natgillin/translations-raw huggingface dataset:
jmenovité zkušební koncentrace, týdně naměřené koncentrace zkušebních roztoků a použitá analytická metoda, střední hodnoty koncentrací naměřených ve zkušebních nádržích a směrodatné odchylky a důkazy toho, že naměřené hodnoty odpovídají koncentracím zkoušené chemické látky v pravém roztoku,
The assay is normally initiated with fish sampled from a population that is in spawning condition;
charakteristiky ředicí vody (včetně pH, tvrdosti, alkality, teploty, koncentrace rozpuštěného kyslíku, koncentrace zbytkového chloru, celkového obsahu organického uhlíku, obsahu suspendovaných látek a výsledků jakýchkoli jiných provedených měření),
senescent animals should not be used.
kvalita vody ve zkušebních nádržích:
Guidance on the age of fish and on the reproductive status is provided in the section on Selection of fish.
pH, tvrdost, teplota a koncentrace rozpuštěného kyslíku,
The assay is conducted using three chemical exposure concentrations as well as a water control, and a solvent control if necessary.
podrobné informace o krmení (např. druh krmiva/krmiv, původ, podávané množství a frekvence krmení), a jsou-li k dispozici, analýzy na přítomnost příslušných kontaminujících látek (např. polychlorovaných bifenylů, polyaromatických uhlovodíků a organochlorových pesticidů).
Two vessels or replicates per treatment are used (each vessel containing 5 males and 5 females) in medaka and zebrafish, whereas four vessels or replicates per treatment are used (each vessel containing 2 males and 4 females) in fathead minnow.
důkazy o tom, že kontrolní skupiny vyhověly kritériím přijatelnosti zkoušky,
This is to accommodate the territorial behaviour of male fathead minnow while maintaining sufficient power of the assay.
údaje o mortalitě pro každou zkušební koncentraci a kontrolní skupinu,
The exposure is conducted for 21 days and sampling of fish is performed at day 21 of exposure.
použité metody statistické analýzy, zpracování údajů a zdůvodnění použitých metod,
On sampling at day 21, all animals are killed humanely.
údaje o biologických pozorováních celkové morfologie včetně druhotných pohlavních znaků a vitelogeninu,
Secondary sex characteristics are measured in fathead minnow and medaka (see Appendix 5A and Appendix 5B);
výsledky analýz údajů, přednostně ve formě tabulek a grafů,
blood samples are collected for determination of vitellogenin in zebrafish and fathead minnow, alternatively head/tail can be collected for the determination of vitellogenin in zebrafish (Appendix 6);
výskyt jakýchkoli neobvyklých reakcí ryb a viditelné účinky vyvolané zkoušenou chemickou látkou.
liver is collected for VTG analysis in medaka (Appendix 6).
POKYNY K INTERPRETACI A PŘIJETÍ VÝSLEDKŮ
TEST ACCEPTANCE CRITERIA
Tento oddíl obsahuje některé aspekty, které je třeba vzít v úvahu při interpretaci výsledků zkoušky pro různé měřené ukazatele.
For the test results to be acceptable the following conditions apply:
K výsledkům zkoušky je třeba přistupovat s opatrností, pokud se zdá, že zkoušená chemická látka způsobuje zjevnou toxicitu nebo ovlivňuje celkový stav zkušebního zvířete.
the mortality in the water (or solvent) controls should not exceed 10 % at the end of the exposure period;
Při stanovování rozmezí zkušebních koncentrací by se mělo dbát na to, aby nebyla překročena maximální tolerovaná koncentrace a byla tak umožněna smysluplná interpretace údajů.
the dissolved oxygen concentration should be at least 60 % of the air saturation value (ASV) throughout the exposure period;
Je důležité, aby existovala alespoň jedna koncentrace, při které se neprojevují žádné příznaky toxických účinků.
the water temperature should not differ by more than ± 1,5 °C between test vessels at any one time during the exposure period and be maintained within a range of 2 °C within the temperature ranges specified for the test species (Appendix 2);
Příznaky onemocnění a příznaky toxických účinků se pečlivě posoudí a zaznamenají.
evidence should be available to demonstrate that the concentrations of the test chemical in solution have been satisfactorily maintained within ± 20 % of the mean measured values.
Je například možné, že tvorba VTG u samiček může být ovlivněna také obecnou toxicitou a toxickými účinky jiného než endokrinního charakteru, např. toxickými účinky na játra.
Normal laboratory equipment and especially the following:
Interpretace účinků však může být podpořena na jiných úrovních expozice, které nejsou zkresleny systémovou toxicitou.
oxygen and pH meters;
Existuje několik aspektů, které je třeba zvážit pro přijetí výsledků zkoušky.
equipment for determination of water hardness and alkalinity;
Obecně vzato by hladiny VTG v kontrolních skupinách samečků a samiček měly být odlišné – u jelečka velkohlavého a dania pruhovaného by se měly lišit přibližně o tři řády a u halančíka japonského přibližně o jeden řád.
adequate apparatus for temperature control and preferably continuous monitoring;
Příklady rozmezí hodnot zjištěných v kontrolních a exponovaných skupinách jsou dostupné ve validačních zprávách (1)(2)(3)(4).
tanks made of chemically inert material and of a suitable capacity in relation to the recommended loading and stocking density (see Appendix 2);
Vysoké hodnoty VTG u samečků v kontrolních skupinách by mohly zpochybnit citlivost zkoušky a její schopnost odhalit slabé agonisty estrogenu.
spawning substrate for fathead minnow and zebrafish, Appendix 4 gives the necessary details;
Nízké hodnoty VTG u samiček v kontrolních skupinách by mohly zpochybnit citlivost zkoušky a její schopnost detekovat inhibitory aromatázy a antagonisty estrogenu.
suitably accurate balance (i.e. accurate to ± 0,5 mg).
Při vypracování tohoto návodu byly použity validační studie.
Any water in which the test species shows suitable long-term survival and growth may be used as test water.
Pokud laboratoř dříve tuto zkoušku neprováděla nebo došlo k podstatným změnám (např. změna rybího kmene nebo dodavatele), lze doporučit provedení studie odborné způsobilosti.
It should be of constant quality during the period of the test.
Doporučuje se použít k tomuto účelu chemické látky pokrývající širší spektrum účinků nebo dopadů na několik ukazatelů zkoušky.
The pH of the water should be within the range 6,5 to 8,5, but during a given test it should be within a range of ± 0,5 pH units.
V praxi se doporučuje, aby každá laboratoř shromáždila své vlastní historické kontrolní údaje pro samečky a samičky v kontrolních skupinách a pro pozitivní kontrolu estrogenního působení chemické látky (např. 17-beta-estradiolu při koncentraci 100 ng/l nebo dobře známého slabého agonisty), jež vede ke zvýšené hodnotě VTG u samečků ryb, pozitivní kontrolu inhibice aromatázy chemické látky (např. fadrozolu nebo prochlorazu při koncentraci 300 μg/l), jež vede ke zvýšené hodnotě VTG u samiček ryb, a pozitivní kontrolu androgenního působení chemické látky (např. 17-beta-trenbolonu při koncentraci 5 μg/l), jež vede k indukci druhotných pohlavních znaků u samiček jelečka velkohlavého a halančíka japonského.
In order to ensure that the dilution water will not unduly influence the test result (for example by complexion of test chemical), samples should be taken at intervals for analysis.
Pro zajištění způsobilosti laboratoře lze všechny tyto údaje porovnat s dostupnými údaji (1)(2)(3).
Measurements of heavy metals (e.g. Cu, Pb, Zn, Hg, Cd, and Ni), major anions and cations (e.g. Ca2+, Mg2+, Na+, K+, Cl-, and SO42-), pesticides (e.g. total organophosphorus and total organochlorine pesticides), total organic carbon and suspended solids should be made, for example, every three months where dilution water is known to be relatively constant in quality.
Obecně lze říci, že měření vitelogeninu se považuje za pozitivní, dojde-li v porovnání s kontrolní skupinou ke statisticky významnému nárůstu VTG u samečků (p < 0,05) nebo ke statisticky významnému poklesu u samiček (p < 0,05) alespoň při nejvyšší koncentraci zkoušené látky a za nepřítomnosti příznaků obecné toxicity.
If water quality has been demonstrated to be constant over at least one year, determinations can be less frequent and intervals extended (e.g. every six months).
Pozitivní výsledek se dále podpoří prokázáním biologicky možné závislosti mezi dávkou a odezvou.
Some chemical characteristics of acceptable dilution water are listed in Appendix 3.
Jak bylo uvedeno výše, pokles hodnoty vitelogeninu nemusí být zcela endokrinního původu;
Test solutions of the chosen concentrations are prepared by dilution of a stock solution.
avšak pozitivní výsledek by měl být obecně interpretován jako důkaz endokrinního působení in vivo a měl by být obvykle podnětem ke krokům za účelem dalšího vyjasnění.
The stock solution should preferably be prepared by simply mixing or agitating the test chemical in dilution water by using mechanical means (e.g. stirring or ultrasonication).
Environmental Health Perspectives;
Saturation columns (solubility columns) can be used for achieving a suitable concentrated stock solution.
látka nebo směs
For difficult test chemicals, a solvent may be technically the best solution;
variační koeficient.
the OECD Guidance Document on aquatic toxicity testing of difficult substances and mixtures should be consulted (22).
enzymová imunosorpční analýza.
The choice of solvent will be determined by the chemical properties of the chemical.
Velikost násady
The OECD Guidance Document recommends a maximum of 100 μl/l, which should be observed.
živá hmotnost ryb na jednotku objemu vody.
However a recent review (23) highlighted additional concerns when using solvents for endocrine activity testing.
Hustota obsádky
Therefore it is recommended that the solvent concentration, if necessary, is minimised wherever technically feasible (dependent on the physical-chemical properties of the test chemical).
počet ryb na jednotku objemu vody.
A flow-through test system will be used.
VTG (Vitelogenin)
Such a system continually dispenses and dilutes a stock solution of the test chemical (e.g. metering pump, proportional diluter, saturator system) in order to deliver a series of concentrations to the test chambers.
fosfolipoglykoprotein, prekurzor proteinů vaječného žloutku, který se obvykle vyskytuje u sexuálně aktivních samiček všech vejcorodých druhů.
The flow rates of stock solutions and dilution water should be checked at intervals, preferably daily, during the test and should not vary by more than 10 % throughout the test.
Osa HPG
Care should be taken to avoid the use of low-grade plastic tubing or other materials that may contain biologically active chemicals.
hypothalamo-hypofýzo-gonadální osa.
When selecting the material for the flow-through system, possible adsorption of the test chemical to this material should be considered.
MTC
Holding of fish
maximální tolerovaná koncentrace;
Test fish should be selected from a laboratory population, preferably from a single stock, which has been acclimated for at least two weeks prior to the test under conditions of water quality and illumination similar to those used in the test.
představuje přibližně 10 % mediánu letální koncentrace (LC50).
It is important that the loading rate and stocking density (for definitions, see Appendix 1) be appropriate for the test species used (see Appendix 2).
Experimentální podmínky pro screeningovou zkoušku endokrinního působení na rybách
Following a 48-hour settling-in period, mortalities are recorded and the following criteria applied:
Doporučené druhy
mortalities of greater than 10 % of population in seven days:
Jeleček velkohlavý
reject the entire batch;
Danio pruhované
mortalities of between 5 % and 10 % of population:
Typ zkoušky
acclimation for seven additional days;
průtoková
if more than 5 % mortality during second seven days, reject the entire batch;
Teplota vody
mortalities of less than 5 % of population in seven days:
Kvalita osvětlení
accept the batch
Fluorescenční zářivky (širokospektrální)
Fish should not receive treatment for disease during the acclimation period, in the pre-exposure period, or during the exposure period.
10–20 μE/m2/s, 540–1000 luxů nebo 50–100 ft-c (okolní laboratorní hodnoty)
Pre-exposure and selection of fish
Fotoperioda (přechody ve formě svítání/stmívání jsou volitelné, nejsou však považovány za nezbytné)
A one-week pre-exposure period is recommended, with animals placed in vessels similar to the actual test.
16 h světlo, 8 h tma
Fish should be fed ad libitum throughout the holding period and during the exposure phase.
12–16 h světlo, 12–8 h tma
The exposure phase is started with sexually dimorphic adult fish from a laboratory supply of reproductively mature animals (e.g. with clear secondary sexual characteristics visible as far as fathead minnow and medaka are concerned), and actively spawning.
< 5 g na l
For general guidance only (and not to be considered in isolation from observing the actual reproductive status of a given batch of fish), fathead minnows should be approximately 20 (± 2) weeks of age, assuming they have been cultured at 25 ± 2 °C throughout their lifespan.
Velikost zkušební komory
Japanese medaka should be approximately 16 (± 2) weeks of age, assuming they have been cultured at 25 ± 2 °C throughout their lifespan.
10 l (minimálně)
Zebrafish should be approximately 16 (± 2) weeks of age, assuming they have been cultured at 26 ± 2 °C throughout their lifespan.
2 l (minimálně)
TEST DESIGN
5 l (minimálně)
Three concentrations of the test chemical, one control (water) and, if needed, one solvent control are used.
Objem zkušebního roztoku
The data may be analysed in order to determine statistically significant differences between treatment and control responses.
8 l (minimálně)
These analyses will inform whether further longer term testing for adverse effects (namely, survival, development, growth and reproduction) is required for the chemical, rather than for use in risk assessment (24).
1,5 l (minimálně)
For zebrafish and medaka, on day 21 of the experiment, males and females from each treatment level (5 males and 5 females in each of the two replicates) and from the control(s) are sampled for the measurement of vitellogenin and secondary sex characteristics, where applicable.
4 l (minimálně)
For fathead minnow, on day 21 of exposure, males and females (2 males and 4 females in each of the four replicates) and from the control(s) are sampled for the measurement of vitellogenin and secondary sex characteristics.
Výměny objemu zkušebního roztoku
For the purposes of this test, the highest test concentration should be set by the maximum tolerated concentration (MTC) determined from a range finder or from other toxicity data, or 10 mg/l, or the maximum solubility in water, whichever is lowest.
Nejméně 6krát denně
The MTC is defined as the highest test concentration of the chemical which results in less than 10 % mortality.
Nejméně 5krát denně
Using this approach assumes that there are existing empirical acute toxicity data or other toxicity data from which the MTC can be estimated.
Viz odstavec 20
Estimating the MTC can be inexact and typically requires some professional judgment.
1,5 ± 20 %
Three test concentrations, spaced by a constant factor not exceeding 10, and a dilution-water control (and solvent control if necessary) are required.
Samečci:
A range of spacing factors between 3,2 and 10 is recommended.
2,5 ± 20 %
Selection and weighing of test fish
Samičky:
It is important to minimise variation in weight of the fish at the beginning of the assay.
0,35 ± 20 %
Suitable size ranges for the different species recommended for use in this test are given in Appendix 2.
0,65 ± 20 %
For the whole batch of fish used in the test, the range in individual weights for male and female fish at the start of the test should be kept, if possible, within ± 20 % of the arithmetic mean weight of the same sex.
0,4 ± 20 %
It is recommended to weigh a subsample of the fish stock before the test in order to estimate the mean weight.
Počet ryb v každé zkušební nádrži
Conditions of exposure
6 (2 samečci a 4 samičky)
The test duration is 21 days, following a pre-exposure period.
10 (5 samečků a 5 samiček)
The recommended pre-exposure period is one week.
Počet expozic
Fish should be fed ad libitum with an appropriate food (Appendix 2) at a sufficient rate to maintain body condition.
= 3 (plus příslušné kontrolní skupiny)
Care should be taken to avoid microbial growth and water turbidity.
Počet nádrží pro každou expozici
As a general guidance, the daily ration may be divided into two or three equal portions for multiple feeds per day, separated by at least three hours between each feed.
minimálně 4
A single larger ration is acceptable particularly for weekends.
minimálně 2
Food should be withheld from the fish for 12 hours prior to sampling/necropsy.
Počet ryb pro každou zkušební koncentraci
Fish food should be evaluated for the presence of contaminants such as organochlorine pesticides, polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs), polychlorinated biphenyls (PCBs).
16 dospělých samiček a 8 samečků (4 samičky a 2 samečci v každé duplikátní nádrži)
Food with an elevated level of phytoestrogens that would compromise the response of the assay to known oestrogen agonist (e.g. 17-beta estradiol) should be avoided.
10 dospělých samiček a 10 samečků (5 samiček a 5 samečků v každé duplikátní nádrži)
Uneaten food and faecal material should be removed from the test vessels at least twice weekly, e.g. by carefully cleaning the bottom of each tank using a siphon.
Krmný režim
The photoperiod and water temperature should be appropriate for the test species (see Appendix 2).
Živé nebo zmrazené dospělé nebo larvy (nauplia) žábronožky solné dvakrát nebo třikrát denně (ad libitum), komerčně dostupná potrava nebo kombinace výše uvedeného
Frequency of analytical determinations and measurements
Larvy (nauplia) žábronožky solné dvakrát nebo třikrát denně (ad libitum), komerčně dostupná potrava nebo kombinace výše uvedeného
Prior to initiation of the exposure period, proper function of the chemical delivery system should be ensured.
Žádné, dokud koncentrace rozpuštěného kyslíku neklesne pod 60 % nasycení vzduchem
All analytical methods needed should be established, including sufficient knowledge on the chemical stability in the test system.
Čistá povrchová, studniční nebo rekonstituovaná voda nebo odchlorovaná vodovodní voda
During the test, the concentrations of the test chemical are determined at regular intervals, as follows:
Předexpoziční období
the flow rates of diluent and toxicant stock solution should be checked preferably daily but as a minimum twice per week, and should not vary by more than 10 % throughout the test.
doporučeno 7 dnů
It is recommended that the actual test chemical concentrations be measured in all vessels at the start of the test and at weekly intervals thereafter.
Trvání expozice chemické látce
It is recommended that results be based on measured concentrations.
Biologické ukazatele
However, if concentration of the test chemical in solution has been satisfactorily maintained within ± 20 % of the nominal concentration throughout the test, then the results can either be based on nominal or measured values.
přežití
Samples may need to be filtered (e.g., using a 0,45 μm pore size) or centrifuged.
chování
If needed, then centrifugation is the recommended procedure.
druhotné pohlavní znaky
However, if the test material does not adsorb to filters, filtration may also be acceptable.
Přijatelnost zkoušky
During the test, dissolved oxygen, temperature, and pH should be measured in all test vessels at least once per week.
Obsah rozpuštěného kyslíku > 60 % nasycení;
Total hardness and alkalinity should be measured in the controls and one vessel at the highest concentration at least once per week.
střední teplota 25 ± 2 °C;
Temperature should preferably be monitored continuously in at least one test vessel.
90 % přežití ryb v kontrolních skupinách;
A number of general (e.g. survival) and core biological responses (e.g. vitellogenin levels) are assessed over the course of the assay or at termination of the assay.
naměřené zkušební koncentrace v rozmezí 20 % středních naměřených hodnot pro každou úroveň expozice.
Measurement and evaluation of these endpoints and their utility are described below.
střední teplota 24 ± 2 °C;
Survival
střední teplota 26 ± 2 °C;
Fish should be examined daily during the test period and any mortality should be recorded and the dead fish removed as soon as possible.
Některé chemické charakteristiky přijatelné ředicí vody
Dead fish should not be replaced in either the control or treatment vessels.
< 20 mg/l
Sex of fish that die during the test should be determined by macroscopic evaluation of the gonads.
< 2 mg/l
Behaviour and appearance
Celkový obsah organofosforových pesticidů
Any abnormal behaviour (relative to controls) should be noted;
Dodatek 4A
this might include signs of general toxicity including hyperventilation, uncoordinated swimming, loss of equilibrium, and atypical quiescence or feeding.
Třecí podklad pro danio pruhované
Additionally external abnormalities (such as haemorrhage, discoloration) should be noted.
Vytírací rošt
Such signs of toxicity should be considered carefully during data interpretation since they may indicate concentrations at which biomarkers of endocrine activity are not reliable.
celoskleněná miska na nástroje, např. o rozměrech (d × š × v) 22 × 15 × 5,5 cm, pokrytá snímatelnou drátěnou mřížkou z nerezové oceli (šířka otvorů 2 mm).
Such behavioural observations may also provide useful qualitative information to inform potential future fish testing requirements.
Mřížka by měla pokrývat misku na nástroje v místech pod úrovní okraje.
For example, territorial aggressiveness in normal males or masculinised females has been observed in fathead minnows under androgenic exposure;
Na mřížku se připevní třecí podklad.
in zebrafish, the characteristic mating and spawning behaviour after the dawn onset of light is reduced or hindered by oestrogenic or anti-androgenic exposure.
Měl by vytvořit strukturu, do které budou ryby vplouvat.
Because some aspects of appearance (primarily colour) can change quickly with handling, it is important that qualitative observations be made prior to removal of animals from the test system.
Vhodné jsou například umělé akvarijní rostliny vyrobené ze zeleného plastového materiálu (poznámka: je třeba vzít v potaz možnou adsorpci zkoušené chemické látky na plastový materiál).
Experience to date with fathead minnows suggests that some endocrine active chemicals may initially induce changes in the following external characteristics:
Plastový materiál se dostatečně dlouho proplachuje v dostatečném objemu horké vody, aby se zajistilo, že se do zkušební vody nedostanou žádné chemické látky.
body colour (light or dark), coloration patterns (presence of vertical bands), and body shape (head and pectoral region).
Při použití skleněných materiálů je třeba zajistit, aby se ryby při prudkých pohybech neporanily a netísnily.
Therefore observations of physical appearance of the fish should be made over the course of the test, and at conclusion of the study
Vzdálenost mezi roštem a skleněnými tabulemi by měla být alespoň 3 cm, aby se zajistilo, že ke tření nebude docházet mimo rošt.
Humane killing of fish
Jikry vytřené do roštu propadávají mřížkou a 45–60 minut od začátku osvětlení je lze odebírat.
At day 21, i.e. at termination of the exposure, the fish should be euthanized with appropriate amounts of Tricaine (Tricaine methane sulfonate, Metacain, MS-222 (CAS 886-86-2), 100-500 mg/l buffered with 300 mg/l NaHCO3 (sodium bicarbonate, CAS 144-55-8) to reduce mucous membrane irritation; blood or tissue is then sampled for vitellogenin determination, as explained in the Vitellogenin section.
Průsvitné jikry nejsou přilnavé a lze je snadno spočítat pomocí bočního světla.
Observation of secondary sex characteristics
Při použití pěti samiček v každé nádrži se počet jiker do 20 za den považuje za nízký, do 100 za den za středně vysoký a více než 100 jiker za den za vysoký.
Some endocrine active chemicals may induce changes in specialised secondary sex characteristics (number of nuptial tubercles in male fathead minnow, papillary processes in male medaka).