natgillin/translations-raw huggingface dataset:
V ojedinělých případech, kdy je zjištěna statisticky nevýznamná indukce nad 1,5násobnou hodnotou, po níž následuje vyšší koncentrace se statisticky významnou indukcí, se výsledky získané z tohoto opakování považují za platné a pozitivní pouze v případě, že při koncentraci, jež není cytotoxická, byla získána statisticky významná indukce vyšší než prahová hodnota 1,5).
For each test chemical and positive control substance, one experiment is needed to derive a prediction (positive or negative), consisting of at least two independent repetitions containing each three replicates (i.e. n = 6).
Kritéria přijatelnosti
In case of discordant results between the two independent repetitions, a third repetition containing three replicates should be performed (i.e. n = 9).
Při použití zkoušky KeratinoSensTM by měla být splněna tato kritéria přijatelnosti: Zaprvé, indukce aktivity luciferázy získaná s pozitivní kontrolou, cinnamaldehydem, by měla být statisticky významná nad prahovou hodnotou 1,5 (tj. s použitím T-testu) alespoň při jedné ze zkoušených koncentrací (od 4 do 64 μM).
Each independent repetition is performed on a different day with fresh stock solution of test chemicals and independently harvested cells.
Zadruhé, hodnota EC1,5 by měla ležet mezi dvěma směrodatnými odchylkami od historické střední hodnoty zkušebního zařízení (např. mezi 7 μM a 30 μM na základě souboru údajů použitého pro validaci), která by měla být pravidelně aktualizována.
Cells may come from the same passage however.
Dále, průměrná indukce ve třech replikách s cinnamaldehydem při koncentraci 64 μM by měla být mezi 2 a 8.
After seeding as described in paragraph 20, cells are grown for 24 hours in the 96-wells microtiter plates.
Není-li toto posledně uvedené kritérium splněno, měla by se pečlivě zkontrolovat křivka dávka-účinek cinnamaldehydu a zkoušky lze přijmout pouze v případě, že existuje jednoznačný vztah dávka-účinek s rostoucí indukcí aktivity luciferázy při rostoucích koncentracích v pozitivní kontrole.
The medium is then removed and replaced with fresh culture medium (150 μl culture medium containing serum but without Geneticin in the case of KeratinoSensTM) to which 50 μl of the 25 fold diluted test chemical and control substances are added.
Průměrný variační koeficient u naměřených údajů luminiscence v negativní kontrole (s rozpouštědlem) s DMSO by pak měl být pod hodnotou 20 % při každém opakování, které se skládá z 6 jamek testovaných třikrát.
At least one well per plate should be left empty (no cells and no treatment) to assess background values.
Je-li variabilita vyšší, výsledky se nepoužijí.
The treated plates are then incubated for about 48 hours at 37 ± 1 °C in the presence of 5 % CO2 in the KeratinoSensTM assay.
Interpretace výsledků a predikční model
Care should be taken to avoid evaporation of volatile test chemicals and cross-contamination between wells by test chemicals by e.g. covering the plates with a foil prior to the incubation with the test chemicals.
existuje zjevný celkový vztah dávka-účinek při indukci luciferázy (nebo dvoufázová odezva, jak uvedeno v odstavci 33).
the use of a luciferase substrate with sufficient light output to ensure sufficient sensitivity and low variability.
Rovněž tak negativní výsledek získaný s koncentracemi < 1000 μM (nebo < 200 μg/ml v případě zkoušených chemických látek bez definované molekulové hmotnosti) by také měl být považován za nepřesvědčivý (viz odstavec 11).
After the 48 hour exposure time with the test chemical and control substances in the KeratinoSensTM assay, cells are washed with a phosphate buffered saline, and the relevant lysis buffer for luminescence readings added to each well for 20 min at room temperature.
Predikční model používaný při zkoušce KeratinoSensTM.
In case alternative settings are used, e.g. depending on the model of luminometer used, these should be justified.
Předpověď KeratinoSensTM by měla být hodnocena v rámci přístupu IATA a v souladu s ustanoveními odstavců 9 a 11.
Furthermore, a glow substrate may also be used provided that the quality control experiment of Appendix 3 is successfully fulfilled.
V ojedinělých případech zkoušené chemické látky, jež indukují aktivitu luciferázy na úrovni velmi blízké cytotoxickým úrovním, mohou být při některých opakováních pozitivní na necytotoxických úrovních (tj. při koncentraci určující hodnotu EC1,5 menší než (<) koncentrace IC30), a při jiných opakováních mohou být pozitivní pouze na cytotoxických úrovních (tj. při koncentraci určující hodnotu EC1,5 větší než (>) koncentrace IC30).
Cytotoxicity Assessment
Takové zkoušené chemické látky musí být přezkoušeny s užší analýzou vztahu dávka-účinek a za použití nižšího ředicího faktoru (např. zředění 1:1,33 nebo √2 (= 1,41) mezi jamkami), aby bylo možné stanovit, zda došlo k indukci na cytotoxických úrovních, či nikoli (9).
For the KeratinoSensTM cell viability assay, medium is replaced after the 48 hour exposure time with fresh medium containing MTT (3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, Thiazolyl blue tetrazolium bromide; CAS No. 298-93-1) and cells incubated for 4 hours at 37 °C in the presence of 5 % CO2.
fyzický vzhled, rozpustnost ve vodě, rozpustnost v DMSO, molekulová hmotnost a další důležité fyzikálně-chemické vlastnosti, v rozsahu, v jakém jsou tyto informace dostupné,
The MTT medium is then removed and cells are lysed (e.g. by adding 10 % SDS solution to each well) overnight.
fyzický vzhled, rozpustnost ve vodě, rozpustnost v DMSO, a další důležité fyzikálně-chemické vlastnosti, v rozsahu, v jakém jsou tyto informace dostupné,
After shaking, the absorption is measured at i.e. 600 nm with a photometer.
případně fyzický vzhled, rozpustnost ve vodě, rozpustnost v DMSO, molekulová hmotnost a další důležité fyzikálně-chemické vlastnosti, v rozsahu, v jakém jsou tyto informace dostupné,
The following parameters are calculated in the KeratinoSensTM assay:
Negativní kontrola (kontrola vehikula):
the maximal average fold induction of luciferase activity (Imax) value observed at any concentration of the tested chemical and positive control;
chemická identifikace, např. název (názvy) IUPAC nebo CAS, číslo (čísla) CAS a/nebo jiné identifikátory,
the EC1,5 value representing the concentration for which induction of luciferase activity is above the 1,5 fold threshold (i.e. 50 % enhanced luciferase activity) was obtained; and
fyzický vzhled, molekulová hmotnost a další důležité fyzikálně-chemické vlastnosti v případě použití jiných negativních kontrol / vehikul, než které jsou uvedeny v této zkušební metodě, a to v rozsahu, v jakém jsou tyto informace dostupné,
the IC50 and IC30 concentration values for 50 % and 30 % reduction of cellular viability.
zdůvodnění volby rozpouštědla pro každou zkoušenou chemickou látku.
Fold luciferase activity induction is calculated by Equation 1, and the overall maximal fold induction (Imax) is calculated as the average of the individual repetitions.
Podmínky zkušební metody
Equation 1:
popis použité zkušební metody,
Fold induction
použité buněčné linie, podmínky skladování a zdroj (např. zařízení, z něhož byly získány),
Lsample
počet pasáží a míra konfluence buněk použitých ke zkoušení,
Lblank
použitý luminometr (např. model), včetně nastavení přístroje, použitý substrát pro luciferázu a prokázání přiměřeného měření luminiscence na základě kontrolního testu, který je popsán v dodatku 3,
where
postup použitý pro prokázání způsobilosti laboratoře k provádění této zkušební metody (např. zkoušením vhodných látek) nebo pro prokázání reprodukovatelného provedení této zkušební metody v průběhu doby.
L sample
Postup zkoušky
is the luminescence reading in the test chemical well
počet opakování a použitých replik,
L blank
koncentrace zkoušených chemických látek, použitý postup aplikace a doba expozice (pokud se liší od doporučených),
is the luminescence reading in the blank well containing no cells and no treatment
Tabulka s uvedením hodnot Imax, EC1,5 a životaschopnosti (tj. IC50, IC30) získaných se zkoušenými chemickými látkami a v pozitivních kontrolách při každém opakování, a rovněž středních hodnot (Imax: průměr; hodnoty EC1,5 a životaschopnosti: geometrický průměr) a směrodatných odchylek vypočtených z údajů získaných při všech opakováních, s uvedením hodnocení zkoušené chemické látky podle predikčního modelu,
L solvent
získaný variační koeficient s údaji o luminiscenci naměřenými v negativní kontrole při každém pokusu,
is the average luminescence reading in the wells containing cells and solvent (negative) control
graf zobrazující křivky dávka- účinek pro indukci aktivity luciferázy a životaschopnost,
,5 is calculated by linear interpolation according to Equation 2, and the overall EC1,5 is calculated as the geometric mean of the individual repetitions.
případně popis jakýchkoli jiných důležitých zjištění z pozorování.
Equation 2:
diskuse o výsledcích získaných za pomoci zkoušky KeratinoSensTM,
is the lowest concentration in μM with > 1,5 fold induction
diskuse o výsledcích zkušební metody v rámci IATA, jsou-li k dispozici jiné příslušné informace.
is the highest concentration in μM with < 1,5 fold induction
Dostupné na: http://www.unece.org/trans/danger/publi/ghs/ghs_rev05/05files_e.html.
is the fold induction measured at the lowest concentration with > 1,5 fold induction (mean of three replicate wells)
OECD Environment, Health and Safety publications, Series on Testing and Assessment No.
is the fold induction at the highest concentration with < 1,5 fold induction (mean of three replicate wells)
OECD, Paris.
Viability is calculated by Equation 3:
Kapitola B.42 této přílohy: Senzibilizace kůže: zkouška s vyšetřením lokálních lymfatických uzlin.
Equation 3:
Kapitola B.50 této přílohy: Senzibilizace kůže: zkouška s vyšetřením lokálních lymfatických uzlin: DA.
Viability
Kapitola B.51 této přílohy: Senzibilizace kůže: zkouška s vyšetřením lokálních lymfatických uzlin: BrdU-ELISA.
Vsample
Recommendation on the KeratinoSensTM assay for skin sensitisation testing (Doporučení pro zkoušku KeratinoSensTM ke zkoušení senzibilizace kůže), 42 pp.
Vblank
Dostupné na: http://ihcp.jrc.ec.europa.eu/our_labs/eurl-ecvam/eurl-ecvam-recommendations/recommendation-keratinosens-skin-sensitisation.
Vsolvent
DB-ALM (INVITTOX) (2013) Protocol 155: KeratinoSensTM, 17 pp.
V sample
Dostupné na: http://ecvam-dbalm.jrc.ec.europa.eu/beta/index.cfm/methodsAndProtocols/index
is the MTT-absorbance reading in the test chemical well
OECD Guidelines for Chemical Testing No.
V blank
Tento výraz se často používá namísto výrazu „soulad“ a rozumí se jím podíl správných výsledků zkušební metody (29).
is the MTT-absorbance reading in the blank well containing no cells and no treatment
Antioxidační responzivní element (též nazývaný EpRE, elektrofilní responzivní element), je responzivní element, který se nachází v oblasti protisměrných promotorů mnohých cytoprotektivních genů a genů kódujících enzymy II. fáze.
V solvent
Je-li aktivován prostřednictvím transkripčního faktoru Nfr2, zprostředkovává transkripční indukci těchto genů.
is the average MTT-absorbance reading in the wells containing cells and solvent (negative) control
Interpolovaná koncentrace pro získání 1,5násobné indukce luciferázy.
and IC30 are calculated by linear interpolation according to Equation 4, and the overall IC50 and IC30 are calculated as the geometric mean of the individual repetitions.
Koncentrace vyvolávající snížení životaschopnosti buněk o 30 %.
Equation 4:
Koncentrace vyvolávající snížení životaschopnosti buněk o 50 %.
X is the % reduction at the concentration to be calculated (50 and 30 for IC50 and IC30)
Faktor maximální indukce aktivity luciferázy ve srovnání s (negativní) kontrolou s rozpouštědlem naměřený při jakékoli koncentraci zkoušené chemické látky.
is the lowest concentration in μM with > x % reduction in viability
(Kelch-like ECH-associated protein 1) je senzorový protein, který dokáže regulovat aktivitu transkripčního faktoru Nrf2.
is the highest concentration in μM with < x % reduction in viability
Za neindukovaných podmínek senzorový protein Keap1 směruje transkripční faktor Nrf2 na ubikvitinylaci a proteolytickou degradaci v proteazomu.
is the % viability at the lowest concentration with > x % reduction in viability
Kovalentní modifikace reaktivních reziduí cysteinu v Keap 1 prostřednictvím malých molekul může vést k disociaci Nrf2 z Keap1 (8) (10) (11).
is the % viability at the highest concentration with < x % reduction in viability
Nuclear factor (erythroid-derived 2)-like 2, je transkripční faktor zapojený do mechanismu antioxidační odpovědi.
For each concentration showing > 1,5 fold luciferase activity induction, statistical significance is calculated (e.g. by a two-tailed Student's t-test), comparing the luminescence values for the three replicate samples with the luminescence values in the solvent (negative) control wells to determine whether the luciferase activity induction is statistically significant (p < 0,05).
Není-li Nrf2 ubikvitinylován, hromadí se se v cytoplasmě a přesouvá se do jádra, kde se spojuje s ARE v oblasti protisměrných promotorů mnohých cytoprotektivních genů a vyvolává jejich transkripci (8) (10) (11).
The lowest concentration with > 1,5 fold luciferase activity induction is the value determining the EC1,5 value.
Relevantnost zahrnuje také posouzení přesnosti (shody) zkušební metody (29).
It is checked in each case whether this value is below the IC30 value, indicating that there is less than 30 % reduction in cellular viability at the EC1,5 determining concentration.
Hodnotí se na základě výpočtu laboratorní a mezilaboratorní reprodukovatelnosti a laboratorní opakovatelnosti (29).
It is recommended that data are visually checked with the help of graphs.
Shoda mezi výsledky získanými při zkoušení téže chemické látky za použití stejného zkušebního protokolu (viz spolehlivost) (29).
If no clear dose-response curve is observed, or if the dose-response curve obtained is biphasic (i.e. crossing the threshold of 1,5 twice), the experiment should be repeated to verify whether this is specific to the test chemical or due to an experimental artefact.
Podíl všech pozitivních/aktivních chemických látek, které jsou na základě zkušební metody správně zatříděny.
In case the biphasic response is reproducible in an independent experiment, the lower EC1,5 value (the concentration when the threshold of 1,5 is crossed the first time) should be reported.
Je měřítkem přesnosti zkušební metody, která poskytuje kategorické výsledky, a je důležitým prvkem při hodnocení relevantnosti zkušební metody (29).
In the rare cases where a statistically non-significant induction above 1,5 fold is observed followed by a higher concentration with a statistically significant induction, results from this repetition are only considered as valid and positive if the statistically significant induction above the threshold of 1,5 was obtained for a non-cytotoxic concentration.
Replika obsahující všechny složky zkušebního systému s výjimkou zkoušené chemické látky, ale včetně rozpouštědla, které se používá.
Finally, for test chemicals generating a 1,5 fold or higher induction already at the lowest test concentration of 0,98 μM, the EC1,5 value of < 0,98 is set based on visual inspection of the dose-response curve.
Používá se ke stanovení účinku na pozadí u vzorků exponovaných zkoušené chemické látce, která je rozpuštěna ve stejném rozpouštědle.
The following acceptance criteria should be met when using the KeratinoSensTM assay.
Podíl všech negativních/neaktivních chemických látek, které jsou na základě zkušební metody správně zatříděny.
First, the luciferase activity induction obtained with the positive control, cinnamic aldehyde, should be statistically significant above the threshold of 1,5 (e.g. using a T-test) in at least one of the tested concentrations (from 4 to 64 μM).
Je měřítkem přesnosti zkušební metody, která poskytuje kategorické výsledky, a je důležitým prvkem při hodnocení relevantnosti zkušební metody (29).
Second, the EC1,5 value should be within two standard deviations of the historical mean of the testing facility (e.g. between 7 μM and 30 μM based on the validation dataset) which should be regularly updated.
Zkušební metoda není nikdy validovaná v absolutním smyslu, ale pouze pro určitý konkrétní účel (29).
In addition, the average induction in the three replicates for cinnamic aldehyde at 64 μM should be between 2 and 8.
Senzibilizace kůže in vitro: zkušební metoda se stanovením luciferázy ARE-Nrf2
If the latter criterion is not fulfilled, the dose-response of cinnamic aldehyde should be carefully checked, and tests may be accepted only if there is a clear dose-response with increasing luciferase activity induction at increasing concentrations for the positive control.
Dříve než začnou laboratoře běžně používat tuto zkušební metodu, měly by prokázat odbornou způsobilost správným získáním předpokládané předpovědi KeratinoSensTM u 10 vhodných látek doporučených v tabulce 1 a získáním hodnot EC1,5 a IC50, které spadají do příslušného referenčního rozpětí, u nejméně 8 z 10 vhodných látek.
Finally, the average coefficient of variation of the luminescence reading for the negative (solvent) control DMSO should be below 20 % in each repetition which consists of 6 wells tested in triplicate.
Tyto látky pro prokázání způsobilosti byly vybrány tak, aby představovaly rozpětí účinků na nebezpečí senzibilizace kůže.
If the variability is higher, results should be discarded.
Jinými kritérii výběru bylo, aby byly komerčně dostupné, aby k nim byly k dispozici vysoce kvalitní referenční údaje získané in vivo a vysoce kvalitní údaje získané in vitro zkouškou KeratinoSensTM.
Interpretation of results and prediction model
Doporučené látky pro prokázání odborné způsobilosti k provádění zkoušky KeratinoSens™.
A KeratinoSensTM prediction is considered positive if the following 4 conditions are all met in 2 of 2 or in the same 2 of 3 repetitions, otherwise the KeratinoSensTM prediction is considered negative (Figure 1):
Vhodné látky
the Imax is higher than (>) 1,5 fold and statistically significantly different as compared to the solvent (negative) control (as determined by a two-tailed, unpaired Student's t-test);
Předpověď in vivo [1]
the cellular viability is higher than (>) 70 % at the lowest concentration with induction of luciferase activity above 1,5 fold (i.e. at the EC1,5 determining concentration);
KeratinoSens™ Předpověď [2]
the EC1,5 value is less than (<) 1000 μM (or < 200 μg/ml for test chemicals with no defined MW);
Referenční rozpětí EC1,5 (v μM) [3]
there is an apparent overall dose-response for luciferase induction (or a biphasic response as mentioned under paragraph 33).
Referenční rozpětí IC50 (v μM) [3]
If in a given repetition, all of the three first conditions are met but a clear dose-response for the luciferase induction cannot be observed, then the result of that repetition should be considered inconclusive and further testing may be required (Figure 1).
Propan-2-ol
In addition, a negative result obtained with concentrations < 1000 μM (or < 200 μg/ml for test chemicals with no defined MW) should also be considered as inconclusive (see paragraph 11).
Látka nesenzibilizující kůži
Figure 1
Kyselina salicylová
Prediction model used in the KeratinoSensTM assay.
Kyselina mléčná
A KeratinoSensTM prediction should be considered in the framework of an IATA and in accordance with the provision of paragraphs 9 and 11
Cinnamyl-alkohol
In rare cases, test chemicals which induce the luciferase activity very close to the cytotoxic levels can be positive in some repetitions at non-cytotoxic levels (i.e. EC1,5 determining concentration below (<) the IC30), and in other repetitions only at cytotoxic levels (i.e. EC1,5 determining concentration above (>) the IC30).
Látka senzibilizující kůži (slabě)
Such test chemicals shall be retested with more narrow dose-response analysis using a lower dilution factor (e.g. 1,33 or √2 (= 1,41) fold dilution between wells), to determine if induction has occurred at cytotoxic levels or not (9).
25–175
Physical appearance, water solubility, DMSO solubility, molecular weight, and additional relevant physicochemical properties, to the extent available;
Ethylenglykol-dimethakrylát
Physical appearance, water solubility, DMSO solubility and additional relevant physicochemical properties, to the extent available;
5–125
Physical appearance, water solubility, DMSO solubility, molecular weight, and additional relevant physicochemical properties, to the extent available and where applicable;
Benzothiazol-2-thiol
Negative (vehicle) control
Látka senzibilizující kůži (středně silně)
Chemical identification, such as IUPAC or CAS name(s), CAS number(s), and/or other identifiers;
25–250
Physical appearance, molecular weight, and additional relevant physicochemical properties in the case other negative controls / vehicles than those mentioned in this test method are used and to the extent available;
rom-2-(brommethyl)pentadinitril
Justification for choice of solvent for each test chemical.
Látka senzibilizující kůži (silně)
Test method conditions
20–100
Description of test method used;
4-(methylamino)fenol, hemisulfát
Cell line used, its storage conditions and source (e.g. the facility from which they were obtained);
20–200
Passage number and level of confluence of cells used for testing;
hlor-2,4-dinitrobenzen
Cell counting method used for seeding prior to testing and measures taken to ensure homogeneous cell number distribution (cf. paragraph 20);
Látka senzibilizující kůži (extrémně)
Luminometer used (e.g. model), including instrument settings, luciferase substrate used, and demonstration of appropriate luminescence measurements based on the control test described in Appendix 3;
5–20
The procedure used to demonstrate proficiency of the laboratory in performing the test method (e.g. by testing of proficiency substances) or to demonstrate reproducible performance of the test method over time.
Předpovědi nebezpečnosti (a potence) in vivo vycházejí z údajů ze zkoušek LLNA (13).
Test procedure
Potence in vivo je odvozena použitím kritérií střediskem ECETOC (24).
Number of repetitions and replicates used;
Předpověď KeratinoSens™ by měla být hodnocena v rámci přístupu IATA a v souladu s ustanoveními odstavců 9 a 11 této zkušební metody.
Test chemical concentrations, application procedure and exposure time used (if different than the one recommended)
Na základě dosavadních zaznamenaných hodnot (12).
Tabulation of Imax, EC1,5 and viability values (i.e. IC50, IC30) obtained for the test chemical and for the positive control for each repetition as well as the mean values (Imax: average; EC1,5 and viability values: geometric mean) and SD calculated using data from all individual repetitions and an indication of the rating of the test chemical according to the prediction model;
KONTROLA KVALITY MĚŘENÍ LUMINISCENCE
Coefficient of variation obtained with the luminescence readings for the negative control for each experiment;
Základní experiment k zajištění optimálních měření luminiscence při zkoušce KeratinoSensTM
A graph depicting dose-response curves for induction of luciferase activity and viability;
Pro zajištění spolehlivých výsledků při měření luminometrem jsou kriticky důležité tyto tři parametry:
Description of any other relevant observations, if applicable.
aby byl dostatečně citlivý a vykazoval stabilní hodnoty pozadí v kontrolních jamkách,
Discussion of the results obtained with the KeratinoSensTM assay;
aby nebyl na destičce žádný gradient v důsledku dlouhých dob odečtů a
Consideration of the test method results within the context of an IATA, if other relevant information is available.
aby v přilehlých jamkách nebyla žádná světelná kontaminace pocházející z jamek se silnou aktivitou.
Available at: http://www.unece.org/trans/danger/publi/ghs/ghs_rev05/05files_e.html.
Před zkoušením se doporučuje zajistit odpovídající měření luminiscence pomocí testování kontrolní destičky s níže uvedeným uspořádáním (trojitá analýza).:
OECD Environment, Health and Safety publications, Series on Testing and Assessment No. 168.
Uspořádání destičky při prvním přípravném pokusu
OECD, Paris.
Prázdný
Chapter B.42 of this Annex: Skin sensitization: Local Lymph Node assay.