natgillin/translations-raw huggingface dataset:
σε περίπτωση κατά την οποία όλα τα ζώα των ευαίσθητων ειδών που βρίσκονται στην εκμετάλλευση εσφάγησαν ή θανατώθηκαν και απολυμάνθηκαν οι εγκαταστάσεις επί 30 ημέρες από την ημερομηνία κατά την οποία εσφάγησαν ή θανατώθηκαν τα ζώα και απολυμάνθηκαν οι εγκαταστάσεις, εκτός από την περίπτωση του βακτηριακού άνθρακα για τον οποίο η διάρκεια της απαγόρευσης είναι 15 ημέρες·
if all the animals of species susceptible to the diseases located on the holding have been slaughtered and the premises disinfected during 30 days, beginning on the day on which the animals were destroyed and the premises disinfected, except in the case of anthrax, where the period of prohibition is 15 days;
δεν έχουν έλθει, εξ όσων γνωρίζω, σε επαφή με ιπποειδή που έχουν προσβληθεί από μεταδοτική ασθένεια ή μόλυνση στη διάρκεια των 15 τελευταίων ημερών·
to the best of my knowledge, it has not been in contact with equidae suffering from an infectious or contagious disease in the 15 days prior to this declaration;
στ) κατά τον χρόνο της επιθεώρησης, ήταν σε φυσική κατάσταση κατάλληλη για την προβλεπόμενη μετακίνηση σύμφωνα με τις διατάξεις του κανονισμού (ΕΚ) αριθ. 1/2005 [5].
at the time of the inspection it was fit to be transported on the intended journey in accordance with the provisions of Regulation (EC) No 1/2005 [5].
Σφραγίδα και υπογραφή του επίσημου κτηνιάτρου [6]
Stamp and signature of the official veterinarian [6]
Η παρούσα βεβαίωση δεν απαιτείται σε περίπτωση διμερούς συμφωνίας σύμφωνα με το άρθρο 6 της οδηγίας 2009/156/ΕΚ.
This attestation is not required where there is a bilateral agreement in accordance with Article 6 of Directive 2009/156/EC.
Η βεβαίωση ισχύει για δέκα ημέρες.
Valid for 10 days.
Διαγράφεται η περιττή μνεία.
Delete whichever does not apply.
Πρέπει να γίνει μνεία του εμβολιασμού στο διαβατήριο.
The vaccination date must be entered in the passport.
Η παρούσα δήλωση δεν απαλλάσσει τους μεταφορείς από τις υποχρεώσεις τους σύμφωνα με τις ισχύουσες κοινοτικές διατάξεις, ιδίως όσον αφορά τη φυσική κατάσταση ζώων προς μεταφορά.
This statement does not exempt transporters from their obligations in accordance with Community provisions in force in particular regarding the fitness of animals to be transported.
Όνομα με κεφαλαία και ιδιότητα
Name in block capitals and capacity.
για το εμπόριο μεταξύ των κρατών μελών
For trade between Member States
Σχετικά πρωτότυπα πιστοποιητικά Αριθμός συνοδευτικών εγγράφων
No(s) of related original certificates No.(s) of accompanying documents
Τόπος καταγωγής
Place of origin/Place of harvest
Εγγεγραμμένα ιπποειδή, ιπποειδή για αναπαραγωγή και κρεατοπαραγωγή ιπποειδή που προορίζονται για σφαγή
Registered equidae, equidae for breeding and production equidae for slaughter
Υγειονομικές πληροφορίες (1)
Health information (1)
Πιστοποιείται ότι το(τα) ιπποειδές/ιπποειδή που αναφέρεται(-ονται) ανωτέρω πληροί(-ούν) τους ακόλουθους όρους:
I, the undersigned, certify that the animal/s described above meet/s the following requirements:
Εξετάσθηκε(-αν) σήμερα και δεν παρουσιάζει(-ουν) κανένα κλινικό σύμπτωμα ασθενείας·
it/they has/have been examined today and show/s no clinical sign of disease;
δεν πρόκειται για ζώο(-α) προοριζόμενο(-ο) να θανατωθεί(-ούν) στο πλαίσιο προγράμματος εξάλειψης μεταδοτικής ή μολυσματικής ασθένειας το οποίο εφαρμόζεται στο κράτος μέλος·
it/they is/are not intended for slaughter under a national programme of contagious or infectious disease eradication;
δεν προέρχεται(-ονται) από κράτος μέλος ή από περιοχή όπου ισχύουν περιοριστικά μέτρα λόγω της αφρικανικής πανώλης των ίππων·]
it/they does/do not come from the territory or part of the territory of a Member State, which is the subject of restrictions for reasons of African horse sickness;]
προέρχεται(-ονται) από το έδαφος ή τμήμα του εδάφους ενός κράτους μέλους το οποίο αποτελεί αντικείμενο περιοριστικών μέτρων λόγω της πανώλης των ίππων, έχει(-ουν) παραμείνει στον προστατευμένο από φορείς της νόσου σταθμό σαρανταήμερης απομόνωσης … και έχει(-ουν) υποβληθεί, όπως περιγράφεται στο παράρτημα IV της οδηγίας 2009/156/EΚ, σε εξέταση για την ανίχνευση αντισωμάτων κατά του ιού της αφρικανικής πανώλης των ιπποειδών η οποία πραγματοποιήθηκε συγχρόνως σε δύο διαφορετικά δείγματα αίματος που λήφθηκαν με παρεμβαλλόμενο χρονικό διάστημα μεταξύ τους από 21 έως 30 ημέρες στις … (να συμπληρωθεί η ημερομηνία) και κατά τις 10 ημέρες πριν από την αποστολή τους στις … (να συμπληρωθεί η ημερομηνία )·]
it/they come/s from the territory or part of the territory of a Member State, which is the subject of restrictions for reasons of African horse sickness, have remained for at least 40 days prior to dispatch in the vector proved quarantine station of … and has/have undergone a test for the detection of antibodies to the African horse sickness virus as described in Annex IV to Directive 2009/156/EC carried out simultaneously on blood samples taken on two occasions with an interval of between 21 and 30 days on … (insert date) and during the 10 days prior to dispatch on … (insert date);
είτε (3)
either (3)
[με αρνητικό αποτέλεσμα κάθε φορά εάν δεν έχει(-ουν) εμβολιασθεί κατά της πανώλης των ίππων·]
[with negative result in each case if it/they was/were not vaccinated against African horse sickness;]
[χωρίς αύξηση των αντισωμάτων, εάν δεν έχει(-ουν) εμβολιασθεί κατά της πανώλης των ίππων·]
[without increase in antibody count, if it/they was/were vaccinated against African horse sickness;]
δεν έχει(-ουν) εμβολιασθεί κατά της πανώλης των ίππων·]
it/they is/are not vaccinated against African horse sickness;]
έχει(-ουν) εμβολιασθεί κατά της πανώλης των ίππων στις … ( να συμπληρωθεί η ημερομηνία),
it/they was/were vaccinated against African horse sickness on … (insert date),
[τουλάχιστον δύο μήνες πριν από την πιστοποίηση·]
[at least two months prior to certification;]
[τουλάχιστον δύο μήνες πριν από την είσοδο στον σταθμό σαρανταήμερης απομόνωσης·]
[at least two months prior to entry into the quarantine station;]
δεν προέρχεται(-νται) από εκμετάλλευση/ εκμεταλλεύσεις που αποτέλεσε(-αν) αντικείμενο απαγόρευσης για υγειονομικούς λόγους και που έθεσε έναν τουλάχιστον από τους ακόλουθους όρους:
it/they does/do not come from (a) holding(s) which was/were subject to prohibition order(s) for animal health reasons which laid down at least of one the following conditions:
[στην εκμετάλλευση δεν εσφάγησαν όλα τα ζώα των ειδών που είναι ευαίσθητα στις ασθένειες οι οποίες αναφέρονται στα σημεία α) έως ζ) κατωτέρω, η δε απαγόρευση ίσχυσε τουλάχιστον:
[not all the animals on the holding of species susceptible to the diseases mentioned in points (a) to (g) hereinafter were slaughtered and the prohibition lasted at least for:
στην περίπτωση ιπποειδών για τα οποία υπάρχουν υπόνοιες ότι έχουν προσβληθεί από δουρίνη,
in the case of equidae suspected of having contracted dourine,
[επί έξι μήνες από την ημερομηνία της τελευταίας διαπιστωμένης ή ενδεχόμενης επαφής με ζώο άρρωστο ή προσβεβλημένο με Trypanosoma equiperdum·]
[six months beginning on the date of the last actual or possible contact with a sick or infected with Trypanosoma equiperdum animal;]
[εάν πρόκειται για επιβήτορα ίππο, έως τον ευνουχισμό του·]
[in the case of a stallion, until the animal is castrated;]
στην περίπτωση μάλεως, επί έξι μήνες από την ημερομηνία κατά την οποία θανατώθηκαν και καταστράφηκαν τα ιπποειδή που προσβλήθηκαν από την ασθένεια ή υποβλήθηκαν με θετικό αποτέλεσμα σε εξέταση για την ανίχνευση των παθογόνων που προκαλούν Burkholderia mallei ή των αντισωμάτων αυτών των παθογόνων·
in the case of glanders, six months beginning on the day on which the equidae suffering from the disease or subjected with positive result to a test for the detection of the causative pathogen Burkholderia mallei or antibodies to that pathogen, were killed and destroyed;
στην περίπτωση οιουδήποτε τύπου εγκεφαλομυελίτιδας των ιπποειδών, επί έξι μήνες από την ημερομηνία κατά την οποία θανατώθηκαν τα ιπποειδή που προσβλήθηκαν από την ασθένεια, εκτός από την περίπτωση μόλυνσης από τον ιό του Δυτικού Νείλου, οπότε η περίοδος των έξι μηνών αρχίζει να υπολογίζεται από την ημερομηνία κατά την οποία το προσβληθέν ιπποειδές κατέληξε, απομακρύνθηκε από την εκμετάλλευση ή ανέρρωσε πλήρως·
in the case of equine encephalomyelitis of any type, six months beginning on the day on which the equidae suffering from the disease have been slaughtered, except in case of West Nile virus infection where the period of six months begins on the day the infected equidae died, have been removed from the holding or fully recovered;
στην περίπτωση λοιμώδους αναιμίας, κατά τη διάρκεια της περιόδου που απαιτείται ώστε, με βάση την ημερομηνία κατά την οποία θανατώθηκαν τα προσβληθέντα από την ασθένεια αυτή ιπποειδή, να αντιδράσουν τα υπόλοιπα ζώα αρνητικά σε δύο εξετάσεις Coggins οι οποίες γίνονται σε διάστημα τριών μηνών η μία από την άλλη·
in the case of infectious anaemia, until the date on which, the infected animals having been slaughtered, the remaining animals have shown a negative reaction to a Coggins test carried out on blood samples collected on two occasions three months apart;
στην περίπτωση αφθώδους στοματίτιδας, επί έξι μήνες από το τελευταίο κρούσμα,
in the case of vesicular stomatitis, six months from the last case;
στην περίπτωση λύσσας, επί έναν μήνα από το τελευταίο κρούσμα,
in the case of rabies, one month from the last case;
στην περίπτωση βακτηριακού άνθρακα, επί 15 ημέρες από το τελευταίο κρούσμα·
in the case of anthrax, 15 days from the last case;]
[εφόσον εντοπισθούν κρούσματα δουρίνης, μάλεως, οιουδήποτε τύπου εγκεφαλομυελίτιδας των ιπποειδών, λοιμώδους αναιμίας των ιπποειδών, αφθώδους στοματίτιδας, βακτηριακού άνθρακα ή λύσσας, όλα τα ευρισκόμενα στην εκμετάλλευση ζώα των ευαίσθητων στην εν λόγω ασθένεια ειδών έχουν σφαγεί ή θανατωθεί και η διάρκεια της απαγόρευσης είναι 30 ημέρες (ή 15 ημέρες στην περίπτωση του βακτηριακού άνθρακα) από την ημέρα κατά την οποία θανατώθηκαν τα ζώα και ολοκληρώθηκε ικανοποιητικά η απολύμανση των εγκαταστάσεων·]
[following cases of dourine, glanders, equine encephalomyelitis of all types, equine infectious anaemia, vesicular stomatitis, anthrax or rabies all animals on the holding of species susceptible to the disease in question were slaughtered or killed and the prohibition lasted for 30 days, or 15 days in the case of anthrax, beginning on the day on which, following the destruction of the animals, the disinfection of the premises was satisfactorily completed;]
δεν έχει(-ουν) έλθει, εξ όσων γνωρίζω, σε επαφή με ιπποειδή που έχουν προσληφθεί από μεταδοτική ασθένεια ή μόλυνση στη διάρκεια των τελευταίων 15 ημερών·
to the best of my knowledge, it/they has/have not been in contact with equidae suffering from an infectious or contagious disease in the 15 days prior to this declaration;
κατά τον χρόνο της επιθεώρησης, ήταν σε φυσική κατάσταση κατάλληλη για την προβλεπόμενη μετακίνηση σύμφωνα με τις διατάξεις του κανονισμού (ΕΚ) αριθ. 1/2005 (3).
at the time of the inspection it/they was/were fit to be transported on the intended journey in accordance with the provisions of Regulation (EC) No 1/2005 (3).
Τετραγωνίδιο I.6: αντιστοιχεί στον αριθμό άδειας CITES όσον αφορά τα ιπποειδή που απαριθμούνται στη σύμβαση της Ουάσινγκτον για τα προστατευόμενα είδη και τα προϊόντα τους.
Box I.6: shall correspond to the CITES permit number in case of equidae listed in the Washington Convention on protected species and products thereof.
Τετραγωνίδιο I.16: Αριθμός κυκλοφορίας (σιδηροδρομικά βαγόνια ή εμπορευματοκιβώτια και φορτηγά), αριθμός πτήσης (αεροσκάφος) ή όνομα (πλοίο).
Box I.16: Registration number (railway wagons or container and lorries), flight number (aircraft) or name (ship).
Τετραγωνίδιο I.19: Χρησιμοποιείται ο κατάλληλος κωδικός (ΕΣ) του Εναρμονισμένου Συστήματος του Παγκόσμιου Οργανισμού Τελωνείων: 01.01.01 ή 01.01.06.19.
Box I.19: Use the appropriate Harmonised System (HS) code of the World Customs Organisation: 01.01.01 or 01.01.06.19
Τετραγωνίδιο I.31: Είδος: ίππος, όνος, ημίονος, γίννος, ζέβρα (συμπεριλαμβανομένων των διασταυρώσεών τους).
Box I.31: Species: horse, ass, mule, hinny, zebra (including their crossings).
Σύστημα αναγνώρισης: έως την 31η Δεκεμβρίου 2009, αντιστοιχεί σε αριθμό αναγνώρισης όπως ορίζεται στο άρθρο 2 της απόφασης 2000/68/EΚ της Επιτροπής, ενώ από την 1η Ιανουαρίου 2010, αντιστοιχεί στον μοναδικό ισόβιο αριθμό όπως ορίζεται στο άρθρο 2 στοιχείο δ) και στο τμήμα Ι μέρος Α παράγραφος 4 του παραρτήματος Ι του κανονισμού (ΕΚ) αριθ. 504/2008 της Επιτροπής.
Identification system: Until 31 December 2009 shall correspond to an identification number as described in Article 2 of Commission Decision 2000/68/EC, and as of 1 January 2010 to the unique life number as described in Article 2(2)(d) of and Section 1(A)(4) of Annex I to Commission Regulation (EC) No 504/2008.
Οι πληροφορίες που αναφέρονται στα σημεία II.1. έως II.6. δεν απαιτούνται σε περίπτωση διμερούς συμφωνίας που έχει συναφθεί σύμφωνα με το άρθρο 6 της οδηγίας 2009/156/ΕΚ.
The information in points II.1. to II.6. is not required where there is a bilateral agreement in accordance with Article 6 of Directive 2009/156/EC.
Το παρόν πιστοποιητικό ισχύει επί δέκα ημέρες.
This certificate is valid for 10 days.
Αριθ. σχετικής ΤΚΜ
No of the related LVU
ΑΦΡΙΚΑΝΙΚΗ ΠΑΝΩΛΗ ΤΩΝ ΙΠΠΟΕΙΔΩΝ
AFRICAN HORSE SICKNESS
ΔΙΑΓΝΩΣΗ
DIAGNOSIS
Τα αντιδραστήρια για τις ενζυμικές δοκιμές ανοσοπροσρόφησης (ELISA), που περιγράφονται κατωτέρω, μπορούν να ληφθούν από το εργαστήριο αναφοράς της Ευρωπαϊκής Κοινότητας ή από τα εργαστήρια αναφοράς για την αφρικανική πανώλη των ιπποειδών, του Διεθνούς Γραφείου Επιζωοτιών (ΟΙΕ).
Reagents for the enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA) described below may be obtained from the European Community Reference Laboratory or the OIE Reference Laboratories for African horse sickness.
ΑΝΤΑΓΩΝΙΣΤΙΚΗ ΔΟΚΙΜΗ ELISA ΓΙΑ ΤΗΝ ΑΝΙΧΝΕΥΣΗ ΑΝΤΙΣΩΜΑΤΩΝ ΚΑΤΑ ΤΟΥ ΙΟΥ ΤΗΣ ΑΦΡΙΚΑΝΙΚΗΣ ΠΑΝΩΛΗΣ ΤΩΝ ΙΠΠΟΕΙΔΩΝ (AHSV) (ΥΠΟΧΡΕΩΤΙΚΗ ΔΟΚΙΜΗ)
COMPETITIVE ELISA FOR THE DETECTION OF ANTIBODIES TO AFRICAN HORSE SICKNESS VIRUS (AHSV) (PRESCRIBED TEST)
Η ανταγωνιστική δοκιμή ELISA χρησιμοποιείται για την ανίχνευση ειδικών αντισωμάτων κατά του AHSV, σε ορούς κάθε είδους ιπποειδών.
Competitive ELISA is used to detect specific AHSV antibodies in sera from any species of equidae.
Ο ευρέος φάσματος, πολυκλωνικός ορός ανοσοποιημένου έναντι του AHSV ινδικού χοιριδίου (αποκαλούμενος στη συνέχεια «αντιορός ινδικού χοιριδίου») είναι εξειδικευμένος κατά οροομάδα και ικανός να ανιχνεύει όλους τους γνωστούς οροτύπους του ιού της αφρικανικής πανώλης των ιπποειδών.
The broad spectrum, polyclonal, immune anti-AHSV guinea-pig serum (hereinafter referred to as ‘guinea-pig antiserum’) is serogroup specific and is able to detect all known serotypes of AHS virus.
Η αρχή αυτής της μεθόδου δοκιμής συνίσταται στη διακοπή, από το δείγμα ορού δοκιμής, της αντίδρασης μεταξύ του αντιγόνου του AHSV και ενός αντιορού ινδικού χοιριδίου.
The principle of the test is the interruption of the reaction between AHSV antigen and a guinea-pig antiserum by a test serum sample.
Τα αντισώματα AHSV που περιέχονται στο δείγμα ορού δοκιμής ανταγωνίζονται εκείνα του αντιορού ινδικού χοιριδίου, με αποτέλεσμα την εξασθένηση του αναμενόμενου χρώματος (μετά την προσθήκη σημασμένων με ένζυμο αντισωμάτων αντιορού ινδικού χοιριδίου και υποστρώματος).
AHSV antibodies in the test serum sample will compete with those in the guinea-pig antiserum resulting in a reduction in the expected colour (following the addition of enzyme labelled anti-guinea-pig antibody and substrate).
Οι οροί μπορούν να υποβληθούν σε δοκιμή μετά από μία μόνον αραίωση 1 προς 5 (μέθοδος δοκιμής της κηλίδας) ή να τιτλοδοτηθούν (μέθοδος της τιτλοδότησης του ορού), ώστε να ληφθούν τελικά σημεία αραίωσης.
Sera can be tested at a single dilution of 1 in 5 (spot test method) or may be titrated (serum titration method) to give dilution end-points.
Οι τιμές αναστολής που είναι υψηλότερες από 50 % μπορούν να θεωρηθούν θετικές.
Inhibition values higher than 50 % may be regarded as positive.
Το πρωτόκολλο δοκιμής που περιγράφεται κατωτέρω χρησιμοποιείται στο Περιφερειακό Εργαστήριο Αναφοράς για την αφρικανική πανώλη των ιπποειδών, στο Pirbright του Ηνωμένου Βασιλείου.
The test protocol described hereinafter is used in the Regional Reference Laboratory for African horse sickness in Pirbright, United Kingdom.
Παρασκευή των πλακών
Preparation of plates
Επιστρώνονται οι πλάκες ELISA με αντιγόνο AHSV που έχει εξαχθεί από μολυσμένες κυτταροκαλλιέργειες με AHSV, αραιωμένο σε ρυθμιστικό διάλυμα ανθρακικών-διτανθρακικών ιόντων, pH 9,6.
Coat ELISA plates with AHSV antigen extracted from infected cell cultures and diluted in carbonate/bicarbonate buffer, pH 9,6.
Οι πλάκες επωάζονται επί μία νύκτα στους 4 °C.
Incubate the ELISA plates overnight at 4 °C.
Οι πλάκες εκπλύνονται τρεις φορές με υπερχείλιση και εκκένωση των κοιλοτήτων με τη βοήθεια φυσιολογικού ορού στον οποίο έχει προστεθεί ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικών ιόντων (PBS), pH 7,2 έως 7,4, και ακολουθεί ξήρανση με στράγγιση σε απορροφητικό χαρτί.
Wash plates three times by flooding and emptying the wells with phosphate buffered saline (PBS), pH 7, 2 to 7,4 pH, and blot dry on adsorbent paper.
Κοιλότητες μάρτυρες
Control wells
Στη στήλη 1 τιτλοδοτούνται οι θετικοί οροί μάρτυρες σε σειρά αραιώσεων στο διπλάσιο, από 1 προς 5 έως 1 προς 640, σε παρεμποδιστικό ρυθμιστικό διάλυμα [PBS που περιέχει Tween-20 σε αναλογία 0,05 % (v/v), αποκορυφωμένο γάλα σε αναλογία 5 % (Cadbury’s Marvel TM) (w/v) και ορό ενήλικου βοοειδούς σε αναλογία 1 % (v/v)] ώστε να ληφθεί τελικός όγκος 50 μl ανά κοιλότητα.
Titrate the positive control sera in a twofold dilution series, from 1 in 5 to 1 in 640, across column 1 in blocking buffer (PBS containing 0,05 % (v/v) Tween-20, 5,0 % (w/v) skimmed-milk powder (Cadbury’s MarvelTM) and 1 % (v/v) adult bovine serum) to give a final volume of 50 μl/well.
Στις κοιλότητες A και B της στήλης 2 προστίθενται 50 μl αρνητικού ορού μάρτυρα, αραιωμένου 1 προς 5 (10 μl ορού + 40 μl παρεμποδιστικού ρυθμιστικού διαλύματος).
Add 50 μl of the negative control serum at a dilution of 1 in 5 (10 μl serum + 40 μl blocking buffer) to wells A and B of column 2.
Στις κοιλότητες C και D της στήλης 2, προστίθενται 100 μl παρεμποδιστικού ρυθμιστικού διαλύματος (ΤΥΦΛΟ).
Add 100 μl/well of blocking buffer to wells C and D of column 2 (blank).
Στις κοιλότητες E, F, G και H της στήλης 2 προστίθενται 50 μl παρεμποδιστικού ρυθμιστικού διαλύματος (μάρτυρας ινδικού χοιριδίου).
Add 50 μl of blocking buffer to wells E, F, G and H of column 2 (guinea pig control).
Μέθοδος της δοκιμής κηλίδας
Spot test method
Σε διπλή σειρά κοιλοτήτων των στηλών 3 έως 12 προστίθενται 50 μl από κάθε ορό δοκιμής αραιωμένο 1 προς 5 με παρεμποδιστικό ρυθμιστικό διάλυμα (10 μl ορού + 40 μl παρεμποδιστικού ρυθμιστικού διαλύματος).
Add a 1 in 5 dilution of each test serum in blocking buffer to duplicate wells of columns 3 to 12 (10 μl sera + 40 μl blocking buffer).
Μέθοδος της τιτλοδότησης ορού
Serum titration method
Από κάθε δείγμα δοκιμής παρασκευάζεται σειρά αραιώσεων στο διπλάσιο (1 προς 5 έως 1 προς 640) με παρεμποδιστικό ρυθμιστικό διάλυμα, μέσα σε οκτώ κοιλότητες χωριστών στηλών (3 έως 12).
Prepare a twofold dilution series of each test sample (1 in 5 to 1 in 640) in blocking buffer across eight wells of single columns (3 to 12).
και στη συνέχεια
then
Σε όλες τις κοιλότητες της πλάκας ELISA, πλην εκείνων που περιέχουν το ΤΥΦΛΟ διάλυμα, προστίθενται 50 μl αντιορού ινδικού χοιριδίου που έχει προηγουμένως αραιωθεί σε παρεμποδιστικό ρυθμιστικό διάλυμα (κάθε κοιλότητα περιέχει πλέον τελικό όγκο 100 μl).
Add 50 μl of guinea pig antisera, pre-diluted in blocking buffer, to all wells except the blank wells of the ELISA plate (all wells now contain a final volume of 100 μl).
Οι πλάκες επωάζονται επί μία ώρα σε θερμοκρασία 37 °C σε περιστρεφόμενο αναδευτήρα.
Incubate for 1 hour at 37 °C on an orbital shaker.
Οι πλάκες εκπλύνονται 3 φορές και ακολουθεί ξήρανση όπως προηγουμένως.
Wash plates three times and blot dry as before.
Σε κάθε κοιλότητα προστίθενται 50 μl αντιορού κουνελιού έναντι του ορού του ινδικού χοιριδίου συζευγμένου με υπεροξειδάση (HRP), αφού προηγουμένως αραιωθεί σε παρεμποδιστικό ρυθμιστικό διάλυμα.
Add 50 μl of rabbit anti-guinea-pig horseradish peroxidase (HRP) conjugate pre-diluted in blocking buffer to each well.
Χρωμογόνο
Chromogen
Παρασκευάζεται το διάλυμα χρωμογόνου OPD (OPD = ορθο-φαινυλοδιαμίνη) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή (0,4 mg/ml σε αποστειρωμένο απεσταγμένο νερό) αμέσως πριν χρησιμοποιηθεί.
Prepare the chromogen OPD (OPD = ortho-phenyldiamine) solution according to the manufacturers’ instructions (0,4 mg/ml in sterile distilled water) just before use.
Προστίθεται υπόστρωμα (υπεροξείδιο του υδρογόνου = Η2Ο2) μέχρι να ληφθεί τελική συγκέντρωση 0,05 % (v/v) (1 μέρος προς 2000 μέρη διαλύματος 30 % H2O2).
Add substrate (hydrogen peroxide = H2O2) to give a final concentration of 0,05 % (v/v) (1 in 2000 of a 30 % solution of H2O2).
Κατόπιν προστίθενται σε κάθε κοιλότητα 50 μl του διαλύματος OPD και οι πλάκες αφήνονται στον πάγκο επί δέκα λεπτά σε θερμοκρασία περιβάλλοντος.
Add 50 μl of the OPD solution to each well and leave plates on the bench for 10 minutes at ambient temperature.
Διακόπτεται η αντίδραση με την προσθήκη, σε κάθε κοιλότητα, 50 μl θειικού οξέος (Η2SO4) 1M.
Stop the reaction by the addition of 50 μl/well of 1M sulphuric acid (H2SO4).
Ανάγνωση των αποτελεσμάτων
Reading
Φασματοφωτομετρική ανάγνωση σε μήκος κύματος 492 nm.
Read spectrophotometrically at 492 nm.
Με τη βοήθεια κάποιου λογισμικού, εκτυπώνονται οι τιμές οπτικής πυκνότητας (OD), καθώς και το επί τοις εκατό ποσοστό αναστολής (PI) για τους ορούς δοκιμής και τους ορούς μάρτυρες, με βάση τη μέση τιμή που έχει καταγραφεί για τις τέσσερις κοιλότητες που αντιστοιχούν στους μάρτυρες ινδικού χοιριδίου.
Using a software package print out the optical density (OD) values, and the percentage inhibition (PI) for test and control sera based on the mean value recorded in the four guinea pig control wells.
Τα εκφραζόμενα σε τιμές OD και PI δεδομένα χρησιμοποιούνται για να προσδιοριστεί αν τα αποτελέσματα της δοκιμής περικλείονται εντός αποδεκτών ορίων.
The data expressed as OD and PI values are used to determine whether the test has performed within acceptable limits.
Τα ανώτατα όρια ελέγχου (UCL) και τα κατώτατα όρια μάρτυρα (LCL) για τον μάρτυρα ινδικού χοιριδίου βρίσκονται μεταξύ των τιμών OD 1,4 και 0,4 αντίστοιχα.
The upper control limits (UCL) and lower control limits (LCL) for the guinea pig control are between OD values 1,4 and 0,4 respectively.
Το τελικό σημείο της τιτλοδότησης του θετικού ορού μάρτυρα, με βάση PI 50 %, θα πρέπει να είναι 1 προς 240 (εντός πεδίου τιμών 1 προς 120 έως 1 προς 480).
The end-point titre for the positive control based on 50 % PI should be 1 in 240 (within a range from 1 in 120 to 1 in 480).
Οποιαδήποτε πλάκα δεν πληροί τα κριτήρια αυτά πρέπει να απορρίπτεται.
Any plate that fails to conform to the above criteria must be rejected.
Ωστόσο, εάν ο τίτλος του θετικού ορού μάρτυρα υπερβαίνει το 1 προς 480, αλλά τα δείγματα δοκιμής είναι αρνητικά, τα τελευταία μπορούν να γίνουν δεκτά.
However, if the positive control serum titre is greater than 1 in 480 and the test samples are still negative then the negative test samples can be accepted.
Οι δύο κοιλότητες που περιέχουν αρνητικό ορό μάρτυρα και οι δύο κοιλότητες που περιέχουν το τυφλό διάλυμα θα πρέπει να δίδουν τιμές PI μεταξύ + 25 % και –25 % και μεταξύ + 95 και + 105 %, αντίστοιχα.
The duplicate negative control serum wells and the duplicate blank wells should record PI values between + 25 % and – 25 %, and between + 95 % and + 105 %, respectively.
Η λήψη τιμών εκτός αυτών των ορίων δεν ακυρώνει την πλάκα, αλλά αποτελεί ένδειξη ανάπτυξης προϋπάρχοντος χρώματος.
Failure to be within these limits does not invalidate the plate but does suggest that background colour is developing.
Το όριο διάγνωσης (διαχωριστικές τιμές) για τους ορούς δοκιμής είναι 50 % (PI 50 %).
The diagnostic threshold (cut-off value) for test sera is 50 % (PI 50 %).
Τα δείγματα που εμφανίζουν τιμές PI άνω του 50 % καταγράφονται ως θετικά.
Samples recording PI values greater than 50 % are recorded as positive.
Τα δείγματα που εμφανίζουν τιμές PI κάτω του 50 % καταγράφονται ως αρνητικά.
Samples recording PI values lower than 50 % are recorded as negative.