natgillin/translations-raw huggingface dataset:
The treatment medium is removed and replaced with fresh medium, and the cells are harvested 1,5-2,0 normal cell cycles later.
Töötlemiskeskkond eemaldatakse ja asendatakse värske kasvukeskkonnaga ning rakud kogutakse pärast 1,5–2,0 normaalse rakutsükliaja möödumist.
If both initial tests of the short (3-6 hrs) treatment are negative or equivocal, a subsequent, extended exposure treatment (without S9) is used.
Kui mõlemad esialgsed lühiajalise töötlemise (3–6 tundi) katsed annavad negatiivse või ebaselge tulemuse, kasutatakse järgnevat pikendatud töötlemis- või kokkupuuteaega (ilma S9-ta).
Two treatment options are available, both of which are equally acceptable:
Kasutada võib kahte töötlemise varianti, mis on võrdselt lubatavad:
In monolayers, mitotic cells (identifiable as being round and detaching from the surface) may be present at the end of the 3-6 hr treatment.
Monokihtides võib pärast 3–6-tunnise töötlemise lõppu olla mitoosifaasi rakke (mida võib ära tunda selle järgi, et need on ümmargused ja tulevad pinna küljest lahti).
Because these mitotic cells are easily detached, they can be lost when the medium containing the test substance is removed.
Kuna mitoosifaasis rakud tulevad kergesti lahti, võivad need uuritavat ainet sisaldava keskkonna eemaldamisel minna kaotsi.
Care should be taken to collect these when cultures are washed, and to return them to the cultures, to avoid losing cells that are in mitosis, and at risk for micronuclei, at the time of harvest.
Need tuleb kultuuri pesemisel kokku koguda ja kultuuri tagasi panna, et vältida mitoosifaasi jõudnud ja võimalikke mikrotuumi sisaldavate rakkude kaotsiminekut kogumise ajal.
Duplicate cultures should be used for each test substance concentration and for the vehicle/solvent and NC cultures.
Uuritava aine iga kontsentratsiooni juures, samuti lahusti/kandeaine kontrolli ja negatiivse kontrolli puhul, tuleks alati kasutada kaht paralleelkultuuri.
Where minimal variation between duplicate cultures can be demonstrated from historical laboratory data, it may be acceptable for single cultures to be used.
Kui labori varasemad andmed näitavad, et paralleelkultuuride erinevus on väike, võib olla vastuvõetav ühe kultuuri kasutamine.
If single cultures are used, it is recommended that an increased number of concentrations be analysed.
Üksikkultuuride kasutamisel tuleks kasutada suuremat arvu kontsentratsioone.
Cell harvest and slide preparation
Rakkude kogumine ja mikroskoobipreparaadi ettevalmistamine
Each culture is harvested and processed separately.
Iga rakukultuur kogutakse ja töödeldakse eraldi.
Cell preparation may involve hypotonic treatment, but this step is not necessary if adequate cell spreading is otherwise achieved.
Rakkude ettevalmistamine võib hõlmata hüpotoonilist töötlust, kuid see etapp ei ole vajalik, kui vajalik rakkude laotus saadakse muul viisil.
Different techniques can be used in slide preparation provided that high-quality cell preparations for scoring are obtained.
Mikroskoobipreparaadi ettevalmistamiseks võib kasutada mitmesuguseid meetodeid, kui on saadud kvaliteetsed, loendamiseks sobivad rakkude valmistised.
Cell cytoplasm should be retained to allow the detection of micronuclei and (in the cytokinesis-block method) reliable identification of binucleate cells.
Säilitada tuleks rakkude tsütoplasma, et oleks võimalik määrata mikrotuumi ja (blokeeritud tsütokineesi meetodi puhul) usaldusväärselt kindlaks teha kahetuumseid rakke.
The slides can be stained using various methods, such as Giemsa or fluorescent DNA specific dyes (59).
Mikroskoobipreparaate võib värvida mitme meetodiga, nagu näiteks Giemsa meetodiga või fluorestseerivate DNA-spetsiifiliste värvainetega (59).
All slides, including those of the solvent/vehicle and the controls, should be independently coded before the microscopic analysis.
Kõik mikroskoobipreparaadid, sh lahusti/kandeaine ning positiivse ja negatiivse kontrolli omad, kodeeritakse sõltumatult enne mikroskoopilist analüüsi.
Alternatively, coded samples can be analysed using a validated, automated flow cytometric or image analysis system.
Kodeeritud proovide analüüsimiseks võib kasutada ka valideeritud automaatseid voolutsütomeetria või kujutise analüüsi süsteeme.
In cytoB-treated cultures, micronucleus frequencies should be analysed in at least 2000 binucleated cells per concentration (at least 1000 binucleated cells per culture; two cultures per concentration).
TsütoB-ga töödeldud kultuuride puhul tuleks mikrotuumade sagedust analüüsida vähemalt 2000 kahetuumses rakus iga kontsentratsiooni kohta (vähemalt 1000 kahetuumses rakus iga kultuuri kohta; kaks kultuuri igal kontsentratsioonil).
If single cultures are used, at least 2000 binucleated cells per concentration should be scored from that culture.
Üheainsa kultuuri kasutamisel tuleks kõnealuse kultuuri kohta loendada vähemalt 2000 kahetuumset rakku igal kontsentratsioonil.
If substantially fewer than 1000 binucleate cells per culture, or 2000 if a single culture is used, are available for scoring at each concentration, and if a significant increase in micronuclei is not detected, the test should be repeated using more cells, or at less toxic concentrations, whichever is appropriate.
Kui igal kontsentratsioonil on loendamiseks kättesaadav oluliselt vähem kui 1000 kahetuumset rakku või üheainsa kultuuri kasutamisel 2000 rakku ja kui olulist mikrotuumade esinemissageduse suurenemist ei täheldata, tuleb katset korrata suurema rakkude arvuga või vähem mürgise kontsentratsiooniga, olenevalt sellest, kumb on sobivam.
Care should be taken not to score binucleate cells with irregular shapes or where the two nuclei differ greatly in size; neither should binucleate cells be confused with poorly spread multi-nucleate cells.
Tuleks jälgida, et ei loendataks ebakorrapärase kujuga kahetuumseid rakke või rakke, mille kaks tuuma on oluliselt erineva suurusega; samuti ei tohiks kahetuumseid rakke segi ajada halvasti eraldunud paljutuumsete rakkudega.
Cells containing more than two main nuclei should not be analysed for micronuclei, as the baseline micronucleus frequency may be higher in these cells (63) (64) Scoring of mononucleate cells is acceptable if the test substance is shown to interfere with cytoB activity.
Rakke, mis sisaldavad rohkem kui kahte peamist tuuma, ei tuleks mikrotuumade loendamisel arvesse võtta, kuna sellistes rakkudes võib mikrotuumade esinemise taustsagedus olla suurem (63, 64). Ühetuumsete rakkude loendamine võib olla lubatav, kui on näidatud, et uuritav aine segab tsütoB toimet.
In cell lines assayed without cytoB treatment, micronuclei should be scored in at least 2000 cells per concentration (at least 1000 cells per culture; two cultures per concentration).
TsütoB-ga töötlemata kultuuride puhul tuleks mikrotuumade sagedust analüüsida vähemalt 2000 rakus iga kontsentratsiooni kohta (vähemalt 1000 rakus iga kultuuri kohta; kaks kultuuri igal kontsentratsioonil).
Where only one culture per concentration is used, at least 2000 cells should be scored from that culture.
Kui kasutatakse ühtainukest kultuuri igal kontsentratsioonil, tuleks kõnealusest kultuurist loendada vähemalt 2000 rakku.
When cytoB is used, a CBPI or an RI should be determined to assess cell proliferation (see Appendix 2) using at least 500 cells per culture.
Kui kasutatakse tsütoB-d, tuleks määrata tsütokineesi blokiga paljunemise indeks (CBPI) või replikatsiooniindeks (RI) (vt 2. liide), kasutades vähemalt 500 rakku kultuuri kohta.
When treatments are performed in the absence of cytoB, it is essential to provide evidence that the cells being scored have proliferated, as discussed in Paragraphs 24-27.
Kui töötlemine toimub ilma tsütoB juuresolekuta, on oluline tõendada, et loendatud rakud on paljunenud (vt punktid 24–27).
Acceptability criteria
Katse kehtivuse kriteeriumid
A laboratory proposing to use the MNvit assay described in this TM should demonstrate its ability to reliably and accurately detect chemicals of known aneugenic and clastogenic activity, with and without metabolic activation, as well as known negative chemicals, using the reference chemicals in Appendix 3.
Käesolevas katsemeetodis kirjeldatud MNvit-katse kasutamist kavandav labor peaks tõendama, et suudab usaldusväärselt ja õigesti määrata teadaoleva aneugeense või klastogeense mõjuga kemikaale koos metaboolse aktivatsiooniga ja ilma selleta, samuti teadaolevalt ilma sellise toimeta kemikaale, kasutades 3. liites esitatud võrdluskemikaale.
As evidence of its ability to perform this TM correctly, the laboratory should provide evidence that the cells being scored for micronucleus formation have completed one nuclear division if the test is performed without the use of cytoB.
Tõendina oma suutlikkusest käesolevat katsemeetodit korralikult rakendada peaks labor esitama tõendid, et mikrotuumade moodustumise seisukohast loendatavad rakud on läbinud ühe rakujagunemise, kui katse tehakse ilma tsütoB kasutamiseta.
The chemicals in Appendix 3 are recommended for use as reference chemicals.
Võrdluskemikaalidena soovitatakse kasutada 3. liites esitatud kemikaale.
Substitute or additional chemicals can be included if their activity is known and if they induce micronuclei by the same mechanisms of action, and if they are shown to be relevant to the chemicals that will be tested using the MNvit procedure.
Võib kasutada ka asendavaid või täiendavaid kemikaale, kui nende toime on teada ja need tekitavad mikrotuumi sama toimemehhanismi kaudu ning on näidatud, et need on asjakohased MNvit-eeskirja järgi uuritavate kemikaalide puhul.
Justification could include a validation study employing a broad variety of substances or focused on a narrower spectrum based on the chemical class of the test substance or the mechanism of damage being studied.
Põhjendus võiks hõlmata paljude erinevate ainetega tehtud valideerimisuuringut või valideerimisuuringut, mis on suunatud kitsamale aineteringile, mis on seotud uuritava aine kemikaaliklassiga või uuritava kahjustusmehhanismiga.
Solvent/vehicle control and untreated cultures should give reproducibly low and consistent micronuclei frequencies (typically 5-25 micronuclei/1000 cells for the cell types identified in paragraph 11).
Lahusti/kandeaine kontrollid ja töötlemata kultuurid peaksid andma reprodutseeritavalt madalad ja kooskõlalised mikrotuumade tekke sagedused (punktis 11 nimetatud rakutüüpide puhul tavaliselt 5–25 mikrotuuma 1000 raku kohta).
Other cell types may have different ranges of responses which should be determined when validating them for use in the MNvit assay.
Muul rakutüübil võib olla teistsugune tulemustevahemik, mis tuleks kindlaks teha, kui rakutüüpi valideeritakse MNvit-katses kasutamiseks.
Data from negative, solvent, and PC should be used to establish historical control ranges.
Negatiivse kontrolli, lahusti ja positiivse kontrolli andmeid tuleks kasutada varasematel andmetel põhinevate kontrollvahemike kindlakstegemiseks.
These values should be used in deciding the adequacy of the concurrent NC/PC for an experiment.
Osutatud väärtusi tuleks kasutada selleks, et otsustada, kas katse paralleelsed negatiivse ja positiivse kontrolli tulemused on adekvaatsed.
If minor changes to the protocol (e.g. use of automated instead of manual scoring techniques; use of a new cell type) are proposed for the assay, then the effectiveness of the change should be demonstrated before the modified protocol can be considered acceptable for use.
Kui katse-eeskirjas tehakse väike muudatus (näiteks kasutatakse automaatset loendamist käsitsi loendamise meetodite asemel, kasutatakse uut rakutüüpi), tuleks enne muudetud katse-eeskirja lubatavaks lugemist tõendada, et ka muudetud katse on tõhus.
Demonstration of effectiveness includes demonstration that the major mechanisms of chromosome breakage and gain or loss can be detected, and that appropriate positive and negative results can be achieved for the class of the individual substance, or the broad range of substances, to be tested.
Tõhususe tõendamiseks tuleb muu hulgas tõendada, et on võimalik kindlaks teha peamisi kromosoomide katkemise, lisandumise või kaotsimineku mehhanisme ja et on võimalik saada sobivad positiivse ja negatiivse kontrolli tulemused üksiku uuritava aine kemikaaliklassi või paljude uuritavate ainete puhul.
If the cytokinesis-block technique is used, only the frequencies of binucleate cells with micronuclei (independent of the number of micronuclei per cell) are used in the evaluation of micronucleus induction.
Kui kasutatakse tsütokineesibloki meetodit, võetakse mikrotuumade hindamisel arvesse ainult kahetuumsetes rakkudes leitud mikrotuumade esinemise sagedust (sõltumatult mikrotuumade arvust ühe raku kohta).
Scoring of the numbers of cells with one, two, or more micronuclei could provide useful information, but is not mandatory.
Ühe või kahe mikrotuumaga või suurema mikrotuumade arvuga rakkude arvu loendamine võib anda kasulikku teavet, kuid ei ole kohustuslik.
Concurrent measures of cytotoxicity and/or cytostasis for all treated and solvent/vehicle control cultures should be determined (58).
Paralleelselt tuleks mõõta kõikide töödeldud kultuuride ja lahusti/kandeaine kontrollikultuuride juures avalduv tsütotoksiline ja/või tsütostaatiline mõju (58).
The CBPI or the RI should be calculated for all treated and control cultures as measurements of cell cycle delay when the cytokinesis-block method is used.
Kui kasutatakse tsütokineesi bloki meetodit, tuleks rakutsükli hilinemise mõõtmise järgi arvutada kõikide töödeldud ja kontrollikultuuride puhul tsütokineesi blokiga paljunemise indeks (CBPI) ja replikatsiooniindeks (RI).
In the absence of cytoB, the RPD or the RICC or PI should be used (see Appendix 2).
TsütoB puudumise korral tuleks kasutada kas RPDd, RICCi või PId (vt 2. liide).
Chemicals that induce micronuclei in the MNvit assay may do so because they induce chromosome breakage, chromosome loss, or a combination of the two.
Mikrotuumade tekkimist MNvit-katses võivad kemikaalid põhjustada sellega, et nende tõttu kromosoomid katkevad, lähevad kaotsi või esinevad mõlemad variandid korraga.
Further analysis using anti-kinetochore antibodies, centromere specific in situ probes, or other methods may be used to determine whether the mechanism of micronucleus induction is due to clastogenic and/or aneugenic activity.
Võib kasutada kinetokoorivastaseid antikehi, tsentromeerispetsiifilisi in situ sonde või muid meetodeid, et määrata kindlaks, kas mikrotuumade tekkemehhanism on seotud klastogeense ja/või aneugeense toimega.
Evaluation and interpretation of results
Tulemuste hindamine ja tõlgendamine
There is no requirement for verification by additional testing of a clear positive or negative response.
Selget positiivset või negatiivset vastust ei ole vaja täiendava katsega kontrollida.
Equivocal results may be clarified by analysis of another 1000 cells from all the cultures to avoid loss of blinding.
Ebamäärast tulemust võib selgitada veel 1000 raku vaatlemisega kõikidest kultuuridest, et vältida kultuuride kodeerimise mõttetuks muutumist.
If this approach does not resolve the result, further testing should be performed.
Kui see lähenemisviis ei võimalda tulemust selgitada, tuleks teha edasisi katseid.
Modification of study parameters over an extended or narrowed range of conditions, as appropriate, should be considered in follow-up experiments.
Järelkatsete tegemisel tuleks kaaluda katse parameetrite muutmist laiendatud või kitsamaks muudetud katsetingimuste vahemikus.
Study parameters that might be modified include the test concentration spacing, the timing of treatment and cell harvest, and/or the metabolic activation conditions.
Katse parameetrid, mida võidakse muuta, hõlmavad kasutatavate kontsentratsioonide jaotust, töötlemise ja rakkude kogumise ajastust ja/või metaboolse aktiveerimise tingimusi.
There are several criteria for determining a positive result, such as a concentration-related increase or a statistically significant increase in the number of cells containing micronuclei.
Positiivse tulemuse määramiseks on mitmeid kriteeriume, näiteks mikrotuumi sisaldavate rakkude arvu kontsentratsioonist sõltuv suurenemine või statistiliselt oluline suurenemine.
The biological relevance of the results should be considered first.
Esmalt tuleks arvesse võtta tulemuste bioloogilist tähtsust.
Consideration of whether the observed values are within or outside of the historical control range can provide guidance when evaluating the biological significance of the response.
Vastuse bioloogilise olulisuse hindamisel võib juhinduda sellest, kas leitud väärtused on varasemate kontrollkatsete vahemikus või väljaspool seda vahemikku.
Appropriate statistical methods may be used as an aid in evaluating the test results (65).
Katsetulemuste hindamisel võib abivahendina kasutada sobivaid statistilisi meetodeid (65).
However, the results of statistical testing should be assessed with respect to dose-response relationship.
Kuid statistiliste katsete tulemusi tuleks hinnata, võttes arvesse saadava tulemuse sõltuvust annusest.
Reproducibility and historical data should also be taken into consideration.
Samuti tuleks arvesse võtta reprodutseeritavust ja varasemaid andmeid.
Although most experiments will give clearly positive or negative results, in some cases the data set will preclude making a definite judgement about the activity of the test substance.
Kuigi enamik katseid annab selge positiivse või negatiivse tulemuse, ei ole mõnel harval juhul võimalik andmete alusel teha kindlat otsust uuritava aine mõju kohta.
These equivocal or questionable responses may occur regardless of the number of times the experiment is repeated.
Tulemused võivad jääda ebaselgeks või küsitavaks, olenemata sellest, kui palju katset korratakse.
Positive results from the MNvit assay indicate that the test substance induces chromosome breakage or chromosome loss, in cultured mammalian cells.
MNvit-katse positiivne tulemus näitab, et uuritav aine tekitab imetajarakkude kultuuris kromosoomide katkemist või kadu.
Negative results indicate that, under the test conditions used, the test substance does not induce chromosome breaks and/or gain or loss in cultured mammalian cells.
Negatiivne tulemus näitab, et konkreetsetes katsetingimustes ei põhjusta uuritav aine imetajarakkude kultuuris kromosoomide katkemist ega/või lisandumist või kadu.
The test report should include at least the following information, if relevant to the conduct of the study:
Katseprotokollis tuleks esitada vähemalt järgmine teave, kui see on uuringu läbiviimise seisukohast asjakohane.
Test chemical:
Uuritav kemikaal
identification data and Chemical Abstract Services Registry Number and EC Number;
Identifitseerimisandmed, Chemical Abstract Services Registry ehk CASi nr ja EÜ nr;
physical nature and purity;
füüsikaline olek ja puhtus;
physico-chemical properties relevant to the conduct of the study;
uuringu tegemisel olulised füüsikalis-keemilised omadused;
reactivity of the test chemical with the solvent/vehicle or cell culture media;
uuritava aine võime reageerida lahusti/kandeainega või rakukultuuri keskkonnaga.
Solvent/Vehicle:
Lahusti/kandeaine
justification for choice of solvent/vehicle;
Lahusti/kandeaine valiku põhjendus;
solubility and stability of the test substance in solvent/vehicle;
uuritava aine lahustuvus ja püsivus lahustis/kandeaines.
Cells:
Rakud
type and source of cells used;
Kasutatud rakkude tüüp ja päritolu;
suitability of the cell type used;
kasutatud rakutüübi sobivus;
absence of mycoplasma, if applicable;
mükoplasma puudumine, vajaduse korral;
information on cell cycle length, doubling time or proliferation index;
teave rakutsükli pikkuse kohta, pooldumisaeg või paljunemisindeks;
where lymphocytes are used, sex, age and number of blood donors, if applicable;
lümfotsüütide kasutamise korral veredoonorite arv, sugu ja vanus, vajaduse korral;
where lymphocytes are used, whether whole blood or separated lymphocytes are exposed;
lümfotsüütide kasutamise korral näidatakse, kas uuritava ainega viidi kokkupuutesse kogu veri või eraldatud lümfotsüüdid;
number of passages, if applicable;
ümberkülvide arv, vajaduse korral;
methods for maintenance of cell cultures, if applicable;
rakukultuuri säilitamise meetodid, vajaduse korral;
modal number of chromosomes;
kromosoomide modaalarv;
normal (negative control) cell cycle time;
normaalse (negatiivse kontrolli) rakutsükli kestus.
identity of cytokinesis blocking substance (e.g. cytoB), if used, and its concentration and duration of cell exposure;
Tsütokineesi blokeeriv aine (nt tsütoB), kui seda kasutatakse, selle kontsentratsioon ja rakkude selle ainega kokkupuute kestus;
rationale for selection of concentrations and number of cultures, including cytotoxicity data and solubility limitations, if available;
kontsentratsioonide ja rakukultuuride arvu valimise põhimõtted, sh nt tsütotoksilisuse andmed ja lahustuvuse piirangud, kui need on olemas;
composition of media, CO2 concentration, if applicable;
kasvukeskkonna koostis, CO2 kontsentratsioon, vajaduse korral;
concentrations of test substance;
uuritava aine kontsentratsioonid;
concentration (and/or volume) of vehicle and test substance added;
lisatud kandeaine ja uuritava aine kontsentratsioon ja kogus (ja/või ruumala);
incubation temperature and time;
inkubatsiooni temperatuur ja kestus;
duration of treatment;
uuritava ainega töötlemise kestus;
harvest time after treatment;
ajavahemik töötlemisest kuni rakkude kogumiseni;
cell density at seeding, if applicable;
rakkude tihedus külvamisel, vajaduse korral;
type and composition of metabolic activation system, including acceptability criteria;
metaboolse aktiveerimise süsteemi tüüp ja koostis, sh selle heakskiitmise kriteeriumid;
positive control chemicals and negative controls;
positiivse kontrolli kemikaalid ja negatiivsed kontrollid;
methods of slide preparation and staining technique used;
mikroskoobipreparaatide valmistamise meetodid ja kasutatud värvimismeetodid;
criteria for micronucleus identification;
mikrotuuma kindlakstegemise kriteeriumid;
numbers of cells analysed;
analüüsitud rakkude arv;
methods for the measurements of cytotoxicity;
tsütotoksilisuse mõõtmise meetodid;
any supplementary information relevant to cytotoxicity;
igasugune täiendav teave tsütotoksilisuse kohta;
criteria for considering studies as positive, negative, or equivocal;
kriteeriumid, mille alusel uuringutulemus klassifitseeritakse positiivseks, negatiivseks või ebaselgeks;
method(s) of statistical analysis used;
kasutatud statistilise analüüsi meetod(id);
methods, such as use of kinetochore antibody, to characterise whether micronuclei contain whole or fragmented chromosomes, if applicable;
vajaduse korral meetodid, millega uuriti, kas mikrotuum sisaldab terveid kromosoome või nende fragmente, näiteks kinetokoori antikeha.
measurement of cytotoxicity used, e.g. CBPI or RI in the case of cytokinesis-block method; RICC, RPD or PI when cytokinesis-block methods are not used; other observations when applicable, e.g. cell confluency, apoptosis, necrosis, metaphase counting, frequency of binucleated cells;
Tsütotoksilisuse määramise meetod, mida kasutati tsütokineesi bloki meetodi kasutamise puhul, näiteks CBPI või RI; RICC, RPD või PI, kui tsütokineesi bloki meetodeid ei kasutatud; vajaduse korral muud tähelepanekud, näiteks pinna katmine, apoptoos, nekroos, metafaaside loendamine, kahetuumsete rakkude esinemise sagedus;
signs of precipitation;
sadenemise tunnused;
data on pH and osmolality of the treatment medium, if determined;
teave kasvukeskkonna pH ja osmolaalsuse kohta, kui see on määratud;
definition of acceptable cells for analysis;
analüüsi jaoks kõlblike rakkude määratlus;
distribution of mono-, bi-, and multi-nucleated cells if a cytokinesis block method is used;
ühe-, kahe- ja paljutuumsete rakkude jaotus, kui kasutatakse tsütokineesi bloki meetodit;
number of cells with micronuclei given separately for each treated and control culture, and defining whether from binucleate or mononucleate cells, where appropriate;
mikrotuumadega rakkude arv eraldi igas töödeldud ja kontrollkultuuris; vajaduse korral peab olema näidatud, kas on määratud kahetuumsetest või ühetuumsetest rakkudest;
concentration-response relationship, where possible;
kontsentratsiooni ja toime vaheline sõltuvus, võimaluse korral;