natgillin/translations-raw huggingface dataset:
I særlige tilfælde, f.eks. testning af ustabile kemikalier eller metaller, må der udvises ekstra opmærksomhed over for pH-afvigelse.
Information on the test chemical which may be useful in establishing the test conditions includes the structural formula, purity, water solubility, stability in water and light, pKa, Kow, vapour pressure and biodegradability.
Nærmere vejledning er givet i (8).
Water solubility and vapour pressure can be used to calculate Henry's Law constant, which will indicate if significant losses of the test chemical during the test period are likely.
Varighed
This will help indicate whether particular steps to control such losses should be taken.
Testen afsluttes syv dage efter, at planterne er overført til testbeholderne.
Where information on the solubility and stability of the test chemical is uncertain, it is recommended that these be assessed under the conditions of the test, i.e. growth medium, temperature, lighting regime to be used in the test.
Ved testens begyndelse tælles og registreres antallet af blade i testbeholderne, idet der sørges for, at fremstående, klart synlige blade medtages.
When pH control of the test medium is particularly important, e.g. when testing metals or chemicals which are hydrolytically unstable, the addition of a buffer to the growth medium is recommended (see paragraph 21).
Antal blade med normalt og unormalt udseende bestemmes ved testens begyndelse, mindst hvert tredje døgn i løbet af eksponeringsperioden (dvs. mindst to gange i løbet af testperioden på syv dage) samt ved testens slutning.
Further guidance for testing chemicals with physical-chemical properties that make them difficult to test is provided in (8).
Ændringer i planternes udvikling, f.eks. i bladstørrelse, udseende, tegn på nekrose, chlorose eller opsvulmethed, opbrydning af kolonierne eller tab af disses flydeevne, samt i røddernes længde og udseende skal registreres.
For the test to be valid, the doubling time of frond number in the control must be less than 2,5 days (60 h), corresponding to approximately a seven-fold increase in seven days and an average specific growth rate of 0,275 d– 1.
Særlige kendetegn ved testsubstratet (f.eks. uopløst materiale i testbeholderen eller algevækst på denne) skal ligeledes registreres.
Using the media and test conditions described in this Test Method, this criterion can be attained using a static test regime (5).
Foruden at bladantallet registreres under testen, vurderes testkemikaliets virkninger på en (eller flere) af følgende målevariable:
It is also anticipated that this criterion will be achievable under semi-static and flow-through test conditions.
totalt bladareal
Calculation of the doubling time is shown in paragraph 49.
tørvægt
Reference chemical(s), such as 3,5-dichlorophenol used in the international ring test (7), may be tested as a means of checking the test procedure.
frisk vægt.
It is advisable to test a reference chemical at least twice a year or, where testing is carried out at a lower frequency, in parallel to the determination of the toxicity of a test chemical.
Bestemmelse af det totale bladareal har den fordel, at det kan bestemmes for hver testbeholder og kontrolbeholder både ved testens start, under testen og ved dens slutning.
All equipment in contact with the test media should be made of glass or other chemically inert material.
Den tørre og friske vægt bestemmes ved testens start på en prøve af podekulturen, der er repræsentativ for den, der anvendes til at igangsætte testen, samt ved testens slutning med plantemateriale fra hver test- og kontrolbeholder.
Glassware used for culturing and testing purposes should be cleaned of chemical contaminants that might leach into the test medium and should be sterile.
Hvis der ikke måles bladareal, er tørvægt at foretrække frem for frisk vægt.
The test vessels should be wide enough for the fronds of different colonies in the control vessels to grow without overlapping at the end of the test.
Bestemmelse af totalt bladareal, tørvægt og frisk vægt kan foretages således:
It does not matter if the roots touch the bottoms of the test vessels, but a minimum depth of 20 mm and minimum volume of 100 ml in each test vessel is advised.
Totalt bladareal:
The choice of test vessels is not critical as long as these requirements are met.
Det totale bladareal af alle kolonier kan bestemmes ved billedanalyse:
Glass beakers, crystallising dishes or glass petri dishes of appropriate dimensions have all proved suitable.
Der kan afbildes en silhuet af testbeholder og planter med et videokamera (idet beholderen anbringes på en lyskasse), og det resulterende billede digitaliseres.
Test vessels must be covered to minimise evaporation and accidental contamination, while allowing necessary air exchange.
Derefter kan det totale bladareal i testbeholderen bestemmes ved kalibrering med flade former med kendt areal.
Suitable test vessels, and particularly covers, must avoid shadowing or changes in the spectral characteristics of light.
Det skal sikres, at interferens udelukkes fra testbeholderens rand.
The cultures and test vessels should not be kept together.
En alternativ, men mere omstændelig metode er at fotokopiere testbeholdere og planter, klippe den resulterende silhuet af kolonierne ud og bestemme arealet med en bladareal-analysator eller ved hjælp af millimeterpapir.
This is best achieved using separate environmental growth chambers, incubators, or rooms.
Også andre teknikker kan anvendes (f.eks. vejning af papiret svarende til silhuetten og sammenholdelse med et enhedsareal).
Illumination and temperature must be controllable and maintained at a constant level (see paragraphs 35-36).
Tørvægt:
Test organism
Alle kolonier indsamles fra hver testbeholder og skylles med destilleret eller deioniseret vand.
The organism used for this test is either Lemna gibba or Lemna minor.
De duppes fri for overskydende vand og tørres derefter ved 60 °C, til vægten er konstant.
Short descriptions of duckweed species that have been used for toxicity testing are given in Appendix 2.
Eventuelle rodstumper skal medtages.
Plant material may be obtained from a culture collection, another laboratory or from the field.
Tørvægten skal angives med en nøjagtighed på mindst 0,1 mg.
If collected from the field, plants should be maintained in culture in the same medium as used for testing for a minimum of eight weeks prior to use.
Frisk vægt:
Field sites used for collecting starting cultures must be free of obvious sources of contamination.
Alle kolonier overføres til på forhånd vejede rør af polystyren (eller andet inert materiale), hvis afrundede bund er forsynet med et lille hul (1 mm).
If obtained from another laboratory or a culture collection they should be similarly maintained for a minimum of three weeks.
Rørene centrifugeres derefter ved 3000 omdr./min. i 10 minutter ved stuetemperatur.
The source of plant material and the species and clone (if known) used for testing should always be reported.
Rørene, der indeholder de nu tørrede kolonier, vejes igen, og den friske vægt beregnes ved fratrækning af vægten af de tomme rør.
Monocultures, that are visibly free from contamination by other organisms such as algae and protozoa, should be used.
Hyppighed af målinger og analytiske bestemmelser
Healthy plants of L. minor will consist of colonies comprising between two and five fronds whilst healthy colonies of L. gibba may contain up to seven fronds.
Hvis testen udføres statisk, skal pH for hver behandling måles ved testens start og slutning.
The quality and uniformity of the plants used for the test will have a significant influence on the outcome of the test and should therefore be selected with care.
Udføres testen semistatisk, foretages pH-måling på hver portion »frisk« testopløsning før hver udskiftning foruden på de tilsvarende »brugte« opløsninger.
Young, rapidly growing plants without visible lesions or discoloration (chlorosis) should be used.
Lysintensiteten skal måles i vækstkammeret, inkubatoren eller lokalet i punkter med samme afstand til lyskilden som Lemna-bladene.
Good quality cultures are indicated by a high incidence of colonies comprising at least two fronds.
Målingerne foretages mindst en gang i løbet af testen.
A large number of single fronds are indicative of environmental stress, e.g. nutrient limitation, and plant material from such cultures should not be used for testing.
Mindst en gang dagligt måles temperaturen af substratet i en surrogatbeholder, der opbevares ved samme betingelser i vækstkammeret, inkubatoren eller lokalet.
Cultivation
Under testen bestemmes testkemikaliekoncentrationerne med passende intervaller.
To reduce the frequency of culture maintenance (e.g. when no Lemna tests are planned for a period), cultures can be held under reduced illumination and temperature (4 — 10 °C).
Mindstekravet i statistiske test er bestemmelse af koncentrationerne ved testens start og slutning.
Details of culturing are given in Appenxix 3.
I semistatiske test, hvor testkemikaliekoncentrationen ikke forventes at forblive inden for ± 20 % af den nominelle koncentration, er det nødvendigt at analysere alle friskfremstillede testopløsninger, og de samme opløsninger analyseres ved hver udskiftning (se punkt 33).
Obvious signs of contamination by algae or other organisms may require surface sterilisation of a sub-sample of Lemna fronds, followed by transfer to fresh medium (see Appendix 3).
For de test, hvor den målte startkoncentration af testkemikaliet ikke ligger inden for ± 20 % af den nominelle værdi, men hvor der kan fremlægges tilstrækkelig dokumentation for, at startkoncentrationerne er repeterbare og stabile (dvs. inden for området 80-120 % af startkoncentrationen), kan det godtages, at der kun foretages kemisk bestemmelse af den højeste og laveste testkoncentration.
In this eventuality the remaining contaminated culture should be discarded.
I sådanne test skal flowhastigheden af fortyndingsmiddel og testkemikalie eller testkemikaliestamopløsning kontrolleres dagligt.
Different media are recommended for Lemna minor and Lemna gibba, as described below.
Er afvigelsen fra den nominelle eller målte startkoncentration større end ± 20 %, skal analysen af resultaterne baseres på den geometriske middelkoncentration under eksponeringen eller på modeller, der beskriver faldet i testkemikaliekoncentrationen (8).
Careful consideration should be given to the inclusion of a pH buffer in the test medium (MOPS (4-morpholinepropane sulphonic acid, CAS No: 1132-61-2) in L. minor medium and NaHCO3 in L. gibba medium) when it is suspected that it might react with the test chemical and influence the expression of its toxicity.
Alle de beskrevne testbetingelser og validitetskriterier finder anvendelse på en grænsetest, bortset fra at antallet af behandlingsreplikater skal fordobles.
Steinberg Medium (9) is also acceptable as long as the validity criteria are met.
Væksten i kontrol- og behandlingsgruppen kan analyseres med en statistisk test til sammenligning af middelværdier, f.eks. Students t-test.
A modification of the Swedish standard (SIS) Lemna growth medium is recommended for culturing and testing with L. minor.
Fordoblingstid
The composition of this medium is given in Appendix 4.
Til bestemmelse af fordoblingstiden (Td) for bladantallet og forsøgets overensstemmelse med dette validitetskriterium (punkt 12) anvendes følgende formel på de data, der er indsamlet for kontrolbeholderne:
The growth medium, 20X — AAP, as described in Appendix 4, is recommended for culturing and testing with L. gibba.
hvor μ er den gennemsnitlige specifikke væksthastighed, der bestemmes som beskrevet i punkt 54-55.
Steinberg medium, as described in Appendix 4, is also suitable for L. minor, but may also be used for L. gibba as long as the validity criteria are met.
Testens formål er at bestemme testkemikaliets virkninger på den vegetative vækst af Lemna.
Test solutions
I nærværende testmetode beskrives to responsvariable, da præferencer og myndighedskrav er forskellige i forskellige lande.
Test solutions are usually prepared by dilution of a stock solution.
Gennemsnitlig specifik væksthastighed:
Stock solutions of the test chemical are normally prepared by dissolving the chemical in growth medium.
Denne responsvariabel beregnes på grundlag af den logaritmiske ændring i bladantallet samt den logaritmiske ændring i en anden måleparameter (totalt bladareal, tørvægt eller frisk vægt) med tiden (udtrykt pr. dag) i kontrollerne og i hver behandlingsgruppe.
The highest tested concentration of the test chemical should not normally exceed the water solubility of the chemical under the test conditions.
Den kaldes undertiden relativ væksthastighed (12).
It should be noted however that Lemna spp. float on the surface and may be exposed to chemicals that collects at the water-air interface (e.g. poorly water-soluble or hydrophobic chemicals or surface-active chemicals).
Udbytte:
Under such circumstances exposure will result from material other than in solution and test concentrations may, depending on the characteristics of the test chemical, exceed water solubility.
Denne responsvariabel beregnes på grundlag af ændringen i bladantallet og desuden ændringen i en anden måleparameter (totalt bladareal, tørvægt eller frisk vægt) i kontrollerne og i hver behandlingsgruppe indtil testens slutning.
For test chemicals of low water solubility it may be necessary to prepare a concentrated stock solution or dispersion of the chemical using an organic solvent or dispersant in order to facilitate the addition of accurate quantities of the test chemical to the test medium and aid in its dispersion and dissolution.
ECx-værdier baseret på gennemsnitlig specifik væksthastighed (ErCx) vil sædvanligvis være højere end resultater baseret på udbytte (EyCx), når testbetingelserne i denne metode er overholdt, hvilket følger af det matematiske grundlag for de to beregningsmåder.
Every effort should be made to avoid the use of such materials.
Begrebet gennemsnitlig specifik væksthastighed bygger på det generelle eksponentielle vækstmønster for andemad i ikke-begrænsede kulturer, idet toksiciteten vurderes på grundlag af virkningerne på væksthastigheden og ikke afhænger af den absolutte størrelse af den specifikke væksthastighed af kontrollen, koncentrationsresponskurvens hældning eller testens varighed.
There should be no phytotoxicity resulting from the use of auxiliary solvents or dispersants.
EyCx afhænger af den specifikke væksthastighed af de arter af andemad, der anvendes i hver test, og af den maksimale specifikke væksthastighed, som kan variere mellem de forskellige arter og endda kloner.
For example, commonly used solvents which do not cause phytotoxicity at concentrations up to 100 μl/l include acetone and dimethylformamide.
Denne responsvariabel bør ikke anvendes til at sammenligne følsomheden over for giftstoffer mellem forskellige arter af andemad, endsige forskellige kloner.
If a solvent or dispersant is used, its final concentration should be reported and kept to a minimum (≤ 100 μl/l), and all treatments and controls should contain the same concentration of solvent or dispersant.
Skønt det videnskabeligt foretrukne grundlag til vurdering af toksicitet er den gennemsnitlige specifikke væksthastighed, indeholder nærværende testmetode toksicitetsvurderinger baseret på udbytte for at imødekomme de aktuelle myndighedskrav i visse lande.
Further guidance on the use of dispersants is given in (8).
Beregningen af toksicitet skal baseres på bladantal og mindst en anden målevariabel (totalt bladareal, tørvægt eller frisk vægt), da visse kemikalier kan påvirke andre målevariable langt mere end bladantallet.
Test and control groups
Denne virkning ville ikke blive opdaget ved beregning af bladantallet alene.
Prior knowledge of the toxicity of the test chemical to Lemna, e.g. from a range-finding test, will help in selecting suitable test concentrations.
Bladantallet og eventuelle andre registrerede målevariable, dvs. totalt bladareal, tørvægt eller frisk vægt, samles i en tabel sammen med testkemikaliekoncentrationerne for hvert målepunkt.
In the definitive toxicity test, there should normally be at least five test concentrations arranged in a geometric series.
Den efterfølgende dataanalyse, f.eks. beregning af estimater for LOEC, NOEC eller ECx, skal baseres på værdierne for de enkelte replikater og ikke beregnede gennemsnit for hver behandlingsgruppe.
Preferably the separation factor between test concentrations should not exceed 3.2, but a larger value may be used where the concentration-response curve is flat.
Den gennemsnitlige specifikke væksthastighed for en given periode beregnes som den logaritmiske stigning i vækstvariablene — bladantal og en anden målevariabel (totalt bladareal, tørvægt eller frisk vægt) — ved hjælp af nedenstående udtryk for hver replikat af kontrol og behandlingsprøve:
Justification should be provided if fewer than five concentrations are used.
er den gennemsnitlige specifikke væksthastighed i tidsrummet fra i til j
At least three replicates should be used at each test concentration.
er værdien af målevariablen i test- eller kontrolbeholderen til tiden i
In setting the range of test concentrations (for range-finding and/or for the definitive toxicity test), the following should be considered:
er værdien af målevariablen i test- eller kontrolbeholderen til tiden j
To determine an ECx, test concentrations should bracket the ECx value to ensure an appropriate level of confidence.
t er tidsrummet fra i til j.
For example, if estimating the EC50, the highest test concentration should be greater than the EC50 value.
Den gennemsnitlige specifikke væksthastighed skal beregnes for hele testperioden (tiden »i« i ovenstående formel er testens starttid, og tiden »j« er testens sluttid).
If the EC50 value lies outside of the range of test concentrations, associated confidence intervals will be large and a proper assessment of the statistical fit of the model may not be possible.
For hver testkoncentration og kontrol beregnes en gennemsnitsværdi af den specifikke væksthastighed samt estimater for variansen.
If the aim is to estimate the LOEC/NOEC, the lowest test concentration should be low enough so that growth is not significantly less than that of the control.
Derudover foretages en trinvis beregning af væksthastigheden for at vurdere testkemikaliets virkninger i eksponeringsperioden (f.eks. ved betragtning af logaritmisk transformerede vækstkurver).
In addition, the highest test concentration should be high enough so that growth is significantly lower than that in the control.
I så fald kan et forsigtigt skøn opstilles ved at sammenholde de specifikke væksthastigheder fra behandlede kulturer i det tidsrum, hvor hæmningen er maksimal, med de tilsvarende værdier for kontroller i samme tidsrum.
If this is not the case, the test will have to be repeated using a different concentration range (unless the highest concentration is at the limit of solubility or the maximum required limit concentration, e.g. 100 mg/l).
Hæmningen i procent af væksthastigheden (Ir) kan derefter beregnes for hver testkoncentration (behandlingsgruppe) ved hjælp af følgende formel:
Every test should include controls consisting of the same nutrient medium, number of fronds and colonies, environmental conditions and procedures as the test vessels but without the test chemical.
er procent hæmning af den gennemsnitlige specifikke væksthastighed
If an auxiliary solvent or dispersant is used, an additional control treatment with the solvent/dispersant present at the same concentration as that in the vessels with the test chemical should be included.
er gennemsnitsværdien af μ i kontrollen
The number of replicate control vessels (and solvent vessels, if applicable) should be at least equal to, and ideally twice, the number of vessels used for each test concentration.
er gennemsnitsværdien af μ i behandlingsgruppen.
If determination of NOEC is not required, the test design may be altered to increase the number of concentrations and reduce the number of replicates per concentration.
Virkningerne på udbyttet bestemmes på grundlag af to målevariable, bladantallet og en anden målevariabel (totalt bladareal, tørvægt eller frisk vægt) i hver testbeholder ved testens start og slutning.
However, the number of control replicates must be at least three.
For tørvægt og frisk vægt bestemmes startbiomassen på grundlag af en prøve af blade, der tages fra samme parti som det, der er anvendt til at pode testbeholderne (se punkt 20).
Exposure
Udbyttehæmningen i procent ( % Iy) kan beregnes for hver behandlingsgruppe som følger:
Colonies consisting of 2 to 4 visible fronds are transferred from the inoculum culture and randomly assigned to the test vessels under aseptic conditions.
er udbyttereduktionen i procent
Each test vessel should contain a total of 9 to 12 fronds.
er slutbiomasse minus startbiomasse for kontrolgruppen
The number of fronds and colonies should be the same in each test vessel.
er slutbiomasse minus startbiomasse for behandlingsgruppen.
Experience gained with this method and ring-test data have indicated that using three replicates per treatment, with each replicate containing 9 to 12 fronds initially, is sufficient to detect differences in growth of approximately 4 to 7 % of inhibition calculated by growth rate (10 to 15 % calculated by yield) between treatments (7).
Optegning af koncentrationsresponskurver
A randomised design for location of the test vessels in the incubator is required to minimise the influence of spatial differences in light intensity or temperature.
Der afsættes koncentrationsresponskurver over sammenhængen mellem den gennemsnitlige hæmningsprocent for responsvariablene (Ir eller Iy, beregnet som vist i punkt 56 eller punkt 57) og logaritmen for testkemikaliekoncentrationen.
A blocked design or random repositioning of the vessels when observations are made (or repositioning more frequently) is also required.
Beregning af ECx
If a preliminary stability test shows that the test chemical concentration cannot be maintained (i.e. the measured concentration falls below 80 % of the measured initial concentration) over the test duration (7 days), a semi-static test regime is recommended.
Estimaterne for ECx (f.eks. EC50) baseres på gennemsnitsværdien dels af specifik væksthastighed (ErCx), dels af udbytte (EyCx), der hver især er baseret på bladantal og en anden målevariabel (totalt bladareal, tørvægt eller frisk vægt).
In this case, the colonies should be exposed to freshly prepared test and control solutions on at least two occasions during the test (e.g. days 3 and 5).
Dette skyldes, at der findes testkemikalier med forskellig virkning på bladantallet og på de øvrige målevariable.
The frequency of exposure to fresh medium will depend on the stability of the test chemical;
Der kan anvendes vægtet lineær regression efter forudgående lineariserende transformation af responsdataene, til f.eks. probit-, logit- eller Weibull-enheder (13), men det må foretrækkes at benytte ikke-lineære regressionsmetoder, da de bedre håndterer de uundgåelige uregelmæssigheder i data og afvigelser fra jævne fordelinger.
a higher frequency may be needed to maintain near-constant concentrations of highly unstable or volatile chemicals.
I området tæt på enten ingen hæmning eller total hæmning kan sådanne uregelmæssigheder blive forstørret ved transformation og derved gribe forstyrrende ind i analysen (13).
In some circumstances, a flow-through procedure may be required (8)(10).
Det må bemærkes, at standardanalysemetoder, hvor der bruges probit-, logit- eller Weibull-transformerede variable, er bestemt til brug på binære data (f.eks. død eller overlevelse) og må modificeres for at kunne benyttes til data for væksthastighed eller biomasse.
The exposure scenario through a foliar application (spray) is not covered in this test method;
Særlige metoder til bestemmelse af ECx-værdier ud fra kontinuerte data findes i henvisning (14),(15) og (16).
instead, see (11).
Hvis de tilgængelige regressionsmodeller eller -metoder er uegnede til dataene, kan estimater og konfidensgrænser for EC50 desuden fås ved lineær interpolation med bootstrapping (17).
Incubation conditions