natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Θέστε τον ομογενοποιητή του μικροσωλήνα σε λειτουργία για 10 με 20 δευτερόλεπτα.
(Pimephales promelas)
Κατά τη διάρκεια της λειτουργίας, παγώστε τον μικροσωλήνα 1,5 ml με θρυμματισμένο πάγο.
Medaka (Oryzias latipes)
Σηκώστε τον ύπερο από τον μικροσωλήνα 1,5 ml και αφήστε το σε αδράνεια για περίπου 10 δευτερόλεπτα.
Zebrafish
Στη συνέχεια διενεργήστε οπτικό έλεγχο της κατάστασης του διαλύματος.
Test type
Εάν παρατηρήσετε κομμάτια ήπατος στο διάλυμα, επαναλάβετε τις διαδικασίες (3) και (4) για να προετοιμάσετε ένα ικανοποιητικό ομογενοποιημένο δείγμα ήπατος.
Flow-through
Παγώστε το ομογενοποιημένο εναιώρημα ήπατος σε βάση πάγου μέχρι την φυγοκέντρηση.
Water temperature
Αλλάζετε τον ύπερο με έναν νέο για κάθε ομογενοποιημένο δείγμα.
Illumination quality
Ομογενοποιήστε όλα τα ήπατα με ρυθμιστικό διάλυμα ομογενοποίησης σύμφωνα με τη διαδικασία που περιγράφεται παραπάνω.
Fluorescent bulbs (wide spectrum)
Φυγοκέντρηση του ομογενοποιημένου αιωρήματος ήπατος
Light intensity 10-20 μE/m2/s, 540-1000 lux, or 50-100 ft-c (ambient laboratory levels)
Επιβεβαιώστε τη θερμοκρασία του ψυχόμενου θαλάμου φυγοκέντρησης στους ≤ 5 °C.
10-20 μE/m2/s, 540-1000 lux, or 50-100 ft-c (ambient laboratory levels)
Τοποθετήστε τους μικροσωλήνες 1,5 ml που περιέχουν το ομογενοποιημένο εναιώρημα ήπατος στην ψυχόμενη φυγόκεντρο (προσαρμόστε τον ζυγό αν χρειάζεται).
Photoperiod (dawn/dusk transitions are optional, however not considered necessary)
Υποβάλετε σε φυγοκέντρηση το ομογενοποιημένο εναιώρημα ήπατος σε 13000 g για 10 λεπτά στους ≤ 5 °C.
16 h light, 8 h dark
Ωστόσο, εάν τα υπερκείμενα υγρά έχουν διαχωριστεί καταλλήλως, η φυγόκεντρος δύναμη και ο χρόνος μπορούν να προσαρμοστούν αναλόγως.
12-16 h light, 12-8 h dark
Μετά τη φυγοκέντρηση, ελέγξτε αν τα υπερκείμενα υγρά έχουν διαχωριστεί καταλλήλως (επιφάνεια: λιπίδια, ενδιάμεσο: υπερκείμενο υγρό, κάτω στρώση: ηπατικός ιστός).
< 5 g per l
Αν ο διαχωρισμός δεν είναι ο κατάλληλος, υποβάλετε εκ νέου το αιώρημα σε φυγκοκέντρηση υπό τις ίδιες συνθήκες.
Test chamber size
Αφαιρέστε όλα τα δείγματα από την ψυχόμενη φυγόκεντρο και τοποθετήστε τα με σειρά στη βάση πάγου σύμφωνα με τον αριθμό δείγματος.
10 l (minimum)
Προσέξτε να μην αναδιαλυθεί κάθε διαχωρισμένη στρώση μετά τη φυγοκέντρηση.
2 l (minimum)
Συλλογή του υπερκείμενου υγρού
5 l (minimum)
Τοποθετήστε τέσσερις μικροσωλήνες 0,5 ml για την αποθήκευση του υπερκείμενου υγρού στη βάση σωλήνων.
Test solution volume
Συλλέξτε 30 μl από κάθε υπερκείμενο υγρό (διαχωρισμένο σαν ενδιάμεση στρώση) με το μικροσιφώνιο και μεταφέρετέ το σε έναν μικροσωλήνα 0,5 ml.
8 l (minimum)
Προσέξτε να μην συλλέξετε λιπίδια από την επιφάνεια ή ηπατικό ιστό από την κάτω στρώση.
l (minimum)
Συλλέξτε το υπερκείμενο υγρό και μεταφέρετέ το σε άλλους δύο μικροσωλήνες 0,5 ml με τον ίδιο τρόπο που περιγράφεται παραπάνω.
4 l (minimum)
Συλλέξτε το υπόλοιπο υπερκείμενο υγρό με το μικροσιφώνιο (αν είναι εφικτό: ≥ 100 μl).
Volume exchanges of test solutions
Στη συνέχεια μεταφέρετε το υπερκείμενο υγρό στον εναπομείναντα μικροσωλήνα 0,5 ml.
Minimum of 6 daily
Κλείστε το πώμα του μικροσωλήνα 0,5 ml και γράψτε τον όγκο του υπερκείμενου υγρού στην ετικέτα.
Minimum of 5 daily
Κατόπιν, παγώστε άμεσα τους μικροσωλήνες τοποθετώντας τους στη βάση πάγου.
Age of test organisms See paragraph 20
Αλλάζετε τη μύτη του μικροσιφωνίου με μία νέα για κάθε υπερκείμενο υγρό.
See paragraph 20
Αν μια μεγάλη ποσότητα λιπιδίων κολλήσει στη μύτη, αλλάξτε την άμεσα για να αποτραπεί η επιμόλυνση του εκχυλίσματος ήπατος με λίπος.
See paragraph 20 12.
Μεταφέρετε όλο το φυγοκεντρημένο υπερκείμενο υγρό σε τέσσερις μικροσωλήνες 0,5 ml σύμφωνα με τη διαδικασία που περιγράφεται παραπάνω.
Approximate wet weight of adult fish (g) Females:
Μετά τη μεταφορά του υπερκείμενου υγρού στους μικροσωλήνες 0,5 ml, τοποθετήστε τους όλους στη βάση σωλήνων με ετικέτα ταυτοποίησης, και μετά παγώστε τους άμεσα τοποθετώντας τους στην κατάψυξη.
1,5 ± 20 %
Αν οι συγκεντρώσεις VTG μετρηθούν αμέσως μετά την προκατεργασία, διατηρήστε έναν μικροσωλήνα 0,5 ml (που περιέχει 30 μl υπερκείμενου υγρού) σε ψύξη στη βάση σωλήνων και μεταφέρετέ τον στον σταθμό εργασίας όπου διεξάγεται η δοκιμή ELISA.
Males:
Σε μια τέτοια περίπτωση, τοποθετήστε τους εναπομείναντες σωλήνες στη βάση σωλήνων και παγώστε τους στην κατάψυξη.
2,5 ± 20 %
Αποθηκεύστε τους μικροσωλήνες 0,5 ml που περιέχουν το υπερκείμενο υγρό του ομογενοποιημένου ήπατος στους ≤ – 70 °C έως ότου χρησιμοποιηθούν στη δοκιμή ELISA.
0,65 ± 20 %
Διαδικασία 3A:
0,4 ± 20 %
Ο όγκος του αίματος κυμαίνεται μεταξύ 5 και 15 μl ανάλογα με το μέγεθος του ψαριού.
10 (5 males and 5 females)
Ίσος όγκος ρυθμιστικού διαλύματος απροτινίνης (6 μgml σε PBS) προστίθεται στον ημιτριχοειδή σωλήνα, και το πλάσμα διαχωρίζεται από το αίμα μέσω φυγοκέντρησης (5 λεπτά στα 600 g).
No. of treatments
Το πλάσμα συλλέγεται σε δοκιμαστικούς σωλήνες και διατηρείται στους – 20 °C έως ότου διεξαχθεί ανάλυση για λεκιθογενίνη ή άλλες πρωτεΐνες που αποτελούν αντικείμενο ενδιαφέροντος.
= 3 (plus appropriate controls)
Διαδικασία 3B:
No. vessels per treatment
Ζεβρόψαρο, αιμοληψία μέσω καρδιακής παρακέντησης
4 minimum
Για να αποφευχθεί η πήξη του αίματος και η αποδόμηση των πρωτεϊνών, τα δείγματα συλλέγονται μέσα σε ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικών με χλωριούχο νάτριο (phosphate-buffered saline, PBS) που περιέχει ηπαρίνη (1000 μονάδες/ml) και τον αναστολέα πρωτεάσης απροτινίνη (2 TIU/ml).
2 minimum
Ως συστατικά για το ρυθμιστικό διάλυμα συνιστώνται αμμωνιακό άλας της ηπαρίνης και λυοφιλιωμένη απροτινίνη.
No. of fish per test concentration
Για τη δειγματοληψία αίματος συνιστάται μια σύριγγα (1 ml) με προσαρμοσμένη λεπτή βελόνα (π.χ. Braun Omnikan-F).
16 adult females and 8 males (4 females and 2 males in each replicate vessel)
Η σύριγγα θα πρέπει να είναι προγεμισμένη με ρυθμιστικό διάλυμα (περίπου 100 μl) για να εκλουθούν πλήρως οι μικροί όγκοι αίματος από κάθε ψάρι.
10 adult females and 10 males (5 females and 5 males in each replicate vessel)
Τα δείγματα αίματος λαμβάνονται με παρακέντηση της καρδιάς.
Feeding regime
Αρχικά, τα ψάρια θα πρέπει να αναισθητοποιηθούν με MS-222 (100 mg/l).
Live or frozen adult or nauplii brine shrimp two or three times daily (ad libitum), commercially available food or a combination of the above
Το κατάλληλο επίπεδο αναισθησίας επιτρέπει στον χρήστη να διακρίνει τον καρδιακό παλμό του ζεβρόψαρου.
Brine shrimp nauplii two or three times daily (ad libitum), commercially available food or a combination of the above
Κατά την παρακέντηση της καρδιάς ασκήστε ελαφρά πίεση στο έμβολο της σύριγγας.
None unless DO concentration falls below 60 % air saturation
Οι συλλέξιμοι όγκοι αίματος κυμαίνονται ανάμεσα σε 20 - 40 μικρόλιτρα.
Clean surface, well or reconstituted water or dechlorinated tap water
Μετά από την καρδιακή παρακέντηση, το μείγμα αίματος/ρυθμιστικού διαλύματος εισάγεται στον δοκιμαστικό σωλήνα.
Pre-exposure period
Το πλάσμα διαχωρίζεται από το αίμα μέσω φυγοκέντρησης (20 λεπτά· 5000 g) και θα πρέπει να φυλάσσεται στους – 80 °C έως ότου χρειασθεί να χρησιμοποιηθεί για ανάλυση.
7 days recommended
Διαδικασία 3Γ:
Chemical exposure duration
Τυποποιημένες διαδικασίες λειτουργίας (ΤΔΛ):
Biological endpoints
Ζεβρόψαρο, ομογενοποίηση κεφαλής & ουράς
survival
Τα ψάρια υποβάλλονται σε αναισθησία και ευθανασία, σύμφωνα με την περιγραφή της δοκιμής.
behaviour
Το κεφάλι και η ουρά κόβονται από το ψάρι σύμφωνα με την εικόνα 1.
sex characteristics
Σημαντική παρατήρηση:
VTG
Όλα τα εργαλεία ανατομής και η πλάκα κοπής θα πρέπει να εκπλένονται και να καθαρίζονται κατάλληλα (π.χ. με 96 % αιθανόλη) ανάμεσα στους χειρισμούς του κάθε ψαριού για την αποφυγή “επιμόλυνσης λεκιθογενίνης” από τα θηλυκά άτομα ή τα αρσενικά άτομα στα οποία έχει πραγματοποιηθεί τεχνητή πρόκληση παραγωγής VTG προς τα αρσενικά άτομα στα οποία δεν έχει πραγματοποιηθεί τεχνητή πρόκληση παραγωγής VTG.
Test acceptability
Για ιστολογία γονάδων
Dissolved oxygen > 60 % of saturation;
Τομή πίσω από το εδρικό πτερύγιο
mean temperature of 25 ± 2 °C;
Για ανάλυση VTG
90 % survival of fish in the controls;
Για ανάλυση VTG
measured test concentrations within 20 % of mean measured values per treatment level.
Το βάρος του συνενωμένου κεφαλιού και της ουράς από το κάθε ψάρι μετράται με ακρίβεια χιλιοστόγραμμου.
mean temperature of 24 ± 2 °C;
Αφού ζυγιστούν, τα τμήματα του ψαριού τοποθετούνται σε κατάλληλους σωλήνες (π.χ. σωλήνες Eppendorf των 1,5 ml) και καταψύχονται στους – 80 °C μέχρι να ομογενοποιηθούν ή ομογενοποιούνται απευθείας σε πάγο με δύο πλαστικούς υπέρους.
mean temperature of 26 ± 2 °C;
(Μπορούν να χρησιμοποιούνται και άλλες μέθοδοι, εάν εκτελούνται σε πάγο και το αποτέλεσμα είναι η δημιουργία μιας ομοιογενούς μάζας).
Some chemical characteristics of acceptable dilution water
Οι σωλήνες θα πρέπει να αριθμούνται κατάλληλα, ώστε το κεφάλι και η ουρά από το ψάρι να μπορούν να σχετιστούν με το αντίστοιχο τμήμα του σώματος που χρησιμοποιείται για την ιστολογική εξέταση των γονάδων.
< 20 mg/l
Όταν επιτευχθεί μια ομοιογενής μάζα, προστίθεται παγωμένο ρυθμιστικό διάλυμα ομογενοποίησης σε ποσότητα ίση με 4 φορές το βάρος του ιστού.
< 2 mg/l
Συνεχίστε τη διαδικασία με τους υπέρους μέχρι το μείγμα να γίνει ομοιογενές.
Total organophosphorus pesticides
Σημαντική σημείωση:
Appendix 4A
Για κάθε ψάρι χρησιμοποιούνται καινούριοι ύπεροι.
Spawning substrate for zebrafish
Τα δείγματα τοποθετούνται πάνω σε πάγο μέχρι τη φυγοκέντρησή τους σε 4 °C και 50000 × g για 30 λεπτά.
Spawning tray
Με τη χρήση ενός σιφωνίου μεταφέρονται 20 μl υπερκείμενου υγρού σε τουλάχιστον δύο σωλήνες, με βύθιση της μύτης του σιφωνίου κάτω από το στρώμα λίπους στην επιφάνεια και με προσεκτική αναρρόφηση του υπερκείμενου υγρού χωρίς κλάσματα λίπους ή ιζήματος.
all glass instrument dish, for example 22 × 15 × 5,5 cm (l × w × d), covered with a removable stainless steel wire lattice (mesh width 2 mm).
Οι σωλήνες αποθηκεύονται στους – 80 °C μέχρι τη χρήση.
The lattice should cover the opening of the instrument dish at a level below the brim.
Ρυθμιστικό διάλυμα ομογενοποίησης:(50 mM Tris-HCl pH 7,4· μείγμα αναστολέων πρωτεάσης 1 % (Sigma)):
On the lattice, spawning substrate should be fixed.
12 ml Tris-HCl pH 7,4 + 120 μl μείγματος αναστολέων πρωτεάσης.TRIS:
It should provide structure for the fish to move into.
TRIS-ULTRA PURE (ICN) π.χ. από Bie & Berntsen, Δανία.Μείγμα αναστολέων πρωτεάσης:
For example, artificial aquaria plants made of green plastic material are suitable (NB: possible adsorption of the test chemical to the plastic material should be considered).
Από τη Sigma (για ιστό θηλαστικών) Κωδικός προϊόντος P 8340.Σημείωση:
The plastic material should be leached out in sufficient volume of warm water for sufficient time to ensure that no chemicals may be disposed to the test water.
Το ρυθμιστικό διάλυμα ομογενοποίησης θα πρέπει να χρησιμοποιείται την ημέρα παρασκευής του.
When using glass materials it should be ensured that the fish are neither injured nor cramped during their vigorous actions.
Κατά τη διάρκεια της χρήσης να τοποθετείται πάνω σε πάγο.
The distance between the tray and the glass panes should be at least 3 cm to ensure that the spawning is not performed outside the tray.
Δείγματά εμπλουτισμού λεκιθογενινησ και πρότυπο αναφοράς μεταξύ διαφορετικών δοκίμων (inter-assay reference standard)
The eggs spawned onto the tray fall through the lattice and can be sampled 45-60 min after the start of illumination.
Για κάθε ημέρα που εκτελούνται δοκιμές λεκιθογενίνης, αναλύεται ένα δείγμα εμπλουτισμού που καταρτίζεται με χρήση ενός προτύπου αναφοράς μεταξύ διαφορετικών δοκιμών.
The transparent eggs are non-adhesive and can easily be counted by using transversal light.
Η λεκιθογενίνη που χρησιμοποιείται για τη δημιουργία ενός προτύπου αναφοράς μεταξύ διαφορετικών δοκιμών θα προέρχεται από διαφορετική παρτίδα από εκείνη που χρησιμοποιείται για την προετοιμασία των προτύπων βαθμονόμησης για τη δοκιμή που εκτελείται.
When using five females per vessel, egg numbers up to 20 at a day can be regarded as low, up to 100 as medium and more than 100 as high numbers.
Το δείγμα εμπλουτισμού θα δημιουργηθεί με την προσθήκη γνωστής ποσότητας του προτύπου που χρησιμοποιείται στις δοκιμές σε δείγμα πλάσματος αρσενικού μάρτυρα.
The spawning tray should be removed, the eggs collected and the spawning tray re-introduced in the test vessel, either as late as possible in the evening or very early in the morning.
Το δείγμα θα εμπλουτιστεί ώστε να επιτευχθεί συγκέντρωση λεκιθογενίνης μεταξύ 10 και 100 φορές παραπάνω από την αναμενόμενη συγκέντρωση λεκιθογενίνης του αρσενικού μάρτυρα.
The time until re-introduction should not exceed one hour since otherwise the cue of the spawning substrate may induce individual mating and spawning at an unusual time.
Το δείγμα πλάσματος του αρσενικού μάρτυρα που εμπλουτίζεται μπορεί να προέρχεται από ένα μεμονωμένο ψάρι ή μπορεί να είναι σύνθετο, προερχόμενο από περισσότερα ψάρια.
If a situation needs a later introduction of the spawning tray, this should be done at least 9 hours after start of the illumination.
Ένα μερικό δείγμα του μη εμπλουτισμένου πλάσματος αρσενικού μάρτυρα θα αναλυθεί σε δύο τουλάχιστον διπλές πλάκες βοθρίων.
At this late time of the day, spawning is not induced any longer.
Το εμπλουτισμένο δείγμα θα αναλυθεί και αυτό σε δύο τουλάχιστον διπλές πλάκες βοθρίων.
Appendix 4B
Η μέση ποσότητα λεκιθογενίνης στα δύο μη εμπλουτισμένα δείγματα πλάσματος αρσενικών μαρτύρων θα προστεθεί στην υπολογιζόμενη ποσότητα λεκιθογενίνης που προστίθεται στα εμπλουτισμένα δείγματα για τον καθορισμό της αναμενόμενης συγκέντρωσης.
Spawning substrate for fathead minnow
Ο λόγος της εν λόγω αναμενόμενης συγκέντρωσης προς τη μετρούμενη συγκέντρωση θα πρέπει να αναφέρεται μαζί με τα αποτελέσματα από κάθε σύνολο δοκιμών που διενεργούνται τη συγκεκριμένη ημέρα.
Two or three combined plastic/ceramic/glass or stainless steel spawning tiles and trays are placed in each of the test chamber (e.g., 80 mm length of grey semi-circular guttering sitting on a lipped tray of 130mm length) (see picture).
Διάγραμμα λήψης αποφάσεων για τη στατιστική ανάλυσή
Properly seasoned PVC or ceramic tiles have demonstrated to be appropriate for a spawning substrate (Thorpe et al, 2007).
Μη ομαλή κατανομή μέσων τιμών των επαυ αλήψεων
It is recommended that the tiles are abraded to improve adhesion.
<=3 επαναλήψεις αν άσυγκέντρωση
The tray should also be screened to prevent fish from access to the fallen eggs unless the egg adhesion efficiency has been demonstrated for the spawning substrate used.
Κανονικές και ομοιογενείς μέσες τιμές των επαναλήψεων
The base is designed to contain any eggs that do not adhere to the tile surface and would therefore fall to the bottom of the tank (or those eggs laid directly onto the flat plastic base).
Ομαλή κατανομή μέσων τιμών των επαν αλήψεων
All spawning substrates should be leached for a minimum of 12 hours, in dilution water, before use.
Δοκιμή Tamhane-Dunnett σε φωλιασ μέυη ANOVA
Appendix 5A
Όχι Ναι
Assessment of secondary sex characteristics in fathead minnow for the detection of certain endocrine active chemicals
Μη μονοτονική
Overview
Μετασχηματισμός για σταδε ροποίηση διασποράς
Potentially important characteristics of physical appearance in adult fathead minnows in endocrine disrupter testing include body colour (i.e. light/dark), coloration patterns (i.e. presence or absence of vertical bands), body shape (i.e. shape of head and pectoral region, distension of abdomen), and specialized secondary sex characteristics (i.e. number and size of nuptial tubercles, size of dorsal pad and ovipositor).
Δοκιμή Dunnett Μη μονοτονική
Nuptial tubercles are located on the head (dorsal pad) of reproductively-active male fathead minnows, and are usually arranged in a bilaterally-symmetric pattern (Jensen et al.
Μονοτονική
2001).
Ίσες διασπορές Ανισες διασπορές
Control females and juvenile males and females exhibit no tubercle development (Jensen et al.
Δοκιμή Tamhane-Dunnett
2001).
<=4 επαυαλήψεις αυάσυγκέντρωση
There can be up to eight individual tubercles around the eyes and between the nares of the males.
Απορρίψτε τον μάρτυρα με το νερό Δοκιμή Dunn
The greatest numbers and largest tubercles are located in two parallel lines immediately below the nares and above the mouth.
Μετασχηματισμός κανονικοποίησης Μονοτονική
In many fish there are groups of tubercles below the lower jaw;
Καθοδικάεφαρ μοζóμενη δοκιμή Jonckheere ή Williams
those closest to the mouth generally occur as a single pair, while the more ventral set can be comprised of up to four tubercles.
Γ.38.
The actual numbers of tubercles is seldom more than 30 (range, 18-28; Jensen et al.
ΔΟΚΙΜΑΣΙΑ ΜΕΤΑΜΟΡΦΩΣΗΣ ΑΜΦΙΒΙΩΝ
2001).
Η παρούσα μέθοδος δοκιμών είναι ισοδύναμη με την κατευθυντήρια γραμμή δοκιμών (TG) 231 του ΟΟΣΑ (2009).
The predominant tubercles (in terms of numbers) are present as a single, relatively round structure, with the height approximately equivalent to the radius.
Η ανάγκη ανάπτυξης και επικύρωσης μιας δοκιμασίας για την ανίχνευση χημικών ουσιών που είναι δραστικές στο θυρεοειδικό σύστημα των σπονδυλωτών προέκυψε από ανησυχίες ότι τα περιβαλλοντικά επίπεδα χημικών ουσιών μπορεί να προκαλέσουν δυσμενείς επιδράσεις τόσο στον άνθρωπο όσο και στη χλωροπανίδα.
Most reproductively-active males also have, at least some, tubercles which are enlarged and pronounced such that they are indistinguishable as individual structures.
Προτάθηκε μια βελτίωση της μελέτης τοξικότητας από του στόματος επαναλαμβανόμενης δόσης 28 ημερών σε τρωκτικά (Κεφάλαιο B.7 του παρόντος προσαρτήματος) και η δοκιμασία μεταμόρφωσης αμφιβίων (AMA).
2001; 2003), while oestrogen receptor agonists may decrease number or size of nuptial tubercles in males (Miles-Richardson et al.
Η δοκιμασία μεταμόρφωσης αμφιβίων (AMA) είναι μια δοκιμασία διαλογής που έχει στόχο να προσδιορίσει εμπειρικά χημικές ουσίες οι οποίες ενδέχεται να παρέμβουν στη φυσιολογική λειτουργία του άξονα υποθαλάμου-υπόφυσης-θυρεοειδούς (ΥΥΘ).
Viewing is best accomplished using an illuminated magnifying glass or 3X illuminated dissection scope.
Η δοκιμασία AMA αντιπροσωπεύει ένα γενικευμένο μοντέλο σπονδυλωτών στον βαθμό που βασίζεται σε διατηρημένες δομές και λειτουργίες του άξονα ΥΥΘ.
View fish dorsally and anterior forward (head toward viewer).
Πρόκειται για μια σημαντική δοκιμασία, επειδή η μεταμόρφωση των αμφιβίων προσφέρει μια καλά μελετημένη, εξαρτώμενη από τον θυρεοειδή διαδικασία που ανταποκρίνεται σε χημικές ουσίες οι οποίες είναι δραστικές εντός του άξονα ΥΥΘ.
Place fish in small Petri dish (e.g., 100 mm in diameter), anterior forward, and ventral down.
Επίσης, είναι η μοναδική υφιστάμενη δοκιμασία που ανιχνεύει τη λειτουργία του θυρεοειδούς σε ένα ζώο το οποίο βρίσκεται σε φάση μορφολογικής ανάπτυξης.
Focus viewfinder to allow identification of tubercles.
Ο γενικός πειραματικός σχεδιασμός περιλαμβάνει την έκθεση γυρίνων σταδίου 51 του είδους Xenopus laevis σε τουλάχιστον τρεις διαφορετικές συγκεντρώσεις μιας υπο δοκιμή χημικής ουσίας και ενός νερού αραίωσης-μάρτυρα για 21 ημέρες.
Gently and slowly roll fish from side to side to identify tubercle areas.
Χρησιμοποιούνται τέσσερις επαναλήψεις για κάθε αγωγή της δοκιμής.
Count and score tubercles.
Η πυκνότητα των προνυμφών κατά την έναρξη της δοκιμής είναι 20 γυρίνοι ανά δεξαμενή δοκιμής για όλες τις ομάδες αγωγής.
Repeat the observation on the ventral head surface by placing the fish dorsal anterior forward in the Petri dish.
Τα τελικά σημεία βάσει παρατήρησης είναι το μήκος των οπίσθιων άκρων, το μήκος ρύγχους-κλοάκης (SVL), το στάδιο ανάπτυξης, το υγρό βάρος, η ιστολογική εξέταση του θυρεοειδούς και οι καθημερινές παρατηρήσεις θνησιμότητας.
Observations should be completed within 2 min for each fish.
Είδος δοκιμής
Tubercle Counting and Rating
Το είδος Xenopus laevis καλλιεργείται συστηματικά σε εργαστήρια παγκοσμίως και η απόκτησή του είναι εύκολη μέσω εμπορικών προμηθευτών.
Six specific areas have been identified for assessment of tubercle presence and development in adult fathead minnows.
Σε αυτό το είδος, μπορεί εύκολα να πραγματοποιηθεί πρόκληση της αναπαραγωγής καθ' όλη τη διάρκεια του έτους με ενέσεις ανθρώπινης χοριακής γοναδοτροπίνης (hCG) και οι προκύπτουσες προνύμφες μπορούν να εκτρέφονται συστηματικά, σε μεγάλους αριθμούς, μέχρι τα επιλεγμένα στάδια ανάπτυξης, ώστε να είναι εφικτή η χρήση πρωτοκόλλων δοκιμής ειδικά σχεδιασμένων για συγκεκριμένα στάδια.
A template was developed to map the location and quantity of tubercles present (see end of this Appendix).
Οι προνύμφες που χρησιμοποιούνται σε αυτήν τη δοκιμασία προτιμάται να προέρχονται από ενήλικα άτομα εσωτερικής καλλιέργειας.
The number of tubercles is recorded and their size can be quantitatively ranked as:
Εναλλακτικά, μπορούν να αποστέλλονται αυγά ή έμβρυα στο εργαστήριο όπου πραγματοποιείται η δοκιμή και, στη συνέχεια, να εγκλιματίζονται, ωστόσο αυτή δεν είναι η προτιμώμενη διαδικασία.
0- absence, 1-present, 2-enlarged and 3-pronounced for each organism (Fig.
Η αποστολή στο στάδιο της προνύμφης για χρήση στη δοκιμή δεν είναι αποδεκτή.
1).
Εξοπλισμός και προμήθειες
Rate 0- absence of any tubercle.
Ο εξοπλισμός και οι προμήθειες που απαιτούνται για τη διεξαγωγή αυτής της δοκιμασίας είναι τα ακόλουθα:
Rating 1-present, is identified as any tubercle having a single point whose height is nearly equivalent to its radius (diameter).
Σύστημα έκθεσης (βλ. περιγραφή κατωτέρω),
Rating 2- enlarged, is identified by tissue resembling an asterisk in appearance, usually having a large radial base with grooves or furrows emerging from the centre.
Ενυδρεία από γυαλί ή ανοξείδωτο χάλυβα (βλ. περιγραφή κατωτέρω),
Tubercle height is often more jagged but can be somewhat rounded at times.
Δεξαμενές αναπαραγωγής,
Rating 3- pronounced, is usually quite large and rounded with less definition in structure.
Συσκευή ελέγχου θερμοκρασίας [π.χ. θερμαντήρες ή ψύκτες (με δυνατότητα ρύθμισης στους 22° ± 1 °C)],
At times these tubercles will run together forming a single mass along an individual or combination of areas (B, C and D, described below).
Θερμόμετρο,
Coloration and design are similar to rating 2 but at times are fairly indiscriminate.
στ) Διοφθάλμιο στερεοσκοπικό μικροσκόπιο,
Using this rating system generally will result in overall tubercle scores of < 50 in a normal control male possessing a tubercle count of 18 to 20 (Jensen et al.
Ψηφιακή φωτογραφική μηχανή με ανάλυση τουλάχιστον 4 megapixel και λειτουργία micro,
2001).
Λογισμικό ψηφιοποίησης εικόνων,
The actual number of tubercles in some fish may be greater than the template boxes (Appendix A) for a particular rating area.
Τρυβλίο Petri (π.χ. 100 × 15 mm) ή διαφανής πλαστικός θάλαμος συγκρίσιμου μεγέθους,
If this happens, additional rating numbers may be marked within, to the right or to the left of the box.
Αναλυτικός ζυγός, ακριβείας 3 δεκαδικών ψηφίων (mg),
The template therefore does not need to display symmetry.
ια) Μετρητής διαλυμένου οξυγόνου,
An additional technique for mapping tubercles which are paired or joined vertically along the horizontal plane of the mouth could be done by double-marking two tubercle rating points in a single box.
ιβ) Πεχάμετρο,
Mapping regions:
ιγ) Μετρητής έντασης φωτός, ικανός να πραγματοποιεί μετρήσεις σε μονάδες lux,
A Tubercles located around eye.
ιδ) Διάφορα γυάλινα είδη και εργαλεία εργαστηρίου,
Mapped dorsal to ventral around anterior rim of eye.
ιε) Ρυθμιζόμενα σιφώνια (10 έως 5000 μl) ή ποικιλία σιφωνίων ισοδύναμων μεγεθών,
Commonly multiple in mature control males, not present in control females, generally paired (one near each eye) or single in females exposed to androgens.
ιστ) Υπό δοκιμή χημική ουσία σε επαρκείς ποσότητες για τη διεξαγωγή της μελέτης, κατά προτίμηση της ίδιας παρτίδας,
B Tubercles located between nares, (sensory canal pores).
ιζ) Αναλυτικά όργανα κατάλληλα για τη χημική ουσία που ελέγχεται ή σύμβαση παροχής υπηρεσιών ανάλυσης.
Normally in pairs for control males at more elevated levels (2- enlarged or 3- pronounced) of development.
Δυνατότητα δοκιμής χημικών ουσιών
Not present in control females with some occurrence and development in females exposed to androgens.
Η δοκιμασία AMA βασίζεται σε ένα πρωτόκολλο υδατικής έκθεσης όπου η υπό δοκιμή χημική ουσία εισάγεται στους θαλάμους δοκιμής μέσω ενός συστήματος συνεχούς ροής νερού.
C Tubercles located immediately anterior to nares, parallel to mouth.