natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Da de givne RT-qPCR-protokoller har en sensitivitet, der svarer til eller er højere end celledyrkningsmetodernes, kan der til PCR anvendes supernatant fra homogeniseret fiskevævsmateriale af organer fra op til ti fisk samlet i cellekulturmedium.
If the collected supernatant is stored at – 80 °C within 48 hours after the sampling, it may be reused only once for virological examination.
Eftersom der anvendes en meget mindre mængde inokulum til PCR end til celledyrkning, skal alt fiskevæv dog homogeniseres omhyggeligt, inden materialet samles til ekstraktion.
Prior to the inoculation of the cells, the supernatant shall be mixed with equal parts of a suitably diluted pool of antisera to the indigenous serotypes of Infectious pancreatic necrosis (IPN) virus and incubated with this for a minimum of one hour at 15 °C or a maximum of 18 hours at 4 °C.
Samme princip gælder, hvis prøverne indsamles i RNA-stabiliseringsreagens.
The titre of the antiserum shall be at least 1/2000 in a 50 % plaque neutralisation test.
I dette tilfælde er det imidlertid vanskeligt at samle repræsentativt materiale fra op til ti fisk i ét rør, og antallet af fisk pr. samleprøve skal derfor indskrænkes til 2-5.
Treatment of all inocula with antiserum to IPN virus aims at preventing cytopathic effect (CPE) due to IPN virus from developing in inoculated cell cultures.
Virologisk undersøgelse i cellekultur
This will reduce the duration of the virological examinations as well as the number of cases in which occurrence of CPE would have to be considered potentially indicative of VHSV or IHNV.
Cellekulturer og medier
When samples come from production units, which are considered free from IPN, the treatment of inocula with antiserum to IPN virus may be omitted.
Celler af enten cellelinjen Bluegill fry – 2 (BF-2) eller cellelinjen Rainbow trout gonad – 2 (RTG-2) og enten cellelinjen Epithelioma papulosum cyprini (EPC) eller Fathead minnow (FHM) skal dyrkes ved 20-30 °C i et egnet medium, dvs. Eagle's Minimum essential medium (MEM) eller modifikationer heraf, tilsat 10 % føtalt kvægserum og antibiotika i standardkoncentrationer.
Sample preparation for RT-PCR and RT-qPCR based surveillance programmes
Når cellerne dyrkes i lukkede glas, benyttes bicarbonat som buffer til mediet.
If samples were collected in transport medium, the procedure set out in points I.4.2 and I.4.3 shall be carried out.
Til det medie, der anvendes til dyrkning af celler i åbne enheder, kan tris(hydroxymethyl)aminomethan-HCl (Tris-HCl) (23 mM) og natriumbicarbonat (6 mM) benyttes som buffer. pH-værdien skal ligge på 7,6 ± 0,2.
After centrifugation, supernatant shall be collected and RNA extracted.
De cellekulturer, der skal anvendes til podning med fiskevævsmateriale, skal være unge, normalt en dag gamle cellekulturer i monolag, hvis det er muligt; cellekulturer, som er 4-48 timer gamle, kan dog accepteres.
If further examination is not to be undertaken directly after centrifugation, the samples shall be immediately frozen at – 20 °C or below.
Cellerne skal være aktivt voksende ved podningen.
For the analysis of fish tissues preserved in RNA stabilization reagent, subsequent work shall be carried out within the following time scales for samples stored at different temperatures:
Podning af cellekulturer
samples stored at 37 °C: 1 day;
En antibiotikabehandlet organopslæmning podes på cellekulturer i to fortyndinger, dvs. primærfortyndingen og derudover en fortynding på 1:10 heraf, så der fremkommer slutfortyndinger af vævsmateriale i cellekulturmediet på henholdsvis 1:100 og 1:1000, idet formålet er at hindre homolog interferens.
samples stored at 25 °C: 1 week;
Mindst to cellelinjer skal podes i overensstemmelse med punkt I.5.1.
samples stored at 4 °C: 1 month;
Mængdeforholdet mellem inokulum og cellekulturmedium skal være ca. 1:10.
samples stored at – 20 °C: indefinitely
For hver fortynding og hver cellelinje anvendes et celleområde på mindst ca. 2 cm2 svarende til én brønd på en cellekulturplade med 24 brønde.
Pooled samples in RNA stabilization reagent shall be treated like single samples in RNA stabilization reagent.
Der anvendes cellekulturplader, hvis det er muligt.
For samples pooled in RNA stabilization reagent, the sample amount shall not exceed that recommended by the manufacturer for extraction with RNA kits, such as RNeasy Mini kits (Qiagen) or similar.
Inkubation af cellekulturer
If larger samples are pooled, the extraction kits or methods must reflect this pooling.
De podede cellekulturer inkuberes ved 15 °C i 7-10 dage.
Samples collected in RNA stabilization reagents shall not be used for cell cultivation.
Hvis cellekulturmediet ændrer farve fra rød til gul, som er tegn på forsuring af mediet, skal pH-værdien justeres med steril bicarbonatopløsning eller tilsvarende stoffer for at sikre, at cellematerialet er modtageligt for virusinfektion.
Pooling of samples for RT-qPCR
Der foretages mindst hver sjette måned, eller når der er mistanke om, at cellerne er mindre modtagelige, titrering af frosne lagre af VHSV og IHNV for at fastslå, om cellekulturerne er modtagelige for infektion.
As the RT-qPCR protocols given are of similar or higher sensitivity than the cell cultivation methods, it may be acceptable to use supernatant from homogenised fish tissue material of pooled organs from up to 10 fish in cell culture medium for PCR.
Proceduren i afsnit III anvendes, hvis det er muligt.
However, due to the much smaller inoculum used for PCR compared to cell cultivation, all fish tissues shall be carefully homogenised before collating material for extraction.
Mikroskopi
The same principle shall also be applied if samples are collected in RNA stabilization reagents.
Podede cellekulturer skal undersøges jævnligt (mindst tre gange om ugen) for forekomst af CPE ved ca. 40-150 × forstørrelse.
However, in that case it is often difficult to collect representative material from up to 10 fish in one tube, and the number of fish per pool shall therefore be reduced to 2 to 5.
Hvis der konstateres tydelig CPE, skal der omgående anvendes procedurer for virusidentifikation i overensstemmelse med punkt I.6.
Virological examination on cell culture
Subkultivering
Cell cultures and media
Er der ingen udvikling af CPE efter primærinkubationen i 7-10 dage, gennemføres der subkultivering med friske cellekulturer på et celleareal af samme størrelse som primærkulturens.
Bluegill fry cell line -2 (BF-2) or Rainbow trout gonad cell line - 2 (RTG-2) and either Epithelioma papulosum cyprini (EPC) or Fathead minnow (FHM) cells shall be grown at 20 to 30 °C in suitable medium, namely Eagle's Minimum essential medium (MEM) or modifications thereof, with a supplement of 10 % foetal bovine serum and antibiotics in standard concentrations.
Alternativt podes aliquoter på 10 % af det medium, som udgør primærkulturen, direkte i en brønd med frisk cellekultur (brønd-til-brønd-subkultivering).
When the cells are cultivated in closed vials, the medium shall be buffered with bicarbonate.
Inden podningen kan der foretages inkubation af fortyndingerne med antiserum mod IPN-virus i en passende fortynding som beskrevet i punkt I.4.3.
The medium used for cultivation of cells in open units may be buffered with tris(hydroxymethyl)aminomethane-HCl (Tris-HCl) (23 mM) and sodium bicarbonate (6 mM).
De podede kulturer inkuberes derefter i 7-10 dage ved 15 °C og undersøges i overensstemmelse med punkt I.5.4.
The pH must be 7,6 ± 0,2.
Hvis der forekommer toksisk CPE i løbet af de første tre inkubationsdage, foretages subkultivering på det stadium, men cellerne skal i så fald inkuberes i syv dage og subkultiveres igen med yderligere syv dages inkubation.
The cell cultures to be used for inoculation with fish tissue material shall be young, normally 1 day old cell culture monolayers where possible; however, a range between 4 to 48 hours old may be accepted.
Hvis der udvikler sig toksisk CPE efter tre dage, subkultiveres cellerne én gang og inkuberes, således at man kommer op på de i alt 14 dage fra primærpodningen.
The cells must be actively growing at inoculation.
Der må ikke være noget tegn på toksicitet i de sidste syv inkubationsdage.
Inoculation of cell cultures
Hvis der trods antibiotikabehandling optræder bakteriekontamination, skal supernatanten inden subkultivering centrifugeres ved 2000-4000 × g i 15-30 minutter ved 2-5 °C og/eller filtreres gennem et 0,45 μm filter (svagt proteinbindende membranfilter).
Antibiotic-treated organ suspension shall be inoculated into cell cultures in two dilutions, namely the primary dilution and, in addition, a 1:10 dilution thereof, resulting in final dilutions of tissue material in cell culture medium of 1:100 and 1:1000, respectively, in order to prevent homologous interference.
Derudover er procedurerne for subkultivering de samme som dem, der er beskrevet for toksisk CPE i fjerde afsnit.
At least two cell lines shall be inoculated as referred to in point I.5.1.
Hvis der ikke forekommer CPE, kan testen erklæres for negativ.
The ratio between inoculum size and volume of cell culture medium shall be about 1:10.
Virusidentifikation
For each dilution and each cell line, a minimum of about 2 cm2 cell area, corresponding to one well in a 24-well cell culture tray, shall be utilised.
Hvis der er observeret tegn på CPE i en cellekultur, indsamles mediet (supernatanten) og undersøges efter én eller flere af følgende metoder: enzymbundet immunosorbent assay (ELISA), immunfluorescens (IF), neutralisationstest, RT-PCR eller RT-qPCR.
Cell culture trays shall be used where possible.
Mikrotiterplader dækkes med 50 μl/brønd (0,9 pg) protein-A-rensede immunglobuliner (Ig) af dokumenteret kvalitet fra kaninantiserum mod IHNV eller VSHV opløst i carbonatbuffer (pH 9,6) indeholdende 15 mM natriumazid og inkuberes i 18 timer til 2 uger ved 4 °C.
If the colour of the cell culture medium changes from red to yellow indicating medium acidification, pH adjustment with sterile bicarbonate solution or equivalent substances shall be performed to ensure cell susceptibility to virus infection.
På en fortyndingsplade skal hver prøve, der indeholder 1 % Triton X-100, og de positive kontroller fortyndes med en bufferopløsning (dvs. phosphat-bufferet saltopløsning (PBS)-T-BSA, 1 % BSA) i en 4-fold-fortynding: ufortyndet, 1:4, 1:16, 1:64.
At least every 6 months or if decreased cell susceptibility is suspected, titration of frozen stocks of VHSV and IHNV shall be performed to verify the susceptibility of the cell cultures to infection.
ELISA-pladerne vaskes med PBS indeholdende 0,05 % Tween-20 (PBS-T), og 50 μl af hver fortynding overføres fra fortyndingspladen til den vaskede og belagte ELISA-plade.
The procedure set out in Section III shall be used, if possible.
Derefter inkuberes ELISA-pladerne i 30 minutter ved 37 °C.
Microscopy
Efterfølgende vaskes pladerne og inkuberes i 30 minutter ved 37 °C med specifikke monoklonale antistoffer (dvs. henholdsvis MAb IP5B11 til VHSV-identifikation og Hyb 136-3 til IHNV).
Inoculated cell cultures shall be inspected regularly, at least three times a week, for the occurrence of CPE at 40 to 150 × magnification.
Kanin-anti-mus-antistoffer fortyndet 1:1000 i PBS-T-BSA konjugeret med 50μl peberrodsperoxidase (HRP) overføres til ELISA-pladen.
If obvious CPE is observed, virus identification procedures in accordance with point I.6 shall be initiated immediately.
Endelig startes reaktionerne, efter endnu en vaskning, ved at tilsætte 50 μl/brønd orthophenylendiamin (OPD).
Subcultivation
ELISA-pladerne inkuberes mørkt i 20 minutter ved rumtemperatur, og reaktionen stoppes ved at tilsætte 100 μl/brønd 0,5 M H2SO4.
If no CPE has developed after the primary incubation for 7 to 10 days, subcultivation shall be performed to fresh cell cultures utilising a cell area similar to that of the primary culture.
Absorbansen måles ved en bølgelængde på 492 og 620 nm i en ELISA-læser.
Aliquots of medium (supernatant) from all cultures or wells constituting the primary culture shall be pooled according to cell line 7 to 10 days after inoculation.
Prøverne betegnes som positive eller negative, efter at testresultaterne er blevet sammenlignet med absorbansværdierne for de positive og negative kontroller.
The pools shall then be inoculated into homologous cell cultures undiluted and diluted 1:10 (resulting in final dilutions of 1:10 and 1:100, respectively, of the supernatant) as described in point I.5.2.
Generelt anses prøver med kombineret absorbans (A) < 0,5 for ufortyndet materiale for negative, prøver med A-værdier mellem 0,5 og 1,0 anses for mistænkelige, og prøver med A-værdier > 1,0 anses for positive.
Alternatively, aliquots of 10 % of the medium constituting the primary culture shall be inoculated directly into a well with fresh cell culture (namely, well to well subcultivation).
Der kan anvendes andre ELISA-versioner med dokumenteret tilsvarende effektivitet i stedet for dem, der er omhandlet i dette punkt.
The inoculation may be preceded by pre-incubation of the dilutions with the antiserum to IPN virus at appropriate dilution as described in point I.4.3.
Immunfluorescens (IF)
The inoculated cultures shall then be incubated for 7 to 10 days at 15 °C and inspected in accordance with point I.5.4.
De listeopførte patogener VHSV og IHNV identificeres ved at inficere celler i 96-brønds »Black«-plader, konventionelle 24-brøndsplader eller på dækglas i 24-brøndsplader.
If toxic CPE occurs within the first 3 days of incubation, subcultivation shall be performed at that stage, but the cells shall then be incubated for 7 days and sub cultivated again with further 7 days incubation.
Når IHNV eller VHSV eller begge er identificeret ved at inficere celler på dækglas, anvendes følgende protokol:
When toxic CPE develops after 3 days, the cells shall be passed once and incubated to achieve the total of 14 days from the primary inoculation.
På dækglassene udstryges der celler med en tæthed, der giver 60-90 % sammenflydning efter 24 timers dyrkning.
There must be no evidence of toxicity in the final 7 days of incubation.
Om muligt anvendes EPC-celler, fordi de klæber stærkt til glasoverflader, men der kan også anvendes andre cellelinjer såsom BF-2, RTG-2 eller FHM.
If bacterial contamination occurs despite treatment with antibiotics, subcultivation shall be preceded by centrifugation at 2000 to 4000 × g for 15 to 30 minutes at 2 to 5 °C, or filtration of the supernatant through a 0,45 μm filter or both (low protein-binding membrane).
150 μl cellekultursupernatant i to forskellige fortyndinger (1:10 og 1:1000) podes i duplikat på en dag gamle monolag og inkuberes ved 15 °C i 24 timer.
In addition to this, subcultivation shall follow the same procedures as described for toxic CPE in the fourth paragraph of this point.
Derefter fjernes cellekulturmediet, og de inficerede cellemonolag fikseres med 0,5 ml iskold, vandig acetoneopløsning (80 % v/v).
If no CPE occurs, the test may be declared negative.
Fikseringen foretages i et stinkskab i 15 minutter ved rumtemperatur, derefter fjernes acetoneopløsningen, og dækglassene lufttørres i mindst 30 minutter.
Virus identification
På dette trin skal pladerne enten behandles med det samme eller opbevares ved – 20 °C med henblik på videre anvendelse.
If evidence of CPE has been observed in a cell culture, medium (supernatant) shall be collected and examined by one or more of the following techniques: Enzyme-linked immunosorbent essay (ELISA), Immunofluorescence (IF), neutralisation, RT-PCR or RT-qPCR.
Specifikke monoklonale antistoffer (dvs. henholdsvis MAb IP5B11 til VHSV-identifikation og Hyb 136-3 til IHNV) opløses i 0,01 M PBST med en pH-værdi på 7,2 i den af leverandøren af MAb anbefalede fortynding; 50-100 μl/brønd tilsættes til det fikserede monolag, og pladerne inkuberes i en time ved 37 °C i et fugtkammer.
If these tests have not allowed definitive identification of the virus within 1 week, the supernatant shall be forwarded to the national reference laboratory or to the EU reference laboratory for fish diseases referred to in Annex VI to Directive 2006/88/EC for immediate identification.
Dækglassene vaskes forsigtigt tre gange med PBS indeholdende 0,05 % Tween-20 (PBS-T), og bufferen fjernes helt efter sidste vaskning.
A double antibody sandwich ELISA shall be performed in order to identify the virus isolate.
Cellerne inkuberes derefter i en time ved 37 °C med fluoresceinisothiocyanat (FITC) — eller tetramethylrhodamin-5-(og-6-)isothiocyanat (TRITC)-konjugerede antistoffer mod museimmunglobulin anvendt som det primære antistof, fortyndet i henhold til leverandørens anvisninger, vaskles endnu en gang i PBS-T og tørres.
Microwell plates shall be coated with 50 μl/well (0,9 pg) of proven quality protein-A purified immunoglobulins(Ig) from rabbit antisera against IHNV or VSHV diluted in carbonate buffer (pH 9,6) containing 15 mM sodium azide and incubated from 18 hours to 2 weeks at 4 °C.
Farvede kulturer monteres på objektglas med glycerolsaltopløsning og undersøges under indfaldende UV-lys.
On a dilution plate, each sample containing 1 % Triton X-100 and the positive controls shall be diluted with buffer solution (namely, phosphate buffered saline (PBS)-T-BSA, 1 % BSA) in a 4-fold dilution: undiluted, 1:4, 1:16, 1:64.
Der anvendes okularer, der forstørrer 10 × eller 12 ×, og × 25 – eller × 40-objektiver med en blænde på henholdsvis > 0,7 og > 1,3.
The ELISA plates shall be washed in PBS containing 0,05 % Tween-20 (PBS-T) and 50 μl of each dilution shall be transferred from the dilution plate to the washed and coated ELISA-plate.
Andre IF-metoder (mht. cellekulturer, fiksering og antistoffer af referencekvalitet) med dokumenteret tilsvarende effektivitet kan anvendes.
ELISA plates shall then be incubated for 30 minutes at 37 °C.
Cellerne fra den opsamlede supernatant fjernes ved centrifugering (2000-4000 × g) eller membranfiltrering (0,45 μm) gennem et svagt proteinbindende membranfilter, og supernatanten fortyndes 1:100 og 1:10000 i celledyrkningsmedium.
Subsequently plates shall be washed and incubated for 30 minutes at 37 °C with specific monoclonal antibodies (namely for VHSV identification MAb IP5B11 and for IHNV Hyb 136-3, respectively).
Aliquoter af mindst to supernatantfortyndinger blandes og inkuberes i 60 minutter ved 15 °C med lige dele af følgende reagenser hver for sig:
50 μl of horseradish-peroxidase (HRP) conjugated rabbit anti mouse antibodies diluted 1:1000 in PBS-T-BSA shall be transferred to the ELISA plate.
serum indeholdende gruppespecifikt antistof mod VHSV fortyndet i forholdet 1:50 v/v
Finally, after renewed washing the reactions shall be developed adding 50 μl/well of ortho-phenylenediamine (OPD).
serum indeholdende gruppespecifikt antistof mod IHNV fortyndet i forholdet 1:50 v/v
The ELISA plates shall be incubated for 20 minutes at room temperature in the dark and the reaction shall be stopped by adding 100 μl/well 0,5 M H2SO4.
blanding af antisera mod indigene serotyper af IPNV fortyndet i forholdet 1:50 v/v
The absorbance shall be monitored at a wavelength of 492 and 620 nm in an ELISA reader.
medium alene (positiv kontrol).
Samples shall be designated positive or negative after comparing the test results to the absorbance values for the positive and negative controls.
Der skal fra hver virussupernatant-serum-blanding podes mindst to cellekulturer med 50 μl hver, som derefter inkuberes ved 15 °C.
In general, samples with combined absorbance (A) < 0,5 for undiluted material shall be considered negative, samples with A values between 0,5 and 1,0 shall be considered suspicious and samples with A values > 1,0 shall be considered positive.
Udviklingen af CPE kontrolleres som beskrevet i punkt I.5.4.
Other ELISA versions with a proven similar efficacy may be used instead of those referred to in this point.
VHSV-stammer og -isolater, som ikke reagerer i neutralisationstest, identificeres ved IF eller ELISA.
Immunofluorescence- IF
Andre neutralisationstest med dokumenteret tilsvarende effektivitet kan også anvendes.
The identification of listed pathogens VHSV and IHNV shall be performed by infecting cells in ‘Black’ 96-well plates, conventional 24-well plates or cover slips into 24-well plates.
Forberedelse af viralt RNA
When IHNV or VHSV or both are identified by infecting cells on cover slips, the following protocol shall apply:
Alt arbejde med RNA skal udføres på is, og der skal anvendes handsker.
cover slips shall be seeded with cells at a density leading to between 60 % and 90 % confluence after 24 hours of cultivation.
RNA ekstraheres efter phenolchloroformmetoden eller med kolonner til oprensning af RNA (RNA affinity spin columns) i henhold til fabrikantens anvisninger.
EPC cells shall be used where possible for this purpose because of their strong adherence to glass surfaces, but other cell lines such as BF-2, RTG-2 or FHM may be used as well.
RNA skal genopslæmmes i destilleret RNAse-frit vand (dvs. vand, der er behandlet med 0,1 % diethylpyrocarbonat) eller en passende elueringsbuffer.
subsequently, cell culture medium shall be removed, and the infected cell monolayers fixed with 0,5 ml ice-cold, aqueous acetone solution (80 % vol:vol).
Der anvendes følgende primere til påvisning af IHNV:
Fixation shall take place in fume hood for 15 minutes at room temperature, then the acetone solution shall be removed and the cover glasses shall be air dried for at least 30 minutes.
Forward primer 5′-AGA-GAT-CCC-TAC-ACC-AGA-GAC-3′
At this stage, the plates shall either be processed immediately or stored at – 20 °C for further use;
Der anvendes følgende cyklusser (ettrins-RT-PCR): 1 cyklus: 50 °C i 30 minutter; 1 cyklus: 95 °C i 2 minutter; 30 cyklusser: 95 °C i 30 sekunder, 50 °C i 30 sekunder, 72 °C i 60 sekunder; 1 cyklus: 72 °C i 7 minutter og udblødning ved 4 °C.
specific monoclonal antibodies (namely for VHSV identification, MAb IP5B11 and for IHNV, Hyb 136-3 respectively) shall be diluted in 0,01 M PBST, pH 7,2 in the dilution recommended by the provider of the MAbs; 50 to 100 μl/well shall be added to the fixed monolayer and plates shall be incubated for one hour at 37 °C in a humid chamber;
Der anvendes følgende primere til påvisning af VHSV:
cover glasses shall be washed gently three times with PBS containing 0,05 % Tween-20 (PBS-T), and the buffer shall be removed completely after the last rinse.
VN For 5′-ATG-GAA-GGA-GGA-ATT-CGT-GAA-GCG-3′
The cells shall subsequently be incubated for one hour at 37 °C with fluorescein isothiocyanate (FITC) — or tetramethylrhodamine-5-(and-6-) isothiocyanate (TRITC)-conjugated antibodies against mouse immunoglobulin used as the primary antibody, diluted according to the supplier instructions, washed again in PBS-T, and dried.
Der anvendes følgende cyklusser (ettrins-RT-PCR): 50 °C i 30 minutter, 95 °C i 15 minutter, 35 cyklusser ved 94 °C i 30 sekunder, 55 °C i 30 sekunder og 68 °C i 60 sekunder.
Stained cultures shall be mounted onto glass slides using glycerol saline and examined under incident ultraviolet (UV) light.
Reaktionen skal derefter holdes ved 68 °C i 7 minutter.
Use 10 × or 12 × eyepieces and a × 25 or × 40 objective lens with numerical apertures > 0,7 and > 1,3 respectively.
RT-PCR-reaktionernes kvantitet og specificitet skal evalueres ved gelelektroforese i 1,5 % agarosegel med ethidiumbromid og observeres ved hjælp af UV-gennemlysning.
Other IF techniques, with regard to cell cultures, fixation and antibodies of reference quality, of proven similar efficacy may be used instead.
Et PCR-amplikon på 693 bp kan observeres for IHNV.
Neutralisation
Resultaterne af PCR kan variere afhængigt af de betingelser, den udføres under, dvs. der kan være brug for at optimere de termiske protokoller afhængigt af den anvendte termocykler.
Aliquots of a minimum of two supernatant dilutions shall be mixed and incubated for 60 minutes at 15 °C with equal parts of the following reagents separately:
Endvidere kan der forekomme falsk positive resultater på grund af falsk hybridisering af primer eller laboratoriekontaminering.
serum containing group specific antibody against VHSV at a 1:50 (vol:vol) dilution;
Passende positive og negative kontroller og sekventeret amplikon skal derfor anvendes for at undgå enhver tvivl.
serum containing group specific antibody against IHNV at a 1:50 (vol:vol) dilution;