natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Identity (name/CAS No as appropriate), source, lot/batch number, purity, supplier, and characterisation of test chemical, reagents, and controls;
Res., 14, 23 — 30.
Physical nature and relevant physicochemical properties of test chemical;
OECD (2010), Multi-Laboratory Validation of the H295R Steroidogenesis Assay to Identify Modulators of Testosterone and Estradiol Production, OECD Series of Testing and Assessment No. 132, ENV/JM/MONO(2010)31, Paris.
Storage conditions and the method and frequency of preparation of test chemicals, reagents and controls;
OECD (2010), Peer Review Report of the H295R Cell-Based Assay for Steroidogenesis, OECD Series of Testing and Assessment No.
Stability of test chemical;
Käesoleva lisa peatükk B.55.
Cells
Hershbergeri biokatse rottidel:
Source and type of cells;
kiire sõelkatse (anti)androgeensete omaduste väljaselgitamiseks
Number of cell passages (cell passage identifier) of cells used in test;
Liide
Description of procedures for maintenance of cell cultures;
CV (Coefficient of Variation)
Pre-test requirements (if applicable)
tsütokroom P450 monooksügenaasid, geenide ja nende järgi sünteesitud ensüümide perekond, mis osaleb väga paljude biokeemiliste reaktsioonide katalüüsimises, sealhulgas steroidhormoonide sünteesi ja metabolismi katalüüsimises.
Description and results of chemical hormone-assay interference test;
DPM (disintegrations per minute)
Description and results of hormone extraction efficiency measurements;
lagunemiste arv minutis.
Standard and calibration curves for all analytical assays to be conducted;
See on teatava koguse radioaktiivse aine ühe minuti jooksul lagunenud aatomite arv.
Detection limits for the selected analytical assays;
E2
Test conditions
östradiool, kõige tähtsam östrogeen imetajate hormoonisüsteemides.
Composition of media;
H295R-rakud
Concentration of test chemical;
inimese adrenokartsinoomi rakud, millel on tsonaalselt diferentseerumata inimloote neerupealise rakkude füsioloogilised omadused ning milles on ekspresseeritud kõik steroidogeneesi raja ensüümid.
Cell density (estimated or measured cell concentrations at 24 hours and 48 hours)
sõltumatu eksperiment, mis tehakse uute lahuste ja uute kontrollidega.
Solubility of test chemical (limit of solubility, if determined);
Katseplaat plaat, millel H295R-rakud viiakse kokkupuutesse uuritavate kemikaalidega.
Incubation time and conditions;
Kvaliteedikontroll (QC)
Test results
Kvaliteedikontrolli plaat
Raw data for each well for controls and test chemicals--each replicate measure in form of the original data provided by the instrument utilised to measure hormone production (e.g. OD, fluorescence units, DPM, etc.);
24 süvendiga plaat, millel on positiivse ja negatiivse kontrolli kaks kontsentratsiooni, millega kontrollitakse uue rakkude partii toimimist või tehakse katse positiivsed kontrollid kemikaalide katsetamisel.
Validation of normality or explanation of data transformation;
Kemikaal aine või segu.
Mean responses ± 1 SD for each well measured;
Külmutuskeskkond keskkond, mida kasutatakse rakkude külmutamiseks ja milles hoitakse külmutatud rakke.
Cytotoxicity data (test concentrations that caused cytotoxicity);
Selle koostis on järgmine: varulahusekeskkond pluss BD NuSerum ja dimetüülsulfoksiid.
Confirmation that QC requirements were met;
Laatumismäär iseloomustab pinna katmise või paljunemise määra, mida rakkudele võimaldatakse kasvukeskkonna pinnal või sees.
Relative change compared with solvent control corrected for cytotoxicity;
Lineaarne osa hormoonide määramise süsteemi standardkõvera osa, milles tulemus on võrdeline proovis oleva analüüdi kontsentratsiooniga.
A bar graph showing relative (fold change) at each concentration, SD and statistical significance as stated in paragraph 49-54;
LOEC (Lowest Observed Effect Concentration) vähim avastatava mõjuga kontsentratsioon, mille juures katse tulemus on statistiliselt erinev lahusti kontrolli tulemusest.
Data interpretation
LOQ (Limit of Quantification)
Apply the data interpretation procedure to the results and discuss findings;
mõõtmispiir, väikseim kogus kemikaali, mida saab eristada kõnealuse kemikaali puudumisest (tühikatse) teatava usalduspiiri juures.
Discussion
Käesoleva meetodi puhul on LOQ tavaliselt katsesüsteemi valmistaja poolt ette antud, kui seda ei ole täpsustatud teisiti.
OECD (2010), Multi-Laboratory Validation of the H295R Steroidogenesis Assay to Identify Modulators of Testosterone and Estradiol Production, OECD Series of Testing and Assessment No 132, ENV/JM/MONO(2010)31, Paris.
PBS Dulbecco fosfaatpuhvrilisandiga keedusoolalahus.
OECD (2010), Peer Review Report of the H295R Cell-Based Assay for Steroidogenesis, OECD Series of Testing and Assessment No 133, ENV/JM/MONO(2010)32, Paris.
Steroidogenees sünteesirada, mille kaudu kolesteroolist sünteesitakse mitmesugused steroidhormoonid.
A short-term Screening Assay for (Anti)Androgenic Properties.
Trüpsiin 1X lahjendatud trüpsiini (üks ensüüme, kõhunäärme seriinproteaas) lahus, mida kasutatakse rakkude eraldamiseks rakkude kasvatamise plaadilt, vt valideerimisaruande (4) III liide.
CV refers to the coefficient of variation, and is defined as the ratio of the standard deviation of a distribution to its arithmetic mean.
Uuritav kemikaal
CYP stands for cytochrome P450 mono-oxygenases, a family of genes and the enzymes produced from them that are involved in catalysing a wide variety of biochemical reactions including the synthesis and metabolism of steroid hormones.
iga aine või segu, mida uuritakse käesoleva katsemeetodi abil.
DPM are disintegration per minute.
Varukeskkond
It is the number of atoms in a given quantity of radioactive material that is detected to have decayed in one minute.
lähtekeskkond, mis on alus muude reagendilahuste valmistamiseks.
E2 is 17β-oestradiol, the most important oestrogen in mammalian systems.
1 15 mM HEPES-puhvris, mis ei sisalda fenoolpunast ega Na-vesinikkarbonaati.
H295R cells are human adreno-carcinoma cells which have the physiological characteristics of zonally undifferentiated human foetal adrenal cells and which express all of the enzymes of the steroidogenesis pathway.
Na-vesinikkarbonaat lisatakse puhverdamiseks, vt valideerimisaruande (4) II liide.
They are available from the ATCC.
B.58.
Freeze medium is used to freeze and to store frozen cells.
TRANSGEENSE NÄRILISE SOMAATILISTE JA SUGURAKKUDE GEENIDE MUTATSIOONI KATSE
It consists of stock medium plus BD NuSerum and dimethyl sulfoxide.
Käesolev katsemeetod on samaväärne OECD katsejuhendiga nr 488 (2013).
Linear Range is the range within the standard curve for a hormone measurement system where the results are proportional to the concentration of the analyte present in the sample.
ELil on katsemeetodid paljude in vitro geenmutatsioonide uuringute tegemiseks, millega on võimalik avastada kromosoomide ja/või geenide mutatsioone.
LOEC is the Lowest Observed Effect Concentration, the lowest concentration level at which the assay response is statistically different from that of the solvent control.
Transgeense närilise (transgenic rodent, TGR) mutatsiooni katse rahuldab vajaduse praktilise ja kergesti kättesaadava in vivo katse järele, millega saab määrata geenimutatsioone.
NOEC is the No Observed Effect Concentration, which is the highest concentration tested if the assay does not provide a positive response.
TGR-mutatsioonikatse kohta on avaldatud põhjalikke ülevaateid (24, 33).
Passage is the number of times that cells are split after initiation of a culture from frozen stock.
Nendes kasutatakse transgeenseid rotte ja hiiri, kelle kromosoomidesse on integreeritud rohkesti plasmiidi või faagi-ülekandevektorite koopiaid (transgeene).
The initial passage that was started from the frozen stock is assigned the number one (1).
Transgeenid sisaldavad reportergeene mitmesugust tüüpi mutatsioonide avastamiseks, mida in vivo tekitavad uuritavad kemikaalid.
Cells that were split 1 time are labelled passage 2, etc.
Närilises tekkivaid mutatsioone loendatakse transgeeni väljavõtmise ja reportergeeni fenotüübi analüüsimisega bakteriaalses peremees-organismis, kellel vastavat reportergeeni ei ole.
PBS is Dulbecco's phosphate buffered saline.
TGR geenimutatsiooni katsetega mõõdetakse mutatsioone, mis on tekkinud geneetiliselt neutraalsetes geenides, mis eraldatakse praktiliselt kõikidest närilise kudedest.
Quality Control, abbreviated QC, refers to the measures needed to assure valid data.
Nende katsetega võib seepärast üle saada paljudest olemasolevatest piirangutest, mis on seotud in vivo geenimutatsioonide uurimisega endogeensetes geenides (näiteks piiratud hulk analüüsikõlblikke kudesid, negatiivne või positiivne selektsioon mutatsioonide vastu).
Quality control plate is a 24 well plate containing two concentrations of the positive and negative controls to monitor the performance of a new batch of cells or to provide the positive controls for the assay when testing chemicals.
Olemasolevad tõendid näitavad veenvalt, et transgeenid reageerivad mutageenidele samal viisil kui endogeensed geenid, eriti mis puutub alusepaari asendustesse, raaminihkemutatsioonidesse ning väikestesse deletsioonidesse ja insertsioonidesse (24).
Run is an independent experiment characterised by a new set of solutions and controls.
Genotoksilisuse testimise rahvusvahelistel seminaridel (IWGT) on toetatud TGR-geenimutatsioonikatse kasutamist geenimutatsioonide avastamiseks in vivo ja on esitatud soovituslik katse-eeskiri selliste katsete tegemiseks (15, 29).
Stock medium is the base for the preparation of other reagents.
Käesolev katsemeetod põhineb kõnealustel soovitustel.
It consists of a 1:1 mixture of Dulbecco's Modified Eagle's Medium and Ham's F-12 Nutrient mixture (DMEM/F12) in 15 mM HEPES buffer without phenol red or sodium bicarbonate.
Käesoleva katse-eeskirja kasutamist toetav täiendav analüüs on esitatud viites (16).
Sodium bicarbonate is added as the buffer, see Appendix II to the validation report (4).
Arvatavasti on tulevikus võimalik ühendada TGR-geenimutatsiooni katse korduvdoosi toksilisuse uuringuga (käesoleva lisa peatükk B.7).
Supplemented medium consist of stock medium plus BD Nu-Serum and ITS+ premium mix, see Appendix II to the validation report (4).
Siiski on vaja veel andmeid selle tõendamiseks, et korduvdoosi toksikoloogia uuringus kasutatav lühem ühepäevane vahe dooside manustamise lõpu ja proovide võtmise vahel ei mõjuta TGR-geenimutatsiooni katseid, mille puhul kasutatakse 3päevast ajavahemikku.
Steroidogenesis is the synthetic pathway leading from cholesterol to the various steroid hormones.
On vaja ka andmeid, mis näitaksid, et transgeense näriliseliini kasutamine tavaliste näriliseliinide asemel ei kahjusta korduvdoosi katse tulemusi.
Several intermediates in the steroid synthesis pathway such as progesterone and testosterone are important hormones in their own right but also serve as precursors to hormones farther down the synthetic pathway.
Kui need andmed saadakse, tuleb käesolevat katsemeetodit ajakohastada.
T stands for testosterone, one of the two most important androgens in mammalian systems.
Peamiste terminite tähendused on esitatud liites.
Test chemical is any substance or mixture tested using this test method.
TGR-geenimutatsiooni mudelsüsteemid, mille kohta on kogutud piisavalt andmeid, et toetada nende kasutamist käesolevas katsemeetodis, on järgmised:
Test plate is the plate on which H295R cells are exposed to test chemicals.
gpt-delta- (gpt- ja Spi–)-hiir ja -rott;
Test plates contain the solvent control and the test chemical at seven concentration levels in triplicate.
lacI-hiir ja -rott (Big Blue®), kui katse tehakse standardtingimustes.
Trypsin 1X is a dilute solution of the enzyme trypsin, a pancreatic serine protease, used to loosen cells from a cell cultivation plate, see Appendix III to the validation report (4).
Lisaks võib kasutada cII- positiivsevaliku katset, et hinnata mutatsioone Big Blue®- ja Muta™Mouse'i mudelites.
B.58 TRANSGENIC RODENT SOMATIC AND GERM CELL GENE MUTATION ASSAYS
Mutageneesi hinnatakse TGR-mudelite puhul tavaliselt mutantide sageduse järgi;
This test method is equivalent to OECD Test Guideline (TG) 488 (2013).
vajaduse korral võib kasutada aga ka mutatsioonide molekulaaranalüüsi täiendava teabe saamiseks (vt punkt 24).
EU test methods are available for a wide range of in vitro mutation assays that are able to detect chromosomal and/or gene mutations.
Need näriliste in vivo geenimutatsiooni katsed on eriti olulised mutageensuse ohu hindamisel, kuna katsete tulemused sõltuvad in vivo metabolismist, farmakokineetikast, DNA parandusprotsessidest ja DNA sünteesimehhanismi võimest kahjustusega toime tulla, kuigi need omadused võivad eri liikidel ja kudedel olla erinevad ja sõltuda ka DNA kahjustuse tüübist.
There are test methods for in vivo endpoints (i.e. chromosomal aberrations and unscheduled DNA synthesis);
In vivo meetod geenimutatsiooni täiendavaks uurimiseks on kasulik edasiseks uurimiseks, kui in vitro süsteemis on leitud mutageenne toime, samuti täiendavate in vivo näitajate väljaselgitamiseks (24).
Transgenic Rodent (TGR) mutation assays fulfil the need for practical and widely available in vivo tests for gene mutations.
Kui on tõendeid, et uuritav kemikaal või asjakohane metaboliit ei pääse mõne huvipakkuva koeni, siis ei ole transgeense närilise geenimutatsiooni katse asjakohane.
The TGR mutation assays have been reviewed extensively (24) (33).
Punktis 8 kirjeldatud katsetes on sihtgeeniks bakteriaalse või bakteriofaagse päritoluga geen ning selle transgeeni närilise genoomsest DNAst väljaeraldamise vahendiks on transgeeni viimine λ-bakteriofaagisse või plasmiidsesse süstikvektorisse.
They use transgenic rats and mice that contain multiple copies of chromosomally integrated plasmid or phage shuttle vectors.
Selleks ekstraheeritakse huvipakkuvast närilisekoest genoomne DNA, töödeldakse seda in vitro (süstikvektori taastamiseks pakendatakse λ-vektorid või ligeeritakse ja elektroporeeritakse plasmiidid) ja seejärel tehakse pärast peremeesorganismi (bakterisse) viimist sobivates tingimustes kindlaks mutatsioonid.
The transgenes contain reporter genes for the detection of various types of mutations induced in vivo by test chemicals.
Analüüsiks kasutatakse neutraalseid transgeene, mida saab enamikust kudedest hõlpsasti jälle välja võtta.
Mutations arising in a rodent are scored by recovering the transgene and analysing the phenotype of the reporter gene in a bacterial host deficient for the reporter gene.
Tavaline TGR geenimutatsiooni katse hõlmab näriliste viimist teatavaks ajaks kokkupuutesse uuritava kemikaaliga.
TGR gene mutation assays measure mutations induced in genetically neutral genes recovered from virtually any tissue of the rodent.
Kemikaale võib manustada mis tahes asjakohasel viisil, sealhulgas implantatsiooniga (nt meditsiiniseadme testimine).
These assays, therefore, circumvent many of the existing limitations associated with the study of in vivo gene mutation in endogenous genes (e.g. limited tissues suitable for analysis, negative/positive selection against mutations).
Kogu ajavahemikku, mille jooksul loomale manustatakse kemikaali, nimetatakse manustamisajaks.
The weight of evidence suggests that transgenes respond to mutagens in a similar manner to endogenous genes, especially with regard to the detection of base pair substitutions, frameshift mutations, and small deletions and insertions(24).
Manustamisele järgneb tavaliselt teatav aeg enne surmamist, mille jooksul kemikaali ei manustata ja mille jooksul parandamata DNA-kahjustused fikseeruvad püsivateks stabiilseteks mutatsioonideks.
The International Workshops on Genotoxicity Testing (IWGT) have endorsed the inclusion of TGR gene mutation assays for in vivo detection of gene mutations, and have recommended a protocol for their implementation (15) (29).
Kirjanduses on seda ajavahemikku nimetatud mitmel viisil: avaldumisaeg, kinnistumisaeg või väljendumisaeg (manifestation, fixation, expression);
This test method is based on these recommendations.
see ajavahemik lõpeb proovivõtuajaga(15, 29).
Further analysis supporting the use of this protocol can be found in (16).
Kui loom on surmatud, eraldatakse huvipakkuvatest kudedest DNA ja puhastatakse.
It is anticipated that in the future it may be possible to combine a TGR gene mutation assay with a repeat dose toxicity study (Chapter B.7 of this Annex).
Paljudest pakendamistest või ligeerimistest iga looma ühe koe kohta saadud andmed tavaliselt koondatakse ja muteerumise sagedus hinnatakse tavaliselt kokku 105–107 lüüsilaike või kolooniaid moodustava ühiku põhjal.
However, data are required to ensure that the sensitivity of TGR gene mutation assays is unaffected by the shorter one day period of time between the end of the administration period and the sampling time, as used in the repeat dose toxicology study, compared to 3 days used in TGR gene mutation assays.
Kui kasutatakse positiivseid selektsioonimeetodeid, määratakse lüüsilaike moodustavad ühikud eraldi mitteselektiivsete plaatidega.
Data are also required to indicate that the performance of the repeat dose assay is not adversely affected by using a transgenic rodent strain rather than traditional rodent strains.
Positiivsed selektsioonimeetodid on välja töötatud mutatsioonide avastamiseks nii gpt-geenis[gpt-delta-hiir ja -rott, gpt–-fenotüüp (20, 22, 28)] kui ka lacZ-geenis [Muta™Mouse või lacZ-plasmiid-hiir (3, 10, 11, 30)];
When these data are available, this test method will be updated.
samas lacI-geeni mutatsioone Big Blue®-loomades tuvastatakse mitteselektiivse meetodiga, milles mutante avastatakse värvunud (siniste) lüüsilaikude tekkimise järgi.
Definitions of key terms are set out in the Appendix.
Positiivne selektsioonimeetod on loodud ka punktmutatsioonide avastamiseks λ-bakteriofaagsüstikvektori cII-geenis [Big Blue®-hiir või -rott ja Muta™Mouse (17)] ning deletsioonimutatsioonide leidmiseks λ red ja gam geenides [Spi–-selektsioon gpt-delta-hiire ja -roti puhul (21, 22, 28)].
TGR gene mutation assays for which sufficient data are available to support their use in this test method are:
Mutatsioonisagedusarvutatakse transgeenis lüüsilaike/plasmiide sisaldavate mutatsioonide arvu jagamisel lüüsilaikude/plasmiidide üldarvuga, mis on saadud samast DNA-proovist.
lacZ bacteriophage mouse (Muta™Mouse); lacZ plasmid mouse;
Transgeense närilise geenimutatsiooni uuringute puhul esitatav näitaja on mutatsioonide sagedus.
gpt delta (gpt and Spi–) mouse and rat;
Lisaks sellele saab mutatsioonisageduse määrata sõltumatut mutatsiooni sisaldavate rakkude määrana;
lacI mouse and rat (Big Blue®), as performed under standard conditions.
selle arvutuse jaoks on vaja eraldatud mutantide sekveneerimisega teha klooni kasvu arvestav parand(24).
In addition, the cII positiveselection assay can be used for evaluating mutations in the Big Blue® and Muta™Mouse models.
Mutatsioonid, mis loendatakse lacI, lacZ, cII ja gpt punktmutatsioonide katsetes, kujutavad endast peamiselt alusepaari asenduse, raaminihke ning väikeste insertsioonide ja deletsioonidega seotud mutatsioone.
Mutagenesis in the TGR models is normally assessed as mutant frequency;
Selliste mutatsioonitüüpide suhteline osa spontaansete mutatsioonide hulgas sarnaneb selle piirkonna endogeenses HPRT-geenis tekkivate mutatsioonide suhtelise osaga.
if required, however, molecular analysis of the mutations can provide additional information (see paragraph 24).
Suuri deletsioone avastatakse ainult Spi–-selektsioonija lacZ-plasmiidi katsetega (24).
These rodent in vivo gene mutation tests are especially relevant to assessing mutagenic hazard in that the assays' responses are dependent upon in vivo metabolism, pharmacokinetics, DNA repair processes, and translesion DNA synthesis, although these may vary among species, among tissues and among the types of DNA damage.
Huvipakkuvad mutatsioonid on in vivo mutatsioonid, mis tekivad hiirtel või rottidel.
An in vivo assay for gene mutations is useful for further investigation of a mutagenic effect detected by an in vitro system, and for following up results of tests using other in vivo endpoints (24).
In vitro ja ex vivo mutatsioonid, mis võivad tekkida faagi/plasmiidi tagasisaamisel, replikatsioonil või parandamisel, on võrdlemisi haruldased ja mõnes süsteemis on neid võimalik spetsiifiliselt tuvastada või välistada bakteriaalse peremeesorganismi/positiivse selektsiooni süsteemiga.
In addition to being causally associated with the induction of cancer, gene mutation is a relevant endpoint for the prediction of mutation-based non-cancer diseases in somatic tissues (12) (13) as well as diseases transmitted through the germline.
Ettevalmistused
If there is evidence that the test chemical, or a relevant metabolite, will not reach any of the tissues of interest, it is not appropriate to perform a TGR gene mutation assay.
Praegu on olemas mitmesuguseid transgeensete hiirte geenimutatsioonide tuvastamise mudeleid ja neid süsteeme kasutatakse laialdasemalt kui transgeense roti mudeleid.
In the assays described in paragraph 8, the target gene is bacterial or bacteriophage in origin, and the means of recovery from the rodent genomic DNA is by incorporation of the transgene into a λ bacteriophage or plasmid shuttle vector.
Kui rott on selgelt sobivam mudel kui hiir (nt kui uuritakse üksnes rottidel esineva kasvaja tekkimise mehhanismi, et korreleerida seda rottide puhul avalduva toksilisuse uuringuga, või kui metabolism rotis on teadaolevalt lähedasem metabolismile inimese organismis), siis tuleks kaaluda transgeense roti mudeli kasutamist.
The procedure involves the extraction of genomic DNA from the rodent tissue of interest, in vitro processing of the genomic DNA (i.e. packaging of λ vectors, or ligation and electroporation of plasmids to recover the shuttle vector), and subsequent detection of mutations in bacterial hosts under suitable conditions.
Temperatuur katseloomade ruumis peaks olema 22 ± 3 °C.
The assays employ neutral transgenes that are readily recoverable from most tissues.
Kuigi suhteline niiskus peaks olema vähemalt 30 % ja eelistatavalt mitte üle 70 %, v.a ruumi koristamise ajal, peaks eesmärgiks olema hoida niiskust 50–60 %.
The basic TGR gene mutation experiment involves treatment of the rodent with a chemical over a period of time.
Valgustus peab olema kunstlik, 12 tundi valgust ja 12 tundi pimedust.
Chemicals may be administered by any appropriate route, including implantation (e.g. medical device testing).
Söödavalikut võib mõjutada vajadus tagada uuritava kemikaali sobiv lisamine söödasse, kui kemikaali manustatakse sellisel viisil.
The total period during which an animal is dosed is referred to as the administration period.
Loomi tuleb pidada väikestes rühmades, kuni viis samast soost looma, kui ei eeldata agressiivset käitumist.
Administration is usually followed by a period of time, prior to sacrifice, during which the chemical is not administered and during which unrepaired DNA lesions are fixed into stable mutations.
Loomi võib hoida eraldi, kui see on teaduslikult põhjendatud.
In the literature, this period has been variously referred to as the manifestation time, fixation time or expression time;
Terved noored suguküpsuse saavutanud täiskasvanud loomad (vanus 8–12 nädalat katse alguses) määratakse juhuvaliku alusel kontrolli- ja doosirühmadesse.
the end of this period is the sampling time (15) (29).
Loomad varustatakse individuaalse märgisega.
After the animal is sacrificed, genomic DNA is isolated from the tissue(s) of interest and purified.
Loomi harjutatakse laboritingimustega vähemalt viis päeva.
Data for a single tissue per animal from multiple packaging/ligations are usually aggregated, and mutant frequency is generally evaluated using a total of between 105 and 107 plaque-forming or colony-forming units.
Uuringu alguses peaksid loomade kehamassi erinevused olema minimaalsed ja ei tohiks ületada ±20 % kummagi soo keskmisest massist.
When using positive selection methods, total plaque-forming units are determined with a separate set of non-selective plates.
Dooside ettevalmistamine