natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Během zkoušky se koncentrace zkoušené látky stanovují v pravidelných intervalech následujícím způsobem: průtok zásobních roztoků toxické látky a ředicí vody se během zkoušky kontroluje nejlépe denně, avšak minimálně dvakrát týdně, a neměl by se v průběhu zkoušky měnit o více než 10 %.
The response is an integer, giving the test day on which the indicated observation is observed for a given replicate tank.
Doporučuje se na počátku zkoušky a poté v týdenních intervalech měřit skutečné koncentrace zkoušené chemické látky ve všech nádržích.
The range of values is generally very limited and there are often high proportions of tied values, e.g. the same first day of hatch is observed in all control replicates and, perhaps in one or two low test concentrations.
Doporučuje se zakládat výsledky na naměřených koncentracích.
Parametric tests such as Williams and Dunnett are not appropriate for such data.
Udržela-li se však koncentrace zkoušené chemické látky v roztoku během celé zkoušky uspokojivě v rozmezí ± 20 % jmenovité koncentrace, lze výsledky zakládat na jmenovitých nebo změřených hodnotách.
Unless there is evidence on serious non-monotonicity, the step-down Jonckheere-Terpstra test is very powerful for detecting effects of the test chemical.
Může být nezbytné vzorky filtrovat (např. přes filtr s průměrem pórů 0,45 μm) nebo je odstředit.
Otherwise, Dunn's test can be used.
Bude-li toho zapotřebí, doporučuje se odstřeďování.
Larval Abnormalities
Neadsorbuje-li se zkoušená látka na filtry, je filtrace přijatelná.
The response is the count of larvae found to be abnormal in some way.
V celém průběhu zkoušky nebo při jejím ukončení se posuzuje počet obecných reakcí (např. přežití) a biologických reakcí (např. hladiny VTG).
This response is frequently of low incidence and has some of the same problems as first day of hatch, as well as sometimes exhibiting erratic in concentration-response.
Vyžadováno je každodenní kvantitativní sledování plodnosti.
If the data at least roughly follow a monotone concentration shape, the step-down Jonckheere-Terpstra test is powerful for detecting effects.
Měření a hodnocení těchto ukazatelů a jejich využití jsou popsány níže.
Series on Testing and Assessment, No. 54.
Přežití
Organisation for Economic Co-operation and Development, OECD, Paris..
Ryby by se v průběhu zkoušky měly prohlížet denně, každý úhyn by se měl zaznamenat a uhynulé ryby co nejdříve odstranit.
STATISTICAL GUIDANCE FOR REGRESSION ESTIMATES
Uhynulé ryby v kontrolních ani v exponovaných nádržích by se neměly nahrazovat.
The observations used to fit a model are replicate means (length and weight) or replicate proportions (egg hatch and larval mortality) (OECD 2006).
Makroskopickým hodnocením gonád by se mělo určit pohlaví ryb, které uhynuly v průběhu zkoušky.
Weighted regression using replicate sample size as weight is generally advised.
Chování a vzhled
Other weighting schemes are possible, such as weighting by predicted mean response or a combination of this and replicate sample size.
Mělo by se zaznamenat jakékoli neobvyklé chování (v porovnání s kontrolními skupinami).
Weighting by reciprocal of within-concentration sample variance is not recommended (Bunke et al.
Může se jednat o příznaky obecné toxicity včetně hyperventilace, nekoordinovaného plavání, ztráty rovnováhy a netypické nečinnosti nebo netypického příjmu potravy.
1999, Seber and Wild, 2003, Motulsky and Christopoulos 2004, Huet et al.
Měly by se rovněž zaznamenat vnější abnormality (např. krvácení, ztráta zbarvení).
2003).
Takovéto příznaky toxicity by měly být při interpretaci údajů pečlivě zváženy, neboť mohou ukazovat na koncentrace, při kterých biologické markery endokrinní aktivity nejsou spolehlivé.
Any transformation of responses prior to analysis should preserve the independence of the observations and ECx and its confidence bounds should be expressed in the original units of measurement, rather than in transformed units.
Pozorované změny chování mohou rovněž poskytnout užitečné kvalitativní informace, které se mohou stát podnětem pro možné budoucí požadavky na zkoušky s rybami.
For example, a 20 % change in the logarithm of length is not equivalent to a 20 % change in length (Lyles et.al 2008, Draper and Smith 1999).
Například u jelečka velkohlavého byla pozorována teritoriální agresivita u normálních samečků nebo maskulinizovaných samiček exponovaných androgenním látkám; u dania pruhovaného se v důsledku expozice estrogenním nebo antiandrogenním látkám omezí nebo utlumí typické chování při páření a tření.
The flowchart in figure 4 gives an overview for ECx estimations.
Některé vzhledové charakteristiky (především zbarvení) se během manipulace mohou rychle měnit, a proto je důležité provádět kvalitativní pozorování ještě před odstraněním ryb ze zkušebního systému.
The details are described in the text below.
Dosavadní zkušenosti s jelečkem velkohlavým naznačují, že některé chemické látky s endokrinním působením mohou zpočátku vyvolat změny těchto vnějších znaků: zbarvení těla (světlé nebo tmavé), forma zbarvení (přítomnost svislých pruhů) a tvar těla (hlavy a hrudní oblasti).
Figure 4
Proto by pozorování fyzického vzhledu ryb měla být prováděna jak v průběhu zkoušky, tak na konci studie.
Flow chart for ECx Estimation of Replicate Mean Length, Weight, or Proportion of Egg Hatch or Larval Mortality, see text for more details Select a larget value of x or a different model
Plodnost
Is (a) predicted response at ECx within CI for control, or (b) predicted response within CI for predicted response at ECx or (c) CI for ECx too wide?
Denní kvantitativní pozorování tření by mělo být zaznamenáno na bázi opakování.
Compute 95 % CI for predicted response at control and at Ecx, Compute 95 % CI for ECx.
Produkce jiker by měla být zaznamenána na bázi opakování jako počet jiker na jednu přeživši samičku za den.
Compare models using AICc criteria or professional judgement and select best fit
Jikry se ze zkušebních nádrží denně odstraňují.
Assess goodness of fit of models: (a) visually, (b) compare predicted % effect to observed % effect, (c) compare control mean response to predicted mean response, (d) compare regression residual SS to pure error SS using F-test.
U jelečka velkohlavého a dania pruhovaného by se měly do zkušebních nádrží vložit třecí podklady, aby se ryby mohly třít za normálních podmínek.
Reject poorly fitting models.
V dodatku 4 jsou uvedeny další podrobnosti k doporučeným třecím podkladům pro dania pruhovaného (dodatek 4A) a jelečka velkohlavého (dodatek 4B).
8 or more concentrations plus control 6 or 7 concentrations plus control 5 concentrations plus control
U halančíka japonského se přidání třecího podkladu nepovažuje za nezbytné.
Report model, ECx and its CI If no model and acceptable x can be found, report NOEC No Yes
Humánní usmrcení ryb
If no indication of extra-binominal variance, probit model can be fit to proportion data Also fit Brain-Cousins Hormetic model
V den 21, tj. při ukončení expozice, by se ryby měly usmrtit přiměřeným množstvím trikainu (trikain methan sulfonát, Metacain, MS-222 (číslo CAS 886-86-2)), pufrovaného na koncentraci 100–500 mg/l roztokem NaHCO3 (hydrogenuhličitan sodný, číslo CAS 144-55-8) v koncentraci 300 mg/l, aby se snížilo podráždění sliznice; poté se odeberou vzorky krve nebo tkání za účelem stanovení vitelogeninu, jak je vysvětleno v části týkající se vitelogeninu.
Also fit OECD 4 & 5, Hill, Michaelis-Menton or other 3-5 parm model
Pozorování druhotných pohlavních znaků
For Bruce-Versteeg, simple exponential (OECD2), simple exponential w/shape parameter (OECD3) or other 2-3 parm model
Některé chemické látky s endokrinním působením mohou vyvolat změny v druhotných pohlavních znacích specifických pro jednotlivé druhy (např. počet pářicích hrbolků u samečků jelečka velkohlavého a bradavkovitých výběžků u samečků halančíka japonského).
Considerations for Egg Hatch and Larval Mortality
Chemické látky s určitými účinky pak mohou způsobit abnormální výskyt druhotných pohlavních znaků u zvířat opačného pohlaví; např. agonisté androgenního receptoru, jako je trenbolon, methyltestosteron a dihydrotestosteron, mohou způsobit, že se u samiček jelečka vyvinou výrazné pářicí hrbolky nebo že se u samiček halančíka japonského vyvinou bradavkovité výběžky (11) (20) (21).
For egg hatch and larval mortality, it is generally best to fit a decreasing model unless one is fitting a probit model as described below.
Bylo také zaznamenáno, že agonisté receptoru estrogenu mohou způsobit snížení počtu pářicích hrbolků a velikost dorzálních týlních polštářků u dospělých samečků jelečka velkohlavého (26) (27).
That is, one should model the proportion of eggs that do not hatch or larvae that die.
Takováto obecná morfologická pozorování mohou poskytnout užitečné kvalitativní a kvantitativní informace, které se mohou stát podnětem pro možné budoucí požadavky na zkoušky s rybami.
The reason for this is that ECx refers to a concentration at which there is a change equal to x % of the control mean response.
Počet a velikost pářicích hrbolků u jelečka velkohlavého a bradavkovitých výběžků u halančíka japonského lze kvantifikovat buď přímo, anebo pomocí uchovávaných vzorků, což je praktičtější.
If there are 5 % control eggs that fail to hatch and one models failure to hatch, then EC20 refers to a concentration at which there is a change equal to 20 % of the 5 % control failure to hatch, and that is a change of 0,2 × 0,05 = 0,01 or 1 percentage point to 6 % failure to hatch.
Doporučené postupy pro hodnocení druhotných pohlavních znaků u jelečka velkohlavého jsou k dispozici v dodatku 5A a u halančíka japonského v dodatku 5B.
Such a small change cannot be estimated in any meaningful way from the data available and is not biologically important.
Vitelogenin (VTG)
Whereas if one models the proportion of eggs that hatch, the control proportion would be 95 % in this example and a 20 % reduction from the control mean would be a change of 0,95 × 0,2 = 0,18, so from 95 % hatch success to 77 % (= 95 – 18) hatching success and that effects concentration can be estimated and is presumably of greater interest.
Pomocí heparinizované mikrohematokritové kapiláry nebo alternativně srdeční punkcí pomocí injekční stříkačky se odebere krev z ocasní tepny/žíly.
This is not an issue with size measurements, though adverse effects on size generally mean a decrease in size.
V závislosti na velikosti ryb se objem krve, který lze odebrat, zpravidla nachází v rozmezí 5–60 μl u jednoho jelečka velkohlavého a 5–15 μl u jednoho dania pruhovaného.
Models for Size (length or weight) and Egg Hatch Success or Larval Survival.
Odstředěním se z krve oddělí plazma a uskladní se s inhibitory proteázy při teplotě – 80 °C do doby, než je analyzována na VTG.
Except for the Brain-Cousens hormetic model, all of these models are described and recommended in OECD (2006).
Alternativně lze jako zdroj tkáně pro stanovení VTG u halančíka japonského použít játra a u dania pruhovaného homogenát hlavy/ocasu (dodatek 6).
What are called OECD 2-5, are also discussed for ecotoxicity experiments in Slob (2002).
Měření VTG by mělo být založeno na validované homologované metodě ELISA s použitím homologovaného standardu VTG a homologovaných protilátek.
There are, of course, many other models that might be useful.
Doporučuje se použít metodu schopnou odhalit tak nízké hladiny VTG, jako je několik málo ng na ml plazmy (nebo ng na mg tkáně, což je základní hladina u neexponovaných samečků ryb).
Bunke, et al.
Kontrola kvality analýzy VTG bude provedena za použití standardů, provedením slepých zkoušek a analýzou alespoň dvou duplikátních vzorků.
lists numerous models not included here and references to other models are plentiful.
U každé metody ELISA by měla být provedena zkouška na vliv matrice (účinek ředění vzorku) s cílem určit minimální faktor ředění vzorku.
Those listed below are suggested as particularly appropriate in ecotoxicity experiments and widely used.
Analyzovat se budou alespoň dva alikvotní vzorky (duplikátní jamky) vzorku každého ředění.
With 5 test concentrations plus control
Duplikátní jamky, které se liší o více než 20 %, by měly být analyzovány znovu.
Simple Exponential (OECD 2)
Korelační koeficient (R2) u kalibračních křivek by měl být větší než 0,99.
Exponential with shape parameter (OECD 3)
Vysoká korelace však nepostačuje k tomu, aby zaručila odpovídající prognózu koncentrace ve všech rozmezích.
Simple Exponential with Lower Bound (OECD 4)
Kromě dostatečně vysoké korelace u kalibrační křivky by koncentrace všech standardů vypočtené z kalibrační křivky měly ležet mezi 70 a 120 % jejich jmenovité koncentrace.
With 6 or more test concentrations plus control
Pokud se jmenovité koncentrace od kalibrační regresní křivky odchylují (např. při nízkých koncentracích), může být pro adekvátní vyjádření údajů o absorbanci nezbytné rozdělit kalibrační křivku na nízké a vysoké rozpětí nebo použít nelineární model.
Exponential with shape parameter and lower bound (OECD 5)
Je-li křivka rozdělena, oba segmenty křivky by měly mít R2 > 0,99.
Where there is visual evidence of hormesis (unlikely with egg hatch success or larval survival, but sometimes observed in size observations)
Mez detekce (LOD) je definována jako koncentrace nejnižšího analytického standardu a mez stanovitelnosti (LOQ) je definována jako koncentrace nejnižšího analytického standardu vynásobená nejnižším faktorem ředění.
Brain-Cousens Hormetic; Brain and Cousens (1989)
Každý den, kdy se provádějí zkoušky VTG, se analyzuje obohacený vzorek vytvořený pomocí referenčního standardu pro opakovatelnost (dodatek 7).
Alternative models for egg hatch failure and larval mortality
Poměr mezi očekávanou koncentrací a naměřenou koncentrací se zaznamená spolu s výsledky všech souborů zkoušek provedených v týž den.
Increasing models for these responses can be fit by probit (or logistic) models if there is no evidence of extra-binomial variance and control incidence is estimated in the model fit.
Hodnocení histopatologie gonád
This is not the preferred method, as it treats the individual, not the replicate, as the unit of analysis (Morgan 1992, O'Hara Hines and Lawless 1993, Collett 2002, 2003).
Regulační orgány mohou vyžadovat provedení histopatologie gonád s cílem prozkoumat cílový orgán osy HPG po expozici chemické látce.
Goodness of fit of a single model
V souvislosti s tím se gonády fixují buď vcelku, nebo v řezech.
Visually compare observed and predicted percent decrease at each test concentration (Motulsky and Christopoulos 2004, Draper and Smith 1999).
Je-li požadována histopatologie, budou při hodnocení působení chemické látky na endokrinní systém hledány specifické reakce související s endokrinním systémem.
Compare regression error mean square against the pure error mean square using an F-test (Draper and Smith 1999).
Tyto diagnostické reakce zahrnují hlavně přítomnost testikulárních oocytů, hyperplazii Leydigových buněk, sníženou tvorbu žloutku, zvýšení počtu spermatogonií a perifolikulární hyperplazii.
Check that every term in the model is significantly different from zero (i.e., determine whether all model terms are important), (Motulsky and Christopoulos 2004).
Jiné léze v gonádách jako atrézie oocytů, testikulární degenerace a změny stadia mohou mít různé příčiny.
Plots of residuals from regression vs. test concentration, possibly on a log(conc) scale.
Pokyny pro histopatologii rybích gonád stanoví postupy, které se použijí při pitvě, fixaci, provádění řezů a histopatologickém hodnocení gonád (22).
There should be no pattern to this plot; the points should be randomly scattered about a horizontal line at zero height.
Hodnocení reakcí biologických markerů pomocí analýzy rozptylu (ANOVA)
The data should be evaluated for normality and variance homogeneity in the same way as indicated in Appendix 5.
Pro zjištění potenciálního působení chemické látky se pomocí analýzy rozptylu (ANOVA) porovnávají reakce mezi zkušebními a kontrolními skupinami.
In addition, normality of the residuals about the regression model should be assessed using the same methods indicated in Appendix 5 for the residuals from ANOVA
Je-li nasazena kontrola s rozpouštědlem, provede se pro každý ukazatel vhodné statistické porovnání mezi kontrolami s ředicí vodou a kontrolami s rozpouštědlem.
Compare models
Návod k tomu, jak při následné statistické analýze zacházet s údaji o kontrolách s ředicí vodou a kontrolách s rozpouštědlem, lze najít v dokumentu OECD, 2006c (28).
Use Akiake's AICc criteria.
Veškeré údaje o biologických reakcích se analyzují a zaznamenají se za každé pohlaví zvlášť.
Smaller AICc values denote better fits and if AICc(B)-AICc(A)≥10, the model A is almost certainly better than model B (Motulsky and Christopoulos (2004).
Nejsou-li splněny předpoklady pro použití parametrických metod kvůli nenormálnímu rozdělení (např. Shapirův-Wilkův test) nebo heterogennímu rozptylu (Bartlettův test nebo Lewenův test), měla by být před provedením ANOVA zvážena transformace údajů za účelem homogenizace rozptylů nebo by měla být provedena vážená ANOVA.
Compare the two models visually by how well they meet the single model criteria above.
V případě nemonotónní závislosti dávka-odezva lze použit Dunnettův test (parametrický) vícenásobných párových porovnání nebo Mannův-Whitneyův test s Bonferroniho korekcí (neparametrický).
The parsimony principal is advised, whereby the simplest model that fits the data reasonably well is used (Ratkowsky 1993, Lyles et.al 2008).
Je-li závislost dávka-odezva přibližně monotónní, lze použít jiné statistické testy (např. Jonckheerův-Terpstrův test nebo Williamsův test).
Quality of ECx estimate
V dodatku 8 je uvedeno statistické schéma, které může pomoci při rozhodování o tom, jaký statistický test je nejvhodnější použít.
The confidence interval (CI) for ECx should not be too wide.
Další informace lze získat rovněž v dokumentu OECD o současných přístupech ke statistické analýze údajů o ekotoxicitě (28).
Statistical judgment is needed in deciding how wide the confidence interval can be and ECx still be useful.
Zpráva o výsledcích zkoušky
Simulations for regression models fit to egg hatching and size data show that about 75 % of confidence intervals for ECx (x = 10, 20 or 30) span no more than two test concentrations.
Údaje o studii by měly zahrnovat:
This provides a general guide for what is acceptable and a practical guide for what is achievable.
Zkušební zařízení:
Numerous authors assert the need to report confidence intervals for all model parameters and that wide confidence intervals for model parameters indicate unacceptable models (Ott and Longnecker 2008, Alvord and Rossio 1993, Motulsky and Christopoulos 2004, Lyles et al.
odpovědní pracovníci a jejich odpovědnost v rámci studie,
2008, Seber and Wild 2003, Bunke et al.
každá laboratoř by měla prokázat svoji způsobilost testováním škály reprezentativních chemických látek.
1999, Environment Canada 2005).
charakterizace zkoušených chemických látek,
The CI for ECx (or any other model parameter) should not contain zero (Motulsky and Christopoulos 2004).
fyzikální povaha a relevantní fyzikálně-chemické vlastnosti,
This is the regression equivalent the minimum significant difference that is often cited in hypothesis testing approaches (e.g. Wang et al 2000).
metoda a frekvence přípravy zkušebních koncentrací,
It also corresponds to the confidence interval for the mean responses at the LOEC not contain the control mean.
informace o stabilitě a biologické rozložitelnosti.
One should wonder whether the parameter estimates are scientifically plausible.
charakterizace rozpouštědla (povaha, použitá koncentrace),
E.g. if the confidence interval for y0 is ± 20 %, no EC10 estimate is plausible.
zdůvodnění výběru rozpouštědla (není-li použita voda).
If the model predicts a 20 % effect at a concentration C and the maximum observed effect at C and lower concentrations is 10 %, then the EC20 is not plausible (Motulsky and Christopoulos 2004, Wang et al.
druh a kmen,
2000, Environment Canada 2005).
dodavatel a konkrétní zařízení dodavatele,
ECx should not require extrapolation outside the range of positive concentrations (Draper and Smith 1999, OECD 2006).
věk ryb na počátku zkoušky a reprodukční stav / stav z hlediska tření,
For example, a general guide might be for ECx to be no more than about 25 % below the lowest tested concentration or above the highest tested concentration.
podrobnosti o postupu aklimatizace ryb,
Brain P. and Cousens R. (1989); An equation to describe dose responses where there is stimulation of growth at low doses.
tělesná hmotnost ryb na počátku expozice (z dílčího vzorku rybí populace).
Weed res.
použitý zkušební postup (druh zkoušky, velikost nasazení, hustota obsádky atd.),
29: 93-96.
metoda přípravy zásobních roztoků a průtok,
OECD (2006); Current approaches in the statistical analysis of ecotoxicity data: A guidance to application.
jmenovité zkušební koncentrace, týdně naměřené koncentrace zkušebních roztoků a použitá analytická metoda, střední hodnoty koncentrací naměřených ve zkušebních nádržích a směrodatné odchylky a důkazy toho, že naměřené hodnoty odpovídají koncentracím zkoušené chemické látky v pravém roztoku,
Series Testing and Assessment, No. 54, Organisation for Economic Co-operation and Development, OECD, Paris.
charakteristiky ředicí vody (včetně pH, tvrdosti, alkality, teploty, koncentrace rozpuštěného kyslíku, koncentrace zbytkového chloru, celkového obsahu organického uhlíku, obsahu suspendovaných látek a výsledků jakýchkoli jiných provedených měření),
C.48 Fish Short Term Reproduction Assay
kvalita vody ve zkušebních nádržích: pH, tvrdost, teplota a koncentrace rozpuštěného kyslíku,
This test method is equivalent to OECD test guideline (TG) 229 (2012).
podrobné informace o krmení (např. druh krmiva/krmiv, původ, podávané množství a frekvence krmení), a jsou-li k dispozici, analýzy na přítomnost příslušných kontaminujících látek (např. polychlorovaných bifenylů, polyaromatických uhlovodíků a organochlorových pesticidů).
The need to develop and validate a fish assay capable of detecting endocrine active chemicals originates from the concerns that environmental levels of chemicals may cause adverse effects in both humans and wildlife due to the interaction of these chemicals with the endocrine system.
důkazy o tom, že kontrolní skupiny vyhověly kritériím přijatelnosti zkoušky,
In 1998, the OECD initiated a high-priority activity to revise existing guidelines and to develop new guidelines for the screening and testing of potential endocrine disruptors.
údaje o mortalitě pro každou zkušební koncentraci a kontrolní skupinu,
One element of the activity was to develop a test guideline for the screening of chemicals active on the endocrine system of fish species.
použité metody statistické analýzy, zpracování údajů a zdůvodnění použitých metod,
The Fish Short Term Reproduction Assay underwent an extensive validation programme consisting of inter-laboratory studies with selected chemicals to demonstrate the relevance and reliability of the assay for the detection of chemicals that impact reproduction in fish by various mechanisms including endocrine modalities (1, 2, 3, 4, 5).
údaje o biologických pozorováních celkové morfologie včetně druhotných pohlavních znaků, tvorby jiker a VTG,
All endpoints of the OECD test guideline have been validated on the fathead minnow, and a subset of endpoints has been validated in the Japanese medaka (i.e. vitellogenin and secondary sex characteristics) and the zebrafish (i.e. vitellogenin).
výsledky analýz údajů, přednostně ve formě tabulek a grafů,
The validation work has been peer-reviewed by a panel of experts nominated by the National Coordinators of the OECD Test Guideline Programme (6) in part, and by an independent panel of experts commissioned by the United States Environmental Protection Agency (29).
výskyt jakýchkoli neobvyklých reakcí ryb a viditelné účinky vyvolané zkoušenou chemickou látkou.
The assay is not designed to identify specific mechanisms of hormonal disruption because the test animals possess an intact hypothalamic-pituitary-gonadal (HPG) axis, which may respond to chemicals that impact on the HPG axis at different levels.