natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Diagnostisk virologisk test og evaluering af resultater
Diagnostic virological tests and evaluation of results
Indtil der forelå og udvikledes molekylære test, blev virusisolation ved inokulering af befrugtede hønseæg anset for langt den mest følsomme diagnostiske test for AI, og metoden var af afgørende betydning for efterfølgende identifikation og karakterisering af det inficerende virus.
Until the advent and development of molecular-based tests, virus isolation by the inoculation of embryonated fowls' eggs was considered the most sensitive diagnostic test for AI by far and essential for subsequent identification and characterisation of the infecting virus.
Dette kapitel indeholder en beskrivelse af de vigtigste trin.
The essential steps are set out in this Chapter.
Behandling af prøver
Sample processing
Hvis de indsendte svaberprøver er »tørre«, anbringes de i så meget antibiotisk væske, at de er helt nedsænket.
Swabs if submitted ‘dry’ must be placed in sufficient antibiotic medium to ensure full immersion.
Prøverne kan samles i batch a fem prøver, forudsat at de kommer fra samme art, tidspunkt og epidemiologiske enhed.
Samples may be pooled in batches in batches of five provided they are derived from the same species, time and epidemiological unit.
Kroppe, der er indsendt til laboratoriet, skal undersøges, og der tages prøver af følgende organer: fæces eller mave-tarm-indhold, hjernevæv, luftrør, lunger, lever, milt og andre synligt angrebne organer.
Carcases submitted to the laboratory must be subjected to post mortem examination and samples of the following organs must be taken: faeces or intestinal contents, brain tissue, trachea, lungs, liver, spleen and other obviously affected organs.
De nævnte organer og væv kan samles, men det er vigtigt, at fækalt materiale behandles for sig.
Those organs and tissues may be pooled, but separate treatment of faecal material is essential.
Fæcesprøver og organprøver homogeniseres (i en lukket blender eller ved hjælp af pistil og morter og sterilt sand) i antibiotisk væske til en opslæmning på 10-20 % w/v i væsken.
Faeces samples and organs must be homogenised (in an enclosed blender or using a pestle and mortar and sterile sand) in antibiotic medium and made to 10 to 20 % w/v suspensions in the medium.
De nedsænkede svaberprøver og opslæmningerne henstår i ca. to timer ved rumtemperatur (eller i længere tid ved 4 °C) og klares derpå ved centrifugering (f.eks. 800-1000 x g i 10 minutter).
The immersed swabs and suspensions must be left for approximately two hours at ambient temperature (or longer periods at 4 oC) and then clarified by centrifugation (for example, 800 to 1000 x g for 10 minutes).
Virusisolation i befrugtede hønseæg
Virus isolation in embryonated fowls' eggs
Den klarede supernatant inokuleres i mængder på 0,1-0,2 ml i allantoishulen på mindst fire befrugtede hønseæg, som er blevet ruget i 9-11 dage.
The clarified supernatant fluid must be inoculated in 0,1 to 0,2 ml amounts into the allantoic cavity of each of a minimum of four embryonated fowls' eggs that have been incubated for nine to 11 days.
Ideelt set skal æggene komme fra en specifikt patogenfri flok (SPF-flok), men hvis det ikke er praktisk muligt, kan der anvendes æg fra en flok, der er dokumenteret fri for AI-antistoffer (serumantistofnegative — SAN).
Ideally, these eggs must be obtained from a specific pathogen free (SPF) flock, but when this is impracticable eggs obtained from a flock shown to be free of antibodies to AI (serum antibody negative — SAN), may be used.
De inokulerede æg inkuberes ved 37 °C og lyses dagligt.
The inoculated eggs must be held at 37 oC and candled daily.
Æg med døde eller døende embryoner nedkøles til 4 °C, og allantois/amnionvæskerne undersøges for hæmagglutinerende egenskaber. Seks dage efter inokulationen nedkøles og afprøves resterende æg på samme måde.
Eggs with dead or dying embryos as they arise, and all remaining eggs six days after inoculation must be chilled to 4 oC and the allantoic- amniotic fluids tested for haemagglutination activity.
Hvis der ikke konstateres nogen hæmagglutination, gentages fremgangsmåden med ufortyndet allantois/amnionvæske fra primærpassagen som inokulat.
If no haemagglutination is detected, this procedure must be repeated using undiluted allantoic/amniotic fluid as inoculum.
Hvis der konstateres hæmagglutination, undersøges det ved dyrkning, om der forekommer bakterier.
When haemagglutination is detected the presence of bacteria must be excluded by culture.
Forekommer der bakterier, kan væskerne passeres gennem et 450 nm membranfilter, tilsættes yderligere antibiotika og inokuleres i befrugtede æg som anført ovenfor.
If bacteria are present, the fluids may be passed through a 450 nm membrane filter, further antibiotics added and inoculated into embryonated eggs as above.
For at fremskynde diagnosticeringen har nogle laboratorier anvendt to 3-dageskørsler eller 2-dages- og 4-dageskørsler og rapporteret om resultater, der kan sammenlignes med to 6-dageskørsler, men dette er endnu ikke fuldt evalueret.
To expedite diagnosis some laboratories have used two 3-day passages or 2-day and 4-day passages and reported comparable results to two 6-day passages, but this has not yet been fully evaluated.
Positive væsker skal testes for, om de er bakteriefrie.
Positive fluids need to be tested for freedom from bacteria.
Forekommer der bakterier, kan væskerne passeres gennem et 450 nm membranfilter, eller centrifugeres for at fjerne bakterier og atter overføres til æg efter tilsætning af yderligere antibiotika.
If bacteria are present the fluids may be passed through a 450-nm membrane filter or centrifuged to remove bacteria and re-passaged in eggs after the addition of more antibiotics.
Foreløbig differentiering
Preliminary differentiation
Da det er vigtigt, at der hurtigst muligt gennemføres bekæmpelsesforanstaltninger for at begrænse spredning af AI-virus, skal alle nationale referencelaboratorier, der har isoleret et hæmagglutinerende virus, være i stand til at identificere, om det er et influenza A-virus af subtype H5 eller H7 eller Newcastle disease-virus.
As it is important that control measures aimed at limiting the spread of the AI virus must be implemented as soon as possible, each national reference laboratory that has isolated a haemagglutinating virus must be in a position to identify it if it is an influenza A virus of H5 or H7 subtype or Newcastle disease virus.
De hæmagglutinerende væsker anvendes til en hæmagglutinations-inhibitionstest som beskrevet i kapitel IX.
The haemagglutinating fluids must be used in haemagglutination inhibition tests as described in Chapter IX.
Positiv inhibition, dvs. en titer inden for 2-3 log2 af en positiv kontrolprøve, med polyklonale antisera, der er specifikke for influenza A af subtype H5 eller H7, kan anvendes som foreløbig identifikation, således at der kan indføres foreløbige bekæmpelsesforanstaltninger.
Positive inhibition, such as a titre within 2 to 3 log2 of a positive control, with polyclonal antisera specific for H5 or H7 subtypes of influenza A may serve as a preliminary identification enabling the imposition of interim control measures.
Konfirmatorisk identifikation
Confirmatory identification
Da der findes 16 hæmagglutinsubtyper og ni neuraminidasesubtyper af influenzavira og forekommer variationer inden for hver af dem, er det hverken muligt eller rentabelt, at hvert enkelt nationalt referencelaboratorium opbevarer antisera, der gør det muligt at foretage en fuldstændig subtypeidentifikation af influenzaisolater.
Since there are 16 haemagglutinin subtypes and 9 neuraminidase subtypes of influenza viruses and variations occur within each of these it is neither practicable nor cost effective for each national reference laboratory to hold antisera that may allow a full subtype identification of influenza isolates.
Hvert enkelt nationalt referencelaboratorium skal dog som minimum:
However, each national reference laboratory must as a minimum:
bekræfte, at isolatet er et influenza-A-virus ved hjælp af en immunodobbeltdiffusionsprøve til påvisning af gruppeantigener
confirm that the isolate is an influenza A virus using an immunodoublediffusion test to detect group antigens;
afgøre, hvorvidt isolatet er af subtype H5 eller H7; positiv identifikation indebærer krav om gennemførelse af bekæmpelsesforanstaltninger vedrørende LPAI af subtyperne H5 og H7
determine whether or not the isolate is of H5 or H7 subtype, positive identification requires implementation of the control measures for LPAI of H5 and H7 subtypes;
omgående indsende alle isolater af HPAI og af subtype H5 og H7 til EF-referencelaboratoriet med henblik på bekræftelse og en fuldstændig karakterisering, medmindre der er givet dispensation i henhold til litra d).
immediately submit all HPAI and all H5 and H7 isolates to the Community reference laboratory for confirmation and full characterisation, unless a derogation is granted in accordance with point (d).
Endvidere må laboratorier med relevante faciliteter gerne:
In addition it is desirable in laboratories with appropriate facilities to:
foretage en intravenøs patogenicitetsindeksprøve på seks uger gamle kyllinger som beskrevet i kapitel VII.
carry out an intravenous pathogenicity index test in six-week-old chickens as set out in Chapter VII.
Intravenøs patogenicitetsindeks på over 1,2 er ensbetydende med forekomst af virus, der kræver komplet iværksættelse af HPAI-bekæmpelsesforanstaltninger.
Intravenous pathogenicity indices of greater than 1,2 indicate the presence of virus requiring a full implementation of control measures for HPAI.
De nationale referencelaboratorier skal endvidere overveje at etablere ekspertise og udstyr, så de for alle H5- eller H7-LPAI-vira kan foretage bestemmelse af hæmagglutiningenets nukleotidsekvens for at afgøre, om der på hæmagglutininprækursorproteinets kløvningssted er flerbasiske aminosyrer.
National reference laboratories must also consider putting in place expertise and equipment that allow nucleotide sequencing of the haemagglutinin gene to determine whether or not there are multiple basic amino acids at the cleavage site of the haemagglutinin precursor protein for any LPAI H5 or H7 virus.
Skønt EF-referencelaboratoriet vil foretage patogenicitetsbestemmelser som en højt prioriteret opgave som led i de arbejdsopgaver, der er omhandlet i punkt 2, litra b), i bilag VII til direktiv 2005/94/EF, vil en sådan viruskarakterisering på nationalt plan i høj grad afkorte den tid, der anvendes til diagnosticering, og, hvis prøven er positiv, den tid, der anvendes til komplet gennemførelse af HPAI-bekæmpelsesforanstaltninger.
Although the Community reference laboratory will conduct pathogenicity determination as a high priority, as part of the duties referred to in Annex VII, point 2(b) to Directive 2005/94/EC, such virus characterisation at the national level will greatly decrease the time taken for diagnosis and, when positive, for the full implementation of control measures for HPAI.
Yderligere typebestemmelse og karakterisering af isolater
Further typing and characterisation of isolates
EF-referencelaboratoriet skal have tilsendt alle hæmagglutinerende vira fra de nationale referencelaboratorier til yderligere antigene og genetiske undersøgelser for at opnå større forståelse af sygdommen(e)s epizootiologi i Fællesskabet i overensstemmelse med EF-referencelaboratoriets funktioner og opgaver, jf. bilag VII til direktiv 2005/94/EF.
The Community reference laboratory must receive all haemagglutinating viruses from the National reference laboratories for further antigenic and genetic studies to enable a greater understanding of the epizootiology of the disease(s) within the Community in accordance with the functions and duties of the Community reference laboratory as set out in Annex VII to Directive 2005/94/EC.
Derudover skal EF-referencelaboratoriet foretage en fuldstændig antigentypebestemmelse af alle modtagne influenzavira.
In addition to those functions and duties, the Community reference laboratory must carry out full antigenic typing for all influenza viruses received.
For H5- og H7-vira, som ikke har intravenøse patogenicitetsindekser på over 1,2, skal der også straks foretages bestemmelse af hæmagglutiningenets nukleotidsekvens for at afgøre, om der på hæmagglutininprækursorproteinets kløvningssted er flerbasiske aminosyrer, og det nationale referencelaboratorium og den kompetente myndighed i oprindelseslandet underrettes, så snart resultaterne foreligger, så HPAI-bekæmpelsesforanstaltninger kan gennemføres fuldt ud.
For H5 and H7 viruses that do not have intravenous pathogenicity indices greater than 1,2, nucleotide sequencing of the haemagglutinin gene to determine whether or not there are multiple basic amino acids at the cleavage site of the haemagglutinin precursor protein must also be carried out immediately and the national reference laboratory and the competent authority in the country of origin must be informed as soon as the results are available so that control measures for HPAI can be fully implemented.
Da den epidemiologiske situation med hensyn til HPAI/LPAI er omskiftelig, er der mulighed for efter aftale med såvel Kommissionen som EF-referencelaboratoriet at give laboratorier, der er fuldt ud i stand til at foretage hurtig viruskarakterisering, dispensation til at indsende en mindre del af disse vira efter undersøgelse af data, og således at EF-referencelaboratoriet kan foretage en relevant udvælgelse.
Given the changing epidemiological situation in relation to HPAI/LPAI, it may be possible by agreement with both the Commission and the Community reference laboratory for a derogation to be given to laboratories with full capabilities for rapid virus characterisation, to submit a subset of these viruses following inspection of data and for the Community reference laboratory to make a relevant selection.
En sådan dispensation kan kun tillades, når det nationale referencelaboratorium hurtigt kan generere data og udveksle dem med EF-referencelaboratoriet.
This derogation must only be permitted where data can be rapidly generated by the national reference laboratory and shared with the Community reference laboratory.
Molekylære test og evaluering af resultater
Molecular tests and evaluation of results
Den nuværende definition af HPAI tillader molekylær identifikation af virulensfaktorer og bekræfter anvendelsen af molekylære teknikker til diagnosticering af AI.
The current definition of HPAI, allows the molecular identification of virulence factors and confirms the use of molecular techniques in the diagnosis of AI.
Der er på det seneste sket en udvikling i anvendelsen af dem til påvisning og karakterisering af AI-virus direkte fra klinisk prøvemateriale fra inficerede fugle.
Recently there have been developments in their application for detection and characterisation of AI virus directly from clinical specimens from infected birds.
Konventionelle RT-PCR-teknikker på klinisk prøvemateriale kan — med korrekt definerede primere — betyde hurtig påvisning og identifikation af subtype (i det mindste af H5 og H7) samt et PCR-amplikon, der kan anvendes til bestemmelse af nukleotidsekvens, og som det er dokumenteret kan have stor betydning ved hurtig identifikation af efterfølgende udbrud, når det primære inficerede sted er påvist, og virusset er karakteriseret.
Conventional RT-PCR techniques on clinical specimens could, with the correctly defined primers, result in rapid detection and subtype (at least of H5 and H7) identification, plus a PCR amplicon product that could be used for nucleotide sequencing and have been demonstrated to have an important application by rapidly identifying subsequent outbreaks once the primary infected premises has been detected and the virus characterised.
Real-time single-step RT-PCR med anvendelse af primer/fluorogen-probe-systemer (rRT-PCR) giver mulighed for endnu hurtigere og mere følsom diagnosticering med påvisning af AI-vira og bestemmelse af subtype H5 eller H7 i klinisk prøvemateriale.
‘Real time’ single-step RT-PCR using primer/fluorogenic probe systems (rRT-PCR) allow even more rapid and sensitive diagnosis with detection of AI viruses and determination of subtype H5 or H7 in clinical samples.
Et stort problem med RT-PCR- og rRT-PCR-systemer er, at de forskellige laboratorier indtil nu har udviklet forskellige systemer, som ikke — hvilket ganske vist er helt legitimt — er blevet valideret eller har omfattet afprøvninger med et stort antal prøver i forskellige laboratorier.
An important problem with RT-PCR and rRT-PCR systems is that, to date, different laboratories have developed different systems, which, although perfectly legitimate, have not been validated or subjected to tests with large numbers of samples in different laboratories.
EF-referencelaboratoriet og nærmere bestemte nationale referencelaboratorier har beskæftiget sig med dette problem som led i et EU-støttet projekt (EU AVIFLU) med henblik på at udarbejde ratificerede protokoller for konventionel RT-PCR og rRT-PCR, som kunne overtages af andre nationale referencelaboratorier.
The Community reference laboratory and specified national reference laboratories have been addressing this problem as part of an Community-funded project (EU AVIFLU) to produce ratified protocols for conventional RT-PCR and rRT-PCR that could be adopted by other national reference laboratories.
Hvis testparametre, såsom cykel- og ramptid, varieres i forhold til anbefalingerne i protokollerne, skal det inden ibrugtagning dokumenteres, at de er egnede til formålet, jf. kapitel I, punkt 6, i denne diagnosticeringsmanual.
If test parameters, such as cycling and ramp times, are varied from those recommended in the specified protocols they must be demonstrated as fit for purpose prior to use in accordance with point 6 of Chapter I of this diagnostic manual.
Standardprotokollerne for sådanne molekylære test og evaluering heraf, som anvendes af EF-referencelaboratoriet, findes på følgende websted:
The standard protocols for those molecular tests and their evaluation as applied by the Community reference laboratory can be found on the following website:
In vivo-patogenicitetstest og evaluering af resultater
In vivo pathogenicity test and the evaluation of results
Virulensen for kyllinger af influenza A-vira, der er isoleret fra fugle, skal vurderes ved anvendelse af intravenøst patogenicitetsindeks-testen (IVPI-testen), som gennemføres således:
The virulence for chickens of influenza A viruses isolated from birds must be estimated using the intravenous pathogenicity index (IVPI) test which must be carried out as follows:
Frisk inficeret allantoisvæske med en HA-titer > 1/16 (> 24 eller >log2 4, når den udtrykkes som den reciprokke værdi) fra det lavest mulige niveau, helst fra den oprindelige isolering uden udvælgelse, fortyndes 1:10 i steril isotonisk saltopløsning.
Fresh infective allantoic fluid with a HA titre >1/16 (>24 or >log2 4 when expressed as the reciprocal) from the lowest passage level available, preferably from the initial isolation without any selection is diluted 1/10 in sterile isotonic saline.
0,1 ml fortyndet virus indsprøjtes intravenøst i ti seks uger gamle SPF- eller SAN-kyllinger.
0,1 ml of the diluted virus is injected intravenously into each of ten six-week-old SPF or SAN chickens.
Kyllingerne undersøges med 24 timers mellemrum i ti dage.
Birds are examined at 24-hour intervals for 10 days.
Ved hver observation gives der hver kylling point. 0 = normal, 1 = syg, 2 = meget syg, 3 = død.
At each observation, each bird is scored 0 if normal, 1 if sick, 2 if severely sick, 3 if dead.
Bedømmelsen af syge og meget syge kyllinger er en subjektiv klinisk vurdering.
The judgement of sick and severely sick birds is a subjective clinical assessment.
Normalt udviser »syge« kyllinger et af følgende symptomer, og »meget syge« mere end et af følgende symptomer: respiratorisk insufficiens, depression, diarre, cyanose af blottet hud eller hagelapper, ødemer i hoved, nervøse symptomer.
Normally, ‘sick’ birds show one of the following signs and ‘severely sick’ more than one of the following signs: respiratory involvement, depression, diarrhoea, cyanosis of the exposed skin or wattles, oedema of the face and/or head, nervous signs.
Døde fugle noteres for 3 point ved hver af de resterende daglige observationer, efter at døden er indtrådt.
Dead birds must be scored as 3 at each of the remaining daily observations after death.
Af velfærdshensyn skal kyllinger, der er for syge til at æde og drikke, aflives på human vis og noteres som døde ved den næste observation, idet de ville have været døde inden for et døgn, hvis de ikke var blevet aflivet.
On welfare grounds when birds are too sick to eat or drink, they must be killed humanely and scored as dead at the next observation since they will die within 24 hours without intervention.
Denne fremgangsmåde kan accepteres af akkrediteringmyndigheder.
This approach is acceptable to accreditation authorities.
IVPI er det gennemsnitlige antal point pr. kylling pr. observation over en 10-dagesperiode.
The IVPI is the mean score per bird per observation over the 10-day period.
Et indeks på 3,00 betyder, at alle kyllingerne døde inden for 24 timer, og et indeks på 0,00 betyder, at ingen af kyllingerne udviste kliniske symptomer i løbet af de ti dages observationsperiode.
An index of 3,00 means that all birds died within 24 hours, and an index of 0,00 means that no bird showed any clinical sign during the 10-day observation period.
I følgende eksempel vises en enkel metode til registrering af resultater og indeksberegning:
A simple method for recording results and calculating indices is shown in the following example:
Kliniske symptomer
Clinical signs
Dag efter inokulation
Day after inoculation
Point i alt
Total score
Syg
Sick
Meget syg
Severely sick
Død
Dead
I alt = 246
Total = 246
10 kyllinger observeret i 10 dage = 100 observationer.
10 birds observed for 10 days = 100 observations
Indeks = gennemsnitligt antal point pr. kylling pr. observation = 246/100 = 2,46.
Index = mean score per bird per observation = 246/100 = 2,46
En influenza A-virus, uanset subtype, der giver en værdi på over 1,2 i en IVPI-test, betragtes som en HPAI-virus.
Any influenza A virus, regardless of subtype, giving a value of greater than 1,2 in an IVPI test is considered to be a HPAI virus.
Serologiske test og evaluering af resultater
Serological tests and evaluation of results
Den foretrukne metode til påvisning af tilstedeværelsen af influenza-A-virus er at vise forekomsten af nukleoprotein- eller matrixantigenerne, som er fælles for alle influenza-A-vira.
The preferred method used to show the presence of influenza A virus is to demonstrate the possession of the nucleoprotein or matrix antigens which are shared by all influenza A viruses.
Det kan foregå ved hjælp af immunodobbeltdiffusionstest med koncentrerede viruspræparater eller ekstrakter af inficerede chorioallantoismembraner.
It may be done in immunodoublediffusion tests involving either concentrated virus preparations or extracts from infected chorioallantoic membranes.
De foretrukne metoder til serologiske test til påvisning af AI-virusantigener er hæmagglutinationstest (HA-test) og hæmagglutinations-inhibitionstest (HI-test).
The preferred methods used for serological tests for AI virus antibodies are haemagglutination (HA) and haemagglutination inhibition (Hl) tests.
I kapitel 2.7.12 i Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals fra Verdensorganisationen for Dyresundhed (OIE) findes der nærmere oplysninger om laboratorieteknikker og evaluering af resultaterne.
Chapter 2.7.12 of the Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals of the World Organisation for Animal Health (OIE) contains detailed information on the laboratory techniques and the evaluation of the results.
Standardprotokollerne for serologiske test og evaluering heraf, som anvendes af EF-referencelaboratoriet, findes på følgende websted:
The standard protocols for serological tests and the evaluation of their results as applied by the Community reference laboratory can be found on the following website:
Overvågningssystemer kombineret med vaccination
Monitoring systems associated with vaccination