natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Έγκυρα αποτελέσματα από τη δοκιμή FISH παρέχονται όταν, χρησιμοποιώντας φίλτρο FITC, παρατηρούνται κύτταρα που είναι χρωσμένα με λαμπρό φθορίζον πράσινο χρώμα και διαθέτουν το τυπικό μέγεθος και μορφολογία του R. solanacearum και, όταν, χρησιμοποιώντας φίλτρο ροδαμίνης, παρατηρούνται κύτταρα χρωσμένα με λαμπρό φθορίζον κόκκινο χρώμα σε όλους τους θετικούς μάρτυρες και σε κανέναν αρνητικό μάρτυρα.
Valid FISH test results are obtained if bright green fluorescent cells of size and morphology typical of R. solanacearum are observed using the FITC filter and bright red fluorescent cells using the rhodamine filter in all positive controls and not in any of the negative controls.
Τα δείγματα με τουλάχιστον 5x 103 τυπικά κύτταρα ανά ml αναδιαλυμένου ιζήματος θεωρούνται ενδεχομένως μολυσμένα.
Samples with at least 5 × 103 typical cells per ml of resuspended pellet are considered potentially contaminated.
Τα δείγματα με λιγότερα από 5x 103 τυπικά κύτταρα ανά ml αναδιαλυμένου ιζήματος θεωρούνται αρνητικά.
Samples with less than 5 × 103 typical cells per ml of resuspended pellet are considered negative.
Η δοκιμή FISH είναι αρνητική εάν κύτταρα χρωσμένα με λαμπρό φθορίζον κόκκινο χρώμα, τα οποία έχουν το τυπικό μέγεθος και μορφολογία του R. solanacearum, δεν παρατηρούνται με φίλτρο ροδαμίνης, υπό την προϋπόθεση ότι τυπικά κύτταρα χρωσμένα με λαμπρό φθορίζον κόκκινο χρώμα παρατηρούνται στα παρασκευάσματα θετικών μαρτύρων όταν χρησιμοποιείται φίλτρο ροδαμίνης.
The FISH test is negative if bright red fluorescent cells with size and morphology typical of R. solanacearum are not observed using the rhodamine filter, provided that typical bright red fluorescent cells are observed in the positive control preparations when using the rhodamine filter.
Δοκιμές ELISA
ELISA tests
Η δοκιμή ELISA είναι δυνατόν να χρησιμοποιηθεί μόνον ως προαιρετική δοκιμή επιπροσθέτως προς τις δοκιμές IF, PCR ή FISH λόγω της σχετικά χαμηλής ευαισθησίας της δοκιμής αυτής.
ELISA can only be used as an optional test in addition to IF, PCR or FISH due to a relatively low sensitivity of this test.
Όταν χρησιμοποιείται η DAS ELISA, είναι υποχρεωτικός ο εμπλουτισμός και η χρήση μονοκλωνικών αντισωμάτων (βλ.ιστοχώρο http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).
When DAS ELISA is used enrichment and the use of monoclonal antibodies are compulsory (see web site http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).
Ο εμπλουτισμός των δειγμάτων πριν από τη χρήση της δοκιμής ELISA ενδέχεται να χρησιμεύσει για την ενίσχυση της ευαισθησίας της δοκιμής, αλλά μπορεί να αποτύχει λόγω ανταγωνισμού από άλλους οργανισμούς στο δείγμα.
Enrichment of the samples before using ELISA may be useful in order to increase the sensitivity of the test, but it can fail due to competition by other organisms in the sample.
Σημείωση: Χρησιμοποιούμε επικυρωμένη πηγή αντισωμάτων του R. solanacearum (βλ. ιστοχώρο http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main). Συνιστάται ο προσδιορισμός του τίτλου για κάθε νέα παρτίδα αντισωμάτων.
Note: Use an validated source of antibodies to R. solanacearum (see web site http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main) It is recommended that the titre is determined for each new batch of antibodies.
Ως τίτλος ορίζεται η μεγαλύτερη αραίωση στην οποία λαμβάνει χώρα η βέλτιστη αντίδραση όταν υποβάλλεται σε δοκιμή αιώρημα που περιέχει 105 έως 106 κύτταρα ανά ml του ομόλογου στελέχους του R. solanacearum και χρησιμοποιείται κατάλληλο δευτερεύον σύμπλοκο αντισωμάτων σύμφωνα με τις συστάσεις του κατασκευαστή.
The titre is defined as the highest dilution at which optimum reaction occurs when testing a suspension containing 105 to 106 cells per ml of the homologous strain of R. solanacearum and using appropriate secondary antibody conjugates according to the manufacturer’s recommendations.
Κατά τη διάρκεια της δοκιμής, τα αντισώματα πρέπει να χρησιμοποιούνται σε αραίωση εργασίας στον τίτλο ή κοντά στον τίτλο του εμπορικού σκευάσματος.
During testing, the antibodies should be used at a working dilution close to or at the titre of the commercial formulation.
Προσδιορίζουμε τον τίτλο των αντισωμάτων σε αιώρημα 105 έως 106 κυττάρων ανά ml ομόλογου στελέχους του R. solanacearum.
Determine the titre of the antibodies on a suspension of 105 to 106 cells per ml of the homologous strain of R. solanacearum.
Περιλαμβάνουμε εκχύλισμα δείγματος που προηγουμένως ήταν αρνητικό στις δοκιμές όσον αφορά το R. solanacearum και αιώρημα ενός μη ειδικώς αντιδρώντος βακτηρίου σε φωσφορικό ρυθμιστικό διάλυμα άλατος (PBS) ως αρνητικούς μάρτυρες.
Include a sample extract that previously tested negative for R. solanacearum and a suspension of a non-cross reacting bacterium in phosphate buffered saline (PBS) as negative controls.
Ως θετικό μάρτυρα χρησιμοποιούμε κατάλληλες ποσότητες εκχυλίσματος δείγματος που προηγουμένως ήταν αρνητικό στις δοκιμές, αναμεμειγμένες με 103 έως 104 κύτταρα ανά ml του R. solanacearum βιοποικιλία 2 (π.χ. στέλεχος NCPPB 4156 = PD 2762 = CFBP 3857, βλ. προσάρτημα 2 A και B).
As positive control use aliquots of sample extract, that previously tested negative, mixed with 103 to 104 cells per ml of R. solanacearum biovar 2 (e.g. strain NCPPB 4156 = PD 2762 = CFBP 3857, see Appendix 2 A and B).
Για τη σύγκριση των αποτελεσμάτων σε κάθε πλάκα χρησιμοποιούμε τυποποιημένο αιώρημα 105 έως 106 κυττάρων ανά ml σε φωσφορικό ρυθμιστικό διάλυμα άλατος (PBS) του R. solanacearum.
For comparison of results on each plate use a standard suspension of 105 to 106 cells per ml in PBS of R. solanacearum.
Εξασφαλίζουμε ότι οι θετικοί μάρτυρες είναι καλά διαχωρισμένοι στη μικρότιτλη πλάκα από το(-α) υπό εξέταση δείγμα(-τα).
Ensure positive controls are well separated on the microtitre plate from the sample(s) under test.
Στο προσάρτημα 3 σημείο Α παρατίθενται τυποποιημένα υλικά θετικών και αρνητικών μαρτύρων που διατίθενται προς χρήση με αυτή τη δοκιμή.
Standardised positive and negative control materials available for use with this test are listed in Appendix 3 A.
Έχουν επικυρωθεί δύο πρωτόκολλα ELISA:
Two ELISA protocols have been validated.
Έμμεση ELISA (Robinson Smith et al., 1995)
Indirect ELISA (Robinson Smith et al., 1995)
Χρησιμοποιούμε ποσότητες 100-200 µl εκχυλίσματος δείγματος.
Use 100 to 200 µl aliquots of sample extract.
(Η θέρμανση στους 100 °C για 4 λεπτά σε υδατόλουτρο ή θερμικό μπλοκ μπορεί να μειώσει σε ορισμένες περιπτώσεις τα μη εξειδικευμένα αποτελέσματα.)
(Heating at 100 °C for four minutes in a waterbath or heating block may reduce non-specific results in some cases).
Προστίθεται ίσος όγκος ρυθμιστικού διαλύματος επικάλυψης διπλής ιοντικής ισχύος (προσάρτημα 4) και ανακατεύουμε σε συσκευή vortex.
Add an equal volume of double strength coating buffer (Appendix 4) and vortex.
Εφαρμόζονται ποσότητες 100 μl σε κάθε ένα από δύο τουλάχιστον φατνία της πλάκας μικροτιτλοδότησης (π.χ. Nunc-Polysorp ή ισοδύναμη) και επωάζονται για 1 ώρα στους 37 °C ή όλη τη νύκτα στους 4 °C.
Apply 100 µl aliquots to each of at least two wells of a microtitre plate (e.g. Nunc-Polysorp or equivalent) and incubate for one hour at 37 °C or overnight at 4 °C.
Τα εκχυλίσματα τινάζονται ελαφρά για να απομακρυνθούν από τα φατνία.
Flick out the extracts from the wells.
Τα φατνία πλένονται τρεις φορές με PBS-Tween (προσάρτημα 4), αφήνοντας το τελευταίο διάλυμα πλυσίματος στα φατνία για 5 λεπτά τουλάχιστον.
Wash the wells three times with PBS-Tween (Appendix 4), leaving the last washing solution in the wells for at least five minutes.
Παρασκευάζεται η κατάλληλη αραίωση αντισωμάτων κατά του R. solanacearum σε ρυθμιστικό διάλυμα φραγμού (προσάρτημα 4).
Prepare the appropriate dilution of antibodies against-R. solanacearum in blocking buffer (Appendix 4).
Για επικυρωμένα αντισώματα του εμπορίου, χρησιμοποιούμε τις συνιστώμενες αραιώσεις (συνήθως διπλά συγκεντρωμένες σε σχέση με τον τίτλο).
For validated commercial antibodies, use the recommended dilutions (usually twice as concentrated as the titre).
Προσθέτουμε 100 µl σε κάθε φατνίο και επωάζουμε για 1 ώρα στους 37 °C.
Add 100 µl to each well and incubate for one hour at 37 °C.
Τινάζουμε ελαφρά το διάλυμα αντισωμάτων από τα φατνία και πλένουμε όπως προηγουμένως (σημείο 4).
Flick out the antibody solution from the wells and wash as before (4).
Παρασκευάζεται η κατάλληλη αραίωση του δευτερεύοντος συμπλόκου αντισώματος - αλκαλικής φωσφατάσης σε ρυθμιστικό διάλυμα φραγμού (αντισωμάτων).
Prepare the appropriate dilution of secondary antibody-alkaline phosphatase conjugate in blocking buffer.
Τινάζουμε ελαφρά το σύμπλοκο αντισώματος από τα φατνία και πλένουμε όπως προηγουμένως (σημείο 4).
Flick out conjugated antibody from wells and wash as before (4).
Προσθέτουμε 100 µl διαλύματος υποστρώματος αλκαλικής φωσφατάσης (προσάρτημα 4) σε κάθε φατνίο.
Add 100 µl alkaline phosphatase substrate solution (Appendix 4) to each well.
Επωάζουμε στο σκοτάδι σε θερμοκρασία εργαστηρίου και διαβάζεται η απορρόφηση στα 405 nm σε τακτικά διαλείμματα εντός 90 λεπτών.
Incubate in the dark at ambient temperature and read absorbance at 405 nm at regular intervals within 90 minutes.
Παρασκευάζουμε την κατάλληλη αραίωση πολυκλωνικών ανοσοσφαιρινών κατά του R. solanacearum σε ρυθμιστικό διάλυμα επικάλυψης pH 9.6 (προσάρτημα 4).
Prepare the appropriate dilution of anti-R. solanacearum polyclonal immunoglobulins in coating buffer pH 9.6 (Appendix 4).
Προσθέτουμε 200 µl σε κάθε φατνίο.
Add 200 µl to each well.
Επωάζουμε στους 37 °C για 4-5 ώρες ή στους 4 °C για 16 ώρες.
Incubate at 37 °C for four to five hours or at 4 °C for 16 hours.
Πλένουμε τα φατνία τρεις φορές με PBS-Tween (προσάρτημα 4).
Wash the wells three times with PBS-Tween (Appendix 4).
Προσθέτουμε 190 µl εκχυλίσματος δείγματος σε τουλάχιστον 2 φατνία.
Add 190 µl of sample extract to at least two wells.
Προσθέτουμε επίσης θετικούς και αρνητικούς μάρτυρες σε δύο φατνία ανά πλάκα.
Also add positive and negative controls in two wells each per plate.
Επωάζουμε για 16 ώρες στους 4 °C.
Incubate for 16 hr at 4 °C.
Παρασκευάζουμε κατάλληλη αραίωση μονοκλωνικών αντισωμάτων ειδικά για το R. solanacearum σε PBS (προσάρτημα 4) που περιλαμβάνει επίσης 0,5 % αλβουμίνη ορού βοοειδών (BSA) και προσθέτουμε 190 µl σε κάθε φατνίο.
Prepare an appropriate dilution of R. solanacearum-specific monoclonal antibodies in PBS (Appendix 4) also containing 0,5 % bovine serum albumin (BSA) and add 190 µl to each well.
Επωάζουμε για 2 ώρες στους 37 °C.
Incubate at 37 °C for two hours.
Παρασκευάζουμε κατάλληλη αραίωση συμπλόκου ανοσοσφαιρινών που έχουν παραχθεί κατά του ποντικιού με αλκαλική φωσφατάση σε PBS.
Prepare an appropriate dilution of anti-mouse immunoglobulins conjugated with alkaline phosphatase in PBS.
Παρασκευάζουμε διάλυμα υποστρώματος αλκαλικής φωσφατάσης που περιέχει 1 mg p-nitrophenyl phosphate ανά ml ρυθμιστικού διαλύματος υποστρώματος (προσάρτημα 4).
Prepare an alkaline phosphatase substrate solution containing 1 mg p-nitrophenyl phosphate per ml of substrate buffer (Appendix 4).
Επωάζουμε στο σκοτάδι σε θερμοκρασία εργαστηρίου και διαβάζεται η απορρόφηση στα 405 nm σε τακτικά διαλείμματα εντός 90 λεπτών.
Incubate in the dark at ambient temperature and read absorbance at 40 nm at regular intervals within 90 minutes.
Ερμηνεία των αποτελεσμάτων της δοκιμής ELISA:
Interpretation of ELISA test results:
Η δοκιμή ELISA είναι αρνητική εάν η ανάγνωση της μέσης οπτικής πυκνότητας (OD) των φατνίων διπλών δειγμάτων είναι < 2x OD του φατνίου αρνητικού μάρτυρα εκχυλίσματος δείγματος, υπό την προϋπόθεση ότι η OD για τους θετικούς μάρτυρες υπερβαίνει σε όλες τις περιπτώσεις την τιμή του 1,0 (μετά από επώαση 90 λεπτών με το υπόστρωμα) και ότι είναι μεγαλύτερη από την διπλάσια OD των εκχυλισμάτων αρνητικών δειγμάτων.
The ELISA test is negative if the average optical density (OD) reading from duplicate sample wells is < 2x OD of that in the negative sample extract control well, providing the OD for the positive controls are all above 1,0 (after 90 minutes incubation with the substrate) and are greater than twice the OD obtained for negative sample extracts.
Η δοκιμή ELISA είναι θετική εάν η μέσες αναγνώσεις OD από φατνία διπλών δειγμάτων είναι > 2x OD του φατνίου εκχυλίσματος αρνητικού δείγματος υπό την προϋπόθεση ότι οι τιμές OD σε όλα τα φατνία αρνητικών μαρτύρων είναι < 2x σε σχέση με αυτές των φατνίων θετικών μαρτύρων.
The ELISA test is positive if the average OD readings from duplicate sample wells is > 2x OD in the negative sample extract well provided that OD readings in all negative control wells are < 2x those in the positive control wells.
Οι αρνητικές αναγνώσεις ELISA σε φατνία θετικών μαρτύρων δείχνουν ότι η δοκιμή δεν έχει πραγματοποιηθεί με ορθό τρόπο ή ότι παρεμποδίστηκε.
Negative ELISA readings in positive control wells indicate that the test has not been performed correctly or that it has been inhibited.
Οι θετικές αναγνώσεις ELISA σε φατνία αρνητικών μαρτύρων δείχνουν ότι υπήρξε επιμόλυνση ή δέσμευση μη εξειδικευμένων αντισωμάτων.
Positive ELISA readings in negative control wells indicate that cross-contamination or non-specific antibody binding has occurred.
Σημείωση: Οι προκαταρκτικές δοκιμές με τη μέθοδο αυτή θα πρέπει να καθιστούν δυνατή την αναπαραγώγιμη ανίχνευση 103 έως 104 μονάδων του R. solanacearum που σχηματίζουν αποικίες ανά ml που προστίθεται σε εκχυλίσματα δειγμάτων που προηγούμενως ήταν αρνητικά στις δοκιμές (για την παρασκευή βλ. προσάρτημα 3).
Note: Preliminary testing with this method should permit reproducible detection of 103 to 104 colony-forming units of R. solanacearum per ml added to sample extracts that previously tested negative (preparation see Appendix 3).
Το ακόλουθο πρωτόκολλο βασίζεται στον Janse (1988):
The following protocol is based upon Janse (1988):
Χρησιμοποιούνται 10 προς δοκιμή φυτά μιάς ευπαθούς ποικιλίας τομάτας (π.χ. Moneymaker ή ποικιλία με ισοδύναμη ευπάθεια όπως έχει προσδιορισθεί από το εργαστήριο δοκιμής) στο στάδιο του τρίτου πραγματικού φύλλου για κάθε δείγμα.
Use 10 test plants of a susceptible tomato cultivar (e.g. Moneymaker or cultivar with equivalent susceptibility as determined by the testing laboratory) at the third true leaf stage for each sample.
Έχει δειχθεί ότι στα φυτά μελιτζάνας τα συμπτώματα είναι λιγότερο έντονα και αναπτύσσονται με πιο αργό ρυθμό.
Symptoms have been show to be less severe and to develop more slowly in eggplant.
Στις περιπτώσεις που αυτό είναι δυνατόν, συνιστάται επομένως η χρήση σπορόφυτων τομάτας.
Where possible, it is therefore recommended to use tomato seedlings.
100 µl του εκχυλίσματος δείγματος κατανέμονται μεταξύ των πειραματοφύτων.
Distribute 100 µl of sample extract between the test plants.
Τα στελέχη των φυτών μολύνονται ακριβώς πάνω από τις κοτυληδόνες με μια σύριγγα με υποδερμική βελόνα (τουλάχιστον 23G).
Inoculate the plant stems just above the cotyledons using a syringe fitted with a hypodermic needle (not less than 23G).
Το δείγμα κατανέμεται μεταξύ των πειραματοφύτων.
Distribute the sample between the test plants.
Το φυτό συγκρατείται μεταξύ δύο δακτύλων και μια σταγόνα (περίπου 5-10 µl) του αιωρήματος του ιζήματος τοποθετείται με σιφώνιο επί του στελέχους, μεταξύ των κοτυληδόνων και του πρώτου φύλλου.
Holding the plant between two fingers, pipette a drop (approximately 5 - 10 µl) of the suspended pellet on the stem between the cotyledons and the first leaf.
Με ένα αποστειρωμένο νυστέρι, πραγματοποιείται στο στέλεχος μια διαγώνια τομή, μήκους 1,0 cm και βάθους ίσου προς τα 2/3 περίπου της διαμέτρου του στελέχους, αρχίζοντας την τομή από τη σταγόνα του ιζήματος.
Using a sterile scalpel, make a diagonal slit, about 1.0 cm long and approximately 2/3 of the stem thickness deep, starting the cut from the pellet drop.
5 σπορόφυτα μολύνονται με την ίδια τεχνική με υδατικό αιώρημα 105 έως 106 κυττάρων ανά ml που έχει παρασκευασθεί από 48ωρη καλλιέργεια παθογόνου στελέχους του R. solanacearum βιοποικιλίας 2 ως θετικοί μάρτυρες και με ρυθμιστικό διάλυμα ιζήματος (προσάρτημα 4) ως αρνητικοί μάρτυρες.
Inoculate by the same technique, five seedlings with an aqueous suspension of 105 to 106 cells per ml prepared from a 48 hr culture of a virulent biovar 2 strain of R. solanacearum as a positive control and with pellet buffer (Appendix 4) as negative control.
Τα φυτά θετικοί και αρνητικοί μάρτυρες, διαχωρίζονται από τα άλλα φυτά προς αποφυγή επιμολύνσεων.
Separate positive and negative control plants from the other plants to avoid cross-contamination.
Τα πειραματόφυτα αναπτύσσονται σε εγκαταστάσεις καραντίνας για χρονικό διάστημα έως 4 εβδομάδες στους 25-30 °C και υψηλή σχετική υγρασία και κατάλληλο πότισμα για την αποφυγή υπεράρδευσης ή μάρανσης λόγω έλλειψης νερού.
Grow the test plants in quarantine facilities for up to four weeks at 25 to 30 °C and high relative humidity with appropriate watering to prevent waterlogging or wilting through water deficiency.
Για την αποφυγή της μόλυνσης, επωάζουμε τα φυτά θετικούς μάρτυρες και αρνητικούς μάρτυρες σε σαφώς διαχωρισμένους πάγκους σε θερμοκήπιο ή θάλαμο ανάπτυξης ή, στην περίπτωση που ο χώρος είναι περιορισμένος, εξασφαλίζουμε τον αυστηρό διαχωρισμό μεταξύ των χειρισμών.
To avoid contamination incubate positive control and negative control plants on clearly separated benches in a glasshouse or growth chamber or, in case space is limited, ensure strict separation between treatments.
Εάν πρέπει να επωασθούν φυτά για διαφορετικά δείγματα το ένα κοντά στο άλλο, διαχωρίζονται με τα κατάλληλα παραπετάσματα.
If plants for different samples must be incubated close together, separate them with appropriate screens.
Κατά τη λίπανση, το πότισμα, την επιθεώρηση και οιουσδήποτε άλλους χειρισμούς δίδεται εξαιρετική προσοχή ώστε να αποφεύγεται τυχόν επιμόλυνση.
When fertilising, watering, inspecting and any other manipulations take great care to avoid cross-contamination.
Είναι σημαντικό να διατηρούνται τα θερμοκήπια και οι θάλαμοι ανάπτυξης απαλλαγμένα από όλα τα έντομα εχθρούς καθώς μπορεί αυτά να μεταδίδουν το βακτήριο από δείγμα σε δείγμα.
It is essential to keep glasshouses and growth chambers free of all insect pests since they may transmit the bacterium from sample to sample.
Παρατηρούμε για συμπτώματα μαρασμού, επιναστίας, χλώρωσης ή/και νανισμού.
Observe for symptoms of wilting, epinasty, chlorosis and/or stunting.
Απομονώνουμε από μολυσμένα φυτά (ενότητα II.3.) και ταυτοποιούμε καθαρές καλλιέργειες πιθανού R. solanacearum (ενότητα VI.B.).
Isolate from infected plants (Section II.3.) and identify purified cultures of presumptive R. solanacearum (Section VI.B.).
Εάν δεν παρατηρηθούν συμπτώματα μετά από τρεις εβδομάδες, πραγματοποιείται δοκιμή IF/PCR/απομόνωση σε σύνθετο δείγμα τμημάτων στελεχών μήκους 1 cm από κάθε φυτό δοκιμής που έχουν ληφθεί πάνω από το σημείο μόλυνσης.
If no symptoms are observed after three weeks perform IF/PCR/Isolation on a composite sample of 1 cm stem sections of each test plant taken above the inoculation site.
Εάν η δοκιμή είναι θετική, πραγματοποιούμε αραιώσεις σε στερεό υπόστρωμα (ενότητα 4.1).
If the test is positive perform dilution plating (section 4.1).
Ταυτοποιούμε τυχόν καθαρές καλλιέργειες πιθανού R. solanacearum (ενότητα VI.B.).
Identify any purified cultures of presumptive R. solanacearum (Section VI.B.).
Ερμηνεία των αποτελεσμάτων της βιοδοκιμής
Interpretation of the bioassay test results
Η βιοδοκιμή είναι αρνητική αν τα φυτά δοκιμής δεν είναι προσβεβλημένα από R. solanacearum υπό τον όρο ότι το R. solanacearum ανιχνεύεται στους θετικούς μάρτυρες.
The bioassay test is negative if test plants are not infected by R. solanacearum, and provided that R. solanacearum is detected in positive controls.
Η βιοδοκιμή είνα θετική αν τα φυτά δοκιμής είναι προσβεβλημένα από R. solanacearum.
The bioassay test is positive if the test plants are infected by R. solanacearum.
ΔΟΚΙΜΕΣ ΤΑΥΤΟΠΟΙΗΣΗΣ
IDENTIFICATION TESTS
Ταυτοποιούνται οι καθαρές καλλιέργειες των πιθανών απομονώσεων του R. solanacearum χρησιμοποιώντας τουλάχιστον δύο από τις ακόλουθες δοκιμές που βασίζονται σε διαφορετικές βιολογικές αρχές.
Identify pure cultures of presumptive R. solanacearum isolates using at least two of the following tests based on different biological principles.
Για κάθε δοκιμή που πραγματοποιείται (βλ. προσάρτημα 3), συμπεριλαμβάνονται γνωστά στελέχη αναφοράς όπου ενδείκνυται.
Include known reference strains where appropriate for each test performed (see Appendix 3).
Προσδιορίζονται οι ακόλουθες φαινοτυπικές ιδιότητες που παρουσιάζει ή όχι εν γένει το R. solanacearum, σύμφωνα με τις μεθόδους των Lelliott και Stead (1987), Klement et al.
Determine the following phenotypic properties, which are universally present or absent in R. solanacearum, according to the methods of Lelliott and Stead (1987), Klement et al.
Παραγωγή φθορίζουσας χρωστικής
Fluorescent pigment production
Έγκλειστα πολυ -β- υδροξυβουτυρικού
Poly-ß-hydroxybutyrate inclusions
Δοκιμή οξείδωσης/ζύμωσης (O/F)
Oxidation/fermentation (O/F) test
Δοκιμή οξειδάσης Kovac
Kovac’s oxidase test
Αναγωγή νιτρικών ιόντων
Reduction of nitrate
Χρησιμοποίηση κιτρικών ιόντων
Utilisation of citrate
Ανάπτυξη στους 40 °C
Growth at 40 °C
Ανάπτυξη σε 1 % NaCl
Growth in 1 % NaCl
Ανάπτυξη σε 2 % NaCl
Growth in 2 % NaCl
Δραστηριότητα διυδρολάσης της αργινίνης
Arginine dihydrolase activity
Υγροποίηση ζελατίνης
Gelatine liquefaction
Παραγωγή levan
Levan production
Παρασκευάζεται αιώρημα περίπου 106 κυττάρων ανά ml σε ρυθμιστικό διάλυμα IF (προσάρτημα 4).
Prepare a suspension of approximately 106 cells per ml in IF buffer (Appendix 4).
Παρασκευάζεται σειρά διπλών αραιώσεων κατάλληλου αντιορρού (βλ. ιστοχώρο http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).
Prepare a twofold dilution series of an appropriate antiserum (see website http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).
Εφαρμόζουμε τη διαδικασία IF (ενότητα VI.A.5.).
Apply the IF procedure (Section VI.A.5.).
Σημείωση: Εάν πραγματοποιούμε μόνον 2 δοκιμές ταυτοποίησης, δεν χρησιμοποιούμε άλλη ορρολογική δοκιμή επιπροσθέτως προς τη μέθοδο αυτή.
Note: If performing only 2 identification tests, do not use another serological test in addition to this method.
Παρασκευάζεται αιώρημα περίπου 108 κυττάρων ανά ml σε 1X PBS (προσάρτημα 4).
Prepare a suspension of approximately 108 cells per ml in 1X PBS (Appendix 4).
Πραγματοποιούμε την κατάλληλη διαδικασία ELISA με εξειδικευμένο μονοκλωνικό αντίσωμα του R. solanacearum.
Perform an appropriate ELISA procedure with a specific monoclonal antibody to R. solanacearum.
Η δοκιμή ELISA είναι θετική εάν η ανάγνωση ELISA που προκύπτει από την καλλιέργεια είναι τουλάχιστον η μισή από αυτήν που προκύπτει από το θετικό μάρτυρα.
A positive ELISA test is achieved if the ELISA reading obtained from the culture is at least half that obtained for the positive control.
Παρασκευάζεται αιώρημα περίπου 106 κυττάρων ανά ml σε αποστειρωμένο νερό μοριακού βαθμού καθαρότητας.
Prepare a suspension of approximately 106 cells per ml in molecular grade sterile water.
Θερμαίνονται 100 µl του αιωρήματος κυττάρων σε κλειστούς σωλήνες σε θερμικό μπλοκ ή αναβράζον υδατολουτρό στους 100 °C για 4 λεπτά.
Heat 100 µl of the cell suspension in closed tubes in a heating block or boiling waterbath at 100 °C for four minutes.
Εφαρμόζονται οι κατάλληλες διαδικασίες PCR για την ενίσχυση των αμπλικονίων που είναι ειδικά για το R. solanacearum [π.χ. Seal et al.
Apply appropriate PCR procedures to amplify R. solanacearum-specific amplicons (e.g. Seal et al.
(1993)· Pastrik και Maiss, (2000)· Pastrik et al.
(1993); Pastrik and Maiss (2000); Pastrik et al.
Επιτυγχάνεται θετική ταυτοποίηση του R. solanacearum εάν τα αμπλικόνια της PCR έχουν το ίδιο μέγεθος και τους ίδιους πολυμορφισμούς μήκους θραυσμάτων εκ περιορισμού όπως το στέλεχος των θετικών μαρτύρων.
A positive identification of R. solanacearum is achieved if the PCR amplicons are the same size and have the same restriction fragment length polymorphisms as for the positive control strain.
Εφαρμόζεται η διαδικασία FISH (ενότητα VI.A.7.) με τουλάχιστον 2 ολιγοανιχνευτές ειδικούς για το R. solanacearum (προσάρτημα 7).
Apply the FISH procedure (Section VI.A.7.) with at least 2 R. solanacearum-specific oligo-probes (Appendix 7).
Η καλλιέργεια αναπτύσσεται σε trypticase soy agar (Oxoid) για 48 ώρες στους 28 °C.
Grow the culture on trypticase soy agar (Oxoid) for 48 hours at 28 °C.
Εφαρμόζεται κατάλληλη διαδικασία FAP (Janse, 1991· Stead, 1992).
Apply an appropriate FAP procedure (Janse, 1991; Stead, 1992).