natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Λαμπτήρες φθορισμού (ευρέως φάσματος)
The test method might be adaptable to other species than those mentioned above provided that the other species undergo a validation equal to the one accomplished for Japanese medaka, the three-spined stickleback and zebrafish, that the control fish are sexually differentiated at the end of the test, that VTG levels are sufficiently high to detect significant chemical-related variations, and that sensitivity of the test system is established using endocrine active reference chemicals ((anti)-oestrogens, (anti)-androgens, aromatase inhibitors etc).
Ένταση φωτός
In addition, any validation report(s) referring to FSDT data using other species should be reviewed by the OECD, and the validation outcome should be considered as satisfactory.
10-20 μE/m2/s, 540-1080 lux ή 50-100 ft-c (επίπεδα στο περιβάλλον του εργαστηρίου)
Initial considerations and limitations
12-16 ώρες φως, 8-12 ώρες σκοτάδι
VTG is normally produced by the liver of female oviparous vertebrates in response to circulating endogenous oestrogen (2).
Ελάχιστο μέγεθος θαλάμου
The VTG synthesis is very limited, though detectable, in immature fish and adult male fish because they lack sufficient circulating oestrogen.
Κάθε θάλαμος θα πρέπει να περιέχει όγκο νερού τουλάχιστον 7 l
However, the liver is capable of synthesising and secreting VTG in response to exogenous oestrogen stimulation (3) (4) (5).
Ηλικία οργανισμών δοκιμής κατά την έναρξη της έκθεσης
The measurement of VTG serves for the detection of chemicals with oestrogenic, anti-oestrogenic, androgenic modes of action and chemicals that interfere with steroidogenesis as for example aromatase inhibitors.
Προσφάτως γονιμοποιημένα αυγά (πρώιμο βλαστικό στάδιο)
The detection of oestrogenic chemicals is possible via the measurement of VTG induction in male fish, and it has been abundantly documented in the scientific peer-reviewed literature.
Προσφάτως γονιμοποιημένα αυγά
VTG induction has also been demonstrated following exposure to aromatisable androgens (6) (7).
Αρ. αυγών ανά αγωγή
A reduction in the circulating level of oestrogen in females, for instance through the inhibition of the aromatase converting the endogenous androgen to the natural oestrogen 17β-oestradiol, causes a decrease in the VTG concentration, which is used to detect chemicals having aromatase inhibiting properties or steroidogenesis inhibitors more broadly (33).
Τουλάχιστον 120
The biological relevance of the VTG response following oestrogenic/aromatase inhibition is established and has been broadly documented (8) (9).
Τουλάχιστον 3 (συν κατάλληλοι μάρτυρες)
However, it is possible that production of VTG in females can also be affected by general toxicity and non-endocrine toxic modes of action.
Αρ. επαναλήψεων ανά αγωγή
Several measurement methods have been successfully developed and standardised for routine use to quantify VTG in blood, liver, whole body or head/tail homogenate samples collected from individual fish.
Τουλάχιστον 4 (εκτός εάν εφαρμόζεται κατανομή τετραγωνικής ρίζας προς τους μάρτυρες)
This is the case for zebrafish, three-spined stickleback and Japanese medaka and also the partially validated species fathead minnow;
Ζωντανά Artemia, κατεψυγμένες ενήλικες γαρίδες σε άλμη, τροφή σε νιφάδες κ.λπ. Συνιστάται να παρέχεται σίτιση δύο φορές την ημέρα
species-specific Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) methods using immunochemistry for the quantification of VTG are available (5) (10) (11) (12) (13) (14) (15) (16).
Ειδική τροφή ιχθυδίων, ζωντανά Artemia, κατεψυγμένες ενήλικες γαρίδες σε άλμη, τροφή σε νιφάδες κ.λπ. Συνιστάται να παρέχεται σίτιση δύο φορές την ημέρα
In Japanese medaka and zebrafish, there is a good correlation between VTG measured from blood plasma, liver and homogenate samples although homogenates tend to show slightly lower values than plasma (17) (18) (19).
Καθόλου, εκτός εάν η συγκέντρωση διαλυμένου οξυγόνου (DO) μειωθεί κάτω από το 60 % της τιμής κορεσμού με αέρα
Appendix 5 provides the recommended procedures for sample collection for VTG analysis.
Καθόλου, εκτός εάν η συγκέντρωση διαλυμένου οξυγόνου (DO) μειωθεί κάτω από το 70 % της τιμής κορεσμού με αέρα
Change in the phenotypic sex ratio (proportions of sex) is an endpoint reflecting sex reversal.
Καθαρό νερό από επιφανειακά ύδατα, νερό γεώτρησης ή ανασυσταθέν νερό
In principle, oestrogens, anti-oestrogens, androgens, anti-androgens and steroidogenesis inhibiting chemicals can affect the sex ratio of developing fish (20).
Διάρκεια έκθεσης στην υπό δοκιμή χημική ουσία
It has been shown that this sex reversal is partly reversible in zebrafish (21) following oestrogen-like chemical exposure, whereas sex reversal following androgen-like chemical exposure is permanent (30).
Επιτυχία εκκόλαψης, επιβίωση, μακροσκοπική μορφολογία, VTG, ιστολογία των γονάδων, γενετικό φύλο αναλογία φύλου
The sex is defined as female, male, intersex (both oocytes and spermatogenetic cells in one gonad) or undifferentiated, determined in individual fish via histological examination of the gonads.
Επιτυχία εκκόλαψης, επιβίωση, μακροσκοπική μορφολογία, VTG, ιστολογία των γονάδων, αναλογία φύλου
Guidance is given in Appendix 7 and in the OECD Guidance Document on the Diagnosis of Endocrine-Related Histopathology of Fish Gonads (22).
Κριτήρια αποδοχής της δοκιμής για συνενωμένες επαναλήψεις μαρτύρων
Genetic sex is examined via genetic markers when they exist in a given fish species.
Επιτυχία εκκόλαψης > 80 %
In Japanese medaka the female XX or male XY genes can be detected by Polymerase Chain-Reaction (PCR), or the Y-linked DM domain gene (DMY) can be analysed (DMY negative or positive) as described in (23) (24).
Επιβίωση μετά την εκκόλαψη ≥70 %
In three-spined stickleback, there is an equivalent PCR method for genetic sex determination described in Appendix 10.
Ανάπτυξη (υγρό βάρος ψαριού, στεγνωμένο με απορροφητικό χαρτί) > 150 mg
Where the genetic sex can be individually linked to the phenotypic sex, the power of the test is improved and therefore genetic sex should be determined in species with documented genetic sex markers.
Ανάπτυξη (υγρό βάρος ψαριού, στεγνωμένο με απορροφητικό χαρτί) > 75 mg
The two core endocrine endpoints, VTG and sex ratio, can in combination demonstrate the endocrine mode of action (MOA) of the chemical (Table 1).
Ανάπτυξη (υγρό βάρος ψαριού, στεγνωμένο με απορροφητικό χαρτί) > 120 mg
The sex ratio is a population relevant biomarker (25) (26) and for some well defined modes of action, the FSDT results may be used for hazard and risk assessment purposes when deemed appropriate by the regulatory agency.
Μήκος (τυπικό μήκος) > 20 mm
These modes of action are at present oestrogens, androgens and steroidogenesis inhibitors.
Μήκος (τυπικό μήκος) > 14 mm
Reaction of the endocrine endpoints to different modes of action of chemicals
Μήκος (τυπικό μήκος) > 20 mm
↑ = increasing, ↓ = decreasing, — = not investigated
Αναλογία φύλου (% αρσενικών ή θηλυκών) 30 %-70 %
References
Χημικά χαρακτηριστικά ενόσω αποδεκτού νερού αραίωσης
Weak oestrogen agonist
ΣΥΓΚΕΝΤΡΩΣΗ
↑♀ or ↑Undiff
Σωματίδια
Strong oestrogen agonist
Από τη μέθοδο δοκίμων Γ.14/καθοδηγηση για τι συγκεντρώσεις δοκιμής
↑♀ or ↑Undiff, No ♂
Στήλη (αριθμός συγκεντρώσεων μεταξύ 100 και 10 ή μεταξύ 10 και 1) [1]
Oestrogen antagonist
Από μια στήλη μπορεί να επιλεγεί μια σειρά τριών (ή περισσότερων) διαδοχικών συγκεντρώσεων.
↓♀, ↑Undiff.
Ενδιάμεσα σημεία μεταξύ συγκεντρώσεων στη στήλη (χ) βρίσκονται στη στήλη (2χ + 1).
Androgen agonist
Οι καταγραφόμενες τιμές μπορεί να αντιπροσωπεύουν συγκεντρώσεις εκφραζόμενες ως % κατ' όγκο ή κατά βάρος (mg/l ή μg/l).
↑♂, No ♀
Οι τιμές μπορούν να πολλαπλασιαστούν ή να διαιρεθούν με οποιαδήποτε δύναμη του 10, αναλόγως.
Androgen antagonist
Η στήλη 1 μπορεί να χρησιμοποιηθεί αν υφίσταται σημαντική αβεβαιότητα ως προς τα επίπεδα τοξικότητας.
↑Intersex
Καθοδήγησή για την ομογενοποίηση του κεφαλιού και της ουράς από νεαρό πετρόψαρο, λιποκεφαλο όξινο, τρικαντό ξαστερώστε και ρυζόχαρτο
Aromatase inhibitor
Σκοπός αυτής της ενότητας είναι η περιγραφή των διαδικασιών που συντελούνται πριν από τον ποσοτικό προσδιορισμό της συγκέντρωσης της VTG.
The FSDT does not cover the reproductive life stage of the fish and therefore chemicals that are suspected to affect reproduction at lower concentrations than sexual development should be examined in a test that covers reproduction.
Μπορούν να χρησιμοποιούνται και άλλες διαδικασίες που έχουν ως αποτέλεσμα συγκρίσιμο ποσοτικό προσδιορισμό της VTG.
Definitions for the purpose of this Test Method are given in Appendix 1.
Ο προσδιορισμός της συγκέντρωσης της VTG από το πλάσμα αίματος ή το ήπαρ αντί του προσδιορισμού από ομογενοποιημένο δείγμα κεφαλιού/ουράς είναι θέμα επιλογής.
The in vivo FSDT is intended to detect chemicals with androgenic and oestrogenic properties as well as anti-androgenic, anti-oestrogenic and steroidogenesis inhibiting properties.
Το κεφάλι και η ουρά κόβονται, σύμφωνα με την περιγραφή της δοκιμής.
The FSDT validation phases (1 and 2) did cover oestrogenic, androgenic and steroidogenesis inhibiting chemicals.
Όλα τα εργαλεία ανατομής και η πλάκα κοπής θα πρέπει να εκπλένονται και να καθαρίζονται κατάλληλα (π.χ. με 96 % αιθανόλη) ανάμεσα στους χειρισμούς του κάθε ψαριού για την αποφυγή “επιμόλυνσης VTG” από τα θηλυκά άτομα ή τα αρσενικά άτομα στα οποία έχει πραγματοποιηθεί τεχνητή πρόκληση παραγωγής VTG προς τα αρσενικά άτομα στα οποία δεν έχει πραγματοποιηθεί τεχνητή πρόκληση παραγωγής VTG.
The effects in the FSDT of oestrogen- and androgen antagonists can be seen in Table 1 but these MOA are less documented at present time.
Όταν επιτευχθεί μια ομοιογενής μάζα, προστίθεται παγωμένο ρυθμιστικό διάλυμα ομογενοποίησης σε ποσότητα ίση με 4-10 φορές το βάρος του ιστού (σημειώνεται η αραίωση).
In the test, fish are exposed, from newly fertilised egg until the completion of sexual differentiation, to at least three concentrations of the test chemical dissolved in water.
Τα δείγματα τοποθετούνται πάνω σε πάγο μέχρι τη φυγοκέντρησή τους σε 4 °C και 50000 g για 30 λεπτά.
The test conditions should be flow-through unless not possible due to the availability or nature (e.g. limited solubility) of the test chemical.
Με τη χρήση ενός σιφωνίου μεταφέρονται 20 έως 50 μl (σημειώνεται η ποσότητα) υπερκείμενου υγρού σε τουλάχιστον δύο σωλήνες, με βύθιση της μύτης του σιφωνίου κάτω από το στρώμα λίπους στην επιφάνεια και με προσεκτική αναρρόφηση του υπερκείμενου υγρού χωρίς κλάσματα λίπους ή ιζήματος.
The test starts with the placing of newly fertilised eggs (before cleavage of the blastodisc) in the test chambers.
Κατά τη διάρκεια της χρήσης να τοποθετείται πάνω σε πάγο
The loading of the chambers is described for each species in paragraph 27.
12 ml Tris-HCl pH 7,4 + 120 μl μείγματος αναστολέων πρωτεάσης (ή ισοδύναμων μειγμάτων αναστολέων πρωτεάσης).TRIS:
For the validated fish species, Japanese medaka, the three-spined stickleback and zebrafish, the test is terminated at 60 dph.
TRIS-ULTRA PURE (ICN)Μείγμα αναστολέων πρωτεάσης:
At test termination, all fish are euthanised humanely.
Από τη Sigma (για ιστό θηλαστικών) Κωδικός προϊόντος P 8340.
A biological sample (blood plasma, liver or head/tail homogenate) is collected for VTG analysis from each fish and the remaining part is fixed for histological evaluation of the gonads to determine the phenotypic sex;
Καθοδήγησή για τον ποσοτικό προσδιορισμό της λεκιθογενινησ από το ομογενοποιημένο δείγμα κεφαλιού και ουράς στο πετρόψαρο (danio rerio) (τροποποίησή των holbech κ.α., 2001).
optionally, histopathology (e.g. staging of gonads, severity of intersex) can be performed.
Μπορούν να χρησιμοποιούνται και άλλες διαδικασίες οπού γίνεται χρήση ομολόγων αντισωμάτων και προτύπων διαλυμάτων
A biological sample (the anal- or the dorsal fin) for the determination of the genetic sex is taken in species possessing appropriate markers (Appendices 9 and 10).
Πλάκες μικροτιτλοδότησης (πιστοποιημένες Maxisorp F96, Nunc, Roskilde Denmark) προεπιστρωμένες με 5 μg/ml αντι-IgG λιποβιτελλίνης ζεβρόψαρου αποψύχονται και εκπλένονται 3 φορές με ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης (*).
An overview of relevant test conditions specific for validated species:
Κεκαθαρμένο πρότυπο διάλυμα λεκιθογενίνης ζεβρόψαρου [1] αραιώνεται διαδοχικά σε 0,2, 0,5, 1, 2, 5, 10 και 20 ng/ml με ρυθμιστικό διάλυμα αραίωσης (**) και τα δείγματα αραιώνονται κατά 200 φορές τουλάχιστον (για την αποφυγή επίδρασης της μήτρας) σε ρυθμιστικό διάλυμα αραίωσης και τοποθετούνται στις πλάκες.
Japanese medaka, the three-spined stickleback and zebrafish is provided in Appendix 2.
Εφαρμόζεται μάρτυρας της δοκιμασίας εις διπλούν.
Results from an acute toxicity test or other short-term toxicity assay [e.g. test method C.14 (34) and OECD TG 210 (1)], preferably performed with the species chosen for this test, should be available.
Σε κάθε βοθρίο προστίθενται 150 μl.
This implies that the water solubility and the vapour pressure of the test chemical are known and a reliable analytical method for the quantification of the chemical in the test chambers, with known and reported accuracy and limit of detection, is available.
Τα πρότυπα διαλύματα εφαρμόζονται εις διπλούν και τα δείγματα εις τριπλούν.
Other useful information includes the structural formula, purity of the chemical, stability in water and light, pKa, Pow and results of a test for ready biodegradability (Test Method C.4) (35).
Ακολουθεί επώαση όλη τη νύχτα στους 4 °C επάνω σε τάρακτρο.
Test acceptance criteria
Οι πλάκες εκπλένονται 5 φορές με ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης (*)
The dissolved oxygen concentration should be at least 60 per cent of the air saturation value (ASV) throughout the test;
Υπεροξειδάση του ραπανιού (HRP), συνδεδεμένη σε πολυμερές δεξτράνης (π.χ. AMDEX A/S, Δανία) και συζευγμένα αντισώματα αραιώνονται σε ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης.
The water temperature should not differ by more than ± 1,5 °C between test chambers at any one time during the exposure period and be maintained within the temperature ranges specified for the test species (Appendix 2);
Η πραγματική αραίωση διαφέρει ανάλογα με την παρτίδα και την ηλικία.
A validated method for analysis of the exposure chemical with a detection limit well below the lowest nominal concentration should be available and evidence should be gathered to demonstrate that the concentrations of the test chemical in solution have been satisfactorily maintained within ± 20 % of the mean measured values;
Σε κάθε βοθρίο προστίθενται 150 μl και οι πλάκες επωάζονται για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου επάνω σε τάρακτρο.
Overall survival of fertilised eggs in the controls and, where relevant, in the solvent controls, should be greater than or equal to the limits defined in Appendix 2;
Οι πλάκες εκπλένονται 5 φορές με ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης (*) και ο πυθμένας των πλακών καθαρίζεται προσεκτικά με αιθανόλη.
Acceptance criteria related to growth and proportions of sex at termination of the test are based on data from the control groups (pooled solvent and water control unless they are significantly different, then solvent only):
Σε κάθε βοθρίο προστίθενται 150 μl TMB plus (***).
Japanese medaka
Σκεπάστε την πλάκα με φύλλο κασσιτέρου για προστασία από το φως και παρακολουθήστε την ανάπτυξη του χρώματος στο τάρακτρο.
Three-spined stickleback
Όταν αναπτυχθεί πλήρως η πρότυπη καμπύλη, η ενζυμική δράση διακόπτεται με την προσθήκη 150 μl H2SO4 0,2 M σε κάθε βοθρίο.
Growth
Ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης:
Fish wet weight, blotted dry
Διάλυμα παρακαταθήκης PBS (****)
> 75 mg
Αποθηκεύεται στους 4 °C.
Length (standard length)
Ρυθμιστικό διάλυμα αραίωσης:
> 20 mm
Διάλυμα παρακαταθήκης PBS (****)
> 14 mm
Το TMB plus είναι ένα υπόστρωμα “έτοιμο προς χρήση” που παράγεται από την KemEnTec (Δανία).
Sex ratio (% males or females)
Είναι ευαίσθητο στο φως.
When a solvent is used it should have no statistical significant effect on survival and should not produce any endocrine disrupting effects or other adverse effects on the early-life stages as revealed by a solvent control.
Διάλυμα παρακαταθήκης PBS
If a deviation from the test acceptance criteria is observed, the consequences should be considered in relation to the reliability of the test data and these considerations should be included in the reporting.
HPO4.2H2O
Test chambers
Ρυθμίστε το pH στο 6,8 και συμπληρώστε με H2O millipore μέχρι τα 2 l.
Any glass, stainless steel or other chemically inert chambers can be used.
Αποθηκεύεται σε θερμοκρασία δωματίου.
The dimensions of the chambers should be large enough to allow compliance with loading rate criteria given below.
Battelle AP4.6.04 (1,18 mg/ml (AAA)), κεκαθαρμένο σύμφωνα με τους:
It is desirable that test chambers be randomly positioned in the test area.
Καθοδήγησή για την προετοιμασία των τομών των ιστών για τον προσδιορισμό του φύλου και του Σταδίου ανάπτυξής των γονάτων
A randomised block design with each concentration being present in each block is preferable to a completely randomised design.
Σκοπός αυτής της ενότητας είναι η περιγραφή των διαδικασιών που συντελούνται πριν από την αξιολόγηση των ιστολογικών τομών.
The test chambers should be shielded from unwanted disturbance.
Μπορούν να χρησιμοποιούνται και άλλες διαδικασίες που έχουν ως αποτέλεσμα ανάλογο προσδιορισμό του φύλου και του σταδίου ανάπτυξης των γονάδων.
Recommended fish species are given in Appendix 2.
Με λίγες εξαιρέσεις, οι διαδικασίες αυτές είναι παρόμοιες για το ρυζόψαρο (JMD) και το ζεβρόψαρο (ZF).
The procedures for inclusion of new species are given in paragraph 2.
Ευθανασία, νεκροψία και μονιμοποίηση ιστών
Holding of parental fish
Στόχοι:
Details on holding the parental fish under satisfactory conditions may be found in OECD TG 210(1).
Τα ψάρια πρέπει να θανατώνονται με τρόπο ανώδυνο.
Parental fish should be fed once or twice a day with appropriate food.
Λήψη των απαραίτητων μετρήσεων σωματικού βάρους και των λοιπών μετρήσεων.
Handling of embryos and larvae
Αξιολόγηση των δευτερευόντων χαρακτηριστικών του φύλου.
Initially, embryos and larvae may be exposed within a main chamber in smaller glass or stainless steel chambers, fitted with mesh sides or ends to permit a flow of test chemical through the chamber.
Διατομή ιστών για ανάλυση της VTG.
Non-turbulent flow through these small chambers may be induced by suspending them from an arm arranged to move the chamber up and down but always keeping the organisms submerged.
Μονιμοποίηση των γονάδων.
Where egg containers, grids or meshes have been used to hold eggs within the main test chamber, these restraints should be removed after the larvae hatch, except that meshes should be retained to prevent the escape of the fish.
Διαδικασίες:
If there is a need to transfer the larvae, they should not be exposed to the air and nets should not be used to release fish from egg containers.
Τα ψάρια θα πρέπει να θανατώνονται αμέσως πριν από τη νεκροψία.
The timing of this transfer varies with the species and transfer may not always be necessary.
Συνεπώς, εάν δεν υπάρχουν διαθέσιμα πολλά εξειδικευμένα άτομα για τις ανατομές, δεν θα πρέπει να θανατώνονται πολλά ψάρια ταυτόχρονα.
Any water in which the test species shows control survival at least as good as in water described in Appendix 3 is suitable as test water.
Με τη χρήση μιας μικρής απόχης, απομακρύνεται ένα ψάρι από τον πειραματικό θάλαμο και μεταφέρεται μέσα σε ένα δοχείο μεταφοράς στον χώρο όπου διεξάγονται οι νεκροψίες.
In order to ensure that the dilution water will not unduly influence the test result (for example by reacting with the test chemical) or adversely affect the performance of the brood stock, samples should be taken at intervals for analysis.
Το ψάρι τοποθετείται μέσα στο διάλυμα ευθανασίας.
Total organic carbon, conductivity, pH and suspended solids should be measured, for example every three months where dilution water is known to be relatively constant in quality.
Το ψάρι απομακρύνεται από το διάλυμα όταν έχει σταματήσει να αναπνέει και δεν ανταποκρίνεται σε εξωτερικά ερεθίσματα.
Measurements of heavy metals (e.g. Cu, Pb, Zn, Hg, Cd, Ni), major anions and cations (e.g. Ca2+, Mg2+, Na+, K+, Cl–, SO42–) and pesticides should be done, if water quality is questionable.
Ζυγίζεται το υγρό βάρος του ψαριού.
Details about chemical analysis and water collection can be found in paragraph 34.
Για την προετοιμασία των ιστών προς ανάλυση VTG, το ψάρι μπορεί να τοποθετείται σε μια πλάκα φελλού επάνω στην τράπεζα ενός στερεοσκοπικού μικροσκοπίου.
Flow-through system should be used if practically possible.
α.
For flow-through tests, a system that continually dispenses and dilutes a stock solution of the test chemical (e.g. metering pump, proportional diluter, and saturator system) is necessary to deliver a series of concentrations to the test chambers.
Για το ζεβρόψαρο, το κεφάλι κόβεται ακριβώς πίσω από το θωρακικό πτερύγιο και η ουρά κόβεται ακριβώς πίσω από το ραχιαίο πτερύγιο.
The flow rates of stock solutions and dilution water should be checked at intervals during the test and should not vary by more than 10 % throughout the test.
β.
A flow rate equivalent to at least five test chamber volumes per 24 hours has been found suitable (1).
Στο ρυζόψαρο, για τη διατομή της κοιλιάς εκτελείται προσεκτικά μια τομή που εκτείνεται κατά μήκος της κοιλιακής μέσης γραμμής ξεκινώντας από το θωρακικό τόξο μέχρι το πρόσθιο σημείο του πρωκτού.
Care should be taken to avoid the use of plastic tubing or other materials, some of which may contain biologically active chemicals or may adsorb the test chemical.
Με τη χρήση μιας μικρής λαβίδας και ενός μικρού ψαλιδιού, το ήπαρ αφαιρείται προσεκτικά.
The stock solution should preferably be prepared without the use of solvents by simply mixing or agitating the test chemical in the dilution water by using mechanical means (e.g. stirring or ultrasonication).
Τα δείγματα για ανάλυση VTG τοποθετούνται σε σωλήνες Eppendorf και καταψύχονται αμέσως σε υγρό άζωτο.
If the test chemical is difficult to dissolve in water, procedures described in the OECD Guidance Document on aquatic toxicity testing of difficult substances and mixtures should be followed (36).
Το νεκρό σώμα μαζί με τις γονάδες τοποθετείται σε προεπισημασμένη πλαστική κασέτα ιστών, η οποία μεταφέρεται σε μονιμοποιητικό υγρό του Davidson ή του Bouin.
The use of solvents should be avoided but may be necessary in some cases in order to produce a suitably concentrated stock solution.
Ο όγκος του μονιμοποιητικού υγρού θα πρέπει να είναι τουλάχιστον 10 φορές μεγαλύτερος από τον κατά προσέγγιση όγκο των ιστών.
Examples of suitable solvents are given in (36).
Ο περιέκτης με το μονιμοποιητικό υγρό ανακινείται απαλά για πέντε δευτερόλεπτα για να απομακρυνθούν οι φυσαλίδες αέρα από την κασέτα.
Semi-static test conditions should be avoided unless justification is provided on compelling reasons associated with the test chemical (e.g. stability, limited availability, high cost or hazard).
α.
For the semi-static technique, two different renewal procedures may be followed.
Όλοι οι ιστοί μένουν στο μονιμοποιητικό υγρό του Davidson όλη τη νύχτα και την επόμενη ημέρα μεταφέρονται σε ξεχωριστούς περιέκτες που περιέχουν ουδέτερο ρυθμιστικό διάλυμα φορμαλδεΰδης (φορμόλη) 10 %.
Either new test solutions are prepared in clean chambers and surviving eggs and larvae gently transferred into the new chambers, or the test organisms are retained in the test chambers whilst a proportion (at least two thirds) of the test water is changed daily.
Οι περιέκτες με τις κασέτες ανακινούνται απαλά για 5 δευτερόλεπτα για να διασφαλιστεί η επαρκής διείσδυση της φορμαλδεΰδης εντός των κασετών.
Conditions of Exposure
β.
Collection of eggs and duration
Οι ιστοί μένουν στο μονιμοποιητικό υγρό του Bouins για 24 ώρες και, στη συνέχεια, μεταφέρονται σε αιθανόλη 70 %.
To avoid genetic bias, eggs are collected from a minimum of three breeding pairs or groups, mixed and randomly selected to initiate the test.
Επεξεργασία ιστών
For the three-spined stickleback, see the description of artificial fertilisation in Appendix 11.
Αφυδάτωση των ιστών για επαρκή διείσδυση της παραφίνης.
The test should start as soon as possible after the eggs have been fertilised, the embryos preferably being immersed in the test solutions before cleavage of the blastodisc commences, or as close as possible after this stage and no later than 12 h post fertilisation.