natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Pokyny k některým vhodným úpravám jsou uvedeny v literatuře (2, 3 a 4).
From the average specific growth rates recorded in a series of test solutions, the concentration bringing about a specified x % inhibition of growth rate (e.g. 50 %) is determined and expressed as the ErCx (e.g. ErC50).
POPIS ZKUŠEBNÍ METODY
An additional response variable used in this test method is yield, which may be needed to fulfil specific regulatory requirements in some countries.
Zkušební nádoby a jiné přístroje, které přijdou do styku se zkušebními roztoky, by měly být celoskleněné nebo vyrobeny z jiného chemicky inertního materiálu.
It is defined as the biomass at the end of the exposure period minus the biomass at the start of the exposure period.
Jednotlivé komponenty musí být pečlivě umyty, aby se zajistilo, že žádné organické nebo anorganické kontaminující látky nebudou rušit růst řas nebo ovlivňovat složení zkušebních roztoků.
From the yield recorded in a series of test solutions, the concentration bringing about a specified x % inhibition of yield (e.g., 50 %) is calculated and expressed as the EyCx (e.g. EyC50).
Zkušební nádoby jsou běžně skleněné baňky takové velikosti, že pojmou dostatečný objem kultury během zkoušky a umožní dostatečný přenos CO2 z atmosféry (viz odstavec 30).
In addition, the lowest observed effect concentration (LOEC) and the no observed effect concentration (NOEC) may be statistically determined.
Objem kapaliny musí být dostatečný pro analytická stanovení (viz odstavec 37).
INFORMATION ON THE TEST CHEMICAL
Kromě toho bude nezbytné veškeré následující vybavení nebo jeho část:
Information on the test chemical which may be useful in establishing the test conditions includes structural formula, purity, stability in light, stability under the conditions of the test, light absorption properties, pKa, and results of studies of transformation including biodegradability in water.
Kultivační zařízení:
The water solubility, octanol water partition coefficient (Pow) and vapour pressure of the test chemical should be known and a validated method for the quantification of the chemical in the test solutions with reported recovery efficiency and limit of detection should be available.
doporučuje se skříň nebo komora, ve které může být udržována zvolená inkubační teplota ± 2 °C.
VALIDITY OF THE TEST
Přístroje na měření světla:
For the test to be valid, the following performance criteria should be met:
je důležité mít na paměti, že metoda měření intenzity osvětlení, a zejména typ snímače (kolektoru), může ovlivnit naměřenou hodnotu.
The biomass in the control cultures should have increased exponentially by a factor of at least 16 within the 72-hour test period.
Měření by se mělo provádět nejlépe pomocí kulového (4 π) snímače (reaguje na přímé a odražené světlo ze všech úhlů nad a pod rovinou měření), nebo 2 π snímače (reaguje na světlo ze všech úhlů nad rovinou měření).
This corresponds to a specific growth rate of 0,92 day– 1.
Zařízení pro stanovení biomasy řas.
For the most frequently used species the growth rate is usually substantially higher (see Appendix 2).
Počet buněk, který je nejčastěji používaným náhradním parametrem pro biomasu řas, lze určit pomocí elektronického počítače částic, mikroskopu s počítací komůrkou nebo průtokovým cytometrem.
This criterion may not be met when species that grow slower than those listed in Appendix 2 are used.
Další náhrady biomasy lze měřit průtokovým cytometrem, fluorimetrem, spektrofotometrem nebo kolorimetrem.
In this case, the test period should be extended to obtain at least a 16-fold growth in control cultures, while the growth has to be exponential throughout the test period.
Je užitečné vypočítat faktor pro přepočet počtu buněk na hmotnost sušiny.
The test period may be shortened to at least 48 hours to maintain unlimited, exponential growth during the test as long as the minimum multiplication factor of 16 is reached.
Aby bylo možné zajistit užitečná měření při nízkých koncentracích biomasy za použití spektrofotometru, může být nutné používat kyvety s dráhou světla nejméně 4 cm.
The mean coefficient of variation for section-by-section specific growth rates (days 0-1, 1-2 and 2-3, for 72-hour tests) in the control cultures (See Appendix 1 under “coefficient of variation”) must not exceed 35 %.
Zkušební organismy
See paragraph 49 for the calculation of section-by-section specific growth rate.
Lze použít několik druhů nevázaných mikrořas a sinic.
This criterion applies to the mean value of coefficients of variation calculated for replicate control cultures.
Kmeny uvedené v dodatku 2 se ukázaly jako vhodné při použití zkušebního postupu uvedeného v této zkušební metodě.
The coefficient of variation of average specific growth rates during the whole test period in replicate control cultures must not exceed 7 % in tests with Pseudokirchneriella subcapitata and Desmodesmus subspicatus.
Jestliže se použijí jiné druhy, je třeba uvést v závěrečné zprávě kmen a/nebo původ.
For other less frequently tested species, the value should not exceed 10 %.
Musí se potvrdit, že lze udržovat exponenciální růst vybraných zkušebních řas po dobu zkoušky za převažujících podmínek.
REFERENCE CHEMICAL
Růstové médium
Reference chemical(s), such as 3,5-dichlorophenol used in the international ring test (1), may be tested as a means of checking the test procedure.
Doporučují se dvě alternativní růstová média, média OECD a AAP.
Potassium dichromate can also be used as a reference chemical for green algae.
Složení těchto médií je uvedeno v dodatku 3.
It is desirable to test a reference chemical at least twice a year.
Uvědomte si, že počáteční hodnota pH a pufrovací kapacita (regulující zvýšení pH) těchto dvou médií jsou rozdílné.
APPLICABILITY OF THE TEST
Proto se mohou výsledky zkoušek lišit v závislosti na použitém médiu, zejména při zkoušení ionizujících látek.
This test method is most easily applied to water-soluble chemicals which, under the conditions of the test, are likely to remain in the water.
Pro určité účely může být nezbytná úprava růstových médií, např. když se zkoušejí kovy a chelatační činidla nebo když se provádějí zkoušky při různých hodnotách pH.
For testing of chemicals that are volatile, strongly adsorbing, coloured, having a low solubility in water or chemicals that may affect the availability of nutrients or minerals in the test medium, certain modifications of the described procedure may be required (e.g., closed system, conditioning of the test vessels).
Použití upraveného média musí být podrobně popsáno a zdůvodněno (3, 4).
Guidance on some appropriate modifications is given in (2) (3) and (4).
Počáteční koncentrace biomasy
DESCRIPTION OF THE TEST METHOD
Počáteční biomasa musí být stejná ve všech zkušebních kulturách a dostatečně nízká, aby umožňovala exponenciální růst po celou inkubační dobu bez rizika vyčerpání živin.
Test vessels and other apparatus which will come into contact with the test solutions should be made entirely of glass or other chemically inert material.
Počáteční biomasa by neměla překročit 0,5 mg/l pro hmotnost sušiny.
The items should be thoroughly washed to ensure that no organic or inorganic contaminants may interfere with the algal growth or composition of the test solutions.
Doporučují se následující počáteční koncentrace buněk:
The test vessels will normally be glass flasks of dimensions that allow a sufficient volume of culture for measurements during the test and a sufficient mass transfer of CO2 from the atmosphere (see paragraph 30).
5 × 103 – 104 buněk/ml
Note that the liquid volume must be sufficient for analytical determinations (see paragraph 37).
2 – 5 × 103 buněk/ml
In addition some or all of the following equipment may be required:
104 buněk/ml
Culturing apparatus:
5 × 104 – 105 buněk/ml
a cabinet or chamber is recommended, in which the chosen incubation temperature can be maintained at ± 2 °C.
Koncentrace zkoušené chemické látky
Light measurement instruments:
Koncentrační rozmezí, ve kterém lze očekávat účinky, lze určit na základě výsledků orientačních zkoušek.
it is important to note that the method of measurement of light intensity, and in particular the type of receptor (collector), may affect the measured value.
Pro závěrečnou hlavní zkoušku je zapotřebí vybrat alespoň pět koncentrací tvořících geometrickou posloupnost s faktorem nepřekračujícím 3,2.
Measurements should preferably be made using a spherical (4 π) receptor (which responds to direct and reflected light from all angles above and below the plane of measurement), or a 2 π receptor (which responds to light from all angles above the measurement plane).
U zkoušených látek vykazujících plochou křivku závislosti odezvy na koncentraci může být opodstatněný vyšší faktor.
Apparatus to determine algal biomass.
Posloupnosti koncentrací by nejlépe měly pokrývat rozmezí způsobující 5–75 % inhibici růstové rychlosti řas.
Cell count, which is the most frequently used surrogate parameter for algal biomass, may be made using an electronic particle counter, a microscope with counting chamber, or a flow cytometer.
Opakování a kontroly
Other biomass surrogates can be measured using a flow cytometer, fluorimeter, spectrophotometer or colorimeter.
Uspořádání zkoušky by mělo zahrnovat tři opakování s každou zkoušenou koncentrací.
A conversion factor relating cell count to dry weight is useful to calculate.
Jestliže se nepožaduje stanovení NOEC (koncentrace bez pozorovaných účinků), uspořádání zkoušky lze pozměnit tak, že se zvýší počet koncentrací a sníží počet opakování pro příslušnou koncentraci.
In order to provide useful measurements at low biomass concentrations when using a spectrophotometer, it may be necessary to use cuvettes with a light path of at least 4 cm.
Počet kontrolních opakování musí být nejméně tři a v ideálním případě by měl být dvojnásobkem počtu opakování používaných pro každou zkoušenou koncentraci.
Test organisms
Pro analytická stanovení koncentrací zkoušených chemických látek se může připravit samostatná sada zkušebních roztoků (viz odstavce 36 a 38).
Several species of non-attached microalgae and cyanobacteria may be used.
Pokud se k rozpouštění zkoušené látky používá rozpouštědlo, musí být do uspořádání zkoušky zahrnuty dodatečné kontroly obsahující rozpouštědlo o stejné koncentraci, jaká se používá v zkušebních kulturách.
The strains listed in Appendix 2 have been shown to be suitable using the test procedure specified in this test method.
Příprava očkovací kultury
If other species are used, the strain and/or origin should be reported.
Pro přizpůsobení zkušebních řas podmínkám zkoušky a zajištění toho, aby řasy byly v exponenciální růstové fázi, když se použijí pro naočkování zkušebních roztoků, se očkovací kultura v zkušebním médiu připravuje 2 až 4 dny před zahájením zkoušky.
Confirm that exponential growth of the selected test alga can be maintained throughout the test period under the prevailing conditions.
Biomasu řas je třeba upravit, aby mohl do zahájení zkoušky v očkovací kultuře převážit exponenciální růst.
Growth medium
Očkovací kultura se musí inkubovat za stejných podmínek jako zkušební kultury.
Two alternative growth media, the OECD and the AAP medium, are recommended.
Měří se nárůst biomasy v očkovací kultuře, aby bylo zajištěno, že je růst v rámci normálního rozmezí pro zkušební kmen za podmínek kultivace.
The compositions of these media are shown in Appendix 3.
Příklad postupu pro kultivaci řas je popsán v dodatku 4.
Note that the initial pH value and the buffering capacity (regulating pH increase) of the two media are different.
Aby se předešlo synchronnímu dělení buněk během zkoušky, může být potřebné provést druhý krok propagace očkovací kultury.
Therefore the results of the tests may be different depending on the medium used, particularly when testing ionising chemicals.
Příprava zkušebních roztoků
Modification of the growth media may be necessary for certain purposes, e.g. when testing metals and chelating agents or testing at different pH values.
Všechny zkušební roztoky musí obsahovat stejné koncentrace růstového média a počáteční biomasy zkušebních řas.
Use of a modified medium should be described in detail and justified (3) (4).
Zkušební roztoky zvolených koncentrací se obvykle připravují smísením zásobního roztoku zkoušené chemické látky s růstovým médiem a očkovací kulturou.
Initial biomass concentration
Zásobní roztoky se obyčejně připravují rozpuštěním chemické látky ve zkušebním médiu.
The initial biomass in the test cultures must be the same in all test cultures and sufficiently low to allow exponential growth throughout the incubation period without risk of nutrient depletion.
Jako nosiče pro přidávání látek o nízké rozpustnosti ve vodě do zkušebního média mohou být použita rozpouštědla, např. aceton, terc-butylalkohol a dimethylformamid (2, 3).
The initial biomass should not exceed 0,5 mg/l as dry weight.
Koncentrace rozpouštědla by neměla překročit 100 μl/l a do všech kultur (včetně kontrolních) ve zkušební řadě by měla být přidána stejná koncentrace rozpouštědla.
The following initial cell concentrations are recommended:
Inkubace
5 × 103 – 104 cells/ml
Zkušební nádoby se uzavřou zátkami, které propouštějí vzduch.
2-5 × 103 cells/ml
Nádoby se protřepou a umístí do kultivačního zařízení.
104 cells/ml
Během zkoušky je nezbytné udržovat řasy v suspensi a umožnit přenos CO2.
5 × 104 – 105 cells/ml
Za tímto účelem je třeba provádět nepřetržité třepání nebo míchání.
Concentrations of test chemical
Kultury je třeba udržovat při teplotě v rozsahu 21 až 24 °C, která je regulována s přesností na ± 2 °C.
The concentration range in which effects are likely to occur may be determined on the basis of results from range-finding tests.
Pro druhy jiné než uvedené v seznamu v dodatku 2, např. tropické druhy, mohou být vhodné vyšší teploty, pokud je možné splnit kritéria platnosti.
For the final definitive test at least five concentrations, arranged in a geometric series with a factor not exceeding 3.2, should be selected.
Doporučuje se umístit baňky náhodně a denně je v inkubátoru přemísťovat.
For test chemicals showing a flat concentration response curve a higher factor may be justified.
Hodnota pH kontrolního média by neměla během zkoušky vzrůst o více než 1,5.
The concentration series should preferably cover the range causing 5-75 % inhibition of algal growth rate.
U kovů a chemických látek, které částečně ionizují při pH blížící se pH zkoušky, může být nezbytné omezit posun pH pro získání opakovatelných a dobře definovaných výsledků.
Replicates and controls
Posun hodnoty pH o < 0,5 je technicky proveditelný a lze jej dosáhnout zajištěním adekvátní rychlosti přesunu hmoty CO2 z okolního vzduchu do zkušebního roztoku, např. zvýšením rychlosti třepání.
The test design should include three replicates at each test concentration.
Další možností je snížit potřebu CO2 snížením počáteční biomasy nebo doby trvání zkoušky.
If determination of the NOEC is not required, the test design may be altered to increase the number of concentrations and reduce the number of replicates per concentration.
Povrch, kde jsou kultury inkubovány, by měl být trvale osvětlen jednotným fluorescenčním světlem, např. ‚chladným bílým‘ nebo ‚denním‘ světlem.
The number of control replicates must be at least three, and ideally should be twice the number of replicates used for each test concentration.
Jednotlivé kmeny řas a sinic mají různé požadavky na osvětlení.
A separate set of test solutions may be prepared for analytical determinations of test chemical concentrations (see paragraphs 36 and 38).
Intenzita světla by měla být zvolena tak, aby vyhovovala použitému zkušebnímu organismu.
When a solvent is used to solubilise the test chemical, additional controls containing the solvent at the same concentration as used in the test cultures must be included in the test design.
Pro doporučené druhy zelených řas se intenzita světla na hladině zkušebních roztoků zvolí v rozmezí 60–120 μE · m– 2 · s– 1, přičemž se měří ve fotosynteticky efektivním rozsahu vlnových délek od 400 do 700 nm pomocí vhodného snímače.
Preparation of inoculum culture
Některé druhy, zejména Anabaena flos-aquae, dobře rostou při nízkých intenzitách světla a mohou být při vysokých intenzitách poškozeny.
In order to adapt the test alga to the test conditions and ensure that the algae are in the exponential growth phase when used to inoculate the test solutions, an inoculum culture in the test medium is prepared 2-4 days before start of the test.
U takových druhů by měla být zvolena průměrná intenzita světla 40–60 μE·m– 2·s– 1.
The algal biomass should be adjusted in order to allow exponential growth to prevail in the inoculum culture until the test starts.
(Měří-li se intenzita osvětlení luxmetry, ekvivalentní rozpětí 4440 až 8880 luxů pro chladné bílé světlo odpovídá přibližně doporučené světelné intenzitě 60–120 μE·m– 2 · s– 1).
Incubate the inoculum culture under the same conditions as the test cultures.
Nad inkubační plochou musí být udržována intenzita světla v rozmezí ± 15 % od průměrné intenzity světla.
Measure the increase in biomass in the inoculum culture to ensure that growth is within the normal range for the test strain under the culturing conditions.
Doba trvání zkoušky
An example of the procedure for algal culturing is described in Appendix 4.
Zkouška obvykle trvá 72 hodin.
To avoid synchronous cell divisions during the test a second propagation step of the inoculum culture may be required.
Lze však použít kratší nebo delší doby trvání zkoušky, pokud lze splnit všechna kritéria platnosti uvedená v odstavci 11.
Preparation of test solutions
Měření a analytická stanovení
All test solutions must contain the same concentrations of growth medium and initial biomass of test alga.
Biomasa řas se v každé baňce určí během doby zkoušky nejméně jednou denně.
Test solutions of the chosen concentrations are usually prepared by mixing a stock solution of the test chemical with growth medium and inoculum culture.
Jestliže se měření provádí na malých objemech odebraných ze zkušebního roztoku pipetou, tyto se nenahrazují.
Stock solutions are normally prepared by dissolving the chemical in test medium.
Měření biomasy se provádí ručním počítáním buněk pod mikroskopem nebo pomocí elektronického počítače částic (počty buněk a/nebo biologický objem).
Solvents, e.g. acetone, t-butyl alcohol and dimethyl formamide, may be used as carriers to add chemicals of low water solubility to the test medium (2)(3).
Alternativní techniky, jako jsou např. průtoková cytometrie, fluorescence chlorofylu in vitro nebo in vivo (5, 6) nebo optická hustota, lze použít za předpokladu, že je možné prokázat uspokojivou korelaci s biomasou v rozmezí, v němž se biomasa během zkoušky vyskytuje.
The concentration of solvent should not exceed 100 μl/l, and the same concentration of solvent should be added to all cultures (including controls) in the test series.
pH roztoků se měří na počátku a na konci zkoušky.
Incubation
Pokud je dostupný analytický postup k určení zkoušené chemické látky v rozmezí použitých koncentrací, zkušební roztoky je třeba analyzovat, aby se ověřily počáteční koncentrace a udržení expozičních koncentrací během zkoušky.
Cap the test vessels with air-permeable stoppers.
Analýza koncentrace zkoušené chemické látky na počátku a konci zkoušky při nízké a vysoké zkušební koncentraci a koncentrace okolo očekávané EC50 mohou být dostatečné, jestliže je pravděpodobné, že se expoziční koncentrace budou během zkoušky lišit o méně než 20 % od nominálních hodnot.
The vessels are shaken and placed in the culturing apparatus.
Analýza všech zkušebních koncentrací na počátku a konci zkoušky se doporučuje v případě, kdy je nepravděpodobné, že koncentrace zůstanou v rozmezí 80 až 120 % nominální hodnoty.
During the test it is necessary to keep the algae in suspension and to facilitate transfer of CO2.
U těkavých, nestabilních nebo silně adsorbujících zkoušených chemických látek se doporučuje provést dodatečný odběr vzorků k analýze v 24hodinových intervalech během expoziční doby s cílem lépe definovat ztrátu zkoušené chemické látky.
To this end constant shaking or stirring should be used.
U těchto chemických látek mohou být zapotřebí dodatečná opakování.
The cultures should be maintained at a temperature in the range of 21 to 24 °C, controlled at ± 2 °C.
Ve všech případech se určení koncentrací zkoušené chemické látky provádí pouze u jedné z opakovaných kultur při každé zkušební koncentraci (nebo u sdruženého obsahu nádob ze všech opakovaných kultur).
For species other than those listed in Appendix 2, e.g. tropical species, higher temperatures may be appropriate, providing that the validity criteria can be fulfilled.
Zkušební média specificky připravená k analýze expozičních koncentrací během zkoušky by měla být exponována stejným způsobem jako zkušební média použitá ke zkoušení, tj. měla by být naočkována řasami a inkubována za identických podmínek.
It is recommended to place the flasks randomly and to reposition them daily in the incubator.
Jestliže se požaduje analýza koncentrace rozpuštěné zkoušené látky, může být nezbytné oddělit řasy od média.
The pH of the control medium should not increase by more than 1,5 units during the test.
Oddělení by se mělo nejlépe provádět odstřeďováním při nízké gravitační síle dostatečné pro usazení řas.
For metals and chemicals that partly ionise at a pH around the test pH, it may be necessary to limit the pH drift to obtain reproducible and well defined results.
Jestliže lze prokázat, že koncentrace zkoušené chemické látky byla po celou dobu zkoušky uspokojivě udržována v rozmezí ± 20 % nominální nebo naměřené počáteční koncentrace, může být analýza výsledků založena na nominálních nebo naměřených počátečních hodnotách.
A drift of < 0,5 pH units is technically feasible and can be achieved by ensuring an adequate CO2 mass transfer rate from the surrounding air to the test solution, e.g. by increasing the shaking rate.
Je-li odchylka od nominální nebo naměřené počáteční koncentrace větší než ± 20 %, analýza výsledků by měla být založena na geometrické střední koncentraci během expozice nebo na modelech popisujících pokles koncentrace zkoušené chemické látky (3, 7).
Another possibility is to reduce the demand for CO2 by reducing the initial biomass or the test duration.
Zkouška inhibice růstu řas je dynamičtější zkušební systém než většina jiných krátkodobých zkoušek vodní toxicity.
The surface where the cultures are incubated should receive continuous, uniform fluorescent illumination e.g. of “cool-white” or “daylight” type.
V důsledku toho může být obtížné definovat skutečné expoziční koncentrace, zvláště u adsorbujících látek zkoušených při nízkých koncentracích.
Strains of algae and cyanobacteria vary in their light requirements.
V takových případech vymizení zkoušené látky z roztoku adsorpcí do zvyšující se biomasy řas neznamená, že se ztratila ze zkušebního systému.
The light intensity should be selected to suit the test organism used.
Při analýze výsledku zkoušky je třeba zkontrolovat, jestli je pokles koncentrace zkoušené chemické látky v průběhu zkoušky doprovázen poklesem inhibice růstu.
For the recommended species of green algae, select the light intensity at the level of the test solutions from the range of 60-120 μE · m– 2 · s– 1 when measured in the photosynthetically effective wavelength range of 400-700 nm using an appropriate receptor.
Pokud tomu tak je, lze zvážit použití vhodného modelu popisujícího pokles koncentrace zkoušené chemické látky (7).
Some species, in particular Anabaena flos-aquae, grow well at lower light intensities and may be damaged at high intensities.
Pokud tomu tak není, může být vhodné založit analýzu výsledků na počátečních (nominálních či naměřených) koncentracích.
For such species an average light intensity in the range 40-60 μE · m– 2 · s– 1 should be selected.
Další pozorování
(For light-measuring instruments calibrated in lux, an equivalent range of 4440 - 8880 lux for cool white light corresponds approximately to the recommended light intensity 60-120 μE · m– 2 · s– 1).