natgillin/translations-raw huggingface dataset:
The competitive ELISA using monoclonal antibody 3-17-A3 is capable of identifying antibodies to all known serotypes of bluetongue virus (BTV).
Monoklonaalseid antikehi 3-17-A3 kasutav võistlev ELISA test suudab tuvastada kõiki lammaste katarraalse palaviku (BTV) tuntud serotüüpe.
The principle of the test is the interruption of the reaction between BTV antigen and a group-specific monoclonal antibody (3-17-A3) by the addition of test serum.
Testi põhimõte on BTV antigeeni ja grupispetsiifilise monoklonaalse antikeha (3-17-A3) vahelise reaktsiooni takistamine uuritavate seerumite lisamisel.
Antibodies to BTV present in the test serum block the reactivity of the monoclonal antibody (Mab) and result in a reduction in the expected colour development after the addition of enzyme labelled anti-mouse antibody, and chromogen/ substrate.
Uuritavates seerumites olevad BTV antikehad blokeerivad monoklonaalse antikeha (MAK) seondumise ning selle tulemusena väheneb ensüümiga märgistatud hiirevastase antikeha ja kromogeeni/substraadi lisamise järel tekkiva värvusreaktsiooni intensiivsus.
Sera can be tested at a single dilution of 1:5 (spot test – Appendix 1) or may be titrated (serum titration – Appendix 2) to give dilution end-point.
Seerumeid võib testida ühekordsete lahjendustena 1:5 (tilktest – 1. lisa) või tiitrimise teel (seerumi tiitrimine – 2. lisa), et leida lahuse lõpptiiter.
Inhibition values higher than 50 % may be regarded as positive.
50 % ületavaid inhibitsiooniväärtused loetakse positiivseks.
Material and Reagents:
Materjal ja reagendid:
Appropriate ELISA microtitre plates.
ELISA mikrotiiterplaadid.
Antigen: supplied as a cell extracted concentrate, prepared as described below, and stored at either –20 °C or –70 °C.
Antigeen: tarnitakse rakust ekstraheeritud kontsentraadina, valmistatakse vastavalt allpool esitatud kirjeldusele ja säilitatakse temperatuuril –20 °C või –70 °C.
Blocking buffer: phosphate buffered saline (PBS) containing 0,3 % BTV negative adult bovine serum, 0,1 % (v/v) Tween-20 (supplied as polyoxyethylene sorbiton monolaurate syrup) in PBS.
Blokeeriv puhver: fosfaadiga puhverdatud keedusoolalahus, mis sisaldab 0,3 % BTV-negatiivset täiskasvanud veise seerumit ja 0,1 mahuprotsendilist Tween-20 (polüoksüetüleensorbitoonmonolauraatsiirupina) fosfaadiga puhverdatud soolalahuses.
Monoclonal antibody: 3-17-A3 (supplied as hybridoma tissue-culture supernatant) directed against the group-specific polypeptide VP7, stored at -20 °C or freeze-dried and diluted 1/100 with blocking buffer before use.
Monoklonaalne antikeha: grupispetsiifilise polüpeptiidi VP7 vastane 3-17-A3 (hübridoomi rakukultuuri supernatandina), säilitatakse –20 °C juures või külmkuivatatakse, enne kasutamist lahjendatakse blokeeriva puhvriga vahekorras 1:100.
Conjugate: rabbit anti-mouse globulin (adsorbed and eluted) conjugated to horseradish peroxidase and kept in the dark at 4 °C.
Konjugaat: küüliku hiirevastane globuliin (absorbeeritud ja elueeritud), mis on konjugeeritud mädarõika peroksüdaasiga ja hoitud pimedas 4 °C juures.
Chromogen and substrate: Orthophenylene diamine (OPD-chromogen) at a final concentration of 0,4 mg/ml in sterile distilled water.
Kromogeen ja substraat: ortofenüleendiamiin (OPD-kromogeen) lõplikul kontsentratsioonil 0,4 mg/ml steriilses destilleeritud vees.
Hydrogen peroxide (30 %w/v-substrate) 0,05 % v/v added immediately before use (5μl H2 O2 per 10 ml OPD).
Vahetult enne kasutamist lisatakse 0,05 mahuprotsendiline vesinikperoksiid (30 % massi/mahu-substraat; 5 μl H2O2 10 ml OPD kohta). (NB!
(Handle OPD with care - wear rubber gloves - suspected mutagen).
Ettevaatust OPDga töötamisel tuleb kanda kummikindaid! Oletatav mutageen.)
1 Molar sulphuric acid: 26,6 ml of acid added to 473,4 ml of distilled water.
1 M väävelhape: 26,6 ml hapet lisatakse 473,4 ml destilleeritud veele. (NB!
(Remember Acid must be added to water, never water to acid.)
Alati lisatakse hapet veele, mitte kunagi vett happele!)
Orbital shaker.
Orbitaalsegisti.
ELISA plate reader (the test may be read visually).
ELISA plaadilugeja (testi tulemusi võib lugeda ka visuaalselt).
Test format
Tööplaan
Cc: conjugate control (no serum/ no monoclonal antibody); C++: strong positive serum control; C+: weak positive serum control; C-: negative serum control; Cm: monoclonal antibody control (no serum).
Cc: konjugaadi kontroll (ilma seerumita/ilma monoklonaalse antikehata); C++: tugev positiivne kontrollseerum; C+: nõrk positiivne kontrollseerum; C-: negatiivne kontrollseerum; Cm: monoklonaalse antikeha kontroll (ilma seerumita).
APPENDIX 1:
LIIDE
Spot dilution (1:5) format (40 sera/plate)
Tilklahjendus (1:5) (40 seerumit plaadil)
Test Sera
Uuritavad seerumid
APPENDIX 2:
LIIDE
Serum titration format (10 sera/plate)
Seerumi tiitrimine (10 seerumit plaadil)
Test protocol:
Tööprotokoll:
Conjugate control (Cc) Wells 1A and 1B are a blank control consisting of BTV antigen and conjugate.
Konjugaadi kontroll (Cc) augud 1A ja 1B on pimekontrollid, mis sisaldavad BTV antigeeni ja konjugaati.
This may be used to blank the ELISA reader.
Seda rida võib kasutada pimereana ELISA plaadilugeja jaoks.
Mab control (Cm) Columns 1 and 2, rows G and H are the monoclonal antibody control and contain BTV antigen, monoclonal antibody and conjugate.
Monoklonaalse antikeha (MAK) kontroll (Cm) veerud 1 ja 2, read G ja H on monoklonaalse antikeha kontrollimiseks ning need sisaldavad BTV antigeeni, monoklonaalset antikeha ja konjugaati.
These wells represent maximum colour.
Neis aukudes tekib tugevaim värvumine.
The mean of the optical density readings from this control represents the 0 % inhibition value.
Selle kontrollrea optilise tiheduse näitude keskmine väärtus vastab 0 % inhibitsiooniväärtusele.
Positive control (C++, C+) Columns 1 and 2, rows C-D-E-F.
Positiivne kontroll (C++, C+) veerud 1 ja 2, read C-D-E-F.
These wells contain BTV antigen, BTV strong and weak positive antiserum respectively, Mab and conjugate.
Nendes aukudes on BTV antigeen, vastavalt BTV tugev ja nõrk positiivne seerum, MAK ja konjugaat.
Negative control (C-) Wells 2A and 2B are the negative controls, which contain BTV antigen, BTV negative antiserum, Mab and conjugate.
Negatiivne kontroll (C-) augud 2A ja 2B on negatiivse kontrolli lahtrid, mis sisaldavad BTV antigeeni, BTV negatiivset antiseerumit, monoklonaalset antikeha ja konjugaati.
Test sera For large-scale serological surveys and rapid screening, sera may be tested at a single dilution of 1:5 (Appendix 1).
Uuritavad seerumid suuremahuliste seroloogiliste uuringute ja kiirseire puhul võib seerumit testida ühekordse lahjendusena 1:5 (1. liide).
Alternatively, 10 sera may be tested over a dilution range from 1:5 to 1:640 (Appendix 2).
Alternatiivina võib 10 seerumit uurida lahjendustes 1:5 kuni 1:640 (2. liide).
This will give some indication of the titre of antibody in the test sera.
See võimaldab hinnata uuritavate seerumite antikeha-tiitrit.
Procedure:
Töö käik:
Dilute BTV antigen to pre-titrated concentration in PBS, sonicate briefly to disperse aggregated virus (if sonicator is not available, pipette vigorously) and add 50 μl to all wells of the ELISA plate.
BTV antigeen lahjendatakse PBSis varem tiitritud kontsentratsioonini, töödeldakse lühidalt ultraheliga agregeerunud viiruse hajutamiseks (sonikaatori puudumisel pipetitakse tugevasti) ning lisatakse 50 μl kõikidesse ELISA plaadi aukudesse.
Tap sides of plate to disperse antigen.
Antigeeni ühtlaseks jaotumiseks koputatakse plaadi servadele.
Incubate at 37 °C for 60 minutes on an orbital shaker.
Inkubeeritakse 37 °C juures 60 minutit.
Wash plates three times by flooding and emptying the wells with non-sterile PBS and blot dry on absorbent paper.
Plaadid pestakse, täites ja tühjendades auke kolm korda mittesteriilse PBSiga, ning klopitakse filterpaberil kuivaks.
Control wells: Add 100 μl of blocking buffer to Cc wells.
Kontrollaugud: Cc aukudesse lisatakse 100 μl blokeerivat puhverlahust.
Add 50 ul of positive and negative control sera, at a dilution of 1:5 (10 μ l sera + 40 μl blocking buffer), to respective wells C-, C+ and C++.
Lisatakse 50 μl positiivset ja negatiivset kontrollseerumit lahjenduses 1:5 (10μl seerumit +40 μl blokeerivat puhverlahust) vastavatesse aukudesse C-, C+ ja C++.
Add 50μl blocking buffer to Mab control wells.
MAKi kontrollaukudesse lisatakse 50 μl blokeerivat puhverlahust.
Spot titration method: Add a 1:5 dilution of each test serum in blocking buffer to duplicate wells of columns 3 to 12 (10 μl sera +40 μl blocking buffer),
Tilktiitrimise meetod: veergude 3–12 topeltaukudesse lisatakse iga uuritavat seerumit, mida on lahjendatud blokeerivas puhverlahuses vahekorras 1:5 (10 μl seerumit +40 μl blokeerivat puhverlahust),
Serum titration method: Prepare a two-fold dilution series of each test sample (1:5 to 1:640) in blocking buffer across eight wells of single columns 3 to 12.
seerumi tiitrimise meetod: blokeerivas puhverlahuses valmistatakse iga uuritava proovi kahekordsete lahjenduste rida (lahjendusastmelt 1:5 astmeni 1:640), iga veeru 3–12 kaheksas augus.
Immediately after the addition of the test sera, dilute Mab 1:100 in blocking buffer and add 50 μl to all wells of the plate except for the blank control.
Kohe pärast uuritavate seerumite lisamist lahjendatakse MAK blokeerivas puhvris vahekorras 1:100 ja lisatakse 50 μl plaadi igasse auku, välja arvatud pimekontrolli augud.
Wash three times with PBS and blot dry.
Pestakse kolm korda PBSiga ja klopitakse filterpaberil kuivaks.
Dilute rabbit anti-mouse concentrate to 1/5000 in blocking buffer and add 50 μl to all wells of the plate.
Küüliku hiirevastase globuliini kontsentraat lahjendatakse 1/5000 blokeerivas puhvris ja lisatakse 50 μl plaadi igasse auku.
Thaw the O-Phenylenediamine dihydrochloride (OPD) and immediately before use add 5 μl of 30 % hydrogen peroxide to each 10 ml of OPD.
O-fenüleendiamiini dihüdrokloriid (OPD) sulatatakse ja vahetult enne kasutamist lisatakse sellele 5 μl 30 % vesinikperoksiidi iga 10 ml OPD kohta.
Add 50 μl to all wells of the plate.
Plaadi igasse auku lisatakse 50 μl.
Allow colour to develop for approximately 10 minutes and stop the reaction with 1 Molar sulphuric acid (50 μl per well).
Lastakse värvusel tekkida umbes 10 minutit ja peatatakse reaktsioon 1 M väävelhappega (50 μl augu kohta).
Colour should develop in the Mab control wells and in those wells containing sera with no antibody to BTV.
Värvumine peaks toimuma MAKi kontrollaukudes ja selliste seerumitega täidetud aukudes, mis ei sisalda antikehi.
Examine and record the plates either visually or using a spectrophotometric reader.
Plaate uuritakse ja tulemused protokollitakse visuaalselt või spektromeetri abil.
Analysis of results:
Tulemuste analüüs:
Using the software package print out the optical density (OD) values, and the percentage inhibition (PI) for test and control sera based on the mean value recorded in the antigen control wells.
Arvutiprogrammi abil prinditakse välja uuritava ja kontrollseerumi optilise tiheduse (OD) väärtused ning inhibitsiooni protsent (PI) lähtuvalt neljas augus registreeritud antigeeni kontrollseerumi keskmisest väärtusest.
The date expressed as OD and PI values are used to determine whether the test has performed within acceptable limits.
OD ja PI väärtusi kasutatakse testi usaldatavuse üle otsustamiseks.
If a computer software package is not available print out the OD values using the ELISA printer.
Arvutiprogrammi puudumisel prinditakse OD väärtused välja ELISA printeriga.
Calculate the mean OD value for the antigen control wells, which is equivalent to the 100 % value.
Arvutatakse antigeeni kontrollaukude keskmine OD väärtus, mis on samaväärne 100 % väärtusega.
Determine the 50 % OD value and manually calculate the positivity and negativity of each sample.
Määratakse kindlaks 50 % OD väärtus ja arvutatakse välja iga proovi positiivsus ja negatiivsus.
Percentage inhibition (PI) value = 100 – (OD of each test control/Mean OD of Cm) × 100.
Inhibitsiooni protsendimäära (PI) väärtus = 100 – (iga uuritava kontrolli OD/Cm keskmine OD) × 100.
The duplicate negative control serum wells and the duplicate blank wells must record PI values between +25 % and –25 %, and between +95 % and +105 %, respectively.
Negatiivse kontrollseerumi dubleeritud augud ja tühikatse dubleeritud augud peavad andma PI väärtuse vahemikus vastavalt +25 % ja –25 % ning +95 % ja +105 %.
Failure to be within these limits does not invalidate the plate but does suggest that background colour is developing.
Kui tulemus jääb väljapoole nimetatud väärtusi, ei tähenda see, ei plaadi tulemused on kehtetud, vaid seda, et taustavärvus veel muutub.
The strong and weak positive control sera must record PI values between +81 % and +100 %, and between +51 % and +80 %, respectively.
Tugev ja nõrk positiivne kontrollseerum peaksid andma PI väärtuse vahemikus vastavalt +81 % ja +100 % ning +51 % ja +80 %.
The diagnostic threshold for test sera is 50 % (PI 50 % or OD 50 %).
Uuritava seerumi diagnoosimise lävi on 50 % (PI 50 % või OD 50 %).
Samples recording PI values >50 % are recorded negative.
Proovid, mille PI väärtused on >50 %, loetakse negatiivseteks.
Samples that record PI values above and below the threshold for the duplicate wells are considered doubtful; such samples may be re-tested in the spot test and/or titration.
Proovid, mille PI väärtused on dubleeritud aukude lävest ülal- või allpool, tuleb lugeda kahtlasteks; selliseid proove võib uuesti testida tilktestmeetodil ja/või tiitrimise teel.
Visual reading: Positive and negative samples are easily discernible by eye; weakly positive or strong negative samples may be more difficult to interpret by eye.
Tulemuse visuaalne lugemine: positiivsed ja negatiivsed proovid on palja silmaga kergesti eristatavad; nõrgalt positiivsete või tugevate negatiivsete proovide palja silmaga tõlgendamine võib olla raskem.
Preparation of BTV ELISA antigen:
BTV ELISA antigeeni valmistamine:
Wash 40-60 roux of confluent BHK-21 cells three times with serum-free Eagle's medium and infect with bluetongue virus serotype 1 in serum-free Eagle's medium.
40–60 ühtlaselt BHK-21 rakkudega täidetud Roux' anumat pestakse kolm korda seerumivaba Eagle’i söötmega ja nakatatakse BTV serotüübiga 1 seerumivabas Eagle’i söötmes.
Incubate at 37 °C and examine daily for cytopathic effect (CPE).
Inkubeeritakse 37 °C juures ja jälgitakse iga päev tsütopaatilise efekti (TPE) teket.
When CPE are complete in 90 % to 100 % of the cell sheet of each roux, harvest the virus by shaking any still-attached cells from the glass.
Kui TPE on hõlmanud 90 % –100 % kõikide Roux' anumate rakukihist, kogutakse viirus kokku, raputades veel kinnitunud rakud klaasi küljest lahti.
Centrifuge at 2000 to 3000 rpm to pellet the cells.
Tsentrifuugitakse kiirusel 2000–3000 pööret minutis rakkude sadestamiseks.
Discard the supernatant and re-suspend the cells in approximately 30 ml of PBS containing 1 % ‘Sarkosyl’ and 2 ml phenylmethylsulphonyl fluoride (lysis buffer).
Supernatant kõrvaldatakse ja rakud resuspendeeritakse umbes 30 ml PBSis, mis sisaldab 1 % sarkosüüli ja 2 ml fenüülmetüülsulfonüülfluoriidi (lüüsipuhver).
This may cause the cells to form a gel and more lysis buffer may be added to reduce this effect.
Selle tulemusena võivad rakud moodustada geeli, efekti vähendamiseks võib lisada lüüsipuhvrit. (NB!
(NB: phenylmethylsulphonyl fluoride is harmful - handle with extreme caution.)
Fenüülmetüülsulfonüülfluoriid on ohtlik, seda tuleb käsitseda äärmiselt ettevaatlikult!)
Disrupt the cells for 60 seconds using an ultrasonic probe at an amplitude of 30 microns.
Rakke lõhustatakse 60 sekundit, kasutades ultrahelisondi amplituudil 30 mikronit.
Centrifuge at 10000 rpm for 10 minutes.
Tsentrifuugitakse 10 minutit kiirusel 10000 pööret minutis.
Store the supernatant at +4 °C and re-suspend the remaining cell pellet in 10 to 20 ml of lysis buffer.
Supernatant säilitatakse +4 °C juures ja järelejäänud rakukogum resuspendeeritakse 10–20 ml lüüsipuhvris.
Sonicate and clarify, storing the supernatant at each stage, a total of three times.
Töödeldakse ultraheliga ja selitatakse kolm korda, säilitades iga etapi supernatandi.
Pool the supernatants and centrifuge at 24000 rpm (100,000 g) for 120 minutes at +4 °C over a 5 ml cushion of 40 % sucrose (w/v in PBS) using 30 ml Beckmann centrifuge tubes and an SW 28 rotor.
Supernatandid pannakse kokku ja tsentrifuugitakse 120 minutit kiirusel 24000 pööret minutis (100,000 g) +4 °C juures (5 ml 40 % sahharoosi lahusega (w/v PBSis)), kasutades Beckmanni 30 ml tsentrifuugitopse ja SW 28 rootorit.
Discard the supernatant, drain the tubes thoroughly and re-suspend the pellet in PBS by sonication.
Supernatant kõrvaldatakse, vedelik eemaldatakse topsidest täielikult ning sade resuspendeeritakse PBSis ultrahelitöötlusega.
Store the antigen in aliquots at –20 °C.
Antigeen säilitatakse väikestesse kogustesse jaotatuna –20 °C juures.
Titration of BTV ELISA antigen:
BTV ELISA antigeeni tiitrimine:
Bluetongue ELISA antigen is titrated by the indirect ELISA.
Lammaste katarraalse palaviku ELISA antigeen tiitritakse kaudse ELISAga.
Twofold dilutions of antigen are titrated against a constant dilution (1/100) monoclonal antibody 3-17-A3.
Antigeeni kahekordsed lahjendused tiitritakse, kasutades monoklonaalse antikeha 3-17-A3 konstantset lahjendust (1:100).
The protocol is as follows:
Protokoll on järgmine:
Titrate a 1:20 dilution of BTV antigen in PBS across the microtitre plate in a twofold dilution series (50 μl/well) using a multichannel pipette.
Vahekorras 1:20 lahjendatud BTV antigeen tiitritakse mikrotiiterplaadil kahekordsete lahjendustena (50 μl augu kohta), kasutades mitmekanalilist pipetti.
Incubate for one hour at 37 °C on an orbital shaker.
Inkubeeritakse orbitaalsegistil 37 °C juures 1 tund.
Wash plates three times with PBS.
Plaate pestakse kolm korda PBSiga.
Add 50 μl of monoclonal antibody 3-17-A3 (diluted 1/100) to each well of the microtitre plate.
Mikrotiiterplaadi igasse auku lisatakse 50 μl monoklonaalset antikeha 3-17-A3 (lahjenduses 1:100).
Add 50 μl of rabbit anti-mouse globulin conjugated to horseradish peroxidase, diluted to a pre-titrated optimal concentration, to each well of the microtitre plate.
Mikrotiiterplaadi igasse auku lisatakse 50 μl küüliku hiirevastast globuliini, mis on konjugeeritud mädarõika peroksüdaasiga ja lahjendatud varem tiitritud optimaalse kontsentratsioonini.
Add substrate and chromogen as described previously.
Lisatakse substraat ja kromogeen, nagu eespool kirjeldatud.
Stop the reaction after 10 minutes by the addition of 1 Molar sulphuric acid (50 μl/well).
Reaktsioon peatatakse 10 minuti pärast, lisades 1 M väävelhapet (50 μl augu kohta).
In the competitive assay, the monoclonal antibody must be in excess, therefore a dilution of antigen is chosen which falls on the titration curve (not on the plateau region) which gives approximately 0,8 OD after 10 minutes.
Võistleva testi puhul tuleb monoklonaalset antikeha võtta liiaga, seetõttu valitakse antigeeni lahjendus, mis langeb tiitrimiskõverale (mitte platoole) ning mis annab 10 minuti jooksul OD väärtuseks umbes 0,8.
The agar gel immuno-diffusion test shall be carried out according to the following protocol:
Tehakse agargeeli imuundifusioontest vastavalt järgmisele juhendile:
Antigen:
Antigeen:
Precipitating antigen is prepared in any cell culture system that supports the rapid multiplication of a reference strain of bluetongue virus.
Pretsipiteeriv antigeen valmistatakse mis tahes rakukultuurisüsteemis, mis soodustab BTV referenttüve kiiret paljunemist.
BHK or Vero cells are recommended.
Soovitatakse BHK või Vero rakke.
Antigen is present in the supernatant fluid at the end of virus growth but requires 50 to 100-fold concentration to be effective.
Antigeen on viiruse kasvuaja lõpul supernatandis olemas, kuid tõhususe tagamiseks peab seda kontsentreerima 50–100 korda.
This may be achieved by any standard protein concentration procedure; virus in the antigen may be inactivated by the addition of 0,3 % (v/v) beta-propiolactone.
Seda on võimalik saavutada mis tahes valgukontsentreerimismeetodiga; antigeenis oleva viiruse võib inaktiveerida 0,3 mahuprotsendilise beetapropiolaktooni lisamisega.
Known positive control serum:
Teadaolev positiivne kontrollseerum:
Using the international reference serum and antigen a national standard serum is produced, standardised for optimal proportion against the international reference serum, freeze-dried and used as the known control serum in each test.
Rahvusvahelist referentseerumit ja antigeeni kasutades valmistatakse riiklik standardseerum, mis on optimaalse vahekorra saavutamiseks standarditud rahvusvahelise referentseerumi suhtes; see külmkuivatatakse ning kasutatakse teadaoleva kontrollseerumina kõigis katsetes.
Test serum
Uuritav seerum
Procedure 1 % agarose prepared in borate or sodium barbitol buffer, pH 8,5 to 9,0, is poured into a petri dish to a minimum depth of 3,0 mm. A test pattern of seven moisture-free wells, each 5,0 mm in diameter, is cut in the agar.
Töö käik 1-protsendine boraat- või naatriumbarbitoolpuhvris valmistatud agaroos pH tasemega 8,5–9,0 valatakse Petri tassi vähemalt 3,0-millimeetrise kihina. Agarisse lõigatakse seitse niiskusvaba auku, igaüks läbimõõduga 5,0 mm.
The pattern consists of one centre well and six wells arranged round it in a circle of radius 3 cm.
Keskel on üks auk ja selle ümber 3 cm raadiuses kuus auku.
The central well is filled with the standard antigen.
Keskmine auk täidetakse standardantigeeniga.
Peripheral wells 2, 4 and 6 are filled with known positive serum, wells 1, 3 and 5 are filled with test sera.
Äärmised augud 2, 4 ja 6 täidetakse teadaoleva positiivse seerumiga, augud 1, 3 ja 5 täidetakse uuritavate seerumitega.
The system is incubated for up to 72 hours at room temperature in a closed humid chamber.
Selliselt ette valmistatud plaati inkubeeritakse kuni 72 tundi suletud niiskes kambris toatemperatuuril.
Interpretation A test serum is positive if it forms a specific precipitin line with the antigen and forms a complete line of identity with the control serum.
Tõlgendamine Uuritav seerum on positiivne, kui see moodustab antigeeniga spetsiifilise pretsipitatsioonijoone, mis on identne kontrollseerumi joonega.
Epizootic haemorrhagic disease (EHD)
Episootiline hemorraagia (EHD)
Precipitating antigen is prepared in any cell culture system that supports the rapid multiplication of the appropriate serotype(s) of epizootic haemorrhagic disease virus.
Pretsipiteeriv antigeen valmistatakse mis tahes rakukultuuris, mis võimaldab episootilise hemorraagia viiruse vastava serotüübi / vastavate serotüüpide kiiret paljunemist.
Infectious bovine rhinotracheitis (IBR) / infectious pustular vulvo-vaginitis (IPV)
Veiste infektsioosne rinotrahheiit (IBR) / nakkav pustuloosne vulvovaginiit (IPV)
The serum neutralisation test shall be carried out according to the following protocol:
Tehakse seerumi neutralisatsiooni test vastavalt järgmisele juhendile:
Serum All sera are heat-inactivated at 56 °C for 30 minutes before use.
Seerum Kõik seerumid inaktiveeritakse enne kasutamist 56 °C juures 30 minuti jooksul.
Procedure The constant virus-varying serum neutralisation test on microtitre plates employs MDBK or other susceptible cells.
Töö käik Neutralisatsiooni testis, kus viiruse doos on konstantne, kasutatakse mikrotiiterplaatidel MDBK või muid vastuvõtlikke rakke.
The Colorado, Oxford or any other reference strain of the virus is used at 100 TCID50 per 0,025 ml; inactivated undiluted serum samples are mixed with an equal volume (0,025 ml) of virus suspension.
Tuleks kasutada Colorado, Oxfordi vm referenttüve kontsentratsiooniga 100 TCID50 0,025 ml kohta; inaktiveeritud lahjendamata seerumiproovid segatakse sama koguse (0,025 ml) viirussuspensiooniga.
The virus/serum mixtures are incubated for 24 hours at 37 °C in the microtitre plates before the MDBK cells are added.
Enne MDBK rakkude lisamist inkubeeritakse viiruse ja seerumi segusid 24 tundi 37 °C juures mikrotiiterplaadil.
Cells are used at a concentration which forms a complete monolayer after 24 hours.
Kasutatakse sellist rakkude kontsentratsiooni, mille puhul täielik monokiht tekib 24 tunniga.