natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Εμποτισμός των ιστών με παραφίνη για τη διατήρηση της ακεραιότητάς τους και τη δημιουργία μιας σκληρής επιφάνειας για πραγματοποίηση μικροτομών.
The test should continue until sexual differentiation in the control group is completed (60 dph for Japanese medaka, the three-spined stickleback and zebrafish).
Οι επισημασμένες κασέτες ιστών αφαιρούνται από τη φορμαλδεΰδη/αιθανόλη και τοποθετούνται σε καλάθια επεξεργασίας.
Loading
Το καλάθι επεξεργασίας τοποθετείται στον σταθμό επεξεργασίας ιστών.
The number of fertilised eggs at the start of the test should be at least 120 per concentration divided between a minimum of 4 replicates (square root allocation to control is accepted).
Επιλέγεται το πρόγραμμα επεξεργασίας.
The eggs should be randomly distributed (by using statistical tables for randomisation) among treatments.
Μετά την ολοκλήρωση του κύκλου επεξεργασίας στον σταθμό επεξεργασίας ιστών, τα καλάθια μπορούν να μεταφερθούν στον σταθμό σκήνωσης.
The loading rate (for definition, see Appendix 1) should be low enough in order that a dissolved oxygen concentration of at least 60 % of the ASV can be maintained without direct aeration of the chambers.
Σκήνωση ιστών
For flow-through tests, a loading rate not exceeding 0,5 g/l per 24 hours, and not exceeding 5 g/l of solution at any time is recommended.
Στόχος:
No later than 28 days post fertilisation the number of fish per replicate should be redistributed, so that each replicate contains as equal a number of fish as possible.
Τοποθέτηση του δείγματος με τον σωστό προσανατολισμό σε στερεοποιημένη παραφίνη για τη δημιουργία μικροτομών.
If exposure related mortality occurs, the number of replicates should be reduced appropriately so that fish density between treatment levels is kept as equal as possible.
Τα καλάθια με τις κασέτες αφαιρούνται από τον σταθμό επεξεργασίας και βυθίζονται στον πρόσθιο θάλαμο της θερμικής μονάδας του σταθμού σκήνωσης, ο οποίος είναι γεμάτος με παραφίνη, ή μεταφέρονται σε ξεχωριστό σύστημα θέρμανσης παραφίνης.
The photoperiod and water temperature should be appropriate for the test species (see Appendix 2 for experimental conditions for the FSDT).
Η πρώτη κασέτα που θα υποβληθεί σε σκήνωση αφαιρείται από τον πρόσθιο θάλαμο της θερμικής μονάδας ή από το σύστημα θέρμανσης παραφίνης.
Food and feeding are critical, and it is essential that the correct food for each stage is supplied at appropriate time intervals and at a level sufficient to support normal growth.
Το καπάκι της κασέτας αφαιρείται και απορρίπτεται, και ελέγχεται η ετικέτα της κασέτας ως προς τα στοιχεία του ζώου για να επιλυθούν τυχόν ασυμφωνίες πριν από τη σκήνωση.
Feeding should be ad libitum whilst minimising the surplus.
Επιλέγεται καλούπι σκήνωσης κατάλληλου μεγέθους.
To obtain a sufficient growth rate, fish should be fed at least twice daily (accepting once daily on weekends), separated by at least three hours between each feed.
Το καλούπι τοποθετείται κάτω από το στόμιο του διανεμητή και γεμίζεται με λιωμένη παραφίνη.
Surplus food and faeces should be removed, as necessary, to avoid accumulation of waste.
Το δείγμα αφαιρείται από την κασέτα και τοποθετείται μέσα στη λιωμένη παραφίνη του καλουπιού.
As experience is gained, food and feeding regimes are continuously being refined to improve survival and optimise growth.
Η διαδικασία αυτή επαναλαμβάνεται με 4 έως 8 δείγματα για κάθε καλούπι παραφίνης.
Effort should therefore be made to confirm the proposed regime with acknowledged experts.
Η θέση του κάθε ψαριού επισημαίνεται με την τοποθέτηση του ψαριού αρ.1 κατά 180 μοίρες προς το ψάρι 2-4/8.
Feeding should be withheld 24 hours before ending the test.
Προστίθεται επιπλέον παραφίνη για να καλυφθεί το δείγμα.
Examples of appropriate food items are listed in Appendix 2 (see also the OECD Fish Testing Framework (39).
Το καλούπι με τη βάση κασέτας τοποθετείται στην ψυχόμενη πλάκα της μονάδας ψύξης.
Test chemicals should be spaced as described in Appendix 4.
Μετά τη στερεοποίηση της παραφίνης, το μπλοκ (δηλ. η σκληρή παραφίνη που περιέχει τους ιστούς και τη βάση κασέτας) αφαιρείται από το καλούπι.
A minimum of three test concentrations in at least four replicates should be used.
Πραγματοποίηση μικροτομών
The curve relating LC50 to period of exposure in the acute studies available should be considered when selecting the range of test concentrations.
Κοπή και στερέωση ιστολογικών τομών για χρώση.
Five test concentrations are recommended if the data are to be used for risk assessment.
Η αρχική φάση για τη δημιουργία μικροτομών που καλείται “διαμόρφωση δείγματος” διεξάγεται ως εξής:
Concentrations of the chemical higher than 10 % of the acute adult LC50 or 10 mg/l, whichever is the lower, need not be tested.
α.
The maximum test concentration should be 10 % of the LC50 on the larval/juvenile life-stage.
Το μπλοκ παραφίνης τοποθετείται στον σφιγκτήρα του μικροτόμου.
Controls
β.
A dilution water control (≥ 4 replicates) and, if relevant, a solvent control (≥ 4 replicates) should be run in addition to the test concentrations.
Ο σφιγκτήρας προωθείται με περιστροφή του τροχού του μικροτόμου και πραγματοποιούνται παχιές τομές από την επιφάνεια της παραφίνης του μπλοκ μέχρι η λεπίδα να φτάσει στους εγκλεισμένους ιστούς.
Only solvents that have been investigated not to have any statistical significant influence on the test endpoints should be used in the test.
γ.
Where a solvent is used, its final concentration should not be greater than 0,1 ml/l (36) and it should be the same concentration in all test chambers, except the dilution water control.
Το πάχος τομής του μικροτόμου ρυθμίζεται σε τιμή από 3-5 μικρά.
However, every effort should be made to avoid the use of such solvent or keep solvent's concentrations to a minimum.
Ο σφιγκτήρας προωθείται και κόβονται πολλές τομές από το μπλοκ για την απομάκρυνση τεχνημάτων που έχουν δημιουργηθεί στην κομμένη επιφάνεια του ιστού κατά τη διάρκεια της αδρής περικοπής.
Frequency of Analytical Determinations and Measurements
δ. Το μπλοκ μπορεί να απομακρύνεται από τον σφιγκτήρα και να τοποθετείται σε πάγο με την όψη προς τα κάτω για τη διαπότιση του ιστού.
Chemical analysis of the test chemical concentration should be performed before initiation of the test to check compliance with the acceptance criteria.
Η επόμενη φάση της δημιουργίας μικροτομών είναι η τελική κοπή και στερέωση των τομών των ιστών σε αντικειμενοφόρες πλάκες.
All replicates should be analysed individually at the beginning and termination of the test.
Οι διαδικασίες αυτές διεξάγονται ως εξής:
One replicate per test concentration should be analysed at least once per week during the test, changing systematically between replicates (1,2,3,4,1,2…).
α.
If samples are stored to be analysed at a later time, the storage method of the samples should be previously validated.
Εάν το μπλοκ έχει τοποθετηθεί σε πάγο, απομακρύνεται από τον πάγο και τοποθετείται ξανά στον σφιγκτήρα του μικροτόμου.
Samples should be filtered (e.g. using a 0,45 μm pore size) or centrifuged to ensure that the determinations are made on the chemical in true solution.
β.
During the test, dissolved oxygen, pH, total hardness, conductivity, salinity (if relevant), and temperature should be measured in all test chambers.
Με τη ρύθμιση του πάχους τομής στον μικροτόμο σε 3 έως 5 μικρά, ο σφιγκτήρας προωθείται με περιστροφή του τροχού του μικροτόμου.
As a minimum dissolved oxygen, salinity (if relevant), and temperature should be measured weekly, and pH, conductivity and hardness at the beginning and at the end of the test.
Κόβονται τομές από το μπλοκ, μέχρι να παραχθεί μια “κορδέλα” που περιέχει τουλάχιστον μία αποδεκτή τομή στην οποία περιλαμβάνονται οι γονάδες.
Temperature should preferably be monitored continuously in at least one test chamber.
(Κατά τη διάρκεια κοπής των τομών, κατά περίπτωση, το μπλοκ μπορεί να αφαιρείται από τον σφιγκτήρα, να τοποθετείται σε πάγο για τη διαπότιση του ιστού και, στη συνέχεια, να τοποθετείται ξανά στον σφιγκτήρα).
Results should be based on measured concentrations.
γ.
However, if the concentration of the test chemical in solution has been satisfactorily maintained within ± 20 % of the nominal concentration throughout the test, then the results can either be based on nominal or measured values.
Οι τομές τοποθετούνται στην επιφάνεια του νερού ενός υδατόλουτρου ώστε να επιπλέουν σε οριζόντια θέση.
Observations and measurements
Γίνεται προσπάθεια λήψης τουλάχιστον μίας τομής χωρίς πτυχώσεις και χωρίς παγιδευμένες φυσαλίδες αέρα κάτω από αυτήν.
Stage of embryonic development
δ. Μια αντικειμενοφόρος πλάκα μικροσκοπίου βυθίζεται στο νερό κάτω από την καλύτερη τομή και την ανασηκώνει για να τη βγάλει από το νερό.
The exposure should begin as soon as possible after fertilisation and before cleavage of the blastodisc commences and no later than 12 h post fertilisation to ensure exposure during early embryonic development.
Η διαδικασία αυτή αναφέρεται ως “στερέωση” της τομής επάνω στην αντικειμενοφόρο πλάκα.
Hatching and survival
Με ειδικό στυλό για την επισήμανση αντικειμενοφόρων πλακών, σημειώνεται στην αντικειμενοφόρο πλάκα ο αριθμός του μπλοκ από το οποίο δημιουργήθηκε η συγκεκριμένη πλάκα.
for eggs:
ζ.
particularly in the early stages, a marked loss of translucency and change in coloration, caused by coagulation and/or precipitation of protein, leading to a white opaque appearance;
Η αντικειμενοφόρος πλάκα τοποθετείται σε μια βάση χρώσης.
for larvae and juvenile fish:
η. Το μπλοκ αφαιρείται από τον σφιγκτήρα και αποθηκεύεται με την όψη προς τα κάτω.
immobility and/or absence of respiratory movement and/or absence of heart-beat and/or white opaque coloration of central nervous system and/or lack of reaction to mechanical stimulus.
Χρώση
However, in accordance with Directive 2010/63/EU of the European Parliament and of the Council of 22 September 2010 on the protection of animals used for scientific purposes, if abnormalities result in pain, suffering and distress or lasting harm, and death can be reliably predicted, animals should be anaesthetised and euthanised according to the description in paragraph 44 and treated as mortality for data analysis..
Οι καλυπτρίδες τοποθετούνται χειροκίνητα ή αυτόματα.
These observations will result in some or all of the following data being available for reporting:
β.
cumulative mortality;
Η αντικειμενοφόρος πλάκα βυθίζεται σε ξυλόλιο ή TissueClear, και η περίσσεια ξυλολίου/TissueClear αφαιρείται με απαλή ανακίνηση.
numbers of healthy fish at end of test;
γ.
time to start of hatching and end of hatching;
Τοποθετούνται περίπου 0,1 ml επικαλυπτικού μέσου κοντά στο άκρο της αντικειμενοφόρου πλάκας στην αντίθετη πλευρά από το ματ άκρο ή επάνω στην καλυπτρίδα.
length and weight of surviving animals;
δ. Η καλυπτρίδα τοποθετείται υπό γωνία μικρής κλίσης στην αντικειμενοφόρο πλάκα.
numbers of deformed larvae;
Επισήμανση
numbers of fish exhibiting abnormal behaviour.
ε.
Sampling of fish
Κάθε ετικέτα της αντικειμενοφόρου πλάκας θα πρέπει να περιέχει τα ακόλουθα στοιχεία.
Fish sampling is performed at termination of the test.
i.
Sampled fish should be euthanised with e.g. MS-222 (100-500 mg per l buffered with 200 mg NaHCO3 per l) or FA-100 (4-allyl-2-methoxyphenol: eugenol) and individually measured and weighed as wet weight (blotted dry) or anaesthetised if a blood sample should be taken (see paragraph 49).
Ονομασία εργαστηρίου
Sampling for VTG analysis and sex determination via histological evaluation
Αρ. δείγματος / Αρ. αντικειμένου πλάκας
All fish should be sampled and prepared for analysis of sex and VTG.
Χημική ουσία / Ομάδα αγωγής
All fish should be analysed histologically to determine sex.
Στατιστικό διάγραμμα ροή για ανάλυσή λεκιθογενινησ
For the VTG measurements, a sub-sampling of at least 16 fish from each replicate is accepted.
Μη ομαλή φωλιασμένη ANOVA
More fish should be analysed for VTG if the results of the sub-sampling turn out to be unclear.
<=3 επαυαλήψεις αυά συγκέντρωση
The sampling procedure for VTG and sex determination is dependent on the VTG analysis method:
Δοκιμή Dunnett οε φωλιαο μέυη ANOVA
Head/tail homogenate method for VTG analysis
Ομαλή φωλιοσμέυη ANOVA
The fish is euthanised.
Ομαλή κατανομή μέσων τιμών των επαυ αλήψεων
Head and tail of each fish are separated from the body of the fish by cuts made right behind the pectoral fins, and right behind the dorsal fin, using a scalpel (See Figure 1).
Καθοδικάεφαρ μοζóμε νη δοκιμή Jonckheere
The head and tail part from each fish are pooled, weighed and individually numbered, frozen in liquid nitrogen and stored at – 70° or less for VTG analysis.
Μη κανονικές ή μη ομοιογενείς μέσε ςτιμές των επαναλήψειςν
The body part of the fish is numbered and fixed in an appropriate fixative for histological evaluation (22).
Δοκιμή Dunnett
By use of this method VTG and histopathology are evaluated on each individual and a possible change in the VTG level can thus be related to the phenotypic sex of the fish or genetic sex (Japanese medaka and the three-spined stickleback) of the fish.
Μετοσχηματισμάς για σταθεροποίηση διασποράς;
For further information see guidance for homogenisation (Appendix 5) and guidance for VTG quantification (Appendix 6).
Δοκιμή Dunn ή Mann-Whitney
Liver homogenate method for VTG analysis
Καθορίστε αυ η σχέση δόσης-ατόκρισης είναι μονοτονική
The liver is dissected out and stored at – 70 °C or below.
Συνδυάστε τους μάρτυρες διατηρήστε υπ σ-ομάδες
Recommended procedures for liver excision and pre-treatment are available in OECD TG 229 (37) or Chapter C.37 of this Annex (38).
Αμφάτεροι οι μάρτυρες με και χωρίς διαλότη είυαι παρόντες
Livers are then individually homogenised as described in OECD TG 229 or Chapter C.37 of this Annex.
Στατιστικό διάγραμμα ροή για ανάλυσή αναλογίας φύλου
The supernatant collected is used for measuring VTG with a homologous ELISA technique (see Appendix 6 for an example of quantification in zebrafish or OECD TG 229 (37) for Japanese medaka).
Καθοδικά εφαρμοζόμενη δοκιμή Jonckheere-Terpstra (+) για τον καθορισμό της ΝΟΕC
Following this approach, it is also possible to have individual fish data on both VTG and gonad histology.
Δοκιμή Dunn ή Mann-Whitney U με προσαρμογή Βοnferroni-Holm για τον καθορισμό της NOEC
Blood plasma method for VTG analysis
Χρήση δοκιμής Dunnet εάν οι διασπορές είναι ομοιογενείς (*), Διαφορετικά χρήση δοκιμής Τamhane-Dunnett (Τ3) για τον καθορισμό της ΝΟΕC
Blood is collected from the anaesthetised fish by cardiac puncture, caudal vein or tail cutting, and centrifuged at 4 °C for plasma collection.
Ομαλή κατανομή των δεδομένων;
The plasma is stored at – 70 °C or below until use.
Συνάδουν τα δεδομένα με μονοτονική σχέση δόσης- απόκρισης;
The whole fish is euthanised and fixed for histology.
(‡) ήάλλ δυή ημφωνημένη επιλογή μάρτυρα
Both plasma samples and fish are numbered individually to relate VTG levels to the sex of the fish.
μετάσχηματισμό τετραγωνικής ρίζας του τόξον
How to cut a fish for measurement of VTG in head/tail homogenate and histological evaluation of the mid section
(+) με λιγότερεζ από 5 πειραματικές μονάδες ανά αγωγή, θα πρέπει ιποιηθεί ακριβής δοκιμή J-Τ ή Μ-W αν υπάρχει
Genetic sex determination
Συγκρίνετε τους μάρτυρες
A biological sample for the determination of the genetic sex is taken from individual fish in species possessing appropriate markers.
Απορρίψτε τον μάρτυρα μετο νερό (‡)
For Japanese medaka, the anal fin or dorsal fin is collected.
Χρησιμοποιήθηκε διαλύτης;
A detailed description is given in Appendix 9 including tissue sampling and sex determination by a PCR-method.
Για κάθε σωλήνα χρησιμοποιείται καινούριος ύπερος για την αποφυγή τυχόν επιμολύνσεων.
Different methods are available to assess VTG production in the fish species considered in this assay.
Ωστόσο, η εκχύλιση είναι πιο αποτελεσματική εάν γίνει εκχύλιση του DNA την ίδια στιγμή (για πληροφορίες σχετικά με τον χειρισμό, βλ. παραπάνω.
Sex determination
Τα δείγματα αποθηκεύονται σε θερμοκρασία δωματίου για 15 λεπτά, ενώ στο διάστημα αυτό συχνά ανακινούνται απαλά με το χέρι.
The individuals should be placed longitudinally in the paraffin block.
Μέχρι την περαιτέρω ανάλυση, οι σωλήνες καταψύχονται στους – 20 °C.
The interval between these sections should be approximately 50 μm for males and 250 μm for females.
Παρασκευή ρυθμιστικού διαλύματος
However, since each block will often contain males and females (if more than one individual are embedded in each block), the interval between sections from these blocks should be approximately 50 μm until at least six sections of the gonads from each male are obtained.
Ρυθμιστικό διάλυμα PCR 1:
Thereafter, the interval between sections can be increased to approximately 250 μm for the females.
500 mg N-λαυρυλο σαρκοσίνη (π.χ. Merck KGaA, Darmstadt, GE)
Sections are stained with haematoxylin and eosin and examined by light-microscopy with focus on sex (male, female, intersex or undifferentiated).
προσθήκη 100 ml απεσταγμ.
Intersex is defined as presence of more than one oocyte in testis per six sections analysed or spermatogenic cells (yes/no) in ovaries.
→ αυτόκαυστο
Histopathology and staging of ovaries and testis is optional but if investigated, the results should be statistically analyzed and reported.
Ρυθμιστικό διάλυμα PCR 2:
It should be noted that some fish species naturally lack a fully developed pair of gonads and only one gonad may be present (e.g. Japanese medaka and occasionally zebrafish).
20 g Chelex (π.χ. Biorad, Munich, GE)
All such observations should be recorded.
Για διόγκωση σε 100 ml απεσταγμ.
Genetic sex determination in individual Japanese medaka is based on the presence or absence of the medaka male-sex determining gene, DMY, which is located on the Y chromosome.
Προσδιορισμός του γενετικού φύλου (με μέθοδο PCR) στο ρυζόψαρο (προετοιμάστηκε από το εργαστήριο για υδρόβιους οργανισμούς της Bayer CropScience AG και το Πανεπιστήμιο Universität Würzburg Biozentrum)
The genotypic sex of medaka can be identified by sequencing the DMY gene from DNA extracted from for instance a piece of anal fin or dorsal fin.
Οι προετοιμασμένοι και κατεψυγμένοι σωλήνες (περιγράφονται στην ενότητα παραπάνω) αποψύχονται σε πάγο.
The presence of DMY indicates a XY (male) individual regardless of phenotype, while the absence of DMY indicates a XX (female) individual regardless of phenotype (23).
Στη συνέχεια, υποβάλλονται σε φυγοκέντρηση με τη χρήση φυγοκέντρου Eppendorf (30 δευτ. στη μέγ. ταχύτητα, σε θερμοκρασία δωματίου).
Guidance for tissue preparation and PCR method is given in Appendix 9.
Για την PCR, χρησιμοποιείται το διαυγές υπερκείμενο υγρό που έχει διαχωριστεί από το ίζημα.
The genetic sex determination in individual three-spined stickleback is also performed via a PCR method, described in Appendix 10.
Πρέπει οπωσδήποτε να αποφεύγεται η μεταφορά κάθε ίχνους Chelex (εντοπίζεται στο ίζημα) στην αντίδραση PCR, επειδή αυτό παρεμβαίνει στη δράση της Taq πολυμεράσης.
The occurrence of intersex (for definition, see Appendix 1) should be reported.
Το υπερκείμενο υγρό χρησιμοποιείται απευθείας ή μπορεί να αποθηκευτεί κατεψυγμένο (στους – 20 °C) και να υποβληθεί σε αρκετούς κύκλους επαναπόψυξης χωρίς δυσμενείς επιπτώσεις στο DNA προκειμένου να αναλυθεί αργότερα.
Secondary sexual characteristics
Παρασκευή του μείγματος αντίδρασης (25 μl ανά δείγμα):
Secondary sexual characteristics are under endocrine control in species like the Japanese medaka;
Όγκος
therefore observations of physical appearance of the fish should if possible be made at the end of the exposure.
Τελική συγκέντρωση
In the Japanese medaka, the papillary formation on the posterior part of the anal fin in females is androgen sensitive.
Εκμαγείο DNA
Chapter C.37 of this Annex (38) provides relevant photographs of male secondary sex characteristics and androgenised females.
0,5 μl-2 μl
It is important that the strongest valid statistical test determine the endpoint.
ρυθμιστικό διάλυμα PCR με MgCl2
The replicate is the experimental unit but intra-replicate variability should be included in the statistical testing.
2,5 μl
A decision flow-chart is available in Appendix 8 to help with the most appropriate statistical test to use based on the characteristic of the data obtained from the test.
Νουκλεοτίδια (καθένα από dATP, dCTP, dGTP, dTTP)
Statistical significance level is 0,05 for all endpoints included.
Πρόσθιος εκκινητής (10 μM) (βλ. 3-5 παρακάτω)
Proportions of sex and genetic sex
0,5 μl
The proportions of sex should be analysed for significant effect (NOEC/LOEC approach) of exposure by Jonckheere-Terpstra (Trend test) if a monotone dose-response exists.
Αντίστροφος εκκινητής (10 μM) (βλ. 3-5 παρακάτω)
If non-monotonicity is found then a pair wise test should be applied:
Νερό (βαθμού PCR)
Use Dunnett's test if normality and homogenous variance can be obtained.
έως 25 μl
Use Tamhane-Dunnett if heterogeneous variance is present.
Taq E πολυμεράση
Otherwise use exact Mann-Whitney test with Bonferroni-Holm adjustment.
0,3 μl
A flow chart describing the statistics of the proportions of sex is placed in Appendix 8.
ρυθμιστικό διάλυμα PCR με MgCl2:
The proportions of sex should be presented in tables as concentration proportions ± SD of males, females, intersex and undifferentiated.
670 mM Tris/HCl (pH 8,8 στους 25 °C), 160 mM (NH4)2SO4, 25 mM MgCl2, Tween 20 0,1 %
Statistical significance should be highlighted.
Για κάθε αντίδραση PCR (βλ. 3-5 παρακάτω), απαιτείται ένας ειδικός εκκινητής που είναι ένας νέος συνδυασμός του μείγματος αντίδρασης και της απαιτούμενης ποσότητας εκμαγείου DNA για κάθε δείγμα (βλ. παραπάνω).
Examples are presented in the FSDT Phase 2 validation report (42).
Οι αντίστοιχοι όγκοι μεταφέρονται με τη χρήση σιφωνίων σε καινούριους σωλήνες.
Genetic sex should be reported as percentage of phenotypic sex reversal of males, females, intersex and undifferentiated.
Στη συνέχεια, όλοι οι σωλήνες πωματίζονται, αναδεύονται (περίπου 10 δευτ.) και υποβάλλονται σε φυγοκέντρηση (10 δευτ., σε θερμοκρασία δωματίου).
VTG concentrations
Τα αντίστοιχα προγράμματα PCR μπορούν πλέον να ξεκινήσουν.
VTG concentrations should be analysed for significant effect (NOEC/LOEC approach) of exposure.
Επιπλέον, σε κάθε πρόγραμμα PCR χρησιμοποιείται ένας θετικός μάρτυρας (πρότυπο δείγμα DNA με γνωστή δράση και σαφή αποτελέσματα) και ένας αρνητικός μάρτυρας (1 μl απεσταγμένου H2O).
The Dunnett test is preferable to the t-test with Bonferroni correction.
Παρασκευή της πηκτής αγαρόζης (1 %) — Κατά την εκτέλεση των προγραμμάτων PCR:
Where a Bonferroni correction is used, the Bonferroni-Holm correction is preferable.
3 g αγαρόζης διαλύονται σε 300 ml 1 × ρυθμιστικού διαλύματος TAE (πηκτή αγαρόζης 1 %)
Allowance should be made for log-transformation of VTG to achieve normality and variance homogeneity.
Το διάλυμα αυτό θα πρέπει να υποβάλλεται σε βρασμό σε φούρνο μικροκυμάτων (περίπου 2-3 λεπτά)
Next, if the concentration-response is consistent with monotonicity, then the JonckheereTerpstra test is preferable to any of the above.
Το θερμό διάλυμα μεταφέρεται σε ειδικό καλούπι, το οποίο είναι τοποθετημένο επάνω σε πάγο
If t-tests or Dunnett's test is used, there is no need for a ANOVA significance F-test in order to proceed.
Μετά από περίπου 20 λεπτά, η πηκτή αγαρόζης είναι έτοιμη για χρήση
For details see the flow chart in Appendix 8.
Η πηκτή αγαρόζης φυλάσσεται σε 1 × ρυθμιστικού διαλύματος TAE μέχρι να ολοκληρωθούν τα προγράμματα PCR
Results should be reported in tables as concentration means ± SD for males, females, intersex and undifferentiated separately.
Πρόγραμμα PCR της ακτίνης:
Statistical significance for phenotypic females and phenotypic males should be highlighted.
Σκοπός αυτής της αντίδρασης PCR είναι να καταδείξει ότι το DNA στο δείγμα δεν έχει υποστεί βλάβη.
Test chemical actual concentrations
Ειδικός εκκινητής:
The actual chamber concentrations of the test chemical should be analysed in frequencies described in paragraph 34.
“Mact1 (άνω/πρόσθιος)” → TTC AAC AGC CCT GCC ATG TA
Results should be reported in tables as mean concentration ± SD on replicate basis as well as on concentration basis with information on number of samples and with outliers from the mean treatment concentration ± 20 % highlighted.
“Mact2 (κάτω/αντίστροφος)” → GCA GCT CAT AGC TCT TCT CCA GGG AG
Examples can be found in the FSDT Phase 2 validation report (42).