natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Σημείωση: Είναι δυνατή η λειτουργία της στήλης σε θερμοκρασία περιβάλλοντος, υπό τον όρο ότι η θερμοκρασία αυτή δεν παρουσιάζει διακυμάνσεις μεγαλύτερες του 1 °C, ειδάλλως ο χρόνος κατακράτησης του CMPA παρουσιάζει μεγάλη μεταβλητότητα.
Eluent A: 150 ml of acetonitrile (CH3CN), 20 ml of isopropanol (CH3CHOHCH3), and 1,00 ml of trifluoroacetic acid (TFA, CF3COOH) are placed in a 1000 ml volumetric flask.
Το δείγμα φυλάσσεται σε συνθήκες που αποκλείουν τη φθορά ή τη μεταβολή της σύστασης.
Make up to 1000 ml with water.
Σε σωλήνα φυγοκέντρου (6.2) ή κατάλληλη φιάλη με πώμα (50 ml) ζυγίζονται 2,00 ±0,001 g δείγματος δοκιμής.
Eluent B: 550 ml of acetonitrile, 20 ml of isopropanol and 1,00 ml of TFA are placed in a 1000 ml volumetric flask.
Σημείωση: Στην περίπτωση των μειγμάτων, ζυγίζεται ποσότητα δείγματος δοκιμής τόση ώστε το τμήμα δείγματος μετά την απολίπανση να αντιστοιχεί σε 2,00 g.
Conservation of the column
Προστίθενται, σε διάστημα δύο λεπτών με σταθερό ρυθμό, 10,0 ml διαλύματος τριχλωροξικού οξέος (5.1) θερμοκρασίας περίπου 25 °C υπό ζωηρή ανάδευση στον μαγνητικό αναδευτήρα (6.4).
After the analyses the column is flushed with eluent B (via a gradient) and subsequently flushed with acetonitrile (via a gradient for 30 minutes).
Ακολουθεί φυγοκέντρηση (6.2) στα 2200 g επί 10 λεπτά ή διήθηση μέσω χάρτινου ηθμού (6.6), ενώ απορρίπτονται τα πρώτα 5 ml του διηθήματος.
The column is stored in acetonitrile.
Η μέθοδος HPLC ανεστραμμένης φάσης αποκλείει τη δυνατότητα ψευδοθετικών αποτελεσμάτων λόγω της παρουσίας σκόνης όξινου βουτυρογάλακτος.
Skimmed milk powder meeting the requirements for public storage (i.e. [0]).
Πριν από την ανάλυση με HPLC ανεστραμμένης φάσης, πρέπει να βελτιστοποιούνται οι συνθήκες βαθμίδωσης.
The same skimmed milk powder adulterated with 5 % (m/m) rennet-type whey powder of standard composition (i.e. [5]).
Για συστήματα βαθμίδωσης με νεκρό όγκο περίπου 6 ml (ο όγκος από το σημείο όπου συναντώνται οι διαλύτες μέχρι και τον όγκο του βρόχου του συστήματος έγχυσης), ο βέλτιστος χρόνος κατακράτησης είναι 26 ± 2 λεπτά για το CMP Α.
The same skimmed milk powder adulterated with 50 % (m/m) rennet-type whey powder of standard composition (i.e. [50])
Στην περίπτωση των συστημάτων βαθμίδωσης με μικρότερο νεκρό όγκο (π.χ. 2 ml) πρέπει να χρησιμοποιούνται ως βέλτιστος χρόνος κατακράτησης τα 22 λεπτά
Graduated pipettes, allowing delivery of 10 ml (ISO 648, Class A, or ISO/R 835), or a dispensing system capable of delivering 10,0 ml in two minutes
Λαμβάνονται διαλύματα των πρότυπων δειγμάτων (5.4) με και χωρίς γλυκό ορό γάλακτος σε αναλογία 50 %.
Binary gradient pumping system
Εισάγονται 100 μl υπερκειμένου ή διηθήματος (8.3.3) στη συσκευή HPLC, η οποία λειτουργεί στις συνθήκες διερευνητικής βαθμίδωσης που εμφαίνονται στον πίνακα 1.
Injector, hand or automatic, with a 100 μl capacity
Πίνακας 1
Agilent Technologies Zorbax 300 SB-C3 column (length 25 cm, 0,46 cm internal diameter) or an equivalent wide-pore silica based reversed-phase column
Συνθήκες διερευνητικής βαθμίδωσης για τη βελτιστοποίηση της χρωματογραφίας
Variable wavelength UV detector, permitting measurements at 210 nm (if necessary, a higher wavelength up to 220 nm may be used) with a sensitivity of 0,02 Å
Χρόνος
Integrator capable of setting the integration to common baseline or valley-to-valley
Ροή
Note: Operation of the column at room temperature is possible, provided that the room temperature does not fluctuate more than 1 °C, otherwise too much variation in the retention time of CMPA takes place.
Καμπύλη
Store the sample in conditions which preclude any deterioration or change in composition.
γραμμική
Weigh 2,00 ± 0,001 g of test sample into a centrifuge tube (6.2) or suitable stoppered flask (50 ml).
Με σύγκριση των δύο χρωματογραφημάτων πρέπει να φαίνεται η θέση της κορυφής του CMPΑ.
Note: In the case of mixtures, weigh such an amount of the test sample that the defatted sample portion corresponds to 2,00 g.
Με τη βοήθεια του επόμενου τύπου είναι δυνατόν να υπολογιστεί η αρχική σύσταση του διαλύτη που θα χρησιμοποιηθεί για την κανονική βαθμίδωση (βλέπε 8.4.3) % B = 10 – 2,5 + (13,5 + (RTcmpA – 26) / 6)*30 / 27 % B = 7,5 + (13,5 + (RTcmpA – 26) / 6)*1,11
Add 10,0 ml of the trichloroacetic acid solution of ca.
Όπου:
25 °C (5.1) constantly over two minutes, while stirring vigorously with the aid of the magnetic stirrer (6.4).
RT cmpA : ο χρόνος κατακράτησης του CMPΑ στη διερευνητική βαθμίδωση
Centrifuge (6.2) 2200 g for 10 minutes, or filter through paper (6.6), discarding the first 5 ml of filtrate
10 : το αρχικό % Β της διερευνητικής βαθμίδωσης
The reversed-phase HPLC method excludes the possibility false-positive results due to the presence of acid buttermilk powder.
2,5 : το % Β στο μέσο της διαδρομής μείον το % Β στην έναρξη της κανονικής βαθμίδωσης
Before the reversed phase HPLC-analysis is carried out, the gradient conditions should be optimised.
13,5 : ο χρόνος στο μέσο της διαδρομής στη διερευνητική βαθμίδωση
A retention time of 26 ± 2 minutes for CMPA is optimal for gradient systems having a dead volume of about 6 ml (volume from the point where the solvents come together to the volume of the injector loop, inclusive).
26 : απαιτούμενος χρόνος κατακράτησης για το CMPΑ
Gradient systems having a lower dead volume (e.g. 2 ml) should use 22 minutes as an optimal retention time
6 : λόγος των κλίσεων της διερευνητικής και της κανονικής βαθμίδωσης
Take solutions of the standard samples (5.4) without and with 50 % rennet whey.
30 : το % Β στην έναρξη μείον το % Β στα 27 λεπτά της διερευνητικής βαθμίδωσης
Inject 100 μl of supernatant or filtrate (8.3.3) into the HPLC apparatus operating at the scouting gradient conditions given in Table 1.
27 : χρόνος διαδρομής της διερευνητικής βαθμίδωσης.
Table 1
Λήψη διαλυμάτων των δειγμάτων δοκιμής
Scouting gradient conditions for optimisation of the chromatography
Εισάγονται 100 μl υπερκειμένου ή διηθήματος (8.3.3), επακριβώς μετρημένα, στη συσκευή HPLC, η οποία λειτουργεί με ταχύτητα ροής 1,0 ml διαλύματος έκλουσης (5.2) ανά λεπτό.
Time
Η σύσταση του διαλύματος έκλουσης στην αρχή της ανάλυσης προκύπτει από το σημείο 8.4.2.
Flow
Προσεγγίζει συνήθως τον λόγο Α: Β = 76:24 (5.2).
Curve
Αμέσως μετά την έγχυση αρχίζει μια γραμμική βαθμίδωση που δίδει μετά από 27 λεπτά ποσοστό του Β μεγαλύτερο κατά 5 %.
linear
Στη συνέχεια αρχίζει μια γραμμική βαθμίδωση που οδηγεί σε σύσταση του διαλύματος έκλουσης 90 % Β σε διάστημα 5 λεπτών.
Comparison of the two chromatograms should reveal the location of the peak of CMPΑ.
Η σύσταση αυτή διατηρείται επί 5 λεπτά και, στη συνέχεια, μεταβάλλεται με γραμμική βαθμίδωση επί 5 λεπτά για να επανέλθει στην αρχική.
Using the formula given below, the initial solvent composition to be used for the normal gradient (see 8.4.3) can be calculated % B = 10 – 2,5 + (13,5 + (RTcmpA – 26) / 6) * 30 / 27 % B = 7,5 + (13,5 + (RTcmpA – 26) / 6) * 1,11
Ανάλογα με τον εσωτερικό όγκο του συστήματος αντλίας, η επόμενη έγχυση μπορεί να γίνει 15 λεπτά αφότου επιτευχθούν οι αρχικές συνθήκες.
Where:
Σημείωση 1.
RT cmpA : retention time of CMPΑ in the scouting gradient
Ο χρόνος κατακράτησης του CMPA πρέπει να είναι 26 ± 2 λεπτά.
10 : the initial % B of the scouting gradient
Τούτο μπορεί να επιτευχθεί με τη μεταβολή των αρχικών και των τελικών συνθηκών της πρώτης βαθμίδωσης.
2,5 : % B at midpoint minus % B at initial in the normal gradient
Ωστόσο η διαφορά του % Β για τις αρχικές και τις τελικές συνθήκες της πρώτης βαθμίδωσης παραμένει 5 %.
13,5 : midpoint time of the scouting gradient
Σημείωση 2.
26 : required retention time of CMPΑ
Τα διαλύματα έκλουσης πρέπει να απαερώνονται επαρκώς και επίσης να διατηρούνται απαερωμένα.
6 : ratio of slopes of the scouting and normal gradient
Αυτό είναι απαραίτητο για την καλή λειτουργία του βαθμιδωτού συστήματος αντλίας.
30 : % B at initial minus % B at 27 minutes in the scouting gradient
Η τυπική απόκλιση για τον χρόνο κατακράτησης που αντιστοιχεί στην κορυφή του CMPA πρέπει να είναι μικρότερη από 0,1 λεπτό (n = 10).
27 : run-time of the scouting gradient.
Σημείωση 3.
Take solutions of the test samples
Ανά πέντε δείγματα πρέπει να εισάγεται το δείγμα αναφοράς [5] και να χρησιμοποιείται για τον υπολογισμό νέου συντελεστή απόκρισης R (9.1.1).
Inject 100 μl of accurately measured supernatant or filtrate (8.3.3) into the HPLC apparatus operating at a flow rate of 1,0 ml of eluent solution (5.2) per minute.
Τα αποτελέσματα της χρωματογραφικής ανάλυσης του δείγματος δοκιμής [Ε] λαμβάνονται υπό μορφή χρωματογραφήματος, στο οποίο η κορυφή του CMPA ταυτοποιείται από τον οικείο χρόνο κατακράτησης των 26 λεπτών περίπου.
The composition of the eluent of the start of the analysis is obtained from 8.4.2.
Ο ολοκληρωτής (6.11.6) υπολογίζει αυτόματα το ύψος Η της κορυφής του CMPA.
It is normally close to A:B = 76:24 (5.2).
Σε κάθε χρωματογράφημα πρέπει να ελέγχεται η θέση της γραμμής βάσης.
Immediately after the injection a linear gradient is started, which results in a 5 % higher percentage of B after 27 minutes.
Εάν η γραμμή βάσης δεν βρίσκεται στη σωστή θέση, πρέπει να επαναλαμβάνεται η ανάλυση ή η ολοκλήρωση.
Subsequently a linear gradient is started, which brings the eluent composition to 90 % B in five minutes.
Σημείωση: Εάν η κορυφή του CMPA είναι επαρκώς διαχωρισμένη από τις υπόλοιπες κορυφές, χρησιμοποιείται η γραμμή βάσης μεταξύ των “κοιλάδων”.
This composition is maintained for five minutes, after which the composition is changed, via a linear gradient in five minutes to the initial composition.
Σε αντίθετη περίπτωση, φέρονται κάθετοι σε κοινή γραμμή βάσης, η οποία πρέπει να αρχίζει από ένα σημείο κοντά στην κορυφή του CMPA (συνεπώς, όχι από το σημείο t=0 λεπτά!).Χρησιμοποιείται ο ίδιος τύπος ολοκλήρωσης για το πρότυπο δείγμα και για τα δείγματα δοκιμής και, στην περίπτωση της κοινής γραμμής βάσης, ελέγχεται η σταθερότητά της για τα δείγματα δοκιμής και το πρότυπο δείγμα.
Depending on the internal volume of the pumping system, the next injection can be made 15 minutes after reaching the initial conditions.
Πριν από την ποσοτική ερμηνεία, είναι απαραίτητο να εξετάζεται η μορφή κάθε χρωματογραφήματος για να εντοπιστούν τυχόν ανωμαλίες που οφείλονται είτε σε ελαττωματική λειτουργία της συσκευής ή της στήλης είτε στην προέλευση και το είδος του αναλυθέντος δείγματος.
Note 1.
Εφαρμόζεται κατά γράμμα στα πρότυπα δείγματα (5.4.1 έως 5.4.2) η διαδικασία που περιγράφεται στα σημεία 8.2 έως 8.4.4.
The retention time of the CMPA should be 26 ± 2 minutes.
Χρησιμοποιούνται διαλύματα που έχουν παρασκευαστεί πρόσφατα, δεδομένου ότι τα CMP αποικοδομούνται σε περιβάλλον τριχλωροξικού οξέος 8 % σε θερμοκρασία περιβάλλοντος.
This can be achieved by varying the initial and end conditions of the first gradient.
Στους 4 °C το διάλυμα παραμένει σταθερό επί 24 ώρες.
However, the difference in the % B for the initial and end conditions of the first gradient shall remain 5 % B.
Στην περίπτωση μακρών σειρών αναλύσεων είναι σκόπιμο να χρησιμοποιείται ένας ψυχόμενος δίσκος δειγμάτων στο αυτόματο σύστημα έγχυσης.
Note 2.
Σημείωση: Σημείωση: Το σημείο 8.4.2 μπορεί να παραλειφθεί εάν το % Β στις αρχικές συνθήκες είναι γνωστό από προηγούμενες αναλύσεις.
The eluents should be degassed sufficiently and should also remain degassed.
Το χρωματογράφημα του δείγματος αναφοράς [5] πρέπει να είναι ανάλογο με το σχήμα.
This is essential for proper functioning of the gradient pumping system.
Στο σχήμα αυτό, πριν από την κορυφή του CMPA εμφανίζονται δύο μικρές κορυφές.
The standard deviation for the retention time of the CMPA peak should be smaller than 0,1 minutes (n = 10).
Είναι απαραίτητο να επιτυγχάνεται συγκρίσιμος διαχωρισμός.
Note 3.
Πριν από τον χρωματογραφικό προσδιορισμό στα δείγματα, εισάγονται 100 μl του προτύπου δείγματος χωρίς γλυκό ορό γάλακτος [0] (5.4.1)
Every five samples the reference sample [5] should be injected and used to calculate a new response factor R. (9.1.1).
Το χρωματογράφημα δεν πρέπει να παρουσιάζει κορυφή στον χρόνο κατακράτησης που αντιστοιχεί στην κορυφή του CMPA.
The results of the chromatographic analysis of the test sample (E) are obtained in the form of a chromatogram in which the CMPA peak is identified by its retention time of about 26 minutes
Προσδιορίζονται οι συντελεστές απόκρισης, R, με την εισαγωγή του ίδιου όγκου διηθήματος (8.5.1) με αυτόν των δειγμάτων.
The integrator (6.11.6) automatically calculates the peak height H of the CMPA peak.
Υπολογισμός του συντελεστή απόκρισης R:
The baseline location should be checked in every chromatogram.
Κορυφή CMPA: R = W/H
The analysis or the integration should be repeated if the baseline was incorrectly located.
R = ο συντελεστής απόκρισης της κορυφής του CMPA
Note: If the CMPA peak is sufficiently separated from other peaks valley-to-valley baseline allocation should be used, otherwise use dropping perpendiculars to a common baseline, which should have starting point close to the CMPA peak (thus not at t = 0 min!).Use for the standard and the samples the same type integration type and check in case of common baseline its consistency for the samples and the standard.
H = το ύψος της κορυφής του CMPA
It is essential to examine the appearance of each chromatogram prior to quantitative interpretation, in order to detect any abnormalities due either to malfunctioning of the apparatus or the column, or to the origin and nature of the sample analysed.
W = η ποσότητα ορού γάλακτος που περιέχεται στο πρότυπο δείγμα [5].
Apply exactly the procedure described from point 8.2 to point 8.4.4 to the standard samples (5.4.1 to 5.4.2).
Υπολογισμός της εκατοστιαίας αναλογίας σκόνης γλυκού ορού γάλακτος στο δείγμα
Use freshly prepared solutions, because CMP degrades in an 8 % trichloroacetic acid environment at room temperature.
W(E) = η κατά μάζα (m/m) εκατοστιαία αναλογία γλυκού ορού γάλακτος στο δείγμα [Ε].
At 4 °C the solution remains stable for 24 hours.
R = ο συντελεστής απόκρισης της κορυφής του CMPA (9.1.1)
In the case of long series of analyses the use of a cooled sample tray in the automatic injector is desirable
H(E) = το ύψος της κορυφής του CMPA του δείγματος (Ε)
Note: 8.4.2. may be omitted if the % B at initial conditions is known from previous analyses.
Εάν η τιμή W(Ε) υπερβαίνει το 1 % και η διαφορά μεταξύ του χρόνου κατακράτησης και του αντίστοιχου χρόνου του πρότυπου δείγματος [5] είναι μικρότερη από 0,2 λεπτά, το δείγμα περιέχει στερεό υπόλειμμα γλυκού ορού γάλακτος.
The chromatogram of the reference sample [5] should be analogous to Figure.
Δεν έχει προσδιοριστεί.
In this figure the CMPA peak is preceded by two small peaks.
Γραμμικότητα
It is essential to obtain a similar separation.
Στο πεδίο τιμών εκατοστιαίας αναλογίας γλυκού ορού γάλακτος 0 έως 16 % πρέπει να προκύπτει γραμμική σχέση με συντελεστή συσχέτισης μεγαλύτερο του 0,99.
Prior to chromatographic determination of the samples inject 100 μl of the standard sample without rennet whey [0] (5.4.1)
Το όριο 1 % περιλαμβάνει την αβεβαιότητα λόγω αναπαραγωγιμότητας.
The chromatogram should not show a peak at the retention time of the CMPA peak.
πρότυπο δείγμα Ni –4.6
Determine the response factors R by injecting the same volume of filtrate (8.5.1) as used for the samples.
Απορρόφηση (220 nm)
Calculation of the response factor R:
χρόνος (λεπτά)
CMPA peak: R = W/H
Προστίθενται τα ακόλουθα παραρτήματα:
R = the response factor of the CMPA peak
ΠΑΡΑΡΤΗΜΑ VI
H = the height of the CMPA peak
Μέθοδοι ανάλυσης βουτύρου στο πλαίσιο ιδιωτικής αποθεματοποίησης
W = the quantity of whey in the standard sample [5].
Στερεά υπολείμματα χωρίς λίπος (εξαιρουμένου του αλατιού)
Calculation of the percentage of rennet whey powder in the sample
Αλάτι
W(E) = the percentage (m/m) of rennet whey in the sample (E).
ΠΑΡΑΡΤΗΜΑ VIII
Not determined.
Μέθοδοι ανάλυσης τυριών στο πλαίσιο ιδιωτικής αποθεματοποίησης
Linearity
Εφαρμόζεται η αναλυτική μέθοδος που καθορίζεται στο προσάρτημα για να εξασφαλιστεί ότι το τυρί που παρασκευάζεται αποκλειστικά από γάλα προβάτων, αιγών ή βουβάλων και μείγματα γάλακτος προβάτων, αιγών και βουβάλων δεν περιέχει καζεΐνη αγελαδινού γάλακτος.
From 0 to 16 % of rennet whey a linear relationship should be obtained with a coefficient of correlation > 0,99.
Η καζεΐνη αγελαδινού γάλακτος θεωρείται παρούσα εάν η περιεκτικότητα του αναλυθέντος δείγματος σε καζεΐνη αγελαδινού γάλακτος είναι ίση ή μεγαλύτερη από την περιεκτικότητα του δείγματος αναφοράς που περιέχει αγελαδινό γάλα σε αναλογία 1 %, όπως προβλέπεται στο προσάρτημα.
The 1 % limit includes the uncertainty due to reproducibility.
Για την ανίχνευση της καζεΐνης αγελαδινού γάλακτος στα τυριά που αναφέρονται στην παράγραφο 1, επιτρέπεται να χρησιμοποιούνται μέθοδοι υπό τους εξής όρους:
Ni—4.6 standard
το μέγιστο όριο ανίχνευσης είναι 0,5 % και
Absorbance (220 nm)
δεν προκύπτουν ψευδοθετικά αποτελέσματα και
time (Minutes)
η καζεΐνη αγελαδινού γάλακτος είναι ανιχνεύσιμη με την απαιτούμενη ευαισθησία, ακόμη και μετά από μακρές περιόδους ωρίμασης, οι οποίες μπορεί να παρατηρηθούν στις συνήθεις συνθήκες εμπορίας.
International IDF Standard 135B/1991.
Εάν δεν ικανοποιείται οποιαδήποτε από τις προαναφερόμενες απαιτήσεις, χρησιμοποιείται η μέθοδος που καθορίζεται στο προσάρτημα.
Milk and milk products.
Προσάρτημα
Precision characteristics of analytical methods.
ΜΕΘΟΔΟΣ ΓΙΑ ΤΗΝ ΑΝΙΧΝΕΥΣΗ ΑΓΕΛΑΔΙΝΟΥ ΓΑΛΑΚΤΟΣ ΚΑΙ ΚΑΖΕΪΝΙΚΩΝ ΑΛΑΤΩΝ ΣΕ ΤΥΡΙΑ ΑΠΟ ΓΑΛΑ ΠΡΟΒΑΤΩΝ, ΑΙΓΩΝ Η ΒΟΥΒΑΛΩΝ ΚΑΙ ΜΕΙΓΜΑΤΑ ΓΑΛΑΚΤΟΣ ΠΡΟΒΑΤΩΝ, ΑΙΓΩΝ ΚΑΙ ΒΟΥΒΑΛΩΝ
Outline of collaborative study procedure.’
ΑΝΤΙΚΕΙΜΕΝΟ
the following Annexes are added:
Ανίχνευση αγελαδινού γάλακτος και καζεϊνικών αλάτων σε τυριά που παρασκευάζονται από γάλα προβάτων, αιγών ή βουβάλων και μείγματα γάλακτος προβάτων, αιγών και βουβάλων με ισοηλεκτρική εστίαση γ-καζεϊνών μετά από πλασμινόλυση.
ANNEX VI
ΠΕΔΙΟ ΕΦΑΡΜΟΓΗΣ
Methods of analysis of butter under private storage
Η μέθοδος είναι κατάλληλη για ευαίσθητη και εξειδικευμένη ανίχνευση φυσικού και θερμικά κατεργασμένου αγελαδινού γάλακτος και καζεϊνικών αλάτων σε νωπά και ώριμα τυριά από γάλα προβάτων, αιγών ή βουβάλων και μείγματα γάλακτος προβάτων, αιγών και βουβάλων.
Non Fat Solids (excluding salt)
Η μέθοδος αυτή δεν είναι κατάλληλη για την ανίχνευση της νοθείας του γάλακτος και των τυριών με συμπυκνώματα πρωτεϊνών ορού αγελαδινού γάλακτος που έχουν υποστεί θερμική κατεργασία.
Salt
Απομόνωση καζεϊνών από το τυρί και τα πρότυπα υλικά αναφοράς
The method to be applied shall be approved by the paying agency.
Διάλυση των καζεϊνών που έχουν απομονωθεί και υποβολή σε διάσπαση με πλασμίνη (EC.3.4.21.7)
ANNEX VII
Ισοηλεκτρική εστίαση των κατεργασμένων με πλασμίνη καζεϊνών παρουσία ουρίας και χρώση πρωτεϊνών
Methods of analysis of skimmed milk powder under private storage
Αξιολόγηση του αποτελέσματος της χρώσης των γ3- και γ2-καζεϊνών (ένδειξη παρουσίας αγελαδινού γάλακτος) με σύγκριση του αποτελέσματος που προκύπτει από το δείγμα με εκείνα που προκύπτουν στην ίδια πηκτή από τα πρότυπα υλικά αναφοράς που περιέχουν αγελαδινό γάλα σε αναλογία 0 % και 1 %.
ANNEX VIII
Χρησιμοποιούνται χημικές ουσίες αναλυτικής καθαρότητας, εκτός αντίθετων υποδείξεων.
Methods of analysis of cheeses under private storage
Το νερό είναι δισαπεσταγμένο ή ισοδύναμης καθαρότητας.
The method of analysis laid down in the Appendix shall be used to ensure that cheese made exclusively from ewe's milk, goat's milk or buffalo milk or from a mixture of ewe's milk, goat's milk and buffalo milk does not contain cow's milk casein.
Σημείωση: Οι περιγραφές που ακολουθούν ισχύουν για πηκτές πολυακρυλαμιδίου με ουρία, διαστάσεων 265 × 125 × 0,25 mm, που παρασκευάζονται στο εργαστήριο.
Cow's milk casein is considered to be present if the cow's milk casein content of the analysed sample is equal to or higher than the content of the reference sample containing 1 % cow's milk as laid down in the Appendix.
Σε περίπτωση χρήσης πηκτών άλλων διαστάσεων και τύπων, ενδέχεται να χρειαστεί προσαρμογή των συνθηκών διαχωρισμού.
Methods for detecting cow's milk casein in cheeses referred to in paragraph 1 may be used provided that:
Ισοηλεκτρική εστίαση
the detection limit is maximum 0,5 % and
Αντιδραστήρια για την παρασκευή των πηκτών πολυακρυλαμιδίου που περιέχουν ουρία
there are no false-positive results and
Μητρικό διάλυμα πηκτής
cow's milk casein is detectable with the required sensitivity even after long ripening periods, as may occur in usual commercial conditions.
Διαλύονται σε νερό:
If any of the above mentioned requirements is not met, the methods laid down in the Appendix shall be used.
4,85 g ακρυλαμιδίου
Appendix
0,15 g Ν, Ν′-μεθυλενο-δις-ακρυλαμιδίου (BIS)
METHOD FOR THE DETECTION OF COW'S MILK AND CASEINATE IN CHEESES FROM EWE'S MILK, GOAT'S MILK OR BUFFALO MILK OR MIXTURES OF EWE'S MILK, GOAT'S MILK AND BUFFALO MILK
48,05 g ουρίας
SCOPE
15,00 g γλυκερίνης (87 % w/w),
Detection of cow's milk and caseinate in cheeses made from ewe's milk, goat's milk, buffalo milk or mixtures of ewe's, goat's and buffalo milk by isoelectric focusing of γ-caseins after plasminolysis.
συμπληρώνεται ο όγκος μέχρι 100 ml και το διάλυμα φυλάσσεται στο ψυγείο μέσα σε σκοτεινόχρωμη φιάλη.
FIELD OF APPLICATION
Εφόσον η περιεκτικότητα του εν λόγω διαλύματος σε ακρυλαμίδιο και σε BIS είναι 30 % w/v και 0,8 % w/v, αντίστοιχα, χρησιμοποιούνται για το παρασκεύασμα 16,2 ml αντί των ανωτέρω καθοριζόμενων ποσοτήτων.
The method is suitable for sensitive and specific detection of native and heat-treated cow's milk and caseinate in fresh and ripened cheeses made from ewe's milk, goat's milk, buffalo milk or mixtures of ewe's, goat's and buffalo milk.
Ο μέγιστος χρόνος διατήρησης του μητρικού διαλύματος είναι 10 ημέρες· εάν η αγωγιμότητά του υπερβαίνει τα 5μS, απιονίζεται με ανάδευση με 2 g Amberlite ΜΒ-3 επί 30 λεπτά και, στη συνέχεια, διηθείται μέσω μεμβράνης των 0,45 μm.
It is not suitable for the detection of milk and cheese adulteration by heat-treated bovine whey protein concentrates.
Διάλυμα πηκτής
Isolation of caseins from cheese and the reference standards
Παρασκευάζεται διάλυμα πηκτής με ανάμιξη προσθέτων και αμφολυτών (*) με το μητρικό διάλυμα πηκτής (βλέπε σημείο 4.1.1).
Dissolving of the isolated caseins and submitting to plasmin (EC.3.4.21.7) cleavage
9,0 ml μητρικού διαλύματος
Isoelectric focusing of plasmin-treated caseins in the presence of urea and staining of proteins
24 mg β-αλανίνης
Evaluation of stained γ3 and γ2 -casein patterns (evidence of cow's milk) by comparison of the pattern obtained from the sample with those obtained in the same gel from the reference standards containing 0 % and 1 % cow's milk.
500 μl αμφολύτη με pH 3,5-9,5
Unless otherwise indicated, analytical grade chemicals shall be used.
250 μl αμφολύτη με pH 5-7
Water shall be double-distilled or of equivalent purity.
Σημείωση: Το διάλυμα πηκτής παρασκευάζεται αμέσως πριν χυθεί πάνω στην πλάκα (βλέπε σημείο 6.2).
Isoelectric focusing
Διαλύματα καταλυτών
Reagents for production of the urea containing polyacrylamide gels
Ν, Ν, Ν′, Ν′-τετραμεθυλ-αιθυλενοδιαμίνη (TEMED)
Stock gel solution
Διάλυμα υπερθειικού αμμωνίου (PER) 40 % w/v:
Dissolve:
Διαλύονται σε νερό 800 mg PER και συμπληρώνεται ο όγκος μέχρι τα 2 ml.
4,85 g acrylamide
Σημείωση: Να χρησιμοποιείται πάντοτε πρόσφατα παρασκευασμένο διάλυμα PER.
0,15 g N, N′-methylene-bis-acrylamide (BIS)
Λιπαντικό ρευστό
48,05 g urea
Κηροζίνη ή υγρή παραφίνη
15,00 g glycerol (87 % w/w),
Διάλυμα της ανόδου
in water and make up to 100 ml and store in a brown glass bottle in the refrigerator.
Διαλύονται σε νερό 5,77 g φωσφορικού οξέος (85 % w/w) και το διάλυμα αραιώνεται μέχρι τα 100 ml.
Note: A commercially available pre-blended acrylamide/BIS solution may be used in preference to the quoted fixed weights of the neurotoxic acrylamides.
Διάλυμα της καθόδου
Where such a solution contains 30 % w/v acrylamide and 0,8 % w/v BIS, a volume of 16,2 ml shall be used for the formulation instead of the fixed weights.
Διαλύονται σε νερό 2,00 g υδροξειδίου του νατρίου και το διάλυμα αραιώνεται με νερό μέχρι τα 100 ml.
The shelf life of the stock solution is a maximum of 10 days; if its conductivity is more than 5 μS, de-ionize by stirring with 2 g Amberlite MB-3 for 30 minutes, then filter through a 0,45 μm membrane.
Προετοιμασία του δείγματος
Gel solution
Αντιδραστήρια για την απομόνωση των πρωτεϊνών
Prepare a gel solution by mixing additives and ampholytes (*) with the stock gel solution (see 4.1.1).
Αραιό οξικό οξύ (25,0 ml παγόμορφου οξικού οξέος αραιώνονται με νερό μέχρι τα 100 ml)
9,0 ml stock solution