natgillin/translations-raw huggingface dataset:
En musetest, assay på lokale lymfeknuder (Local Lymph Node Assay (LLNA), TM B.42 (4)) og dens to ikke-radioaktive ændringer, LLNA: DA (TM B.50 (5)) og LLNA: BrdU-ELISA (TM B.51 (6)), som alle udelukkende vurderer induktionsresponsen, er også blevet accepteret, eftersom de indebærer en fordel i forhold til marsvinetest, hvad angår dyrevelfærd og en objektiv måling af induktionsfasen for hudsensibilisering.
measurement of cytotoxicity used, e.g. CBPI or RI in the case of cytokinesis-block method; RICC or RPD when cytokinesis-block methods are not used; other observations if any (e.g. cell confluency, apoptosis, necrosis, metaphase counting, frequency of binucleated cells);
På det seneste har man anset mekanistisk baserede in chemico- og in vitro-forsøgsmetoder for videnskabeligt gyldige til evaluering af kemikaliers hudsensibiliseringsfare.
data on pH and osmolality of the treatment medium, if determined;
Men der vil være behov for kombinationer af metoder uden brug af dyr (in silico, in chemico, in vitro) inden for integrerede tilgange til prøvning og vurdering (IATA) for fuldt ud at kunne erstatte de dyreforsøg, der anvendes i øjeblikket, i lyset af den begrænsede AOP-mekanistiske dækning af hver af de aktuelt tilgængelige forsøgsmetoder uden brug af dyr (2) (7).
distribution of mono-, bi-, and multi-nucleate cells if a cytokinesis block method is used;
Det foreslås, at DPRA bruges til at håndtere den molekylære udløsende begivenhed for hudsensibiliserings-AOP'en, nemlig proteinreaktivitet, ved at kvantificere testkemikaliernes reaktivitet over for modellens syntetiske peptider, som enten indeholder lysin eller cystein (8).
number of cells with micronuclei given separately for each treated and control culture, and defining whether from binucleate or mononucleate cells, where appropriate;
De procentvise nedbrydningsværdier for cystein og lysin bruges herefter til at klassificere et stof i en af fire reaktivitetsklasser, der bruges som grundlag for sondringen mellem hudsensibiliserende og ikke-sensibiliserende stoffer (9).
historical negative (solvent) and positive control data, with ranges, means and standard deviation and 95 % control limits for the distribution, as well as the number of data;
DPRA er blevet vurderet i en valideringsundersøgelse ledet af et EU-referencelaboratorium for alternativer til dyreforsøg (EURL ECVAM) og en efterfølgende uafhængig peer review udført af EURL ECVAM's videnskabelige rådgivende udvalg (ESAC) og betragtes som videnskabeligt underbygget (10) til brug som en del af en IATA til at underbygge sondringen mellem hudsensibiliserende og ikke-hudsensibiliserende stoffer med henblik på fareklassificering og mærkning.
statistical analysis; p-values if any.
Litteraturen indeholder eksempler på anvendelse af DPRA-data i kombination med andre oplysninger (11) (12) (13) (14).
Chapter B.10 of this Annex: In Vitro Mammalian Chromosome Aberration Test,.
Definitioner findes i tillæg 1.
In vitro micronucleus assay with Chinese hamster V79 cells — results of a collaborative study with in situ exposure to 26 chemical substances.
INDLEDENDE OVERVEJELSER, ANVENDELSE OG BEGRÆNSNINGER
A protocol for the in vitro micronucleus test, I. Contributions to the development of a protocol suitable for regulatory submissions from an examination of 16 chemicals with different mechanisms of action and different levels of activity.
Sammenhængen mellem proteinreaktivitet og hudsensibiliseringspotentiale er veldokumenteret (15) (16) (17).
Evaluation of different cytotoxic and cytostatic measures for the in vitro micronucleus test (MNVit): Introduction to the collaborative trial.
Men da proteinbinding kun udgør en vigtig begivenhed, selv om der er tale om den molekylære udløsende begivenhed for hudsensibiliserings-AOP'en, er oplysninger om proteinreaktivitet, der genereres med forsøgs- og ikke-forsøgsmetoder, muligvis ikke i sig selv tilstrækkelige til at konkludere, at kemikalier ikke kan forårsage hudsensibilisering.
Comparison of four different treatment conditions of extended exposure in the in vitro micronucleus assay using TK6 lymphoblastoid cells.
Derfor bør data genereret med denne forsøgsmetode ses i sammenhæng med integrerede tilgange, såsom IATA, idet de kombineres med andre supplerende oplysninger, f.eks. hidrørende fra in vitro-assays vedrørende andre vigtige begivenheder for hudsensibiliserings-AOP samt ikke-forsøgsmetoder, herunder analogislutninger fra analoge kemikalier.
Statement by the European Centre for the Validation of Alternative Methods (ECVAM) Scientific Advisory Committee (ESAC) on the scientific validity of the in vitro micronucleus test as an alternative to the in vitro chromosome aberration assay for genotoxicity testing.
Denne forsøgsmetode kan anvendes i kombination med andre supplerende oplysninger som begrundelse for forskelsbehandling mellem hudsensibiliserende (dvs. UN GHS-/CLP-kategori 1) og ikke-hudsensibiliserende stoffer i forbindelse med IATA.
ESAC 25th meeting, 16-17 November 2006, Available at: http://ecvam.jrc.it/index.htm.
Denne metode kan ikke anvendes alene, hverken til at kategorisere hudsensibiliserende stoffer i underkategorierne 1A og 1B som defineret i UN GHS/CLP, eller til at forudsige styrken i forbindelse med beslutninger om sikkerhedsvurdering.
Available at: http://ecvam.jrc.it/index.htm.
Afhængigt af den juridiske ramme kan et positivt udfald af DPRA imidlertid anvendes alene til at klassificere et kemikalie i UN GHS-/CLP-kategori 1.
“A safe substitute for Polychlorinated Biphenyls as an Inducer of Metabolic Activation Systems”, in In Vitro Metabolic Activation in Mutagenesis Testing. de Serres, F.J. et al.
DPRA-forsøgsmetoden har vist sig at kunne overføres til laboratorier, der har erfaring med højtrykvæskekromatografi (HPLC).
(eds), Elsevier, North-Holland, pp. 85-88.
Det er mere sandsynligt, at DPRA vil føre til for lave forudsigelser for kemiske stoffer med lav til moderat hudsensibiliserende styrke (dvs. UN GHS-/CLP-underkategori 1B) i forhold til kemikalier med høj hudsensibiliserende styrke (dvs. UN GHS-/CLP-underkategori 1A) (18) (19).
Available at: http://www.pops.int/
I øjeblikket er der begrænsede oplysninger tilgængelige om anvendeligheden af DPRA til blandinger med kendt sammensætning (18) (19).
“CHO/HGPRT Mutation Assay: Evaluation of Gases and Volatile Liquids”, in Genotoxic Effects of Airborne Agents.
DPRA betragtes alligevel som teknisk anvendelig til test af stoffer med flere bestanddele og blandinger med kendt sammensætning (se punkt 18).
Tice, R.R., D.L.
Før brug af denne forsøgsmetode til lovmæssig test af en blanding til generering af data bør det overvejes, om den vil give resultater, som er egnede til formålet, og i givet fald hvorfor.
Corrigendum to “Report from the in vitro micronucleus assay working group”.
Sådanne overvejelser er ikke nødvendige, når der foreligger et myndighedskrav om test af blandingen.
OECD Environment, Health and Safety Publications (EHS), Series on testing and assessment, No. 198, OECD Publishing, Paris.
Den nuværende forudsigelsesmodel kan ikke anvendes til komplekse blandinger af ukendt sammensætning eller til stoffer med ukendt eller variabel sammensætning, komplekse reaktionsprodukter eller biologiske materialer (dvs. UVCB-stoffer) på grund af de definerede molforhold for testkemikalie og peptid.
“In vitro micronucleus test”, in Encyclopedia of Biopharmaceutical Statistics, 2nd ed.
Der vil derfor skulle udvikles en ny forudsigelsesmodel til dette baseret på en gravimetrisk metode.
Chow, S. (ed.), Marcel Dekker, Inc.
I de tilfælde, hvor det kan påvises, at forsøgsmetoden ikke er anvendelig til andre specifikke kategorier af kemikalier, bør forsøgsmetoden ikke anvendes til de pågældende kategorier.
New York, pp. 463-467.
Denne forsøgsmetode er en in chemico-metode, der ikke omfatter et metabolisk system.
Analysis of Data from in vitro Cytogenetic Assays. in Statistical Evaluation of Mutagenicity Test Data, Kirkland, D.J.
Kemikalier, der kræver enzymatisk bioaktivering for at udøve deres hudsensibiliseringspotentiale (dvs. pro-haptener), kan ikke spores med denne forsøgsmetode.
(ed), Cambridge University Press, Cambridge, pp. 141-154.
Der findes rapporter om, at kemikalier, der bliver til sensibiliserende stoffer efter abiotisk omdannelse (dvs. præ-haptener), i nogle tilfælde kan spores korrekt med denne forsøgsmetode (18).
Aneugen
I lyset af ovenstående bør negative resultater, der er opnået med forsøgsmetoden, fortolkes i lyset af de anførte begrænsninger og i kombination med andre informationskilder inden for rammerne af en IATA.
any chemical or process that, by interacting with the components of the mitotic and meiotic cell division cycle apparatus, leads to aneuploidy in cells or organisms.
Testkemikalier, der ikke bindes kovalent til peptidet, men fremmer dets oxidering (dvs. cysteindimerisering), kan medføre en overvurdering af peptidnedbrydningen, hvilket kan resultere i mulige falsk positive forudsigelser og/eller placering i en højere reaktivitetsklasse (jf. punkt 29 og 30).
programmed cell death characterised by a series of steps leading to the disintegration of cells into membrane-bound particles that are then eliminated by phagocytosis or by shedding.
Som beskrevet understøtter DPRA sondring mellem hudsensibiliserende og ikke-hudsensibiliserende stoffer.
the increase in cell number as a result of mitotic cell division.
Det kan imidlertid også bidrage til vurderingen af sensibiliseringsstyrken (11), når det bruges i integrerede tilgange såsom IATA.
the DNA region of a chromosome where both chromatids are held together and on which both kinetochores are attached side-to-side.
Der er dog behov for yderligere arbejde, fortrinsvis baseret på data for mennesker, for at fastslå, hvordan DPRA-resultaterne kan anvendes til styrkevurderingen.
refers to final concentrations of the test chemical in the culture medium.
DPRA er en in chemico-metode, der kvantificerer restkoncentrationen af cystein- eller lysin-holdigt peptid efter 24 timers inkubering med testkemikaliet ved 25 ± 2,5 °C.
any chemical or event which causes structural chromosomal aberrations in populations of cells or eukaryotic organisms.
Den syntetiske peptid indeholder phenylalanin for at hjælpe med påvisningen.
Cytokinesis
Den relative peptidkoncentration måles ved højtryksvæskekromatografi (HPLC) med gradienteluering og UV-detektion ved 220 nm.
the process of cell division immediately following mitosis to form two daughter cells, each containing a single nucleus.
Herefter beregnes nedbrydningsværdierne for det cystein- og lysinholdige peptid i procent og anvendes i en forudsigelsesmodel (se punkt 29), som gør det muligt at placere testkemikaliet i en af fire reaktivitetsklasser, der anvendes som grundlag for sondringen mellem sensibiliserende stoffer og ikke-sensibiliserende stoffer.
Cytokinesis-Block Proliferation index (CBPI)
Før rutinemæssig brug af den metode, der beskrives i denne forsøgsmetode, bør laboratorierne godtgøre deres tekniske kompetence ved hjælp af de 10 kompetencestoffer, der findes opført i tillæg 2.
the proportion of second-division cells in the treated population relative to the untreated control (see Appendix 2 for formula).
Denne forsøgsmetode er baseret på DPRA DB-ALM protokol nr. 154 (20), der repræsenterer den protokol, der blev anvendt i valideringsundersøgelsen koordineret af EURL ECVAM.
Cytostasis
Det anbefales, at denne protokol anvendes, når metoden indføres og anvendes i laboratoriet.
inhibition of cell growth (see Appendix 2 for formula).
Følgende er en beskrivelse af de vigtigste DPRA-komponenter og procedurer.
For the assays covered in this test method performed in the presence of cytochalasin B, cytotoxicity is identified as a reduction in cytokinesis-block proliferation index (CBPI) or Replication Index (RI) of the treated cells as compared to the negative control (see paragraph 26 and Appendix 2)
Hvis der anvendes en alternativ HPLC-opstilling, bør dens ækvivalens med den validerede opstilling, som beskrives i DB-ALM-protokollen, dokumenteres (f.eks. ved at teste kompetencestofferne i tillæg 2).
For the assays covered in this test method performed in the absence of cytochalasin B, cytotoxicity is identified as a reduction in relative population doubling (RPD) or relative increase in cell count (RICC) of the treated cells as compared to the negative control (see paragraph 27 and Appendix 2).
Præparering af de cystein- eller lysinholdige peptider
Interphase cells
Stamopløsninger af cystein (Ac-RFAACAA-COOH) og lysin (Ac-RFAAKAA-COOH), der indeholder syntetiske peptider med en renhed på over 85 % og helst i intervallet 90-95 %, fremstilles lige før deres inkubering med testkemikaliet.
cells not in the mitotic stage.
Slutkoncentrationen af cysteinpeptidet bør være 0,667 mM i pH 7,5-fosfatbuffer, mens slutkoncentrationen af lysinpeptid bør være 0,667 mM i pH 10,2-ammoniumacetatbuffer.
a protein-containing structure that assembles at the centromere of a chromosome to which spindle fibres associate during cell division, allowing orderly movement of daughter chromosomes to the poles of the daughter cells.
HPLC-analysesekvensen bør fastlægges med henblik på at holde varigheden af HPLC-analysen under 30 timer.
small nuclei, separate from and additional to the main nuclei of cells, produced during telophase of mitosis or meiosis by lagging chromosome fragments or whole chromosomes.
Til den HPLC-opstilling, som blev anvendt i valideringsundersøgelsen og beskrives i denne forsøgsmetode, kan op til 26 analyseprøver (der omfatter testkemikaliet, den positive kontrol og et hensigtsmæssigt antal opløsningsmiddelkontroller på grundlag af antallet af individuelle opløsningsmidler, der anvendes i testen, som hvert afprøves i tre eksemplarer), medtages i en enkelt HPLC-kørsel.
the ratio of cells in metaphase divided by the total number of cells observed in a population of cells; an indication of the degree of cell proliferation of that population.
Til alle replikater, som analyseres i samme kørsel, bør der anvendes identiske stamopløsninger af cystein- og lysinpeptid.
Non-disjunctio
Det anbefales at kontrollere, at de enkelte peptidbatches har korrekt opløselighed, inden de bruges.
failure of paired chromatids to disjoin and properly segregate to the developing daughter cells, resulting in daughter cells with abnormal numbers of chromosomes.
Præparering af testkemikaliet
numerical chromosome aberrations in cells or organisms involving entire set(s) of chromosomes, as opposed to an individual chromosome or chromosomes (aneuploidy).
Teststoffets opløselighed i et passende opløsningsmiddel bør vurderes, inden assayet gennemføres, i henhold til opløselighedsproceduren, der beskrives i DPRA DB-ALM-protokollen (20).
Proliferation Index (PI)
Et passende opløsningsmiddel vil opløse testkemikaliet helt.
method for cytotoxicity measurement when cytoB is not used (see Appendix 2 for formula).
Eftersom en stor overskydende mængde af DPRA-testkemikaliet inkuberes i enten cystein- eller lysinpeptiderne, betragtes visuel kontrol af dannelsen af en klar opløsning for at være tilstrækkelig til at fastslå, at testkemikaliet (og alle dets komponenter i forbindelse med afprøvning af et stof med flere bestanddele eller en blanding) er opløst.
Relative Increase in Cell Count (RICC)
Egnede opløsningsmidler er acetonitril, vand, en 1:1-blanding af vand og acetonitril, isopropanol, acetone eller en 1:1-blanding af acetone og acetonitril.
Replication Index (RI)
Andre opløsningsmidler kan anvendes, så længe de ikke påvirker stabiliteten af peptidet, som overvåges med referencekontrol C (dvs. prøver bestående af peptid alene opløst i et passende opløsningsmiddel, jf. tillæg 3).
the proportion of cell division cycles completed in a treated culture, relative to the untreated control, during the exposure period and recovery (see Appendix 2 for formula).
Testkemikaliet bør afvejes på forhånd i hætteglas og opløses lige inden testen i et egnet opløsningsmiddel, så der fremstilles en 100 mM-opløsning.
When cytoB is used, evaluation of cytotoxicity should be based on the Cytokinesis-Block Proliferation Index (CBPI) or Replication Index (RI) (17) (69).
For blandinger og stoffer med flere bestanddele med kendt sammensætning bør en enkelt renhed bestemmes af summen af andelen af bestanddelene (undtagen vand), og en enkelt tilsyneladende molekylvægt bør bestemmes på grundlag af de enkelte molekylvægte af de enkelte bestanddele i blandingen (undtagen vand) og deres individuelle andele.
The CBPI indicates the average number of nuclei per cell, and may be used to calculate cell proliferation.
Den resulterende renhed og tilsyneladende molekylvægt bør derefter bruges til at beregne den mængde testkemikalie, som skal bruges for fremstille en 100 mM-opløsning.
The RI indicates the relative number of cell cycles per cell during the period of exposure to cytoB in treated cultures compared to control cultures and can be used to calculate the % cytostasis:
For polymerer, for hvilke det ikke er muligt at fastslå en primær molekylvægt, kan molekylvægten af monomeren (eller den tilsyneladende molekylvægt af de forskellige monomerer, der udgør polymeren) anvendes til at fremstille en 100 mM-opløsning.
% Cytostasis = 100 – 100(CBPIT – 1) ÷ (CBPIC – 1)
Men ved test af blandinger, stoffer med flere bestanddele eller polymerer med kendt sammensætning bør det overvejes også at teste det rene kemikalie.
T test chemical treatment culture
For væsker bør det rene kemikalie testes uden forudgående fortynding ved at inkubere det med cystein- og lysinpeptiderne i et molforhold på henholdsvis 1:10 og 1:50.
C control culture
For faste stoffer bør teststoffet opløses til sin maksimale opløselige koncentration i samme opløsningsmiddel, som bruges til at fremstille den tilsyneladende 100 mM-opløsning.
No. mononucleate cells
For væsker bør det rene kemikalie testes uden forudgående fortynding ved at inkubere det med cystein- og lysinpeptiderne i et molforhold på henholdsvis 1:10 og 1:50.
No. binucleate cells
Enslydende resultater (reaktive eller ikkereaktive) mellem den tilsyneladende 100 mM-opløsning og det rene kemikalie bør give mulighed for at udlede en entydig konklusion om resultatet.
No. multinucleate cells
Forberedelse af den positive kontrol, referencekontroller og co-elueringskontroller
Total number of cells
Kanelaldehyd (CAS 104-55-2, ≥ 95 % fødevaregodkendt renhed) bør anvendes som positiv kontrol i en koncentration på 100 mM i acetonitril.
Thus, a CBPI of 1 (all cells are mononucleate) is equivalent to 100 % cytostasis.
Andre egnede positive kontroller, helst med nedbrydningsværdier i mellemområdet, kan anvendes, hvis der foreligger historiske data, som kan anvendes til at udlede sammenlignelige acceptkriterier for kørslen.
Cytostasis = 100-RI
Desuden bør man også medtage referencekontroller (dvs. prøver, der kun indeholder peptidet opløst i et passende opløsningsmiddel) i HPLC-analysesekvensen, og disse benyttes til at kontrollere HPLC-systemets egnethed forud for analysen (referencekontrol A), stabiliteten af referencekontrollerne over tid (referencekontrol B) og til at kontrollere, at det opløsningsmiddel, der anvendes til at opløse testkemikaliet, ikke påvirker den procentvise peptidnedbrydning (referencekontrol C) (jf. tillæg 3).
T treated cultures
Den relevante referencekontrol for hvert kemikalie bruges til at beregne den procentvise peptidnedbrydning for det pågældende kemikalie (se punkt 26).
C control cultures
Desuden bør man medtage en co-elueringskontrol, som udelukkende består af testkemikaliet, i analyseserien med henblik på at konstatere mulig co-eluering af testkemikaliet med enten lysin- eller cysteinpeptidet.
Thus, an RI of 53 % means that, compared to the numbers of cells that have divided to form binucleate and multinucleate cells in the control culture, only 53 % of this number divided in the treated culture, i.e. 47 % cytostasis.
Inkubering af testkemikaliet med cystein- og lysinpeptidopløsningerne
When cytoB is not used, evaluation of cytotoxicity based on Relative Increase in Cell Counts (RICC) or on Relative Population Doubling (RPD) is recommended (69), as both take into account the proportion of the cell population which has divided.
Cystein- og lysinpeptidopløsninger bør inkuberes i autosampler-hætteglas med testkemikaliet i et forhold på henholdsvis 1:10 og 1:50.
Thus, a RICC, or a RPD of 53 % indicates 47 % cytotoxicity/cytostasis.
Hvis der observeres bundfald umiddelbart efter tilsætning af testkemikalieopløsningen til peptidopløsningen på grund af testkemikaliets lave vandopløselighed, kan man ikke være sikker på, hvor meget af testkemikaliet, der forblev i opløsningen til at reagere med peptidet.
By using a Proliferation Index (PI), cytotoxicity may be assessed via counting the number of clones consisting of 1 cell (cl1), 2 cells (cl2), 3 to 4 cells (cl4) and 5 to 8 cells (cl8).
Derfor kan man i sådanne tilfælde stadig bruge et positivt resultat, men et negativt resultat er usikkert og bør fortolkes med behørig forsigtighed (se også bestemmelserne i punkt 11 vedrørende test af kemikalier, der ikke er opløselige op til en koncentration på 100 mM).
The PI has been used as a valuable and reliable cytotoxicity parameter also for cell lines cultured in vitro in the absence of cytoB (35) (36) (37) (38) and can be seen as a useful additional parameter.
Reaktionsopløsningen bør stå i mørke ved 25 ± 2,5 °C i 24 ± 2 timer, før HPLC-analysen foretages.
In any case, the number of cells before treatment should be the same for treated and negative control cultures.
Prøverne skal undersøges visuelt forud for HPLC-analysen.
When using automated scoring systems, for instance, flow cytometry, laser scanning cytometry or image analysis, the number of cells in the formula can be substituted by the number of nuclei.
Der bør genereres en kalibreringskurve for både cystein- og lysinpeptiderne.
This test method (TM) is equivalent to the OECD test guideline (TG) 442C (2015).
Peptidstandarder præpareres i en opløsning med 20 % eller 25 % acetonitrilbuffer i forhold til buffer, idet der anvendes fosfatbuffer (pH 7,5) til cysteinpeptidet og ammoniumacetatbuffer (pH 10,2) til lysinpeptidet.
A skin sensitiser refers to a substance that will lead to an allergic response following skin contact as defined by the United Nations Globally Harmonized System of Classification and Labelling of Chemicals (UN GHS) (1) and Regulation (EC) No 1272/2008 of the European Parliament and Council on Classification, Labelling and Packaging of Substances and Mixtures (CLP) [12].
Under anvendelse af serielle fortyndingsstandarder for peptidstamopløsningen (0,667 mM) fremstilles der seks kalibreringsopløsninger, der dækker området fra 0,534 til 0,0167 mM.
This test method provides an in chemico procedure (Direct Peptide Reactivity Assay — DPRA) to be used for supporting the discrimination between skin sensitisers and non-sensitisers in accordance with the UN GHS and CLP.
En blindprøve af fortyndingsbufferen bør også medtages i standardkalibreringskurven.
There is general agreement regarding the key biological events underlying skin sensitisation.
Passende kalibreringskurver skal have en r2 > 0,99.
The existing knowledge of the chemical and biological mechanisms associated with skin sensitisation has been summarised in the form of an Adverse Outcome Pathway (AOP) (2), from the molecular initiating event through the intermediate events to the adverse effect namely allergic contact dermatitis in humans or contact hypersensitivity in rodents.
Forberedelse af HPLC og analyse
Within the skin sensitisation AOP, the molecular initiating event is the covalent binding of electrophilic substances to nucleophilic centres in skin proteins.
HPLC-systemets egnethed skal kontrolleres forud for analysen.
The assessment of skin sensitisation has typically involved the use of laboratory animals.
Peptidnedbrydningen overvåges af HPLC kombineret med en UV-detektor (fotodiodearraydetektor eller absorbansdetektor med fast bølgelængde med 220 nm-signal).
The classical methods based on guinea-pigs, the Magnusson Kligman Guinea Pig Maximisation Test (GMPT) and the Buehler Test (TM B.6 (3)), study both the induction and elicitation phases of skin sensitisation.