natgillin/translations-raw huggingface dataset:
LLNA er baseret på immunologiske hændelser, som udløses af kemiske stoffer i induktionsfasen af sensibiliseringen.
The LLNA is based upon consideration of immunological events stimulated by chemicals during the induction phase of sensitisation.
I modsætning til marsvinetest kræver LLNA ikke, at der fremkaldes challenge-inducerede dermale hypersensivitetsreaktioner.
Unlike guinea pig tests the LLNA does not require that challenged-induced dermal hypersensitivity reactions be elicited.
Desuden kræver LLNA ikke anvendelse af et adjuvans, således som det er tilfældet for Maksimeringstesten på marsvin.
Furthermore, the LLNA does not require the use of an adjuvant, as is the case for the guinea pig maximisation test.
LLNA mindsker således dyrenes lidelser.
Thus, the LLNA reduces animal distress.
Trods LLNA's fordele frem for traditionelle marsvinetest må man have for øje, at metoden har visse begrænsninger, som kan gøre traditionelle marsvinetest nødvendige (således forekommer falske negative fund i LLNA for visse metaller og falske positive fund for visse hudirriterende stoffer) (10).
Despite the advantages of the LLNA over traditional guinea pig tests, it should be recognised that there are certain limitations that may necessitate the use of traditional guinea pigs tests (e.g. false negative findings in the LLNA with certain metals, false positive findings with certain skin irritants)(10).
Der henvises desuden til indledningens del B.
See also Introduction part B.
Det tilgrundliggende princip for LLNA består i, at det sensibiliserende agens inducerer en primær lymfocytproliferation i den lymfeknude, som dræner påføringsstedet for det kemiske stof.
The basic principle underlying the LLNA is that sensitisers induce a primary proliferation of lymphocytes in the lymph node draining the site of chemical application.
Denne proliferation er proportional med den påførte dosis (og med allergenets styrke) og gør det let at få et objektivt, kvantitativt mål for sensibiliseringen.
This proliferation is proportional to the dose applied (and to the potency of the allergen) and provides a simple means of obtaining an objective, quantitative measurement of sensitisation.
I LLXA-testen vurderes denne proliferation som en dosis-respons-forhold, hvor proliferationen i forsøgsgrupperne sammenholdes med proliferationen i en kontrolgruppe, der er behandlet med vehiklet.
The LLNA assesses this proliferation as a dose-response relationship in which the proliferation in test groups is compared to that in vehicle treated controls.
Forholdet mellem proliferation i behandlingsgrupperne og proliferationen i kontrolgruppen kaldes stimulationsindekset og skal være mindst tre, før et prøvestof kan vurderes nærmere som et potentielt hudsensibiliserende agens.
The ratio of the proliferation in treated groups to that in vehicular controls, termed the Stimulation Index, is determined, and must be at least three before a test substance can be further evaluated as a potential skin sensitiser.
De her beskrevne metoder bygger på anvendelse af radioaktiv mærkning til måling af celleproliferationen.
The methods described here are based on the use of radioactive labelling to measure cell proliferation.
Andre endepunkter til bedømmelse af proliferationen kan imidlertid anvendes, forudsat at dette begrundes og dokumenteres videnskabeligt forsvarligt med fuldstændige litteraturhenvisninger og beskrivelse af metoden.
However, other endpoints for assessment of proliferation may be employed provided there is justification and appropriate scientific support, including full citations and description of the methodology.
Dyrene udtages på tilfældig måde, mærkes, så hvert dyr kan identificeres (dog ikke ved nogen form for mærkning af øret) og holdes i deres bure i mindst fem døgn forud for doseringen, for at de kan akklimatisere sig til forsøgsbetingelserne.
The animals are randomly selected, marked to permit individual identification (but not by any form of ear marking), and kept in their cages for at least 5 days prior to the start of dosing to allow for acclimatisation to the laboratory conditions.
Før behandlingen påbegyndes, undersøges alle dyr for at sikre, at de er uden observerbare hudlæsioner.
Prior to the start of treatment all animals are examined to ensure that they have no observable skin lesions.
Ved forsøgets begyndelse skal dyrene være 8-12 uger gamle, og vægtvariationen mellem de anvendte dyr være mindst mulig og må ikke overstige 20 % af gennemsnitsvægten.
At the start of the study, animals should be between eight to 12 weeks old, and the weight variation of the animals should be minimal and not exceed 20 % of the mean weight.
Andre stammer og handyr kan anvendes, når der er genereret tilstrækkelige data til at dokumentere, at der ikke er væsentlige stamme- og/eller kønsspecifikke forskelle i LLNA-respons.
Other strains and males may be used when sufficient data are generated to demonstrate that significant strain and/or gender-specific differences in the LLNA response do not exist.
Kvalitetskontrol
Reliability check
I forsøget anvendes positive kontroller til at godtgøre, at assayets præstationer og laboratoriets kompetence er tilstrækkelige til at assayet bliver vellykket.
Positive controls are used to demonstrate appropriate performance of the assay and competency of the laboratory to successfully conduct the assay.
Dosis til den positive kontrol skal vælges således, at der er tydelig, men ikke overdreven induktion, De foretrukne stoffer hertil er hexylkanelaldehyd (CAS nr. 101-86-0, Einecs nr. 202-983-3) og mercaptobenzothiazol (CAS nr. 149-30-4, Einecs nr. 205-736-8).
Preferred substances are hexyl cinnamic aldehyde (CAS No 101-86-0, EINECS No 202-983-3) and mercaptobenzothiazole (CAS No 149-30-4, EINECS No 205-736-8).
Der kan forekomme omstændigheder, hvor man kan anvende andre kontrolstoffer, som opfylder ovenstående kriterier, forudsat at dette er velbegrundet.
There may be circumstances in which, given adequate justification, other control substances, meeting the above criteria, may be used.
Sædvanligvis vil en positiv kontrolgruppe i hvert assay være nødvendig, men undertiden råder prøvningslaboratorierne over historiske positive kontroldata, som viser ensartet tilfredsstillende respons gennem en seks måneders periode eller længere.
While ordinarily a positive control group may be required in each assay, there may be situations in which test laboratories will have available historic positive control data to show consistency of a satisfactory response over a six-month or more extended period.
Under sådanne omstændigheder kan mindre hyppig testning med positive kontroller være på sin plads med intervaller på højst seks måneder.
In those situations, less frequent testing with positive controls may be appropriate at intervals no greater than six months.
Skønt det positive kontrolstof bør afprøves i et vehikel, som vides at fremkalde ensartet respons (f.eks. acetone, olivenolie), kan det i visse godkendelsessituationer desuden være nødvendigt med testning i andre vehikler end standardvehiklet (med en klinisk-kemisk relevant formulering).
Although the positive control substance should be tested in the vehicle that is known to elicit a consistent response (e.g. acetone: olive oil), there may be certain regulatory situations in which testing in non-standard vehicle (clinically/chemically relevant formulation) will also be necessary.
I sådanne tilfælde bør en mulig interaktion mellem et positivt kontrolstof og det pågældende ukonventionelle vehikel undersøges.
In such situation the possible interaction of a positive control with this unconventional vehicle should be tested.
Antal dyr, dosisniveauer og valg af vehikel
Number of animals, dose levels and vehicle selection.
Der anvendes mindst fire dyr i hver dosisgruppe, mindst tre forskellige koncentrationer af prøvestoffet, en negativ kontrolgruppe, som udelukkende behandles med det til prøvestoffet anvendte vehikel, samt, når det er hensigtsmæssigt, en positiv kontrolgruppe.
A minimum of four animals is used per dose group, with a minimum of three concentrations of the test substance, plus a negative control group treated only with the vehicle for the test substance, and, as appropriate, a positive control.
Når data skal indsamles fra de enkelte dyr, anvendes mindst fem dyr i hver dosisgruppe.
In those cases in which individual animal data are to be collected, a minimum of five animals per dose group are used.
Bortset fra behandlingen med prøvestof behandles dyrene i kontrolgrupperne på samme måde som dyrene i behandlingsgrupperne.
Except for absence of treatment with the test substance, animals in the control groups should be handled and treated in a manner identical to that of animals in the treatment groups.
Dosering og valg af vehikel baseres på anbefalingerne i henvisning (1).
Dose and vehicle selection should be based on the recommendations given in reference (1).
Dosisniveauerne vælges af koncentrationsserier på 100 %, 50 %, 25 %, 10 %, 5 %, 2,5 %, 1 %, 0,5 % osv. Foreliggende data vedrørende akut toksicitet og hudirritation tages i betragtning, således at der vælges tre på hinanden følgende koncentrationer, hvoraf den højeste er den. der giver størst mulig eksponering uden systemisk toksicitet eller for stærk hudirritation (2)(11).
Doses are selected from the concentration series 100 %, 50 %, 25 %, 10 %, 5 %, 2,5 %, 1 %, 0,5 % etc. Existing acute toxicity and dermal irritation data should be considered, where available, in selecting the three consecutive concentrations so that the highest concentration maximises exposure whilst avoiding systemic toxicity and excessive local skin irritation (2)(11).
Vehiklet vælges således, at testkoncentrationer og opløselighed maksimeres, samtidig med al den fremstillede opløsning/suspension er egnet til påføring af prøvestoffet.
The vehicle should be selected on the basis of maximising the test concentrations and solubility whilst producing a solution/suspension suitable for application of the test substance.
De anbefalede vehikler er i prioriteret rækkefølge acetone/olivenolie (4:1 v/v), dimethylformamid. methylethylketon, propylenglycol og dimethylsulphoxid (2)(10), men andre kan anvendes, hvis der fremlægges et fyldestgørende videnskabeligt rationale derfor.
In order of preference, recommended vehicles are acetone/olive oil (4:1 v/v), dimethylformamide, methyl ethyl ketone, propylene glycol and dimethyl sulphoxide (2)(10), but others may be used if sufficient scientific rationale is provided.
I visse situationer kan det som yderligere kontrol være nødvendigt med et klinisk relevant opløsningsmiddel eller den formulering, hvori prøvestoffet markedsføres.
In certain situations it may be necessary to use a clinically relevant solvent or the commercial formulation in which the test substance is marketed as an additional control.
Man må specielt være opmærksom på, at vehikelsystemet bør indeholde hydrofile stoffer, som befugter huden og ikke straks løber af. Vehikler kun bestående af vand bør således undgås.
Particular care should be taken to ensure that hydrophilic materials are incorporated into a vehicle system, which wets the skin and does not immediately run off. Thus, wholly aqueous vehicles are to be avoided.
Forsøgsplan
Experimental schedule
Forsøgsplanen for assayet er følgende:
The experimental schedule of the assay is as follows:
Dag 1
Day 1:
Hvert dyrs vægt bestemmes og registreres.
individually identify and record the weight of each animal.
Dorsum af hvert øre påføres åbent 25 μl af den pågældende prøvestofkoncentration, af vehiklet alene eller af det positive kontrolstof.
Open application of 25μl of the appropriate dilution of the test substance, the vehicle alone, or the positive control (as appropriate), to the dorsum of each ear.
Dag 2 og 3
Days 2 and 3:
Påføringen fra dag 1 gentages.
repeat the application procedure carried out on day 1.
Dag 4 og 5
Days 4 and 5:
Ingen behandling.
no treatment.
Fem timer senere aflives dyrene.
Five hours later, the animals are killed.
De drænende aurikulære lymfeknuder fra hvert øre eksciseres og pooles i saltvand med phosphatbuffer for hver forsøgsgruppe (metode med poolet behandlingsgruppe); alternativt kan hvert par lymfeknuder fra hvert enkelt dyr eksciseres og pooles i saltvand med phosphatbuffer for hvert dyr (enkeltdyrsmetode).
The draining auricular lymph nodes from each ear are excised and pooled in PBS for each experimental group (pooled treatment group approach); alternatively pairs of lymph nodes from individual animals may be excised and pooled in PBS for each animal (individual animal approach).
Detaljer og diagrammer vedrørende identifikation og dissektion af lymfeknuder findes i bilag I til henvisning (10).
Details and diagrams of the node identification and dissection can be found in Appendix I of reference 10.
Fremstilling af cellesuspensioner
Preparation of cell suspensions
En enkeltcellesuspension af lymfeknudeceller (LNC) enten fra de poolede behandlingsgrupper eller bilateralt fra de enkelte dyr fremstilles ved forsigtig mekanisk disaggregering gennem 200 μm trådnet af rustfrit stål.
A single cell suspension of lymph node cells (LNC) either from pooled treatment groups or bilaterally from individual animals is prepared by gentle mechanical disaggregation through 200 μm-mesh stainless steel gauze.
Lymfeknudecellerne vaskes to gange med overskud af saltvand med phosphatbuffer og fældes med 5 % trichloreddikesyre (TCA) ved 4 oC i 18 timer (2).
Lymph node cells are washed twice with an excess of PBS and precipitated with 5 % trichloroacetic acid (TCA) at 4 oC for 18h (2).
De dannede pellets genopslæmmes enten i 1 ml TCA og overføres til scintillationsglas indeholdende 10 ml scintillatorvæske til 3H-tælling, eller overføres direkte i gamma-tælleglas til tælling af 125l.
Pellets are either re-suspended in 1 ml TCA and transferred to scintillation vials containing 10 ml of scintillation fluid for 3H-counting, or transferred directly to gamma counting tubes for 125I-counting.
Bestemmelse af celleproliferationen (optagen radioaktivitet)
Determination of cell proliferation (incorporated radioactivity)
Optagelsen af 3H-methylthymidin måles ved β-scintillationstælling som antal disintegrationer pr. minut (DPM).
Incorporation of 3H-methyl thymidine is measured by β-scintillation counting as disintegrations per minute (DPM).
Optagelsen af 125l-ioddeoxyuridin måles ved 125l-tælling og angives også som DPM.
Incorporation of 125I-iododeoxyuridine is measured by 125I-counting and also is expressed as DPM.
Afhængigt af den valgte metode angives optagelsen som DPM/behandlingsgruppe (poolet metode) eller DPM/dyr (individuel metode).
Depending on the approach used, the incorporation will be expressed as DPM/treatment group (pooled approach) or the DPM/animal (individual approach).
Dyrene observeres en gang dagligt for alle kliniske tegn på lokalirritation på påføringsstedet og systemisk toksicitet.
Animals should be carefully observed once daily for any clinical signs, either of local irritation at the application site or of systemic toxicity.
Kropsvægt
Body weights
Som angivet i 1.3.3.1 måles kropsvægten af hvert dyr ved forsøgets begyndelse og ved den planmæssige aflivning af dyrene.
As stated in section 1.3.3.1, individual animal body weights should be measured at the start of the test and at the scheduled kill of the animals.
Ved enkeltdyrsmetoden fås Sl-værdien ved at dividere den gennemsnitlige DPM/dyr fra hver stof-testgruppe og den positive kontrolgruppe med den gennemsnitlige DPM/dyr fra opløsningsmiddel/vehikel-kontrolgruppen.
When using the individual approach, the SI is derived by dividing the mean DPM/animal within each test substance group and the positive control group by the mean DPM/animal for the solvent/vehicle control group.
Gennemsnitsværdien for de vehikelbehandlede kontroldyr er således 1.
The average SI for vehicle treated controls is then 1.
Ved at bruge enkeltdyrsmetoden til beregning af SI får man mulighed for en statistisk analyse af data.
Use of the individual approach to calculate the SI will enable the performance of a statistical analysis of the data.
Ved valg af statistisk analysemetode bør undersøgeren være opmærksom på mulige forskelle i varians eller andre tilknyttede problemer, som kan kræve transformation af data eller anvendelse af ikke-parametrisk statistisk analyse.
In choosing an appropriate method of statistical analysis the investigator should maintain an awareness of possible inequalities of variances and other related problems that may necessitate a data transformation or a non-parametric statistical analysis.
En hensigtsmæssig metode til fortolkning af data er at vurdere alle individuelle data for behandlede dyr og kontroldyr på vehikel og på grundlag heraf optegne den bedst tilpassede dosis-responskurve, idet der tages hensyn til konfidensgrænserne (8)(12)(13).
An adequate approach for interpreting the data is to evaluate all individual data of treated and vehicle controls, and derive from these the best fitting dose response curve, taking confidence limits into account (8)(12)(13).
Undersøgeren må dog være på vagt over for mulige »vildskud« i form af responsværdier for enkeltdyr, som falder uden for gruppen og kan gøre det nødvendigt at benytte et alternativt mål for responsen (f.eks. medianværdi i stedet for gennemsnit) eller frasortering af vildskuddet.
However, the investigator should be alert to possible ‘outlier’ responses for individual animals within a group that may necessitate the use of an alternative measure of response (e.g. median rather than mean) or elimination of the outlier.
Afgørelsen vedrørende en positiv respons omfatter et stimulationsindeks ≥ 3 foruden en gennemgang af dosis-respons og, når det er hensigtsmæssigt, statistisk signifikans (3)(6)(8)(12)(14).
The decision process with regard to a positive response includes a stimulation index ≥ 3 together with consideration of dose-response and, where appropriate, statistical significance (3)(6)(8)(12)(14).
Hvis det er nødvendigt at klargøre de opnåede resultater, bør forskellige egenskaber af prøvestoffet tages i betragtning, herunder om det er strukturelt beslægtet med kendte hudsensibiliserende stoffer, om det medfører kraftig hudirritation og arten af den iagttagne dosis-respons.
If it is necessary to clarify the results obtained, consideration should be given to various properties of the test substance, including whether it has a structural relationship to known skin sensitisers, whether it causes excessive skin irritation and the nature of the dose response seen.
Disse og andre overvejelser er der mere indgående redegjort for andetsteds (7).
These and other considerations are discussed in detail elsewhere (7).
Data sammenfattes i tabelform med angivelse af gennemsnitlige og individuelle DPM-værdier og stimulationsindeks for hver dosisgruppe (herunder også kontrolgruppen på vehikel).
Data should be summarised in tabular form showing the mean and individual DPM values and stimulation indexes for each dose (including vehicle control) group.
Forsøgsrapporten skal indeholde følgende oplysninger:
The test report should contain the following information
Teststof:
test substance:
identifikationsoplysninger (f.eks. CAS-nummer, hvis det findes, oprindelse, renhed, kendte urenheder, batch-nummer)
identification data (e.g. CAS number, if available, source, purity, known impurities, lotnumber),
fysisk tilstand og fysisk-kemiske egenskaber (f.eks. flygtighed, stabilitet, opløselighed)
physical nature and physicochemical properties (e.g. volatility, stability, solubility),
identifikationsoplysninger (renhed, koncentration (i givet fald); anvendt volumen)
identification data (purity, concentration (where appropriate); volume used)
den anvendte musestamme
strain of mice used,
enkeltheder vedrørende præparation og påføring af prøvestoffet
details of test substance preparation and application,
begrundelse af den valgte dosis, herunder resultaterne af dosistitreringsundersøgelsen, hvis en sådan er udført; anvendte koncentrationer af vehikel og prøvestof, og samlet mængde påført stof
justification for dose selection, including results from range finding study, if conducted; vehicle and test substance concentrations used and the total amount of substance applied,
oplysninger om foderets og vandets kvalitet (herunder fødens art/oprindelse, vandets oprindelse).
details of food and water quality (including diet type/source, water source).
Pålidelighedskontrol:
Reliability check:
sammenfatning af resultaterne af den seneste pålidelighedskontrol, herunder oplysninger om stoffet og anvendt koncentration og vehikel
a summary of the results of the latest reliability check including information on substance, concentration and vehicle used,
sideløbende og/eller historiske data for positive og negative kontroller fra prøvelaboratoriet
concurrent and/or historical positive and negative control data for testing laboratory.
de enkelte dyrs vægt ved doseringens begyndelse og ved den planmæssige aflivning
individual weights of animals at the start of dosing and at scheduled kill,
en tabel med gennemsnitlige (poolet metode) eller individuelle (enkeltdyrsmetode) DPM-værdier samt variationen af værdier for begge metoder og stimulationsindeks for hver dosisgruppe (herunder også kontrolgruppen på vehikel)
a table of mean (pooled approach) and individual (individual approach) DPM values as well as the range of values for both approaches and the stimulation indices for each dose (including vehicle control) group,
statistisk analyse, når det er hensigtsmæssigt
statistical analysis where appropriate,
tidspunkt for indtræden af og tegnene på toksicitet, herunder eventuel hudirritation på administrationsstedet for hvert dyr
time course of onset and signs of toxicity, including dermal irritation at site of administration, if any, for each animal.
Diskussion af resultaterne:
Discussion of results:
Kortfattet kommentar til resultaterne, dosis-responsanalyse og i givet fald statistisk analyse, med en konklusion mht. til om det undersøgte stof må anses for hudirriterende.
a brief commentary on the results, the dose-response analysis, and statistical analyses, where appropriate, with a conclusion as to whether the test substance should be considered a skin sensitiser.
Food and Chemical Toxicology 30, 165-169.
Food and Chemical Toxicology 30, p. 165-169.
Toxicology, 93, 13-31.
Toxicology, 93, p. 13-31.
Kimber, I., Hilton, J., Dearman, R.J., Gerberick, G.F., Ryan, C,A., Basketter, DA. Lea, L,. House, R,V. Ladies, G.S., Loveless, S.E., Hastings, K.L. (1998).
Kimber, I., Hilton, J., Dearman, R.J., Gerberick, G.F., Ryan, C.A., Basketter, D.A., Lea, L., House, R.V., Ladies, G.S., Loveless, S.E., Hastings, K.L., (1998) Assessment of the skin sensitisation potential of topical medicaments using the local lymph node assay: An interlaboratory exercise.
Assessment of the skin sensitisation potential of topical medicaments using the local lymph node assay: An interlaboratory exercise Journal of Toxicology and Environmental Health, 53, 563-79.
Journal of Toxicology and Environmental Health, 53, p. 563-79.
2 Chamberlain, M. and Basketter, D.A. (1996) The local lymph node assay: status of validation.
Chamberlain, M. and Basketter, D.A., (1996) The local lymph node assay: status of validation.
Food and Chemical Toxicology, 34, 999-1002.
Food and Chemical Toxicology, 34, p. 999-1002.
Basketter, D.A., Gerberick, G.F., Kimber. I. and Loveless, S.E (1996). The local lymph node assay- A viable alternative to currently accepted skin sensitisation tests.
Basketter, D.A., Gerberick, G.F., Kimber, I. and Loveless, S.E., (1996) The local lymph node assay- A viable alternative to currently accepted skin sensitisation tests.
Food and Chemical Toxicology, 34, 985-997.
Food and Chemical Toxicology, 34, p. 985-997.
Toxicology, 146, 49-59.
Toxicology, 146, p. 49-59.
Journal of Applied Toxicology, 18, 281-4.
Journal of Applied Toxicology, 18, p. 281-4.
Food and Chemical Toxicology, 31, 63-67.
Food and Chemical Toxicology, 31, p. 63-67.
Toxicology, 19, 261-266.
Toxicology, 19, p. 261-266.