natgillin/translations-raw huggingface dataset:
U jelečka velkohlavého se v den 21 expozice odebere vzorek samečků a samiček (2 samečci a 4 samičky z každé ze čtyř duplikátních nádrží) a z kontroly (kontrol) za účelem změření vitelogeninu a druhotných pohlavních znaků.
At 23 °C, the mites become sexually mature after 16 days (females) and 18 days (males), respectively (6).
Pro účely této zkoušky by nejvyšší zkušební koncentrace měla být stanovena na úrovni maximální tolerované koncentrace (MTC) určené na základě zkoušky ke zjištění rozsahu či jiných údajů o toxicitě, na úrovni 10 mg/l nebo na úrovni maximální rozpustnosti ve vodě, podle toho, která z hodnot je nejnižší.
The females carry over the sperms by the solenostom where they will be then transferred to the ovar.
Maximální tolerovaná koncentrace je definována jako nejvyšší zkušební koncentrace chemické látky, která vede k nižší než 10 % mortalitě.
In the ovar the sperms mature and will be stored.
Použití tohoto přístupu předpokládá, že existují empirické údaje o akutní toxicitě nebo jiné údaje o toxicitě, z nichž je možné maximální tolerovanou koncentraci odhadnout.
Fertilisation takes place only after maturation of the sperms in the ovar.
Odhad maximální tolerované koncentrace může být nepřesný a obvykle se požaduje nějaký odborný posudek.
The fertilised or unfertilised eggs will be deposited by the females in clumps or separately, preferably in crevices or holes.
Vyžadují se tři zkušební koncentrace odstupňované podle konstantního faktoru, který nepřekračuje 10, a kontrola s ředicí vodou (a v případě potřeby kontrola s rozpouštědlem).
Copulated females can bear juveniles of both sexes whereas from eggs of uncopulated females only male juveniles are hatching.
Doporučené rozmezí faktorů odstupňování je mezi 3,2 a 10.
During development to the adult four phases of development (egg — larvae, larvae — protonymph, protonymph — deutonymph, deutonymph — adult) are passed through.
Výběr a vážení zkušebních ryb
The egg is milky white, hyaline, elliptical and approximately 0,37 mm long with a solid mantle.
Je důležité minimalizovat rozdíly v hmotnostech ryb na začátku zkoušky.
According to (8), the larvae are between 0,42 - 0,45 mm in size.
Vhodná rozpětí velikostí ryb různých druhů doporučených pro tuto zkoušku jsou uvedena v dodatku 2.
They have only three pairs of legs.
Rozpětí individuálních hmotností samečků a samiček na začátku zkoušky by pro celou násadu ryb použitých ve zkoušce mělo být pokud možno ± 20 % aritmetického průměru hmotností stejného pohlaví.
In the head region palps and chelicers are developed.
Aby bylo možné odhadnout střední hodnotu hmotnosti, doporučuje se před zkouškou zvážit dílčí vzorek rybí populace.
The chelicers, having some few small denticles, are used to hatch from the egg.
Podmínky expozice
After the first moult, 1 - 2 days after hatching, the protonymphs are developed.
Doba trvání zkoušky je 21 dnů po předexpozičním období.
They are also white, the size is 0,45 - 0,62 mm (8) and they have four pairs of legs.
Doporučené předexpoziční období je jeden týden.
On the chelicers the teeth are completely present.
Ryby by měly být krmeny ad libitum dostatečným množstvím vhodného krmiva (dodatek 2), aby si udržely tělesnou kondici.
Beginning with that stadium the mites start to forage.
Je třeba dbát na to, aby nedošlo k růstu mikroorganismů a k zakalení vody.
For that reason the cuticula of the prey is pierced with the chelicers and a secretion for the extra intestinal digestion is emitted into the prey.
Obecně lze říci, že denní množství krmiva by mělo být rozděleno na dva nebo tři stejné díly a podáváno několikrát za den s odstupem alespoň tří hodin mezi dvěma krmeními.
The food mash can then be sucked by the mite.
Podávání v jedné větší porci je přijatelné zejména o víkendech.
The chelicers can also be used to rip bigger particles out of food nuggets (28).
12 hodin před odběrem vzorků / pitvou se ryby přestanou krmit.
After one further moult the deutonymphs are developed.
Rybí potrava by měla být vyhodnocena z hlediska přítomnosti kontaminantů, např. organochlorových pesticidů, polycyklických aromatických uhlovodíků (PAH) a polychlorovaných bifenylů (PCB).
They are 0,60 - 0,80 mm (8) in size and yellow to light brown in colour.
Měla by být vyloučena potrava se zvýšenou hladinou fytoestrogenů, která by zpochybnila reakci na známého agonistu estrogenu (např. 17-beta-estradiol) při zkoušce.
Beginning with that phase they can be separated into females and males.
Nespotřebovaná potrava a výkaly se ze zkušebních nádrží odstraňují alespoň dvakrát týdně, např. opatrným odsátím ze dna jednotlivých nádrží pomocí odsávačky.
After further ecdysis, during which time the animals are inactive and the brown shield is developing (approx. after 14 days) the mites are adult (28) (29) (30).Their life span is between 48 and 100 days at 25 °C (27).
Fotoperioda a teplota vody by měly vyhovovat zkušebním druhům (viz dodatek 2).
Appendix 8
Četnost analytických stanovení a měření
Summary and time schedule of the main actions to be taken in order to perform the Hypoaspis test
Před započetím předexpoziční doby je třeba zajistit řádné fungování systému dávkování chemických látek.
Time (days)
Měly by se stanovit všechny analytické metody, které budou zapotřebí, včetně dostatečných znalostí o stálosti chemických látek ve zkušebním systému.
test start = day 0
Během zkoušky se koncentrace zkoušené látky stanovují v pravidelných intervalech následujícím způsobem:
Activity / task
průtok zásobních roztoků toxické látky a ředicí vody se během zkoušky kontroluje nejlépe denně, avšak minimálně dvakrát týdně, a neměl by se v průběhu zkoušky měnit o více než 10 %.
Day – 35
Doporučuje se na počátku zkoušky a poté v týdenních intervalech měřit skutečné koncentrace zkoušené chemické látky ve všech nádržích.
to – 28
Doporučuje se zakládat výsledky na naměřených koncentracích.
Transfer females from stock culture to clean vessels to start synchronisation
Udržela-li se však koncentrace zkoušené chemické látky v roztoku během celé zkoušky uspokojivě v rozmezí ± 20 % jmenovité koncentrace, lze výsledky zakládat na jmenovitých nebo změřených hodnotách.
2 days later:
Může být nezbytné vzorky filtrovat (např. přes filtr s průměrem pórů 0,45 μm) nebo je odstředit.
removal of females
Bude-li toho zapotřebí, doporučuje se odstřeďování.
Twice or three times a week:
Neadsorbuje-li se zkoušená látka na filtry, je filtrace přijatelná.
supply with sufficient food
Teplota se měří pokud možno nepřetržitě alespoň v jedné zkušební nádrži.
Day – 5 (+/- 2)
V celém průběhu zkoušky nebo při jejím ukončení se posuzuje počet obecných reakcí (např. přežití) a základních biologických reakcí (např. hladiny vitelogeninu).
Prepare artificial soil
Měření a hodnocení těchto ukazatelů a jejich využití jsou popsány níže.
Day – 4 (+/- 2)
Přežití
Determine WHC of artificial soil
Ryby se v průběhu zkoušky prohlížejí denně, každý úhyn se zaznamená a uhynulé ryby se co nejdříve odstraní.
Dry over night
Uhynulé ryby v kontrolních ani v exponovaných nádržích se nenahrazují.
Next day:
Makroskopickým hodnocením gonád se určí pohlaví ryb, které uhynuly v průběhu zkoušky.
weigh samples and calculate WHC
Chování a vzhled
Day – 4 (+/– 2)
Jakékoli neobvyklé chování (v porovnání s kontrolními skupinami) se zaznamená.
Pre moisture artificial soil to achieve 20 - 30 % of WHC
Může se jednat o příznaky obecné toxicity včetně hyperventilace, nekoordinovaného plavání, ztráty rovnováhy a netypické nečinnosti nebo netypického příjmu potravy.
Start test:
Zaznamenají se rovněž vnější abnormality (např. krvácení, ztráta zbarvení).
add test chemical to artificial soil
Takovéto příznaky toxicity by měly být při interpretaci údajů pečlivě zváženy, neboť mohou ukazovat na koncentrace, při kterých biologické markery endokrinní aktivity nejsou spolehlivé.
Introduce 10 females to each replicate
Pozorované změny chování mohou rovněž poskytnout užitečné kvalitativní informace, které se mohou stát podnětem pro možné budoucí požadavky na zkoušky s rybami.
Weigh each replicate
Například u jelečka velkohlavého byla pozorována teritoriální agresivita u normálních samečků nebo maskulinizovaných samiček exponovaných androgenním látkám;
Set up abiotic controls for moisture content and pH, 2 replicates for each treatment
u dania pruhovaného se v důsledku expozice estrogenním nebo antiandrogenním látkám omezí nebo utlumí typické chování při páření a tření.
Dry moisture controls over night
Některé vzhledové charakteristiky (především zbarvení) se během manipulace mohou rychle měnit, a proto je důležité provádět kvalitativní pozorování ještě před odstraněním ryb ze zkušebního systému.
weigh moisture controls
Dosavadní zkušenosti s jelečkem velkohlavým naznačují, že některé chemické látky s endokrinním působením mohou zpočátku vyvolat změny těchto vnějších znaků:
measure pH of dried abiotic controls
zbarvení těla (světlé nebo tmavé), forma zbarvení (přítomnost svislých pruhů) a tvar těla (hlavy a hrudní oblasti).
Day 3, 6, 9, 12 (approx.)
Proto by pozorování fyzického vzhledu ryb měla být prováděna jak v průběhu zkoušky, tak na konci studie.
Supply each replicate with sufficient amount of prey organisms
Humánní usmrcení ryb
Weigh each replicate and eventually add evaporated water
V den 21, tj. při ukončení expozice, se ryby usmrtí přiměřeným množstvím trikainu (trikain methan sulfonát, Metacain, MS-222 (číslo CAS 886-86-2)), pufrovaného na koncentraci 100–500 mg/l roztokem NaHCO3 (hydrogenuhličitan sodný, číslo CAS 144-55-8) v koncentraci 300 mg/l, aby se snížilo podráždění sliznice; poté se odeberou vzorky krve nebo tkání za účelem stanovení vitelogeninu, jak je vysvětleno v části týkající se vitelogeninu.
Terminate test, set up extraction with all replicates plus extraction efficiency controls
Pozorování druhotných pohlavních znaků
Dry water content controls over night
Některé chemické látky s endokrinním působením mohou vyvolat změny v druhotných pohlavních znacích specifických pro jednotlivé druhy (např. počet pářicích hrbolků u samečků jelečka velkohlavého a bradavkovitých výběžků u samečků halančíka japonského).
weigh water content controls
Chemické látky s určitými účinky pak mohou způsobit abnormální výskyt druhotných pohlavních znaků u zvířat opačného pohlaví;
measure pH of dried controls
např. agonisté androgenního receptoru, jako je trenbolon, methyltestosteron a dihydrotestosteron, mohou způsobit, že se u samiček jelečka vyvinou výrazné pářicí hrbolky nebo že se u samiček halančíka japonského vyvinou bradavkovité výběžky (11)(20)(21).
Day 16
Bylo také zaznamenáno, že agonisté receptoru estrogenu mohou způsobit snížení počtu pářicích hrbolků a velikost dorzálních týlních polštářků u dospělých samečků (25)(26).
Terminate extraction
Takováto obecná morfologická pozorování mohou poskytnout užitečné kvalitativní a kvantitativní informace, které se mohou stát podnětem pro možné budoucí požadavky na zkoušky s rybami.
Day 16 +
Počet a velikost pářicích hrbolků u jelečka velkohlavého a bradavkovitých výběžků u halančíka japonského lze kvantifikovat buď přímo, anebo pomocí uchovávaných vzorků, což je praktičtější.
Record number of adults and juveniles in extracted material
Doporučené postupy pro hodnocení druhotných pohlavních znaků u jelečka velkohlavého jsou k dispozici v dodatku 5A a u halančíka japonského v dodatku 5B.
Report results on template tables
Vitelogenin (VTG)
Report testing procedure in test protocol sheets
Pomocí heparinizované mikrohematokritové kapiláry nebo alternativně srdeční punkcí pomocí injekční stříkačky se odebere krev z ocasní tepny/žíly.
C.37.
V závislosti na velikosti ryb se objem krve, který lze odebrat, zpravidla nachází v rozmezí 5–60 μl u jednoho jelečka velkohlavého a 5–15 μl u jednoho dania pruhovaného.
AY FISH ASSAY:
Odstředěním se z krve oddělí plazma a uskladní se s inhibitory proteázy při teplotě – 80 °C do doby, než je analyzována na vitelogenin.
A SHORT-TERM SCREENING FOR OESTROGENIC AND ANDROGENIC ACTIVITY, AND AROMATASE INHIBITION
Alternativně lze jako zdroj tkáně pro stanovení vitelogeninu u halančíka japonského použít játra a u dania pruhovaného homogenát hlavy/ocasu (dodatek 6).
This test method is equivalent to OECD test guideline (TG) 230 (2009).
Měření VTG by mělo být založeno na validované homologované metodě ELISA s použitím homologovaného standardu VTG a homologovaných protilátek.
The need to develop and validate a fish assay capable of detecting certain endocrine active chemicals originates from the concerns that environmental levels of chemicals may cause adverse effects in both humans and wildlife due to the interaction of these chemicals with the endocrine system.
Doporučuje se použít metodu schopnou odhalit tak nízké hladiny VTG, jako je několik málo ng na ml plazmy (nebo ng na mg tkáně, což je základní hladina u neexponovaných samečků ryb).
In 1998, the OECD initiated a high-priority activity to revise existing guidelines and to develop new guidelines for the screening and testing of potential endocrine disrupters.
Kontrola kvality analýzy vitelogeninu bude provedena za použití standardů, provedením slepých zkoušek a analýzou alespoň dvou duplikátních vzorků.
One element of the activity was to develop a Test Guideline for the screening of chemicals active on the endocrine system of fish species.
U každé metody ELISA by měla být provedena zkouška na vliv matrice (účinek ředění vzorku) s cílem určit minimální faktor ředění vzorku.
The 21-day Fish Endocrine Screening Assay underwent an extensive validation programme consisting of inter-laboratory studies with selected chemicals to demonstrate the relevance and reliability of the assay for the detection of oestrogenic and aromatase inhibiting chemicals (1, 2, 3, 4, 5) in the three fish species investigated (the fathead minnow, the Japanese medaka and the zebrafish);
Každá destička pro analýzu metodou ELISA, která se používá pro zkoušky VTG, by měla zahrnovat tyto vzorky pro kontrolu kvality:
the detection of androgenic activity is possible in the fathead minnow and the medaka, but not in the zebrafish.
alespoň 6 kalibračních standardů pokrývajících rozmezí očekávaných koncentrací vitelogeninu a alespoň jednu slepou zkoušku nespecifické vazby (analyzované na dvou duplikátních vzorcích).
This test method does not allow the detection of anti-androgenic chemicals.
Absorbance při těchto slepých zkouškách by neměla přesahovat 5 % maximální absorbance kalibrovaných standardů.
The validation work has been peer-reviewed by a panel of experts nominated by the National Coordinators of the Test Guideline Programme (6).
Analyzovat se budou alespoň dva alikvotní vzorky (duplikátní jamky) každého ředění.
The assay is not designed to identify specific mechanisms of hormonal disruption because the test animals possess an intact hypothalamic-pituitary-gonadal (HPG) axis, which may respond to chemicals that impact on the HPG axis at different levels.
Duplikátní jamky, které se liší o více než 20 %, by měly být analyzovány znovu.
The Fish Short Term Reproduction assay (OECD TG 229) includes fecundity and, as appropriate, gonadal histopathology for the fathead minnow, as well as all endpoints included in this test method.
Korelační koeficient (R2) u kalibračních křivek by měl být větší než 0,99.
OECD TG 229 provides a screening of chemicals which affect reproduction through various mechanisms including endocrine modalities.
Vysoká korelace však nepostačuje k tomu, aby zaručila odpovídající prognózu koncentrace ve všech rozmezích.
This should be considered prior to selecting the most appropriate test method.
Kromě dostatečně vysoké korelace u kalibrační křivky by koncentrace všech standardů vypočtené z kalibrační křivky měly ležet mezi 70 a 120 % jejich jmenovité koncentrace.
This test method describes an in vivo screening assay where sexually mature male and spawning female fish are held together and exposed to a chemical during a limited part of their life-cycle (21 days).
Pokud se jmenovité koncentrace od kalibrační regresní křivky odchylují (např. při nízkých koncentracích), může být pro adekvátní vyjádření údajů o absorbanci nezbytné rozdělit kalibrační křivku na nízké a vysoké rozpětí nebo použít nelineární model.
At termination of the 21-day exposure period, depending on the species used, one or two biomarker endpoint(s) are measured in males and females as indicators of oestrogenic, aromatase inhibition or androgenic activity of the test chemical;
Je-li křivka rozdělena, oba segmenty křivky by měly mít R2 > 0,99.
these endpoints are vitellogenin and secondary sexual characteristics.
Mez detekce (LOD) je definována jako koncentrace nejnižšího analytického standardu a mez stanovitelnosti (LOQ) je definována jako koncentrace nejnižšího analytického standardu vynásobená nejnižším faktorem ředění.
Vitellogenin is measured in fathead minnow, Japanese medaka and zebrafish, whereas secondary sex characteristics are measured in fathead minnow and Japanese medaka only.
Každý den, kdy se provádějí zkoušky vitelogeninu, se analyzuje obohacený vzorek vytvořený pomocí referenčního standardu pro opakovatelnost (dodatek 7).
This bioassay serves as an in vivo screening assay for certain endocrine modes of action and its application should be seen in the context of the “OECD Conceptual Framework for the Testing and Assessment of Endocrine Disrupting Chemicals” (28).
Poměr mezi očekávanou koncentrací a naměřenou koncentrací se zaznamená spolu s výsledky všech souborů zkoušek provedených v týž den.
INITIAL CONSIDERATIONS AND LIMITATIONS
Hodnocení reakcí biologických markerů pomocí analýzy rozptylu (ANOVA)
Vitellogenin is normally produced by the liver of female oviparous vertebrates in response to circulating endogenous oestrogen.
Pro zjištění potenciálního endokrinního působení chemické látky se pomocí analýzy rozptylu (ANOVA) porovnávají reakce mezi exponovanými a kontrolními skupinami.
It is a precursor of egg yolk proteins and, once produced in the liver, travels in the bloodstream to the ovary, where it is taken up and modified by developing eggs.
Je-li nasazena kontrola s rozpouštědlem, provede se pro každý ukazatel vhodné statistické porovnání mezi kontrolami s ředicí vodou a kontrolami s rozpouštědlem.
Vitellogenin is almost undetectable in the plasma of immature female and male fish because they lack sufficient circulating oestrogen;
Návod k tomu, jak při následné statistické analýze zacházet s údaji o kontrolách s ředicí vodou a kontrolách s rozpouštědlem, lze najít v dokumentu OECD, 2006c (27).
however, the liver is capable of synthesizing and secreting vitellogenin in response to exogenous oestrogen stimulation.
Veškeré údaje o biologických reakcích se analyzují a zaznamenají se za každé pohlaví zvlášť.
The measurement of vitellogenin serves for the detection of chemicals with various oestrogenic modes of action.
Nejsou-li splněny předpoklady pro použití parametrických metod kvůli nenormálnímu rozdělení (např. Shapirův-Wilkův test) nebo heterogennímu rozptylu (Bartlettův test nebo Lewenův test), měla by být před provedením ANOVA zvážena transformace údajů za účelem homogenizace rozptylů nebo by měla být provedena vážená ANOVA.
The detection of oestrogenic chemicals is possible via the measurement of vitellogenin induction in male fish, and it has been abundantly documented in the scientific peer-reviewed literature (e.g. (7)).
V případě nemonotónní závislosti dávka-odezva lze použit Dunnettův test (parametrický) vícenásobných párových porovnávání nebo Mannův-Whitneyův test s Bonferroniho korekcí (neparametrický).
Vitellogenin induction has also been demonstrated following exposure to aromatizable androgens (8, 9).
Je-li závislost dávka-odezva přibližně monotónní, lze použít jiné statistické testy (např. Jonckheerův-Terpstrův test nebo Williamsův test).
A reduction in the circulating level of oestrogen in females, for instance through the inhibition of the aromatase converting the endogenous androgen to the natural oestrogen 17β-estradiol, causes a decrease in the vitellogenin level, which is used to detect chemicals having aromatase inhibiting properties (10, 11).
V dodatku 8 je uvedeno statistické schéma, které může pomoci při rozhodování o tom, jaký statistický test je nejvhodnější použít.
The biological relevance of the vitellogenin response following oestrogenic/aromatase inhibition is established and has been broadly documented.
Další informace lze získat rovněž v dokumentu OECD o současných přístupech ke statistické analýze údajů o ekotoxicitě (27).
However, it is possible that production of VTG in females can also be affected by general toxicity and non-endocrine toxic modes of action, e.g. hepatotoxicity.
Zpráva o výsledcích zkoušky
Several measurement methods have been successfully developed and standardised for routine use.
Údaje o studii by měly zahrnovat:
This is the case of species-specific Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) methods using immunochemistry for the quantification of vitellogenin produced in small blood or liver samples collected from individual fish (12, 13, 14, 15, 16, 17, 18).
Zkušební zařízení:
Fathead minnow blood, zebrafish blood or head/tail homogenate, and medaka liver are sampled for VTG measurement.
odpovědní pracovníci a jejich odpovědnost v rámci studie,
In medaka, there is a good correlation between VTG measured from blood and from liver (19).
každá laboratoř by měla prokázat svoji způsobilost testováním škály reprezentativních chemických látek.
Appendix 6 provides the recommended procedures for sample collection for vitellogenin analysis.
charakterizace zkoušených chemických látek,
Kits for the measurement of vitellogenin are widely available;
fyzikální povaha a relevantní fyzikálně-chemické vlastnosti,
such kits should be based on a validated species-specific ELISA method.
metoda a frekvence přípravy zkušebních koncentrací,
Secondary sex characteristics in male fish of certain species are externally visible, quantifiable and responsive to circulating levels of endogenous androgens;
informace o stabilitě a biologické rozložitelnosti.
this is the case for the fathead minnow and the medaka — but not for zebrafish, which does not possess quantifiable secondary sex characteristics.
Rozpouštědlo:
Females maintain the capacity to develop male secondary sex characteristics, when they are exposed to androgenic chemicals in water.
charakterizace rozpouštědla (povaha, použitá koncentrace),
Several studies are available in the scientific literature to document this type of response in fathead minnow (20) and medaka (21).
zdůvodnění výběru rozpouštědla (není-li použita voda).
A decrease in secondary sex characteristics in males should be interpreted with caution because of low statistical power, and should be based on expert judgement and weight of evidence.
Pokusná zvířata:
There are limitations to the use of zebrafish in this assay, due to the absence of quantifiable secondary sex characteristics responsive to androgenic acting chemicals.
druh a kmen,
In the fathead minnow, the main indicator of exogenous androgenic exposure is the number of nuptial tubercles located on the snout of the female fish.
dodavatel a konkrétní zařízení dodavatele,
In the medaka, the number of papillary processes constitutes the main marker of exogenous exposure to androgenic chemicals in female fish.
věk ryb na počátku zkoušky a reprodukční stav/stav z hlediska tření,
Appendix 5A and Appendix 5B indicate the recommended procedures to follow for the evaluation of sex characteristics in fathead minnow and in medaka, respectively.
podrobnosti o postupu aklimatizace ryb,
Definitions used in this test method are given in Appendix 1.
tělesná hmotnost ryb na počátku expozice (z dílčího vzorku rybí populace).
In the assay, male and female fish in a reproductive status are exposed together in test vessels.
Zkušební podmínky:
Their adult and reproductive status enables a clear differentiation of each sex, and thus a sex-related analysis of each endpoint, and ensures their sensitivity towards exogenous chemicals.
použitý zkušební postup (druh zkoušky, velikost nasazení, hustota obsádky atd.),
At test termination, sex is confirmed by macroscopic examination of the gonads following ventral opening of the abdomen with scissors.
metoda přípravy zásobních roztoků a průtok,
An overview of the relevant bioassay conditions is provided in Appendix 2.