natgillin/translations-raw huggingface dataset:
When the presence of infection with WSD is required to be confirmed or the suspicion of such infection is required be ruled out in accordance with Article 28 of Directive 2006/88/EC, the following inspection, sampling and testing procedure shall be complied with:
Proovid kogutakse ning neid säilitatakse ja analüüsitakse igal aastal kahe ühekuise analüüsiperioodi vältel (kevadel ja sügisel) või praktilistest kaalutlustest tuleneval muul sobival ajal.
the official investigation shall include at least one health inspection and one sampling of 10 crustaceans when clinical or post-mortem signs consistent with infection with WSD are observed or 150 crustaceans when clinical or post-mortem signs are not observed.
Kalade maksimaalne arv koondproovis: 5.
The samples shall be tested using the diagnostic method set out in point II.2 (two-step PCR);
Proovid kogutakse ja neid analüüsitakse igal aastal kahe ühekuise analüüsiperioodi vältel (kevadel ja sügisel) või praktilistest kaalutlustest tuleneval muul sobival ajal.
the presence of WSD shall be considered as confirmed when two-step PCR followed by sequencing, following the detailed methods and procedures set out in this Part 6 of Annex II, is positive for WSSV and, when pathognomonic signs of WSD are present in the selected hosts.
II LISA
The suspicion of WSD may be ruled out, if those tests reveal no further evidence of the presence of WSD.
ÜKSIKASJALIKUD DIAGNOSTIKAMEETODID JA NENDE KOHALDAMISE KORD
Table 6 A
Käesolevas lisas nähakse ette üksikasjalik kord selliste diagnostikameetodite kohaldamiseks, mida tuleb kasutada käesoleva rakendusotsuse I lisas sätestatud likvideerimis- ja seireprogrammide raames tehtavates laboriuuringutes, et direktiivi 2006/88/EÜ artikli 57 punkti b kohaselt kinnitada nimetatud direktiivi IV lisa II osas loetletud järgmiste mitteeksootiliste taudide (edaspidi „loetletud taudid”) esinemise kahtlust või sellist kahtlust ümber lükata:
Surveillance scheme for Member States, zones and compartments for the 2-year control period which precedes the achievement of WSD disease-free status as referred to in point I.2.1
nakkuslik vereloomenekroos (IHN)
Number of crustaceans in the sample
transpordisööde rakukultuurisööde, mis sisaldab 10 % vasikaseerumit ning 200 RÜ penitsilliini, 200 μg streptomütsiini ja 200 μg kanamütsiini milliliitri kohta või muid tõendatud tõhususega antibiootikume.
Table 6 B
1.
Surveillance schemes for Member States, zones or compartments to maintain WSD disease-free status as referred to in point I.3
OSA IHNi JA VHSi SEIREKS JA NENDE ESINEMISE KINNITAMISEKS KASUTATAVAD ÜKSIKASJALIKUD DIAGNOSTIKAMEETODID JA NENDE KOHALDAMISE KORD
The samples must be collected no sooner than 3 weeks after the transfer of the fish from fresh to saltwater.
Proovivõtmisel ja laborianalüüsi tegemisel vastavalt I lisa 1. osa punktides II.1 ja II.2 sätestatud diagnostikameetoditele järgitakse nimetatud lisa 1. osa I jao kohaseks IHNi või VHSi suhtes taudivaba staatuse saamiseks või säilitamiseks järgmisi punktides I.1–I.6 sätestatud üksikasjalikke diagnostikameetodeid ja nende kohaldamise korda.
Ovarian or seminal fluid of broodstock shall be collected at the time of maturation, in connection with stripping.
Kaladelt võetud proovide ettevalmistamine ja proovide saatmine
Samples must be taken from the number of fish that will ensure the detection of VHSV or IHNV with a 95 % confidence if the design prevalence is 5 %.
Koed viroloogiliseks analüüsiks rakukultuuris
Samples must be taken from the number of fish that will ensure detection of VHSV or IHNV with a 95 % confidence if the design prevalence is 10 %.
Enne laborisse saatmist või edastamist eemaldatakse steriilsete lahkamisriistade abil kaladelt uuritavate elundite tükid ja pannakse need transpordisöödet sisaldavasse steriilsesse plastkatsutisse.
Samples must be taken from the number of fish that will ensure the detection of VHSV or IHNV with a 95 % confidence if the design prevalence is 10 %.
Rakukultuuris tehtavaks viroloogiliseks analüüsiks ja RT-qPCRi jaoks võetava materjali kogus sõltub kala suurusest.
There shall be minimum one sample for every health inspection.
Kogutavad koed on vastsete puhul (kehapikkus < 4 cm) terve vastne, 4–6 cm pikkuste kalade puhul sisikond koos neerudega ning suuremate kalade puhul neerud, põrn, süda ja/või peaaju ja kudemisajal sugukalade ovariaalvedelik.
Samples must be taken from the number of fish that will ensure the detection of KHV with a 95 % confidence if the design prevalence is 5 %.
Ühte steriilsesse katsutisse, mis sisaldab vähemalt 4 ml transpordisöödet, võib koguda kuni 10 kala ovariaal- või seemnevedeliku või elunditükid, mis moodustavad ühe koondproovi.
Samples must be collected and examined during two 1 month test periods per year (namely spring and autumn) or when appropriate in accordance with practical considerations.
Proovid pöördtranskriptsiooniga polümeraasi ahelreaktsiooni (RT-PCR või RT-qPCR) abil analüüsimiseks
ANNEX II
Kaladelt võetakse proovid steriilse instrumendiga vastavalt punktis I.1.1 kirjeldatud korrale ja pannakse transpordisöödet sisaldavasse steriilsesse plastkatsutisse.
DETAILED DIAGNOSTIC METHODS AND PROCEDURES
Ühte katsutisse võib koguda 10 kalalt võetud koeproovid, mis moodustavad ühe koondproovi.
This Annex sets out the detailed procedures for the diagnostic methods to be used for the laboratory examination in the eradication and surveillance programmes set out in Annex I to this Decision, and in order to confirm or rule out the suspected presence of the following non-exotic diseases listed in Part II to Annex IV to Directive 2006/88/EC (‘the listed diseases’) in accordance with Article 57 (b) to that Directive:
Kui inokulumi maht on väike, võib siiski koondada vaid kuni viielt kalalt võetud koeproovid.
Infectious hematopoietic necrosis (IHN)
Teise võimalusena võib proovid koguda RNAd stabiliseerivasse lahusesse nii, et koematerjali sisaldus lahuses oleks tootja soovituse kohaselt 0,2 g/ml; sel juhul käideldakse iga kala koematerjali eraldi ja eri kalade kudesid ei koondata, kuna eraldamiseks kasutatava materjali kogus on väike.
For the purpose of this Annex, ‘transport medium’ means a cell culture medium with 10 % calf serum and with 200 iu penicillin, 200 μg streptomycin, and 200 μg kanamycin per millilitre or with other antibiotics of proven efficacy.
Laborisse võib saata ka terveid kalu.
PART 1
Kaladelt võetud proovide saatmine
DETAILED DIAGNOSTIC METHODS AND PROCEDURES FOR THE SURVEILLANCE AND CONFIRMATION OF IHN AND VHS
Transpordisöötmega katsutid, mis sisaldavad rakukultuuris või RT-PCRi või RT-qPCRi abil analüüsimiseks ette nähtud kalakudesid, pannakse soojusisolatsiooniga konteinerisse, näiteks paksuseinalisse polüstüreenkasti koos piisava koguse jääga või muu sarnase jahutava toimega jahutusainega, et tagada laborisse transportimise ajal proovi püsimine jahutatuna.
I. Diagnostic methods and procedures for the surveillance of VHS and IHN
Samas on vaja ära hoida proovi külmumist.
When sampling and laboratory examination for the purpose of obtaining or maintaining disease-free health status with regard to IHN or VHS as set out in Section I of Part 1 of Annex I are carried out, using the diagnostic methods set out in points II.1 and II.2 of Part 1 of that Annex, the detailed diagnostic methods and procedures set out in following points I.1 to I.6 shall apply.
Proovi temperatuur ei tohi transpordi ajal hetkekski tõusta üle 10 °C ning saadetise vastuvõtmise ajal peab transpordikastis veel jääd olema või peab vähemalt üks jahutusplokk olema vähemalt osaliselt külmunud.
Preparation and shipment of samples from fish
Laborisse võib saata terveid kalu, kui transpordi ajal on võimalik järgida esimeses lõigus osutatud temperatuurinõudeid.
Tissues for virological examination on cell culture
Terved kalad mähitakse imavasse paberisse ning need saadetakse teele plastkotis.
Before shipment or transfer to the laboratory, pieces of the organs to be examined shall be removed from the fish with sterile dissection tools and transferred to sterile plastic tubes containing transport medium.
Võib saata ka elusaid kalu.
The quantity of fish material suitable for virological examination on cell culture and by RT-qPCR is dependent on fish size.
Täiendava diagnostilise materjali kogumine
Thus, whole alevin (body length < 4 cm), viscera including kidney (4 cm < body length < 6 cm) or, for larger size fish, kidney, spleen, heart and/or encephalon, and ovarian fluid from brood fish at the time of spawning shall be the tissues to be sampled.
Asjaomase diagnostikalabori heakskiidul võib täiendavateks uuringuteks koguda ja ette valmistada ka muid kalakudesid.
Ovarian or seminal fluid or organ pieces from a maximum of 10 fish may be collected in one sterile tube containing at least 4 ml transport medium and represent one pooled sample.
Proovide ettevalmistamine rakukultuuris analüüsimiseks ja RT-qPCRi jaoks
The tissue in each sample shall weigh a minimum of 0,5 gram (g).
Külmutamine erandjuhul
The virological examination on cell culture shall be started as soon as possible and no later than 48 hours after the collection of the samples.
Praktiliste raskuste korral, mis teevad proovi käitlemise kalakudede kogumisele järgneva 48 tunni jooksul võimatuks, võib olla vastuvõetav külmutada koeproov transpordisöötmes – 20 °C juures või madalamal temperatuuril ning teha viroloogiline analüüs 14 päeva jooksul.
In exceptional cases, the virological examination may be started at the latest within 72 hours after the collection of the material, provided that the material to be examined is protected by a transport medium and that the temperature requirements during transportation can be fulfilled.
Kalakude külmutatakse ja sulatatakse enne analüüsimist vaid korra.
Samples for reversed transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR or RT-qPCR) analysis
Kalade koeproovide iga külmutamine registreeritakse koos sellekohase üksikasjaliku põhjendusega.
Samples shall be taken from the fish in accordance with the procedure described in point I.1.1 using a sterile instrument and transferred to a sterile plastic tube containing transport medium.
Elundite homogeniseerimine
Tissue from 10 fish may be collected in one tube and shall represent one pooled sample.
Katsutis olev kude homogeniseeritakse laboris täielikult stomahheri, segisti või uhmri, nuia ja steriilse liivaga ning suspendeeritakse seejärel algses transpordisöötmes.
However, in case the amount of inoculum is small, tissue from up to five fish may be used.
Kui proov koosneb alla 4 cm pikkustest tervetest kaladest, tükeldatakse need steriilsete kääride või skalpelliga pärast seda, kui pärakust tahapoole jääv keha osa on eemaldatud.
Alternatively, samples may be pooled in RNA stabilization reagents, such as 0,2 g tissue/ml reagent according to the recommendation from the manufacturers, although each fish shall be processed individually and shall not be pooled in the samples because of the small amount of material to be used for extraction.
Kui proov koosneb tervetest kaladest pikkusega 4–6 cm, kogutakse sisikond koos neerudega.
Whole fish may also be sent to the laboratory.
Kui proov koosneb üle 6 cm pikkustest tervetest kaladest, kogutakse koematerjal punktis I.1 kirjeldatud viisil.
Shipment of samples for fish
Koematerjal tükeldatakse steriilsete kääride või skalpelliga, homogeniseeritakse käesoleva punkti esimeses lõigus kirjeldatud viisil ja suspendeeritakse transpordisöötmes.
Tubes containing fish tissues in transport medium for cell cultivation or RT-PCR/RT-qPCR analysis shall be placed in insulated containers, such as thick-walled polystyrene boxes, together with sufficient ice or an alternative cooling medium with the similar cooling effect to ensure chilling of the samples during transportation to the laboratory.
Koematerjali ja transpordisöötme vahekorda reguleeritakse laboris nii, et nende lõplik suhe oleks 1:10.
However, freezing of the samples shall be avoided.
Homogenaadi tsentrifuugimine
The temperature of a sample during transit must never exceed 10 °C and ice must still be present in the transport box at receipt or one or more freeze blocks must still be partly or completely frozen.
Homogenaati tsentrifuugitakse 15 minutit jahutatud tsentrifuugis temperatuuril 2–5 °C kiirendusel 2000–4000 g, kogutakse supernatant ja töödeldakse seda vajaduse korral antibiootikumidega neli tundi temperatuuril 15 °C või öö läbi temperatuuril 4–8 °C.
Whole fish may be sent to the laboratory if the temperature requirements referred to in the first paragraph during transportation can be fulfilled.
Kui proovi transporditakse transpordisöötmes, võib supernatandi töötlemise antibiootikumidega ära jätta.
Whole fish shall be wrapped up in paper with absorptive capacity and shall finally be shipped in a plastic bag.
Kui ilmnevad praktilised raskused, näiteks inkubaatoririke või probleemid rakukultuuridega, mistõttu rakkude nakatamine 48 tunni jooksul pärast kaladelt koeproovide kogumist ei ole võimalik, võib supernatandi külmutada temperatuuril – 80 °C ning teha viroloogilise analüüsi 14 päeva jooksul.
Live fish may also be shipped.
Kui kogutud supernatant külmutatakse 48 tunni jooksul pärast proovivõtmist temperatuuril – 80 °C, võib seda viroloogiliseks analüüsiks uuesti kasutada vaid ühe korra.
Collection of supplementary diagnostic material
Enne rakkude nakatamist segatakse supernatant võrdse osa nakkusliku pankrease nekroosi (IPN) viiruse kohalike serotüüpide vastaste antiseerumite sobivalt lahjendatud koondprooviga ning segu inkubeeritakse vähemalt tund aega 15 °C juures või maksimaalselt 18 tundi 4 °C juures.
When approved by the diagnostic laboratory, other fish tissues may be collected as well and prepared for supplementary examinations.
Antiseerumi tiiter peab 50 % plaagide neutraliseerimise katse kohaselt olema vähemalt 1/2000.
Preparation of samples for cell culture examination and RT-qPCR
Kõiki inokulume töödeldakse IPNi viiruse vastase antiseerumiga selleks, et hoida ära IPNi viirusest põhjustatud tsütopaatilise efekti ilmnemist inokulumiga nakatatud rakukultuurides.
Freezing in exceptional cases
Sellega lühendatakse viroloogilise analüüsi kestust ja vähendatakse nende juhtude arvu, mille puhul tsütopaatilise efekti ilmnemist tuleb pidada VHSi või IHNi viiruse võimaliku esinemise märgiks.
Where practical difficulties arise, which make it impossible to process the samples within 48 hours after the collection of the fish tissues, it may be acceptable to freeze the tissue specimens in transport medium at – 20 °C or below and to carry out virological examination within 14 days.
Kui proovid on pärit tootmisüksusest, mida peetakse IPNi-vabaks, võib inokulumide töötlemise IPNi viiruse vastase antiseerumiga ära jätta.
However, the fish tissue shall only be frozen and thawed once before examination.
Proovide ettevalmistamine RT-PCRil või RT-qPCRil põhinevate seireprogrammide puhul
Records shall be kept with details on the reason for each freezing of fish tissue samples.
Kui proovid on kogutud transpordisöötmesse, viiakse läbi punktides I.4.2 ja I.4.3 ette nähtud toimingud.
Homogenisation of organs
Pärast tsentrifuugimist kogutakse supernatant ja eraldatakse RNA.
In the laboratory, the fish tissue in the tubes shall be completely homogenised, either by stomacher, blender or mortar and pestle with sterile sand, and subsequently suspended in the original transport medium.
Kui edasine analüüs ei toimu kohe pärast tsentrifuugimist, külmutatakse proovid viivitamata – 20 °C juures või madalamal temperatuuril.
If a sample consists of a whole fish less than 4 cm long, it shall be minced with sterile scissors or scalpel after removal of the body behind the gut opening.
RNAd stabiliseerivas lahuses olevate kalakudede analüüsimisel tehakse edasised toimingud proovide säilitustemperatuurist olenevalt järgmise ajavahemiku jooksul:
If a sample consists of a whole fish with body length between 4 cm and 6 cm, the viscera including kidney shall be collected.
37 °C juures säilitatavad proovid: ühe päeva jooksul;
If a sample consists of a whole fish more than 6 cm long, the tissue specimens shall be collected as described in point I.1.
25 °C juures säilitatavad proovid: ühe nädala jooksul;
The tissue specimens shall be minced with sterile scissors or scalpel and homogenised as described in the first paragraph of this point and suspended in transport medium.
4 °C juures säilitatavad proovid: ühe kuu jooksul;
The final ratio between tissue material and transport medium shall be adjusted in the laboratory to 1:10.
20 °C juures säilitatavad proovid: mis tahes ajal.
Centrifugation of homogenate
RNAd stabiliseerivas lahuses olevat koondproovi käsitatakse kui RNAd stabiliseerivas lahuses olevat üksikproovi.
The homogenate shall be centrifuged in a refrigerated centrifuge at 2 °C to 5 °C at 2000 to 4000 × g for 15 minutes and the supernatant collected and may be treated for either four hours at 15 °C or overnight at 4 to 8 °C with antibiotics.
RNAd stabiliseerivas lahuses oleva koondproovi maht ei tohi ületada RNA eraldamise komplekti tootja, näiteks RNeasy Mini komplekti tootja (Qiagen) soovituse kohast mahtu.
If the sample has been shipped in a transport medium, the treatment of the supernatant with antibiotics may be omitted.
Suurema mahuga proovide koondamisel tuleb kasutatava eraldamiskomplekti või -meetodi puhul arvesse võtta koondproovi mahtu.
Where practical difficulties arise, such as incubator breakdown or problems with cell cultures, which make it impossible to inoculate cells within 48 hours after the collection of the fish tissue samples, the supernatant may be frozen at – 80 °C and virological examination may be carried out within 14 days.
RNAd stabiliseerivasse lahusesse kogutud proove ei kasutata rakukultuuris.
If the collected supernatant is stored at – 80 °C within 48 hours after the sampling, it may be reused only once for virological examination.
Proovide koondamine RT-qPCRi jaoks
Prior to the inoculation of the cells, the supernatant shall be mixed with equal parts of a suitably diluted pool of antisera to the indigenous serotypes of Infectious pancreatic necrosis (IPN) virus and incubated with this for a minimum of one hour at 15 °C or a maximum of 18 hours at 4 °C.
Kuna esitatud RT-qPCRi meetodite tundlikkus on rakukultuuri meetoditega võrreldes sarnane või suurem, võib olla vastuvõetav kasutada PCRi jaoks kuni 10 kalalt võetud elundite koondproovist pärit homogeniseeritud koematerjalist saadud supernatanti.
The titre of the antiserum shall be at least 1/2000 in a 50 % plaque neutralisation test.
Kuna PCRi jaoks kasutatav inokulum on rakukultuuris kasutatavaga võrreldes palju väiksem, tuleb kõik kalakoed enne eraldamiseks võetava materjali koondamist hoolikalt homogeniseerida.
Treatment of all inocula with antiserum to IPN virus aims at preventing cytopathic effect (CPE) due to IPN virus from developing in inoculated cell cultures.
Seda põhimõtet kohaldatakse ka RNAd stabiliseerivasse lahusesse kogutavate proovide suhtes.
This will reduce the duration of the virological examinations as well as the number of cases in which occurrence of CPE would have to be considered potentially indicative of VHSV or IHNV.
Sel juhul on sageli siiski raske koguda kuni 10 kalalt võetud representatiivne koematerjal ühte katsutisse ja seepärast vähendatakse koondproovis esindatud kalade arvu 2–5 kalani.
When samples come from production units, which are considered free from IPN, the treatment of inocula with antiserum to IPN virus may be omitted.
Viroloogiline analüüs rakukultuuris
Sample preparation for RT-PCR and RT-qPCR based surveillance programmes
Rakukultuurid ja söötmed
If samples were collected in transport medium, the procedure set out in points I.4.2 and I.4.3 shall be carried out.
Päikeseahvena Lepomis macrochirus vastsete rakuliini BF-2 ja vikerforelli sugunäärmerakkude liini RTG-2 ning rakuliini Epithelioma papulosum cyprini (EPC) või pakspea-lepamaimu rakuliini FHM kasvatatakse 20–30 °C juures sobivas söötmes, täpsemalt Eagle'i minimaalsöötmes (MEM) või selle modifikatsioonis, kuhu on lisatud 10 % veiselooteseerumit ja tavapärases kontsentratsioonis antibiootikume.
After centrifugation, supernatant shall be collected and RNA extracted.
Kui rakke kasvatatakse suletud pudelites, puhverdatakse söödet vesinikkarbonaadiga.
If further examination is not to be undertaken directly after centrifugation, the samples shall be immediately frozen at – 20 °C or below.
Kaladelt saadud koematerjaliga nakatamiseks kasutatav rakukultuur peab võimaluse korral olema noor, üldjuhul ühe päeva vanune ühekihiline kultuur; vastuvõetav kultuuri vanus võib siiski olla 4–48 tundi.
For the analysis of fish tissues preserved in RNA stabilization reagent, subsequent work shall be carried out within the following time scales for samples stored at different temperatures:
Rakud peavad nakatamise ajal aktiivselt kasvama.
samples stored at 37 °C: 1 day;
Rakukultuuride nakatamine
samples stored at 25 °C: 1 week;
Rakukultuuride nakatamisel antibiootikumidega töödeldud elundisuspensiooniga kasutatakse homoloogilise interferentsi ärahoidmiseks kahte lahjendusastet: esmast lahjendust ja selle 1:10 lahjendamisel saadud täiendavat lahjendust, nii et koematerjali lõpplahjendus rakukultuurisöötmes on vastavalt 1:100 ja 1:1000.
samples stored at 4 °C: 1 month;
Nakatamiseks kasutatakse vähemalt kahte punktis I.5.1 osutatud rakuliini.
samples stored at – 20 °C: indefinitely
Inokulumi mahu ja rakukultuurisöötme ruumala suhe peab olema umbes 1:10.
Pooled samples in RNA stabilization reagent shall be treated like single samples in RNA stabilization reagent.
Iga lahjenduse ja iga rakuliini kohta kasutatakse vähemalt 2 cm2 suurust rakkudega kaetud ala, mis vastab 24-kannulise rakukultuuriplaadi ühe kannu põhjapindalale.
For samples pooled in RNA stabilization reagent, the sample amount shall not exceed that recommended by the manufacturer for extraction with RNA kits, such as RNeasy Mini kits (Qiagen) or similar.
Võimaluse korral kasutatakse rakukultuuriplaate.
If larger samples are pooled, the extraction kits or methods must reflect this pooling.
Rakukultuuride inkubeerimine
Samples collected in RNA stabilization reagents shall not be used for cell cultivation.
Nakatatud rakukultuure inkubeeritakse 7–10 päeva 15 °C juures.
As the RT-qPCR protocols given are of similar or higher sensitivity than the cell cultivation methods, it may be acceptable to use supernatant from homogenised fish tissue material of pooled organs from up to 10 fish in cell culture medium for PCR.
Vähemalt iga kuue kuu järel või kui kahtlustatakse rakkude vastuvõtlikkuse vähenemist, kontrollitakse rakukultuuride vastuvõtlikkust nakkusele VHSi ja IHNi viiruse külmutatud põhilahuse tiitrimise teel.
However, due to the much smaller inoculum used for PCR compared to cell cultivation, all fish tissues shall be carefully homogenised before collating material for extraction.
Võimaluse korral kohaldatakse III jaos sätestatud korda.
The same principle shall also be applied if samples are collected in RNA stabilization reagents.
Mikroskoopia
However, in that case it is often difficult to collect representative material from up to 10 fish in one tube, and the number of fish per pool shall therefore be reduced to 2 to 5.
Nakatatud rakukultuure kontrollitakse korrapäraselt vähemalt kolm korda nädalas tsütopaatilise efekti esinemise suhtes 40- kuni 150-kordsel suurendusel.
Virological examination on cell culture
Kui täheldatakse ilmset tsütopaatilist efekti, alustatakse viivitamata viiruse tuvastamist vastavalt punktile I.6.
Cell cultures and media
Subkultuuride loomine
Bluegill fry cell line -2 (BF-2) or Rainbow trout gonad cell line - 2 (RTG-2) and either Epithelioma papulosum cyprini (EPC) or Fathead minnow (FHM) cells shall be grown at 20 to 30 °C in suitable medium, namely Eagle's Minimum essential medium (MEM) or modifications thereof, with a supplement of 10 % foetal bovine serum and antibiotics in standard concentrations.
Kui 7–10 päeva kestnud esimese inkubeerimise järel ei ole ilmnenud tsütopaatilist efekti, luuakse subkultuurid värsketest rakukultuuridest, mida kasvatatakse primaarkultuuri kasvupinnaga sarnase suurusega alal.