natgillin/translations-raw huggingface dataset:
PCR-testen er positiv, hvis det C. m. subsp. sepedonicus-specifikke PCR-amplikon af den forventede størrelse og med (evt.) det forventede restriktionsmønster påvises, forudsat at det ikke er blevet amplificeret fra nogen af de negative kontrolprøver.
The PCR test is positive if the C. m. subsp. sepedonicus-specific PCR amplicon of expected size and restriction pattern (when required) is detected, providing that it is not amplified from any of the negative control samples.
Pålidelig bekræftelse af et positivt resultat kan endvidere fås ved at gentage testen med et nyt sæt PCR-primere (afsnit 9.3).
Reliable confirmation of a positive result can also be obtained by repeating the test with a second set of PCR primers (section 9.3).
Der er mistanke om PCR-inhibition, hvis det forventede amplikon fremkommer fra den positive kontrolprøve, der indeholder C. m. subsp. sepedonicus i vand, men der fås negative resultater fra positive kontrolprøver med C. m. subsp. sepedonicus kartoffelekstrakt.
Inhibition of the PCR may be suspected if the expected amplicon is obtained from the positive control sample containing C. m. subsp. sepedonicus in water but negative results are obtained from positive controls with C. m. subsp. sepedonicus in potato extract.
I multiplex-PCR-protokoller med interne PCR-kontroller er det tegn på inhibering af reaktionen, hvis ingen af de to amplikoner fremkommer.
In multiplex PCR protocols with internal PCR controls, inhibition of the reaction is indicated when neither of the two amplicons are obtained.
Der er mistanke om kontaminering, hvis det forventede amplikon fremkommer fra en eller flere af de negative kontroller.
Contamination may be suspected if the expected amplicon is obtained from one or more of the negative controls.
Indledende test med denne metode skal muliggøre reproducerbar påvisning af 103-104 kolonidannende celler af C. m. subsp. sepedonicus pr. ml tilsat til prøveekstrakter, som tidligere er testet negative (forberedelse, se tillæg 2).
Preliminary testing with this method should permit reproducible detection of 103 to 104 colony-forming units of C. m. subsp. sepedonicus per ml added to sample extracts that previously tested negative (preparation see Appendix 2).
Testen er mest følsom, når der anvendes frisklavet prøveekstrakt og der er optimale vækstbetingelser.
Highest sensitivity of detection can be expected when using freshly prepared sample extract and optimal growth conditions.
Metoden kan dog udmærket anvendes på ekstrakter, der er blevet opbevaret i glycerol ved –68 til –86 °C.
However, the method can be successfully applied to extracts that have been stored under glycerol at –68 to –86 °C.
Visse arter af ægplanter befordrer selektivt vækst af C. m. subsp. sepedonicus — også selv om der ikke forekommer symptomer. Ægplanter er også gode til en konfirmativ værtstest.
Some varieties of eggplant provide an excellent selective enrichment medium for the growth of C. m. subsp. sepedonicus even in the absence of symptoms and also provide an excellent confirmatory host test.
Vækstbetingelserne bør være optimale for at reducere risikoen for falske negative testresultater.
Growth conditions should be optimal to reduce the risk of false negative test results.
For detaljer vedrørende dyrkning, se tillæg 8.
For cultural details, see Appendix 8.
Hele den resterende testdelprøve af den resuspenderede pellet fra afsnit 3.1.6 eller 3.2.5 fordeles mellem ægplanterne ved en af nedenstående metoder (7.3 eller 7.4).
Distribute the whole of the remaining test aliquot of the resuspended pellet from section 3.1.6 or 3.2.5 between eggplants by one of the methods given below (7.3 or 7.4).
Der anvendes udelukkende planter i bladstadium 2-3, hvor højst tre blade er foldet helt ud.
Use only plants at leaf stage two to three up to full expansion of the third true leaf.
For at sikre, at den resuspenderede pellet anvendes fuldt ud, og at inokuleringen er effektiv, kræver de nedenfor beskrevne procedurer, at der bruges 15-25 ægplanter pr. prøve.
In order to ensure complete utilisation of the resuspended pellet as well as effective inoculation the procedures outlined below will require 15 to 25 eggplants per sample.
Ægplanterne vandes ikke i 1-2 dage forud for inokulering for således at mindske saftspændingen.
Do not water eggplants for one to two days prior to inoculation to reduce turgor pressure.
Snitinokulering
Slit inoculation
Idet planten holdes mellem to fingre, anbringes med pipette en dråbe (ca. 5-10 µl) af den suspenderede pellet på stænglen mellem kimbladene og det første blad.
Holding the plant between two fingers, pipette a drop (approximately 5 to 10 µl) of the suspended pellet on the stem between the cotyledons and the first leaf.
Med en steril skalpel skæres et diagonalt snit, der er 1,0 cm langt og så dybt som ca. 2/3 af stænglens tykkelse, idet snittet begyndes fra pelletdråben.
Using a sterile scalpel, make a diagonal slit, about 1,0 cm long and approximately 2/3 of the stem thickness deep, starting the cut from the pellet drop.
Snittet lukkes med steril vaseline fra en sprøjte.
Seal the cut with sterile vaseline from a syringe.
Sprøjteinokulering
Syringe inoculation
På ægplantestænglerne podes lige over kimbladene med en sprøjte, der er forsynet med en subkutan nål (ikke mindre end 23 G).
Inoculate the eggplant stems just above the cotyledons using a syringe fitted with a hypodermic needle (not less than 23 G).
Prøven fordeles mellem ægplanterne.
Distribute the sample between the eggplants.
Som positive kontroller podes 5 planter med en vandig suspension af 105-106 celler pr. ml af en kendt C. m. subsp. sepedonicus-kultur og om muligt med naturligt inficeret knoldvæv (jf. afsnit 4) efter samme podningsmetode (7.3 eller 7.4).
As the positive controls, inoculate 5 plants with an aqueous suspension of 105 to 106 cells per ml of a known culture of C. m. subsp. sepedonicus and, where possible, with naturally infected tuber tissue (see section 4) by the same inoculation method (7.3 or 7.4).
Som negativ kontrol podes 5 planter med steril pelletbuffer efter samme podningsmetode (7.3 eller 7.4).
As the negative control, inoculate 5 plants with sterile pellet buffer by the same inoculation method (7.3 or 7.4).
Planterne inkuberes under karantæneforhold i op til 4 uger ved 18-24 °C.
Incubate plants in quarantine facilities for up to four weeks at 18 to 24 °C.
Planterne inkuberes med tilstrækkeligt lys og høj fugtighed (70-80 %), og de vandes således, at såvel overvanding som vandmangel med deraf følgende visnen undgås.
Incubate plants with sufficient light and high humidity (70 to 80 %) and water to prevent water logging or wilting through water deficiency.
subsp. sepedonicus-cellerne dør ved temperaturer over 30 °C, og den optimale temperatur er 21 °C.
sepedonicus cells are killed at temperatures above 30 °C and the optimum temperature is 21 °C.
For at undgå krydskontaminering inkuberes planter til positiv kontrol og negativ kontrol på tydeligt adskilte bænke i et drivhus eller vækstkammer, eller, hvis pladsen er begrænset, der sikres absolut adskillelse mellem behandlingerne.
To avoid contamination incubate positive control and negative control plants on clearly separated benches in a glasshouse or growth chamber or, in case space is limited, ensure strict separation between treatments.
Hvis det er nødvendigt at inkubere planter, der anvendes til forskellige prøver, tæt sammen, adskilles de med passende afskærmning.
If plants for different samples must be incubated close together, separate them with appropriate screens.
Ved gødskning, vanding, inspektion eller anden håndtering udvises der stor omhu for at undgå krydskontaminering.
When fertilising, watering, inspecting and any other manipulations take great care to avoid cross-contamination.
Det er af afgørende betydning, at drivhuse og vækstkammere holdes fri for alle skadegørende insekter, idet sådanne kan overføre bakterien fra den ene prøve til den anden.
It is essential to keep glasshouses and growth chambers free of all insect pests since they may transmit the bacterium from sample to sample.
Der undersøges regelmæssigt for symptomer efter en uge.
Examine regularly for symptoms starting after a week.
Antallet af planter med symptomer tælles.
Count the number of plants showing symptoms.
subsp. sepedonicus forårsager visnen af blade på ægplanter, der kan begynde som en slaphed i bladrandene eller mellem bladstrengene.
subsp. sepedonicus causes leaf wilting in eggplants which may commence as a marginal or interveinal flaccidity.
Vissent væv kan i begyndelsen forekomme mørkegrønt eller spættet, men bliver blegere, før det nekrotiserer.
Wilted tissue may initially appear dark green or mottled but turns paler before becoming necrotic.
Visnede steder mellem bladstrengene har ofte et fedtet, gennemblødt udseende.
Interveinal wilts often have a greasy water-soaked appearance.
Nekrotisk væv har ofte en lysegul rand.
Necrotic tissue often has a bright yellow margin.
Planterne dør ikke nødvendigvis; jo længere perioden før symptomernes udvikling er, desto større er chancerne for overlevelse.
Plants are not necessarily killed; the longer the period before symptoms develop, the greater the chance of survival.
Planterne kan vokse fra infektionen.
Plants may outgrow the infection.
Unge ægplanter er langt mere modtagelige for ringe bestande af C. m. subsp. sepedonicus end ældre planter, derfor er det nødvendigt at anvende planter på eller lige før bladstadium 3.
Young eggplants are much more susceptible to low populations of C. m. subsp. sepedonicus than are older plants, hence the necessity to use plants at or just before leaf stage 3.
Visnen kan også skyldes bestande af andre bakterier eller svampe, der findes i pellet fra knoldenes væv.
Wilts may also be induced by populations of other bacteria or fungi present in the tuber tissue pellet.
De omfatter Ralstonia solanacearum, Erwinia carotovora subsp. carotovora og E. carotovora subsp. atroseptica, Erwinia chrysanthemi, Phoma exigua var. foveata samt store bestande af blødrådsbakterier.
These include Ralstonia solanacearum, Erwinia carotovora subsp. carotovora and E. carotovora subsp. atroseptica, Erwinia chrysanthemi, Phoma exigua var. foveata, as well as large populations of saprophytic bacteria.
Navnlig Erwinia chrysanthemi kan forårsage symptomer og visnen, der ligner C. m. subsp. sepedonicus symptomer meget.
In particular Erwinia chrysanthemi can cause leaf symptoms and wilt that is very similar to symptoms of C. m. sepedonicus.
Den eneste forskel er en sortfarvning af stænglerne, når det drejer sig om Erwinia chrysanthemi-infektioner.
The only difference is blackening of the stems in case in Erwinia chrysanthemi infections.
Andre former for visnen kan skelnes fra dem, der skyldes C. m. subsp. sepedonicus, eftersom hele blade eller hele planter hurtigt visner.
Other wilts can be distinguished from those caused by C. m. subsp. sepedonicus since whole leaves or whole plants wilt rapidly.
Der kan også forberedes en gram-farvning: Ved denne test skelnes der mellem C. m. subsp. sepedonicus og Erwinia spp.
Also a Gram stain can be prepared: this test will differentiate C. m. subsp. sepedonicus from Erwinia spp.
Så snart der observeres symptomer på ægplanter, bør der laves en reisolering, idet der anvendes stykker af visnet bladvæv og stængelvæv fra planter (udblødning af væv, se 3.1.3).
As soon as symptoms in eggplants are observed reisolation should be performed, using sections of wilted leaf tissue or stem tissue from plants (see 3.1. 3 for tissue maceration).
Desinficer overfladen af ægplanternes blade og stængler ved aftørring med 70 % ethanol.
Surface disinfect the eggplant leaves and stems by wiping with 70 % ethanol.
Der gennemføres en IF-test eller en PCR-test af ægplantesaften, og der isoleres på et egnet (selektivt) medie (se afsnit 8).
Perform an IF test or PCR on the eggplant sap and isolate on to suitable (selective) media (see section 8).
Der kan også forberedes en gram-farvning (tillæg 9).
A Gram stain (Appendix 9) may also be prepared.
Der foretages identifikation af formodede renkulturer af C. m. subsp. sepedonicus, og patogeniteten bekræftes (se afsnit 9 og 10).
Identify purified cultures of presumptive C. m. subsp. sepedonicus and confirm pathogenicity (see section 9 and 10).
Under visse omstændigheder, især hvor vækstbetingelserne ikke er optimale, kan C. m. subsp. sepedonicus eksistere som en latent infektion i ægplanter selv efter en inkubationstid på op til 4 uger.
Under certain circumstances, in particular where growing conditions are not optimal, it may be possible for C. m. subsp. sepedonicus to exist as a latent infection within eggplants even after incubation periods up to 4 weeks.
Hvis der ikke observeres symptomer efter 4 uger, gennemføres en IF-/PCR-test af en blandingsprøve af stængelstykker på 1 cm fra hver testplante, idet stykkerne skal være taget over podningsstedet.
If no symptoms are observed after 4 weeks perform IF/PCR on a composite sample of 1 cm stem sections of each test plant taken above the inoculation site.
Hvis testen er positiv, bør der foretages reisolering på et egnet (selektivt) medie efter proceduren i afsnit 8.
If the test is positive reisolation on suitable (selective) media should be performed following the procedure under section 8.
Der foretages identifikation af formodede renkulturer af C. m. subsp. sepedonicus, og patogeniteten bekræftes (se afsnit 9 og 10).
Identify purified cultures of presumptive C. m. subsp. sepedonicus and confirm pathogenicity (section 9 and 10).
Fortolkning af resultatet af biotesten
Interpretation of the bioassay test result.
Biotestresultaterne er gyldige, hvis planterne til positiv kontrol udviser typiske symptomer, hvis bakterierne kan reisoleres fra disse planter, og hvis der ikke observeres symptomer på de negative kontroller.
Valid Bioassay test results are obtained when plants of the positive control show typical symptoms, the bacteria can be reisolated from these plants and no symptoms are found on the negative controls.
Biotesten er negativ, hvis testplanterne ikke er inficeret med C. m. subsp. sepedonicus, og forudsat at C. m. subsp. sepedonicus er påvist i de positive kontrolplanter.
The bioassay test is negative if test plants are not infected by C. m. subsp. sepedonicus, and provided that C. m. subsp. sepedonicus is detected in positive controls.
Biotesten er positiv, hvis testplanterne er inficeret med C. m. subsp. sepedonicus.
The bioassay test is positive if the test plants are infected by C. m. subsp. sepedonicus.
ISOLERING AF C. M. SUBSP.
ISOLATION OF C. M. SUBSP.
Diagnose er først fuldført, når C. m. subsp. sepedonicus er blevet isoleret og efterfølgende identificeret (se afsnit 9) samt bekræftet ved en patogenitetstest (afsnit 10).
Diagnosis is only completed if C. m. subsp. sepedonicus is isolated, subsequently identified (see section 9). and confirmed by a pathogenicity test (section 10).
Skønt C. m. subsp. sepedonicus er en organisme, det er vanskeligt at dyrke på medie, kan den isoleres fra væv, der udviser symptomer.
Although C. m. subsp. sepedonicus is a fastidious organism, it can be isolated from symptomatic tissue.
Den kan imidlertid blive overvokset af hurtigtvoksende blødrådsbakterier, og det er vanskeligt at isolere direkte fra pellet fra knold- eller stængelvævet (afsnit 3.1.6 eller 3.2.5).
However, it may be outgrown by rapidly growing saprophytic bacteria and, therefore, isolations directly from the tuber or stem tissue pellet (section 3.1.6 or 3.2.5) is difficult.
Med et selektivt medie og en passende opløsning af den resuspenderede pellet fra navleender eller stængler af kartofler er det muligt at foretage direkte isolering af C. m. subsp. sepedonicus.
With selective medium and appropriate dilution of the resuspended pellet from the heel end cores or stems of potatoes direct isolation of C. m. subsp. sepedonicus may be possible.
Der skal foretages isolering fra alle kartoffelknolde eller -stængelstykker og fra ægplanter, for hvilke der ikke er blevet observeret symptomer, men hvor IF-/PCR-testen af blandingsprøven fra positiv (se afsnit 7.10).
Isolations shall be made from all symptomatic potato tubers or stem segments and from eggplants were no symptoms are observed but IF/PCR test from the composite sample was positive (see section 7.10).
Macerering af ægplantestængler bør, hvis det er påkrævet, udføres som beskrevet i afsnit 3.1.3.
Maceration of eggplants stems when necessary should be carried out as described in section 3.1.3.
Til anvendelse som positive kontroller forberedes tifoldsfortyndinger af en suspension af 106 cfu pr. ml C. m. subsp. sepedonicus (f.eks. NCPPB 4053 eller PD 406).
As positive controls, prepare decimal dilutions from a suspension of 106 cfu per ml of C. m. subsp. sepedonicus (e.g. NCPPB 4053 or PD 406).
For at undgå mulighed for kontaminering forberedes positive kontroller helt adskilt fra de prøver, der skal testes.
To avoid any possibility of contamination, prepare positive controls totally separated from samples to be tested.
For hver frisklavet batch af selektivt medie bør dets egnethed med hensyn til dyrkning af patogenet testes, inden det anvendes til at teste rutineprøver.
For each newly prepared batch of a selective medium its suitability for growth of the pathogen should be tested before it is used to test routine samples.
Udpladning på selektive medier
Selective plating
Af en 100 µl delprøve fra en genopløst kartoffelpelletprøve eller ægplantesaft laves tifoldsfortyndinger i pelletbuffer (tillæg 3).
From a 100 µl aliquot from a resuspended potato pellet sample or eggplant sap make 10-fold dilutions in pellet buffer (Appendix 3).
Isolering fra ufortyndet kartoffelpellet mislykkes normalt som følge af at Cms er vanskelig at dyrke på medier samt konkurrence fra blødrådsbakterier.
Isolation from undiluted potato pellet usually fails due to the fastidious growth habit of Cms and competition by saprophytes.
Eftersom bakterien normalt forekommer i store populationer i inficeret væv, kan blødrådsbakterierne normalt fortyndes væk, mens patogenet bliver tilbage.
Since the bacterium is usually present in high populations in infected tissues, the saprophytes can usually be diluted out, whilst the pathogen remains.
Det anbefales derfor at udplade 100 µl fra hver af prøverne i fortyndinger på 1:100 til 1:10000 på MTNA-medie eller NCP-88-medie (tillæg 5) (hvis der anvendes petriskåle med en diameter på 90 mm, ellers tilpasses mængden i forhold til andre skålstørrelser), idet der anvendes podenåle (»hockey sticks«) og pladespredningsmetoden.
It is therefore recommended to spread 100 µl from each of the samples, 1/100 up to 1/10000 dilutions onto MTNA medium or NCP-88 medium (Appendix 5) (if using 90 mm diameter petri dishes- adjust volume for alternative dish sizes), using spreaders (hockey sticks) and the spread plate technique.
Som alternativ kan den oprindelige delprøve på 100 µl kartoffelpellet udplades på den første agarplade med en podenål, og dernæst flyttes podenålen til en anden agarplade, idet eventuelle rester på podenålen stryges af. Til sidst gentages dette med en tredje plade, hvorved man opnår en virkning som pladespredning af forskellige fortyndinger via podenålen.
An alternative strategy is to spread out the initial 100 µl potato pellet aliquot onto a first agar plate with a spreader and then remove the spreader to a second agar plate, streaking out any residue left on the spreader; finally repeat this with a third plate, thus giving a dilution plating effect via the spreader.
Pladerne inkuberes i mørke ved 21-23 °C.
Incubate plates in the dark at 21 to 23 °C.
De første undersøgelser af pladerne, der omfatter tælling af C. m. subsp. sepedonicus-lignende kolonier, idet kontrolplader anvendes som reference, foretages efter 3 dage med yderligere tællinger efter 5, 7 og til sidst 10 dage.
Initial examinations of the plates including, by reference to the control plates, counts of any C. m. subsp. sepedonicus like colonies are made after 3 days, with further counts after 5, 7, eventually 10 days.
Rendyrkning af Cms-lignende kolonier
Purification of suspicious colonies
Rendyrkning af C. m. subsp. sepedonicus-lignende kolonier bør foretages på gærekstraktmedie til ægplanteinokulering og/eller efterfølgende identifikation; dette bør ske, inden pladerne bliver for overvoksede, dvs. helst efter 3-5 dage.
Subculturing of C. m. subsp. sepedonicus-like colonies should be carried out onto YGM media for eggplant inoculation and/or subsequent identification; this should be done before the plates become too overgrown i.e. preferably after three to five days.
Der udstryges C. m. subsp. sepedonicus -lignende kolonier på et af følgende medier (tillæg 5 angiver formler):
Streak C. m. subsp. sepedonicus –like colonies on to one of the following media: (formulae are given in Appendix 5):
næringsagar med dextrose (kun til rendyrkning)
nutrient dextrose agar (for use in subculturing only),
gæragar med peptonglukose
yeast peptone glucose agar,
gærekstraktagar med mineralsalte.
yeast extract mineral salts agar.
Der inkuberes ved 21-24 °C i op til 10 dage.
Incubate at 21 °C to 24 °C for up to 10 days.
subsp. sepedonicus er langsomtvoksende og giver sædvanligvis punktformede, cremefarvede og kuppelformede kolonier i løbet af højst 10 dage.
subsp. sepedonicus is slow-growing, usually producing pin-point, cream, domed colonies within 10 days.
(Der findes fotografier af typiske C. m. subsp. sepedonicus-kolonier på webstedet http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).
Photos of typical colonies of C. m. subsp. sepedonicus (see web site http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).
Der udstryges på ny for at sikre renheden.
Re-streak to establish purity.
Væksthastigheden kan øges ved hjælp af subkulturer.
Growth rates are improved with subculture.
Kolonidannelserne er typisk cremehvide eller elfenbensfarvede, til tider gule, afrundede, glatte, ophøjede, kuppelkonvekse, slimagtige til flydende, har ubrudte kanter og er sædvanligvis 1 til 3 mm i diameter.
Typical colonies are creamy-white or ivory, occasionally yellow, rounded, smooth, raised, convex-domed, mucoid-fluidal, with entire edges and usually 1 to 3 mm in diameter.
En almindelig gram-farvning (tillæg 9) kan benyttes som hjælp til at vælge kolonier til yderligere test.
A simple Gram stain (Appendix 9) may help to select colonies for further testing.
Formodede kulturer identificeres (se afsnit 9), og der gennemføres en patogenitetstest (se afsnit 10).
Identify presumptive cultures (see section 9) and perform a pathogenicity test (see section 10).
IDENTIFIKATION
IDENTIFICATION
Formodede renkulturer af C. m. subsp. sepedonicus-isolater identificeres ved at anvende mindst to af følgende test, der bygger på forskellige biologiske principper.
Identify pure cultures of presumptive C. m. subsp. sepedonicus isolates using at least two of the following tests based on different biological principles.
Hvor det er relevant, inddrages kendte referencestammer i hver af de test, der gennemføres.
Include known reference strains where appropriate for each test performed.
Biokemiske undersøgelser og enzymundersøgelser
Nutritional and enzymatic identification tests
Følgende fænotypiske egenskaber, som C. m. subsp. sepedonicus enten har eller slet ikke har, bestemmes efter metoderne Lelliott and Stead (1987), Klement et al.
Determine the following phenotypic properties which are universally present or absent in C. m. subsp. sepedonicus, according to the methods of Lelliott and Stead (1987), Klement et al.
(1990), Schaad (2001), anonym (1987).
(1990), Schaad (2001), Anonymous (1987).
Alle medier bør inkuberes ved 21 °C og undersøges efter seks dages forløb.
All media should be incubated at 21 °C and examined after six days.
Er der efter 6 dage ingen vækst, inkuberes der i op til 20 dage.
If no growth has occurred, incubate for up to 20 days.
Alle test skal omfatte en kendt C. m. subsp. sepedonicus-kontrol.
All tests must include a known C. m. subsp.sepedonicus control.
Biokemiske test og fysiologiske test udføres ved podning med renkulturer fra vækstmedier.
Nutritional and physiological tests must be made using inocula from nutrient agar subcultures.
Der skal foretages morfologiske sammenligninger af kulturer fra vækstmedier med dextrose.
Morphological comparisons must be made from nutrient dextrose agar cultures.