natgillin/translations-raw huggingface dataset:
I infektionens sene stadier iagttages der frie sporangia i lumen i fordøjelseskanalen.
antigen retrieval shall be done by boiling sections in 0,1 M citrate buffer pH 6,0 for 2 × 6 minutes followed by blocking with 5 % non-fat dry milk and 2 % goat serum in 50 mM TBS (TBS; Tris/HCl 50 mM, NaCl 150 mM, pH 7,6) for 20 minutes;
Farvningen af granula kan gå fra dybt orange til dybrød.
sections shall then be incubated overnight with primary antibody (monospecific rabbit antibody against ISAV nucleoprotein) diluted in TBS with 1 % non-fat dry milk, followed by three washes in TBS with 0,1 % Tween 20;
Molekylære teknikker
for detection of bound antibodies, sections shall be incubated with Alkaline phosphatase-conjugated antibodies to rabbit IgG for 60 minutes.
Der kan anvendes DNA-ekstraktionskit, der er kommercielt tilgængelige og normalt giver DNA af høj kvalitet, som er egnet til anvendelse med de PCR-protokoller, der er beskrevet i punkt I.3.2.
Following a final wash, Fast Red (1 mg ml– 1) and Naphthol AS-MX phosphate (0,2 mg ml– 1) with 1 mM Levamisole in 0,1 M TBS (pH 8,2) shall be added to develop for 20 minutes.
Polymerasekædereaktion (PCR)
Sections shall then be washed in tap water before counterstaining with Harris haematoxylin and mounted in aqueous mounting medium.
Der er udarbejdet og offentliggjort en række PCR-protokoller.
ISAV positive and ISAV negative tissue sections shall be included as controls in every setup.
Der skal anvendes PCR-primere, der er målrettet ITS1-regionen (ITS = internal transcribed spacer), da de er i stand til kun at amplificere M. refringens.
Interpretation of the result of IHC
PCR skal foretages i en mængde på 50 μl.
The interpretation of the result of the IHC test shall be as set out in points (a) and (b):
PCR-blandinger skal indeholde buffer (500 mM KCl, 100 mM Tris/HCl [pH 9,0 ved 25 °C] og 1 % Triton® X-100), 2,5 mM MgCl2, 0,2 mM dNTP mix, 1 μM forward og reverse primere, 0,02 enheder μl– 1 Taq DNA-polymerase og 10-100 ng ekstraheret DNA.
control sections shall be considered as positive, when it is observed that the control sections have clearly visible red-coloured (reddish) cytoplasmic and intranuclear staining of endothelia cells in blood vessels of endocardium.
Efter denaturering af DNA ved 94 °C i fem minutter, skal der køres 30 cyklusser som følger: denaturering ved 94 °C i ét minut, hybridisering ved 55 °C i ét minut og elongering ved 72 °C i ét minut pr. kilobasepar.
A test sample section shall only be regarded as positive if such clear, intranuclear red staining of endothelial cells is found;
Der foretages en endelig elongering i 10 minutter ved 72 °C.
control sections shall be considered as negative if they don't have any significant colour reaction.
Til påvisning af M. refringens foretages der PCR med primere, der er målrettet ITS1-regionen (5′-CCG-CAC-ACG-TTC-TTC-ACT-CC-3′ og 5′-CTC-GCG-AGT-TTC-GAC-AGA-CG-3′).
Since the intranuclear localisation is particular to the orthomyxovirus nucleoprotein during a stage of virus replication but concurrent cytoplasmic staining is often dominant, cytoplasmic and other staining patterns without intranuclear localisation shall be considered as nonspecific or inconclusive.
Positive kontroller skal bestå af genomisk DNA fra en stærkt inficeret vært eller plasmid-DNA inklusive målregionen.
The strongest positive staining reactions are usually obtained in endothelial cells of heart and kidney.
Negative kontroller skal bestå af genomisk DNA fra ikkeinficerede værter og PCR-reagenser uden mål-DNA.
Endothelial staining reactions within very extensive haemorrhagic lesions may be slight or absent, possibly because of lysis of infected endothelial cells.
Et positivt resultat er positiv PCR-amplificering i den forventede størrelse (412 bp), idet alle negative kontroller skal være negative, og alle positive kontroller positive.
DETAILED DIAGNOSTIC METHODS AND PROCEDURES FOR THE SURVEILLANCE AND CONFIRMATION OF INFECTION WITH MARTEILIA REFRINGENS
In-situ-hybridisering (ISH)
I. Detailed diagnostic methods and procedures for the diagnosis of infection with Marteilia refringens
Der er udarbejdet og offentliggjort række ISH-protokoller.
When sampling and laboratory examination are carried out for the purpose of obtaining or maintaining a health status with regard to infection with Marteilia refringens as set out in Section I of Part 4 of Annex I or to confirm or rule out the presence of that listed disease in accordance with Article 57(b) of Directive 2006/88/EC, using the diagnostic methods set out in Section II of Part 4 of Annex I, the detailed diagnostic methods and procedures set out in points I.1, I.2 and I.3 of this Part shall apply.
Der skal anvendes den probe, der er målrettet rRNA-genkompleksets SSU, fordi det er valideret i forhold til histologi.
Sampling procedure
Vævssnit, som omfatter gæller og fordøjelseskirtel, fikseres i mindst 24 timer i Davidsons fikseringsmiddel efterfulgt af normal behandling for histologi med paraffin.
Gaping or freshly dead individual molluscs shall be sampled by priority, to increase the chances of finding infected animals.
Snit på 5 μm skæres og anbringes på aminoalkylsilan-belagte objektglas, som derefter opvarmes natten over i en ovn ved 40 °C.
Once sampled, oysters or mussels shall be maintained at 4 °C or on refrigerated ice for no more than 24 hours if samples include gaping molluscs and no more than 72 hours if not, in a plastic bag including a label with details related to the nature and the origin of the oysters or mussels.
Voksen fjernes ved at nedsænke snittene i xylen i 10 minutter.
Gaping or freshly dead molluscs shall be maintained separately from other molluscs.
Dette trin skal gentages én gang, og derefter skal opløsningsmidlet fjernes ved nedsænkning i to på hinanden følgende bade med absolut ethanol af 10 minutters varighed hver.
A 3 to 5 mm thick section of tissues including gills and heart tissue shall be used for the diagnostic of Marteilia refringens by histology.
Derefter dehydreres snittene ved nedsænkning i ethanol i stigende koncentrationer.
A piece of digestive gland shall be used for some tests, including imprints and polymerase chain reaction (PCR).
Snittene behandles med proteinase K (100 μg ml– 1) i TE-buffer (Tris [50 mM], EDTA [10 mM]) ved 37 °C i 30 minutter.
Microscopic techniques
Objektglassene dehydreres ved nedsænkning i ethanol i stigende koncentrationer og lufttørres derefter.
Cytology (imprint cytology)
Snittene inkuberes med 100 μl hybridiseringsbuffer (4 × SSC [standardsaltcitrat], 50 % formamid, 1 × Denhardts opløsning, 250 μg ml–1 gær-tRNA, 10 % dextransulphat) indeholdende 10 ng (1 μl af de PCR-reaktanter, der er præpareret som beskrevet i punkt I.3.2 ved hjælp af primerne CCG-GTG-CCA-GGT-ATA-TCT-CG og TTC-GGG-TGG-TCT-TGA-AAG-GC) af den digoxigenin-mærkede probe.
After drying digestive gland tissues on absorbent paper, several imprints shall be made on a glass slide.
Snittene dækkes med in-situ-dækglas af plastik og anbringes på en varmeblok ved 95 °C i fem minutter.
Slides shall be air-dried, fixed in methanol or in absolute ethanol and stained using a commercially available blood-staining kit such as Diff-Quik®/Hemacolor®, in accordance with the manufacturer's instructions.
Objektglassene afkøles derefter på is i ét minut inden hybridisering natten over ved 42 °C i et fugtkammer.
After rinsing in tap water and drying, the slides shall be mounted with a cover-slip using an appropriate synthetic resin.
Snittene vaskes 2 × 5 minutter i 2 × SSC ved rumtemperatur og 1 × 10 minutter i 0,4 × SSC ved 42 °C.
The slides shall be observed first at × 200 magnification and then under oil immersion at × 1000 magnification.
Påvisningen skal udføres i henhold til fabrikantens anvisninger.
A positive result shall be the observation of cells ranging in size up to between 30 to 40 μm.
Objektglassene skylles derefter i sterilt destilleret vand (dH2O).
The cytoplasm stains basophilic, whereas the nucleus stains eosinophilic.
Snittene kontrastfarves med Bismarck Brown Yellow og skylles i dH2O, og dækglassene placeres ved hjælp af et vandigt monteringsmedium.
Pale halos around large, strongly stained (refringent) granules and, in larger cells, cell within cell arrangements are observed.
Positive og negative kontroller skal være snit fra henholdsvis kendte inficerede og kendte ikkeinficerede værter.
The technique is not parasite species specific.
Et positivt resultat vises ved sort-lilla mærkning af M. refringens-celler i kendte målvæv, idet alle negative kontroller skal være negative, og alle positive kontroller positive.
Sections of tissue that include gills, digestive gland, mantle, and gonad shall be fixed for at least 24 hours in Davidson's fixative followed by normal processing for paraffin histology and staining, for example with haematoxylin and eosin.
Sekventering
Observations shall be made at increasing magnifications up to × 1000.
Sekventering foretages som et af de sidste trin ved diagnosebekræftelse.
A positive result shall be the observation of cells ranging in size from 4 up to 40 μm.
Målregioner er SSU rDNA og ITS1.
Early stages consist of multinucleate, spheric to elongated cells.
Detaljerede diagnosemetoder og -procedurer for overvågning og bekræftelse af infektion med Marteilia refringens
These are mainly found in the epithelium of oesophagus and stomach and sometimes of labial palps.
I forbindelse med overvågningsprogrammer og for at bekræfte forekomst af infektion med Marteilia refringens eller for at udelukke mistanke om denne listeopførte sygdom i overensstemmelse med kravene i bilag I, del 4, afsnit II, skal de diagnosemetoder og tilhørende procedurer, der skal anvendes, følge de retningslinjer, der er fastsat i tabel 4.1.
Sporulation involves divisions of cells within cells and takes place in the digestive gland tubules and ducts.
Tabel 4.1
Refringent granules appear in the course of sporulation, but are not observed in early stages.
Retningslinjer for anvendelse af diagnosemetoder for overvågningsprogrammerne og til bekræftelse eller udelukkelse af infektion med Marteilia refringens
In late phases of infection, sporangia are observed free in the lumen of the digestive tract.
Metode
The granules can range from deep orange to deep red.
Målrettet overvågning
Molecular techniques
Sandsynlig diagnose
DNA extraction kits, which are available commercially and usually produce high quality DNA suitable for use with the PCR protocols as described in point I.3.2, may be used.
Bekræftende diagnose
Polymerase chain reaction (PCR)
Aftryk af fordøjelseskirtel
Several PCR protocols have been developed and published.
X eller
PCR primers that target the internal transcribed spacer (ITS1) region shall be used as they are able to amplify only M. refringens.
Histopatologi
PCR shall be carried out in a 50 μl volume.
In situ-hybridisering
PCR mixtures shall contain buffer (500 mM KCl, 100 mM Tris/HCl [pH 9,0 at 25 °C] and 1 % Triton® X-100), 2,5 mM MgCl2, 0,2 mM dNTP mix, 1 μM forward and reverse primers, 0,02 units μl– 1 Taq DNA polymerase, and 10 to100 ng of extracted DNA.
X og
After denaturation of DNA at 94 °C for five minutes, 30 cycles shall be run as follows: denaturation at 94 °C for one minute, annealing at 55 °C for one minute, and elongation at 72 °C for one minute per kilo-base pair.
DETALJEREDE DIAGNOSEMETODER OG -PROCEDURER FOR OVERVÅGNING OG BEKRÆFTELSE AF INFEKTION MED BONAMIA OSTREAE
A final elongation step of 10 minutes at 72 °C shall be performed.
I. Procedurer for diagnose af infektion med Bonamia ostreae
For the detection of M. refringens, PCR shall be performed with primers that target the ITS1 region (5′-CCG-CAC-ACG-TTC-TTC-ACT-CC-3′ and 5′-CTC-GCG-AGT-TTC-GAC-AGA-CG-3′).
Hvis der foretages prøveudtagning og laboratorieundersøgelse for at opnå eller opretholde en bestemt sundhedsstatus med hensyn til Bonamia ostreae, jf. bilag I, del 5, afsnit I, eller for at bekræfte eller udelukke forekomst af denne listeopførte sygdom i overensstemmelse med artikel 57, litra b), i direktiv 2006/88/EF ved hjælp af diagnosemetoderne i bilag I, del 5, afsnit II, anvendes de detaljerede diagnosemetoder og -procedurer i punkt I.1, I.2 og I.3 nedenfor.
Positive controls shall consist of genomic DNA from a highly infected host or plasmidic DNA including the target region.
Prøveudtagningsprocedure
Negative controls shall consist of genomic DNA from non-infected hosts and PCR reactives without target DNA.
De indsamlede østers opbevares ved 4 °C eller på køleis i højst 24 timer, hvis der er bløddyr med åbne skaller, og 72 timer, hvis dette ikke er tilfældet; de skal opbevares i en plastpose med en etiket med oplysninger om østernes art og oprindelse.
A positive result shall be positive PCR amplification at the expected size (412 bp), with all negative controls being negative and all positive controls being positive.
Et 3-5 mm tykt vævssnit, der omfatter væv fra hjerte og gæller, skal anvendes til diagnosticering af Bonamia ostreae ved hjælp af histologi.
In-situ hybridisation (ISH)
Efter tørring af væv fra gæller eller hjerte på absorberende papir skal der tages en række aftryk på et objektglas.
Several ISH protocols have been developed and published.
Objektglassene skal lufttørres, fikseres i methanol eller i absolut ethanol og farves med et kommercielt tilgængeligt kit til farvning af blod (f.eks. Diff-Quick®/Hemacolor®) i henhold til fabrikantens anvisninger.
Probe that targets the SSU of the rRNA gene complex shall be used because it has been validated against histology.
Dækglassene observeres først ved 200 × forstørrelse og derefter i immersionsolie ved 1000 × forstørrelse.
Sections of tissue that include gills, digestive gland, shall be fixed for at least 24 hours in Davidson's fixative followed by normal processing for paraffin histology.
Et positiv resultat er forekomst af små sfæriske eller ovoide organismer (2-5 μm brede) inden i hæmocytterne.
Sections of 5 μm shall be cut and placed on aminoalkylsilane-coated slides, which shall then be baked overnight in an oven at 40 °C.
Parasitten kan dog også forekomme ekstracellulært.
The sections shall be dewaxed by immersing in xylene for 10 minutes.
Disse organismer har et basofilt cytoplasma og en eosinofil cellekerne (farverne kan variere afhængigt af den anvendte farve), og fordi de spredes ud på objektglasset, kan de virke bredere på aftryk end ved histologisk undersøgelse.
This step shall be repeated once and then the solvent shall be eliminated by immersion in two successive absolute ethanol baths for 10 minutes each.
Der kan iagttages multinukleære celler.
The sections shall then be dehydrated by immersion in a graded ethanol series.
Vævssnit, som omfatter gæller og fordøjelseskirtel, fikseres i mindst 24 timer i Davidsons fikseringsmiddel efterfulgt af normal behandling for histologi med paraffin og farvning, f.eks. med hæmatoxylin og eosin.
The sections shall be treated with proteinase K (100 μg ml– 1) in TE buffer (Tris [50 mM], EDTA [10 mM]), at 37 °C for 30 minutes.
Et positivt resultat er forekomst af parasitter som meget små celler, der er 2-5 μm brede, inden i hæmocytterne eller frie i bindevævet eller sinus i gæller, tarm og kappeepitel, hvilket ofte kædes sammen med en intensiv inflammatorisk reaktion.
Slides shall be dehydrated by immersion in a graded ethanol series and then air dried.
For at undgå enhver tvivl skal parasitten iagttages inden i hæmocytten med henblik på en positiv diagnose.
Sections shall be incubated with 100 μl of hybridisation buffer (4 × SSC [standard saline citrate], 50 % formamide, 1 × Denhardt's solution, 250 μg ml– 1 yeast tRNA, 10 % dextran sulphate) containing 10 ng (1 μl of the PCR reactants prepared as described in point I.3.2 using primers CCG-GTG-CCA-GGT-ATA-TCT-CG and TTC-GGG-TGG-TCT-TGA-AAG-GC) of the digoxigenin-labelled probe.
Der kan anvendes DNA-ekstraktionskit, der er kommercielt tilgængelige og normalt giver DNA af høj kvalitet, som er egnet til anvendelse med de PCR-protokoller, der er beskrevet nedenfor.
Sections shall be covered with in-situ plastic cover-slips and placed on a heating block at 95 °C for five minutes.
Der kan anvendes to PCR-protokoller, der er målrettet den lille underenhed (SSU) af rDNA:
Slides shall then be cooled on ice for one minute before overnight hybridisation at 42 °C in a humid chamber.
PCR-blandinger indeholder buffer (500 mM KCl, 100 mM Tris/HCl [pH 9,0 ved 25 °C] og 1 % Triton® X-100), 2,5 mM MgCl2, 0,2 mM dNTP mix, 1 μM forward og reverse primere, 0,02 enheder μl–1 Taq DNA-polymerase og 0,2 ng μl–1 af DNA-templatet i en samlet mængde på 50 μl.
Sections shall be washed twice for five minutes in 2 × SSC at room temperature, and once for 10 minutes in 0,4 × SSC at 42 °C.
Prøverne denatureres i en thermocykler i fem minutter ved 94 °C efterfulgt af 30 cyklusser (94 °C i ét minut, 55 °C i et minut, 72 °C i ét minut) med en afsluttende elongering i 10 minutter ved 72 °C.
The detection steps shall be performed according to the manufacturer's instructions.
Et positivt resultat er positiv PCR-amplificering i den forventede størrelse (dvs. 300 bp), idet alle negative kontroller skal være negative, og alle positive kontroller positive.
The slides shall then be rinsed in sterile distilled water (dH2O).
Den anden PCR-protokol er en SYBR® Green realtids-PCR-metode.
The sections shall be counter-stained with Bismarck Brown Yellow, rinsed in dH2O, and cover-slips shall be applied using an aqueous mounting medium.
Den gør det muligt at påvise B. ostreae (beskrevet nedenfor) og kan kombineres med en SYBR® Green realtids-PCR-analyse, som gør det muligt at påvise B. exitiosa (Ramilo et al. 2013).
Positive and negative controls shall be sections from known infected and non-infected hosts respectively.
Primerne BOSTRE-F (5′- TTACGTCCCTGCCCTTTGTA-3′) og BOSTRE-R (5′- TCGCGGTTGAATTTTATCGT-3′) amplificerer et produkt på 208 bp.
A positive result shall be demonstrated by the purple-black labelling of M. refringens cells within known target tissues, with all negative controls being negative and all positive controls being positive.
PCR-blandinger indeholder SYBR® Green Master Mix (1X), 0,3 μM forward og reverse primere og 200 ng ekstraheret DNA.
Sequencing
Prøverne denatureres i et Real Time Detection System i 10 minutter ved 95 °C efterfulgt af 35 cyklusser (95 °C i 30 sekunder, 55 °C i 45 sekunder og 72 °C i ét minut).
Sequencing shall be carried out as one of the final steps for confirmatory diagnostic.
Kurven over smeltetemperaturen skal analyseres med temperaturstigninger på 0,5 °C/s begyndende ved 55 °C og indtil 95 °C, idet fluorescens registreres ved hver temperaturændring.
Targeted regions are the SSU rDNA and ITS1.
Positive kontroller skal bestå af genomisk DNA fra en stærkt inficeret vært eller plasmid-DNA inklusive målregionen.
Detailed diagnostic methods and procedures for surveillance and confirmation of infection with Marteilia refringens
Negative kontroller skal bestå af genomisk DNA fra ikkeinficerede værter og PCR-reagenser uden mål-DNA.
For the purpose of surveillance programmes and to confirm the presence of an infection with Marteilia refringens or to rule out a suspicion of that listed disease, in accordance with the requirements laid down in Section II of Part 4 to Annex I, the diagnostic methods and corresponding procedures to be used shall be in accordance with the guidelines laid down in Table 4.1 as follows:
Et positivt resultat er positiv PCR-amplificering med en unik maksimal smeltetemperatur (78,25 ± 0,25 °C under de betingelser, som er publiceret af Ramilo et al. 2013), idet alle negative kontroller er negative, og alle positive kontroller positive.
Table 4.1
Der skal anvendes en probe målrettet rDNA-genkompleksets SSU, selv om den har vist sig at krydsreagere med visse andre medlemmer af Haplosporidia-familien.
Guidelines for the use of diagnostic methods for the surveillance programmes and to confirm or rule out infection with Marteilia refringens
Vævssnit, som omfatter gæller og fordøjelseskirtel, fikseres i mindst 24 timer i Davidsons fikseringsmiddel efterfulgt af normal behandling for histologi med paraffin.
Method
Snittene inkuberes med 100 μl af hybridiseringsbuffer (4 × SSC [standardsaltcitrat], 50 % formamid, 1 × Denhardts opløsning, 250 μg ml– 1 gær-tRNA, 10 % dextransulphat) indeholdende 20 ng (2 μl af PCR-reaktionen, der er præpareret som beskrevet i punkt I.3.2 ved hjælp af primerne Bo og Boas) af den digoxigenin-mærkede probe.
Targeted surveillance
Snittene vaskes 2 × 5 minutter i 2 × SSC ved rumtemperatur og 1 × 10 minutter i 0,4 × SSC ved 42 °C.
Presumptive diagnosis
Et positivt resultat skal svare til de mærkede parasitter inden i hæmocytterne, idet alle negative kontroller skal være negative, og alle positive kontroller positive.
Confirmatory diagnosis
Målregioner er SSU rDNA og ITS1.
Digestive gland imprints
Procedurer for overvågning og bekræftelse af infektion med Bonamia ostreae
X, or
I forbindelse med overvågning og bekræftelse af forekomst af eller for at udelukke mistanke om infektion med Bonamia ostreae i overensstemmelse med kravene i bilag I, del 5, afsnit II, skal de diagnosemetoder og tilhørende procedurer, der skal anvendes, følge de retningslinjer, der er fastsat i tabel 5.1.
Histopathology
Tabel 5.1
In situ hybridisation
Retningslinjer for anvendelse af diagnosemetoder for overvågningsprogrammerne og til udelukkelse eller bekræftelse af infektion med Bonamia ostreae
X, and
Aftryk af hjerte eller gæller
DETAILED DIAGNOSTIC METHODS AND PROCEDURES FOR THE SURVEILLANCE AND CONFIRMATION OF INFECTION WITH BONAMIA OSTREAE
DETALJEREDE DIAGNOSEMETODER OG -PROCEDURER FOR OVERVÅGNING OG BEKRÆFTELSE AF WHITE SPOT DISEASE (WSD)
I. Procedures for diagnosis of Infection with Bonamia ostreae
Diagnoseprocedurer for påvisning af WSSV
When sampling and laboratory examination are carried out for the purpose of obtaining or maintaining a certain health status with regard to Bonamia ostreae as set out in Section I of Part 5 of Annex I or to confirm or rule out the presence of that listed disease in accordance with Article 57(b) of Directive 2006/88/EC, using the diagnostic methods set out in Section II of Part 5 of Annex I, the detailed diagnostic methods and procedures set out in following points I.1, I.2 and I.3 shall apply.
Hvis der foretages prøveudtagning og laboratorieundersøgelse i forbindelse med overvågnings- og udryddelsesprogrammerne i bilag I, del 6, afsnit I, for at bekræfte forekomst af eller udelukke mistanke om infektion med WSSV i overensstemmelse med artikel 57, litra b), i direktiv 2006/88/EF ved hjælp af diagnosemetoderne i bilag I, del 6, afsnit II, anvendes de detaljerede diagnosemetoder og -procedurer i punkt 2-7 nedenfor.
Sample process
De metoder og procedurer, der er beskrevet i denne del af bilag II, er udarbejdet på grundlag af ISO 17025-akkrediterede test, som anvendes på EU-referencelaboratoriet for krebsdyrsygdomme.
Once sampled, oysters shall be maintained at 4 °C or on refrigerated ice for no more than 24 hours if samples include gaping molluscs and 72 hours if not, in a plastic bag including a label with details related to the nature and the origin of the oysters.
Der kan anvendes alternative tilgange, hvor der bruges tilsvarende betingelser eller kit, som er produceret af forskellige fabrikanter, men som giver en sensitivitet og specificitet svarende til dem, der er beskrevet i denne del.
A 3 to 5 mm thick section of tissues including gills and heart tissue shall be used for the diagnostic of Bonamia ostreae by histology.
Væv (pleopoder og gæller) indeholdende WSSV fra krebsdyr kan opbevares i ethanol eller RNAlater eller lynfryses ved – 80 °C.
Slides shall be air-dried, fixed in methanol or in absolute ethanol and stained using a commercially available blood-staining kit (namely such as Diff- Quik®/Hemacolor®.), in accordance with the manufacturer's instructions.
Følgende trin kræves for at identificere WSSV fra vævsprøver: homogenisering af vævet, ekstraktion af DNA'et, specifik amplificering af WSSV-DNA'et ved hjælp af PCR, visualisering af det amplificerede produkt på en gel, rensning af DNA'et og sekventering for at bekræfte patogenets identitet.
Slides shall be observed first at × 200 magnification and then under oil immersion at × 1000 magnification.