natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Šňůry vajíček se odeberou z krystalizační misky v chovné kleci pomocí pinzety nebo pipety bez špičky.
It is placed directly on the plaster of Paris in a small heap.
Každá šňůra vajíček se z krystalizační misky, z níž byla odebrána, přemístí do nádoby s kultivačním médiem (např. do jamky mikrotitrační destičky s 12 jamkami spolu s nejméně 2,5 ml média).
The mass of baker's yeast added should be adjusted to the size of the collembolan population, but as a general rule 2-15 mg is sufficient.
Nádoby se šňůrami vajíček se přikryjí víčky, aby se zabránilo významnému odpařování.
Synchronisation
Šňůry vajíček se po dobu nejméně šesti dnů od jejich nakladení ponechají za účelem pozorování, aby mohly být vyhodnoceny jako plodné nebo neplodné.
The test should be performed with synchronised animals to obtain homogeneous test animals of the same instar and size.
Pro zahájení zkoušky s druhou generací se z každé chovné klece vyberou nejméně tři, lépe však šest plodných šňůr vajíček a spolu s určitým množstvím potravy se nechají vylíhnout.
Furthermore, the synchronisation enables discrimination of F. fimetaria males and females from the age of 3 weeks and onwards based on sexual dimorphism, i.e. size differences.
Tyto šňůry s vajíčky by měly být nakladeny ve vrcholné části kladení vajíček, k čemuž obvykle dochází kolem zkušebního dne 19 v kontrolních skupinách.
The procedure below is a suggestion on how to obtain synchronised animals (the practical steps are optional).
V ideálním případě začne zkouška s druhou generací ve všech expozicích ve stejný den, ale v důsledku účinků té či oné chemické látky na vývoj larev to nemusí být vždy možné.
Synchronisation.
V takovém případě může k vývoji při vyšších koncentracích dojít později než k nižším expozicím a kontrolám (s rozpouštědlem).
Prepare containers with a 0,5 cm layer of plaster of Paris/charcoal substrate.
a.
For egg laying transfer 150-200 adult F. fimetaria and 50-100 F. candida from the best 15-20 containers of the stock culture with 4-8 weeks old substrate to the containers and feed them 15 mg baker's yeast.
Při uspořádání s obohacenou vodou se systém sediment-voda pro druhou generaci připraví tak, že se zkoušená chemická látka přimísí do vodního sloupce nad sedimentem přibližně 1 hodinu před vložením larev prvního instaru do zkušebních nádob.
Avoid bringing juveniles together with adults as presence of juveniles may inhibit egg production.
Pod hladinou vody se pomocí pipety aplikují malé objemy roztoku zkoušené chemické látky.
Keep the culture at 20 ± 1 °C (the mean should be 20 °C) and a light-dark cycle of 12-12 hours (400-800 Lux).
Po obohacení se provede mírné provzdušnění.
Ensure that fresh food is available and the air is water saturated.
b.
Lack of food may lead the animals to defecate on the eggs resulting in fungal growth on the eggs or F. candida may cannibalise its own eggs.
Při uspořádání s obohaceným sedimentem se expoziční nádoby obsahující systém sediment-voda pro druhou generaci připraví stejným způsobem jako pro první generaci.
After 10 days the eggs are carefully collected with a needle and spatula and moved to “egg-paper” (small pieces of filter paper dipped in plaster of Paris/charcoal slurry) which is placed in a container with fresh plaster/charcoal substrate.
20 larev v prvním instaru (nejvýše 48 h po vylíhnutí) druhé generace se pomocí pipety bez špičky náhodně rozdělí do jednotlivých zkušebních nádob obsahujících systém obohacený sediment-voda.
A few grains of yeast are added to the substrate to attract the juveniles and make them leave the egg-paper.
Provzdušňování vody by mělo být při přidání larev prvního instaru do zkušebních nádob ukončeno a mělo by být znovu zahájeno nejdříve po uplynutí dalších 24 hodin od přidání larev.
It is important that the egg-paper and substrate are humid, or the eggs will dehydrate.
Podle zvoleného uspořádání zkoušky (viz odstavce 19 a 20) je počet larev použitý na jednu koncentraci minimálně 120 pro stanovení ECx (6 opakování pro každou koncentraci) a 160 pro stanovení NOEC (8 opakování pro každou koncentraci).
As an alternative, adult animals may be removed from the synchronisation culture boxes after producing eggs for 2 or 3 days.
Larvy ve zkušebních nádobách je třeba krmit optimálně denně nebo nejméně třikrát týdně.
After three days most of the eggs on the egg-paper will have hatched, and some juveniles may be found under the egg-paper.
Jako dostatečná dávka pro mladé larvy po dobu prvních 10 dnů jejich vývoje se jeví krmivo pro ryby (suspenze ve vodě nebo jemně rozmělněné krmivo, např. Tetra-Min nebo Tetra-Phyll, viz podrobnosti v dodatku 2) v množství 0,25 až 0,5 mg (0,35 až 0,5 mg pro C. yoshimatsui) na larvu za den.
To have evenly aged juveniles, the egg-paper with un-hatched eggs is removed from the Petri dish with forceps.
Starší larvy mohou potřebovat o něco větší množství potravy:
The juveniles, now 0-3 days, stay in the dish and are fed baker's yeast.
po zbývající dobu zkoušky by mělo dostačovat 0,5–1,0 mg na larvu denně.
Un-hatched eggs are discharged.
Pokud v kontrolních skupinách dojde k růstu plísní nebo je u nich zjištěna mortalita, je nutné přísun potravy u všech expozic snížit a kontrolovat.
Eggs and hatched juveniles are cultured in the same manner as the adults.
Pokud není možné růst plísní zastavit, je třeba zkoušku opakovat.
In particular for F. fimetaria the following measures should be taken:
Toxikologický význam expozice požitím je obecně vyšší v případě chemických látek s vysokou afinitou k organickému uhlíku nebo chemických látek s kovalentní vazbou na sediment.
ensuring sufficient fresh food, old moulding food is removed, after 1 week the juveniles are divided into new Petri dishes provided that the density is above 200.
Voda nad sedimentem ve zkušebních nádobách se 24 hodin po přidání larev prvního instaru obou generací mírně provzdušňuje a v provzdušňování se pokračuje po celou dobu zkoušky (je třeba dbát na to, aby koncentrace rozpuštěného kyslíku neklesla pod 60 procent ASV).
Static electricity should be neutralised, otherwise the animals may just fly into the air, or stick to the side of the test container and dry out.
Provzdušňování se provádí pomocí skleněné Pasteurovy pipety, jejíž výstupní otvor je upevněn 2–3 cm nad vrstvou sedimentu a která dávkuje několik bublin/s.
An ioniser or a moist cloth below the container may be used for neutralisation.
Při zkoušení těkavých chemických látek by se mělo zvážit neprovzdušňování systému sediment-voda, přičemž je však třeba splnit kritérium nejméně 60 % ASV (odstavec 10).
The food should be spread all over the soil surface and not just in one lump.
Další pokyny jsou uvedeny v (16).
During transportation and during the testing period it should be avoided to knock or otherwise physically disturb the test containers, as this may increase the compaction of the soil, and hamper the interaction between the collembolans.
Fotoperioda je 16 hodin a intenzita osvětlení by měla být 500 až 1000 luxů.
A number of prerequisites should be fulfilled in advance before using alternative species:
Pro chovné klece je možné zařadit jednohodinovou fázi úsvitu a šera.
They should be unequivocally identified;
Trvání expozice
The rationale for the selection of the species should be given;
Uspořádání s obohacenou vodou:
It should be ensured that the reproductive biology is included in the testing phase so it will be a potential target during the exposure;
Doba expozice první generace začíná v okamžiku vmísení zkoušené chemické látky do vody nad sedimentem ve zkušebních nádobách (tj. jeden den po vložení larev – pro možné změny v uspořádání expozice viz odstavec 7).
The life-history should be known:
Expozice druhé generace larev začíná okamžitě, neboť se vkládají do systému sediment-voda, který již byl obohacen.
age at maturation, duration of egg development, and instars subject to exposure;
Maximální délka trvání expozice pro C. riparius a C. yoshimatsui je u první generace 27 dnů a u druhé generace 28 dnů (tj. larvy první generace stráví v nádobách jeden den bez expozice).
Optimal conditions for growth and reproduction should be provided by the test substrate and food supply;
Vzhledem k překrývání činí celková délka trvání zkoušky přibližně 44 dnů.
Variability should be sufficiently low for precise and accurate toxicity estimation.
Pro C. dilutus je maximální délka trvání expozice u první generace 64 dnů a u druhé generace 65 dnů.
Extraction and counting of animals
Celková délka trvání je přibližně 100 dnů.
Two methods of extraction can be performed.
Uspořádání s obohaceným sedimentem:
First method:
expozice začíná přidáním larev a trvá maximálně 28 dnů pro obě generace C. riparius a C. yoshimatsui a maximálně 65 dnů pro obě generace C. dilutus.
A controlled temperature gradient extractor based on principles by MacFadyen can be used (1).
Líhnutí
The heat coming from a heating element at the top of the extraction box (regulated through a thermistor placed on the surface of the soil sample).
Určí se čas potřebný pro vývoj a celkový počet plně vylíhlých, živých samečků a samiček pakomárů pro obě generace.
The temperature in the cooled liquid surrounding the collecting vessel is regulated through a thermistor situated at the surface of the collection box (placed below the soil core).
Samečky lze snadno rozlišit podle vějířovitých tykadel a štíhlého trupu.
The thermistors are connected to a programmable controlling unit which raises the temperature according to a pre-programmed schedule.
Zkušební nádoby pro obě generace se kontrolují alespoň třikrát týdně s cílem vizuálně posoudit jakékoli neobvyklé chování larev (např. opouštění sedimentu, neobvyklé plavání) ve srovnání s kontrolními nádobami.
Animals are collected in the cooled collecting box (2 °C) with a bottom layer of plaster of Paris/charcoal.
Během období líhnutí, které začíná asi 12 dnů po vložení larev u C. riparius a C. yoshimatsui (a po 20 dnech u C. dilutus), se vylíhlí pakomáři počítají a rozlišují podle pohlaví alespoň jednou, lépe však dvakrát denně (brzy ráno a pozdě odpoledne).
Extraction is started at 25 °C and the temperature is increased automatically every 12 h by 5 °C and has a total duration of 48 hours.
Po identifikaci se pakomáři první generace z nádob opatrně odstraní a přemístí do chovné klece.
After 12 h at 40 °C the extraction is finished.
Pakomáři druhé generace se po identifikaci odstraní a usmrtí.
Second method:
Veškeré šňůry vajíček vložené do zkušebních nádob první generace by měly být jednotlivě odebrány a přeneseny s alespoň 2,5 ml původní vody na mikrotitrační destičky s 12 jamkami (nebo do jiných vhodných nádob), které se přikryjí víčkem s cílem zamezit významnému odpařování.
After the experimental incubation period the number of juvenile Collembola present is assessed by flotation.
Je třeba rovněž zaznamenat počet mrtvých larev a viditelných kukel, které se dosud nevylíhly.
For that purpose the test is performed in the vessels of approximately 250 ml volume.
Příklady chovné klece, zkušební nádoby a exhaustoru jsou uvedeny v dodatku 5.
At the end of the test approx.
Reprodukce
200 ml of distilled water are added.
Šňůry vajíček by se měly odebrat a přenést s alespoň 2,5 ml původní vody na mikrotitrační destičku s 12 jamkami (po jedné šňůře vajíček do každé jamky) nebo do jiné vhodné nádoby, která se přikryje víčkem s cílem zamezit silnému odpařování.
0,5 ml, of black Kentmere photographic dye may be added to the water to aid counting by increasing the contrast between the water and the white Collembola.
U každé šňůry vajíček se zdokumentují tyto charakteristiky:
The dye is not toxic to Collembola.
den nakladení, velikost (normální, tj. 1,0 ± 0,3 cm, nebo malá, obvykle ≤ 0,5 cm), struktura (normální = ve tvaru banánku se spirálovitě zatočenou nití vajíček, nebo nenormální, např. s nití vajíček, která není spirálovitě zatočená) a fertilita (plodná nebo neplodná).
Counting:
Po uplynutí 6 dní od nakladení šňůry vajíček se posoudí její fertilita.
Counts of numbers may be carried out by eye or under a light microscope using a grid placed over the floatation vessel or by photographing the surface of each vessel and later counting the Collembola on enlarged prints or projected slides.
Šňůra vajíček se považuje za plodnou, pokud se vylíhne alespoň jedna třetina vajíček.
Counts may also be performed using digital image processing techniques (12).
Celkový počet samiček přidaných do chovné klece se použije k výpočtu počtu šňůr vajíček na jednu samičku a počtu plodných šňůr vajíček na jednu samičku.
All techniques should be validated.
Je-li to nutné, lze počet vajíček ve šňůře vajíček odhadnout, aniž by došlo k jejich poškození, metodou počtu prstenců (ta je podrobně popsána v (32)(33)).
Determination of the maximum WHC of the soil
Analytická měření
The following method for determining the maximum water holding capacity (WHC) of the soil has been found to be appropriate.
Koncentrace zkoušené chemické látky
It is described in Annex C of ISO DIS 11268-2 (Soil Quality — Effects of pollutants on earthworms (Eisenia fetida).
Je třeba analyzovat alespoň vzorky vody nad sedimentem, kapilární vody a sedimentu na počátku expozice (v případě obohacení vody nejlépe hodinu po aplikaci zkoušené chemické látky) a na konci zkoušky při nejvyšší koncentraci a jedné nižší koncentraci.
Part 2: Determination of effects on reproduction).
To platí o nádobách pro obě generace.
Cover the bottom of the tube with a wet piece of filter paper and then place it on a rack in a water bath.
Z krystalizačních misek v chovné kleci se analyzuje pouze voda nad sedimentem, protože právě s ní přišly šňůry vajíček do styku (při uspořádání s obohaceným sedimentem lze zvážit analytické potvrzení koncentrace v sedimentu).
The water holding capacity (WHC) should be calculated as follows:
Další měření sedimentu, kapilární vody nebo vody nad sedimentem lze provádět během zkoušky, je-li to považováno za nezbytné.
Soil Quality — Determination of pH.
Tato stanovení koncentrace zkoušené chemické látky poskytují informace o chování/distribuci zkoušené chemické látky v systému voda-sediment.
C.40.
Odběr vzorků sedimentu a kapilární vody na počátku zkoušky a v jejím průběhu (viz odstavec 39) vyžaduje další zkušební nádoby k provedení analytických určení.
SEDIMENT-WATER CHIRONOMID LIFE-CYCLE TOXICITY TEST USING SPIKED WATER OR SPIKED SEDIMENT
Měření v sedimentu při uspořádání s obohacenou vodou nemusí být nutná, pokud distribuce zkoušené chemické látky mezi vodou a sedimentem byla jasně stanovena studií voda/sediment za srovnatelných podmínek (např. poměr sedimentu k vodě, typ aplikace, obsah organického uhlíku v sedimentu), nebo pokud se prokáže, že naměřené koncentrace ve vodě nad sedimentem zůstávají v rozmezí 80 až 120 % nominálních nebo naměřených počátečních koncentrací.
This test method is equivalent to OECD Testing Guideline (TG) 233 (2010).
Při provádění průběžných měření (např. v den 7 a/nebo den 14) a v případě, že jsou pro analýzu zapotřebí rozsáhlé vzorky, které nelze ze zkušebních nádob odebrat bez dopadu na zkušební systém, je potřeba provést analytická stanovení na vzorcích z dalších zkušebních nádob, s nimiž bylo zacházeno stejným způsobem (včetně přítomnosti zkušebních organismů), ale nebyly použity pro biologická pozorování.
It is designed to assess the effects of life-long exposure of chemicals on the freshwater dipteran Chironomus sp., fully covering the 1st generation (P generation) and the early part of the 2nd generation (F1 generation).
V některých případech může být nemožné analýzu koncentrací v kapilární vodě provést kvůli tomu, že vzorek je příliš malý.
It is an extension of the existing test methods C.28 (1) or C.27 (15) using a spiked-water exposure scenario or a spiked sediment scenario, respectively.
Fyzikálně-chemické parametry
It takes into account existing toxicity test protocols for Chironomus riparius and Chironomus dilutus (previously named C. tentans (2)) that have been developed in Europe and North America (3) (4) (5) (6) (7) (8) (9) and subsequently ring-tested (1) (7) (10) (11) (12).
Hodnotu pH, rozpuštěný kyslík ve zkušební vodě a teplotu vody ve zkušebních nádobách a krystalizačních miskách je nutno měřit vhodným způsobem (viz odstavec 10).
Other well documented chironomid species may also be used, e.g. Chironomus yoshimatsui (13) (14).
Tvrdost a obsah amoniaku by měly být měřeny v kontrolních nádobách a v jedné zkušební nádobě a krystalizační misce při nejvyšší koncentraci na počátku zkoušky a na jejím konci.
The complete exposure duration is ca.
Účelem této zkoušky toxicity během životního cyklu je stanovit účinek zkoušené chemické látky na reprodukci a na rychlost vývoje a celkový počet plně vylíhlých, živých samečků a samiček pakomárů po dobu dvou generací.
44 days for C. riparius and C. yoshimatsui, and –ca.
Pro získání údajů o procentu vylíhlých jedinců by údaje o samečcích a samičkách měly být sloučeny.
100 days for C. dilutus.
V případě obohacené vody se proto pro každou expozici stanoví průměrná hodnota koncentrací naměřených obvykle na počátku expozice ve vodě nad sedimentem v nádobách pro obě generace a koncentrací naměřených v krystalizačních miskách.
The water exposure scenario, spiking of the water column, is intended to simulate a pesticide spray drift event and covers the initial peak concentration in surface waters.
V případě obohaceného sedimentu se pro každou expozici stanoví průměrná hodnota koncentrací naměřených obvykle na počátku expozice v nádobách pro obě generace (a volitelně koncentrací naměřených v krystalizačních miskách).
Water spiking is also useful for other types of exposure (including chemical spills), but not for accumulation processes within the sediment lasting longer than the test period.
Pro výpočet bodového odhadu, tj. ECx, lze jako skutečné opakování použít statistiku na jednu nádobu a na jednu chovnou klec.
In that case, and also when run-off is the main entry route of pesticides into water bodies, a spiked sediment design may be more appropriate.
Při výpočtu intervalu spolehlivosti pro každou hodnotu ECx je nutno zohlednit variabilitu mezi jednotlivými nádobami, případně prokázat, že tato variabilita je tak nízká, že ji lze ignorovat.
If other exposure scenarios are of interest, the test design may be readily adapted.
Je-li u modelu užita metoda nejmenších čtverců, je nutné u statistik jednotlivých nádob uplatnit transformaci za účelem homogenity rozptylu.
For example, if the distribution of the test chemical between the water phase and the sediment layer is not of interest and adsorption to the sediment has to be minimised, the use of surrogate artificial sediment (e.g. quartz sand) may be considered.
Hodnoty ECx je však třeba vypočítat až poté, co byla reakce převedena zpět na původní hodnotu (31).
Chemicals that require testing of sediment-dwelling organisms may persist in sediment over long periods.
Pokud je cílem statistické analýzy stanovení hodnoty NOEC testováním hypotéz, je nutné vzít v úvahu variabilitu mezi nádobami, což zaručí užití metod analýzy rozptylu ANOVA (např. postupy Williamsova a Dunnettova testu).
Sediment-dwelling organisms may be exposed via a number of routes.
Williamsův test je vhodný, když se teoreticky předpokládá monotónní závislost dávka-odezva, a Dunnettův test je vhodný, pokud hypotéza monotónnosti neplatí.
The relative importance of each exposure route, and the time taken for each to contribute to the overall toxic effect, is dependent on the physical-chemical properties of the chemical.
Případně mohou být vhodnější robustnější testy (27), jsou-li porušeny předpoklady obvykle užité při analýze ANOVA (31).
For strongly adsorbing chemicals or for chemicals covalently binding to sediment, ingestion of contaminated food may be a significant exposure route.
Procento vylíhlých jedinců
In order not to underestimate the toxicity of highly lipophilic chemicals, the use of food added to the sediment before application of the test chemical may be considered (see paragraph 31).
V opačném případě lze použít Fisherův exaktní test nebo Mantelův-Haenszelův test s Bonferroniho-Holmovou korekcí hodnot p. Pokud existují důkazy o větší variabilitě mezi opakováními ve stejné koncentraci, pak by binomické rozdělení (často uváděné jako ‚extra-binomická‘ variabilita) nasvědčovalo tomu, že je nutno použít robustní Cochranův-Armitageův test nebo Fisherův exaktní test, jak je navrhováno v položce seznamu literatury (27).
Therefore, it is possible to include all routes of exposure and all life stages.
Určí se součet živých pakomárů (samečků plus samiček) vylíhlých v jedné nádobě, ne, a ten se vydělí počtem vložených larev, na:
Measured endpoints are the total number of adults emerged (for both 1st and 2nd generations), development rate (for both 1st and 2nd generations), sex ratio of fully emerged and alive adults (for both 1st and 2nd generations), number of egg ropes per female (1st generation only) and fertility of the egg ropes (1st generation only).
ER procento vylíhlých jedinců,
Formulated sediment is strongly recommended.
počet živých pakomárů vylíhlých v nádobě,
Formulated sediment has several advantages over natural sediments:
počet larev nasazených do nádoby (obvykle 20).
experimental variability is reduced because it forms a reproducible “standardised matrix” and the need to source uncontaminated clean sediment is eliminated;
Pokud je ne větší než na (tj. pokud bylo neúmyslně nasazeno více než předpokládaný počet larev), na se upraví na hodnotu rovnou ne.
tests can be initiated at any time without encountering seasonal variability in the test sediment and there is no need to pre-treat the sediment to remove indigenous fauna;
Nejvhodnějším alternativním přístupem pro rozsáhlé vzorky s extra-binomickou variabilitou je zacházet s procentem vylíhlých jedinců jako s kontinuální proměnnou a použít postupy, které jsou konzistentní s těmito údaji ER.
reduced cost compared to field collection of sufficient quantities required for routine testing;
Rozsáhlý vzorek je zde definován jako situace, při níž jak počet vylíhlých jedinců, tak počet nevylíhlých jedinců přesáhnou v jednom opakování (nádobě) hodnotu pět.
formulated sediment allows for comparisons of toxicity across studies and ranking chemicals accordingly (3).
Při použití metody ANOVA je nutno hodnoty ER nejprve transformovat druhou odmocninou funkce arcsin nebo transformací podle Tukeyho-Freemana s cílem získat přibližné normální rozdělení údajů a vyrovnat odchylky.
First instar chironomid larvae are exposed to a concentration range of the test chemical in a sediment-water system.
Pro získání procenta vylíhlých jedinců se hodnoty ECx vypočtou pomocí regresní analýzy (např. pomocí modelu probit, logit nebo Weibullova modelu (28)).
Emerged adults are transferred to breeding cages, to facilitate swarming, mating and oviposition.
V případě selhání regresní analýzy (např. v případě méně než dvou koncentrací s parciálními odezvami) se použijí další neparametrické metody, jako je například klouzavý průměr nebo prostá interpolace.
The number of egg ropes produced and their fertility are assessed.
Rychlost vývoje
From these egg ropes, first instar larvae of the 2nd generation are obtained.
Střední doba vývoje představuje střední časové rozpětí mezi nasazením larev (den 0 zkoušky) a vylíhnutím experimentální kohorty pakomárů (pro výpočet skutečné doby vývoje by mělo být zohledněno stáří larev v okamžiku zavedení).
These larvae are placed into freshly prepared test beakers (spiking procedure as for the 1st generation) to determine the viability of the 2nd generation through an assessment of their emergence, time to emergence and the sex ratio of the fully emerged and alive midges (a schematic presentation of the life-cycle test is provided in Appendix 5).
Rychlost vývoje (jednotka: 1/den) je převrácenou hodnotou doby vývoje a představuje tu část larválního vývoje, která se odehraje za den.
All data are analysed either by a regression model to estimate the concentration that would cause X % reduction in the relevant endpoint, or by using hypothesis testing to determine a No Observed Effect Concentration (NOEC).