natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Pro ověření normálního a zdravého vzhledu očkovací kultury a sledování jakéhokoliv abnormálního vzhledu řas (které může být způsobeno expozicí zkoušené chemické látce) na konci zkoušky by mělo být provedeno mikroskopické pozorování.
Maintain the light intensity within ±15 % from the average light intensity over the incubation area.
Limitní zkouška
Test duration
Za určitých okolností, např. pokud předběžná zkouška naznačuje, že zkoušená chemická látka nemá žádné toxické účinky při koncentracích až do 100 mg/l nebo až do meze své rozpustnosti ve zkušebním médiu (podle toho, co je nižší), může se provést limitní zkouška zahrnující porovnání odezvy v kontrolní skupině a odezvy v jedné exponované skupině (100 mg/l nebo koncentrace rovná mezi rozpustnosti).
Test duration is normally 72 hours.
Důrazně se doporučuje podpořit tuto zkoušku analýzou expozičních koncentrací.
However, shorter or longer test durations may be used provided that all validity criteria in paragraph 11 can be met.
Všechny dříve popsané zkušební podmínky a kritéria platnosti se vztahují i na limitní zkoušku s výjimkou toho, že by mělo být provedeno alespoň šest opakování s exponovanými vzorky.
Measurements and analytical determinations
Proměnné odezvy v kontrolní a exponované skupině mohou být analyzovány pomocí statistického testu pro porovnání středních hodnot, např. Studentova t-testu.
The algal biomass in each flask is determined at least daily during the test period.
Jestliže rozptyly obou skupin nejsou shodné, je třeba provést t-test upravený pro nerovnost rozptylů.
If measurements are made on small volumes removed from the test solution by pipette, these should not be replaced.
Vynášení růstových křivek
Measurement of biomass is done by manual cell counting by microscope or an electronic particle counter (by cell counts and/or biovolume).
Biomasa ve zkušebních nádobách může být vyjádřena v jednotkách náhradního parametru použitého pro měření (např. počet buněk, fluorescence).
Alternative techniques, e.g. flow cytometry, in vitro or in vivo chlorophyll fluorescence (5) (6), or optical density can be used if a satisfactory correlation with biomass can be demonstrated over the range of biomass occurring in the test.
Pro vynesení růstových křivek do grafu sestavte tabulku odhadovaných koncentrací biomasy ve zkušebních kulturách a kontrolních kulturách společně s koncentracemi zkušebního materiálu a časy měření zaznamenanými v rozlišení nejméně na celé hodiny.
Measure the pH of the solutions at the beginning and at the end of the test.
V tomto prvním stadiu mohou být užitečné jak logaritmické, tak lineární stupnice, ale logaritmické stupnice jsou povinné a obecně poskytují lepší zobrazení odchylek ve vzorci růstu během zkušebního období.
Provided an analytical procedure for determination of the test chemical in the concentration range used is available, the test solutions should be analysed to verify the initial concentrations and maintenance of the exposure concentrations during the test.
Nezapomeňte, že exponenciální růst má při vynesení na logaritmické stupnici podobu přímky a že sklon (směrnice) přímky ukazuje specifickou růstovou rychlost.
Analysis of the concentration of the test chemical at the start and end of the test of a low and high test concentration and a concentration around the expected EC50 may be sufficient where it is likely that exposure concentrations will vary less than 20 % from nominal values during the test.
Po vynesení do grafu prověřte, jestli kontrolní kultury rostou exponenciálně očekávanou rychlostí po celou dobu zkoušky.
Analysis of all test concentrations at the beginning and at the end of the test is recommended where concentrations are unlikely to remain within 80-120 % of the nominal concentration.
Kriticky zhodnoťte všechny datové body a vzhled grafů a zkontrolujte, zda v hrubých datech a postupech nejsou chyby.
For volatile, unstable or strongly adsorbing test chemicals, additional samplings for analysis at 24 hour intervals during the exposure period are recommended in order to better define loss of the test chemical.
Zejména zkontrolujte všechny body grafu, u nichž se zdá, že se odchylují na základě systematické chyby.
For these chemicals, extra replicates may be needed.
Pokud je zřejmé, že lze rozpoznat procesní chyby a/nebo je lze považovat za vysoce pravděpodobné, konkrétní datový bod se označí jako odlehlá hodnota a nebude zahrnut do následné statistické analýzy.
In all cases, determination of test chemical concentrations need only be performed on one replicate vessel at each test concentration (or the contents of the vessels pooled by replicate).
Přijatelnými důvody jsou pouze (vzácné) procesní chyby, a nikoli jen malá preciznost.
The test media prepared specifically for analysis of exposure concentrations during the test should be treated identically to those used for testing, i.e. they should be inoculated with algae and incubated under identical conditions.
Statistické postupy pro rozpoznání odlehlé hodnoty mají u tohoto typu problému pouze omezené použití a nemohou nahradit odborné posouzení.
If analysis of the dissolved test chemical concentration is required, it may be necessary to separate algae from the medium.
Odlehlé hodnoty (takto označené) by nejlépe měly zůstat mezi údaji zobrazenými v jakékoliv následné grafické či tabelární prezentaci dat.
Separation should preferably be made by centrifugation at a low g-force, sufficient to settle the algae.
Proměnné odezvy
If there is evidence that the concentration of the chemical being tested has been satisfactorily maintained within ± 20 % of the nominal or measured initial concentration throughout the test, analysis of the results can be based on nominal or measured initial values.
Účelem této zkoušky je stanovit účinky zkoušené chemické látky na růst řas.
If the deviation from the nominal or measured initial concentration is not within the range of ± 20 %, analysis of the results should be based on geometric mean concentration during exposure or on models describing the decline of the concentration of the test chemical (3) (7).
Tato zkušební metoda popisuje dvě proměnné odezvy, protože jurisdikce v členských zemích mají odlišné preference a právní požadavky.
The alga growth inhibition test is a more dynamic test system than most other short-term aquatic toxicity tests.
Mají-li být výsledky zkoušky přijatelné ve všech členských zemích, účinky je třeba vyhodnotit pomocí obou proměnných odezvy a) a b) popsaných dále.
As a consequence, the actual exposure concentrations may be difficult to define, especially for adsorbing chemicals tested at low concentrations.
Průměrná specifická růstová rychlost
In such cases, disappearance of the test chemical from solution by adsorption to the increasing algal biomass does not mean that it is lost from the test system.
tato proměnná odezvy se vypočítá na základě logaritmického zvýšení biomasy během zkušebního období a vyjádří se v jednotkách za den.
When the result of the test is analysed, it should be checked whether a decrease in concentration of the test chemical in the course of the test is accompanied by a decrease in growth inhibition.
Výtěžek
If this is the case, application of a suitable model describing the decline of the concentration of the test chemical (7) may be considered.
tato proměnná odezvy je biomasa na konci zkoušky minus počáteční biomasa.
If not, it may be appropriate to base the analysis of the results on the initial (nominal or measured) concentrations.
Je třeba uvést, že hodnoty toxicity vypočítané pomocí těchto dvou proměnných odezvy nejsou srovnatelné a při používání výsledků zkoušky se musí vzít tento rozdíl na vědomí.
Other observations
Hodnoty ECx založené na průměrné specifické růstové rychlosti (ErCx) budou všeobecně vyšší než výsledky založené na výtěžku (EyCx), pokud se dodrží zkušební podmínky této zkušební metody, a to vzhledem k matematickému základu příslušných přístupů.
Microscopic observation should be performed to verify a normal and healthy appearance of the inoculum culture and to observe any abnormal appearance of the algae (as may be caused by the exposure to the test chemical) at the end of the test.
Tuto skutečnost nelze vykládat jako rozdíl v citlivosti mezi těmito dvěma proměnnými odezvy; hodnoty jsou jednoduše matematicky odlišné.
Limit test
Koncepce průměrné specifické růstové rychlosti je založena na obecném průběhu exponenciálního růstu řas v nelimitovaných kulturách, u nichž se toxicita odhaduje na základě účinků na růstovou rychlost, aniž by závisela na absolutní úrovni specifické růstové rychlosti kontrolní kultury, na sklonu křivky závislosti koncentrace-odezva nebo na době trvání zkoušky.
Under some circumstances, e.g. when a preliminary test indicates that the test chemical has no toxic effects at concentrations up to 100 mg/l or up to its limit of solubility in the test medium (whichever is the lower), a limit test involving a comparison of responses in a control group and one treatment group (100 mg/l or a concentration equal to the limit of solubility), may be undertaken.
Naproti tomu výsledky založené na proměnné odezvy výtěžku jsou závislé na všech těchto ostatních proměnných.
It is strongly recommended that this be supported by analysis of the exposure concentration.
EyCx závisí na specifické růstové rychlosti druhů řas použitých v každé zkoušce a na maximální specifické růstové rychlosti, která se může lišit u jednotlivých druhů, a dokonce i u různých kmenů řas.
All previously described test conditions and validity criteria apply to a limit test, with the exception that the number of treatment replicates should be at least six.
Tato proměnná odezvy by se neměla používat pro srovnávání citlivosti na toxické látky mezi druhy řas, nebo dokonce mezi různými kmeny.
The response variables in the control and treatment group may be analysed using a statistical test to compare means, e.g. a Student's t-test.
Přestože se z vědeckého hlediska dává přednost použití průměrné specifické růstové rychlosti pro odhad toxicity, odhady toxicity založené na výtěžku jsou rovněž do této zkušební metody zahrnuty, aby uspokojily současné právní požadavky v některých zemích.
If variances of the two groups are unequal, a t-test adjusted for unequal variances should be performed
Průměrná růstová rychlost
Plotting growth curves
Průměrná specifická růstová rychlost pro konkrétní období se vypočítá jako logaritmické zvýšení biomasy z rovnice pro každou jednotlivou nádobu s kontrolními a exponovanými vzorky:
The biomass in the test vessels may be expressed in units of the surrogate parameter used for measurement (e.g. cell number, fluorescence).
den
Tabulate the estimated biomass concentration in test cultures and controls together with the concentrations of test material and the times of measurement, recorded with a resolution of at least whole hours, to produce plots of growth curves.
kde:
Both logarithmic scales and linear scales can be useful at this first stage, but logarithmic scales are mandatory and generally give a better presentation of variations in growth pattern during the test period.
je biomasa v čase i,
Examine all data points and the appearance of the graphs critically and check raw data and procedures for possible errors.
je biomasa v čase j.
Check in particular any data point that seems to deviate by a systematic error.
Pro každou exponovanou skupinu a kontrolní skupinu se vypočítá střední hodnota růstové rychlosti a odhady rozptylu.
If it is obvious that procedural mistakes can be identified and/or considered highly likely, the specific data point is marked as an outlier and not included in subsequent statistical analysis.
Vypočítejte průměrnou specifickou růstovou rychlost po celou dobu trvání zkoušky (obvykle 0 až 3 dny), přičemž namísto naměřené počáteční hodnoty použijte jako počáteční hodnotu spíše nominálně naočkovanou biomasu, protože se tímto způsobem obvykle dosáhne větší přesnosti.
(A zero algal concentration in one out of two or three replicate vessels may indicate the vessel was not inoculated correctly, or was improperly cleaned).
Jestliže zařízení použité pro měření biomasy umožňuje dostatečně přesné určení nízké biomasy inokula (např. průtokovým cytometrem), pak lze použít naměřenou počáteční koncentraci biomasy.
State reasons for rejection of a data point as an outlier clearly in the test report.
Rovněž vyhodnoťte růstovou rychlost po jednotlivých časových úsecích vypočtenou jako specifické růstové rychlosti pro každý den v průběhu zkoušky (dny 0–1, 1–2 a 2–3) a zkontrolujte, zda růstová rychlost v kontrolním vzorku zůstává konstantní (viz kritéria platnosti, odstavec 11).
Accepted reasons are only (rare) procedural mistakes and not just bad precision.
Významně nižší specifická růstová rychlost v den jedna v porovnání s celkovou průměrnou specifickou růstovou rychlostí může poukazovat na fázi iniciace.
Statistical procedures for outlier identification are of limited use for this type of problem and cannot replace expert judgement.
Zatímco v kontrolních kulturách lze fázi iniciace minimalizovat a prakticky vyloučit správnou kultivací předkultury, fáze iniciace v exponovaných kulturách může být známkou obnovy po počátečním toxickém stresu nebo známkou snížené expozice vyvolané ztrátou zkoušené chemické látky (včetně sorpce na biomasu řas) po počáteční expozici.
Outliers (marked as such) should preferably be retained among the data points shown in any subsequent graphical or tabular data presentation.
Odpovídajícím způsobem lze růstovou rychlost vyhodnocovat v jednotlivých časových úsecích s cílem zhodnotit účinky zkoušené látky, které se vyskytly během expoziční doby.
Response variables
Významné rozdíly mezi růstovou rychlostí v jednotlivých časových úsecích a průměrnou růstovou rychlostí jsou známkou odchylky od konstantního exponenciálního růstu a vyžadují důkladné prozkoumání růstových křivek.
The purpose of the test is to determine the effects of the test chemical on the growth of algae.
Vypočítejte procentuální inhibici růstové rychlosti u jednotlivých opakování s exponovanými vzorky se vypočítá z rovnice [2]:
This test method describes two response variables, as different jurisdictions have different preferences and regulatory needs.
% I r
In order for the test results to be acceptable in all jurisdictions, the effects should be evaluated using both response variables (a) and (b) described below.
procentuální inhibice průměrné specifické růstové rychlosti,
Average specific growth rate
střední hodnota průměrné specifické růstové rychlosti (μ) v kontrolní skupině,
this response variable is calculated on the basis of the logarithmic increase of biomass during the test period, expressed per day
průměrná specifická růstová rychlost při opakování s exponovaným vzorkem.
Yield
Jestliže se k přípravě zkušebních roztoků používají rozpouštědla, pro výpočet procentuální inhibice by se měly namísto kontrol bez rozpouštědel používat kontroly s rozpouštědly.
this response variable is the biomass at the end of the test minus the starting biomass.
Výtěžek se vypočítá jako biomasa na konci zkoušky minus počáteční biomasa pro každou jednotlivou nádobu s kontrolními a exponovanými vzorky.
It should be noted that toxicity values calculated by using these two response variables are not comparable and this difference must be recognised when using the results of the test.
Pro každou zkušební koncentraci a kontrolu se vypočítá střední hodnota výtěžku a odhad rozptylu.
ECx values based upon average specific growth rate (ErCx) will generally be higher than results based upon yield (EyCx) if the test conditions of this test method are adhered to, due to the mathematical basis of the respective approaches.
Procentuální inhibici výtěžku ( % Iy) lze vypočítat pro každé opakování s exponovanými vzorky následovně:
This should not be interpreted as a difference in sensitivity between the two response variables, simply that the values are different mathematically.
% I y
The concept of average specific growth rate is based on the general exponential growth pattern of algae in non-limited cultures, where toxicity is estimated on the basis of the effects on the growth rate, without being dependent on the absolute level of the specific growth rate of the control, slope of the concentration-response curve or on test duration.
procentuální inhibice výtěžku,
In contrast, results based upon the yield response variable are dependent upon all these other variables.
střední hodnota výtěžku v kontrolní skupině,
EyCx is dependent on the specific growth rate of the algal species used in each test and on the maximum specific growth rate that can vary between species and even different algal strains.
hodnota výtěžku u jedné repliky s exponovaným vzorkem.
This response variable should not be used for comparing the sensitivity to toxicants among algal species or even different strains.
Vynášení křivky závislosti koncentrace-odezva
While the use of average specific growth rate for estimating toxicity is scientifically preferred, toxicity estimates based on yield are also included in this test method to satisfy current regulatory requirements in some countries.
Vyneste procentuální hodnotu inhibice proti logaritmu koncentrace zkušební látky a vynesené body pečlivě prozkoumejte, přičemž neberte v úvahu žádný datový bod, který byl v první fázi vyloučen jako odlehlá hodnota.
Average growth rate
Od oka nebo pomocí počítačové interpolace proložte datovými body hladkou křivku, abyste získali první dojem o vztahu koncentrace a odezvy; poté přistupte k podrobnější metodě, nejlépe počítačové statistické metodě.
The average specific growth rate for a specific period is calculated as the logarithmic increase in the biomass from the equation for each single vessel of controls and treatments [1]:
Platnými důvody pro nepoužití statistické metody mohou být:
day
Údaje nejsou vhodné pro počítačové metody, které neposkytnou spolehlivější výsledky než ty, které lze získat odborným posouzením – v takových situacích mohou dokonce některé počítačové programy selhat při získání spolehlivého řešení (iterace nemusí konvergovat atd.).
where:
Stimulační růstové odezvy nelze odpovídajícím způsobem zpracovat pomocí dostupných počítačových programů (viz níže).
μi-j
Statistické postupy
is the average specific growth rate from time i to j;
Cílem je získat kvantitativní vztah mezi koncentrací a odezvou pomocí regresní analýzy.
is the biomass at time i;
Je možné použít váženou lineární regresi po provedení linearizující transformace dat odezvy – například do probitových nebo logitových či Weibullových jednotek (8), ale dává se přednost nelineárním regresním postupům, s jejichž pomocí se lépe zpracovávají nevyhnutelné nepravidelnosti dat a odchylky od hladkých distribucí.
is the biomass at time j
Při přiblížení se k nule či úplné inhibici mohou být takové nepravidelnosti zesíleny transformací a rušit při analýze (8).
For each treatment group and control group, calculate a mean value for growth rate along with variance estimates.
Je třeba uvést, že standardní metody analýzy používající probitové, logitové nebo Weibullovy transformace jsou určeny k použití s kvantálními daty (např. mortalita nebo přežití) a musí se upravit, aby se mohly použít na data růstu či biomasy.
Calculate the average specific growth rate over the entire test duration (normally days 0-3), using the nominally inoculated biomass as the starting value rather than a measured starting value, because in this way greater precision is normally obtained.
Speciální postupy pro stanovení hodnoty ECx ze spojitých dat lze nalézt v literatuře (9, 10 a 11).
If the equipment used for biomass measurement allows sufficiently precise determination of the low inoculum biomass (e.g. flow cytometer) then the measured initial biomass concentration can be used.
Použití nelineární regresní analýzy je dále podrobně popsáno v dodatku 5.
Assess also the section-by-section growth rate, calculated as the specific growth rates for each day during the course of the test (days 0-1, 1-2 and 2-3) and examine whether the control growth rate remains constant (see validity criteria, paragraph 11).
Pro každou proměnnou odezvy, která se má analyzovat, se použije vztah koncentrace a odezvy pro výpočet bodových odhadů hodnot ECx.
A significantly lower specific growth rate on day one than the total average specific growth rate may indicate a lag phase.
Je-li to možné, je zapotřebí určit 95 % intervaly spolehlivosti pro každý odhad.
While a lag phase can be minimised and practically eliminated in control cultures by proper propagation of the pre-culture, a lag phase in exposed cultures may indicate recovery after initial toxic stress or reduced exposure due to loss of test chemical (including sorption onto the algal biomass) after initial exposure.
Dobrá shoda dat odezvy s regresním modelem se vyhodnotí buď graficky, nebo statisticky.
Hence the section-by-section growth rate may be assessed in order to evaluate effects of the test chemical occurring during the exposure period.
Regresní analýza by se měla provádět pomocí odezev jednotlivých opakování, nikoliv pomocí středních hodnot exponovaných skupin.
Substantial differences between the section-by-section growth rate and the average growth rate indicate deviation from constant exponential growth and that close examination of the growth curves is warranted.
Pokud však je proložení nelineární křivky obtížné či neúspěšné kvůli příliš velkému rozptylu dat, lze problém obejít provedením regrese na skupinových středních hodnotách, což je praktický způsob, jak snížit vliv podezřelých odlehlých hodnot.
Calculate the percent inhibition of growth rate for each treatment replicate from equation [2]:
Použití této možnosti je zapotřebí zaznamenat v závěrečné zprávě jako odchylku od normálního postupu v důsledku skutečnosti, že křivka vyhovující jednotlivým opakováním nevedla k uspokojivému výsledku.
%I r
Odhady EC50 a intervaly spolehlivosti lze rovněž získat lineární interpolací s bootstrapem (metoda postupného výpočtu) (13), pokud se dostupné regresní modely/metody pro příslušná data nehodí.
percent inhibition in average specific growth rate;
Pro odhad LOEC, a tedy i NOEC, a pro účinky zkoušené chemické látky na růstovou rychlost je nezbytné porovnat střední hodnoty exponovaných vzorků pomocí metod analýzy rozptylu (ANOVA).
mean value for average specific growth rate (μ) in the control group;
Střední hodnota pro každou koncentraci se poté musí porovnat se střední hodnotou pro kontrolní skupinu, a to vhodnou metodou vícenásobného porovnání nebo metodou zkoušky trendu.
average specific growth rate for the treatment replicate.
Užitečný může být Dunnettův nebo Williamsův test (12, 14, 15, 16, 17).
When solvents are used to prepare the test solutions, the solvent controls rather than the controls without solvents should be used in calculation of percent inhibition.
Je nezbytné vyhodnotit, zda je splněn předpoklad homogenity rozptylu nezbytný pro ANOVA.
Yield is calculated as the biomass at the end of the test minus the starting biomass for each single vessel of controls and treatments.
Toto hodnocení lze provádět graficky nebo formálním testem (17).
For each test concentration and control, calculate a mean value for yield along with variance estimates.
Vhodnými testy jsou Leveneův nebo Bartlettův.
The percent inhibition in yield ( %Iy) may be calculated for each treatment replicate as follows:
Nesplnění předpokladu homogenity rozptylů se dá někdy napravit logaritmickou transformací dat.
%I y
Jestliže je heterogenita rozptylů extrémní a nelze ji napravit transformací, pak je třeba zvážit analýzu takovými metodami, jako je sestupný Jonckheerův trend test.
percent inhibition of yield;
Vhodná hodnota pro x nebyla pro tuto zkoušku pomocí řas stanovena.
Plotting concentration response curve
Zdá se, že vhodné je rozmezí od 10 do 20 % (v závislosti na zvolené proměnné odezvy) a nejlépe by se měly v závěrečné zprávě uvádět jak EC10, tak EC20.
Plot the percentage of inhibition against the logarithm of the test chemical concentration and examine the plot closely, disregarding any such data point that was singled out as an outlier in the first phase.