natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Existuje-li obava, že teplota v rámci destiček s 24 jamkami není stejná, změří se teplota ve třech náhodně vybraných nádobách.
Homogenise all livers with homogenate buffer according to the procedure described above.
Teplota by se měla během zkoušky zaznamenávat přednostně nepřetržitě nebo minimálně denně.
Centrifugation of the suspended liver homogenate
Při statickém systému by se měla měřit koncentrace zkoušené chemické látky minimálně v nádržích s největší a nejnižší zkušební koncentrací, ale přednostně ve všech exponovaných nádržích, a to na začátku a na konci zkoušky.
Confirm the temperature of the refrigerated centrifuge chamber at ≤ 5 °C.
Při semistatických zkouškách (s obnovováním), kde se očekává, že koncentrace zkoušené chemické látky zůstane v rozmezí ± 20 % nominálních hodnot, se doporučuje analyzovat přinejmenším nejvyšší a nejnižší zkušební koncentraci, když je čerstvě připravená a bezprostředně před obnovením.
Insert the 1,5 ml microtubes containing the suspended liver homogenate in refrigerated centrifuge (adjust the balance if necessary).
Důrazně se doporučuje zakládat výsledky na naměřených koncentracích.
Following centrifugation, check that the supernatants are adequately separated (surface: lipid, intermediate: supernatant, bottom layer: liver tissue).
Nezůstávají-li koncentrace v rozmezí 80 až 120 % nominální koncentrace, měla by být účinná koncentrace vyjádřena vzhledem ke geometrickému průměru naměřených koncentrací; podrobněji viz kapitola 5 Pokynu OECD ke zkoušení toxicity složitých látek a směsí ve vodním prostředí (28).
If the separation is not adequate, centrifuge the suspension again under the same conditions.
LIMITNÍ ZKOUŠKA
Remove all specimens from the refrigerated centrifuge and arrange them in the order of specimen number on the ice rack.
Limitní zkouška může být provedena postupy popsanými v této zkušební metodě při koncentraci zkoušené látky 100 mg/l nebo při mezní hodnotě její rozpustnosti ve zkoušeném médiu (podle toho, která z hodnot je nižší) s cílem prokázat, že hodnota LC50 je vyšší než tato koncentrace.
Be careful not to resuspend each separated layer after the centrifugation.
Limitní zkouška se provede s 20 embryi v exponované skupině, pozitivní kontrole a – je-li to nezbytné – kontrole s rozpouštědlem a 24 embryi v negativní kontrole.
Collection of the supernatant
Pokud procentuální letalita při zkoušené koncentraci překročí o 10 % letalitu v negativní kontrole (nebo kontrole s rozpouštědlem), je třeba provést úplnou studii.
Place four 0,5 ml microtubes for storage of the supernatant into the tube rack.
Veškeré pozorované účinky se zaznamenají.
Collect 30 μl of each supernatant (separated as the intermediate layer) with the micropipette and dispense it to one 0,5 ml microtube.
Překročí-li mortalita v negativní kontrole (nebo kontrole s rozpouštědlem) 10 %, zkouška je neplatná a je třeba ji opakovat.
Be careful not to collect the lipid on the surface or the liver tissue in the bottom layer.
Pro účely statistické analýzy se jednotlivé jamky v této zkoušce považují za nezávislá opakování.
Collect the supernatant and dispense it to other two 0,5 ml microtubes in the same manner as described above.
Procenta embryí, u nichž je alespoň jedno pozorování hlavních ukazatelů provedené po 48 a/nebo 96 hodinách pozitivní, se vynesou do grafu v závislosti na zkušebních koncentracích.
Collect the rest of the supernatant with the micropipette (if feasible: ≥ 100 μl).
K výpočtu směrnic křivky, hodnoty LC50 a intervalu spolehlivosti (95 %) se použijí vhodné statistické metody (38) a měl by být konzultován pokyn OECD o současných přístupech ve statistické analýze údajů o ekotoxicitě (39).
Then dispense the supernatant to the remaining 0,5 ml microtube.
chemická identifikace, např. název podle IUPAC nebo CAS, číslo CAS, kód SMILES nebo InChI, strukturní vzorec, čistota, popřípadě chemická identita nečistot, je-li to prakticky proveditelné atd. (včetně obsahu organického uhlíku, je-li měřen).
Close the cap of the 0,5 ml microtube and write the volume of the supernatant on the label.
Zkušební organismy:
Then immediately cool the microtubes on the ice rack.
použitý zkušební postup (např. semistatický s obnovováním),
Change the tip of the micropipette to the new one for each supernatant.
fotoperioda,
If a large amount of lipid becomes attached to the tip, change it to the new one immediately to avoid contamination of the liver extract with fat.
uspořádání zkoušky (např. počet zkušebních komor, druhy kontrol),
Dispense all of the centrifuged supernatant to four 0,5 ml microtubes according to the procedure described above.
charakteristiky kvality chovné vody (např. pH, tvrdost, teplota, vodivost, koncentrace rozpuštěného kyslíku),
After dispensing the supernatant to the 0,5 ml microtubes, place all of them in the tube rack with the identification label, and then freeze them in the freezer immediately.
koncentrace rozpuštěného kyslíku, pH, celková tvrdost, teplota a vodivost zkušebních roztoků na začátku a po 96 hodinách,
If the VTG concentrations are measured immediately after the pre-treatment, keep one 0,5 ml microtube (containing 30 μl of supernatant) cool in the tube rack and transfer it to the workstation where the ELISA assay is conducted.
metoda přípravy zásobních roztoků a zkušebních roztoků a četnost obnovování,
In such case, place the remaining microtubes in the tube racks and freeze them in the freezer.
zdůvodnění použití rozpouštědla a zdůvodnění volby rozpouštědla, pokud je jiné než voda,
After the collection of the supernatant, discard the residue adequately.
nominální zkušební koncentrace a výsledky všech analýz pro stanovení koncentrace zkoušené chemické látky ve zkušebních nádobách; uvedena by měla být také výtěžnost dané metody a mez stanovitelnosti (LoQ),
Storage of the specimen
doklady o tom, že kontrolní skupiny splnily kritéria platnosti týkající se přežití,
Store the 0,5 ml microtubes containing the supernatant of the liver homogenate at ≤ – 70 °C until they are used for the ELISA.
míra oplodnění jiker,
Procedure 3A:
míra vylíhnutí v exponovaných a kontrolních skupinách.
Zebrafish, Blood Collection from the Caudal Vein / Artery
nejvyšší koncentrace, která nevyvolala za dobu zkoušky žádný úhyn,
Immediately following anaesthesia, the caudal peduncle is severed transversely, and the blood is removed from the caudal artery/vein with a heparinised microhematocrit capillary tube.
nejnižší koncentrace, která vyvolala za dobu zkoušky 100 % mortalitu,
Blood volumes range from 5 to 15 microliters depending on fish size.
kumulativní mortalita při každé koncentraci v doporučených časech pozorování,
An equal volume of aprotinin buffer (6 micrograms/ml in PBS) is added to the microcapillary tube, and plasma is separated from the blood via centrifugation (5 minutes at 600 g).
hodnoty LC50 po 96 hodinách (a volitelně po 48 hodinách) při mortalitě v rámci 95 % intervalu spolehlivosti, je-li to možné,
Plasma is collected in the test tubes and stored at – 20 °C until analysed for VTG or other proteins of interest.
graf závislosti koncentrace-mortalita na konci zkoušky,
Procedure 3B:
mortalita v kontrolních skupinách (negativní kontroly, vnitřní kontroly destiček a pozitivní kontrola a jakákoli použitá kontrola s rozpouštědlem),
Zebrafish, Blood Collection by Cardiac Puncture
údaje o výsledku každého ze čtyř pozorování hlavních ukazatelů,
To avoid coagulation of blood and degradation of protein the samples are collected within Phosphate-buffered saline (PBS) buffer containing heparin (1000 units/ml) and the protease inhibitor aprotinin (2 TIU/ml).
výskyt a popis morfologických a fyziologických abnormalit, pokud se vyskytly (příklady viz dodatek 5 obrázek 2),
As ingredients for the buffer, heparin, ammonium-salt and lyophilised aprotinin are recommended.
události v průběhu zkoušky, které mohly ovlivnit výsledky,
For blood sampling, a syringe (1ml) with a fixed thin needle (e.g. Braun Omnikan-F) is recommended.
statistická analýza a zpracování údajů (probitová analýza, logistický regresní model a geometrický průměr hodnot LC50),
The syringe should be prefilled with buffer (approximately 100 microliter) to completely elute the small blood volumes from each fish.
směrnice a intervaly spolehlivosti regrese (transformované) křivky závislosti koncentrace-odezva.
The blood samples are taken by cardiac puncture.
Jakékoli odchylky od zkušební metody a příslušná vysvětlení.
At first the fish should be anesthetized with MS-222 (100 mg/l).
Rozbor a interpretace výsledků.
The proper plane of anaesthesia allows the user to distinguish the heartbeat of the zebrafish.
OECD (2011) Validation Report (Phase 1) for the Zebrafish Embryo Toxicity Test: Part I and Part II.
While puncturing the heart, keep the syringe piston under weak tension.
Series on Testing and Assessment No.
Collectable blood volumes range between 20 - 40 microliters.
157, OECD, Paris.
After cardiac puncture, the blood/buffer-mixture should be filled into the test tube.
OECD (2012) Validation Report (Phase 2) for the Zebrafish Embryo Toxicity Test: Part I and Part II (Annexes).
Plasma is separated from the blood via centrifugation (20 min; 5000 g) and should be stored at – 80°C until required for analysis.
Series on Testing and Assessment No.
Procedure 3C:
179, OECD, Paris.
SOP: Zebrafish, homogenisation of head & tail
Belanger, S.
The fish are anaesthetised and euthanised in accordance with the test description.
E., Rawlings J.
The head and tail are cut of the fish in accordance with Figure 1.
M. a Carr G.
Important: All dissection instruments, and the cutting board should be rinsed and cleaned properly (e.g. with 96 % ethanol) between handling of each single fish to prevent “vitellogenin pollution” from females or induced males to uninduced males.
J.
For gonad histology
(2013) Use of Fish Embryo Toxicity Tests for the Prediction of Acute Fish Toxicity to Chemicals.
Cut behind
Environmental Toxicology and Chemistry 32: 1768-1783.
Cut behind dorsal fin
Pharmacol.: 149 (2), 196–209
For Vtg analysis
Kapitola C.4 této přílohy: Snadná biologická rozložitelnost.
The weight of the pooled head and tail from each fish is measured to the nearest mg.
Kapitola C.29 této přílohy: Hodnocení snadné biologické rozložitelnosti – uvolňování CO2 v těsně uzavřených lahvičkách.
After being weighed, the parts are placed in appropriate tubes (e.g. 1,5 ml eppendorf) and frozen at – 80 °C until homogenisation or directly homogenised on ice with two plastic pistils.
Kapitola C.48 této přílohy: Krátkodobá zkouška působení na reprodukci ryb.
(Other methods can be used if they are performed on ice and the result is a homogenous mass).
Viz dodatek 4a.
Important: The tubes should be numbered properly so that the head and tail from the fish can be related to their respective body-section used for gonad histology.
Dostupné na: [http://www.iso.org].
When a homogenous mass is achieved, 4 x the tissue weight of ice-cold homogenisation buffer [1] is added.
23, OECD, Paris.
Keep working with the pistils until the mixture is homogeneous.
Evropská komise (2007) Doporučení Komise 2007/526/ES ze dne 18. června 2007 týkající se pokynů pro umístění zvířat používaných pro pokusné a jiné vědecké účely a péči o ně (oznámeno pod číslem K(2007) 2525) [http://eur-lex.europa.eu/LexUriServ/LexUriServ.do?uri=OJ:L:2007:197:0001:0089:CS:PDF]
Important note: New pistils are used for each fish.
Evropská unie (2010) Směrnice Evropského parlamentu a Rady 2010/63/EU ze dne 22. září 2010 o ochraně zvířat používaných pro vědecké účely.
The samples are placed on ice until centrifugation at 4 °C at 50000 g for 30 min.
Úř. věst.
Use a pipette to dispense portions of 20 μl supernatant into at least two tubes by dipping the tip of the pipette below the fat layer on the surface and carefully sucking up the supernatant without fat- or pellet fractions.
L 276, 20.10.2010, s. 33
The tubes are stored at – 80 °C until use.
http://eur-lex.europa.eu/LexUriServ/LexUriServ.do?uri=OJ:L:2010:276:0033:0079:CS:PDF
Homogenisation buffer:(50 mM Tris-HCl pH 7,4; 1 % Protease inhibitor cocktail (Sigma)): 12 ml Tris-HCl pH 7,4 + 120 μl Protease inhibitor cocktail.TRIS: TRIS-ULTRA PURE (ICN) e.g. from Bie & Berntsen, Denmark.Protease inhibitor cocktail: From Sigma (for mammalian tissue) Product number P 8340.NOTE: The homogenisation buffer should be used the same day as manufactured.
Kapitola C.2 této přílohy: Zkouška akutní imobilizace dafnií (Daphnia sp.).
Place on ice during use.
Series on Testing and Assessment No.
VITELLOGENIN FORTIFICATION SAMPLES AND INTER-ASSAY REFERENCE STANDARD
OECD, Paris.
On each day that VTG assays are performed, a fortification sample made using an inter-assay reference standard will be analysed.
Detailed review paper „Fish embryo toxicity assays“.
The VTG used to make the inter-assay reference standard will be from a batch different from the one used to prepare calibration standards for the assay being performed.
UBA report under contract no.
The fortification sample will be made by adding a known quantity of the inter-assay standard to a sample of control male plasma.
20385422 German Federal Environment Agency, Berlin.
The sample will be fortified to achieve a VTG concentration between 10 and 100 times the expected vitellogenin concentration of control male fish.
Hlavní ukazatel
The sample of control male plasma that is fortified may be from an individual fish or may be a composite from several fish.
způsobuje účinek na úrovni populace.
A subsample of the unfortified control male plasma will be analysed in at least two duplicate wells.
buněčný útvar obklopující animální pól, který zakrývá určitou část žloutku.
The fortified sample also will be analysed in at least two duplicate wells.
látka nebo směs.
The mean quantity of vitellogenin in the two unfortified control male plasma samples will be added to the calculated quantity of VTG added to fortification the samples to determine an expected concentration.
Epibolie
The ratio of this expected concentration to the measured concentration will be reported along with the results from each set of assays performed on that day.
masivní proliferace převážně epidermálních buněk ve fázi gastrulace embrya a jejich pohyb od dorzální k ventrální straně, v důsledku kterého jsou vrstvy endodermálních buněk internalizovány během procesu podobnému invaginaci (vchlípení) a žloutek je vstřebán do embrya.
DECISION FLOWCHART FOR THE STATISTICAL ANALYSIS
Průtoková metoda
Rep means normally distributed
zkouška, při níž zkušební roztoky plynule protékají zkušebním systémem po celou dobu trvání expozice.
Stept-down Jonckheere or Williams' test
Vnitřní kontrola destičky
Normalising transform?
vnitřní kontrola sestávající z naplnění 4 jamek ve 24jamkové destičce ředicí vodou má za cíl zjistit potenciální kontaminaci destiček způsobenou výrobcem nebo výzkumníkem během zkušebního postupu a jakýkoli účinek na destičku, který může ovlivnit výsledek zkoušky (např. teplotní gradient).
variance stabilising transform?
Chovná voda voda, ve které se provádí chov dospělých ryb.
Tamhane-Dunnett test on nested ANOVA
Medián letální koncentrace (LC50)
Dunnett test on nested ANOVA No
koncentrace zkoušené chemické látky, která usmrtí přibližně 50 % zkušebních organismů během celé zkoušky.
Yes Yes
Semistatická (obnovovací) zkouška
No >=4 reps per conc
zkouška, při níž se zkušební roztoky pravidelně obnovují po stanovených časových úsecích (např. každých 24 hodin).
<=3 reps per conc
Simplified Molecular Input Line Entry Specification (zjednodušená molekulární specifikace pro vstupní řádky).
Dunn or Mann-Whitney test on rep means
Somit
Dunn test on rep means Dunn or Mann-Whitney test
somity jsou bloky mezodermu ve vyvíjejícím se embryu obratlovců rozmístěné po stranách neurální trubice, z nichž později vzniká škára (dermatomy), kosterní svaly (myotomy) a obratle (sklerotomy).
Dunn test <=3 reps per conc
Statická metoda
>=4 reps per conc Tamhane-Dunnett test
zkouška, při níž se zkušební roztoky během celé zkoušky nemění.
Nested ANOVA normal
jakákoli látka nebo směs zkoušená pomocí této zkušební metody.
Nested ANOVA not normal
látky s neznámým nebo proměnlivým složením, komplexní reakční produkty nebo biologický materiál.
variance stabilising transformation
CHOV, MNOŽENÍ A TYPICKÉ PODMÍNKY PRO ZKOUŠKY AKUTNÍ TOXICITY NA EMBRYÍCH DANIA PRUHOVANÉHO
Variances unequal Dunnett test
Danio pruhované (Danio rerio)
Variances equal
Původ druhu
Step-down Jonckheere test
Indie, Barma, Malakka, Sumatra
Rep means normal or not homogenous
Pohlavní dimorfismus
Rep means normal & homogenous
Samičky: vystouplé břicho, když v něm mají jikry
Step-down trendtest on replicate means
Samečci: štíhlejší, oranžové zbarvení mezi modrými podélnými pruhy (obzvláště patrné na řitní ploutvi)
Not monotone
Suché vločkové krmivo (maximálně 3 % hmotnosti ryb za den) 3–5krát denně; doplňkově larvy (nauplie) žábronožky solné (druh Artemia) a/nebo malé dafnie o vhodné velikosti získané z nekontaminovaného zdroje.
Monotone
Krmení živou potravou obohacuje prostředí, a proto by měla být dle možnosti podávána živá potrava.
Determine whether Dose-Response is monotone
Aby se zajistila co nejlepší kvalita vody, přebytky potravy a exkrety by se měly odstranit asi hodinu po krmení.
C.49 Fish Embryo Acute Toxicity (FET) Test
Přibližná hmotnost dospělých ryb
This test method (TM) is equivalent to OECD test guideline (TG) 236 (2013).
Samičky: 0,65 ± 0,13 g
It describes a Fish Embryo Acute Toxicity (FET) test with the zebrafish (Danio rerio).
Samečci: 0,5 ± 0,1 g
This test is designed to determine acute toxicity of chemicals on embryonic stages of fish.
Chov matečných ryb
The FET-test is based on studies and validation activities performed on zebrafish (1)(2)(3)(4)(5)(6)(7)(8)(9)(10)(11)(12)(13)(14).
Osvětlení
The FET-test has been successfully applied to a wide range of chemicals exhibiting diverse modes of action, solubilities, volatilities, and hydrophobicities (reviewed in 15 and 16).
Fluorescenční zářivky (širokospektrální); 10–20 μE/m2/s, 540–1080 lx nebo 50–100 ft-c (okolní laboratorní hodnoty); fotoperioda 12–16 hodin
Newly fertilised zebrafish eggs are exposed to the test chemical for a period of 96 hrs.
Kvalita vody
Every 24 hrs, up to four apical observations are recorded as indicators of lethality (6): (i) coagulation of fertilised eggs, (ii) lack of somite formation, (iii) lack of detachment of the tail-bud from the yolk sac, and (iv) lack of heartbeat.
O2 ≥ 80 % nasycení, tvrdost: např. ~ 30–300 mg/l CaCO3, NO3–: ≤ 48 mg/l, NH4+ a NO2–: < 0,001 mg/l, zbytkový chlor < 10 μg/l, celkový obsah organického chloru < 25 ng/l, pH = 6,5–8,5
At the end of the exposure period, acute toxicity is determined based on a positive outcome in any of the four apical observations recorded, and the LC50 is calculated.
Další kritéria pro kvalitu vody
Useful information about substance-specific properties include the structural formula, molecular weight, purity, stability in water and light, pKa and Kow, water solubility and vapour pressure as well as results of a test for ready biodegradability (TM C.4 (17) or TM C.29 (18)).
Pevné částice < 20 mg/l, celkový obsah organického uhlíku < 2 mg/l, celkový obsah organofosforových pesticidů < 50 ng/l, celkový obsah organochlorových pesticidů a polychlorovaných bifenylů < 50 ng/l
Solubility and vapour pressure can be used to calculate Henry's law constant, which will indicate whether losses due to evaporation of the test chemical may occur.
Velikost chovných nádrží
A reliable analytical method for the quantification of the substance in the test solutions with known and reported accuracy and limit of detection should be available.
např. 180 l, 1 ryba/l
If the test method is used for the testing of a mixture, its composition should, as far as possible, be characterised, e.g. by the chemical identity of its constituents, their quantitative occurrence and their substance-specific properties (see paragraph 4).
Čištění vody
Concerning substances that may be activated via metabolism, there is evidence that zebrafish embryos do have biotransformation capacities (19)(20)(21)(22).
Stálé (filtrace přes aktivní uhlí); jinými možnostmi jsou např. kombinace se semistatickým systémem s obnovováním nebo průtokový systém s nepřetržitým obnovováním vody
However, the metabolic capacity of embryonic fish is not always similar to that of juvenile or adult fish.
Doporučený poměr samečků a samiček pro množení:
For instance, the protoxicant allyl alcohol (9) has been missed in the FET.
2:1 (nebo hromadné tření)
Therefore, if there are any indications that metabolites or other transformation products of relevance may be more toxic than the parent compound, it is also recommended to perform the test with these metabolites/transformation products and to also use these results when concluding on the toxicity of the test chemical, or alternatively perform another test which takes metabolism into further account.
Třecí nádrže
For substances with a molecular weight ≥ 3kDa, a very bulky molecular structure, and substances causing delayed hatch which might preclude or reduce the post-hatch exposure, embryos are not expected to be sensitive because of limited bioavailability of the substance, and other toxicity tests might be more appropriate.
např. 4litrové nádrže vybavené dnem z ocelové mřížky a imitací rostlin pro povzbuzení tření; rohože vnějšího vytápění nebo hromadné tření v chovných nádržích
For the test results to be valid, the following criteria apply:
Struktura a vzhled jiker
The overall fertilisation rate of all eggs collected should be ≥ 70 % in the batch tested.
Stabilní chorion (tj. vysoce průhledný, nelepivý, průměr ~ 0,8 až 1,5 mm)
The water temperature should be maintained at 26 ± 1 °C in test chambers at any time during the test.
Rychlost tření
Overall survival of embryos in the negative (dilution-water) control, and, where relevant, in the solvent control should be ≥ 90 % until the end of the 96 hrs exposure.
Jedna pohlavně zralá samička vytře za den nejméně 50 až 80 jiker.
Exposure to the positive control (e.g. 4,0 mg/l 3,4-dichloroaniline for zebrafish) should result in a minimum mortality of 30 % at the end of the 96 hrs exposure.
V závislosti na kmenu může být rychlost tření značně vyšší.
Hatching rate in the negative control (and solvent control if appropriate) should be ≥ 80 % at the end of 96 hrs exposure.
Míra oplodnění by měla být ≥ 70 %.
At the end of the 96 hrs exposure, the dissolved oxygen concentration in the negative control and highest test concentration should be ≥ 80 % of saturation.
U ryb, které se třou poprvé, může být při několika prvních třeních míra oplodnění jiker nižší.
An overview of recommended maintenance and test conditions is available in Appendix 2.
Statická, semistatická s obnovováním, průtoková, teplota 26 ± 1 °C, zkušební komory kondiciované po dobu 24 hodin (např. 24jamkové destičky s objemem jednotlivých dutin 2,5 až 5 ml)
The following equipment is needed:
NORMÁLNÍ VÝVOJ DANIA PRUHOVANÉHO PŘI TEPLOTĚ 26 C
Fish tanks made of chemically inert material (e.g. glass) and of a suitable capacity in relation to the recommended loading (see “Maintenance of brood fish”, paragraph 14);
Obrázek 1: Vybraná stadia raného vývoje dania pruhovaného (Danio rerio): 0,2–1,75 hodiny po oplodnění (z Kimmel et al., 1995 (35)).
Inverted microscope and/or binocular with a capacity of at least 80-fold magnification.
Časový sled normálního vývoje lze použít k diagnostikování oplodnění a životaschopnosti jiker (viz odstavec 26: Výběr oplodněných jiker).
If the room used for recording observations cannot be adjusted to 26 ± 1 °C, a temperature-controlled cross movement stage or other methods to maintain temperature are necessary;
Obrázek 2: Vybraná stadia pozdního vývoje dania pruhovaného (Danio rerio) (embryo s odstraněným chorionem pro dosažení co nejlepší viditelnosti): 22–48 hodin po oplodnění (z Kimmel et al., 1995 (35)).
Test chambers; e.g., standard 24-well plates with a depth of approx.
Obrázek 3: Normální vývoj embryí dania pruhovaného (Danio rerio): (1) 0,75 hodiny, 2buněčné stadium; (2) 1 hodina, 4buněčné stadium; (3) 1,2 hodiny, 8buněčné stadium; (4) 1,5 hodiny, 16buněčné stadium; (5) 4,7 hodiny, počínající epibolie; (6) 5,3 hodiny, cca 50 % epibolie (z Braunbeck & Lammer 2006 (40)).
20 mm. (see “Test chambers”, paragraph 11);