natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Expozice se rozvrhne pro jednotlivé zkušební nádoby a veškerá další manipulace se zkušebními nádobami se provádí náhodně.
The growth-corrected biomagnification factor should also be calculated in the same way, using the growth corrected depuration rate constant (as derived according to section 7 in Appendix 5).
Nedodržení této zásady může vést k jednostrannému vychýlení, které může být považováno za účinek koncentrace.
Again, if Ig has been used to calculate α, it should also be used here instead of I:
Je-li například s experimentálními jednotkami manipulováno v pořadí varianty nebo v pořadí koncentrací, mohl nějaký časově podmíněný efekt, např. únava obsluhy nebo jiné pochybení, vést k vyšším účinkům při vyšších koncentracích.
[Equation A7.5]
Mohou-li být výsledky ovlivněny počátečními podmínkami zkoušky nebo okolními podmínkami, jako je např. umístění v laboratoři, mělo by být dále zváženo blokové uspořádání zkoušky.
assimilation efficiency (absorption of test substance across the gut);
U semistatických zkoušek se dafnie krmí přednostně denně, nejméně však třikrát týdně (tj. s výměnou média).
overall (not growth-corrected) depuration rate constant (day– 1), calculated according to equations in Appendix 5, Section 3;
Mělo by být vzato v úvahu možné zředění zkušební koncentrace v důsledku přidání potravy, čemuž by mělo být v co největší míře zabráněno suspensí řas v náležité koncentraci.
growth-corrected depuration rate constant (day– 1);
Odchylky od této praxe (např. u průtokových zkoušek) se uvedou ve zprávě.
food ingestion rate constant (g food g– 1 fish day– 1);
Potrava rodičovských organismů během zkoušky by měla sestávat přednostně z živých jednobuněčných řas jednoho nebo více těchto druhů: Chlorella sp., Pseudokirchneriella subcapitata (dříve Selenastrum capricornutum) a Desmodesmus subspicatus (dříve Scenedesmus subspicatus).
The growth-corrected half-life (t1/2) is calculated as follows.
Dodávaná potrava by měla vycházet z množství organického uhlíku (C) dodávaného na jeden rodičovský organismus.
[Equation A7.6]
Výzkum (14) ukázal, že u druhu Daphnia magna je množství potravy obsahující od 0,1 do 0,2 mg C na dafnii za den dostatečné na to, aby bylo dosaženo požadovaného živého potomstva nezbytného pro splnění kritérií validity.
The substance assimilation efficiency from the diet can also be estimated if tissue residues are determined during the linear phase of the uptake phase (between days 1 and 3).
Potrava může být dodávána buď v konstantních dávkách po celou dobu zkoušky, nebo podle požadavku v nižších dávkách na začátku zkoušky a poté ve zvyšujících se dávkách s ohledem na růst rodičovských organismů.
In this case the substance assimilation efficiency (α) can be determined as follows
V takovém případě by mělo množství potravy po celou dobu obsahovat doporučené množství 0,1 až 0,2 mg C na dafnii za den.
[Equation A7.7]
Použije-li se k určení požadovaného množství potravy zástupný ukazatel, jako je počet jednobuněčných řas nebo absorbance ve viditelném světle (z praktických důvodů, neboť měření obsahu uhlíku je časově náročné), měla by každá laboratoř vytvořit vlastní nomogram vztahu zástupného ukazatele a obsahu uhlíku v kultuře řas (viz dodatek 3 s návodem na vytvoření nomogramu).
the concentration of test substance in the fish at time t (mg kg– 1 wet weight).
Nomogramy by měly být ověřovány jednou ročně a častěji v případě, že se změní podmínky kultivace řas.
LIPID CORRECTION
Absorbance ve viditelném světle byla shledána lepším zástupným ukazatelem celkového obsahu uhlíku než počet buněk (15).
If lipid content was measured on the same fish as chemical analysis for all sampling intervals, then individual concentrations should be corrected on a lipid basis and the ln(concentration, lipid corrected) plotted against depuration (day) to give C0,d and k2.
Dafniím by měla být dodávána koncentrovaná suspense řas, aby se minimalizoval objem kultivačního média řas uváděný do zkušební nádoby.
Assimilation efficiency (Equation A7.1) can then be calculated on a lipid basis, using Cfood on a lipid basis (i.e. Cfood is multiplied by the mean lipid fraction of the food).
Zkoncentrování řas lze dosáhnout centrifugací a následnou resuspenzí v kultivačním médiu dafnií.
Subsequent calculation using Equation A7.4 and Equation A7.5 will give the lipid-corrected (and growth-dilution corrected) BMF directly.
Osvětlení
Otherwise, the mean lipid fraction (w/w) in the fish and in the food are derived for both treatment and control groups (for food and control group fish this is usually from data measured at exposure start and end; for treatment group fish this is usually from data measured at end of exposure only).
16 hodin světla při intenzitě nepřekračující 15 až 20 μE · m– 2 · s– 1 naměřené na hladině vody v nádobě.
In some studies, fish lipid content may increase markedly; in such cases it is more appropriate to use a mean test fish lipid concentration calculated from the measured values at the end of exposure and end of depuration.
Měří-li se intenzita osvětlení luxmetry, ekvivalentní rozpětí 1000 až 1500 lx pro chladné bílé světlo odpovídá přibližně doporučené světelné intenzitě 15–20 μE·m– 2 · s– 1).
In general, data from the treatment group only should be used to derive both of the lipid fractions.
Teplota zkušebního média by měla být v rozmezí 18–22 °C.
The lipid-correction factor (Lc) is calculated as:
V žádné zkoušce by však teplota neměla v těchto mezích kolísat o více než 2 °C (např. 18 až 20, 19 až 21 nebo 20 až 22 °C).
[Equation A7.8]
Pro účely sledování teploty může být vhodné použít další zkušební nádobu.
where Lfish and Lfood are the mean lipid fractions in fish and food, respectively.
Provzdušňování
The lipid-correction factor is used to calculate the lipid-corrected biomagnification factor (BMFL):
Zkušební nádoby by neměly být během zkoušky provzdušňovány.
[Equation A7.9]
Uspořádání zkoušky
EVALUATION OF DIFFERENCES BETWEEN MEASURED TIME ZERO CONCENTRATION (C0,M) AND DERIVED TIME ZERO CONCENTRATION (C0,D)
Zkouška ke stanovení rozsahu
The measured time zero concentration (C0,m) and derived time zero concentration (C0,d) should be compared.
Je-li to nezbytné, provede se zkouška ke stanovení rozsahu například s pěti koncentracemi zkoušené chemické látky a s dvěma paralelními skupinami pro každou expozici a s kontrolní skupinou.
If they are very similar, then this supports the first order model used to derive the depuration parameters.
Při rozhodování o rozsahu koncentrací, které ve zkoušce ke stanovení rozsahu mají být použity, mohou být užitečné i další informace o akutní toxicitě pro druh Daphnia magna a/nebo pro jiné vodní organismy, získané při zkouškách s obdobnými chemickými látkami nebo z literatury.
In some studies there may be a marked difference between the derived time zero value, C0,d, and the mean measured time zero concentration.
Zkoušky pro stanovení rozsahu trvají 21 dní nebo tak dlouho, aby bylo možné spolehlivě předpovědět úrovně účinků.
C0,m (see last bullet point of paragraph 159 of this test method).
Na konci zkoušky se vyhodnotí reprodukce dafnií.
If C0,d is very much lower than C0,m (C0,d << C0,m), the difference may suggest the presence of undigested spiked food in the gut.
Počet rodičovských organismů a výskyt potomstva by měl být zaznamenán.
This may be tested experimentally by conducting separate analysis on the excised gut if additional (whole fish) samples were taken and stored at the end of the uptake phase.
Hlavní zkouška
Otherwise, if a statistically valid outlier test applied to the depuration phase linear regression indicates that the first sample point of depuration is erroneously elevated, carrying out the linear regression to derive k2 but omitting the first depuration concentration point may be appropriate.
Použití méně než pěti koncentrací by mělo být zdůvodněno.
In such cases, if the uncertainty in the linear regression is greatly decreased, and it is clear that approximately first order depuration kinetics were obeyed, it may be appropriate to use the resulting C0,d and k2 values in the assimilation efficiency calculation.
má-li být pro účinky na reprodukci odhadnuta ECx, doporučuje se, aby byl použit dostatečný počet koncentrací s cílem zjistit ECx s přijatelným intervalem spolehlivosti.
This should be fully justified in the report.
Odhadovaná hodnota ECx by se měla nacházet mezi použitými zkušebními koncentracemi, aby byla získána spíše interpolací než extrapolací.
It is also possible that non-first order kinetics were operating in the depuration phase.
Pro účely následné statistické analýzy je výhodné mít více zkušebních koncentrací (např. 10) a méně paralelních skupin pro každou koncentraci (např. 5, čímž celkový počet nádob zůstane stejný) a s 10 kontrolními skupinami;
If this is likely (i.e. the natural logarithm transformed data appear to follow a curve compared with the straight-line linear regression plot), then the calculations of k2 and C0,d are unlikely to be valid and the advice of a biostatician should be sought.
má-li být odhadnuta LOEC a/nebo NOEC, měla by být nejnižší zkušební koncentrace dostatečně nízká, aby nebyla reprodukční schopnost při této koncentraci významně nižší, než je reprodukční schopnost v kontrolní skupině.
If C0,d is very much higher than the measured value (C0,d >> C0,m) this may indicate: that the substance was depurated very fast (i.e. sampling points approached the limit of quantification of the analytical method very early in the depuration phase, cf.
V opačném případě by měla být zkouška opakována se sníženou nejnižší koncentrací;
Section 6 below); that there was a deviation from first order depuration kinetics; that the linear regression to derive k2 and C0,d is flawed; or that a problem with the measured concentrations in the study occurred at some sampling time points.
má-li být odhadnuta LOEC a/nebo NOEC, měla by být nejvyšší zkušební koncentrace dostatečně vysoká, aby byla reprodukční schopnost při této koncentraci významně nižší, než je reprodukční schopnost v kontrolní skupině.
In such cases the linear regression plot should be scrutinised for evidence of samples at or near the limit of quantification, for outliers and for obvious curvature (suggestive of non-first order kinetics), and highlighted in the report.
V opačném případě by měla být zkouška opakována se zvýšenou nejvyšší koncentrací, pokud jako nejvyšší zkušební koncentrace v počáteční zkoušce nebyla použita maximální požadovaná zkušební koncentrace pro zkoušení chronických účinků (tj. 10 mg/l).
Any subsequent re-evaluation of the linear regression to improve estimated values should be described and justified.
Nejsou-li při nejvyšší koncentraci v rámci zkoušky ke stanovení rozsahu (např. při 10 mg/l) zjištěny žádné účinky nebo pokud je zkoušená chemická látka na základě nezaznamenané toxicity pro jiné organismy a/nebo na základě nízkého/žádného příjmu je s vysokou pravděpodobností málo toxická nebo netoxická, je možné provést zkoušku toxicity pro reprodukci jako limitní zkoušku s použitím zkušební koncentrace např. 10 mg/l a kontrolní skupiny.
If marked deviation from first order kinetics is observed, then the calculations of k2 and C0,d are unlikely to be valid and the advice of a biostatician should be sought.
K exponované i ke kontrolní skupině by mělo být použito deset paralelních skupin.
GUIDANCE FOR VERY FAST DEPURATING TEST SUBSTANCES
Pokud by bylo nutné provést limitní zkoušku v průtokovém systému, bude stačit méně paralelních skupin.
As discussed in paragraph 129 of the test method, some substances may depurate so fast that a reliable time zero concentration, C0,d, and k2 cannot be derived because in samples very early in the depuration phase (i.e. from the second depuration sample onwards) the substance is effectively no longer measured (concentrations reported at the limit of quantification).
Limitní zkouška umožní prokázat, že při mezní koncentraci není žádný statisticky významný účinek, ale jsou-li účinky zaznamenány, bude zpravidla nutné provést úplnou zkoušku.
This situation was observed in the ring test carried out in support of this test method with benzo[a]pyrene, and has been documented in the validation report for the method.
Kromě zkušební série se nasadí jedna série kontrolních skupin pro kontrolu zkušebního média a podle potřeby jedna série kontrolních skupin obsahujících rozpouštědlo nebo dispergátor.
In such cases linear regression cannot be carried out reliably, and is likely to give an unrealistically high estimate of C0,d, resulting in an apparent assimilation efficiency much greater than 1.
Použije-li se rozpouštědlo nebo dispergátor, měla by být jejich koncentrace stejná jako koncentrace v nádobách se zkoušenou chemickou látkou.
It is possible to calculate a conservative estimate of k2 and an “upper bound” BMF in these instances.
Použije se vhodný počet paralelních skupin (viz odstavce 23–24).
Using those data points of the depuration phase where a concentration was measured, up to and including the first “non-detect” concentration (concentration set at limit of quantification), a linear regression (using natural logarithm transformed concentration data against time) will give an estimate of k2.
V dobře vedených zkouškách by měl být variační koeficient středního počtu živých potomků připadajících na rodičovský organismus v kontrolní skupině (kontrolních skupinách) zpravidla ≤ 25 % a měl být uveden v návrzích zkoušek s oddělenými jedinci.
For these sorts of cases this is likely only to involve two data points (e.g. sample days 1 and 2 of depuration) and then k2 can be estimated using Equation A5.22 in Appendix 5.
Obnovování zkušebního média
This k2 estimate can be used to estimate an assimilation efficiency according to equation A7.1, substituting the C0,d value in the equation with the measured time zero concentration (C0,m) in cases where C0,d is clearly estimated to be much higher than could have been achievable in the test.
Četnost obnovování média bude záviset na stabilitě zkoušené chemické látky, médium se však obnovuje alespoň třikrát týdně.
If C0,m was not measureable, then the limit of detection in fish tissue should be used.
Není-li podle předběžných zkoušek stability (viz odstavec 7) koncentrace zkoušené látky po maximální dobu mezi obnoveními média (tj. po tři dny) stálá (tj. nepohybuje-li se v intervalu 80–120 % nominální koncentrace nebo klesá-li pod 80 % naměřené počáteční koncentrace), mělo by být zváženo častější obnovování média nebo průtoková zkouška.
If, in some cases, this gives a value of α > 1, then the assimilation efficiency is assumed to 1 as a “worst case”.
Při obnovování média v semistatických zkouškách se připraví druhá série zkušebních nádob a rodičovské organismy se do nich přenesou např. skleněnou pipetou o vhodném průměru.
The maximum BMFK can then be estimated using Equation A7.4, and should be quoted as a “much less than” (<<) value.
Objem média přeneseného s dafniemi by měl být co nejmenší.
For example, for a study carried out with a feeding rate of 3 % and a depuration half-life less than 3 days, and a “worst case” α of 1, the BMFK is likely to be below about 0,13.
Výsledky pozorování prováděných během zkoušky se zaznamenávají do přehledu údajů (viz příklady v dodatcích 4 a 5).
Given the purpose of this estimation and the fact that values will be conservative in nature, it is not necessary to correct them for growth dilution or fish and food lipid content.
Jsou-li požadována další měření (viz odstavec 44), může být nezbytné provádět další pozorování.
In some regions it may only be possible to obtain fish food with a lipid concentration that falls far short of this upper limit.
Potomstvo
In such cases studies should be run with the lower lipid concentration in the food as supplied, and the feeding rate adjusted appropriately to maintain fish health.
Potomstvo pocházející z každého rodičovského organismu se od jeho prvního výskytu nejlépe denně vybírá a počítá, aby nespotřebovávalo potravu určenou pro rodičovský organismus.
Diet lipids should not be artificially increased by the addition of excess oil.
Pro účely této zkušební metody je třeba počítat pouze živé potomstvo, avšak přítomnost nevylíhnutých vajíček nebo mrtvého potomstva se zaznamená.
Appendix 8
Mortalita
APPROACHES TO ESTIMATE TENTATIVE BCFS FROM DATA COLLECTED IN THE DIETARY EXPOSURE STUDY
Mortalita rodičovských organismů se zaznamenává přednostně denně, nebo by měla být stanovována alespoň při počítání potomstva.
The dietary method is included in this test method for the bioaccumulation testing of substances that cannot in practice be tested using the aqueous exposure method.
Další parametry
The aqueous exposure method gives a bioconcentration factor, whereas the dietary method leads directly to information on feeding biomagnification potential.
Třebaže je tato zkušební metoda navržena hlavně k posouzení účinků na reprodukční schopnost, mohou však být i jiné účinky kvantifikovány v míře dostatečné pro statistickou analýzu.
In many chemical safety regimes information on aquatic bioconcentration is required (for example in risk assessment and the Globally Harmonization System of Classification).
Dojde-li k mortalitě rodičovských organismů v exponovaných paralelních skupinách, mělo by být posouzeno, zda tato mortalita odpovídá vztahu koncentrace a účinku, či nikoli, např. zda existuje významný pokles účinku v závislosti na koncentraci zkoušené chemické látky se sklonem k pozitivnímu účinku (k tomu lze použít statistický test, například Cochranovu-Armitageovu zkoušku trendu).
Hence there is a need to use the data generated in a dietary study to estimate a bioconcentration factor that is comparable to tests conducted according to the aqueous exposure method [1].
Odpovídá-li mortalita vztahu koncentrace a účinku, měla by být mortalita rodičovských organismů označena za účinek zkoušené chemické látky a paralelní skupiny by neměly být z analýzy výsledků zkoušky vyloučeny.
This section explores approaches that may be followed to do this, while recognising the shortcomings that are inherent in the estimations.
Zvláště měření růstu jsou žádoucí, neboť poskytují informace o možných subletálních účincích, které mohou být užitečné vedle samotných měření reprodukce; doporučuje se na konci zkoušky změřit délku rodičovských organismů (tj. délku těla bez zadečkového hrotu).
The dietary study measures depuration to give a depuration rate constant, k2.
Mezi další parametry, které lze měřit nebo vypočítávat, patří doba do vylíhnutí prvních plůdků (a následně dalších potomků), počet a velikost potomků na jeden organismus, počet nevylíhnutých plůdků, přítomnost novorozenců samčího pohlaví (OECD, 2008) nebo efipií a možná i vnitřní míra růstu populace (viz dodatek 1 s definicemi a dodatek 7 ke zjištění pohlaví novorozenců).
If an uptake rate constant can be estimated with the available data for the situation where the fish had been exposed to the test substance via the water, then a kinetic BCF could be estimated.
Četnost analytických stanovení a měření
The estimation of an uptake rate constant for water exposure of a test substance is reliant on many assumptions, all of which will contribute to the estimate's uncertainty.
Koncentrace kyslíku, teplota, tvrdost a pH se měří alespoň jednou týdně před obnovením média a po něm, v kontrolních nádobách a u nejvyšší zkušební koncentrace chemické látky.
Furthermore, this approach to estimating a BCF assumes that the overall rate of depuration (including contributory factors like distribution in the body and individual depuration processes) is independent of the exposure technique used to produce a test substance body burden.
Během zkoušky se koncentrace zkoušené chemické látky stanovují v pravidelných intervalech.
The main assumptions inherent in the estimation approach can be summarised as follows.
U semistatických zkoušek (s obnovováním média), u nichž se má koncentrace zkoušené chemické látky pohybovat v rozmezí ±20 % nominálních hodnot (tj. od 80 do 120 % – viz odstavce 6, 7 a 39), se doporučuje analyzovat alespoň nejvyšší a nejnižší zkušební koncentrace ihned po jejich přípravě a při obnovování, a to jednou během prvního týdne zkoušky (tj. analýzy se provedou na vzorku z téhož roztoku – při jeho přípravě a při obnovování).
Depuration following dietary uptake is the same as depuration following aqueous exposure for a given substance
Tato stanovení se poté opakují alespoň v týdenních intervalech.
Uptake from water would follow first order kinetics
U zkoušek, u nichž se nepředpokládá, že se bude koncentrace zkoušené chemické látky pohybovat v rozmezí ± 20 % nominální hodnoty, je nezbytné analyzovat všechny zkušební koncentrace, a to ihned po jejich přípravě a při obnovování.
Depending on the method used to estimate uptake:
U zkoušek, u nichž není naměřená počáteční koncentrace zkoušené chemické látky v rozsahu ± 20 % nominální koncentrace, avšak u nichž lze dostatečně prokázat, že počáteční koncentrace jsou reprodukovatelné a stálé (tj. od 80 do 120 % počátečních koncentrací), by mohla být stanovení ve 2. a 3. týdnu zkoušky omezena na nejvyšší a nejnižší zkušební koncentrace.
uptake can be correlated with fish weight alone
Ve všech případech je stanovení koncentrací zkoušené chemické látky před obnovením třeba provést pro každou koncentraci pouze u jedné paralelní nádoby.
uptake can be correlated with the substance's octanol-water partition coefficient alone
U průtokových zkoušek je vhodný podobný vzorkovací režim, jaký je popsán u semistatických zkoušek (v tomto případě se však neprovádí měření „starých“ roztoků).
uptake can be correlated with a combination of fish weight and the substance's octanol-water partition coefficient
Doporučuje se však zvýšit počet odběrů v prvním týdnu (např. tři sady měření) pro ujištění, že jsou zkušební koncentrace stálé.
factors that can affect uptake in an aqueous exposure study in practice such as substance bioavailability, adsorption to apparatus, molecular size etc. have little effect
V těchto typech zkoušky se průtok ředicí vody a zkoušené chemické látky kontroluje denně.
and, crucially:
Lze-li prokázat, že byla po celou dobu zkoušky koncentrace zkoušené látky uspokojivě udržována v rozmezí ± 20 % nominální hodnoty nebo naměřené počáteční koncentrace, mohou být výsledky založeny na nominálních nebo naměřených počátečních hodnotách.
The database (“training set”) used to develop the uptake estimation method is representative of the substance under consideration
Je-li odchylka od nominální nebo naměřené počáteční koncentrace větší než ± 20 %, vyjádří se výsledky jako časově vážené střední hodnoty (pro pokyny k výpočtu viz dodatek 6).
Several publications in the open literature have derived equations relating uptake from water in fish via the gills to a substance's octanol-water partition coefficient, fish weight (1) (2) (3) (4), volume and/or lipid content, membrane permeation/diffusion (5) (6), fish ventilation volume (7) and by a fugacity/mass balance approach (8) (9) (10).
Účelem této zkoušky je stanovit účinky zkoušené chemické látky na reprodukční schopnost.
A detailed appraisal of such methods in this context is given in Crookes & Brooke (11).
Celkový počet potomků na rodičovský organismus se vypočte pro každou zkušební nádobu (tj. pro každou paralelní nádobu).
A publication by Barber (12) focussed on modelling bioaccumulation through dietary uptake is also useful in this context as it includes contributions from gill uptake rate models.
Reprodukci je také možné vypočítat na základě produkce živých potomků přeživším rodičovským organismem.
A section of the background document to the 2004 dietary protocol (13) was also devoted to this aspect.
Ekologicky nejvýznamnější proměnnou účinku však je celkový počet živých potomků pocházejících z jednoho rodičovského organismu, který neuhyne náhodně [58] nebo bezděčně [59] během zkoušky.
Most of these models seem to have been derived using limited databases.
Jestliže rodičovský organismus během zkoušky náhodně nebo bezděčně uhyne nebo se zjistí, že jde o samečka, vyloučí se nádoba z experimentu.
For models where details of the database used to build the model are available, it appears that the types of substances used are often of a similar structure or class (in terms of functionality, e.g. organochlorines).