natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Και στις δύο τεχνικές, έπειτα από δύο ή τρεις ημέρες επωάσεως, μετρώνται οι ανάστροφες αποικίες και ο αριθμός τους συγκρίνεται με τον αριθμό των αυθόρμητων ανάστροφων αποικιών σε τρυβλία-μάρτυρες με διαλύτη.
For both techniques, after two or three days of incubation, revertant colonies are counted and compared to the number of spontaneous revertant colonies on solvent control plates.
Έχουν περιγραφεί διάφορες διαδικασίες για την εκτέλεση της δοκιμής βακτηριακής ανάστροφης μετάλλαξης.
Several procedures for performing the bacterial reverse mutation test have been described.
Μεταξύ εκείνων που χρησιμοποιούνται συνήθως είναι η μέθοδος προσθήκης σε τρυβλίο (1) (2) (3) (4), η μέθοδος προεπωάσεως (2) (3) (5) (6) (7) (8), η μέθοδος διακύμανσης (9) (10) και η μέθοδος εναιωρήματος (11).
Among those commonly used are the plate incorporation method (1)(2)(3)(4), the preincubation method (2)(3)(5)(6)(7)(8), the fluctuation method (9)(10), and the suspension method (11).
Έχουν περιγραφεί επίσης και τροποποιήσεις για τη δοκιμασία αερίων η ατμών (12).
Modifications for the testing of gases or vapours have been described (12).
Οι διαδικασίες που περιγράφονται στη μέθοδο σχετίζονται κυρίως με τις μεθόδους προσθήκης σε τρυβλίο και προεπωάσεως.
The procedures described in the method pertain primarily to the plate incorporation and preincubation methods.
Και οι δύο είναι αποδεκτές για την πραγματοποίηση πειραμάτων και με και χωρίς μεταβολική ενεργοποίηση.
Either of them is acceptable for conducting experiments both with and without metabolic activation.
Ορισμένες ουσίες μπορούν να ανιχνευθούν αποτελεσματικότερα με τη μέθοδο προεπωάσεως.
Some substances may be detected more efficiently using the preincubation method.
Οι ουσίες αυτές ανήκουν σε μία σειρά χημικών τάξεων στην οποία περιλαμβάνονται οι αλειφατικές νιτροζαμίνες με βραχεία αλυσίδα, τα δισθενή μέταλλα, αλδεΰδες, αζωχρώματα και διαζωενώσεις, πυρολλιζιδινικά αλκαλοειδή, αλλυλοενώσεις και νιτροενώσεις (3).
These substances belong to chemical classes that include short chain aliphatic nitrosamines, divalent metals, aldehydes, azo-dyes and diazo compounds, pyrollizidine alkaloids, allyl compounds and nitro compounds (3).
Αναγνωρίζεται επίσης ότι ορισμένες τάξεις μεταλλαξιγόνων δεν ανιχνεύονται πάντοτε με τις τυποποιημένες διαδικασίες όπως με τη μέθοδο προσθήκης σε τρυβλίο ή με τη μέθοδο προεπωάσεως.
It is also recognised that certain classes of mutagens are not always detected using standard procedures such as the plate incorporation method or preincubation method.
Aυτές θα πρέπει να θεωρούνται ως «ειδικές περιπτώσεις» και συνιστάται ιδιαίτερα να χρησιμοποιούνται για την ανίχνευσή τους εναλλακτικές διαδικασίες.
These should be regarded as ‘special cases’ and it is strongly recommended that alternative procedures should be used for their detection.
Ως «ειδικές περιπτώσεις» μπορούν να αναφερθούν οι ακόλουθες (μαζί με παραδείγματα διαδικασιών που μπορούν να χρησιμοποιηθούν για την ανίχνευσή τους): αζωχρώματα και διαζωενώσεις (3) (5) (6) (13), αέρια και πτητικές ουσίες (12) (14) (15) (16) και γλυκοζίτες (17) (18).
The following ‘special cases’ could be identified (together with examples of procedures that could be used for their detection): azo-dyes and diazo compounds (3)(5)(6)(13), gases and volatile chemicals (12)(14)(15)(16) and glycosides (17)(18).
Τυχόν παρέκκλιση από την τυποποιημένη διαδικασία πρέπει να αιτιολογείται επιστημονικώς.
A deviation from the standard procedure needs to be scientifically justified.
Πρόσφατες καλλιέργειες βακτηρίων θα πρέπει να αφήνονται να αναπτυχθούν μέχρι το τελευταίο στάδιο της εκθετικής ή το πρώιμο στάδιο της στατικής φάσης αναπτύξεως (περίπου 109 κύτταρα ανά ml).
Fresh cultures of bacteria should be grown up to the late exponential or early stationary phase of growth (approximately 109 cells per ml).
Δεν θα πρέπει να χρησιμοποιούνται καλλιέργειες που βρίσκονται στο τελευταίο στάδιο της στατικής φάσης.
Cultures in late stationary phase should not be used.
Παίζει σημαντικό ρόλο οι χρησιμοποιούμενες καλλιέργειες να εμφανίζουν υψηλό τίτλο βιώσιμων βακτηρίων.
It is essential that the cultures used in the experiment contain a high titre of viable bacteria.
Ο τίτλος μπορεί να βρεθεί είτε από προϋπάρχοντα στοιχεία για τις καμπύλες αύξησης, είτε σε κάθε δοκιμή με τον προσδιορισμό του αριθμού των βιώσιμων κυττάρων με δοκιμή σε τρυβλίο.
The titre may be demonstrated either from historical control data on growth curves, or in each assay through the determination of viable cell numbers by a plating experiment.
Η συνιστώμενη θερμοκρασία επωάσεως είναι 37 oC.
The recommended incubation temperature is 37 oC.
Θα πρέπει να χρησιμοποιούνται πέντε τουλάχιστον στελέχη βακτηρίων.
At least five strains of bacteria should be used.
Σε αυτά θα πρέπει να περιλαμβάνονται τέσσερα στελέχη .8. typhimurium (ΤΑ 1535, ΤΑ 1537 ή TA97a ή ΤΑ97, ΤΑ98 και ΤA100) που έχει αποδειχθεί ότι είναι αξιόπιστα και παρέχουν αναπαραγώγιμες αποκρίσεις μεταξύ εργαστηρίων.
These should include four strains of S. typhimurium (TA 1535; TA 1537 or TA97a or TA97; TA98; and TA100) that have been shown to be reliable and reproducibly responsive between laboratories.
Τα τέσσερα αυτά στελέχη S. typhimurium έχουν GC ζεύγη βάσεων στην πρωταρχική θέση αναστροφής και είναι γνωστό ότι δεν μπορούν να εντοπίσουν ορισμένα οξειδωτικά μεταλλαξιγόνα, παράγοντες σταυροειδούς σύνδεσης και υδραζίνες.
These four S. typhimurium strains have GC base pairs at the primary reversion site and it is known that may not detect certain oxidising mutagens, cross-linking agents and hydrazines.
Οι ουσίες αυτές μπορούν να ανιχνευθούν με στελέχη Ε. coli WP2 ή S. typhimurium ΤΑ102 (19) που έχουν ένα ζεύγος βάσεων ΑΤ στην πρωταρχική θέση αναστροφής.
Such substances may be detected by E. coli WP2 strains or S. typhimurium TA102 (19), which have an AT base pair at the primary reversion site.
Συνεπώς, ο συνιστώμενος συνδυασμός στελεχών είναι:
Therefore the recommended combination of strains is:
typhimurium TA153 5 και
typhimurium TA1535, and
typhimurium TA1537 ή ΤΑ97 ή TA97a και
typhimurium TA1537 or TA97 or TA97a, and
typhimurium TA98 και
typhimurium TA98, and
typhimurium TA100 και
typhimurium TA100, and
coli WP2 uvrA ή Ε. coli WP2 uvrA (pKM 101) ή S. typhimurium ΤA102.
coli WP2 uvrA, or E. coli WP2 uvrA (pKM101), or S. typhimurium TA102.
Για την παρασκευή έτοιμων καλλιεργειών, την επαλήθευση ιχνηθετών και την αποθήκευση θα πρέπει να χρησιμοποιούνται καθιερωμένες διαδικασίες.
Established procedures for stock culture preparation, marker verification and storage should be used.
Για κάθε κατεψυγμένο παρασκεύασμα έτοιμης καλλιέργειας θα πρέπει να καταδεικνύεται ότι απαιτεί αμινοξύ για να αναπτυχθεί (ιστιδΐνη για στελέχη S. typhimurium και θρυπτοφάνη για στελέχη Ε. coli).
The amino-acid requirement for growth should be demonstrated for each frozen stock culture preparation (histidine for S. typhimurium strains, and tryptophan for E. coli strains).
Θα πρέπει ομοίως να ελέγχονται προς επιβεβαίωση και άλλα ψαινοτυπικά χαρακτηριστικά, συγκεκριμένα: η παρουσία ή απουσία πλασμιδίων R-παράγοντα όπου χρειάζεται [δηλαδή αντίσταση αμπικιλλίνης σε στελέχη ΤΑ98, ΤΑ 100 και TA97a ή ΤΑ97, VVP2 uvrA και WP2 uvrA (pKM101), και αντίσταση αμπικιλλίνης + τετρακυκλίνης σε στέλεχος ΤΑ 102], η παρουσία χαρακτηριστικών μεταλλάξεων (δηλαδή rfa μετάλλαξη σε S. typhimurium μέσω της ευαισθησίας σε κρυσταλλικό ιώδες και uvrΑμετάλλαξη σε Ε. coli ή uvrB μετάλλαξη σε S. typhimurium μέσω της ευαισθησίας σε υπεριώδες φως (2 (3.
Other phenotypic characteristics should be similarly checked, namely: the presence or absence of R-factor plasmids where appropriate [i.e. ampicillin resistance in strains TA98, TA100 and TA97a or TA97, WP2 uvrA and WP2 uvrA (pKM101), and ampicillin + tetracycline resistance in strain TA102]; the presence of characteristic mutations (i.e. rfa mutation in S. typhimurium through sensitivity to crystal violet, and uvrA mutation in E. coli or uvrB mutation in S. typhimurium, through sensitivity to ultraviolet light) (2)(3).
Τα στελέχη θα πρέπει επίσης να δίνουν έναν αριθμό αυθόρμητων ανάστροφων αποικιών σε τρυβλίο που να πέφτει μέσα στις περιοχές συχνοτήτων που αναμένονται από τα προϋπάρχοντα εργαστηριακά δεδομένα, και κατά προτίμηση, μέσα στην περιοχή που αναφέρεται στη βιβλιογραφία.
The strains should also yield spontaneous revertant colony plate counts within the frequency ranges expected from the laboratory's historical control data and preferably within the range reported in the literature.
Μέσον καλλιέργειας
Medium
Χρησιμοποιείται κατάλληλο ελάχιστο άγαρ (π.χ. άγαρ που περιέχει ελάχιστο μέσο Ε Vogel-Bonner και γλυκόζη) και άγαρ επίστρωσης που περιέχει ιστιδίνη και βιοτίνη ή τρυπτοφάνη για να μπορούν να γίνουν μερικές κυτταρικές διαιρέσεις (1) (2) (9).
An appropriate minimal agar (e.g. containing Vogel-Bonner minimal medium E and glucose), and an overlay agar containing histidine and biotin or tryptophan to allow for a few cell divisions, is used (1)(2)(9).
Τα βακτήρια θα πρέπει να εκτίθενται στην υπό δοκιμή ουσία παρουσία και απουσία κατάλληλου συστήματος μεταβολικής ενεργοποίησης.
Bacteria should be exposed to the test substance both in the presence and absence of an appropriate metabolic activation system.
Το συνηθέστερα χρησιμοποιούμενο σύστημα είναι ένα μεταμιτοχονδριακό κλάσμα εμπλουτισμένο με συμπαράγοντα (S9) που παρασκευάζεται από το ήπαρ τρωκτικών που έχει υποβληθεί σε κατεργασία με ενζυμοεπαγωγικούς παράγοντες όπως το Aroclor 1254 (1) (2) ή μείγμα φαινοβαρβιτόνης και β-ναφθοφλαβόνης (18) (20) (21).
The most commonly used system is a cofactor-supplemented post-mitochondrial fraction (S9) prepared from the livers of rodents treated with enzyme-inducing agents such as Aroclor 1254 (1)(2) or a combination of Phenobarbitone and ß-naphthoflavone (18)(20)(21).
Το μεταμιτοχονδριακό κλάσμα χρησιμοποιείται συνήθως σε συγκεντρώσεις της τάξεως του 5 έως 30 % ν/ν στο S9—μείγμα.
The post-mitochondrial fraction is usually used at concentrations in the range from 5 to 30 % v/v in the S9-mix.
Η επιλογή και κατάσταση ενός συστήματος μεταβολικής ενεργοποίησης μπορεί να εξαρτάται από την τάξη της υπό δοκιμή χημικής ουσίας.
The choice and condition of a metabolic activation system may depend upon the class of chemical being tested.
Σε ορισμένες περιπτώσεις μπορεί να χρειάζεται να χρησιμοποιηθούν περισσότερες από μία συγκεντρώσεις μεταμιτοχονδριακού κλάσματος.
In some cases, it may be appropriate to utilise more than one concentration of post-mitochondrial fraction.
Στην περίπτωση των αζωχρωμάτων και των αζωενώσεων, μπορεί να είναι καλύτερα να χρησιμοποιηθεί αναγωγικό σύστημα μεταβολικής ενεργοποίησης (6) (13).
For azo-dyes and diazo-compounds, using a reductive metabolic activation system may be more appropriate (6)(13).
Οι στερεές υπό δοκιμή ουσίες πρέπει να διαλύονται ή να τίθενται υπό μορφή εναιωρήματος σε κατάλληλους διαλύτες ή φορείς και να αραιώνονται εφόσον απαιτείται πριν από την κατεργασία των βακτηρίων.
Solid test substances should be dissolved or suspended in appropriate solvents or vehicles and diluted if appropriate prior to treatment of the bacteria.
Πρέπει να χρησιμοποιούνται πρόσφατα παρασκευάσματα της υπό δοκιμή ουσίας εκτός κι αν τα σχετικά με τη σταθερότητα της ουσίας στοιχεία επιτρέπουν τη χρήση έτοιμων παρασκευασμάτων.
Fresh preparations should be employed unless stability data demonstrate the acceptability of storage.
Δεν πρέπει να υπάρχουν υπόνοιες για πιθανή χημική αντίδραση του διαλύτη/φορέα με την υπό δοκιμή ουσία ενώ θα πρέπει να είναι συμβατός με την επιβίωση των βακτηρίων και τη δραστικότητα S9 (22).
The solvent/vehicle should not be suspected of chemical reaction with the test substance and should be compatible with the survival of the bacteria and the S9 activity (22).
Υπό δοκιμή στελέχη (βλέπε σημείο 1.5.1.1)
Test strains (see 1.5.1.1)
Μεταξύ των κριτηρίων που πρέπει να λαμβάνονται υπόψη για τον καθορισμό της μέγιστης για χρήση ποσότητας υπό δοκιμή ουσίας είναι η κυτταροτοξικότητα και η διαλυτότητα στο τελικό μίγμα κατεργασίας.
Amongst the criteria to be taken into consideration when determining the highest amount of the test substance to be used are the cytotoxicity and the solubility in the final treatment mixture.
Μπορεί να είναι σκόπιμο να προσδιοριστεί η τοξικότητα και η δυσδιαλυτότητα με μία προκαταρκτική δοκιμή.
It may be useful to determine toxicity and insolubility in a preliminary experiment.
Η κυτ-ταροτοξικότητα μπορεί να βρεθεί από τη μείωση του αριθμού των ανάστροφων αποικιών, το μηδενισμό ή την ελάττωση του υποστρώματος ή το βαθμό επιβίωσης των εξεταζομένων καλλιεργειών.
Cytotoxicity may be detected by a reduction in the number of revertant colonies, a clearing or diminution of the background lawn, or the degree of survival of treated cultures.
Η κυτταροτοξικότητα μιας ουσίας μπορεί να μεταβληθεί παρουσία συστημάτων μεταβολικής ενεργοποίησης.
The cytotoxicity of a substance may be altered in the presence of metabolic activation systems.
Η δυσδιαλυτότητα θα πρέπει να εκτιμάται με βάση την πτώση ιζήματος στο τελικό μίγμα υπό τις πραγματικές συνθήκες δοκιμής που είναι εμφανής με γυμνό οφθαλμό.
Insolubility should be assessed as precipitation in the final mixture under the actual test conditions and evident to the unaided eye.
Η συνιστώμενη μέγιστη συγκέντρωση δοκιμής για διαλυτές μη κυτταροτοξικές ουσίες είναι 5 mg/τρυβλίο ή 5 ml/τρυβλίο.
The recommended maximum test concentration for soluble non-cytotoxic substances is 5 mg/plate or 5 μl/plate.
Για μη κυτταροτοξικές ουσίες που δεν είναι διαλυτές σε επίπεδα συγκεντρώσεως 5 mg/τρυβλίο ή 5 ml/τρυβλίο, μία ή περισσότερες από τις χρησιμοποιούμενες στη δοκιμή συγκεντρώσεις θα πρέπει να καθιστούν την ουσία αδιάλυτη στο τελικό μίγμα κατεργασίας.
For non-cytotoxic substances that are not soluble at 5 mg/plate or 5 μl/plate, one or more concentrations tested should be insoluble in the final treatment mixture.
Οι υπό δοκιμή ουσίες που είναι κυτταροτοξικές ήδη από επίπεδα συγκεντρώσεως κάτω των 5 mg/τρυβλίο ή 5 ml/τρυβλίο θα πρέπει να υποβάλλονται στη δοκιμή μέχρι του επιπέδου της κυτταροτοξικής συγκέντρωσης.
Test substances that are cytotoxic already below 5 mg/plate or 5 μl/plate should be tested up to a cytotoxic concentration.
Στα αρχικά πειράματα θα πρέπει να χρησιμοποιούνται τουλάχιστον πέντε διαφορετικές αναλώσιμες συγκεντρώσεις της υπό δοκιμή ουσίας με ημιλογαριθμικά περίπου διαστήματα (δηλαδή 10) μεταξύ των σημείων δοκιμής.
At least five different analysable concentrations of the test substance should be used with approximately half log (i.e. √10) intervals between test points for an initial experiment.
Όταν διερευνάται η σχέση συγκέντρωσης/απόκρισης, μπορεί να είναι σκόπιμο να χρησιμοποιηθούν μικρότερα διαστήματα.
Smaller intervals may be appropriate when a concentration-response is being investigated.
Όταν αξιολογούνται ουσίες που περιέχουν σημαντικές ποσότητες δυνητικά μεταλλαξιγόνων προσμείξεων, μπορεί να εξεταστεί και η διενέργεια δοκιμής σε συγκεντρώσεις μεγαλύτερες από τα 5 mg/τρυβλίο ή 5 ml/τρυβλίο.
Testing above the concentration of 5 mg/plate or 5 μl/plate may be considered when evaluating substances containing substantial amounts of potentially mutagenic impurities.
Σε κάθε δοκιμή θα πρέπει να περιλαμβάνονται παράλληλα και καλλιέργειες με εξειδικευμένους για το στέλεχος θετικούς και αρνητικούς (διαλύτης ή φορέας) μάρτυρες.
Concurrent strain-specific positive and negative (solvent or vehicle) controls, both with and without metabolic activation, should be included in each assay.
Θα πρέπει να επιλέγονται συγκεντρώσεις θετικών μαρτύρων που αποδεικνύουν την αποτελεσματικότητα κάθε δοκιμής.
Positive control concentrations that demonstrate the effective performance of each assay should be selected.
Σε δοκιμές στις οποίες χρησιμοποιείται σύστημα μεταβολικής ενεργοποίησης, ο ή οι θετικοί μάρτυρες αναφοράς θα πρέπει να επιλέγονται με βάση το είδος των χρησιμοποιουμένων βακτηριακών στελεχών.
For assays employing a metabolic activation system, the positive control reference substance(s) should be selected on the basis of the type of bacteria strains used.
Παραδείγματα κατάλληλων θετικών μαρτύρων για δοκιμές με μεταβολική ενεργοποίηση αποτελούν οι παρακάτω ουσίες: Ουσια
The following substances are examples of suitable positive controls for assays with metabolic activation:
Αριθ. CAS
CA numbers
Στέλεχος
Names
7,12-διμεθυλοβενζ[α]ανθρακένιο
9,10-dimethylanthracene
βενζο[α]πυρένιο
7,12-dimethylbenz[a]anthracene
Κυκλοφωσφαμίδιο
2-aminoanthracene
Μονοένυδρο κυκλοφωσφαμίδιο
cyclophosphamide
Ουσία
The following substance is a suitable positive control for the reductive metabolic activation method:
Το 2-αμινοανθρακένιο δεν θα πρέπει να χρησιμοποιείται ως αποκλειστικός δείκτης της αποτελεσματικότητας του S9-Μείγματος.
2-Aminoanthracene should not be used as the sole indicator of the efficacy of the S9-mix.
Εάν χρησιμοποιηθεί 2-αμινοανθρακένιο, κάθε παρτίδα S9 θα πρέπει να χαρακτηρίζεται και με ένα μεταλλαξιγόνο που απαιτεί μεταβολική ενεργοποίηση από μικροσωμικά ένζυμα, π.χ. βενζο[α]πυρένιο, διμεθυλοβενζανθρακένιο.
If 2-aminoanthracene is used, each batch of S9 should also be characterised with a mutagen that requires metabolic activation by microsomal enzymes, e.g. benzo[a]pyrene, dimethylbenzanthracene.
Οι ουσίες που ακολουθούν αποτελούν παραδείγματα εξειδικευμένων κατά στέλεχος θετικών μαρτύρων για δοκιμές που εκτελούνται χωρίς εξωγενές σύστημα μεταβολικής ενεργοποίησης:
The following substances are examples of strain-specific positive controls for assays performed without exogenous metabolic activation system:
Αζίδιο του νατρίου
Strain
ΤΑ 1535 και ΤΑ 100 2-νιτροφθορένιο
TA 1535 and TA 100
ΤΑ 1537, ΤΑ 97 και ΤΑ 97a Υδροπεροξείδιο του κουμενίου
TA 1537, TA 97 and TA 97a
Μιτομυκίνη C
Mitomycin C
uvrA και ΤΑ 102 Ν-αιθυλο-Ν-νιτρο-Ν-νιτροζογουανιδίνη
uvrA and TA102
YVP2, VP2uvrA και WP2uvrA(pKM101)
N-ethyl-N-nitro-N-nitrosoguanidine
Φουρυλοφουραμίδιο (AF2)
WP2, WP2uvrA and WP2uvrA(pKM101)
WP2, WP2uvrA και WP2uvrA(pKM101)
4-nitroquinoline-1-oxide
Στη μέθοδο της προσθήκης σε τρυβλίο (1) (2) (3) (4), χωρίς μεταβολική ενεργοποίηση, αναμειγνύονται συνήθως 0,05 ml ή 0,1 ml των διαλυμάτων δοκιμής, 0,1 ml πρόσφατης βακτηριακής καλλιέργειας (που περιέχει περίπου 108 βιώσιμα κύτταρα) και 0,5 ml στείρου ρυθμιστικού διαλύματος με 2,0 ml άγαρ επιστρώσεως.
For the plate incorporation method (1)(2)(3)(4), without metabolic activation, usually 0,05 ml or 0,1 ml of the test solutions, 0,1 ml of fresh bacterial culture (containing approximately 108 viable cells) and 0,5 ml of sterile buffer are mixed with 2,0 ml of overlay agar.
Στη δοκιμή με μεταβολική ενεργοποίηση, αναμειγνύονται συνήθως 0,5 ml μίγματος μεταβολικής ενεργοποίησης που περιέχει κατάλληλη ποσότητα μεταμιτοχονδριακού κλάσματος (της τάξεως του 5 έως 30 % ν/ν στο μείγμα μεταβολικής ενεργοποίησης) με το άγαρ επιστρώσεως (2,0 ml), μαζί με τα βακτήρια και την ουσία δοκιμής/διάλυμα δοκιμής.
For the assay with metabolic activation, usually 0,5 ml of metabolic activation mixture containing an adequate amount of post-mitochondrial fraction (in the range from 5 to 30 % v/v in the metabolic activation mixture) are mixed with the overlay agar (2,0 ml), together with the bacteria and test substance/test solution.
Το περιεχόμενο κάθε σωλήνα ανακατεύεται και φέρεται στην επιφάνεια τρυβλίου με ελάχιστο άγαρ.
The contents of each tube are mixed and poured over the surface of a minimal agar plate.
Το άγαρ επιστρώσεως αφήνεται να στερεοποιηθεί πριν από την επώαση.
The overlay agar is allowed to solidify before incubation.
Στη μέθοδο της προεπωάσεως (2) (3) (5) (6), η ουσία δοκιμής/διάλυμα δοκιμής προεπωάζεται με το υπό δοκιμή στέλεχος (που περιέχει περίπου 108 βιώσιμα κύτταρα) και στείρο ρυθμιστικό διάλυμα ή το σύστημα μεταβολικής ενεργοποίησης (0,5 ml) συνήθως για 20 λεπτά ή και περισσότερο στους 30-37 oC πριν να αναμειχθεί με το άγαρ επιστρώσεως και να επιστρωθεί στην επιφάνεια τρυβλίου με ελάχιστο άγαρ.
For the preincubation method (2)(3)(5)(6), the test substance/test solution is preincubated with the test strain (containing approximately 108 viable cells) and sterile buffer or the metabolic activation system (0,5 ml) usually for 20 min. or more at 30-37 oC prior to mixing with the overlay agar and pouring onto the surface of a minimal agar plate.
Συνήθως, 0,05 ή 0,1 ml της υπό δοκιμή ουσίας/διαλύματος δοκιμής, 0,1 ml βακτηρίων και 0,5 ml S9-μείγματος ή στείρου ρυθμιστικού αναμειγνύονται με 2,0 ml άγαρ επιστρώσεως.
Usually, 0,05 or 0,1 ml of test substance/test solution, 0,1 ml of bacteria, and 0,5 ml of S9-mix or sterile buffer are mixed with 2,0 ml of overlay agar.
Οι σωλήνες, κατά τη διάρκεια της προεπώασης, θα πρέπει να αερίζονται με τη χρήση αναταρακτη.
Tubes should be aerated during pre-incubation by using a shaker.
Για τη σωστή εκτίμηση της διακύμανσης, σε κάθε επίπεδο δύσεως θα πρέπει να χρησιμοποιείται τριπλή επίστρωση.
For an adequate estimate of variation, triplicate plating should be used at each dose level.
Εφόσον αιτιολογείται επιστημονικώς, μπορεί να χρησιμοποιηθεί και διπλή επίστρωση.
The use of duplicate plating is acceptable when scientifically justified.
Τυχαία απώλεια τρυβλίου δεν καθιστά κατ' ανάγκη άκυρη τη δοκιμή.
The occasional loss of a plate does not necessarily invalidate the assay.
Αέριες ή πτητικές ουσίες θα πρέπει να υποβάλλονται σε δοκιμή με κατάλληλες μεθόδους, όπως π.χ. σε σφραγισμένα δοχεία (12) (14) (15) (16).
Gaseous or volatile substances should be tested by appropriate methods, such as in sealed vessels (12)(14)(15)(16).
Επώαση
Incubation
Όλα τα τρυβλία σε μία δεδομένη δοκιμή 9α πρέπει να επωάζονται στους 37 oC για 48-72 ώρες.
All plates in a given assay should be incubated at 37 oC for 48-72 hours.
Μετά την περίοδο επώασης, μετράται ο αριθμός των ανάστροφων αποικιών ανά τρυβλίο.
After the incubation period, the number of revertant colonies per plate is counted.
Τα δεδομένα θα πρέπει να παρουσιάζονται ως ο αριθμός των ανάστροφων αποικιών ανά τρυβλίο.
Data should be presented as the number of revertant colonies per plate.
Θα πρέπει επίσης να δίνεται και ο αριθμός των ανάστροφων αποικιών στα τρυβλία που χρησιμοποιήθηκαν ως αρνητικός (διαλύτης-μάρτυρας και μη υποβληθείς σε κατεργασία μάρτυρας, εφόσον χρησιμοποιείται) και θετικός μάρτυρας.
The number of revertant colonies on both negative (solvent control, and untreated control if used) and positive control plates should also be given.
Για την υπό δοκιμή ουσία καθώς και για το θετικό και αρνητικό (μη κατεργασθείς ή/και διαλύτης) μάρτυρα θα πρέπει να δίνονται στοιχεία με τους επιμέρους κατά τρυβλίο αριθμούς, το μέσο αριθμό των ανάστροφων αποικιών ανά τρυβλίο και την τυπική απόκλιση.
Individual plate counts, the mean number of revertant colonies per plate and the standard deviation should be presented for the test substance and positive and negative (untreated and/or solvent) controls.
Τα αρνητικά αποτελέσματα πρέπει να επιβεβαιώνονται κατά περίπτωση.
Negative results need to be confirmed on a case-by-case basis.
Στις παραμέτρους που μπορούν να τροποποιηθούν περιλαμβάνεται το εύρος της συγκέντρωσης, η μέθοδος κατεργασίας (προσθήκη σε τρυβλίο ή προεπώαση σε υγρό περιβάλλον) και οι συνθήκες μεταβολικής ενεργοποίησης.
Study parameters that might be modified include the concentration spacing, the method of treatment (plate-incorporation or liquid pre-incubation), and metabolic activation conditions.
Για να θεωρηθεί ένα αποτέλεσμα ως θετικό εφαρμόζονται διάφορα κριτήρια όπως η σχετιζόμενη με την συγκέντρωση αύξηση στην περιοχή δοκιμής ή/και μία αναπαραγώγιμη αύξηση υπό μία ή περισσότερες συγκεντρώσεις στον αριθμό των ανάστροφων αποικιών ανά τρυβλίο σε ένα τουλάχιστον στέλεχος με ή χωρίς σύστημα μεταβολικής ενεργοποίησης (23).
There are several criteria for determining a positive result, such as a concentration-related increase over the range tested and/or a reproducible increase at one or more concentrations in the number of revertant colonies per plate in at least one strain with or without metabolic activation system (23).
Ως βοήθημα στην αξιολόγηση των αποτελεσμάτων των δοκιμών μπορούν να χρησιμοποιούνται και στατιστικές μέθοδοι (24).
Statistical methods may be used as an aid in evaluating the test results (24).
Πάντως, σε μία θετική απόκριση, δεν θα πρέπει ως μοναδικός αποφασιστικός παράγοντας να λαμβάνεται η στατιστική σημαντικότητα.
However, statistical significance should not be the only determining factor for a positive response.