natgillin/translations-raw huggingface dataset:
obecný název, chemický název, číslo CAS, strukturní vzorec a relevantní fyzikálně-chemické vlastnosti,
When opening the bottles, take care to release excess gas pressure either by cautiously loosening the seal, or by means of the three-way pressure-release valve (paragraph 12(e)).
čistota zkoušené látky (obsah nečistot).
It is preferable to use the sludge within a few hours of collection, otherwise store at 35 °C ± 2 °C under a headspace of nitrogen for up to 3 days, when little loss of activity normally occurs.
objemy kapaliny ve zkušebních nádobách a prostoru nad ní,
Warning — Digesting sludge produces flammable gases which present fire and explosion risks:
popis zkušebních nádob a měření plynu (např. typ tlakoměru),
it also contains potentially pathogenic organisms, so take appropriate precautions when handling sludge.
aplikace zkoušené chemické látky a referenční chemické látky na zkušební systém, použité zkušební koncentrace a použití jakýchkoli rozpouštědel,
For safety reasons, do not use glass vessels for collecting sludge.
podrobnosti o použitém inokulu:
Immediately prior to use, mix the sludge by gentle stirring and pass it through a 1 mm2 mesh sieve (paragraph 12(f)) into a suitable bottle (paragraph 12(g)) through the headspace of which a stream of nitrogen is passed.
jméno čistírny odpadních vod, popis zdroje čištěné odpadní vody (např. provozní teplota, doba retence kalu, převážně domácí odpadní vody nebo průmyslový odpad atd.), koncentrace pevných částic, produkce plynů v anaerobní vyhnívací nádrži, předchozí expozice či možná předběžná adaptace na toxické chemické látky nebo místo odběru bahna, sedimentu atd.,
Set aside a sample for measurement of the concentration of total dry solids (see e.g. ISO 11 923 (13) or equivalent EU standard).
inkubační teplota a rozmezí,
In general, use the sludge without dilution.
počet opakování.
The solids concentration is usually between 2 % and 4 % (w/v).
hodnoty pH na konci zkoušky,
Check the pH value of the sludge and, if necessary, adjust to 7 ± 0,5.
všechna data naměřená v nádobách se zkoušenou chemickou látkou, referenční chemickou látkou a slepou kontrolou, podle potřeby (např. tlak v Pa nebo milibarech) v tabulkové formě,
Test substrate
procento inhibice v lahvích se zkoušenou a referenční chemickou látkou a křivky závislosti inhibice na koncentraci,
Dissolve 10 g nutrient broth (e.g. Oxoid), 10 g of yeast extract and 10 g of D-glucose in deionised water and dilute to 100 ml.
vypočítané hodnoty EC50 vyjádřené v mg/l a mg/g,
Sterilise by filtration through a 0,2 μm membrane filter (paragraph 12(h)) and use immediately or store at 4 °C for not longer than 1 day.
produkce plynu na jeden gram kalu za 48 hodin,
Prepare a separate stock solution for each water-soluble test chemical to contain, for example, 10 g/l of the chemical in oxygen-free dilution water (paragraph 14).
rovněž uveďte, zda bylo cílem zkoušky měřit toxicitu vůči předem exponovaným, nebo předem neexponovaným mikroorganismům.
Use appropriate volumes of these stock solutions to prepare the reaction mixtures containing graded concentrations.
Kapitola C.11 této přílohy:
Alternatively, prepare a dilution series of each stock solution so that the volume added to the test bottles is the same for each required final concentration.
Zkouška inhibice respirace aktivovaného kalu.
The pH of the stock solutions should be adjusted to 7 ± 0,2 if necessary.
Kapitola C.43 této přílohy:
For test chemicals which are insufficiently soluble in water, consult ISO 10 634 (12) or equivalent EU standard.
Anaerobní biologická rozložitelnost organických sloučenin ve vyhnilém kalu:
If an organic solvent is needed to be used, avoid solvents such as chloroform and carbon tetrachloride, which are known strongly to inhibit methane production.
metoda měřením produkce plynů.
Prepare a solution of an appropriate concentration of water-insoluble chemical in a suitable volatile solvent, for example, acetone, di-ethylether.
Steinberg C and Kettrup A, pp 117-132 (1992).
Add the required volumes of solvent solution to the empty test bottles (paragraph 12(b)) and evaporate the solvent before the addition of sludge.
Příklad zařízení k měření produkce bioplynu pomocí tlaku plynu
For other treatments use ISO 10 634 (12) or equivalent EU standard, but be aware that any surfactants used to produce emulsions may be inhibitory to anaerobic gas production.
1 Tlakoměr
If it is thought that the presence of organic solvents and emulsifying agents causes artefacts, the test chemical could be added directly to the test mixture as a powder or liquid.
2 Třícestný plynotěsný ventil
Volatile chemicals and water-insoluble liquid test chemicals may be injected into inoculated serum bottles, using micro-syringes (paragraph 12(i)).
3 Injekční jehla
Add test chemicals to the bottles to give a geometric series of concentrations, for example, 500 mg/l, 250 mg/l, 125 mg/l, 62,5 mg/l, 31,2 mg/l and 15,6 mg/l.
4 Plynotěsný uzávěr (tvarovaný uzávěr a septum)
If the range of toxicity is not known from similar chemicals, first carry out a preliminary range-finding test with concentration of 1000 mg/l, 100 mg/l and 10 mg/l to ascertain the appropriate range.
5 Prostor nad kapalinou v lahvi
Prepare an aqueous solution of 3,5-dichlorophenol (10 g/l) by gradually adding the minimum amount of 5 mol/l of sodium hydroxide solution to the solid, while shaking, until it has dissolved.
6 Inokulum rozkládajícího kalu
Then add de-oxygenated dilution water (paragraph 14) to the required volume;
Zkušební nádoby v prostředí o teplotě 35 °C ± 2 °C
sonication may aid dissolution.
Převod údajů tlakoměru
Other reference chemicals may be used when the average range of the EC50 has been obtained in at least three tests with different inocula (different sources or different times of collection).
Hodnoty naměřené tlakoměrem lze převést na objemy plynu pomocí standardní křivky a z nich lze vypočítat objem plynu vyprodukovaný na jeden gram suchého kalu za 48 hodin.
INTERFERENCE/ERRORS
Tento index aktivity se používá jako jedno z kritérií pro hodnocení platnosti výsledků zkoušky.
Some constituents of sludge presumably could react with potential inhibitors making them unavailable to micro-organisms so giving lower, or no, inhibition.
Kalibrační křivka se získá vstříknutím známých objemů plynu při teplotě 35 °C ± 2 °C do sérových lahví obsahujících objem vody odpovídající objemu reakční směsi VR.
Also, if the sludge already contains a chemical which is inhibitory, erroneous results would be obtained when that chemical was subjected to the test.
do pěti lahviček na sérum se rozdělí poměrné části vody odpovídající objemu VR v ml, udržované o teplotě 35 ± 2 °C.
Apart from these possibilities, there are a number of identified factors which can lead to false results.
Lahve uzavřete a umístěte je do vodní lázně o teplotě 35 °C ± 2 °C a nechte 1 hodinu, aby systém dosáhl rovnováhy.
These are listed in Appendix 3, together with methods of eliminating or at least reducing errors.
zapne se tlakoměr, nechá se ustálit a vynuluje se,
The number of necessary replicates depends on the degree of precision required for the inhibition indices.
Zaveďte injekční jehlu skrz uzávěr jedné z lahví, otevřete ventil, počkejte, dokud se na tlakoměru neobjeví nula, a potom ventil zavřete.
If the bottle seals are sufficiently gas-tight over the duration of the test, set up just one batch (at least triplicates) of test bottles at each concentration required.
tento postup se opakuje s ostatními lahvičkami,
Similarly, set up one batch of bottles with reference chemical and one set of controls.
do každé lahvičky se nastříkne 1 ml vzduchu o teplotě 35 °C ± 2 °C.
However, if the seals of the bottles are reliable for only one or a few piercings, set up a batch (e.g. triplicates) of the test bottles for each interval (t) for which results are required for all concentrations of a test chemical to be tested.
Jehlou (napojenou na tlakoměr) se propíchne víčko jedné z lahviček a údaj o tlaku se nechá stabilizovat.
Similarly, set up “t” batches of bottles for the reference chemical and for the controls.
Tlak se zaznamená, otevře se ventil, dokud tlak nevykáže nulovou hodnotu, a poté se ventil uzavře,
The use of a glove box (paragraph 12(j)) is recommended.
Zopakujte celý postup se 2 ml, 3 ml, 4 ml, 5 ml, 6 ml, 8 ml, 10 ml, 12 ml, 16 ml, 20 ml, a 50 ml vzduchu.
At least 30 minutes before starting the test, start a flow of nitrogen gas through the glove box containing all the necessary equipment.
Vyneste do grafu převodní křivku tlaku (Pa) jako funkci vstříknutého objemu plynu (ml).
Ensure that the temperature of the sludge is within 35 °C ± 2 °C during handling and sealing of the bottles.
V rozmezí 0 Pa až 70000 Pa a v rozmezí 0 ml až 50 ml produkce plynu je odezva přístroje lineární.
Preliminary Test
Zjištěné faktory, které mohou vést k chybným výsledkům
If the activity of the sludge is unknown, it is recommended to carry out a preliminary test.
Kvalita uzávěrů lahví
Set up controls to give, for example, concentrations of solids of 10 g/l, 20 g/l and 40 g/l plus substrate but use no test chemical.
Existují různé druhy komerčně dostupných sept pro sérové lahve.
Also, use different volumes of reaction mixture in order to have three or four ratios of volume of headspace to volume of liquid.
Mnoho z nich, včetně sept z butylové pryže, ztrácí těsnost při propíchnutí jehlou za podmínek této zkoušky.
From the results of gas volumes produced at various time intervals, the most suitable conditions which allow two daily measurements yielding significant volumes of gas and release of pressure per day at optimal sensitivity [7] without fear of explosions.
Někdy tlak po propíchnutí septa injekční jehlou klesá velmi pomalu.
Addition of test chemicals
Doporučuje se používat plynotěsná septa, aby se zamezilo únikům plynu (odstavec 12 b)).
Add water-soluble test chemicals to empty test bottles (paragraph 12(b)) as aqueous solutions (paragraph 18).
Vlhkost v injekční jehle
Use at least triplicate sets of bottles for each of a range of concentrations (paragraph 20).
Někdy se v injekční jehle a trubici nahromadí vlhkost, o čemž svědčí malá záporná hodnota tlaku zobrazená na tlakoměru.
In the case of insoluble and poorly soluble test chemical, inject solutions of these in organic solvents using a micro-syringe into empty bottles to give replicate sets of each five concentrations of test chemical.
K nápravě této situace jehlu odstraňte, protřepejte trubici, osušte papírovou utěrkou a připojte novou jehlu (odstavce 12 c) a 35).
Evaporate the solvent by passing a jet of nitrogen gas over the surface of the solutions in the test bottles.
Kontaminace kyslíkem
Alternatively, add insoluble solid chemicals as weighed amounts of the solid directly to the test bottles.
Anaerobní metody vykazující chybu v důsledku kontaminace kyslíkem, který může způsobit nižší produkci plynu.
If insoluble and poorly water-soluble liquid test chemicals are not added using a solvent, add them directly by micro-syringe to the test bottles after addition of inoculum and test substrate (see paragraph 30).
V této metodě by se měla tato možnost minimalizovat použitím přísně anaerobních technik, včetně použití rukavicového boxu.
Volatile test chemicals may be added in the same way.
Hrubé částice substrátu v kalu
Addition of inoculum and substrate
Anaerobní produkce plynu a citlivost kalu jsou ovlivněny substráty, které jsou do zkušebních lahví přeneseny spolu s inokulem.
Stir an appropriate volume of sieved digesting sludge (see paragraph 16) in a 5 litre bottle (paragraph 12(g)), while passing a stream of nitrogen gas through the headspace.
Rozkládající kal z domácích anaerobních vyhnívacích nádrží často ještě obsahuje rozeznatelný materiál, jako jsou vlasy a celulózové rostlinné zbytky, který znesnadňuje odběr reprezentativních vzorků.
Flush test bottles, containing aqueous solutions or evaporated solvent solutions of test chemicals, with a stream of nitrogen gas, for about two minutes to remove air.
Procezením lze hrubý nerozpustný materiál z kalu odstranit, a zvýšit tak pravděpodobnost odběru reprezentativních vzorků (odstavec 16).
Dispense aliquots, e.g. 100 ml, of the well-mixed sludge into the test bottles using a large-tipped pipette or a measuring cylinder.
Těkavé zkoušené chemické látky
It is essential to fill the pipette in one step to the exact volume of sludge required because of the ease of settlement of sludge solids.
Těkavé zkoušené chemické látky se budou uvolňovat do prostoru nad kapalinou ve zkušebních lahvích.
If more is taken up, empty the pipette and start again.
Tato skutečnost může vést ke ztrátě části zkoušeného materiálu ze systému během ventilace po měřeních tlaku a k získání falešně vysokých hodnot EC50.
Then add sufficient substrate solution (paragraph 17) to give a concentration of 2 g/l of each of the nutrient broth, yeast extract and D-glucose in the mixture, while nitrogen is still flushing through.
Tuto chybu lze snížit volbou vhodného poměru objemu prostoru nad kapalinou vůči objemu kapaliny a neprováděním ventilace po měřeních tlaku (10).
The following is an example for test batches.
Nelinearita produkce plynu
Total volume of bottle = 160 ml.
Pokud graf střední kumulativní produkce plynu jako funkce doby inkubace nemá přibližně lineární průběh v intervalu 48 hodin, může se přesnost zkoušky snížit.
Volume of liquid = 103 ml
Odstranění tohoto nedostatku lze docílit použitím rozkládajícího kalu z jiného zdroje a/nebo přidáním zvýšené koncentrace zkušebního substrátu – živné půdy, kvasničného extraktu a glukózy (odstavec 29).
Gas volume = 57 ml, or 35,6 % of total volume.
Použití na environmentální vzorky s nízkou koncentrací biomasy – anaerobní bahna, sedimenty atd.
Final mass concentration of test chemical in test bottles
A.1 Obecně platí, že specifická mikrobiální aktivita (objem plynu vyprodukovaného na gram sušiny) přirozeně se vyskytujících anaerobních bahen, sedimentů, půd atd. je mnohem nižší než aktivita anaerobního kalu získaného z odpadních vod.
Volume of test chemical
Proto je třeba změnit některé experimentální podmínky, pokud se mají měřit inhibiční účinky chemických látek na tyto méně aktivní vzorky.
Reagents and media
U těchto méně aktivních vzorků jsou možné dva obecné způsoby provedení zkoušky:
Stock solution
provést modifikovanou předběžnou zkoušku (odstavec 25) s neředěným vzorkem bahna, půdy atd. při teplotě 35 °C ± 2 °C nebo při teplotě místa odběru vzorku, chceme-li dosáhnout přesnější simulace (stejně jako v části 1 normy ISO 13 641);
para.
nebo provést zkoušku s ředěným vzorkem (1:100) kalu z vyhnívací nádrže za účelem simulace nízké aktivity očekávané u vzorku prostředí, avšak při teplotě udržované na 35 °C ± 2 °C (stejně jako v části 2 normy ISO 13 641).
18
A.2 Možnost a) lze provést podle zde popsané metody (odpovídající části 1 normy ISO 13 641), avšak je třeba provést předběžnou zkoušku (odstavec 25) ke zjištění optimálních podmínek, pokud již nejsou známy z předchozích zkoušek.
1 g/l
Vzorek bahna nebo sedimentu by se měl důkladně promíchat, např. v míchačce, a je-li to nutné, naředit malým množstvím odvzdušněné vody (odstavec 14), aby byl dostatečně tekutý pro přenos pipetou s dlouhou špičkou nebo odměrným válcem.
Dilution water
Pokud se má za to, že ve vzorku mohou chybět živiny, je možné vzorek bahna odstředit (za anaerobních podmínek) a resuspendovat v minerálním médiu obsahujícím kvasničný extrakt (A.11).
para.
A.3 Možnost b).
14
Tato možnost přiměřeně napodobuje nízkou aktivitu environmentálních vzorků, avšak chybí při ní vysoká koncentrace suspendovaných pevných částic přítomných v těchto vzorcích.
para.
Úloha těchto pevných částic při inhibici není známa, avšak je možné, že by reakce mezi zkoušenými chemickými látkami a složkami bahna a rovněž adsorpce zkoušených chemických látek na pevné částice mohly vést ke snížení toxicity zkoušené chemické látky.
16
A.4 Teplota je dalším důležitým faktorem:
Substrate
k dosažení přesné simulace by se měly zkoušky provádět při teplotě místa odběru vzorku, protože je známo, že různé skupiny bakteriálních společenstev produkujících methan jsou aktivní při různých teplotních rozmezích, a sice termofilové při teplotě ~30–35 °C, mezofilové při 20–25 °C, a psychrofilové při < 20 °C, což může vést k různým inhibičním vzorcům.
para.
A.5 Doba trvání.
17
V obecné zkoušce, části 1, používající neředěný kal, byla produkce plynu za 2–4 dny vždy dostatečná, zatímco v části 2 se stokrát ředěným kalem bylo za toto období v okružním testu vyprodukováno nedostatečné či žádné množství plynu.
Similarly flush out with nitrogen gas sufficient empty test bottles to deal with any volatile and insoluble liquid test chemical (see paragraph 27).
Madsen et al.
Controls and reference chemical
při popisu této druhé zkoušky uvádí, že je třeba vyčkat alespoň 7 dní.
Set up at least triplicate sets of bottles, containing sludge and substrate only, to act as controls.
Zkouška při nízké koncentraci biomasy (možnost b)
Set up further replicate bottles containing sludge and substrate plus sufficient stock solution of the reference chemical, 3,5-dichlorophenol (paragraph 21) to result in a final concentration of 150 mg/l.
Měly by se provést následující změny a úpravy, které přidávají či nahrazují některé stávající odstavce a pododstavce hlavního textu.
This concentration should inhibit gas production by about 50 %.
A.6 V odstavci 6 se doplňuje:
Alternatively, set up a range of concentrations of the reference chemical.
Podstata zkoušky;
In addition, set up four extra bottles for pH measurement which contain sludge, de-oxygenated water and substrate.
‚Tato technika se může použít s anaerobním kalem naředěným 1:100, částečně proto, aby se simulovala nízká aktivita bahen a sedimentů.
Add the test chemical to two bottles at the highest concentration being tested and add de-oxygenated water to the remaining two bottles.
Inkubační teplota může být buď 35 °C, nebo odpovídat teplotě místa, z něhož byl vzorek odebrán.
Ensure that all bottles — test and reference chemicals, and controls — contain the same volume (VR) of liquid;
Protože bakteriální aktivita je mnohem nižší než v neředěném kalu, měla by se inkubační doba prodloužit alespoň na 7 dní.‘
where necessary, add de-oxygenated deionised water (paragraph 14) to make up the volume.
A.7 V odstavci 12 a) se doplňuje:
The headspace should be between 10 % and 40 % of the bottle volume, the actual value being selected from the data obtained from the preliminary test.
‚inkubátor by měl být schopen provozu při teplotách klesajících až k 15 °C.‘
After adding all constituents to the bottles, remove the needle supplying the gas and seal each bottle with a rubber stopper and an aluminium cap (Paragraph 12(b)) moistening the stopper with a drop of deionised water to aid insertion.
A.8 Za odstavec 13 se přidává další činidlo:
Mix the contents of each bottle by shaking.
‚kyselina fosforečná (H3PO4), 85 % (hmot.) vodný roztok.‘
Incubation of bottles
A.9 Na konec odstavce 16 se doplňuje:
Transfer the bottles to the thermostatically controlled incubator, preferably equipped with a shaking device, and maintained at 35 °C ± 2 °C.
‚Ve zkoušce použijte konečnou koncentraci 0,20 ± 0,05 g/l celkové sušiny.‘
The bottles are incubated in the dark.
Tento substrát se nepoužívá, nýbrž se nahrazuje kvasničným extraktem (viz odstavce 17, A.11, A.12.
After about 1 hour, equalise the pressure in the bottles to atmosphere by inserting the syringe needle, attached to the pressure-meter (paragraph 12(c)), through the seal of each bottle in turn, open the valve until the pressure-meter reads zero and finally close the valve.
A.13).
The needle should be inserted at an angle of about 45° to prevent gas leaking from the bottles.
A.11 K naředění anaerobního kalu je třeba minerální médium obsahující stopové prvky a pro usnadnění se k tomuto médiu přidá organický substrát, jímž je kvasničný extrakt.
If the bottles are incubated without shaking facility, shake manually twice each day during the total incubation period to equilibrate the system.
Za odstavec 17 se vkládá nový odstavec, který zní
Incubate the bottles and invert them to prevent any loss of gas through the septum.
Zkušební minerální médium s kvasničným extraktem.
Inversion is, however, not appropriate in cases in which insoluble test chemicals may adhere to the bottom of the flask.
Připraví se z 10násobně koncentrovaného zkušebního média (odstavec 17 b); A.12) s roztokem stopových prvků (odstavec 17 c); A.13).
Pressure measurement
Použijte čerstvě dodaný nonahydrát sulfidu sodného (odstavec 17 b); A.12) nebo ho před použitím namočte a vysušte, aby bylo zajištěno, že má dostatečnou redukční kapacitu.
When the bottles have reached 35 °C ± 2 °C, measure and record the pH of the contents of two of the four bottles set up for the purpose and discard the contents;
Pokud se zkouška provádí bez použití rukavicového boxu (odstavec 12 j)), měla by se koncentrace sulfidu sodného v zásobním roztoku zvýšit na 2 g/l (z 1 g/l).
continue incubating remaining bottles in the dark.
Sulfid sodný lze rovněž z vhodného zásobního roztoku přidat skrz septum uzavřených zkušebních lahví (neboť tento postup snižuje riziko oxidace) k dosažení konečné koncentrace 0,2 g/l.
Measure and record the pressure in the bottles twice a day over the following 48 hours to 72 hours by inserting the needle of the pressure-meter through the seal of each bottle, in turn, drying the needle between measurements.
Alternativně je možné použít citrát titanitý (odstavec 17 b)).
Keep all parts of the bottle at the incubation temperature during the measurement, which should be carried out as quickly as possible.
Přidejte ho skrz septum uzavřených zkušebních lahví, abyste získali koncentraci 0,8 mmol/l až 1,0 mmol/l.
Allow the pressure reading to stabilise and record it.
Citrát titanitý je vysoce účinné redukční činidlo o nízké toxicitě, které se připravuje tímto způsobem:
Then open the valve for ventilation and close it when the pressure reads zero.
Roztok pomocí uhličitanu sodného neutralizujte na pH 7 ± 0,5 a přelijte do vhodné sérové lahve pod proudem plynného dusíku.
The number of readings and ventilations should be limited for volatile chemicals to one (at the end of incubation) or two to minimise loss of test chemical (10).
Koncentrace citrátu titanitého v tomto zásobním roztoku je 164 mmol/l.
If the pressure reading is negative, do not open the valve.
Zkušební médium ihned použijte, nebo ho uchovávejte při teplotě 4 °C maximálně po dobu 1 dne.
Moisture sometimes accumulates in the syringe needle and tubing, indicated by a small negative pressure reading.
A.12 b) Desetinásobně koncentrované zkušební médium připravené z těchto látek:
In this case remove the needle, shake the tubing, dry with a tissue and fit a new needle.
bezvodý dihydrogenfosforečnan draselný (KH2PO4)
pH measurement
2,7 g
Measure and record the pH of the contents of each bottle after the final pressure measurement.
(nebo 11,2 g dodekahydrátu)
Plot curves of mean cumulative gas production (Pa) against time for control, test and reference bottles.
chlorid amonný (NH4Cl)
Select a time on the linear part of the curve, usually 48 hours, and calculate the percentage inhibition (I) for each concentration from equation [1]:
5,3 g
I percentage inhibition,in %;
dihydrát chloridu vápenatého (CaCl2 · 2H2O)
the gas pressure produced with test material at selected time, in Pascal (Pa);
0,75 g
the gas pressure produced in the control at the same time, in Pascal (Pa).
hexahydrát chloridu manganatého (MgCl2 · 6H2O)
It would be advisable to draw both plots, i.e. Plot I against concentration and also against logarithm of the concentration so that the curve which is nearer to linearity may be selected.
1,0 g
Assess the EC50 (mg/l) value visually or by regression analysis from that curve nearer to linearity.
tetrahydrát chloridu železnatého (FeCl2 · 4H2O)
For comparative purposes it may be more useful to express the concentration of the chemical as mg chemical/g of total dry solids.
resazurin (redoxní indikátor)
To obtain this concentration, divide the volumetric concentration (mg/l) by the volumetric concentration of dry sludge solids (g/l) (paragraph 16).
0,01 g
Calculate either the percentage inhibition achieved by the single concentration of the reference chemical used or the EC50 if a sufficient number of concentrations have been investigated.