natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Před začátkem fáze vylučování by se ryby měly přemístit do čistých nádrží.
Fish should not receive treatment for disease in the two weeks preceding the test, or during the test.
Odběr vzorků a příprava vzorků
PERFORMANCE OF THE TEST
Vzorky vody pro analýzy by se měly odebírat například odsáváním potrubím z inertního materiálu ze středu zkušební nádrže.
Preliminary test
Biologicky nedostupná frakce zkoušené látky se nedá často oddělit od biologicky dostupné frakce ani filtrací, ani odstředěním.
It may be useful to conduct a preliminary experiment in order to optimise the test conditions of the definitive test, e.g. selection of test substance concentration(s), duration of the uptake and depuration phases, or to determine whether a full test need be conducted.
Použije-li se separační metoda, mělo by se v závěrečné zprávě vždy uvést odůvodnění nebo validace této separační metody vzhledem k obtížím s biologickou dostupností.
The design of the preliminary test should be such as to obtain the information required.
Zejména v případě vysoce hydrofobních látek (tj. látek s hodnotou log KOW > 5) (12) (26), kdy by mohlo dojít k adsorpci na filtrovou matrici nebo na odstřeďovací nádoby, by vzorky neměly být takto zpracovávány.
It can be considered if a minimised test may be sufficient to derive a BCF, or if a full study is needed (cf. paragraphs 83-95 on the minimised test).
Namísto toho je třeba přijmout opatření pro to, aby byly nádrže udržovány co nejčistší (srov. odstavec 46), a obsah organického uhlíku by měl být pravidelně monitorován jak během fáze příjmu, tak během fáze vylučování.(srov. odstavec 53).
Conditions of Exposure
Aby se zamezilo možným problémům se sníženou biologickou dostupností, mohou být v případě špatně rozpustných a vysoce hydrofobních látek použity pro odběr vzorků metody mikroextrakce pevné fáze.
Duration of uptake phase
Ryba určená pro odběr vzorků by se měla okamžitě usmrtit nejvhodnější humánní metodou (při měření celých ryb by neměly být prováděny žádné další postupy než omytí vodou (srov. odstavec 28) a důkladné osušení).
A prediction of the duration of the uptake phase can be obtained from practical experience (e.g. from a previous study or an accumulation study on a structurally related substance) or from certain empirical relationships utilising knowledge of either the aqueous solubility or the octanol/water partition coefficient of the test substance (provided that uptake follows first order kinetics, cf. Appendix 5).
Ryba se zváží a změří se celková délka [35].
The uptake phase should be run for 28 days unless it can be demonstrated that steady-state has been reached earlier (see Appendix 1, definitions and units).
U každého jedince by naměřená hmotnost a délka měly být vztaženy ke koncentrací analyzované látky (a případně k obsahu lipidů), například tak, že se každé rybě ve vzorku přidělí jedinečný identifikační kód.
A steady-state is reached in the plot of test substance in fish (Cf) against time when the curve becomes parallel to the time axis and three successive analyses of Cf made on samples taken at intervals of at least two days are within ± 20 % of each other, and there is no significant increase of Cf in time between the first a last successive analysis.
Ryby a voda se pokud možno analyzují ihned po odběru s cílem předejít degradaci nebo jiným ztrátám a vypočítat přibližné rychlostní konstanty příjmu a vylučování ještě v průběhu zkoušky.
When pooled samples are analysed, at least four successive analyses are required.
Okamžitá analýza rovněž zabrání opožděnému stanovení plató (rovnovážného stavu) při jeho dosažení.
For test substances which are taken up slowly the intervals would more appropriately be seven days.
Neprovádí-li se analýza okamžitě, měly by se vzorky uchovat vhodným způsobem.
If steady-state has not been reached by 28 days, either the BCF is calculated using only the kinetic approach, which is not reliant on steady-state being reached, or the uptake phase can be extended, taking further measurements, until steady-state is reached or for 60 days, whichever is shorter.
Před zahájením studie je třeba zjistit informace o řádné metodě uchovávání s ohledem na danou zkoušenou látku – například hluboké zmrazení, udržování při 4 °C, vyluhování atd. Délka uchovávání by měla být zvolena tak, aby se zajistilo, že látka během uchovávání nedegraduje.
Also, the test substance concentration in the fish at the end of the uptake phase needs to be sufficiently high to ensure a reliable estimation of k2 from the depuration phase.
Kvalita analytické metody
If no significant uptake is shown after 28 days, the test can be stopped.
Vzhledem k tomu, že celý postup je určen hlavně správností, přesností a citlivostí analytické metody použité pro analýzu zkoušené látky, je třeba experimentálně kontrolovat, že správnost, přesnost a reprodukovatelnost analýzy látky a rovněž výtěžek zkoušené látky jak z vody, tak ze vzorků ryb jsou pro danou analytickou metodu dostatečné.
Duration of the depuration phase
To by mělo být součástí předběžných zkoušek.
For substances following first order kinetics, a period of half the duration of the uptake phase is usually sufficient for an appropriate (e.g. 95 %) reduction in the body burden of the substance to occur (cf. Appendix 5 for explanation of the estimation).
Kontroluje se také, zda se zkoušená látka nevyskytuje v použité ředicí vodě.
If the time required to reach 95 % loss is impractically long, exceeding for example twice the normal duration of the uptake phase (i.e. more than 56 days) a shorter period may be used (e.g. until the concentration of test substance is less than 10 % of steady-state concentration).
Hodnoty koncentrace zkoušené látky ve vodě a v rybách získané ve zkoušce se podle potřeby korigují na výtěžky a hodnoty pozadí v kontrolních experimentech.
However, longer depuration periods may be necessary for substances having more complex patterns of uptake and depuration than are represented by a one-compartment fish model that yields first order kinetics.
Vzorky ryb a vody by se měly zpracovávat tak, aby se minimalizovala kontaminace a ztráty (např. v důsledku adsorpce odběrným zařízením).
If such complex patterns are observed and/or anticipated, it is advised to seek advice from a biostatistician and/or pharmacokineticist to ensure a proper test set-up.
Analýza vzorků ryb
As the depuration period is extended, numbers of fish to sample may become limiting and growth differences between fish can influence the results.
Je-li ve zkoušce použit materiál značený radioizotopy, je možné provést analýzu na celkovou aktivitu (tj. pro mateřskou látku i s metabolity) nebo lze provést separaci, tak aby mohla být mateřská látka analyzována samostatně.
The period will also be governed by the period over which the concentration of the test substance in the fish remains above the analytical limit of quantification.
Má-li být hodnota BCF založena na mateřské látce, měly by být charakterizovány hlavní metabolity, a to minimálně na konci fáze příjmu (srov. odstavec 6).
Numbers of test fish
Hlavní metabolity jsou ty metabolity, které představují ≥ 10 % celkového množství reziduí v tkáních ryb, metabolity, které představují ≥ 5 % ve dvou po sobě jsoucích odběrech vzorků, metabolity, které vykazují rostoucí úroveň v průběhu celé fáze příjmu a metabolity se známými toxikologickými obavami.
Select the numbers of fish per test concentration such that a minimum of four fish are available at each sampling point.
Jsou-li produkty rozkladu představující ≥ 10 % celkových radioizotopově značených reziduí v rybách identifikovány a kvantifikovány, doporučuje se také identifikovat a kvantifikovat produkty rozkladu ve zkušební vodě.
Fish should only be pooled if analysis of single fish is not feasible.
Pokud by to nebylo proveditelné, je třeba to ve zprávě odůvodnit.
If higher precision in curve fitting (and derived parameters) is intended or if metabolism studies are required (e.g. to distinguish between metabolites and parent substance when using radiolabelled test substances), more fish per sampling point will be necessary.
Koncentrace zkoušené látky by měla být obvykle stanovena pro každou jednotlivou zváženou rybu.
The lipid content should be determined on the same biological material as is used to determine the concentration of the test substance.
Není-li to možné, mohou být vzorky při každém odběru sdružovány, avšak sdružování omezuje statistické postupy, které lze na údaje aplikovat, takže by měl být do zkoušky nasazen dostatečný počet ryb vyhovující požadovanému sdružování, statistickému postupu a statistické váze.
Should this not be feasible, additional fish may be needed (cf. paragraphs 56 and 57).
Jako úvod k příslušným postupům sdružování je možno použít odkazy (27) a (28) v seznamu literatury.
If adult (i.e. sexually mature) fish are used, they should not be in a spawning state or recently spent (i.e. already spawned) either before or during the test.
Hodnota BCF by kromě hodnoty odvozené ze studie (srov. odstavec 21) měla být vyjádřena jako hodnota normalizovaná na ryby s 5 % obsahem lipidů (na základě živé hmotnosti), pokud nelze prokázat, že zkoušená látka se neakumuluje hlavně v lipidech.
It should also be reported whether male or female, or both are used in the experiment.
Je-li to možné, měl by být obsah lipidů v rybách stanoven při každém odběru a pokud možno v extraktu připraveném pro analýzu zkoušené látky, neboť lipidy musí být často před chromatografickou analýzou odstraněny.
If both sexes are used, differences in growth and lipid content between sexes should be documented to be non-significant before the start of the exposure, in particular if it is anticipated that pooling of male and female fish will be necessary to ensure detectable substance concentrations and/or lipid content.
Analýza zkoušené látky však často vyžaduje zvláštní extrakční postupy, které by mohly být v rozporu se zkušebními metodami ke stanovení lipidů.
In any one test, select fish of similar weight such that the smallest are no smaller than two-thirds of the weight of the largest.
V tomto případě (dokud nebudou k dispozici vhodné nedestruktivní instrumentální metody) se doporučuje pro stanovení obsahu lipidů v rybách použít jinou strategii (srov. odstavec 56).
All should be of the same year-class and come from the same source.
Pro stanovení obsahu lipidů by měly být použity vhodné metody (20).
Since weight and age of a fish may have a significant effect on BCF values (12) these details should be recorded accurately.
Jako standardní metodu lze doporučit extrakční metodu za pomoci chloroformu/methanolu (29), ale jako alternativní metoda se doporučuje Smedesova metoda (31).
It is recommended that a sub-sample of the stock of fish is weighed shortly before the start of the test in order to estimate the mean weight (cf. paragraph 61).
Tato metoda se vyznačuje srovnatelnou účinností extrakce, vysokou přesností, použitím méně toxických organických rozpouštědel a snadným provedením.
Loading
Lze použít i jiné metody, jejichž přesnost je srovnatelná s doporučenými metodami, je-li to náležitě odůvodněno.
High water-to-fish ratios should be used in order to minimise the reduction in the concentration of the test compound in water caused by the addition of the fish at the start of the test and also to avoid decreases in dissolved oxygen concentration.
Je důležité použitou metodu podrobně popsat.
It is important that the loading rate is appropriate for the test species used.
Měření růstu ryb
In any case, a fish-to-water loading rate of 0,1-1,0 g of fish (wet weight) per litre of water per day is normally recommended.
Na začátku zkoušky je třeba jednotlivě zvážit pět až deset ryb z kmenové populace a změřit jejich celkovou délku.
Higher fish-to-water loading rates can be used if it is shown that the required concentration of test substance can be maintained within ± 20 % limits, and that the concentration of dissolved oxygen does not fall below 60 % saturation (cf. paragraph 24).
Mohou to být tytéž ryby, které se použijí na analýzu lipidů (srov. odstavec 56).
In choosing appropriate loading regimes, take into account the normal habitat of the fish species.
Před provedením analýzy chemické látky nebo lipidů by měla být stanovena hmotnost a délka ryb použitých pro každý odběr vzorků jak ze zkušební skupiny, tak z kontrolního experimentu.
For example, bottom-living fish may demand a larger bottom area of the aquarium for the same volume of water compared to pelagic fish species.
Měření těchto ryb určených pro odběr vzorků lze použít k odhadu hmotnosti a délky ryb, které zůstávají ve zkušební a kontrolní nádrži (srov. odstavec 45).
Feeding
Zpracování výsledků
During the acclimation and test periods, feed an appropriate diet of known lipid and total protein content to the fish in an amount sufficient to keep them in a healthy condition and to maintain body weight (some growth is allowed).
Křivku příjmu zkoušené látky je třeba sestrojit vynesením koncentrace látky v/na rybách (nebo ve specifikovaných tkáních) v průběhu fáze příjmu proti času v lineárním měřítku.
Feed daily throughout the acclimation and test periods at a set level depending on the species used, experimental conditions and calorific value of the food (for example for rainbow trout between approximately 1 to 2 % of body weight per day).
Dosáhla-li křivka plató, tj. pokud začíná být rovnoběžná s časovou osou, vypočítá se hodnota BCF v rovnovážném stavu (BCFSS) z poměru:
The feeding rate should be selected such that fast growth and large increase of lipid content are avoided.
rovnovstřední
To maintain the same feeding rate, the amount of feed should be re-calculated as appropriate, for example once per week.
Vývoj hodnoty Cf může být ovlivněn růstem ryb (srov. odstavce 72 a 73).
For this calculation, the weight of the fish in each test chamber can be estimated from the weight of the fish sampled most recently in that chamber.
Střední hodnotu zkušební koncentrace (Cw) ovlivňuje kolísání v čase.
Do not weigh the fish remaining in the chamber.
Lze očekávat, že časově vážená průměrná koncentrace je pro studie bioakumulace relevantnější a přesnější, i když je kolísání v rámci příslušného rozpětí platnosti (srov. odstavec 24).
Uneaten food and faeces should be siphoned daily from the test chambers shortly after feeding (30 minutes to one hour).
Časově váženou průměrnou koncentraci ve vodě lze vypočítat podle oddílu 1 dodatku 5.
The chambers should be kept as clean as possible throughout the test to keep the concentration of organic matter as low as possible (cf. paragraph 29), since the presence of organic carbon may limit the bioavailability of the test substance (12).
Kinetický biokoncentrační faktor (BCFK) by se měl stanovit jako poměr k1/k2, dvou kinetických rychlostních konstant prvního řádu.
Since many feeds are derived from fishmeal, it should be ensured that the feed will not influence the test results or induce adverse effects, e.g. by containing (traces of) pesticides, heavy metals and/or the test substance itself.
Rychlostní konstanty k1 a k2 a hodnotu BCFK je možno odvodit tak, že se křivkou současně prokládají údaje jak o fázi příjmu, tak o fázi vylučování.
Light and temperature
Alternativně lze hodnotu k1 a k2 stanovit postupně (popis a porovnání těchto metod – viz dodatek 5).
A 12- to 16-hour photoperiod is recommended and the temperature (± 2 °C) should be appropriate for the test species (cf. Appendix 3).
Rychlostní konstantu vylučování (k2) bude možná nutné upravit o zředění růstem (srov. odstavce 72 a 73).
The type and characteristics of illumination should be known.
Není-li křivka příjmu a/nebo křivka vylučování zjevně křivkou prvního řádu, měly by být použity složitější modely (viz odkazy v příloze 5) a měl by být konzultován biostatistik a/nebo farmakokinetik.
Caution should be given to the possible phototransformation of the test substance under the irradiation conditions of the study.
Údaje o hmotnosti/délce ryb
Appropriate illumination should be used avoiding exposure of fish to unnatural photoproducts.
V tabulce se uvedou živé hmotnosti a celkové délky jednotlivých ryb ve všech intervalech odběru vzorků zvlášť pro zkušební a pro kontrolní skupinu během fáze příjmu (včetně kmenové populace na začátku příjmu) a během fáze vylučování.
In some cases it may be appropriate to use a filter to screen out UV irradiation below 290 nm.
U každého jedince by naměřená hmotnost a délka měly být vztaženy ke koncentraci analyzované chemické látky, např. tak, že se každé rybě ve vzorku přidělí jedinečný identifikační kód.
Test concentrations
Preferovaným měřítkem růstu pro účely úpravy hodnot kinetického BCF o zředění růstem je hmotnost (o metodě používané k úpravě údajů o zředění růstem viz odstavec 73 a dodatek 5).
The test was originally designed for non-polar organic substances.
Úprava o zředění růstem a normalizace lipidů
For this type of substance, the exposure of fish to a single concentration is expected to be sufficient, as no concentration effects are expected, although two concentrations may be required for the relevant regulatory framework.
Růst ryb během fáze vylučování může snížit naměřené koncentrace chemické látky v rybách s tím důsledkem, že celková rychlostní konstanta vylučování (k2) je větší než ta, která by vyplynula pouze z procesů odstranění (např. dýchání, metabolismus, vyplavením).
If substances outside this domain are tested, or other indications of possible concentration dependence are known, the test should be run with two or more concentrations.
Kinetické biokoncentrační faktory by měly být upraveny o zředění růstem.
If only one concentration is tested, justification for the use of one concentration should be given (cf. paragraph 79).
Také hodnota BCFSS bude ovlivněna růstem, ale pro úpravu BCFSS o růst není k dispozici žádný schválený postup.
Also, the tested concentration should be as low as is practical or technically possible (i.e. not close to the solubility limit).
V případech výrazného růstu by měla být odvozena také hodnota BCFK upravená o růst (BCFKg), neboť může být relevantnějším měřítkem biokoncentračního faktoru.
In some cases it can be anticipated that the bioconcentration of a substance is dependent on the water concentration (e.g. for metals, where the uptake in fish may be at least partly regulated).
Obsah lipidů v zkušebních rybách (který je úzce spojen s bioakumulací hydrofobních látek) může v praxi výrazně kolísat, takže je nezbytná normalizace na stanovený obsah lipidů v rybách (5 % hmot.), aby bylo možné smysluplně vyjádřit jak kinetické biokoncentrační faktory, tak biokoncentrační faktory v rovnovážném stavu, pokud není možné namítnout, že zkoušená látka se neakumuluje především v lipidech (např. některé perfluorované látky se mohou vázat na proteiny).
In such a case it is necessary that at least two, but preferably more, concentrations are tested (cf. paragraph 49) which are environmentally relevant.
Rovnice a příklady těchto výpočtů lze najít v dodatku 5.
Also for substances where the concentrations tested have to be near the solubility limit for practical reasons, testing at least two concentrations is recommended, because this can give insight into the reliability of the exposure concentrations.
Biokoncentrační faktor upravený o růst se pak vypočítá dělením rychlostní konstanty příjmu (k1) rychlostní konstantou vylučování upravenou o růst (k2g) (srov. dodatek 5).
The highest permissible test concentration can also be determined by dividing the acute 96 h LC50 by an appropriate acute/ chronic ratio (e.g. appropriate ratios for some substances are about three, but a few are above 100).
V některých případech lze tento přístup zpochybnit.
If a second concentration is used, it should differ from the one above by a factor of ten.
Například u velmi pomalu se vylučujících látek zkoušených na rychle rostoucích rybách může být odvozená hodnota k2g velmi malá a chyba ve dvou rychlostních konstantách, které se používají pro její odvození, se tak stává kritickou a v některých případech může být odhad hodnoty kg větší než hodnota k2.
If this is not possible because of the toxicity criterion (that limits the upper test concentration) and the analytical limit (that limits the lower test concentration), a lower factor than ten can be used and use of radiolabelled test substance (of the highest purity, e.g. preferably > 98 %) should be considered.
Alternativní přístup, který obchází nutnost úpravy o zředění růstem, zahrnuje použití údajů o hmotnosti vylučování zkoušené látky na každou rybu (základem je celá ryba), a nikoli obvyklých údajů o hmotnosti zkoušené látky na jednotku hmotnosti ryby (koncentraci).
Care should be taken that no concentration used is above the solubility limit of the test substance in the test media.
Toho lze snadno dosáhnout, neboť zkoušky podle této metody by měly spojovat naměřené koncentrace v tkáních s hmotností jednotlivých ryb.
One dilution water control or if relevant (cf. paragraphs 30 and 31), one control containing the solvent should be run in addition to the test series.
Jednoduchý postup, jak to provést, je uveden v dodatku 5.
Frequency of Water Quality Measurements
Upozorňujeme, že hodnota k2 by přesto měla být ve zprávě uvedena, i když se použije tento alternativní přístup.
During the test, dissolved oxygen, TOC, pH and temperature should be measured in all test and control vessels.
Měl by rovněž být uveden kinetický biokoncentrační faktor a biokoncentrační faktor v rovnovážném stavu ve vztahu k standardnímu 5 % hmot. obsahu lipidů v rybách, pokud není možné namítnout, že zkoušená látka se neakumuluje především v lipidech.
Total hardness and salinity (if relevant) should be measured in the control(s) and one vessel.
Údaje o koncentraci v rybách, nebo hodnoty BCF, se normalizují podle poměru mezi 5 % obsahem lipidů a skutečnou (individuální) střední hodnotou obsahu lipidů (v % živé hmotnosti) (srov. dodatek 5).
If two or more concentrations are tested, measure these parameters at the higher (or highest) concentration.
Jestliže byly analýzy chemické látky a lipidů prováděny na týchž rybách, měly by být normalizované údaje o lipidech jednotlivých ryb použity pro výpočet BCF s normalizovanými lipidy.
As a minimum, dissolved oxygen and salinity (if relevant) should be measured three times — at the beginning, around the middle and end of the uptake period — and once a week in the depuration period.
Alternativně, je-li růst kontrolních a exponovaných ryb podobný, může být pro úpravu o lipidy použít pouze obsah lipidů v rybách z kontrolního experimentu (srov. odstavec 56).
TOC should be measured at the beginning of the test (24 h and 48 h prior to test initiation of uptake phase) before addition of the fish and at least once a week during both uptake and depuration phases.
Metoda pro výpočet BCF s normalizovanými lipidy je popsána v dodatku 5.
Temperature should be measured and recorded daily, pH at the beginning and end of each period and hardness once each test.
Interpretace výsledků
Temperature should preferably be monitored continuously in at least one vessel.
Pokud se naměřené koncentrace zkoušených roztoků pohybují na úrovních blízkých mezi detekce analytické metody, je nutno výsledky interpretovat s opatrností.
Sampling and Analysis of Fish and Water
Aby se vyloučily toxické účinky, průměrný růst ve zkušební i v kontrolní skupině by se v zásadě neměl výrazně lišit.
Fish and water sampling schedule
Rychlostní konstanty růstu nebo křivky růstu v obou skupinách by se měly porovnávat vhodným postupem [36].Jasně vymezené křivky příjmu a úbytku jsou ukazatelem dobré kvality údajů o biokoncentraci.
Water should be sampled from the test chambers for the determination of test substance concentration before addition of the fish and during both uptake and depuration phases.
Pokud jde o rychlostní konstanty, aby je bylo možno považovat za spolehlivé, měl by výsledek testu dobré shody pro model bioakumulace být v souladu s rozdělením χ5 (tj. nízké procento chyb měření (32)) (srov. dodatek 5).
The water should be sampled the before feeding, at the same time as the fish sampling.
Je-li použito více než jedna zkušební koncentrace, rozdíl konstant příjmu/vylučování mezi těmito zkušebními koncentracemi by měl být nižší než 20 % [37].
More frequent sampling may be useful to ensure stable concentrations after introduction of the fish.