natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Επομένως, η μέτρηση του μήκους των οπίσθιων άκρων χρησιμοποιείται ως τελικό σημείο για τον εντοπισμό των επιδράσεων στον άξονα του θυρεοειδούς (Σχήμα 2).
The blood samples are taken by cardiac puncture.
Για λόγους συνέπειας, η μέτρηση του μήκος των οπίσθιων άκρων πραγματοποιείται στο αριστερό οπίσθιο άκρο.
At first the fish should be anesthetized with MS-222 (100 mg/l).
Το μήκος των οπίσθιων άκρων αξιολογείται την 7η και την 21η ημέρα της δοκιμής.
The proper plane of anaesthesia allows the user to distinguish the heartbeat of the zebrafish.
Την 7η ημέρα, η μέτρηση του μήκους των οπίσθιων άκρων είναι μια απλή διαδικασία, όπως απεικονίζεται στο σχήμα 2.
While puncturing the heart, keep the syringe piston under weak tension.
Ωστόσο, η μέτρηση του μήκους των οπίσθιων άκρων την 21η ημέρα είναι πιο πολύπλοκη εξαιτίας των κάμψεων του άκρου.
Collectable blood volumes range between 20 - 40 microliters.
Επομένως, οι μετρήσεις του μήκους των οπίσθιων άκρων την 21η ημέρα θα πρέπει να ξεκινούν από το τοίχωμα του σώματος και να ακολουθούν τη μεσαία γραμμή του άκρου όταν συναντάται γωνιακή απόκλιση.
After cardiac puncture, the blood/buffer-mixture should be filled into the test tube.
Αλλαγές στο μήκος των οπίσθιων άκρων την 7η ημέρα, ακόμα και εάν δεν είναι εμφανείς την 21η ημέρα, εξακολουθούν να θεωρούνται σημαντικές σε ό,τι αφορά τη δυνητική θυρεοειδική δραστηριότητα.
Plasma is separated from the blood via centrifugation (20 min; 5000 g) and should be stored at – 80 °C until required for analysis.
Οι μετρήσεις του μήκους λαμβάνονται από ψηφιακές φωτογραφίες με τη χρήση λογισμικού ανάλυσης εικόνας, όπως περιγράφεται στο έγγραφο OECD Guidance Document on Amphibian Thyroid Histology (Έγγραφο κατευθυντήριων γραμμών του ΟΟΣΑ για την ιστολογία του θυρεοειδούς των αμφιβίων) (9).
Procedure 3C:
Μήκος σώματος και υγρό βάρος
SOP:
Στο πρωτόκολλο της δοκιμής περιλαμβάνονται προσδιορισμοί του μήκους ρύγχους-κλοάκης (SVL) (Σχήμα 2) και του υγρού βάρους, για να αξιολογούνται οι πιθανές επιδράσεις των υπό δοκιμή χημικών ουσιών στον ρυθμό ανάπτυξης των γυρίνων σε σύγκριση με την ομάδα-μάρτυρα, οι οποίοι είναι επίσης χρήσιμοι για τον εντοπισμό γενικευμένης τοξικότητας στην υπό δοκιμή χημική ουσία.
Zebrafish, homogenisation of head & tail
Επειδή η απομάκρυνση του νερού από το σώμα των γυρίνων για τους προσδιορισμούς του βάρους μπορεί να δημιουργήσει συνθήκες πρόκλησης πίεσης για τους γυρίνους και ενδέχεται να προκαλέσει δερματική βλάβη, οι μετρήσεις αυτές πραγματοποιούνται την 7η ημέρα στους γυρίνους του επιμέρους δείγματος και κατά τον τερματισμό της δοκιμής (21η ημέρα) στους υπόλοιπους γυρίνους.
The fish are anaesthetised and euthanised in accordance with the test description.
Για λόγους συνέπειας, χρησιμοποιείτε την κρανιακή όψη της κλοάκης ως το ουραίο όριο της μέτρησης.
The head and tail are cut of the fish in accordance with Figure 1.
Το μήκος ρύγχους-κλοάκης (SVL) χρησιμοποιείται για να εκτιμηθεί η ανάπτυξη των γυρίνων, όπως απεικονίζεται στο σχήμα 2.
Important:
Τύποι μετρήσεων του μήκους σώματος και (Β) μετρήσεις του μήκους οπίσθιων άκρων στους γυρίνους του X. laevis (1).
All dissection instruments, and the cutting board should be rinsed and cleaned properly (e.g. with 96 % ethanol) between handling of each single fish to prevent “vitellogenin pollution” from females or induced males to uninduced males.
Παρότι το στάδιο ανάπτυξης και το μήκος οπίσθιων άκρων αποτελούν σημαντικά τελικά σημεία για την αξιολόγηση αλλαγών που σχετίζονται με την έκθεση κατά τη διαδικασία μεταμόρφωσης, η καθυστερημένη ανάπτυξη δεν μπορεί από μόνη της να θεωρείται διαγνωστικός δείκτης αντιθυρεοειδικής δράσης.
Cut behind
Μερικές αλλαγές μπορούν να εντοπιστούν μόνο με ιστοπαθολογική ανάλυση ρουτίνας.
Cut behind dorsal fin
Τα διαγνωστικά κριτήρια περιλαμβάνουν την υπερτροφία/ατροφία του θυρεοειδούς αδένα, την υπερτροφία των θυλακικών κυττάρων, την υπερπλασία των θυλακικών κυττάρων και, ως πρόσθετα ποιοτικά κριτήρια, τα εξής:
For Vtg analysis
περιοχή του θυλακικού αυλού, ποιότητα κολλοειδούς και ύψος/σχήμα θυλακικών κυττάρων.
For gonad histology
Θα πρέπει να αναφέρεται και ο βαθμός σοβαρότητας (4 βαθμοί).
The weight of the pooled head and tail from each fish is measured to the nearest mg.
Πληροφορίες σχετικά με τη λήψη και την επεξεργασία δειγμάτων για ιστολογική ανάλυση, καθώς και για τη διεξαγωγή ιστολογικών αναλύσεων σε δείγματα ιστού διατίθενται στο έγγραφο “Amphibian Metamorphosis Assay: Part 1 — Technical guidance for morphologic sampling and histological preparation” (Δοκιμασία μεταμόρφωσης αμφιβίων: Μέρος 1 — Τεχνικές κατευθύνσεις για τη μορφολογική δειγματοληψία και την ιστολογική προετοιμασία) και στο έγγραφο “Amphibian Metamorphosis Assay: Part 2 — Approach to reading studies, diagnostic criteria, severity grading and atlas” (Δοκιμασία μεταμόρφωσης αμφιβίων: Μέρος 2 — Προσέγγιση στην ερμηνεία μελετών, διαγνωστικών κριτηρίων, βαθμολόγησης σοβαρότητας και του άτλαντα) (9).
After being weighed, the parts are placed in appropriate tubes (e.g. 1,5 ml eppendorf) and frozen at – 80 °C until homogenisation or directly homogenised on ice with two plastic pistils.
Όταν ένα εργαστήριο πραγματοποιεί τη δοκιμασία για πρώτη φορά ή από τις πρώτες φορές, θα πρέπει να συμβουλεύεται πεπειραμένους παθολογοανατόμους για σκοπούς εκπαίδευσης προτού αναλάβει την ιστολογική ανάλυση και αξιολόγηση του θυρεοειδούς αδένα.
(Other methods can be used if they are performed on ice and the result is a homogenous mass).
Έκδηλες και σημαντικές αλλαγές σε κορυφαία τελικά σημεία που υποδεικνύουν επιτάχυνση ή ασυγχρονισμό της ανάπτυξης ενδέχεται να καθιστούν μη αναγκαία την εκτέλεση ιστοπαθολογικής ανάλυσης του θυρεοειδούς αδένα.
The tubes should be numbered properly so that the head and tail from the fish can be related to their respective body-section used for gonad histology.
Ωστόσο, η απουσία έκδηλων μορφολογικών αλλαγών ή οι ενδείξεις καθυστέρησης στην ανάπτυξη επιβάλλουν τη διεξαγωγή ιστολογικών αναλύσεων.
When a homogenous mass is achieved, 4 x the tissue weight of ice-cold homogenisation buffer is added.
Όλες οι δεξαμενές δοκιμής θα πρέπει να ελέγχονται καθημερινά για νεκρούς γυρίνους και θα πρέπει να καταγράφονται οι αριθμοί για κάθε δεξαμενή.
Keep working with the pistils until the mixture is homogeneous.
Για κάθε θνησιμότητα που παρατηρείται, θα πρέπει να καταγράφονται η ημερομηνία, η συγκέντρωση και ο αριθμός της δεξαμενής.
Important note:
Τα νεκρά ζώα θα πρέπει να απομακρύνονται από τη δεξαμενή δοκιμής αμέσως μόλις γίνονται αντιληπτά.
New pistils are used for each fish.
Ποσοστά θνησιμότητας που υπερβαίνουν το 10 % ενδέχεται να υποδεικνύουν ακατάλληλες συνθήκες δοκιμής ή τοξικές επιδράσεις της υπό δοκιμή χημικής ουσίας.
The samples are placed on ice until centrifugation at 4 °C at 50000 × g for 30 min.
Συμπληρωματικές παρατηρήσεις
Use a pipette to dispense portions of 20 μl supernatant into at least two tubes by dipping the tip of the pipette below the fat layer on the surface and carefully sucking up the supernatant without fat- or pellet fractions.
Περιπτώσεις μη φυσιολογικής συμπεριφοράς και μακροσκοπικών δυσμορφιών και βλαβών θα πρέπει να καταγράφονται.
The tubes are stored at – 80 °C until use.
Για κάθε μη φυσιολογική συμπεριφορά και μακροσκοπική δυσμορφία ή βλάβη που παρατηρείται, θα πρέπει να καταγράφονται η ημερομηνία, η συγκέντρωση και ο αριθμός της δεξαμενής.
Homogenisation buffer:(50 mM Tris-HCl pH 7,4; 1 % Protease inhibitor cocktail (Sigma)):
Η φυσιολογική συμπεριφορά χαρακτηρίζεται από την εναιώρηση των γυρίνων στη στήλη ύδατος με την ουρά ανεβασμένη πάνω από το κεφάλι, το τακτικό και ρυθμικό χτύπημα του ουραίου πτερυγίου, την περιοδική ανάδυση στην επιφάνεια του νερού, το ανοιγοκλείσιμο των επικαλυμμάτων των βραγχίων και την ανταπόκριση σε ερεθίσματα.
12 ml Tris-HCl pH 7,4 + 120 μl Protease inhibitor cocktail.TRIS:
Η μη φυσιολογική συμπεριφορά μπορεί να περιλαμβάνει, για παράδειγμα, επίπλευση στην επιφάνεια, παραμονή στον πυθμένα της δεξαμενής, ανεστραμμένη ή ακανόνιστη κολύμβηση, έλλειψη δραστηριότητας ανάδυσης και μη ανταπόκριση σε ερεθίσματα.
TRIS-ULTRA PURE (ICN) e.g. from Bie & Berntsen, Denmark.Protease inhibitor cocktail:
Επιπλέον, μεγάλες διαφορές στην κατανάλωση τροφής μεταξύ των αγωγών θα πρέπει να καταγράφονται.
From Sigma (for mammalian tissue) Product number P 8340.Note:
Μακροσκοπικές δυσμορφίες και βλάβες μπορεί να περιλαμβάνουν, για παράδειγμα, μορφολογικές ανωμαλίες (π.χ. παραμορφώσεις άκρων), αιμορραγικές βλάβες ή λοιμώξεις από βακτήρια ή μύκητες.
The homogenisation buffer should be used the same day as manufactured.
Οι προσδιορισμοί αυτοί είναι ποιοτικοί και θα πρέπει θεωρούνται παρόμοιοι με κλινικές ενδείξεις ασθένειας/πίεσης, καθώς και να γίνονται σε σύγκριση με τα ζώα-μάρτυρες.
Place on ice during use.
Εάν η εμφάνιση ή ο ρυθμός εμφάνισής τους είναι μεγαλύτερος στις δεξαμενές έκθεσης σε σχέση με τους μάρτυρες, θα πρέπει να θεωρούνται ενδείξεις έκδηλης τοξικότητας.
Vitellogenin fortification samples and inter-assay reference standard
Συλλογή δεδομένων
On each day that vitellogenin assays are performed, a fortification sample made using an inter-assay reference standard will be analysed.
Όλα τα δεδομένα θα πρέπει να συλλέγονται με χρήση ηλεκτρονικών ή μη αυτόματων συστημάτων που συμμορφώνονται με τους κανόνες των ορθών εργαστηριακών πρακτικών (ΟΕΠ).
The vitellogenin used to make the inter-assay reference standard will be from a batch different from the one used to prepare calibration standards for the assay being performed.
Χαρακτηρισμός της υπό δοκιμή χημικής ουσίας:
The fortification sample will be made by adding a known quantity of the inter-assay standard to a sample of control male plasma.
Χημικές πληροφορίες και δεδομένα:
The sample will be fortified to achieve a vitellogenin concentration between 10 and 100 times the expected vitellogenin concentration of control male fish.
Μετρήσεις της υπό δοκιμή χημικής ουσίας μπορεί να απαιτούνται τόσο για τα διαλύματα παρακαταθήκης, όσο και για τα διαλύματα δοκιμής,
The sample of control male plasma that is fortified may be from an individual fish or may be a composite from several fish.
Διαλύτης (εάν είναι διαφορετικός από το νερό):
A subsample of the unfortified control male plasma will be analysed in at least two duplicate wells.
αιτιολόγηση για την επιλογή του διαλύτη και χαρακτηρισμός του διαλύτη (φύση, χρησιμοποιούμενη συγκέντρωση),
The fortified sample also will be analysed in at least two duplicate wells.
Αρχεία λειτουργιών:
The mean quantity of vitellogenin in the two unfortified control male plasma samples will be added to the calculated quantity of vitellogenin added to fortification the samples to determine an expected concentration.
αυτά περιλαμβάνουν παρατηρήσεις που αφορούν τη λειτουργία του συστήματος δοκιμής, καθώς και το περιβάλλον υποστήριξης και την υποδομή.
The ratio of this expected concentration to the measured concentration will be reported along with the results from each set of assays performed on that day.
Στα τυπικά αρχεία περιλαμβάνονται τα εξής:
Decision flowchart for the statistical analysis
θερμοκρασία περιβάλλοντος, θερμοκρασία δοκιμής, φωτοπερίοδος, κατάσταση κρίσιμων εξαρτημάτων του συστήματος έκθεσης (π.χ. αντλίες, μετρητές κύκλου, πιέσεις), ταχύτητες ροής, επίπεδα νερού, αλλαγές φιάλης διαλύματος παρακαταθήκης και αρχεία σίτισης.
Dunnett test on nested ANOVA
Στις γενικές παραμέτρους ποιότητας νερού περιλαμβάνονται τα εξής:
No Yes
pH, διαλυμένο οξυγόνο, αγωγιμότητα, συνολικό ιώδιο, αλκαλικότητα και σκληρότητα,
Dunn or Mann-Whitney test on rep means
Αποκλίσεις από τη μέθοδο δοκιμών:
variance stabilising transform
οι πληροφορίες αυτές θα πρέπει να περιλαμβάνουν οποιοδήποτε στοιχείο ή λεπτομερείς περιγραφές των αποκλίσεων από τη μέθοδο δοκιμών,
>=4 reps per conc
Βιολογικές παρατηρήσεις και δεδομένα:
<=3 reps per conc Dunn test Yes
αυτά περιλαμβάνουν καθημερινές παρατηρήσεις της θνησιμότητας, της κατανάλωσης τροφής, της μη φυσιολογικής συμπεριφοράς κολύμβησης, του λήθαργου, της απώλειας ισορροπίας, των δυσμορφιών, των βλαβών κ.λπ. Οι παρατηρήσεις και τα δεδομένα που συλλέγονται σε προκαθορισμένα διαστήματα είναι, μεταξύ άλλων:
No Normalising transform?
στάδιο ανάπτυξης, μήκος οπίσθιων άκρων, μήκος ρύγχους-κλοάκης και υγρό βάρος,
Tamhane-Dunnett test >=4 reps per conc
Ιστολογικά δεδομένα:
<=3 reps per conc Nested ANOVA not normal No Yes No
αυτά περιλαμβάνουν λεπτομερείς περιγραφές, καθώς και βαθμολογίες για τη σοβαρότητα και τη συχνότητα συγκεκριμένων παρατηρήσεων, όπως περιγράφεται στο έγγραφο καθοδήγησης ιστοπαθολογίας,
Yes variance stabilising transformation
Παρατηρήσεις ad hoc:
Dunnett test Variances unequal
οι παρατηρήσεις αυτές θα πρέπει να περιλαμβάνουν λεπτομερείς περιγραφές της μελέτης που δεν εντάσσονται στις κατηγορίες που περιγράφηκαν προηγουμένως.
Variances equal
Αναφορά δεδομένων
Not monotone
Το προσάρτημα 2 περιέχει φύλλα εργασίας για την καθημερινή συλλογή δεδομένων που μπορούν να χρησιμοποιούνται ως οδηγός για την καταχώριση ανεπεξέργαστων δεδομένων και για υπολογισμούς συνοπτικών στατιστικών στοιχείων.
Stept-down Jonckheere or Williams' test
Επιπλέον, παρέχονται πίνακες αναφοράς που είναι χρήσιμοι για την ανακοίνωση συνόψεων με τα δεδομένα των τελικών σημείων.
Step-down trendtest on replicate means
Πίνακες αναφοράς για τις ιστολογικές εκτιμήσεις περιλαμβάνονται στο προσάρτημα 2.
Monotone
Κριτήρια απόδοσης και αποδοχή/εγκυρότητα δοκιμής
Tamhane-Dunnett test on nested ANOVA
Γενικώς, οι μεγάλες αποκλίσεις από τη μέθοδο δοκιμών θα έχουν ως αποτέλεσμα τα δεδομένα να μην είναι αποδεκτά για ερμηνεία ή αναφορά.
Dunn test on rep means
Για τον σκοπό αυτό, αναπτύχθηκαν τα ακόλουθα κριτήρια που παρατίθενται στον πίνακα 4 ως οδηγός για τον προσδιορισμό της ποιότητας της εκτελεσθείσας δοκιμής και της γενικής απόδοσης των οργανισμών-μαρτύρων.
Dunn or Mann-Whitney test
Πίνακας 4
Nested ANOVA normal
Κριτήρια απόδοσης για τη δοκιμασία AMA.
Rep means normally distributed
Κριτήριο
Step-down Jonckheere test
Αποδεκτά όρια
Rep means normal or not homogenous
Συγκεντρώσεις δοκιμής
Rep means normal & homogenous
Διατήρηση σε ≤ 20 % CV (μεταβλητότητα της μετρηθείσας συγκέντρωσης δοκιμής) καθ' όλη τη διάρκεια της δοκιμής 21 ημερών
Determine whether Dose-Response is monotone
Θνησιμότητα στους μάρτυρες
C.38.
≤ 10 % — η θνησιμότητα των μαρτύρων σε οποιαδήποτε μία επανάληψη δεν θα πρέπει να υπερβαίνει τους 2 γυρίνους
THE AMPHIBIAN METAMORPHOSIS ASSAY
Ελάχιστο διάμεσο στάδιο ανάπτυξης των μαρτύρων στο τέλος της δοκιμής
This test method is equivalent to OECD test guideline (TG) 231 (2009).
Κατανομή του σταδίου ανάπτυξης στην ομάδα-μάρτυρα
The need to develop and validate an assay capable of detecting chemicals active in the thyroid system of vertebrate species originates from concerns that environmental levels of chemicals may cause adverse effects in both humans and wildlife.
Η κατανομή του σταδίου ανάπτυξης μεταξύ του 10ου και του 90ού εκατοστημορίου δεν θα πρέπει να διαφέρει κατά περισσότερο από 4 στάδια
In 1998, the OECD initiated a high-priority activity to revise existing TGs and to develop new TGs for the screening and testing of potential endocrine disrupters.
Διαλυμένο οξυγόνο
One element of the activity was to develop a TG for the screening of chemicals active on the thyroid system of vertebrate species.
≥ 40 % κορεσμός με αέρα [8]
Both an enhancement of the Repeated dose 28-day oral toxicity study in rodents (Chapter B.7 of this Annex) and the Amphibian Metamorphosis Assay (AMA) were proposed.
Το pH θα πρέπει να διατηρείται σε τιμή από 6,5 έως 8,5.
The enhanced test method B.7 underwent validation and a revised test method has been issued.
Οι διαφορές μεταξύ των επαναλήψεων/μεταξύ των αγωγών δεν θα πρέπει να υπερβαίνουν την τιμή 0,5.
The Amphibian Metamorphosis Assay (AMA) underwent an extensive validation programme which included intra- and inter-laboratory studies demonstrating the relevance and reliability of the assay (1, 2).
± 1 °C — οι διαφορές μεταξύ των επαναλήψεων/μεταξύ των αγωγών δεν θα πρέπει να υπερβαίνουν τους 0,5 °C
Subsequently, the validation of the assay was subject to peer-review by a panel of independent experts (3).
Συγκεντρώσεις δοκιμής χωρίς έκδηλη τοξικότητα
This test method is the outcome of the experience gained during the validation studies for the detection of thyroid active chemicals, and of work conducted elsewhere in OECD member countries.
Απόδοση επανάληψης
The Amphibian Metamorphosis Assay (AMA) is a screening assay intended to empirically identify chemicals which may interfere with the normal function of the hypothalamic-pituitary-thyroid (HPT) axis.
Επιτρέπεται να υπάρχουν ≤ 2 υποβαθμισμένες επαναλήψεις σε ολόκληρη τη δοκιμή
The AMA represents a generalised vertebrate model to the extent that it is based on the conserved structures and functions of the HPT axis.
Ειδικές συνθήκες για τη χρήση διαλύτη
It is an important assay because amphibian metamorphosis provides a well-studied, thyroid-dependent process which responds to chemicals active within the HPT axis, and it is the only existing assay that detects thyroid activity in an animal undergoing morphological development.
Εάν χρησιμοποιείται διαλύτης ως φορέας, θα πρέπει να χρησιμοποιείται μάρτυρας με διαλύτη και μάρτυρας καθαρού νερού και να αναφέρονται τα αποτελέσματα
The general experimental design entails exposing stage 51 Xenopus laevis tadpoles to a minimum of three different concentrations of a test chemical and a dilution water control for 21 days.
Οι στατιστικά σημαντικές διαφορές ανάμεσα στις ομάδες-μάρτυρες με διαλύτη και ομάδες-μάρτυρες νερού υφίστανται ειδική μεταχείριση.
There are four replicates of each test treatment.
Για περισσότερες πληροφορίες, βλ. παρακάτω
Larval density at test initiation is 20 tadpoles per test tank for all treatment groups.
Ειδικές συνθήκες για τη χρήση συστήματος στατικής ανανέωσης
The observational endpoints are hind limb length, snout to vent length (SVL), developmental stage, wet weight, thyroid histology, and daily observations of mortality.
Θα πρέπει να αναφέρονται αντιπροσωπευτικές χημικές αναλύσεις πριν από την ανανέωση και μετά από αυτήν
Test Species
Τα επίπεδα αμμωνίας θα πρέπει να μετρώνται αμέσως πριν από την ανανέωση
Xenopus laevis is routinely cultured in laboratories worldwide and is easily obtainable through commercial suppliers.
Όλες οι παράμετροι της ποιότητας νερού που παρατίθενται στον πίνακα 1 του προσαρτήματος 1 θα πρέπει να μετρώνται αμέσως πριν από την ανανέωση
Reproduction can be easily induced in this species throughout the year using human chorionic gonadotropin (hCG) injections and the resultant larvae can be routinely reared to selected developmental stages in large numbers to permit the use of stage-specific test protocols.
Η περίοδος ανανέωσης δεν θα πρέπει να υπερβαίνει τις 72 ώρες
It is preferred that larvae used in the assay are derived from in-house adults.
Κατάλληλο πρόγραμμα σίτισης (το 50 % του ημερήσιου σιτηρεσίου να αποτελείται από εμπορικά διαθέσιμη τροφή για γυρίνους)
As an alternative although this is not the preferred procedure, eggs or embryos may be shipped to the laboratory performing the test and allowed to acclimate;
Εγκυρότητα δοκιμής
the shipping of larval stages for use in the test is unacceptable.
Για να κριθεί μια δοκιμή αποδεκτή/έγκυρη, θα πρέπει να πληρούνται οι ακόλουθες προϋποθέσεις:
Equipment and Supplies
Έγκυρο πείραμα σε μια δοκιμή με αρνητική επίδραση στη λειτουργία του θυρεοειδούς:
The following equipment and supplies are needed for the conduct of this assay:
Για οποιαδήποτε αγωγή (συμπεριλαμβανομένων των μαρτύρων), η θνησιμότητα δεν επιτρέπεται να υπερβαίνει το 10 %.
Exposure system (see description below);
Για οποιαδήποτε επανάληψη, η θνησιμότητα δεν επιτρέπεται να υπερβαίνει τους τρεις γυρίνους, διαφορετικά η επανάληψη θεωρείται υποβαθμισμένη
Glass or stainless steel aquaria (see description below);
Θα πρέπει να είναι διαθέσιμα για ανάλυση τουλάχιστον δύο επίπεδα αγωγής και με τις τέσσερις μη υποβαθμισμένες επαναλήψεις.
Breeding tanks;
Θα πρέπει να είναι διαθέσιμα για ανάλυση τουλάχιστον δύο επίπεδα αγωγής χωρίς έκδηλη τοξικότητα
Temperature controlling apparatus (e.g., heaters or coolers (adjustable to 22° ± 1 °C));
Έγκυρο πείραμα σε μια δοκιμή με θετική επίδραση στη λειτουργία του θυρεοειδούς:
Thermometer;
Μπορεί να προκύψει θνησιμότητα σε έως δύο γυρίνους/επανάληψη στην ομάδα-μάρτυρα
Binocular dissection microscope;
Λογική απόφασης για τη διεξαγωγή της δοκιμασίας AMA.
Digital camera with at least 4 megapixel resolution and micro function;
Η λογική της απόφασης για τη δοκιμασία AMA αναπτύχθηκε ώστε να προσφέρει μια λογική βοήθεια όσον αφορά τη διεξαγωγή και την ερμηνεία των αποτελεσμάτων της βιοδοκιμασίας (βλ. διάγραμμα ροής στο σχήμα 3).
Image digitising software;
Η λογική της απόφασης, ουσιαστικά, σταθμίζει τα τελικά σημεία με τρόπο ώστε να δίνεται μεγαλύτερη βαρύτητα στην προχωρημένη ανάπτυξη, την ασύγχρονη ανάπτυξη και την ιστοπαθολογία του θυρεοειδούς και μικρότερη βαρύτητα στην καθυστερημένη ανάπτυξη, στο μήκος ρύγχους-κλοάκης και στο βάρος υγρού σώματος -παράμετροι που μπορεί ενδεχομένως να επηρεαστούν από τη γενική τοξικότητα.
Petri dish (e.g. 100 × 15 mm) or transparent plastic chamber of comparable size;
Προχωρημένη ανάπτυξη (που προσδιορίζεται με τη χρήση του σταδίου ανάπτυξης, του μήκους ρύγχους-κλοάκης (SVL) και του μήκους των οπίσθιων άκρων (HLL))
Analytical balance capable of measuring to 3 decimal places (mg);
Οι μοναδικές γνωστές αιτίες που προκαλούν προχωρημένη ανάπτυξη είναι επιδράσεις που σχετίζονται με τον θυρεοειδή.
Dissolved oxygen meter;
Αυτές μπορεί να είναι επιδράσεις στον περιφερικό ιστό, όπως άμεση αλληλεπίδραση με τον υποδοχέα των θυρεοειδικών ορμονών (όπως της T4) ή επιδράσεις που μεταβάλλουν τα επίπεδα των κυκλοφορουσών θυρεοειδικών ορμονών.
pH meter;
Σε κάθε περίπτωση, αυτές οι ενδείξεις αποδεικνύουν επαρκώς ότι η χημική ουσία έχει επίδραση στη λειτουργία του θυρεοειδούς.
Light intensity meter capable of measuring in lux units;
Η προχωρημένη ανάπτυξη αξιολογείται με έναν από τους δύο ακόλουθους τρόπους.
Miscellaneous laboratory glassware and tools;
Πρώτον, το στάδιο γενικής ανάπτυξης μπορεί να αξιολογηθεί με τη χρήση της τυποποιημένης προσέγγισης που περιγράφεται από τους Nieuwkoop και Faber (8).
Adjustable pipettes (10 to 5000 μl) or assorted pipettes of equivalent sizes;
Δεύτερον, μπορεί να γίνει ποσοτικός προσδιορισμός συγκεκριμένων μορφολογικών χαρακτηριστικών, όπως το μήκος των οπίσθιων άκρων, την 7η και την 21η ημέρα, το οποίο σχετίζεται θετικά με αγωνιστικές επιδράσεις στον υποδοχέα των θυρεοειδικών ορμονών.
Test chemical in sufficient quantities to conduct the study, preferably of one lot;
Εάν προκύπτουν στατιστικά σημαντικές εξελίξεις στην ανάπτυξη ή στο μήκος των οπίσθιων άκρων, η δοκιμή υποδεικνύει ότι η χημική ουσία επιδρά στον θυρεοειδή.
Analytical instrumentation appropriate for the chemical on test or contracted analytical services.
Η αξιολόγηση των ζώων δοκιμής όσον αφορά την παρουσία ταχύτερης ανάπτυξης σε σχέση με τον πληθυσμό του μάρτυρα θα βασίζεται στα αποτελέσματα στατιστικών αναλύσεων για τα ακόλουθα τέσσερα τελικά σημεία:
Chemical Testability
μήκος οπίσθιων άκρων (κανονικοποιημένο ως προς το μήκος ρύγχους-κλοάκης) την 7η ημέρα της μελέτης
The AMA is based upon an aqueous exposure protocol whereby test chemical is introduced into the test chambers via a flow-through system.
μήκος οπίσθιων άκρων (κανονικοποιημένο ως προς το μήκος ρύγχους-κλοάκης) την 21η ημέρα της μελέτης
Flow-through methods however, introduce constraints on the types of chemicals that can be tested, as determined by the physicochemical properties of the chemical.
στάδιο ανάπτυξης την 7η ημέρα της μελέτης
Therefore, prior to using this protocol, baseline information about the chemical should be obtained that is relevant to determining the testability, and the OECD Guidance Document on Aquatic Toxicity Testing of Difficult Substances and Mixtures (4) should be consulted.
στάδιο ανάπτυξης την 21η ημέρα της μελέτης.
Characteristics which indicate that the chemical may be difficult to test in aquatic systems include:
Η διεξαγωγή των στατιστικών αναλύσεων για το μήκος οπίσθιων άκρων θα πρέπει να βασίζεται σε μετρήσεις του μήκους του αριστερού οπίσθιου άκρου.
high octanol water partitioning coefficients (log Kow), high volatility, susceptibility to hydrolysis, and susceptibility to photolysis under ambient laboratory lighting conditions.