natgillin/translations-raw huggingface dataset:
u studií trvajících déle než jeden týden: tělesné hmotnosti jednotlivých zvířat během studie, včetně rozpětí tělesné hmotnosti, střední hodnoty a směrodatné odchylky pro každou skupinu; spotřeba potravy,
Longer electrophoresis times (e.g. 30 or 40 minutes to maximize sensitivity) usually lead to stronger positive responses with known mutagens.
vztah dávka-účinek, pokud je zřejmý,
However longer electrophoresis times may also lead to excessive migration in control samples.
u každé tkáně/zvířete, procentuální zastoupení DNA v ohonu (nebo jiná měřítka, pokud byla zvolena) a střední hodnoty pro každý preparát, střední hodnoty pro každé zvíře a střední hodnoty za skupinu,
In each experiment the voltage should be kept constant, and the variability in the other parameters should be within a narrow and specified range, for example in the JaCVAM trial 0,7 V/cm delivered a starting current of 300 mA.
údaje o provedených negativních kontrolách a historické údaje negativních kontrol s rozpětími, středními/mediánovými hodnotami a směrodatnými odchylkami pro každou hodnocenou tkáň,
The depth of buffer should be adjusted to achieve the required conditions and maintained throughout the experiment.
údaje o provedených pozitivních kontrolách a historické údaje pozitivních skupin,
The current at the start and end of the electrophoresis period should be recorded.
u jiných tkání než jater křivka dávka-účinek na základě pozitivní kontroly.
The optimum conditions should therefore be determined during the initial demonstration of proficiency in the laboratory concerned with each tissue studied.
Křivka může být vynesena z údajů shromážděných během prokazování způsobilosti (viz odstavce 16–17) a mělo by k ní být připojeno zdůvodnění vhodnosti rozsahu a rozptylu odezev dané tkáně na kontrolní látku, s odkazy na existující literaturu,
The temperature of the electrophoresis solution through unwinding and electrophoresis should be maintained at a low temperature, usually 2-10 °C (10).
použité statistické analýzy a metody; a kritéria pro hodnocení odezvy jako pozitivní, negativní nebo neurčité,
The temperature of the electrophoresis solution at the start of unwinding, the start of electrophoresis, and the end of electrophoresis should be recorded.
četnost výskytu buněk „hedgehogs“ v každé skupině a u každého zvířete.
After completion of electrophoresis, the slides should be immersed/rinsed in the neutralization buffer for at least 5 minutes.
Durand (1990), Heterogeneity in radiation-induced DNA damage and repair in tumor and normal cells using the „Comet“ assay, Radiation Research, Vol.
Gels can be stained and scored “fresh” (e.g. within 1-2 days) or can be dehydrated for later scoring (e.g. within 1-2 weeks after staining) (56).
122/1, s. 86–94.
However, the conditions should be validated during the demonstration of proficiency and historical data should be obtained and retained separately for each of these conditions.
Kapitola B.8 této přílohy: Subakutní inhalační toxicita: 28denní studie.
In case of the latter, slides should be dehydrated by immersion into absolute ethanol for at least 5 minutes, allowed to air dry, and then stored, either at room temperature or in a container in a refrigerator until scored.
Kapitola B.29 této přílohy: Subchronická inhalační toxicita: 90denní studie.
Methods of Measurement
OECD (2002), „Guidance Document on the Recognition, Assessment and Use of Clinical Signs as Humane Endpoints for Experimental Animals Used in Safety Evaluation“, OECD Environment, Health and Safety Publications (EHS), Series on Testing and Assessment, No.
Comets should be scored quantitatively using an automated or semi-automated image-analysis system.
19, OECD Publishing, Paris.
The slides will be stained with an appropriate fluorescent stain e.g. SYBR Gold, Green I, propidium iodide or ethidium bromide and measured at a suitable magnification (e.g. 200x) on a microscope equipped with epi-fluorescence and appropriate detectors or a digital (e.g. CCD) camera.
Alkalická jednobuněčná gelová elektroforéza
Cells may be classified into three categories as described in the atlas of comet images (57), namely scorable, non-scorable and “hedgehog” (see paragraph 56 for further discussion).
citlivá metoda detekce primárního poškození DNA na úrovni jednotlivé buňky/jádra.
Only scorable cells (clearly defined head and tail with no interference with neighbouring cells) should be scored for % tail DNA to avoid artefacts.
Kometa
There is no need to report the frequency of non-scorable cells.
tvar, který nabývají nukleoidy poté, co jsou vystaveny jednomu elektroforéznímu poli, vzhledem k podobnosti kometám: hlavou je jádro a ohon tvoří DNA migrující z jádra ven v elektrickém poli.
The frequency of hedgehogs should be determined based on the visual scoring (since the absence of a clearly-defined head will mean they are not readily detected by image analysis) of at least 150 cells per sample (see paragraph 56 for further discussion) and separately documented.
Kritická proměnná / kritický parametr
All slides for analysis, including those of positive and negative controls, should be independently coded and scored “blinded” so the scorer is unaware of the treatment condition.
je to proměnná protokolu, jejíž malá změna může mít velký dopad na závěry zkoušky.
For each sample (per tissue per animal), at least 150 cells (excluding hedgehogs — see paragraph 56) should be analysed.
Kritické proměnné mohou být u různých tkání různé.
Scoring 150 cells per animal in at least 5 animals per dose (less in the concurrent positive control — see paragraph 29) provides adequate statistical power according to the analysis of Smith et al., 2008 (5).
Kritické proměnné by neměly být měněny, zejména v průběhu zkoušky, aniž by se zvážilo, jak může změna změnit odezvu ve zkoušce vyjádřenou například velikostí a variabilitou v pozitivních a negativních kontrolách.
If slides are used, this could be from 2 or 3 slides scored per sample when five animals per group are used.
V závěrečné zprávě by měly být uvedeny změny kritických proměnných provedené během zkoušky nebo ve srovnání se standardním protokolem dané laboratoře a každá změna by měla být odůvodněna.
Several areas of the slide should be observed at a density that ensures there is no overlapping of tails.
Intenzita ohonu nebo procentuální zastoupení DNA v ohonu
Scoring at the edge of slides should be avoided.
odpovídá intenzitě ohonu komety v poměru k celkové intenzitě (hlavy plus ohonu).
DNA strand breaks in the comet assay can be measured by independent endpoints such as % tail DNA, tail length and tail moment.
Zohledňuje množství zlomů DNA vyjádřené v procentech.
All three measurements can be made if the appropriate image software analyser system is used.
FAKTORIÁLNÍ POKUS KE ZJIŠTĚNÍ ROZDÍLŮ MEZI POHLAVÍMI V KOMETOVÉM TESTU IN VIVO
However, the % tail DNA (also known as % tail intensity) is recommended for the evaluation and interpretation of results (12) (40) (41) (42), and is determined by the DNA fragment intensity in the tail expressed as a percentage of the cell's total intensity (13).
Při tomto pokusu se na každé úrovni koncentrace testuje minimálně 5 samců a 5 samic a výsledkem je uspořádání s použitím minimálně 40 zvířat (20 samců a 20 samic plus příslušné pozitivní kontroly).
Tissue damage and cytotoxicity
Analýza dělí variabilitu v souboru údajů na variabilitu mezi pohlavími, variabilitu mezi úrovněmi koncentrace a variabilitu interakce mezi pohlavími a koncentracemi.
Positive findings in the comet assay may not be solely due to genotoxicity, target tissue toxicity may also result in increases in DNA migration (12) (41).
Veškeré podrobnosti příslušné metodiky jsou dostupné v mnoha běžných učebnicích statistiky (viz odkazy) a v příručkách ke statistickým programům.
Conversely, low or moderate cytotoxicity is often seen with known genotoxins (12), showing that it is not possible to distinguish DNA migration induced by genotoxicity versus that induced by cytotoxicity in the comet assay alone.
OMEZENÍ ZKOUŠKY V SOUČASNOSTI
However, where increases in DNA migration are observed, it is recommended that an examination of one or more indicators of cytotoxicity is performed as this can aid in interpretation of the findings.
Za současného stavu poznání jsou s kometovým testem in vivo spojena i některá omezení.
Increases in DNA migration in the presence of clear evidence of cytotoxicity should be interpreted with caution.
Očekává se, že tato omezení budou redukována nebo úžeji definována, jakmile bude k dispozici více zkušeností s použitím zkoušky, které umožní řešit příslušné bezpečnostní otázky v právních předpisech.
Many measures of cytotoxicty have been proposed and of these histopathological changes are considered a relevant measure of tissue toxicity.
Některé druhy poškození DNA mohou být krátkodobé, tj. mohou být napraveny mnohem rychleji, než je možné zaznamenat po uplynutí 24 hodin nebo ještě později po poslední dávce.
Observations such as inflammation, cell infiltration, apoptotic or necrotic changes have been associated with increases in DNA migration, however, as demonstrated by the JaCVAM validation trial (12) no definitive list of histopathological changes that are always associated with increased DNA migration is available.
Nebyl zjištěn žádný seznam druhů krátkodobého poškození ani chemických látek, které by pravděpodobně mohly tento druh poškození vyvolávat, a není ani známo, v jakém časovém intervalu lze tento druh poškození detekovat.
Changes in clinical chemistry measures (e.g. AST, ALT), can also provide useful information on tissue damage and additional indicators such as caspase activation, TUNEL stain, Annexin V stain, etc. may also be considered.
Optimální doba (doby) pro odběr vzorků může (mohou) také záviset na chemické látce a na způsobu podávání dávky a doba odběru vzorků by měla být stanovena na základě kinetických údajů (například čas Tmax, ve kterém je dosažena nejvyšší koncentrace plazmy nebo tkáně), pokud jsou takové údaje k dispozici.
However, there are limited published data where the latter have been used for in vivo studies and some may be less reliable than others.
Většina validačních studií, které tuto zkušební metodu podpořily, stanovila provedení pitvy na dobu 2 nebo 3 hodiny po podání poslední dávky.
Hedgehogs (or clouds, ghost cells) are cells that exhibit a microscopic image consisting of a small or non-existent head, and large diffuse tails and are considered to be heavily damaged cells, although the etiology of the hedgehogs is uncertain (see Appendix 3).
Většina studií v publikované literatuře popisuje podání poslední dávky mezi 2 a 6 hodinami před usmrcením.
Due to their appearance, % tail DNA measurements by image analysis are unreliable and therefore hedgehogs should be evaluated separately.
Na základě těchto zkušeností se proto v této zkušební metodě doporučuje, aby – neexistují-li údaje, které by mohly nasvědčovat jiné době – byla poslední dávka podávána ve stanoveném čase 2 až 6 hodin před pitvou.
The occurrence of hedgehogs should be noted and reported and any relevant increase thought to be due to the test chemical should be investigated and interpreted with care.
Nebyly zjištěny žádné experimentální údaje, které by zkoumaly citlivost tohoto testu při detekování krátkodobých poškození DNA po podávání potravy nebo pitné vody ve srovnání s podáváním žaludeční sondou.
Knowledge of the potential mode of action of the test chemicals may help with such considerations.
Byla zjištěna poškození DNA po podávání potravy a pitné vody, ale takových zpráv je poměrně málo v porovnání s mnohem většími zkušenostmi s podáváním žaludeční sondou a injekcí.
The animal is the experimental unit and therefore both individual animal data and summarized results should be presented in tabular form.
Může tak být snížená citlivost zkoušky v případě chemických látek, které vyvolávají krátkodobá poškození a jsou podávány v potravě nebo s pitnou vodou.
Due to the hierarchical nature of the data it is recommended that the median %tail DNA for each slide is determined and the mean of the median values is calculated for each animal (12).
Nebyly provedeny mezilaboratorní zkoušky s jinými tkáněmi než s játry a se žaludkem, a proto nebylo vydáno doporučení, např. ve formě předpokládaných rozpětí v rámci pozitivních a negativních kontrol, jak dosáhnout citlivé a reprodukovatelné odezvy v jiných tkáních než v játrech.
The mean of the individual animal means is then determined to give a group mean.
Ani u jater však nebylo dosaženo shody, pokud jde o stanovení nižšího limitu pro hodnotu negativní kontroly.
All of these values should be included in the report.
Existuje několik publikací, jež prokazují zkreslující účinek cytotoxicity in vitro, avšak bylo publikováno velmi málo údajů získaných in vivo, a proto nemohlo být doporučeno žádné jediné měřítko cytotoxity.
Alternative approaches (see paragraph 53) may be used if scientifically and statistically justified.
S nárůsty migrace DNA byly spojovány histopatologické změny jako zánět, infiltrace buněk, apoptotické nebo nekrotické změny, avšak jak prokázal validační experiment JaCVAM (OECD, 2014), tyto změny nevedly vždy k pozitivním nálezům v kometovém testu, a tudíž není k dispozici žádný konečný seznam histopatologických změn, které by byly vždy spojeny se zvýšenou migrací DNA.
Statistical analysis can be done using a variety of approaches (58) (59) (60) (61).
Jako ukazatel cytotoxicity byly dříve navrženy buňky zvané „hedgehogs“ (nebo „clouds“, „ghost cells“), avšak etiologie „hedgehogs“ není známa.
When selecting the statistical methods to be used, the need for transformation (e.g. log or square root) of the data and/or addition of a small number (e.g. 0,001) to all (even non-zero) values to mitigate the effects of zero cell values, should be considered as discussed in the above references.
Existují údaje, jež nasvědčují tomu, že mohou vznikat v důsledku cytotoxicity související s chemickou látkou, mechanicky/enzymaticky vyvolaného poškození vzniklého při přípravě vzorku (Guerard et al., 2014) a/nebo extrémnějšího účinku genotoxicity zkoušené chemické látky.
Details of analysis of treatment/sex interactions when both sexes are used, and subsequent analysis of data where either differences or no differences are found is given in Appendix 2.
Jiné údaje, zdá se, ukazují na to, že jsou důsledkem rozsáhlého, ale snad napravitelného poškození DNA (Lorenzo et al., 2013).
Data on toxicity and clinical signs should also be reported.
Tkáně nebo buněčná jádra byly úspěšně zmrazeny pro pozdější analýzu.
The concurrent negative control is considered acceptable for addition to the laboratory historical negative control database as described in paragraph 16
To obvykle vede k měřitelnému účinku na odezvu vůči vehikulu a pozitivní kontrolní látce (Recio et al., 2010; Recio et al., 2012; Jackson et al., 2013).
Concurrent positive controls (see paragraph 29) should induce responses that are compatible with those generated in the historical positive control database and produce a statistically significant increase compared with the concurrent negative control.
Je-li tento postup použit, laboratoř by měla prokázat schopnost používat mrazicí metody a potvrdit přijatelná nízká rozpětí procentuálního zastoupení DNA v ohonu v cílových tkáních zvířat ošetřených vehikulem i to, že přesto mohou být detekovány pozitivní odezvy.
Adequate numbers of cells and doses have been analysed (paragraphs 52 and 36-38).
V literatuře bylo popsáno zmrazení tkání pomocí různých metod.
The criteria for the selection of highest dose are consistent with those described in paragraph 36.
V současnosti však neexistuje shoda ohledně toho, jak nejlépe tkáně zmrazovat a rozmrazovat a jak posoudit, zda potenciálně změněná odezva může ovlivnit citlivost zkoušky.
Providing that all acceptability criteria are fulfilled, a test chemical is considered to be clearly positive if:
Práce z poslední doby prokazují, že seznam kritických proměnných se podle všeho bude dále zužovat a parametry kritických proměnných zpřesňovat (Guerard et al., 2014).
at least one of the test doses exhibits a statistically significant increase compared with the concurrent negative control,
Lorenzo Y. et al.
any of the results are outside the distribution of the historical negative control data for a given species, vehicle, route, tissue, and number of administrations.
V části C se kapitola C.13 nahrazuje tímto:
When all of these criteria are met, the test chemical is then considered able to induce DNA strand breakage in the tissues studied in this test system.
Bioakumulace v rybách: expozice ve vodním prostředí a v potravě
If only one or two of these criteria are satisfied, see paragraph 62.
Tato zkušební metoda je rovnocenná Pokynu OECD pro zkoušení (TG) č. 305 (2012).
Providing that all acceptability criteria are fulfilled, a test chemical is considered clearly negative if:
Revize této zkušební metody sleduje dva hlavní cíle.
there is no concentration-related increase when evaluated with an appropriate trend test.
Za prvé má začlenit zkoušku bioakumulace v potravě [20] vhodnou pro stanovení bioakumulačního potenciálu látek s velmi nízkou rozpustností ve vodě.
all results are inside the distribution of the historical negative control data for a given species, vehicle, route, tissue, and number of administrations.
Za druhé má vytvořit zkušební metodu, ve které se ve vhodných případech z důvodu dobrých životních podmínek zvířat používá méně ryb a která je nákladově efektivnější.
direct or indirect evidence supportive of exposure of, or toxicity to, the target tissue(s) has been demonstrated.
V letech po přijetí konsolidované zkušební metody C.13 (1) bylo zkoušeno mnoho látek a laboratoře i regulační orgány získaly značné zkušenosti.
The test chemical is then considered unable to induce DNA strand breakage in the tissues studied in this test system.
To vedlo k přesvědčení, že při splnění určitých kritérií (srov. odstavec 88) je možné složitost zkoušky snížit a že lze uplatnit postupný přístup.
In case the response is neither clearly negative nor clearly positive (i.e. not all the criteria listed in paragraphs 59 or 60 are met) and in order to assist in establishing the biological relevance of a result, the data should be evaluated by expert judgement and/or further investigations conducted, if scientifically justified.
Zkušenosti také ukázaly, že biologické faktory, např. růst ryb a obsah lipidů v nich, mohou mít značný dopad na výsledky a že je zapotřebí je brát v úvahu.
Scoring additional cells (where appropriate) or performing a repeat experiment possibly using optimised experimental conditions (e.g. dose spacing, other routes of administration, other sampling times or other tissues) could be useful.
Bylo rovněž zjištěno, že zkoušení látek velmi málo rozpustných ve vodě nemusí být technicky proveditelné.
In rare cases, even after further investigations, the data set will preclude making a conclusion of positive or negative results, and will therefore be concluded as equivocal.
U látek s velmi nízkou rozpustností ve vodě může mít expozice touto cestou omezený význam ve srovnání s expozicí v potravě.
To assess the biological relevance of a positive or equivocal result, information on cytotoxicity at the target tissue is required (see paragraphs 54-55).
To vedlo k vývoji zkušební metody, ve které jsou ryby exponovány prostřednictvím potravy (srov. odstavce 7 až 14 a odstavec 97 a následující).
Where positive or equivocal findings are observed solely in the presence of clear evidence of cytotoxicity, the study would be concluded as equivocal for genotoxicity unless there is enough information that is supportive of a definitive conclusion.
V roce 2010 byla provedena validace (mezilaboratorní porovnávací zkouška) zkoušky expozice v potravě.
In cases of a negative study outcome where there are signs of toxicity at all doses tested, further study at non-toxic doses may be advisable.
Hlavní změny jsou tyto:
source, lot number if available;
za dostatečné lze považovat zkoušení pouze jedné zkušební koncentrace, je-li pravděpodobné, že biokoncentrační faktor (BCF) je nezávislý na zkušební koncentraci,
stability of the test chemical, limit date for use, or date for re-analysis if known.
uspořádání minimalizované zkoušky expozice ve vodním prostředí, při které je možný menší počet odběrů vzorků, pokud jsou splněna určitá kritéria,
Solvent/vehicle:
měl by být měřen obsah lipidů v rybách, tak aby hodnotu BCF bylo možno vyjádřit na základě 5 % obsahu lipidů,
justification for choice of solvent/vehicle;
větší důraz na odhad kinetického BCF (je-li možný) hned po odhadování BCF v rovnovážném stavu,
preparation of dose formulations;
pro některé skupiny látek bude navržena zkouška expozice v potravě, pokud je považována za vhodnější než zkouška expozice ve vodním prostředí,
analytical determinations on formulations (e.g. stability, homogeneity, nominal concentrations).
měla by být stanovena hmotnost ryb, tak aby hodnotu BCF bylo možno opravit o korekci růstem.
species/strain used and scientific and ethical justifications for the choice;
Před provedením zkoušky bioakumulace je třeba získat tyto informace o zkoušené látce:
source, housing conditions, diet, enrichment, etc.;
citlivost analytické metody pro měření tkání a koncentrací zkoušené látky a případných metabolitů ve vodním prostředí nebo v potravě (srov. odstavec 65);
individual weight of the animals at the start and at the end of the test, including body weight range, mean and standard deviation for each group.
rozpustnost ve vodě [zkušební metoda A.6; (2)]; pro získání spolehlivé hodnoty by měla být stanovena v souladu s metodou, která je vhodná pro (odhadované) rozpětí rozpustnosti.
results from the range-finding study (if conducted);
U hydrofobních látek to zpravidla bude sloupcová eluční metoda;
rationale for route of administration;
rozdělovací koeficient n-oktanol/voda, KOW [21] [zkušební metody A.8 (4), A.24 (5), A.23 (6)]; nebo jiné vhodné informace o chování při rozdělení (např. sorpce na lipidy, KOC); pro získání spolehlivé hodnoty by koeficient měl být stanoven v souladu s metodou, která je vhodná pro (odhadované) rozpětí KOW.
site of injection (for subcutaneous or intravenous studies);
U hydrofobních látek to zpravidla bude metoda pomalého míchání (zkušební metoda [A.23 (6)];
methods for sample preparation, where available, histopathological analyses, especially for a chemical giving a positive comet response;
stabilita látky ve vodě (hydrolýza [zkušební metoda C.7 (7)]);
rationale for tissue selection;
stabilita látky v potravě (zvláště pokud je zvolen zkušební postup expozice v potravě);
methods for verifying that the test chemical reached the target tissue, or general circulation, if negative results are obtained;
informace o fototransformaci důležité pro nastavení podmínek ozáření při zkoušce);
details of diet and water quality;
povrchové napětí (tj. u látek, kde není možné určit log KOW) [zkušební metoda A.5 (9)];
detailed description of treatment and sampling schedules and justifications for the choices (e.g. toxicokinetic data, where available);
tlak par [zkušební metoda A.4 (10)];
method of pain relief, analgesia;
jakékoli případné informace o biotickém nebo abiotickém rozkladu ve vodě, mimo jiné např. přímá biologická rozložitelnost [zkušební metody C.4 části II až VII (11), C.29 (12)];
procedures for isolating and preserving tissues;
případné informace o metabolitech: složení, log KOW, tvorba a rozložitelnost;
methods for preparing single cell/nucleus suspension;
kyselá disociační konstanta (pKa) u látek, které by mohly ionizovat.
source and lot numbers of all reagents (where possible);
V případě potřeby by se měla upravit hodnota pH zkušební vody, aby se zajistilo, že látka je během zkoušky v nedisociovaném stavu, je-li to slučitelné s druhem ryb.
methods for evaluating cytotoxicity;
Nezávisle na zvolené metodě expozice nebo schématu odběru vzorků je v této zkušební metodě popsán postup pro charakterizaci potenciálu látek bioakumulovat se v rybách.
electrophoresis conditions;
Ačkoli jsou průtokové zkušební režimy preferovány, připouštějí se i semistatické režimy, jsou-li splněna kritéria validace (srov. odstavce 24 a 113).
staining techniques used; and