natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Kunstigt fremstillet ferskvand kan tilpasses vedligeholdelsesvand med lav hårdhed ved fortynding med deioniseret vand op til et forhold på 1:5 og en hårdhed på mindst 30-35 mg/l CaCO3.
10 adult females and 10 males (5 females and 5 males in each replicate vessel)
Vandet beluftes til iltmætning før tilsætning af testkemikaliet.
Feeding regime
Temperaturen bør holdes på 26 ± 1 °C i brøndene under hele testen.
Live or frozen adult or nauplii brine shrimp two or three times daily (ad libitum), commercially available food or a combination of the above
PH-værdien bør være mellem 6,5 og 8,5 og må ikke variere inden for dette område med mere end 1,5 enheder i løbet af testen.
Brine shrimp nauplii two or three times daily (ad libitum), commercially available food or a combination of the above
Hvis pH-værdien ikke forventes at holde sig inden for dette interval, bør den tilpasses inden testen.
Brine shrimp nauplii two or three times daily (ad libitum),commercially available food or a combination of the above
PH-justeringen bør foretages på en sådan måde, at stamopløsningens koncentration ikke ændres nævneværdigt, og så der ikke sker nogen kemisk reaktion eller udfældning af testkemikaliet.
None unless DO concentration falls below 60 % air saturation
Det anbefales at bruge hydrogenchlorid (HCl) og natriumhydroxid (NaOH) til justering af pH i opløsninger, der indeholder testkemikaliet.
Dilution water
Testopløsninger med den valgte koncentration kan f.eks. fremstilles ved fortynding af en stamopløsning.
Clean surface, well or reconstituted water or dechlorinated tap water
Stamopløsninger bør fortrinsvis fremstilles ved mekanisk opblanding eller omrystning af testkemikaliet i fortyndingsvandet (f.eks. ved omrøring eller ultralydbehandling).
Pre- exposure period
Hvis testkemikaliet er vanskeligt at opløse i vand, bør de procedurer, der er beskrevet i OECD's vejledning nr. 23 om håndtering af vanskelige stoffer og blandinger følges (28).
7-14 days recommended
Anvendelse af opløsningsmidler bør undgås, men kan i nogle tilfælde være nødvendig for at fremstille en stamopløsning med en passende koncentration.
Chemical exposure duration
Når der anvendes et opløsningsmiddel som hjælpemiddel ved fremstillingen af stamopløsninger, bør dens slutkoncentration ikke være højere end 100 μl/l og bør være den samme i alle testbeholdere.
Biological endpoints
Når der anvendes et opløsningsmiddel, er der behov for yderligere opløsningsmiddelkontrol.
survival
Vedligeholdelse af yngelfisk
behaviour
En avlsdyrbestand bestående af ueksponerede, vilde zebrafisk med veldokumenteret befrugtning af æg anvendes til produktion af æg.
fecundity
Fiskene bør være fri for makroskopisk synlige symptomer på infektion og sygdomme og bør ikke have undergået nogen form for farmaceutisk (akut eller profylaktisk) behandling i to måneder før gydning.
sex characteristics
Avlsfisk holdes i akvarier med et anbefalet rumindhold på 1 liter vand pr. fisk og en fast lysperiode på 12-16 timer (29) (30) (31) (32) (33).
optionally gonadal histopathology
Optimal filtrering bør tilpasses, og overskydende filtrering, der medfører kraftige forstyrrelse af vandet, bør undgås.
Test acceptability
Vedrørende fodring, se tillæg 2.
Dissolved oxygen ≥ 60 % of saturation; mean temperature of 25 ± 2 °C; 90 % survival of fish in the controls; measured test concentrations within 20 % of mean measured values per treatment level.
Overskudsfodring bør undgås, og vandets kvalitet og akvariets renhed bør overvåges regelmæssigt og om nødvendigt nulstilles til den oprindelige tilstand.
Dissolved oxygen ≥ 60 % of saturation; mean temperature of 26 ± 2 °C; 90 % survival of fish in the controls; measured test concentrations within 20 % of mean measured values per treatment level.
Præstationstest
SOME CHEMICAL CHARACTERISTICS OF ACCEPTABLE DILUTION WATER
Som referencekemikalie bør 3,4-dichloranilin (som anvendes i valideringsundersøgelser (1) (2)) testes i en fuld koncentration/respons til kontrol af følsomheden af den anvendte fiskestamme, fortrinsvis to gange om året.
COMPONENT
Ethvert laboratorium bør, når det påbegynder brug af dette assay, benytte referencekemikaliet.
CONCENTRATIONS
Et laboratorium kan benytte disse kemikalier til at godtgøre sin tekniske kompetence vedrørende udførelsen af assayet, inden det påbegynder fremsendelse af data til forskriftsmæssige formål.
< 20 mg/l
Ægproduktion
< 2 mg/l
Zebrafiskeæg kan produceres i gydegrupper (i individuelle gydetanke) eller via massegydning (i vedligeholdelsestankene).
Unionised ammonia
Med hensyn til gydegrupper placeres hanner og hunner (f.eks. i forholdet 2:1) i en avlsgruppe i gydetanke et par timer før mørkets frembrud på dagen før testen.
< 1 μg/l
Da gydegrupper af zebrafisk undertiden ikke gyder, anbefales det parallelt dermed at anvende mindst tre gydetanke.
< 10 μg/l
For at undgå genetiske skævheder indsamles der æg fra mindst tre blandede og tilfældigt udvalgte avlsgrupper.
Total organophosphorus pesticides
Til indsamling af æg anbringes gydefælder i gydetankene eller vedligeholdelsestankene inden mørkets frembrud på dagen før testen eller før lysets frembrud på selve testdagen.
< 50 ng/l
For at forhindre voksne zebrafisks rov af æg er gydefælderne dækket af inert trådnet af passende maskestørrelse (ca. 2 ±0,5 mm).
< 25 ng/l
Hvis det anses for nødvendigt, kan kunstige planter fremstillet af et inert materiale (f.eks., plast eller glas) fastgøres til nettet som gydestimulus (3) (4) (5) (23) (35).
Appendix 4A
Der bør anvendes forvitret plastmateriale som ikke lækker (f.eks. phthalater).
SPAWNING SUBSTRATE FOR ZEBRAFISH
Parring, gydning og befrugtning sker inden for 30 min. efter lysets frembrud, og gydefælderne med de indsamlede æg kan forsigtigt fjernes.
Spawning tray
Det anbefales at skylle æggene med kunstigt fremstillet ferskvand efter indsamling fra gydefælderne.
all glass instrument dish, for example 22 × 15 × 5,5 cm (l × w × d), covered with a removable stainless steel wire lattice (mesh width 2mm).
Differentiering af æg
The lattice should cover the opening of the instrument dish at a level below the brim.
Ved 26 °C deler befrugtede æg sig første gang efter ca. 15 min., og de efterfølgende synkrone delinger danner 4, 8, 16 og 32 celleblastomerer (jf. tillæg 3) (35).
On the lattice, spawning substrate should be fixed.
I disse faser kan de befrugtede æg let identificeres med udviklingen af et blastula.
It should provide structure for the fish to move into.
Tyve embryoner pr. koncentration (et embryon pr. brønd) eksponeres for testkemikaliet.
For example, artificial aquaria plants made of green plastic material are suitable (NB: possible adsorption of the test chemical to the plastic material should be considered).
Eksponeringen bør foregå på en sådan måde, at der fastholdes ± 20 % af den nominelle kemikaliekoncentration under hele testen.
The plastic material should be leached out in sufficient volume of warm water for sufficient time to ensure that no chemicals may be disposed to the test water.
Hvis dette ikke er muligt i et statisk system, bør der anvendes et overskueligt semistatisk udskiftningsinterval (f.eks. udskiftning hver 24. time).
When using glass materials it should be ensured that the fish are neither injured nor cramped during their vigorous actions.
I disse tilfælde skal eksponeringskoncentrationerne verificeres som minimum i den højeste og den laveste testkoncentration ved begyndelsen og slutningen af hvert eksponeringsinterval (jf. punkt 36).
The distance between the tray and the glass panes should be at least 3 cm to ensure that the spawning is not performed outside the tray.
Hvis der ikke kan opretholdes en eksponeringskoncentration på ± 20 % af de nominelle koncentrationer, skal alle koncentrationer måles ved begyndelsen og slutningen af hvert eksponeringsinterval (jf. punkt 36).
The eggs spawned onto the tray fall through the lattice and can be sampled 45-60 min after the start of illumination.
Ved udskiftning bør det påses, at embryoner fortsat er dækket af en lille mængde af den gamle testopløsning, så de ikke tørrer ud.
The transparent eggs are non-adhesive and can easily be counted by using transversal light.
Testdesignet kan tilpasses, så det opfylder testkravene til specifikke stoffer (f.eks. gennemstrømning (24) eller passive doseringssystemer (25) i forbindelse med let nedbrydelige eller meget adsorptive stoffer (29) eller andre for flygtige stoffer (36) (37)).
When using five females per vessel, egg numbers up to 20 at a day can be regarded as low, up to 100 as medium and more than 100 as high numbers.
Under alle omstændigheder bør der drages omsorg for at minimere stress for embryonerne.
The spawning tray should be removed, the eggs collected and the spawning tray re-introduced in the test vessel, either as late as possible in the evening or very early in the morning.
Testkamrene bør konditioneres i mindst 24 timer med testopløsningerne, inden testen påbegyndes.
The time until re-introduction should not exceed one hour since otherwise the cue of the spawning substrate may induce individual mating and spawning at an unusual time.
Testbetingelserne er opsummeret i tillæg 2.
If a situation needs a later introduction of the spawning tray, this should be done at least 9 hours after start of the illumination.
Normalt kræves fem koncentrationer af testkemikaliet med en konstant afstandsfaktor, som ikke overstiger 2,2, for at opfylde de statistiske krav.
At this late time of the day, spawning is not induced any longer.
Det bør begrundes, såfremt der anvendes færre end fem koncentrationer.
Appendix 4B
Den højeste testede koncentration bør helst medføre 100 % dødelighed, mens den laveste koncentration helst ikke må medføre nogen observerbar effekt som defineret i punkt 28.
SPAWNING SUBSTRATE FOR FATHEAD MINNOW
En fortest inden den endelige test gør det muligt at vælge et passende koncentrationsinterval.
Two or three combined plastic/ceramic/glass or stainless steel spawning tiles and trays are placed in each of the test chamber (e.g. 80 mm length of grey semi-circular guttering sitting on a lipped tray of 130mm length) (see picture).
Fortesten udføres typisk med 10 embryoner pr. koncentration.
Properly seasoned PVC or ceramic tiles have demonstrated to be appropriate for a spawning substrate (Thorpe et al, 2007).
Følgende instruktioner henviser til udførelse af testen i plader med 24 brønde.
It is recommended that the tiles are abraded to improve adhesion.
Hvis der anvendes andre testkamre (f.eks. små petriskåle), eller hvis der testes flere koncentrationer, skal instruktionerne justeres i overensstemmelse hermed.
The tray should also be screened to prevent fish from access to the fallen eggs unless the egg adhesion efficiency has been demonstrated for the spawning substrate used.
Nærmere oplysninger og visuelle instruktioner vedrørende allokering af koncentrationer i plader med 24 brønde findes i punkt 27 og tillæg 4, figur 1.
The base is designed to contain any eggs that do not adhere to the tile surface and would therefore fall to the bottom of the tank (or those eggs laid directly onto the flat plastic base).
Det er nødvendigt at foretage kontrol af fortyndingsvand, både som negativ kontrol og som intern pladekontrol.
All spawning substrates should be leached for a minimum of 12 hours, in dilution water, before use.
Hvis der observeres mere end et dødt embryo i den interne pladekontrol, afvises pladen, og dermed reduceres antallet af koncentrationer, der bruges til at udlede LC50.
Appendix 5A
Hvis en hel plade afvises, kan det blive vanskeligt at vurdere og udlede observerede virkninger, især hvis den afviste plade er pladen til opløsningsmiddelkontrol eller en plade, hvori de behandlede embryoner også påvirkes.
ASSESSMENT OF SECONDARY SEX CHARACTERISTICS IN FATHEAD MINNOW FOR THE DETECTION OF CERTAIN ENDOCRINE ACTIVE CHEMICALS
I det første tilfælde skal testen gentages.
Overview
I det andet tilfælde kan tabet af en hel behandlingsgruppe på grund af dødelighed i den interne kontrol begrænse evnen til at vurdere virkningerne og bestemme LC50-værdier.
Potentially important characteristics of physical appearance in adult fathead minnows in endocrine disrupter testing include body colour (i.e., light/dark), coloration patterns (i.e., presence or absence of vertical bands), body shape (i.e., shape of head and pectoral region, distension of abdomen), and specialised secondary sex characteristics (i.e., number and size of nuptial tubercles, size of dorsal pad and ovipositor).
Der udføres en positiv kontrol i en fast koncentration på 4 mg/l 3,4-dichloranilin med hvert parti æg, der anvendes til testen.
Nuptial tubercles are located on the head (dorsal pad) of reproductively-active male fathead minnows, and are usually arranged in a bilaterally-symmetric pattern (Jensen et al.
Hvis der anvendes opløsningsmiddel, eksponeres endnu en gruppe på 20 embryoner for opløsningsmidlet på en separat plade med 24 brønde, som dermed fungerer som opløsningsmiddelkontrol.
2001).
For at anse testen for at være acceptabel bør det påvises, at opløsningsmidlet ikke har nogen signifikant virkning på klækningstid og overlevelse og ikke har andre skadelige virkninger på embryonerne (jf. punkt 8c).
Control females and juvenile males and females exhibit no tubercle development (Jensen et al.
Påbegyndelse af eksponering og testens varighed
2001).
Testen påbegyndes så hurtigt som muligt efter befrugtningen af æggene og afsluttes efter 96 timers eksponering.
There can be up to eight individual tubercles around the eyes and between the nares of the males.
Embryonerne bør nedsænkes i testopløsningerne, inden blastocysten begynder at dele sig eller senest inden fasen med 16 celler.
The greatest numbers and largest tubercles are located in two parallel lines immediately below the nares and above the mouth.
For at påbegynde eksponeringen med den mindst mulige forsinkelse udvælges mindst dobbelt så mange æg, som der er behov for, for hver behandlingsgruppe, og overføres til de respektive koncentrationer og kontroller (f.eks. i krystallisationsskåle på 100 ml; æggene bør være helt dækket) senest 90 minutter efter befrugtningen.
In many fish there are groups of tubercles below the lower jaw; those closest to the mouth generally occur as a single pair, while the more ventral set can be comprised of up to four tubercles.
Levedygtige befrugtede æg bør adskilles fra ubefrugtede æg og overføres til plader med 24 brønde forkonditioneret i 24 timer og genopfyldes med 2 ml/brønd frisk fremstillede testopløsninger inden for 180 minutter efter befrugtning.
The actual numbers of tubercles is seldom more than 30 (range, 18-28; Jensen et al.
Ved hjælp af stereomikroskopi (helst ≥ 30-fold forstørrelse) udvælges befrugtede æg, som er ved at dele sig og ikke udviser synlige uregelmæssigheder under delingen (f.eks. asymmetri, vesikeldannelse) eller skader på chorion.
2001).
Vedrørende indsamling af æg og adskillelse, se tillæg 3, fig. 1 og 3, og tillæg 4, fig. 2.
The predominant tubercles (in terms of numbers) are present as a single, relatively round structure, with the height approximately equivalent to the radius.
Fordeling af æg i plader med 24 brønde
Most reproductively-active males also have, at least some, tubercles which are enlarged and pronounced such that they are indistinguishable as individual structures.
Æggene fordeles i brøndplader som følger (jf. også bilag 4, fig. 1)
Some types of endocrine-disrupting chemicals can cause the abnormal occurrence of certain secondary sex characteristics in the opposite sex; for example, androgen receptor agonists, such as 17α-methyltestosterone or 17β-trenbolone, can cause female fathead minnows to develop nuptial tubercles (Smith 1974; Ankley et al.
20 æg på en plade for hver testkoncentration.
2001; 2003), while oestrogen receptor agonists may decrease number or size of nuptial tubercles in males (Miles-Richardson et al.
20 æg som opløsningsmiddelkontrol på en plade (om nødvendigt)
1999; Harries et al.
20 æg som positiv kontrol på en plade
2000).
4 æg i fortyndingsvand som intern pladekontrol på hver af ovennævnte plader
Below is a description of the characterisation of nuptial tubercles in fathead minnows based on procedures used at the U.S. Environmental Protection Agency lab in Duluth, MN.
24 æg i fortyndingsvand som negativ kontrol på en plade.
Specific products and/or equipment can be substituted with comparable materials available.
Apikale observationer foretaget på hvert testet embryon omfatter: koagulering af embryoner, manglende dannelse af somitter, manglende løsnen af halen og manglende hjerteslag (tabel 1).
Viewing is best accomplished using an illuminated magnifying glass or 3X illuminated dissection scope.
Disse observationer anvendes til at bestemme dødeligheden: Et positivt resultat i en af disse observationer betyder, at zebrafiskembryonet er dødt.
View fish dorsally and anterior forward (head toward viewer).
Desuden registreres klækning i behandlings- og kontrolgrupper dagligt fra 48 timer.
Place fish in small Petri dish (e.g. 100 mm in diameter), anterior forward, and ventral down.
Observationer registreres hver 24. time indtil testens slutning.
Focus viewfinder to allow identification of tubercles.
Apikale observationer af akut toksicitet i zebrafiskembryoner 24-96 timer efter befrugtning
Gently and slowly roll fish from side to side to identify tubercle areas.
Eksponeringstid
Count and score tubercles.
24 timer
Repeat the observation on the ventral head surface by placing the fish dorsal anterior forward in the Petri dish.
48 timer
Observations should be completed within 2 min for each fish.
72 timer
Tubercle Counting and Rating
96 timer
Six specific areas have been identified for assessment of tubercle presence and development in adult fathead minnows.
Koagulerede embryoner
A template was developed to map the location and quantity of tubercles present (see end of this appendix).
Manglende dannelse af somitter
The number of tubercles is recorded and their size can be quantitatively ranked as: 0- absence, 1-present, 2-enlarged and 3-pronounced for each organism (Fig.
Manglende løsnen af halen i lateral visning
1).
Manglende hjerteslag
Rate 0 — absence of any tubercle.
Koagulering af embryonet: Koagulerede embryoner er mælkehvide og ser mørke ud under mikroskop (jf. tillæg 5, fig. 1).
Rating 1 — present, is identified as any tubercle having a single point whose height is nearly equivalent to its radius.
Antallet af koagulerede embryoner bestemmes efter 24, 48, 72 og 96 timer.
Rating 2 — enlarged, is identified by tissue resembling an asterisk in appearance, usually having a large radial base with grooves or furrows emerging from the centre.
Manglende dannelse af somitter: Ved 26 ± 1 °C er der efter 24 timer dannet ca. 20 somitter (jf. tillæg 5, figur 2) i et normalt udviklet zebrafiskembryon.
Tubercle height is often more jagged but can be somewhat rounded at times.
Et normalt udviklet embryon viser spontane bevægelser (kontraktioner fra side til side).
Rating 3 — pronounced, is usually quite large and rounded with less definition in structure.
Spontane bevægelser viser dannelse af somitter.
At times these tubercles will run together forming a single mass along an individual or combination of areas (B, C and D, described below).
Manglende somitter registreres efter 24, 48, 72 og 96 timer.
Coloration and design are similar to rating 2 but at times are fairly indiscriminate.
Manglende dannelse af somitter efter 24 timer kan skyldes en generel forsinkelse i udviklingen.
Using this rating system generally will result in overall tubercle scores of < 50 in a normal control male possessing a tubercle count of 18 to 20 (Jensen et al.
Senest efter 48 timer bør dannelsen af somitter være udviklet.
2001).
Hvis ikke betragtes embryonerne som døde.
The actual number of tubercles in some fish may be greater than the template boxes for a particular rating area.
Manglende løsnen af halen: På et normalt udviklet zebrafiskeembryon observeres løsnen af halen (jf. tillæg 5, figur 3) fra blommen efter forlængelse bagud af embryonets legeme.
If this happens, additional rating numbers may be marked within, to the right or to the left of the box.
Manglende løsnen af halen registreres efter 24, 48, 72 og 96 timer.
The template therefore does not need to display symmetry.
Manglende hjerteslag: Ved 26 ± 1 °C er der i et normalt udviklet zebrafiskeembryon et synligt hjerteslag efter 48 timer (jf. tillæg 5, figur 4).
An additional technique for mapping tubercles which are paired or joined vertically along the horizontal plane of the mouth could be done by double-marking two tubercle rating points in a single box.
Der bør udvises særlig omhu ved registrering af dette endepunkt, da uregelmæssige (ujævne) hjerteslag ikke skal registreres som dødelige.
Mapping regions:
Endvidere anses et synligt hjerteslag uden omløb i aorta abdominalis som ikke-dødeligt.
A — Tubercles located around eye.
For at registrere dette endepunkt bør embryoner, der ikke viser noget hjerteslag. observeres i en forstørrelse på mindst 80x i mindst et minut.
Mapped dorsal to ventral around anterior rim of eye.
Manglende hjerteslag registreres efter 48, 72 og 96 timer.
Commonly multiple in mature control males, not present in control females, generally paired (one near each eye) or single in females exposed to androgens.
Klækning af alle behandlings- og kontrolgrupper bør registreres fra 48 timer og fremefter og rapporteres.
B — Tubercles located between nares, (sensory canal pores).
Selv om klækning ikke er et endepunkt, som anvendes til beregning af LC50, sikrer klækning, at embryonet eksponeres uden chorions potentielle barrierefunktion, og dette kan være en hjælp til fortolkning af data.
Normally in pairs for control males at more elevated levels (2- enlarged or 3- pronounced) of development.
Detaljerede beskrivelser af normalen (35) og eksempler på unormal udvikling af zebrafiskeembryoner er vist i tillæg 3 og 5.
Not present in control females with some occurrence and development in females exposed to androgens.
Analysemålinger
C — Tubercles located immediately anterior to nares, parallel to mouth.
Ved begyndelsen og afslutningen af testen måles pH, hårdhedsgrad og ledningsevne i kontrolgruppen/-erne og i den højeste koncentration af testkemikaliet.
Generally enlarged or pronounced in mature control males.
I semistatiske udskiftningssystemer bør pH måles før og efter vandudskiftning.
Present or enlarged in less developed males or androgen-treated females.
Koncentrationen af opløst ilt måles ved testens afslutning i de negative kontroller og den højeste testkoncentration for levedygtige embryoner, som bør opfylde validitetskriterierne for testen (jf. punkt 8f).
D — Tubercles located parallel along mouth line.
Hvis der er bekymring for, at temperaturen varierer for pladerne med 24 brønde, måles temperaturen i tre tilfældigt udvalgte beholdere.
Generally rated developed in control males.
Temperaturen bør helst registreres kontinuerligt under testen eller som minimum dagligt.
Absent in control females but present in androgen-exposed females.
Koncentrationen af testkemikaliet bør som minimum måles ved den højeste og laveste testkoncentration, men helst i alle behandlinger, ved testens begyndelse og slutning.
E — Tubercles located on lower jaw, close to mouth, usually small and commonly in pairs.
Ved semistatiske test (udskiftningstest), hvor testkemikaliets koncentration forventes at holde sig inden for ± 20 % af de nominelle værdier, anbefales det som et minimum, at den højeste og den laveste testkoncentration analyseres, når de lige er fremstillet og umiddelbart inden udskiftning.
Varying in control or treated males, and treated females.
I forbindelse med test, hvor testkemikaliet ikke forventes at holde sig inden for ± 20 % af den nominelle koncentration, skal alle testkoncentrationer analyseres, når de er frisk fremstillede og umiddelbart inden udskiftning.
F — Tubercles located ventral to E. Commonly small and paired.
I tilfælde af en utilstrækkelig analysevolumen kan det være nyttigt at sammenlægge testopløsninger eller anvende surrogatkamre af samme materiale og med samme forhold mellem rumfang og overfladeareal som plader med 24 brønde.
Present in control males and androgen-exposed females.
Det anbefales stærkt, at resultaterne baseres på målte koncentrationer.
Tubercle Template: