natgillin/translations-raw huggingface dataset:
V poslední době jsou za vědecky platné metody pro hodnocení nebezpečnosti chemických látek pro senzibilizaci kůže považovány mechanisticky založené zkušební metody in chemico a in vitro.
Relative Increase in Cell Count (RICC)
Protože však každá z těchto nyní dostupných zkušebních metod bez použití zvířat mechanisticky pokrývá AOP jen v omezeném rozsahu, bude pro úplné nahrazení nyní používaných zkoušek na zvířatech zapotřebí kombinace metod bez použití zvířat (in silico, in chemico, in vitro) v rámci integrovaného přístupu ke zkouškám a posuzování (IATA) (2) (7).
Replication Index (RI)
Zkouška DPRA je navržena ke zkoumání molekulární iniciační události AOP pro senzibilizaci kůže, konkrétně reaktivity proteinů, pomocí kvantifikace reaktivity zkoušených chemických látek vůči modelovým syntetickým peptidům obsahujícím lysin nebo cystein (8).
the proportion of cell division cycles completed in a treated culture, relative to the untreated control, during the exposure period and recovery (see Appendix 2 for formula).
Na základě procentuálních hodnot úbytku cysteinových a lysinových peptidů se pak látka zařadí do jedné ze čtyř tříd reaktivity, což pomáhá rozlišovat mezi látkami senzibilizujícími kůži a látkami nesenzibilizujícími kůži (9).
mix of the S9 liver fraction and cofactors necessary for metabolic enzyme activity.
Zkušební metoda DPRA byla validována ve validační studii provedené pod vedením Referenční laboratoře Evropské unie pro alternativy ke zkouškám na zvířatech (EURL ECVAM), následně byla podrobena nezávislé odborné revizi, kterou provedl vědecký poradní výbor (ESAC) EURL ECVAM, a uznána za vědecky platnou (10) pro použití v rámci integrovaných přístupů IATA na podporu rozlišení mezi látkami senzibilizujícími a nesenzibilizujícími kůži pro účely klasifikace a označování nebezpečnosti.
Untreated control
Příklady využití údajů DPRA v kombinaci s jinými informacemi jsou uvedeny v odborné literatuře (11) (12) (13) (14).
When cytoB is used, evaluation of cytotoxicity should be based on the Cytokinesis-Block Proliferation Index (CBPI) or Replication Index (RI) (17) (69).
Definice jsou uvedeny v dodatku 1.
The CBPI indicates the average number of nuclei per cell, and may be used to calculate cell proliferation.
VÝCHOZÍ ÚVAHY, POUŽITELNOST A OMEZENÍ
The RI indicates the relative number of cell cycles per cell during the period of exposure to cytoB in treated cultures compared to control cultures and can be used to calculate the % cytostasis:
Korelace mezi reaktivitou proteinů a potenciálem senzibilizace kůže byla spolehlivě zjištěna (15) (16) (17).
% Cytostasis = 100 – 100(CBPIT – 1) ÷ (CBPIC – 1)
Ačkoli se jedná o molekulární iniciační události AOP pro senzibilizace kůže, vazba na proteiny představuje pouze jeden klíčový jev, takže informace o reaktivitě proteinů získané zkušebními i nezkušebními metodami nemusí samy o sobě stačit k vyvození závěru o neexistenci potenciálu chemických látek způsobovat senzibilizaci kůže.
T test chemical treatment culture
Údaje získané pomocí této zkušební metody by proto měly být zvažovány v kontextu integrovaných přístupů, jako je např. IATA, v kombinaci s jinými doplňujícími informacemi např. pocházejícími ze zkoušek in vitro zkoumajících jiné klíčové události v rámci metody AOP pro stanovení senzibilizace kůže, jakož i z nezkušebních metod včetně údajů odvozených z analogických chemických látek.
C control culture
Tuto zkušební metodu lze v kombinaci s jinými doplňujícími informacemi v rámci přístupu IATA použít na podporu rozlišení mezi látkami senzibilizujícími kůži (tj. kategorie 1 GHS OSN /CLP) a látkami nesenzibilizujícími kůži.
No. mononucleate cells
Tuto zkušební metodu nelze používat samu o sobě ani k zařazení látek senzibilizujících kůži do podkategorií 1A a 1B, jak je definuje systém GHS OSN / CLP, ani k predikci účinnosti těchto látek při rozhodování v rámci posuzování bezpečnosti.
No. binucleate cells
V závislosti na regulačním rámci však kladný výsledek získaný zkušební metodou DPRA může být použit sám o sobě ke klasifikaci chemické látky v kategorii 1 GHS OSN / CLP.
No. multinucleate cells
U zkušební metody DPRA se prokázalo, že ji lze přenést do laboratoří, které mají zkušenosti s analýzou pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC).
Total number of cells
V případě DPRA je pravděpodobnější, že povede k příliš nízké předpovědi u chemických látek vykazujících nízkou až střední potenci způsobovat senzibilizaci kůže (tj. podkategorie 1B GHS OSN / CLP), než u chemických látek vykazujících vysokou potenci způsobovat senzibilizaci kůže (tj. podkategorie 1A GHS OSN / CLP (18) (19).
Thus, a CBPI of 1 (all cells are mononucleate) is equivalent to 100 % cytostasis.
Zde uvedené hodnoty přesnosti DPRA jako samostatné zkušební metody jsou však pouze orientační, protože tato zkušební metoda by měla být zvažována v kombinaci s jinými zdroji informací v rámci přístupu IATA a v souladu s ustanoveními odstavce 9 výše.
Cytostasis = 100-RI
Při hodnocení metod posuzování senzibilizace kůže bez použití zvířat by se dále mělo vést v patrnosti, že ani zkouška LLNA, ani jiné zkoušky na zvířatech nemusí plně odrážet situaci existující u druhu, který je předmětem zájmu, tj. u lidí.
T treated cultures
Na základě celkových dostupných údajů bylo prokázáno, že zkušební metodu DPRA lze použít v případě zkoušených chemických látek, jež obsahují různé organické funkční skupiny, mají různé reakční mechanismy, různou potenci způsobovat senzibilizaci kůže (jak bylo stanoveno ve studiích in vivo) a různé fyzikálně-chemické vlastnosti (8) (9) (10) (19).
C control cultures
Celkově vzato z těchto informací vyplývá, že zkušební metoda DPRA je užitečná a může přispět ke zjištění nebezpečí senzibilizace kůže.
Thus, an RI of 53 % means that, compared to the numbers of cells that have divided to form binucleate and multinucleate cells in the control culture, only 53 % of this number divided in the treated culture, i.e. 47 % cytostasis.
Termín „zkoušená chemická látka“ se v této zkušební metodě používá k označení toho, co se zkouší, a nesouvisí s použitelností zkušební metody DPRA ke zkoušení látek a/nebo směsí.
When cytoB is not used, evaluation of cytotoxicity based on Relative Increase in Cell Counts (RICC) or on Relative Population Doubling (RPD) is recommended (69), as both take into account the proportion of the cell population which has divided.
V současnosti jsou k dispozici jen omezené informace o použitelnosti zkušební metody DPRA ke zkoušení směsí se známým složením (18) (19).
Thus, a RICC, or a RPD of 53 % indicates 47 % cytotoxicity/cytostasis.
DPRA je nicméně považována za technicky použitelnou k testování vícesložkových látek a směsí se známým složením (viz odstavec 10).
By using a Proliferation Index (PI), cytotoxicity may be assessed via counting the number of clones consisting of 1 cell (cl1), 2 cells (cl2), 3 to 4 cells (cl4) and 5 to 8 cells (cl8).
Před použitím této zkušební metody ke zkoušení směsi za účelem získání údajů pro zamýšlené použití v právních předpisech by mělo být zváženo, zda tato metoda může pro tento účel poskytnout přiměřené výsledky, a pokud ano, proč je tomu tak.
The PI has been used as a valuable and reliable cytotoxicity parameter also for cell lines cultured in vitro in the absence of cytoB (35) (36) (37) (38) and can be seen as a useful additional parameter.
Takové posouzení není nutné, pokud existuje právní požadavek na zkoušení dané směsi.
In any case, the number of cells before treatment should be the same for treated and negative control cultures.
Pro tento účel bude nutné vyvinout nový predikční model založený na gravimetrické metodě.
When using automated scoring systems, for instance, flow cytometry, laser scanning cytometry or image analysis, the number of cells in the formula can be substituted by the number of nuclei.
V případech, kdy mohou být předloženy důkazy prokazující nepoužitelnost této zkušební metody ke zkoušení jiných specifických kategorií chemických látek, neměla by se tato zkušební metoda na tyto specifické kategorie chemických látek používat.
In the negative control cultures, population doubling or replication index should be compatible with the requirement to sample cells after treatment at a time equivalent to about 1,5 - 2,0 normal cell cycle.
V literatuře se uvádí, že v některých případech byly za pomocí této zkušební metody správně detekovány chemické látky, které se stávají senzibilizujícími látkami po abiotické přeměně (tj. prehapteny) (18).
This test method (TM) is equivalent to the OECD test guideline (TG) 442C (2015).
Vzhledem k výše uvedenému by se měly negativní výsledky získané touto zkušební metodou interpretovat v kontextu stanovených omezení a ve spojení s jinými zdroji informací v rámci přístupu IATA.
A skin sensitiser refers to a substance that will lead to an allergic response following skin contact as defined by the United Nations Globally Harmonized System of Classification and Labelling of Chemicals (UN GHS) (1) and Regulation (EC) No 1272/2008 of the European Parliament and Council on Classification, Labelling and Packaging of Substances and Mixtures (CLP) [12].
Při zkoušení chemických látek, které se na peptidy kovalentně neváží, ale podporují jejich oxidaci (dimerizaci cysteinů), by mohlo potenciálně dojít k příliš vysokému odhadu úbytku peptidů, což může vést k falešným pozitivním předpovědím a/nebo k zařazení do vyšší třídy reaktivity (viz odstavce 29 a 30).
This test method provides an in chemico procedure (Direct Peptide Reactivity Assay — DPRA) to be used for supporting the discrimination between skin sensitisers and non-sensitisers in accordance with the UN GHS and CLP.
Jak bylo popsáno výše, zkušební metoda DPRA pomáhá rozlišovat mezi látkami senzibilizujícími kůži a látkami nesenzibilujícími kůži.
There is general agreement regarding the key biological events underlying skin sensitisation.
Může však také potenciálně přispět k hodnocení senzibilizační potence (11), je-li používána v rámci integrovaných přístupů, například IATA.
The existing knowledge of the chemical and biological mechanisms associated with skin sensitisation has been summarised in the form of an Adverse Outcome Pathway (AOP) (2), from the molecular initiating event through the intermediate events to the adverse effect namely allergic contact dermatitis in humans or contact hypersensitivity in rodents.
Pro určení toho, jak mohou výsledky DPRA potenciálně přispět k posuzování potence, však bude nutný další výzkum, přednostně založený na údajích o účincích na člověka.
Within the skin sensitisation AOP, the molecular initiating event is the covalent binding of electrophilic substances to nucleophilic centres in skin proteins.
DPRA je metoda in chemico, která kvantifikuje zbytkovou koncentraci peptidů obsahujících cystein nebo lysin po 24hodinové inkubaci se zkoušenou chemickou látkou při teplotě 25 ± 2,5 °C.
The assessment of skin sensitisation has typically involved the use of laboratory animals.
K usnadnění detekce obsahují syntetické peptidy fenylalanin.
The classical methods based on guinea-pigs, the Magnusson Kligman Guinea Pig Maximisation Test (GMPT) and the Buehler Test (TM B.6 (3)), study both the induction and elicitation phases of skin sensitisation.
Relativní koncentrace peptidů se měří pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC) s gradientovou elucí a UV detekcí při vlnové délce 220 nm.
A murine test, the Local Lymph Node Assay (LLNA, TM B.42 (4)) and its two non-radioactive modifications, LLNA: DA (TM B.50 (5)) and LLNA: BrdU-ELISA (TM B.51 (6)), which all assess the induction response exclusively, have also gained acceptance since they provide an advantage over the guinea pig tests in terms of animal welfare and an objective measurement of the induction phase of skin sensitisation.
Poté se vypočítají procentuální hodnoty úbytku cysteinových a lysinových peptidů a použijí se v predikčním modelu (viz odstavec 29), což umožní zařadit zkoušenou chemickou látku do jedné ze čtyř tříd reaktivity, které se podpůrně používají k rozlišení mezi senzibilizujícími a nesenzibilizujícími látkami.
More recently, mechanistically based in chemico and in vitro test methods have been considered scientifically valid for the evaluation of the skin sensitisation hazard of chemicals.
Před rutinním používáním popsané metody, která se řídí touto zkušební metodou, by měly laboratoře prokázat odbornou způsobilost použitím deseti látek pro prokazování způsobilosti, které jsou uvedeny v dodatku 2.
However, combinations of non-animal methods (in silico, in chemico, in vitro) within Integrated Approaches to Testing and Assessment (IATA) will be needed to be able to fully substitute for the animal tests currently in use given the restricted AOP mechanistic coverage of each of the currently available non-animal test methods (2) (7).
Tato zkušební metoda je založena na protokolu DPRA DB-ALM č. 154 (20), což je protokol použitý při validační studii provedené za koordinace EURL ECVAM.
The DPRA is proposed to address the molecular initiating event of the skin sensitisation AOP, namely protein reactivity, by quantifying the reactivity of test chemicals towards model synthetic peptides containing either lysine or cysteine (8).
Při provádění a používání této metody v laboratoři se doporučuje použít tento protokol.
Cysteine and lysine percent peptide depletion values are then used to categorise a substance in one of four classes of reactivity for supporting the discrimination between skin sensitisers and non-sensitisers (9).
Dále je uveden popis hlavních složek a postupů zkušební metody DPRA.
The DPRA has been evaluated in a European Union Reference Laboratory for Alternatives to Animal Testing (EURL ECVAM)-lead validation study and subsequent independent peer review by the EURL ECVAM Scientific Advisory Committee (ESAC) and was considered scientifically valid (10) to be used as part of an IATA to support the discrimination between skin sensitisers and non-sensitisers for the purpose of hazard classification and labelling.
Použije-li se jiné nastavení vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC), měla by být prokázána jeho rovnocennost validovanému nastavení, které je popsáno v protokolu DB-ALM (např. testováním vhodných látek uvedených v dodatku 2).
Examples on the use of DPRA data in combination with other information are reported in the literature (11) (12) (13) (14).
Příprava peptidů obsahujících cystein nebo lysin
Definitions are provided in Appendix I.
Zásobní roztoky cysteinu (Ac-RFAACAA-COOH) a lysinu (Ac-RFAAKAA-COOH) obsahující syntetické peptidy o čistotě vyšší než 85 % a přednostně v rozmezí 90–95 % by se měly připravovat čerstvé bezprostředně před jejich inkubací se zkoušenou chemickou látkou.
INITIAL CONSIDERATIONS, APPLICABILITY AND LIMITATIONS
Konečná koncentrace cysteinových peptidů ve fosfátovém pufru s pH 7,5 by měla být 0,667 mM a konečná koncentrace lysinových peptidů v pufru octanu amonného s pH 10,2 by měla být 0,667 mM.
The correlation of protein reactivity with skin sensitisation potential is well established (15) (16) (17).
Série provedení HPLC by se měla nastavit tak, aby trvání analýzy HPLC bylo kratší než 30 hodin.
Nevertheless, since protein binding represents only one key event, albeit the molecular initiating event of the skin sensitisation AOP, protein reactivity information generated with testing and non-testing methods may not be sufficient on its own to conclude on the absence of skin sensitisation potential of chemicals.
Při nastavení HPLC použitém ve validační studii a popsaném v této zkušební metodě je možné v rámci jednoho provedení HPLC zpracovat až 26 analytických vzorků (jež zahrnují vzorky se zkoušenou chemickou látkou, pozitivní kontrolu a přiměřený počet kontrol s rozpouštědlem na základě počtu jednotlivých rozpouštědel použitých ve zkoušce, přičemž každý z nich se testuje třikrát).
Therefore, data generated with this test method should be considered in the context of integrated approaches such as IATA, combining them with other complementary information e.g. derived from in vitro assays addressing other key events of the skin sensitisation AOP as well as non-testing methods including read-across from chemical analogues.
U všech replik analyzovaných v rámci jednoho provedení by měly být použity totožné zásobní roztoky cysteinových a lysinových peptidů.
This test method can be used, in combination with other complementary information, to support the discrimination between skin sensitisers (i.e. UN GHS/CLP Category 1) and non-sensitisers in the context of IATA.
U jednotlivých šarží peptidů se před použitím doporučuje ověřit správnou rozpustnost.
This test method cannot be used on its own, neither to sub-categorise skin sensitisers into subcategories 1A and 1B as defined by UN GHS/CLP, nor to predict potency for safety assessment decisions.
Příprava zkoušené chemické látky
However, depending on the regulatory framework, a positive result with the DPRA may be used on its own to classify a chemical into UN GHS/CLP category 1.
Před provedením zkoušky by měla být posouzena rozpustnost zkoušené chemické látky ve vhodném rozpouštědle za dodržení postupu rozpouštění popsaného v protokolu DPRA DB-ALM (20).
The DPRA test method proved to be transferable to laboratories experienced in high-performance liquid chromatography (HPLC) analysis.
Ve vhodném rozpouštědle se zkoušená chemická látka rozpustí beze zbytku.
The level of reproducibility in predictions that can be expected from the test method is in the order of 85 % within laboratories and 80 % between laboratories (10).
Jelikož při zkoušce DPRA se zkoušená chemická látka inkubuje ve velkém přebytku s cysteinovými nebo lysinovými peptidy, stačí k ověření toho, že se zkoušená chemická látka (a všechny její složky v případě zkoušení vícesložkové látky nebo směsi) rozpustila, vizuální kontrola tvorby čirého roztoku.
Results generated in the validation study (18) and published studies (19) overall indicate that the accuracy of the DPRA in discriminating sensitisers (i.e. UN GHS/CLP Cat.
Vhodnými rozpouštědly jsou acetonitril, voda, směs voda/acetonitril v poměru 1:1, izopropanol, aceton nebo směs aceton/acetonitril v poměru 1:1.
1) from non-sensitisers is 80 % (N=157) with a sensitivity of 80 % (88/109) and specificity of 77 % (37/48) when compared to LLNA results.
Lze použít i jiná rozpouštědla, pokud nemají vliv na stabilitu peptidů, sledovanou pomocí referenční kontroly C (tj. vzorky sestávající pouze z peptidů rozpuštěných ve vhodném rozpouštědle; viz dodatek 3).
The DPRA is more likely to under predict chemicals showing a low to moderate skin sensitisation potency (i.e. UN GHS/CLP subcategory 1B) than chemicals showing a high skin sensitisation potency (i.e. UN GHS/CLP subcategory 1A) (18) (19).
Poslední možností, není-li zkoušená chemická látka rozpustná v žádném z těchto rozpouštědel, je pokusit se ji rozpustit ve 300 μl DMSO a výsledný roztok zředit přidáním 2700 μl acetonitrilu, a pokud zkoušená chemická látka není v této směsi rozpustná, pokusit se rozpustit stejné množství zkoušené chemické látky v 1500 μl DMSO a výsledný roztok zředit přidáním 1500 μl acetonitrilu.
However, the accuracy values given here for the DPRA as a stand-alone test method are only indicative since the test method should be considered in combination with other sources of information in the context of an IATA and in accordance with the provisions of paragraph 9 above.
Zkoušená chemická látka by měla být předem odměřena do skleněných zkumavek a bezprostředně před zkoušením rozpuštěna ve vhodném rozpouštědle k získání 100 mM roztoku.
Furthermore when evaluating non-animal methods for skin sensitisation, it should be kept in mind that the LLNA test as well as other animal tests may not fully reflect the situation in the species of interest, i.e. humans.
U směsí a vícesložkových látek se známým složením by se měla stanovit jediná čistota součtem podílů jejich složek (s výjimkou vody) a měla by se stanovit celková molekulová hmotnost na základě jednotlivých molekulových hmotností každé složky směsi (s výjimkou vody) a jejich jednotlivých podílů.
On the basis of the overall data available, the DPRA was shown to be applicable to test chemicals covering a variety of organic functional groups, reaction mechanisms, skin sensitisation potency (as determined in in vivo studies) and physico-chemical properties (8) (9) (10) (19).
Výsledná čistota a molekulová hmotnost by poté měly být použity k výpočtu hmotnosti zkoušené chemické látky nezbytné pro přípravu 100 mM roztoku.
Taken together, this information indicates the usefulness of the DPRA to contribute to the identification of skin sensitisation hazard.
U polymerů, u kterých není možné stanovit dominantní molekulovou hmotnost, lze pro přípravu 100 mM roztoku posoudit molekulovou hmotnost monomeru (nebo zdánlivou molekulovou hmotnost různých monomerů tvořících polymer).
The term “test chemical” is used in this test method to refer to what is being tested and is not related to the applicability of the DPRA to the testing of substances and/or mixtures.
Při zkoušení směsí, vícesložkových látek nebo polymerů se známým složením by však mělo být zváženo také zkoušení chemické látky v neředěném stavu.
This test method is not applicable for the testing of metal compounds since they are known to react with proteins with mechanisms other than covalent binding.
V případě kapalin by měla být zkoušena čistá chemická látka jako taková bez předchozího ředění prostřednictvím inkubace s cysteinovými peptidy v molárním poměru 1:10 a s lysinovými peptidy v molárním poměru 1:50.
A test chemical should be soluble in an appropriate solvent at a final concentration of 100 mM (see paragraph 18).
V případě pevných látek by měla být zkoušená chemická látka rozpuštěna v maximální rozpustné koncentraci ve stejném rozpouštědle, které bylo použito na přípravu roztoku se zdánlivou molekulovou hmotností 100 mM.
However, test chemicals that are not soluble at this concentration may still be tested at lower soluble concentrations.
Poté by měla zbýt zkoušena jako taková bez dalšího ředění tak, že se inkubuje s cysteinovými peptidy v molárním poměru 1:10 a s lysinovými peptidy v molárním poměru 1:50.
In such a case, a positive result could still be used to support the identification of the test chemical as a skin sensitiser but no firm conclusion on the lack of reactivity should be drawn from a negative result.
Souhlasné výsledky (reaktivita nebo nereaktivita) mezi roztokem se zdánlivou molekulovou hmotností 100 mM a roztokem čisté chemické látky by měly umožnit vyvodit na základě tohoto výsledku spolehlivý závěr.
Limited information is currently available on the applicability of the DPRA to mixtures of known composition (18) (19).
Příprava pozitivní kontroly, referenčních kontrol a kontrol koelucí
The DPRA is nevertheless considered to be technically applicable to the testing of multi-constituent substances and mixtures of known composition (see paragraph 18).
Jako pozitivní kontrola by měl být použit cinnamaldehyd (č. CAS 104-55-2, potravinářské čistoty ≥95 %) v roztoku o koncentraci 100 mM v acetonitrilu.
Before use of this test method on a mixture for generating data for an intended regulatory purpose, it should be considered whether, and if so why, it may provide adequate results for that purpose.
Lze použít i jiné vhodné pozitivní kontroly přednostně poskytující hodnoty úbytku středního rozsahu, pokud jsou k dispozici dosavadní údaje umožňující odvodit srovnatelná kritéria přijatelnosti daného provedení zkoušky.
Such considerations are not needed when there is a regulatory requirement for testing of the mixture.
Do série provedení HPLC by navíc měly být zařazeny referenční kontroly (tj. vzorky obsahující pouze peptidy rozpuštěné ve vhodném rozpouštědle), které se používají k ověření vhodnosti systému HPLC před analýzou (referenční kontroly A), k ověření stability referenčních kontrol v časovém průběhu (referenční kontroly B) a k ověření toho, že rozpouštědlo použité k rozpuštění zkoušené chemické látky nemá vliv na procentuální úbytek peptidů (referenční kontroly C) (viz dodatek 3).
The current prediction model cannot be used for complex mixtures of unknown composition or for substances of unknown or variable composition, complex reaction products or biological materials (i.e. UVCB substances) due to the defined molar ratio of test chemical and peptide.