natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Intervallerne fastlægges på grundlag af mindst 10 nedbrydningsværdier, som genereres af seks uafhængige laboratorier.
For reference controls:
EKSEMPLER PÅ ANALYSESEKVENSER
Peptide peak area at 220 nm of each B and C replicate;
Tre sæt referencekontroller (dvs. prøver, som udelukkende består af peptidet opløst i et passende opløsningsmiddel) bør indgå i analysesekvensen:
Mean peptide peak area at 220 nm of the nine reference controls B and C in acetonitrile, SD an CV (for stability of reference controls over analysis time);
Referencekontrol A: anvendes til at kontrollere HPLC-systemets egnethed.
For each solvent used, the mean peptide peak area at 220 nm of the three appropriate reference controls C (for the calculation of percent peptide depletion);
Referencekontrol B: indgår i begyndelsen og slutningen af analysesekvensen for at kontrollere stabiliteten af referencekontrollerne i løbet af analysen.
For each solvent used, the peptide concentration (mM) of the three appropriate reference controls C;
Referencekontrol C: indgår i analysesekvensen for at kontrollere, at det opløsningsmiddel, der anvendes til at opløse testkemikaliet, ikke påvirker den procentvise peptidnedbrydning.
For each solvent used, the mean peptide concentration (mM) of the three appropriate reference controls C, SD and CV.
Kalibreringsstandarder og referencekontroller
For positive control:
Fortyndingsbuffer
Peptide peak area at 220 nm of each replicate;
Referencekontrol A, rep 1
Percent peptide depletion of each replicate;
Referencekontrol A, rep 2
Mean percent peptide depletion of the three replicates, SD and CV.
Referencekontrol A, rep 3
For each test chemical:
Co-elueringskontroller
Appearance of precipitate in the reaction mixture at the end of the incubation time, if observed.
Co-elueringskontrol 1 for testkemikalie 1
If precipitate was re-solubilised or centrifuged;
Co-elueringskontrol 2 for testkemikalie 2
Presence of co-elution;
Referencekontroller
Description of any other relevant observations, if applicable;
Referencekontrol B, rep 1
Mean of percent peptide depletion of the three replicate, SD and CV;
Referencekontrol B, rep 2
Mean of percent cysteine and percent lysine depletion values;
Referencekontrol B, rep 3
Prediction model used and DPRA prediction.
Første sæt replikater
Proficiency testing
Referencekontrol C, rep 1
If applicable, the procedure used to demonstrate proficiency of the laboratory in performing the test method (e.g. by testing of proficiency substances) or to demonstrate reproducible performance of the test method over time.
Kanelaldehyd, rep 1
Discussion of the results
Prøve 1, rep 1
Discussion of the results obtained with the DPRA test method;
Prøve 2, rep 1
Discussion of the test method results in the context of an IATA if other relevant information is available.
Andet sæt replikater
Available at: http://www.unece.org/trans/danger/publi/ghs/ghs_rev05/05files_e.html
Referencekontrol C, rep 2
Part 1: Scientific Evidence.
Kanelaldehyd, rep 2
Series on Testing and Assessment No. 168, OECD, Paris.
Prøve 1, rep 2
Chapter B.6 of this Annex: Skin Sensitisation.
Prøve 2, rep 2
Chapter B.42 of this Annex: The Local Lymph Node Assay
Tredje sæt replikater
Chapter B.50 of this Annex: Skin Sensitisation: Local Lymph Node Assay: DA.
Referencekontrol C, rep 3
Chaper B.51 of this Annex: Skin Sensitisation: Local Lymph Node Assay BrdU-ELISA
Kanelaldehyd, rep 3
Available at: https://eurl-ecvam.jrc.ec.europa.eu/eurl-ecvam-recommendations/eurl-ecvam-recommendation-on-the-direct-peptide-reactivity-assay-dpra
Prøve 1, rep 3
Accessible at: http://ihcp.jrc.ec.europa.eu/our_labs/eurl-ecvam/eurl-ecvam-recommendations/eurl-ecvam-recommendation-on-the-direct-peptide-reactivity-assay-dpra
Prøve 2, rep 3
Accessible at: http://ecvam-dbalm.jrc.ec.europa.eu/
Referencekontrol B, rep 4
OECD Series on Testing and Assessment, No. 34.
Referencekontrol B, rep 5
Organisation for Economic Cooperation and Development, Paris, France.
Referencekontrol B, rep 6
Accessible at: www.fda.gov/downloads/drugs/guidancecomplianceregulatoryinformation/guidance/ucm070107.pdf - 138
B.60 In vitro-hudsensibilisering: ARE-Nrf2-luciferase-forsøgsmetoden
The term is often used interchangeably with “concordance”, to mean the proportion of correct outcomes of a test method (21).
Denne forsøgsmetode svarer til OECD's testvejledning (Test Guideline (TG)) 442D (2015).
AOP (Adverse Outcome Pathway)
Et hudsensibiliserende stof er et stof, der fremkalder en allergisk reaktion ved hudkontakt som defineret ved De Forenede Nationers globalt harmoniserede system til klassificering og mærkning af kemikalier (UN GHS) (1) og forordning (EF) nr. 1272/2008 om klassificering, mærkning og emballering af stoffer og blandinger (CLP-forordningen) [18].
Sequence of events from the chemical structure of a target chemical or group of similar chemicals through the molecular initiating event to an in vivo outcome of interest (2).
Den nuværende viden om kemiske og biologiske mekanismer i forbindelse med hudsensibilisering er sammenfattet i form af en Adverse Outcome Pathway (AOP) (2), fra den molekylære udløsende begivenhed gennem de mellemliggende begivenheder til den skadelige sundhedsvirkning, dvs. allergisk kontaktdermatitis hos mennesker eller kontaktoverfølsomhed hos gnavere (2) (3).
Calibration curve
Den molekylære udløsende begivenhed er den kovalente binding af elektrofile stoffer til nukleofile centre i hudproteiner.
The relationship between the experimental response value and the analytical concentration (also called standard curve) of a known substance.
Den anden centrale begivenhed i denne AOP finder sted i keratinocytter og omfatter inflammatoriske reaktioner samt genekspression forbundet med specifikke cellesignalveje, f.eks. antioxidant-/elektrofilresponselement- (ARE) afhængige veje.
Coefficient of variation
Den tredje centrale begivenhed er aktivering af dendritiske celler, som typisk vurderes ved ekspression af bestemte celleoverflademarkører, kemokiner og cytokiner.
A measure of variability that is calculated for a group of replicate data by dividing the standard deviation by the mean.
Den fjerde centrale begivenhed er T-celleproliferation, som vurderes indirekte ved assayet på lokale lymfeknuder i mus (4).
It can be multiplied by 100 for expression as a percentage.
Med de klassiske metoder baseret på marsvin, Guinea Pig Maximisation Test (GPMT) og Buehler-testen (TM B.6 (5)) undersøger man både induktions- og udløsningsfasen ved hudsensibilisering.
IATA (Integrated Approach to Testing and Assessment)
En musetest, assayet på lokale lymfeknuder (LLNA, TM B.42 (4)), og dens to ikke-radioaktive ændringer, LLNA: DA (TM B.50 (6)) og LLNA: BrdU-ELISA (TM B.51 (7)), som alle udelukkende vurderer induktionsresponsen, er også blevet accepteret, eftersom de indebærer en fordel i forhold til marsvinetest både, hvad angår dyrevelfærd og objektiv måling af induktionsfasen for hudsensibilisering.
A structured approach used for hazard identification (potential), hazard characterisation (potency) and/or safety assessment (potential/potency and exposure) of a chemical or group of chemicals, which strategically integrates and weights all relevant data to inform regulatory decision regarding potential hazard and/or risk and/or the need for further targeted and therefore minimal testing.
På det seneste har man anset mekanistisk baserede in chemico- og in vitro-forsøgsmetoder for videnskabeligt valide til evaluering af kemikaliers hudsensibiliseringsfare.
Molecular Initiating Event
Men der vil være behov for kombinationer af metoder uden brug af dyr (in silico, in chemico, in vitro) inden for integrerede tilgange til afprøvning og vurdering (IATA) for fuldt ud at kunne erstatte de dyreforsøg, der anvendes i øjeblikket, i lyset af den begrænsede AOP-mekanistiske dækning af hver af de aktuelt tilgængelige forsøgsmetoder uden brug af dyr (2) (3).
Chemical-induced perturbation of a biological system at the molecular level identified to be the starting event in the adverse outcome pathway.
Denne forsøgsmetode (ARE-Nrf2-luciferase-assay) foreslås i forbindelse med den anden centrale begivenhed som forklaret i punkt 2.
A mixture or a solution composed of two or more substances in which they do not react (1).
Der foreligger rapporter om, at hudsensibiliserende stoffer har medført gener, der reguleres af antioxidantresponselementet (ARE) (8) (9).
A substance, defined by its quantitative composition, in which one main constituent is present to at least 80 % (w/w).
Små elektrofile stoffer såsom hudsensibiliserende stoffer kan påvirke sensorproteinet Keap1 (Kelch-lignende SSG-associeret protein 1), f.eks. ved kovalent modifikation af cysteinrestkoncentrationen, hvilket fører til dissociering fra transskriptionsfaktoren Nrf2 (nuclear factor-erythroid 2-related factor 2).
Multi-constituent substance
Den dissocierede Nrf2 kan herefter aktivere ARE-afhængige gener såsom dem, der koder for fase II-detoxificerende enzymer (8) (10) (11).
A substance, defined by its quantitative composition, in which more than one main constituent is present in a concentration ≥ 10 % (w/w) and < 80 % (w/w).
I øjeblikket er det eneste in vitro-Nrf2-luciferase-assay, der er omfattet af denne forsøgsmetode, KeratinoSensTM-assayet, for hvilket man har gennemført valideringsundersøgelser (9) (12) (13) efterfulgt af en uafhængig peer review foretaget af Den Europæiske Unions referencelaboratorium for alternativer til dyreforsøg (EURL ECVAM) (14).
A multi-constituent substance is the result of a manufacturing process.
KeratinoSensTM-assayet blev betragtet som videnskabeligt validt til at kunne bruges som en del af en IATA til at underbygge sondringen mellem hudsensibiliserende og ikke-hudsensibiliserende stoffer med henblik på fareklassificering og -mærkning (14).
The difference between mixture and multi-constituent substance is that a mixture is obtained by blending of two or more substances without chemical reaction.
Laboratorier, som er villige til at anvende forsøgsmetoden, kan erhverve den rekombinante cellelinje, der anvendes i KeratinoSensTM-assayet, ved at indgå en licensaftale med udvikleren af forsøgsmetoden (15).
A multi-constituent substance is the result of a chemical reaction.
Eftersom aktivering af Keap1-Nrf2-ARE-vejen udelukkende vedrører den anden centrale begivenhed i hudsensibiliserings-AOP'en, er det usandsynligt, at oplysninger om forsøgsmetoder baseret på aktiveringen af denne vej alene er tilstrækkelige til at kunne konkludere noget om kemikaliers hudsensibiliseringspotentiale.
A replicate containing all components of a test system and treated with a substance known to induce a positive response.
Derfor bør data genereret med denne forsøgsmetode ses i sammenhæng med integrerede tilgange, såsom IATA, idet de kombineres med andre supplerende oplysninger, f.eks. hidrørende fra in vitro-assays vedrørende andre vigtige begivenheder for hudsensibiliserings-AOP'en samt ikke-forsøgsmetoder, herunder analogislutning fra analoge kemikalier.
Reference control
I litteraturen findes der eksempler på, hvordan man kan bruge ARE-Nrf2-luciferase-forsøgsmetoden sammen med andre oplysninger (13) (16) (17) (18) (19).
An untreated sample containing all components of a test system, including the solvent or vehicle that is processed with the test chemical treated and other control samples to establish the baseline response for the samples treated with the test chemical dissolved in the same solvent or vehicle.
Denne forsøgsmetode kan ikke anvendes alene, hverken til at kategorisere hudsensibiliserende stoffer i underkategori 1A og 1B som defineret i UN GHS/CLP eller til at forudsige styrken i forbindelse med beslutninger om sikkerhedsvurdering.
Description of relationship of the test to the effect of interest and whether it is meaningful and useful for a particular purpose.
Afhængigt af lovrammen kan et positivt resultat imidlertid anvendes alene til at klassificere et kemikalie i UN GHS/CLP-kategori 1.
It is the extent to which the test correctly measures or predicts the biological effect of interest.
Graden af reproducerbarhed i de forudsigelser, der kan forventes fra forsøgsmetoden, ligger i størrelsesordenen 85 % inden for og mellem laboratorier (14).
It is assessed by calculating intra- and inter-laboratory reproducibility and intra-laboratory repeatability (21).
Disse tal svarer til de nyligt offentliggjorte tal baseret på interne test af ca. 145 stoffer (77 % nøjagtighed, 79 % følsomhed, 72 % specificitet) (13).
The agreement among results obtained from testing the same chemical using the same test protocol (see reliability) (21).
Det er mere sandsynligt, at KeratinoSensTM-assayet vil føre til for lave forudsigelser for kemiske stoffer med lav til moderat hudsensibiliserende styrke (dvs. UN GHS/CLP-underkategori 1B) i forhold til kemikalier med høj hudsensibiliserende styrke (dvs. UN GHS/CLP-underkategori 1A) (13) (14).
The proportion of all positive/active chemicals that are correctly classified by the test method.
Samlet set viser disse oplysninger nytteværdien af KeratinoSensTM-assayet som bidrag til identifikation af hudsensibiliseringsfare.
It is a measure of accuracy for a test method that produces categorical results, and is an important consideration in assessing the relevance of a test method (21).
De nøjagtige værdier, der her angives for KeratinoSensTM-assayet som en selvstændig forsøgsmetode, er imidlertid kun vejledende, da forsøgsmetoden bør overvejes i kombination med andre informationskilder i forbindelse med en IATA og i overensstemmelse med bestemmelserne i punkt 9 ovenfor.
The proportion of all negative/inactive chemicals that are correctly classified by the test method.
I forbindelse med vurderingen af metoder til hudsensibilisering uden brug af dyr bør man desuden holde sig for øje, at LLNA samt andre dyreforsøg ikke fuldt ud afspejler situationen hos arten af interesse, dvs. mennesker.
It is a measure of accuracy for a test method that produces categorical results and is an important consideration in assessing the relevance of a test method (21).
Betegnelsen “testkemikalie” anvendes i denne forsøgsmetode om det, der testes, og vedrører ikke anvendeligheden af ARE-Nrf2-luciferase-forsøgsmetoden til test af stoffer og/eller blandinger.
Chemical elements and their compounds in the natural state or obtained by any production process, including any additive necessary to preserve the stability of the product and any impurities deriving from the process used, but excluding any solvent which may be separated without affecting the stability of the substance or changing its composition (1).
På grundlag af de nuværende tilgængelige data viste KeratinoSensTM-assayet sig at være relevant for testkemikalier, der dækker en række forskellige organiske funktionelle grupper, reaktionsmekanismer, hudsensibiliseringsstyrke (som fastlagt ved in vivo-undersøgelser) og fysisk-kemiske egenskaber (9) (12) (13) (14).
Determination of instrument performance (e.g. sensitivity) by analysis of a reference standard prior to running the analytical batch (22).
Man testede hovedsagelig stoffer med en enkelt bestanddel, men der findes også en begrænset mængde data om test af blandinger (20).
The term “test chemical” is used to refer to what is being tested.
Forsøgsmetoden kan ikke desto mindre teknisk set benyttes til stoffer med forskellige bestanddele og blandinger.
A system proposing the classification of chemicals (substances and mixtures) according to standardised types and levels of physical, health and environmental hazards, and addressing corresponding communication elements, such as pictograms, signal words, hazard statements, precautionary statements and safety data sheets, so that to convey information on their adverse effects with a view to protect people (including employers, workers, transporters, consumers and emergency responders) and the environment (1).
Før brug af denne forsøgsmetode til lovmæssig test af en blanding til generering af data bør det imidlertid overvejes, om den vil give resultater, som er egnede til formålet, og i givet fald hvorfor.
Substances of unknown or variable composition, complex reaction products or biological materials.
Ved test af stoffer med flere bestanddele eller blandinger bør der desuden tages hensyn til cytotoksiske bestanddeles eventuelle interferens med de observerede responser.
Valid test method
Forsøgsmetoden gælder opløselige testkemikalier eller testkemikalier, der danner en stabil dispersion (dvs. en kolloid eller en suspension, hvor testkemikaliet ikke bundfældes eller separeres fra opløsningsmidlet i forskellige faser), enten i vand eller DMSO (herunder alle bestanddele af testkemikaliet ved test af et stof med forskellige bestanddele eller en blanding).
A test method considered to have sufficient relevance and reliability for a specific purpose and which is based on scientifically sound principles.
Testkemikalier, der ikke virker sensibiliserende, men som ikke desto mindre er kemiske stressstoffer, kan på den anden side give falsk positive resultater (14).
Recommended proficiency substances for demonstrating technical proficiency with the Direct Peptide Reactivity Assay
Desuden er det ikke altid muligt at foretage en pålidelig vurdering af stærkt cytotoksiske testkemikalier.
Proficiency substances
Endelig kan testkemikalier, der reagerer med luciferaseenzymet, forstyrre luciferasens aktivitet i cellebaserede assays og forårsage enten synlig hæmning eller øget luminescens (22).
Physical state
Eksempelvis findes der rapporter om, at fytoøstrogenkoncentrationer på over 1 μM forstyrrede luminescenssignalerne i andre luciferasebaserede reportergenassays på grund af overaktivering af luciferasereportergenet (23).
In vivo prediction [1]
Som følge heraf skal den luciferaseekspression, som er opnået ved høje koncentrationer af fytoøstrogener eller lignende kemiske stoffer, der mistænkes for at forårsage fytoøstrogenlignende overaktivering af luciferasereportergenet, undersøges nøje (23).
DPRA prediction [2]
I de tilfælde, hvor det kan påvises, at forsøgsmetoden ikke er anvendelig til andre specifikke kategorier af testkemikalier, bør forsøgsmetoden ikke anvendes til disse kategorier.
Range [3] of % cysteine peptide depletion
Ud over at bidrage til sondringen mellem hudsensibiliserende og ikke-hudsensibiliserende stoffer leverer KeratinoSensTM-assayet også oplysninger om koncentrationsrespons, der muligvis kan bidrage til vurderingen af sensibiliseringsstyrken ved anvendelse i integrerede metoder såsom IATA (19).
Range [3] of % lysine peptide depletion
Der er dog behov for yderligere arbejde, som fortrinsvis bør baseres på pålidelige data om mennesker, for at fastslå, hvordan resultaterne af KeratinoSensTM-assayet kan bidrage til styrkevurderingen (24) og til placering af sensibiliserende stoffer i underkategorier i henhold til UN GHS/CLP.
2,4-Dinitrochlorobenzene
Til ARE-Nrf2-luciferase-forsøgsmetoden anvendes en udødeliggjort vedhæftende cellelinje, der er afledt af humane HaCaT-keratinocytter, som er stabilt transfekteret med et valgbart plasmid.
Sensitiser
Cellelinjen indeholder luciferasegenet under transskriptionskontrollen for en konstitutiv promotor, der er sammensmeltet med et ARE-element, som vides at blive opreguleret af kontaktsensibiliserende stoffer (25) (26).
(extreme)
Luciferasesignalet afspejler de sensibiliserende stoffers aktivering af endogene Nrf2-afhængige gener, og afhængigheden af luciferasesignalet i den rekombinante cellelinje på Nrf2 er blevet dokumenteret (27).
Oxazolone
Dette giver mulighed for kvantitativ måling (ved luminescensdetektion) af luciferasegeninduktion ved hjælp af veldokumenterede lysproducerende luciferasesubstrater som en indikator for Nrf2-transskriptionsfaktorens aktivitet i celler efter eksponering for elektrofile stoffer.
Formaldehyde
Testkemikalierne anses for positive i KeratinoSensTM-assayet, hvis de forårsager en statistisk signifikant induktion af luciferaseaktiviteten over en bestemt tærskel (dvs. > 1,5 gange eller 50 % stigning) under en bestemt koncentration, som ikke i væsentlig grad påvirker cellernes levedygtighed (dvs. under 1000 μM og i en koncentration, hvor cellernes levedygtighed er på over 70 % (9) (12)).
(strong)
Med henblik herpå bestemmes den maksimale foldinduktion af luciferaseaktiviteten over opløsningsmiddelkontrollen (den negative kontrol) (Imax).
Benzylideneacetone
Da cellerne udsættes for serier af koncentrationer af testkemikalierne, skal den nødvendige koncentration for en statistisk signifikant induktion af luciferaseaktivitet over tærsklen (dvs. EF1,5-værdi) interpoleres fra dosis/respons-kurven (se punkt 32 for beregninger).
(moderate)
Endelig bør der foretages parallelle målinger af cytotoksicitet for at vurdere, om niveauerne for induktion af luciferaseaktivitet forekommer ved subcytotoksiske koncentrationer.
Farnesal
Før rutinemæssig brug af ARE-Nrf2-luciferase-assayet, der hører til denne forsøgsmetode, bør laboratorierne godtgøre deres tekniske kompetence ved hjælp af de 10 kompetencestoffer, der findes opført i tillæg 2.
(weak)
Der stilles ydeevnestandarder (28) til rådighed for at lette valideringen af nye eller ændrede in vitro-Nrf2-luciferase-forsøgsmetoder svarende til KeratinoSensTM-assayet, og de gør det muligt at ændre denne forsøgsmetode i tide, så de kan medtages.
2,3-Butanedione
Gensidig anerkendelse af data i henhold til OECD-aftalen vil kun være garanteret for forsøgsmetoder, der er valideret i henhold til ydeevnestandarderne, hvis disse forsøgsmetoder er gennemgået og medtaget i OECD's tilhørende testvejledning.
utanol
I øjeblikket er den eneste metode, der er omfattet af denne forsøgsmetode, det videnskabeligt validerede KeratinoSensTM-assay (9) (12) (13) (14).
Non-sensitizer
Standardprocedurer for KeratinoSensTM-assayet er tilgængelige og bør anvendes ved gennemførelse og brug af metoden i laboratoriet (15).
ethylcoumarin
Laboratorier, som er villige til at anvende forsøgsmetoden, kan erhverve den rekombinante cellelinje, der anvendes i KeratinoSensTM-assayet, ved at indgå en licensaftale med udvikleren af forsøgsmetoden.
Lactic Acid
Følgende afsnit indeholder en beskrivelse af de vigtigste komponenter og procedurer i Nrf2-luciferase-forsøgsmetoden.
ethoxyacetophenone
Fremstilling af keratinocytkulturerne
The in vivo hazard and (potency) predictions are based on LLNA data (19).
Der bør anvendes en transgen cellelinje med stabil indsættelse af luciferase-reportergenet, der kontrolleres af ARE-elementet (f.eks. KeratinoSensTM-cellelinjen).
The in vivo potency is derived using the criteria proposed by ECETOC (23).
Ved modtagelsen opformeres cellerne (f.eks. 2-4 generationer) og opbevares frosne som en homogen stamme.
A DPRA prediction should be considered in the framework of an IATA and in accordance with the provisions of paragraphs 9 and 11.
Celler fra den oprindelige stamme kan opformeres til det maksimale antal generationer (dvs. 25 for KeratinoSensTM) og anvendes til rutinetest under anvendelse af det relevante opbevaringsmedium (for KeratinoSensTM er der tale om DMEM indeholdende serum og Geneticin).
Ranges determined on the basis of at least 10 depletion values generated by 6 independent laboratories.
Ved testen bør cellerne være 80-90 % sammenflydende, og det bør sikres, at cellerne aldrig er fuldkommen sammenflydende.
EXAMPLES OF ANALYSIS SEQUENCE
En dag inden testen høstes cellerne og fordeles i plader med 96 brønde (10000 celler/brønd for KeratinoSensTM).
Three sets of reference controls (i.e. samples constituted only by the peptide dissolved in the appropriate solvent) should be included in the analysis sequence:
Man bør være opmærksom på at undgå sedimentering af cellerne under udsåningen, så der sikres en ensartet fordeling af cellerne i brøndene.
Reference control A: used to verify the suitability of the HPLC system.
I modsat fald kan dette trin medføre stor variation fra brønd til brønd.
Reference control B: included at the beginning and at the end of the analysis sequence to verify stability of reference controls over the analysis time.
For hver gentagelse anvendes tre replikater til måling af luciferaseaktivitet, mens et parallelt replikat bruges til cellelevedygtighedsassayet.
Reference control C: included in the analysis sequence to verify that the solvent used to dissolve the test chemical does not impact the percent peptide depletion.