natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Kapitel B.48 i dette bilag, Isoleret kyllingeøje-forsøgsmetoden (ICE-forsøgsmetoden) til identifikation af i) kemikalier, der medfører alvorlig øjenskade, og ii) kemikalier, der ikke kræver klassificering for øjenirritation eller alvorlig øjenskade.«
Chemical is not corrosive or severely irritating to skin
Del B, kapitel B.10, affattes således:
Perform validated and accepted in vitro or ex vivo ocular test(s)
Denne forsøgsmetode svarer til OECD-testvejledning (Test Guideline) 473 (2016).
Assume corrosive or severe irritant to eyes, provided the test performed can be used to identify corrosives/severe irritants and the chemical is within the applicability domain of the test.
Den er en del af en række forsøgsmetoder vedrørende genetisk toksikologi.
Irritant response
Der er udarbejdet et OECD-dokument med kortfattede oplysninger om test af genetisk toksikologi og en oversigt over de nylige ændringer af denne testvejledning (1).
Assume irritant to eyes, provided the test(s) performed can be used to correctly identify corrosive, severe irritants, and irritants, and the chemical is within the applicability domain of the test(s).
Formålet med in vitro-testen for kromosomaberrationer er at påvise, om et kemikalie eller andet forårsager strukturelle kromosomafvigelser i dyrkede pattedyrceller (2) (3) (4).
Non-irritant response
Der er to typer strukturændringer, kromosomtypen og kromatidtypen.
Assume non-irritant to eyes, provided the test(s) performed can be used to correctly identify non-irritants, correctly distinguish these from chemicals that are irritants, severe irritants, or ocular corrosives, and the chemical is within the applicability domain of the test.
Polyploidi (herunder endofordobling) kan opstå i kromosomaberrationsassays in vitro.
Validated and accepted in vitro or ex vivo ocular test(s) cannot be used to reach a conclusion
Selv om aneugener kan fremkalde polyploidi, er polyploidi alene ikke tegn på aneugenpotentiale og kan ganske enkelt være tegn på forstyrrelse eller cytotoksicitet af cellecyklussen (5).
Perform initial in vivo rabbit eye test using one animal
Denne test er ikke beregnet til at måle aneuploidi.
Consider corrosive to eyes.
En in vitro-mikrokernetest (6) anbefales til påvisning af aneuploidi.
No severe damage, or no response
I in vitro-testen for kromosomaberrationer kan der benyttes kulturer af etablerede cellelinjer eller primære cellekulturer af human oprindelse eller gnaveroprindelse.
Perform confirmatory test using one or two additional animals
Cellerne bør udvælges på grundlag af deres vækstegenskaber ved dyrkning, karotypens stabilitet (herunder kromosomtal) og hyppighed af spontane kromosomaberrationer (7).
Corrosive or irritating
På nuværende tidspunkt gør de tilgængelige data det ikke muligt at fremsætte konkrete anbefalinger, men viser, at det i forbindelse med vurdering af kemiske farer er vigtigt at tage højde for status af p53, genetisk (karotypens) stabilitet, DNA-reparationskapacitet og oprindelse (gnavere eller mennesker) af de celler, der er udvalgt til test.
Consider corrosive or irritating to eyes.
De anvendte definitioner er forklaret i tillæg 1.
Not corrosive or irritating
INDLEDENDE OVERVEJELSER OG BEGRÆNSNINGER
Consider non-irritating and non-corrosive to eyes.
Normalt kræver en in vitro-test, at der benyttes en eksogen kilde til metabolisk aktivering, medmindre cellerne er metabolisk kompetente i forhold til testkemikalierne.
OECD (1996) OECD Test Guidelines Programme: Final Report of the OECD Workshop on Harmonization of Validation and Acceptance Criteria for Alternative Toxicological Test Methods.
Metabolismeaktiveringssystemet efterligner ikke in vivo-betingelserne fuldstændig.
Held in Solna, Sweden, 22 - 24 January 1996 (http://www.oecd.org/ehs/test/background.htm).
Disse betingelser omfatter ændringer i pH eller osmolalitet (8) (9) (10), interaktion med mediets komponenter (11) (12) eller for højt cytotoksicitetsniveau (13) (14) (15) (16).
Classification as Corrosive or Irritant to Skin of Preparations Containing Acidic or Alkaline Substance Without Testing on Animals.
Denne test bruges til at registrere kromosomaberrationer, som kan hidrøre fra klastogene hændelser.
Toxicology in vitro 12, pp.483 - 524.
Analysen af induktion af kromosomaberrationer bør foretages ved hjælp af celler i metafase.
Supplement to Chapter B.4 of this Annex, A Sequential Testing Strategy for Skin Irritation and Corrosion.
Det er derfor vigtigt, at celler bør opnå mitose i både behandlede og ubehandlede kulturer.
Chapter B.48 of this Annex, Isolated Chicken Eye Test Method for Identifying i) Chemicals Inducing Serious Eye Damage and ii) Chemicals Not Requiring Classification for Eye Irritation or Serious Eye Damage.’
Før brug af forsøgsmetoden til lovmæssig test af en blanding til generering af data bør det overvejes, om den vil give resultater, som er egnede til formålet, og i givet fald hvorfor.
In Part B, Chapter B.10 is replaced by the following:
Sådanne overvejelser er ikke nødvendige, når der foreligger et myndighedskrav om test af blandingen.
10 In Vitro Mammalian Chromosomal Aberration Test
PRINCIP FOR TESTEN
This test method is equivalent to OECD test guideline 473 (2016).
Cellekulturer fra mennesker eller andre pattedyr eksponeres for testkemikaliet både med og uden en eksogen metabolisk aktivering, medmindre der anvendes celler med en tilstrækkelig metaboliseringsevne (jf. punkt 13).
It is part of a series of test methods on genetic toxicology.
Efter passende forud fastsatte tidsrum efter starten af eksponeringen for testkemikaliet behandles kulturerne med et metafasestandsende kemikalie (f.eks. colcemid eller colchicin), hvorefter de høstes og farves; dernæst undersøges metafasecellerne mikroskopisk for forekomst af aberration af kromatidtypen og kromosomtypen.
An OECD document that provides succinct information on genetic toxicology testing and an overview of the recent changes that were made to these Test Guidelines has been developed (1).
BESKRIVELSE AF METODEN
The purpose of the in vitro chromosomal aberration test is to identify chemicals that cause structural chromosomal aberrations in cultured mammalian cells (2) (3) (4).
Celler
Structural aberrations may be of two types, chromosome or chromatid.
Der kan benyttes en række forskellige cellelinjer (f.eks. ovarie fra kinesisk hamster (CHO), lunge fra kinesisk hamster V79, lunge fra kinesisk hamster (CHL)/IU, TK6) eller primære cellekulturer, herunder perifere blodlymfocytter fra mennesker eller andre pattedyr (7).
Polyploidy (including endoreduplication) could arise in chromosome aberration assays in vitro.
Valget af anvendte cellelinjer bør begrundes videnskabeligt.
While aneugens can induce polyploidy, polyploidy alone does not indicate aneugenic potential and can simply indicate cell cycle perturbation or cytotoxicity (5).
Når der anvendes primære celler, bør det af hensyn til dyrevelfærden overvejes at anvende primære celler fra mennesker, hvis det er muligt, og disse bør indsamles i overensstemmelse med menneskelige etiske principper og regler.
This test is not designed to measure aneuploidy.
Perifere blodlymfocytter fra mennesker bør udtages fra unge (ca. 18-35 år), ikkerygende personer uden kendt sygdom eller nylige eksponeringer for genotoksiske stoffer (f.eks. kemikalier, ioniserende stråling) i et niveau, der vil øge baggrundsforekomsten af kromosomaberrationer.
An in vitro micronucleus test (6) would be recommended for the detection of aneuploidy.
Det vil sikre en lav og konsekvent baggrundsforekomst af kromosomaberrationer.
The in vitro chromosomal aberration test may employ cultures of established cell lines or primary cell cultures of human or rodent origin.
Det er nødvendigt at påvise, at cellerne er delt fra begyndelsen af behandlingen med testkemikaliet til prøveudtagning.
The users of this test method are thus encouraged to consider the influence of these and other cell characteristics on the performance of a cell line in detecting the induction of chromosomal aberrations, as knowledge evolves in this area.
Cellekulturer fastholdes i en eksponentiel cellevækstfase (cellelinjer) eller stimuleres til at dele sig (primære kulturer af lymfocytter) for at eksponere cellerne på forskellige stadier i cellecyklussen, da cellefasernes følsomhed over for testkemikalierne muligvis ikke kendes.
Definitions used are provided in Appendix 1.
De primære celler, der skal stimuleres med mitogenstoffer for at dele sig, synkroniseres generelt ikke længere under eksponering for testkemikaliet (f.eks. humane lymfocytter efter en 48-timers stimulering med mitogen).
INITIAL CONSIDERATIONS AND LIMITATIONS
Det anbefales ikke at bruge synkroniserede celler under behandlingen, men det kan accepteres, såfremt det er berettiget.
Tests conducted in vitro generally require the use of an exogenous source of metabolic activation unless the cells are metabolically competent with respect to the test chemicals.
Medier og dyrkningsbetingelser
The exogenous metabolic activation system does not entirely mimic in vivo conditions.
Til vedligeholdelse af kulturerne bør der benyttes egnede dyrkningsmedier og inkubationsbetingelser (dyrkningsflasker, fugtig atmosfære på 5 % CO2, hvor det er relevant, inkubationstemperatur på 37 °C).
Care should be taken to avoid conditions that could lead to artifactual positive results, i.e. chromosome damage not caused by direct interaction between the test chemicals and chromosomes; such conditions include changes in pH or osmolality (8) (9) (10), interaction with the medium components (11) (12) or excessive levels of cytotoxicity (13) (14) (15) (16).
Cellelinjer bør kontrolleres regelmæssigt for et stabilt normalt kromosomtal og fravær af mykoplasmakontaminering (7) (19), og i tilfælde af kontaminering, eller hvis det normale kromosomtal har ændret sig, bør cellerne ikke anvendes.
This test is used to detect chromosomal aberrations that may result from clastogenic events.
Den normale cyklustid for de cellelinjer eller primære kulturer, der benyttes i laboratoriet, bør være fastlagt og være i overensstemmelse med de offentliggjorte celleegenskaber (20).
The analysis of chromosomal aberration induction should be done using cells in metaphase.
Fremstilling af kulturer
It is thus essential that cells should reach mitosis both in treated and in untreated cultures.
Cellelinjer: Celler udtages fra stamkulturer og udsås i dyrkningsmedium med en sådan tæthed, at cellerne i suspension eller i encellede lag vil fortsætte med at vokse eksponentielt, indtil de høstes (f.eks. bør konfluens undgås for celler, der vokser i encellede lag).
For manufactured nanomaterials, specific adaptations of this test method may be needed but are not described in this test method.
Lymfocytter: Fuldblod, der er behandlet med antikoaguleringsmiddel (f.eks. heparin), eller fraseparerede lymfocytter dyrkes (f.eks. i 48 timer for humane lymfocytter) med tilstedeværelse af et mitogen [f.eks. phytohæmagglutinin (PHA) for humane lymfocytter] for at fremkalde celledeling inden eksponering for testkemikaliet.
Before use of the test method on a mixture for generating data for an intended regulatory purpose, it should be considered whether, and if so why, it may provide adequate results for that purpose.
Metabolisk aktivering
Such considerations are not needed, when there is a regulatory requirement for testing of the mixture.
Eksogene metaboliserende systemer bør anvendes, når der gøres brug af celler med utilstrækkelige endogene metaboliske egenskaber.
PRINCIPLE OF THE TEST
Det mest almindeligt anvendte system, der som standard anbefales, medmindre der er begrundelse for andet, er en cofaktorsuppleret postmitokondriefraktion (S9), der fremstilles af levere fra gnavere (normalt rotter), der har været behandlet med enzyminducerende stoffer såsom Aroclor 1254 (21) (22) (23) eller en blanding af phenobarbiton og β-naphthoflavon (24) (25) (26) (27) (28) (29).
Cell cultures of human or other mammalian origin are exposed to the test chemical both with and without an exogenous source of metabolic activation unless cells with an adequate metabolizing capability are used (see paragraph 13).
Sidstnævnte blanding er ikke i strid med Stockholmkonventionen om persistente organiske miljøgifte (30) og har vist sig at være lige så effektiv som Aroclor 25 til induktion af oxidaser med blandet funktion (24) (25) (26) (28).
At appropriate predetermined intervals after the start of exposure of cell cultures to the test chemical, they are treated with a metaphase-arresting chemical (e.g. colcemid or colchicine), harvested, stained and metaphase cells are analysed microscopically for the presence of chromatid-type and chromosome-type aberrations.
S9-fraktionen anvendes normalt i en koncentration på 1-2 % (v/v), men kan øges til 10 % (v/v) i det færdige testmedium.
DESCRIPTION OF THE METHOD
Brug af produkter, der nedsætter mitoseindekset, især calciumkompleksdannere (31), bør undgås under behandlingen.
Cells
Valget af type og koncentration af exogent metabolismeaktiveringssystem eller anvendte metaboliske inducerende stoffer kan påvirkes af den testede kemikaliegruppe.
A variety of cell lines (e.g. Chinese Hamster Ovary (CHO), Chinese Hamster lung V79, Chinese Hamster Lung (CHL)/IU, TK6) or primary cell cultures, including human or other mammalian peripheral blood lymphocytes, can be used (7).
Præparering af testkemikaliet
The choice of the cell lines used should be scientifically justified.
Testkemikalier i fast form bør præpareres i passende opløsningsmidler og eventuelt fortyndes inden behandling af cellerne (jf. punkt 23).
When primary cells are used, for animal welfare reasons, the use of primary cells from human origin should be considered where feasible and sampled in accordance with the human ethical principles and regulations.
Testkemikalier i væskeform kan enten tilsættes direkte til testsystemet og/eller fortyndes inden behandlingen af testsystemet.
Human peripheral blood lymphocytes should be obtained from young (approximately 18-35 years of age), non-smoking individuals with no known illness or recent exposures to genotoxic agents (e.g. chemicals, ionizing radiations) at levels that would increase the background incidence of chromosomal aberrations.
Gasser og flygtige testkemikalier bør testes ved passende modifikation af standardprotokollerne, f.eks. i forseglede dyrkningsflasker (32) (33) (34).
This would ensure the background incidence of chromosomal aberrations to be low and consistent.
Der bør laves præparater af testkemikaliet lige inden behandlingen, medmindre stabilitetsdata påviser, at opbevaring er acceptabelt.
The baseline incidence of chromosomal aberrations increases with age and this trend is more marked in females than in males (17) (18).
Opløsningsmidler
If cells from more than one donor are pooled for use, the number of donors should be specified.
Opløsningsmidlet bør vælges for at optimere testkemikaliets opløselighed uden at påvirke assayets adfærd negativt, f.eks. ved at ændre cellevækst, påvirke integriteten af testkemikaliet, reagere med dyrkningsflasker eller forringe metabolismeaktiveringssystemet.
It is necessary to demonstrate that the cells have divided from the beginning of treatment with the test chemical to cell sampling.
Det anbefales så vidt muligt først at overveje at anvende et vandigt opløsningsmiddel (eller dyrkningsmedium).
Cell cultures are maintained in an exponential cell growth phase (cell lines) or stimulated to divide (primary cultures of lymphocytes), to expose the cells at different stages of the cell cycle, since the sensitivity of cell stages to the test chemicals may not be known.
Veletablerede opløsningsmidler er f.eks. vand eller dimethylsulfoxid.
The primary cells that need to be stimulated with mitogenic agents in order to divide are generally no longer synchronized during exposure to the test chemical (e.g. human lymphocytes after a 48-hour mitogenic stimulation).
Organiske opløsningsmidler bør generelt ikke overstige 1 % (v/v), og vandige opløsningsmidler (saltvand eller vand) bør ikke overstige 10 % (v/v) i det færdige behandlingsmedium.
The use of synchronized cells during treatment is not recommended, but can be acceptable if justified.
Hvis der anvendes ikke-veletablerede opløsningsmidler (f.eks. ethanol eller acetone), bør brugen af dem underbygges med data, der viser deres kompatibilitet med testkemikalier, testsystemet og fraværet af genetisk toksicitet ved den anvendte koncentration.
Media and culture conditions
Uden disse understøttende data er det vigtigt at medtage ubehandlede kontroller (jf. tillæg 1) for at påvise, at det valgte opløsningsmiddel ikke frembringer skadelige eller klastogene virkninger.
Appropriate culture medium and incubation conditions (culture vessels, humidified atmosphere of 5 % CO2 if appropriate, incubation temperature of 37 °C) should be used for maintaining cultures.
Måling af celleproliferation og cytotoksicitet og valg af behandlingskoncentrationer
Cell lines should be checked routinely for the stability of the modal chromosome number and the absence of Mycoplasma contamination (7) (19), and cells should not be used if contaminated or if the modal chromosome number has changed.
Ved valg af højeste koncentration af testkemikaliet bør man undgå koncentrationer, der kan frembringe en artefakt positiv respons, f.eks. koncentrationer, der frembringer for høj cytotoksicitet (jf. punkt 22), udfældning i dyrkningsmediet (jf. punkt 23) eller væsentlige ændringer i pH eller osmolalitet (jf. punkt 5).
The normal cell cycle time of cell lines or primary cultures used in the testing laboratory should be established and should be consistent with the published cell characteristics (20).
Hvis testkemikaliet frembringer en væsentlig ændring i mediets pH på tilsætningstidspunktet, kan pH-værdien justeres ved bufring af det endelige behandlingsmedium for at undgå et artefakt positivt resultat og for at opretholde passende dyrkningsbetingelser.
Preparation of cultures
Målinger af celleproliferation foretages for at sikre, at et passende antal af de behandlede celler har undergået mitose under testen, og at behandlingerne udføres med passende cytotoksicitet (jf. punkt 18 og 22).
Cell lines: cells are propagated from stock cultures, seeded in culture medium at a density such that the cells in suspensions or in monolayers will continue to grow exponentially until harvest time (e.g. confluence should be avoided for cells growing in monolayers).
Cytotoksiciteten bør bestemmes med og uden metabolismeaktivering i hovedforsøget ved hjælp af en passende indikator for celledød og -vækst.
Lymphocytes: whole blood treated with an anti-coagulant (e.g. heparin) or separated lymphocytes are cultured (e.g. for 48 hours for human lymphocytes) in the presence of a mitogen [e.g. phytohaemagglutinin (PHA) for human lymphocytes] in order to induce cell division prior to exposure to the test chemical.
Evaluering af cytotoksicitet i en indledende test kan være nyttig for at sikre en bedre definition af de koncentrationer, der skal anvendes i hovedforsøg, men en indledende test er ikke obligatorisk.
Metabolic activation
Hvis en sådan test udføres, bør den ikke erstatte måling af cytotoksicitet i hovedforsøget.
Exogenous metabolising systems should be used when employing cells which have inadequate endogenous metabolic capacity.
Relativ populationsfordobling (RPD) eller relativ forøgelse af celletal (RICC) er passende metoder til vurdering af cytotoksicitet i cytogenetiske test (13) (15) (35) (36) (55) (jf. formlerne i tillæg 2).
The most commonly used system that is recommended by default, unless otherwise justified, is a co-factor-supplemented post-mitochondrial fraction (S9) prepared from the livers of rodents (generally rats) treated with enzyme-inducing agents such as Aroclor 1254 (21) (22) (23) or a combination of phenobarbital and β-naphthoflavone (24) (25) (26) (27) (28) (29).
I tilfælde af langtidsbehandling og prøveudtagning efter et tidsrum, der svarer til 1,5 gange normal cellecykluslængde regnet fra behandlingens begyndelse (dvs. længere end 3 cellecykluslængder i alt), kan anvendelsen af RPD føre til, at cytotoksiciteten undervurderes (37).
The latter combination does not conflict with the Stockholm Convention on Persistent Organic Pollutants (30) and has been shown to be as effective as Aroclor 1254 for inducing mixed-function oxidases (24) (25) (26) (28).
Under disse omstændigheder kan RICC være et bedre mål, eller evaluering af cytotoksicitet efter 1,5 gange normal cellecykluslængde kunne være et nyttigt estimat ved brug af RPD.
The S9 fraction typically is used at concentrations ranging from 1 to 2 % (v/v) but may be increased to 10 % (v/v) in the final test medium.
For lymfocytter i primærkulturer er mitoseindekset (MI) et mål for cytotoksisk/cytostatisk virkning, men påvirkes af, hvor længe efter behandlingen det måles, det anvendte mitogen og mulige forstyrrelser af cellecyklussen.
The use of products that reduce the mitotic index, especially calcium complexing products (31) should be avoided during treatment.
MI er imidlertid acceptabelt, da andre cytotoksicitetsmålinger kan være både besværlige og upraktiske og ikke nødvendigvis gælder for målpopulationen af lymfocytter, der vokser som reaktion på PHA-stimulering.
The choice of type and concentration of exogenous metabolic activation system or metabolic inducer employed may be influenced by the class of chemicals being tested.
Mens RICC og RPD for cellelinjer og MI for primærkulturer af lymfocytter er de anbefalede cytotoksicitetsparametre, kan andre indikatorer (f.eks. celleintegritet, apoptose, nekrose, cellecyklus) give nyttige supplerende oplysninger.
Test chemical preparation
Mindst tre testkoncentrationer (herunder ikke opløsningsmiddel og positive kontroller), der opfylder acceptkriterierne (passende cytotoksicitet, antal celler mv.), bør vurderes.
Solid test chemicals should be prepared in appropriate solvents and diluted, if appropriate, prior to treatment of the cells (see paragraph 23).
Uanset hvilke typer celler (cellelinjer eller primærkulturer af lymfocytter), det drejer sig om, kan der ved hver af de testede koncentrationer anvendes enten replikate eller enkelte behandlede kulturer.
Liquid test chemicals may be added directly to the test system and/or diluted prior to treatment of the test system.
Selv om det anbefales at benytte duplikate kulturer, accepteres anvendelse af enkeltkulturer også, forudsat at det samme totale celleantal scores i enten enkeltkulturer eller dublikate kulturer.
Gaseous or volatile test chemicals should be tested by appropriate modifications to the standard protocols, such as treatment in sealed culture vessels (32) (33) (34).
Brug af enkeltkulturer er især relevant ved vurdering af mere end tre koncentrationer (jf. punkt 31).
Preparations of the test chemical should be made just prior to treatment unless stability data demonstrate the acceptability of storage.
De resultater, der er opnået i uafhængige replikate kulturer i en given koncentration, kan samles med henblik på dataanalyse (38).
Solvents
For testkemikalier, der udviser ringe eller ingen cytotoksicitet, vil koncentrationsintervaller på ca. 2 til 3 gange normalt være egnede.
The solvent should be chosen to optimize the solubility of the test chemicals without adversely impacting the conduct of the assay, e.g. changing cell growth, affecting the integrity of the test chemical, reacting with culture vessels, impairing the metabolic activation system.
Hvis der forekommer cytotoksicitet, bør de valgte testkoncentrationer dække et interval fra det, der frembringer cytotoksicitet som beskrevet i punkt 22, til koncentrationer, hvor der er en beskeden og ringe eller ingen cytotoksicitet.
It is recommended that, wherever possible, the use of an aqueous solvent (or culture medium) should be considered first.
Mange testkemikalier udviser kraftige koncentration/respons-kurver, og for at indhente data ved lav og moderat cytotoksicitet eller undersøge dosis/respons-forholdet nærmere vil det være nødvendigt at bruge mere samlede koncentrationer og/eller mere end tre koncentrationer (enkeltkulturer eller replikater), navnlig i situationer, hvor der er behov for at gentage forsøget (jf. punkt 47).
Well established solvents are for example water or dimethyl sulfoxide.