natgillin/translations-raw huggingface dataset:
De betingelser, som er beskrevet i denne forsøgsmetode, er imidlertid tilpasset test af arter af tusindbladsfamilien, Myriophyllum spicatum.
This test does not replace other aquatic toxicity tests; it should rather complement them so that a more complete aquatic plant hazard and risk assessment is possible.
Denne art tilhører den tokimbladede familie, Haloragaceae.
The test method has been validated by a ring-test (4).
Myriophyllum spicatum (eurasisk tusindblad) er en undervandsart med rødder, som tåler en lang række forhold og findes i både statisk og strømmende vand.
Details of testing with renewal (semi-static) and without renewal (static) of the test solution are described.
M. spicatum er en flerårig plante, der dør tilbage til rødderne i vintermånederne.
Depending on the objectives of the test and the regulatory requirements, the use of semi-static method is recommended, e.g. for substances that are rapidly lost from solution as a result of volatilisation, adsorption, photodegradation, hydrolysis, precipitation or biodegradation.
Planterne blomstrer normalt frit og sætter frø frit, selv om vegetativ formering fra skud eller stammefragmenter, der løsriver sig naturligt eller efter forstyrrelser, ofte er den primære koloniseringsmetode.
Further guidance is given in (5).
Dyrkning af testorganismen
This test method applies to substances, for which the test method has been validated, (see details in the ring-test report (4)) or to formulations, or known mixtures; if a mixture is tested, its constituents should be as far as possible identified and quantified.
Planter kan fås fra naturlige populationer eller via leverandører af vandplanter.
The sediment-free Myriophyllum spicatum test method complements the water-sediment Myriophyllum spicatum Toxicity Test (6).
I begge tilfælde bør kilden til planterne dokumenteres, og arternes identitet bør kontrolleres.
Before use of the test method for the testing of a mixture intended for a regulatory purpose, it should be considered whether, and if so why, it may provide adequate results for that purpose.
I tvivlstilfælde anbefales det at anvende verificerede laboratoriekulturer fra kendte kilder.
Continuously growing plant cultures of Myriophyllum spicatum (only in modified Andrews' medium, see Appendix 2) are allowed to grow as monocultures in different concentrations of the test chemical over a period of 14 days in a sediment-free test system.
Planter, der har været eksponeret for kemiske forurenende stoffer eller er indsamlet fra lokaliteter, der vides at være kontaminerede, bør ikke benyttes i denne test.
The objective of the test is to quantify chemical-related effects on vegetative growth over this period based on assessments of selected measurement variables.
I regioner, hvor M. spicatum ikke umiddelbart er tilgængelig i vintermånederne, kan det være nødvendigt at vedligeholde stamkulturer på lang sigt i et drivhus eller under laboratorieforhold.
Growth of shoot length, of lateral branches and roots as well as development of fresh and dry weight and increase of whorls are the measurement variables.
Stamkulturer bør vedligeholdes under samme forhold som testbetingelser, selv om bestråling og temperatur kan nedsættes med henblik på at reducere hyppigheden af kulturvedligeholdelse (f.eks. når der ikke er planlagt test af Myriophyllum i en periode).
In addition, account is taken of distinctive qualitative changes in test organisms, such as disfigurement or chlorosis and necrosis indicated by yellowing or white and brown colouring.
Det anbefales at bruge større akvarier og plantekrukker, end der ville blive brugt i test, for at give plads til spredning.
To quantify chemical-related effects, growth in the test solutions is compared with that of the controls and the concentration bringing about a specified x % inhibition of growth is determined and expressed as the ECx; “x” can be any value depending on the regulatory requirements, e.g. EC10, EC20, EC50.
Sammensætningen af sediment og vandmedier bør være den samme som i test, selv om der kan anvendes alternative metoder til sedimentgødning (f.eks. brug af kommercielle gødningsformuleringer med langsom frigivelse).
It should be noted that estimates of EC10 and EC20 values are only reliable and appropriate in tests where coefficients of variation in control plants fall below the effect level being estimated, i.e. coefficients of variation should be < 20 % for robust estimation of an EC20.
Stamplanter bør være synligt fri for forurening med andre organismer, herunder snegle, trådalger, svampe og insekter, f.eks. æg eller larver af Paraponyx stratiotata-møl og larver eller voksne snudebiller, curculionidae, af arten Eubrychius velutus.
Both average specific growth rate (estimated from assessments of main shoot length and three additional measurement variables) and yield (estimated from the increase in main shoot length and three additional measurement variables) of untreated and treated plants should be determined.
Det kan være nødvendigt at skylle plantemateriale i ferskvand for at fjerne synlig forurening.
Specific growth rate (r) and yield (y) are subsequently used to determine the ErCx (e.g. ErC10, ErC20, ErC50) and EyCx (e.g. EyC10, EyC20, EyC50), respectively.
Desuden bør der gøres en indsats for at minimere udviklingen af kontaminering med encellede alger og bakterier, om end det ikke er nødvendigt med fuldstændig sterilt plantemateriale.
In addition, the lowest observed effect concentration (LOEC) and the no observed effect concentration (NOEC) may be statistically determined.
Stamkulturerne bør overvåges og om nødvendigt transplanteres for at undgå kontaminering med alger og bakterier.
An analytical method, with adequate sensitivity for quantification of the test chemical in the test medium, should be available.
Stamkulturer kan med fordel beluftes, såfremt kontaminering med alger eller bakterier bliver et problem.
Information on the test chemical which may be useful in establishing the test conditions includes the structural formula, purity and impurities, water solubility, stability in water and light, acid dissociation constant (pKa), partition coefficient octanol-water (Kow), vapour pressure and biodegradability.
I alle tilfælde dyrkes/akklimatiseres planter under forhold, der ligner, men ikke nødvendigvis er identiske med de forhold, der anvendes i testen i en passende periode (dvs. > 2 uger), før de anvendes i en test.
Water solubility and vapour pressure can be used to calculate Henry's Law constant, which will indicate if significant losses of the test chemical during the test period are likely.
Blomstrende stamkulturer bør ikke anvendes i en test, da den vegetative vækst generelt falder under og efter blomstring.
This will help indicate whether particular steps to control such losses should be taken.
Det anbefales at bruge følgende formulerede sediment, som er baseret på det syntetiske sediment, der anvendes i kapitel C.28 i dette bilag (8), i denne test.
Where information on the solubility and stability of the test chemical are uncertain, it is recommended that these be assessed under the conditions of the test, i.e. growth medium, temperature, lighting regime to be used in the test.
Sedimentet fremstilles som beskrevet i TM C.28, idet der dog tilsættes nedenstående næringsstoffer:
The pH control of the test medium is particularly important, e.g. when testing metals or substances which are hydrolytically unstable.
4-5 % tørv (tørvægt, i henhold til 2 ± 0,5 % organisk kulstof) så tæt på pH 5,5 til 6,0 som muligt.
Further guidance for testing chemicals with physical-chemical properties that make them difficult to test is provided in a OECD Guidance Document (5).
Det er vigtigt at bruge tørv i form af pulver, fint formalet (helst partikelstørrelse på < 1 mm) og kun lufttørret.
For the test to be valid, the doubling time of main shoot length in the control must be less than 14 days.
20 % (tørvægt) kaolinholdigt ler, helst med over 30 % kaolinit.
Using the media and test conditions described in this test method, this criterion can be attained using a static or semi-static test regime.
75-76 % (tørvægt) kvartssand (overvejende finsand med over 50 % af en partikelstørrelse på 50 til 200 μm).
The mean coefficient of variation for yield based on measurements of shoot fresh weight (i.e. from test initiation to test termination) and the additional measurement variables (see paragraph 37) in the control cultures do not exceed 35 % between replicates.
Et vandigt næringsmedie tilsættes således, at det endelige sedimentparti indeholder 200 mg/kg tørt sediment af både ammoniumchlorid og natriumphosphat, og vandindholdet i den færdige blanding ligger på 30-50 %.
More than 50 % of the replicates of the control group are kept sterile over the exposure period of 14 days, which means visibly free of contamination by other organisms such as algae, fungi and bacteria (clear solution).
Kemisk rent calciumcarbonat (CaCO3) tilsættes for at få en pH-værdi i den færdige sedimentblanding på 7,0 ± 0,5.
Note: Guidance on how to assess sterility is provided in the ring-test report (4).
Oprindelsen af tørv, kaolinler og sand bør være kendt og dokumenteret.
REFERENCE CHEMICAL
Hvis oprindelsen er ukendt eller giver anledning til bekymring, bør det kontrolleres, at sedimentkomponenterne ikke indeholder kemisk forurening (f.eks. tungmetaller, organiske chlorforbindelser, organiske phosphorforbindelser osv.).
Reference chemical(s), such as 3,5-dichlorophenol used in the ring test (4), may be tested as a mean of checking the test procedure; from the ring test data, the mean EC50-values of 3,5-DCP for the different response variables (see paragraphs 37-41 of this test method) are between 3,2 mg/l and 6,9 mg/l (see ring test report for details about confidence interval for these values).
De tørre bestanddele i sedimentet skal blandes homogent, inden den vandige næringsopløsning blandes grundigt i sedimentet.
It is advisable to test a reference chemical at least twice a year or, where testing is carried out at a lower frequency, in parallel to the determination of the toxicity of a test chemical.
Det fugtige sediment skal fremstilles mindst to dage før brug, så tørven kan gennemvædes, og for at forhindre, at hydrofobe tørvepartikler flyder op til overfladen, når sedimentet dækkes med medie.
All equipment in contact with the test media should be made of glass or other chemically inert material.
Inden brug kan det fugtige sediment opbevares i mørke.
Glassware used for culturing and testing purposes should be cleaned of chemical contaminants that might leach into the test medium and should be sterile.
Ved testen overføres sedimentet til beholdere af en passende størrelse såsom plantekrukker med en diameter, som passer ind i glasbeholderne (sedimentets overflade skal dække ca. 70 % eller mere af beholderens overflade).
The test vessels should be long enough for the shoot in the control vessels to grow in the water phase without reaching the surface of the test medium at the end of the test.
Såfremt beholderen har huller i bunden, vil et stykke filtrerpapir i bunden af beholderen hjælpe med at holde sedimentet i beholderen.
Thick-walled borosilicate glass test tubes without lip, inner diameter approximately 20 mm, length approximately 250 mm, with aluminium caps are recommended.
Krukkerne fyldes med sedimentet således, at sedimentets overflade er jævn, inden det dækkes med et tyndt lag (~ 2 til 3 mm) af et inert materiale som f.eks. sand eller fint havegrus (eller knust koral) for at holde sedimentet på plads.
Since the modified Andrews' medium contains sucrose (which stimulates the growth of fungi and bacteria), the test solutions have to be prepared under sterile conditions.
Smart and Barko-medium (12) anbefales til dyrkning og test af Myriophyllum spicatum.
All liquids as well as equipment are sterilised before use.
Dette medie fremstilles som beskrevet i tillæg 1.
Sterilisation is carried out via heated air treatment (210 °C) for 4 hours or autoclaving for 20 minutes at 121 °C.
Mediets pH-værdi (vandfase) ved testens påbegyndelse skal være mellem 7,5 og 8,0 for optimal plantevækst.
In addition, all flasks, dishes, bowls etc. and other equipment undergo flame treatment at a sterile workbench just prior to use.
Testdesign
The cultures and test vessels should not be kept together.
Testen bør omfatte mindst seks replikate testbeholdere til den ubehandlede kontrolgruppe og mindst fire replikate testbeholdere for hver af mindst fem koncentrationer.
This is best achieved using separate environmental growth chambers, incubators, or rooms.
Hver testbeholder svarer til et replikat med tre skud.
Illumination and temperature should be controllable and maintained at a constant level.
Testdesign A: et skud pr. krukke og tre krukker pr. beholder.
Myriophyllum spicatum — a submersed aquatic dicotyledon — is a species of the water milfoils family.
Testdesign B: tre skud pr. krukke og en krukke pr. beholder.
Between June and August, inconspicuous pink-white flowers protrude above the water surface.
Alternative testdesign af et skud pr. krukke pr. testbeholder kan accepteres, forudsat at replikationen justeres som krævet for at opnå de krævede validitetskriterier.
The plants are rooted in the ground by a system of robust rhizomes and can be found in the entire northern hemisphere in eutrophic, however non-polluted and more calciferous still waters with muddy substrate.
De enkelte testbeholdere randomiseres til behandlingsgrupperne.
Myriophyllum spicatum prefers fresh water, but is found in brackish water as well.
Testbeholdernes placering i testområdet skal være randomiseret for at minimere indflydelsen af rumlige forskelle i lysintensitet eller temperatur.
For the sediment-free toxicity test, sterile plants are required.
Koncentrationer af testkemikalie og kontrolgrupper
If the testing laboratory does not have regular cultures of Myriophyllum spicatum, sterile plant material may be obtained from another laboratory or (unsterile) plant material might be taken from the field or provided by a commercial supplier; if plants come from the field a taxonomic verification of the species should be envisaged.
Koncentrationer bør normalt følge en kvotientrække med en foretrukken kvotient mellem testkoncentrationerne på højst 3,2.
If collected from the field or provided by a commercial supplier, plants should be sterilised (1) and maintained in culture in the same medium as used for testing for a minimum of eight weeks prior to use.
Det vil lette valget af passende testkemikaliekoncentrationer, hvis man på forhånd kender til testkemikaliets toksicitet fra en test til bestemmelse af dosisinterval.
Field sites used for collecting starting cultures have to be free of obvious sources of contamination.
Ved bestemmelse af en ECx-værdi skal denne ligge i det område, testkoncentrationerne dækker, for at den skal blive bestemt med et tilstrækkeligt konfidensniveau.
Great care should be taken to ensure that the correct species is obtained when collecting Myriophyllum spicatum from the field, especially in regions where it can hybridise with other Myriophyllum species.
Brug af flere testkoncentrationer vil forbedre konfidensintervallet omkring den resulterende ECx-værdi.
If obtained from another laboratory they should be similarly maintained for a minimum of three weeks.
For at bestemme LOEC/NOEC (valgfrit endepunkt) skal den laveste testkoncentration være tilstrækkeligt lav til, at væksten ikke er væsentligt forskellig fra væksten i kontrolplanterne.
The source of plant material and the species used for testing should always be reported.
Desuden skal den højeste testkoncentration være så høj, at væksten er væsentligt mindre end i kontrolprøven.
The quality and uniformity of the plants used for the test will have a significant influence on the outcome of the test and should therefore be selected with care.
Brug af flere replikater vil øge den statistiske power af nuleffektkoncentrationen/ANOVA-designet.
Young, rapidly growing plants without visible lesions or discoloration (chlorosis) should be used.
I de tilfælde, hvor en indledende test viser, at testkemikaliet er uden bivirkninger i koncentrationer på op til 100 mg/l, dog ikke over kemikaliets opløselighed i testmediet eller i tilfælde af en formulering op til grænsen af dens dispergeringsevne, kan der udføres en grænsetest for at gøre det lettere at sammenholde responsen i en kontrolgruppe med responsen i en behandlingsgruppe (100 mg/l eller en koncentration lig med opløselighedsgrænsen eller 1000 mg/kg tørt sediment).
Details about preparation of the test organism are given in Appendix 4.
Denne test bør følge de generelle principper for en standardtest med fast dosis med den undtagelse, at det tilrådes at øge det mindste antal replikater til seks testbeholdere pr. kontrol og koncentration.
Cultivation
Testopløsninger fremstilles sædvanligvis ved fortynding af en stamopløsning fremstillet ved opløsning eller dispergering af testkemikaliet i Smart and Barko-medium ved hjælp af demineraliseret (dvs. destilleret eller deioniseret) vand (jf. tillæg 1).
To reduce the frequency of culture maintenance (e.g. when no Myriophyllum tests are planned for a period), cultures can be held under reduced illumination and temperature (50 μE m–2 s–1, 20 ± 2 °C).
Den højeste testkoncentration bør normalt ikke overstige testkemikaliets vandopløselighed eller, i tilfælde af formuleringer, dispergerbarheden under testbetingelserne.
Details of culturing are given in Appendix 3.
For testkemikalier med lav vandopløselighed kan det være nødvendigt at fremstille en koncentreret stamopløsning eller -dispersion af kemikaliet ved hjælp af et organisk opløsnings- eller dispergeringsmiddel for at lette tilsætning af nøjagtige mængder testkemikalie til testmediet og medvirke til, at det dispergeres eller opløses.
At least 14 to 21 days before testing, sufficient test organisms are transferred aseptically into fresh sterile medium and cultured for 14 to 21 days under the conditions of the test as a pre culture.
Brug af sådanne opløsnings- eller dispergeringsmidler bør så vidt muligt søges undgået.
Details for preparation of a pre-culture are given in Appendix 4.
Som eksempler på almindeligt anvendte opløsningsmidler, der er uden fytotoksisk virkning i koncentrationer på op til 100 μl/l, kan nævnes acetone og dimethylformamid.
Only one nutrient medium is recommended for Myriophyllum spicatum in a sediment-free test system, as described in Appendix 2.
Hvis der anvendes et opløsnings- eller dispergeringsmiddel, bør dets slutkoncentration rapporteres og holdes på et minimum (≤ 100 μl/l).
A modification of the Andrews' medium is recommended for culturing and testing with Myriophyllum spicatum as described in (1).
Under disse omstændigheder bør alle behandlinger og (opløsningsmiddel)kontroller indeholde den samme koncentration af opløsningsmiddel eller dispergeringsmiddel.
From five separately prepared nutrient stock solutions with addition of 3 % sucrose the modified Andrews' medium will be arranged.
Ubehandlede kontrolreplikater, som ikke indeholder et opløsnings- eller dispergeringsmiddel, indarbejdes også i testdesignet.
Details about preparation of the medium are given in Appendix 2.
Nærmere anvisninger vedrørende brug af dispergeringsmidler kan findes i OECD vejledning (11).
A tenfold concentrated, modified Andrews' medium is needed for obtaining the test solutions (by dilution as appropriate).
Forsøgsmetoden varierer i forhold til anvendelsen af testkemikaliet (dvs. via vand eller sediment).
The composition of this medium is given in Appendix 2.
Testkemikaliets sandsynlige adfærd i et vandsedimentsystem bør overvejes for at kunne vælge den anvendte eksponering i testen (dvs. statisk eller statisk fornyelse, spiket vand eller spiket sediment).
Test solutions are usually prepared by dilution of a stock solution.
Spiket sediment kan i nogle tilfælde være at foretrække for kemikalier, der vil give en væsentlig fordeling til sediment.
Stock solutions of the test chemical are normally prepared by dissolving the chemical in demineralised (i.e. distilled or deionised) water.
Etableringsfase
The addition of the nutrients will be achieved by using the tenfold concentrated, modified Andrews' medium.
Sunde skudspidser, dvs. uden sideskud, skæres af kulturplanterne for at få en skudlængde på 6 cm (± 1 cm).
The stock solutions of the test chemical can be sterilised by autoclave at 121 °C for 20 minutes or by sterile filtration, provided that the sterilisation technique used does not denaturise the test chemical.
For testdesign A (et skud pr. krukke og tre krukker pr. beholder) plantes enkelte skudspidser i hver krukke.
Test solutions can also be prepared in sterile demineralised water or medium, under sterile conditions.
For testdesign B (tre skud pr. krukke og en krukke pr. beholder) plantes fire til fem skudspidser i hver krukke med sediment.
The thermo-stability and the adsorption on different surfaces should the taken into account in the selection of the sterilisation procedure of the stock solutions of the test chemical.
I begge tilfælde bør overskydende krukker tilplantes for at give mulighed for at udvælge ensartede planter ved testens start og for at have ekstra planter til rådighed, som kan anvendes til at undersøge rodvæksten umiddelbart før behandling og til overskydende planter, der høstes til skudbiomasse og længdemålinger på dag 0.
Because of that, it is recommended that the stock solutions be prepared under sterile conditions, i.e. using sterile material for dissolving the test chemical under sterile conditions (e.g. flame sterilisation, laminar-flow hoods, etc.) into sterile water.
Skud isættes således, at ca. tre cm, der dækker mindst to knuder, er under sedimentets overflade.
This technique of preparation of sterile stock solutions is valid for both substances and mixtures.
Krukkerne overføres derefter til testbeholdere under samme miljømæssige betingelser, som gælder for eksponeringsfasen, og vedligeholdes i syv dage i Smart and Barko-medium for at fremkalde rodudvikling.
The highest tested concentration of the test chemical should normally not exceed its water solubility under the test conditions.
Herefter bør flere planter i overskydende krukker fjernes med henblik på undersøgelse af rodvæksten.
For test chemicals of low water solubility it may be necessary to prepare a concentrated stock solution or dispersion of the chemical using an organic solvent or dispersant in order to facilitate the addition of accurate quantities of the test chemical to the test medium and aid in its dispersion and dissolution.
Hvis rodvæksten ikke er synlig (dvs. rodspidsen ikke er synlig), bør etableringsfasen forlænges, indtil rodvæksten er synlig.
Every effort should be made to avoid the use of such materials.
Dette trin anbefales for at sikre, at planterne vokser aktivt, når testen indledes.
There should be no phytotoxicity resulting from the use of auxiliary solvents or dispersants.
Udvælgelse af ensartet plantemateriale
For example, commonly used solvents which do not cause phytotoxicity at concentrations up to 100 μl/l, include acetone and dimethylformamide.
For testdesign A (et skud pr. krukke og tre krukker pr. beholder) udvælges ensartede krukker, inden testen indledes.
If a solvent or dispersant is used, its final concentration should be reported and kept to a minimum (≤ 100 μl/l), and all treatments and controls should contain the same concentration of solvent or dispersant.
For testdesign B (tre skud pr. krukke og en krukke pr. beholder) fjernes overskydende planter, så der er tre planter tilbage af ensartet størrelse og udseende.
Further guidance on the use of dispersants is given in (5).
Eksponering via vandfasen
Test and control groups
Krukker, der er udvalgt for deres ensartethed, anbringes i testbeholderne som krævet med henblik på test.
Prior knowledge of the toxicity of the test chemical to Myriophyllum spicatum from a range-finding test will help in selecting suitable test concentrations.
Smart and Barko-medium tilsættes derefter testbeholderne.
In the definitive toxicity test, there should normally be five (like in the Lemna growth inhibition test, Chapter C.26 of this Annex) to seven test concentrations arranged in a geometric series; they should be chosen in order that the NOEC and EC50 values are bracketed by the concentration range (see below).