natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Είναι δυνατή η χρήση πιο ευαίσθητων μεθόδων ανάλυσης από τις μεθόδους που αναφέρονται στο παρόν παράρτημα για την ανίχνευση της παράνομης περιεκτικότητας των ζωοτροφών σε μη εγκεκριμένες πλέον πρόσθετες ύλες.
More sensitive methods of analysis than the methods of analysis mentioned in this Annex can be used to detect the illegal presence of no longer authorised additives in feed.
Οι μέθοδοι ανάλυσης που αναφέρονται στο παρόν παράρτημα χρησιμοποιούνται για λόγους επιβεβαίωσης.
The methods of analysis mentioned in this Annex shall be used for confirmatory purposes.
ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟΣ ΤΗΣ ΟΥΣΙΑΣ ΜΕΘΥΛ-ΜΠΕΝΖΟΚΟΥΕΙΤ
DETERMINATION OF METHYL BENZOQUATE
7-βενζυλοξη-6-βουτυλ-3-μεθοξυκαρβονυλ-4-κινολόνη
7-benzyloxy-6-butyl-3-methoxycarbonyl-4-quinolone
Η μέθοδος επιτρέπει τον προσδιορισμό της ουσίας μεθυλ-μπενζοκουέιτ στις ζωοτροφές.
This method makes it possible to determine the level of methyl benzoquate in feed.
Η ουσία μεθυλ-μπενζοκουέιτ λαμβάνεται από το δείγμα με εκχύλιση με μεθανολικό διάλυμα μεθανοσουλφονικού οξέος.
Methyl benzoquate is extracted from the sample with methanolic methanesulfonic acid solution.
Το εκχύλισμα υποβάλλεται σε καθαρισμό με διχλωρομεθάνιο διά ιοντοεναλλακτικής χρωματογραφίας και εν συνεχεία πάλι με διχλωρομεθάνιο.
The extract is purified with dichloromethane, by ion-exchange chromatography and then again with dichloromethane.
Η περιεκτικότητα σε μεθυλ-μπενζοκουέιτ προσδιορίζεται με υψηλής απόδοσης υγρή χρωματογραφία (HPLC) ανάστροφης φάσης με τη βοήθεια ανιχνευτή υπεριώδους ακτινοβολίας.
The methyl benzoquate content is determined by reversed-phase high-performance liquid chromatography (HPLC) with an UV detector.
Μείγμα μεθανόλης (3.2) και νερού (καθαρότητας ισοδύναμης με HPLC) 75 + 25 (v+v).
Mixture of methanol (3.2) and water (equivalent to HPLC grade) 75 + 25 (v + v).
Ακολουθεί διήθηση μέσω φίλτρου 0,22 μm (4.5) και απαερίωση του διαλύματος (π.χ. με υπερήχους για 10 λεπτά).
Filter through a 0,22 μm filter (4.5) and degas the solution (e.g. by ultrasonification for 10 minutes).
Διάλυμα μεθανοσουλφονικού οξέος, c = 2 %
Methanesulfonic acid solution, c = 2 %
Διαλύονται 20,0 ml μεθανοσουλφονικού οξέος σε 1000 ml μεθανόλης (3.2).
Dilute 20,0 ml methanesulfonic acid to 1000 ml with methanol (3.2).
Διάλυμα υδροχλωρικού οξέος, c = 10 %
Hydrochloric acid solution, c = 10 %
Διαλύονται 100 ml υδροχλωρικού οξέος (ρ201,18 g/ml) σε 1000 ml νερού.
Dilute 100 ml hydrochloric acid (ρ201,18 g/ml) to 1000 ml with water.
Αναμειγνύονται 100 γραμμάρια ρητίνης με 500 ml διαλύματος υδροχλωρικού οξέος (3.5) και θερμαίνονται μέχρι βρασμού πάνω σε θερμαινόμενη πλάκα υπό συνεχή ανάδευση.
Slurry 100 g resin with 500 ml hydrochloric acid solution (3.5) and heat on a hot plate to boiling, stirring continuously.
Αφήνεται το διάλυμα να κρυώσει και αποχύνεται το οξύ.
Allow to cool and decant off the acid.
Διηθούμε μέσω διηθητικού χάρτη υπό κενό.
Filter through a filter paper under vacuum.
Εκπλύνουμε τη ρητίνη δύο φορές με 500 ml νερού κάθε φορά και εν συνεχεία με 250 ml μεθανόλης (3.2).
Wash the resin twice with 500 ml portions of water and then with 250 ml of methanol (3.2).
Εκπλύνουμε τη ρητίνη μια ακόμη φορά με 250 ml μεθανόλης και ξηραίνουμε με αέρα που διέρχεται μέσω του στερεού υπολείμματος της διήθησης.
Rinse the resin with a further 250 ml portion of methanol and dry by passing air through the filter cake.
Η αποξηραμένη ρητίνη φυλάσσεται σε πωματισμένη φιάλη.
Store the dried resin in a stoppered bottle.
Πρότυπη ουσία: καθαρή μεθυλ-μπενζοκουέιτ (7-βενζυλοξη-6-βουτυλ-3-μεθοξυκαρβονυλ-4-κινολόνη)
Standard substance: pure methyl benzoquate (7-benzyloxy-6-butyl-3-methoxycarbonyl-4-quinolone)
Αρχικό πρότυπο διάλυμα της ουσίας μεθυλ-μπενζοκουέιτ, 500 μg/ml
Methyl benzoquate stock standard solution, 500 μg/ml
Ζυγίζουμε 50 mg της πρότυπης ουσίας (3.7) με ακρίβεια 0,1 mg, διαλύουμε σε διάλυμα μεθανοσουλφονικού οξέος (3.4) σε βαθμονομημένη φιάλη των 100 ml, συμπληρώνουμε μέχρι τη χαραγή και αναμειγνύουμε.
Weigh to the nearest 0,1 mg, 50 mg of standard substance (3.7), dissolve in methanesulfonic acid solution (3.4) in a 100 ml graduated flask, make up to the mark and mix.
Ενδιάμεσο πρότυπο διάλυμα της ουσίας μεθυλ-μπενζοκουέιτ, 50 μg/ml
Methyl benzoquate intermediate standard solution, 50 μg/ml
Μεταφέρουμε 5,0 ml του αρχικού πρότυπου διαλύματος μεθυλ-μπενζοκουέιτ (3.7.1) σε βαθμονομημένη φιάλη των 50 ml, συμπληρώνουμε με μεθανόλη (3.2) μέχρι τη χαραγή και αναμειγνύουμε.
Transfer 5,0 ml of methyl benzoquate stock standard solution (3.7.1) into a 50 ml graduated flask, make up to the mark with methanol (3.2) and mix.
Μεταφέρουμε 1,0 ml, 2,0 ml, 3,0 ml, 4,0 ml και 5,0 ml του ενδιάμεσου πρότυπου διαλύματος μεθυλ-μπενζοκουέιτ (3.7.2) σε βαθμολογημένες φιάλες των 25 ml.
Transfer 1,0, 2,0, 3,0, 4,0 and 5,0 ml of methyl benzoquate intermediate standard solution (3.7.2) into a series of 25 ml graduated flasks.
Συμπληρώνουμε με την κινητή φάση (3.3) μέχρι τη χαραγή και αναμειγνύουμε.
Make up to the mark with the mobile phase (3.3) and mix.
Η συγκέντρωση των διαλυμάτων αυτών σε μεθυλ-μπενζοκουέιτ είναι αντιστοίχως 2,0 μg/ml, 4,0 μg/ml, 6,0 μg/ml, 8,0 μg/ml και 10,0 μg/ml.
These solutions have concentrations of 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 and 10,0 μg/ml methyl benzoquate respectively.
Αναδευτήρας εργαστηρίου
Laboratory shaker
Υάλινη στήλη (250 mm × 15 mm), εφοδιασμένη με στρόφιγγα και με δεξαμενή χωρητικότητας 200 ml περίπου
Glass column (250 mm × 15 mm) fitted with a stopcock and reservoir of approximately 200 ml capacity
Στήλη υγρής χρωματογραφίας διαστάσεων 300 mm × 4 mm, με πληρωτικό υλικό C18 πάχους 10 μm ή ισοδύναμη
Liquid chromatographic column: 300 mm × 4 mm, C18, 10 μm packing or equivalent
Πρέπει να αναλυθεί τυφλό δείγμα ζωοτροφής για να διαπιστωθεί ότι δεν υπάρχει σε αυτό ούτε η ουσία μεθυλ-μπενζοκουέιτ ούτε άλλες παρεμποδίζουσες ουσίες.
A blank feed shall be analysed to check that neither methyl benzoquate nor interfering substances are present.
Για να εξακριβωθεί ο βαθμός ανάκτησης, πρέπει να αναλυθεί τυφλό δείγμα ζωοτροφής το οποίο θα έχει εμπλουτιστεί με προσθήκη ποσότητας μεθυλ-μπενζοκουέιτ παραπλήσιας εκείνης του δείγματος.
A recovery test shall be carried out by analysing the blank feed which has been fortified by addition of a quantity of methyl benzoquate, similar to that present in the sample.
Για εμπλουτισμό μέχρι 15 mg/kg, προσθέτουμε 600 μl του αρχικού πρότυπου διαλύματος (3.7.1) σε 20 g του τυφλού δείγματος ζωοτροφής, αναμειγνύουμε και περιμένουμε επί 10 λεπτά πριν προχωρήσουμε στο στάδιο της εκχύλισης (5.2).
To fortify at a level of 15 mg/kg, add 600 μl of the stock standard solution (3.7.1) to 20 g of the blank feed, mix and wait for 10 minutes before proceeding with the extraction step (5.2).
Σημείωση: Για τους σκοπούς της μεθόδου, το τυφλό δείγμα ζωοτροφής πρέπει να είναι παρόμοιου τύπου προς εκείνον του δείγματος και κατά την ανάλυση δεν πρέπει να ανιχνεύεται μεθυλ-μπενζοκουέιτ.
Note for the purpose of this method, the blank feed shall be similar in type to that of the sample and on analysis methyl benzoquate must not be detected.
Ζυγίζονται περί τα 20 g του παρασκευασθέντος δείγματος με ακρίβεια 0,01 g και εισάγονται σε κωνική φιάλη των 250 ml.
Weigh to the nearest 0,01 g, approximately 20 g of the prepared sample and transfer to a 250 ml conical flask.
Διαχωρισμός υγρού-υγρού
Liquid-liquid partition
Εντός διαχωριστικής χοάνης των 500 ml όπου περιέχονται 100 ml διαλύματος υδροχλωρικού οξέος (3.5), εισάγονται 25,0 ml του διηθήματος που ελήφθη κατά το στάδιο (5.2).
Transfer into a 500 ml separating funnel containing 100 ml of hydrochloric acid solution (3.5), 25,0 ml of the filtrate obtained in (5.2).
Προστίθενται στη χοάνη 100 ml διχλωρομεθανίου (3.1) και ακολουθεί ανατάραξη επί 1 λεπτό.
Add 100 ml dichloromethane (3.1) to the funnel and shake for one minute.
Αφήνεται να επέλθει διαχωρισμός των στοιβάδων και αποχύνεται η υποκείμενη στοιβάδα (διχλωρομεθάνιο) εντός σφαιρικής φιάλης με σφαιρικό πυθμένα και όγκου 500 ml.
Allow the layers to separate and run off the lower (dichloromethane) layer into a 500 ml round-bottomed flask.
Επαναλαμβάνεται η εκχύλιση της υδατικής φάσης με δύο ακόμη ποσότητες διχλωρομεθανίου των 40 ml και τα εκχυλίσματα εισάγονται στη σφαιρική φιάλη μαζί με το πρώτο εκχύλισμα.
Repeat the extraction of the aqueous phase with two further 40-ml portions of dichloromethane and combine these with the first extract in the round-bottomed flask.
Αφήνεται να εξατμιστεί το εκχύλισμα του διχλωρομεθανίου μέχρι πλήρους ξηράνσης στον περιστροφικό εξατμιστήρα (4.2) σε θερμοκρασία 40 oC και υπό ελαττωμένη πίεση.
Evaporate the dichloromethane extract down to dryness on the rotary evaporator (4.2) operating under reduced pressure at 40 oC.
Το υπόλειμμα διαλύεται σε 20-25 ml μεθανόλης (3.2), πωματίζεται η φιάλη και φυλάσσεται το σύνολο του εκχυλίσματος για το στάδιο της ιοντοεναλλακτικής χρωματογραφίας (5.4).
Dissolve the residue in 20 to 25 ml methanol (3.2), stopper the flask and retain the whole of the extract for ion-exchange chromatography (5.4).
Ιοντοεναλλακτική χρωματογραφία
Ion-exchange chromatography
Προετοιμασία της στήλης ανταλλαγής κατιόντων
Preparation of the cation-exchange column
Τοποθετείται βύσμα από υαλοβάμβακα στο κάτω μέρος μιας υάλινης στήλης (4.3).
Insert a plug of glass wool into the lower end of a glass column (4.3).
Παρασκευάζεται μείγμα 5,0 g της προεπεξεργασμένης ρητίνης ανταλλαγής κατιόντων (3.6) με 50 ml υδροχλωρικού οξέος (3.5), εισάγεται στη γυάλινη στήλη και αφήνεται να ηρεμήσει.
Prepare a slurry of 5,0 g of the treated cation-exchange resin (3.6) with 50 ml of hydrochloric acid (3.5), pour into the glass column and allow to settle.
Απορρίπτεται το πλεονάζον οξύ μέχρις ότου η στάθμη του φθάσει ακριβώς πάνω από την επιφάνεια της ρητίνης και η στήλη εκπλύνεται με νερό μέχρι την ουδετέρη αντίδραση του εκρέοντος υγρού με το χάρτη του ηλιοτροπίου.
Run out the excess acid to just above the resin surface and wash the column with water until the effluent is neutral to litmus.
Εισάγονται πάνω στη στήλη 50 ml μεθανόλης (3.2) και αφήνονται να φθάσουν μέχρι την επιφάνεια της ρητίνης.
Transfer 50 ml methanol (3.2) onto the column and allow to drain down to the resin surface.
Με ένα σιφώνιο εισάγεται προσεκτικά πάνω στη στήλη το εκχύλισμα που ελήφθη κατά το στάδιο (5.3).
By means of a pipette, carefully transfer the extract obtained in (5.3) onto the column.
Εκπλύνεται η σφαιρική φιάλη με δύο ποσότητες μεθανόλης (3.2) των 5-10 ml και τα υπολείμματα της έκπλυσης μεταφέρονται στη στήλη.
Rinse the round-bottomed flask with two portions of 5 to 10 ml methanol (3.2) and transfer these washings to the column.
Εκλούεται η μεθυλ-μπενζοκουέιτ από τη στήλη με 150 ml διαλύματος μεθανοσουλφονικού οξέος (3.4) και το υγρό της έκλουσης συλλέγεται από τη στήλη μέσα σε κωνική φιάλη των 250 ml.
Elute the methyl benzoquate from the column using 150 ml of methanesulfonic acid solution (3.4) and collect the column eluate in a 250 ml conical flask.
Προστίθενται 300 ml διαλύματος υδροχλωρικού οξέος (3.5) και 130 ml διχλωρομεθανίου (3.1).
Add 300 ml of hydrochloric acid solution (3.5) and 130 ml of dichloromethane (3.1).
Ακολουθεί ανατάραξη επί 1 λεπτό και αφήνεται να επέλθει διαχωρισμός των φάσεων.
Shake for 1 minute and allow the phases to separate.
Αποχύνεται η κατώτερη στοιβάδα (διχλωρομεθάνιο) εντός σφαιρικής φιάλης με σφαιρικό πυθμένα και όγκου 500 ml.
Run off the lower (dichloromethane) layer into a 500 ml round bottomed flask.
Επαναλαμβάνεται η εκχύλιση της υδατικής φάσης με δύο επιπλέον ποσότητες διχλωρομεθανίου των 70 ml και τα εκχυλίσματα εισάγονται μαζί με το πρώτο στη σφαιρική φιάλη.
Repeat the extraction of the aqueous phase with two further 70 ml portions of dichloromethane and combine these extracts with the first in the round-bottomed flask.
Διαλύεται το υπόλειμμα της φιάλης με περίπου 5 ml μεθανόλης (3.2) και το διάλυμα μεταφέρεται προσεκτικά σε βαθμονομημένη φιάλη των 10 ml.
Dissolve the residue in the flask with approximately 5 ml of methanol (3.2) and transfer this solution quantitatively to a 10 ml graduated flask.
Εκπλύνεται η σφαιρική φιάλη με δύο ακόμη ποσότητες μεθανόλης 1-2 ml και τα υπολείμματα της έκπλυσης μεταφέρονται στη βαθμονομημένη φιάλη.
Rinse the round-bottomed flask with a further two portions of 1 to 2 ml of methanol and transfer these to the graduated flask.
Προστίθεται μεθανόλη μέχρι τη χαραγή και ακολουθεί ανάμειξη.
Make up to the mark with methanol and mix.
Μέρος του εν λόγω υγρού διηθείται μέσω διηθητικής μεμβράνης (4.6).
An aliquot portion is filtered through a membrane filter (4.6).
Το εν λόγω διάλυμα φυλάσσεται για τον προσδιορισμό με χρωματογραφία HPLC (5.6).
Reserve this solution for HPLC-determination (5.6).
Οι ακόλουθες πειραματικές συνθήκες είναι απλώς ενδεικτικές- ισοδύναμα αποτελέσματα μπορούν να προκύψουν και υπό άλλες συνθήκες:
The following conditions are offered for guidance, other conditions may be used provided that they give equivalent results:
Στήλη υγρής χρωματογραφίας (4.4.1),
liquid chromatographic column (4.4.1),
Κινητή φάση HPLC: Μείγμα μεθανόλης-νερού (3.3),
HPLC mobile phase: methanol-water mixture (3.3),
Ρυθμός ροής: 1-1,5 ml/min,
flow rate: 1 to 1,5 ml/minute,
Μήκος κύματος ανίχνευσης: 265 nm,
detection wavelength: 265 nm,
Ελέγχεται η σταθερότητα της χρωματογραφικής διάταξης με επανειλημμένη εισαγωγή του διαλύματος αναφοράς (3.7.3) συγκέντρωσης 4,0 μg/ml έως ότου επιτευχθούν σταθερά ύψη κορυφών ή εμβαδά και σταθεροί χρόνοι κατακράτησης.
Check the stability of the chromatographic system, injecting the calibration solution (3.7.3) containing 4 μg/ml several times, until constant peak heights or areas and retention times are achieved.
Εισάγονται κατ’ επανάληψη καθένα από τα διαλύματα αναφοράς (3.7.3) και μετρούνται τα ύψη των κορυφών (εμβαδά) για κάθε συγκέντρωση.
Inject each calibration solution (3.7.3) several times and measure the peak heights (areas) for each concentration.
Εισάγεται κατ’ επανάληψη στη στήλη το εκχύλισμα του δείγματος (5.5) σε όγκο ίσο με εκείνον που χρησιμοποιήθηκε για τα διαλύματα αναφοράς και προσδιορίζεται το μέσο ύψος κορυφής (εμβαδόν) των κορυφών που αντιστοιχούν στην ουσία μεθυλ-μπενζοκουέιτ.
Inject the sample extract (5.5) several times, using the same volume as taken for the calibration solutions and determine the mean peak height (area) of the methyl benzoquate peaks.
Προσδιορίζεται η συγκέντρωση του διαλύματος του δείγματος σε μg/ml με βάση το μέσο ύψος (εμβαδόν) των κορυφών της μεθυλ-μπενζοκουέιτ του διαλύματος του δείγματος με τη βοήθεια της καμπύλης αναφοράς (5.6.2).
Determine the concentration of the sample solution in μg/ml from the mean height (area) of the methyl benzoquate peaks of the sample solution by reference to the calibration graph (5.6.2).
Η περιεκτικότητα του δείγματος σε μεθυλ-μπενζοκουέιτ w (mg/kg) υπολογίζεται με βάση τον ακόλουθο τύπο:
The content of methyl benzoquate w (mg/kg) of the sample is given by the following formula:
c η συγκέντρωση της μεθυλ-μπενζοκουέιτ στο διάλυμα του δείγματος, σε μg/ml και
c methyl benzoquate concentration of the sample solution in μg/ml,
Η ταυτότητα της ανιχνευόμενης ουσίας μπορεί να επιβεβαιωθεί με συγχρωματογραφία ή με τη χρήση συστοιχίας διόδων ως ανιχνευτή με τον οποίο γίνεται σύγκριση των φασμάτων του εκχυλίσματος του δείγματος και του διαλύματος αναφοράς (3.7.3) συγκέντρωσης 10 μg/ml.
The identity of the analyte can be confirmed by co-chromatography, or by using a diode-array detector by which the spectra of the sample extract and the calibration solution (3.7.3) containing 10 μg/ml are compared.
Εκχύλισμα του δείγματος εμπλουτίζεται με την προσθήκη κατάλληλης ποσότητας του ενδιάμεσου πρότυπου διαλύματος (3.7.2).
A sample extract is fortified by addition of an appropriate amount of the intermediate standard solution (3.7.2).
Η ποσότητα της προστιθέμενης μεθυλ-μπενζοκουέιτ πρέπει να είναι παραπλήσια προς την κατ’ εκτίμηση υπολογιζόμενη ποσότητα μεθυλ-μπενζοκουέιτ στο εκχύλισμα του δείγματος.
The amount of added methyl benzoquate must be similar to the estimated amount of methyl benzoquate in the sample extract.
Αν συνεκτιμηθούν τόσο η ποσότητα που προστέθηκε όσο και η αραίωση του εκχυλίσματος, πρέπει να σημειωθεί ενίσχυση μόνον της κορυφής που αντιστοιχεί στην ουσία μεθυλ-μπενζοκουέιτ.
Only the height of the methyl-benzoquate peak shall be enhanced after taking into account both the amount added and the dilution of the extract.
Τα μήκη κύματος στα οποία παρατηρείται η μέγιστη απορρόφηση στο φάσμα του δείγματος και στο φάσμα του προτύπου και τα οποία αντιστοιχούν στο μέγιστο ύψος των κορυφών στο χρωματογράφημα, πρέπει να είναι τα ίδια, με μια διαφορά της οποίας τα όρια καθορίζονται από τη διαχωριστική ικανότητα της ανιχνευτικής διάταξης.
the wavelength of maximum absorption of the sample and of the standard spectra recorded at the peak apex on the chromatogram must be the same within a margin determined by the resolving power of the detection system.
Μεταξύ 220 και 350 nm, τα φάσματα του δείγματος και του προτύπου, καταγραφόμενα στο μέγιστο ύψος των κορυφών στο χρωματογράφημα, δεν πρέπει να διαφέρουν για τα τμήματα εκείνα του φάσματος που περικλείονται μεταξύ 10 % και 100 % της σχετικής απορρόφησης.
between 220 and 350 nm, the sample and standard spectra recorded at the peak apex on the chromatogram must not be different for those parts of the spectrum within the range 10 % to 100 % of relative absorbance.
Μεταξύ 220 και 350 nm νανομέτρων, τα φάσματα στο ανερχόμενο τμήμα, στο μέγιστο ύψος και στο κατερχόμενο τμήμα της κορυφής του εκχυλίσματος του δείγματος δεν πρέπει να διαφέρουν το ένα από το άλλο για τα τμήματα εκείνα του φάσματος που περικλείονται μεταξύ 10 % και 100 % της σχετικής απορρόφησης.
between 220 and 350 nm, the spectra of the upslope, apex and downslope of the peak produced by the sample extract must not be different from each other for those parts of the spectrum within the range 10 % to 100 % of relative absorbance.
Το κριτήριο αυτό πληρούται όταν παρατηρούνται οι ίδιες μέγιστες τιμές και σε κανένα σημείο η απόκλιση μεταξύ των φασμάτων δεν υπερβαίνει το 15 % της απορρόφησης του φάσματος στο μέγιστο ύψος .
This criterion is met when the same maxima are present and when at no observed points the deviation between the spectra does not exceed 15 % of the absorbance of the spectrum of the apex.
Η διαφορά μεταξύ των αποτελεσμάτων δύο παράλληλα διενεργούμενων ποσοτικών προσδιορισμών επί του ίδιου δείγματος δεν πρέπει να υπερβαίνει το 10 % του αποτελέσματος με την υψηλότερη τιμή για περιεκτικότητα της μεθυλ-μπενζοκουέιτ μεταξύ 4 και 20 mg/kg.
The difference between the results of two parallel determinations carried out on the same sample must not exceed: 10 % relative to the higher result for methyl benzoquate contents between 4 and 20 mg/kg.
Σε ένα εμπλουτισμένο τυφλό δείγμα, η ανάκτηση πρέπει να είναι τουλάχιστον 90 %.
For a fortified blank sample the recovery shall be at least 90 %.
Άλευρο 1
Meal 1
Σύμπηκτο 1
Pellet 1
Άλευρο 2
Meal 2
Σύμπηκτο 2
Pellet2
ΔΑ δεν ανιχνεύθηκε
ND Not detected
ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟΣ ΟΛΑΚΙΝΔΟΞΗΣ
DETERMINATION OF OLAQUINDOX
2-[N-2'-(υδροξυαιθυλο)καρβαμοϋλο]- 3-μεθυλοκινοξαλίνης -N1,N4- διοξείδιο
2-[N-2'-(hydroxyethyl)carbamoyl]-3-methylquinoxaline-N1,N4-dioxide
Η παρούσα μέθοδος επιτρέπει τον ποσοτικό προσδιορισμό της ολακινδόξης (olaquindox) στις ζωοτροφές.
This method makes it possible to determine the level olaquindox in feed.
Το δείγμα εκχυλίζεται με μείγμα νερού-μεθανόλης.
The sample is extracted by a water-methanol mixture.
Η περιεκτικότητα σε ολακινδόξη προσδιορίζεται με τη μέθοδο της υγρής χρωματογραφίας υψηλής απόδοσης (HPLC) ανάστροφης φάσης χρησιμοποιώντας ανιχνευτή UV.
The content of olaquindox is determined by reversed-phase high-performance liquid chromatography (HPLC) using an UV detector.
Κινητή φάση για HPLC
Mobile phase for HPLC.
Μείγμα νερού (3.3)-μεθανόλης (3.2), 900 + 100 (V + V)
Water (3.3)-methanol (3.2) mixture, 900 +100 (V + V).
Πρότυπη ουσία: καθαρή ολακινδόξη [2-/(N-2'-(υδροξυαίθυλο)καρβαμοϋλο] - 3-μεθυλοκινοξαλίνης-N1,N4- διοξίδιο, E 851
Standard substance: pure olaquindox 2-[N-2'-(hydroxyethyl)carbamoyl]-3-methylquinoxaline-N1,N4-dioxide, E 851.
Αρχικό πρότυπο διάλυμα 250 μg/ml
Olaquindox stock standard solution, 250 μg/ml
Σε ογκομετρική φιάλη των 200 ml ζυγίζονται με ακρίβεια 0,1mg, 50 mg ολακινδόξης (3.5) και προστίθενται 190 ml περίπου νερό.
Weigh to the nearest 0,1 mg 50 mg of olaquindox (3.5) in a 200 ml graduated flask and add ca. 190 ml water.
Κατόπιν, η φιάλη τοποθετείται για 20 λεπτά σε λουτρό υπερήχων (4.1).
Then place the flask for 20 min. into an ultrasonic bath (4.1).
Στη συνέχεια, το διάλυμα φέρεται σε θερμοκρασία δωματίου, συμπληρώνεται μέχρι τη χαραγή με νερό και ανακινείται.
After ultrasonic treatment bring the solution to room temperature, make up to the mark with water and mix.
Η φιάλη τυλίγεται με ένα φύλλο αλουμινίου και φυλάσσεται σε ψυγείο.
Wrap the flask with aluminium foil and store in a refrigerator.
Να παρασκευάζεται φρέσκο κάθε μήνα.
This solution must be prepared fresh each month.
Ενδιάμεσο πρότυπο διάλυμα ολακινδόξης, 25 μg/ml
Olaquindox intermediate standard solution, 25 μg/ml
Σε ογκομετρική φιάλη των 100ml μεταφέρονται 10,0 ml του αρχικού πρότυπου διαλύματος (3.5.1), το διάλυμα συμπληρώνεται μέχρι τη χαραγή με την κινητή φάση (3.4) και ανακινείται για να αναμειχθεί καλά.
Transfer 10,0 ml of the stock standard solution (3.5.1) into a 100 ml graduated flask, make up to the mark with the mobile phase (3.4) and mix.
Να παρασκευάζεται φρέσκο κάθε μέρα.
This solution must be prepared fresh each day.
Σε μία σειρά από ογκομετρικές φιάλες των 50 ml, μεταγγίζονται 1,0, 2,0, 5,0, 10,0, 15,0 και 20,0 ml του ενδιάμεσου πρότυπου διαλύματος (3.5.2).
Into a series of 50 ml graduated flasks transfer 1,0, 2,0, 5,0, 10,0, 15,0 and 20,0 ml of the intermediate standard solution (3.5.2).
Οι φιάλες περιτυλίσσονται με φύλλο αλουμινίου.
Wrap the flasks with aluminium foil.
Τα διαλύματα αυτά αντιστοιχούν σε 0,5, 1,0, 2,5, 5,0, 7,5 και 10,0 μg ολακινδόξης ανά ml.
These solutions correspond to 0,5, 1,0, 2,5, 5,0, 7,5 and 10,0 μg of olaquindox per ml respectively.
Κάθε μέρα πρέπει να παρασκευάζονται φρέσκα διαλύματα.
These solutions must be prepared fresh each day.
Εξοπλισμός για HPLC με ανιχνευτή υπεριώδους μεταβλητού μήκους κύματος ή με ανιχνευτή διόδων
HPLC equipment with variable wavelength ultraviolet detector or diode array detector
Στήλη υγρής χρωματογραφίας, 250 mm × 4 mm, πληρωτικό υλικό C18, 10 μm ή ισοδύναμη με αυτήν στήλη
Liquid chromatographic column, 250 mm × 4 mm, C18, 10 μm packing, or equivalent
Καταρχάς, πρέπει να υποβάλλεται σε ανάλυση ένα τυφλό δείγμα για να επιβεβαιώνεται ότι αυτό είναι απαλλαγμένο από ολακινδόξη ή άλλες παρεμβαίνουσες προσμίξεις.
A blank feed shall be analysed to check that neither olaquindox nor interfering substances are present.
Πρέπει να εκτελείται δοκιμή ανάκτησης υποβάλλοντας σε ανάλυση το τυφλό το οποίο εμπλουτίστηκε με ολακινδόξη, παρόμοια με εκείνη του δείγματος.
A recovery test shall be carried out by analysing the blank feed which has been fortified by addition of a quantity of olaquindox, similar to that present in the sample.
Για να επιτευχθεί εμπλουτισμός της τάξης των 50 mg/kg, σε κωνική φιάλη των 250 ml μεταφέρονται 10,0 ml του αρχικού προτύπου διαλύματος (3.5.1) και το διάλυμα εξατμίζεται μέχρις όγκου περίπου 0,5 ml.
To fortify at a level of 50 mg/kg, transfer 10,0 ml of the stock standard solution (3.5.1) to a 250 ml conical flask and evaporate the solution to ca. 0,5 ml.
Προστίθενται 50 g του τυφλού, αναμειγνύονται επισταμένως και αφήνονται για 10 λεπτά αναμειγνύοντας πάλι μερικές φορές πριν προχωρήσουμε στο στάδιο της εκχύλισης (5.2).
Add 50 g of the blank feed, mix thoroughly and leave for 10 min. mixing again several times before proceeding with the extraction step (5.2).
Για τους σκοπούς της παρούσας μεθόδου, το τυφλό πρέπει να είναι παρόμοιου τύπου με εκείνον του δείγματος και να μην ανιχνεύεται σε αυτό ολακινδόξη.
For the purpose of this method the blank feed shall be similar in type to that of the sample and olaquindox must not be detected.
Ζυγίζονται, με ακρίβεια 0,01 g περίπου 50 g του δείγματος.
Weigh to the nearest 0,01 g, approximately 50 g of the sample.