natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Schäfers, C., Teigeler, M., Wenzel, A., Maack, G., Fenske, M., Segner, H.
Examples of suitable solvents are given in (36).
(2007) Concentration- and time-dependent effects of the synthetic estrogen, 17 alpha-ethinylestradiol, on reproductive capabilities of the zebrafish, Danio rerio, Journal of Toxicology and Environmental Health-Part A, 70, 9–10, pp 768–779.
Semi-static test conditions should be avoided unless justification is provided on compelling reasons associated with the test chemical (e.g. stability, limited availability, high cost or hazard).
Zkratky a definice
For the semi-static technique, two different renewal procedures may be followed.
Klíčový ukazatel
Either new test solutions are prepared in clean chambers and surviving eggs and larvae gently transferred into the new chambers, or the test organisms are retained in the test chambers whilst a proportion (at least two thirds) of the test water is changed daily.
způsobuje účinek na úrovni populace
Conditions of Exposure
hodnota nasycení vzduchem
Collection of eggs and duration
způsobuje účinek na úrovni jedinců
To avoid genetic bias, eggs are collected from a minimum of three breeding pairs or groups, mixed and randomly selected to initiate the test.
látka nebo směs.
For the three-spined stickleback, see the description of artificial fertilisation in Appendix 11.
dnů po vylíhnutí
The test should start as soon as possible after the eggs have been fertilised, the embryos preferably being immersed in the test solutions before cleavage of the blastodisc commences, or as close as possible after this stage and no later than 12 h post fertilisation.
gen ležící v DM doméně chromozomu Y, který je nezbytný pro vývoj samečků halančíka japonského
The test should continue until sexual differentiation in the control group is completed (60 dph for Japanese medaka, the three-spined stickleback and zebrafish).
enzymová imunosorpční analýza
Loading
Hmotnost ryby
The number of fertilised eggs at the start of the test should be at least 120 per concentration divided between a minimum of 4 replicates (square root allocation to control is accepted).
hmotnost ryby po osušení do sucha
The eggs should be randomly distributed (by using statistical tables for randomisation) among treatments.
zkouška pohlavního vývoje ryb
The loading rate (for definition, see Appendix 1) should be low enough in order that a dissolved oxygen concentration of at least 60 % of the ASV can be maintained without direct aeration of the chambers.
hypothalamo-hypofýzo-gonadální osa
For flow-through tests, a loading rate not exceeding 0,5 g/l per 24 hours, and not exceeding 5 g/l of solution at any time is recommended.
Intersexuální ryba
No later than 28 days post fertilisation the number of fish per replicate should be redistributed, so that each replicate contains as equal a number of fish as possible.
ryba s více než jedním oocytem ve varleti na 6 analyzovaných řezů nebo se spermatogenetickými buňkami ve vaječnících (ano/ne)
If exposure related mortality occurs, the number of replicates should be reduced appropriately so that fish density between treatment levels is kept as equal as possible.
živá hmotnost ryb na jednotku objemu vody
The photoperiod and water temperature should be appropriate for the test species (see Appendix 2 for experimental conditions for the FSDT).
mechanismus účinku
Food and feeding are critical, and it is essential that the correct food for each stage is supplied at appropriate time intervals and at a level sufficient to support normal growth.
polymerázová řetězová reakce s reverzní transkripcí
Feeding should be ad libitum whilst minimising the surplus.
Nediferencovaná ryba
To obtain a sufficient growth rate, fish should be fed at least twice daily (accepting once daily on weekends), separated by at least three hours between each feed.
ryba s gonádami, které nevykazují žádné rozpoznatelné zárodečné buňky
Surplus food and faeces should be removed, as necessary, to avoid accumulation of waste.
vitelogenin
As experience is gained, food and feeding regimes are continuously being refined to improve survival and optimise growth.
Experimentální podmínky pro zkoušku FSDT (sladkovodní druhy)
Effort should therefore be made to confirm the proposed regime with acknowledged experts.
Halančík japonský (Oryzias latipes)
Feeding should be withheld 24 hours before ending the test.
Danio pruhované (Danio rerio)
Examples of appropriate food items are listed in Appendix 2 (see also the OECD Fish Testing Framework (39).
Koljuška tříostná (Gasterosteus aculeatus)
Test chemicals should be spaced as described in Appendix 4.
Průtoková nebo semistatická
A minimum of three test concentrations in at least four replicates should be used.
Fluorescenční zářivky (širokospektrální)
The curve relating LC50 to period of exposure in the acute studies available should be considered when selecting the range of test concentrations.
Intenzita osvětlení
Five test concentrations are recommended if the data are to be used for risk assessment.
10–20 μE/m2/s, 540–1080 luxů nebo 50–100 ft-c (okolní laboratorní hodnoty)
Concentrations of the chemical higher than 10 % of the acute adult LC50 or 10 mg/l, whichever is the lower, need not be tested.
12–16 h světlo, 8–12 h tma
The maximum test concentration should be 10 % of the LC50 on the larval/juvenile life-stage.
Minimální velikost nádrže
Controls
Jednotlivé nádrže by měly pojmout nejméně 7 l vody
A dilution water control (≥ 4 replicates) and, if relevant, a solvent control (≥ 4 replicates) should be run in addition to the test concentrations.
Stáří zkušebních organismů na začátku expozice
Only solvents that have been investigated not to have any statistical significant influence on the test endpoints should be used in the test.
Čerstvě oplodněné jikry (stadium rané blastuly)
Where a solvent is used, its final concentration should not be greater than 0,1 ml/l (36) and it should be the same concentration in all test chambers, except the dilution water control.
Čerstvě oplodněné jikry
However, every effort should be made to avoid the use of such solvent or keep solvent's concentrations to a minimum.
Počet jiker pro každou expozici
Frequency of Analytical Determinations and Measurements
Nejméně 120
Chemical analysis of the test chemical concentration should be performed before initiation of the test to check compliance with the acceptance criteria.
Nejméně 3 (plus příslušné kontrolní skupiny)
All replicates should be analysed individually at the beginning and termination of the test.
Počet opakování pro každou expozici
One replicate per test concentration should be analysed at least once per week during the test, changing systematically between replicates (1,2,3,4,1,2…).
Nejméně 4 (pokud není přidělení ke kontrolním skupinám podle druhé odmocniny)
If samples are stored to be analysed at a later time, the storage method of the samples should be previously validated.
Živé Artemia, zmrazené dospělé žábronožky solné, vločkové krmivo atd. Doporučuje se krmit dvakrát denně
Samples should be filtered (e.g. using a 0,45 μm pore size) or centrifuged to ensure that the determinations are made on the chemical in true solution.
Speciální krmivo pro mladé ryby, živé Artemia, zmrazené dospělé žábronožky solné, vločkové krmivo atd. Doporučuje se krmit dvakrát denně
During the test, dissolved oxygen, pH, total hardness, conductivity, salinity (if relevant), and temperature should be measured in all test chambers.
Žádné, dokud koncentrace rozpuštěného kyslíku neklesne pod 60 % nasycení
As a minimum dissolved oxygen, salinity (if relevant), and temperature should be measured weekly, and pH, conductivity and hardness at the beginning and at the end of the test.
Žádné, dokud koncentrace rozpuštěného kyslíku neklesne pod 70 % nasycení
Temperature should preferably be monitored continuously in at least one test chamber.
Čistá povrchová, studniční nebo rekonstituovaná voda
Results should be based on measured concentrations.
Trvání expozice zkoušené chemické látce
However, if the concentration of the test chemical in solution has been satisfactorily maintained within ± 20 % of the nominal concentration throughout the test, then the results can either be based on nominal or measured values.
Úspěšné vylíhnutí, přežití makroskopická morfologie, VTG histologie gonád, genetické pohlaví, poměr pohlaví
Observations and measurements
Úspěšné vylíhnutí, přežití makroskopická morfologie, VTG histologie gonád, poměr pohlaví
Stage of embryonic development
Kritéria přijatelnosti zkoušky pro sloučená opakování kontrolních skupin
The exposure should begin as soon as possible after fertilisation and before cleavage of the blastodisc commences and no later than 12 h post fertilisation to ensure exposure during early embryonic development.
Úspěšné vylíhnutí > 80 %
Hatching and survival
růst (živá hmotnost ryby, po osušení do sucha) > 75 mg
Extreme care should be taken when removing dead individuals not to knock or physically damage adjacent eggs/larvae, these being extremely delicate and sensitive.
růst (živá hmotnost ryby, po osušení do sucha) > 120 mg
Criteria for death vary according to life stage:
délka (standardní délka) > 20 mm
for eggs:
délka (standardní délka) > 14 mm
particularly in the early stages, a marked loss of translucency and change in coloration, caused by coagulation and/or precipitation of protein, leading to a white opaque appearance;
délka (standardní délka) > 20 mm
for larvae and juvenile fish:
poměr pohlaví (% samečků nebo samiček) 30 %–70 %
immobility and/or absence of respiratory movement and/or absence of heart-beat and/or white opaque coloration of central nervous system and/or lack of reaction to mechanical stimulus.
Chemické charakteristiky vhodné ředicí vody
Abnormal appearance
KONCENTRACE
The number of larvae or fish showing abnormality of body form should be recorded, and the appearance and the nature of the abnormality described.
Pevné částice
It should be noted that abnormal embryos and larvae occur naturally and can be of the order of several per cent in the control(s) in some species.
Ze zkušební metody C.14/Pokyny týkající se zkušebních koncentrací
Abnormal animals should only be removed from the test chambers on death.
Sloupec (počet koncentrací mezi 100 a 10, nebo mezi 10 a 1) [1]
However, in accordance with Directive 2010/63/EU of the European Parliament and of the Council of 22 September 2010 on the protection of animals used for scientific purposes, if abnormalities result in pain, suffering and distress or lasting harm, and death can be reliably predicted, animals should be anaesthetised and euthanised according to the description in paragraph 44 and treated as mortality for data analysis..
Ze sloupců může být zvolena řada tří (nebo více) po sobě jdoucích koncentrací.
Abnormal behaviour
Mezilehlé body pro koncentrace ve sloupci (x) jsou uvedeny ve sloupci (2x + 1).
Abnormalities, e.g. hyperventilation, uncoordinated swimming, atypical quiescence and atypical feeding behaviour should be recorded at appearance.
Uvedené hodnoty mohou být koncentracemi vyjádřenými v objemových nebo hmotnostních procentech (mg/l nebo μg/l).
Weight
Hodnoty mohou být podle potřeby násobeny nebo děleny jakoukoli mocninou 10.
At the end of the test all surviving fish should be euthanised (anaesthetised if blood samples should be taken), and individual wet weight (blotted dry) should be measured.
Sloupec 1 by se měl použít, pokud je úroveň toxicity značně neurčitá.
Length
Návod k homogenizaci hlavy a ocasu z nedospělých danií pruhovaných, jelečka velkohlavého, koljušky tříostné a halančíka japonského
At the end of the test, individual lengths (standard length) should be measured.
Účelem tohoto oddílu je popsat postupy, které je třeba dodržet před stanovením hladiny koncentrace VTG.
These observations will result in some or all of the following data being available for reporting:
Lze použít jiné postupy, jež vedou ke srovnatelné kvantifikaci VTG.
cumulative mortality;
Namísto užití homogenátu hlavy/ocasu je možné koncentraci VTG určit z krevní plazmy nebo z jater.
numbers of healthy fish at end of test;
Odřízne se hlava a ocas v souladu s popisem zkoušky.
time to start of hatching and end of hatching;
Veškeré pitevní nástroje a pracovní stůl je třeba mezi zpracováním každé jednotlivé ryby řádně omýt a vyčistit (např. 96 % ethanolem), aby se zabránilo ‚znečištění VTG‘ přenosem ze samiček nebo ze samečků, u kterých byly vyvolány účinky, na samečky, u kterých účinky vyvolány nebyly.
length and weight of surviving animals;
Jakmile se dosáhne homogenní hmoty, přidá se ledový homogenizační pufr v množství 4–10krát větším než hmotnost tkáně (ředění se zaznamená).
numbers of deformed larvae;
Vzorky se položí na led až do odstřeďování při teplotě 4 °C po dobu 30 min při zrychlení 50000 g.
numbers of fish exhibiting abnormal behaviour.
Pomocí pipety přeneste části o velikosti 20–50 μl (množství zaznamenejte) supernatantu do nejméně dvou zkumavek tak, že špičku pipety ponoříte pod tukovou vrstvu na hladině a opatrně nasajete supernatant bez frakcí tuku nebo sedimentu.
Sampling of fish
Během použití ho uchovávejte na ledu.
Fish sampling is performed at termination of the test.
Homogenizační pufr:50 mM Tris-HCl pH 7,4;
Sampled fish should be euthanised with e.g. MS-222 (100-500 mg per l buffered with 200 mg NaHCO3 per l) or FA-100 (4-allyl-2-methoxyphenol: eugenol) and individually measured and weighed as wet weight (blotted dry) or anaesthetised if a blood sample should be taken (see paragraph 49).
1 % koktejl inhibitoru proteázy (Sigma):
Sampling for VTG analysis and sex determination via histological evaluation
12 ml Tris-HCl pH 7,4 + 120 μl koktejlu inhibitoru proteázy (nebo rovnocenné koktejly inhibitoru proteázy).TRIS:
All fish should be sampled and prepared for analysis of sex and VTG.
TRIS-ULTRA PURE (ICN)Koktejl inhibitoru proteázy:
All fish should be analysed histologically to determine sex.
od výrobce Sigma (pro tkáně savců), produktové číslo P 8340.
For the VTG measurements, a sub-sampling of at least 16 fish from each replicate is accepted.
Návod ke kvantifikaci vitelogeninu z homogenátu hlavy a ocasu dania pruhovaného (Danio rerio) (upraveno z Holbech a další, 2001). lze použít jiné postupy za použití homologických protilátek a standardů
More fish should be analysed for VTG if the results of the sub-sampling turn out to be unclear.
Mikrotitrační destičky (certifikované, Maxisorp F96, Nunc, Roskilde Denmark) předem pokryté 5 μg/ml lipovitellinu-IgG se rozmrazí a třikrát promyjí promývacím pufrem (*).
The sampling procedure for VTG and sex determination is dependent on the VTG analysis method:
Očištěný standard [1] dania pruhovaného pro stanovení vitelogeninu se sériově rozředí ředicím pufrem (**) na 0,2, 0,5, 1, 2, 5, 10 a 20 ng/ml, vzorky se zředí nejméně 1/200 ředicím pufrem (s cílem zabránit matricovému efektu) a nanesou se na destičky.
Head/tail homogenate method for VTG analysis
V opakování se použije vzorek z kontrolní skupiny.
The fish is euthanised.
Do každé jamky se vloží 150 μl.
Head and tail of each fish are separated from the body of the fish by cuts made right behind the pectoral fins, and right behind the dorsal fin, using a scalpel (See Figure 1).
Standardy se testují ve dvou opakováních a vzorky ve třech opakováních.
The head and tail part from each fish are pooled, weighed and individually numbered, frozen in liquid nitrogen and stored at – 70° or less for VTG analysis.
Inkubují se přes noc na třepačce při teplotě 4 °C.
The body part of the fish is numbered and fixed in an appropriate fixative for histological evaluation (22).
Destičky se pětkrát promyjí promývacím pufrem (*).
By use of this method VTG and histopathology are evaluated on each individual and a possible change in the VTG level can thus be related to the phenotypic sex of the fish or genetic sex (Japanese medaka and the three-spined stickleback) of the fish.
Křenová peroxydáza (HRP) sloučená v řetězec dextranu (např. AMDEX A/S, Denmark) a konjugované protilátky se rozředí v promývacím pufru;
For further information see guidance for homogenisation (Appendix 5) and guidance for VTG quantification (Appendix 6).
skutečné zředění se liší podle šarže a stáří.
Liver homogenate method for VTG analysis
Do každé jamky se vloží 150 μl a destičky se 1 hodinu inkubují na třepačce při pokojové teplotě.
The liver is dissected out and stored at – 70 °C or below.
Destičky se pětkrát promyjí promývacím pufrem (*) a dno jamek se důkladně vyčistí ethanolem.
Recommended procedures for liver excision and pre-treatment are available in OECD TG 229 (37) or Chapter C.37 of this Annex (38).
Do každé jamky se vloží 150 μl TNB plus (***).
Livers are then individually homogenised as described in OECD TG 229 or Chapter C.37 of this Annex.
Destičku je třeba chránit před světlem pomocí staniolu a kontrolovat změnu barvy na třepačce.
The supernatant collected is used for measuring VTG with a homologous ELISA technique (see Appendix 6 for an example of quantification in zebrafish or OECD TG 229 (37) for Japanese medaka).
Jakmile se standardní křivka plně rozvine, činnost enzymů se zastaví přidáním 150 μl 0,2 M H2SO4 do každé jamky.
Following this approach, it is also possible to have individual fish data on both VTG and gonad histology.
Promývací pufr:
Blood plasma method for VTG analysis
Hodnota pH se upraví na 7,3 a doplní se do 5 l deionizovanou H2O (Millipore).
Blood is collected from the anaesthetised fish by cardiac puncture, caudal vein or tail cutting, and centrifuged at 4 °C for plasma collection.
Skladuje se při 4 °C.
The plasma is stored at – 70 °C or below until use.
Ředicí pufr:
The whole fish is euthanised and fixed for histology.
PBS-Stock(****)
Both plasma samples and fish are numbered individually to relate VTG levels to the sex of the fish.
Hodnota pH se upraví na 7,3 a doplní se do 1 l deionizované H2O (Millipore).
How to cut a fish for measurement of VTG in head/tail homogenate and histological evaluation of the mid section
TMB plus je substrát ‚k okamžitému použití‘ vyráběný společností KemEnTec (Dánsko).
Genetic sex determination
Je citlivý na světlo.
A biological sample for the determination of the genetic sex is taken from individual fish in species possessing appropriate markers.
PBS-stock
For Japanese medaka, the anal fin or dorsal fin is collected.
Hodnota pH se upraví na 6,8 a doplní se do 2 l deionizované H2O (Millipore).
A detailed description is given in Appendix 9 including tissue sampling and sex determination by a PCR-method.
Skladuje se při pokojové teplotě.
Equally, for the three spined stickleback, a description of tissue sampling and a sex determining PCR-method is given in Appendix 10.
Battelle AP4.6.04 (1.18 mg/ml (AAA)), očištěný podle:
VTG measurement
Návod k přípravě tkáňových řezů pro určení pohlaví a určení stadií gonád
The measurement of VTG should be based upon a quantitative and analytically validated method.
Účelem tohoto oddílu je popsat postupy, ke kterým dochází před hodnocením histologických řezů.
Information should be available upon the intra-assay and inter-assay variability of the method used in a given laboratory.
S několika málo výjimkami jsou tyto postupy obdobné pro halančíka japonského i danio pruhované.
Considering the variability of VTG measurement, NOECs based on this endpoint alone should be treated with great care.
Usmrcení, pitva a fixace tkání
Different methods are available to assess VTG production in the fish species considered in this assay.
Cíle:
A measurement technique that is both relatively sensitive and specific is the determination of protein concentrations via enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).
Humánní usmrcení ryby.
Homologous antibodies (raised against VTG of the same species) and most important homologous standards should be used.
Získání potřebných tělesných hmotností a měření.
Sex determination
Vyhodnocení druhotných pohlavních znaků.
Dependent on the VTG sampling procedure, whole fish or the remaining mid-section of each fish is placed in a pre-labelled processing cassette and fixed in an appropriate fixative for histological determination of sex (optionally also for evaluation of gonadal staging).
Disekce tkání pro analýzu VTG.
Guidance on fixation and embedding is provided in Appendix 7 as well as in the OECD Guidance Document on the Diagnosis of Endocrine-Related Histopathology of Fish Gonads (22).
Postupy:
The individuals should be placed longitudinally in the paraffin block.
Ryba by se měla usmrtit bezprostředně před pitvou.
At least six longitudinal sections (3-5 μm in thickness) in a frontal plane including gonadal tissue from both gonads are taken from each individual.
Není-li k dispozici větší počet osob provádějících pitvu, nemělo by proto být usmrcováno více ryb současně.
The interval between these sections should be approximately 50 μm for males and 250 μm for females.
Ryba se pomocí malého podběráku vyjme z experimentální nádrže a přenese se v dopravní nádržce do pitevního prostoru.
However, since each block will often contain males and females (if more than one individual are embedded in each block), the interval between sections from these blocks should be approximately 50 μm until at least six sections of the gonads from each male are obtained.
Vloží se do usmrcujícího roztoku.
Thereafter, the interval between sections can be increased to approximately 250 μm for the females.
Poté, co se zastaví dýchání a ryba nereaguje na vnější podněty, z roztoku se vyjme.
Sections are stained with haematoxylin and eosin and examined by light-microscopy with focus on sex (male, female, intersex or undifferentiated).
Ryba se zváží
Intersex is defined as presence of more than one oocyte in testis per six sections analysed or spermatogenic cells (yes/no) in ovaries.
Za účelem přípravy tkání pro analýzu VTG lze rybu na korkové podložce položit na stolek pitevního mikroskopu.
Histopathology and staging of ovaries and testis is optional but if investigated, the results should be statistically analyzed and reported.
a.
It should be noted that some fish species naturally lack a fully developed pair of gonads and only one gonad may be present (e.g. Japanese medaka and occasionally zebrafish).
U dania pruhovaného se odřízne hlava těsně za prsní ploutví a ocas těsně za hřbetní ploutví.
All such observations should be recorded.
b.
Genetic sex determination in individual Japanese medaka is based on the presence or absence of the medaka male-sex determining gene, DMY, which is located on the Y chromosome.
U halančíka japonského se opatrně otevře břicho řezem, který je veden po střední linii od hrudního pletence k bodu na kraniálním okraji řitního otvoru.
The genotypic sex of medaka can be identified by sequencing the DMY gene from DNA extracted from for instance a piece of anal fin or dorsal fin.
Pomocí malé pinzety a malých nůžek se opatrně vyjmou játra.
The presence of DMY indicates a XY (male) individual regardless of phenotype, while the absence of DMY indicates a XX (female) individual regardless of phenotype (23).
Vzorek pro analýzu VTG se vloží do Eppedorfových zkumavek a okamžitě zmrazí v tekutém dusíku.
Guidance for tissue preparation and PCR method is given in Appendix 9.
Mrtvé tělo včetně gonád se vloží do etiketou předem označené plastové kazety na tkáně, která se přenese do Davidsonova nebo Bouinova fixačního roztoku.
The genetic sex determination in individual three-spined stickleback is also performed via a PCR method, described in Appendix 10.
Objem fixačního roztoku by měl být alespoň desetinásobkem odhadovaného objemu tkání.
The occurrence of intersex (for definition, see Appendix 1) should be reported.
Fixační nádrž se po dobu 5 sekund jemně protřepe, aby se z kazety odstranily vzduchové bubliny.
Secondary sexual characteristics
a.
Secondary sexual characteristics are under endocrine control in species like the Japanese medaka;
V Davidsonově fixačním roztoku zůstanou všechny tkáně přes noc a příštího dne se přemístí do individuálních nádrží s 10 % neutrálním pufrovaným formalínem.
therefore observations of physical appearance of the fish should if possible be made at the end of the exposure.
Nádrže s kazetami se po 5 minut jemně protřepou s cílem zajistit dostatečně proniknutí formalínu do kazet.
In the Japanese medaka, the papillary formation on the posterior part of the anal fin in females is androgen sensitive.