natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Zkušební ryby se umístí do přepravní nádrže a dopraví se na pracoviště, kde se provádí vyříznutí jater.
2 l (minimum)
Etikety ze zkušební komory a přepravní nádrže se zkontrolují kvůli přesnosti a pro ověření, zda se počet ryb, jež byly vyjmuty ze zkušební komory, a počet ryb, které ve zkušební komoře zůstávají, shodují s očekáváním.
5 l (minimum)
Nelze-li pohlaví ryb zjistit podle jejich vnějšího vzhledu, vyjmou se ze zkušební komory všechny ryby.
Test solution volume
V takovém případě se pohlaví zjistí vyšetřením gonád nebo druhotných pohlavních znaků pod stereoskopickým mikroskopem.
8 l (minimum)
Vyříznutí jater
l (minimum)
Zkušební ryba se pomocí malého čeřenu přenese z nádrže pro přepravu do anestetického roztoku.
4 l (minimum)
Po anestetizaci se ryba přenese pinzetou na filtrační papír (nebo na papírový ubrousek).
Volume exchanges of test solutions
Ryba se uchopí pinzetou za hlavu z obou stran, aby nedošlo k porušení ocasu.
Minimum of 6 daily
Voda na povrchu těla ryby se otře filtračním papírem (nebo papírovým ubrouskem).
Minimum of 5 daily
Poté se pomocí preparačních nůžek provede malý příčný řez v polovině vzdálenosti mezi ventrální hřbetní oblastí a střední břišní oblastí.
Age of test organisms See paragraph 20
Do tohoto malého řezu se vloží preparační nůžky a rozstřihne se břicho podél střední linie břicha od bodu ležícího kaudálně od žaberního krytu až po kraniální stranu řitního otvoru.
See paragraph 20
Je třeba dát pozor, aby preparační nůžky nepronikly příliš hluboko a aby nedošlo k poškození jater a gonád.
See paragraph 20 12.
Následující kroky se provedou pod stereoskopickým mikroskopem.
Approximate wet weight of adult fish (g) Females:
Testovací ryba se položí břichem nahoru na papírový ubrousek (použít lze rovněž skleněnou Petriho misku nebo podložní sklíčko mikroskopu).
1,5 ± 20 %
Stěny břišní dutiny se roztáhnou jemnou pinzetou a odkryjí se tak vnitřní orgány.
Males:
V případě potřeby je rovněž přijatelné odkrýt vnitřní orgány tak, že se odstraní jedna strana stěny břišní dutiny.
2,5 ± 20 %
Pomocí druhé jemné pinzety se odhalí přirostlá část jater a žlučový měchýř.
Females:
Poté se uchopí žlučovod a odřízne se žlučový měchýř.
0,35 ± 20 %
Je třeba dbát na to, aby se žlučový měchýř neprotrhl.
0,65 ± 20 %
Stejným způsobem se uchopí jícen a od jater se odřízne gastrointestinální trakt.
0,4 ± 20 %
Je třeba dát pozor, aby obsah trávicí soustavy nevytekl.
No. of fish per test vessel
Kaudální část gastrointestinálního traktu se odřízne od řitního otvoru a gastrointestinální trakt se vyjme z břišní dutiny.
6 (2 males and 4 females)
Od periferie jater se ořízne tuková hmota a jiné tkáně.
10 (5 males and 5 females)
Je třeba dát pozor, aby se játra nepoškrábala.
No. of treatments
Oblast jaterního portálu se uchopí jemnou pinzetou a játra se vyjmou z břišní dutiny.
= 3 (plus appropriate controls)
Játra se umístí na podložní sklíčko.
No. vessels per treatment
V případě potřeby se pomocí jemné pinzety z povrchu jater odstraní veškerý zbývající tuk a vnější tkáně (např. břišní výstelka).
4 minimum
Na elektronických analytických vahách se změří hmotnost jater s mikrozkumavkou o objemu 1,5 ml jako vahou obalu.
2 minimum
Hodnota se zaznamená v pracovním listu (s přesností na 0,1 mg).
No. of fish per test concentration
Na etiketě mikrozkumavky se ověří identifikační údaje.
16 adult females and 8 males (4 females and 2 males in each replicate vessel)
Mikrozkumavka s játry se zazátkuje.
10 adult females and 10 males (5 females and 5 males in each replicate vessel)
Skladuje se v chladicím (nebo mrazicím) stojánku.
Feeding regime
Po odříznutí jedněch jater se preparační nástroje vyčistí nebo nahradí čistými.
Live or frozen adult or nauplii brine shrimp two or three times daily (ad libitum), commercially available food or a combination of the above
Výše popsaným způsobem se vyjmou játra u všech ryb v přepravní nádrži.
Brine shrimp nauplii two or three times daily (ad libitum), commercially available food or a combination of the above
Po vyříznutí jater ze všech ryb v přepravní nádrži (tj. všech samečků nebo samiček ze zkušební komory) se všechny vzorky jater umístí do stojánku na zkumavky s etiketou kvůli identifikaci a uskladní se v mrazničce.
None unless DO concentration falls below 60 % air saturation
Jsou-li játra krátce po vyříznutí dodána k předběžné úpravě, vzorky se na další pracoviště přenesou v chladicím (nebo mrazicím) stojánku.
Clean surface, well or reconstituted water or dechlorinated tap water
Po odnětí jater je mrtvé tělo ryby k dispozici pro měření druhotných pohlavních znaků.
Pre-exposure period
Vzorek
7 days recommended
Pokud se vzorky jater odebrané u testovacích ryb krátce po vyříznutí nepoužijí pro předběžnou úpravu, skladují se při teplotě ≤ – 70 °C.
Chemical exposure duration
Nůžkami se vede řez těsně před prsními ploutvemi.
Biological endpoints
Obrázek 2
survival
Pomocí nůžek se rozstřihne střední linie břicha až k bodu, který se nachází přibližně 2 mm kraniálně od řitního otvoru.
behaviour
Obrázek 3.
sex characteristics
Pinzetou se rozevřou břišní stěny, aby se odkryla játra a další vnitřní orgány.
VTG
(Alternativně lze břišní stěny laterálně přišpendlit.)
Test acceptability
Šipka označuje játra.
Dissolved oxygen > 60 % of saturation;
Obrázek 4.
mean temperature of 25 ± 2 °C;
Játra se pomocí pinzety vypreparují a vyříznou.
90 % survival of fish in the controls;
Obrázek 5.
measured test concentrations within 20 % of mean measured values per treatment level.
Pinzetou se jemně odtáhnou střeva.
mean temperature of 24 ± 2 °C;
Obrázek 6.
mean temperature of 26 ± 2 °C;
Oba konce střev a veškeré střevní okruží se oddělí nůžkami.
Some chemical characteristics of acceptable dilution water
Obrázek 7 (samička).
< 20 mg/l
U samiček je postup stejný.
< 2 mg/l
Obrázek 8.
Total organophosphorus pesticides
Dokončený postup.
Appendix 4A
Postup 2B:
Spawning substrate for zebrafish
Halančík japonský (Oryzias latipes), předúprava jater pro analýzu vitelogeninu
Spawning tray
Ze soupravy pro analýzu ELISA se vezme lahev s homogenizačním pufrem a ochladí se v ledové tříšti (teplota roztoku ≤ 4 °C).
all glass instrument dish, for example 22 × 15 × 5,5 cm (l × w × d), covered with a removable stainless steel wire lattice (mesh width 2 mm).
Je-li použit homogenizační pufr ze systému ELISA EnBio, roztok se rozmrazí při pokojové teplotě a poté se lahev ochladí v ledové tříšti.
The lattice should cover the opening of the instrument dish at a level below the brim.
Objem pufru pro homogenizaci jater se vypočítá na základě jejich hmotnosti (pro přípravu homogenátu se přidá 50 μl homogenizačního pufru na mg hmotnosti jater).
On the lattice, spawning substrate should be fixed.
Například je-li hmotnost jater 4,5 mg, objem pufru pro homogenizaci jater je 225 μl.
It should provide structure for the fish to move into.
Připraví se seznam objemů homogenizačního pufru pro všechna játra.
For example, artificial aquaria plants made of green plastic material are suitable (NB: possible adsorption of the test chemical to the plastic material should be considered).
Příprava jater pro předúpravu
The plastic material should be leached out in sufficient volume of warm water for sufficient time to ensure that no chemicals may be disposed to the test water.
Mikrozkumavka o objemu 1,5 ml obsahující játra se vyjme z mrazničky těsně před předúpravou.
When using glass materials it should be ensured that the fish are neither injured nor cramped during their vigorous actions.
Předúprava samčích jater by se měla provádět dříve než předúprava samičích jater, aby se předešlo kontaminaci vitelogeninem.
The distance between the tray and the glass panes should be at least 3 cm to ensure that the spawning is not performed outside the tray.
U zkušebních skupin by se kromě toho předúprava měla provádět v tomto pořadí:
The eggs spawned onto the tray fall through the lattice and can be sampled 45-60 min after the start of illumination.
Počet mikrozkumavek o objemu 1,5 ml obsahujících vzorky jater, které se vyjmou z mrazničky v daný čas, by neměl být větší než počet zkumavek, které lze současně odstředit.
The transparent eggs are non-adhesive and can easily be counted by using transversal light.
Mikrozkumavky o objemu 1,5 ml s jaterními vzorky se uspořádají na mrazicím stojánku podle pořadových čísel (játra není třeba rozmrazovat).
When using five females per vessel, egg numbers up to 20 at a day can be regarded as low, up to 100 as medium and more than 100 as high numbers.
Provedení předúpravy
The spawning tray should be removed, the eggs collected and the spawning tray re-introduced in the test vessel, either as late as possible in the evening or very early in the morning.
Přidání homogenizačního pufru
The time until re-introduction should not exceed one hour since otherwise the cue of the spawning substrate may induce individual mating and spawning at an unusual time.
Kontrolou seznamu se zjistí, jaký objem homogenizačního pufru má být přidán pro daný konkrétní vzorek jater, a mikropipeta (rozmezí objemů 100–1000 μl) se nastaví na příslušný objem.
If a situation needs a later introduction of the spawning tray, this should be done at least 9 hours after start of the illumination.
Na mikropipetu se nasadí čistý hrot.
At this late time of the day, spawning is not induced any longer.
Z lahve s činidlem se nabere homogenizační pufr a přidá se do zkumavky o objemu 1,5 ml obsahující játra.
Appendix 4B
Podle výše uvedeného postupu se homogenizační pufr přidá do všech mikrozkumavek o objemu 1,5 ml obsahujících játra.
Spawning substrate for fathead minnow
Hrot mikropipety není třeba měnit za nový.
Two or three combined plastic/ceramic/glass or stainless steel spawning tiles and trays are placed in each of the test chamber (e.g., 80 mm length of grey semi-circular guttering sitting on a lipped tray of 130mm length) (see picture).
Je-li hrot kontaminován nebo existuje-li podezření, že je kontaminován, musí se vyměnit.
Properly seasoned PVC or ceramic tiles have demonstrated to be appropriate for a spawning substrate (Thorpe et al, 2007).
Homogenizace jater
It is recommended that the tiles are abraded to improve adhesion.
Vezme se nový homogenizační tlouček pro homogenizátor pro mikrozkumavky.
The tray should also be screened to prevent fish from access to the fallen eggs unless the egg adhesion efficiency has been demonstrated for the spawning substrate used.
Tlouček se vloží do mikrozkumavky o objemu 1,5 ml.
The base is designed to contain any eggs that do not adhere to the tile surface and would therefore fall to the bottom of the tank (or those eggs laid directly onto the flat plastic base).
Homogenizátor se uchopí tak, aby tlačil na játra mezi povrchem tloučku a vnitřní stěnou mikrozkumavky o objemu 1,5 ml.
All spawning substrates should be leached for a minimum of 12 hours, in dilution water, before use.
Homogenizátor pro mikrozkumavky se ponechá v činnosti 10–20 sekund.
Appendix 5A
Mikrozkumavka o objemu 1,5 ml se během této činnosti chladí ledovou tříští.
Assessment of secondary sex characteristics in fathead minnow for the detection of certain endocrine active chemicals
Tlouček se vyjme z mikrozkumavky o objemu 1,5 ml a ponechá se asi na 10 sekund v nečinnosti.
Overview
Poté se provede vizuální kontrola stavu suspenze.
Potentially important characteristics of physical appearance in adult fathead minnows in endocrine disrupter testing include body colour (i.e. light/dark), coloration patterns (i.e. presence or absence of vertical bands), body shape (i.e. shape of head and pectoral region, distension of abdomen), and specialized secondary sex characteristics (i.e. number and size of nuptial tubercles, size of dorsal pad and ovipositor).
Jsou-li v suspenzi patrné kousky jater, kroky 3) a 4) se opakují, aby se připravil uspokojivý homogenát jater.
Nuptial tubercles are located on the head (dorsal pad) of reproductively-active male fathead minnows, and are usually arranged in a bilaterally-symmetric pattern (Jensen et al.
Suspendovaný homogenát jater se chladí v chladicím stojánku až do odstřeďování.
2001).
Pro každý homogenát se tlouček vymění za nový.
Control females and juvenile males and females exhibit no tubercle development (Jensen et al.
Podle výše popsaného postupu se všechna játra homogenizují za pomoci homogenizačního pufru.
2001).
Odstředění suspendovaného homogenátu jater
There can be up to eight individual tubercles around the eyes and between the nares of the males.
Ověří se, že teplota v komoře chlazené odstředivky není vyšší než 5 °C.
The greatest numbers and largest tubercles are located in two parallel lines immediately below the nares and above the mouth.
Mikrozkumavky o objemu 1,5 ml obsahující suspendovaný homogenát jater se vloží do chlazené odstředivky (v případě potřeby se provede vyvážení).
In many fish there are groups of tubercles below the lower jaw;
Suspendovaný homogenát jater se 10 minut odstřeďuje při zrychlení 13000 g a při teplotě ≤ 5 °C.
those closest to the mouth generally occur as a single pair, while the more ventral set can be comprised of up to four tubercles.
Je-li však supernatant dostatečně oddělený, lze sílu a dobu odstředění upravit podle potřeby.
The actual numbers of tubercles is seldom more than 30 (range, 18-28; Jensen et al.
Po odstředění se zkontroluje, zda je supernatant náležitě oddělený (na povrchu: tuk, uprostřed: supernatant, spodní vrstva: jaterní tkáň).
2001).
Není-li odstředění dostatečné, suspenze se odstředí znovu za stejných podmínek.
The predominant tubercles (in terms of numbers) are present as a single, relatively round structure, with the height approximately equivalent to the radius.
Do stojánku na zkumavky se vloží čtyři mikrozkumavky o objemu 0,5 ml pro uchovávání supernatantu.
2001; 2003), while oestrogen receptor agonists may decrease number or size of nuptial tubercles in males (Miles-Richardson et al.
Pomocí mikropipety se z každého supernatantu (odděleného jako prostřední vrstva) odebere 30 μl a vloží se do jedné mikrozkumavky o objemu 0,5 ml.
1999; Harries et al.
Mikrozkumavka o objemu 0,5 ml se uzavře zátkou a objem supernatantu se zapíše na etiketu.
View fish dorsally and anterior forward (head toward viewer).
Poté se mikrozkumavky ihned ochladí v mrazicím stojánku.
Place fish in small Petri dish (e.g., 100 mm in diameter), anterior forward, and ventral down.
Pro každý supernatant se použije nový hrot mikropipety.
Focus viewfinder to allow identification of tubercles.
Ulpí-li na hrotu větší množství tuku, je třeba ho ihned nahradit novým hrotem, aby nedošlo ke kontaminaci jaterního extraktu tukem.
Gently and slowly roll fish from side to side to identify tubercle areas.
Podle postupu popsaného výše se všechen odstředěný supernatant vloží do čtyř mikrozkumavek o objemu 0,5 ml.
Count and score tubercles.
Po vložení supernatantu do mikrozkumavek o objemu 0,5 ml se všechny mikrozkumavky s identifikačními etiketami uloží do stojánku na zkumavky a ihned poté se zmrazí v mrazničce.
Repeat the observation on the ventral head surface by placing the fish dorsal anterior forward in the Petri dish.
Měří-li se koncentrace VTG okamžitě po předúpravě, zkumavka o objemu 0,5 ml (obsahující 30 μl supernatantu) se uchová v chladu ve stojánku na zkumavky a přenese se na pracoviště, kde se provádí analýza ELISA.
Observations should be completed within 2 min for each fish.
V takovém případě se ostatní mikrozkumavky vloží do stojánků na zkumavky a zmrazí se v mrazničce.
Tubercle Counting and Rating
Po odběru supernatantu se reziduum vhodným způsobem odstraní.
Six specific areas have been identified for assessment of tubercle presence and development in adult fathead minnows.
Skladování vzorku
A template was developed to map the location and quantity of tubercles present (see end of this Appendix).
Mikrozkumavky o objemu 0,5 ml obsahující supernatant homogenátu jater se skladují při teplotě ≤ – 70 °C do doby, než jsou použity pro analýzu ELISA.
The number of tubercles is recorded and their size can be quantitatively ranked as:
Postup 3A:
0- absence, 1-present, 2-enlarged and 3-pronounced for each organism (Fig.
Danio pruhované, odběr krve z ocasní žíly/tepny
1).
Ihned po anestetizaci se příčně oddělí ocasní stopka a z ocasní tepny/žíly se odebere krev pomocí heparinizované mikrohematokritové kapiláry.
Rate 0- absence of any tubercle.
Objemy krve se nacházejí v rozmezí od 5 do 15 μl v závislosti od velikosti ryby.
Rating 1-present, is identified as any tubercle having a single point whose height is nearly equivalent to its radius (diameter).
Do mikrokapiláry se přidá stejný objem pufru s aprotininem (6 μg aprotininu na ml fosfátového pufru (PBS)) a plazma se od krve oddělí odstředěním (po dobu 5 minut při zrychlení 600 g).
Rating 2- enlarged, is identified by tissue resembling an asterisk in appearance, usually having a large radial base with grooves or furrows emerging from the centre.
Plazma se shromáždí do zkušebních zkumavek a uskladní se při teplotě – 20 °C do doby, než se analyzuje na vitelogenin nebo na jiné proteiny, jež jsou předmětem zájmu.
Tubercle height is often more jagged but can be somewhat rounded at times.
Postup 3B:
Rating 3- pronounced, is usually quite large and rounded with less definition in structure.
Danio pruhované, odběr krve srdeční punkcí
At times these tubercles will run together forming a single mass along an individual or combination of areas (B, C and D, described below).
Aby nedošlo ke koagulaci krve a rozložení proteinu, vzorky se odebírají ve fosfátovém pufru (PBS) obsahujícím heparin (1000 jednotek/ml) a inhibitor proteázy aprotinin (2 TIU/ml).
Coloration and design are similar to rating 2 but at times are fairly indiscriminate.
Jako složky pro přípravu tohoto pufru se doporučuje použít heparin, amonnou sůl a lyofilizovaný aprotinin.
Using this rating system generally will result in overall tubercle scores of < 50 in a normal control male possessing a tubercle count of 18 to 20 (Jensen et al.
Odběr krve se doporučuje provést injekční stříkačkou (o objemu 1 ml) s fixovanou tenkou jehlou (např. značky Braun Omnikan-F).
2001).
Injekční stříkačka se předem naplní pufrem (přibližně 100 μl) tak, aby malé objemy krve z každé ryby byly plně eluovány.
The actual number of tubercles in some fish may be greater than the template boxes (Appendix A) for a particular rating area.
Vzorky krve se odeberou srdeční punkcí.
If this happens, additional rating numbers may be marked within, to the right or to the left of the box.
Ryba se nejprve anestetizuje roztokem MS-222 (v koncentraci 100 mg/l).
The template therefore does not need to display symmetry.
Správný režim anestezie umožní uživateli rozeznat srdeční tep dania pruhovaného.
An additional technique for mapping tubercles which are paired or joined vertically along the horizontal plane of the mouth could be done by double-marking two tubercle rating points in a single box.
Při provádění srdeční punkce se píst injekční stříkačky udržuje pod slabým tlakem.
Mapping regions:
Množství krve, která lze odebrat, se nacházejí v rozmezí 20–40 mikrolitrů.
A Tubercles located around eye.
Po srdeční punkci se směs krve/pufru vloží do zkušební zkumavky.
Mapped dorsal to ventral around anterior rim of eye.
Plazma se oddělí od krve odstředěním (po dobu 20 minut při 5000 g) a uskladní se při teplotě – 80 °C do doby, než bude použita pro analýzu.
Commonly multiple in mature control males, not present in control females, generally paired (one near each eye) or single in females exposed to androgens.
Postup 3C:
B Tubercles located between nares, (sensory canal pores).
Standardní operační postup:
Normally in pairs for control males at more elevated levels (2- enlarged or 3- pronounced) of development.
danio pruhované, homogenizace hlavy a ocasu
Not present in control females with some occurrence and development in females exposed to androgens.
Ryba se anestetizuje a usmrtí v souladu s popisem zkoušky.
C Tubercles located immediately anterior to nares, parallel to mouth.
Odřízne se hlava a ocas, jak znázorňuje obrázek 1.
Generally enlarged or pronounced in mature control males.
Důležité:
Present or enlarged in less developed males or androgen-treated females.
veškeré preparační nástroje a pracovní stůl je třeba mezi zpracováním každé jednotlivé ryby řádně omýt a vyčistit (např. 96 % ethanolem), aby se zabránilo ‚znečištění vitelogeninem‘ v důsledku přenosu ze samiček nebo ze samečků, u kterých byly vyvolány účinky, na samečky, u kterých účinky vyvolány nebyly.
D Tubercles located parallel along mouth line.
Řez za prsní ploutví
Generally rated developed in control males.
Řez za hřbetní ploutví
Absent in control females but present in androgen-exposed females.
Pro analýzu VTG
E Tubercles located on lower jaw, close to mouth, usually small and commonly in pairs.
Stanoví se společná hmotnost hlavy a ocasu každé ryby se zaokrouhlením na mg.
Varying in control or treated males, and treated females.
Společná hmotnost hlavy a ocasu každé ryby se stanoví se zaokrouhlením na mg.
F Tubercles located ventral to E. Commonly small and paired.
Po zvážení se části vloží do vhodných zkumavek (např. Eppendorfovy zkumavky o objemu 1,5 ml) a zmrazí se při teplotě –80 °C až do homogenizace nebo se přímo homogenizují na ledu pomocí dvou plastových paliček.
Present in control males and androgen-exposed females.
Zkumavky je třeba řádně očíslovat, aby bylo možné hlavu a ocas z určité ryby porovnat s příslušným řezem těla, který se použije pro histologii gonád.
Tubercle Template
V práci s paličkami se pokračuje, dokud není směs homogenní.
Numerical Rating
Důležitá poznámka:
resent
Na každou rybu se použijí nové paličky.
Date
Vzorky se uloží na led až do odstřeďování při teplotě 4 °C po dobu 30 minut při zrychlení 50000 g.
nlarged
Pomocí pipety se části supernatantu o objemu 20 μl přenesou do nejméně dvou zkumavek tak, že se špička pipety ponoří pod tukovou vrstvu na hladině a opatrně se nasaje supernatant bez frakcí tuku nebo sedimentu.
Total Score
Zkumavky se až do použití uskladní při teplotě – 80 °C.
ronounced
Homogenizační pufr:(50 mM Tris-HCl pH 7,4; 1 % koktejl inhibitoru proteázy (Sigma)):
Appendix 5B
12 ml Tris-HCl pH 7,4 + 120 μl koktejlu inhibitoru proteázy.TRIS:
Assessment of secondary sex characteristics in medaka for the detection of certain endocrine active chemicals
TRIS-ULTRA PURE (ICN), např. od výrobce Bie & Berntsen, Dánsko.Koktejl inhibitoru proteázy:
Below is a description of the measurement of papillary processes, which are the secondary sex characteristics in medaka (Oryzias latipes).
od výrobce Sigma (pro tkáně savců), produktové číslo P 8340.Poznámka:
After the excision of the liver (Appendix 6), the carcass is placed into a conical tube containing about 10 ml of 10 % neutral buffered formalin (upside: head, downside: tail).
Homogenizační pufr by měl být použit ve stejný den, kdy byl vyroben.
If the gonad is fixed in a solution other than 10 % neutral buffered formalin, make a transverse cut across the carcass between anterior region of anal fin and anus using razor, taking care not to harm the gonopore and gonad itself (Fig.
Během použití se má uchovávat na ledu.
3).
Vzorky obohacené vitelogeninem a referenční standard pro opakovatelnost
Place the cranial side of the fish body into the fixative solution to preserve the gonad, and the tail side of the fish body into the 10 % neutral buffered formalin as described above.
Každý den provádění zkoušek na vitelogenin se analyzuje obohacený vzorek vytvořený pomocí referenčního standardu pro opakovatelnost.
After placing the fish body into 10 % neutral buffered formalin, grasp the anterior region of the anal fin with tweezers and fold it for about 30 seconds to keep the anal fin open.
Pro přípravu referenčního standardu pro opakovatelnost se použije vitelogenin z jiné šarže, než jaká byla použita pro přípravu kalibračních standardů pro zkoušku, která se nyní provádí.
When grasping the anal fin with tweezers, grasp a few fin rays in the anterior region with care not to scratch the papillary processes.
Obohacený vzorek se připraví tak, že se známé množství standardu přidá do vzorku plazmy samečků z kontrolní skupiny.
After keeping the anal fin open for about 30 seconds, store the fish body in 10 % neutral buffered formalin at room temperature until the measurement of the papillary processes (measurement should be conducted after fixing for at least 24 hours).