation of these solutions is described in Appendix II to the validation report (4).
Rakud viiakse üle tsentrifuugitopsi, tsentrifuugitakse toatemperatuuril, supernatant eemaldatakse ja tsentrifuugitud rakukogum suspendeeritakse uuesti täiendatud keskkonnas.
After initiation of an H295R cell culture from an original ATCC batch, cells should be grown for five passages (i.e.the cells are split 4 times).
Sobiv kogus rakkudega lahust pannakse uude kultuurikolbi.
Passage five cells are then frozen in liquid nitrogen for storage.
Rakkudega lahuse kogus tuleks reguleerida selliseks, et rakud laatuvad 5–7 päevaga.
Prior to freezing the cells, a sample of the previous passage four cells is run in a QC plate (See paragraph 36 and 37) to verify whether the basal production of hormones and the response to positive control chemicals meet the assay quality control criteria as defined in Table 5.
Soovitatav alamkultuuri suhtarv on 1: 3 kuni 1:
H295R cells need to be cultured, frozen and stored in liquid nitrogen to make sure that there are always cells of the appropriate passage/age available for culture and use.
Tass tuleks hoolikalt märgistada.
The maximum number of passages after taking a new [15] or frozen [16] batch of cells into culture that is acceptable for use in the H295R assay should not exceed 10.
Rakud on nüüd valmis katses kasutamiseks ja liigsed rakud tuleks külmutada vedelas lämmastikus, nagu on kirjeldatud punktis 20.
For example, acceptable passages for cultures of cells from a batch frozen at passage 5 would be 4.5 through 10.5.
H295R-rakkude külmutamine (rakkude ettevalmistamine vedelas lämmastikus säilitamiseks)
For cells started from these frozen batches, the procedure described in paragraph 19 should be followed.
H295R-rakkude ettevalmistamisel külmutamiseks tuleks korrata eespool kirjeldatud rakkude eraldamisel kasutatud korda kuni tsentrifuugitopsi põhja kogutud rakkude uuesti suspendeerimiseni.
These cells should be cultured for at least four (4) additional passages (passage 4.5) prior to their use in testing.Starting Cells from the Frozen Stock
Seekord suspendeeritakse tsentrifuugitud rakkudekogum külmutamiskeskkonnas.
The procedure for starting the cells from frozen stock is to be used when a new batch of cells is removed from liquid nitrogen storage for the purpose of culture and testing.
Rakkudega lahus viiakse üle krüoviaali, märgistatakse, nagu vaja, ja külmutatakse 24 tundi – 80 °C juures, mille järel viaal pannakse hoiule vedelasse lämmastikku.
Details for this procedure are set forth in Appendix III to the validation report (4).
Rakkude kandmine plaadile ja eelinkubeerimine katse tegemiseks
Cells are removed from liquid nitrogen storage, thawed rapidly, placed in supplemented medium in a centrifuge tube, centrifuged at room temperature, re-suspended in supplemented medium, and transferred to a culture flask.
Katse tegemiseks vajalike punktis 19 esitatud juhendite kohaselt ettevalmistatud 24 süvendiga plaatide arv sõltub uuritavate kemikaalide arvust ja rakkude laatumisest kultuuritassidel.
The medium should be changed the following day.
Üldreeglina saab ühest kultuurikolvist (75 cm2), milles laatumismäär on 80–90 %, piisava hulga rakke 1,5 (24 süvendiga) plaadi jaoks, kui vajalik rakkude tihedus on 200000 kuni 300000 rakku keskkonna ml-s, mis tekitab umbes 50–60 % laatumise süvendites 24 tunniga (joonis 2).
The H295R cells are cultivated in an incubator at 37 °C with 5 % CO2 in air atmosphere and the medium is renewed 2-3 times per week.
See on tavaliselt sobivaim rakkude tihedus katses hormoonide sünteesiks.
When the cells are approximately 85-90 % confluent, they should be split.
Suurema tiheduse juures muutub T ja ka E2 sünteesi ajaline käik.
Splitting of the cells is necessary to ensure the health and growth of the cells and to maintain cells for performing bioassays.
Enne katse esmakordset tegemist soovitatakse katsetada mitut külvamistihedust vahemikus 200000 kuni 300000 rakku ml-s ja edasisteks katseteks tuleks valida selline tihedus, mis annab 50–60 % laatumise süvendites 24 tunniga.
The cells are rinsed three times with phosphate-buffered saline (PBS, without Ca2+ Mg2+.) and freed from the culture flask by the addition of an appropriate detachment enzyme, e.g. trypsin, in PBS (without Ca2+ Mg2+).
H295R-rakkude mikrofoto külvamistihedusel 50 % 24 süvendiga plaadil pärast 24 tundi: A — süvendi äärel;
Immediately after the cells detach from the culture flask, the enzyme action should be stopped with the addition of supplemented medium at a ratio of 3× the volume used for the enzyme treatment.
B — süvendi keskel P-põlvkonna loomade lahkamine
Cells are placed into a centrifuge tube, centrifuged at room temperature, the supernatant is removed and the pellet of cells is re-suspended in supplemented medium.
Paarituseelne
The appropriate amount of cell solution is placed in the new culture flask.
Paaritusjärgne
The amount of cell solution should be adjusted so that the cells are confluent within 5-7 days.
2 nädalat
The recommended sub-cultivation ratio is 1:3 to 1:4.
6 nädalat
The plate should be carefully labelled.
Tiinus
The cells are now ready to be used in the assay and excess cells should be frozen in liquid nitrogen as described in paragraph 20.
Imetamine
Freezing H295R Cells (preparing cells for liquid nitrogen storage)
Emakasisene areng
To prepare H295R cells for freezing, the procedure described above for splitting cells should be followed until the step for re-suspending the pellet of cells in the bottom of the centrifuge tube.
Võõrutuseelne
Here, the pellet of cells is re-suspended in freezing medium.
Võõrutusjärgne
The solution is transferred to a cryogenic vial, labelled appropriately, and frozen at – 80 °C for 24 hours after which the cryogenic vial is transferred to liquid nitrogen for storage.
Vanemate põlvkond
Plating and Pre-incubation of Cells for Testing
Kohort
The number of 24-well plates, prepared as outlined in paragraph 19, that will be needed depends on the number of chemicals to be tested and the confluency of the cells in the culture dishes.
Otstarve
As a general rule, one culture flask (75 cm2) of 80-90 % confluent cells will supply sufficient cells for one to 1,5 (24-well) plates at a target density of 200000 to 300000 cells per ml of medium resulting in approximately 50-60 % confluency in the wells at 24 hours (Figure 2).
Loomi/kohort
This is typically the optimal cell density for hormone production in the assay.
Ligikaudne vanus lahkamisel (nädalad)
At higher densities, T as well as E2 production patterns are altered.
Eesmärk on 20 pesakonda/rühm
Before conducting the assay the first time, it is recommended that different seeding densities between 200000 and 300000 cells per ml be tested, and the density resulting in 50-60 % confluency in the well at 24 hours be selected for further experiments.
Ülejääk
Photomicrograph of H295R cells at a seeding density of 50 % in a 24 well culture plate at 24 hours taken at the edge (A) and centre (B) of a well
Reproduktiivtoks
Necropsy P animals
Neurotoksilisus
Pre-mating
Immuuntoksilisus
Post-mating
Varuloomad
2 weeks
20 M + 20 N
6 weeks
10 M + 10 N @
Pregnancy
14 või 20–25, kui algatatakse
Lactation
@ üks pesakonna kohta ja esindab võimaluse korral kokku 20 pesakonda
In-utero development
Keskkond eemaldatakse kultuurikolvist pipetiga ja rakke loputatakse 3 korda steriilse fosfaatpuhvrit sisaldava soolalahusega (mis ei sisalda Ca2+ ega Mg2+).
Pre-weaning
Lisatakse ensüümi lahust samas fosfaatpuhvrit sisaldavas soolalahuses, et eraldada rakud kultuurikolvist.
Post-weaning
Rakkude eraldumiseks sobiva aja järel tuleks ensüümi toime peatada, milleks lisatakse kolm korda suurem kogus täiendatud keskkonda, kui selle lahuse maht, mida kasutati ensüümiga töötlemisel.
Parental generation
Rakud viiakse üle tsentrifuugitopsi, tsentrifuugitakse toatemperatuuril, supernatant eemaldatakse ja tsentrifuugitud rakukogum suspendeeritakse uuesti täiendatud keskkonnas.
Cohort
Arvutatakse rakkude tihedus, kasutades näiteks hematotsütomeetrit või rakuloendajat.
Designation
Rakkudega lahust tuleks lahjendada kuni vajaliku külvamistiheduseni ja segada hoolikalt, et tagada rakkude ühtlane tihedus.
Animals/cohort
Rakud tuleks kanda plaadile, 1 ml rakkudega lahust igasse süvendisse, ning plaadid ja süvendid märgistatakse.
Approximate age at necropsy (weeks)
Rakkudega plaate inkubeeritakse 24 tundi 37 °C juures õhuatmosfääris, mis sisaldab 5 % CO2, et lasta rakkudel kinnituda süvenditele.
Target is 20 litters per group
KVALITEEDIKONTROLLI NÕUDED
Surplus
On väga oluline, et süvenditesse pandaks täpne maht lahuseid ja dooside lisamisel proove, kuna need mahud määravad kontsentratsioonid, mida kasutatakse katsetulemuste arvutamisel.
Reproductive
Enne rakukultuuri loomist ja edasist katsete tegemist peaks iga labor näitama, et tema hormoonide määramise süsteem on piisavalt tundlik (punktid 29–31).
Neurotoxicity
Kui hormoonide määramiseks kasutatakse antikehapõhiseid katseid, tuleks enne katse alustamist kontrollida, kas uuritavad kemikaalid võivad segada T ja E2 mõõtmist vastavalt punktis 32 kirjeldatule.
Immunotoxicity
Katse puhul soovitatakse lahustina kasutada dimetüülsulfoksiidi (DMSO).
Spares
Kui kasutatakse muud lahustit, tuleks määrata:
20 M + 20 F
tsütotoksilisus funktsioonina lahusti kontsentratsioonist.
10 M + 10 F @
Soovitatakse, et lahusti suurim lubatav kontsentratsioon ei oleks kõrgem kui solvendi madalaima tsütotoksilise kontsentratsiooni 10-kordne lahjendus.
14 or 20-25 if triggered
Enne katse esmakordset tegemist peaks labor läbi tegema kvalifikatsioonikatse, mis näitab, et labor suudab hooldada rakukultuuri ning saavutada rakukultuuri ja eksperimenditingimused, mis on vajalikud kemikaali katsetamiseks, nagu on kirjeldatud punktides 33–35.
The medium is pipetted off the culture flask, and the cells are rinsed 3 times with sterile PBS (without Ca2+Mg2+).
Hormoonide määramise süsteemi toimimine
An enzyme solution (in PBS) is added to detach the cells from the culture flask.
Meetodi tundlikkus, mõõtetäpsus ja kordustäpsus ning ristreaktsioonid proovi maatriksiga
Following an appropriate time for detachment of the cells, the enzyme action should be stopped with the addition of supplemented medium at a ratio of 3 × the volume used for the enzyme treatment.
Iga labor võib ise valida hormoonide mõõtmise süsteemi, mida ta kasutab H295R poolt sünteesitud T ja E2 määramiseks, tingimusel, et see vastab tulemuslikkuse kriteeriumidele, sealjuures mõõtmispiirile (Limit of Quantification, LOQ).
Cells are placed into a centrifuge tube, centrifuged at room temperature, the supernatant is removed, and the pellet of cells is re-suspended in supplemented medium.
Nominaalselt on need 100 pg/ml T puhul ja 10 pg/ml E2 puhul; väärtused põhinevad valideerimisuuringus leitud normaalsetel hormoonitaseme baasväärtustel.
The cell density is calculated using e.g. a haemocytometer or cell counter.
Kuid ka kõrgem või madalam tase võib olla sobiv; see oleneb hormoonide baastasemest, mis on määratud katset tegevas laboris.
The cell solution should be diluted to the desired plating density and thoroughly mixed to assure homogenous cell density.
Enne kvaliteedikontrolli plaadi ja uuritava kemikaali katsete käivitamist peaks labor tõendama, et kasutatava hormoonide määramise katsega saab hormoonide kontsentratsiooni mõõta täiendatud keskkonnas piisava mõõtmis- ja kordustäpsusega, et täita tabelites 1 ja 5 esitatud kvaliteedikontrolli kriteeriumid; selleks analüüsitakse täiendatud keskkonda, mida on tembitud hormooni sisestandardiga.
The cells should be plated with 1 ml of the cell solution/well and the plates and wells labelled.
Täiendatud keskkonda peaks olema tembitud kummagi hormooniga vähemalt kolmel kontsentratsioonil (nt 100, 500 ja 2500 pg/ml T-d; 10, 50 ja 250 pg/ml E2; T ja E2-ga tempimise kõige madalama määrana võib kasutada ka kõige madalamaid võimalikke kontsentratsioone, arvestades valitud hormoonide määramise süsteemi avastamispiiri) ja need tuleks määrata.
The seeded plates are incubated at 37 °C under 5 % CO2 in air atmosphere for 24 hours to allow the cells to attach to the wells.
Ekstraheerimata proovides mõõdetud hormoonide kontsentratsioonid tohivad nominaalsest kontsentratsioonist erineda kuni 30 % ja sama proovi paralleelmõõtmiste erinevus ei tohiks olla üle 25 % (vt ka tabel 8, täiendavad kvaliteedikontrolli kriteeriumid).
QUALITY CONTROL REQUIREMENTS
Kui need kvaliteedikontrolli kriteeriumid on täidetud, siis eeldatakse, et valitud hormoonide määramise süsteem on piisavalt täpne, korratav ja ei esine ristreaktsioone keskkonnaga (proovi maatriks), mis võiksid oluliselt mõjutada katse tulemust.
It is critical that exact volumes of solutions and samples are delivered into the wells during dosing because these volumes determine the concentrations used in the calculations of assay results.
Sellisel juhul ei ole enne hormoonide mõõtmist vaja proove ekstraheerida.
Prior to the initiation of cell culture and any subsequent testing, each laboratory should demonstrate the sensitivity of its hormone measurement system (paragraphs 29-31).
Kui tabelites 1 ja 8 esitatud kvaliteedikontrolli kriteeriumid ei ole täidetud, võib olla tegemist olulise maatriksiefektiga; sel juhul tuleb teha katse tembitud keskkonnaga ja ekstraheerida hormoonid.
If antibody-based hormone measurement assays are to be used, the chemicals to be tested should be analysed for their potential to interfere with the measurement system used to quantify T and E2 as outlined in paragraph 32 prior to initiating testing.
Ekstraheerimise käigu kohta on esitatud näide valideerimisaruande II liites (4).
DMSO is the recommended solvent for the assay.
Hormoonide kontsentratsiooni mõõtmisel ekstraheeritud proovidest tuleks teha kolm paralleelkatset [17].
If an alternative solvent is utilised, the following should be determined:
Kui on võimalik näidata, et pärast ekstraheerimist keskkonna komponendid ei sega hormoonide määramise meetodit, nagu on määratletud kvaliteedikontrolli kriteeriumidega, tuleks kõik edaspidised katsed teha ekstraheeritud proovidega.