natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Nejvyšší zkušební koncentrace zkoušené chemické látky by obvykle neměla překročit rozpustnost látky ve vodě za zkušebních podmínek.
48 hrs
Pro zkoušené chemické látky s nízkou rozpustností ve vodě může být nezbytné připravit koncentrovaný zásobní roztok nebo disperzi látky pomocí organického rozpouštědla nebo dispergátoru, aby se usnadnilo přidávání přesných množství zkoušené chemické látky do zkušebního média, a napomohlo se tak jejímu rozptýlení a rozpuštění.
72 hrs
Měla by být vynaložena maximální snaha takové látky nepoužívat.
96 hrs
Používání pomocných rozpouštědel nebo dispergátorů by nemělo způsobovat žádnou fytotoxicitu.
Coagulated embryos
Příkladem běžně používaných rozpouštědel, která nezpůsobují fytotoxicitu při koncentracích až do 100 μl/l, jsou aceton a dimethylformamid.
Lack of somite formation
Jestliže se použije rozpouštědlo nebo dispergátor, jeho konečná koncentrace by se měla uvést v závěrečné zprávě a udržovat na minimální hodnotě (≤ 100 μl/l) a všechny exponované vzorky a kontroly by měly obsahovat stejnou koncentraci rozpouštědla nebo dispergátoru.
Non-detachment of the tail
Další pokyny k používání dispergátorů jsou uvedeny v (5).
Lack of heartbeat
Zkušební a kontrolní skupiny
Coagulation of the embryo: Coagulated embryos are milky white and appear dark under the microscope (see Appendix 5, Fig.
Předběžná znalost toxicity zkoušené chemické látky pro Myriophyllum spicatum, např. ze zkoušky ke stanovení rozsahu, pomůže při volbě vhodných zkušebních koncentrací.
1).
Při hlavní zkoušce toxicity se zpravidla použije alespoň pět (jako ve zkoušce inhibice růstu druhů Lemna, kapitola C.26 této přílohy) až sedm zkušebních koncentrací tvořících geometrickou posloupnost; měly by být zvoleny tak, aby hodnoty NOEC a EC50 byly zahrnuty v rozmezí koncentrací (viz níže).
The number of coagulated embryos is determined after 24, 48, 72 and 96 hrs.
Faktor mezi zkušebními koncentracemi by optimálně neměl překročit 3,2, ale lze použít i vyšší hodnotu, jestliže je křivka závislosti koncentrace a odezvy plochá.
Lack of somite formation: At 26 ± 1 °C, about 20 somites have formed after 24 hrs (see Appendix 5, Figure 2) in a normally developing zebrafish embryo.
Použití méně než pěti koncentrací by mělo být zdůvodněno.
A normally developed embryo shows spontaneous movements (side-to-side contractions).
Jestliže hodnota EC50 leží mimo rozmezí zkušebních koncentrací, související intervaly spolehlivosti budou velké, a proto správné hodnocení statistické vhodnosti modelu nemusí být možné.
If not, the embryos are considered dead.
Jestliže je cílem odhadnout LOEC/NOEC, nejnižší zkušební koncentrace by měla být dostatečně nízká, aby růst nebyl výrazně nižší než růst v kontrolním vzorku.
Non-detachment of the tail: In a normally developing zebrafish embryo, detachment of the tail (seeAppendix 5, Figure 3) from the yolk is observed following posterior elongation of the embryonic body.
Dále by nejvyšší zkušební koncentrace měla být dostatečně vysoká, aby byl růst výrazně nižší než růst v kontrolním vzorku.
Absence of tail detachment is recorded after 24, 48, 72 and 96 hrs.
Pokud tomu tak není, zkouška se bude muset opakovat v odlišném rozmezí koncentrací (s výjimkou případů, kdy je nejvyšší koncentrace na mezi rozpustnosti nebo představuje maximální požadovaný koncentrační limit, např. 100 mg/l).
Lack of heartbeat: In a normally developing zebrafish embryo at 26 ± 1 °C, the heartbeat is visible after 48 hrs (see Appendix 5, Figure 4).
Počet kontrolních nádob použitých k opakování (a případných nádob s rozpouštědly) by měl být nejméně deset.
Particular care should be taken when recording this endpoint, since irregular (erratic) heartbeat should not be recorded as lethal.
Jestliže stanovení NOEC není požadováno, uspořádání zkoušky lze pozměnit tak, že se zvýší počet koncentrací a sníží počet replik pro příslušnou koncentraci.
Moreover, visible heartbeat without circulation in aorta abdominalis is considered non-lethal.
Počet kontrolních opakování by však v každém případě měl být nejméně deset.
To record this endpoint, embryos showing no heartbeat should be observed under a minimum magnification of 80x for at least one minute.
Expozice
Absence of heartbeat is recorded after 48, 72 and 96 hrs.
Čerstvé boční větve z předkultury zkrácené na 2,5 cm od báze se náhodně přiřadí do zkušebních nádob za aseptických podmínek; každá zkušební nádoba by měla obsahovat jednu boční větev o délce 2,5 cm, která by měla mít na konci apikální meristém.
Hatching rates of all treatment and control groups should be recorded from 48 hrs onwards and reported.
Vybraný rostlinný materiál by v každé zkušební nádobě měl mít stejnou kvalitu.
Although hatching is not an endpoint used for the calculation of the LC50, hatching ensures exposure of the embryo without a potential barrier function of the chorion, and as such may help data interpretation.
K minimalizaci vlivu prostorových rozdílů v intenzitě světla nebo v teplotě je potřebné náhodné uspořádání zkušebních nádob v inkubátoru.
Detailed descriptions of the normal (35) and examples of abnormal development of zebrafish embryos are illustrated in Appendixes 3 and 5.
Při provádění pozorování se rovněž vyžaduje uspořádání do bloků nebo náhodné přemísťování nádob (nebo častější přemísťování).
Analytical measurements
Jestliže předběžná zkouška stálosti ukazuje, že během doby trvání zkoušky (14 dnů) nelze udržet koncentraci zkoušené chemické látky (tj. měřená koncentrace poklesne pod 80 % naměřené počáteční koncentrace), doporučuje se režim semistatické zkoušky.
At the beginning and at the end of the test, pH, total hardness and conductivity in the control(s) and in the highest test chemical concentration are measured.
V tomto případě by měly být rostliny nejméně jednou během zkoušky (např. v den 7) vystaveny čerstvě připraveným zkušebním a kontrolním roztokům.
In semi-static renewal systems the pH should be measured prior to and after water renewal.
Četnost expozice čerstvému médiu závisí na stabilitě zkoušené chemické látky; pro udržení téměř konstantních koncentrací vysoce nestálých či těkavých chemických látek může být zapotřebí vyšší četnost.
The dissolved oxygen concentration is measured at the end of the test in the negative controls and highest test concentration with viable embryos, where it should be in compliance with the test validity criteria (see paragraph 8f).
Scénář expozice prostřednictvím aplikace na lístek (rozprašování) není do této zkušební metody zahrnut.
If there is concern that the temperature varies across the 24-well plates, temperature is measured in three randomly selected vessels.
Pomocí teplého a/nebo chladného bílého fluorescenčního osvětlení je třeba zajistit ozářenost zvolenou z rozmezí 100 až 150 μE m– 2 s– 1, přičemž se tato ozářenost měří v pásmu fotosynteticky aktivního záření (400 až 700 nm) v bodech nacházejících se ve stejné vzdálenosti od zdroje světla na dně zkušebních nádob (ekvivalent cca 6000–9000 lx) a s použitím cyklu světlo-tma v poměru 16:8 h.
Temperature should be recorded preferably continuously during the test or, as a minimum, daily.
Naměřenou hodnotu bude ovlivňovat metoda detekce světla a měření, zejména typ čidla.
In a static system, the concentration of the test chemical should be measured, as a minimum, in the highest and lowest test concentrations, but preferably in all treatments, at the beginning and end of the test.
Kulová čidla (která reagují na světlo přicházející ze všech úhlů nad i pod rovinou měření) a „kosinová“ čidla (která reagují na světlo přicházející ze všech úhlů nad rovinou měření) jsou vhodnější než jednosměrná čidla, neboť poskytují vyšší naměřené hodnoty pro vícebodový světelný zdroj zde popsaného typu.
In semi-static (renewal) tests where the concentration of the test chemical is expected to remain within ± 20 % of the nominal values, it is recommended that, as a minimum, the highest and lowest test concentrations be analysed when freshly prepared and immediately prior to renewal.
Teplota ve zkušebních nádobách by měla být 23 ± 2 °C.
For tests where the concentration of the test chemical is not expected to remain within ± 20 % of nominal, all test concentrations must be analysed when freshly prepared and immediately prior to renewal.
Zvláštní pozornost je zapotřebí věnovat posunu pH ve speciálních případech, jako jsou zkoušky nestálých chemických látek nebo kovů; hodnota pH by měla zůstat v rozmezí 6 až 9.
In case of insufficient volume for analysis, merging of test solutions, or use of surrogate chambers being of the same material and having the same volume to surface area ratios as 24-well plates, may be useful.
Další pokyny naleznete v (5).
It is strongly recommended that results be based on measured concentrations.
Zkouška je ukončena za 14 dnů poté, co byly rostliny přeneseny do zkušebních nádob.
When the concentrations do not remain within 80-120 % of the nominal concentration, the effect concentrations should be expressed relative to the geometric mean of the measured concentrations; see Chapter 5 in the OECD Guidance Document on Aquatic Toxicity Testing of Difficult Substances and Mixtures for more details (28).
Měření a analytická stanovení
LIMIT TEST
Na počátku zkoušky činí délka hlavního výhonku 2,5 cm (viz odstavec 29); měří se pravítkem (viz dodatek 4) nebo pomocí fotografie a analýzy obrazu.
Using the procedures described in this test method, a limit test may be performed at 100 mg/l of test chemical or at its limit of solubility in the test medium (whichever is the lower) in order to demonstrate that the LC50 is greater than this concentration.
Na počátku zkoušky, dále nejméně jednou během 14denní expoziční doby a při ukončení zkoušky se musí určit délka hlavního výhonku zkušebního organismu, který má normální nebo nenormální vzhled.
The limit test should be performed using 20 embryos in the treatment, the positive control and –if necessary- in the solvent control and 24 embryos in the negative control.
Poznámka: Jako alternativa pro ty, kdo nemají analýzu obrazu, lze pro změření délky hlavního výhonku při zahájení a během zkoušky použít také sterilní pravítko, je-li před přidáním rostlin do zkušebních nádob pracovní stůl sterilizovaný.
If the percentage of lethality at the concentration tested exceeds the mortality in the negative control (or solvent control) by 10 %, a full study should be conducted.
V závěrečné zprávě by se měly zaznamenat změny ve vývoji rostlin, např. deformace výhonků, vzhled, známky nekrózy, chlorózy, rozpadávání rostlin nebo ztráta vzplývavosti, a v délce a vzhledu kořenu.
Any observed effects should be recorded.
Měly by se rovněž zaznamenat významné znaky zkušebního média (např. přítomnost nerozpuštěného materiálu, růst řas, hub a bakterií ve zkušební nádobě).
If mortality exceeds 10 % in the negative control (or solvent control), the test becomes invalid and should be repeated.
Kromě určení délky hlavního výhonku během zkoušky by se také měly hodnotit účinky zkoušené chemické látky na tři (nebo více) následujících proměnných měření:
In this test, the individual wells are considered independent replicates for statistical analysis.
Celková délka bočních větví
The percentages of embryos for which at least one of the apical observations is positive at 48 and/or 96 hrs are plotted against test concentrations.
Celková délka výhonků
For calculation of the slopes of the curve, LC50 values and the confidence limits (95 %), appropriate statistical methods should be applied (38) and the OECD Guidance Document on Current Approaches in the Statistical Analysis of Ecotoxicity Data should be consulted (39).
Celková délka kořenů
chemical identification, such as IUPAC or CAS name, CAS number, SMILES or InChI code, structural formula, purity, chemical identity of impurities as appropriate and practically feasible, etc. (including the organic carbon content, if appropriate).
Čerstvá hmotnost
Test organisms:
Hmotnost sušiny
test procedure used (e.g., semi-static renewal);
Počet přeslenů
photoperiod;
Poznámka 1:
test design (e.g., number of test chambers, types of controls);
Pozorování provedená během zkoušky ke stanovení rozsahu by mohla pomoci při volbě příslušných doplňkových měření výše uvedených šesti proměnných.
water quality characteristics in fish maintenance (e.g. pH, hardness, temperature, conductivity, dissolved oxygen);
Poznámka 2:
dissolved oxygen concentration, pH, total hardness, temperature and conductivity of the test solutions at the start and after 96 hrs;
Stanovení čerstvé hmotnosti a hmotnosti sušiny (parametry iv) a v)) je vysoce žádoucí.
method of preparation of stock solutions and test solutions as well as frequency of renewal;
Poznámka 3:
justification for use of solvent and justification for choice of solvent, if other than water;
Vzhledem k tomu, že sacharóza a světlo (expozice kořenů světlu během zkoušky) mohou mít vliv na nosiče auxinů (růstové hormony rostlin) a že některé chemické látky mohou mít mechanismus účinku auxinového typu, je zařazení kořenových ukazatelů (parametr iii) sporné.
the nominal test concentrations and the result of all analyses to determine the concentration of the test chemical in the test vessels; the recovery efficiency of the method and the limit of quantification (LoQ) should also be reported;
Poznámka 4:
evidence that controls met the overall survival validity criteria;
Výsledky mezilaboratorní porovnávací zkoušky ukazují na vysoký variační koeficient (> 60 %) pro celkovou délku bočních větví (parametr i)).
fertilisation rate of the eggs;
Celková délka bočních větví je v každém případě zahrnuta do měření celkové délky výhonků (parametr ii)), jež vykazuje přijatelnější variační koeficient < 30 %.
hatching rate in treatment and control groups.
Poznámka 5:
maximum concentration causing no mortality within the duration of the test;
Z výše uvedených úvah vycházejí doporučené hlavní měřené ukazatele, kterými jsou: celková délka výhonků, čerstvá hmotnost a hmotnost sušiny (parametry ii), iv) a v)); parametr vi) – počet přeslenů – je ponechán na úsudku experimentátora.
minimum concentration causing 100 % mortality within the duration of the test;
Délka hlavního výhonku a počet přeslenů má tu výhodu, že je lze stanovit pro každou zkušební a kontrolní nádobu na počátku, během a na konci zkoušky pomocí fotografie a analýzy obrazu, ačkoli může být použito také (sterilní) pravítko.
cumulative mortality for each concentration at the recommended observation times;
Celkovou délku bočních větví, celkovou délku kořenů (jako součet všech bočních větví nebo kořenů) a celkovou délku výhonků (jako součet délky hlavního výhonku a celkové délky bočních větví) lze měřit pravítkem na konci expozice.
the LC50 values at 96 hrs (and optionally at 48 hrs) for mortality with 95 % confidence limits, if possible;
Čerstvá hmotnost a/nebo hmotnost sušiny by se měly určit na počátku zkoušky ze vzorku předkultury, která se obvykle používá k zahájení zkoušky, a na konci zkoušky pak na základě rostlinného materiálu z každé zkušební a kontrolní nádoby.
graph of the concentration-mortality curve at the end of the test;
Celkovou délku bočních větví, celkovou délku výhonků, celkovou délku kořenů, čerstvou hmotnost, hmotnost sušiny a počet přeslenů lze určit takto:
mortality in the controls (negative controls, internal plate controls, as well as positive control and any solvent control used);
Délku bočních větví lze určit změřením všech bočních větví pravítkem na konce expozice.
data on the outcome of each of the four apical observations;
Celková délka bočních větví je součet všech bočních větví v každé zkušební a kontrolní nádobě.
incidence and description of morphological and physiological abnormalities, if any (see examples provided in Appendix 5, Figure 2);
Celkovou délku výhonků lze určit analýzou obrazu nebo pravítkem.
incidents in the course of the test which might have influenced the results;
Celková délka výhonků je součet celkové délky bočních větví a délky hlavního výhonku v každé zkušební a kontrolní nádobě na konci expozice.
statistical analysis and treatment of data (probit analysis, logistic regression model and geometric mean for LC50);
Délku kořenů lze určit změřením všech kořenů pravítkem na konci expozice.
slope and confidence limits of the regression of the (transformed) concentration-response curve.
Celková délka kořenů je součet všech kořenů v každé zkušební a kontrolní nádobě.
Any deviation from the test method and relevant explanations.
Čerstvou hmotnost lze určit zvážením zkušebních organismů na konci expozice.
Discussion and interpretation of results.
Veškerý rostlinný materiál z každé zkušební a kontrolní nádoby se opláchne destilovanou vodou a utře dosucha celulózovým papírem.
OECD (2011) Validation Report (Phase 1) for the Zebrafish Embryo Toxicity Test: Part I and Part II.
Po této přípravě se určí čerstvá hmotnost zvážením.
Series on Testing and Assessment No. 157, OECD, Paris.
Počáteční biomasa (čerstvá hmotnost) se určuje na základě vzorku zkušebních organismů odebraných ze stejné vsázky použité k naočkování zkušebních nádob.
OECD (2012) Validation Report (Phase 2) for the Zebrafish Embryo Toxicity Test: Part I and Part II (Annexes).
Po přípravě pro určení čerstvé hmotnosti se zkušební organismy vysuší při teplotě 60 °C na konstantní hmotnost.
Series on Testing and Assessment No. 179, OECD, Paris.
Tato hmotnost je hmotnost sušiny.
Belanger, S. E., Rawlings J. M. and Carr G. J. (2013).
Počáteční biomasa (hmotnost sušiny) se určuje na základě vzorku zkušebních organismů odebraných ze stejné vsázky použité k naočkování zkušebních nádob.
Use of Fish Embryo Toxicity Tests for the Prediction of Acute Fish Toxicity to Chemicals.
Spočítají se všechny přesleny na hlavním výhonku.
Environmental Toxicology and Chemistry 32: 1768-1783. .
Četnost měření a analytická stanovení
Pharmacol.: 149 (2), 196-209
Jestliže se používá statické uspořádání zkoušky, pH každé expozice by se mělo změřit na počátku a na konci zkoušky.
Chapter C.4 of this Annex: Ready Biodegradability.
Jestliže se používá semistatické uspořádání zkoušky, pH by se mělo měřit v každé vsázce „čerstvého“ zkušebního roztoku před každým obnovením a rovněž i v odpovídajících „spotřebovaných“ roztocích.
Chapter C.29 of this Annex: Ready Biodegradability, CO2 in sealed vessels.
Intenzita osvětlení by se měla měřit v růstové komoře, inkubátoru nebo místnosti v bodech nacházejících se ve stejné vzdálenosti od zdroje světla jako zkušební organismy.
Chapter C.48 of this Annex: Fish Short Term Reproduction Assay.. See Appendix 4a.
Měření je třeba provádět nejméně jednou během zkoušky.
35, 4097–4102.
Teplota média v náhradní nádobě držené za stejných podmínek v růstové komoře, inkubátoru nebo místnosti by se měla zaznamenávat nejméně jednou denně (nebo nepřetržitě se zařízením k záznamu dat).
Available: [http://www.iso.org].
Během zkoušky se koncentrace zkoušené chemické látky (látek) určují ve vhodných intervalech.
Series on Testing and Assessment No. 23, OECD, Paris.
Při statických zkouškách je minimálním požadavkem určení koncentrací na počátku a na konci zkoušky.
European Commission (2007) Commission recommendation 2007/526/EC of 18 June 2007 on guidelines for the accommodation and care of animals used for experimental and other scientific purposes (notified under document number C(2007) 2525) [http://eur-lex.europa.eu/LexUriServ/LexUriServ.do?uri=OJ:L:2007:197:0001:0089:EN:PDF]
Při semistatických zkouškách, u nichž se neočekává, že koncentrace zkoušené chemické látky (látek) zůstanou v rozmezí ± 20 % nominální koncentrace, je nezbytné analyzovat všechny čerstvě připravené zkušební roztoky a tytéž roztoky při každém obnovení.
European Union (2010) Directive 2010/63/EU of the European Parliament and Council of 22 September 2010 on the protection of animals used for scientific purposes (OJ L 276, 20.10.2010, p.
Ovšem u zkoušek, u nichž nejsou naměřené počáteční koncentrace zkoušené chemické látky (látek) v rozmezí ± 20 % nominální hodnoty, avšak u nichž lze dostatečně prokázat, že počáteční koncentrace jsou reprodukovatelné a stálé (tj. od 80 do 120 % počáteční koncentrace), mohou být chemická stanovení provedena pouze na nejvyšších a nejnižších zkušebních koncentracích.
33).
Ve všech případech je třeba určit zkušební koncentrace před obnovením při každé zkušební koncentraci vždy pouze u jedné nádoby z počtu použitých opakování (nebo u sdruženého obsahu nádob všech opakování).
http://eur-lex.europa.eu/LexUriServ/LexUriServ.do?uri=OJ:L:2010:276:0033:0079:EN:PDF
Lze-li prokázat, že byla po celou dobu zkoušky zkušební koncentrace uspokojivě udržována v rozmezí ± 20 % nominální nebo naměřené počáteční koncentrace, může být analýza výsledků založena na nominálních nebo naměřených počátečních hodnotách.
Chapter C.2 of this Annex: Daphnia sp., Acute Immobilistaion Test.
Je-li odchylka od nominální nebo naměřené počáteční koncentrace větší než ± 20 %, analýza výsledků by měla být založena na geometrické střední koncentraci během expozice nebo na modelech popisujících pokles koncentrace zkoušené chemické látky (5).
Series on Testing and Assessment No. 54.
Za určitých okolností, např. pokud předběžná zkouška naznačuje, že zkoušená chemická látka nemá žádné toxické účinky při koncentracích až do 100 mg/l nebo až do meze své rozpustnosti ve zkušebním médiu nebo v případě přípravků až do meze jejich dispergovatelnosti, může se provést limitní zkouška zahrnující porovnání odezvy v kontrolní skupině a odezvy v jedné exponované skupině (100 mg/l nebo koncentrace rovná mezi rozpustnosti).
OECD, Paris.
Důrazně se doporučuje podpořit tuto zkoušku analýzou expozičních koncentrací.
Detailed review paper “Fish embryo toxicity assays”.
Všechny dříve popsané zkušební podmínky a kritéria platnosti se vztahují i na limitní zkoušku s výjimkou toho, že počet opakování s exponovanými vzorky by se měl zdvojnásobit.
UBA report under contract no.
Růst v kontrolní a exponované skupině může být analyzován pomocí statistické zkoušky pro porovnání středních hodnot, např. Studentova t-testu.
20385422 German Federal Environment Agency, Berlin.
Tato zkušební metoda popisuje dvě proměnné odezvy.
Blastula
Průměrná specifická růstová rychlost
A cellular formation around the animal pole that covers a certain part of the yolk.
Tato proměnná odezvy se počítá na základě změn logaritmů délky hlavního výhonku a dále na základě změn logaritmů jiných parametrů měření, tj. celkové délky výhonků, čerstvé hmotnosti, hmotnosti sušiny nebo počtu přeslenů v čase (ve dnech) v kontrolních vzorcích a každé exponované skupině.
A substance or a mixture
Poznámka: Výpočet průměrné specifické růstové rychlosti nelze provést pro parametry měření, jako jsou celková délka bočních větví a celková délka kořenů.
Epiboly
Na počátku zkoušky zkušební organismus nemá žádné boční větve a žádné kořeny (na základě přípravy z předkultury); výpočet průměrné specifické růstové rychlosti z nulové hodnoty není definován.
is a massive proliferation of predominantly epidermal cells in the gastrulation phase of the embryo and their movement from the dorsal to the ventral side, by which entodermal cell layers are internalised in an invagination-like process and the yolk is incorporated into the embryo.
Výtěžek
Flow-through test
Tato proměnná odezvy se počítá na základě změn délky hlavního výhonku a dále na základě změn jiných parametrů měření – tj. přednostně celkové délky výhonků, čerstvé hmotnosti, hmotnosti sušiny nebo počtu přeslenů a jiných parametrů, je-li to považováno za užitečné – v kontrolních vzorcích a každé exponované skupině až do ukončení zkoušky.
A test with continued flow of test solutions through the test system during the duration of exposure.
Odhady toxicity by měly být založeny na délce hlavního výhonku a třech dalších proměnných měření (tj. přednostně celkové délce výhonků, čerstvé hmotnosti, hmotnosti sušiny nebo počtu přeslenů), viz odstavec 37 a poznámky 2, 4 a 5 k tomuto odstavci), protože některé chemické látky mohou ovlivňovat jiné proměnné měření mnohem více než délku hlavního výhonku.
Internal Plate Control
Pouhým počítáním délky hlavního výhonku by se tento účinek nezjistil.
Internal control consisting of 4 wells filled with dilution water per 24-well plate to identify potential contamination of the plates by the manufacturer or by the researcher during the procedure, and any plate effect possibly influencing the outcome of the test (e.g. temperature gradient).