natgillin/translations-raw huggingface dataset:
συνοδεύονται από υγειονομικό πιστοποιητικό των ζώων το οποίο συμπληρώνεται σύμφωνα με το υπόδειγμα που περιέχεται στο παράρτημα ΙΙ του παρόντος κανονισμού και με τις επεξηγηματικές σημειώσεις του παραρτήματος V του κανονισμού (ΕΚ) αριθ. 1251/2008, αν τα ζώα:
be accompanied by an animal health certificate completed in accordance with the model set out in Annex II to this Regulation and the explanatory notes set out in Annex V to Regulation (EC) No 1251/2008, if the animals:
προορίζονται για κράτη μέλη ή διαμερίσματα τα οποία έχουν θεσπίσει πρόγραμμα έγκαιρης ανίχνευσης του OsHV-1 μvar και στα οποία δεν έχει ανιχνευτεί ο OsHV-1 μvar, και
are intended for Member States or compartments which have established a programme for the early detection of OsHV-1 μvar, and in which OsHV-1 μvar is not detected; and
προορίζονται για καλλιέργεια ή περιοχές μετεγκατάστασης·
are intended for farming or relaying areas;
προέρχονται από διαμέρισμα στο οποίο αποδείχθηκε η απουσία του OsHV-1 μVar με βάση δειγματοληψία και δοκιμές που πραγματοποιήθηκαν σύμφωνα με το μέρος Α του παραρτήματος Ι· και
originate from a compartment where the absence of OsHV-1 μVar is demonstrated by sampling and testing carried out in accordance with Part A of Annex I; and
πληρούν τις κτηνιατρικές απαιτήσεις υγειονομικού ελέγχου που ορίζονται στο υπόδειγμα πιστοποιητικού το οποίο αναφέρεται στο στοιχείο α).
comply with the animal health requirements set out in the model certificate, referred to in point (a).
Το πρόγραμμα έγκαιρης ανίχνευσης του OsHV-1 μvar που αναφέρεται στην παράγραφο 1 στοιχείο α) σημείο i) πληροί τις ακόλουθες απαιτήσεις:
A programme for the early detection of OsHV-1 μvar referred to in paragraph 1(a)(i) shall comply with the following requirements:
το πρόγραμμα πρέπει να δηλώνεται στη μόνιμη επιτροπή για την τροφική αλυσίδα και την υγεία των ζώων·
the programme must be declared to the Standing Committee on the Food Chain and Animal Health;
η δήλωση αυτή πρέπει να είναι σύμφωνη με το σημείο 1, τα σημεία 5.1, 5.2, 5.3, 5.5 και 5.9, και τα σημεία 6 και 7 του υποδείγματος που περιέχεται στο παράρτημα II της απόφασης 2009/177/ΕΚ·
such declaration must be in conformity with point 1, points 5.1, 5.2, 5.3, 5.5, and 5.9, and points 6 and 7 of the model form set out in Annex II to Decision 2009/177/EC;
το πρόγραμμα πρέπει να περιλαμβάνει:
the programme must include:
δειγματοληψία σύμφωνα με το μέρος Α του παραρτήματος Ι·
sampling in accordance with Part A of Annex I;
δοκιμές για την παρουσία του ιού OsHV-1 μvar, σύμφωνα με τις διαγνωστικές μεθόδους που αναφέρονται στο μέρος Β του παραρτήματος I.
testing for the presence of OsHV-1 μvar in accordance with the diagnostic methods set out in Part B of Annex I.
Η παράγραφος 1 εφαρμόζεται μία εβδομάδα από την ημερομηνία της συνεδρίασης της μόνιμης επιτροπής για την τροφική αλυσίδα και την υγεία των ζώων στην οποία δηλώνεται το πρόγραμμα που αναφέρεται στην παράγραφο 1 στοιχείο α) σημείο i).
Paragraph 1 shall apply one week from the date of the meeting of the Standing Committee on the Food Chain and Animal Health at which the programme referred to in paragraph 1(a)(i) was declared.
Ενημερωτική σελίδα στο διαδίκτυο
Internet-based information page
Τα κράτη μέλη κοινοποιούν στην Επιτροπή και στα άλλα κράτη μέλη:
Member States shall make available to the Commission and the other Member States:
κατάλογο των περιοχών περιορισμού και τους παράγοντες που ελήφθησαν υπόψη για τον καθορισμό τους, συμπεριλαμβανομένης της περιγραφής των γεωγραφικών συνόρων της σχετικής περιοχής, που καθορίστηκε σύμφωνα με το άρθρο 2 παράγραφος 2·
a list of containment areas and the factors that have been taken into account to define such areas, including a description of the geographical boundaries of the relevant area, established in accordance with Article 2(2);
κατάλογο των διαμερισμάτων καθώς και περιγραφή των γεωγραφικών συνόρων της σχετικής περιοχής:
a list of compartments including a description of the geographical boundaries of the relevant area:
που υποβλήθηκε σε μέτρα περιορισμού το 2009 λόγω της αυξημένης θνησιμότητας στα στρείδια του είδους Crassostrea gigas σε σχέση με τον ιό OsHV-1 μvar,
which have been subject to containment measures in 2009 due to increased mortalities in Crassostrea gigas oysters in connection with OsHV-1 μvar;
στην οποία η απουσία του ιού OsHV-1 μvar αποδείχθηκε με δοκιμές που πραγματοποιήθηκαν σε δείγματα που ελήφθησαν στις περιοχές περιορισμού σύμφωνα με τα μέρη Α και Β του παραρτήματος Ι·
where the absence of OsHV-1 μvar has been demonstrated by a testing carried out in accordance with Parts A and B of Annex I in samples taken in the containment area;
δηλώσεις προγραμμάτων που αναφέρονται στο άρθρο 5 παράγραφος 2, συμπεριλαμβανομένης περιγραφής των γεωγραφικών συνόρων της σχετικής περιοχής.
declarations of programmes referred to in Article 5(2), including a description of the geographical boundaries of the relevant area.
Οι πληροφορίες που προβλέπονται στην παράγραφο 1 ενημερώνονται και διατίθενται μέσω των ενημερωτικών σελίδων στο διαδίκτυο που δημιουργήθηκαν σύμφωνα με το άρθρο 10 της απόφασης 2009/177/ΕΚ.
The information provided for in paragraph 1 shall be kept up-to-date and made available through the internet-based information pages established in accordance with Article 10 of Decision 2009/177/EC.
Έως την 1η Οκτωβρίου 2010 το αργότερο τα κράτη μέλη υποβάλλουν έκθεση στην Επιτροπή σχετικά με τα προγράμματα που δηλώνονται σύμφωνα με το άρθρο 5 παράγραφος 2.
By 1 October 2010 at the latest, Member States shall submit a report to the Commission on programmes declared in accordance with Article 5(2).
Η έκθεση είναι σύμφωνη με το υπόδειγμα εντύπου που ορίζεται στο παράρτημα VI της απόφασης 2009/177/ΕΚ.
The report shall be in conformity with the model form set out in Annex VI to Decision 2009/177/EC.
Εφαρμόζεται από τη 15η Μαρτίου 2010 έως την 31η Δεκεμβρίου 2010.
It shall apply from 15 March 2010 to 31 December 2010.
Δειγματοληψία για τους σκοπούς του άρθρου 2
Sampling for the purposes of Article 2
Τα δείγματα που προβλέπονται στο άρθρο 2 αποτελούνται από τουλάχιστον 12 άτομα του είδους Crassotrea gigas.
Samples as provided for in Article 2 shall consist of at least 12 individuals of Crassostrea gigas oysters.
Κατά την επιλογή αυτών των ζώων, ως δείγματα λαμβάνονται στρείδια αδύναμα, ανοιχτά ή πρόσφατα νεκρά (όχι σε αποσύνθεση) που συλλέγονται από το διαμέρισμα στο οποίο παρατηρείται η θνησιμότητα.
When selecting those animals weak, gaping or freshly dead (not decomposed) individuals shall be sampled and they shall be collected from the compartment where the mortality is observed.
Δειγματοληψία για τους σκοπούς του άρθρου 3 παράγραφος 2 στοιχείο β), του άρθρου 5 παράγραφος 1 στοιχείο β) και του άρθρου 5 παράγραφος 2
Sampling for the purposes of Article 3(2)(b), 5(1)(b) and 5(2)
Η δειγματοληψία για τους σκοπούς του άρθρου 3 παράγραφος 2 στοιχείο β) αποτελείται από:
Sampling for the purposes of Article 3(2)(b) shall consist of:
για τις προνύμφες, πέντε ομάδες βάρους τουλάχιστον 50 mg ολόκληρων ζώων που συλλέχθηκαν 4 έως 8 ημέρες μετά τη γονιμοποίηση, μαζί με το όστρακο, ανά φορτίο·
in the case of larvae, five pools of at least 50 mg of whole animals collected between 4 and 8 days after fecundation including shell per consignment;
για τους γόνους που είναι μικρότεροι από 6 mm, 30 ομάδες των 300 mg ολόκληρων ζώων, μαζί με το όστρακο, ανά φορτίο·
in the case of spat smaller than 6 mm, 30 pools of 300 mg of whole animals including shell per consignment;
στην περίπτωση στρειδιών που είναι μεγαλύτερα από 6 mm, 150 άτομα ανά φορτίο.
in the case of oysters bigger than 6 mm, 150 individuals per consignment.
Κατά την επιλογή αυτών των ζώων, όλα τα μέρη του φορτίου πρέπει να αντιπροσωπεύονται αναλογικά στο δείγμα.
When selecting those animals, all parts of the consignment must be proportionally represented in the sample.
Αν υπάρχουν στρείδια αδύναμα, ανοιχτά ή πρόσφατα νεκρά (όχι σε αποσύνθεση), επιλέγονται κυρίως αυτά.
If weak, gaping or freshly dead (not decomposed) animals are present, primarily such animals shall be selected.
Η δειγματοληψία για τους σκοπούς του άρθρου 5 παράγραφος 2 αποτελείται από τουλάχιστον 150 άτομα του είδους Crassotrea gigas ανά σημείο δειγματοληψίας.
Sampling for the purposes of Article 5(2) shall consist of at least 150 individuals of Crassostrea gigas per sampling points.
Λαμβάνονται δείγματα από όλες τις εκμεταλλεύσεις ή περιοχές καλλιέργειας μαλακίων στο κράτος μέλος ή το διαμέρισμα όπου ισχύει το πρόγραμμα.
All farms or mollusc farming areas in the Member State or compartment covered by the programme shall be sampled.
Η δειγματοληψία για τους σκοπούς του άρθρου 5 παράγραφος 1 στοιχείο β) αποτελείται από τουλάχιστον 150 άτομα του είδους Crassotrea gigas ανά διαμέρισμα.
Sampling for the purposes of Article 5(1)(b) shall consist of at least 150 individuals of Crassostrea gigas oysters per compartment.
Κατά την επιλογή αυτών των ζώων λαμβάνονται υπόψη τα ακόλουθα κριτήρια:
When selecting those animals, the following criteria shall be taken into account:
Αν δεν υπάρχουν ζώα σε αυτή την κατάσταση, τα ζώα που επιλέγονται περιλαμβάνουν υγιή μαλάκια ηλικίας κάτω των 12 μηνών·
If such animals are not present, the animals selected shall include healthy molluscs less than 12 months old.
Κατά τη δειγματοληψία σε εκμεταλλεύσεις στις οποίες χρησιμοποιούνται περισσότερες από μία πηγές νερού για την παραγωγή, στο δείγμα πρέπει να περιληφθούν ζώα από όλες τις πηγές νερού έτσι ώστε όλα τα μέρη της εκμετάλλευσης να αντιπροσωπεύονται αναλογικά στο δείγμα·
When sampling in farms in which more than one water source is utilised for production, animals representing all water sources must be included for sampling in such a way that all parts of the farm are proportionally represented in the sample.
Κατά τη δειγματοληψία σε περιοχές καλλιέργειας μαλακίων, στο δείγμα περιλαμβάνονται ζώα από επαρκή αριθμό σημείων δειγματοληψίας, τουλάχιστον από τρία σημεία δειγματοληψίας, έτσι ώστε όλα τα μέρη της περιοχής καλλιέργειας μαλακίων να αντιπροσωπεύονται αναλογικά στο δείγμα, συμπεριλαμβανομένων των φυσικών κοιτών που υπάρχουν στις περιοχές καλλιέργειας μαλακίων.
When sampling in mollusc farming areas, animals from a sufficient number of sampling points, at least three sampling points, shall be included in the sample in such a way that all parts of the mollusc farming area are proportionally represented in the sample, including natural beds present in the mollusc farming area.
Οι κύριοι παράγοντες που πρέπει να εξεταστούν για την επιλογή αυτών των σημείων δειγματοληψίας είναι οι ακόλουθοι: προηγούμενη ανίχνευση του ιού OsHV-1 μvar στην περιοχή, δείκτης πυκνότητας, ροές υδάτων, βαθυμετρία και πρακτικές διαχείρισης.
The main factors to be considered for the selection of these sampling points are: previous detection of OsHV-1 μvar in the area, stocking density, water flows, bathymetry and management practices.
Η δειγματοληψία που προβλέπεται στο άρθρο 5 παράγραφος 2 πραγματοποιείται κατά την περίοδο του έτους που είναι γνωστό ότι στο κράτος μέλος ή στο διαμέρισμα ο επιπολασμός του ιού OsHV-1 μvar είναι στο υψηλότερο επίπεδο.
The sampling provided for in Article 5(2) shall be carried out in the period of the year when prevalence of OsHV-1 μvar in the Member State or compartment is known to be maximal.
Όταν τα στοιχεία αυτά δεν είναι διαθέσιμα, η δειγματοληψία πραγματοποιείται αμέσως μετά την περίοδο κατά την οποία η θερμοκρασία του νερού υπερβαίνει τους 16 °C ή την περίοδο του έτους με τη μέγιστη κατά κανόνα θερμοκρασία.
When such data is not available, sampling shall be carried out just after the period when the water temperature exceeds 16 °C or at the time of the year when the temperature normally reaches its yearly maximum.
Η δειγματοληψία που προβλέπεται στο άρθρο 5 παράγραφος 1 στοιχείο β) πραγματοποιείται κατά προτίμηση κατά την περίοδο του έτους που περιγράφεται στο στοιχείο γ). Αν συλλεχθούν δείγματα εκτός αυτής της περιόδου του έτους, τα δείγματα των στρειδιών πρέπει, πριν από τη δοκιμή, να διατηρηθούν υπό συνθήκες που αντιστοιχούν σε εκείνες που περιγράφονται στο στοιχείο γ) για περίοδο κατάλληλη για την ανίχνευση του ιού OsHV-1 μvar.
The sampling provided for in Article 5(1)(b) shall preferably be carried out in the period of the year described in point c. If samples are collected outside that period of the year, the sampled oysters must be maintained under conditions equivalent to those described in point c for a period suitable for the detection of OsHV-1 μvar, before being tested.
Διαγνωστικές μέθοδοι ανίχνευσης του OsHV-1 μvar
Diagnostic methods of detecting OsHV-1 μvar
Η παρούσα διαδικασία περιγράφει μια πρότυπη διαγνωστική μέθοδο που πρέπει να χρησιμοποιείται για την ανίχνευση και την ταυτοποίηση του ιού OsHV-1 μvar μέσω αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης (εφεξής «PCR»).
This procedure explains a standard diagnostic method to be used for OsHV-1 μvar detection and identification by Polymerase Chain Reaction (hereinafter PCR).
Επιτρέπει τη διάκριση μεταξύ του OsHV-1 και του OsHV-1 μvar.
It allows distinguishing between OsHV-1 and OsHV-1 μvar.
Προκειμένου να επιτευχθούν βέλτιστες συνθήκες αντίδρασης και προσαρμογή στον εξοπλισμό και τις συνθήκες στις εγκαταστάσεις τους, τα εργαστήρια μπορούν ενδεχομένως να εφαρμόσουν τροποποιήσεις στις μεθόδους που περιγράφονται στο παρόν παράρτημα, με την προϋπόθεση ότι μπορεί να αποδειχθεί ισοδύναμη ευαισθησία και εξειδίκευση.
When appropriate, in order to optimise the reaction conditions and to suit the equipment and conditions in their own laboratory, the laboratories may apply modifications to the methods described in this Annex, provided that an equal sensitivity and specificity can be demonstrated.
Ο ιός OsHV-1 μvar ορίζεται στο άρθρο 1 του παρόντος κανονισμού.
OsHV-1 μvar is defined in Article 1 of this Regulation.
Εξοπλισμός και συνθήκες περιβάλλοντος
Equipment and environmental conditions
Η διαγνωστική δοκιμή που χρησιμοποιείται για την ανίχνευση και την ταυτοποίηση του OsHV-1 μvar μέσω PCR απαιτεί τον εξοπλισμό και τις συνθήκες περιβάλλοντος που χρησιμοποιούνται συνήθως για τις δοκιμές PCR, δηλαδή:
The diagnostic test used for OsHV-1 μvar detection and identification by PCR requires the equipment and environmental conditions classically used for PCR assays as follows:
Κλειστό κάλυμμα εξοπλισμένο με σύστημα που παράγει υπεριώδη ακτινοβολία (UV) για την πρόληψη πιθανών επιμολύνσεων κατά την προετοιμασία του μείγματος PCR.
A closed hood equipped with an UV producing system to eliminate potential contaminations when preparing PCR mix.
Δύο πλήρη σετ πιπετών (2 μl· 20 μl· 200 μl και 1000 μl), το πρώτο για την εκχύλιση του DNA και το δεύτερο για την προετοιμασία του μείγματος PCR.
Two complete sets of pipettes (2 μl; 20 μl; 200 μl and 1000 μl), the first one for DNA extraction, and the second one for PCR mix preparation.
Τρεις διαφορετικές πιπέτες: μία πιπέτα (2 μl) για τη διανομή των δειγμάτων στο μείγμα PCR, μία πιπέτα (20 μl) για τη δειγματοληψία EB (βρωμιούχο αιθίδιο) και μία τρίτη πιπέτα (20 μl) για τη φόρτωση των προϊόντων PCR σε πηκτές αγαρόζης.
Three different pipettes: one pipette (2 μl) to dispense samples in PCR mix, one pipette (20 μl) for EB sampling and another pipette (20 μl) to load PCR products in agarose gels.
Στόμια πιπέτας με φίλτρο (2 μl· 20 μl· 200 μl και 1000 μl) για την εκχύλιση του DNA, την προετοιμασία μείγματος PCR και τη διανομή δειγμάτων.
Filter pipette tips (2 μl; 20 μl; 200 μl and 1000 μl) for DNA extraction, PCR mix preparation and sample dispensing.
Στόμια πιπέτας (20 μl) για τη συλλογή EB και τη φόρτωση προϊόντων ενίσχυσης σε πηκτή αγαρόζης.
Pipette tips (20 μl) to collect EB and to load amplification products in agarose gel.
Θερμoκυκλοποιητής για τις ενισχύσεις.
A thermal cycler to perform amplifications.
Σύστημα οριζόντιας ηλεκτροφόρησης για την ηλεκτροφόρηση των προϊόντων PCR.
A horizontal electrophoresis system for PCR products electrophoresis.
Τράπεζα UV για την παρατήρηση των προϊόντων PCR μετά την ηλεκτροφόρηση πηκτής αγαρόζης.
An UV table to observe PCR products after agarose gel electrophoresis.
Σύστημα απεικόνισης της πηκτής.
A system to acquire pictures of the gels.
Κατά τη διάρκεια όλων των παρακάτω περιγραφόμενων σταδίων ο χειριστής πρέπει να φέρει ένδυμα και γάντια εργαστηρίου.
The manipulator must wear a lab coat and some gloves during all the different steps described bellow.
Το ένδυμα και τα γάντια εργαστηρίου πρέπει να αλλάζονται κατά προτίμηση ύστερα από κάθε κύριο στάδιο: εκχύλιση του DNA, προετοιμασία μείγματος PCR, διανομή δειγμάτων, ενίσχυση και φόρτωση πηκτής.
Lab coat and gloves must be changed preferably after each main step: DNA extraction, preparation of PCR mix, sample dispensing, amplification and gel loading.
Συνιστάται να πραγματοποιούνται αυτά τα στάδια σε διαφορετικούς χώρους.
It is recommended to perform these different steps in different rooms.
Ειδικότερα, η ενίσχυση και η φόρτωση/ηλεκτροφόρηση της πηκτής θα πρέπει να γίνονται σε χώρο ξεχωριστό από εκείνο της εκχύλισης του DNA, της προετοιμασίας του μείγματος PCR και της διανομής του DNA.
More particularly, amplification and gel loading/electrophoresis should take place in a room separate from DNA extraction, PCR mix preparation and DNA dispensing.
Προετοιμασία δείγματος
Sample preparation
Ζωντανά ή πρόσφατα νεκρά (όχι σε αποσύνθεση) στρείδια, τα οποία μπορούν προηγουμένως να καταψυχθούν, υποβάλλονται σε επεξεργασία για την εκχύλιση του DNA.
Live or freshly dead (not decomposed) oysters, which can be previously frozen, are processed for DNA extraction.
Η επεξεργασία των δειγμάτων διαφέρει ανάλογα με το μέγεθός τους:
Samples are processed differently according to their size:
για προνύμφες, ομάδες βάρους 50 mg ολόκληρων ζώων (μαζί με το κέλυφος) συνθλίβονται με 200 μl αποσταγμένο νερό και φυγοκεντρούνται σε 1000 g για 1 λεπτό·
For larvae, pools of 50 mg of the whole animals (including the shell) completed with 200 μl of distilled water are crushed and centrifuged at 1000 g for 1 minute.
για γόνους μεγέθους έως και 6 mm, ομάδες των 300 mg ολόκληρων ζώων (μαζί με το κέλυφος) συνθλίβονται με 1200 μl αποσταγμένο νερό και φυγοκεντρούνται σε 1000 g για 1 λεπτό·
For spat smaller than or of 6 mm, pools of 300 mg of the whole animals (including the shell) completed with 1200 μl of distilled water are crushed and centrifuged at 1000 g for 1 minute.
για γόνους μεγέθους μεταξύ 6 και 15 mm, όλοι οι μαλακοί ιστοί κάθε ζώου συνθλίβονται χωριστά·
For spat between 6 and 15 mm in size, all the soft tissues of each animal are crushed individually.
για τα ζώα που είναι μεγαλύτερα από 15 mm, χωρίζονται κομμάτια από τα βράγχια και τον μανδύα
For animals bigger than 15 mm, pieces of gills and mantle are isolated.
Για την εκχύλιση του DNA χρησιμοποιείται το QIAamp® DNA Mini Kit (QIAGEN) και ακολουθούνται οι οδηγίες του πρωτοκόλλου δοκιμών σε ιστούς.
DNA extraction is performed using the QIAamp® DNA Mini Kit (QIAGEN) and following the instructions for Tissue Test Protocol.
Η περαιτέρω προετοιμασία του δείγματος πραγματοποιείται με την εξής σειρά:
The further sample preparation is performed in the following order:
100 μl του υπερκείμενου υγρού των δειγμάτων που αναφέρονται στο α) και στο β) ή 10 έως 50 mg ιστών από τα δείγματα που αναφέρονται στα σημεία γ) και δ) τοποθετούνται σε σωλήνα μικροφυγοκέντρησης 1,5 ml και προστίθενται 180 μl ρυθμιστικού διαλύματος ATL.
Place 100 μl of supernatant for samples referred to in (a) and (b) or 10 to 50 mg of tissues for samples referred to point (c) and (d) in a 1,5 ml microcentrifuge tube and add 180 μl of Buffer ATL.
Προστίθενται 20 μl πρωτεϊνάσης K, αναμειγνύονται σε συσκευή vortex (κυκλοαναδευτήρας) και επωάζονται στους 56 °C έως την πλήρη λύση του ιστού (όλη τη νύχτα).
Add 20 μl Proteinase K, mix by vortexing and incubate at 56 °C until the tissue is completely lysed (overnight).
Κατά τη διάρκεια της επώασης το δείγμα αναμειγνύεται σε συσκευή vortex κατά διαστήματα ώστε να επιτευχθεί πλήρης διασπορά.
Vortex occasionally during incubation to disperse sample.
Σύντομη φυγοκέντρηση στον σωλήνα μικροφυγοκέντρησης των 1,5 ml για την απομάκρυνση των σταγόνων από το κάλυμμα.
Briefly centrifuge the 1,5 ml microcentrifuge tube to remove drops from the lid.
Προστίθενται στο δείγμα 200 μl ρυθμιστικού διαλύματος AL, αναμειγνύονται με παλμικό κυκλοαναδευτήρα (pulse-vortex) κατά τη διάρκεια 15 δευτερολέπτων και επωάζονται στους 70 °C για 10 λεπτά.
Add 200 μl Buffer AL to the sample, mix by pulse-vortexing for 15 s and incubate at 70 °C for 10 minutes.
Προστίθενται 200 μl αιθανόλης (96-100 %) στο δείγμα και αναμειγνύονται με παλμικό κυκλοαναδευτήρα (pulse-vortex) για 15 δευτερόλεπτα. Σύντομη φυγοκέντρηση στον σωλήνα μικροφυγοκέντρησης των 1,5 ml για την απομάκρυνση των σταγόνων από το κάλυμμα.
Add 200 μl ethanol (96-100 %) to the sample, and mix by pulse-vortexing for 15 s. Briefly centrifuge the 1,5 ml microcentrifuge tube to remove drops from the lid.
Το μείγμα του σταδίου 4 μεταφέρεται προσεκτικά σε στήλη φυγοκέντρησης QIAamp Spin Column (σε σωλήνα συλλογής 2 ml) χωρίς να υγρανθεί το χείλος.
Carefully apply the mixture from step 4 to the QIAamp Spin Column (in a 2 ml collection tube) without wetting the rim.
Τοποθετείται το πώμα και γίνεται φυγοκέντρηση με ταχύτητα 10000 περιστροφών/λεπτό για 1 λεπτό. Η στήλη φυγοκέντρησης (QIAamp Spin Column) τοποθετείται σε καθαρό σωλήνα συλλογής 2 ml (που παρέχεται με το κιτ) και ο σωλήνας που περιέχει το διήθημα απορρίπτεται.
Close the cap and centrifuge at 10000 rpm for 1 min. Place the QIAamp Spin Column in a clean 2 ml collection tube (provided in the kit) and discard the tube containing the filtrate.
Ανοίγεται προσεκτικά η στήλη φυγοκέντρησης (QIAamp Spin Column) και προστίθενται 500 μl ρυθμιστικού διαλύματος AW1 χωρίς να υγρανθεί το χείλος.
Carefully open the QIAamp Spin Column and add 500 μl Buffer AW1 without wetting the rim.
Τοποθετείται το πώμα και γίνεται φυγοκέντρηση με ταχύτητα 10000 περιστροφών/λεπτό για 1 λεπτό. Η στήλη φυγοκέντρησης (QIAamp Spin Column) τοποθετείται σε καθαρό σωλήνα συλλογής 2 ml (που παρέχεται με το κιτ) και ο σωλήνας συγκέντρωσης που περιέχει το διήθημα απορρίπτεται.
Close the cap and centrifuge at 10000 rpm for 1 min. Place the QIAamp Spin Column in a clean 2 ml collection tube (provided in the kit) and discard the collection tube containing the filtrate.
Ανοίγεται προσεκτικά η στήλη φυγοκέντρησης (QIAamp Spin Column) και προστίθενται 500 μl ρυθμιστικού διαλύματος AW2 χωρίς να υγρανθεί το χείλος.
Carefully open the QIAamp Spin Column and add 500 μl Buffer AW2 without wetting the rim.
Τοποθετείται το πώμα και γίνεται φυγοκέντρηση με τη μέγιστη ταχύτητα (14000 περιστροφές/λεπτό) για 3 λεπτά.
Close the cap and centrifuge at full speed (14000 rpm) for 3 min.
(Προαιρετικό) Η στήλη φυγοκέντρησης (QIAamp Spin Column) τοποθετείται σε νέο σωλήνα συλλογής 2 ml (δεν παρέχεται με το κιτ) και ο σωλήνας συγκέντρωσης που περιέχει το διήθημα απορρίπτεται.
(Optional) Place the QIAamp Spin Column in a new 2ml collection tube (not provided in the kit) and discard the collection tube containing the filtrate.
Πραγματοποιείται φυγοκέντρηση με τη μέγιστη ταχύτητα (14000 περιστροφές/λεπτό) για 1 λεπτό.
Centrifuge at full speed (14000 rpm) for 1 min.
Η στήλη φυγοκέντρησης (QIAamp Spin Column) τοποθετείται σε καθαρό σωλήνα μικροφυγοκέντρησης 1,5 ml (δεν παρέχεται με το κιτ) και ο σωλήνας συλλογής που περιέχει το διήθημα απορρίπτεται.
Place the QIAamp Spin Column in a clean 1,5 ml microcentrifuge tube (not provided in the kit) and discard the collection tube containing the filtrate.
Ανοίγεται προσεκτικά η στήλη φυγοκέντρησης (QIAamp Spin Column) και προστίθενται 100 μl αποσταγμένου νερού.
Carefully open the QIAamp Spin Column and add 100 μl of distilled water.
Πραγματοποιείται επώαση για 5 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου και φυγοκέντρηση με ταχύτητα 10000 περιστροφές/λεπτό για 1 λεπτό.
Incubate 5 minutes at room temperature and centrifuge at 10000 rpm for 1 min.
Ελέγχονται η ποιότητα και η αποτελεσματικότητα της εκχύλισης [για παράδειγμα, με μέτρηση της οπτικής πυκνότητας (260 nm) με φασματοφωτόμετρο ή έπειτα από ηλεκτροφόρηση πηκτής αγαρόζης].
Control the quality and efficacy of the extraction (for example by measuring OD (260 nm) under spectrophotometer or after electrophoresis in agarose gel).
Προετοιμάζεται διάλυμα των δειγμάτων σας έτσι ώστε η τελική συγκέντρωση DNA να είναι 50-100 ng/μl.
Prepare dilution of your samples in order to have a final DNA concentration of 50-100 ng/μl.