natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Εγκατάσταση της στήλης και της προστήλης
Installation of the column and pre-column
Τοποθετείται η προστήλη (6.2) εκτός του κλιβάνου στήλης (6.3) και η στήλη (6.1) μέσα στον κλίβανο.
Install the pre-column (6.2) outside the column oven (6.3) and the column (6.1) in the oven.
Σημείωση: Εάν ο κλίβανος δεν περιλαμβάνει σωλήνωση για την προθέρμανση της φάσης έκλουσης, η τελευταία πρέπει απαραιτήτως να διέρχεται από ανοξείδωτο χαλύβδινο σωλήνα μήκους περίπου 15 cm στον κλίβανο, πριν εισέλθει στη στήλη (η θέρμανση της φάσης έκλουσης πριν από την είσοδό της στη στήλη είναι απολύτως απαραίτητη, ειδάλλως διευρύνονται οι κορυφές).
Note: If the oven does not contain tubing to preheat the eluent, it is necessary that the eluent passes ca. 15 cm stainless steel tubing in the oven before entering the column (it is absolutely necessary that the eluent has heated up before entering the column, otherwise peak broadening shall occur).
Ανιχνευτής και αρχική ροή
Detector and initial flow
Για να επιτευχθεί σταθερή γραμμή βάσης, ο ανιχνευτής (6.6) τίθεται σε λειτουργία τουλάχιστον 24 ώρες πριν αρχίσει η ανάλυση.
In order to get a stable baseline, turn on the detector (6.6) at least 24 h before starting the analysis.
Κλίβανος στήλης και τελική ταχύτητα ροής
Column oven and final flow-rate
Ρυθμίζεται ο κλίβανος στήλης (6.3) στους 85 °C.
Set the column oven (6.3) at 85 °C.
Μόλις επιτευχθεί η θερμοκρασία αυτή, αυξάνεται σταδιακά μετά από 30 λεπτά η ταχύτητα ροής από 0,2 ml/min σε 0,6 ml/min (6.4).
When that temperature is reached, increase after 30 minutes gradually the flow rate from 0,2 ml/min to 0,6 ml/min (6.4).
Το σύστημα αφήνεται να αποκτήσει ισορροπία στη συγκεκριμένη ταχύτητα ροής και στη θερμοκρασία των 85 °C επί 2 ώρες ή μέχρι να προκύψει σταθερή γραμμή βάσης.
Allow the system to equilibrate with that flow rate and at 85 °C for 2 h or until a stable baseline is obtained.
Ολοκλήρωση
Integration
Επιλέγονται με προσοχή οι παράμετροι απόκτησης δεδομένων και ολοκλήρωσης (6.7), όπως ρυθμός μεταφοράς δεδομένων, ευαισθησία, σταθερά χρόνου, εύρος κορυφής και κατώτατο όριο.
Carefully chose the acquisition and integration parameters (6.7) such as data rate, sensitivity, time constant, peak width and threshold.
Ο χρόνος κατακράτησης της λακτόζης είναι περίπου 11 λεπτά.
The retention time of lactose is ca. 11 min.
Σημείωση: Πολλά προγράμματα λογισμικού απόκτησης δεδομένων (6.7) παρέχουν τη δυνατότητα ευχερούς μέτρησης του αριθμού θεωρητικών πλακών.
Note: Many data acquisition software programs (6.7) afford easy measurement of the theoretical plate count.
Μετράται τακτικά ο αριθμός θεωρητικών πλακών για το πρότυπο διάλυμα 1 (8.1) και η στήλη (6.1) αντικαθίσταται, όταν ο αριθμός αυτός είναι κατά 25 % χαμηλότερος από την αρχική τιμή του για μια νέα στήλη.
Measure the theoretical plate count of standard 1 (8.1) regularly and replace the column (6.1) when the plate count is 25 % lower than that of the initial value of a new column.
Δοκιμή της προστήλης
Guard column test
Ελέγχεται τακτικά (τουλάχιστον μία φορά σε κάθε σειρά μετρήσεων) η ικανότητα της προστήλης (6.2) να απομακρύνει τα άλατα από το δείγμα, με την εισαγωγή 25 µl διαλύματος χλωριούχου νατρίου 0,05 %.
Check regularly (at least once in every sequence) the ability of the guard column (6.2) to eliminate salts from the sample by injecting 25 µL of a 0,05 % sodium chloride solution.
Εάν εμφανιστούν κορυφές, η προστήλη πρέπει να αντικατασταθεί.
Whenever peaks are appearing, the guard column should be replaced.
Μέτρηση των προτύπων διαλυμάτων
Running standards
Στην αρχή κάθε σειράς αναλύσεων εισάγονται διαδοχικά 25 µl (6.5) του προτύπου διαλύματος 1 (8.1) και του προτύπου διαλύματος 2 (8.2).
Inject at the beginning of each series of analyses 25 µL (6.5) of standard 1 (8.1) and subsequently of standard 2 (8.2).
Αυτό επαναλαμβάνεται ανά 10 έως 20 δείγματα, καθώς και στο τέλος της σειράς.
Repeat this every 10 to 20 samples and apply this also at the end of the sequence.
Μέτρηση των δειγμάτων
Running samples
Εισάγονται 25 µl του υπερκειμένου (9.2) του δείγματος.
Inject 25 µL of the supernatant (9.2) of the sample.
ΥΠΟΛΟΓΙΣΜΟΣ ΚΑΙ ΕΚΦΡΑΣΗ ΤΩΝ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΩΝ
CALCULATION AND EXPRESSION OF THE RESULTS
Για τον υπολογισμό των αποτελεσμάτων χρησιμοποιούνται κατά κανόνα τα ύψη των κορυφών. Εάν όμως το σήμα έχει υπερβολικό θόρυβο, μπορούν να χρησιμοποιηθούν τα εμβαδά των κορυφών (ο ποσοτικός προσδιορισμός με τη βοήθεια του ύψους των κορυφών επηρεάζεται λιγότερο από τις κορυφές των συστατικών που περιέχονται σε χαμηλές συγκεντρώσεις, οι οποίες διαχωρίζονται εν μέρει αλλά ανεπαρκώς από την κορυφή της λακτόζης).
Normally peak heights are used to calculate the results, however, if the signal contains to much noise peak area can be used (quantitation by peak height is less influenced by peaks of components in low concentration and which are partly, but insufficiently separated from the lactose peak).
Το λογισμικό (6.7) πρέπει να χαράσσει γραμμική καμπύλη βαθμονόμησης, διερχόμενη από την αρχή των αξόνων.
The software (6.7) should calculate a linear calibration curve forced through the origin.
Η καμπύλη ελέγχεται για πιθανή έλλειψη γραμμικότητας (τα πιθανότερα αίτια της έλλειψης γραμμικότητας είναι τα σφάλματα στην παρασκευή του προτύπου διαλύματος 1 (8.1) ή 2 (8.2), η κακή ολοκλήρωση και, σε μικρότερο βαθμό, η ελαττωματική λειτουργία του συστήματος έγχυσης).
Check the curve for possible non linearity (apparent non linearity is most likely caused by a mistake in preparing the standards 1 (8.1) or 2 (8.2), bad integration and, less likely, by a mall functioning injector).
Ως δεδομένα εισάγονται οι υπολογισθείσες συγκεντρώσεις των προτύπων διαλυμάτων 1 (8.1) και 2 (8.2), σε mg/ml άνυδρης λακτόζης.
Use as input the calculated lactose concentrations in mg/mL of the standards 1 (8.1) and 2 (8.2) as water free lactose.
Η κλίση (RF) της καμπύλης βαθμονόμησης ορίζεται από το εμβαδόν/συγκέντρωση σε mg/ml.
The slope (RF) of the calibration line is defined by area/concentration in mg/mL.
Το αποτέλεσμα της ανάλυσης προκύπτει σε g/100 g και υπολογίζεται με τη βοήθεια του λογισμικού (6.7) ή με τον ακόλουθο τύπο:
The result of the analysis is obtained as g/100 g and calculated using the software (6.7) or using the following formula:
όπου
Where:
C συγκέντρωση λακτόζης σε g/100 g σκόνης
C concentration of lactose in g/100 g powder
H ύψος της κορυφής της λακτόζης του δείγματος
H peak height of lactose of sample
RF συντελεστής απόκρισης (ή κλίση) της καμπύλης βαθμονόμησης σε mV/mg/ml
RF Response factor (or slope) of calibration plot in mV/mg/mL
βάρος του δείγματος σκόνης σε g (9.1)
sample weight of powder sample in g (9.1)
βάρος, σε g, του νερού που προστέθηκε στο δείγμα σκόνης (9.1)
weight of added water in g to powder sample (9.1)
βάρος του δείγματος από το διάλυμα ανασύστασης της σκόνης σε g (9.2)
sample weight of reconstituted solution of powder in g (9.2)
50 όγκος της ογκομετρικής φιάλης που χρησιμοποιήθηκε στο σημείο (9.2)
50 Volume of volumetric flask used in (9.2)
0,1 μετατροπή του αποτελέσματος σε g/100 g
0,1 conversion of the result in g/100 g
Οι τιμές που προέκυψαν από αυτή τη διεργαστηριακή δοκιμή ενδέχεται να μην ισχύουν για πεδία τιμών συγκέντρωσης και υλικά διαφορετικά από τα αναφερόμενα.
The values derived from this inter laboratory test may not be applicable to concentration ranges and matrices other than those given.
Οι τιμές επαναληψιμότητας και αναπαραγωγιμότητας θα προκύψουν από το αποτέλεσμα διεργαστηριακής δοκιμής σύμφωνα με το πρότυπο ISO 5725.
The values for the repeatability and reproducibility will be derived from the result of an inter laboratory test carried out in accordance with ISO 5725
Η διαφορά, σε απόλυτες τιμές, μεταξύ των αποτελεσμάτων δύο μεμονωμένων δοκιμών που έχουν διεξαχθεί με την ίδια μέθοδο, με πανομοιότυπο ελεγχόμενο υλικό, στο ίδιο εργαστήριο από τον ίδιο χειριστή με τον ίδιο εξοπλισμό, σε σύντομο χρονικό διάστημα, δεν υπερβαίνει σε περισσότερο από 5 % των περιπτώσεων την τιμή xxx (θα προσδιοριστεί με ομαδική δοκιμή).
The absolute difference between two single test results, obtained using the same method on identical test material in the same laboratory with the same operator using the same equipment within a short time of interval, will in not more than 5 % of cases be greater than xxx (to be determined by a collaborative trial).
Η διαφορά, σε απόλυτες τιμές, μεταξύ των αποτελεσμάτων δύο μεμονωμένων δοκιμών που έχουν διεξαχθεί με την ίδια μέθοδο, με πανομοιότυπο ελεγχόμενο υλικό, σε διαφορετικά εργαστήρια από διαφορετικούς χειριστές, με διαφορετικό εξοπλισμό, δεν υπερβαίνει σε περισσότερο από 5 % των περιπτώσεων την τιμή 0,5 g/100 g (θα προσδιοριστεί με ομαδική δοκιμή).
The absolute difference between two single test results, obtained using the same method on identical test material in different laboratories with different operators using different equipment, will in not more than 5 % of cases be greater than 0,5 g/100g (to be determined by a collaborative trial)
ISO 5725-1, Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results.
ISO 5725-1, Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results.
ISO 5725-2, Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results.
ISO 5725-2, Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results.
(Άρθρο 9)
(Article 9)
ΑΝΙΧΝΕΥΣΗ ΓΛΥΚΟΥ ΟΡΟΥ ΓΑΛΑΚΤΟΣ (ΤΥΡΟΓΑΛΑ ΠΥΤΙΑΣ) ΣΕ ΑΠΟΚΟΡΥΦΩΜΕΝΟ ΓΑΛΑ ΣΕ ΣΚΟΝΗ ΠΟΥ ΠΡΟΟΡΙΖΕΤΑΙ ΓΙΑ ΔΗΜΟΣΙΑ ΑΠΟΘΕΜΑΤΟΠΟΙΗΣΗ, ΜΕ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟ ΤΩΝ ΚΑΖΕΪΝΟΜΑΚΡΟΠΕΠΤΙΔΙΩΝ ΜΕ ΥΓΡΟΧΡΩΜΑΤΟΓΡΑΦΙΑ ΥΨΗΛΗΣ ΑΠΟΔΟΣΗΣ (HPLC)
DETECTION OF RENNET WHEY IN SKIMMED-MILK POWDER FOR PUBLIC STORAGE BY DETERMINATION OF CASEINOMACROPEPTIDES HIGH-PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY (HPLC)
Με την παρούσα μέθοδο είναι δυνατόν να ανιχνευθεί η παρουσία γλυκού ορού γάλακτος (τυρόγαλα πυτιάς) στο αποκορυφωμένο γάλα σε σκόνη που προορίζεται για δημόσια αποθεματοποίηση, με προσδιορισμό των καζεϊνομακροπεπτιδίων.
This method allows detection of rennet whey in skimmed-milk powder intended for public storage by determination of the caseinomacropeptides.
Διεθνές πρότυπο ISO 707 — Γάλα και γαλακτοκομικά προϊόντα — Μέθοδοι δειγματοληψίας, σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές του παραρτήματος Ι σημείο 2 στοιχείο γ), τελευταίο εδάφιο.
International Standard ISO 707 — Milk and Milk Products — Methods of sampling, conforming to the guidelines contained in Annex I(2)I last paragraph.
Η περιεκτικότητα σε στερεό υπόλειμμα γλυκού ορού γάλακτος ορίζεται ως η κατά μάζα εκατοστιαία αναλογία που προσδιορίζεται μέσω της περιεκτικότητας σε καζεϊνομακροπεπτίδια η οποία προκύπτει από την περιγραφόμενη διαδικασία.
The content of rennet whey solids is defined as the percentage by mass as determined by the caseinomacropeptide content by the procedure described.
Ανασύσταση του αποκορυφωμένου γάλακτος σε σκόνη, απομάκρυνση του λίπους και των πρωτεϊνών με τη βοήθεια τριχλωροξικού οξέος και φυγοκέντρηση ή διήθηση
Reconstitution of the skimmed-milk powder, removal of fat and proteins with trichloroacetic acid, followed by centrifugation or filtration.
Ποσοτικός προσδιορισμός των καζεϊνομακροπεπτιδίων (CMP) στο υπερκείμενο με υγροχρωματογραφία υψηλής απόδοσης (HPLC)
Determination of the quantity of caseinomacropeptides (CMP) in the supernatant by high-performance liquid chromatography (HPLC).
Αξιολόγηση του αποτελέσματος που προκύπτει για τα δείγματα με σύγκριση με πρότυπα δείγματα, τα οποία συνίστανται από αποκορυφωμένο γάλα σε σκόνη με ή χωρίς προσθήκη γνωστής εκατοστιαίας αναλογίας ορού γάλακτος σε σκόνη
Evaluation of the result obtained for the samples by reference to standard samples consisting of skimmed-milk powder with or without the addition of a known percentage of whey powder.
Διάλυμα τριχλωροξικού οξέος
Trichloroacetic acid solution
Διαλύονται 240 g τριχλωροξικού οξέος (CCl3COOH) σε νερό και συμπληρώνεται ο όγκος μέχρι τα 1000 ml.
Dissolve 240 g of trichloroacetic acid (CCl3COOH) in water and make up to 1000 ml.
Διάλυμα έκλουσης, pH 6,0
Eluent solution, pH 6,0
Διαλύονται σε περίπου 700 ml νερού 1,74 g όξινου φωσφορικού καλίου (K2HPO4), 12,37 g δισόξινου φωσφορικού καλίου (KH2PO4) και 21,41 g θειικoύ νατρίου (Na2SΟ4).
Dissolve 1,74 g of dipotassium hydrogen phosphate (K2HPO4), 12,37 g of potassium dihydrogen phosphate (KH2PO4) and 21,41 g of sodium sulphate (Na2SO4) in about 700 ml of water.
Εάν είναι αναγκαίο, ρυθμίζεται το pH σε 6,0 με διάλυμα φωσφορικού οξέος ή υδροξειδίου του καλίου.
Adjust, if necessary, to pH 6,0, using a solution of phosphoric acid or potassium hydroxide.
Προστίθεται νερό μέχρι τελικού όγκου 1000 ml και το διάλυμα ομογενοποιείται.
Make up to 1000 ml with water and homogenise.
Σημείωση: Η σύσταση του διαλύματος έκλουσης μπορεί να αναπροσαρμοστεί ώστε να είναι σύμφωνη με το πιστοποιητικό των προτύπων υλικών ή με τις συστάσεις του κατασκευαστή του υλικού πλήρωσης της στήλης.
Note: The composition of the eluent can be updated to comply with the certificate of the standards or the recommendations of the manufacturer of the column packing material.
Πριν χρησιμοποιηθεί, το διάλυμα έκλουσης διηθείται μέσω διηθητικής μεμβράνης με διάμετρο πόρων 0,45 μm.
Filter the eluent solution, prior to use, through a membrane filter with a 0,45 μm pore diameter.
Διαλύτης έκπλυσης
Flushing solvent
Αναμειγνύεται ένας όγκος ακετονιτριλίου (CH3CN) με εννέα όγκους νερού.
Mix one volume acetonitrile (CH3CN) with nine volumes water.
Πριν χρησιμοποιηθεί, το μείγμα διηθείται μέσω διηθητικής μεμβράνης με διάμετρο πόρων 0,45 μm.
Filter the mixture prior to use through a membrane filter with a 0,45 μm pore diameter.
Σημείωση: Μπορεί να χρησιμοποιηθεί οποιοσδήποτε άλλος διαλύτης έκπλυσης που έχει βακτηριοκτόνο δράση και δεν μεταβάλλει τη διαχωριστική ικανότητα των στηλών.
Note: Any other flushing solvent with a bactericidal effect which does not impair the columns’ resolution efficiency may be used.
Πρότυπα δείγματα
Standard samples
Αποκορυφωμένο γάλα σε σκόνη το οποίο ανταποκρίνεται στις απαιτήσεις του παρόντος κανονισμού (δηλαδή [0]).
Skimmed-milk powder meeting the requirements of this Resolution (i.e. [0])
Το ίδιο αποκορυφωμένο γάλα σε σκόνη, νοθευμένο σε αναλογία 5 % (m/m) με σκόνη γλυκού ορού γάλακτος πρότυπης σύστασης (δηλαδή [5])
The same skimmed-milk powder adulterated with 5 % (m/m) rennet-type whey powder of standard composition (i.e. [5]).
Προαιρετικά, φυγόκεντρος ικανή να επιτυγχάνει φυγόκεντρο δύναμη 2200 g, εφοδιασμένη με πωματισμένους σωλήνες φυγοκέντρου των 50 ml περίπου
Optional centrifuge capable of attaining a centrifugal force of 2200 g, fitted with stoppered or capped centrifuge tubes of about 50 ml capacity
Μηχανικό τάρακτρο
Mechanical shaker
Γυάλινες χοάνες, διαμέτρου περίπου 7 cm
Glass funnels, diameter about 7 cm
Χάρτινοι ηθμοί μέσης διηθητικής ικανότητας, διαμέτρου περίπου 12,5 cm
Filter papers, medium filtration, diameter about 12,5 cm
Γυάλινη συσκευή διήθησης, εφοδιασμένη με διηθητική μεμβράνη διαμέτρου πόρων 0,45 μm
Glass filtration equipment with 0,45 μm pore diameter membrane filter
Βαθμολογημένα σιφώνια παροχής 10 ml (ISO 648, κατηγορίας Α ή ISO/R 835) ή σύστημα διανομής ικανό να παρέχει 10,0 ml σε δύο λεπτά
Graduated pipettes allowing delivery of 10 ml (ISO 648, Class A, or ISO/R 835) or a dispensing system capable of delivering 10,0 ml in two minutes
Σύστημα διανομής ικανό να παρέχει 20,0 ml νερού θερμοκρασίας περίπου 50 °C
Dispensing system capable of delivering 20,0 ml water at ca. 50 °C
Θερμοστατούμενο υδατόλουτρο, ρυθμισμένο στους 25 ±0,5 °C
Thermostatic water bath, set at 25 ± 0,5 °C
Εξοπλισμός HPLC, ο οποίος περιλαμβάνει:
HPLC equipment, consisting of:
Αντλία
Pump
Σύστημα έγχυσης, χειροκίνητο ή αυτόματο, χωρητικότητας 15 έως 30 μl
Injector, hand or automatic, with a 15 to 30 μl capacity
Δύο στήλες TSK 2000 SW εν σειρά (μήκος 30 cm, εσωτερική διάμετρος 0,75 cm) ή ισοδύναμες στήλες (π.χ. μία TSK 2000-SWxl και μία Agilent Technologies Zorbax GF 250) και μια προστήλη (3 cm × 0,3 cm) με υλικό πλήρωσης I 125 ή υλικό ισοδύναμης αποτελεσματικότητας
Two TSK 2000-SW columns in series (length 30 cm, internal diameter 0,75 cm) or equivalent columns (e.g. single TSK 2000-SWxl, single Agilent Technologies Zorbax GF 250) and a precolumn (3 cm × 0,3 cm) packed with I 125 or material of equivalent effectiveness
Θερμοστατούμενο κλίβανο στήλης, ρυθμισμένο στους 35 ±1 °C
Thermostatic column oven, set at 35 ± 1 °C
Ανιχνευτή υπεριώδους ακτινοβολίας μεταβλητού μήκους κύματος, με δυνατότητα μετρήσεων στα 205 nm με ευαισθησία 0,008 ΑU
Variable wavelength UV detector, permitting measurements at 205 nm with a sensitivity of 0,008 A
Ολοκληρωτή με δυνατότητα ολοκλήρωσης μεταξύ των «κοιλάδων» του χρωματογραφήματος
Integrator capable of valley-to-valley integration
Σημείωση: Μπορούν να χρησιμοποιηθούν στήλες που διατηρούνται σε θερμοκρασία περιβάλλοντος αλλά η διαχωριστική τους ικανότητα είναι κατά τι μικρότερη.
Note: Working with columns kept at room temperature is possible, but their power of resolution is slightly lower.
Στην περίπτωση αυτή, οι διακυμάνσεις της θερμοκρασίας κατά την ίδια σειρά αναλύσεων πρέπει να είναι μικρότερες από ± 5 °C.
In that case, the temperature should vary by less than ± 5 °C in any one range of analyses.
Τα δείγματα πρέπει να λαμβάνονται με τη διαδικασία που καθορίζεται στο διεθνές πρότυπο ISO 707.
Samples must be taken in accordance with the procedure laid down in International Standard ISO 707.
Τα κράτη μέλη μπορούν ωστόσο να χρησιμοποιούν άλλη μέθοδο δειγματοληψίας, εφόσον αυτή είναι σύμφωνη με τις αρχές του προαναφερόμενου προτύπου.
However, Member States may use another method of sampling provided that it complies with the principles of the abovementioned standard.
Το δείγμα φυλάσσεται σε συνθήκες που αποκλείουν τη φθορά ή τη μεταβολή της σύστασης.
Store the sample in conditions which preclude any deterioration or change in composition.
Η σκόνη γάλακτος μεταφέρεται σε δοχείο χωρητικότητας περίπου διπλάσιας του όγκου της σκόνης, εφοδιασμένο με αεροστεγές πώμα.
Transfer the milk powder into a container with a capacity of about twice the volume of the powder, fitted with an airtight lid.
Τμήμα δείγματος δοκιμής
Test portion
Σε σωλήνα φυγοκέντρου (6.2) ή κατάλληλη φιάλη με πώμα (50 ml) ζυγίζονται 2,000 ±0,001 g δείγματος δοκιμής.
Weight 2,000 ± 0,001 g of test sample into a centrifuge tube (6.2) or a suitable stoppered flask (50 ml).
Απομάκρυνση του λίπους και των πρωτεϊνών
Removal of fat and proteins
Στο τμήμα δείγματος προστίθενται 20,0 ml θερμού νερού (50 °C).
Add 20,0 ml of warm water (50 °C) to the test portion.
Διαλύεται η σκόνη με ανακίνηση επί πέντε λεπτά σε μηχανικό τάρακτρο (6.3).
Dissolve the powder by shaking for five minutes using a mechanical shaker (6.3).
Ο σωλήνας τοποθετείται σε υδατόλουτρο (6.10) και αφήνεται να αποκτήσει ισορροπία στους 25 °C.
Place the tube into the water bath (6.10) and allow to equilibrate to 25 °C
Προστίθενται, σε διάστημα δύο λεπτών, 10,0 ml διαλύματος τριχλωροξικού οξέος (5.1) θερμοκρασίας περίπου 25 °C υπό ζωηρή ανάδευση στον μαγνητικό αναδευτήρα (6.4).
Add 10,0 ml of the trichloroacetic acid solution (5.1) of ca. 25 °C in two minutes, while stirring vigorously with the aid of the magnetic stirrer (6.4).
Ο σωλήνας τοποθετείται σε υδατόλουτρο (6.10) όπου παραμένει επί 60 λεπτά.
Place the tube in a water bath (6.10) and leave for 60 minutes
Ακολουθεί φυγοκέντρηση (6.2) στα 2200 g επί 10 λεπτά ή διήθηση μέσω χάρτινου ηθμού (6.6), ενώ απορρίπτονται τα πρώτα 5 ml του διηθήματος.
Centrifuge (6.2) for 10 minutes at 2200 g, or filter through paper (6.6), discarding the first 5 ml of filtrate
Εισάγονται 15 έως 30 μl υπερκειμένου ή διηθήματος (8.3.3), επακριβώς μετρημένα, στη συσκευή HPLC (6.11), η οποία λειτουργεί με ταχύτητα ροής 1,0 ml διαλύματος έκλουσης (5.2) ανά λεπτό.
Inject 15 to 30 μl of accurately measured supernatant or filtrate (8.3.3) into the HPLC apparatus (6.11) operating at a flow rate of 1,0 ml of eluent solution (5.2) per minute
Σημείωση 1: Μπορεί να εφαρμοστεί διαφορετική ταχύτητα ροής ανάλογα με τη εσωτερική διάμετρο των χρησιμοποιούμενων στηλών ή τις οδηγίες του κατασκευαστή τους.
Note 1. Another flow rate may be used, dependent of the internal diameter of the columns used or the instructions of the manufacturer of the column.
Σημείωση 2: Η θερμοκρασία του διαλύματος έκλουσης (5.2) πρέπει να διατηρείται στους 85 °C καθ’ όλη τη διάρκεια της χρωματογραφικής ανάλυσης, ώστε να διατηρείται απαεριωμένο το διάλυμα έκλουσης και να αποτρέπεται η ανάπτυξη βακτηριδίων.
Note 2. Keep the eluent solution (5.2) at 85 °C throughout the chromatographic analysis in order to keep the eluent degassed and to prevent bacterial growth.
Δεν πρέπει ποτέ να παραμένει σε αυτές το διάλυμα έκλουσης (5.2).
Never leave the eluent solution in them (5.2).
Πριν από κάθε διακοπή που υπερβαίνει τις 24 ώρες, εκπλύνονται οι στήλες με νερό και στη συνέχεια με το διάλυμα (5.3) τουλάχιστον επί τρεις ώρες, με ταχύτητα ροής 0,2 ml ανά λεπτό.
Prior to any interruption of more than 24 hours, rinse the columns with water then wash them with solution (5.3) for at least three hours at a flow rate of 0,2 ml per minute.
Τα αποτελέσματα της χρωματογραφικής ανάλυσης του δείγματος δοκιμής [Ε] λαμβάνονται υπό μορφή χρωματογραφήματος, στο οποίο κάθε κορυφή ταυτοποιείται από τον οικείο χρόνο κατακράτησης, RT, ως εξής:
The results of chromatographic analysis of the test sample [E] are obtained in the form of chromatogram in which each peak is identified by its retention time RT as follows:
Κορυφή ΙΙ:
Peak II:
Η δεύτερη κορυφή του χρωματογραφήματος, με RT 12,5 λεπτών περίπου
The second peak of the chromatogram having an RT of about 12,5 minutes.
Κορυφή ΙΙΙ:
Peak III:
Η τρίτη κορυφή του χρωματογραφήματος, η οποία αντιστοιχεί στα CMP, με RT 15,5 λεπτών
The third peak of the chromatogram, corresponding to the CMP, having an RT of 15,5 minutes.
Η επιλογή της ή των στηλών μπορεί να επηρεάσει σημαντικά τον χρόνο κατακράτησης των επιμέρους κορυφών.
The choice of the column(s) can effect the retention times of the individual peaks considerably.
Ο ολοκληρωτής (6.11.6) υπολογίζει αυτόματα το εμβαδόν Α κάθε κορυφής:
The integrator (6.11.6) automatically calculates the area A of each peak:
εμβαδόν της κορυφής II
area of peak II,
εμβαδόν της κορυφής III
area of peak III,
Πριν από την ποσοτική ερμηνεία, είναι απαραίτητο να εξετάζεται η μορφή κάθε χρωματογραφήματος για να εντοπιστούν τυχόν ανωμαλίες που οφείλονται είτε σε ελαττωματική λειτουργία της συσκευής ή των στηλών είτε στην προέλευση και το είδος του αναλυθέντος δείγματος.
It is essential to examine the appearance of each chromatogram prior to quantitative interpretation, in order to detect any abnormalities due either to malfunctioning of the apparatus or the columns, or to the origin and nature of the sample analysed.
Σε περίπτωση αμφιβολίας επαναλαμβάνεται η ανάλυση.
If in doubt, repeat the analysis.
Εφαρμόζεται κατά γράμμα στα πρότυπα δείγματα (5.4) η διαδικασία που περιγράφεται στα σημεία 8.2 έως 8.4.2.
Apply exactly the procedure described from point 8.2 to point 8.4.2 to the standard samples (5.4)
Χρησιμοποιούνται διαλύματα που έχουν παρασκευασθεί πρόσφατα, δεδομένου ότι τα CMP αποικοδομούνται σε περιβάλλον τριχλωροξικού οξέος 8 %.
Use freshly prepared solutions, because CMP degrade in an 8 % trichloroacetic environment.
Η σχετική απώλεια ουσίας εκτιμάται σε 0,2 % ανά ώρα στους 30 °C.
The loss is estimated at 0,2 % per hour at 30 °C.
Πριν από τον χρωματογραφικό προσδιορισμό στα δείγματα, οι στήλες προσαρμόζονται στις συνθήκες με επανειλημμένη εισαγωγή διαλύματος (8.5.1) του πρότυπου δείγματος (5.4.2) μέχρι να σταθεροποιηθούν το εμβαδόν και ο χρόνος κατακράτησης της κορυφής που αντιστοιχεί στα CMP.
Prior to chromatographic determination of the samples, condition the columns by repeatedly injecting the standard sample (5.4.2) in solution (8.5.1) until the area and retention time of the peak corresponding to the CMP are constant
Προσδιορίζονται οι συντελεστές απόκρισης, R, με την εισαγωγή του ίδιου όγκου διηθημάτων (8.5.1) με αυτόν των δειγμάτων.
Determine the response factors R by injecting the same volume of filtrates (8.5.1) as used for the samples
Μέθοδος υπολογισμού και τύποι
Method of calculation and formulae
Υπολογισμός των συντελεστών απόκρισης R:
Calculation of the response factors R:
ο συντελεστής απόκρισης της κορυφής ΙΙ
the response factors of peaks II,
το εμβαδόν της κορυφής ΙΙ του πρότυπου δείγματος [0], που λαμβάνεται στο σημείο 8.5.3
the areas of peaks II of the standard sample [0] obtained in 8.5.3.