natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Τα αποτελέσματα θα πρέπει να παρουσιάζονται σε μορφή γραφήματος (ραβδογράμματα που παριστούν τη μέση τιμή ± 1 SD) και πίνακα (LOEC/NOEC, κατεύθυνση της επίδρασης και ισχύς της μέγιστης απόκρισης που αποτελεί μέρος του τμήματος δόσης-απόκρισης των δεδομένων) (βλ. παράδειγμα στο σχήμα 3).
Inhibition of steroidogenesis occurring in the presence of almost 20 % cytotoxicity should be carefully evaluated to ensure that cytotoxicity is not the cause for the inhibition.
Η αξιολόγηση των δεδομένων θεωρείται έγκυρη μόνο εάν έχει βασιστεί τουλάχιστον σε δύο ανεξάρτητες δοκιμές.
Hormone Analysis
Ένα πείραμα ή μια εκτέλεση δοκιμής θεωρείται ανεξάρτητο εάν έχει διεξαχθεί σε διαφορετική ημερομηνία και με τη χρήση νέου συνόλου διαλυμάτων και μαρτύρων.
Each laboratory can use a hormone measurement system of its choice for the analysis of T and E2.
Η κλίμακα συγκεντρώσεων που χρησιμοποιείται στη δεύτερη και στην τρίτη εκτέλεση (εάν είναι απαραίτητη) της δοκιμής μπορεί να προσαρμόζεται βάσει των αποτελεσμάτων της πρώτης εκτέλεσης, ώστε να καθορίζεται ακριβέστερα η κλίμακα δόσης-απόκρισης που περιέχει την τιμή LOEC (βλ. παράγραφο 47).
Spare aliquots of medium from each treatment group may be used to prepare dilutions to bring the concentration within the linear part of the standard curve.
Σχήμα 3
As noted in paragraph 29, each laboratory should demonstrate the conformance of their hormone measurement system (e.g. ELISA, RIA, LC-MS, LC-MS/MS) with the QC criteria by analysing supplemented medium spiked with an internal hormone control prior to conducting QC runs or testing of chemicals.
Παράδειγμα παρουσίασης και αξιολόγησης δεδομένων που έχουν ληφθεί κατά τη διεξαγωγή του προσδιορισμού H295R, σε μορφή γραφήματος και πίνακα.
In order to ensure that the components of the test system do not interfere with measurement of hormones, the hormones may need to be extracted from the media prior to their measurement (see paragraph 30 for the conditions under which an extraction is or is not required).
Οι αστερίσκοι δηλώνουν στατιστικά σημαντικές διαφορές από τον μάρτυρα με τον διαλύτη (p<0,05).
It is recommended to conduct extraction following the procedures in Appendix III to the validation report (4).
η ελάχιστη συγκέντρωση στην οποία παρατηρούνται επιδράσεις.
If a commercial test kit is being used to measure the hormone production, the hormone analysis should be conducted as specified in the manuals provided by the test kit manufacturer.
μέγιστη ισχύς της απόκρισης που παρατηρείται σε οποιαδήποτε συγκέντρωση σε σχέση με τη μέση απόκριση του μάρτυρα με τον διαλύτη (=1)
Dilutions of samples need to be adjusted such that expected hormone concentrations for the solvent controls fall within the centre of the linear range of the standard curve of the individual assay (Appendix III to the validation report (4)).
Χοληστερόλη
Values outside of the linear portion of the standard curve should be rejected.
Πρεγνενολόνη
Final hormone concentrations are calculated as follows:
OH-πρεγνενολόνη
Example:
Προγεστερόνη
Extracted:
ΟΗ-προγεστερόνη
450 μl medium
Ανδροστενεδιόνη
Reconstituted in:
Τεστοστερόνη Οιστρόνη
250 μl assay buffer
οιστραδιόλη
Dilution in Assay:
εσοξυκορτικοστερόνη
1:10 (to bring the sample within the linear range of the standard curve)
Δεσοξυκορτιζόλη
Hormone Concentration in Assay:
Κορτικοστερόνη
150 pg/ml (already adjusted to concentration per ml sample assayed)
Κορτιζόλη
Recovery:
Αλδοστερόνη
Final hormone concentration =
Χημική ουσία
(Hormone concentration (per ml) ÷ recovery) (dilution factor)
Μέγιστη μεταβολή
(150 pg/ml) ÷ (0,89) × (250 μl/450 μl) × 10 = 936,3 pg/ml
0,15πλασιασμός
Selection of test concentrations
Λετροζόλη
A minimum of two independent runs of the assay should be conducted.
Διαδικασία ερμηνείας των δεδομένων
Unless prior information such as information on solubility limits or cytotoxicity provides a basis for selecting test concentrations, it is recommended that the test concentrations for the initial run be spaced at log10 intervals with 10–3 M being the maximum concentration.
Μια ελεγχόμενη χημική ουσία θεωρείται θετική εάν η πολλαπλασιαστική επαγωγή διαφέρει στατιστικά (p ≤ 0,05) από τον μάρτυρα με τον διαλύτη σε δύο παρακείμενες συγκεντρώσεις και τουλάχιστον σε δύο ανεξάρτητες εκτελέσεις της δοκιμής (πίνακας 7).
If the chemical is soluble, and not cytotoxic at any of the tested concentrations, and the first run was negative for all concentrations, then it is to be confirmed in one more run using the same conditions as the first run was conducted (Table 7).
Μια ελεγχόμενη χημική ουσία θεωρείται αρνητική μετά από δύο ανεξάρτητες εκτελέσεις με αρνητικά αποτελέσματα ή μετά από τρείς εκτελέσεις, εκ των οποίων δύο με αρνητικά αποτελέσματα και μία με αμφίσημα ή θετικά.
If the results of the first run are equivocal (i.e. the fold-change is statistically significant from the SC at only one concentration) or positive (i.e. the fold change at two or more adjacent concentrations is statistically significant), the test should be repeated as indicated in Table 7 by refining the selected test concentrations.
Εάν τα δεδομένα που έχουν προκύψει από τρία ανεξάρτητα πειράματα δεν πληρούν τα κριτήρια λήψης απόφασης του πίνακα 7, τα πειραματικά αποτελέσματα δεν είναι δυνατόν να ερμηνευτούν.
Test concentrations in runs two and three (if applicable) should be adjusted on the basis of the results of the initial run bracketing concentrations that elicited an effect using 1/2-log concentration spacing (e.g. if the original run of 0,001, 0,01, 0,1, 1, 10, 100, 1000 μM resulted in inductions at 1 and 10 μM, the concentrations tested in the second run should be 0,1, 0,3, 1, 3, 10, 30, 100 μM), unless lower concentrations need to be employed to achieve a LOEC.
Τα αποτελέσματα που λαμβάνονται σε συγκεντρώσεις οι οποίες υπερβαίνουν τα όρια διαλυτότητας ή είναι κυτταροτοξικές δεν θα πρέπει να περιλαμβάνονται στην ερμηνεία των αποτελεσμάτων.
In the latter case, at least five concentrations below the lowest concentration tested in the first run should be used in the second run using a 1/2-log scale.
Έκθεση δοκιμής
If the second run does not confirm the first run (i.e. statistical significance does not occur at the previously positively tested Live/Deadconcentration ± 1 concentration-increment), a third experiment is to be conducted using the original testing conditions.
όνομα και τοποθεσία των εγκαταστάσεων·
Equivocal results in the first run are considered negative if the observed effect could not be confirmed in any of the two subsequent runs.
διευθυντής και λοιπό προσωπικό της μελέτης και οι αρμοδιότητές τους στη μελέτη·
Equivocal results are considered as positive responses (effect) when the response can be confirmed in at least one more run within a ± 1 concentration increment (see section 55 for the Data Interpretation Procedure).
ημερομηνίες έναρξης και λήξης της μελέτης·
Table 7
Ελεγχόμενη χημική ουσία, αντιδραστήρια και μάρτυρες
Decision matrix for possible outcome scenarios
ταυτότητα (ονομασία/αριθμός CAS, κατά περίπτωση), προέλευση, αριθμός παρτίδας, καθαρότητα, προμηθευτής και χαρακτηρισμός της ελεγχόμενης χημικής ουσίας, των αντιδραστηρίων και των μαρτύρων·
Run 1
φυσική μορφή και σημαντικές φυσικοχημικές ιδιότητες της ελεγχόμενης χημικής ουσίας·
Run 2
συνθήκες αποθήκευσης και μέθοδος και συχνότητα παρασκευής των δειγμάτων ελεγχόμενων χημικών ουσιών, των αντιδραστηρίων και των μαρτύρων·
Run 3
σταθερότητα της ελεγχόμενης χημικής ουσίας.
Decision
Κύτταρα
Scenario
προέλευση και τύπος των κυττάρων·
Positive
αριθμός ανακαλλιεργειών (αναγνωριστικό κυτταρικής ανακαλλιέργειας) των κυττάρων που χρησιμοποιήθηκαν στη δοκιμή·
Confirm [26]
περιγραφή των διαδικασιών διατήρησης των κυτταροκαλλιεργειών·
Stop
Απαιτήσεις πριν από τη δοκιμή (κατά περίπτωση)
Refine [27]
περιγραφή και αποτελέσματα της δοκιμής χημικής παρεμπόδισης του ορμονικού προσδιορισμού·
Equivocal [28]
περιγραφή και αποτελέσματα των μετρήσεων της απόδοσης της εκχύλισης ορμονών·
Quality Control of the Test Plate
πρότυπες καμπύλες και καμπύλες βαθμονόμησης για όλους τους αναλυτικούς προσδιορισμούς προς διεξαγωγή·
In addition to meeting the criteria for the QC plate, other quality criteria that pertain to acceptable variation between replicate wells, replicate experiments, linearity and sensitivity of hormone measurement systems, variability between replicate hormone measures of the same sample, and percentage recovery of hormone spikes after extraction of medium (if applicable; see Paragraph 30 regarding extraction requirements) should be met and are provided in Table 8.
όρια ανίχνευσης για τους επιλεγμένους αναλυτικούς προσδιορισμούς.
Data should fall within the acceptable ranges defined for each parameter to be considered for further evaluation.
σύνθεση των θρεπτικών μέσων·
Table 8
συγκέντρωση της ελεγχόμενης χημικής ουσίας·
Acceptable ranges and/or variation (%) for H295R assay test plate parameters.
πυκνότητα κυττάρων (εκτιμώμενες ή μετρούμενες συγκεντρώσεις κυττάρων μετά από 24 και 48 ώρες)·
(LOQ: Limit of Quantification of the hormone measurement system.
διαλυτότητα της ελεγχόμενης χημικής ουσίας (όριο διαλυτότητας, εάν έχει προσδιοριστεί)·
CV: Coefficient of variation; SC: Solvent Control; DPM: Disintegrations per minute)
χρόνος και συνθήκες επώασης·
Comparison Between
Αποτελέσματα της δοκιμής
Basal hormone production in SCs
ανεπεξέργαστα δεδομένα ανά κοιλότητα για τους μάρτυρες και τις ελεγχόμενες χημικές ουσίες – κάθε επαναληπτική μέτρηση υπό τη μορφή των αρχικών δεδομένων που παρέχει το όργανο που χρησιμοποιήθηκε για τη μέτρηση της παραγωγής ορμονών (π.χ. απορρόφηση, μονάδες φθορισμού, διασπάσεις ανά λεπτό κ.λπ.)·
Fold-greater than LOQ
επικύρωση της κανονικότητας των δεδομένων ή επεξήγηση του μετασχηματισμού τους·
≥ 5-fold
δεδομένα κυτταροτοξικότητας (συγκεντρώσεις δοκιμής που προκάλεσαν κυτταροτοξικότητα)·
Exposure Experiments — Within Plate CV for SCs (Replicate Wells)
επιβεβαίωση της ικανοποίησης των απαιτήσεων ποιοτικού ελέγχου·
Absolute Concentrations
σχετική μεταβολή σε σύγκριση με τον μάρτυρα με τον διαλύτη, διορθωμένη ως προς την κυτταροτοξικότητα·
Exposure Experiments — Between Plate CV for SCs (Replicate Experiments)
ραβδόγραμμα που παρουσιάζει τη σχετική (πολλαπλασιαστική) μεταβολή σε κάθε συγκέντρωση, την τυπική απόκλιση και τη στατιστική σημαντικότητα, όπως αναφέρεται στις παραγράφους 49-54.
Fold-Change
Ερμηνεία των δεδομένων
Hormone Measurement System — Sensitivity
Εφαρμογή της διαδικασίας ερμηνείας των δεδομένων στα αποτελέσματα και συζήτηση των ευρημάτων
Detectable fold-decrease relative to SC
Συζήτηση
Hormone Measurement System — Replicate Measure CV for SCs [29]
Προκύπτουν από τη μελέτη ενδείξεις σχετικά με την πιθανότητα να έχουν επηρεαστεί τα δεδομένα για την Τ/Ε2 από έμμεσες επιδράσεις στην πορεία σύνθεσης γλυκοκορτικοειδών και μεταλλοκορτικοειδών;
Medium Extraction — Recovery of Internal 3H Standard (If Applicable)
Συμπεράσματα
DPM
Res., 14, 23–30.
≥ 65 % Nominal
OECD (2010), Multi-Laboratory Validation of the H295R Steroidogenesis Assay to Identify Modulators of Testosterone and Estradiol Production, OECD Series of Testing and Assessment No.
DATA ANALYSIS AND REPORTING
132, ENV/JM/MONO(2010)31, Paris.
Data Analysis
OECD (2010), Peer Review Report of the H295R Cell-Based Assay for Steroidogenesis, OECD Series of Testing and Assessment No.
To evaluate the relative increase/decrease in chemically altered hormone production, the results should be normalised to the mean SC value of each test plate, and results expressed as changes relative to the SC in each test plate.
133, ENV/JM/MONO(2010)32, Paris.
All data are to be expressed as mean ± 1 standard deviation (SD).
Κεφάλαιο B.55 του παρόντος παραρτήματος:
Only hormone data from wells where cytotoxicity was less than 20 % should be included in the data analysis.
Βιοπροσδιορισμός Hershberger σε επίμυες:
Relative changes should be calculated as follows:
Βραχυπρόθεσμος προσδιορισμός διαλογής για (αντι)ανδρογονικές ιδιότητες.
Relative Change = (Hormone concentration in each well) ÷ (Mean hormone concentration in all solvent control well).
Προσάρτημα
If by visual inspection of the well or as demonstrated by the viability/cytotoxicity assay described in paragraph 42 there appears to be an increase in cell number, the apparent increase needs to be verified.
Συρροή τα περιθώρια κάλυψης ή εξάπλωσης των κυττάρων στην επιφάνεια ή τη μάζα του μέσου καλλιέργειας.
Prior to conducting statistical analyses, the assumptions of normality and variance homogeneity should be evaluated.
συντελεστής μεταβλητότητας, ο οποίος ορίζεται ως ο λόγος της τυπικής απόκλισης μιας κατανομής προς την αριθμητική μέση τιμή της.
Normality should be evaluated using standard probability plots or other appropriate statistical method (e.g. Shapiro-Wilk's test).
CYP
If the data (fold changes) are not normally distributed, transformation of the data should be attempted to approximate a normal distribution.
μονοξυγονάσες του κυτοχρώματος Ρ450, ήτοι μια οικογένεια γονιδίων και τα παραγόμενα από αυτά ένζυμα που συμμετέχουν στην κατάλυση μεγάλης ποικιλίας βιοχημικών αντιδράσεων, συμπεριλαμβανομένων της σύνθεσης και του μεταβολισμού στεροειδών ορμονών.
If the data are normally distributed or approximate a normal distribution, differences between chemical concentration groups and SCs should be analysed using a parametric test (e.g. Dunnett's Test) with concentration being the independent, and response (fold-change) being the dependent variable.
DPM
If data are not normally distributed, an appropriate non-parametric test should be used (e.g. Kruskal Wallis, Steel's Many-one rank test).
οιστραδιόλη, το σημαντικότερο οιστρογόνο στα συστήματα θηλαστικών.
Differences are considered significant at p ≤ 0,05.
Κύτταρα Η295R ανθρώπινα κύτταρα επινεφριδικού καρκινώματος, που έχουν τα χαρακτηριστικά φυσιολογίας των ζωνικά αδιαφοροποίητων κυττάρων των επινεφριδίων ανθρώπινων εμβρύων και εκφράζουν το σύνολο των ενζύμων της πορείας στεροειδογένεσης.
Statistical evaluations are done based on average values for each well that represent independent replicate data points.
Είναι διαθέσιμα από τον οργανισμό ATCC.
It is anticipated that due to the large spacing of doses in the first run (log10 scale) in many cases it will not be possible to describe clear concentration-response relationships where the two greatest doses will be on the linear portion of the sigmoid curve.
Θρεπτικό μέσο κατάψυξης χρησιμοποιείται για την κατάψυξη και τη φύλαξη κατεψυγμένων κυττάρων.
Therefore, for the first run or any other data sets where this condition occurs (e.g. where no maximum efficacy can be estimated) type I fixed variable statistics as described above will be applied.
Αποτελείται από το θρεπτικό μέσο παρακαταθήκης στο οποίο προστίθενται ορός BD NuSerum και διμεθυλοσουλφοξείδιο (DMSO).
If more than two data points lie on the linear portion of the curve and where maximum efficacies can be calculated — as is anticipated for some of the 2nd runs that are conducted using a semi-log spacing of exposure concentrations — a probit, logit or other appropriate regression model should be utilised to calculate effective concentrations (e.g. EC50 and EC20).
Γραμμική περιοχή η περιοχή της πρότυπης καμπύλης σε σύστημα μέτρησης ορμονών στην οποία τα αποτελέσματα είναι ανάλογα της συγκέντρωσης του αναλύτη στο δείγμα.
Results should be provided both in graphical (bar graphs representing mean ± 1 SD) and tabular (LOEC/NOEC, direction of effect, and strength of maximum response that is part of the dose-response portion of the data) formats (see Figure 3 for an example).
LOQ
Data assessment is only considered valid if it has been based on at least two independently conducted runs.
Limit of Quantification/όριο ποσοτικού περιορισμού· είναι η μικρότερη ποσότητα μιας χημικής ουσίας που μπορεί να διακριθεί από την απουσία αυτής της χημικής ουσίας (τιμή τυφλού δείγματος) εντός του δηλούμενου διαστήματος εμπιστοσύνης.
An experiment or run is considered independent if it has been conducted at a different date using a new set of solutions and controls.
Για τους σκοπούς της παρούσας μεθόδου, η τιμή LOQ ορίζεται συνήθως από τον κατασκευαστή των συστημάτων δοκιμών, εάν δεν προσδιορίζεται διαφορετικά.
The concentration range used in runs 2 and 3 (if necessary) may be tailored on the basis of the results of run 1 to better define the dose response range containing the LOEC (see paragraph 47).
LOEC
Figure 3
η ελάχιστη συγκέντρωση στην οποία παρατηρούνται επιδράσεις, ήτοι το κατώτατο επίπεδο συγκέντρωσης στο οποίο η απόκριση του προσδιορισμού διαφέρει στατιστικά από την απόκριση του μάρτυρα με τον διαλύτη.
Example of the presentation and evaluation of data obtained during the conduct of the H295R Assay in graphical and tabular format.
NOEC
Asterisks indicate statistically significant differences from the solvent control (p < 0,05).
η συγκέντρωση στην οποία δεν παρατηρούνται επιδράσεις, ήτοι η μέγιστη συγκέντρωση που ελέγχθηκε σε προσδιορισμό από τον οποίο δεν προέκυψε θετική απόκριση.
Lowest observed effective concentration;
Ανακαλλιέργεια ο αριθμός των διαιρέσεων των κυττάρων μετά την έναρξη μιας καλλιέργειας από κατεψυγμένο απόθεμα.
Max Change:
Τα κύτταρα που έχουν διαιρεθεί μία φορά ονομάζονται 2η ανακαλλιέργεια και ούτω καθεξής.
Cholesterol
PBS
Pregnenolone
ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικών αλάτων του Dulbecco.
OH Pregnenolone
Ποιοτικός έλεγχος
Progesterone
τα μέτρα που απαιτούνται για την εξασφάλιση έγκυρων δεδομένων.
OH Progesterone
Πλάκα ποιοτικού ελέγχου
Androstenedione
πλάκα 24 κοιλοτήτων που περιέχει δύο συγκεντρώσεις του θετικού και του αρνητικού μάρτυρα για την παρακολούθηση των επιδόσεων μιας νέας παρτίδας κυττάρων ή για την παροχή θετικών μαρτύρων για τον προσδιορισμό, όταν υποβάλλονται σε δοκιμή χημικές ουσίες.
Testosterone
Εκτέλεση ανεξάρτητο πείραμα που χαρακτηρίζεται από νέο σύνολο διαλυμάτων και μαρτύρων.
estradiol
Θρεπτικό μέσο παρακαταθήκης η βάση για την παρασκευή άλλων αντιδραστηρίων.
eoxycorticosterone
Αποτελείται από μείγμα του τροποποιημένου κατά Dulbecco θρεπτικού μέσου του Eagle και του μείγματος θρεπτικών ουσιών F-12 του Ham (DMEM/F12), σε αναλογία 1:1 σε ρυθμιστικό διάλυμα HEPES 15 mM, χωρίς ερυθρό της φαινόλης ούτε όξινο ανθρακικό νάτριο.
Cortisol
Το όξινο ανθρακικό νάτριο προστίθεται ως ρυθμιστικό διάλυμα· βλ. προσάρτημα ΙΙ της έκθεσης επικύρωσης (4).
Aldosterone
Εμπλουτισμένο θρεπτικό μέσο
Estrone
αποτελείται από θρεπτικό μέσο παρακαταθήκης στο οποίο προστίθενται ορός BD Nu-Serum και μείγμα ITS+ premium· βλ. προσάρτημα ΙΙ της έκθεσης επικύρωσης (4).
Deoxycortisol
Στεροειδογένεση η πορεία σύνθεσης των διαφόρων στεροειδών ορμονών από χοληστερόλη.
Corticosterone
Ορισμένα ενδιάμεσα προϊόντα της πορείας σύνθεσης στεροειδών, όπως η προγεστερόνη και η τεστοστερόνη, είναι σημαντικές ορμόνες από μόνες τους αλλά λειτουργούν και ως πρόδρομοι ορμονών που παράγονται σε μεταγενέστερο στάδιο της συνθετικής πορείας.
LOEC Max Change
Τ
0,15 fold
τεστοστερόνη, ένα από τα δύο σημαντικότερα ανδρογόνα στα συστήματα θηλαστικών.
Letrozole
Ελεγχόμενη χημική ουσία
29 fold
κάθε ουσία ή μείγμα που υποβάλλεται σε δοκιμή με τη χρήση της παρούσας μεθόδου δοκιμών.
Data Interpretation Procedure
Πλάκα δοκιμής η πλάκα στην οποία κύτταρα H295R εκτίθενται σε ελεγχόμενες χημικές ουσίες.
A test chemical is judged to be positive if the fold induction is statistically different (p ≤ 0,05) from the solvent control at two adjacent concentrations in at least two independent runs (Table 7).
Οι πλάκες δοκιμής περιέχουν τον μάρτυρα με τον διαλύτη και τις ελεγχόμενες χημικές ουσίες σε επτά επίπεδα συγκέντρωσης εις τριπλούν.
A test chemical is judged to be negative following two independent negative runs, or in three runs, comprising two negative runs and one equivocal or positive run.
Θρυψίνη 1Χ αραιωμένο διάλυμα του ενζύμου θρυψίνη, μιας σερινοπρωτεάσης του παγκρέατος, που χρησιμοποιείται για την αποκόλληση των κυττάρων από πλάκες κυτταροκαλλιέργειας· βλ. προσάρτημα ΙΙΙ της έκθεσης επικύρωσης (4).
If the data generated in three independent experiments does not meet the decision criteria listed in Table 7, the experimental results are not interpretable.
B.58.
Results at concentrations exceeding the limits of solubility or at cytotoxic concentrations should not be included in the interpretation of results.
ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟΙ ΓΟΝΙΔΙΑΚΗΣ ΜΕΤΑΛΛΑΞΗΣ ΣΩΜΑΤΙΚΩΝ ΚΑΙ ΓΕΝΝΗΤΙΚΩΝ ΚΥΤΤΑΡΩΝ ΣΕ ΔΙΑΓΟΝΙΔΙΑΚΑ ΤΡΩΚΤΙΚΑ
Test Report
Η παρούσα μέθοδος δοκιμών είναι ισοδύναμη με την κατευθυντήρια γραμμή του ΟΟΣΑ για τη διεξαγωγή δοκιμών (TG) 488 (2013).
Name of facility and location;
Υπάρχουν μέθοδοι της ΕΕ για ευρύ φάσμα προσδιορισμών μετάλλαξης in vitro με τους οποίους είναι δυνατόν να ανιχνευθούν χρωμοσωματικές και/ή γονιδιακές μεταλλάξεις.
Study director and other personnel and their study responsibilities;
Οι προσδιορισμοί μετάλλαξης σε διαγονιδιακά τρωκτικά (ΔΓΤ) καλύπτουν την ανάγκη για πρακτικές και ευρέως διαθέσιμες δοκιμές γονιδιακών μεταλλάξεων in vivo.
Dates the study began and ended;
Οι προσδιορισμοί μετάλλαξης σε ΔΓΤ έχουν αναθεωρηθεί εκτενώς (24) (33).
Test chemical, reagents and controls
Στους προσδιορισμούς αυτούς χρησιμοποιούνται διαγονιδιακοί επίμυες και ποντικούς που φέρουν πολλαπλά αντίγραφα ενσωματωμένων στο χρωμόσωμα αναπαραγόμενων φορέων που είναι πλασμίδια ή φάγοι.
Identity (name/CAS No as appropriate), source, lot/batch number, purity, supplier, and characterisation of test chemical, reagents, and controls;
Τα διαγονίδια περιέχουν γονίδια αναφοράς για την ανίχνευση διαφόρων ειδών μεταλλάξεων που επάγονται in vivo από τις ελεγχόμενες χημικές ουσίες.
Physical nature and relevant physicochemical properties of test chemical;
Οι μεταλλάξεις που εμφανίζονται σε τρωκτικά βαθμολογούνται με ανάκτηση του διαγονιδίου και ανάλυση του φαινότυπου του γονιδίου αναφοράς σε βακτηριακό ξενιστή από τον οποίο λείπει το γονίδιο αναφοράς.
Storage conditions and the method and frequency of preparation of test chemicals, reagents and controls;
Με τους προσδιορισμούς γονιδιακής μετάλλαξης σε ΔΓΤ μετρώνται οι μεταλλάξεις που επάγονται σε γενετικώς ουδέτερα γονίδια, τα οποία ανακτώνται σχεδόν από οποιονδήποτε ιστό του τρωκτικού.
Stability of test chemical;
Συνεπώς, οι προσδιορισμοί αυτοί παρακάμπτουν πολλούς από τους υφιστάμενους περιορισμούς που συνδέονται με τη μελέτη της γονιδιακής μετάλλαξης in vivo σε ενδογενή γονίδια (π.χ. περιορισμένοι ιστοί κατάλληλοι για ανάλυση, αρνητική/θετική επιλογή έναντι των μεταλλάξεων).
Cells
Το βάρος της μαρτυρίας υποδηλώνει ότι τα διαγονίδια αντιδρούν στις μεταλλαξιογόνες ουσίες κατά τρόπο παρόμοιο με τα ενδογενή γονίδια, ιδίως όσον αφορά την ανίχνευση υποκαταστάσεων ζευγών βάσεων, μεταλλάξεων αλλαγής πλαισίου ανάγνωσης και μικρών ελλείψεων και παρεμβολών (24).
Source and type of cells;
Στο πλαίσιο των διεθνών ημερίδων για τις δοκιμές γονιδιοτοξικότητας (IWGT) εγκρίθηκε η χρήση προσδιορισμών γονιδιακής μετάλλαξης σε ΔΓΤ για την ανίχνευση γονιδιακών μεταλλάξεων in vivo και διατυπώθηκαν συστάσεις σχετικά με πρωτόκολλο για την εφαρμογή τους (15) (29).
Number of cell passages (cell passage identifier) of cells used in test;
Η παρούσα μέθοδος δοκιμών βασίζεται σε αυτές τις συστάσεις.
Description of procedures for maintenance of cell cultures;
Περαιτέρω ανάλυση υπέρ της χρήσης του εν λόγω πρωτοκόλλου περιλαμβάνεται στη βιβλιογραφική παραπομπή (16).
Pre-test requirements (if applicable)
Αναμένεται ότι στο μέλλον ενδέχεται να καταστεί δυνατός ο συνδυασμός του προσδιορισμού γονιδιακής μετάλλαξης σε ΔΓΤ με μελέτη τοξικότητας με επαναλαμβανόμενη δόση (κεφάλαιο Β.7 του παρόντος παραρτήματος).
Description and results of chemical hormone-assay interference test;
Ωστόσο, απαιτούνται δεδομένα για να εξασφαλιστεί ότι η ευαισθησία των προσδιορισμών γονιδιακής μετάλλαξης σε ΔΓΤ δεν επηρεάζεται από το συντομότερο, μονοήμερο χρονικό διάστημα μεταξύ του τέλους της περιόδου χορήγησης και του χρόνου δειγματοληψίας, το οποίο χρησιμοποιείται στην τοξικολογική μελέτη με επαναλαμβανόμενη δόση, έναντι του τριήμερου που χρησιμοποιείται στους προσδιορισμούς γονιδιακής μετάλλαξης σε ΔΓΤ.
Description and results of hormone extraction efficiency measurements;
Απαιτούνται επίσης δεδομένα για να καταδειχθεί ότι η απόδοση της δοκιμής επαναλαμβανόμενης δόσης δεν επηρεάζεται δυσμενώς από τη χρήση συγκεκριμένου στελέχους διαγονιδιακών τρωκτικών αντί των παραδοσιακών στελεχών τρωκτικών.
Standard and calibration curves for all analytical assays to be conducted;