natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Χρησιμοποιείται υπόστρωμα κυτταροκαλλιέργειας με ρυθμιστικό διάλυμα περιεκτικότητας σε ορό τουλάχιστον 10 %.
Tissue material may be subjected to other diagnostic techniques, such as IFAT on frozen sections, immunohistochemistry on formalin fixed tissue material.
Για τον ενοφθαλμισμό χρησιμοποιείται χαμηλή τιμή MOI (< 1).
Those rapid techniques shall be supplemented with a virological examination in accordance with either point II(a) or point II(b) within 48 hours after sampling, if:
Όταν επιτευχθεί το συνολικό ΚΠΦ, ο ιός συλλέγεται με φυγοκέντρηση του υπερκείμενου υγρού της κυτταροκαλλιέργειας στα 2000 × g επί 15 λεπτά, αποστειρώνεται με διήθηση μέσω διηθητικής μεμβράνης των 0,45 μm και κατανέμεται σε κρυοσωλήνες με την κατάλληλη επισήμανση.
a negative result is obtained; or
Ο ιός φυλάσσεται σε θερμοκρασία – 80 °C.
a positive result is obtained with material representing the first case of IHN or VHS.
Προετοιμασία δειγμάτων ιχθύων
Low MOI for inoculation (< 1) shall be used.
Επιπρόσθετα, μπορεί να συμπεριληφθεί η σπλήνα, ο εγκέφαλος και το έντερο ως πρόσθετο ξεχωριστό δείγμα.
1 week after freezing, three replicate vials with each virus shall be thawed under cold water and titrated on their respective cell lines.
Σε σοβαρές περιπτώσεις, μπορεί να ενοποιηθεί ιστολογικό υλικό από έως πέντε ιχθύς.
At least every 6 months, or if it is suspected that the susceptibility of a cell line has decreased, each virus isolate shall be thawed and titrated.
Επιπλέον, σε ορισμένες περιπτώσεις μπορούν να χρησιμοποιηθούν μη θανατηφόρα δείγματα, όπως αίμα, βραγχιακό επίχρισμα σε μάκτρο, βιοψία βραγχίου, επίχρισμα βλέννας (ήτοι μπορεί να χρησιμοποιηθούν ιδιαίτερα πολύτιμοι ιχθύες σε περίπτωση υπόνοιας για την παρουσία του KHV).
Titration procedures must be described in detail and the same procedure followed each time.
Εξαγωγή DNA
Titration by end point dilution shall include at least six replicates at each dilution step.
Το DNA εξάγεται σύμφωνα με τις πρότυπες διαδικασίες.
The titres shall be compared with previously obtained titres.
Μπορούν να χρησιμοποιηθούν εμπορικά διαθέσιμα κιτ εξαγωγής DNA που παράγουν DNA υψηλής ποιότητας κατάλληλο για χρήση με τα πρωτόκολλα PCR, τα οποία αναφέρονται στο σημείο I.2.
If the titre of any of the three virus isolates drops by a factor of 2 logs or more, compared with the initial titre, the cell line shall no longer be used for surveillance purposes.
Ανίχνευση του παράγοντα και ταυτοποίηση με μεθόδους που βασίζονται στην αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR)
If different cell lines are kept in the laboratory each line shall be examined separately.
I.2.1. qPCR για ανίχνευση του KHV
Records shall be kept for a period of at least 10 years.
Για την ανίχνευση του KHV με qPCR, χρησιμοποιείται η ακόλουθη δοκιμασία qPCR:
DETAILED DIAGNOSTIC METHODS AND PROCEDURES FOR THE SURVEILLANCE AND CONFIRMATION OF KHV DISEASE (KHVD)
Πρόσθιος εκκινητής (KHV-86f): 5′- GACGCCGGAGACCTTGTG -3′,
I. Detailed diagnostic methods and procedures for the confirmation of the presence of or to rule out the suspicion of KHVD
Αντίστροφος εκκινητής (KHV-163r): 5′- CGGGTTCTTATTTTTGTCCTTGTT -3′
When a laboratory examination is required for the purpose of confirmation of the presence of or to rule out the suspicion of KHVD in accordance with Article 57(b) of Directive 2006/88/EC, using the diagnostic methods set out in Section III of Part 2 of Annex I, the detailed diagnostic methods and procedures set out in points I.1 – I.2 of this Part shall apply.
και ανιχνευτής (KHV-109p): 5′-FAM- CTTCCTCTGCTCGGCGAGCACG -3′.
Preparation of samples from fish
Συνθήκες των κύκλων:
For diagnostic purposes the fish (sent alive or killed and packed separately in sealed aseptic containers) or alternatively frozen organs or organ pieces preserved in 80 % to absolute ethanol or viral transport medium (to be processed within 48 hours after collection) may be used for testing with conventional PCR or qPCR based methods.
ένας κύκλος στους 95 °C επί 15 λεπτά, ακολουθούμενος από 40 κύκλους στους 94 °C επί 15 δευτερόλεπτα και στους 60 °C επί 60 δευτερόλεπτα.
For the detection of KHV, gill and kidney shall be collected; in addition spleen, encephalon and intestine may be included in an additional separated sample.
Ωστόσο, αντ' αυτής μπορούν να εφαρμόζονται και άλλες εκδοχές qPCR αποδεδειγμένης παρόμοιας αποτελεσματικότητας.
In acute cases, tissue material of up to five fish may be pooled.
Συμβατική PCR για ανίχνευση του KHV
Furthermore, non-lethal samples such as blood, gill swabs, gill biopsy, mucus scrape may be used in certain cases (namely very valuable fish may be used in the case of the suspicion of the presence of KHV).
Χρησιμοποιείται η δοκιμασία που περιγράφεται στο παρόν σημείο, η οποία στοχεύει το γονίδιο κινάσης της θυμιδίνης (TK) του KHV.
DNA extraction
Ωστόσο, αντ' αυτού μπορούν να εφαρμόζονται άλλες δοκιμασίες PCR με τεκμηριωμένα παρόμοια ευαισθησία και ειδικότητα σε σχέση με τη δοκιμασία που περιγράφηκε.
DNA shall be extracted in accordance with standard procedures.
Πρόσθιος εκκινητής (KHV-TKf):
The commercially available DNA extraction kits that produce high quality DNA suitable for use with the PCR protocols referred to in point I.2 may be used.
5′-GGGTTACCTGTAC GAG-3′; Αντίστροφος εκκινητής (KHV-TKr):
Agent detection and identification by Polymerase chain reaction (PCR) based methods
5′-CACCCAGTAGATTA TGC-3′.
I.2.1. qPCR for KHV detection
Συνθήκες των κύκλων:
For qPCR detection of KHV, the following qPCR assay shall be used:
ένας κύκλος στους 95 °C επί 5 λεπτά, ακολουθούμενος από 35 κύκλους στους 95 °C επί 30 δευτερόλεπτα, στους 52 °C επί 30 δευτερόλεπτα, στους 72 °C επί ένα λεπτό και ένας κύκλος στους 72 °C επί 10 λεπτά.
Forward primer (KHV-86f): 5′- GACGCCGGAGACCTTGTG -3′;
Το μέγεθος του προϊόντος πρέπει να είναι 409 bp.
Reverse primer (KHV-163r): 5′- CGGGTTCTTATTTTTGTCCTTGTT -3′;
Επιπλέον, μπορεί να προκύψουν ψευδώς θετικά αποτελέσματα λόγω πρόσδεσης ψευδούς εκκινητή ή επιμόλυνσης.
and probe (KHV-109p): 5′-FAM- CTTCCTCTGCTCGGCGAGCACG -3′.
Ωστόσο, αντ' αυτής μπορούν να εφαρμόζονται και άλλες εκδοχές PCR αποδεδειγμένης παρόμοιας αποτελεσματικότητας.
Cycling conditions: one cycle of 95 °C at 15 minutes, followed by 40 cycles of 94 °C at 15 seconds and 60 °C for 60 seconds.
Η πρώτη ανίχνευση σε μια περιοχή επιβεβαιώνεται μέσω προσδιορισμού αλληλουχίας ή αποστέλλεται για άμεση ταυτοποίηση σε ένα εθνικό εργαστήριο αναφοράς ή στο εργαστήριο αναφοράς της ΕΕ για ασθένειες ιχθύων που αναφέρεται στο παράρτημα VI της οδηγίας 2006/88/ΕΚ.
However, other qPCR versions of proven similar efficacy may be used instead.
Λεπτομερείς διαγνωστικές μέθοδοι και διαδικασίες για την επιτήρηση της KHVD
Conventional PCR for KHV detection
Κατά τη διενέργεια της δειγματοληψίας και των εργαστηριακών εξετάσεων για τους σκοπούς της απόκτησης ή διατήρησης ορισμένων υγειονομικών καθεστώτων όσον αφορά την KHVD, όπως ορίζεται στο παράρτημα I μέρος 2 τμήμα I, με τη χρήση των διαγνωστικών μεθόδων που προβλέπονται στο μέρος 2 τμήματα II ή III του εν λόγω παραρτήματος, εφαρμόζονται οι λεπτομερείς διαγνωστικές μέθοδοι και διαδικασίες που προβλέπονται στα ακόλουθα σημεία II.1 και I.2 του παρόντος μέρους.
The assay described in this point targeting the Thymine kinase (TK) gene of KHV shall be used.
Εάν είναι δυνατόν, θα γίνει δειγματοληψία από ιχθύς που έχουν διατηρηθεί για παρατεταμένο χρονικό διάστημα στο επιτρεπτό εύρος θερμοκρασίας του ιού (ήτοι δύο έως τρεις εβδομάδες στους 15 °C έως 26 °C).
However, other PCR assays with demonstrated similar sensitivities and specificities to the described assay may be used instead.
Εάν είναι δυνατόν, τα δείγματα συλλέγονται 24 ώρες, και το αργότερο 72 ώρες, μετά την εφαρμογή πρακτικών διαχείρισης που μπορεί να αναζωπυρώσουν τον ιό σε ιχθύς που είναι φορείς, όπως η σύλληψη με δίχτυ ή η μεταφορά, προκειμένου να αυξηθούν οι πιθανότητας ανίχνευσης του KHV.
Forward primer (KHV-TKf): 5′-GGGTTACCTGTAC GAG-3′;
Για τους σκοπούς επιτήρησης της KHVD, οι ιχθύες μπορούν να αποσταλούν ζωντανοί ή να έχουν θανατωθεί και συσκευαστεί χωριστά σε σφραγισμένους άσηπτους περιέκτες ή, εναλλακτικά, μπορούν να χρησιμοποιηθούν κατεψυγμένα όργανα ή τμήματα οργάνων διατηρημένα σε 80 % έως 100 % αλκοόλη ή υπόστρωμα μεταφοράς ιών (προς επεξεργασία εντός 48 ωρών από τη συλλογή) για εξέταση με συμβατικές μεθόδους που βασίζονται σε PCR.
Reverse primer (KHV-TKr): 5′-CACCCAGTAGATTA TGC-3′.
Για την επιτήρηση της KHVD, συλλέγεται ιστός βραγχίου και νεφρού.
Cycling conditions: one cycle of 95 °C for 5 minutes followed by 35 cycles of 95 °C for 30 seconds, 52 °C for 30 seconds, 72 °C for one minute and one cycle of 72 °C for 10 minutes.
Για τους σκοπούς επιτήρησης της KHVD, αποφεύγεται η ενοποίηση των δειγμάτων, όπου είναι δυνατόν.
Product size should be 409 bp.
Εάν είναι απαραίτητη η ενοποίηση, μπορεί να γίνει ενοποίηση ιστολογικού υλικού από δύο ιχθύς το πολύ.
Furthermore, false-positive results may occur because of false primer annealing or contamination.
Τα μεγαλύτερα δείγματα ομογενοποιούνται με τη χρήση ιγδίου ή ομογενοποιητή και γίνεται ανάκτηση των υποδειγμάτων για εξαγωγή DNA πριν από τη διαύγαση.
However, other PCR versions of proven similar efficacy may be used instead.
Εναλλακτικά, μπορεί να συλλεχθούν υποδείγματα από κάθε ιστό που συμπεριλαμβάνεται στο δείγμα και να τοποθετηθούν σε «σωλήνες λύσης».
The first detection in an area shall be confirmed by sequencing or sent to a to a national reference laboratory or to the EU reference laboratory for fish diseases referred to in Annex VI to Directive 2006/88/EC, for immediate identification.
Μπορούν να χρησιμοποιηθούν εμπορικά διαθέσιμα κιτ εξαγωγής DNA που παράγουν DNA υψηλής ποιότητας κατάλληλο για χρήση με τα πρωτόκολλα PCR, τα οποία ορίζονται στο σημείο II.2.
Detailed diagnostic methods and procedures for the surveillance of KHVD
Η αποδεκτή αναλογία ιστού — υποστρώματος είναι 1:9 w/v.
When sampling and laboratory examination for the purpose of obtaining or maintaining certain health statuses with regard to KHVD as set out in Section I of Part 2 of Annex I are carried out using the diagnostic methods set out in Sections II or III of Part 2 of that Annex, the detailed diagnostic methods and procedures set out in the following points II.1 and II.2 of this Part shall apply.
Στις δοκιμές συμπεριλαμβάνονται 20 έως 25 mg ιστολογικού υλικού.
If possible, fish that have been kept for a prolonged time period at the virus permissive temperature range (namely, 2 to 3 weeks at 15 °C to 26 °C) shall be sampled.
Επιτήρηση της KHVD με μεθόδους που βασίζονται στην PCR
If possible, samples shall be collected 24 hours but not later than 72 hours after management practices that may reactivate the virus in fish with a carrier status, such as netting or transport, in order to enhance the chance of KHV detection.
Για την επιτήρηση του KHV, χρησιμοποιείται qPCR.
For the purpose of the surveillance of KHVD, the fish may be sent alive or killed and packed separately in sealed aseptic containers or alternatively frozen organs or organ pieces preserved in 80 % to 100 % alcohol or viral transport medium (to be processed within 48 hours after collection) may be used for testing PCR based methods.
Εάν εμφανιστούν θετικά δείγματα σε μια περιοχή που δεν είχε επιβεβαιωθεί προηγουμένως ως θετική, τα αποτελέσματα της δοκιμής επιβεβαιώνονται με:
For the surveillance of KHVD, gill and kidney tissue shall be collected.
προσδιορισμό της ακολουθίας ενός προϊόντος PCR ή ένθετης PCR από τα δείγματα.
For the purpose of surveillance of KHVD, pooling shall be avoided where possible.
Η ληφθείσα καθαρή συναινετική αλληλουχία πρέπει να αντιστοιχεί (τουλάχιστον κατά 98 %) με τις εν λόγω αλληλουχίες αναφοράς.
If pooling is necessary, tissue material from a maximum of two fish may be pooled.
ή, εναλλακτικά, με αποστολή των δειγμάτων σε εθνικό εργαστήριο αναφοράς για επιβεβαίωση.
Larger samples shall be homogenised in mortar and pestle or stomacher, and subsamples retrieved for DNA extraction before clarification.
qPCR για ανίχνευση του KHV
Alternatively, subsamples may be collected from each tissue included in the sample and placed in ‘lysis-tubes’.
Χρησιμοποιείται η qPCR που περιγράφεται παρακάτω:
Commercially available DNA extraction kits that produce high quality DNA suitable for use with the PCR protocols set out in point II.2 may be used.
ένας κύκλος στους 95 °C επί 15 λεπτά, ακολουθούμενος από 50 κύκλους στους 94 °C επί 15 δευτερόλεπτα και στους 60 °C επί 60 δευτερόλεπτα.
The acceptable tissue medium ratio shall be 1:9 w/v.
Τα αποτελέσματα της qPCR ενδέχεται να διαφοροποιούνται ανάλογα με τις συνθήκες υπό τις οποίες αυτή εκτελείται, δηλαδή τα πρωτόκολλα των θερμικών κύκλων μπορεί να απαιτούν βελτιστοποίηση, ανάλογα με τον θερμικό κυκλοποιητή που χρησιμοποιείται.
20 to 25 mg tissue material shall be included in the tests.
Συμβατική PCR για επιβεβαίωση της ανίχνευσης του KHV
Surveillance of KHVD by PCR based methods
Για επιβεβαίωση της παρουσίας λοίμωξης από τον KHV, χρησιμοποιείται η γενική ένθετη PCR που περιγράφεται στον πίνακα 2.1 παρακάτω, ακολουθούμενη από τον προσδιορισμό της αλληλουχίας του προϊόντος ενίσχυσης.
For the surveillance of KHV, a qPCR shall be used.
Πίνακας 2.1
If positive samples appear in an area not previously confirmed positive, the test results shall be confirmed either:
Εκκινητές και συνθήκες για τη δοκιμασία ένθετης PCR που στοχεύει όλους τους ερπητοϊούς του κυπρίνου (CyHV-1, CyHV-2 και CyHV-3)
by sequencing of a PCR or nested PCR product from the samples.
Όνομα εκκινητή
The obtained clean consensus sequence shall match (by at least 98 %) with these reference sequences.
Αλληλουχία
or alternatively, samples may be sent to a national reference laboratory for confirmation.
Συνθήκες των κύκλων
qPCR for KHV detection
Μέγεθος προϊόντος
The qPCR described as follows shall be used:
CyHVpol-πρόσθιος
Cycling conditions: one cycle of 95 °C at 15 minutes, followed by 50 cycles of 94 °C at 15 seconds and 60 °C for 60 seconds.
Πρώτος γύρος της PCR
The results of the qPCR may vary depending on the conditions under which it is performed, namely the thermal protocols might need optimisation, depending on the thermal cycler in use.
1 κύκλος:
Conventional PCR for confirmation of KHV detection
95 °C επί 2 λεπτά
For confirmation of the presence of infection with KHV, the generic nested PCR described in the following Table 2.1 shall be used followed by sequencing of the amplified product.
40 κύκλοι:
Table 2.1
95 °C επί 30 δευτερόλεπτα
Primers and conditions for the nested PCR assay targeting all cyprinid herpesviruses (CyHV-1, CyHV-2 and CyHV-3)
55 °C επί 30 δευτερόλεπτα
Primer name
72 °C επί 45 δευτερόλεπτα
Sequence
72 °C επί 10 λεπτά
Cycling conditions
CyHVpol-αντίστροφος
Product size
CyHVpol-εσωτερικός πρόσθιος
CyHVpol-forward
Δεύτερος γύρος της PCR
First round PCR
95 °C επί 2 λεπτά
1 cycle:
CyHVpol-εσωτερικός αντίστροφος
95 °C 2 minutes
Αντ' αυτής μπορούν να εφαρμόζονται και άλλες εκδοχές PCR αποδεδειγμένης παρόμοιας αποτελεσματικότητας.
40 cycles:
Ο προσδιορισμός της αλληλουχίας μπορεί να διεξάγεται από το εργαστήριο ή από εξωτερικές εξειδικευμένες εταιρείες προσδιορισμού αλληλουχίας.
95 °C for 30 seconds
Τα αποτελέσματα του προσδιορισμού της αλληλουχίας αναλύονται μέσω ευθυγράμμισης των αλληλουχιών με τις γνωστές αλληλουχίες αναφοράς του KHV (Αριθμοί πρόσβασης στην Gen Bank AP008984, DQ657948 και DQ177346).
55 °C for 30 seconds
Η ληφθείσα καθαρή συναινετική αλληλουχία πρέπει να αντιστοιχεί κατά 98 % τουλάχιστον με τις εν λόγω αλληλουχίες αναφοράς.
72 °C for 45 seconds
ΛΕΠΤΟΜΕΡΕΙΣ ΔΙΑΓΝΩΣΤΙΚΕΣ ΜΕΘΟΔΟΙ ΚΑΙ ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΕΣ ΓΙΑ ΤΗΝ ΕΠΙΤΗΡΗΣΗ ΚΑΙ ΕΠΙΒΕΒΑΙΩΣΗ ΛΟΙΜΩΔΟΥΣ ΑΝΑΙΜΙΑΣ ΤΟΥ ΣΟΛΟΜΟΥ (ΛΑΣ)
72 °C for 10 minutes
I.
CyHVpol-reverse
Διαδικασίες δειγματοληψίας για την επιτήρηση και τον έλεγχο της ΛΑΣ
CyHVpol-internal forward
Κατά τη διενέργεια της δειγματοληψίας και της εργαστηριακής εξέτασης για τους σκοπούς των προγραμμάτων επιτήρησης ή εξάλειψης που ορίζονται στο παράρτημα I μέρος 3 ή για την επιβεβαίωση ή τον αποκλεισμό της παρουσίας ΛΑΣ σύμφωνα με το άρθρο 57 στοιχείο β) της οδηγίας 2006/88/ΕΚ, εφαρμόζονται οι λεπτομερείς μέθοδοι και διαδικασίες που ορίζονται στα σημεία I.1, I.2 και I.3 του παρόντος τμήματος.
Second round PCR
Για τους σκοπούς της εργαστηριακής εξέτασης για την παρουσία ΛΑΣ, τα δείγματα ιχθύων δεν ενοποιούνται, όπου είναι δυνατόν.
95 °C 2 minutes,
Ωστόσο, για τους σκοπούς της επιτήρησης για ΛΑΣ, γίνεται αποδεκτή η ενοποίηση 2 έως 5 ιχθύων.
CyHVpol-internal reverse
Δείγματα για ανάλυση RT-PCR (ανάστροφη μεταγραφάση — αλυσιδωτή αντίδραση της πολυμεράσης) λαμβάνονται από όλους τους ιχθύς που αποτέλεσαν αντικείμενο δειγματοληψίας.
PCR versions of proven similar efficacy may be used instead.
Αφαιρείται τεμάχιο μεσόνεφρου από τον ιχθύ, με τη βοήθεια αποστειρωμένου εργαλείου, και μεταφέρεται σε σωληνάριο μικροφυγοκέντρησης που περιέχει 1 ml συντηρητικό διάλυμα του RNA, αποδεδειγμένης αποτελεσματικότητας.
Sequencing may be performed by the laboratory or at external specialised sequencing companies.
Ιστός από έως πέντε ιχθύς συλλέγεται σε ένα σωλήνα που περιέχει διάλυμα μεταφοράς και αποτελεί ένα ενοποιημένο δείγμα.
Sequencing results shall be analysed by aligning the sequences to the known reference sequences of KHV (Gen Bank accession numbers AP008984, DQ657948 and DQ177346).
Το βάρος του ιστού σε ένα δείγμα είναι 0,5 g.
The obtained clean consensus sequence must match at least to 98 % with those reference sequences.
Όταν το μέγεθος των ιχθύων είναι τόσο μικρό ώστε να μην επιτρέπει τη λήψη δείγματος με το απαιτούμενο βάρος, είναι δυνατόν να ληφθούν τεμάχια νεφρού, καρδιάς, σπλήνας, ήπατος ή πυλωρικών τυφλών, με την ως άνω σειρά προτιμήσεως, ούτως ώστε να συμπληρωθούν τα 0,5 g.
DETAILED DIAGNOSTIC METHODS AND PROCEDURES FOR THE SURVEILLANCE AND CONFIRMATION OF INFECTIOUS SALMON ANEMIA (ISA)
Ο ιστός που προορίζεται για ιστολογική εξέταση λαμβάνεται κατ' αποκλειστικότητα από προσφάτως θανατωθέντες ιχθύς κανονικής σύστασης, με κλινικά σημεία ή μεταθανάτια ευρήματα που συνάδουν με την παρουσία ΛΑΣ.
I. Sampling procedures for the surveillance and control of ISA
Λαμβάνεται δείγμα από τυχόν εξωτερικές ή εσωτερικές αλλοιώσεις και, οπωσδήποτε, αφαιρούνται δείγματα από το μεσόνεφρο, την καρδιά, το ήπαρ, το πάγκρεας, το έντερο, τα βράγχια και τον σπλήνα από κάθε ιχθύ, με τη βοήθεια νυστεριού, και μεταφέρονται σε φυσιολογικό ορό με ρυθμιστικό διάλυμα φορμόλης 8 % έως 10 % (vol:vol).
When sampling and laboratory examination are carried out, for the purpose of the surveillance or eradication programmes set out in Part 3 of Annex I or to confirm or rule out the presence of ISA in accordance with Article 57(b) of Directive 2006/88/EC, the detailed methods and procedures set out in points I.1, I.2 and I.3 of this Section shall apply.
Η αναλογία σταθεροποιητικού παράγοντα/ιστού είναι τουλάχιστον 20:1, ούτως ώστε να εξασφαλίζεται η ικανοποιητική διατήρηση των ιστών.
For the purpose of laboratory examination for the presence of ISA, fish samples shall not be pooled where possible.
Για ανοσοϊστοχημική (IHC) ανάλυση, λαμβάνονται δείγματα από το μεσόνεφρο και την καρδιά.
However, for the purpose of surveillance for ISA, the pooling of 2 to be 5 fish is accepted.
Ιστοί για ιολογική εξέταση σε κυτταροκαλλιέργεια λαμβάνονται από όλους τους δειγματοληπτούμενους ιχθύς.
Samples for Reverse Transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) analysis shall be taken from all of the fish sampled.
Τα τεμάχια ήπατος, πρόνεφρου ή μεσόνεφρου, καρδιάς και σπλήνα αφαιρούνται από τον ιχθύ με τη βοήθεια αποστειρωμένου εργαλείου και μεταφέρονται σε πλαστικούς σωλήνες που περιέχουν 9 ml υποστρώματος μεταφοράς.
A piece of mid-kidney shall be removed from the fish using a sterile instrument and transferred to a microfuge tube containing one ml RNA preservative solution of proven efficacy.
Ιστός από έως πέντε ιχθύς συλλέγεται σε ένα σωλήνα που περιέχει διάλυμα μεταφοράς και αποτελεί ένα ενοποιημένο δείγμα.
Tissue from up to five fish may be collected in one tube of transport solution and shall represent one pooled sample.
Το βάρος του ιστού σε ένα δείγμα πρέπει να είναι 1,0 ± 0,5 g.
The weight of tissue in one sample shall be 0,5 g.
Αποστολή δειγμάτων ιχθύων
When the fish are too small to obtain a sample of the required weight, pieces of kidney, heart, spleen, liver or pyloric caeca may be taken, in that order of preference, to make up 0,5 g.
Είναι δυνατή η μεταφορά ολόκληρων ιχθύων στο εργαστήριο, εφόσον πληρούνται οι θερμοκρασιακές απαιτήσεις κατά τη μεταφορά, όπως περιγράφεται στην παράγραφο 3 του παρόντος σημείου.
Tissue for histological examination shall only be taken from freshly killed fish with a normal constitution, exhibiting clinical signs or post-mortem findings consistent with the presence of ISA.
Οι ολόκληροι ιχθύες τυλίγονται σε απορροφητικό χαρτί και μεταφέρονται σε πλαστική σακούλα, υπό ψύξη, όπως περιγράφεται στην εν λόγω παράγραφο.
Any external or internal lesions shall be sampled and in any case samples of mid-kidney, heart, liver, pancreas, gut, gills and spleen shall be removed from individual fish using a scalpel and transferred to 8 % to 10 % (vol:vol) buffered formol saline.
Είναι δυνατή επίσης η αποστολή ζωντανών ιχθύων, μόνον όμως υπό την εποπτεία του εθνικού εργαστηρίου αναφοράς για ασθένειες ιχθύων και λαμβάνοντας υπόψη τα πρόσθετα ζητήματα που αφορούν την απολύμανση και τη βιοασφάλεια κατά τη μεταφορά ζωντανών ιχθύων.
The ratio of fixative to tissue shall be at least 20:1 to ensure satisfactory preservation of the tissues.
Τα δείγματα αίματος και οι σωλήνες που περιέχουν ιστούς ιχθύων για ιολογική εξέταση ή ανάλυση RT-PCR (ανάστροφη μεταγραφάση — αλυσιδωτή αντίδραση της πολυμεράσης) τοποθετούνται σε μονωμένους περιέκτες, όπως κιβώτια πολυστυρολίου με παχιά τοιχώματα, μαζί με αρκετό πάγο ή παγοκολώνες, ούτως ώστε να εξασφαλίζεται η ψύξη των δειγμάτων κατά τη μεταφορά στο εργαστήριο.
For immunohistochemistry (IHC), samples from mid-kidney and heart shall be taken.
Αποφεύγεται η κατάψυξη, ενώ κατά την παραλαβή τους πρέπει να υπάρχει ακόμη πάγος στο κιβώτιο μεταφοράς ή μία ή περισσότερες παγοκολώνες πρέπει να είναι εν μέρει ή πλήρως παγωμένες.
Tissues for virological examination on cell culture shall be taken from all of the fish sampled.
Σε εξαιρετικές περιστάσεις, δείγματα RT-PCR και δείγματα για ιολογική εξέταση υφίστανται στιγμιαία κατάψυξη και μεταφέρονται στο εργαστήριο υπό θερμοκρασία – 20 °C ή χαμηλότερη.
Pieces of the liver, anterior or mid-kidney, heart and spleen shall be removed from the fish using a sterile instrument and transferred to plastic tubes containing 9 ml transport medium.
Για την ανάλυση RT-PCR των ιστών που διατηρήθηκαν σε ριβονουκλεϊκό οξύ (RNA), η εξαγωγή RNA διεξάγεται εντός των παρακάτω χρονικών πλαισίων ανάλογα με τη θερμοκρασία στην οποία φυλάσσονται τα δείγματα:
Tissues from up to five fish may be collected in one tube containing transport solution and represent one pooled sample.
δείγματα που φυλάσσονται στους – 20 °C: επ' αόριστον.
The weight of tissue in one sample shall be 1,0 ± 0,5 g.
Σε περίπτωση μεταφοράς ιστών ιχθύων σε σταθεροποιητικό μέσο για ιστολογική εξέταση, αυτοί αποστέλλονται σε στεγανούς σωλήνες εντός ανθεκτικών στα κτυπήματα περιεκτών.
Shipment of samples from fish
Αποφεύγεται η κατάψυξη αυτών των δειγμάτων.
Whole fish may be transported to the laboratory if the temperature requirements during transportation, as described in paragraph 3 of this point can be fulfilled.
Κατόπιν έγκρισης του διαγνωστικού εργαστηρίου, μπορούν να συλλεχθούν και να προετοιμαστούν για συμπληρωματική εξέταση ιστοί ιχθύων άλλοι εκτός αυτών που αναφέρονται στο σημείο I.1.
Whole fish shall be wrapped in absorbent paper and shipped in a plastic bag, chilled as described in that paragraph.
Λεπτομερείς διαγνωστικές μέθοδοι και διαδικασίες για την επιτήρηση και την επιβεβαίωση της παρουσίας ή τον αποκλεισμό της υπόνοιας για ΛΑΣ
Live fish may also be shipped, but only under the supervision of the National reference laboratory for fish diseases and taking into account the additional disinfection and biosecurity issues when transporting live fish.