natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Det anbefales derfor, at opløsningsmiddelkoncentrationen om nødvendigt minimeres, når det er teknisk muligt (afhængigt af testkemikaliets fysisk-kemiske egenskaber).
Chapter C.8 of this Annex -.
Der anvendes et testsystem med gennemstrømning.
Toxicity for Earthworms.
Et sådan system doserer og fortynder kontinuerligt en stamopløsning af testkemikaliet (f.eks. udmålingspumpe, proportionalfortynder, mætningssystem), så der afgives en serie af koncentrationer til testbeholderne.
Chapter C.32 of this Annex- Enchytraeid reproduction test.
Stamopløsningernes og fortyndingsvandets strømningshastigheder skal i løbet af testen kontrolleres regelmæssigt, fortrinsvis dagligt, og må ikke variere mere end 10 % gennem hele testforløbet.
Diet-dependent female choice for males with “good genes” in a soil predatory mite.
Der skal udvises forsigtighed, så brugen af plastslanger eller andre materialer af lavere kvalitet undgås, da nogle af dem kan indeholde biologisk aktive kemikalier.
The following definitions are applicable to this test method (in this test all effect concentrations are expressed as a mass of test chemical per dry mass of the test soil):
Ved valg af materiale til gennemstrømningssystemet bør der tages højde for den eventuelle adsorption af testkemikaliet til dette materiale.
Chemical is a substance or a mixture
Opbevaring af fiskene
LOEC (lowest observed effect concentration) is the lowest test chemical concentration that has a statistically significant effect (p < 0,05) within a given exposure period when compared with the control.
Testfisk udvælges fra en laboratoriepopulation, fortrinsvis fra en enkelt bestand, som i mindst to uger forud for testen akklimatiseres under vandkvalitets- og lysbetingelser, som svarer til de i testen anvendte.
ECx (effect concentration for x % effect) is the concentration that causes an x % of an effect on test organisms within a given exposure period when compared with a control.
Det er vigtigt, at belastningsgraden og bestandtætheden (definitioner i tillæg 1) er passende for den fiskeart, der bruges i testen (se tillæg 2).
Test Chemical is any substance or mixture tested using this test method.
Efter en 48-timers tilpasningsperiode noteres dødeligheden, og der anvendes følgende kriterier:
The following method for determining the maximum water holding capacity of the soil is considered to be appropriate.
dødelighed på mere end 10 % af populationen på syv dage:
It is described in Annex C of ISO DIS 11268-2 (Soil Quality — Effects of pollutants on earthworms (Eisenia fetida).
Hele fiskegruppen kasseres
Part 2: Determination of effects on reproduction (23)).
Akklimatisering i yderligere syv dage, og hvis dødeligheden er over 5 % i løbet af de følgende syv dage, kasseres hele fiskegruppen
Cover the bottom of the tube with a piece of filter paper filled with water and then places it on a rack in a water bath.
dødelighed på mindre end 5 % af populationen på syv dage:
Soil Quality — Determination of pH (16).
Fiskegruppen godkendes.
Rearing of Hypoaspis (Geolaelaps ) aculeifer, food mites and synchronisation of culture
Præeksponering og valg af fisk
Cultures can be maintained in plastic vessels or glass jars filled with plaster of Paris / charcoal powder (9:1) mixture.
Der anbefales en præeksponeringsperiode på en uge, hvor dyrene anbringes i beholdere svarende til dem, der anvendes i den egentlige test.
The plaster can be kept moist by adding few drops of distilled or deionised water if required.
Fisk fodres ad libitum gennem hele opbevaringsperioden og i eksponeringsfasen.
Rearing temperatures are optimal between 20 ± 2 °C, light / dark regime is not relevant for this species.
Eksponeringsfasen indledes med seksuelt dimorfe voksne fisk fra en laboratoriepopulation af kønsmodne dyr (f.eks. med tydelige synlige sekundære kønskarakteristika hos tykhovedet elritse og japansk risfisk), som er aktivt gydende.
Prey can be Typrophagus putrescentiae or Caloglyphus sp. mites (food mites should be handled with care since they could cause allergies in humans), but nematodes, enchytraeids and collembolans are also suited as prey items.
Som generel vejledning (og ikke isoleret ud fra observationen af en given fiskegruppes faktiske reproduktive tilstand) bør tykhovedet elritse være ca. 20 (± 2) uger gamle, forudsat at de har været dyrket ved 25 °C ± 2 °C i hele deres levetid.
Their source should be recorded.
Japanske risfisk bør være ca. 16 (± 2) uger gamle, forudsat at de har været dyrket ved 25 °C ± 2 °C i hele deres levetid.
Population development can start with a single female because males develop in unfertilised eggs.
Zebrafisk bør være ca. 16 (± 2) uger gamle, forudsat at de har været dyrket ved 26 °C ± 2 °C i hele deres levetid.
Generations are largely overlapping.
TESTDESIGN
A female can live at least 100 days and can deposit approximately 100 eggs during its lifetime.
Der bruges tre koncentrationer af testkemikaliet, en kontrol og om nødvendigt en opløsningsmiddelkontrol.
A maximum oviposition rate is reached between 10 and 40 days (after becoming adults) and amounts to 2,2 eggs female– 1 day– 1.
Dataene kan analyseres for at bestemme statistisk signifikante forskelle mellem behandlings- og kontrolresponser.
Developmental time from egg to adult female is approximately 20 days at 20 °C. More than one culture should be maintained and held beforehand.
Disse analyser bruges i højere grad til at vurdere, om der er brug for yderligere længerevarende testning af kemikaliets skadelige virkninger (navnlig overlevelse, udvikling, vækst og reproduktion), end til risikovurdering (24).
Rearing of Typrophagus putrescentiae: The mites are kept in a glass vessel filled with fine brewers yeast powder which is put in a plastic bucket filled with KNO3-solution in order to avoid escaping.
Når der bruges zebrafisk og japansk risfisk, udtages der på eksperimentets dag 21 hanner og hunner fra hvert behandlingsniveau (fem hanner og fem hunner i hver af de to replikater) og fra kontrollen/kontrollerne med henblik på måling af vitellogenin og eventuelt sekundære kønskarakteristika.
The food mites are placed on top of this powder.
Når der bruges tykhovedet elritse, udtages der på eksponeringens dag 21 hanner og hunner (to hanner og fire hunner i hver af de fire replikater) og fra kontrollen/kontrollerne med henblik på måling af vitellogenin og sekundære kønskarakteristika.
Afterwards, they are carefully mixed with the powder (which has to be replaced twice a week) using a spatula.
I denne test fastsættes den højeste testkoncentration til den maksimalt tolererede koncentration (MTC) bestemt ud fra test til bestemmelse af dosisinterval eller andre toksicitetsdata eller 10 mg/l eller den maksimale opløselighed i vand, alt efter hvilken der er lavest.
Synchronisation of culture: Specimens that are used in the test should be of similar age (ca.
Det er vigtigt at minimere variationen i fiskenes vægt ved assayets begyndelse.
The development of the mites follows approximately the pattern described below at 20 °C (figure):
Egnede størrelser for de forskellige fiskearter, der anbefales til brug i denne test, er angivet i tillæg 2.
Egg 5d, Larva 2d, Protonymph 5d, Deutonymph 7d, preoviposition period of female 2d.
For hele gruppen af fisk, der bruges i testen, gælder det, at området for han- og hunfisks individuelle vægt ved testens begyndelse om muligt bør holdes inden for ± 20 % af gennemsnitsvægten for det relevante køn.
Afterwards, the mites are adult.
Det anbefales at veje en delprøve af fiskebestanden inden testen for at beregne gennemsnitsvægten.
Figure
Eksponeringsbetingelser
Development of Hypoaspis (Geolaelaps) aculeifer at 20 °C.
Testens varighed er 21 dage efter en præeksponeringsperiode.
(removal = females used for the test)
Den anbefalede præeksponeringsperiode er en uge.
20 days
Fiskene fodres ad libitum med et passende foder (tillæg 2) og tilstrækkeligt ofte til at bevare kropstilstanden.
The adult test animals are removed from the synchronised culture and introduced into the test vessels between the 28th and the 35th day after the parental females have started egg laying (i.e. 7 – 14 days after they became adult).
Mikrobiel vækst og urenheder i vandet skal undgås.
This ensures that the test animals have already passed their preoviposition period and have been mated by males that are also present in the culture vessel.
Som hovedregel kan den daglige ration opdeles i to eller tre lige store portioner til flere fodringer om dagen med mindst tre timers interval.
Observations in laboratory cultures suggest, that females mate immediately or shortly after becoming adult if males are present (Ruf, Vaninnen, pers. obs.).
En større ration kan accepteres, navnlig i weekender.
The period of seven days is chosen to facilitate integration in laboratory routine and to buffer individual developmental variability among mites.
Fiskene bør ikke fodres i 12 timer inden prøveudtagning/makroskopisk undersøgelse.
The oviposition should be started with at least the same number of females that is eventually needed for the test (If for example 400 females are needed in the test, at least 400 females should be allowed to oviposit for two to three days.
Fiskefoder evalueres for tilstedeværelse af forurenende stoffer som chlorholdige organiske pesticider, polycykliske aromatiske kulbrinter (PAH) og polychlorerede biphenyler (PCB).
At least 1200 eggs should be the starting point for the synchronised population (sex ratio ca.
Foder med et højt niveau af fytoøstrogener, som ville kompromittere assayets respons på en kendt østrogenagonist (f.eks. østradiol-17β), bør undgås.
0,5, mortality ca. 0,2).
Foderrester og fækalt materiale skal fjernes fra testbeholderne mindst to gange om ugen f.eks. ved omhyggelig rengøring af bunden i hver enkelt beholder ved hjælp af en sifon.
To avoid cannibalism, it is more feasible to keep not more than 20-30 ovipositing females in one vessel.
Lysperioderne og vandtemperaturen skal passe til den art, der bruges i testen (se tillæg 2).
Extraction methods
Hyppighed af analyser og målinger
For micro-arthropods a heat extraction is an appropriate method to separate specimens from the soil / substrate (see figure below).
Inden eksponeringsperioden påbegyndes, kontrolleres det, at kemikalietilførselssystemet fungerer korrekt.
The method is based on the activity of the organisms, so only mobile specimens will have the chance to be recorded.
Alle de nødvendige analysemetoder skal være fastlagt, herunder tilstrækkeligt kendskab til kemikaliets stabilitet i testsystemet.
The principle of the heat extraction is to make conditions for the organisms gradually worse in the sample, so that they will leave the substrate and fall in a fixing liquid (e.g. ethanol).
Under testen bestemmes koncentrationerne af testkemikalie regelmæssigt som følger:
Crucial points are the duration of the extraction and the gradient of good to moderate to bad conditions for the organisms.
Gennemstrømningshastigheden for fortyndingsmidlet og giftstofstamopløsningen kontrolleres fortrinsvis dagligt, men som minimum to gange om ugen, og må ikke udvise en variation på mere end 10 % gennem hele testperioden.
The duration of extraction for ecotoxicological tests have to be as short as possible, because any population growth during the time of extraction would falsify the results.
Det anbefales, at de faktiske testkemikaliekoncentrationer måles i alle beholdere ved testens begyndelse og efterfølgende ugentligt.
On the other hand the temperature and moisture conditions in the sample have to be always in a range that allows the mites to move.
Det anbefales, at resultaterne baseres på målte koncentrationer.
The heating of a soil sample leads to a desiccation of substrate.
Hvis testkemikaliets koncentration i tilstrækkelig grad har holdt sig inden for ± 20 % af den nominelle koncentration gennem hele testen, kan resultaterne baseres på enten de nominelle eller de målte værdier.
If the desiccation is too quick, some mites might also desiccated before they managed to escape.
Det kan være nødvendigt at centrifugere eller filtrere prøverne (f.eks. med et filter med en porestørrelse på 0,45 μm).
Therefore the following procedure is proposed (24) (25): Apparatus:
Hvis det er nødvendigt, anbefales centrifugering.
Tullgren funnel or comparable methods like e.g. McFadyen (heating from above, sample is put over a funnel) Heating regime:
Det anbefales at centrifugere prøverne, men hvis testmaterialet ikke adsorberer på filteret, kan filtrering også accepteres.
25 °C for 12 h, 35 °C for 12 h, 45 °C for 24 hours (in total 48 h).
I løbet af testen skal opløst ilt, temperatur og pH måles i alle testbeholderne mindst en gang om ugen.
The temperature should be measured in the substrate.
Samlet hårdhedsgrad og alkalinitet skal måles i kontrolbeholderne og i en beholder med den højeste koncentration mindst en gang om ugen.
Fixation liquid:
Temperaturen skal fortrinsvis overvåges kontinuerligt i mindst en testbeholder.
70 % ethanol
En række generelle (f.eks. overlevelse) og centrale biologiske responser (f.eks. vitellogeninniveauer) vurderes i løbet af assayet eller ved afslutningen af assayet.
Details:
Måling og evaluering af disse endepunkter og deres anvendelse er beskrevet nedenfor.
Take glass vial that was used for the test.
Overlevelse
Remove lid and wrap a piece of mesh or fabric around the opening.
Fiskene undersøges dagligt i testperioden, eventuel dødelighed registreres, og den døde fisk fjernes så hurtigt som muligt.
The fabric should have a mesh size of 1,0 to 1,5 mm.
Døde fisk erstattes hverken i kontrol- eller testbeholderne.
Fix the fabric with an elastic band.
Kønnet for fisk, der dør under testen, bestemmes ved makroskopisk undersøgelse af kønskirtlerne.
Carefully turn the vial upside down and place it in the extraction apparatus.
Adfærd og udseende
The fabric prevents substrate from trickling in the fixation liquid but allows mites to leave the sample.
det kan omfatte tegn på generel toksicitet, herunder hyperventilation, ukoordineret svømning, tab af ligevægt og atypisk ubevægelighed eller fouragering.
End the extraction after 48 hours.
Yderligere ydre abnormaliteter (f.eks. blødning, misfarvning) registreres.
Remove fixation vials and count mites by means of a dissecting microscope.
Sådanne tegn på toksicitet bør overvejes nøje i forbindelse med fortolkningen af data, da de kan være et tegn på koncentrationer, hvor biomarkører for hormonforstyrrelser ikke er pålidelige.
The extraction efficiency of the chosen method must have been proven once or twice a year using vessels containing a known number of juvenile and adult mites kept in untreated test substrate.
Sådanne adfærdsmæssige observationer kan også være nyttige kvalitative oplysninger som udgangspunkt for eventuelle fremtidige krav til testning med fisk.
Efficiency should be ≥ 90 % on average combined for all developmental stages.
Eksempelvis er der observeret territorial aggressivitet hos normale hanner eller maskuliniserede hunner hos tykhovedet elritse under androgen eksponering;
Tullgren-type extracting device
hos zebrafisk reduceres eller hindres den karakteristiske parrings- og gydningsadfærd efter daggry ved østrogen eller antiandrogen eksponering.
Wire mesh barrier
Fordi visse aspekter af udseendet (primært farven) kan ændre sig hurtigt ved håndtering, er det vigtigt, at kvalitative observationer foretages, inden dyrene fjernes fra testsystemet.
How to prepare the test vial after the test is finished, before extraction
Tidligere erfaringer med tykhovedet elritse tyder på, at visse hormonforstyrrende kemikalier i første omgang kan forårsage ændringer i følgende ydre karakteristika:
Identification of Hypoaspis (Geolaelaps ) aculeifer
kropsfarve (lys eller mørk), farvemønstre (lodrette bånd) og kropsform (hoved- og brystområde).
Subclass/order/suborder:
Derfor bør fiskenes fysiske udseende observeres i løbet af testen og ved afslutningen af undersøgelsen.
Family:
Human aflivning af fisk
Genus/subgenus/species:
På dag 21, dvs. ved eksponeringens afslutning, aflives fiskene med passende mængder tricain (tricainmethansulfonat), metacain, MS-222 (CAS 886-86-2), 100-500 mg/l bufret med 300 mg/l NaHCO3 (natriumbicarbonat, CAS 144-55-8) for at reducere irritation af slimhinderne; blod eller væv udtages derefter med henblik på bestemmelse af vitellogenin som forklaret i punktet om vitellogenin.
Author and Date:
Observation af sekundære kønskarakteristika
Literature used:
Visse hormonforstyrrende kemikalier kan forårsage ændringer i specialiserede sekundære kønskarakteristika (antal legevorter hos tykhovedet elritse-hanner, papillære strukturer hos japansk risfisk-hanner).
Deterministic characteristics:
Kemikalier med visse virkemåder kan navnlig forårsage abnormal forekomst af sekundære kønskarakteristika hos dyr af det modsatte køn;
Tectum with rounded denticulate edge;
eksempelvis kan androgene receptoragonister, som trenbolon, methyltestosteron og dihydrotestosteron, få tykhovedet elritse-hunner til at udvikle fremtrædende legevorter eller japansk risfisk-hunner til at udvikle papillære strukturer (11, 20, 21).
hypostomal grooves with more than 6 denticles;
Det er også blevet beskrevet, at østrogenreceptoragonister kan reducere antallet af legevorter og størrelsen af nakkefremspringet hos voksne hanner (25, 26).
caudal dorsal setae of Z4 not very long;
Sådanne makroskopiske morfologiske observationer kan også være nyttige kvalitative og kvantitative oplysninger som udgangspunkt for eventuelle fremtidige krav til testning med fisk.
dorsal setae setiform;
Antallet og størrelsen af legevorter hos tykhovedet elritse og papillære strukturer hos japansk risfisk kan kvantificeres direkte eller mere praktisk hos præserverede dyr.
genital shield normal, not very enlarged and not reaching the anal shield;
Anbefalede fremgangsmåder til evaluering af sekundære kønskarakteristika hos tykhovedet elritse og japansk risfisk findes i henholdsvis tillæg 5A og tillæg 5B.
posterior half of dorsal shield without unpaired setae;
Blod indsamles fra halearterien/-venen med et hepariniseret mikrohæmatokrit-kapillærrør eller alternativt ved hjertepunktur med en kanyle.
legs II and IV with some thick macrosetae;
Afhængigt af fiskens størrelse kan der generelt indsamles 5-60 μl blod pr. individ hos tykhovedet elritse og 5-15 μl pr. individ hos zebrafisk.
dorsal seta Z5 about two times longer than J5;
Plasma separeres fra blodet ved centrifugering og opbevares med proteaseinhibitorer ved – 80 °C, indtil det skal undersøges for vitellogenin.
fixed digit of chelicera with 12-14 teeth and movable digit with 2 teeth;
Alternativt bruges leveren hos japansk risfisk og hoved-/halehomogenat hos zebrafisk som kilde til væv til bestemmelse af vitellogenin (tillæg 6).
Idiosoma 520-685 μm long.
VTG-målingen skal være baseret på en valideret homolog ELISA-metode, og der skal anvendes en homolog VTG-standard og homologe antistoffer.
Hypoaspis miles is also used in biological control and might get confused with H. aculeifer.
Det anbefales at bruge en metode, hvor der kan påvises VTG-niveauer så lave som nogle få ng/ml plasma (eller ng/mg væv), som er baggrundsniveauet hos ikke-eksponerede hanfisk.
The main difference is:
Kvalitetskontrol af vitellogeninanalyse sker ved brug af standarder, blindprøver og mindst to analyser.
H. miles belongs to subgenus Cosmolaelaps and has knife-like dorsal setae while H. aculeifer belongs to subgenus Geolaelaps and has setiform dorsal setae.
For hver ELISA-metode gennemføres en test for matrixeffekt (effekt af prøveopløsning) for at bestemme minimumsfaktoren for prøveopløsningen.
Hypoaspis aculeifer, dorsal shield with characteristic setae Hypoaspis aculeifer
Hver ELISA-plade, der bruges til VTG-assay, skal omfatte følgende kvalitetskontrolprøver:
Original drawings by F. Faraji
mindst seks kalibreringsstandarder, som omfatter det forventede interval af vitellogeninkoncentrationer, og mindst en ikke-specifik bindingsassayblindprøve (analyseres to gange).
Hypoaspis miles After Hughes, 1976
Disse blindprøvers absorbans bør være under 5 % af den maksimale kalibreringsstandardabsorbans.
Hypoaspis aculeifer After Hughes, 1976
Der analyseres mindst to alikvoter (dobbeltprøver i brønde) af hver prøveopløsning.
Leg IV (female)
Dobbeltprøver i brønde, som afviger med mere end 20 %, analyseres igen.
Leg II (female)
Korrelationskoefficienten (R2) for kalibreringskurverne bør være større end 0,99.
Basic information on the biology of Hypoaspis (Geolaelaps) aculeifer
En høj korrelation er imidlertid ikke nok til at garantere tilstrækkelig forudsigelse af koncentrationen i alle intervaller.
Hypoaspis aculeifer belongs to the family Lealapidae, order Acari (mites), class Arachnida, tribe Arthropoda.
Ud over at have en tilstrækkelig høj korrelation for kalibreringskurven, bør koncentrationen for hver standard, som beregnet på grundlag af kalibreringskurven, være 70-120 % af den nominelle koncentration.
They are living in all kinds of soil and feed on other mites, nematodes, enchytraeids and collembolans (26).
Hvis de nominelle koncentrationer afviger fra kalibreringsregressionslinjen (f.eks. ved lavere koncentrationer), kan det være nødvendigt at opdele kalibreringskurven i lave og høje intervaller eller bruge en ikke-lineær model til at tilpasse absorbansdataene.
In case of food shortage they switch to cannibalism (27).
Hvis kurven er opdelt, bør R2 for begge linjesegmenter være > 0,99.
Predatory mites are segmented in idiosoma and gnathosoma.
Detektionsgrænsen (LOD) defineres som koncentrationen af den laveste analytiske standard, og kvantificeringsgrænsen (LOQ) defineres som den laveste analytiske standard ganget med den laveste fortyndingsfaktor.
A clear differentiation of the idiosoma in prosoma (head) and opisthosoma (abdomen) is missing.
På hver dag, hvor der gennemføres vitellogeninassay, analyseres en spiket prøve, der fremstilles med en referencestandard for assayet (tillæg 7).
The gnathosoma (head shield) contains the instruments for feeding such as palps and chelicera.
Forholdet mellem den forventede koncentration og den målte koncentration registreres i rapporten sammen med resultaterne af hvert assaysæt gennemført på den pågældende dag.
The chelicers are trifurcated and tusked with teeth of different shape.
Evaluering af biomarkørresponser ved variansanalyse (ANOVA)
Beside ingestion the males are using their chelicers mainly to transfer the spermatophores to the females.
For at identificere et kemikalies potentielle hormonforstyrrende virkning sammenlignes responser for henholdsvis behandlinger og kontrolgrupper ved variansanalyse (ANOVA).
A dorsal shield covers nearly completely the idiosoma.
Når der bruges en opløsningsmiddelkontrol, udføres en passende statistisk test til sammenligning af fortyndingsvand og opløsningsmiddelkontroller for hvert endepunkt.
A big part of the female idiosoma is occupied by the reproductive organs, which are in particular distinct shortly before egg deposition.
Vejledning i hvordan data om fortyndingsvand og opløsningsmiddel håndteres i den efterfølgende statistiske analyse, findes i OECD, 2006c (27).
Ventrally, two shields can be found, the sternal and the genital shield.
Alle data om biologisk respons analyseres og registreres særskilt i rapporten fordelt på køn.
All legs are provided with bristles and thorns.
Hvis de nødvendige forudsætninger for parametriske metoder ikke er opfyldt — ikke-normalfordeling (f.eks. Shapiro-Wilks test) eller heterogen varians (Bartletts eller Levenes test) — bør man overveje at transformere dataene for at homogenisere varianserne, inden ANOVA foretages, eller at foretage en vægtet ANOVA.
The bristles are used to anchor when moving in or on top of the soil.
Der kan bruges andre statistiske test (f.eks. Jonckheere-Terpstra-testen eller Williams' test), hvis dosis/respons-forholdet omtrent er monotont.
The second pair of legs is used not only for moving but also to clinch the prey.
Tillæg 8 indeholder et statistisk flowdiagram, som kan hjælpe med at træffe beslutning om, hvilken statistisk test der er mest egnet.
The thorns of the fourth pair of legs can serve as protection as well as “moving motor” (28).
Der kan desuden findes yderligere oplysninger i OECD Document on Current Approaches to Statistical Analysis of Ecotoxicity Data (27).
Males are 0,55 - 0,65 mm long and have a weight of 10 - 15 μg.