natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Rozvržení 24jamkových destiček
e.g., self-adhesive foil to cover the 24-well plates;
1–5 pět zkušebních koncentrací / chemická látka;
Incubator or air-conditioned room with controlled temperature, allowing to maintain 26 ± 1 °C in wells (or test chambers);
nC negativní kontrola (s ředicí vodou);
Oxygen meter;
iC vnitřní kontrola destičky (s ředicí vodou);
Equipment for determination of hardness of water and conductivity;
pC pozitivní kontrola (3,4-dichloranilin 4 mg/l);
Spawn trap: instrument trays of glass, stainless steel or other inert materials; wire mesh (grid size 2 ± 0,5 mm) of stainless steel or other inert material to protect the eggs once laid; spawning substrate (e.g. plant imitates of inert material) (TM C.48, Appendix 4a (23));
sC kontrola s rozpouštědlem.
Pipettes with widened openings to collect eggs;
ATLAS UKAZATELŮ LETALITY PRO ZKOUŠKU AKUTNÍ TOXICITY NA EMBRYÍCH DANIA PRUHOVANÉHO
Glass vessels to prepare different test concentrations and dilution water (beakers, graduated flasks, graduated cylinders and graduated pipettes) or to collect zebrafish eggs (e.g. beakers, crystallisation dishes);
Následující hlavní ukazatele naznačují akutní toxicitu a následně uhynutí embryí: koagulace embrya, neoddělení ocasu, nepřítomnost tvorby somitů a nepřítomnost srdečního tepu.
If alternative exposure systems, such as flow-through (24) or passive dosing (25) are used for the conduct of the test, appropriate facilities and equipment are needed.
K ilustraci těchto ukazatelů byly vybrány následující mikroskopické snímky.
Glass or polystyrene test chambers should be used (e.g. 24-well plates with a 2,5-5 ml filling capacity per well).
Koagulace embrya:
In case adsorption to polystyrene is suspected (e.g., for non-polar, planar substances with high KOW), inert materials (glass) should be used to reduce losses due to adsorption (26).
Při osvětlení v jasném poli jsou na koagulovaných embryích dania pruhovaného viditelné různé neprůhledné útvary.
Test chambers should be randomly positioned in the incubator.
Obrázek 2
Water and test conditions
Nepřítomnost tvorby somitů:
Dilution of the maintenance water is recommended to achieve hardness levels typical of a wide variety of surface waters.
Třebaže je embryo dania pruhovaného ve věku 24 h na snímku a) opožděné ve vývoji přibližně o 10 h, vykazuje dobře vyvinuté somity (→), zatímco embryo na snímku b) nevykazuje žádné známky tvorby somitů (→).
Dilution water should be prepared from reconstituted water (27).
Ačkoli embryo dania pruhovaného ve věku 48 h na snímku c) vykazuje výrazný otok žloutkového váčku (*), zároveň je zřetelně patrná tvorba somitů (→), zatímco embryo dania pruhovaného ve věku 96 h vyobrazené na snímku d) nevykazuje žádné známky tvorby somitů (→).
The resulting degree of hardness should be equivalent to 100-300 mg/l CaCO3 in order to prevent excessive precipitation of calcium carbonate.
Na embryu vyobrazeném na snímku d) si povšimněte také zakřivení páteře (skoliózy) a otoku perikardu (*).
Other well-characterised surface or well water may be used.
pohled z boku (a: →; embryo dania pruhovaného ve věku 96 h).
The reconstituted water may be adapted to maintenance water of low hardness by dilution with deionised water up to a ratio of 1:5 to a minimum hardness of 30-35 mg/l CaCO3.
Povšimněte si také neexistence očního pupenu (*).
The water is aerated to oxygen saturation prior to addition of the test chemical.
Obrázek 4
Temperature should be kept at 26 ± 1 °C, in the wells, throughout the test.
Nepřítomnost srdečního tepu je z povahy věci obtížné prokázat z mikroskopického snímku.
The pH should be in a range between pH 6,5 and 8,5, and not vary within this range by more than 1,5 units during the course of the test.
Na nepřítomnost srdečního tepu ukazuje to, že nedochází ke stahům srdce (dvojitá šipka).
If the pH is not expected to remain in this range, then pH adjustment should be done prior to initiating the test.
Nepohyblivost krevních buněk např. v břišní aortě (→ na vloženém snímku) není ukazatelem nepřítomnosti srdečního tepu.
The pH adjustment should be made in such a way that the stock solution concentration is not changed to any significant extent and that no chemical reaction or precipitation of the test chemical is caused.
Povšimněte si také neexistence tvorby somitů v tomto embryu (*, spíše homogenní než členitý vzhled svalových tkání).
Use of hydrogen chloride (HCl) and sodium hydroxide (NaOH) to correct pH in the solutions containing the test chemical is recommended.
Pozorování pro zaznamenání nepřítomnosti srdečního tepu by mělo trvat nejméně jednu minutu při minimálně 80 násobném zvětšení.
Test solutions of the selected concentrations can be prepared, e.g. by dilution of a stock solution.
C.50 Zkouška toxicity na Myriophyllum spicatum bez sedimentu
The stock solutions should preferably be prepared by simply mixing or agitating the test chemical in the dilution water by mechanical means (e.g. stirring and/or ultra-sonification).
Tato zkušební metoda je rovnocenná Pokynu OECD pro zkoušení (TG) č. 238 (2014).
If the test chemical is difficult to dissolve in water, procedures described in the OECD Guidance Document No. 23 for handling difficult substances and mixtures should be followed (28).
Je určena k hodnocení toxicity chemických látek pro Myriophyllum spicatum (stolístek klasnatý), vodní dvouděložnou rostlinu z čeledi Haloragaceae rostoucí pod hladinou.
The use of solvents should be avoided, but may be required in some cases in order to produce a suitably concentrated stock solution.
Je založena na stávající zkušební metodě ASTM (1) upravené na zkušební systém bez sedimentu pro odhadování vlastní ekotoxicity zkoušených chemických látek (nezávisle na vztahu rozdělení a chování zkoušené chemické látky ve vodě a v sedimentu).
Where a solvent is used to assist in stock solution preparation, its final concentration should not exceed 100 μl/l and should be the same in all test vessels.
Zkušební systém bez sedimentu není z analytického hlediska složitý (má pouze vodní fázi) a výsledky lze analyzovat souběžně a/nebo v srovnání s výsledky získanými ve zkoušce s druhy Lemna (3); požadované sterilní podmínky navíc umožňují udržovat účinky mikroorganismů a řas (příjem/rozklad chemické látky) na co možná nejnižší úrovni.
When a solvent is used, an additional solvent control is required.
Tato zkouška nenahrazuje jiné zkoušky toxicity ve vodním prostředí; měla by je spíše doplňovat, aby bylo možné provést úplnější posouzení nebezpečí a rizik pro vodní rostliny.
Maintenance of brood fish
Tato zkušební metoda byla validována mezinárodní mezilaboratorní porovnávací zkouškou (4).
A breeding stock of unexposed, wild-type zebrafish with well-documented fertilisation rate of eggs is used for egg production.
Podrobně se popisuje zkoušení s obnovením (semistatické) a bez obnovení (statické) zkušebního roztoku.
Fish should be free of macroscopically discernible symptoms of infection and disease and should not have undergone any pharmaceutical (acute or prophylactic) treatment for 2 months before spawning.
Další pokyny jsou uvedeny v (5).
Optimal filtering rates should be adjusted; excess filtering rates causing heavy perturbation of the water should be avoided.
Tato zkušební metoda se používá na látky, pro které byla zkušební metoda validována (viz podrobnosti ve zprávě o mezilaboratorní porovnávací zkoušce (4)), nebo na přípravky či známé směsi; je-li zkoušena směs, její složky by měly být v co možná největší míře identifikovány a kvantifikovány.
For feeding conditions, see Appendix 2.
Zkušební metoda s Myriophyllum spicatum bez sedimentu doplňuje zkoušku toxicity na Myriophyllum spicatum v systému voda-sediment (6).
Surplus feeding should be avoided, and water quality and cleanness of the aquaria should be monitored regularly and be reset to the initial state, if necessary.
Před použitím této zkušební metody na zkoušení směsi pro zamýšlené použití v právních předpisech by se mělo zvážit, zda tato metoda může pro tento účel poskytnout přiměřené výsledky, a pokud ano, proč tomu tak je.
Proficiency Testing
Nepřetržitě rostoucí kultury rostlin Myriophyllum spicatum (pouze v modifikovaném Andrewsově médiu, viz dodatek 2) se po dobu 14 dnů nechají růst jako monokultury v různých koncentracích zkoušené látky ve zkušebním systému bez sedimentu.
As a reference chemical, 3,4-dichloroaniline (used in the validation studies (1)(2)), should be tested in a full concentration-response range to check the sensitivity of the fish strain used, preferably twice a year.
Cílem zkoušky je kvantifikovat účinky související s chemickou látkou na vegetativní růst během tohoto období, a to na základě hodnocení zvolených proměnných měření.
For any laboratory initially establishing this assay, the reference chemical should be used.
Proměnnými měření jsou nárůst délky výhonků, bočních větví a kořenů, vývoj čerstvé hmotnosti a hmotnosti sušiny a zvýšení počtu přeslenů.
A laboratory can use this chemical to demonstrate their technical competence in performing the assay prior to submitting data for regulatory purposes.
Kromě toho se berou v úvahu výrazné kvalitativní změny ve zkušebních organismech, jako např. znetvoření nebo chloróza a nekróza, které se projevují zežloutnutím nebo bílým a hnědým zbarvením.
Egg production
Pro kvantifikaci účinků souvisejících s chemickou látkou se růst ve zkušebních roztocích porovnává s růstem v kontrolních vzorcích a stanoví se koncentrace způsobující stanovenou x % inhibici růstu a vyjádří se jako ECx; „x“ může být jakákoli hodnota v závislosti na právních požadavcích, např. EC10, EC20, EC50.
Zebrafish eggs may be produced via spawning groups (in individual spawning tanks) or via mass spawning (in the maintenance tanks).
Je třeba poznamenat, že odhady hodnot EC10 a EC20 jsou spolehlivé a vhodné pouze ve zkouškách, kde variační koeficient u kontrolních rostlin klesne pod odhadovanou úroveň účinku, tj. pro spolehlivý odhad EC20 by variační koeficient měl být < 20 %.
In the case of spawning groups, males and females (e.g., at a ratio of 2:1) in a breeding group are placed in spawning tanks a few hours before the onset of darkness on the day prior to the test.
Měla by být stanovena průměrná specifická růstová rychlost (odhadnutá na základě posouzení délky hlavního výhonku a tří dalších proměnných měření) a výtěžek (odhadnutý na základě růstu délky hlavního výhonku a tří dalších proměnných měření) u neexponovaných a exponovaných rostlin.
Since spawning groups of zebrafish may occasionally fail to spawn, the parallel use of at least three spawning tanks is recommended.
Specifická růstová rychlost (r) se následně použije pro stanovení hodnot ErCx (např. ErC10, ErC20, ErC50) a výtěžek (y) se použije pro stanovení EyCx (např. EyC10, EyC20, EyC50).
To avoid genetic bias, eggs are collected from a minimum of three breeding groups, mixed and randomly selected.
Měla by být k dispozici analytická metoda s odpovídající citlivostí pro kvantifikaci zkoušené chemické látky ve zkušebním médiu.
To prevent predation of eggs by adult zebrafish, the spawn traps are covered with inert wire mesh of appropriate mesh size (approx.
Užitečnými informacemi o zkoušené chemické látce pro účely stanovení zkušebních podmínek mohou být strukturní vzorec, čistota a nečistoty, rozpustnost ve vodě, stabilita ve vodě a na světle, kyselá disociační konstanta (pKa), rozdělovací koeficient oktanol/voda (Kow), tlak par a biologická rozložitelnost.
2 ± 0,5 mm).
Rozpustnost ve vodě a tlak par lze použít pro výpočet Henryho konstanty, která určí pravděpodobnost významných ztrát zkoušené chemické látky během doby zkoušky.
If considered necessary, artificial plants made of inert material (e.g., plastic or glass) can be fixed to the mesh as spawning stimulus (3)(4)(5)(23)(35).
Toto pomáhá zjistit, zda by se měla podniknout konkrétní opatření ke kontrole takových ztrát.
Weathered plastic materials which do not leach (e.g., phthalates) should be used.
Jestliže nejsou informace o rozpustnosti a stabilitě zkoušené látky jisté, doporučuje se, aby byly hodnoceny za podmínek zkoušky, tj. v růstovém médiu, při teplotě a režimu osvětlení, které mají být při zkoušce použity.
Mating, spawning and fertilisation take place within 30 min after the onset of light and the spawn traps with the collected eggs can be carefully removed.
Zvláště důležitá je kontrola pH zkušebního média, např. zkoušejí-li se kovy nebo látky, které jsou hydrolyticky nestálé.
Rinsing eggs with reconstituted water after collection from spawning traps is recommended.
Další pokyny pro zkoušení chemických látek s fyzikálně-chemickými vlastnostmi, které činí jejich zkoušení obtížné, jsou uvedeny v pokynu OECD (5).
Egg differentiation
Aby byla zkouška platná, musí být doba, za kterou se zdvojnásobí délka hlavního výhonku v kontrolním vzorku, kratší než 14 dnů.
At 26 °C, fertilised eggs undergo the first cleavage after about 15 min and the consecutive synchronous cleavages form 4, 8, 16 and 32 cell blastomers (see Appendix 3)(35).
Více než 50 % opakování kontrolní skupiny je po expoziční dobu 14 dnů udržováno ve sterilních podmínkách, což znamená, že tato opakování jsou očividně prosta kontaminace jinými organismy, například řasami, houbami a bakteriemi (čistý roztok).
Exposure should be such that ± 20 % of the nominal chemical concentration are maintained throughout the test.
Poznámka: Pokyny ohledně toho, jak posuzovat sterilitu, jsou uvedeny ve zprávě o mezilaboratorní porovnávací zkoušce (4).
If this is not possible in a static system, a manageable semi-static renewal interval should be applied (e.g. renewal every 24 hrs).
REFERENČNÍ CHEMICKÁ LÁTKA
In these cases exposure concentrations need to be verified as a minimum in the highest and lowest test concentrations at the beginning and the end of each exposure interval (see paragraph 36).
Jako prostředek kontroly zkušebního postupu lze zkoušet referenční látku (látky), například 3,5-dichlorfenol použitý v mezilaboratorní porovnávací zkoušce; podle údajů mezilaboratorní porovnávací zkoušky se střední hodnoty EC50 3,5-DCP pro různé proměnné odezvy (viz odstavce 37–40 této zkušební metody) pohybují mezi 3,2 mg/l a 6,9 mg/l (podrobnosti o intervalech spolehlivosti pro každou z těchto hodnot – viz zpráva o mezilaboratorní porovnávací zkoušce).
If an exposure concentration of ± 20 % of the nominal concentrations cannot be maintained, all concentrations need to be measured at the beginning and the end of each exposure interval (see paragraph 36).
Doporučuje se zkoušet referenční chemickou látku nejméně dvakrát ročně nebo – pokud se zkoušení provádí s menší četností – souběžně se stanovováním toxicity zkoušené chemické látky.
Upon renewal, care should be taken that embryos remain covered by a small amount of old test solutions to avoid drying.
Veškeré vybavení přicházející do styku se zkušebními médii by mělo být vyrobeno ze skla nebo jiného chemicky inertního materiálu.
The test design can be adapted to meet the testing requirements of specific substances (e.g,. flow-through (24) or passive dosing systems (25) for easily degradable or highly adsorptive substances (29), or others for volatile substances (36)(37)).
Skleněné pomůcky použité pro kultivační a zkušební účely je zapotřebí vyčistit od chemických kontaminantů, které by mohly unikat do zkušebního média, a měly by být sterilní.
In any case, care should be taken to minimise any stress to the embryos.
Zkušební nádoby by měly být dostatečně dlouhé, aby mohly výhonky v kontrolních nádobách ve vodní fázi růst, aniž by na konci zkoušky dosáhly hladiny zkušebního média.
Test chambers should be conditioned at least for 24 hrs with the test solutions prior to test initiation.
Doporučují se silnostěnné zkušební zkumavky z borokřemičitého skla bez výčnělků, s vnitřním průměrem přibližně 20 mm, o délce přibližně 250 mm, s hliníkovým víčkem.
Test conditions are summarised in Appendix 2.
Jelikož modifikované Andrewsovo médium obsahuje sacharózu (která povzbuzuje růst hub a bakterií), musí se zkušební roztoky připravovat za sterilních podmínek.
Normally, five concentrations of the test chemical spaced by a constant factor not exceeding 2,2 are required to meet statistical requirements.
Veškeré kapaliny a vybavení se před použitím sterilizují.
Justification should be provided, if fewer than five concentrations are used.
Sterilizace se provádí horkým vzduchem (210 °C) po dobu 4 hodin nebo v autoklávu po dobu 20 minut při teplotě 121 °C.
The highest concentration tested should preferably result in 100 % lethality, and the lowest concentration tested should preferably give no observable effect, as defined in paragraph 28.
Všechny baňky, misky, mísy atd. a další vybavení navíc těsně před použitím projdou ošetřením plamenem na sterilním laboratorním stole.
A range-finding test before the definitive test allows selection of the appropriate concentration range.
Kultury a zkušební nádoby by se měly přechovávat odděleně.
The range-finding is typically performed using ten embryos per concentration.
Toho se nejlépe dosáhne pomocí samostatných komor, inkubátorů či místností pro růst za podmínek prostředí.
The following instructions refer to performing the test in 24-well plates.
Osvětlení a teplota by měly být regulovatelné a měly by se udržovat na stálé úrovni.
If different test chambers (e.g. small Petri dishes) are used or more concentrations are tested, instructions have to be adjusted accordingly.
Zkušební organismy
Details and visual instructions for allocation of concentrations across 24-well plates are available in paragraph 27 and Appendix 4, Figure 1.
Myriophyllum spicatum (stolístek klasnatý) – vodní dvouděložná rostlina rostoucí pod hladinou – je druh stolístku z čeledi Haloragaceae (zrnulovité).
Dilution water controls are required both as negative control and as internal plate controls.
Od června do srpna jeho nenápadné růžově bílé květy vyrůstají nad vodní hladinu.
If more than 1 dead embryo is observed in the internal plate control, the plate is rejected, thus reducing the number of concentrations used to derive the LC50.
Rostliny jsou zakořeněny v zemi soustavou pevných oddenků a lze se s nimi setkat po celé severní polokouli v eutrofních, avšak neznečištěných stojatých vodách s větším obsahem vápníku a s bahnitým substrátem.
If an entire plate is rejected the ability to evaluate and discern observed effects may become more difficult, especially if the rejected plate is the solvent control plate or a plate in which treated embryos are also affected.
Myriophyllum spicatum upřednostňuje sladkou vodu, ale vyskytuje se i v brakických vodách.
In the first case the test must be repeated.
Pro zkoušku toxicity bez sedimentu jsou vyžadovány sterilní rostliny.
In the second one the loss of an entire treatment group(s) due to internal control mortality may limit the ability to evaluate effects and determine LC50 values.
Nemá-li zkušební laboratoř standardní kultury Myriophyllum spicatum, lze získat sterilní rostlinný materiál z jiné laboratoře nebo by bylo možné (nesterilní) rostlinný materiál odebrat v terénu nebo získat od komerčního dodavatele; pocházejí-li rostliny z terénu, předpokládá se taxonomické ověření druhu.
A positive control at a fixed concentration of 4 mg/l 3,4-dichloroaniline is performed with each egg batch used for testing.
Jestliže se sběr provádí z terénu, nebo jsou rostliny dodány komerčním dodavatelem, měly by se sterilizovat (1) a kultivovat ve stejném médiu, jaké se používá ke zkoušení, minimálně po dobu osmi týdnů před použitím.
In case a solvent is used, an additional group of 20 embryos is exposed to the solvent on a separate 24-well plate, thus serving as a solvent control.
Terénní místa použitá pro sběr výchozích kultur musí být prostá zřejmých zdrojů kontaminace.
To consider the test acceptable, the solvent should be demonstrated to have no significant effects on time to hatch, survival, nor produce any other adverse effects on the embryos (cf. paragraph 8c).
Při sběru Myriophyllum spicatum v terénu je třeba věnovat velkou pozornost tomu, aby byl získán správný druh, zejména v oblastech, kde se může zkřížit s jinými druhy Myriophyllum.
Start of exposure and duration of test
Pokud se získávají z jiné laboratoře, měly by se podobně uchovávat minimálně po tři týdny.
The test is initiated as soon as possible after fertilisation of the eggs and terminated after 96 hrs of exposure.
Ve zkušebním protokolu je vždy třeba uvést zdroj rostlinného materiálu a druhu použitého ke zkoušení.
The embryos should be immersed in the test solutions before cleavage of the blastodisc commences, or, at latest, by the 16 cell-stage.
Měly by se používat mladé, rychle rostoucí rostliny bez viditelných lézí či odbarvení (chlorózy).
Viable fertilised eggs should be separated from unfertilised eggs and be transferred to 24-well plates pre-conditioned for 24 hrs and refilled with 2 ml/well freshly prepared test solutions within 180 minutes post fertilisation.
Podrobnosti o přípravě zkušebního organismu jsou uvedeny v dodatku 4.
By means of stereomicroscopy (preferably ≥30-fold magnification), fertilised eggs undergoing cleavage and showing no obvious irregularities during cleavage (e.g. asymmetry, vesicle formation) or injuries of the chorion are selected.
Kultivace
For egg collection and separation, see Appendix 3, Fig. 1 and 3 and Appendix 4, Fig.
Nejméně 14 až 21 dnů před zkoušením se dostatečný počet zkušebních organismů asepticky převede do čerstvého sterilního média a kultivuje se 14 až 21 dnů za podmínek zkoušky jako předkultura.
2.
Podrobnosti o přípravě předkultury jsou uvedeny v dodatku 4.
Distribution of eggs over the 24-well plates
Pro Myriophyllum spicatum ve zkušebním systému bez sedimentu se doporučuje použít pouze jedno živné médium, jak je popsáno v dodatku 2.
Eggs are distributed to well plates in the following numbers (see also Appendix 4, Fig.
Pro kultivaci a zkoušení Myriophyllum spicatum se doporučuje modifikace Andrewsova média, jak je popsáno v (1).
1)
Modifikované Andrewsovo médium se připraví z pěti samostatně připravených zásobních živných roztoků s přidáním 3 % sacharózy.
20 eggs on one plate for each test concentration;
Podrobnosti o přípravě média jsou uvedeny v dodatku 2.
20 eggs as solvent control on one plate (if necessary);
Pro získání zkušebních roztoků (odpovídajícím zředěním) je zapotřebí desetinásobně koncentrované, modifikované Andrewsovo médium.
20 eggs as positive control on one plate;
Složení tohoto média je uvedeno v dodatku 2.
4 eggs in dilution water as internal plate control on each of the above plates;
Zkušební roztoky se obvykle připravují ředěním zásobního roztoku.
24 eggs in dilution water as negative control on one plate.
Zásobní roztoky zkoušené chemické látky se zpravidla připraví rozpuštěním chemické látky v demineralizované (tj. destilované nebo deionizované) vodě.
Apical observations performed on each tested embryo include: coagulation of embryos, lack of somite formation, non-detachment of the tail, and lack of heartbeat (Table 1).
Doplnění živin se dosáhne pomocí desetinásobně koncentrovaného, modifikovaného Andrewsova média.
These observations are used for the determination of lethality: Any positive outcome in one of these observations means that the zebrafish embryo is dead.
Zásobní roztoky zkoušené chemické látky lze sterilizovat v autoklávu při teplotě 121 °C po dobu 20 minut, nebo sterilní filtrací za předpokladu, že použitá technika sterilizace zkoušenou chemickou látku nedenaturuje.
Additionally, hatching is recorded in treatment and control groups on a daily basis starting from 48 hrs.
Zkušební roztoky lze též připravit ve sterilní demineralizované vodě nebo médiu za sterilních podmínek.
Observations are recorded every 24 hrs, until the end of the test.
Při volbě postupu sterilizace zásobních roztoků zkoušené chemické látky by měla být vzata v úvahu její teplotní stabilita a adsorpce na různé povrchy.
Apical observations of acute toxicity in zebrafish embryos 24-96 hrs post fertilisation
Vzhledem k tomu se doporučuje, aby byly zásobní roztoky připraveny za sterilních podmínek, tj. s použitím sterilního materiálu pro rozpuštění zkoušené chemické látky za sterilních podmínek (např. sterilizace plamenem, digestoř s laminárním prouděním atd.) v sterilní vodě.
Exposure times
Tato metoda přípravy sterilních zásobních roztoků je platná pro látky i směsi.
24 hrs