natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Hvis man allerede har nogle af ovennævnte salte, men med et andet vandindhold (dvs. 2H2O i stedet for vandfrit), kan man stadig bruge det, men først justeres vægten baseret på molekylvægt).
Clear indication of the results obtained on the different endpoints observed:
Til Hank's final solution kombineres i følgende rækkefølge:
embryo survival and hatching success;
Stamopløsning 1
external abnormalities;
1,0 ml
length and weight;
8,6 ml
incidence of any unusual reactions by the fish and any visible effects produced by the test chemical.
Stamopløsning 4
The results should be presented as mean values ± standard deviation (SD) or standard error (SE).
Stamopløsning 5
Statistics should be reported as a minimum as NOEC and LOEC and confidence intervals.
Bland godt inden brug.
The statistical flow chart (Appendix 8) should be followed.
Befrugtning
Sumpter, 1996, “Inhibition of testicular growth in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) exposed to estrogenic alkylphenolic chemicals”, Environmental Toxicology and Chemistry 15, pp. 194-202.
Store hunner med æg udtages fra den ønskede population.
Sumpter, J.P. and S. Jobling, 1995, “Vitellogenesis As A Biomarker for Estrogenic Contamination of the Aquatic Environment”, Environmental Health Perspectives 103, pp. 173-178.
Hunner er først klar til udpresning, når man kan se æg stå frem fra afløbskanalen.
Hutchinson, S. Maddix, and H. Trip (1999), “An in vivo testing system for endocrine disruptors in fish early life stages using induction of vitellogenin”, Environmental Toxicology and Chemistry 18, pp. 337-347.
Hunner, der er klar, har den karakteristiske holdning med hovedet op.
Pedersen, and P. Bjerregaard (2001a), “Development of an ELISA for vitellogenin in whole body homogenate of zebrafish (Danio rerio)”, Comparative Biochemistry and Physiology C-Toxicology & Pharmacology 130, pp. 119-131.
Lad forsigtigt en finger eller tommelfinger løbe langs siden af fisken ned mod halen for at fremme udstødelsen af en ægsæk i en frisk petriskål.
Andersen, L., P. Bjerregaard, and B. Korsgaard (2003), “Vitellogenin induction and brain aromatase activity in adult male and female zebrafish exposed to endocrine disrupters”, Fish Physiology and Biochemistry 28, pp. 319-321.
Gentag på den anden side og læg fisken tilbage til dens kar.
Petersen (2003), “Gonad development and vitellogenin production in zebrafish (Danio rerio) exposed to ethinylestradiol and methyltestosterone”, Aquatic Toxicology 65, pp. 397-411.
Æggene kan spredes ud (så de danner et lag) ved hjælp af en fin malerpensel.
Tyler (2002), “Utility of a juvenile fathead minnow screening assay for detecting (anti-)estrogenic substances”, Environmental Toxicology and Chemistry 21, pp. 319-326.
Det er vigtigt at prøve at eksponere så mange æg som muligt for spermen, så det hjælper at gøre overfladearealet så stort som muligt.
Wang (2007), “Toxicity of the aromatase inhibitor letrozole to Japanese medaka (Oryzias latipes) eggs, larvae and breeding adults”, Comparative Biochemistry and Physiology C-Toxicology & Pharmacology 145, pp. 533-541.
Hold æggene fugtige ved at lægge en fugtig serviet omkring dem (det er vigtigt, at æggene ikke rører vand direkte, da dette kan hærde fosterhinden for tidligt og forhindre befrugtning).
LeBlanc, and C.V.Sullivan (1999), “Fathead minnow (Pimephales promelas) vitellogenin: purification, characterization and quantitative immunoassay for the detection of estrogenic compounds”, Comparative Biochemistry and Physiology C-Toxicology & Pharmacology 123, pp. 113-125.
Der er stor variation i antallet af æg, hver hun kan producere, men i gennemsnit bør der let kunne fås omkring 150 æg fra en enkelt hun med æg.
Porcher (2002), “Development and validation of an enzyme-linked immunosorbent assay to measure vitellogenin in the zebrafish (Danio rerio)”, Environmental Toxicology and Chemistry 21, pp. 1699-1708.
25 μl sperm i Hank's blanding fordeles jævnt over hele overfladen af æg ved hjælp af en malerpensel.
Hatano, H. Mizukami, M. Yamashita, R. Sakakibara, and E. Tamiya (2002), “Development and application of a monoclonal antibody-based sandwich ELISA for quantification of Japanese medaka (Oryzias latipes) vitellogenin”, Comparative Biochemistry and Physiology C-Toxicology & Pharmacology 132, pp. 161-169.
Æggene vil hurtigt hærde og ændre farve (inden for et minut), når befrugtningen er begyndt.
Bengtsson (2004), “The juvenile three-spined stickleback (Gasterosteus aculeatus L.) as a model organism for endocrine disruption — II — kidney hypertrophy, vitellogenin and spiggin induction”, Aquatic Toxicology 70, pp. 311-326.
Hvis det anslåede antal æg er over 150, gentages proceduren.
Tatarazako, N., M. Koshio, H. Hori, M. Morita, and T. Iguchi (2004), “Validation of an enzyme-linked immunosorbent assay method for vitellogenin in the medaka”, Journal of Health Science 50, pp. 301-308.
Tilsvarende tilsættes lidt mere sperm, hvis æggene ikke hærder inden for et minut.
Eidem, J.K., H. Kleivdal, K. Kroll, N. Denslow, R. van Aerle, C. Tyler, G. Panter, T. Hutchinson, and A. Goksoyr (2006), “Development and validation of a direct homologous quantitative sandwich ELISA for fathead minnow (Pimephales promelas) vitellogenin.
Æggene og spermopløsningen lades »interagere« i mindst 15 minutter, og de befrugtede æg anbringes i eksponeringsakvariet inden for 1,5 time efter befrugtningen.
Ankley (2006), “Evaluation of a commercial kit for measuring vitellogenin in the fathead minnow (Pimephales promelas)”, Ecotoxicology and Environmental Safety 64, pp. 101-105.
Proceduren gentages med en anden hun, indtil det ønskede antal æg er udtaget.
Holbech, H., Petersen, G. I., Norman, A., Örn, S, Norrgren, L., and Bjerregaard, P (2001b), “Suitability of zebrafish as test organism for detection of endocrine disrupting chemicals.
Gem nogle få æg fra det sidste parti og fikser dem i 10 % eddikesyre.
Comparison of vitellogenin in plasma and whole body homogenate from zebrafish (Danio rerio) and rainbow trout (Oncorhynchus mykiss)”, Nordic Council of Ministers, TemaNord 2001:597, pp. 48-51.
Optælling og fordeling af æg i testakvarier
Porcher, and A. Goksoyr (2004), “Development of quantitative vitellogenin-ELISAs for fish test species used in endocrine disruptor screening”, Analytical and Bioanalytical Chemistry 378, pp. 621-633.
Æggene fordeles jævnt mellem hvert behandlingsniveau for at undgå genetisk skævhed.
Orn, S., S. Yamani, and L. Norrgren (2006), “Comparison of vitellogenin induction, sex ratio, and gonad morphology between zebrafish and Japanese medaka after exposure to 17 alpha-ethinylestradiol and 17 beta-trenbolone”, Archives of Environmental Contamination and Toxicology 51, pp. 237-243.
Hvert parti befrugtede æg deles i lige store grupper (så mange, som der er behandlingsniveauer) ved hjælp af et stumpt instrument (dvs. en bredbladet insektpincet eller en inokuleringsløkke).
Scholz, S. and N. Kluver (2009), “Effects of Endocrine Disrupters on Sexual, Gonadal Development in Fish, Sexual Development 3”, pp. 136-151.
Hvis man sigter efter fire replikater pr. behandling med 20 æg hver, skal der fordeles 80 æg pr. eksponeringsakvarium.
Fenske, M., G. Maack, C. Schafers, and H. Segner (2005), “An environmentally relevant concentration of estrogen induces arrest of male gonad development in zebrafish, Danio rerio”, Environmental Toxicology and Chemistry 24, pp. 1088-1098.
Det anbefales at tilsætte yderligere 20 % (dvs. 96 æg pr. behandlingsniveau), indtil man er sikker på at få 100 % befrugtning.
Nagahama (2004), “Two DM domain genes, DMY and DMRT1, involved in testicular differentiation and development in the medaka, Oryzias latipes”, Developmental Dynamics 231, pp. 518-526.
Hundestejleæg er meget modtagelige for svampeinfektioner uden for den rede, faderen bevogter.
Shinomiya, A., H. Otake, K. Togashi, S. Hamaguchi, and M. Sakaizumi (2004), “Field survey of sex-reversals in the medaka, Oryzias latipes: genotypic sexing of wild populations”, Zoological Science 21, pp. 613-619.
I den forbindelse er behandling af alle æg med methylenblåt i testens første fem dage helt afgørende.
Flick (2007), “Collapse of a fish population after exposure to a synthetic estrogen”, Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 104, pp. 8897-8901.
En stamopløsning af methylenblåt fremstilles med 1 mg/ml og tilsættes eksponeringsakvariet for at give en maksimal slutkoncentration på 2,125 mg/l.
Kidd (2009), “Interspecies differences in biochemical, histopathological, and population responses in four wild fish species exposed to ethynylestradiol added to a whole lake”, Canadian Journal of Fisheries and Aquatic Sciences 66, pp. 1920-1935.
Hundestejler må ikke eksponeres for methylenblåt, når de er klækket, så systemet skal derfor være uden methylenblåt senest på dag 6.
Tyler (2006), “Development of chronic tests for endocrine active chemicals — Part 1.
Æggene inspiceres dagligt, og eventuelt døde eller ubefrugtede æg registreres som sådanne.
An extended fish early-life stage test for oestrogenic active chemicals in the fathead minnow (Pimephales promelas)”, Aquatic Toxicology 77, pp. 279-290.
Æggene må aldrig være uden for vand, før de klækkes, selv ikke i korte perioder.
Petersen, P. Jackson, K. Hylland, L. Norrgren, and P. Bjerregaard (2006), “Detection of endocrine disrupters: Evaluation of a Fish Sexual Development Test (FSDT)”, Comparative Biochemistry and Physiology C-Toxicology & Pharmacology 144, pp. 57-66.
Hank's Buffered Salt Solution (HBSS):HBSS er nødvendig for at præservere spermen, mens befrugtningen forberedes.
Andersen, L., K. Kinnberg, H. Holbech, B. Korsgaard, and P. Bjerregaard (2004), “Evaluation of a 40 day assay for testing endocrine disrupters: Effects of an anti-estrogen and an aromatase inhibitor on sex ratio and vitellogenin concentrations in juvenile zebrafish (Danio rerio)”, Fish Physiology and Biochemistry 30, pp. 257-266.
C.42 BIONEDBRYDELIGHED I HAVVAND
Morthorst, J.E., H. Holbech, and P. Bjerregaard (2010), “Trenbolone causes irreversible masculinization of zebrafish at environmentally relevant concentrations”, Aquatic Toxicology 98, pp. 336-343.
GENEREL INDLEDNING
Metcalf (2003), “Effects of the antiandrogens, vinclozolin and cyproterone acetate on gonadal development in the Japanese medaka (Oryzias latipes)”, Aquatic Toxicology 63, pp. 391-403.
Denne testmetode svarer til OECD Test Guideline (TG) 306 (1992).
Tyler (2004), “Successful detection of (anti-) androgenic and aromatase inhibitors in pre-spawning adult fathead minnows (Pimephales promelas) using easily measured endpoints of sexual development”, Aquatic Toxicology 70, pp. 11-21.
Da de oprindelige testmetoder blev udviklet, vidste man ikke, i hvilken grad resultater fra screeningtest for let bionedbrydelighed under anvendelse af ferskvand og spildevand eller aktiveret slam som inokulum kunne anvendes på havmiljøet.
Petersen, and P. Bjerregaard (2007), “Effects of the fungicide prochloraz on the sexual development of zebrafish (Danio rerio)”, Comparative Biochemistry and Physiology C-Toxicology & Pharmacology 145, pp. 165-170.
Der er registreret forskellige resultater på dette punkt (f.eks. 1)).
Chapter C.14 of this Annex, Fish Juvenile Growth Test.
Meget industrispildevand, som indeholder forskellige kemikalier, når enten havet ved direkte udledning eller via flodmundinger og floder, hvor opholdstiderne er lave sammenlignet med den periode, som er nødvendig for en fuldstændig bionedbrydning af mange af de tilstedeværende kemikalier.
Chapter C.4 of this Annex, Ready Biodegradability.
På grund af den voksende bevidsthed om behovet for at beskytte havmiljøet mod stigende mængder af kemikalier og behovet for at anslå den sandsynlige kemikaliekoncentration i havet er der udviklet testmetoder for bionedbrydelighed i havvand.
Chapter C.37 of this Annex, 21-Day Fish Assay:
De her beskrevne metoder benytter naturligt havvand både som den vandige fase og som kilde til mikroorganismer.
A Short Term Screening for Oestrogenic and Androgenic Activity, and Aromatase Inhibition.
I et forsøg på at leve op til metoderne for let bionedbrydelighed i ferskvand blev brugen af ultrafiltreret og centrifugeret havvand undersøgt ligesom brugen af marine sedimenter som inokula.
Schäfers, C., Teigeler, M., Wenzel, A., Maack, G., Fenske, M., Segner, H (2007), “Concentration- and time-dependent effects of the synthetic estrogen, 17 alpha-ethinylestradiol, on reproductive capabilities of the zebrafish, Danio rerio” Journal of Toxicology and Environmental Health-Part A, 70, 9-10 pp 768-779.
Disse undersøgelser lykkedes ikke.
Abbreviations and definitions
Testmediet er derfor naturligt havvand, som er forbehandlet for at fjerne grove partikler.
Apical endpoint
Med henblik på at vurdere fuldstændig bionedbrydelighed efter rystekolbemetoden skal der anvendes relativt høje koncentrationer af teststoffet, fordi analysemetoden med opløst organisk kulstof (DOC) har en ringe følsomhed.
Causing effect at population level
Dette kræver tilsætning af uorganiske næringsstoffer (N og P) til havvandet, idet vandets lave koncentrationer ellers ville begrænse fjernelsen af DOC.
Air saturation value
Det er også nødvendigt at tilsætte næringsstoffer efter Closed Bottle-metoden på grund af det tilsatte teststofs koncentration.
Biomarker
Derfor er metoderne ikke test for let bionedbrydelighed, eftersom der ikke tilsættes inokulum ud over de mikroorganismer, der allerede er til stede i havvandet.
Causing effect at individual level
Testene simulerer heller ikke havmiljøet, eftersom der tilsættes næringsstoffer, og teststoffets koncentration er langt højere, end man ville finde i havet.
A substance or a mixture.
Af disse årsager foreslås metoderne under en ny underafdeling »Bionedbrydelighed i havvand«.
Days post hatch
ANVENDELSE
Y-specific DM-domain gene required for male development in the medaka fish
Testresultaterne, som skulle anvendes, fordi brugsmønstret for og bortskaffelsen af det pågældende stof viste en vej til havet, giver et første indtryk af bionedbrydeligheden i havvand.
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay
Hvis resultatet er positivt (> 70 % DOC-fjernelse, > 60 % ThOD — teoretisk iltforbrug), kan det konkluderes, at der er et potentiale for bionedbrydning i havmiljøet.
Fish weight
Et negativt resultat udelukker dog ikke et sådant potentiale, men viser, at yderligere undersøgelse er nødvendig, f.eks. ved at bruge en så lav koncentration af teststoffet som muligt.
Fish wet weight (blotted dry)
Hvis der kræves en mere definitiv værdi for hastigheden eller graden af bionedbrydning i havvand et bestemt sted, vil der i hvert tilfælde skulle anvendes mere komplekse og avancerede og dermed dyrere metoder.
FSDT
F.eks. kunne der anvendes en simuleringstest med en koncentration af teststoffet, som ligger tættere på den sandsynlige koncentration i miljøet.
Fish Sexual Development Test
Der kunne også bruges ikkeberiget og ikkeforbehandlet havvand fra det interessante sted, og primær bionedbrydning kunne følges op af en specifik kemisk analyse.
Hypothalamic-pituitary-gonadal axis
For fuldstændig bionedbrydelighed ville 14C-mærkede stoffer være nødvendige, for at forsvindingshastigheden for opløselig organisk 14C og produktionen af 14CO2 ved miljømæssigt realistiske koncentrationer kunne måles.
Intersex fish
VALG AF METODER
Fish with more than one oocyte in testis per 6 sections analysed or spermatogenetic cells in ovaries (yes/no)
Hvilke metoder der skal bruges, afhænger af en række faktorer.
Wet weight of fish per volume of water
Følgende tabel giver hjælp til at vælge.
Mode of action
Selv om stoffer med en vandopløselighed under det, der svarer til omkring 5 mg C/l, ikke kan testes efter rystekolbemetoden, kan tungt opløselige stoffer — i hvert fald i princippet — testes efter Closed Bottle-metoden.
Reverse Transcriptase Polymerase Chain-Reaction
Tabel
Undifferentiated fish
Fordele og ulemper ved rystekolbetest og closed bottle-test
Fish with gonads exhibiting no discernible germ cells.
METODE
Vitellogenin
FORDELE
Experimental conditions for the FSDT (freshwater species)
ULEMPER
Japanese medaka (Oryzias latipes)
RYSTEKOLBE
Zebrafish (Danio rerio)
enkelt apparat undtagen kulstofanalysator
Three-spined Stickleback (Gasterostreus aculeatus)
60 dages varighed er ikke noget problem
Flow-through or semi-static
ingen forstyrrende nitrifikation
Fluorescent bulbs (wide spectrum
kan tilpasses flygtige stoffer
Light intensity
kræver kulstofanalysator
10-20 μE/m2/s, 540-1080 lux, or 50-100 ft-c (ambient laboratory levels)
bruger 5-40 mg DOC/1, kunne være hæmmende
12-16 h light, 8-12 h dark
DOC-bestemmelse er vanskelig ved lave koncentrationer i havvand (chlorideffekt)
Minimum chamber size
DOC er undertiden høj i havvand
Individual chambers should contain a minimum of 7 l water volume
enkelt apparat
Age of test organisms at start of exposure
enkel slutbestemmelse
Newly fertilised eggs (Early blastula stage)
bruger lav koncentration af teststof (2 mg/l) og således mindre sandsynlighed for inhibering
Newly fertilised eggs
kan let tilpasses flygtige stoffer
No. of eggs per treatment
kunne være vanskeligt at opretholde flaskernes lufttæthed
Minimum 120
bakterievækst på væggen kan føre til falske værdier
Minimum 3 (plus appropriate controls)
rene O2-optagelsesværdier kan være høje, især efter 28 dage;
No. replicates per treatment
kan løses ved ældning af havvandet
Minimum 4 (unless square root allocation to controls)
mulig forstyrrelse fra O2-optagelse ved nitrifikation
Live Artemia, frozen adult brine shrimp, flake food, etc.
RYSTEKOLBEMETODEN
It is recommended to feed twice daily
Denne metode er en havvandsvariant af den modificerede OECD-screeningtest, der er beskrevet i kapitel C.4B i dette bilag (2).
Special fry food, live Artemia, frozen adult brine shrimp, flake food, etc.
Den blev færdiggjort som resultat af en ringtest afholdt for Europa-Kommissionen af Vandkvalitetsinstituttet (3).
It is recommended to feed twice daily
I lighed med den tilhørende marine closed bottle-metode skal resultaterne fra denne test ikke opfattes som indikatorer for let bionedbrydelighed, men skal bruges specifikt til at opnå information om stoffers bionedbrydelighed i havmiljøer.
None unless DO concentration falls below 60 % saturation
En på forhånd fastsat mængde teststof opløses i testmediet for at få en koncentration på 5-40 mg opløst organisk kulstof (DOC)/l.
None unless DO concentration falls below 70 % saturation
Hvis organiske kulstofanalysers følsomhedsgrænser forbedres, kan brugen af lavere koncentrationer af teststof være en fordel, især for inhibitoriske stoffer.
Clean surface, well or reconstituted water
Opløsningen af teststoffet i testmediet inkuberes under omrøring i mørke eller i diffus belysning under aerobe betingelser ved en fast temperatur (kontrolleret til ± 2 °C), som normalt ligger inden for intervallet 15-20 °C.
Test chemical exposure duration
I tilfælde, hvor undersøgelsens formål er at simulere situationer i miljøet, kan testene udføres over dette normale temperaturområde.
Hatching success, Survival Gross- morphology, VTG gonadal histology, Genetic sex, Sex ratio
Den anbefalede maksimale testvarighed er ca. 60 dage.
Hatching success, Survival Gross- morphology, VTG gonadal histology, Sex ratio
Nedbrydning efterfølges af DOC-målinger (fuldstændig nedbrydning) og — i nogle tilfælde — af specifik analyse (primær nedbrydning).
Test acceptability criteria for pooled replicates of controls
For at vide, om testen kan anvendes på et bestemt stof, skal nogle af dets egenskaber være kendt.
Hatching success > 80 %
Stoffets organiske kulstofindhold skal fastslås, dets flygtighed skal være således, at der ikke opstår betydelige tab i løbet af testen, og dets vandopløselighed bør være større, end hvad der svarer til 25-40 mg C/l.
Post hatch survival ≥ 70 %
Teststoffet må heller ikke i væsentlig grad adsorbere til glasoverflader.
growth (Fish wet weight, blotted dry) > 150 mg
Oplysninger om teststoffets renhed eller forholdet mellem dets hovedbestanddele er nødvendige for, at de fundne resultater kan fortolkes, især hvis de ligger tæt på tærskelværdien.
growth (Fish wet weight, blotted dry) > 75 mg
Oplysninger om teststoffets toksicitet over for bakterier, f.eks. som målt i kortvarige respirationshastighedstest (4), kan være nyttige ved valg af passende testkoncentrationer og kan være afgørende for korrekt fortolkning af lave værdier for bionedbrydning.
growth (Fish wet weight, blotted dry) > 120 mg
Sådanne oplysninger er dog ikke altid tilstrækkelige til at fortolke de resultater, der fås i bionedbrydningstesten, og proceduren, som er beskrevet i punkt 18, er mere egnet.
Length (standard length) > 20mm
Egnede referencestoffer skal bruges til at kontrollere den mikrobielle aktivitet i havvandsprøven.
Length (standard length) > 14 mm
Natriumbenzoat, natriumacetat and anilin er eksempler på stoffer, der kan bruges til dette formål.
Length (standard length) > 20 mm
Referencestofferne skal nedbrydes inden for et rimeligt kort tidsrum, ellers anbefales det, at testen gentages under anvendelse af en anden havvandsprøve.
Sex ratio (% males or females) 30 %-70 %
I Europa-Kommissionens ringtest, hvor der blev udtaget havvandsprøver forskellige steder og på forskellige tidspunkter på året (3), var lag-fasen (tL) og tiden til at nå 50 % nedbrydning (t50), eksklusive lag-fasen, henholdsvis 1-4 dage og 1-7 dage for natriumbenzoat.
Chemical characteristics of an acceptable dilution water
For anilin varede tL fra 0 til 10 dage, mens t50 varede fra 1 til 10 dage.
CONCENTRATION
METODENS REPRODUCERBARHED OG FØLSOMHED
Particular matter
Metodens reproducerbarhed blev fastslået i ringtesten (3).
From test method C.14/Guidance on test concentrations
Den laveste teststofkoncentration, for hvilken denne metode kan bruges med DOC-analyse, bestemmes i vid udstrækning af detektionsgrænsen for den organiske kulstofanalyse (omkring 0,5 mg C/l) og den anvendte koncentration af opløst organisk kulstof i havvandet (normalt i størrelsesordenen 3-5 mg/l for vand fra åbent hav).
Column (Number of concentrations between 100 and 10, or between 10 and 1) [1]
Baggrundskoncentrationen for DOC må ikke overstige omkring 20 % af den samlede DOC-koncentration efter tilsætning af teststoffet.
A series of three (or more) successive concentrations may be chosen from a column.
Hvis dette ikke kan lade sig gøre, kan baggrundskoncentrationen undertiden reduceres ved at ælde havvandet før testning.
Mid-points between concentrations in column (x) are found in column (2x + 1).
Bruges metoden kun med en specifik kemisk analyse (hvorved der måles primær nedbrydning), skal forsøgslederen ved at fremlægge yderligere oplysninger dokumentere, om fuldstændig nedbrydelighed kan forventes.
The values listed can represent concentrations expressed as percentage per volume or weight (mg/l or μg/l).
Disse supplerende oplysninger kan bestå af resultater fra andre test for let eller naturlig bionedbrydelighed.
Values can be multiplied or divided by any power of 10 as appropriate.
Sædvanligt laboratorieudstyr og:
Column 1 might be used if there was considerable uncertainty on the toxicity level.
a. rysteapparat beregnet til 0,5-2 liter Erlenmeyerkolber, enten med automatisk temperaturkontrol eller brugt i et rum med konstant temperatur ved 15-20 °C kontrolleret til ± 2 °C
Guidance for homogenisation of head & tail from juvenile zebrafish, fathead minnow, three spined stickleback and Japanese medaka
b. Erlenmeyerkolber med smal hals, 0,5-2 liter
The purpose of this section is to describe the procedures that occur prior to the quantification of the VTG concentration.
c. apparatur til membranfiltrering eller centrifuge
Other procedures that result in comparable VTG quantification can be used.
d. membranfiltre, 0,2-0,45 μm;
It is an option to determine the VTG concentration in blood plasma or liver instead of head/tail homogenate.
e. kulstofanalysator
The head and tail are cut of the fish in accordance with the test description.
f. udstyr til specifik analyse (valgfrit).
All dissection instruments, and the cutting board should be rinsed and cleaned properly (e.g. with 96 % ethanol) between handling of each single fish to prevent “VTG pollution” from females or induced males to un-induced males.
Havvand
When a homogenous mass is achieved an amount of 4-10 time the tissue weight of ice-cold homogenisation buffer is added (note the dilution).