natgillin/translations-raw huggingface dataset:
V rámci prevence se upřednostňují vinylové nebo nitrilové rukavice před latexovými.
There is no need to change the micropipette tip to a new one.
Uhynulé jedince je třeba během prvního týdne každodenně odstraňovat a nahrazovat larvami z rezervy, aby byla zachována hustota organismů.
However, if the tip is contaminated or suspected to be contaminated, the tip should be changed.
Krmit je třeba minimálně dvakrát za den.
Homogenisation of the liver
V adaptační fázi se pulci aklimatizují na podmínky skutečné expoziční fáze, včetně typu potravy, teploty, cyklu světlo – tma a kultivačního média.
Attach a new pestle for homogenisation to the microtube homogeniser.
Proto se doporučuje, aby během adaptační fáze a expoziční fáze byla použita stejná kultivační/ředicí voda.
Insert the pestle into the 1,5 ml microtube.
Pokud je pro uchovávání pulců během adaptační fáze používán statický kultivační systém, je třeba kultivační médium zcela vyměnit nejméně dvakrát týdně.
Hold the microtube homogeniser to press the liver between the surface of the pestle and the inner wall of the 1,5 ml microtube.
V adaptační fázi je nutné předejít nakupením vyvolaným vysokou hustotou larev, protože takové vlivy by mohly znatelně ovlivnit vývoj pulců v následné experimentální fázi.
Operate the microtube homogeniser for 10 to 20 seconds.
Hustota chovu by neměla být větší než přibližně čtyři pulci na litr kultivačního média (ve statickém systému expozice) nebo 10 pulců na litr kultivačního média (např. s průtokem 50 ml/min v adaptačním nebo kultivačním systému).
Cool the 1,5 ml microtube with crushed ice during the operation.
Za těchto podmínek by se pulci ze stadia 45/46 do stadia 51 měli vyvinout do dvanácti dnů.
Lift up the pestle from the 1,5 ml microtube and leave it at rest for about 10 seconds.
Reprezentativní pulce z této kmenové populace je třeba denně kontrolovat z hlediska jejich vývojové fáze, aby bylo možno odhadnout vhodný čas pro zahájení expozice.
Then conduct a visual check of the state of the suspension.
Je nutné dbát na minimalizaci stresu a traumat u pulců, zejména během přemisťování, čištění akvárií a manipulace s larvami.
If pieces of liver are observed in the suspension, repeat the operations (3) and (4) to prepare satisfactory liver homogenate.
Je třeba se vyvarovat stresových podmínek/činností, jakými jsou hlasitý a/nebo nepřetržitý hluk, klepání na akvária, vibrace v akváriích, nadměrná aktivita v laboratoři a rychlé změny ve složkách životního prostředí (dostupnost světla, teplota, pH, rozpuštěný kyslík, rychlosti průtoku vody apod.).
Cool the suspended liver homogenate on the ice rack until centrifugation.
Pokud se pulci nevyvinou do stadia 51 během 17 dní po oplodnění, za potenciální důvod této skutečnosti je třeba považovat nadměrný stres.
Change the pestle to the new one for each homogenate.
Kultivace larev a jejich krmení
Homogenise all livers with homogenate buffer according to the procedure described above.
Pulci se v době před expozicí (po stadiu 45/46 podle Nieuwkoopa a Fabera (NF) (8)) a během celé 21denní zkoušky krmí např. komerčně dostupným krmivem pro pulce používaným ve validačních studiích (viz též dodatek 1) nebo jinou stravou, u níž bylo prokázáno, že umožňuje stejnou účinnost zkoušky metamorfózy obojživelníků.
Centrifugation of the suspended liver homogenate
Krmný režim v období před expozicí je třeba pečlivě upravit tak, aby splňoval požadavky vyvíjejících se pulců.
Confirm the temperature of the refrigerated centrifuge chamber at ≤ 5 °C.
To znamená, že nově vylíhnutým pulcům by měly být podávány malé porce potravy několikrát (minimálně dvakrát) za den.
Insert the 1,5 ml microtubes containing the suspended liver homogenate in refrigerated centrifuge (adjust the balance if necessary).
Pokud jde o krmivo pro pulce používané ve validačních studiích, spolu s růstem pulců je nutno zvyšovat denní porce potravy až na přibližně 30 mg na jedince a den krátce před začátkem zkoušky.
However, if the supernatants are adequately separated, centrifugal force and time may be adjusted as needed.
Celkové denní množství potravy je proto třeba rozdělit do menších porcí a podávat minimálně dvakrát denně.
If the separation is not adequate, centrifuge the suspension again under the same conditions.
Krmný režim pro toto krmivo je nastíněn v tabulce 1.
Remove all specimens from the refrigerated centrifuge and arrange them in the order of specimen number on the ice rack.
Krmné dávky je třeba zaznamenávat.
Be careful not to resuspend each separated layer after the centrifugation.
Přísun potravy (mg potravy na jedince a den)
Collect the supernatant and dispense it to other two 0,5 ml microtubes in the same manner as described above.
Analytická chemie
Collect the rest of the supernatant with the micropipette (if feasible: ≥ 100 μl).
Před provedením studie je třeba vyhodnotit stabilitu zkoušené chemické látky na základě existujících informací o její rozpustnosti, rozložitelnosti a těkavosti.
Then dispense the supernatant to the remaining 0,5 ml microtube.
Na začátku zkoušky (den 0) a poté jednou týdně po dobu zkoušky je třeba z každé nádrže (opakování) při každé koncentraci odebrat vzorky zkušebních roztoků pro analytickou chemickou analýzu, tedy minimálně čtyři vzorky.
Close the cap of the 0,5 ml microtube and write the volume of the supernatant on the label.
Analýzu každé zkušební koncentrace se doporučuje provést rovněž během přípravy systému, před zahájením zkoušky, aby se ověřila účinnost systému.
Then immediately cool the microtubes on the ice rack.
Dále se doporučuje analyzovat zásobní roztoky při jejich výměně, zejména pokud objem zásobního roztoku neposkytuje dostatečné množství chemické látky, aby pokrylo období běžných odběrů vzorků.
Change the tip of the micropipette to the new one for each supernatant.
V případě chemických látek, které při některých nebo všech koncentracích používaných při zkoušce není možné zjistit, je třeba měřit zásobní roztoky a zaznamenávat průtoky v rámci systému, aby bylo možno vypočítat nominální koncentrace.
If a large amount of lipid becomes attached to the tip, change it to the new one immediately to avoid contamination of the liver extract with fat.
Dávkování chemické látky
Dispense all of the centrifuged supernatant to four 0,5 ml microtubes according to the procedure described above.
Chemické látky rozpustné ve vodě mohou být rozpuštěny v přiměřeném množství zkušební vody v koncentraci, která umožňuje dávkování v cílové zkušební koncentraci v průtokovém systému.
If the VTG concentrations are measured immediately after the pre-treatment, keep one 0,5 ml microtube (containing 30 μl of supernatant) cool in the tube rack and transfer it to the workstation where the ELISA assay is conducted.
Chemické látky, které jsou kapalné při pokojové teplotě a těžko rozpustné ve vodě, mohou být zavedeny pomocí metod sycení kapaliny kapalinou.
In such case, place the remaining microtubes in the tube racks and freeze them in the freezer.
Chemické látky, které jsou pevné při pokojové teplotě a jsou těžko rozpustné ve vodě, mohou být zavedeny pomocí syticích kolon ze skelné vaty (7).
After the collection of the supernatant, discard the residue adequately.
Upřednostňuje se použití zkušebního systému bez nosičů, avšak různé zkoušené chemické látky budou mít rozličné fyzikálně-chemické vlastnosti, které mohou vyžadovat různé přístupy při přípravě vody pro expozici chemické látce.
Storage of the specimen
Upřednostňuje se obejít se bez rozpouštědel nebo nosičů, protože:
Store the 0,5 ml microtubes containing the supernatant of the liver homogenate at ≤ – 70 °C until they are used for the ELISA.
V případě chemických látek, jejichž zkoušení je obtížné, lze použít rozpouštědlo jako poslední řešení, a určení, jaká metoda je nejvhodnější, by mělo vycházet z Metodického dokumentu OECD ke zkouškám toxicity složitých látek a směsí pro vodní organismy (4).
Zebrafish, Blood Collection from the Caudal Vein / Artery
Bylo zjištěno, že v případech zkoušení toxicity ve vodním prostředí účinně působí rozpouštědla jako aceton, ethanol, methanol, dimethylformamid a triethylenglykol.
Immediately following anaesthesia, the caudal peduncle is severed transversely, and the blood is removed from the caudal artery/vein with a heparinised microhematocrit capillary tube.
V případě, že je použito nosné rozpouštědlo, musí být koncentrace rozpouštědla nižší než stálá koncentrace bez pozorovaných účinků (NOEC);
Blood volumes range from 5 to 15 μl depending on fish size.
pokyny OECD doporučují maximálně 100 μl/l;
An equal volume of aprotinin buffer (6 μgml in PBS) is added to the microcapillary tube, and plasma is separated from the blood via centrifugation (5 minutes at 600 g).
nedávný přezkum doporučuje používat koncentrace rozpouštědla pouze 20 μl/l ředicí vody (12).
Plasma is collected in the test tubes and stored at – 20 °C until analyzed for vitellogenin or other proteins of interest.
Jsou-li použita jako nosiče rozpouštědla, je nutné vyhodnotit kontrolní měření nejen při použití vhodného rozpouštědla, ale i v pro případ, kdy se rozpouštědlo nepoužije (čistá voda).
Procedure 3B:
Pokud není možné dodat chemickou látku s vodou, buď kvůli fyzikálně-chemickým vlastnostem (nízká rozpustnost), nebo z důvodu omezené dostupnosti chemické látky, je možné zvážit její podání prostřednictvím potravy.
Zebrafish, Blood Collection by Cardiac Puncture
Volbu metody je nutné zdokumentovat a analyticky ověřit.
To avoid coagulation of blood and degradation of protein the samples are collected within Phosphate-buffered saline (PBS) buffer containing heparin (1000 units/ml) and the protease inhibitor aprotinin (2 TIU/ml).
Stanovení nejvyšší zkušební koncentrace
As ingredients for the buffer, heparin ammonium salt and lyophilised aprotinin are recommended.
Pro účely této zkoušky by měla být nejvyšší zkušební koncentrace rovna mezi rozpustnosti zkoušené chemické látky;
For blood sampling, a syringe (1 ml) with a fixed thin needle (e.g. Braun Omnikan-F) is recommended.
v případě akutně toxické chemické látky maximální tolerované koncentraci (MTC);
The syringe should be prefilled with buffer (approximately 100 μl) to completely elute the small blood volumes from each fish.
nebo 100 mg/l podle toho, která z těchto hodnot je nejnižší.
The blood samples are taken by cardiac puncture.
Maximální tolerovaná koncentrace je definována jako nejvyšší zkušební koncentrace chemické látky, která vede k nižší akutní mortalitě než 10 %.
At first the fish should be anesthetized with MS-222 (100 mg/l).
Použití tohoto přístupu předpokládá, že existují empirické údaje o akutní mortalitě, z nichž je možné maximální tolerovanou koncentraci odhadnout.
The proper plane of anaesthesia allows the user to distinguish the heartbeat of the zebrafish.
I když technicky nejspolehlivější metodou pro odhad maximální tolerované koncentrace je použití regresních modelů, užitečnou aproximaci maximální tolerované koncentrace lze odvodit z existujících údajů o akutní toxicitě pomocí 1/3 akutní hodnoty LC50.
While puncturing the heart, keep the syringe piston under weak tension.
Údaje o akutní toxicitě pro testovaný druh však mohou chybět.
Collectable blood volumes range between 20 - 40 microliters.
Pokud údaje o akutní toxicitě pro konkrétní druh nejsou k dispozici, lze provést 96hodinovou zkoušku LC50 s pulci, kteří jsou reprezentativním (tj. ve stejném stadiu) vzorkem pulců ze zkoušky metamorfózy obojživelníků.
After cardiac puncture, the blood/buffer-mixture should be filled into the test tube.
Volitelně, jsou-li dostupné údaje týkající se jiných druhů vodních živočichů (např. studie LC50 na rybách nebo na jiných druzích obojživelníků), je možné pravděpodobnou maximální tolerovanou koncentraci odhadnout mezidruhovou extrapolací na základě odborného posudku.
Plasma is separated from the blood via centrifugation (20 min; 5000 g) and should be stored at – 80 °C until required for analysis.
Alternativně, pokud chemická látka není akutně toxická a je rozpustná v koncentraci vyšší než 100 mg/l, měla by být za nejvyšší zkoušenou koncentraci (HTC) považována hodnota 100 mg/l, neboť tato koncentrace se obvykle považuje za ‚prakticky netoxickou‘.
Procedure 3C:
Ačkoli statické metody s obnovováním média nejsou doporučeným postupem, mohou být použity, pokud průtokové metody nepostačují k dosažení maximální tolerované koncentrace.
SOP:
Použijí-li se statické metody s obnovováním média, je třeba zdokumentovat stabilitu koncentrace zkoušené chemické látky, která by měla zůstat v mezích kritérií provedení zkoušky.
Zebrafish, homogenisation of head & tail
Médium se doporučuje obnovovat každých 24 hodin.
The fish are anaesthetised and euthanised in accordance with the test description.
Obnovení po více než 72 hodinách je nepřijatelné.
The head and tail are cut of the fish in accordance with Figure 1.
Kromě toho je třeba vždy, bezprostředně před každým obnovením, změřit parametry kvality vody (např. rozpuštěný kyslík, teplotu, pH atd.).
Important:
Rozpětí zkušebních koncentrací
All dissection instruments, and the cutting board should be rinsed and cleaned properly (e.g. with 96 % ethanol) between handling of each single fish to prevent “vitellogenin pollution” from females or induced males to uninduced males.
Požadovány jsou minimálně tři zkušební koncentrace a kontrola s čistou vodou (a v případě nutnosti kontrola s vehikulem).
Cut behind
Mezi nejvyšší a nejnižší zkušební koncentrací by měl rozdíl minimálně jednoho řádu.
Cut behind dorsal fin
Maximální odstupňování dávek je o 0,1 a minimální odstupňování je o 0,33.
For Vtg analysis
Zahájení a provádění zkoušky
For gonad histology
Expozice by měla být zahájena, jakmile dostatečný počet pulců v předexpoziční kmenové populaci, kteří jsou ve věku 17 dnů po oplodnění nebo mladší, dosáhne vývojového stadia 51 podle Nieuwkoopa a Fabera (8).
The weight of the pooled head and tail from each fish is measured to the nearest mg.
Pro výběr zkušebních zvířat je třeba zdravé a normálně vyhlížející pulce z kmenové populace shromáždit do jediné nádoby s přiměřeným množství ředicí vody.
After being weighed, the parts are placed in appropriate tubes (e.g. 1,5 ml eppendorf) and frozen at – 80 °C until homogenisation or directly homogenised on ice with two plastic pistils.
Pro určení stadia vývoje je třeba pulce jednotlivě vyjmout ze sběrné nádrže síťkou nebo odfiltrováním a přemístit do průhledné měřicí komory (např. Petriho misky o průměru 100 mm) s ředicí vodou.
(Other methods can be used if they are performed on ice and the result is a homogenous mass).
Při určování stadia se doporučuje pokud možno nepoužívat anestezii, avšak pulce je možné jednotlivě znecitlivět roztokem trikain–methan–sulfonátu v koncentraci 100 mg/l (např. MS-222), před manipulací vhodně pufrovaným hydrouhličitanem sodným.
The tubes should be numbered properly so that the head and tail from the fish can be related to their respective body-section used for gonad histology.
Použije-li se tento postup, měla by být metodika pro vhodné použití k anestezii, např. MS-222, získána z laboratoří, které s ní mají zkušenosti, a popsána ve zprávě o výsledcích zkoušky.
When a homogenous mass is achieved, 4 x the tissue weight of ice-cold homogenisation buffer is added.
Se zvířaty je třeba při tomto přemístění zacházet opatrně, aby se minimalizoval manipulační stres a předešlo jakémukoli poranění.
Keep working with the pistils until the mixture is homogeneous.
Stadium vývoje zvířat se určí pomocí binokulárního preparačního mikroskopu.
Important note:
Aby se snížila konečná variabilita v rámci jednoho vývojového stadia, je důležité určení stadia provést co nejpřesněji.
New pistils are used for each fish.
Podle Nieuwkoopa a Fabera (8) je hlavním vývojovým znakem při výběru organismů ve stadiu 51 morfologie zadní končetiny.
The samples are placed on ice until centrifugation at 4 °C at 50000 × g for 30 min.
Morfologické znaky zadních končetin je třeba zkoumat pod mikroskopem.
Use a pipette to dispense portions of 20 μl supernatant into at least two tubes by dipping the tip of the pipette below the fat layer on the surface and carefully sucking up the supernatant without fat- or pellet fractions.
Pro získání komplexních informací o určení stadií u pulců je třeba si pročíst celý návod Nieuwkoopa a Fabera (8), avšak stadium vývoje lze spolehlivě určit pomocí výrazných morfologických znaků.
The tubes are stored at – 80 °C until use.
Pro zjednodušení a standardizaci procesu určení stadií během celé studie pomocí identifikace těchto výrazných morfologických znaků spojených s jednotlivými stadii za předpokladu, že vývoj je normální, je možné použít následující tabulku.
Homogenisation buffer:(50 mM Tris-HCl pH 7,4; 1 % Protease inhibitor cocktail (Sigma)):
Výrazné morfologické znaky pro určení stadií vývoje podle Neuwkoopa a Fabera.
12 ml Tris-HCl pH 7,4 + 120 μl Protease inhibitor cocktail.TRIS:
Výrazné morfologické znaky
TRIS-ULTRA PURE (ICN) e.g. from Bie & Berntsen, Denmark.Protease inhibitor cocktail:
Stadium vývoje
From Sigma (for mammalian tissue) Product number P 8340.Note:
Zadní končetina
The homogenisation buffer should be used the same day as manufactured.
Přední končetina
Place on ice during use.
Kraniofaciální struktura
Vitellogenin fortification samples and inter-assay reference standard
Morfologie čichového nervu
On each day that vitellogenin assays are performed, a fortification sample made using an inter-assay reference standard will be analysed.
Délka ocasu
The vitellogenin used to make the inter-assay reference standard will be from a batch different from the one used to prepare calibration standards for the assay being performed.
Pro zahájení zkoušky by všichni pulci měli být ve stadiu 51.
The fortification sample will be made by adding a known quantity of the inter-assay standard to a sample of control male plasma.
Nejvýraznějším morfologickým znakem pro určení stadia je v tomto stadiu morfologie zadní končetiny, což je zobrazeno na obrázku 1.
The sample will be fortified to achieve a vitellogenin concentration between 10 and 100 times the expected vitellogenin concentration of control male fish.
Morfologie zadní končetiny ve stadiu 51 pulce X. laevis.
The sample of control male plasma that is fortified may be from an individual fish or may be a composite from several fish.
Kromě výběru podle stadia vývoje je volitelně možné použít výběr podle velikosti zkušebních zvířat.
A subsample of the unfortified control male plasma will be analysed in at least two duplicate wells.
Za tímto účelem je třeba změřit délku celého těla (nikoli délku těla od tlamy po kloaku (SVL)) v den 0 z dílčího vzorku přibližně 20 pulců ve stadiu 51 podle Nieuwkoopa a Fabera.
The fortified sample also will be analysed in at least two duplicate wells.
Po výpočtu střední délky celého těla pro tuto skupinu pulců je možné stanovit minimální a maximální meze délky celého těla zkušebních zvířat tak, že se povolí rozpětí střední hodnoty ± 3 mm (střední hodnota délky celého těla u pulců ve stadiu 51 je mezi 24,0 a 28,1 mm).
The mean quantity of vitellogenin in the two unfortified control male plasma samples will be added to the calculated quantity of vitellogenin added to fortification the samples to determine an expected concentration.
Hlavním parametrem při určování připravenosti každého zkušebního zvířete je však stanovení stadia vývoje.
The ratio of this expected concentration to the measured concentration will be reported along with the results from each set of assays performed on that day.
Pulce, kteří vykazují viditelné malformace nebo poranění, je třeba ze zkoušky vyloučit.
Decision flowchart for the statistical analysis
Pulci, kteří splňují výše popsaná kritéria stadia, jsou uchováváni v nádržce s čistou kultivační vodou, dokud postup určení stadia není dokončen.
Dunnett test on nested ANOVA
Jakmile se určení stadia dokončí, larvy se náhodně rozdělí do expozičních nádrží tak, aby každá nádrž obsahovala 20 larev.
No Yes
Každá expoziční nádrž se pak zkontroluje, zda neobsahuje zvířata s abnormálním vzhledem (např. poraněním, nestandardním plaváním atd.).
Dunn or Mann-Whitney test on rep means
Pulci, kteří vypadají zjevně nezdravě, by měli být z expozičních nádrží odstraněni a nahrazeni larvami nově vybranými ze sběrné nádrže.
variance stabilising transform
Podrobnější informace ohledně postupů ukončení zkoušky a výběru pulců viz Metodický dokument OECD pro histologii štítné žlázy u obojživelníků (OECD Guidance Document on Amphibian Thyroid Histology (9)).
>=4 reps per conc
Měření v den 7.
<=3 reps per conc Dunn test Yes
V den 7 se z každé zkušební nádrže (opakování) vyjme pět náhodně zvolených pulců.
No Normalising transform?
Použitý postup náhodného výběru by každému organismu ve zkoušce měl poskytnout stejnou pravděpodobnost, že bude vybrán.
Tamhane-Dunnett test >=4 reps per conc
Toho lze dosáhnout použitím jakékoli metody náhodného výběru, avšak vyžaduje se, aby každý pulec byl očištěn.
<=3 reps per conc Nested ANOVA not normal No Yes No
Pulci, kteří nebyli vybráni, se vrátí do své původní nádrže a pulci, kteří vybráni byli, se humánně usmrtí v roztoku o koncentraci 150 až 200 mg/l, např. MS-222, vhodně pufrovaném hydrouhličitanem sodným tak, aby bylo dosaženo pH 7,0.
Yes variance stabilising transformation
Utracení pulci se opláchnou ve vodě a osuší, poté se stanoví jejich tělesná hmotnost se zaokrouhlením na miligramy.
Dunnett test Variances unequal
U každého pulce se stanoví (pomocí binokulárního preparačního mikroskopu) délka zadní končetiny, délka těla od tlamy po kloaku a stadium vývoje.
Variances equal
Měření v den 21. (při ukončení zkoušky)
Not monotone
Při ukončení zkoušky (den 21) se zbývající pulci vyjmou ze zkušebních nádrží a humánně usmrtí v roztoku o koncentraci 150 až 200 mg/l, např. MS-222, vhodně pufrovaném hydrouhličitanem sodným, jak uvedeno výše.
Stept-down Jonckheere or Williams' test
Pulci se opláchnou ve vodě a osuší, poté se stanoví jejich tělesná hmotnost se zaokrouhlením na miligramy.
Step-down trendtest on replicate means
U každého pulce se změří stadium vývoje, délka těla od tlamy po kloaku a délka zadní končetiny.
Monotone
Všechny larvy se na 48 až 72 hodin ponoří do Davidsonova fixačního média buď jako vzorky celého těla, nebo jako tkáňové vzorky odříznuté hlavy se spodní čelistí pro histologická vyšetření.
Tamhane-Dunnett test on nested ANOVA
Pro histopatologii by z každé nádrže (opakování) mělo být odebráno celkem pět pulců.
Dunn test on rep means
Jelikož výška folikulární buňky závisí na stadiu vývoje (10), nejvhodnější metodou pro odběr vzorků pro účely histologických analýz je použít pokud možno jedince ve stejném stadiu.
Dunn or Mann-Whitney test
Aby bylo možno vybrat jedince ve stejném stadiu, je třeba před výběrem a následným zpracováním za účelem sběru a uchování údajů provést u všech larev určení stadia vývoje.
Nested ANOVA normal
Je to nezbytné, protože běžná odchylka ve vývoji bude mít za následek rozdílnou distribuci stadií v každé nádrži (opakování).
Rep means normally distributed
Pulce vybrané pro histopatologii (n = 5 z každé nádrže k opakování) je třeba pokud možno porovnávat se střední hodnotou stadia kontrolních vzorků (ze spojených replik/opakování).
Step-down Jonckheere test
Pokud existují nádrže (opakování) s více než pěti larvami v odpovídajícím stadiu, náhodně se vybere pět larev.
Rep means normal or not homogenous
Pokud existují nádrže (opakování) s méně než pěti larvami v odpovídajícím stadiu, je třeba odebrat vzorek náhodně vybraných jedinců v nejbližším nižším nebo vyšším stadiu vývoje tak, aby celková velikost vzorku dosáhla pěti larev pro každé opakování.
Rep means normal & homogenous
Rozhodnutí, zda odebrat tyto další larvy v nejbližším vyšším, anebo nejbližším nižším stadiu vývoje, by mělo být učiněno na základě celkového hodnocení distribuce stadií v rámci kontroly a v rámci expozic chemické látce.
Determine whether Dose-Response is monotone
Tzn. je-li expozice dané chemické látce spojena se zpomalením vývoje, pak by vzorek dalších larev měl být odebrán v nejbližším nižším stadiu.
C.38.
A naopak, je-li expozice dané chemické látce spojena s urychlením vývoje, pak by vzorek dalších larev měl být odebrán v nejbližším vyšším stadiu.
THE AMPHIBIAN METAMORPHOSIS ASSAY