natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Det er ikke nødvendigt at sætte en ny spids på mikropipetten.
The nominal test concentrations, weekly measured concentrations of the test solutions and analytical method used, means of the measured values and standard deviations in the test vessels and evidence that the measurements refer to the concentrations of the test chemical in true solution;
Hvis spidsen er kontamineret eller mistænkes for at være det, skal den dog udskiftes.
Dilution water characteristics (including pH, hardness, alkalinity, temperature, dissolved oxygen concentration, residual chlorine levels, total organic carbon, suspended solids and any other measurements made)
Homogenisering af leveren
Water quality within test vessels: pH, hardness, temperature and dissolved oxygen concentration;
Sæt en ny støder på homogenisatoren med henblik på homogenisering.
Detailed information on feeding (e.g. type of food(s), source, amount given and frequency and analyses for relevant contaminants if available (e.g. PCBs, PAHs and organochlorine pesticides).
Indfør støderen i 1,5 ml-mikrorøret.
Evidence that the controls met the acceptance criteria of the test;
Hold homogenisatoren, således at leveren presses mellem støderens overflade og mikrorørets indervæg.
Data on mortalities occurring in any of the test concentrations and control;
Kør homogenisatoren i 10-20 sekunder.
Statistical analytical techniques used, treatment of data and justification of techniques used;
Afkøl mikrorøret med knust is under operationen.
Data on biological observations of gross morphology, including secondary sex characteristics, egg production and VTG;
Løft støderen op af mikrorøret, og hold den stille i omkring ti sekunder.
Results of the data analyses preferably in tabular and graphical form;
Undersøg derefter suspensionens tilstand visuelt.
Incidence of any unusual reactions by the fish and any visible effects produced by the test chemical
Hvis stykker af lever observeres i suspensionen, gentages trin (3) og (4) for at fremstille et tilfredsstillende leverhomogenat.
GUIDANCE FOR THE INTERPRETATION AND ACCEPTANCE OF THE TEST RESULTS
Afkøl det opslæmmede leverhomogenat på isstativet indtil centrifugering.
This section contains a few considerations to be taken into account in the interpretation of test results for the various endpoints measured.
Udskift støderen for hvert homogenat.
The results should be interpreted with caution where the test chemical appears to cause overt toxicity or to impact on the general condition of the test animal.
Homogeniser alle levere med homogenatbuffer i henhold til ovennævnte procedure.
In setting the range of test concentrations, care should be taken not to exceed the maximum tolerated concentration to allow a meaningful interpretation of the data.
Centrifugering af det opslæmmede leverhomogenat
It is important to have at least one treatment where there are no signs of toxic effects.
Kontroller, at temperaturen i det afkølede centrifugekammer er på ≤ 5 °C.
Signs of disease and signs of toxic effects should be thoroughly assessed and reported.
Indsæt 1,5 ml-mikrorørene med det opslæmmede leverhomogenat i den afkølede centrifuge (juster om nødvendigt balancen).
For example, it is possible that production of VTG in females can also be affected by general toxicity and non-endocrine toxic modes of action, e.g. hepatotoxicity.
Centrifuger det opslæmmede leverhomogenat ved 13000 g i 10 min. ved ≤ 5 °C.
However, interpretation of effects may be strengthened by other treatment levels that are not confounded by systemic toxicity.
Hvis supernatanterne er tilstrækkeligt separeret, kan centrifugalkraften og tiden dog justeres efter behov.
There are a few aspects to consider for the acceptance of test results.
Efter centrifugeringen kontrolleres det, at supernatanterne er tilstrækkeligt separeret (overflade: fedtstoffer, mellemlag: supernatant, nederste lag: levervæv).
As a guide, the VTG levels in control groups of males and females should be distinct and separated by about three orders of magnitude in fathead minnow and zebrafish, and about one order of magnitude for medaka.
Hvis separationen ikke er tilstrækkelig, centrifugeres suspensionen igen under samme betingelser.
Examples of the range of values encountered in control and treatment groups are available in the validation reports (1, 2, 3, 4).
Fjern alle prøver fra den afkølede centrifuge, og arranger dem i samme rækkefølge som prøvenummeret på isstativet.
High VTG values in control males could compromise the responsiveness of the assay and its ability to detect weak oestrogen agonists.
Sørg for ikke at resuspendere de enkelte separerede lag efter centrifugeringen.
Low VTG values in control females could compromise the responsiveness of the assay and its ability to detect aromatase inhibitors and oestrogen antagonists.
Indsamling af supernatanten
The validation studies were used to build that guidance.
Anbring fire 0,5 ml-mikrorør til opbevaring af supernatanten i reagensglasstativet.
Concerning the quantification of egg production, this is subject to important variations [the coefficient of variation (CV) may range from 20 to 60 %] that impinge the ability of the assay to detect a significant decrease in egg production smaller than 70 % as the CV approaches 50 % or more.
Indsaml 30 μl af hver supernatant (separeret som det mellemliggende lag) med mikropipetten, og fyld det i et 0,5 ml-mikrorør.
When the CV is confined to lower values (around 20-30 %), then the assay will have acceptable power (80 %) to detect 40-50 % decrease in egg production.
Sørg for ikke at indsamle fedtstoffet på overfladen eller levervævet i det nederste lag.
The test design used for the fathead minnow, including four replicates per treatment level, should allow more power to the fecundity endpoint, compared to a test design with 2 replicates only.
Indsaml supernatanten, og fyld den i to andre 0,5 ml-mikrorør på samme måde som beskrevet ovenfor.
If a laboratory has not performed the assay before or substantial changes (e.g. change of fish strain or supplier) have been made it is advisable that a technical proficiency study is conducted.
Indsaml resten af supernatanten med mikropipetten (om muligt: ≥ 100 μl).
It is recommended that chemicals covering a range of modes of action or impacts on a number of the test endpoints are used.
Fyld derefter supernatanten i det sidste mikrorør.
In practice, each laboratory is encouraged to build its own historical control data for males and females and to perform a positive control chemical for estrogenic activity (e.g. 17β-estradiol at 100 ng/l, or a known weak agonist) resulting in increased VTG in male fish, a positive control chemical for aromatase inhibition (e.g. fadrozole or prochloraz at 300 μg/l) resulting in decreased VTG in female fish, and a positive control chemical for androgenic activity (e.g. 17β-trenbolone at 5 μg/l) resulting in induction of secondary sex characteristics in female fathead minnow and medaka.
Luk mikrorørets låg, og angiv supernatantens volumen på etiketten.
All these data can be compared to available data from the validation studies (1, 2, 3) to ensure laboratory proficiency.
Afkøl derefter straks mikrorørene på isstativet.
In general, VTG measurements should be considered positive if there is a statistically significant increase in VTG in males (p < 0,05), or a statistically significant decrease in females (p < 0,05) at least at the highest dose tested compared to the control group, and in the absence of signs of general toxicity.
Sæt en ny spids på mikropipetten for hver supernatant.
A positive result is further supported by the demonstration of a biologically plausible relationship between the dose and the response curve.
Hvis en stor mængde fedtstoffer sætter sig fast i spidsen, skal den straks udskiftes, for at forhindre at leverekstraktet kontamineres med fedtstoffet.
As mentioned earlier, the VTG decrease may not entirely be of endocrine origin; however a positive result should generally be interpreted as evidence of endocrine activity in vivo, and should normally initiate actions for further clarification.
Fordel hele den centrifugerede supernatant i fire 0,5 ml-mikrorør i henhold til ovennævnte procedure.
Gonadal histopathology evaluation may be required by regulatory authorities to determine the reproductive fitness of the test animals and to allow a weight of evidence assessment of the test results.
Når supernatanten er fordelt i mikrorørene, anbringes de alle i reagensglasstativet med identifikationsetiketten og nedfryses straks.
Performance of gonadal histopathology may not be necessary in cases where either, VTG or secondary sex characteristics is positive (i.e. VTG increase or decrease, or induction of secondary sex characteristics).
Hvis VTG-koncentrationerne måles umiddelbart efter forbehandlingen, holdes et af mikrorørene (som indeholder 30 μl supernatant) afkølet i reagensglasstativet og overføres til den arbejdsstation, hvor ELISA-assayet udføres.
OECD (2006b).
I givet fald anbringes de resterende mikrorør i reagensglasstativerne og fryses i fryseren.
OECD (2007).
Når supernatanten er indsamlet, kasseres remanensen med det samme.
Owens JW (2007).
Fremgangsmåde 3A:
Sumpter J.P. and S. Jobling (1995).
Blodvolumenerne er 5-15 mikroliter afhængigt af fiskens størrelse.
Ankley G.T., et al.
Et tilsvarende volumen aprotininbuffer (6 mikrogram/ml i PBS) tilsættes til mikrokapillærrøret, og plasma separeres fra blodet ved centrifugering (fem minutter ved 600 g).
Panter G.H., et al.
Fremgangsmåde 3B:
Part C Pharmacology, toxicology and endocrinology; 123(2):113-25.
Zebrafisk, indsamling af blod ved hjertepunktur
Application of an ELISA to quantify vitellogenin concentrations in fathead minnows (Pimephales promelas) exposed to endocrine disrupting chemicals.
For at undgå koagulering af blod og nedbrydning af protein indsamles prøverne i phosphatbufret saltvand (PBS), som indeholder heparin (1000 enheder/ml) og proteaseinhibitoren aprotinin (2 TIU/ml).
CEFIC-EMSG research report reference AQ001.
Det anbefales at bruge heparin, ammonium-salt og lyofiliseret aprotinin som bestanddele i bufferen.
CEFIC, Brussels, Belgium.
Det anbefales at bruge en kanyle (1 ml) med en fast tynd nål (f.eks. Braun Omnikan-F) til blodprøveudtagning.
Fenske M., et al.
Kanylen bør på forhånd være påfyldt buffer (ca. 100 mikroliter) for helt at eluere de små volumener blod fra hver fisk.
Development and validation of a homologous zebrafish (Danio rerio Hamilton- Buchanan) vitellogenin enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and its application for studies on estrogenic chemicals.
Ved det rette anæstesiniveau kan brugeren identificere zebrafiskens hjerteslag.
Phys.
Under hjertepunktur holdes kanylens stempel under svagt tryk.
C 129 (3): 217-232.
Der kan indsamles 20-40 mikroliter blod.
Holbech H., et al.
Efter hjertepunktur fyldes blod/buffer-blandingen i reagensglasset.
Development of an ELISA for vitellogenin in whole body homogenate of zebrafish (Danio rerio).
Plasma separeres fra blodet ved centrifugering (20 min.; 5000 g) og opbevares ved – 80 °C, indtil det skal analyseres.
Comparative Biochemistry and Physiology.
Fremgangsmåde 3C:
Part C Pharmacology, toxicology and endocrinology; 130: 119-131 (16) Rose J., et al.
Standardprocedure: Zebrafisk, homogenisering af hoved og hale
Vitellogenin induction by 17β-estradiol and 17α-ethinylestradiol in male zebrafish (Danio rerio).
Fiskene bedøves og aflives i overensstemmelse med testbeskrivelsen.
C 131: 531-539.
Hoved og hale skæres af fisken i overensstemmelse med figur 1.
Brion F., et al.
Bemærk: Alle dissektionsinstrumenter og skærebrættet skylles og rengøres grundigt (f.eks. med 96 % ethanol) mellem håndtering af hver enkelt fisk for at forebygge »vitellogeninforurening« fra hunner eller inducerede hanner til ikke-inducerede hanner.
Development and validation of an enzyme-linked immunosorbent assay to measure vitellogenin in the zebrafish (Danio rerio).
Til kønskirtelhistologi
Environmental Toxicology and Chemistry; vol 21: 1699-1708.
Til VTG-analyse
Yokota H., et al.
Snit bag
Development of an ELISA for determination of the hepatic vitellogenin in Medaka (Oryzias latipes).
Til VTG-analyse
Jpn J Environ Toxicol 4:87–98.
Den samlede vægt af hoved og hale fra hver fisk måles til nærmeste mg.
(19) Tatarazako N., et al.
Når delene er vejet, anbringes de i passende rør (f.eks. 1,5 ml eppendorf) og nedfryses ved – 80 °C indtil homogenisering eller homogeniseres direkte på is med to plastpistiller.
Journal of Health Science 50:301-308.
(Der kan bruges andre metoder, hvis de anvendes på is og resulterer i en homogen masse).
Effects of the androgenic growth promoter 17-beta-trenbolone on fecundity and reproductive endocrinology of the fathead minnow.
Bemærk: Rørene nummereres korrekt, så fiskens hoved og hale kan knyttes til deres respektive kropssektion, der benyttes til histologisk undersøgelse af kønskirtlerne.
Environmental Toxicology and Chemistry; 22(6): 1350-60.
Når der er opnået en homogen masse, tilsættes en mængde iskold homogeniseringsbuffer [1] på 4 gange vævsvægten.
Seki M, et al (2004).
Arbejd til stadighed med pistillerne, indtil blandingen er homogen.
Fish full life-cycle testing for androgen methyltestosterone on medaka (Oryzias latipes).
Vigtigt: Der bruges nye pistiller til hver fisk.
OECD (2010).
Prøverne lægges på is indtil centrifugering ved 4 °C ved 50000 g i 30 min.
Guidance Document on Fish Gonadal Histopathology.
Anvend en pipette til at fordele portioner a 20 μl supernatant i mindst to rør ved at dyppe spidsen af pipetten ned under fedtlaget på overfladen og omhyggeligt suge supernatanten op uden dele af hverken fedt eller pellets.
OECD Environmental Health and Safety Publications Series on Testing and Assessment No. 123, Paris.
Rørene opbevares ved – 80 °C indtil brug.
OECD (2000) Guidance Document on Aquatic Toxicity Testing of Difficult Substances and Mixtures.
VITELLOGENINSPIKEDE PRØVER OG REFERENCESTANDARD FOR ASSAYET
Paris
På hver dag, hvor der gennemføres VTG-assay, analyseres en spiket prøve, der fremstilles med en referencestandard for assayet.
Hutchinson T.H., et al.
Det VTG, der bruges til at fremstille referencestandarden for assayet, vil være fra et andet parti end det, der bruges til at fremstille kalibrereringsstandarder for det udførte assay.
Aquatic Toxicology, 76; pp.69–92.
Den spikede prøve fremstilles ved at tilsætte en kendt mængde af standarden for assayet til en prøve af plasma fra hanner i kontrollerne.
(2006b).
Prøven spikes til en VTG-koncentration på 10-100 gange den forventede vitellogeninkoncentration for hanner i kontrollerne.
Screening and testing for endocrine disruption in fish-biomarkers as “signposts”, not “traffic lights,” in risk assessment.
Den spikede prøve af plasma fra hanner i kontrollerne kan være fra en enkelt fisk eller en kombination af flere fisk.
Environmental Health Perspectives; 114 Suppl 1:106-14.
En underprøve af ikke-spiket plasma fra hanner i kontrollerne analyseres i mindst to duplikate brønde.
Miles-Richardson S.R., et al.
Den gennemsnitlige mængde vitellogenin i de to ikke-spikede prøver af plasma fra hanner i kontrollerne lægges til den beregnede mængde VTG, der tilsættes til prøverne for at bestemme en forventet koncentration.
Aquat.
Forholdet mellem denne forventede koncentration og den målte koncentration registreres i rapporten sammen med resultaterne af hvert sæt assay gennemført på den pågældende dag.
Toxicol.
BESLUTNINGSFLOWDIAGRAM TIL STATISTISK ANALYSE Nej Nej
47, 129-145.
Rep.gns. normalt fordelt
Martinovic D., et al.
Dunns test på rep. gns.
Characterization of reproductive toxicity of vinclozolin in the fathead minnow and co-treatment with an androgen to confirm an anti-androgenic mode of action.
Rep.gns. ikke normalt fordelt
Environ.
Stept-down Jonckheere- test eller Williams' test
Toxicol.
Normaliserende transformation?
Chem.
Variansstabiliserende transformation?
27, 478-488.
<=3 rep. pr. konc.
OECD (2006c), Current Approaches in the Statistical Analysis of Ecotoxicity Data: A Guidance to Application, OECD Environmental Health and Safety Publications, Series on Testing and Assessment No.54, OECD, Paris.
Dunns test eller Mann-Whitney-test
(29) US EPA (2008), Peer-Review Results for the Fish Short-Term Reproduction Assay, dated 30 January 2008, US Environmental Protection Agency, Washington DC.
>=4 rep. pr. konc.
OECD (2012), OECD Conceptual Framework for Testing and Assessment of Endocrine Disrupters, OECD Environmental Health and Safety Publications, Series on Testing and Assessment No. 150, OECD, Paris.
Nested ANOVA ikke normal
ABBREVIATIONS & DEFINITIONS:
Variansstabiliserende transformation?
a substance or a mixture
Varianser lige
coefficient of variation
Rep.gns. ikke normalt eller ikke homogent
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay
Rep.gns. normal tog homogen
HPG axis
Step-down trend test på replikatgennemsnit
hypothalamic-pituitary-gonadal axis
Ikke monotont
Loading rate
Monotont
the wet weight of fish per volume of water.
Bestem, om dosis/respons-forholder er monotont
MTC
C.49 Test af akut toksicitet for fiskeembryoner (FET)
Maximum Tolerated Concentration, representing about 10 % of the LC50
Denne forsøgsmetode svarer til OECD-testvejledning (Test Guideline) (TG) 236 (2013).
Stocking density
Den beskriver en test af akut toksicitet for fiskeembryoner (FET) hos zebrafisk (Danio rerio).
is the number of fish per volume of water.
Formålet med denne test er at bestemme kemikaliers akutte toksicitet for fisk i fosterstadiet.
vitellogenin is a phospholipoglycoprotein precursor to egg yolk protein that normally occurs in sexually active females of all oviparous species.
FET-testen er baseret på undersøgelser og valideringsaktiviteter udført på zebrafisk (1) (2) (3) (4) (5) (6) (7) (8) (9) (10) (11) (12) (13) (14).
EXPERIMENTAL CONDITIONS FOR THE FISH ENDOCRINE SCREENING ASSAY
FET-testen har med stor succes været anvendt på en lang række kemikalier, der udviser forskellige virkemåder, opløseligheder, volatilitet og hydrofobiciteter (revideret i 15 og 16).
(Pimephales promelas)
Nybefrugtede zebrafiskeæg eksponeres for testkemikaliet i en periode på 96 timer.
Medaka (Oryzias latipes)
Hver 24. time registreres op til fire apikale observationer som indikatorer for dødelighed (6): i) koagulering af befrugtede æg, ii) mangel på dannelse af somitter, iii) manglende løsnen af halen fra blommesækken og iv) manglende hjerteslag.
Test type
Efter eksponeringsperioden bestemmes akut toksicitet på grundlag af et positivt resultat i en hvilken som helst af de fire registrerede apikale observationer, og LC50 beregnes.
Flow-through
Nyttige oplysninger om stofspecifikke egenskaber omfatter strukturformlen, molekylvægt, renhed, vand- og lysstabilitet, pKa and Kow, vandopløselighed og damptryk samt resultaterne af en test for let bionedbrydelighed (TM C.4 (17) eller TM C.29 (18)).
Water temperature
Opløseligheden og damptrykket kan bruges til at beregne Henrys konstant, som angiver, om der kan forekomme et tab som følge af fordampning af testkemikaliet.
Illumination quality
En pålidelig analyse til kvantificering af kemikaliet i testopløsningerne med kendt og publiceret “accuracy” og nederste målegrænse bør foreligge.
Fluorescent bulbs (wide spectrum)
Hvis forsøgsmetoden anvendes til at teste en blanding, bør der så vidt muligt foreligge oplysninger om dens sammensætning, f.eks. i form af bestanddelenes kemiske identitet, deres kvantitative forekomst og deres stofspecifikke egenskaber (jf. punkt 4).
Light intensity
For stoffer, der kan aktiveres via metabolisme, er der dokumentation for, at zebrafisks embryoner har biotransformationskapacitet (19) (20) (21) (22).
10-20 μE/m2/s, 540-1000 lux, or 50-100 ft-c (ambient laboratory levels)
Den metaboliske kapacitet hos fisk i fosterstadiet er imidlertid ikke altid den samme som hos unge eller voksne fisk.
Photoperiod (dawn / dusk transitions are optional, however not considered necessary) 16 h light, 8 h dark
Eksempelvis blev protoxicanten allylalkohol ikke påvist som giftig (9) i FET.
12-16 h light, 12-8 h dark
Hvis der derfor er tegn på, at metabolitter eller andre relevante omdannelsesprodukter kan være mere toksiske end moderforbindelsen, anbefales det også at udføre testen med disse metabolitter/omdannelsesprodukter og anvende disse resultater ved fastlæggelsen af testkemikaliets toksicitet eller alternativt foretage en ny test, som tager yderligere højde for metabolisme.
< 5 g per l
Den samlede overlevelse af embryoner i den negative kontrol (fortyndingsvand) og, hvor det er relevant, i opløsningsmiddelkontrollen bør være ≥ 90 % indtil slutningen af de 96 timers eksponering.
Test solution volume
Eksponering for den positive kontrol (f.eks. 4,0 mg/l 3,4-dichloranilin for zebrafisk) bør resultere i en minimumsdødelighed på 30 % efter 96 timers eksponering.
8 l (minimum)
Klækningshastigheden i den negative kontrol (og evt. opløsningsmiddelkontrollen) bør være ≥ 80 % efter 96 timers eksponering.
1,5 l (minimum)
Efter 96 timers eksponering bør koncentrationen af opløst ilt i den negative kontrol og den højeste testkoncentration være ≥ 80 % mætning.
4 l (minimum)
En oversigt over anbefalede vedligeholdelses- og testbetingelser findes i tillæg 2.
Volume exchanges of test solutions
Der er behov for følgende udstyr:
Minimum of 6 daily
fisketanke fremstillet af et kemisk inert materiale (f.eks. glas) og med passende kapacitet i forhold til den anbefalede belastningsgrad (jf.
Minimum of 5 daily
“Vedligeholdelse af yngelfisk”, punkt 14)
Age of test organisms
inverteret mikroskop og/eller kikkert med en forstørrelseskapacitet på mindst 80 fold.
See paragraph 21
Hvis det lokale, der benyttes til registrering af observationer, ikke kan indstilles til 26 ± 1 °C, er der behov for et temperaturstyret flytbart bord eller andre metoder til at opretholde temperaturen.
Approximate wet weight of adult fish (g)
testkamre, f.eks. plader med 24 brønde af standardtypen med en dybde på ca. 20 mm (jf.
Females: 1,5 ± 20 %
“Testkamre”, punkt 11)
Males: 2,5 ± 20 %
f.eks. selvklæbende folie til dækning af pladerne med 24 brønde
Females: 0,35 ± 20 %
inkubator eller luftkonditionerede rum med temperaturstyring, der gør det muligt at opretholde 26 ± 1 °C i brønde (eller testkamre)
Males: 0,35 ± 20 %
oxygenmeter
Females: 0,65 ± 20 %
udstyr til bestemmelse af vandets hårdhed og ledningsevne
Males: 0,4 ± 20 %
gydefælde: instrumentbakker af glas, rustfrit stål eller andet inert materiale, trådnet (gitterstørrelse 2 ± 0,5 mm) af rustfrit stål eller andet inert materiale til at beskytte æggene, når de er lagt; gydningssubstrat (f.eks. planteefterligninger af inert materiale) (TM C. 48, tillæg 4a (23))
No. of fish per test vessel
pipetter med brede åbninger til at indsamle æg
6 (2 males and 4 females)
glaskar til at klargøre forskellige testkoncentrationer og fortyndingsvand (bægerglas, målekolber, målecylindere og målepipetter) eller til at indsamle zebrafiskeæg (f.eks. bægerglas, krystallisationsskåle)
6 (3 males and 3 females)
Hvis der anvendes alternative eksponeringssystemer, som f.eks. gennemstrømning (24) eller passiv dosering (25), til udførelsen af testen, er der behov for passende faciliteter og udstyr.
10 (5 males and 5 females)
Der bør anvendes testkamre af glas eller polystyren (f.eks. plader med 24 brønde med 2,5-5 ml påfyldningskapacitet pr. brønd).
No. of treatments
Ved mistanke om adsorption til polystyren (f.eks. for ikke-polære, plane stoffer med høj Kow) bør der anvendes inert materiale (glas) til at begrænse tabene på grund af adsorption (26).
= 3 (plus appropriate controls)
Testkamrene bør placeres randomiseret i inkubatoren.
No. vessels per treatment
Vand- og testbetingelser
4 minimum
Det anbefales også at fortynde vedligeholdelsesvandet for at opnå de typiske hårdhedsniveauer for en bred vifte af overfladevand.
2 minimum
Vand til fortynding bør fremstilles på baggrund af kunstigt fremstillet ferskvand (27).
No. of fish per test concentration
Den dannede hårdhed bør svare til 100-300 mg/l CaCO3 for at undgå for stor udfældning af calciumcarbonat.
16 adult females and 8 males (4 females and 2 males in each replicate vessel)
Andet velkarakteriseret overflade- eller brøndvand kan anvendes.
12 adult females and 12 males (3 females and 3 males in each replicate vessel)