natgillin/translations-raw huggingface dataset:
V. Κατά τη λειτουργία τους, πρέπει να διαθέτουν επαρκή αριθμό κτηνιάτρων για να εκτελούν τα καθήκοντα που ορίζονται στο Μέρος 5.
V. When operating, they must have sufficient veterinarians to carry out all duties set out in Part 5;
Πρέπει να δέχονται μόνο ζώα που έχουν ταυτοποιηθεί ατομικά, ώστε να παρέχονται εγγυήσεις για την ανιχνευσιμότητα της προέλευσής τους.
They must only admit animals that are individually identified so as to guarantee traceability.
Προς τούτο, ο ιδιοκτήτης ή ο υπεύθυνος του κέντρου οφείλει να εξασφαλίζει τη σωστή ταυτοποίηση των ζώων κατά την είσοδό τους στο κέντρο και ότι συνοδεύονται από τα υγειονομικά έγγραφα ή πιστοποιητικά που αντιστοιχούν στα συγκεκριμένα είδη και κατηγορίες ζώων.
To this end, when animals are admitted the owner or the person in charge of the centre must ensure that the animals are properly identified and accompanied by health documents or certificates for the species and categories involved.
Επιπλέον, ο ιδιοκτήτης ή ο αρμόδιος του κέντρου συγκέντρωσης πρέπει να καταγράφει σε μητρώο ή σε βάση δεδομένων και να διατηρεί επί τουλάχιστον τρία έτη το όνομα του ιδιοκτήτη, την καταγωγή των ζώων, τις ημερομηνίες εισόδου και εξόδου, τον αριθμό ταυτοποίησης των ζώων ή τον αριθμό καταχώρησης της αγέλης καταγωγής και την εκμετάλλευση προορισμού καθώς και τον αριθμό μητρώου του μεταφορέα και τον αριθμό κυκλοφορίας του φορτηγού που παραδίδει ή παραλαμβάνει τα ζώα από το κέντρο συγκέντρωσης.
In addition, the owner or the person in charge of the assembly centre must record on a register or in a data base, and retain for at least three years the name of the owner, the origin of the animals, the dates of entry and exit, the identification number of the animals or registration number of the herd of origin and the holding of destination, and, the registration number of the carrier and the registration number of the lorry delivering or collecting animals from that assembly centre.
Όλα τα ζώα που διέρχονται από τα κέντρα πρέπει να πληρούν τους υγειονομικούς όρους εισαγωγής της συγκεκριμένης κατηγορίας ζώων στην Ένωση.
All animals passing through the assembly centre must fulfil the health conditions established for the introduction of the relevant category of animal into the Union.
Τα ζώα που προορίζονται να εισαχθούν στην Ένωση και διέρχονται από κέντρα συγκέντρωσης πρέπει, εντός έξι ημερών από την άφιξή τους στο κέντρο, να φορτώνονται και να αποστέλλονται άμεσα στα σύνορα της χώρας εξαγωγής:
Animals to be introduced into the Union which pass through an assembly centre must, within six days of arrival at the assembly centre, be loaded and dispatched directly to the border of the exporting country:
χωρίς να έλθουν σε επαφή με δίχηλα ζώα που δεν πληρούν τους υγειονομικούς όρους για την εισαγωγή της συγκεκριμένης κατηγορίας ζώων στην Ένωση·
without coming into contact with cloven-hoofed animals other than animals which fulfil the health conditions established for the introduction of the relevant category of animal into the Union;
να χωρίζονται σε παρτίδες, έτσι ώστε καμία παρτίδα να μην περιέχει και ζώα που προορίζονται για αναπαραγωγή ή παραγωγή και ζώα που προορίζονται για άμεση σφαγή·
segregated into consignments so that no consignment contains both animals for breeding or production and animals for immediate slaughter;
να μεταφέρονται σε οχήματα ή εμπορευματοκιβώτια που έχουν καθαρισθεί και απολυμανθεί με απολυμαντική ουσία επίσημα εγκεκριμένη στη χώρα εξαγωγής για τον αποτελεσματικό έλεγχο του αφθώδους πυρετού και που είναι κατασκευασμένα κατά τρόπο ώστε τα περιττώματα, τα ούρα, τα απορρίμματα ή οι ζωοτροφές να μην είναι δυνατό να εκρέουν ή να πέφτουν κατά τη διάρκεια της μεταφοράς.
in transport vehicles or containers which have first been cleansed and disinfected with a disinfectant officially authorised in the exporting country as effective for the control of foot-and-mouth disease and which are so constructed that faeces, urine, litter or fodder cannot flow or fall out during transportation.
Όταν οι όροι εξαγωγής των ζώων προς την Ένωση απαιτούν τη διενέργεια δοκιμής εντός συγκεκριμένης περιόδου πριν από τη φόρτωση, η εν λόγω χρονική περίοδος περιλαμβάνει το διάστημα της συγκέντρωσης, έως έξι ημέρες, μετά την άφιξη των ζώων στο εγκεκριμένο κέντρο.
Where the conditions for the export of animals to the Union require that a test is carried out within a specified period before loading, that period must include any period of assembly, up to six days, from the date of arrival of the animals at the approved assembly centre.
Η χώρα εξαγωγής καθορίζει τη διαδικασία επίσημης επιθεώρησης των εγκεκριμένων κέντρων συγκέντρωσης και διασφαλίζει την υλοποίηση της εν λόγω επιθεώρησης.
The exporting third country shall determine the procedure for official supervision of approved assembly centres and shall ensure that such supervision is carried out.
Τα εγκεκριμένα κέντρα συγκέντρωσης πρέπει να επιθεωρούνται τακτικά από την αρμόδια αρχή της τρίτης χώρας, έτσι ώστε να ελέγχεται αν ικανοποιούνται οι απαιτήσεις έγκρισης που ορίζονται στα σημεία Ι έως ΧΙ.
The approved assembly centres must be regularly inspected by the competent authority of the third country in order to check that the requirements for approval set out in points I to XI continue to be fulfilled.
Εάν κατά τις επιθεωρήσεις αυτές διαπιστωθεί ότι δεν πληρούνται πλέον αυτοί οι όροι, αναστέλλεται η έγκριση της λειτουργίας του κέντρου.
If those inspections show that those conditions are no longer complied with, the approval of the centre must be suspended.
Η έγκριση πρέπει να χορηγείται εκ νέου μόνο αν η αρμόδια αρχή της τρίτης χώρας βεβαιωθεί ότι το κέντρο συμμορφώνεται πλήρως με τους όρους που ορίζονται στα σημεία Ι έως ΧΙ.
The approval may be restored only when the competent authority of the third country is satisfied that the centre fully complies with the conditions set out in points I to XI.
Πρωτόκολλα για την τυποποίηση υλικού και διαδικασίες δοκιμών
Protocols for the standardisation of materials and testing procedures
Φυματίωση (TBL)
Tuberculosis (TBL)
Η απλή ενδοδερμική δοκιμή φυματινισμού με φυματίνη M. bovis διενεργείται σύμφωνα με το παράρτημα Β της οδηγίας 64/432/ΕΟΚ.
The single intradermal tuberculin test using bovine tuberculin shall be carried out according to Annex B to Directive 64/432/EEC.
Στην περίπτωση των συιδών, ο απλός ενδοδερμικός φυματινισμός με φυματίνη M. avium διενεργείται σύμφωνα με το παράρτημα Β της οδηγίας 64/432/ΕΟΚ, με τη διαφορά ότι η ένεση πρέπει να γίνεται στο χαλαρό δέρμα στη βάση του αυτιού.
In the case of Suidae animals, the single intradermal tuberculin test using avian tuberculin shall be carried out according to Annex B to 64/432/EEC, except that the site of injection shall be the loose skin at the base of the ear.
Βρουκέλλωση (Brucella abortus) (BRL)
Brucellosis (Brucella abortus) (BRL)
Η δοκιμή ορροσυγκόλλησης, η δοκιμή σύνδεσης του συμπληρώματος, η δοκιμή βρουκελλικού αντιγόνου εντός ρυθμιστικού διαλύματος και η ενζυμική δοκιμή ανοσοπροσρόφησης (ELISA) διενεργούνται σύμφωνα με το παράρτημα Γ της οδηγίας 64/432/ΕΟΚ.
The serum agglutination test, complement fixation test, buffered brucella antigen test and enzyme linked immuno-absorbent assays tests (ELISA) shall be carried out according to Annex C to Directive 64/432/EEC.
Βρουκέλλωση (Brucella melitensis) (BRL)
Brucellosis (Brucella melitensis) (BRL)
Η δοκιμή διενεργείται σύμφωνα με το παράρτημα Γ της οδηγίας 91/68/ΕΟΚ.
Tests shall be carried out according to Annex C to Directive 91/68/EEC.
Ενζωοτική λεύκωση των βοοειδών (EBL)
Enzootic Bovine Leukosis (EBL)
Η δοκιμή ανοσοδιάχυσης σε πλάκες γελόζης και η ενζυμική δοκιμή ανοσοπροσρόφησης (ELISA) διενεργούνται σύμφωνα με τις παραγράφους Α και Γ, κεφάλαιο II του παραρτήματος Δ της οδηγίας 64/432/ΕΟΚ.
The agar gel immuno-diffusion test and the enzyme linked immuno-absorbent assay test (ELISA) shall be carried out according to paragraphs A and C of Chapter II of Annex D to Directive 64/432/EEC.
Καταρροϊκός πυρετός του προβάτου (BTG)
Bluetongue (BTG)
Η παρεμποδιστική ή ανταγωνιστική δοκιμή ELISA διενεργείται σύμφωνα με το ακόλουθο πρωτόκολλο:
The blocking or competitive ELISA test shall be carried out according to the following protocol:
Η παρεμποδιστική δοκιμή ELISA, με τη χρήση του μονοκλωνικού αντισώματος 3-17-A3, είναι ικανή να ανιχνεύσει αντισώματα όλων των γνωστών οροτύπων του ιού του καταρροϊκού πυρετού του προβάτου (BTV).
The competitive ELISA using monoclonal antibody 3-17-A3 is capable of identifying antibodies to all known serotypes of bluetongue virus (BTV).
Η αρχή της μεθόδου είναι η διακοπή της αντίδρασης μεταξύ του αντιγόνου του BTV και ενός κατά ομάδα ειδικού μονοκλωνικού αντισώματος (3-17-Α3) με την προσθήκη δοκιμαστικού ορού.
The principle of the test is the interruption of the reaction between BTV antigen and a group-specific monoclonal antibody (3-17-A3) by the addition of test serum.
Τα αντισώματα του BTV που υπάρχουν στο δοκιμαστικό ορό παρεμποδίζουν την ικανότητα αντίδρασης του μονοκλωνικού αντισώματος (Mab) και προκαλούν μια μείωση στην αναμενόμενη ανάπτυξη χρώματος μετά την προσθήκη σεσημασμένων με ένζυμο αντισωμάτων αντιορού ποντικού και χρωμογόνου/υποστρώματος.
Antibodies to BTV present in the test serum block the reactivity of the monoclonal antibody (Mab) and result in a reduction in the expected colour development after the addition of enzyme labelled anti-mouse antibody, and chromogen/ substrate.
Οι οροί μπορεί να δοκιμαστούν σε λόγο αραίωσης 1/5 (μέθοδος δοκιμής της κηλίδας - Προσάρτημα 1) ή να τιτλοδοτηθούν (μέθοδος της τιτλοδότησης του ορού - Προσάρτημα 2) ώστε να ληφθούν τελικά σημεία αραίωσης.
Sera can be tested at a single dilution of 1:5 (spot test – Appendix 1) or may be titrated (serum titration – Appendix 2) to give dilution end-point.
Υλικά και αντιδραστήρια:
Material and Reagents:
Ενδεδειγμένα τρυβλία μικροτιτλοδότησης ELISA.
Appropriate ELISA microtitre plates.
Αντιγόνο: υπό μορφή συμπυκνώματος εκχυλίσματος κυττάρων, παρασκευαζόμενο όπως περιγράφεται κατωτέρω, και διατηρημένο στους –20 °C ή στους –70 °C.
Antigen: supplied as a cell extracted concentrate, prepared as described below, and stored at either –20 °C or –70 °C.
Παρεμποδιστικό ρυθμιστικό διάλυμα: ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικών ιόντων (PBS), που περιέχει αρνητικό ορό BTV ενήλικου βοοειδούς σε αναλογία 0,3 % και Tween-20 σε αναλογία 0,1 % (ο/ο) (υπό μορφή σιροπίου του πολυοξυαιθυλενοσορβιτόνιου του μονολαυρικού οξέος) σε PBS.
Blocking buffer: phosphate buffered saline (PBS) containing 0,3 % BTV negative adult bovine serum, 0,1 % (v/v) Tween-20 (supplied as polyoxyethylene sorbiton monolaurate syrup) in PBS.
Μονοκλωνικό αντίσωμα: 3-17-A3 (υπό μορφή υπερκειμένου ιστοκαλλιέργειας υβριδώματος) κατά της ομάδας ειδικού πολυπεπτιδίου VP7, διατηρημένο στους –20 °C ή λυοφιλιμένο, αραιωμένο κατά 1/100 με παρεμποδιστικό ρυθμιστικό διάλυμα πριν από τη χρήση.
Monoclonal antibody: 3-17-A3 (supplied as hybridoma tissue-culture supernatant) directed against the group-specific polypeptide VP7, stored at -20 °C or freeze-dried and diluted 1/100 with blocking buffer before use.
Συζευκτικό: αντιγλοβουλίνη ποντικού από κόνικλο (απορροφηθείσα και εκχυλισθείσα) συνεζευγμένη με υπεροξειδάση αγριοραπανιού και διατηρούμενη στο σκοτάδι στους 4 °C.
Conjugate: rabbit anti-mouse globulin (adsorbed and eluted) conjugated to horseradish peroxidase and kept in the dark at 4 °C.
Υπόστρωμα και χρωμογόνο: Ορθοφαινυλενοδιαμίνης (χρωμογόνο OPD) σε τελική συγκέντρωση 0,4mg/ml σε αποστειρωμένο απεσταγμένο νερό.
Chromogen and substrate: Orthophenylene diamine (OPD-chromogen) at a final concentration of 0,4 mg/ml in sterile distilled water.
Ακριβώς πριν από τη χρήση, προστίθεται υπεροξείδιο του υδρογόνου (υπόστρωμα 30 % β/ο) σε αναλογία 0,05 % ο/ο (5μl H2 O2 ανά 10ml OPD).
Hydrogen peroxide (30 %w/v-substrate) 0,05 % v/v added immediately before use (5μl H2 O2 per 10 ml OPD).
(Να χειρίζεστε προσεκτικά το OPD - Να φορούνται πλαστικά γάντια - πιθανό μεταλλαξιογόνο).
(Handle OPD with care - wear rubber gloves - suspected mutagen).
Ένα γραμμομόριο θειικού οξέος: 26,6 ml οξέος προστίθενται σε 473,4 ml απεσταγμένου νερού.
1 Molar sulphuric acid: 26,6 ml of acid added to 473,4 ml of distilled water.
(Υπενθύμιση: πάντα πρέπει να προστίθεται οξύ σε νερό, ποτέ νερό σε οξύ).
(Remember Acid must be added to water, never water to acid.)
Περιστροφικά παλινδρομούμενος αναδευτήρας.
Orbital shaker.
Τρυβλίο ανάγνωσης για Elisa (η δοκιμή μπορεί να αναγνωριστεί οπτικά).
ELISA plate reader (the test may be read visually).
Σχέδιο δοκιμής
Test format
Cc: μάρτυρας συζευτικού (χωρίς ορό/χωρίς μονοκλωνικό αντίσωμα)· C++: ισχυρός θετικός έλεγχος ορού· C+: ασθενής θετικός έλεγχος ορού· C-: αρνητικός θετικός έλεγχος ορού· Cm: έλεγχος μονοκλωνικού αντισώματος (χωρίς ορό).
Cc: conjugate control (no serum/ no monoclonal antibody); C++: strong positive serum control; C+: weak positive serum control; C-: negative serum control; Cm: monoclonal antibody control (no serum).
ΠΡΟΣΑΡΤΗΜΑ 1
APPENDIX 1:
Mέθοδος δοκιμής της κηλίδας (1/5) (40 οροί/τρυβλίο)
Spot dilution (1:5) format (40 sera/plate)
Δοκιμαστικός ορός 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Test Sera
Πρωτόκολλο δοκιμής:
Test protocol:
Μάρτυρας συζευτικού (Cc) οι στήλες 1A και 1B συνιστούν τον μάρτυρα αναφοράς που αποτελείται από αντιγόνο BTV και συζευτικό.
Conjugate control (Cc) Wells 1A and 1B are a blank control consisting of BTV antigen and conjugate.
Μπορεί να χρησιμοποιηθεί για να ουδετεροποιήσει το τρυβλίο ανάγνωσης ELISA.
This may be used to blank the ELISA reader.
Έλεγχος Mab (Cm) οι στήλες 1 και 2, γραμμές Ζ και Η, είναι ο έλεγχος του μονοκλωνικού αντισώματος και περιέχουν αντιγόνο BTV, μονοκλωνικό αντίσωμα και συζευτικό.
Mab control (Cm) Columns 1 and 2, rows G and H are the monoclonal antibody control and contain BTV antigen, monoclonal antibody and conjugate.
Οι στήλες αυτές αντοπροσωπεύουν το μέγιστο χρώμα.
These wells represent maximum colour.
Ο μέσος όρος των τιμών οπτικής πυκνότητας από τον έλεγχο αυτό αποτελεί 0 % της τιμής αναστολής.
The mean of the optical density readings from this control represents the 0 % inhibition value.
Αρνητικος έλεγχος (C-) οι στήλες 2Α και 2Β είναι οι αρνητικοί έλεγχοι που περιέχουν αντιγόνο BTV, αρνητικό αντιορό BTV, Mab και συζευκτικό.
Negative control (C-) Wells 2A and 2B are the negative controls, which contain BTV antigen, BTV negative antiserum, Mab and conjugate.
Δοκιμαστικός ορός Για ορολογικές μελέτες μεγάλης κλίμακας και γρήγορο διαχωρισμό, ο ορός θα μπορούσε να εξετασθεί σε μία μόνον αραίωση 1/5 (προσάρτημα 1).
Test sera For large-scale serological surveys and rapid screening, sera may be tested at a single dilution of 1:5 (Appendix 1).
Εναλλακτικά, μπορούν να εξετασθούν 10 οροί σε λόγους αραίωσης από 1/5 έως 1/640 (προσάρτημα 2).
Alternatively, 10 sera may be tested over a dilution range from 1:5 to 1:640 (Appendix 2).
Αυτό θα δώσει κάποια ένδειξη του τίτλου του αντισώματος στο δοκιμαστικό ορό.
This will give some indication of the titre of antibody in the test sera.
Αραιώνεται αντιγόνο BTV σε προτιτλοδοτημένη συγκέντρωση σε PBS, υπερηχείται σύντομα για να διασπαρούν συσπειρωμένα σωματίδια ιού (εάν δεν υπάρχει υπερηχητής, γίνεται ζωηρός σιφωνισμός) και προστίθενται 50 μl σε όλες τις κοιλότητες του τρυβλίου ELISA.
Dilute BTV antigen to pre-titrated concentration in PBS, sonicate briefly to disperse aggregated virus (if sonicator is not available, pipette vigorously) and add 50 μl to all wells of the ELISA plate.
Οι πλευρές του τρυβλίου κτυπούνται ελαφρά για να διασκορπιστεί το αντιγόνο.
Tap sides of plate to disperse antigen.
Επώαση στους 37 °C επί 60 λεπτά πάνω σε περιστροφικό αναδευτήρα.
Incubate at 37 °C for 60 minutes on an orbital shaker.
Τα τρυβλία πλένονται τρεις φορές υπερχειλίζοντας και αδειάζοντας τις κοιλότητες με μη αποστειρωμένο PBS και αποστύπτονται σε απορροφητικό χαρτί.
Wash plates three times by flooding and emptying the wells with non-sterile PBS and blot dry on absorbent paper.
Κοιλότητες ελέγχου: Προστίθενται 100 μl παρεμποδιστικού ρυθμιστικού διαλύματος σε κοιλότητες Cc.
Control wells: Add 100 μl of blocking buffer to Cc wells.
Προστίθενται 50 μl ορού θετικού και αρνητικού ελέγχου, σε αραίωση 1/5 (10 μl ορού +40 μl παρεμποδιστικού ρυθμιστικού διαλύματος), στις αντίστοιχες κοιλότητες C-, C+ και C++.
Add 50 ul of positive and negative control sera, at a dilution of 1:5 (10 μ l sera + 40 μl blocking buffer), to respective wells C-, C+ and C++.
Προστίθενται 50 μl παρεμποδιστικού ρυθμιστικού διαλύματος σε κοιλότητες ελέγχου Mab.
Add 50μl blocking buffer to Mab control wells.
Μέθοδος δοκιμής της κηλίδας: Σε διπλή σειρά κοιλοτήτων των στηλών 3 έως 12, προστίθενται 50 μl από κάθε ορό δοκιμής αραιωμένο 1 προς 5 με παρεμποδιστικό ρυθμιστικό διάλυμα (10 μl ορού +40 μl παρεμποδιστικού ρυθμιστικού διαλύματος),
Spot titration method: Add a 1:5 dilution of each test serum in blocking buffer to duplicate wells of columns 3 to 12 (10 μl sera +40 μl blocking buffer),
Μέθοδος τιτλοδότησης του ορού: Από κάθε δείγμα δοκιμής παρασκευάζεται σειρά αραιώσεων στο διπλάσιο (1 προς 5 έως 1 προς 640) με παρεμποδιστικό ρυθμιστικό διάλυμα, μέσα σε οκτώ κοιλότητες χωριστών στηλών 3 έως 12.
Serum titration method: Prepare a two-fold dilution series of each test sample (1:5 to 1:640) in blocking buffer across eight wells of single columns 3 to 12.
Αμέσως μετά την προσθήκη του δοκιμαστικού ορού, αραιώνεται 1:100 Mab σε παρεμποδιστικό ρυθμιστικό διάλυμα και προστίθενται 50 μl σε όλες τις κοιλότητες του τρυβλίου εκτός από το μάρτυρα αναφοράς.
Immediately after the addition of the test sera, dilute Mab 1:100 in blocking buffer and add 50 μl to all wells of the plate except for the blank control.
Έκπλυση τρεις φορές με PBS και απόστυψη.
Wash three times with PBS and blot dry.
Αραίωση συμπυκνώματος αντιποντικού από κόνικλο σε 1/5000 σε ρυθμιστικό διάλυμα παρεμπόδισης και προσθήκη 50 μl σε όλες τις κοιλότητες του τρυβλίου.
Dilute rabbit anti-mouse concentrate to 1/5000 in blocking buffer and add 50 μl to all wells of the plate.
Το OPD αποψύχεται και αμέσως πριν από τη χρήση προστίθενται 5 μl 30 % υπεροξειδίου του υδρογόνου σε κάθε 10 ml OPD.
Thaw the O-Phenylenediamine dihydrochloride (OPD) and immediately before use add 5 μl of 30 % hydrogen peroxide to each 10 ml of OPD.
Προστίθενται 50 μl σε όλες τις κοιλότητες του τρυβλίου.
Add 50 μl to all wells of the plate.
Αφήνεται να αναπτυχθεί το χρώμα επί 10 περίπου λεπτά και η αντίδραση διακόπτεται με ένα γραμμομόριο θειικού οξέος (50 μl ανά κοιλότητα).
Allow colour to develop for approximately 10 minutes and stop the reaction with 1 Molar sulphuric acid (50 μl per well).
Το χρώμα πρέπει να αναπτυχθεί στις κοιλότητες ελέγχου Mab και σε αυτές τις κοιλότητες που περιέχουν ορό χωρίς κανένα αντίσωμα του BTV.
Colour should develop in the Mab control wells and in those wells containing sera with no antibody to BTV.
Εξετάζονται τα τρυβλία και μετρούνται τα αποτελέσματα είτε οπτικά είτε χρησιμοποιώντας φασματοφωτομετρικό αναγνωστήρα.
Examine and record the plates either visually or using a spectrophotometric reader.
Ανάλυση των αποτελεσμάτων:
Analysis of results:
Με τη βοήθεια λογισμικού, εκτυπώνονται οι τιμές οπτικής πυκνότητας (OD) καθώς και ποσοστό αναστολής (PI) για τους ορούς δοκιμής και τους ορούς μάρτυρες, με βάση τη μέση τιμή που έχει καταγραφεί για τις κοιλότητες που αντιστοιχούν στους μάρτυρες αντιγόνου.
Using the software package print out the optical density (OD) values, and the percentage inhibition (PI) for test and control sera based on the mean value recorded in the antigen control wells.
Τα εκφραζόμενα σε τιμές OD και PI δεδομένα χρησιμοποιούνται για να προσδιοριστεί εάν τα αποτελέσματα της δοκιμής περικλείονται εντός αποδεκτών ορίων.
The date expressed as OD and PI values are used to determine whether the test has performed within acceptable limits.
Εάν δεν υπάρχει λογισμικό, εκτυπώνονται οι τιμές OD με τη βοήθεια εκτυπωτή ELISA.
If a computer software package is not available print out the OD values using the ELISA printer.
Υπολογίζεται ο μέσος όρος των μετρήσεων OD για τις κοιλότητες ελέγχου αντιγόνου, ο οποίος ισοδυναμεί με 100 % της τιμής.
Calculate the mean OD value for the antigen control wells, which is equivalent to the 100 % value.
Καθορίζεται το 50 % της τιμής OD και υπολογίζεται διά χειρός η θετικότητα και η αρνητικότητα κάθε δείγματος.
Determine the 50 % OD value and manually calculate the positivity and negativity of each sample.
Ποσοστό τιμής παρεμπόδισης = 100 - (OD κάθε ελέγχου δοκιμής/μέσος όρος OD του Cm) × 100.
Percentage inhibition (PI) value = 100 – (OD of each test control/Mean OD of Cm) × 100.
Οι δύο κοιλότητες που περιέχουν αρνητικό ορό μάρτυρα και οι δύο κοιλότητες που περιέχουν το τυφλό διάλυμα θα πρέπει να δίδουν τιμές PI μεταξύ +25 % και –25 % και μεταξύ +95 και +105 %, αντίστοιχα.
The duplicate negative control serum wells and the duplicate blank wells must record PI values between +25 % and –25 %, and between +95 % and +105 %, respectively.
Ο ισχυρός και ο ασθενής θετικός ορός ελέγχου πρέπει να δίδουν τιμές PI μεταξύ +81 % και +100 % και μεταξύ +51 % και +80 %, αντίστοιχα.
The strong and weak positive control sera must record PI values between +81 % and +100 %, and between +51 % and +80 %, respectively.
Το όριο διάγνωσης για τους ορούς δοκιμής είναι 50 % (PI 50 % ή OD 50 %).
The diagnostic threshold for test sera is 50 % (PI 50 % or OD 50 %).
Τα δείγμα που εμφανίζουν τιμές > 50 % καταγράφονται ως αρνητικά.
Samples recording PI values >50 % are recorded negative.
Τα δείγματα που εμφανίζουν τιμές PI μεγαλύτερες ή μικρότερες από το όριο για τις διπλές κοιλότητες θεωρούνται αμφίβολα. Τα εν λόγω δείγματα μπορούν να υποβάλλονται σε νέα δοκιμή κηλίδας και δοκιμή τιτλοδότησης.
Samples that record PI values above and below the threshold for the duplicate wells are considered doubtful; such samples may be re-tested in the spot test and/or titration.
Οπτική ανάγνωση: Τα θετικά και αρνητικά δείγματα διακρίνονται εύκολα με γυμνό μάτι· τα ασθενή θετικά ή τα ισχυρά αρνητικά δείγματα ενδέχεται να διακρίνονται δυσκολότερα με γυμνό μάτι.
Visual reading: Positive and negative samples are easily discernible by eye; weakly positive or strong negative samples may be more difficult to interpret by eye.
Παρασκευή αντιγόνου για δοκιμή ELISA BTV:
Preparation of BTV ELISA antigen:
Εκπλύονται 40-60 σειρές συνενωμένων κυττάρων ΒΗΚ-21 τρεις φορές με μέσο Eagle ελεύθερο ορού και μολύνονται με ορότυπο 1 του ιού της κυανής γλώσσας με μέσο Eagle ελεύθερο ορού.
Wash 40-60 roux of confluent BHK-21 cells three times with serum-free Eagle's medium and infect with bluetongue virus serotype 1 in serum-free Eagle's medium.
Επωάζονται στους 37 °C και εξετάζονται καθημερινά για κυτοπαθολογικό σύμπτωμα (ΚΠΣ).
Incubate at 37 °C and examine daily for cytopathic effect (CPE).
Όταν το ΚΠΣ έχει φανεί στο 90 μέχρι 100 % της κυτταρικής στρώσης κάθε σειράς, ο ιός συλλέγεται με δόνηση κάθε ακινητοποιημένου κύτταρου από το γυαλί.
When CPE are complete in 90 % to 100 % of the cell sheet of each roux, harvest the virus by shaking any still-attached cells from the glass.
Φυγοκέντρηση στις 2000 - 3000 rpm προς ιζηματοποίηση των κυττάρων.
Centrifuge at 2000 to 3000 rpm to pellet the cells.
Το υπερκείμενο απορρίπτεται και τα κύτταρα επαναιωρούνται σε περίπου 30 ml PBS που περιέχει 1 % «Sarkosyl» και 2 ml φαινυλομεθυλοσουλφονυλοφθορίδιο (ρυθμιστικό διάλυμα λύσης).
Discard the supernatant and re-suspend the cells in approximately 30 ml of PBS containing 1 % ‘Sarkosyl’ and 2 ml phenylmethylsulphonyl fluoride (lysis buffer).
Αυτό μπορεί να κάνει τα κύτταρα να σχηματίζουν ένα πήγμα και περισσότερο ρυθμιστικό διάλυμα λύσης μπορεί να προστεθεί για να μειώσει το φαινόμενο αυτό.
This may cause the cells to form a gel and more lysis buffer may be added to reduce this effect.
(Σημείωση: το φαινυλομεθυλοσουλφονυλοφθορίδιο είναι επικίνδυνο - να χρησιμοποιείται με εξαιρετική προσοχή.)
(NB: phenylmethylsulphonyl fluoride is harmful - handle with extreme caution.)
Τα κύτταρα αποκόπτονται επί 60 δευτερόλεπτα χρησιμοποιώντας στέλεχος υπερηχητή με πλάτος 30 μικρών.
Disrupt the cells for 60 seconds using an ultrasonic probe at an amplitude of 30 microns.
Φυγοκέντρηση στις 10000 rpm επί 10 λεπτά.
Centrifuge at 10000 rpm for 10 minutes.
Το υπερκείμενο αποθηκεύεται στους +4 °C και το εναπομείναν κυτταρικό ίζημα επαναιωρείται σε 10 μέχρι 20 ml ρυθμιστικού διαλύματος λύσης.
Store the supernatant at +4 °C and re-suspend the remaining cell pellet in 10 to 20 ml of lysis buffer.