natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Determination of the percentage of 2-glyceryl monopalmitate’;
2-glütserüülmonopalmitaadi protsendilise sisalduse määramine”.
‘DETERMINATION OF FREE FATTY ACIDS, COLD METHOD’;
„VABADE RASVHAPETE MÄÄRAMINE KÜLMMEETODIL”.
Annex IV is replaced by the following:
IV lisa asendatakse järgmiselt:
DETERMINATION OF WAX CONTENT BY CAPILLARY COLUMN GAS CHROMATOGRAPHY
VAHADE SISALDUSE MÄÄRAMINE KAPILLAARGAASIKROMATOGRAAFIA ABIL
SUBJECT
EESMÄRK
This method describes a process for determining the wax content of olive oils.
Käesoleva meetodiga määratakse vahade sisaldust oliiviõlides.
Waxes are separated according to the number of their carbon atoms.
Vahade eraldamine toimub süsinikuaatomite arvu alusel.
The method may be used in particular to distinguish between olive oil obtained by pressing and that obtained by extraction (olive-residue oil).
Meetodit võib eeskätt kasutada pressimisega saadud oliiviõlide eristamiseks ekstraheerimisega saadud õlidest (oliivijääkõlidest).
25 ml Erlenmeyer flask.
Erlenmeyeri kolb.
Glass column for gas chromatography, internal diameter 15,0 mm, length 30 to 40 cm, fitted with a stopcock.
Klaasist gaasikromatograafiakolonn sisediameeteriga 15,0 mm ja pikkusega 30–40 cm, mis on varustatud kraaniga.
Suitable gas chromatograph with a capillary column, equipped with a system for direct introduction into the column comprising the following:
Sobiv kapillaarkolonniga gaasikromatograaf, mis on varustatud süsteemiga, mis võimaldab otse kolonni süstimist ja koosneb järgmistest osadest:
Thermostatic chamber for the columns, equipped with a temperature programmer.
programmeeritava temperatuuriga termostaatkapp kolonnide jaoks;
Cold injector for direct introduction into the column.
külminjektor proovi viimiseks otse kolonni;
Flame ionisation detector and converter-amplifier.
leekionisatsioondetektor ja muundurvõimend;
10 μl microsyringe for on-column injection, equipped with a hardened needle.
mikrosüstal otse kolonni süstimiseks, mille nõelal on tugevdatud pinnakiht.
Electrovibrator.
Elektriline vibraator.
Rotary evaporator.
Pöördaurusti.
Muffle furnace.
Muhvelahi.
Analytical balance with guaranteed precision of ± 0,1 mg.
Analüütiline kaal, kaalumistäpsus ± 0,1 mg.
Normal laboratory glassware.
Tavalised klaasist laborinõud.
REAGENTS
REAKTIIVID
Silica gel with a granule size of between 60 and 200 μm.
Silikageel, tera suurus 60–200 μm.
Place the gel in the furnace at 500 °C for at least four hours.
Geel pannakse vähemalt neljaks tunniks ahju temperatuuriga 500 °C.
After cooling, add 2 % water in relation to the quantity of sampled silica gel.
Lastakse jahtuda, seejärel lisatakse vett koguses, mis vastab 2 %le silikageeli massist.
Shake well to homogenise the slurry.
Segatakse korralikult ühtlase massi saamiseni.
Keep in darkness for at least 12 hours prior to use.
Hoitakse pimedas vähemalt 12 tundi enne kasutamist.
n-hexane, for chromatography.
n-heksaan, kromatograafias kasutamiseks.
Ethyl ether, for chromatography.
Etüüleeter, kromatograafias kasutamiseks.
n-heptane, for chromatography.
n-heptaan, kromatograafias kasutamiseks.
Sudan 1 (1-phenyl-azo-2-naphthol).
Sudaan 1 (1-fenüül-aso-2-naftool).
Carrier gas: hydrogen or helium, gas-chromatographic purity.
Kandegaas: puhas vesinik või heelium, gaasikromatograafias kasutamiseks.
Auxiliary gases:
Abigaasid:
pure hydrogen for gas chromatography,
puhas vesinik, gaasikromatograafias kasutamiseks;
pure air for gas chromatography.
puhas õhk, gaasikromatograafias kasutamiseks.
Preparation of the chromatographic column.
Kromatograafiakolonni valmistamine
Transfer the prepared sample to the chromotography column using two 2 ml portions of n-hexane (4.2).
Eelkirjeldatud viisil ettevalmistatud proov kantakse kromatograafiakolonni, kasutades kahte n-heksaani (4.2) kogust mahuga à 2 ml.
Allow the solvent to flow away until it reaches 1 mm above the upper level of the absorbant then percolate a further 70 ml of n-hexane in order to eliminate the n-alkanes naturally present.
Lahustil lastakse voolata, kuni absorbendi ülemise pinna kohale jääb 1 mm vedelikku, seejärel voolutatakse kolonni veel 70 ml n-heksaaniga, et eemaldada proovis tavaliselt sisalduvad n-alkaanid.
Then start the chromatographic elution by collecting 180 ml of the mixture of n-hexane/ethyl ether (ratio 99:1), keeping a rate of flow of approximately 15 drops every 10 seconds.
Seejärel alustatakse voolutamist; kogutakse 180 ml n-heksaani-etüüleetri segu (vahekorras 99:1) voolukiirusel umbes 15 tilka 10 sekundi jooksul.
Elution of the sample must be carried out at a room temperature of 22 ± 4 °C.
Proovi elueerimine toimub toatemperatuuril 22 ± 4 °C.
The n-hexane/ethyl ether mixture (99:1) must be prepared every day.
n-heksaani-dietüüleetri segu (99:1) tuleb valmistada igal päeval uuesti.
For a visual check on the correct elution of the waxes 100 μl of 1 % Sudan in the elution mixture can be added to the sample in solution.
Vahade nõuetekohase elueerimise visuaalseks kontrollimiseks võib proovi lahusele lisada 100 μl 1 % sudaani lahust elueerimissegus.
Since the colourant has an intermediate retention, between waxes and triglycerides, when the coloration has reached the bottom of the column the elution should be suspended because all the waxes will have been eluted.
Värvaine retentsiooniaeg on vahade ja triglütseriidide retentsiooniaegade vahel; kui värvaine jõuab kromatograafiakolonni põhjani, tuleb elueerimine peatada, sest kõik vahad on elueeritud.
Dry the fraction thus obtained in a rotary evaporator (3.6.) until virtually all the solvent has been eliminated.
Niimoodi saadud fraktsiooni aurustatakse pöördaurustis (3.6), kuni peaaegu kogu lahusti on eemaldatud.
Eliminate the final 2 ml of solvent with the aid of a weak current of nitrogen; then add 2-4 ml n-heptane.
Viimased 2 ml lahustit eemaldatakse nõrga lämmastikuvoolu abil, seejärel lisatakse 2–4 ml n-heptaani.
Analysis by gas chromatography
Gaasikromatograafiline analüüs
Preparatory work
Ettevalmistustööd
Fit the column to the gas chromatograph (3.3) by connecting the inlet port to the on-column system and the outlet port to the detector.
Kolonn pannakse gaasikromatograafi (3.3); sisselaskekoht ühendatakse on-column-süsteemiga ja väljalaskekoht detektoriga.
Perform a general check on the GC apparatus (operation of gas circuits, detector and recorder efficiency, etc.).
Kontrollitakse, et gaasikromatograafiaseade oleks töökorras (gaasijuhtmete lekkekindlus, detektori tundlikkus, meerik jne).
If the column is being used for the first time it should be conditioned first.
Kui kolonni kasutatakse esimest korda, on soovitatav see tasakaalustada.
Pass a little gas through the column, then turn on the GC apparatus.
Läbi kolonni hakatakse nõrga joana juhtima gaasi, seejärel lülitatakse gaasikromatograafiaseade sisse.
Heat gradually until 350 °C is reached after about four hours.
Järk-järgult, 4 tunni jooksul, tõstetakse temperatuur 350 °C-ni.
Maintain that temperature for at least two hours then regulate the apparatus to operating conditions (set gas flow, light flame, connect to the electronic recorder (3.3.4), set temperature of column chamber, detector, etc.) and record the signal at a sensitivity at least twice as high as that required for the analysis.
Sellist temperatuuri hoitakse vähemalt kaks tundi, seejärel reguleeritakse seade töörežiimile (reguleeritakse gaasivoolu kiirust, leegi süüdet, ühendatakse elektrilise meerikuga (3.3.4), reguleeritakse kolonni termostaatkapi temperatuuri, detektorit jne). Registreeritakse signaal vähemalt kaks korda suuremal tundlikkusel, kui on vaja analüüsi läbiviimiseks.
The baseline must be linear, with no peaks of any kind, and must not show any deviation.
Saadav nulljoon peaks olema sirge, ilma igasuguste piikideta, ning see ei tohiks kummalegi poole triivida.
A negative straight-line drift indicates that the column connections are not tight; a positive drift that the column has not been sufficiently conditioned.
Negatiivne sirge triiv näitab, et kolonn ei ole korralikult ühendatud; positiivne triiv osutab kolonni puudulikule tasakaalustamisele.
Choice of operating conditions
Töötingimuste valimine
The operating conditions are generally as follows:
Töötingimused on reeglina järgmised:
column temperature:
kolonni temperatuur:
20 °C/minute
20 °C/min
5 °C/minute
5 °C/min
Initially 80 °C
algul 80 °C
detector temperature: 350 °C;
detektori temperatuur: 350 °C;
quantity of substance injected: 1 μl of the n-heptane solution (2-4 ml);
sisestatava aine kogus: 1 μl lahust n-heptaanis (2–4 ml);
carrier gas: helium or hydrogen at the correct linear velocity for the gas selected (see Appendix);
kandegaas: heelium või vesinik asjaomase gaasi optimaalsel voolukiirusel (vt liide);
instrument sensitivity: suitable for the following conditions:
seadme tundlikkus peab vastama järgmistele tingimustele:
The conditions may be modified according to the characteristics of the column and the GC apparatus to obtain separation of all the waxes and a satisfactory peak resolution (see figure); the internal standard C32 retention time must be 18 ± 3 minutes.
Olenevalt kolonni ja gaasikromatograafi omadustest võib tingimusi muuta, et saavutada kõikide vahade eraldumine, piikide rahuldav lahutus (vt joonis) ja et C32 sisestandardi retentsiooniaeg oleks 18 ± 3 minutit.
The most representative wax peak must be at least 60 % of the full scale.
Vaha kõige tüüpilisem piik peab olema vähemalt 60 % täisskaalast.
The peak integration parameters must be established so as to obtain a correct evaluation of the areas of the peaks in question.
Piigi integreerimisparameetrid määratakse kindlaks nii, et uuritavate piikide pindalasid oleks võimalik õigesti hinnata.
Given the high final temperature, a positive drift of no more than 10 % of the full scale is permitted.
NB: Arvesse võttes kõrget lõpptemperatuuri, on lubatav positiivne triiv, mis ei tohi ületada 10 % skaala ulatusest.
Performance of the analysis
Analüüsi läbiviimine
Sample 1 μl of the solution using the 10 μl microsyringe; withdraw the syringe plunger so that the needle is empty.
mikrosüstlasse võetakse 1 μl lahust; kolb tõmmatakse tagasi, kuni nõel on tühi.
Place the needle in the injector and after 1-2 seconds inject quickly; remove the needle slowly after about five seconds.
Nõel viiakse injektsioonisüsteemi ning 1–2 sekundi pärast tehakse kiire süst. Umbes 5 sekundi pärast tõmmatakse nõel ettevaatlikult välja.
Record until the waxes are completely eluted.
Detektori signaali registreeritakse seni, kuni vahad on täielikult elueeritud.
The base line must always satisfy the required conditions.
Nulljoon peab kogu aeg vastama nõuetele.
Identification of peaks
Piikide määramine
Identification of the different peaks should be based on retention time by comparison with wax mixtures of known retention times analysed under the same conditions.
Piigid määratakse retentsiooniaja põhjal, võrdlusest samadel tingimustel analüüsitud teadaoleva retentsiooniajaga vahade segudega.
The figure is a chromatogram of the waxes of a virgin olive oil.
Joonisel on esitatud neitsioliiviõli vahade kromatogramm.
Evaluation of quantity
Kvantitatiivne hindamine
Calculate the areas of the peaks of the internal standard and the aliphatic esters of C40 to C46 using the integrator.
Sisestandardile ja alifaatsetele estritele C40–C46vastavate piikide pindalad arvutatakse integraatori abil.
Calculate the wax content of each of the esters in mg/kg fat using the formula:
Iga estri vahasisaldus milligrammides rasvaine kilogrammi kohta arvutatakse järgmiselt:
area of each ester’s peak, in square millimetres;
iga estri piigi pindala ruutmillimeetrites;
area of the internal standard’s peak, in square millimetres;
sisestandardi piigi pindala ruutmillimeetrites;
mass of added internal standard, in milligrams;
lisatud sisestandardi mass milligrammides;
m mass of sample for analysis, in grams.
m määramisel kasutatud proovi mass grammides.
Indicate the total of the contents of the various C40 to C46 waxes in mg/kg fat (ppm).
Märgitakse erinevate C40- kuni C46-vahade sisalduste summa milligrammides rasva kilogrammi kohta (ppm). NB.
The components to be quantified refer to the peaks with carbon pair numbers between esters C40 and C46, using the example of the olive oil wax chromatogram shown in the figure below.
Määratavate koostisosade puhul osutatakse vahade piikidele, mis paiknevad paarisarvulise süsinikuaatomite arvuga estrite C40 ja C46 vahel, vastavalt järgneval joonisel esitatud oliiviõli vahade kromatogrammile.
If ester C46 appears twice, it is recommended that to identify it the fraction of the waxes of an olive-residue oil should be analysed where the C46 peak is easy to identify because it is in the clear majority.
Kui ester C46 esineb kahekordsena, on soovitatav selle identifitseerimiseks analüüsida pressimisjääkide õli vahafraktsiooni, kus C46 piiki on kerge ära tunda, sest see on oluliselt suurem.
The results should be expressed to one decimal place.
Tulemused väljendatakse ühe kümnendkoha täpsusega.
Chromatogram of the waxes of an olive oil
Oliiviõli vahade kromatogramm
Key:
Tähistused:
Lauryl arachidate
laurüülarahidaat
Diterpenic esters
diterpeenestrid
2 + 2′ C40 esters
2 + 2′ estrid C40
3 + 3′ C42 esters
3 + 3′ estrid C42
4 + 4′ Esters C44
4 + 4′ estrid C44
esters
estrid C46
Sterol esters and triterpenic alcohol
steroolestrid ja triterpeenalkoholid.
After elution of the sterol esters the chromatogram trace must not show any significant peaks (triglycerides).
Pärast steroolestrite väljumist ei tohi kromatogrammil enam ilmuda märkimisväärseid piike (triglütseriide).
Determination of the linear velocity of the gas
Gaasi voolukiiruse määramine
The linear velocity in cm/s is given by the formula L/tM, where L is the length of the column in cm and tM the time measured in seconds.
Voolukiirus (cm/s) määratakse valemiga L/tM, kus L on kolonni pikkus sentimeetrites ja tM on stopperiga mõõdetud aeg sekundites.
‘ANNEX VII
„VII LISA
DETERMINATION OF THE PERCENTAGE OF 2-GLYCERYL MONOPALMITATE
2-GLÜTSERÜÜLMONOPALMITAADI PROTSENDILISE SISALDUSE MÄÄRAMINE
PURPOSE AND SCOPE
EESMÄRK JA RAKENDAMISALA
This method describes the analysis procedure for determining the percentage of palmitic acid in position 2 of the triglycerides by evaluating 2-glyceryl monopalmitate.
Käesoleva meetodiga määratakse triglütseriidide 2. positsioonis oleva palmitiinhappe protsendilist sisaldust 2-glütserüülmonopalmitaadi hindamise abil.
This method can be applied to liquid vegetable oils at ambient temperature (20 °C).
Seda meetodit saab kasutada toatemperatuuril (20 °C) vedelate taimeõlide puhul.
After preparation the oil sample is subjected to the action of pancreatic lipase: partial and specific hydrolysis in positions 1 and 3 of the triglyceride molecule causes monoglycerides to appear in position 2.
Pärast õliproovi ettevalmistamist lastakse proovil reageerida pankrease lipaasiga – toimub triglütseriidi molekuli spetsiifiline osaline hüdrolüüs 1. ja 3. positsioonis, mille tulemusena tekivad 2-monoglütseriidid.
The percentage of 2-glyceryl monopalmitate in the monoglyceride fraction is determined after silylation by capillary-column gas chromatography.
2-glütserüülmonopalmitaadi sisaldus monoglütseriidi fraktsioonis määratakse pärast silaanimist kapillaarkolonn-gaasikromatograafia abil.
APPARATUS AND MATERIALS
KASUTATAVAD SEADMED JA MATERJALID
25 ml Erlenmeyer flask
Erlenmeyeri kolb
100, 250 and 300 ml beakers
100-, 250- ja 300milliliitrised keeduklaasid
Glass chromatograph column, internal diameter 21-23 mm, length 400 mm, fitted with a sintered glass disc and a stopcock
Klaasist kromatograafiakolonn sisediameetriga 21–23 mm ja pikkusega 400 mm, mis on varustatud klaasfilterketta ja kraaniga
10, 50, 100 and 200 ml measuring cylinders
Gradueeritud 10-, 50-, 100- ja 200milliliitrised mõõtesilindrid
100 and 250 ml flasks
100- ja 250milliliitrised ümarkolvid
Rotary evaporator
Pöördaurusti
10 ml conical-bottomed centrifuge tubes with groundglass stopper
lihvkorgiga tsentrifuugitopsid, millel on kooniline põhi
Centrifuge for 10 and 100 ml tubes
Tsentrifuug tööks 10- ja 100milliliitriste tsentrifuugitopsidega
Thermostat permitting a stable temperature of 40 ± 0,5 °C
Termostaat, mis võimaldab hoida temperatuuri 40 ± 0,5 °C
1 and 2 ml graduated pipettes
Gradueeritud 1- ja 2milliliitrised pipetid
1 ml hypodermic syringe
hüpodermiline süstal
100 μl microsyringe
mikrosüstal
1000 ml funnel
1000 milliliitrine jaotuslehter
Capillary gas chromatograph with an on-column cold injector for direct injection of the sample into the column and a furnace able to maintain the selected temperature to approximately 1 °C
Kapillaarkolonniga gaasikromatograaf, mis on varustatud süsteemiga, mis võimaldab proovi otse külmalt kolonni süstimist, ja ahjuga, mis hoiab soovitud temperatuuri 1 °C täpsusega
On-column cold injector for direct injection of the sample into the column
Külminjektor proovi viimiseks otse kolonni
Flame ionisation detector and electrometer
Leekionisatsioondetektor ja elektromeeter
Recorder-integrator adapted to the electrometer with a response rate no greater than 1 sec and a variable paper roll rate
Koos elektromeetriga kasutatav integraatormeerik, mille reageerimisaeg on kuni 1 sekund ning mille paberi kiirust saab muuta
Capillary column made of glass or fused silica 8-12 metres long, 0,25-0,32 mm internal diameter, covered with methylpolysiloxane or phenyl methylpolysiloxane 5 %, 0,10-0,30 μm thick, useable at 370 °C
Klaasist või sulatatud ränidioksiidist kapillaarkolonn pikkusega 8–12 m ja sisediameetriga 0,25–0,32 mm, mis sobib tööks kuni 370 °C juures ja mis on seestpoolt kaetud 5 % metüülpolüsiloksaani või fenüül-metüülpolüsiloksaani kihiga, mille paksus on 0,10–0,30 μm
10 μl microsyringe fitted with a hardened needle, at least 7,5 cm long for direct on-column injection.
Vähemalt 7,5 cm pikkune 10mikroliitrine mikrosüstal otse kolonni süstimiseks, mille nõelal on tugevdatud pinnakiht
Silica gel with a grain size of between 0,063 and 0,200 mm (70/280 mesh) prepared as follows: Place the silica gel in a porcelain capsule, dry in an incubator at 160 °C for four hours, then leave to cool at room temperature in a desiccator.
Silikageel tera suurusega 0,063–0,200 mm (sõelaava 70–280), mis on ette valmistatud järgmisel viisil. Silikageel pannakse portselankaussi, kuivatatakse kuivatuskapis 160 °C juures 4 tundi, lastakse eksikaatoris jahtuda toatemperatuurini.
Add water equivalent to 5 % of the mass of the silica gel as follows: Weigh 152 g silica gel into an Erlenmeyer flask then add 8 g of distilled water, stopper and shake gently to distribute the water evenly.
Lisatakse vett koguses, mis vastab 5 % le silikageeli massist, tehes seda järgmisel viisil: 500milliliitrisesse Erlenmeyeri kolbi kaalutakse 152 g silikageeli ja lisatakse 8 g destilleeritud vett, suletakse korgiga ja segatakse ettevaatlikult, et tagada vee ühtlane jaotumine.
Leave to stand for at least 12 hours before use.
Enne kasutamist lastakse seista vähemalt 12 tundi.
n-hexane (for chromatography)
n-heksaan, kromatograafias kasutamiseks
Isopropanol
Isopropanool
Isopropanol, 1/1 (v/v) aqueous solution
Isopropanooli vesilahus (mahusuhe 1:1)
Pancreatic lipase.
Pankrease lipaas.
It must have an activity of between 2,0 and 10 lipase units per mg. (Pancreatic lipases with an activity of between 2 and 10 units per mg enzyme are commercially available.)
Kasutatava lipaasi aktiivsus peab olema vahemikus 2,0–10 lipaasiühikut mg kohta (müügilolevate lipaaside aktiivsus on 2–10 ühikut ensüümi mg kohta)
Buffer solution of trishydroxymethylaminomethane: 1 M aqueous solution adjusted to pH 8 (potentiometric control) by conc. HCl (1/1 v/v)
Puhverlahus: 1 M tris-hüdroksümetüülaminometaani lahuse pH reguleeritakse potentsiomeetriga kontrollides väärtusele 8, lisades selleks kontsentreeritud soolhapet (mahusuhe 1:1)
Enzyme-quality sodium cholate, 0,1 % aqueous solution (this solution must be used within two weeks of its preparation)
Naatriumkolaat, ensüümikvaliteediga, 0,1 % vesilahus (lahus tuleb ära kasutada 15 päeva jooksul pärast valmistamist)
Calcium chloride, 22 % aqueous solution
Kaltsiumkloriid, 22 % vesilahus
Diethyl ether for chromatography
Dietüüleeter, kromatograafias kasutamiseks
Developer solvent: mixture of n-hexane/diethyl ether (87:13 v:v)
Elueerimislahus: n-heksaani ja dietüüleetri segu (mahusuhe 87:13)
Sodium hydroxide, 12 % by weight solution
Naatriumhüdroksiid, 12massiprotsendiline lahus
Phenolphthalein, 1 % solution in ethanol
Fenoolftaleiin, 1 % lahus etanoolis
Carrier gas: hydrogen or helium, for gas chromatography
Kandegaas: vesinik või heelium gaasikromatograafias kasutamiseks
Auxiliary gases: hydrogen, 99 % minimum purity, free from moisture and organic substances, and air, for gas chromatography, of the same purity
Abigaasid: kuiv vesinik, vähemalt 99 % puhtusega, ei tohi sisaldada orgaanilisi aineid; õhk kromatograafias kasutamiseks, sama puhtusastmega
Other silylation reagents may be used, particularly bis-trimethylsilyl trifluoracetamide + 1 % trimethylchlorosilane, diluted with an identical volume of anhydrous pyridine.)
Kasutada võib ka muid silaanimisreaktiive, näiteks bistrimetüülsilüültrifluoroatsetamiid + 1 % trimetüülklorosilaani, mis on lahustatud samas koguses veevabas püridiinis.)
Reference samples: pure monoglycerides or monoglyceride mixtures with a known percentage composition similar to that of the sample.
Standardproovid: puhtad monoglütseriidid või proovile sarnaste mahusuhetega monoglütseriidide segud, mille teadaolevad mahusuhted on samad kui proovil.
METHOD
TÖÖ KÄIK
Oils with a free acidity of less than 3 % do not need to be neutralised before chromatography on a silica gel column.
Õlisid, milles vabade hapete sisaldus on alla 3 %, ei ole vaja neutraliseerida enne kromatografeerimist silikageelkolonnis.
Oils with a free acidity of more than 3 % must be neutralised as per point 5.1.1.1.
Õlid, mille vabade hapete sisaldus on suurem kui 3 %, tuleb neutraliseerida vastavalt punktile 5.1.1.1.
Pour 50 g of oil and 200 ml n-hexane into the 1000 ml funnel (3.13).
1000 milliliitrisesse jaotuslehtrisse (3.13) kallatakse 50 g õli ja 200 ml n-heksaani.
Add 100 ml of isopropanol and a quantity of 12 % sodium hydroxide solution (4.11) equivalent to the free acidity of the oil plus 5 %.
Lisatakse 100 ml isopropanooli ja selline kogus 12 % naatriumhüdroksiidi (4.11), mis on 5 % suurem kui vabade hapete kogus õlis.
Shake vigorously for one minute.
Loksutatakse tugevasti 1 minuti jooksul.
Add 100 ml of distilled water, shake again and leave to stand.
Lisatakse 100 ml destilleeritud vett, loksutatakse uuesti ja lastakse seista.
After decanting, remove the lower layer containing the soaps.
Pärast kihistumist eemaldatakse alumine kiht, mis sisaldab seepe.
Remove any intermediate layers (mucilage and insoluble substances).
Eemaldatakse ka võimalikud vahepealsed kihid (lima ja mittelahustuvad ained).
Wash the hexane solution of the neutralised oil with successive portions of 50-60 ml of the 1/1 (v/v) isopropanol/water solution (4.4) until the pink colouration of the phenolphthalein disappears.
Neutraliseeritud õli lahust heksaanis pestakse järjestikuste 50–60milliliitriste isopropanooli vesilahuse (mahusuhe 1:1) (4.4) kogustega kuni fenoolftaleiini roosa värvuse kadumiseni.
Remove most of the hexane by vacuum distillation (use a rotary evaporator, for example) and transfer the oil into a 100 ml flask (3.5).
Vaakumdestilleerimisega (näiteks pöördaurusti abil) eemaldatakse suurem osa heksaanist ja õli kantakse üle 100milliliitrisesse ümarkolbi (3.5).
Dry the oil in vacuum until the solvent is completely removed.
Õli kuivatatakse vaakumis kuni lahusti täieliku eemaldamiseni.
After that procedure is completed, the acidity of the oil should be less than 0,5 %.
Selle toimingu tulemusena peab õli happelisus jääma alla 0,5 %.
Put 1,0 g of the oil prepared as above into a 25 ml Erlenmeyer flask (3.1) and dissolve in 10 ml of developer mixture (4.10).
1,0 g eespool kirjeldatud viisil ettevalmistatud õli pannakse 25milliliitrisesse Erlenmeyeri kolbi (3.1) ja lahustatakse 10 ml elueerimislahuses (4.10).
Leave the solution to stand for at least 15 minutes before silica gel column chromatography.
Enne kromatografeerimist silikageelkolonnis lastakse lahusel vähemalt 15 minutit seista.