natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Για την ξήρανση των σιτηρών καθώς και των αλεύρων, χονδραλεύρων και σιμιγδαλιών, ο κλίβανος αποξήρανσης πρέπει να έχει θερμική απόδοση τέτοια ώστε ρυθμιζόμενος εκ των προτέρων στη θερμοκρασία των 131 oC, να δύναται να επανακτήσει τη θερμοκρασία αυτή νωρίτερα των 45 πρώτων λεπτών κατόπιν της τοποθέτησης σε αυτόν του μεγαλύτερου δυνατού αριθμού των δειγμάτων για ταυτόχρονο ξήρανση.
For the drying of cereals, flour, groats and meal, the oven must have a thermal capacity such that, when pre-set at 131 oC, it will return to that temperature in less than 45 minutes after the maximum number of test samples have been placed inside to dry simultaneously.
Ο αερισμός του κλιβάνου αποξήρανσης πρέπει να είναι τέτοιος ώστε όλα μαζί τα δείγματα μαλακού σίτου, που είναι δυνατόν να χωρέσουν, ξηραινόμενα επί δύο ώρες να δίδουν αποτελέσματα τα οποία να παρουσιάζουν διαφορά κατώτερη του 0,15 % σε σχέση με τα αποτελέσματα που επιτυγχάνονται μετά από τετράωρη ξήρανση.
Ventilation must be such that, when as many samples of common wheat as it can contain are dried for two hours, the results differ from those obtained after four hours of drying by less than 0,15 %.
Όταν η λιπαρή ύλη πρέπει να αποτελέσει αντικείμενο μεταγενέστερων ποιοτικών εξετάσεων, τα τεμάχια κίσσηρης αντικαθίστανται από γυάλινες χάντρες.
Where the oil or fat has to undergo subsequent quality tests, replace the fragments of pumice stone by glass beads.
ΜΕΘΟΔΟΙ ΑΝΑΛΥΣΗΣ ΓΙΑ ΤΟΝ ΕΛΕΓΧΟ ΤΗΣ ΠΕΡΙΕΚΤΙΚΟΤΗΤΑΣ ΤΩΝ ΖΩΟΤΡΟΦΩΝ ΣΕ ΕΓΚΕΚΡΙΜΕΝΕΣ ΠΡΟΣΘΕΤΕΣ ΥΛΕΣ
METHODS OF ANALYSIS TO CONTROL THE LEVEL OF AUTHORISED ADDITIVES IN FEED
ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟΣ ΤΗΣ ΒΙΤΑΜΙΝΗΣ Α
DETERMINATION OF VITAMIN A
Η παρούσα μέθοδος αποσκοπεί στον προσδιορισμό της βιταμίνης Α (ρετινόλη) σε ζωοτροφές και προμείγματα.
This method makes it possible to determine the level of vitamin A (retinol) in feed and premixtures.
Στον όρο βιταμίνη Α περιλαμβάνονται η ολο-trans-ρετινόλη και τα cis-ισομερή της που προσδιορίζονται με την παρούσα μέθοδο.
Vitamin A includes all-trans-retinyl alcohol and its cis-isomers which are determined by this method.
Η περιεκτικότητα σε βιταμίνη Α εκφράζεται σε διεθνείς μονάδες (IU) ανά kg.
The content of vitamin A is expressed in International Units (IU) per kg.
Μία IU αντιστοιχεί στη δράση 0,300 μg αλκοολικής ολο-trans-βιταμίνης Α ή 0,344 μg οξικής ολο-trans-βιταμίνης Α ή 0,550 μg παλμιτικής ολο-trans-βιταμίνης Α.
One IU corresponds to the activity of 0,300 μg all-trans-vitamin A alcohol or 0,344 μg all-trans-vitamin A acetate or 0,550 μg all-trans-vitamin A palmitate.
Το όριο προσδιορισμού είναι 2000 IU βιταμίνης A/kg.
The limit of quantification is 2000 IU vitamin A/kg.
Το δείγμα υδρολύεται με αιθανολικό διάλυμα υδροξειδίου του καλίου και η βιταμίνη Α εκχυλίζεται με πετρελαϊκό αιθέρα.
The sample is hydrolysed with ethanolic potassium hydroxide solution and the vitamin A is extracted into light petroleum.
Ο διαλύτης απομακρύνεται με εξάτμιση και το υπόλειμμα διαλύεται σε μεθανόλη και, εφόσον είναι αναγκαίο, αραιώνεται μέχρι την απαιτούμενη συγκέντρωση.
The solvent is removed by evaporation and the residue is dissolved in methanol and, if necessary, diluted to the required concentration.
Η συγκέντρωση της βιταμίνης Α προσδιορίζεται με υγρή χρωματογραφία ανάστροφης φάσης υψηλής απόδοσης (RP-HPLC) χρησιμοποιώντας ανιχνευτή UV ή φθορισμού.
The content of vitamin A is determined by reversed phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC) using a UV or a fluorescence detector.
Οι χρωματογραφικές παράμετροι επιλέγονται έτσι ώστε να μη γίνεται διαχωρισμός μεταξύ της αλκοολικής ολο-trans- βιταμίνης Α και των cis ισομερών της.
The chromatographic parameters are chosen so that there is no separation between the all-trans-vitamin A alcohol and its cis isomers.
Αιθανόλη, σ = 96 %
Ethanol, σ = 96 %
Πετρελαϊκός αιθέρας, περιοχή ζέσεως 40 oC-60 oC
Light petroleum, boiling range 40 oC-60 oC
Διάλυμα υδροξειδίου του καλίου, c = 50 g/100 ml
Potassium hydroxide solution, c = 50 g/100 ml
Διάλυμα ασκορβικού νατρίου, c = 10 g/100 ml (βλέπε παρατήρηση 7.7)
Sodium ascorbate solution, c = 10 g/100 ml (see 7.7 observations)
Θειούχο νάτριο, Na2S·× H2O (x = 7-9)
Sodium sulphide, Na2S · x H2O (x = 7-9)
Διάλυμα θειούχου νατρίου, c = 0,5 mol/l σε γλυκερόλη, ß = 120 g/l (για x = 9) (βλέπε παρατήρηση 7.8)
Sodium sulphide solution, c = 0,5 mol/l in glycerol, ß = 120 g/l (for x = 9) (see 7.8 observations)
Διάλυμα φαινολοφθαλεΐνης, c = 2 g/100 ml σε αιθανόλη (3.1)
Phenolphthalein solution, c = 2 g/100 ml in ethanol (3.1)
2-προπανόλη
2-Propanol
Κινητή φάση για HPLC: μείγμα μεθανόλης (3.3) και νερού, π.χ. 980 + 20 (v + v).
Mobile phase for HPLC: mixture of methanol (3.3) and water, e.g. 980 + 20 (v + v).
Η ακριβής σχέση καθορίζεται από τα χαρακτηριστικά της χρησιμοποιούμενης στήλης.
The exact ratio will be determined by the characteristics of the column employed.
Άζωτο, απαλλαγμένο οξυγόνου
Nitrogen, oxygen free
Οξική ολο-trans-βιταμίνη Α, εξαιρετικά καθαρή, πιστοποιημένης δραστικότητας, π.χ. 2,80 × 106 IU/g
All-trans-vitamin A acetate, extra pure, of certified activity, e.g. 2,80 x 106 IU/g
Αρχικό διάλυμα οξικής ολο-trans-βιταμίνης Α: Σε ογκομετρική φιάλη 100 ml ζυγίζονται με προσέγγιση 0,1 mg, 50 mg οξικής βιταμίνης Α (3.11).
Stock solution of all-trans-vitamin A acetate: Weigh to the nearest 0,1 mg, 50 mg of vitamin A acetate (3.11) into a 100 ml graduated flask.
Διαλύονται σε 2-προπανόλη (3.8) και συμπληρώνονται μέχρι τη χαραγή με τον ίδιο διαλύτη.
Dissolve in 2-propanol (3.8) and make up to the mark with the same solvent.
Η ονομαστική συγκέντρωση του εν λόγω διαλύματος είναι 1400 IU βιταμίνης Α ανά ml.
The nominal concentration of this solution is 1400 IU vitamin A per ml.
Η ακριβής συγκέντρωση πρέπει να προσδιορίζεται σύμφωνα με την παράγραφο 5.6.3.1.
The exact content has to be determined according to 5.6.3.1.
Παλμιτική ολο-trans-βιταμίνη Α, εξαιρετικά καθαρή, πιστοποιημένης δραστικότητας, π.χ. 1,80 × 106 IU/g
All-trans-vitamin A palmitate, extra pure, of certified activity, e.g. 1,80 x 106 IU/g
Αρχικό διάλυμα παλμιτικής ολο-trans-βιταμίνης Α: Σε ογκομετρική φιάλη 100 ml ζυγίζονται με προσέγγιση 0,1 mg, 80 mg παλμιτικής βιταμίνης Α (3.12).
Stock solution of all-trans-vitamin A palmitate: Weigh to the nearest 0,1 mg, 80 mg of vitamin A palmitate (3.12) into a 100 ml graduated flask.
Η ακριβής συγκέντρωση πρέπει να προσδιορίζεται σύμφωνα με την παράγραφο 5.6.3.2.
The exact content has to be determined according to 5.6.3.2.
2,6-δι-tert-βουτυλο-4-μεθυλοφαινόλη (BHT) (βλέπε παρατήρηση 7.5)
2,6-Di-tert-butyl-4-methylphenol (BHT) (see 7.5 observations)
Περιστροφικός εξατμιστήρας κενού
Vacuum rotary evaporator
Αδιαφανή γυάλινα σκεύη
Amber glassware
Κωνικές ή σφαιρικές φιάλες με επίπεδο πυθμένα των 500 ml, με εσμυρισμένη υποδοχή
Flat bottom or conical flasks, 500 ml, with ground-glass socket
Ογκομετρικές στενόλαιμες φιάλες με εσμυρισμένα πώματα των 10, 25, 100 και 500 ml
Graduated flasks with ground-glass stoppers, narrow-necked, 10, 25, 100 and 500 ml
Κωνικές διαχωριστικές χοάνες των 1000 ml, με εσμυρισμένα πώματα
Separating funnels, conical, 1000 ml, with ground-glass stoppers
Απιοειδείς φιάλες των 250 ml, με εσμυρισμένες υποδοχές
Pear shaped flasks, 250 ml, with ground-glass sockets
Συμπυκνωτής Allihn, με χιτώνιο μήκους 300 mm, με εσμυρισμένη ένωση, με προσαρμογέα για σωλήνα παροχής αερίου
Allihn condenser, jacket length 300 mm, with ground-glass joint, with adapter for gas feed pipe
Πτυχωτός ηθμός για διαχωρισμό φάσεων, διαμέτρου 185 mm (π.χ. Schleicher & Schuell 597 HY 1/2)
Pleated filter paper for phase separation, diameter 185 mm (e.g. Schleicher & Schuell 597 HY 1/2)
Εξοπλισμός HPLC με σύστημα έγχυσης
HPLC equipment with injection system
Στήλη υγρής χρωματογραφίας, 250 mm × 4 mm, C18, 5 ή 10 μm με πλήρωση 5 ή 10 μm, ή ισοδύναμη (κριτήριο απόδοσης: μία μόνον κορυφή για όλα τα ισομερή ρετινόλης υπό τις συνθήκες HPLC)
Liquid chromatographic column, 250 mm x 4 mm, C18, 5 or 10 μm packing, or equivalent (performance criterion: only a single peak for all retinol isomers under the HPLC-conditions)
Ανιχνευτής UV ή φθορισμού, με μεταβαλλόμενο μήκος κύματος
UV or fluorescence detector, with variable wavelength adjustment
Φασματοφωτόμετρο με κυψελίδες χαλαζία των 10 mm
Spectrophotometer with 10 mm quartz cells
Υδρόλουτρο με μαγνητικό αναδευτήρα
Water-bath with magnetic stirrer
Συσκευή εκχύλισης (βλέπε σχήμα 1) αποτελούμενη από:
Extraction apparatus (see figure 1) consisting of:
Γυάλινο κύλινδρο χωρητικότητας 1 l με εσμυρισμένο λαιμό και πώμα
Glass cylinder of 1 l capacity fitted with a ground glass neck and stopper
Εσμυρισμένο γυάλινο ένθεμα εφοδιασμένο με πλευρικό βραχίονα και προσαρμόσιμο σωλήνα διερχόμενο από το κέντρο.
Ground glass insert equipped with a side-arm and an adjustable tube passing through the centre.
Το κάτω άκρο του προσαρμόσιμου σωλήνα πρέπει να έχει σχήμα U ενώ στο άλλο άκρο πρέπει να υπάρχει ακροφύσιο έτσι ώστε η πάνω υγρή στιβάδα στον κύλινδρο να μπορεί να μεταφέρεται σε διαχωριστική χοάνη.
The adjustable tube shall have a U-shaped lower end and a jet at the opposite end so that the upper liquid layer in the cylinder may be transferred into a separating funnel.
Η βιταμίνη Α είναι ευαίσθητη στο υπεριώδες φως και στην οξείδωση.
Vitamin A is sensitive to (UV-) light and to oxidation.
Όλες οι εργασίες πρέπει να γίνονται απουσία φωτός (χρησιμοποιώντας αδιαφανή γυάλινα σκεύη ή σκεύη προστατευόμενα με φύλλο αλουμινίου) και οξυγόνου (πλήρωση με άζωτο).
All operations shall be carried out in the absence of light (using amber glassware, or glassware protected with aluminium foil) and oxygen (flush with nitrogen).
Κατά τη διάρκεια της εκχύλισης ο αέρας πρέπει να αντικαθίσταται από άζωτο (αποφεύγεται η υπερβολική πίεση χαλαρώνοντας από καιρού σε καιρό το πώμα).
During extraction air above the liquid shall be replaced by nitrogen (avoid excess pressure by loosening the stopper from time to time).
Το δείγμα αλέθεται έτσι ώστε να διέρχεται από κόσκινο με διάμετρο οπών 1 mm, προσέχοντας να μην παράγεται θερμότητα.
Grind the sample so that it passes a 1 mm mesh sieve, taking care to avoid generation of heat.
Η άλεση πρέπει να γίνεται αμέσως πριν από τη ζύγιση και τη σαπωνοποίηση, αλλιώς μπορεί να υπάρξουν απώλειες βιταμίνης A.
Grinding must be carried out immediately before weighing and saponification otherwise there may be losses of vitamin A.
Σαπωνοποίηση
Saponification
Ανάλογα με την περιεκτικότητα σε βιταμίνη Α, ζυγίζονται σε κωνική ή σφαιρική φιάλη με επίπεδο πυθμένα των 500 ml (4.2.1), 2 g έως 25 g του δείγματος με προσέγγιση 1 mg.
Depending on the vitamin A content weigh, to the nearest 1 mg, 2 g to 25 g of the sample into a 500 ml flat bottom or conical flask (4.2.1).
Προστίθενται διαδοχικά υπό ανακίνηση 130 ml αιθανόλης (3.1), περίπου 100 mg BHT (3.13), 2 ml διαλύματος ασκορβικού νατρίου (3.5) και 2 ml διαλύματος θειούχου νατρίου (3.6).
Add successively with swirling 130 ml ethanol (3.1), approximately 100 mg BHT (3.13), 2 ml sodium ascorbate solution (3.5) and 2 ml sodium sulphide solution (3.6).
Στη φιάλη προσαρμόζεται συμπυκνωτήρας (4.3) και η φιάλη βυθίζεται σε υδρόλουτρο με μαγνητικό αναδευτήρα (4.7).
Fit a condenser (4.3) to the flask and immerse the flask in a water-bath with magnetic stirrer (4.7).
Θερμαίνεται μέχρι βρασμού και το διάλυμα αφήνεται υπό αναρροή για 5 λεπτά.
Heat to boiling and allow to reflux for 5 minutes.
Κατόπιν προστίθενται 25 ml διαλύματος υδροξειδίου του καλίου (3.4) μέσω του συμπυκνωτήρα (4.3) και το διάλυμα αφήνεται υπό αναρροή για 25 λεπτά ακόμη, με ανάδευση υπό ελαφρύ ρεύμα αζώτου.
Then add 25 ml potassium hydroxide solution (3.4) through the condenser (4.3) and allow to reflux for a further 25 min., with stirring under a slow stream of nitrogen.
Ο συμπυκνωτήρας στη συνέχεια εκπλένεται με 20 ml νερό περίπου και το περιεχόμενο της φιάλης ψύχεται σε θερμοκρασία δωματίου.
Then rinse the condenser with approximately 20 ml water and cool the content of the flask to room temperature.
Εκχύλιση
Extraction
Το σαπωνοποιημένο διάλυμα μεταγγίζεται ποσοτικά, εκπλένοντάς το με νερό συνολικού όγκου 250 ml, σε διαχωριστική χοάνη των 1000 ml (4.2.3) ή σε συσκευή εκχύλισης (4.8).
Transfer by decantation the saponification solution quantitatively by rinsing with a total volume of 250 ml water to a 1000 ml separating funnel (4.2.3) or to the extraction apparatus (4.8).
Η φιάλη σαπωνοποίησης εκπλένεται διαδοχικά με 25 ml αιθανόλης (3.1) και 100 ml πετρελαϊκού αιθέρα (3.2) και τα εκπλύματα μεταφέρονται στη διαχωριστική χοάνη ή στη συσκευή εκχύλισης.
Rinse the saponification flask successively with 25 ml ethanol (3.1) and 100 ml light petroleum (3.2) and transfer the rinsings to the separating funnel or to the extraction apparatus.
Η αναλογία νερού-αιθανόλης στα συνενωμένα διαλύματα πρέπει να είναι περίπου 2:1.
The proportion of water and ethanol in the combined solutions must be about 2:1.
Το σύνολο ανακινείται έντονα επί 2 λεπτά και αφήνεται να ηρεμήσει για άλλα 2 λεπτά.
Shake vigorously for 2 min. and allow to settle for 2 minutes.
Εκχύλιση με διαχωριστική χοάνη (4.2.3)
Extraction using a separating funnel (4.2.3)
Μετά το διαχωρισμό των στιβάδων (βλέπε παρατήρηση στην παράγραφο 7.3), η στιβάδα του πετρελαϊκού αιθέρα μεταφέρεται σε άλλη διαχωριστική χοάνη (4.2.3).
When the layers have separated (see observation 7.3) transfer the light petroleum layer to another separating funnel (4.2.3).
Η εκχύλιση αυτή επαναλαμβάνεται δύο φορές, με 100 ml πετρελαϊκού αιθέρα (3.2) και δύο φορές με 50 ml πετρελαϊκού αιθέρα (3.2).
Repeat this extraction twice, with 100 ml light petroleum (3.2) and twice, with 50 ml light petroleum (3.2).
Τα συνενωμένα εκχυλίσματα πλένονται στη διαχωριστική χοάνη δύο φορές με ήπια περιδίνιση (για την αποφυγή σχηματισμού γαλακτωμάτων) με 100 ml νερό κάθε φορά και κατόπιν με επανειλημμένη ανακίνηση με περαιτέρω ποσότητες νερού των 100 ml μέχρις ότου το νερό να παραμένει άχρωμο σε προσθήκη διαλύματος φαινολοφθαλεΐνης (3.7) (τέσσερις φορές πλύσιμο συνήθως αρκεί).
Wash the combined extracts in the separating funnel twice by gently swirling (to avoid formation of emulsions) with 100 ml portions of water and then by repeated shaking with further 100 ml portions of water until the water remains colourless on addition of phenolphthalein solution (3.7) (washing four times is usually sufficient).
Το πλυμένο εκχύλισμα διηθείται μέσω ξηρού πτυχωτού ηθμού για διαχωρισμό φάσεων (4.4) για την απομάκρυνση τυχόν εναιωρούμενου νερού σε ογκομετρική φιάλη των 500 ml (4.2.2).
Filter the washed extract through a dry pleated filter for phase separation (4.4) to remove any suspended water into a 500 ml graduated flask (4.2.2).
Η διαχωριστική χοάνη και ο ηθμός εκπλύνονται με 50 ml πετρελαϊκού αιθέρα (3.2), το διάλυμα συμπληρώνεται μέχρι τη χαραγή με πετρελαϊκό αιθέρα (3.2) και αναμειγνύεται καλά.
Rinse the separating funnel and the filter with 50 ml light petroleum (3.2), make up to the mark with light petroleum (3.2) and mix well.
Εκχύλιση με συσκευή εκχύλισης (4.8)
Extraction using an extraction apparatus (4.8)
Μετά το διαχωρισμό των στιβάδων (βλέπε παρατήρηση 7.3), το πώμα του γυάλινου κυλίνδρου (4.8.1) αντικαθίσταται με το εσμυρισμένο ένθεμα (4.8.2) και το σχήματος U κάτω άκρο του προσαρμοζόμενου σωλήνα φέρεται σε τέτοια θέση ώστε να είναι ίσα-ίσα πάνω από το επίπεδο της διαχωριστικής επιφάνειας.
When the layers have separated (see observation 7.3) replace the stopper of the glass cylinder (4.8.1) by the ground glass insert (4.8.2) and position the U-shaped lower end of the adjustable tube so that it is just above the level of the interface.
Με εφαρμογή πίεσης από γραμμή αζώτου στον πλευρικό βραχίονα, η πάνω στιβάδα του πετρελαϊκού αιθέρα μεταφέρεται σε διαχωριστική χοάνη των 1000 ml (4.2.3).
By application of pressure from a nitrogen line to the side-arm, transfer the upper light petroleum-layer to a 1000 ml separating funnel (4.2.3).
Στον γυάλινο κύλινδρο προστίθενται 100 ml πετρελαϊκού αιθέρα (3.2), ο κύλινδρος πωματίζεται και ανακινείται καλά.
Add 100 ml light petroleum (3.2) to the glass cylinder, stopper and shake well.
Οι στιβάδες αφήνονται να διαχωριστούν και η πάνω στιβάδα μεταφέρεται όπως πριν στη διαχωριστική χοάνη.
Allow the layers to separate and transfer the upper layer to the separating funnel as before.
Η διαδικασία εκχύλισης επαναλαμβάνεται με 100 ml ακόμη πετρελαϊκού αιθέρα (3.2), στη συνέχεια δύο φορές με 50 ml κάθε φορά πετρελαϊκού αιθέρα (3.2) και οι στιβάδες του πετρελαϊκού αιθέρα προστίθενται στη διαχωριστική χοάνη.
Repeat the extraction procedure with further 100 ml of light petroleum (3.2), then twice with 50 ml portions of light petroleum (3.2) and add the light petroleum layers to the separating funnel.
Τα συνενωμένα πετρελαϊκά εκχυλίσματα πλένονται όπως περιγράφεται στην παράγραφο 5.3.1 και ακολουθείται η περιγραφόμενη εκεί διαδικασία.
Wash the combined light petroleum extracts as described in 5.3.1 and proceed as described there.
Παρασκευή του δείγματος για την HPLC
Preparation of the sample solution for HPLC
Σε απιοειδή φιάλη 250 ml (4.2.4) μεταφέρεται με πιπέτα (σιφώνιο) κατάλληλη ποσότητα του διαλύματος πετρελαϊκού αιθέρα (από την παράγραφο 5.3.1 ή 5.3.2).
Pipette an aliquot portion of the light petroleum solution (from 5.3.1 or 5.3.2) into a 250 ml pear shaped flask (4.2.4).
Ο διαλύτης εξατμίζεται σχεδόν μέχρι ξηρού σε περιστροφικό εξατμιστήρα (4.1) με ελαττωμένη πίεση και θερμοκρασία λουτρού μη υπερβαίνουσα τους 40 oC. Αποκαθίσταται η ατμοσφαιρική πίεση με εισαγωγή αζώτου (3.9) και η φιάλη απομακρύνεται από τον περιστροφικό εξατμιστήρα.
Evaporate the solvent nearly to dryness on the rotary evaporator (4.1) with reduced pressure at a bath temperature not exceeding 40 oC.
Αποκαθίσταται η ατμοσφαιρική πίεση με εισαγωγή αζώτου (3.10) και η φιάλη απομακρύνεται από τον περιστροφικό εξατμιστήρα.
Restore atmospheric pressure by admitting nitrogen (3.10) and remove the flask from the rotary evaporator.
Ο παραμένων διαλύτης απομακρύνεται με ρεύμα αζώτου (3.10) και το υπόλειμμα διαλύεται αμέσως σε γνωστό όγκο (10-100 ml) μεθανόλης (3.3) (η συγκέντρωση της βιταμίνης Α πρέπει να είναι της τάξεως των 5 IU/ml έως 30 IU/ml).
Remove the remaining solvent with a stream of nitrogen (3.10) and dissolve the residue immediately in a known volume (10-100 ml) of methanol (3.3) (the concentration of vitamin A must be in the range of 5 IU/ml to 30 IU/ml).
Η βιταμίνη Α διαχωρίζεται σε στήλη ανάστροφης φάσης C18 (4.5.1) και μετράται η συγκέντρωση με τη βοήθεια ανιχνευτή UV (325 nm) ή φθορισμού (διέγερση: 325 nm, εκπομπή: 475 nm) (4.5.2).
Vitamin A is separated on a C18 reversed phase column (4.5.1) and the concentration is measured by means of a UV detector (325 nm) or a fluorescence detector (excitation: 325 nm, emission: 475 nm) (4.5.2).
Εγχύεται κατάλληλη ποσότητα (π.χ. 20 μl) του μεθανολικού διαλύματος που λαμβάνεται στην παράγραφο 5.4 και εκλούζεται με την κινητή φάση (3.9).
Inject an aliquot portion (e.g. 20 μl) of the methanolic solution obtained in 5.4 and elute with the mobile phase (3.9).
Υπολογίζεται το μέσο ύψος κορυφής (εμβαδόν) ορισμένων εγχύσεων του ίδιου δείγματος και τα μέσα ύψη κορυφών (εμβαδά) ορισμένων εγχύσεων των διαλυμάτων βαθμονόμησης (5.6.2).
Calculate the mean peak height (area) of several injections of the same sample solution and the mean peak heights (areas) of several injections of the calibration solutions (5.6.2).
Συνθήκες HPLC
HPLC conditions
Για την HPLC πρέπει να χρησιμοποιούνται οι κατωτέρω συνθήκες. Μπορούν να χρησιμοποιηθούν όμως και άλλες συνθήκες υπό την προϋπόθεση ότι παρέχουν ισοδύναμα αποτελέσματα.
The following conditions are offered for guidance; other conditions may be used provided that they give equivalent results.
Υγρή χρωματογραφική στήλη (4.5.1):
Liquid chromatographic column (4.5.1):
250 mm × 4 mm, C18, 5 ή 10 μm πλήρωση ή ισοδύναμη
250 mm × 4 mm, C18, 5 or 10 μm packing, or equivalent
Κινητή φάση (3.9):
Mobile phase (3.9):
Μείγμα μεθανόλης (3.3) και νερού π.χ. 980 + 20 (v + v).
Mixture of methanol (3.3) and water e.g. 980 + 20 (v + v).
1-2 ml/min
1-2 ml/min.
Ανιχνευτής (4.5.2):
Detector (4.5.2):
Ανιχνευτής UV (325 nm) ή φθορισμού
UV detector (325 nm) or fluorescence detector
(διέγερση: 325 nm/εκπομπή: 475 nm)
(excitation: 325 nm/emission: 475 nm)
Παρασκευή των πρότυπων διαλυμάτων εργασίας
Preparation of the working standard solutions
Σε κωνική ή σφαιρική φιάλη με επίπεδο πυθμένα των 500 ml μεταφέρονται με σιφώνιο 20 ml του αρχικού διαλύματος οξικής βιταμίνης Α (3.11.1) ή 20 ml του αρχικού διαλύματος παλμιτικής βιταμίνης Α (3.12.1) και υδρολύονται όπως περιγράφεται στο σημείο 5.2, αλλά χωρίς προσθήκη BHT.
Pipette 20 ml of the vitamin A acetate stock solution (3.11.1) or 20 ml of the vitamin A palmitate stock solution (3.12.1) into a 500 ml flat bottom or conical flask (4.2.1) and hydrolyse as described under 5.2, but without addition of BHT.
Ακολουθεί εκχύλιση με πετρελαϊκό αιθέρα (3.2) σύμφωνα με την παράγραφο 5.3 και συμπληρώνουμε μέχρι τη χαραγή των 500 ml με πετρελαϊκό αιθέρα (3.2).
Subsequently extract with light petroleum (3.2) according to 5.3 and make up to 500 ml with light petroleum (3.2).
100 ml του εκχυλίσματος αυτού εξατμίζονται στον περιστροφικό εξατμιστήρα (βλέπε 5.4) σχεδόν μέχρι ξηρού, ο εναπομένων διαλύτης απομακρύνεται με ρεύμα αζώτου (3.10) και το υπόλειμμα αναδιαλύεται σε 10,0 ml μεθανόλης (3.3).
Evaporate 100 ml of this extract on the rotary evaporator (see 5.4) nearly to dryness, remove the remaining solvent with a stream of nitrogen (3.10) and redissolve the residue in 10,0 ml of methanol (3.3).
Η ονομαστική συγκέντρωση αυτού του διαλύματος είναι 560 IU βιταμίνης Α ανά ml.
The nominal concentration of this solution is 560 IU vitamin A per ml.
Η ακριβής συγκέντρωση πρέπει να προσδιοριστεί σύμφωνα με την παράγραφο 5.6.3.3.
The exact content has to be determined according to 5.6.3.3.
Το πρότυπο διάλυμα εργασίας πρέπει να παρασκευάζεται λίγο πριν από τη χρήση του.
The working standard solution has to be freshly prepared before use.
2,0 ml του προτύπου αυτού διαλύματος εργασίας μεταφέρονται με σιφώνιο σε ογκομετρική φιάλη των 20 ml, συμπληρώνονται μέχρι τη χαραγή με μεθανόλη (3.3) και το σύνολο αναμειγνύεται.
Pipette 2,0 ml of this working standard solution into a 20 ml graduated flask, make up to the mark with methanol (3.3) and mix.
Η ονομαστική συγκέντρωση αυτού του αραιωμένου πρότυπου διαλύματος εργασίας είναι 56 IU βιταμίνης Α ανά ml.
The nominal concentration of this diluted working standard solution is 56 IU vitamin A per ml.
Παρασκευή των διαλυμάτων βαθμονόμησης και καμπύλη βαθμονόμησης
Preparation of the calibration solutions and calibration graph
1,0, 2,0, 5,0 και 10,0 ml του αραιωμένου πρότυπου διαλύματος εργασίας μεταφέρονται σε μια σειρά ογκομετρικών φιαλών των 20 ml, συμπληρώνονται μέχρι τη χαραγή με μεθανόλη (3.3) και αναμειγνύονται.
Transfer 1,0, 2,0, 5,0 and 10,0 ml of the diluted working standard solution into a series of 20 ml graduated flasks, make up to the mark with methanol (3.3) and mix.
Οι ονομαστικές συγκεντρώσεις των διαλυμάτων αυτών είναι 2,8, 5,6, 14,0 και 28,0 IU βιταμίνης Α ανά ml.
The nominal concentrations of these solutions are 2,8, 5,6, 14,0 and 28,0 IU vitamin A per ml.
20 μl κάθε διαλύματος βαθμονόμησης εγχύονται κατ’ επανάληψη και προσδιορίζονται τα μέσα ύψη (εμβαδά) των κορυφών.
Inject 20 μl of each calibration solution several times and determine the mean peak heights (areas).
Χρησιμοποιώντας τα μέσα ύψη (εμβαδά) των κορυφών, χαράσσεται καμπύλη βαθμονόμησης λαμβάνοντας υπόψη τα αποτελέσματα του ελέγχου με UV (5.6.3.3).
Using the mean peak heights (areas) plot a calibration graph considering the results of the UV control (5.6.3.3).
Τυποποίηση σε UV των πρότυπων διαλυμάτων
UV standardisation of the standard solutions
Αρχικό διάλυμα οξικής βιταμίνης Α
Vitamin A acetate stock solution
Σε ογκομετρική φιάλη των 50 ml (4.2.2) μεταφέρονται με σιφώνιο 2,0 ml του αρχικού διαλύματος οξικής βιταμίνης Α (3.11.1) και συμπληρώνονται μέχρι τη χαραγή με 2-προπανόλη (3.8).
Pipette 2,0 ml of the vitamin A acetate stock solution (3.11.1) into a 50 ml graduated flask (4.2.2) and make up to the mark with 2-propanol (3.8).
Η ονομαστική συγκέντρωση αυτού του διαλύματος είναι 56 IU βιταμίνης Α ανά ml.
The nominal concentration of this solution is 56 IU vitamin A per ml.