natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Andre opløsningsmidler med lav cytotoksicitet kan også være velegnede.
Other solvents of low cytotoxicity may be appropriate.
Inden brug skal alle opløsningsmidler vurderes for specifikke egenskaber f.eks. reaktion med testkemikaliet, quenching af den fototoksiske effekt, evne til at opfange radikaler og/eller kemisk stabilitet i opløsningen.
Prior to use, all solvents should be assessed for specific properties, e.g. reaction with the test chemical, quenching of the phototoxic effect, radical scavenging properties and/or chemical stability in the solvent.
Vortexblanding og/eller ultralydbehandling og/eller opvarmning til passende temperaturer kan anvendes for at fremme opløsningen, medmindre dette kan påvirke testkemikaliets stabilitet.
Vortex mixing and/or sonication and/or warming to appropriate temperatures may be used to aid solubilisation unless this would affect the stability of the test chemical.
Betingelser for bestråling
Irradiation conditions
Valg af den rette lyskilde og filtre er en afgørende faktor i fototoksicitetstestning.
The choice of an appropriate light source and filters is a crucial factor in phototoxicity testing.
Lys i UVA-området og det synlige område forbindes almindeligvis med fototoksiske reaktioner in vivo (3)(12), hvorimod UVB ofte er mindre relevant, men kraftigt cytotoksisk. Cytotoksiciteten stiger 1000 gange, når bølgelængden går fra 313 til 280 nm (13).
Light of the UVA and visible regions is usually associated with phototoxic reactions in vivo (3)(12), whereas generally UVB is of less relevance but is highly cytotoxic; the cytotoxicity increases 1000-fold as the wavelength goes from 313 to 280 nm (13).
Kriterierne for valg af passende lyskilde skal bl.a. omfatte krav om, at lyskilden udsender bølgelængder, der absorberes af testkemikaliet (absorptionsspektrum), og at lysmængden (der kan opnås inden for en acceptabel eksponeringstid) skal være tilstrækkelig til bestemmelse af kendte fotocytotoksiske kemiske stoffer.
Criteria for the choice of an appropriate light source must include the requirement that the light source emits wavelengths absorbed by the test chemical (absorption spectrum) and that the dose of light (achievable in a reasonable exposure time) should be sufficient for the detection of known photocytotoxic chemicals.
Endvidere skal bølgelængder og de anvendte doser ikke påføre testsystemet unødige skader, f.eks. som følge af varmestråling (det infrarøde område).
Furthermore, the wavelengths and doses employed should not be unduly deleterious to the test system, e.g. the emission of heat (infrared region).
Simulering af sollys med solsimulatorer anses for at være den optimale kunstlyskilde.
Simulation of sunlight with solar simulators is considered the optimal artificial light source.
Fordelingen af bestråling s styrken i den filtrerede solsimulator skal ligge tæt på fordelingen i udendørs dagslys, som det fremgår af (14).
The irradiation power distribution of the filtered solar simulator should be close to that of outdoor daylight given in (14).
Både xenonlysbuer og (doterede) kviksølvmetalhalogenidlysbuer anvendes som solsimulatorer (15).
Both, Xenon arcs and (doped) mercury-metal halide arcs are used as solar simulators (15).
Sidstnævnte har den fordel, at de udsender mindre varme og er billigere, men ligheden med sollys er knap så perfekt som xenonlysbuernes.
The latter has the advantage of emitting less heat and being cheaper, but the match to sunlight is less perfect compared to that of xenon arcs.
Eftersom alle solsimulatorer udsender væsentlige mængder UVB, skal de være behørigt filtrerede for at dæmpe de stærkt cytotoksiske UVB-bølgelængder.
Because all solar simulators emit significant quantities of UVB they should be suitably filtered to attenuate the highly cytotoxic UVB wavelengths.
Da plastmaterialer til cellekulturer indeholder UV-stabilisatorer, skal spektret måles gennem den samme type 96-huls pladelåg, som anvendes ved testningen.
Because cell culture plastic materials contain UV stabilisers the spectrum should be measured through the same type of 96-well plate lid as will be used in the assay.
Uanset hvilke forholdsregler der er taget for at dæmpe dele af spektret ved filtrering eller som følge af uundgåelige filtereffekter fra udstyret, må det spektrum, der måles på under disse filtre, ikke afvige fra standard udendørs dagslys (14).
Irrespective of measures taken to attenuate parts of the spectrum by filtering or by unavoidable filter effects of the equipment the spectrum recorded below these filters should not deviate from standardised outdoor daylight (14).
Et eksempel på den spektrale strålingsintensitetsfordeling i den filtrerede solsimulator, der anvendes i valideringsundersøgelsen i in vitro 3T3 NRU-fototoksicitetstesten, fremgår af (8)(16).
An example of the spectral irradiance distribution of the filtered solar simulator used in the validation study of the in vitro 3T3 NRU phototoxicity test is given in (8)(16).
Se også bilag 2, figur 1.
See also Appendix 2 Figure 1.
Dosimetri
Dosimetry
Lysintensiteten kontrolleres regelmæssigt før hver fototoksicitetstest ved hjælp af et bredbåndet UV-meter.
The intensity of light (irradiance) should be regularly checked before each phototoxicity test using a suitable broadband UV-meter.
Intensiteten måles gennem den samme type 96-huls pladelåg, som anvendes ved testen.
The intensity should be measured through the same type of 96-well plate lid as will be used in the assay.
UV-meteret skal være kalibreret til kilden.
The UV-meter must have been calibrated to the source.
UV-meterets ydelse kontrolleres, og til dette formål anbefales det at anvende et ekstra UV-meter af samme type og med samme kalibrering som reference.
The performance of the UV-meter should be checked, and for this purpose the use of a second, reference UV-meter of the same type and identical calibration is recommended.
Det optimale ville være, med lidt længere mellemrum, at anvende et spektroradiometer til måling af den spektrale intensitet af den filtrerede lyskilde og til kontrol af kalibreringen af det bredbåndede UV-meter.
Ideally, at greater intervals, a spectroradiometer should be used to measure the spectral irradiance of the filtered light source and to check the calibration of the broadband UV-meter.
En dosis på 5 J/cm2 (målt i UVA-området) er blevet bestemt til at være ikke-cytotoksisk for Balb/c 3T3-celler og tilstrækkelig kraftig til at få kemiske stoffer til at udløse fototoksiske reaktioner (6) (17). For at nå op på 5 J/cm2 inden for en periode på 50 min blev intensiteten f.eks. justeret til 1,7 mW/cm2.
A dose of 5 J/cm2 (as measured in the UVA range) was determined to be non-cytotoxic to Balb/c 3T3 cells and sufficiently potent to excite chemicals to elicit phototoxic reactions, (6) (17) e.g. to achieve 5 J/cm2 within a time period of 50 min, irradiance was adjusted to 1,7 mW/cm2.
Se bilag 2, figur 2.
See Appendix 2 Figure 2.
Hvis der anvendes en anden cellelinje eller en anden lyskilde, skal strålingsdosen eventuelt kalibreres, så der vælges en dosering, der ikke er skadelig for cellerne, men samtidig tilstrækkelig til at udløse standardfototoksiner.
If another cell line or a different light source are used, the irradiation dose may have to be calibrated so that a dose regimen can be selected that is not deleterious to the cells but sufficient to excite standard phototoxins.
Lyseksponeringens varighed beregnes på følgende måde:
The time of light exposure is calculated in the following way:
t(min)=bestrålinsgdosis (J/ cm
t(min)=irradiation dose (J/cm
strålingsitensitet (mW/ cm
irradiance (mW/cm
= 1 Wsek)
(1 J = 1 Wsec)
Teststoffets koncentrationer
Test substance concentrations
Koncentrationsområdet for et kemisk stof, der testes henholdsvis med (+Irr) og uden (–Irr) lys, skal nøje fastlægges ud fra eksperimenter til bestemmelse af dosisområde.
The ranges of concentrations of a chemical tested in the presence (+Irr) and in the absence (-Irr) of light should be adequately determined in dose range-finding experiments.
Den højeste koncentration af teststoffet skal ligge inden for fysiologiske testforhold. F.eks. skal belastende osmotiske og pH-mæssige forhold undgås.
The highest concentration of the test substance should be within physiological test conditions, e.g. osmotic and pH stress should be avoided.
Afhængigt af teststof kan det være nødvendigt at overveje andre fysisk-kemiske egenskaber som faktorer til fastlæggelse af den højeste testkoncentration.
Depending on the test chemical, it may be necessary to consider other physico-chemical properties as factors limiting the highest test concentration.
Med hensyn til relativt opløselige stoffer, der ikke er toksiske ved koncentrationer op til mætningspunktet, skal den højest mulige koncentration testes.
For relatively insoluble substances that are not toxic at concentrations up to the saturation point the highest achievable concentration should be tested.
Generelt skal man undgå udfældning af teststoffet ved enhver testkoncentration.
In general, precipitation of the test chemical at any of the test concentrations should be avoided.
Den maksimale koncentration af et teststof bør ikke overstige 1000 μg/ml. Osmolalitet bør ikke overstige 10 mM.
The maximum concentration of a test substance should not exceed 1000 μg/mL; osmolarity should not exceed 10 mmolar.
Der skal anvendes en geometrisk fortyndingsrække bestående af otte teststofkoncentrationer med en konstant fortyndingsfaktor (se punkt 2.1, andet afsnit).
A geometric dilution series of eight test substance concentrations with a constant dilution factor should be used (See Section 2.1, second paragraph).
Hvis der findes oplysninger (fra et eksperiment til områdebestemmelse) om, at testkemikaliet ikke er cytotoksisk op til grænsekoncentrationen i mørkeeksperimentet (–Irr), men at det er stærkt cytotoksisk, når det bestråles (+Irr), kan man for at overholde kvalitetskravene til relevante data vøæge andre koncentrationsområder for (+Irr)-eksperimentet end dem, der er valgt for (–Irr)-eksperimentet.
If there is information (from a range finding experiment) that the test chemical is not cytotoxic up to the limit concentration in the dark experiment (-Irr), but is highly cytotoxic when irradiated (+Irr), the concentration ranges to be selected for the (+Irr) experiment may differ from those selected for the (-Irr) experiment to fulfill the requirement of adequate data quality.
Cellernes strålingsfølsomhed, etablering af historiske data
Radiation sensitivity of the cells, establishing of historical data:
Celler skal kontrolleres regelmæssigt (ca. ved hver femte cellegeneration) for følsomhed over for lyskilden ved at vurdere deres levedygtighed efter at være eksponeret for stigende doser af bestråling.
Cells should be checked regularly (about every fifth passage) for sensitivity to the light source by assessing their viability following exposure to increasing doses of irradiation.
Til denne vurdering skal der anvendes adskillige bestrålingsdoser og også niveauer, der er væsentligt højere end de værdier, der anvendes ved 3T3 NRU-fototoksicitetstest.
Several doses of irradiation, including levels substantially greater than those used for the 3T3 NRU Phototoxicity test should be used in this assessment.
Disse doser kvantificeres lettest ved at måle UV-dele af lyskilden.
These doses are easiest quantitated by measurements of UV parts of the light source.
Celler podes med den tæthed, der er anvendt i in vitro 3T3 NRU-fototoksicitetstesten, og bestråles den følgende dag.
Cells are seeded at the density used in the in vitro 3T3 NRU phototoxicity test and irradiated the next day.
Cellelevedygtigheden bestemmes en dag senere ud fra Neutral Red-optagelsen.
Cell viability is then determined one day later using Neutral Red uptake.
Det skal påvises, at den heraf følgende højeste ikke-cytotoksiske dosis (f.eks. i valideringsundersøgelsen: 5 J/cm2 [UVA]) var tilstrækkelig til at klassificere referencekemikalierne (tabel 1) korrekt.
It should be demonstrated that the resulting highest non-cytotoxic dose (e.g. in the validation study: 5 J/cm2 [UVA]) was sufficient to classify the reference chemicals (Table 1) correctly.
Strålingsfølsomhed, kontrol af den aktuelle test
Radiation sensitivity, check of current test:
Testen overholder kvalitetskriterierne, hvis de bestrålede negative/opløsningsmiddelholdige kontrolkulturer udviser en levedygtighed på mere end 80 % sammenlignet med ikke-bestrålede negative/opløsningsmiddelholdige kontroller.
The test meets the quality criteria if the irradiated negative/solvent controls show a viability of more than 80 % when compared with non-irradiated negative/solvent.
Levedygtigheden for kontrolkulturer med opløsningsmiddel
Viability of solvent controls:
Den absolutte absorbans (optical density) (od540 nru) for Neutral Red ekstraheret fra kontrolkulturer med opløsningsmiddel indikerer, om de 1 × 104 celler, der er podet pr. hul, har vokset med normal fordoblingstid i løbet af testens to dage.
The absolute optical density (OD540 NRU) of the Neutral Red extracted from the solvent controls indicates whether the 1×104 cells seeded per well have grown with a normal doubling time during the two days of the assay.
En testning opfylder de accepterede kriterier, hvis middelværdien af OD540 nru for de ubehandlede kontrolkulturer er ≥ 0,4 (dvs. ca. 20 gange baggrundsopløsningsmidlets absorbans).
A test meets the acceptance criteria if the mean OD540 NRU of the untreated controls is ≥ 0,4 (i.e. approximately 20 times the background solvent absorbance).
Positiv kontrol
Positive control:
Et velkendt fototoksisk kemisk stof skal undersøges sideløbende med hver in vitro 3T3 NRU-fototoksicitetstest.
A known phototoxic chemical shall be tested concurrently with each in vitro 3T3 NRU phototoxicity test.
Klorpromazin (CPZ) kan anbefales hertil.
Chlorpromazine (CPZ) is recommended.
For CPZ, der testes ifølge standardprotokollen for in vitro 3T3 NRU-fototoksicitetstesten, er der defineret følgende godkendelseskriterier for afprøvningen: bestrålet CPZ (+Irr): IC50 = 0,1 til 2,0 g/ml, ikke-bestrålet CPZ (–Irr): IC50 = 7,0 til 90,0 g/ml.
For CPZ tested with the standard protocol in the in vitro 3T3 NRU phototoxicity test, the following test acceptance criteria were defined: CPZ irradiated (+Irr): IC50 = 0,1 to 2,0 μg/ml, CPZ non-irradiated (-Irr): IC50 = 7,0 to 90,0 μg/mL.
Fotoirritationsfaktoren (PIF) skal være > 6.
The Photo Irritation Factor (PIF), should be > 6.
Den positive kontrols historiske ydelse skal overvåges.
The historical performance of the positive control should be monitored.
Andre fototoksiske kemikalier, der er velegnede i forhold til den kemiske klasse eller opløselighedskarakteristikken af det kemiske stof, der skal evalueres, kan anvendes som sideløbende positiv kontrol i stedet for klorpromazin.
Other phototoxic chemicals, suitable for the chemical class or solubility characteristics of the chemical being evaluated, may be used as the concurrent positive controls in place of chlorpromazine.
Testprocedure (6)(7)(8)(16)(17)
Test procedure (6)(7)(8)(16)(17):
Tredjedag:
day:
Der anbringes 100 μl kulturmedium i de ydre huller i en 96-huls mikrotiterplade til vævskultur (= negative kontroller).
Dispense 100 μL culture medium into the peripheral wells of a 96-well tissue culture microtiter plate (= blanks).
I de øvrige huller tilsættes 100 μl af en cellesuspension med 1 × 105 celler/ml i kulturmedium (= 1 × 104 celler/hul).
In the remaining wells, dispense 100 μL of a cell suspension of 1×105 cells/mL in culture medium (= 1×104 cells/well).
Der skal klargøres to plader for hver serie af individuelle teststofkoncentrationer samt til opløsningsmiddelkontrollen og den positive kontrol.
Two plates should be prepared for each series of individual test substance concentrations, and for the solvent and positive controls.
Cellerne inkuberes i 24 timer (se punkt 1.4.1.2), indtil de danner et halvt sammenflydende encellet lag.
Incubate cells for 24 h (See Section 1.4.1.2) until they form a half confluent monolayer.
Denne inkubationsperiode tillader cellegendannelse, adhæsion og eksponentiel vækst.
This incubation period allows for cell recovery, adherence, and exponential growth.
Efter inkubation dekanteres kulturmediet fra cellerne, som vaskes omhyggeligt med 150 μl af det bufferopløsningsmiddel, der blev anvendt til inkubationen.
After incubation, decant culture medium from the cells and wash carefully with 150 μL of the buffered solution used for incubation.
Der tilsættes 100 μl af bufferen med den korrekte koncentration af teststoffet eller opløsningsmidlet (kontrolkultur med opløsningsmiddel).
Add 100 μL of the buffer containing the appropriate concentration of test chemical or solvent (solvent control).
Der benyttes otte forskellige koncentrationer af teststoffet.
Apply eight different concentrations of the test chemical.
Cellerne med teststoffet inkuberes i mørke i 60 minutter (se punkt 1.4.1.2 og punkt 1.4.1.4, andet afsnit).
Incubate cells with the test substance in the dark for 60 minutes (See Section 1.4.1.2 and 1.4.1.4 second paragraph).
Blandt de to plader, der er klargjort til hver serie koncentrationer af teststof og kontrolmateriale, udvælges der en tilfældig plade til bestemmelse af cytotoksicitet (–Irr), dvs. kontrolpladen, og desuden en behandlingsplade til bestemmelse af fotocytotoksicitet (+Irr).
From the two plates prepared for each series of test substance concentrations and the controls, one is selected, generally at random, for the determination of cytotoxicity (-Irr) (i.e., the control plate), and one (the treatment plate) for the determination of photocytotoxicity (+Irr).
+Irr-eksponeringen gennemføres ved at bestråle cellerne ved stuetemperatur i 50 minutter gennem låget på 96-huls pladen med den størst mulige strålingsdosis, der ikke er cytotoksisk (se også bilag 2).
To perform the +Irr exposure, irradiate the cells at room temperature for 50 minutes through the lid of the 96-well plate with the highest dose of radiation that is non-cytotoxic (see also Appendix 2).
Ikke-bestrålede plader (–Irr) opbevares ved stuetemperatur i en mørk kasse i 50 minutter (= lyseksponeringstiden).
Keep non-irradiated plates (-Irr) at room temperature in a dark box for 50 min (= light exposure time).
Testopløsningen dekanteres fra, og der vaskes to gange omhyggeligt med 150 μl af den bufferopløsning, der anvendes til inkubation, men som ikke indeholder teststoffet.
Decant test solution and carefully wash twice with 150 μL of the buffered solution used for incubation, but not containing the test material.
Bufferen erstattes med kulturmediet, og der inkuberes til næste dag (18-22 timer). Se punkt 1.4.1.2.
Replace the buffer with culture medium and incubate (See Section 1.4.1.2.) overnight (18-22 h).
Mikroskopisk evaluering
Microscopic evaluation
Med et fasekontrast-mikroskop undersøges cellerne med hensyn til vækst, morfologi og enkeltlagets integritet.
Cells should be examined for growth, morphology, and integrity of the monolayer using a phase contrast microscope.
Ændringer i cellemorfologi og påvirkninger af cellevækst registreres.
Changes in cell morphology and effects on cell growth should be recorded.
Test af optagelsen af Neutral Red
Neutral Red uptake test
Cellerne vaskes med 150 μl forvarmet buffer.
Wash the cells with 150 μL of the pre-warmed buffer.
Vaskeopløsningen fjernes ved at banke let på pladen.
Remove the washing solution by gentle tapping.
Der tilsættes 100 μl af en 50 μg/ml Neutral Red (NR) (3-amino-7-dimethylamino-2-methylphenazinhydrochlorid, EINECS nr. 209-035-8; CAS nr. 553-24-2; C.I.
Add 100 μL of a 50 μg/mL Neutral Red (NR) (3-amino-7-dimethylamino-2-methylphenazine hydrochloride, EINECS number 209-035-8; CAS number 553-24-2; C.I.
til dyrkningsmediet uden serum (16), og der inkuberes som beskrevet i punkt 1.4.1.2 i tre timer. Efter inkubation fjernes Neutral Red-mediet, og cellerne vaskes med 150 μl buffer.
in medium without serum (16) and incubate as described in paragraph 1.4.1.2., for 3 h. After incubation, remove the NR medium, and wash cells with 150 μL of the buffer.
Efter dekantering fjernes overskydende buffer med sugende papir eller ved centrifugering.
Decant and remove excess buffer by blotting or centrifugation.
Der tilsættes nøjagtig 150 μl Neutral Red-desorptionsopløsning (frisk fremstillet af 49 dele vand + 50 dele ethanol + 1 del eddikesyre).
Add exactly 150 μL NR desorb solution (freshly prepared 49 parts water + 50 parts ethanol + 1 part acetic acid).
Mikrotiterpladen rystes forsigtigt på en mikrotiterpladeshaker i 10 minutter, indtil al Neutral Red er ekstraheret fra cellerne, og der er dannet en homogen opløsning.
Shake the microtiter plate gently on a microtiter plate shaker for 10 min until NR has been extracted from the cells and has formed a homogeneous solution.
OD af Neutral Red-ekstraktet måles ved 540 nm i et spektrofotometer med blindprøver som reference.
Measure the optical density of the NR extract at 540 nm in a spectrophotometer, using blanks as a reference.
Resultaterne gemmes i et passende filformat med henblik på senere analyse.
Save data in an appropriate electronic file format for subsequent analysis.
DATAKVALITET OG -MÆNGDE
QUALITY AND QUANTITY OF DATA
Resultaterne af undersøgelsen skal give mulighed for en relevant analyse af koncentration/respons fremkommet med og uden bestråling og, hvis det er muligt, af den koncentration af kemisk stof, hvor cellelevedygtigheden reduceres til 50 % (IC50).
The test data should allow a meaningful analysis of the concentration-response obtained in the presence and in the absence of irradiation, and if possible the concentration of test chemical by which cell viability is reduced to 50 % (IC50).
Hvis der påvises cytotoksicitet, skal både koncentrationsområdet og enkeltkoncentrationerne fastsættes på en sådan måde, at der kan tilpasses en kurve til forsøgsdataene.
If cytotoxicity is found, both the concentration range and the intercept of individual concentrations shall be set in a way to allow the fit of a curve to the experimental data.
Hvis resultaterne er enten klart positive eller klart negative (se punkt 2.3, første afsnit), vil første forsøg, der understøttes af et eller flere foreløbige eksperimenter til bestemmelse af dosisområde, være tilstrækkeligt.
For both clearly positive and clearly negative results (See Section 2.3, first paragraph), the primary experiment, supported by one or more preliminary dose range-finding experiment(s), may be sufficient.
Usikre og tvetydige resultater skal kontrolleres ved at gentage undersøgelsen (se også punkt 2.4, andet afsnit).
Equivocal, borderline, or unclear results should be clarified by further testing (see also section 2.4, second paragraph).
I disse tilfælde kan det være påkrævet at ændre forsøgsbetingelserne for at opnå et klart resultat.
In such cases, modification of experimental conditions should be considered.
Forsøgsbetingelser, der kan ændres, er bl.a. koncentrationsområde, inkubationstid før bestråling og eksponeringstid.
Experimental conditions that might be modified include the concentration range or spacing, the pre-incubation time, and the irradiation-exposure time.
En kortere eksponeringstid kan være relevant for stoffer, der er ustabile i vandig opløsning.
A shorter exposure time may be appropriate for water-unstable chemicals.
Til evaluering af resultaterne kan der beregnes en fotoirritationsfaktor (PIF) eller en gennemsnitlig lyseffekt (MPE).
To enable evaluation of the data, a Photo-Irritation-Factor (PIF) or Mean Photo Effect (MPE) may be calculated.
Ved beregning af parametrene for fotocytotoksicitet (se nedenfor) skal de spredte koncentration-responsværdier tilnærmes en passende kontinuerlig koncentration-responskurve (model).
For the calculation of the measures of photocytotoxicity (see below) the set of discrete concentration-response values has to be approximated by an appropriate continuous concentration-response curve (model).
Kurven tilnærmes normalt til dataene ved hjælp af en ikke-lineær regressionsmetode (18).
Fitting of the curve to the data is commonly performed by a non-linear regression method (18).
For at kunne vurdere virkningen af dataafvigelser på den tilpassede kurve anbefales det at gennemføre en bootstrap-proces.
To assess the influence of data variability on the fitted curve a bootstrap procedure is recommended.