natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Dosavadní údaje naznačují, že střední hodnota procentuálního zastoupení DNA v ohonu ve skupině (na základě střední hodnoty mediánů – podrobněji o těchto termínech viz odstavec 57) u jater potkanů by přednostně neměla být vyšší než 6 %, což by se shodovalo s hodnotami získanými ve validačním experimentu JaCVAM (12) a jinými zveřejněnými i chráněnými údaji.
It is a measure of accuracy for a test method that produces categorical results and is an important consideration in assessing the relevance of a test method.
V současnosti neexistuje dostatek údajů, aby bylo možné předložit doporučení týkající se optimálních nebo přijatelných rozpětí pro jiné tkáně.
Used in the context of the UN GHS as chemical elements and their compounds in the natural state or obtained by any production process, including any additive necessary to preserve the stability of the product and any impurities deriving from the process used, but excluding any solvent which may be separated without affecting the stability of the substance or changing its composition.
To nebrání použití jiných tkání, je-li to odůvodněno.
It is important to note that a validated test method may not have sufficient performance in terms of accuracy and reliability to be found acceptable for the proposed purpose (8).
V závěrečné zprávě by měl být uveden náležitý přehled účinnosti kometového testu v těchto tkáních v poměru k údajům z publikované literatury nebo chráněným údajům.
PROFICIENCY CHEMICALS FOR THE FL TEST METHOD
Za prvé je žádoucí, aby nízké rozpětí procentuálního zastoupení DNA v ohonu v kontrolách poskytovalo dostatečně dynamické rozpětí pro zjištění pozitivního účinku.
Prior to routine use of this test method, laboratories should demonstrate technical proficiency by correctly identifying the ocular corrosivity classification of the 8 chemicals recommended in Table 1.
Za druhé by každá laboratoř měla být schopna reprodukovat očekávané odezvy na přímé mutageny a promutageny s různými mechanismy působení, jak se doporučuje v tabulce 1 (odstavec 29).
These chemicals were selected to represent the range of responses for local eye irritation/corrosion, which is based on results in the in vivo rabbit eye test (TG 405, TM B.5(5)) (i.e., Categories 1, 2A, 2B, or no classification according to the UN GHS).
Pozitivní látky lze vybrat z validačního experimentu JaCVAM (12) nebo případně s odůvodněním i z jiných zveřejněných údajů (viz odstavec 9), které prokazují jasné pozitivní odezvy ve tkáních, které jsou předmětem zájmu.
However, considering the validated usefulness of the FL assay (i.e., to identify ocular corrosives/severe irritants only), there are only two test outcomes for classification purposes (corrosive/severe irritant or non-corrosive/non-severe irritant) to demonstrate proficiency.
Měla by být rovněž prokázána schopnost detekovat slabé účinky známých mutagenů, např. EMS, při nízkých dávkách, například určením vztahu dávka-účinek s odpovídajícím počtem dávek a intervaly jejich podávání.
Other selection criteria were that chemicals are commercially available, there are high quality in vivo reference data available, and there are high quality data from the FL test method.
Nejprve by se úsilí mělo zaměřit na dosažení způsobilosti ke zkoušení nejčastěji používaných tkání, tj. jater hlodavců, kde lze provést srovnání s existujícími údaji a očekávanými výsledky.
For this reason, the proficiency chemicals were selected from the “Fluorescein Leakage Assay Background Review Document as an Alternative Method for Eye Irritation Testing” (8), which was used for the retrospective validation of the FL test method.
Měly by být shromažďovány údaje o kontrolách s vehikulem / negativních kontrolách, aby bylo možné prokázat reprodukovatelnost údajů o negativních odezvách a prokázat, že byly řádně kontrolovány technické aspekty testu, nebo aby bylo možné navrhnout stanovení nových historických rozpětí kontrol (viz odstavec 22).
Recommended chemicals for demonstrating technical proficiency with FL
Je třeba poznamenat, že mnohé tkáně je možné odebírat při pitvě a zpracovat pro kometovou analýzu, avšak laboratoř musí být způsobilá odebírat vzorky více tkání od jediného zvířete, čímž se zajistí, že jakékoli potenciální léze DNA nebudou opomenuty a že analýza komet nebude zpochybněna.
Abbreviations: CAS NR = Chemical Abstracts Service Registry Number
Zásadně důležitý může být časový interval od utracení do odstranění tkání pro zpracování (viz odstavec 44).
CAS NR
Při dosahování způsobilosti k této zkoušce musí být brán ohled na dobré zacházení se zvířaty, proto při zvyšování způsobilosti v různých aspektech testu lze použít tkáně ze zvířat použitých v jiných zkouškách.
Corrosive/Severe Irritant
Nemusí být rovněž nezbytné v různých fázích zavádění nové zkušební metody v laboratoři provádět celou zkoušku a při rozvíjení potřebných dovedností lze použít méně zvířat nebo nižší zkušební koncentrace.
Promethazine hydrochloride
Během šetření způsobilosti by laboratoř měla vytvořit databázi historických údajů, aby mohla stanovit rozsah a distribuci pozitivních a negativních kontrol pro příslušné tkáně a druhy zvířat.
Amine/Amidine, Heterocyclic, Organic sulphur compound
Doporučení, jak shromáždit a používat historické údaje (tj. kritéria pro zařazení údajů do databáze a jejich vyřazení a kritéria přijatelnosti pro daný experiment), lze najít v literatuře (47).
Sodium hydroxide (10 %)
Různé tkáně a různé druhy, jakož i různá vehikula a způsoby podávání mohou vést k různým hodnotám procentuálního zastoupení DNA v ohonu u negativních kontrol.
Alkali
Je proto důležité stanovit rozsahy negativních kontrol pro každou tkáň a pro každý druh.
Sodium lauryl sulfate (15 %)
V laboratořích by měly být uplatňovány metody řízení jakosti, např. regulační diagramy (např. diagramy typu C nebo χ s pruhem (48)), z nichž je patrné, jak proměnlivé jsou jejich údaje a že metodika je v dané laboratoři „pod kontrolou“.
Carboxylic acid (salt)
Aby bylo možné detekovat slabé účinky, bude také možná zapotřebí optimalizovat výběr vhodných látek pro pozitivní kontrolu, rozsahy dávkování a zkušební podmínky (např. podmínky elektroforézy) (viz odstavec 17).
arboxy-benzaldehyde
Obvykle se používají běžné laboratorní kmeny zdravých, mladých a pohlavně zralých zvířat (ve věku 6 až 10 týdnů na počátku expozice, i když přijatelné je i použití poněkud starších zvířat).
Carboxylic acid, Aldehyde
Při výběru druhu hlodavců by se mělo vycházet z i) druhů používaných v jiných studiích toxicity (aby bylo možné porovnat údaje a provádět integrované studie), ii) druhů, u kterých se ve zkoušce karcinogenity (při zkoumání mechanismu karcinogeneze) rozvinuly nádory nebo iii) druhů, jejichž metabolismus nejvíce odpovídá lidskému, jsou-li takové známy.
Category 2(A)
Při této zkoušce jsou rutinně používáni hlodavci.
Non-corrosive/Non-severe irritant
Lze však použít i jiné druhy, je-li to eticky a vědecky odůvodněno.
Noncorrosive/Non-severe irritant
Teplota v místnosti s pokusnými zvířaty by u hlodavců v ideálním případě měla být 22 °C (± 3 °C).
Category 2(B)
Relativní vlhkost vzduchu by v ideálním případě měla mít hodnotu 50 až 60 %, minimálně však 30 %, a neměla by pokud možno přesáhnout 70 % kromě doby úklidu místnosti.
Based on results from the in vivo rabbit eye test (OECD TG 405, TM B.5) and using the UN GHS and EU CLP.
Hlodavci by měli být umístěni v klecích v malých skupinkách (obvykle maximálně pět zvířat) stejného pohlaví, pokud se neočekává agresivní chování.
Based on results obtained with FL (INVITTOX Protocol No. 71(6))
Měly by být pokud možno použity pevné podlahy, protože pletivové podlahy mohou způsobit vážná poranění (49).
B.62 In Vivo Mammalian Alkaline Comet Assay
Musí být zajištěno přiměřené obohacení životního prostředí.
This test method (TM) is equivalent to OECD test guideline (TG) 489 (2016).
Zvířata se náhodným výběrem rozdělí do kontrolních a experimentálních skupin.
The in vivo alkaline comet (single cell gel electrophoresis) assay (hereafter called simply the comet assay) is used for the detection of DNA strand breaks in cells or nuclei isolated from multiple tissues of animals, usually rodents, that have been exposed to potentially genotoxic material(s).
Zvířata se jednoznačně identifikují a před začátkem expozice se nechají v laboratorních podmínkách alespoň pět dní aklimatizovat.
The comet assay has been reviewed and recommendations have been published by various expert groups (1) (2) (3) (4) (5) (6) (7) (8) (9) (10).
Musí být použita co nejméně invazivní metoda jednoznačné identifikace zvířat.
This test method is part of a series of test methods on genetic toxicology.
Vhodnými metodami jsou například kroužkování, označení štítkem, pomocí mikročipu nebo biometrické identifikace.
An OECD document that provides succinct information on genetic toxicology testing and an overview of the recent changes that were made to these Test Guidelines has been developed (11).
Zkracování posledních článků končetin a vystříhávání tkání z uší není při těchto zkouškách vědecky odůvodněné.
The purpose of the comet assay is to identify chemicals that cause DNA damage.
Klece by měly být uspořádány tak, aby byl případný vliv jejich polohy minimalizován.
Under alkaline conditions (> pH 13), the comet assay can detect single and double stranded breaks, resulting, for example, from direct interactions with DNA, alkali labile sites or as a consequence of transient DNA strand breaks resulting from DNA excision repair.
V okamžiku zahájení studie by měla být odchylka v hmotnosti zvířat minimální a neměla by překročit ± 20 %.
These strand breaks may be repaired, resulting in no persistent effect, may be lethal to the cell, or may be fixed into a mutation resulting in a permanent viable change.
Pevné zkoušené chemické látky by se před podáním dávky zvířatům měly rozpustit nebo suspendovat ve vhodných vehikulech nebo přimíchat do potravy nebo pitné vody.
They may also lead to chromosomal damage which is also associated with many human diseases including cancer.
Pro účely expozice inhalací lze zkoušené chemické látky v závislosti na jejich fyzikálně-chemických vlastnostech podávat v podobě plynu, páry nebo pevného/kapalného aerosolu (50) (51).
A formal validation trial of the in vivo rodent comet assay was performed in 2006-2012, coordinated by the Japanese Center for the Validation of Alternative Methods (JaCVAM), in conjunction with the European Centre for the Validation of Alternative Methods (ECVAM), the Interagency Coordinating Committee on the Validation of Alternative Methods (ICCVAM) and the NTP Interagency Center for the Evaluation of Alternative Toxicological Methods (NICEATM) (12).
Vehikulum
This test method includes the recommended use and limitations of the comet assay, and is based on the final protocol (12) used in the validation trial, and on additional relevant published and unpublished (laboratories proprietary) data.
Vehikulum by nemělo mít při použitých objemech dávek toxické účinky a mělo by být vyloučeno podezření, že reaguje se zkoušenou chemickou látkou.
Definitions of key terms are set out in Appendix 1.
Jsou-li použita jiná než známá vehikula, mělo by být jejich zařazení podloženo referenčními údaji o jejich kompatibilitě, pokud jde o pokusná zvířata, způsob podávání a cílový ukazatel.
It is noted that many different platforms can be used for this assay (microscope slides, gel spots, 96-well plates etc.).
Je třeba poznamenat, že některá (zejména viskózní) vehikula mohou vyvolat zánět a zvýšit úroveň zlomů vláken DNA v pozadí v místě kontaktu, zejména při vícenásobném podávání.
For convenience the term “slide” is used throughout the remainder of this document but encompasses all of the other platforms.
V současnosti by měla být běžně do každé zkoušky zařazena skupina nejméně 3 analyzovatelných zvířat jednoho pohlaví nebo každého pohlaví, jsou-li použita obě (viz odstavec 32), exponovaných pozitivní kontrolní látce.
The comet assay is a method for measuring DNA strand breaks in eukaryotic cells.
V budoucnosti bude možná možné prokázat odpovídající způsobilost a potřebu pozitivních kontrol snížit.
Single cells/nuclei embedded in agarose on a slide are lysed with detergent and high salt concentration.
Odebírají-li se vzorky vícekrát (např. při protokolu s jediným podáním dávky), je nezbytné zařadit pozitivní kontroly pouze při jednom odběru, avšak mělo by být zajištěno vyvážené uspořádání (viz odstavec 48).
This lysis step digests the cellular and nuclear membranes and allows the release of coiled DNA loops generally called nucleoids and DNA fragments.
V souběžných pozitivních kontrolách není nezbytné podávat látky stejným způsobem jako zkoušenou chemickou látku, ovšem při měření účinků v místě kontaktu je důležité použít stejný způsob podávání.
Electrophoresis at high pH results in structures resembling comets, which, by using appropriate fluorescent stains, can be observed by fluorescence microscopy; DNA fragments migrate away from the “head” into the “tail” based on their size, and the intensity of the comet tail relative to the total intensity (head plus tail) reflects the amount of DNA breakage (13) (14) (15).
O pozitivních kontrolních látkách by mělo být známo, že indukují zlomy vláken DNA ve všech tkáních, které jsou předmětem zájmu u zkoušené chemické látky, a vhodnou látkou pro pozitivní kontrolu je pravděpodobně EMS, neboť vyvolala zlomy vláken DNA ve všech tkáních, které byly dosud zkoumány.
The in vivo alkaline comet assay is especially relevant to assess genotoxic hazard in that the assay's responses are dependent upon in vivo ADME (absorption, distribution, metabolism and excretion), and also on DNA repair processes.
Dávky pozitivních kontrolních látek by měly být vybrány tak, aby vyvolaly střední účinky, které nejlépe dokládají dobré provedení a citlivost zkoušky, a mohly by být založeny na křivkách dávka-účinek vytvořených laboratoří během prokazování způsobilosti.
These may vary among species, among tissues and among the types of DNA damage.
Je možné vybrat jiné látky než látky uvedené v tabulce 1, je-li to vědecky odůvodněno.
The use of non-rodent species should be scientifically and ethically justified on a case-by-case basis and it is strongly recommended that the comet assay only be performed on species other than rodents as part of another toxicity study and not as a standalone test.
Příklady pozitivních kontrolních látek a některé z jejich cílových tkání
The selection of route of exposure and tissue(s) to be studied should be determined based on all available/existing knowledge of the test chemicals e.g. intended/expected route of human exposure, metabolism and distribution, potential for site-of-contact effects, structural alerts, other genotoxicity or toxicity data, and the purpose of the study.
Látky a jejich číslo CAS
Thus, where appropriate, the genotoxic potential of the test chemicals can be assayed in the target tissue(s) of carcinogenic and/or other toxic effects.
ethylmethansulfonát (CAS RN 62-50-0) pro veškeré tkáně
The assay is also considered useful for further investigation of genotoxicity detected by an in vitro system.
thyl 1-nitrosomočovina (CAS RN 759-73-9) pro játra a žaludek, dvanáctník nebo lačník
It is appropriate to perform an in vivo comet assay in a tissue of interest when it can be reasonably expected that the tissue of interest will be adequately exposed.
methylmethansulfonát (CAS RN 66-27-3) pro játra, žaludek, dvanáctník nebo lačník, plíce a buňky bronchoalveolární laváže (BAL), ledviny, močový měchýř, plíce, varlata a kostní dřeň / krev
The assay has been most extensively validated in somatic tissues of male rats in collaborative studies such as the JaCVAM trial (12) and in Rothfuss et al., 2010 (10).
N-methyl-N′-nitro-N-nitrosoguanidin (CAS RN: 70-25-7) pro žaludek, dvanáctník nebo lačník
The liver and stomach were used in the JaCVAM international validation trial.
1,2-dimethylhydrazin-dihydrochlorid (CAS RN 306-37-6) pro játra a střeva
The liver, because it is the most active organ in metabolism of chemicals and also frequently a target organ for carcinogenicity.
ethyl-1-nitrosomočovina (CAS RN 684-93-5) pro játra, kostní dřeň, krev, ledviny, žaludek, dvanáctník a mozek
The stomach, because it is usually first site of contact for chemicals after oral exposure, although other areas of the gastro-intestinal tract such as the duodenum and jejunum should also be considered as site-of-contact tissues and may be considered more relevant for humans than the rodent glandular stomach.
Do každé zkoušky by pro každý odběr a pro každou tkáň měla být zařazena skupina zvířat pro negativní kontrolu ošetřených pouze vehikulem, s kterou se jinak zachází stejně jako s exponovanými skupinami.
Care should be taken to ensure that such tissues are not exposed to excessively high test chemical concentrations (21).
U zvířat negativní kontroly by procentuální zastoupení DNA v ohonu mělo být uvnitř rozpětí pro pozadí, které laboratoř předem stanoví pro každou jednotlivou tkáň a každý odběr vzorků u daného druhu (viz odstavec 16).
The technique is in principle applicable to any tissue from which analysable single cell/nuclei suspensions can be derived.
Neexistují-li dosavadní nebo publikované údaje o kontrolách prokazující, že zvolené vehikulum, počet podávaných dávek nebo způsob jejich podávání vyvolává zhoubné nebo genotoxické účinky, měly by se před provedením úplné studie provést počáteční studie ke stanovení přijatelnosti kontroly s vehikulem.
Proprietary data from several laboratories demonstrate its successful application to many different tissues, and there are many publications showing the applicability of the technique to organs or tissues other than liver and stomach, e.g. jejunum (22), kidney (23) (24), skin (25) (26), or urinary bladder (27) (28), lungs and bronchoalveolar lavage cells (relevant for studies of inhaled chemicals) (29) (30), and tests have also been performed in multiple organs (31) (32).
Počet a pohlaví zvířat
Whilst there may be an interest in genotoxic effects in germ cells, it should be noted that the standard alkaline comet assay as described in this test method is not considered appropriate to measure DNA strand breaks in mature germ cells.
Existuje málo údajů týkajících se zvířat samičího pohlaví, na jejichž základě by bylo možné provést srovnání mezi oběma pohlavími v souvislosti s kometovým testem, avšak obecně jsou jiné genotoxické odezvy in vivo u zvířat samčího a samičího pohlaví podobné, a proto většinu studií lze provést se zvířaty kteréhokoli pohlaví.
Since high and variable background levels in DNA damage were reported in a literature review on the use of the comet assay for germ cell genotoxicity (33), protocol modifications together with improved standardization and validation studies are deemed necessary before the comet assay on mature germ cells (e.g. sperm) can be included in the test method.
Použití zvířat obou pohlaví podpoří údaje prokazující významné rozdíly mezi samci a samicemi (např. rozdíly v systémové toxicitě, metabolismu, biologické dostupnosti atd. zjištěné např. ve studii ke stanovení rozsahu dávek pro studie toxicity po opakovaných dávkách).
In addition, the recommended exposure regimen described in this test method is not optimal and longer exposures or sampling times would be necessary for a meaningful analysis of DNA strand breaks in mature sperm.
V tom případě může být vhodné provést studii s oběma pohlavími, např. jako součást studie toxicity po opakovaných dávkách.
Genotoxic effects as measured by the comet assay in testicular cells at different stages of differentiation have been described in the literature (34) (35).
Velikost skupin při zahájení studie (a během stanovení způsobilosti) by měla být stanovena tak, aby poskytla minimálně pět analyzovatelných zvířat jednoho pohlaví nebo každého pohlaví, jsou-li použita obě, z každé skupiny (méně ve skupině souběžné pozitivní kontroly – viz odstavec 29).
However, it should be noted that gonads contain a mixture of somatic and germ cells.
Určitým vodítkem pro maximální typické požadavky na počet zvířat může být, že studie provedená podle parametrů uvedených v odstavci 33 se třemi exponovanými skupinami a souběžnými negativními a pozitivními kontrolami (každá skupina složená z pěti zvířat jednoho pohlaví) by vyžadovala 25 až 35 zvířat.
For this reason, positive results in whole gonad (testis) are not necessarily reflective of germ cell damage; nevertheless, they indicate that tested chemical(s) and/or its metabolites have reached the gonad.
PLÁN EXPOZICE
Cross-links cannot be reliably detected with the standard experimental conditions of the comet assay.
Zvířata by měla být každodenně exponována po dobu 2 nebo více dnů (tj. dvě nebo více expozic v přibližně 24hodinových intervalech), a vzorky by měly být odebírány každých 2 až 6 hodin (nebo v čase Tmax) od první expozice.
Under certain modified experimental conditions, DNA-DNA and DNA-protein crosslinks, and other base modifications such as oxidized bases might be detected (23) (36) (37) (38) (39).
Vzorky ze studií s prodlouženým režimem podávání (např. každodenní podávání po dobu 28 dnů) jsou přijatelné.
But further work would be needed to adequately characterize the necessary protocol modifications.
Byla prokázána úspěšná kombinace kometového testu a testu erytrocytárních mikrojader (10) (19).
Thus detection of cross linking agents is not the primary purpose of the assay as described here.
Je však třeba pečlivě zvážit logistiku spojenou s odběrem vzorků tkání pro kometovou analýzu spolu s požadavky na odběr tkáňových vzorků pro jiné druhy toxikologických hodnocení.
The assay is not appropriate, even with modifications, for detecting aneugens.
Použití jiných harmonogramů expozice a odběru vzorků by mělo být odůvodněno (viz dodatek 3).
Due to the current status of knowledge, several additional limitations (see Appendix 3) are associated with the in vivo comet assay.
Mohla by být například použita jediná expozice s více odběry vzorků, avšak je třeba poznamenat, že studie s jediným podáním dávky bude vyžadovat více zvířat, jelikož je zapotřebí více odběrů, avšak někdy může být upřednostněna, např. jestliže zkoušená chemická látka po opakovaném podání vyvolává nadměrnou úroveň toxicity.
It is expected that the test method will be reviewed in the future and if necessary revised in light of experience gained.
Ať je zkouška provedena jakýmkoli způsobem, je přijatelná, pokud zkoušená chemická látka vyvolá pozitivní odezvu nebo, v případě negativní studie, pokud jsou podány přímé či nepřímé důkazy o expozici cílové tkáně (tkání) nebo o toxicitě pro cílovou tkáň (tkáně) nebo o tom, že bylo dosaženo limitní dávky (viz odstavec 36).
PRINCIPLE OF THE METHOD
Zkoušené chemické látky mohou být podávány také ve dvou dávkách, tj. dvě expozice v týž den v intervalu nanejvýš 2 až 3 hodin, aby se usnadnilo podávání velkých objemů.
A detailed description of dosing and sampling is given in paragraphs 36-40.
Za těchto podmínek by doby odběru vzorků měly být stanoveny na základě doby posledního podání dávky (viz odstavec 40).
At the selected sampling time(s), the tissues of interest are dissected and single cells/nuclei suspensions are prepared (in situ perfusion may be performed where considered useful e.g. liver) and embedded in soft agar so as to immobilize them on slides.
Dávkování
Cells/nuclei are treated with lysis buffer to remove cellular and/or nuclear membrane, and exposed to strong alkali e.g. pH ≥13 to allow DNA unwinding and release of relaxed DNA loops and fragments.
Provádí-li se studie ke stanovení rozsahu dávek, poněvadž nejsou k dispozici vhodné údaje z jiných relevantních studií, které by mohly pomoci při stanovení dávek, měla by podle současného přístupu k provádění studií ke stanovení rozsahu dávek být provedena ve stejné laboratoři, se stejným druhem, kmenem, pohlavím a za stejného režimu expozice, které se použijí v hlavní studii.
The nuclear DNA in the agar is then subjected to electrophoresis.