natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Shluky vajíček se použijí pro založení nové kultivační nádoby (např. 2–4 shluky vajíček na nádobu) nebo pro zkoušky toxicity.
Preparation of the water-sediment system (water spiking)
Larvy prvního instaru by se měly vylíhnout za 2–3 dny.
a.
Zakládání nových kultivačních nádob
Formulated sediment (see paragraphs 13-14 and Appendix 3) is added to each test vessel and crystallising dish to form a layer of at least 1,5 cm (for the crystallising dish it may be somewhat lower) but maximally 3 cm.
Jakmile jsou kultury založeny, mělo by být možné s kulturami larev jednou týdně nebo méně často v závislosti na zkušebních požadavcích zakládat nové nádoby a odstraňovat starší nádoby po vylíhnutí dospělců.
Water (see paragraph 15) is added so that the ratio of the depth of the sediment layer and the depth of the water does not exceed 1:4.
Pomocí tohoto systému se zajistí pravidelné dodávky dospělců s minimální potřebou dohledu.
After preparation of the test vessels the sediment-water system should be left under gentle aeration for approximately seven days prior to addition of the first instar larvae of the 1st or 2nd generation (see paragraph 14 and Appendix 3).
Příprava zkušebních roztoků ‚M4‘ a ‚M7‘
The sediment-water system of the crystallising dishes is not aerated during the test, since they do not need to support larval survival (before hatching the egg ropes are already collected).
Médium ‚M4‘ popsal Elendt (1990).
To avoid separation of sediment ingredients and re-suspension of fine material during addition of test water in the water column, the sediment can be covered with a plastic disc while water is poured onto it.
Médium ‚M7‘ se připraví obdobně jako médium ‚M4‘ s výjimkou látek uvedených v tabulce 1, u nichž jsou koncentrace u ‚M7‘ čtyřikrát nižší než u ‚M4‘.
The disc is removed immediately afterwards.
Podle Elendta a Biase (1990) by se zkušební roztok neměl připravovat, protože pro koncentrace NaSiO3 · 5H2O, NaNO3, KH2PO4 a K2HPO4 nejsou pro přípravu zásobních roztoků vhodné.
Other devices may also be appropriate.
Příprava média ‚M7‘
Preparation of the water-sediment system (spiked sediment)
Každý zásobní roztok (I) se připraví samostatně a z těchto zásobních roztoků (I) se pak připraví kombinovaný zásobní roztok (II) (viz tabulka 1).
b.
Médium ‚M7‘ se připraví přidáním 50 ml kombinovaného zásobního roztoku (II) a množství zásobního roztoku jednotlivých makroživin, které jsou uvedeny v tabulce 2, do 1 litru deionizované vody.
The spiked sediments prepared according to paragraph 16b are placed in the vessels and crystallising dish and overlying water is added to produce a sediment-water volume ratio of 1:4.
Vitaminový zásobní roztok se připraví přidáním tří vitaminů do deionizované vody, jak je uvedeno v tabulce 3, a 0,1 ml kombinovaného vitaminového zásobního roztoku se přidá do výsledného média ‚M7‘ krátce před použitím.
The depth of the sediment layer should be in the range of 1,5 to 3 cm (it may be somewhat lower for the crystallising dish).
Vitaminový zásobní roztok se uskladňuje zmrazený v malých stejnoměrných dílech.
To avoid separation of sediment ingredients and re-suspension of fine material during addition of test water in the water column, the sediment can be covered with a plastic disc while water is poured onto it, and the disc removed immediately afterwards.
Zásobní roztoky stopových prvků pro médium M4 a M7
Appropriate equilibration time is sediment and chemical specific, and can be in the order of hours to days and in rare cases up to five weeks.
Zásobní roztoky (I)
As this would leave time for degradation of many chemicals, equilibrium is not awaited but an equilibration period of 48 hours is recommended.
Množství (mg) doplněné na 1 litr deionizované vody
However, when the degradation half-life of the chemical in sediment is known to be long (see paragraph 8), the equilibration time may be extended.
Konečné koncentrace ve zkušebním roztoku (mg/l)
At the end of this further equilibration period, the concentration of the test chemical should be measured in the overlying water, the pore water and the sediment, at least at the highest concentration and a lower one (see paragraph 38).
MnCl2 · 4H2O [1]
These analytical determinations of the test chemical allow for calculation of a mass balance and expression of results based on measured concentrations.
SrCl2 · 6H2O [1]
Test vessels should be covered (e.g. by glass plates).
MoO4 · 2H2O [1]
If necessary, during the study the water levels may be topped up to the original volume in order to compensate for evaporation.
CuCl2 · 2H2O [1]
This should be performed using distilled or deionised water to prevent any build-up of salts.
CaCl2 · 6H2O
Crystallising dishes in the breeding cages are not covered and may, but do not need to be adjusted to compensate for water loss during the test period, since the egg ropes are only in contact with the water for about one day and the dishes are only used during a short phase of the test.
EDTA · 2H2O [1] [2]
Addition of test organisms
FeSO4 · 7H2O [1] [2]
Four to five days before adding the first instar larvae for the 1st generation, egg masses should be taken from the culture and placed in small vessels in culture medium.
Zásobní roztoky makroživin pro médium M4 a M7
Aged medium from the stock culture or freshly prepared medium may be used.
Množství doplněné na 1 litr deionizované vody
In any case, a small amount of food, e.g. a few droplets of filtrate from a finely ground suspension of flaked fish food, should be added to the culture medium (see Appendix 2).
Množství zásobních roztoků makroživin přidané za účelem přípravy média M4 a M7
Only freshly laid egg masses should be used.
Konečné koncentrace ve zkušebním roztoku M4 a M7
Normally, the larvae begin to hatch a couple of days after the eggs are laid (2 to 3 days for C. riparius at 20 °C and 1 to 4 days for C. dilutus at 23 °C and C. yoshimatsui at 25 °C) and larval growth occurs in four instars, each of 4-8 days duration.
Vitaminový zásobní roztok pro médium M4 a M7
First instar larvae (maximum 48 h post hatching) should be used in the test.
Všechny tři vitaminové roztoky se smísí do jediného vitaminového zásobního roztoku.
The instar stage of larvae can potentially be checked using head capsule width (7).
Množství vitaminového zásobního roztoku přidané za účelem přípravy média M4 a M7
Twenty first instar larvae for the 1st generation are allocated randomly to each test vessel containing the sediment-water system, using a blunt pipette.
Biotin
In the spiked sediment design, exposure starts with the addition of the larvae.
Tyto chemické látky se u M4 a M7 liší, jak je uvedeno výše.
Spiking the overlying water
Tyto roztoky se připravují samostatně, spojí se a ihned se zpracují v autoklávu.
Twenty-four hours after adding the first instar larvae for the 1st generation, the test chemical is spiked into the overlying water column, and slight aeration is again supplied (for possible amendments of the test design, see paragraph 7).
Příprava umělého sedimentu
Small volumes of the test chemical stock solutions are applied below the surface of the water using a pipette.
SLOŽENÍ SEDIMENTU
The overlying water should then be mixed with care not to disturb the sediment.
Složení připraveného sedimentu by mělo být následující:
In the spiked water design, exposure starts with the spiking of the water (i.e. one day after addition of the larvae).
rašeliníková (Sphagnum) rašelina s pH co nejblíže 5,5 až 6,0, bez viditelných zbytků rostlin a jemně mletá (velikost částic ≤ 1 mm) a vysušená na vzduchu
Collecting emerged adults
4–5
Emerged midges of the 1st generation are collected at least once, but preferably twice a day (see point 36) from the test vessels using an aspirator, exhauster or similar device (see Appendix 5).
> 50 % částic musí být v rozpětí 50–200 μm
Special care should be taken not to damage the adults.
CaCO3, práškový, chemicky čistý
The collected midges from four test vessels within one treatment are released into a breeding cage to which they had been previously assigned.
0,05–0,1
At the day of first (male) emergence, crystallising dishes are spiked by pipetting a small volume of the test chemical stock solution below the water surface (spiked water design).
vodivost ≤ 10 μS/cm
The concentration of test chemical in the crystallising dish is nominally the same as in the treatment vessels which are assigned to that specific breeding cage.
PŘÍPRAVA
For the spiked sediment design, the crystallising dishes are prepared at around day 11 after the start of the exposure (i.e. addition of the 1st generation larvae) so that they can equilibrate for about 48 hours before the first egg ropes are produced.
Suspenze se po dobu nejméně dvou dnů za mírného promíchávání při 20 ± 2 °C kondicionuje za účelem stabilizace pH a vytvoření stabilní mikrobiální složky.
Egg ropes are collected from the crystallising dish in the breeding cage using tweezers or a blunt pipette.
Poté se opět změří pH, které by se mělo rovnat 6,0 ± 0,5.
Each egg rope is placed into a vessel containing culture medium from the crystallising dish it was collected from (e.g. a well of a 12-well micro-plate together with at least 2,5 ml of medium).
Znovu se změří pH konečné směsi a v případě nutnosti se opět upraví pomocí CaCO3 na hodnotu 6,5 až 7,5.
The vessels with the egg ropes are covered with a lid to prevent significant evaporation.
Před použitím pro zkoušku toxicity pro pakomáry se doporučuje připravený sediment kondicionovat po dobu 7 dnů za stejných podmínek, které budou převládat v následné zkoušce.
Egg ropes are kept for observation for at least six days after they have been produced so that they can be classified as fertile or infertile.
SKLADOVÁNÍ
For starting the 2nd generation, at least three but preferably six fertile egg ropes are selected from each breeding cage and together with some food allowed to hatch.
Suché složky pro přípravu umělého sedimentu lze skladovat na suchém a chladném místě při pokojové teplotě.
These egg ropes should have been produced at the peak of oviposition, which normally occurs around test day 19 in the controls.
Připravený (vlhký) sediment by před použitím ve zkoušce neměl být skladován.
Ideally, the 2nd generation of all treatments is initiated on the same day, but due to chemical related effects on larval development, this may not always be possible.
Měl by se použít ihned po uplynutí 7denního období kondicionování, kterým končí jeho příprava.
In such a case, the higher concentrations may be initiated later than the lower treatments and the (solvent) control.
Safety, 39: pp.
a.
10–20.
In the spiked water design, the sediment-water system for the 2nd generation is prepared by spiking the test chemical into the overlying water column ca.
Chemické charakteristiky přípustné ředicí vody
1 hour before adding the first instar larvae to the test vessels.
SLOŽKA
Small volumes of the test chemical solutions are applied below the surface of the water using a pipette.
KONCENTRACE
After spiking, slight aeration is supplied.
Tvrdost vyjádřená jako obsah CaCO3
b.
Je však třeba poznamenat, že v případech, kdy existuje podezření na interakci mezi ionty způsobujícími tvrdost vody a zkoušenou látkou, by měla být použita voda nižší tvrdosti (v takovéto situaci by tedy nemělo být použito Elendtovo médium M4).
In the spiked sediment design, the exposure vessels containing the sediment-water system for the 2nd generation are prepared in the same way as for the 1st generation.
Pokyny pro provedení zkoušky
Twenty first instar larvae (maximum 48 h post hatching) of the 2nd generation are allocated randomly to each test vessel containing the spiked sediment-water system, using a blunt pipette.
Příklad chovné klece:
Aeration of the water should be stopped while adding the first instar larvae to the test vessels and remain so for another 24 hours after addition of the larvae.
B otvor pro vkládání vylíhlých dospělců do chovné klece a odstraňování nakladených šňůr vajíček z krystalizačních misek (na tomto nákresu nejsou zobrazeny) C minimální velikost chovné klece:
It is necessary to feed the larvae in the test vessels, preferably daily or at least three times per week.
délka 30 cm, výška 30 cm a šířka 30 cm
Fish-food (a suspension in water or finely ground food, e.g. Tetra-Min or Tetra-Phyll; see details in Appendix 2) of 0,25 - 0,5 mg (0,35 - 0,5 mg for C. yoshimatsui) per larvae per day is an adequate amount of food for young larvae during the first 10 days of their development.
Příklad zkušební nádoby:
Slightly more food may be necessary for older larvae:
A Pasteurova pipeta pro provzdušňování vody nad sedimentem
0,5 - 1,0 mg per larvae per day should be sufficient for the rest of the test.
B skleněné víčko bránící vylíhlým pakomárům v opuštění nádoby
The food ration should be reduced in all treatments and control if fungal growth is seen or if mortality is observed in controls.
C hladina vody
If fungal development cannot be stopped the test should be repeated.
D zkušební nádoba (skleněná kádinka, minimální objem 600 ml)
The toxicological relevance of exposure via ingestion is generally higher in chemicals with a high affinity for organic carbon or chemicals covalently binding to the sediment.
E vrstva sedimentu
Hence, when testing chemicals with such properties, the amount of food necessary to ensure survival and natural growth of the larvae may be added to the formulated sediment before the stabilisation period, depending on the regulatory demand.
Příklad exhaustoru pro odchyt dospělých pakomárů (šipky znázorňují směr proudu vzduchu)
To prevent deterioration of the water quality, plant material should be used instead of fish food, e.g. addition of 0,5 % (dry weight) finely ground leaves of stinging nettle (Urtica dioica), mulberry (Morus alba), white clover (Trifolium repens), spinach (Spinacia oleracea) or other plant material (Cerophyl or α-cellulose).
Z vnitřní strany je vyústění skleněné trubice (A) obloženo určitým množstvím bavlny a gázou (velikost ok přibližně 1 mm) s cílem zamezit poškození pakomárů, když jsou vtahováni do exhaustoru
Addition of the complete ration of an organic food source to the sediment before spiking is not trivial with respect to water quality and biological performance (21), nor a standardised method, but recent studies provide indications that this method works (19) (26).
C průhledná nádržka (plastová nebo skleněná, délka přibližně 15 cm) pro odchycené pakomáry
Adult midges in the breeding cage need no feeding normally, but fecundity and fertility are enhanced when a cotton wool pad soaked in a saturated sucrose solution is offered as a food source for emerged adults (34).
D zátka z vulkanizované pryže, jíž prochází skleněná trubice (E).
Gentle aeration of the overlying water in the test vessels is supplied 24 hours after addition of the first instar larvae of both generations and is continued throughout the test (care should be taken that the dissolved oxygen concentration does not fall below 60 % of ASV).
Pro vypuštění do chovné klece se zátka D vyjme z nádoby C
Aeration is provided through a glass Pasteur pipette of which the outlet is fixed 2-3 cm above the sediment layer giving a few bubbles/sec.
E trubice (plastová nebo skleněná, vnitřní průměr přibližně 8 mm) k odběru dospělých pakomárů z nádoby
When testing volatile chemicals, consideration should be given not to aerate the sediment-water system, while at the same time the validity criterion of minimal 60 % ASV (paragraph 10) should be fulfilled.
Schematický přehled zkoušky toxicity během životního cyklu:
Further guidance is provided in (16).
A první generace – zkušební nádoby obsahující systém sediment-voda, osm opakování, 20 larev prvního instaru v každé nádobě
The test with C. riparius is conducted at a constant temperature of 20 °C (± 2 °C).
B čtyři zkušební nádoby pro každou chovnou klec, A a B
For C. dilutus and C. yoshimatsui, recommended temperatures are 23 °C and 25 °C (± 2 °C), respectively.
C chovné klece (A a B) pro rojení, páření a kladení vajíček
A 16 hours photoperiod is used and the light intensity should be 500 to 1000 lux.
D krystalizační misky pro odkládání šňůr vajíček
For the breeding cages an additional one hour dawn and dusk phase may be included.
E mikrotitrační destičky, jedna jamka na každou šňůru vajíček
Exposure duration
F druhá generace – zkušební nádoby obsahující systém sediment-voda, osm opakování, 20 larev prvního instaru v každé nádobě
Spiked water design:
ZKOUŠKA POHLAVNÍHO VÝVOJE RYB
The exposure period of the 1st generation starts when the test chemical is spiked into the overlying water of the test vessels (which is one day after insertion of the larvae — for possible amendments of the exposure design, see paragraph 7).
Tato zkušební metoda je rovnocenná Pokynu OECD pro zkoušení č. 234 (2011).
Exposure of the 2nd larval generation starts immediately, since they are inserted into a sediment-water system that has been already spiked.
Je založena na rozhodnutí přijatém v roce 1998 s cílem vyvinout nové nebo aktualizovat stávající zkušební metody pro screening a zkoušky potenciálních endokrinních disruptorů.
The maximum exposure duration for the 1st generation is 27 days and for the 2nd generation 28 days (the 1st generation larvae spend one day in the vessels without exposure) for C. riparius and C. yoshimatsui.
Zkouška pohlavního vývoje ryb (FSDT) byla označena za slibnou zkušební metodu zahrnující citlivé životní stadium ryb, kdy reagují na chemické látky typu estrogenů a androgenů.
Considering the overlap, the complete test duration is approximately 44 days.
V letech 2006 až 2013 byly k této zkušební metodě provedeny mezilaboratorní validační studie, při kterých byly validovány zkoušky s halančíkem japonským (Oryzias latipes), daniem pruhovaným (Danio rerio) a koljuškou tříostnou (Gasterosteus aculeatus) a částečně validována zkouška s jelečkem velkohlavým (Pimephales promelas) (41)(42)(43).
For C. dilutus, maximum exposure durations are 64 and 65 days, for the 1st and 2nd generation, respectively.
Tento pokyn zahrnuje halančíka japonského, koljušku tříostnou a danio pruhované.
The total duration is approximately 100 days.
Pokyn v zásadě navazuje na pokyn OECD TG 210 Zkouška toxicity na raných životních stadiích ryb (1), přičemž expozice pokračuje, dokud nedojde k pohlavní diferenciaci ryb, tj. přibližně 60 dní po vylíhnutí pro halančíka japonského, koljušku tříostnou a dania pruhovaného (u jiných druhů, které budou validovány v budoucnu, může být doba expozice kratší), a je doplněn o ukazatele citlivosti endokrinního systému.
Spiked sediment design:
Zkouška FSDT hodnotí účinky chemických látek, které by mohly způsobovat poruchy endokrinního systému (např. estrogenů, androgenů a inhibitorů steroidogeneze), v raném životním stadiu a případné nepříznivé důsledky těchto chemických látek pro pohlavní vývoj.
exposure starts with the addition of the larvae and is maximum 28 days for both generations for C. riparius and C. yoshimatsui and maximum 65 days for both generations for C. dilutus.
Kombinace dvou základních endokrinních ukazatelů, koncentrace vitelogeninu (VTG) a fenotypový poměr pohlaví, umožňuje při této zkoušce prokázat mechanismus působení zkoušené chemické látky.
Emergence
Metoda je založena na expozici ryb chemickým látkám prostřednictvím vody v pohlavně labilním období, kdy lze očekávat, že ryba je vůči účinkům chemických látek způsobujících poruchy endokrinního systému, které interferují s pohlavním vývojem, nejcitlivější.
Test vessels of both generations should be observed at least three times per week to make visual assessment of any abnormal behaviour of the larvae (e.g. leaving sediment, unusual swimming), compared to the control.
Jsou měřeny dva základní ukazatele – indikátory vývojových vad souvisejících s endokrinním systémem, a to koncentrace VTG a poměry pohlaví určené histologií pohlavních žláz.
During the period of emergence, which starts about 12 days after insertion of the larvae for C. riparius and C. yoshimatsui (after 20 days for C. dilutus), emerged midges are counted and sexed at least once, but preferably twice a day (early morning and late afternoon).
Histopatologie pohlavních žláz (hodnocení a určení stadií oocytů a spermatogenetických buněk) je volitelná.
After identification, the midges of the 1st generation are carefully removed from the vessels and transferred to a breeding cage.
Tam, kde je to možné (např. u halančíka japonského a koljušky tříostné) se navíc určí genetické pohlaví.
Midges of the 2nd generation are removed and killed after identification.
Přítomnost markerů genetického pohlaví je značnou výhodou, neboť zvyšuje průkaznost statistických údajů o poměru pohlaví a umožňuje zjistit fenotypovou změnu pohlaví jedinců.
Any egg ropes deposited in the test vessels of the 1st generation should be collected individually and transferred with at least 2,5 ml native water to 12-well microplates (or other suitable vessels) which are covered with a lid to prevent significant evaporation.
Jinými klíčovými ukazateli, které by měly být měřeny, jsou míra vylíhnutí, přežití, délka a tělesná hmotnost.
The number of dead larvae and visible pupae that have failed to emerge should also be recorded.
Tuto zkušební metodu by bylo možno přizpůsobit i pro jiné druhy, než které byly uvedeny výše, a to za předpokladu, že tyto jiné druhy projdou stejnou validací, jako byla validace provedená pro halančíka japonského, koljušku tříostnou a danio pruhované, kontrolní ryby budou na konci zkoušky pohlavně diferencované, úrovně VTG budou dostatečně vysoké, aby bylo možné zjistit významné změny související s chemickou látkou, a citlivost zkušebního systému byla stanovena pomocí referenčních chemických látek ovlivňujících funkci endokrinního systému ((anti)-estrogenů, (anti)-androgenů, inhibitorů aromatázy atd.).
Examples of a breeding cage, test vessel and exhauster are provided in Appendix 5.
Veškeré validační zprávy odkazující na údaje zkoušky FSDT s užitím jiných druhů musí přezkoumat OECD a výsledek validace musí být shledán dostatečným.
Reproduction
Výchozí úvahy a omezení
Effects on reproduction are assessed via the number of egg ropes produced by the 1st generation of midges and the fertility of these egg ropes.
VTG obvykle vzniká v játrech samiček vejcorodých obratlovců v reakci na endogenní estrogen v krevním oběhu (2).
Once per day the egg ropes are collected from the crystallising dish that is placed in each breeding container.
Syntéza VTG je velmi omezená, ale zjistitelná, u nedospělých ryb a dospělých rybích samečků, protože nemají dostatek estrogenu v krevním oběhu.
The egg ropes should be collected and transferred with at least 2,5 ml native water to a 12-wells microplate (one egg rope in each well) or other suitable vessels, which are covered with a lid to prevent significant evaporation.
Játra jsou však schopna syntetizovat a vylučovat VTG jako reakci na exogenní stimulaci estrogenem (3)(4)(5).
The following characteristics are documented for each egg rope:
Měření VTG slouží k zjištění chemických látek s estrogenními, antiestrogenními a androgenními účinky a chemických látek, jež interferují se steroidogenezí, jako například s inhibitory aromatázy.
day of production, size (normal, i.e. 1,0 ± 0,3 cm or small; typically ≤ 0,5 cm), and structure (normal = banana-form with spiralled egg string or abnormal, e.g. unspiralled egg string) and fertility (fertile or infertile).
Zjišťování estrogenních chemických látek je možné pomocí měření indukce VTG u samečků ryb a bylo rozsáhle zdokumentováno v recenzované vědecké literatuře.
Over the course of six days after it was produced the fertility of an egg rope is assessed.
Indukce VTG byla rovněž prokázána na základě expozice aromatizovatelným androgenům (6)(7).
An egg rope is considered fertile when at least one third of the eggs hatch.
Pokles úrovně estrogenu v krevním oběhu u samiček, například prostřednictvím inhibice aromatázy, která endogenní androgen přeměňuje v přírodní estrogen 17-beta-estradiol, způsobuje snížení koncentrace VTG, což se používá k zjištění chemických látek s vlastnostmi způsobujícími inhibici aromatázy, nebo obecněji inhibitorů steroidogeneze (33).
The total number of females added to the breeding cage is used to calculate the number of egg ropes per female and the number of fertile egg ropes per female.