natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Medier og dyrkningsbetingelser Der bør anvendes korrekte dyrkningsmedie- og inkubationsforhold til rutinemæssige celledyrkninger under testproceduren.
Media and culture conditions
Til vedligeholdelse af kulturerne benyttes der egnede dyrkningssubstrater og inkuberingsbetingelser (dyrkningsflaskcr, CO2-koncentration, temperatur og luftfugtighed).
Appropriate culture media and incubation conditions (culture vessels, CO2 concentration, temperature and humidity) should be used in maintaining cultures.
Etablerede cellelinjer og -stammer kontrolleres regelmæssigt for stabilt karakteristisk kromosomtal og mycoplasmakontaminering; i tilfælde af kontaminering anvendes kulturen ikke.
Established cell lines and strains should be checked routinely for stability in the modal chromosome number and the absence of mycoplasma contamination and should not be used if contaminated.
Cellernes normale cyklustid og dyrkningsbetingelserne skal være kendt.
The normal cell cycle time for the cells and culture conditions used should be known.
Forberedelse af kulturerne
Preparation of cultures
Etablerede cellelinjer og -stammer: Celler udtages fra stamkulturer og udsås i dyrkningssubstrat med en sådan tæthed, at kulturerne ikke flyder sammen inden høst, og inkuberes ved 37 oC.
Established cell lines and strains: cells are propagated from stock cultures, seeded in culture medium at a density such that the cultures will not reach confluency before the time of harvest, and incubated at 37 oC.
Lymfocytter: fuldblod, der er behandlet med antikoaguleringsmiddel (f.eks, heparin), eller lymfocytter fra sunde individer tilsættes til dyrkningssubstratet, der indeholder et mitogen (f.eks. phytohæmagglutinin), og inkuberes ved 37 oC.
Lymphocytes: whole blood treated with an anti-coagulant (e.g. heparin) or separated lymphocytes obtained from healthy subjects are added to the culture medium containing a mitogen (e.g. phytohaemagglutinin) and incubated at 37 oC.
Metabolisk aktivering
Metabolic activation
Cellerne eksponeres for teststoffet både med og uden et eksogent metabolisk aktiveringssystem fra pattedyr.
Cells should be exposed to the test substance both in the presence and absence of an appropriate metabolic activation system.
Det mest almindeligt anvendte system er en cofaktorsuppleret postmitokondriefraktion (S9), der fremstilles af levere fra rotter, der har været behandlet med enzyminducerende stoffer såsom Aroclor 1254 (6) (7) (8) (9), eller en blanding af phenobarbiton og β-naphthoflavon (10) (11) (12).
The most commonly used system is a cofactor-supplemented post-mitochondrial fraction (S9) prepared from the livers of rodents treated with enzyme-inducing agents such as: Aroclor 1254 (6)(7)(8)(9), or a mixture of phenobarbitone and ß–naphthoflavone (10)(11)(12).
I nogle tilfælde vil det være hensigtsmæssigt at benytte postmitokondriefraktion i mere end én koncentration.
In some cases it may be appropriate to utilise more than one concentration of post-mitochondrial fraction.
Nogle udviklingstendenser, f.eks. genetisk konstruktion af cellelinjer, der udtrykker specifikke aktiverende enzymer, kan rumme potentiale for endogen aktivering.
A number of developments, including the construction of genetically engineered cell lines expressing specific activating enzymes, may provide the potential for endogenous activation.
Valget af en bestemt cellelinje skal begrundes sagligt (f.eks. ved, at cytochrom P450-coenzymet er relevant for teststoffets metabolisme).
The choice of the cell lines used should be scientifically justified (e.g. by the relevance of the cytochrome P450 isoenzyme for the metabolism of the test substance).
Teststof/testpræparat
Test substance/Preparation
Teststoffer i fast form opløses eller opslæmmes i passende opløsningsmidler eller bærestoffer og fortyndes passende inden behandling af cellerne.
Solid test substances should be dissolved or suspended in appropriate solvents or vehicles and diluted if appropriate prior to treatment of the cells.
Teststoffer i væskeform kan enten tilsættes direkte til testsystemet eller fortyndes inden behandlingen.
Liquid test substances may be added directly to the test systems and/or diluted prior to treatment.
Der benyttes frisk fremstillede teststofpræparater, medmindre stabilitetsdata viser, at opbevaring er acceptabel.
Fresh preparations of the test substance should be employed unless stability data demonstrate the acceptability of storage.
Opløsningsmiddel/bærestof
Solvent/vehicle
Der må ikke være mistanke om. at opløsningsmiddel/bærestof reagerer kemisk med teststoffet, og opløsningsmiddel/bærestof må hverken hæmme cellernes overlevelse eller S9-aktiviteten.
The solvent/vehicle should not be suspected of chemical reaction with the test substance and should be compatible with the survival of the cells and the S9 activity.
Benyttes der andre opløsningsmiddel/bærestoffer end de velkendte, skal brugen af dem underbygges med kompatibilitetsdata.
If other than well-known solvent/vehicles are used, their inclusion should be supported by data indicating their compatibility.
Det anbefales i videst muligt omfang først at forsøge at benytte et vandigt opløsningsmiddel/bærestofsystem.
It is recommended that wherever possible, the use of an aqueous solvent/vehicle be considered first.
Ved undersøgelse af stoffer, der er ustabile i vand, skal de organiske opløsningsmidler være vandfrie.
When testing water-unstable substances, the organic solvents used should be free of water.
Vand kan fjernes ved tilsætning af molekylsi.
Water can be removed by adding a molecular sieve.
Stoffets cytotoksicitet, dets opløselighed i testsystemet samt ændringer i pH og osmolalitet er blandt de kriterier, der skal tages hensyn til ved valg af højeste koncentration.
Among the criteria to be considered when determining the highest concentration are cytotoxicity, solubility in the test system and changes in pH or osmolality.
Cytotoksiciteten bestemmes med og uden metabolismeaktivering i hovedforsøget ved hjælp af en passende indikator for celleintegritet og -vækst, f.eks. konfluens, antal levedygtige celler eller mitoseindeks.
Cytotoxicity should be determined with and without metabolic activation in the main experiment using an appropriate indication of cell integrity and growth, such as degree of confluency, viable cell counts, or mitotic index.
Det kan være hensigtsmæssigt at bestemme cytotoksicitet og opløselighed ved et indledende forsøg.
It may be useful to determine cytotoxicity and solubility in a preliminary experiment.
Der benyttes mindst tre analyserbare koncentrationer.
At least three analysable concentrations should be used.
Hvis der er tale om cytoksicitet, skal koncentrationerne dække et interval fra største toksicitet til ringe eller ingen toksicitet; det betyder normalt, at koncentrationerne højst er adskilt med en faktor mellem 2 og √10.
Where cytotoxicity occurs, these concentrations should cover a range from the maximum to little or no toxicity; this will usually mean that the concentrations should be separated by no more than a factor between 2 and √10.
På højsttidspunktet skal konfluens, celleantal eller mitoseindeks være faldet signifikant ved den højeste koncentration (mere end 50 %).
At the time of harvesting, the highest concentration should show a significant reduction in degree of confluency, cell count or mitotic index, (all greater than 50 %).
Mitoseindekset er kun et direkte mål for cytotoksisk/cytostatisk virkning og afhænger af, hvor lang tid der er forløbet efter behandlingen.
The mitotic index is only an indirect measure of cytotoxic/cytostatic effects and depends on the time after treatment.
Mitoseindeks er dog acceptabel for dyrkning i rystekolber, hvor andre toksicitetsmål er besværlige eller ubrugelige i praksis.
However, the mitotic index is acceptable for suspension cultures in which other toxicity measurements may be cumbersome and impractical.
Oplysninger om cellecyklens kinetik, såsom den gennemsnitlige generationstid (AGT), kan benyttes som supplerende information.
Information on cell cycle kinetics, such as average generation time (AGT), could be used as supplementary information.
AGT er imidlertid et overordnet gennemsnit, der ikke altid afslører forsinkede subpopulationer, og selv en lille forøgelse af den gennemsnitlige generationstid kan føre til en meget betydelig forsinkelse af tidspunktet for optimalt udbytte af aberrationer.
AGT, however, is an overall average that does not always reveal the existence of delayed subpopulations, and even slight increases in average generation time can be associated with very substantial delay in the time of optimal yield of aberrations.
For stoffer, der er forholdsvis ikke-cytotoksiske, må testkoncentrationen højst være 5 μl/ml, 5 mg/ml eller 0,01 M (den laveste af de tre).
For relatively non-cytotoxic substances, the maximum test concentration should be 5 μl/ml, 5 mg/ml or 0,01 M, whichever is the lowest.
For forholdsvis uopløselige stoffer, der ikke er toksiske ved koncentrationer under opløselighedsgrænsen, skal der som højeste dosis benyttes en koncentration, der er højere end opløselighedsgrænsen i det samlede dyrkningssubstrat ved behandlingens afslutning.
For relatively insoluble substances that are not toxic at concentrations lower than the insoluble concentration, the highest dose used should be a concentration above the limit of solubility in the final culture medium at the end of the treatment period.
I nogle tilfælde (f.eks. når toksicitet kun optræder over den laveste koncentration med uopløselighed) tilrådes det at gennemføre testen ved mere end én koncentration med synlig udfældning.
In some cases (e.g. when toxicity occurs only at higher than the lowest insoluble concentration) it is advisable to test at more than one concentration with visible precipitation.
Det kan være hensigtsmæssigt at bedømme opløseligheden både ved behandlingens begyndelse og afslutning, eftersom opløseligheden kan ændre sig under eksponeringen i testsystemet som følge af, at der er celler S9. serum mv. til stede. Uopløselighed kan iagttages med det blotte øje.
It may be useful to assess solubility at the beginning and the end of the treatment, as solubility can change during the course of exposure in the test system due to presence of cells, S9, serum etc. Insolubility can be detected by using the unaided eye.
Bundfald må ikke have indflydelse på bedømmelsen.
The precipitate should not interfere with the scoring.
Negative og positive kontrolprøver
Negative and positive controls
I alle forsøg medtages der sideløbende både positive og negative (opløsningsmiddel eller bærestof) kontrolprøver, såvel med som uden metabolismeaktivering.
Concurrent positive and negative (solvent or vehicle) controls, both with and without metabolic activation, should be included in each experiment.
Når der benyttes metabolismeaktivering, bør der som positivt kontrolkemikalie anvendes et, der kræver aktivering for at virke mutagent.
When metabolic activation is used, the positive control chemical should be the one that requires activation to give a mutagenic response.
1 positive kontrolprøver benyttes der et kendt clastogen i en mængde, der forventes at give reproducerbar og påviselig forøgelse i forhold til baggrundsværdierne, hvorved testsystemets følsomhed godtgøres.
Positive controls should employ a known clastogen at exposure levels expected to give a reproducible and detectable increase over background, which demonstrates the sensitivity of the test system.
Der vælges sådanne koncentrationer i de positive kontrolprøver, at virkningerne er tydelige, uden dog at de kodede objektglas' identitet umiddelbart afsløres for den, der aflæser dem.
Positive control concentrations should be chosen so that the effects are clear but do not immediately reveal the identity of the coded slides to the reader.
Nedenfor er opregnet eksempler på positive kontrolstoffer:
Examples of positive control substances include:
Metabolismeaktivering
Metabolic Activation condition
CAS nr.
CAS No
EINECS nr.
EINECS No
Ingen exogen metabolismeaktivering
Absence of exogenous metabolic Activation
Methylmethansulfonat
Methyl methanesulphonate
Ethylmethansulfonat
Ethyl methanesulphonate
Ethylnitrosourea
Ethyl nitrosourea
4-Nitroquinoline-N-oxid
4-Nitroquinoline-N-oxide
Exogen metabolismeaktivering
Presence of exogenous metabolic Activation
Benzo[a]pyren
Benzo[a]pyrene
Cyclophosphamid
Cyclophosphamide
Cyclophosphamidmonohydrat
Cyclophosphamide monohydrate
Der kan anvendes andre egnede positive kontrolstoffer.
Other appropriate positive control substances may be used.
Hvis der er mulighed for det, bør der anvendes kemisk beslægtede stoffer.
The use of chemical class-related positive control chemicals should be considered, when available.
Der skal i hver høst indgå negative kontrolprøver, hvor behandlingsmediet kun består af opløsningsmiddel eller bærestof, og som behandles på samme måde som de øvrige kulturer.
Negative controls, consisting of solvent or vehicle alone in the treatment medium, and treated in the same way as the treatment cultures, should be included for every harvest time.
Desuden skal der være ubehandlede kontrolprøver, medmindre der foreligger tidligere opnåede kontroldata, der viser, at det valgte opløsningsmiddel ingen skadelige eller mutagene virkninger har.
In addition, untreated controls should also be used unless there are historical control data demonstrating that no deleterious or mutagenic effects are induced by the chosen solvent.
Behandiing med teststof
Treatment with the test substance
Celler under formering behandles med teststoffet med og uden tilstedeværelse af et metabolismeaktiveringssystem.
Proliferating cells are treated with the test substance in the presence and absence of a metabolic activation system.
Behandling af lymfocytter påbegyndes ca. 2 døgn efter stimulering med mitogen.
Treatment of lymphocytes should commence at about 48 hours after mitogenic stimulation.
Der benyttes normalt dobbeltbestemmelse ved hver koncentration, hvilket også stærkt tilrådes for negative kontrolprøver (kontrolprover med opløsningsmiddel).
Duplicate cultures should normally be used at each concentration, and are strongly recommended for negative/solvent control cultures.
Hvis det på grundlag af tidligere forsøg kan godtgøres, at forskellen mellem dobbeltbestemmelser (13) (14) er minimal, kan enkeltbestemmelse ved hver koncentration accepteres.
Where minimal variation between duplicate cultures can be demonstrated (13)(14), from historical data, it may be acceptable for single cultures to be used at each concentration.
Gasformige og flygtige stoffer testes ved en egnet metode, f.eks. i forseglede dyrkningsflasker (15) (16).
Gaseous or volatile substances should be tested by appropriate methods, such as in sealed culture vessels (15)(16).
Høst af kulturer
Culture harvest time
I det første forsøg udsættes cellerne for teststoffet både med og uden metabolismeaktivering i 3-6 timer, og der udtages prøve efter et tidsrum, der svarer til ca.1,5 gange cellecykluslængden, regnet fra behandlingens begyndelse (12).
In the first experiment, cells should be exposed to the test substance, both with and without metabolic activation, for three to six hours, and sampled at a time equivalent to about 1,5 normal cell cycle length after the beginning of treatment (12).
Fører denne protokol til negativt resultat både med og uden aktivering, udføres endnu et forsøg, denne gang med kontinuerlig behandling indtil prøveudtagning efter et tidsrum, der svarer til ca. 1,5 gange en normal cellecyklus.
If this protocol gives negative results both with and without activation, an additional experiment without activation should be done, with continuous treatment until sampling at a time equivalent to about 1,5 normal cell cycle lengths.
Nogle kemiske stoffer er det lettere at bestemme ved behandlings/prøveudtagningstider på mere end 1,5 gange cellecyklussen.
Certain chemicals may be more readily detected by treatment/sampling times longer than 1,5 cycle lengths.
Negativt resultat med metabolismeaktivering skal bekræftes i hvert enkelt tilfælde.
Negative results with metabolic activation need to be confirmed on a case-by-case basis.
Anses bekræftelse af negative resultater ikke for nødvendigt, skal dette begrundes.
In those cases where confirmation of negative results is not considered necessary, justification should be provided.
Præparering af kromosomer
Chromosome preparation
Cellekulturerne behandles med Colcemid® eller colchicin normalt 1-3 timer før høst.
Cell cultures are treated with Colcemid® or colchicine usually for one to three hours prior to harvesting.
Høst og kromosompræparering skal foregå særskilt for hver enkelt kultur.
Each cell culture is harvested and processed separately for the preparation of chromosomes.
Kromosompræpareringen består i hypotonisk behandling af cellerne, fiksering og farvning.
Chromosome preparation involves hypotonic treatment of the cells, fixation and staining.
Alle objektglas, herunder positive og negative kontrolprøver, kodes uafhængigt inden mikroskoperingen.
All slides, including those of positive and negative controls, should be independently coded before microscopic analysis.
Da fikseringen ofte medfører, at en del af metafasecellerne går i stykker, og kromosomerne går tabt, bør bedømte celler indeholde et antal centromerer svarende til kromosomtallet ± 2 for alle celletyper.
Since fixation procedures often result in the breakage of a proportion of metaphase cells with loss of chromosomes, the cells scored should therefore contain a number of centromeres equal to the modal number ± 2 for all cell types.
Der skal bedømmes mindst 200 vel fordelte metafaser pr. koncentration og kontrolgruppe, ligeligt fordelt mellem eventuelle dobbeltprøver.
At least 200 well spread metaphases should be scored per concentration and control, equally divided amongst the duplicates, if applicable.
Dette antal kan sættes ned, hvis der iagttages høje aberrationstal.
This number can be reduced when high number of aberrations is observed.
Selv om testens formål er at påvise ændringer i kromosomstrukturen, er det vigtigt også at notere polyploidi og endofordobling, hvis dette konstateres.
Though the purpose of the test is to detect structural chromosome aberrations, it is important to record polyploidy and endoreduplication when these events are seen.
Da cellen er forsøgets måleenhed, bedømmes det, hvilken procentdel af cellerne der har ændret kromosomstruktur.
The experimental unit is the cell, and therefore the percentage of cells with structural chromosome aberration(s) should be evaluated.
Forskellige strukturændringer noteres med antal og hyppighed for både forsøgs- og kontrolkulturer.
Different types of structural chromosome aberrations should be listed with their numbers and frequencies for experimental and control cultures.
Gaps registreres særskilt og oplyses, men medregnes ikke generelt i den totale aberrationshyppighed.
Gaps are recorded separately and reported but generally not included in the total aberration frequency.
Sideløbende målinger af cytotoksicitet for alle behandlede og negative kontrolkulturer i hovedforsøget registreres ligeledes.
Concurrent measures of cytotoxicity for all treated and negative control cultures in the main aberration experiments should also be recorded.
Der anføres data for hver enkelt kultur.
Individual culture data should be provided.
Desuden sammenfattes alle data i tabel form.
Additionally, all data should be summarised in tabular form.
Der findes ingen krav til verifikation af et klart positivt resultat.
There is no requirement for verification of a clear positive response.
Tvetydige resultater bør afklares ved yderligere undersøgelser, helst med ændrede forsøgsbetingelser.
Equivocal results should be clarified by further testing preferably using modification of experimental conditions.
Der er redegjort for behovet for bekræftelse af negative resultater i punkt 1.4.3.3.
The need to confirm negative results has been discussed in 1.4.3.3.
Ved opfølgende forsøg kan man overveje at ændre på undersøgelsens parametre, så de bedømte forsøgsbetingelser udvides.
Modification of study parameters to extend the range of conditions assessed should be considered in follow-up experiments.
Blandt de undersøgelsesparametre. der kan ændres på, er koncentrationernes spredning og metabolismeaktiveringen.
Study parameters that might be modified include the concentration spacing and the metabolic activation conditions.
EVALUERING OG FORTOLKNING AF RESULTATER
EVALUATION AND INTERPRETATION OF RESULTS
Der findes en række kriterier for opnåelse af et positivt resultat, f.eks. en koncentrationsafhængig forøgelse eller en reproducerbar forøgelse af antallet af celler med kromosomaberrationer.
There are several criteria for determining a positive result, such as a concentration-related increase or a reproducible increase in the number of cells with chromosome aberrations.
Der bør i første række ses på resultaternes biologiske relevans.
Biological relevance of the results should be considered first.
Statistiske metoder kan benyttes som hjælpemiddel ved evalueringen af testresultaterne (3) (13).
Statistical methods may be used as an aid in evaluating the test results (3)(13).
Statistisk signifikans bør ikke være den eneste faktor, der afgør, om resultatet bedømmes som positivt.
Statistical significance should not be the only determining factor for a positive response.
En forøgelse i antallet af polyploide celler kan være tegn på, at teststoffet er i stand til at inhibere mitoseprocesser og fremkaldte kromosomantalsafvigelser.
An increase in the number of polyploid cells may indicate that the test substance has the potential to inhibit mitotic processes and to induce numerical chromosome aberrations.
En forøgelse af antallet af celler med endofordoblede kromosomer kan være tegn på, at teststoffet kan inhibere cellecyklussens forløb (17) (18).
An increase in the number of cells with endoreduplicated chromosomes may indicate that the test substance has the potential to inhibit cell cycle progression (17)(18).
Et teststof, der ikke opfylder ovennævnte kriterier, anses ikke for mutagent i denne test.
A test substance for which the results do not meet the above criteria is considered non-mutagenic in this system.
De fleste forsøg giver klart positivt eller negativt resultat, men i sjældne tilfælde giver dataene ikke mulighed for en endegyldig bedømmelse af teststoffets aktivitet.
Although most experiments will give clearly positive or negative results, in rare cases the data set will preclude making a definite judgement about the activity of the test substance.
Resultatet kan stadig være tvetydigt eller tvivlsomt, uanset hvor mange gange forsøget gentages.
Results may remain equivocal or questionable regardless of the number of times the experiment is repeated.
Et positivt resultat af en in vitro-test for kromosomaberrationer viser, at teststoffet fremkalder ændringer i kromosomstrukturen i dyrkede somatiske celler fra pattedyr.
Positive results from the in vitro chromosome aberration test indicate that the test substance induces structural chromosome aberrations in cultured mammalian somatic cells.
Et negativt resultat viser, at teststoffet under testbetingelserne ikke fremkalder ændringer i kromosomstrukturen i dyrkede somatiske celler fra pattedyr.
Negative results indicate that, under the test conditions, the test substance does not induce chromosome aberrations in cultured mammalian somatic cells.
Opløsningsmiddel/bærestof:
Solvent/Vehicle:
teststoffets opløselighed og stabilitet i opløsningsmiddel/bærestof, hvis den kendes
solubility and stability of the test substance in solvent/vehicle, if known.
Celler:
Cells:
celletype og oprindelse
type and source of cells,
den valgte celletypes karyotypiske karakteristika og egnethed
karyotype features and suitability of the cell type used,
eventuelt fravær af mycoplasma
absence of mycoplasma, if applicable,
oplysninger om cellecyklussens længde
information on cell cycle length,
bloddonorers køn. fuldblod eller fraseparerede lymfocytter samt benyttet mitogen
sex of blood donors, whole blood or separated lymphocytes, mitogen used,
eventuelt antal passager
number of passages, if applicable,
eventuelle metoder til vedligehold af cellekultur
methods for maintenance of cell culture, if applicable,
normalt kromsomtal
modal number of chromosomes.