natgillin/translations-raw huggingface dataset:
V tomto případě by měly být kolonie nejméně dvakrát během zkoušky (např. v den 3 a 5) vystaveny čerstvě připraveným zkušebním a kontrolním roztokům.
Test vessels must be covered to minimise evaporation and accidental contamination, while allowing necessary air exchange.
Četnost expozice čerstvému médiu závisí na stálosti zkoušené chemické látky;
Suitable test vessels, and particularly covers, must avoid shadowing or changes in the spectral characteristics of light.
pro udržení téměř konstantních koncentrací vysoce nestálých či těkavých látek může být zapotřebí vyšší četnost.
The cultures and test vessels should not be kept together.
Za určitých okolností může být nutný průtokový postup (8, 10).
This is best achieved using separate environmental growth chambers, incubators, or rooms.
Scénář expozice prostřednictvím aplikace na lístek (rozprašování) není do této zkušební metody zahrnut;
Illumination and temperature must be controllable and maintained at a constant level (see paragraphs 35-36).
tomuto tématu se věnuje literatura (11).
Test organism
Inkubační podmínky
The organism used for this test is either Lemna gibba or Lemna minor.
Pomocí kontinuálního teplého nebo chladného bílého fluorescenčního osvětlení je třeba zajistit světelnou intenzitu zvolenou z rozmezí 85–135 μE·m– 2 · s– 1, přičemž se tato intenzita měří v pásmu fotosynteticky aktivního záření (400 až 700 nm) v bodech nacházejících se ve stejné vzdálenosti od zdroje světla jako lístky Lemna (ekvivalent 6500 až 10000 luxů).
Short descriptions of duckweed species that have been used for toxicity testing are given in Appendix 2.
Jakékoliv odchylky od zvolené intenzity světla nad zkušební plochou by neměly překročit ± 15 %.
Plant material may be obtained from a culture collection, another laboratory or from the field.
Naměřenou hodnotu bude ovlivňovat metoda detekce světla a měření, zejména typ čidla.
If collected from the field, plants should be maintained in culture in the same medium as used for testing for a minimum of eight weeks prior to use.
Kulová čidla (která reagují na světlo přicházející ze všech úhlů nad i pod rovinou měření) a ‚kosinová‘ čidla (která reagují na světlo přicházející ze všech úhlů nad rovinou měření) jsou vhodnější než jednosměrná čidla, neboť poskytují vyšší naměřené hodnoty pro vícebodový světelný zdroj zde popsaného typu.
Field sites used for collecting starting cultures must be free of obvious sources of contamination.
Ovšem odchylka o více než 1,5 nebude znamenat neplatnost zkoušky, pokud je možné prokázat, že byla splněna kritéria platnosti.
If obtained from another laboratory or a culture collection they should be similarly maintained for a minimum of three weeks.
Zvláštní pozornost je zapotřebí věnovat posunu pH ve speciálních případech, jako jsou zkoušky nestálých chemických látek nebo kovů.
The source of plant material and the species and clone (if known) used for testing should always be reported.
Další pokyny naleznete v (8).
Monocultures, that are visibly free from contamination by other organisms such as algae and protozoa, should be used.
Doba trvání
Healthy plants of L. minor will consist of colonies comprising between two and five fronds whilst healthy colonies of L. gibba may contain up to seven fronds.
Zkouška je ukončena za 7 dnů poté, co byly rostliny přeneseny do zkušebních nádob.
The quality and uniformity of the plants used for the test will have a significant influence on the outcome of the test and should therefore be selected with care.
Na počátku zkoušky se zjistí a zaznamená počet lístků ve zkušebních nádobách, přičemž se pečlivě dbá na to, aby byly započítány vystupující, jasně viditelné lístky.
Young, rapidly growing plants without visible lesions or discoloration (chlorosis) should be used.
Na počátku zkoušky, dále nejméně jednou během každých 3 dnů během expoziční doby (tj. nejméně dvakrát během celkové doby 7 dnů) a při ukončení zkoušky se musí určit počty lístků, které mají normální či abnormální vzhled.
Good quality cultures are indicated by a high incidence of colonies comprising at least two fronds.
V závěrečné zprávě se musí zaznamenat změny ve vývoji rostlin, např. velikost lístku, vzhled, známky nekrózy, chlorózy nebo hrbatosti, rozpadávání kolonií nebo ztráta vzplývavosti, a v délce a vzhledu kořenu.
A large number of single fronds are indicative of environmental stress, e.g. nutrient limitation, and plant material from such cultures should not be used for testing.
Je rovněž nutné zaznamenat významné znaky zkušebního média (např. přítomnost nerozpuštěného materiálu, růst řas ve zkušební nádobě).
Cultivation
Kromě určení počtu lístků během zkoušky se také hodnotí účinky zkoušené chemické látky na jednu (nebo více) následujících proměnných měření:
To reduce the frequency of culture maintenance (e.g. when no Lemna tests are planned for a period), cultures can be held under reduced illumination and temperature (4 — 10 °C).
celková plocha lístků,
Details of culturing are given in Appenxix 3.
hmotnost sušiny,
Obvious signs of contamination by algae or other organisms may require surface sterilisation of a sub-sample of Lemna fronds, followed by transfer to fresh medium (see Appendix 3).
čerstvá hmotnost.
In this eventuality the remaining contaminated culture should be discarded.
Celková plocha lístků má tu výhodu, že ji lze u každé zkušební a kontrolní nádoby určit na počátku zkoušky, v jejím průběhu i na jejím konci.
At least seven days before testing, sufficient colonies are transferred aseptically into fresh sterile medium and cultured for 7 - 10 days under the conditions of the test.
Hmotnost sušiny nebo čerstvá hmotnost by se měly určit na počátku zkoušky ze vzorku očkovací kultury, která se obvykle používá k zahájení zkoušky, a na konci zkoušky pak na základě rostlinného materiálu z každé zkušební a kontrolní nádoby.
Test medium
Jestliže se plocha lístků neměří, dává se přednost hmotnosti sušiny před čerstvou hmotností.
Different media are recommended for Lemna minor and Lemna gibba, as described below.
Celková plocha lístků, hmotnost sušiny a čerstvá hmotnost se mohou určit následovně:
Careful consideration should be given to the inclusion of a pH buffer in the test medium (MOPS (4-morpholinepropane sulphonic acid, CAS No: 1132-61-2) in L. minor medium and NaHCO3 in L. gibba medium) when it is suspected that it might react with the test chemical and influence the expression of its toxicity.
Celková plocha lístků:
Steinberg Medium (9) is also acceptable as long as the validity criteria are met.
Celková plocha lístků všech kolonií se může stanovit analýzou obrazu.
A modification of the Swedish standard (SIS) Lemna growth medium is recommended for culturing and testing with L. minor.
Pomocí videokamery lze zachytit siluetu zkušební nádoby a rostlin (tj. umístíte nádobu na negatoskop) a výsledný obraz se digitalizuje.
The composition of this medium is given in Appendix 4.
Plochu lístků v zkušební nádobě lze poté stanovit kalibrací pomocí plochých tvarů o známé ploše.
The growth medium, 20X — AAP, as described in Appendix 4, is recommended for culturing and testing with L. gibba.
Je třeba vyloučit rušení způsobené hranou zkušební nádoby.
Steinberg medium, as described in Appendix 4, is also suitable for L. minor, but may also be used for L. gibba as long as the validity criteria are met.
Alternativní, ale pracnější způsob spočívá v pořízení fotografie zkušebních nádob a rostlin, vyříznutí výsledné siluety kolonií a určení jejich plochy pomocí analyzátoru plochy lístku nebo milimetrového papíru.
Test solutions
Mohou být vhodné i další postupy (například poměr hmotnosti papírů s plochou siluety kolonií a s jednotkovou plochou).
Test solutions are usually prepared by dilution of a stock solution.
Hmotnost sušiny:
Stock solutions of the test chemical are normally prepared by dissolving the chemical in growth medium.
Z každé ze zkušebních nádob se shromáždí všechny kolonie a propláchnou se destilovanou nebo deionizovanou vodou.
The highest tested concentration of the test chemical should not normally exceed the water solubility of the chemical under the test conditions.
Nadbytečná voda se odstraní savým papírem a pak se vzorky suší při 60 °C do konstantní hmotnosti.
It should be noted however that Lemna spp. float on the surface and may be exposed to chemicals that collects at the water-air interface (e.g. poorly water-soluble or hydrophobic chemicals or surface-active chemicals).
Měly by být zahrnuty jakékoliv úlomky kořenů.
Under such circumstances exposure will result from material other than in solution and test concentrations may, depending on the characteristics of the test chemical, exceed water solubility.
Hmotnost sušiny by se měla vyjádřit s přesností alespoň na 0,1 mg.
For test chemicals of low water solubility it may be necessary to prepare a concentrated stock solution or dispersion of the chemical using an organic solvent or dispersant in order to facilitate the addition of accurate quantities of the test chemical to the test medium and aid in its dispersion and dissolution.
Čerstvá hmotnost:
Every effort should be made to avoid the use of such materials.
Všechny kolonie se převedou do předem zvážených zkumavek vyrobených z polystyrenu nebo z jiného interního materiálu, s malými (1 mm) otvory v zaoblených dnech.
There should be no phytotoxicity resulting from the use of auxiliary solvents or dispersants.
Zkumavky se poté odstřeďují při rychlosti 3000 ot/min po dobu 10 minut při pokojové teplotě.
For example, commonly used solvents which do not cause phytotoxicity at concentrations up to 100 μl/l include acetone and dimethylformamide.
Zkumavky obsahující nyní osušené kolonie se opětovně zváží a čerstvá hmotnost se vypočítá odečtením hmotnosti prázdné zkumavky.
If a solvent or dispersant is used, its final concentration should be reported and kept to a minimum (≤ 100 μl/l), and all treatments and controls should contain the same concentration of solvent or dispersant.
Četnost měření a analytická stanovení
Further guidance on the use of dispersants is given in (8).
Jestliže se používá statické uspořádání zkoušky, pH každé expozice by se mělo změřit na počátku a na konci zkoušky.
Test and control groups
Jestliže se používá semistatické uspořádání zkoušky, pH by se mělo měřit v každé vsázce ‚čerstvého‘ zkušebního roztoku před každým obnovením a rovněž i v odpovídajících ‚spotřebovaných‘ roztocích.
Prior knowledge of the toxicity of the test chemical to Lemna, e.g. from a range-finding test, will help in selecting suitable test concentrations.
Intenzita osvětlení by se měla měřit v růstové komoře, inkubátoru nebo místnosti v bodech nacházejících se ve stejné vzdálenosti od zdroje světla jako lístky Lemna.
In the definitive toxicity test, there should normally be at least five test concentrations arranged in a geometric series.
Měření je třeba provádět nejméně jednou během zkoušky.
Preferably the separation factor between test concentrations should not exceed 3.2, but a larger value may be used where the concentration-response curve is flat.
Teplota média v náhradní nádobě držené za stejných podmínek v růstové komoře, inkubátoru nebo místnosti by se měla zaznamenávat nejméně jednou denně.
Justification should be provided if fewer than five concentrations are used.
Během zkoušky se koncentrace zkoušené látky určují ve vhodných intervalech.
At least three replicates should be used at each test concentration.
Při statických zkouškách je minimálním požadavkem určení koncentrací na počátku a na konci zkoušky.
In setting the range of test concentrations (for range-finding and/or for the definitive toxicity test), the following should be considered:
Při semistatických zkouškách, u nichž se neočekává, že koncentrace zkoušené látky zůstane v rozmezí ± 20 % nominální koncentrace, je nezbytné analyzovat všechny čerstvě připravené zkušební roztoky a tytéž roztoky při každém obnovení (viz odstavec 33).
To determine an ECx, test concentrations should bracket the ECx value to ensure an appropriate level of confidence.
Ovšem u zkoušek, u nichž není naměřená počáteční koncentrace zkoušené chemické látky v rozmezí ± 20 % nominální hodnoty, avšak u nichž lze dostatečně prokázat, že počáteční koncentrace jsou reprodukovatelné a stálé (tj. od 80 do 120 % počáteční koncentrace), mohou být chemická stanovení provedena pouze na nejvyšších a nejnižších zkušebních koncentracích.
For example, if estimating the EC50, the highest test concentration should be greater than the EC50 value.
Ve všech případech je třeba určit koncentrace zkoušené chemické látky před obnovením při každé zkušební koncentraci vždy pouze u jedné nádoby z počtu použitých replik (nebo u sdruženého obsahu nádob všech replik).
If the EC50 value lies outside of the range of test concentrations, associated confidence intervals will be large and a proper assessment of the statistical fit of the model may not be possible.
U průtokových zkoušek je vhodný podobný vzorkovací režim, jaký je popsán u semistatických zkoušek včetně analýzy na počátku, uprostřed a na konci zkoušky, ale měření ‚spotřebovaného‘ roztoku není v tomto případě vhodné.
If the aim is to estimate the LOEC/NOEC, the lowest test concentration should be low enough so that growth is not significantly less than that of the control.
U tohoto typu zkoušky je zapotřebí kontrolovat denně průtok ředicí vody a zkoušené chemické látky nebo zásobního roztoku zkoušené látky.
In addition, the highest test concentration should be high enough so that growth is significantly lower than that in the control.
Je-li odchylka od nominální nebo naměřené počáteční koncentrace větší než ± 20 %, analýza výsledků by měla být založena na geometrické střední koncentraci během expozice nebo na modelech popisujících pokles koncentrace zkoušené chemické látky (8).
If this is not the case, the test will have to be repeated using a different concentration range (unless the highest concentration is at the limit of solubility or the maximum required limit concentration, e.g. 100 mg/l).
Všechny dříve popsané zkušební podmínky a kritéria platnosti se vztahují i na limitní zkoušku s výjimkou toho, že počet opakování s exponovanými vzorky by se měl zdvojnásobit.
Every test should include controls consisting of the same nutrient medium, number of fronds and colonies, environmental conditions and procedures as the test vessels but without the test chemical.
Růst v kontrolní a exponované skupině může být analyzován pomocí statistické zkoušky pro porovnání středních hodnot, např. Studentova t-testu.
If an auxiliary solvent or dispersant is used, an additional control treatment with the solvent/dispersant present at the same concentration as that in the vessels with the test chemical should be included.
Doba zdvojnásobení
The number of replicate control vessels (and solvent vessels, if applicable) should be at least equal to, and ideally twice, the number of vessels used for each test concentration.
Pro stanovení doby zdvojnásobení (Td) počtu lístků a dodržování tohoto kritéria platnosti ve studii (odstavec 12) se používá následující vzorec s údaji získanými z kontrolních nádob:
If determination of NOEC is not required, the test design may be altered to increase the number of concentrations and reduce the number of replicates per concentration.
kde μ je průměrná specifická růstová rychlost stanovena tak, jak je popsáno v odstavcích 54–55.
However, the number of control replicates must be at least three.
Účelem této zkoušky je stanovit účinky zkoušené chemické látky na vegetativní růst Lemna.
Exposure
Průměrná specifická růstová rychlost:
Each test vessel should contain a total of 9 to 12 fronds.
Tato proměnná odezvy se počítá na základě změn logaritmů počtů lístků a dále na základě změn logaritmů jiného parametru měření (celková plocha lístků, hmotnost sušiny nebo čerstvá hmotnost) v čase (vyjádřeno na den) v kontrolních vzorcích a každé exponované skupině.
The number of fronds and colonies should be the same in each test vessel.
Někdy se označuje jako relativní růstová rychlost (12).
Experience gained with this method and ring-test data have indicated that using three replicates per treatment, with each replicate containing 9 to 12 fronds initially, is sufficient to detect differences in growth of approximately 4 to 7 % of inhibition calculated by growth rate (10 to 15 % calculated by yield) between treatments (7).
Výtěžek:
A randomised design for location of the test vessels in the incubator is required to minimise the influence of spatial differences in light intensity or temperature.
Tato proměnná odezvy se počítá na základě změn počtu lístků a dále na základě změn jiného parametru měření (celková plocha lístků, hmotnost sušiny nebo čerstvá hmotnost) v kontrolních vzorcích a každé exponované skupině až do konce zkoušky.
A blocked design or random repositioning of the vessels when observations are made (or repositioning more frequently) is also required.
Hodnoty ECx založené na průměrné specifické růstové rychlosti (ErCx) budou obecně vyšší než výsledky založené na výtěžku (EyCx), pokud se dodrží zkušební podmínky této zkušební metody, a to kvůli matematickému základu příslušných přístupů.
If a preliminary stability test shows that the test chemical concentration cannot be maintained (i.e. the measured concentration falls below 80 % of the measured initial concentration) over the test duration (7 days), a semi-static test regime is recommended.
Koncepce průměrné specifické růstové rychlosti je založena na obecném průběhu exponenciálního růstu okřehku v nelimitovaných kulturách, u nichž se toxicita odhaduje na základě účinků na růstovou rychlost, aniž by závisela na absolutní úrovni specifické růstové rychlosti kontroly, na sklonu křivky závislosti koncentrace-odezva nebo na době trvání zkoušky.
In this case, the colonies should be exposed to freshly prepared test and control solutions on at least two occasions during the test (e.g. days 3 and 5).
EyCx závisí na specifické růstové rychlosti druhů okřehku použitých v každé zkoušce a na maximální specifické růstové rychlosti, která se může u jednotlivých druhů, a dokonce i u různých klonů, lišit.
The frequency of exposure to fresh medium will depend on the stability of the test chemical;
Tato proměnná odezvy by se neměla používat pro srovnávání citlivosti na toxické látky mezi druhy okřehku nebo dokonce různými klony.
a higher frequency may be needed to maintain near-constant concentrations of highly unstable or volatile chemicals.
Přestože se z vědeckého hlediska dává při odhadu toxicity přednost použití průměrné specifické růstové rychlosti, odhady toxicity založené na výtěžku jsou rovněž do této zkušební metody zahrnuty, aby uspokojily současné právní požadavky v některých zemích.
In some circumstances, a flow-through procedure may be required (8)(10).
Odhady toxicity by měly být založeny na počtu lístků a na jedné další proměnné měření (celková plocha lístků, hmotnost sušiny nebo čerstvá hmotnost), protože některé chemické látky mohou ovlivňovat jiné proměnné měření mnohem více než počet lístků.
The exposure scenario through a foliar application (spray) is not covered in this test method;
Pouhým určováním počtu lístků by se tento účinek nezjistil.
instead, see (11).
Počet lístků a jakákoliv další zaznamenaná proměnná měření, tj. celková plocha lístků, hmotnost sušiny nebo čerstvá hmotnost, se pro každé měření uvedou v tabulce společně s koncentracemi zkoušené látky.
Incubation conditions
Následná analýza dat, např. odhad LOEC, NOEC nebo ECx, by měla být založena na hodnotách pro jednotlivá opakování, a nikoliv na vypočítaných středních hodnotách pro každou exponovanou skupinu.
Continuous warm or cool white fluorescent lighting should be used to provide a light intensity selected from the range of 85-135 μE · m– 2s– 1 when measured in a photosynthetically active radiation (400-700 nm) at points the same distance from the light source as the Lemna fronds (equivalent to 6500-10000 lux).
Průměrná specifická růstová rychlost pro konkrétní období se vypočítá jako logaritmické zvýšení proměnných růstu – počtu lístků a jedné další proměnné měření (celková plocha lístků, hmotnost sušiny nebo čerstvá hmotnost) – pomocí následujícího vzorce pro každé opakování kontrolních a exponovaných vzorků:
Any differences from the selected light intensity over the test area should not exceed the range of ± 15 %.
průměrná specifická růstová rychlost od doby i do doby j,
The method of light detection and measurement, in particular the type of sensor, will affect the measured value.
proměnná měření ve zkušební nebo kontrolní nádobě v době i,
Spherical sensors (which respond to light from all angles above and below the plane of measurement) and “cosine” sensors (which respond to light from all angles above the plane of measurement) are preferred to unidirectional sensors, and will give higher readings for a multi-point light source of the type described here.
proměnná měření ve zkušební nebo kontrolní nádobě v době j,
The temperature in the test vessels should be 24 ± 2 °C.
t čas od i do j.
However, deviation of more than 1,5 units would not invalidate the test when it can be shown that validity criteria are met.
Průměrná specifická růstová rychlost by se měla vypočítat pro celou dobu trvání zkoušky (doba ‚i‘ ve shora uvedeném vzorci je počátek zkoušky a doba ‚j‘ je ukončení zkoušky).
Additional care is needed on pH drift in special cases such as when testing unstable chemicals or metals.
Pro každou zkušební koncentraci a kontrolu se vypočítá střední hodnota průměrné specifické růstové rychlosti a odhady rozptylu.
See (8) for further guidance.
Dále je zapotřebí vyhodnotit růstovou rychlost v jednotlivých časových úsecích s cílem zhodnotit účinky zkoušené chemické látky, které se vyskytly během expoziční doby (např. kontrolou logaritmicky transformovaných růstových křivek).
Duration
V tomto případě by konzervativní přístup spočíval v porovnání specifických růstových rychlostí exponovaných kultur během doby maximální inhibice se specifickými růstovými rychlostmi kontrolních vzorků pro totéž období.
The test is terminated 7 days after the plants are transferred into the test vessels.
Procentuální inhibici růstové rychlosti (Ir) lze potom vypočítat pro každou zkušební koncentraci (exponovanou skupinu) podle následujícího vzorce:
At the start of the test, frond number in the test vessels is counted and recorded, taking care to ensure that protruding, distinctly visible fronds are accounted for.
procentuální inhibice průměrné specifické růstové rychlosti,
Frond numbers appearing normal or abnormal, need to be determined at the beginning of the test, at least once every 3 days during the exposure period (i.e. on at least 2 occasions during the 7 day period), and at test termination.
střední hodnota μ v kontrolní skupině,
Changes in plant development, e.g. in frond size, appearance, indication of necrosis, chlorosis or gibbosity, colony break-up or loss of buoyancy, and in root length and appearance, should be noted.
střední hodnota μ v exponované skupině.
Significant features of the test medium (e.g. presence of undissolved material, growth of algae in the test vessel) should also be noted.
Účinky na výtěžek se určují na základě dvou proměnných měření, tj. počtu lístků a jedné další proměnné měření (celková plocha lístků, hmotnost sušiny nebo čerstvá hmotnost), přítomných v každé zkušební nádobě na počátku a konci zkoušky.
In addition to determinations of frond number during the test, effects of the test chemical on one (or more) of the following measurement variables are also assessed:
Pro hmotnost sušiny nebo čerstvou hmotnost se počáteční biomasa určuje na základě vzorku lístků odebraných ze stejné vsázky použité k naočkování zkušebních nádob (viz odstavec 20).
total frond area,
Střední hodnotu procentuální inhibice výtěžku ( % Iy) lze vypočítat pro každou exponovanou skupinu následovně:
dry weight,
procentuální snížení výtěžku,
fresh weight.
konečná biomasa minus počáteční biomasa pro kontrolní skupinu,
Total frond area has an advantage, in that it can be determined for each test and control vessel at the start, during, and at the end of the test.