natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Οι καλυπτρίδες επικαλύπτονται με κύτταρα σε πυκνότητα που αποβαίνει σε συρροή περίπου 60 % και 90 % μετά από 24 ώρες καλλιέργειας.
Virus identification
Για τον σκοπό αυτό, χρησιμοποιούνται κύτταρα EPC, όπου είναι δυνατόν, λόγω της ισχυρής προσκόλλησής τους σε γυάλινες επιφάνειας.
If evidence of CPE has been observed in a cell culture, medium (supernatant) shall be collected and examined by one or more of the following techniques: Enzyme-linked immunosorbent essay (ELISA), Immunofluorescence (IF), neutralisation, RT-PCR or RT-qPCR.
Δύναται όμως να χρησιμοποιηθούν και άλλες κυτταρικές σειρές, όπως η BF-2, η RTG-2 ή η FHM.
If these tests have not allowed definitive identification of the virus within 1 week, the supernatant shall be forwarded to the national reference laboratory or to the EU reference laboratory for fish diseases referred to in Annex VI to Directive 2006/88/EC for immediate identification.
Ενοφθαλμίζονται 150 μl από το υπερκείμενο υγρό της κυτταροκαλλιέργειας σε δύο διαφορετικές αραιώσεις (1:10 και 1:1000) εις διπλούν σε μονοστιβάδες μιας ημέρας και ακολουθεί επώαση στους 15 °C επί 24 ώρες.
A double antibody sandwich ELISA shall be performed in order to identify the virus isolate.
Στη συνέχεια, απομακρύνεται το υπόστρωμα της κυτταροκαλλιέργειας και οι επιμολυσμένες μονοστιβάδες κυττάρων σταθεροποιούνται σε 0,5 ml παγωμένου υδατικού διαλύματος ακετόνης (80 % vol:vol).
Microwell plates shall be coated with 50 μl/well (0,9 pg) of proven quality protein-A purified immunoglobulins(Ig) from rabbit antisera against IHNV or VSHV diluted in carbonate buffer (pH 9,6) containing 15 mM sodium azide and incubated from 18 hours to 2 weeks at 4 °C.
Η σταθεροποίηση πραγματοποιείται μέσα σε συλλέκτη καπνών επί 15 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου, κατόπιν απομακρύνεται το διάλυμα ακετόνης και οι καλυπτρίδες ξηραίνονται δι' αέρος για τουλάχιστον 30 λεπτά.
On a dilution plate, each sample containing 1 % Triton X-100 and the positive controls shall be diluted with buffer solution (namely, phosphate buffered saline (PBS)-T-BSA, 1 % BSA) in a 4-fold dilution: undiluted, 1:4, 1:16, 1:64.
Στο στάδιο αυτό, τα τρυβλία είτε υφίστανται επεξεργασία άμεσα είτε φυλάσσονται στους – 20 °C για περαιτέρω χρήση.
The ELISA plates shall be washed in PBS containing 0,05 % Tween-20 (PBS-T) and 50 μl of each dilution shall be transferred from the dilution plate to the washed and coated ELISA-plate.
Τα ειδικά μονοκλωνικά αντισώματα (ήτοι τα ΜΑb IP5B11 για την ταυτοποίηση του VHSV και τα Hyb 136-3 για την ταυτοποίηση του IHNV, αντίστοιχα) αραιώνονται σε 0,01 M PBST, pH 7,2 στην αναλογία που συνιστάται από τον προμηθευτή των μονοκλωνικών αντισωμάτων.
ELISA plates shall then be incubated for 30 minutes at 37 °C.
Προστίθενται 50 έως 100 μl/κοιλότητα στη σταθεροποιημένη μονοστιβάδα και τα τρυβλία επωάζονται επί μία ώρα στους 37 °C μέσα σε υγρό θάλαμο.
Subsequently plates shall be washed and incubated for 30 minutes at 37 °C with specific monoclonal antibodies (namely for VHSV identification MAb IP5B11 and for IHNV Hyb 136-3, respectively).
Οι καλυπτρίδες πλένονται απαλά τρεις φορές με PBS που περιέχει 0,05 % Tween-20 (PBS-T) και το ρυθμιστικό διάλυμα απομακρύνεται πλήρως μετά την τελευταία έκπλυση.
50 μl of horseradish-peroxidase (HRP) conjugated rabbit anti mouse antibodies diluted 1:1000 in PBS-T-BSA shall be transferred to the ELISA plate.
Κατόπιν, τα κύτταρα επωάζονται επί μία ώρα στους 37 °C με αντισώματα συζευγμένα με ισοθειοκυανιούχο φλουορεσκεΐνη (FITC) —ή ισοθειοκυανική τετραμεθυλροδαμίνη-5-(και-6) (TRITC) έναντι ανοσοσφαιρίνης ποντικού χρησιμοποιούμενη ως κύριο αντίσωμα, αραιώνονται σύμφωνα με τις οδηγίες του προμηθευτή, εκπλένονται ξανά σε PBS-T και ξηραίνονται.
Finally, after renewed washing the reactions shall be developed adding 50 μl/well of ortho-phenylenediamine (OPD).
Οι χρωσμένες καλλιέργειες στερεώνονται σε αντικειμενοφόρες πλάκες χρησιμοποιώντας αλατούχο γλυκερίνη και εξετάζονται υπό προσπίπτον υπεριώδες φως (UV).
The ELISA plates shall be incubated for 20 minutes at room temperature in the dark and the reaction shall be stopped by adding 100 μl/well 0,5 M H2SO4.
Χρησιμοποιούνται προσοφθάλμιοι των 10 × ή 12 × και αντικειμενικός φακός των × 25 ή × 40 με αριθμητικό άνοιγμα > 0,7 και > 1,3, αντίστοιχα.
The absorbance shall be monitored at a wavelength of 492 and 620 nm in an ELISA reader.
Αντ' αυτής μπορούν να εφαρμόζονται και άλλες τεχνικές IF, όσον αφορά τις κυτταροκαλλιέργειες, τη σταθεροποίηση και τα αντισώματα ποιότητας αναφοράς, αποδεδειγμένης παρόμοιας αποτελεσματικότητας.
Samples shall be designated positive or negative after comparing the test results to the absorbance values for the positive and negative controls.
Εξουδετέρωση
In general, samples with combined absorbance (A) < 0,5 for undiluted material shall be considered negative, samples with A values between 0,5 and 1,0 shall be considered suspicious and samples with A values > 1,0 shall be considered positive.
Τα κύτταρα από το υπερκείμενο υγρό που συλλέχθηκε απομακρύνονται με φυγοκέντρηση (2000 έως 4000 × g) ή διήθηση μέσω μεμβράνης (0,45 μm) με χαμηλή πρωτεϊνική σταθεροποίηση της μεμβράνης και, στη συνέχεια, το υπερκείμενο υγρό αραιώνεται κατά 1:100 και 1:10000 με το υπόστρωμα κυτταροκαλλιέργειας.
Other ELISA versions with a proven similar efficacy may be used instead of those referred to in this point.
Αναμειγνύονται υποπολλαπλάσια τουλάχιστον δύο αραιώσεων του υπερκείμενου υγρού και επωάζονται επί 60 λεπτά στους 15 °C μαζί με ίσα μέρη των ακόλουθων αντιδραστηρίων μεμονωμένα:
Immunofluorescence- IF
ορός που περιέχει κατά ομάδα ειδικό αντίσωμα έναντι του VHSV σε αραίωση 1:50 (vol:vol),
The identification of listed pathogens VHSV and IHNV shall be performed by infecting cells in ‘Black’ 96-well plates, conventional 24-well plates or cover slips into 24-well plates.
ορός που περιέχει κατά ομάδα ειδικό αντίσωμα έναντι του IHNV σε αραίωση 1:50 (vol:vol),
When IHNV or VHSV or both are identified by infecting cells on cover slips, the following protocol shall apply:
ομάδα αντιορών κατά των ενδογενών οροτύπων IPNV σε αραίωση 1:50 (vol:vol),
cover slips shall be seeded with cells at a density leading to between 60 % and 90 % confluence after 24 hours of cultivation.
μόνο υπόστρωμα (θετικός μάρτυρας).
EPC cells shall be used where possible for this purpose because of their strong adherence to glass surfaces, but other cell lines such as BF-2, RTG-2 or FHM may be used as well.
Τουλάχιστον δύο κυτταροκαλλιέργειες ενοφθαλμίζονται με 50 μl καθεμία από κάθε μείγμα υπερκείμενου υγρού ιού-ορού και μετά επωάζονται στους 15 °C.
150 μl cell culture supernatant in two different dilutions (1:10 and 1:1000) shall be inoculated in duplicate onto 1-day-old monolayers and incubated at 15 °C for 24 hours;
Ελέγχεται η ανάπτυξη του ΚΠΦ, όπως περιγράφεται στο σημείο I.5.4.
subsequently, cell culture medium shall be removed, and the infected cell monolayers fixed with 0,5 ml ice-cold, aqueous acetone solution (80 % vol:vol).
Τα στελέχη και τα απομονώματα VHSV που δεν αντιδρούν στις δοκιμές εξουδετέρωσης ταυτοποιούνται μέσω IF ή ELISA.
Fixation shall take place in fume hood for 15 minutes at room temperature, then the acetone solution shall be removed and the cover glasses shall be air dried for at least 30 minutes.
Αντ' αυτής μπορούν να εφαρμόζονται και άλλες δοκιμές εξουδετέρωσης αποδεδειγμένης παρόμοιας αποτελεσματικότητας.
At this stage, the plates shall either be processed immediately or stored at – 20 °C for further use;
Προετοιμασία του ιικού RNA
specific monoclonal antibodies (namely for VHSV identification, MAb IP5B11 and for IHNV, Hyb 136-3 respectively) shall be diluted in 0,01 M PBST, pH 7,2 in the dilution recommended by the provider of the MAbs; 50 to 100 μl/well shall be added to the fixed monolayer and plates shall be incubated for one hour at 37 °C in a humid chamber;
Όλες οι εργασίες με RNA διεξάγονται πάνω σε πάγο με τη χρήση γαντιών.
cover glasses shall be washed gently three times with PBS containing 0,05 % Tween-20 (PBS-T), and the buffer shall be removed completely after the last rinse.
Η εξαγωγή του RNA πραγματοποιείται με τη μέθοδο φαινόλης-χλωροφορμίου ή μέσω στηλών φυγοκέντρησης με συγγένεια RNA σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή.
The cells shall subsequently be incubated for one hour at 37 °C with fluorescein isothiocyanate (FITC) — or tetramethylrhodamine-5-(and-6-) isothiocyanate (TRITC)-conjugated antibodies against mouse immunoglobulin used as the primary antibody, diluted according to the supplier instructions, washed again in PBS-T, and dried.
Μπορούν να χρησιμοποιηθούν εμπορικά διαθέσιμα κιτ εξαγωγής RNA που παράγουν RNA υψηλής ποιότητας κατάλληλο για χρήση με τα πρωτόκολλα RT-PCR, τα οποία περιγράφονται λεπτομερώς στα παρακάτω σημεία.
Stained cultures shall be mounted onto glass slides using glycerol saline and examined under incident ultraviolet (UV) light.
Πραγματοποιείται επανεναιώρηση του RNA σε αποσταγμένο νερό απαλλαγμένο από RΝΑάση, (ήτοι νερό που έχει υποστεί επεξεργασία με 0,1 % πυροκαρβονικό διαιθύλιο) ή κατάλληλο ρυθμιστικό διάλυμα έκλουσης.
Use 10 × or 12 × eyepieces and a × 25 or × 40 objective lens with numerical apertures > 0,7 and > 1,3 respectively.
Για την ανίχνευση του IHNV χρησιμοποιούνται οι εξής εκκινητές:
Other IF techniques, with regard to cell cultures, fixation and antibodies of reference quality, of proven similar efficacy may be used instead.
Πρόσθιος εκκινητής 5′-AGA-GAT-CCC-TAC-ACC-AGA-GAC-3′,
Neutralisation
Χρησιμοποιούνται οι ακόλουθοι κύκλοι (RT-PCR ενός βήματος):
Aliquots of a minimum of two supernatant dilutions shall be mixed and incubated for 60 minutes at 15 °C with equal parts of the following reagents separately:
1 κύκλος: 50 °C επί 30 λεπτά, 1 κύκλος: 95 °C επί 2 λεπτά, 30 κύκλοι:
serum containing group specific antibody against VHSV at a 1:50 (vol:vol) dilution;
95 °C επί 30 δευτερόλεπτα, 50 °C επί 30 δευτερόλεπτα, 72 °C επί 60 δευτερόλεπτα, 1 κύκλος: 72 °C επί 7 λεπτά και εμποτισμός στους 4 °C.
serum containing group specific antibody against IHNV at a 1:50 (vol:vol) dilution;
Για την ανίχνευση του VHSV χρησιμοποιούνται οι εξής εκκινητές:
pool of antisera against the indigenous serotypes of IPNV at a 1:50 (vol:vol) dilution;
Πρόσθιος εκκινητής VN 5′-ATG-GAA-GGA-GGA-ATT-CGT-GAA-GCG-3′,
medium alone (positive control).
Αντίστροφος εκκινητής VN 5′-GCG-GTG-AAG-TGC-TGC-AGT-TCC-C-3′.
From each virus supernatant-serum mixture, at least two cell cultures shall be inoculated with 50 μl each and then incubated at 15 °C.
Χρησιμοποιούνται οι ακόλουθοι κύκλοι (RT-PCR ενός βήματος):
The development of CPE shall be checked as described in point I.5.4.
50 °C επί 30 λεπτά, 95 °C επί 15 λεπτά, 35 κύκλοι στους 94 °C επί 30 δευτερόλεπτα, 55 °C επί 30 δευτερόλεπτα και 68 °C επί 60 δευτερόλεπτα.
VHSV strains and isolates that do not react in neutralisation tests shall be identified by IF or ELISA.
Στη συνέχεια, η αντίδραση διατηρείται στους 68 °C επί 7 λεπτά.
Other neutralisation tests of proven similar efficacy may be used instead.
Οι αντιδράσεις RT-PCR αξιολογούνται ως προς την ποσότητα του προϊόντος και την ειδικότητά τους με ηλεκτροφόρηση σε πηκτή χρησιμοποιώντας 1,5 % πηκτή αγαρόζης με βρωμιούχο αιθίδιο και η εμφάνιση πραγματοποιείται με υπεριώδη ακτινοβολία.
RT-PCR/RT-qPCR
Για τον IHNV, το αμπλικόνιο της PCR έχει μέγεθος 693 bp.
Preparation of viral RNA
Για τον VHSV, το μέγεθος είναι 505 bp.
All work with RNA shall be performed on ice, using gloves.
Μέγεθος προϊόντος 155 bp.
RNA shall be extracted using the phenol-chloroform method or by RNA affinity spin columns, according to the manufacturer's instructions.
Τα αποτελέσματα της PCR ενδέχεται να διαφοροποιούνται ανάλογα με τις συνθήκες κάτω από τις οποίες αυτή εκτελείται, δηλαδή τα πρωτόκολλα των θερμικών κύκλων μπορεί να απαιτούν βελτιστοποίηση, ανάλογα με τον θερμικό κυκλοποιητή που χρησιμοποιείται.
Commercially available RNA extraction kits that will produce high quality RNA suitable for use with the RT-PCR protocols detailed in the points below may be used.
Επιπλέον, μπορεί να προκύψουν ψευδώς θετικά αποτελέσματα λόγω πρόσδεσης ψευδούς εκκινητή ή εργαστηριακής επιμόλυνσης.
RNA shall be re-suspended in distilled RNAse-free water, (namely water treated with 0,1 % diethyl pyrocarbonate) or an appropriate elution buffer.
Συνεπώς, συμπεριλαμβάνονται επαρκείς θετικοί και αρνητικοί μάρτυρες, καθώς και αμπλικόνια της αλληλουχίας για την αποφυγή κάθε αμφιβολίας.
The following primers shall be used for detection of IHNV:
Για τους εκκινητές του VHSV, επιδεικνύεται ιδιαίτερη προσοχή κατά τη χρήση κυττάρων BF-2, επειδή οι εκκινητές μπορεί να αντιδράσουν με τη DNA/RNA κυτταρική σειρά, με αποτέλεσμα την παραγωγή ψευδώς θετικών αποτελεσμάτων παρόμοιου μεγέθους.
Forward Primer 5′-AGA-GAT-CCC-TAC-ACC-AGA-GAC-3′;
Κατά τη δοκιμή υπερκείμενου υγρού από κύτταρα BF-2, θα προσδιορίζεται η αλληλουχία όλων των ενισχυμένων θραυσμάτων της PCR.
Reverse Primer 5′-GGT-GGT-GTT-GTT-TCC-GTG-CAA-3′.
RT-qPCR για τον VHSV
The following cycles shall be used (one-step RT-PCR): 1 cycle: 50 °C for 30 minutes; 1 cycle: 95 °C for 2 minutes; 30 cycles: 95 °C for 30 seconds, 50 °C for 30 seconds, 72 °C for 60 seconds; 1 cycle: 72 °C for 7 minutes and soak at 4 °C.
Για τον VHSV, η αντίδραση ενίσχυσης πραγματοποιείται με τους εκκινητές και τον ανιχνευτή που παρατίθενται παρακάτω: Πρόσθιος εκκινητής:
The following primers shall be used for detection of VHSV:
5′-AAA-CTC-GCA-GGA-TGT-GTG-CGT-CC-3′, Αντίστροφος εκκινητής:
VN For 5′-ATG-GAA-GGA-GGA-ATT-CGT-GAA-GCG-3′;
5′-TCT-GCG-ATC-TCA-GTC-AGG-ATG-AA-3′ και ανιχνευτής:
VN Rev 5′-GCG-GTG-AAG-TGC-TGC-AGT-TCC-C-3′.
5′-FAM-TAG-AGG-GCC-TTG-GTG-ATC-TTC-TG-BHQ1.
The following cycles shall be used (one-step RT-PCR): 50 °C for 30 minutes, 95 °C for 15 minutes, 35 cycles at 94 °C for 30 seconds, 55 °C for 30 seconds, and 68 °C for 60 seconds.
RT-qPCR ενός βήματος:
Subsequently, the reaction shall be held at 68 °C for 7 minutes.
Σε κάθε ανάλυση τρυβλίου συμπεριλαμβάνονται αρνητικοί πρότυποι μάρτυρες και θετικοί μάρτυρες.
Quantity and specificity of the RT-PCR reactions shall be evaluated by gel electrophoresis in 1,5 % agarose gel with ethidium bromide and observed using UV transillumination.
Συνθήκες των κύκλων (RT-PCR ενός βήματος):
A 693 bp PCR amplicon may be observed for IHNV.
50 °C επί 30 λεπτά, 95 °C επί 15 λεπτά, 40 κύκλοι στους 94 °C επί 15 δευτερόλεπτα, 60 °C επί 40 δευτερόλεπτα, 72 °C επί 20 δευτερόλεπτα.
For VHSV, the size shall be 505 bp.
Γίνεται προσαρμογή, εφόσον είναι απαραίτητη.
The results of the PCR may vary depending on the conditions under which it is performed, namely the thermal protocols might need optimisation, depending on the thermal cycler in use.
Αντ' αυτής μπορούν να χρησιμοποιούνται και άλλες εκδοχές RT-PCR ή RT-qPCR αποδεδειγμένης παρόμοιας αποτελεσματικότητας.
Furthermore, false-positive results may occur because of false primer annealing or laboratory contamination.
RT-qPCR για τον IHNV
Adequate positive and negative controls and sequence amplicons shall therefore be included to avoid any doubts.
Για τον IHNV, η αντίδραση ενίσχυσης πραγματοποιείται με τους εκκινητές και τον ανιχνευτή που παρατίθενται παρακάτω: Πρόσθιος εκκινητής:
For the VHSV primers, special care shall be taken when using BF-2 cells, as the primers may react with the cell line DNA/RNA producing false-positive results of similar size.
5′- AGA-GCC-AAG-GCA-CTG-TGC-G-3′, Αντίστροφος εκκινητής:
When testing supernatant from BF-2 cells, any amplified PCR fragments shall be sequenced.
5′- TTCTTTGCGGCTTGGTTGA — 3′ και ανιχνευτής:
RT-qPCR for VHSV
5′ 6FAM-TGAGACTGAGCGGGACA-NFQ/MGB.
For VHSV, amplification shall be performed using the following primers and probe:
RT-qPCR δύο βημάτων:
Forward primer: 5′-AAA-CTC-GCA-GGA-TGT-GTG-CGT-CC-3′;
Επειδή η παρακάτω δοκιμασία βασίζεται σε ενίσχυση δύο βημάτων, επιδεικνύεται ιδιαίτερη προσοχή κατά τον χειρισμό των σωλήνων μεταξύ των αντιδράσεων για την αποφυγή επιμόλυνσης.
Reverse primer: 5′-TCT-GCG-ATC-TCA-GTC-AGG-ATG-AA-3′;
Συνθήκες των κύκλων (μετά το βήμα RT):
and probe: 5′-FAM-TAG-AGG-GCC-TTG-GTG-ATC-TTC-TG-BHQ1.
50 °C επί 2 λεπτά, 95 °C επί 10 λεπτά, ακολουθούν 40 κύκλοι στους 95 °C επί 15 δευτερόλεπτα και στους 60 °C επί 1 λεπτό.
One-step RT-qPCR:
Γίνονται προσαρμογές, εφόσον είναι απαραίτητες.
Negative template controls and positive controls shall be included on each plate run.
Λεπτομερείς διαγνωστικές μέθοδοι και διαδικασίες για την επιβεβαίωση ή τον αποκλεισμό της υπόνοιας για VHS ή IHN ή αμφότερες σε περιπτώσεις υποψίας εκδήλωσης ασθένειας
Cycling conditions: 50 °C for 30 minutes, 95 °C for 15 minutes, 40 cycles of 94 °C for 15 seconds, 60 °C for 40 seconds, 72 °C for 20 seconds; adjust if necessary.
Όταν απαιτείται εργαστηριακή εξέταση για την επιβεβαίωση ή τον αποκλεισμό της παρουσίας IHN ή VHS ή και των δύο σύμφωνα με το άρθρο 57 στοιχείο β) της οδηγίας 2006/88/ΕΚ με τη χρήση των διαγνωστικών μεθόδων που ορίζονται στο παράρτημα I μέρος 1 σημείο II.3, εφαρμόζονται οι παρακάτω διαγνωστικές μέθοδοι και διαδικασίες:
Other RT-PCR or RT-qPCR versions of proven similar efficacy may be used instead.
συμβατική απομόνωση του ιού, ακολουθούμενη από ταυτοποίηση του ιού με οροεξουδετέρωση, ανοσοχημική τεχνική ή μοριακή τεχνική,
RT-qPCR for IHNV
ανίχνευση ιού με RT-PCR ή RT-qPCR,
For IHNV, amplification shall be performed using the following primers and probe:
άλλες διαγνωστικές τεχνικές, όπως IFAT, ELISA, RT-PCR, IHC.
Forward primer: 5′- AGA-GCC-AAG-GCA-CTG-TGC-G-3′;
Συμβατική απομόνωση του ιού, ακολουθούμενη από ταυτοποίηση του ιού
Reverse primer: 5′- TTCTTTGCGGCTTGGTTGA - 3′;
Επιλογή δειγμάτων
and probe: 5′ 6FAM-TGAGACTGAGCGGGACA-NFQ/MGB.
Επιλέγονται προς εξέταση τουλάχιστον 10 ιχθείς που εμφανίζουν τυπικά συμπτώματα ΙΗΝ ή VHS.
Two-step RT-qPCR:
Για την προετοιμασία και την αποστολή για τους σκοπούς της συμβατικής απομόνωσης του ιού, ακολουθούνται οι μέθοδοι και οι διαδικασίες που προβλέπονται στο σημείο Ι.2.
As the following assay depends on a two-step amplification, extra care shall be taken when handling the tubes from one reaction to the other in order to prevent contamination.
Για τη συλλογή συμπληρωματικού υλικού για τους σκοπούς της συμβατικής απομόνωσης του ιού, ακολουθούνται οι μέθοδοι και οι διαδικασίες που προβλέπονται στο σημείο Ι.3.
Cycling conditions (after RT-step): 50 °C for 2 minutes, 95 °C for 10 minutes, followed by 40 cycles of 95 °C for 15 seconds and 60 °C for 1 minutes; adjustments shall be made if necessary.
Προετοιμασία των δειγμάτων για εξέταση κυτταροκαλλιέργειας
Detailed diagnostic methods and procedures for the confirmation of or to rule out the suspicion of VHS or IHN or both in suspected outbreaks
Για την προετοιμασία των δειγμάτων προς εξέταση κυτταροκαλλιέργειας για τους σκοπούς της συμβατικής απομόνωσης του ιού, ακολουθούνται οι μέθοδοι και οι διαδικασίες που προβλέπονται στο σημείο I.4.
When a laboratory examination is required to confirm or rule out the presence of IHN or VHS or both in accordance with Article 57(b) of Directive 2006/88/EC using the diagnostic methods set out in point II.3 of Part 1 of Annex I, the following detailed diagnostic methods and procedures shall apply:
Για την ιολογική εξέταση για τους σκοπούς της συμβατικής απομόνωσης του ιού, ακολουθούνται οι μέθοδοι και οι διαδικασίες που προβλέπονται στο σημείο Ι.5.
conventional virus isolation with subsequent seroneutralisation, immune-chemical or molecular virus identification;
Για την ταυτοποίηση του ιού για τους σκοπούς της συμβατικής απομόνωσης του ιού, ακολουθούνται οι μέθοδοι και οι διαδικασίες που προβλέπονται στο σημείο Ι.6.
virus detection by RT-PCR or RT-qPCR;
Ανίχνευση ιού με RT-qPCR
other diagnostic techniques such as IFAT, ELISA, RT-PCR, IHC.
Για την επιλογή των δειγμάτων για τους σκοπούς της ανίχνευσης του ιού με RT-qPCR, ακολουθούνται οι μέθοδοι και οι διαδικασίες που προβλέπονται στο σημείο I.1.2.
Conventional virus isolation with subsequent virus identification
Για την προετοιμασία και την αποστολή για τους σκοπούς της ανίχνευσης του ιού με RT-qPCR, ακολουθούνται οι μέθοδοι και οι διαδικασίες που προβλέπονται στο σημείο I.2.
Selection of samples
Για τη συλλογή συμπληρωματικού διαγνωστικού υλικού για τους σκοπούς της ανίχνευσης του ιού με RT-qPCR, ακολουθούνται οι μέθοδοι και οι διαδικασίες που προβλέπονται στο σημείο I.3.
At least 10 fish showing typical signs of IHN or VHS shall be selected for examination.
Προετοιμασία του δείγματος για RT-qPCR
The preparation and shipment for the purpose of conventional virus isolation shall follow the methods and procedures laid down in point I.2.
Για την προετοιμασία του δείγματος για τους σκοπούς της ανίχνευσης του ιού με RT-qPCR, ακολουθούνται οι μέθοδοι και οι διαδικασίες που προβλέπονται στο σημείο I.6.4.1.
The collection of supplementary material for the purpose of conventional virus isolation shall follow the methods and procedures laid down in point I.3.
Για την ανίχνευση του ιού με RT-qPCR, ακολουθούνται οι μέθοδοι και οι διαδικασίες που προβλέπονται στα σημεία I.6.4.1, I.6.4.3 και I.6.4.4.
Preparation of samples for cell culture examination
Λοιπές διαγνωστικές τεχνικές
The preparation of samples for cell culture examination for the purpose of conventional virus isolation shall follow the methods and procedures laid down in point I.4.
Το υπερκείμενο υγρό που έχει προετοιμαστεί όπως περιγράφεται στο σημείο I.4.3 μπορεί να υποβληθεί σε ELISA, δοκιμή έμμεσα φθοριζόντων αντισωμάτων (IFAT) ή RT-PCR σύμφωνα με το σημείο I.6.1, το σημείο I.6.2 ή το σημείο I.6.4, αντίστοιχα.
The virological examination for the purpose of conventional virus isolation shall follow the methods and procedures laid down in point I.5.
Το ιστολογικό υλικό μπορεί να υποβληθεί και σε άλλες διαγνωστικές τεχνικές, όπως στην IFAT επί κατεψυγμένων στοιχείων ή την ανοσοϊστοχημεία επί ιστολογικού υλικού σταθεροποιημένου με φορμαλίνη.
The virus identification for the purpose of conventional virus isolation shall follow the methods and procedures laid down in point I.6.
Οι ταχείες αυτές τεχνικές συμπληρώνονται με μια ιολογική εξέταση σύμφωνα με το σημείο II α) ή το σημείο II β) εντός 48 ωρών μετά τη δειγματοληψία, εάν:
Virus detection by RT-qPCR
το αποτέλεσμα είναι αρνητικό ή
The selection of samples for the purpose of virus detection by RT-qPCR shall follow the methods and procedures laid down in point I.1.2.
προκύψει θετικό αποτέλεσμα με υλικό που αντιπροσωπεύει την πρώτη περίπτωση ΙΗΝ ή VHS.
The preparation and shipment for the purpose of virus detection by RT-qPCR shall follow the methods and procedures laid down in point I.2.
Διαδικασία τιτλοδότησης για την επαλήθευση της επιδεκτικότητας των κυτταροκαλλιεργειών στη μόλυνση
The collection of supplementary diagnostic material for the purpose of virus detection by RT-qPCR shall follow the methods and procedures laid down in point I.3.
Όταν διεξάγεται τιτλοδότηση για την επαλήθευση της επιδεκτικότητας των κυτταροκαλλιεργειών στη μόλυνση, όπως αναφέρεται στο σημείο I.5.3., ακολουθούνται οι διαδικασίες που ορίζονται στις ακόλουθες παραγράφους του παρόντος σημείου.
Sample preparation for RT-qPCR
Χρησιμοποιούνται τουλάχιστον δύο απομονώματα του VHSV και ένα απομόνωμα του IHNV.
The sample preparation for the purpose of virus detection by RT-qPCR shall follow the methods and procedures laid down in point I.6.4.1.
Τα απομονώματα αντιπροσωπεύουν τη σημαντικότερη ομάδα ιών στην Ευρωπαϊκή Ένωση, δηλαδή για τον VHSV, ένα παθογενές απομόνωμα από την ιριδοειδή πέστροφα γλυκών υδάτων και ένα θαλάσσιο παθογενές απομόνωμα για το καλκάνι, και για τον IHNV, ένα παθογενές στέλεχος ιριδοειδούς πέστροφας από την Ευρωπαϊκή Ένωση.
The virus detection by RT-qPCR shall follow the methods and procedures laid down in points I.6.4.1, I.6.4.3 and I.6.4.4.
Χρησιμοποιούνται σαφώς καθορισμένα απομονώματα από τα κράτη μέλη.
Other diagnostic techniques
Παρτίδες ιών από ασυνεχείς καλλιέργειες με χαμηλό αριθμό κυτταροκαλλιεργειών πολλαπλασιάζονται μέσα σε φιάλες κυτταροκαλλιέργειας, σε κύτταρα BF-2 ή RTG-2, προκειμένου για τον VHSV, και EPC ή FHM, προκειμένου για τον IHNV.
Supernatant prepared as described in point I.4.3 may be submitted to ELISA, Indirect fluorescent antibody test (IFAT), or RT-PCR in accordance with point I.6.1, point I.6.2 or point I.6.4 respectively.