natgillin/translations-raw huggingface dataset:
næringsberiget havvand, men uden teststof
Alternatively the agarose gel is stained by covering the gel in a dilute solution of ethidium bromide (0,5 μg/ml in water) for 30 minutes prior to visualisation.
Gennemsnit blind-værdi
Appendix 11
Der kan anvendes en tilsvarende opstilling for referencestoffet og toksicitetskontrollerne.
Guidance for artificial fertilisation procedure for the three-spined stickleback
TAB AF DO:
The purpose of this section is to describe the procedures to obtain fertilised eggs from the three-spined stickleback in view of using them in the FSDT.
% NEDBRYDNING ( % D):
Procedures
Tab af DO efter n dage
Obtaining sperm from the males
Dette forudsætter, at mb(o) = mt(o), hvorm b(o) blindværdi på dag 0m t(o) teststofværdi på dag 0.Hvis mb(o) ikke er lig med mt(o), benyttes (mt(o) — mt(x)) — (mb(o) — mb(x)), hvorm b(x) blindværdi på dag xm t(o) teststofværdi på dag x.
A well-coloured male of the desired population is euthanised.
ORGANISKE STOFFERS ANAEROBE BIONEDBRYDELIGHED I UDRÅDNET SLAM:
The testes are dissected from each side of the fish.
VED MÅLING AF GASPRODUKTION
The testes are generally heavily pigmented, rod shaped structures that are readily apparent at the lateral midline of the body.
Denne testmetode svarer til OECD Test Guideline (TG) 311 (2006).
Use either of the following methods:
Der findes en række screeningtest til vurdering af organiske stoffers aerobe bionedbrydelighed (testmetode C.4, C.9, C.10 og C.11 (1) og OECD TG 302C (2)), og resultaterne af at anvende disse er blevet brugt med succes til at forudsige stoffers skæbne i aerobt miljø, især i de aerobe stadier af spildevandsrensningen.
Using a pair of fine scissors, begin at the cloaca and make a 1-1,5 cm incision with a single snip angled at about 45 degrees.
Forskellige mængder af vanduopløselige stoffer samt stoffer, der adsorberer til fast affald, behandles også aerobt, eftersom de er til stede i bundfældet spildevand.
Use a scalpel to make a small incision in the side of the fish slightly posterior to the pelvis and just ventral of the lateral plates.
De større fraktioner af disse stoffer bindes dog til primært bundfældet slam, der skilles fra ubearbejdet spildevand i bundfældningstanke, før det bundfældede spildevand, eller supernatanten, behandles aerobt.
The testes are removed using fine forceps and placed into a petri dish.
Slammet, som indeholder nogle af de opløselige stoffer i den interstitielle væske, føres herefter til opvarmede rådnetanke med henblik på anaerob behandling.
Each testis is covered with 100 μl freshly made Hank's final solution.
Indtil nu findes der ingen test i denne række til vurdering af anaerob bionedbrydelighed i anaerobe rådnetanke, og denne test har til formål at fylde dette tomrum.
The testes are finely diced by using a razor blade or scalpel.
Den kan ikke nødvendigvis anvendes på andre anoxiske delmiljøer.
This will release sperm and give the Hank's solution a milky appearance.
Respirometriske metoder til at måle mængderne af produceret gas, især (CH4) og kuldioxid (CO2), under anaerobe betingelser er blevet brugt med succes til at vurdere anaerob bionedbrydelighed.
The fluid containing sperm is added into a tube, while trying not to include any pieces of testes tissue when pipetting.
Birch et al.
800 μl of Hank's final solution are added into the tube and mixed well.
gennemgik disse fremgangsmåder og konkluderede, at Shelton og Tiedjes (4) arbejde baseret på tidligere undersøgelser (5)(6)(7) var det mest omfattende.
If required, the male can be preserved by fixing in 100 % ethanol or other desired fixative.
Metoden (4), som blev videreudviklet af andre (8) og er blevet amerikanske standarder (9)(10), løste ikke problemerne med CO2's og CH4's forskellige opløselighed i testmediet og beregningen af et teststofs teoretiske gasproduktion.
This is particularly important if the study is assigning parental origin of offsprings.
I ECETOC-rapporten (3) anbefaledes den supplerende måling af opløst uorganisk kulstofindhold (DIC) i den ovenstående væske, hvilket gjorde teknikken mere bredt anvendelig.
Although most of the stock solutions required can be made in advance, stock 5 and subsequently the final solution, should be made up fresh on the day of use.
ECETOC-metoden blev underkastet en international kalibrering (eller ringtest) og blev ISO-standard, ISO 11734 (11).
Stock 1
Denne testmetode, som er baseret på ISO 11734 (11), beskriver en screeningsmetode til vurdering af organiske stoffers potentielle anaerobe bionedbrydelighed under en bestemt betingelse (dvs. i en anaerob rådnetank på et givet tidspunkt og ved en given koncentration af mikroorganismer).
8,00 g
Fordi der anvendes fortyndet slam med en relativt høj teststofkoncentration, og testen typisk varer længere end retentionstiden i anaerobe rådnetanke, svarer testbetingelserne ikke nødvendigvis til betingelserne i anaerobe rådnetanke, og testen kan heller ikke anvendes til vurdering af organiske stoffers anaerobe bionedbrydelighed under forskellige miljøbetingelser.
0,40 g
Slam eksponeres for teststoffet i op til 60 dage, hvilket er længere end den normale slamretentionstid (25-30 dage) i anaerobe rådnetanke, selv om retentionstiderne kan være meget længere på industriområder.
Distilled water (DW)
Der kan ikke forudsiges noget på grundlag af resultaterne af denne test med samme vægt, som det er tilfældet med aerob bionedbrydning, eftersom den eksisterende dokumentation om teststoffernes egenskaber i »let« aerobe test og i simulationstest og det aerobe miljø er tilstrækkelig til at have tiltro til, at der er en forbindelse.
100 ml
Der findes kun lidt tilsvarende dokumentation for det anaerobe miljø.
Stock 2
En fuldstændig anaerob bionedbrydelighed kan antages at forekomme, hvis der opnås 75-80 % teoretisk gasproduktion.
HPO4 (anhydrous)
De høje forhold mellem stof og biomasse, der er brugt i disse test, betyder, at et stof, der går igennem, har højere sandsynlighed for at blive nedbrudt i en anaerob rådnetank.
0,358 g
Endvidere forefindes de stoffer, som ikke omdannes til gas i testen, måske ikke nødvendigvis ved mere miljømæssigt realistiske forhold mellem stof og biomasse.
0,60 g
Andre anaerobe reaktioner forekommer også, hvorved stoffer kan blive i hvert fald delvist nedbrudt, f.eks. ved afchlorering, men denne test påviser ikke sådanne reaktioner.
Stock 3
Ved at anvende specifikke analysemetoder til at bestemme teststoffet kan dets forsvinden dog overvåges (se punkt 6, 30, 44 og 53).
0,72 g
Vasket udrådnet slam [12], som indeholder lave (< 10 mg/l) koncentrationer af uorganisk kulstof (IC), fortyndes omkring ti gange til en samlet koncentration af faste stoffer på 1 g/l til 3 g/l og inkuberes ved 35 °C ± 2 °C i lukkede beholdere med teststoffet ved 20-100 mg C/l i op til 60 dage.
50 ml
Der er mulighed for at måle slamaktiviteten ved at foretage parallelle blindkontroller med inokulum af slam i mediet, men uden teststof.
Stock 4
Stigningen i headspacetrykket i beholderne som følge af produktionen af kuldioxid og methan måles.
MgSO4.7H2O
Meget af den producerede CO2 vil blive opløst i væskefasen eller omdannet til carbonat eller hydrogencarbonat under testbetingelserne.
1,23 g
Dette uorganiske kulstof måles ved afslutningen af testen.
Stock 5 (freshly prepared)
Mængden af kulstof (uorganisk plus methan) fra bionedbrydningen af teststoffet beregnes ud fra nettogasproduktionen og nettodannelsen af IC i væskefasen ud over blindkontrolværdierne.
0,35 g
Bionedbrydningens omfang beregnes ud fra den samlede mængde IC og methan-C, som produceres, i procent af den målte eller beregnede mængde kulstof, der tilsættes som teststof.
10 ml
Forløbet af bionedbrydningen kan følges ved kun at foretage mellemliggende målinger af gasproduktionen.
If you already have some of the above salts but with different water content (i.e. 2H2O instead of anhydrous) you can still use it but first adjust weight based on molecular weight).
Yderligere kan den primære bionedbrydning bestemmes ved specifikke analyser ved testens begyndelse og afslutning.
For Hank's final solution combine in the following order:
Testkemikaliets renhed, vandopløselighed, flygtighed og adsorptionsegenskaber skal være kendt, for at resultaterne kan fortolkes korrekt.
stock 1
Teststoffets organiske kulstofindhold (vægtprocent) skal være kendt enten fra sin kemiske struktur eller ved måling.
1,0 ml
For flygtige teststoffer kan en målt eller beregnet Henrys lovkonstant bruges til at afgøre, om testen kan anvendes.
stock 2
Information om teststoffets toksicitet over for anaerobe bakterier kan bruges til at vælge en passende testkoncentration og fortolke resultater, der påviser lav bionedbrydelighed.
0,1 ml
Kontrol for hæmning bør medtages, medmindre det er påvist, at teststoffet ikke hæmmer anaerobe mikrobielle aktiviteter (se punkt 21 og ISO 13641-1 (12)).
stock 3
Generelt skal der for flygtige stoffer træffes en beslutning for hvert enkelt stof.
8,6 ml
Der skal måske træffes særlige foranstaltninger for f.eks. ikke at frigive gas under testen.
stock 4
For at kontrollere fremgangsmåden testes et referencestof ved at opstille egnede beholdere parallelt som led i de almindelige testforløb.
stock 5
Phenol, natriumbenzoat og polyethylenglycol 400 er eksempler og forventes at nedbrydes med over 60 % teoretisk gasproduktion (dvs. methan og uorganisk kulstof) inden for 60 dage (3)(14).
Mix well before use.
FORSØGSRESULTATERNES REPRODUCERBARHED
Fertilisation
I en international ringtest (14) var der god reproducerbarhed i gastrykmålinger mellem tre beholdere.
Large, gravid females are identified from the desired population;
Den relative standardafvigelse (variationskoefficient, CV) var hovedsagelig under 20 %, skønt denne værdi ofte steg til > 20 % i nærværelse af toksiske stoffer eller hen imod slutningen af den 60 dages inkubationsperiode.
females are ready for squeezing only when you can see eggs protruding from the cloaca.
Følgende resultater blev opnået i ringtesten:
Ready females have the characteristic “head up” posture.
Teststof
Gently run a finger or thumb down the side of the fish towards the tail to encourage the expulsion of an egg sack into a fresh petri dish.
Gennem-snitlig nedbrydning
The eggs can be spread out (forming a monolayer) using a fine paintbrush.
Relativ standard-afvigelse
Keep the eggs humid by laying damp tissue around them (it is important the eggs do not touch water directly as this can prematurely harden the chorion preventing fertilisation).
(af valide data)
of sperm in Hank's mixture is spread evenly over the whole surface of the eggs using the paintbrush.
Palmitin-syre
If the estimated number of eggs is more than 150, repeat the procedure.
Polyethylen Glycol 400
Similarly if the eggs don't harden within a minute add a bit more sperm.
Når værdier på < 40 % og > 100 % blev udeladt (den førstnævnte antages at skyldes suboptimale betingelser, sidstnævnte har ukendte årsager), blev CV'erne reduceret til henholdsvis 26 % og 23 %.
The eggs and the sperm solution should be left to “interact” for at least 15 minutes and the fertilised eggs should be placed into the exposure aquaria within 1,5 hours post fertilisation.
Andelene af den procentvise bionedbrydning, der stammer fra DIC-målinger, var relativt lave, men variable.
Spare few eggs from the last batch and fix them in 10 % acetic acid.
a. inkubator — gnistsikker og styret til 35 °C ± 2 °C
Eggs should be evenly distributed between each treatment level to avoid genetic bias.
b. trykmodstandsdygtige testbeholdere af glas med en passende nominel størrelse [14], hver udstyret med et gastæt låg, som kan modstå ca. 2 bar.
Each batch of fertilised eggs should be separated into equal size groups (as many as the treatment levels) by the use of a blunt instrument (i.e. wide-blade entomology forceps or use of an inoculation loop).
Headspacevolumen bør være omkring 10-30 % af det samlede volumen.
If you aim for 4 replicates per treatment, with 20 eggs each then you need to distribute 80 eggs per exposure aquaria.
Hvis der jævnligt udledes biogas, er omkring 10 % headspacevolumen passende, men hvis der kun udledes gas ved afslutningen af testen, er 30 % passende.
It is advisable to add an extra 20 % (i.e. 96 eggs per treatment level) until you are confident that you obtain 100 % fertilisation rates.
Serumflasker af glas med et nominelt volumen på 125 ml, og et samlet volumen på ca. 160 ml, forseglet med serumflaskesepta [15] og crimplåg (aluminiumsringe) anbefales, når trykket udløses på hvert prøvetagningstidspunkt
Stickleback eggs are very prone to fungal infections outside the father-guarded nest.
c. trykmåler [16], der er tilpasset til at kunne måle og udlufte den producerede gas, f.eks. en håndholdt præcisionstrykmåler, som er forbundet med en passende kanyle;
In this respect, treatment of all eggs with methylene blue during the first 5 days of the test is critically important.
en gastæt trevejsventil letter frigivelsen af overtryk (tillæg 1).
A stock solution of methylene blue is prepared at 1 mg/ml and added to the exposure aquaria to give a maximum final concentration of 2,125 mg/l.
Bemærk — Trykaflæsningerne bruges direkte til at beregne mængden af kulstof produceret i headspacet (punkt 42-44).
Sticklebacks should not be exposed to methylene blue once hatched so the system should be free of methylene blue by day 6.
Alternativt kan trykaflæsningerne omregnes til volumener (ved 35 °C atmosfærisk tryk) produceret gas ved hjælp af en omregningskurve.
The eggs are inspected daily and any dead or unfertilised eggs are recorded as such.
Denne kurve konstrueres på grundlag af data, som fremkommer ved at indsprøjte et kendt volumen kvælstofgas ind i en række testbeholdere (f.eks. serumflasker) med en temperatur på 35 ° +/– 2 °C, og registrere de deraf følgende stabiliserede trykaflæsninger (se tillæg 2).
The eggs should never be outside water until they hatch even for very brief periods.
Beregningen vises i bemærkningen i punkt 44.
Hank's Buffered Salt Solution (HBSS):HBSS is needed to preserve the sperm whilst preparing for fertilisation.
Advarsel — Pas på nålestikskader ved brug af mikrosprøjter.
C.42 BIODEGRADABILITY IN SEAWATER
d. kulstofanalysator egnet til direkte bestemmelse af uorganisk kulstof i området 1 mg/l til 200 mg/l
GENERAL INTRODUCTION
e. sprøjter med høj præcision til gasformige og flydende prøver
This test method is equivalent to OECD Test Guideline (TG) 306 (1992).
f. magnetomrørere og stangmagneter (valgfrit)
When the original test methods were developed, it was not known to what extent results from the screening tests for ready biodegradability using freshwater, and sewage effluent or activated sludge as inoculum, could be applied to the marine environment.
g. handskekasse (anbefales).
Variable results on this point have been reported (e.g. (1)).
Brug destilleret eller deioniseret vand (afiltet ved at gennemboble med kvælstofgas indeholdende under 5 μl/l ilt), som indeholder under 2 mg/l opløst organisk kulstof (DOC).
Many industrial waste waters, containing a variety of chemicals, reach the sea either by direct discharge or via estuaries and rivers in which the residence times are low compared with the period necessary for complete biodegradation of many of the chemicals present.
Fortyndingsmediet fremstilles således, at det indeholder følgende bestanddele i de angivne mængder:
Because of the growing awareness of the need to protect the marine environment against increasing loads of chemicals and the need to estimate the probable concentration of chemicals in the sea, test methods for biodegradability in seawater have been developed.
Vandfrit kaliumdihydrogenfosfat, (KH2PO4)
The methods described here use natural seawater both as the aqueous phase and as the source of micro-organisms.
Dinatriumhydrogenfosfatdodecahydrat (Na2HPO4 · 12H2O))
In an endeavour to conform with the methods for ready biodegradability in freshwater, the use of ultra-filtered and centrifuged seawater was investigated, as was the use of marine sediments as inocula.
Ammoniumchlorid (NH4Cl)
These investigations were unsuccessful.
Calciumchloriddihydrat (CaCl2 · 2H2O)
The test medium therefore is natural seawater pre-treated to remove coarse particles.
0,075g
In order to assess ultimate biodegradability with the Shake Flask Method, relatively high concentrations of the test substance have to be used because of the poor sensitivity of the dissolved organic carbon (DOC) analytical method.
Magnesiumchloridhexahydrat (MgCl2 · 6H2O)
This in turn necessitates the addition to the seawater of mineral nutrients (N and P), the low concentrations of which would otherwise limit the removal of DOC.
Jern(II)chloridtetrahydrat (FeCl2 · 4H2O)
It is also necessary to add the nutrients in the Closed Bottle Method because of the concentration of the added test substance.
Resazurin (iltindikator)
Hence, the methods are not tests for ready biodegradability since no inoculum is added in addition to the micro-organisms already present in the seawater.
Natriumsulfidnonahydrat (Na2S · 9H2O)
Neither do the tests simulate the marine environment since nutrients are added and the concentration of test substance is very much higher than would be present in the sea.
Stamopløsning af sporstoffer (valgfrit, punkt 18)
For these reasons the methods are proposed under a new subsection “Biodegradability in Seawater”.
Tilsæt afiltet vand (punkt 15)
APPLICATION
til 1 liter
The results of the tests, which would be applied because the pattern of use and disposal of the substance in question indicated a route to the sea, give a first impression of biodegradability in seawater.
Brug frisk natriumsulfid, eller vask og tør det før brug for at sikre, at det har tilstrækkelig reducerende kapacitet.
If the result is positive (> 70 % DOC removal; > 60 % ThOD — theoretical oxygen demand), it may be concluded that there is a potential for biodegradation in the marine environment.
Testen kan udføres uden brug af handskekasse (se punkt 26).
However, a negative result does not preclude such a potential but indicates that further study is necessary, for example, using as low a concentration of the test substance as possible.
I så fald øges slutkoncentrationen af natriumsulfid i mediet til 0,20 g Na2S · 9H2O pr. liter.
In either case, if a more definitive value for the rate or degree of biodegradation in seawater at a particular site is required, other more complex and sophisticated, and hence more costly, methods would have to be applied.
Natriumsulfid kan også tilsættes fra en passende anaerob stamopløsning gennem septum på de lukkede testbeholdere, eftersom denne fremgangsmåde vil mindske risikoen for iltning.
For example, a simulation test could be applied using a concentration of test substance nearer to the likely environmental concentration.
Natriumsulfid kan erstattes af titanium(III)citrat, som tilsættes gennem septum af de lukkede testbeholdere ved en slutkoncentration på 0,8-1,0 mmol/l.
Also, non-fortified, non-pre-treated seawater taken from the location of interest could be used and primary biodegradation could be followed by specific chemical analysis.
Titanium(III)citrat er et meget effektivt reduktionsmiddel med lav toksicitet, der fremstilles som følger:
For ultimate biodegradability, 14C-labelled substances would be necessary in order that the rates of the disappearance of soluble organic 14C and the production of 14CO2 at environmentally realistic concentrations could be measured.
Opløs 2,94 g trinatriumcitratdihydrat i 50 ml afiltet vand (hvilket giver en opløsning på 200 mmol/l), og tilsæt 5 ml 15 % (vægtprocent) titanium(III)chloridopløsning.
CHOICE OF METHODS
Neutraliser til pH 7 ± 0,2 med mineralsk alkali, og hæld i en passende beholder med en strøm af kvælstof.
The selection of which method to use depends on a number of factors;
Koncentrationen af titanium(III)citrat i denne stamopløsning er på 164 mmol/l.
the following Table is given to help the selection.
Bland bestanddelene i testmediet undtagen reduktionsmidlet (natriumsulfid titaniumcitrat) og sprøjt opløsningen med kvælstofgas i ca. 20 min. umiddelbart før brug for at fjerne ilten.
While substances of water solubility below the equivalent of about 5 mg C/l cannot be tested in the Shake Flask Method, at least, in principle, poorly soluble substances may be tested in the Closed Bottle Method.
Tilsæt herefter en passende mængde frisk fremstillet opløsning af reduktionsmidlet (fremstillet af afiltet vand), lige før mediet skal bruges.
Table
Tilpas eventuelt mediets pH med fortyndet uorganisk syre eller alkali til 7 ± 0,2.
Advantages and disadvantages of the shake flask and closed bottle test
Stamopløsning af sporstoffer (valgfrit)
METHOD
Testmediet bør indeholde følgende sporstoffer for at øge anaerobe nedbrydningsprocesser, især hvis der benyttes lave koncentrationer (f.eks. 1 g/l) af inokulum (11).
ADVANTAGES
Manganchloridtetrahydrat (MnCl2 · 4H2O)
DISADVANTAGES
Borsyre (H3BO3)
SHAKE FLASK
Zinkchlorid (ZnCl2)
simple apparatus except C analyser
Kobber(II)chlorid (CuCl2)
60 d duration is not a problem
Dinatriummolybdatdihydrat (Na2MoO4 · 2H2O)
no interference from nitrification
Cobaltchloridhexahydrat (CoCl2 · 6H2O)
can be adapted for volatile substances
Nikkelchloridhexahydrat (NiCl2 · 6H2O)
needs C analyser
Dinatriumselenit (Na2SeO3)
uses 5-40 mg DOC/1, could be inhibitory
Tilsæt teststoffet som en stamopløsning, suspension, emulsion eller direkte som fast eller flydende stof eller absorberet på et glasfiberfilter for at få en koncentration på højst 100 mg/l organisk kulstof.
DOC determination is difficult at low concentrations in seawater (chloride effect)
Hvis der anvendes stamopløsninger, fremstilles en egnet opløsning med vand (punkt 15) (tidligere afiltet ved at besprøjtning med kvælstofgas) af en sådan styrke, at det tilsatte volumen er mindre end 5 % af den samlede mængde reaktionsblanding.
DOC sometimes high in seawater
Tilpas eventuelt stamopløsningens pH til pH 7 ± 0,2.
CLOSED BOTTLE
Er der tale om teststoffer, som ikke er tilstrækkeligt opløselige i vand, henvises til ISO 10634 (13).
simple apparatus
Hvis der anvendes et opløsningsmiddel, klargøres en supplerende kontrol, hvor der kun tilsættes opløsningsmiddel til det inokulerede medium.
simple end determination
Referencestoffer
could be difficult to maintain air-tightness of bottles
Referencestoffer, såsom natriumbenzoat, phenol og polyethylenglycol 400 er blevet brugt med held til at kontrollere fremgangsmåden, idet de nedbrydes over 60 % inden for 60 dage.
wall growth of bacteria can lead to false values
Fremstil en stamopløsning (i afiltet vand) af det valgte referencestof på samme måde som for teststoffet og tilpas eventuelt til pH 7 ± 0,2.
blank O2 uptake values can be high especially after 28 days;
Kontrol for hæmning (betinget)
could be overcome by ageing the seawater
For at få information om teststoffets toksicitet over for anaerobe mikroorganismer for at finde den mest egnede testkoncentration tilsættes teststof og referencestof til en beholder, der indeholder testmediet (se punkt 16), hver især med de samme koncentrationer, som blev tilsat (se punkt 19-20 og se endvidere ISO 13641-1 (12)).
possible interference from O2 uptake by nitrification
Udrådnet slam
SHAKE FLASK METHOD
Udtag udrådnet slam fra en rådnetank på et rensningsanlæg, der fortrinsvis behandler husholdningsspildevand.
This method is a seawater variant of the Modified OECD Screening Test described in Chapter C.4B of this Annex (2).
Slammet skal være fuldstændig karakteriseret, og baggrundsoplysningerne om det registreres (se punkt 54).
It was finalised as a result of a ring test organized for the European Commission (EC) by the Danish Water Quality Institute (3).
Hvis det er meningen, at der skal bruges et tilpasset inokulum, kan det overvejes at bruge udrådnet slam fra et industrielt rensningsanlæg.
In common with the accompanying marine Closed Bottle Method, the results from this test are not to be taken as indicators of ready biodegradability, but are to be used specifically for obtaining information about the biodegadability of substances in marine environments.
Brug kolber med bred hals fremstillet af polyethylen med høj densitet eller et tilsvarende materiale, som kan udvides, til opsamling af udrådnet slam.
A pre-determined amount of the test substance is dissolved in the test medium to yield a concentration of 5-40 mg dissolved organic carbon (DOC)/l.