natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Existují dvě hlavní odchylky od harmonogramu: i) jestliže se použije prodloužená fáze příjmu pro účely zkoumání kinetiky příjmu, dojde k dodatečným odběrům vzorků během fáze příjmu, a bude tedy nutné zařadit dodatečné ryby (srov. odstavec 126; ii) jestliže byla studie na konci fáze příjmu ukončena z důvodu neexistence měřitelného příjmu (srov. odstavec 131).
If used, the reference substance should preferably be incorporated at a concentration around 10 % of that of the test substance (or in any case as low as is practicable), subject to analysis sensitivity (e.g. for hexachlorobenzene a concentration in the food of 1-100 μg/g has been found to be acceptable; cf. (47) for more information on assimilation efficiencies of HCB).
Jednotlivé ryby, které se odeberou ve vzorku, by měly být zváženy (a změřena jejich celková délka), aby bylo možné stanovit rychlostní konstanty růstu.
The test substance can be spiked to the fish food in several ways depending on its physical characteristics and solubility (see Appendix 7 for more details on spiking methods):
Koncentrace látky ve specifické rybí tkáni (jedlé a nejedlé podíly) lze rovněž měřit na konci fáze příjmu a ve vybraných dobách fáze vylučování.
If the substance is soluble and stable in triglycerides, the substance should be dissolved in a small amount of fish oil or edible vegetable oil before mixing with fish food.
Pokud se zkouší radioizotopově značený materiál, měly by být vzaty v úvahu podobné okolnosti jako při metodě expozice ve vodním prostředí, přičemž namísto analýzy vody se provádí analýza potravy (srov. odstavec 65).
In this instance, care should be taken to avoid producing a ration that is too high in lipid, taking into account the natural lipid content of the spiked feed, by adding the minimum known quantity of oil required to achieve distribution and homogeneity of the test substance in the food, or;
Obsah lipidů u jednotlivých ryb by měl být stanoven při každém odběru nebo alespoň na začátku a na konci fáze příjmu a na konci fáze vylučování (srov. odstavce 56 a 67).
The food should be spiked using a suitable organic solvent, so long as homogeneity and bioavailability are not compromised (it is possible that (micro)crystals of the test substance may form in the food as a consequence of solvent evaporation and there is no easy way to prove this has not occurred; cf.
V závislosti na analytické metodě (srov. odstavec 67 a dodatek 4) lze možná použít stejné ryby ke stanovení obsahu lipidů i koncentrací zkoušené látky.
(49)), or;
To je upřednostňováno z důvodu minimalizace počtu ryb.
Non-viscous liquids should be added directly to fish food but they should be well mixed to promote homogeneity and facilitate good assimilation.
Pokud by to však nebylo možné, lze použít stejný postup, který je popsán v metodě expozice ve vodním prostředí (možnosti alternativního měření lipidů viz odstavec 56).
The technique for mixing should ensure homogeneity of the spiked feed.
Metodu, která byla použita ke kvantifikaci obsahu lipidů, je třeba zdokumentovat v závěrečné zprávě.
In few cases, e.g. less hydrophobic test substances more likely to desorb from the food, it may be necessary to coat prepared food pellets with a small quantity of corn/fish oil (see paragraph 142).
Kvalita analytické metody
In such cases, control food should be treated similarly and the final prepared feed used for lipid measurement.
Měly by být prováděny experimentální kontroly s cílem zajistit specifičnost, přesnost a reprodukovatelnost analytické metody pro danou látku a rovněž výtěžky zkoušené látky z potravy a z ryb.
If used, the results of the reference substance should be comparable with literature study data carried out under similar conditions with a comparable feeding rate (cf. paragraph 45) and reference substance-specific parameters should meet the relevant criteria in paragraph 113 (3rd, 4th and 5th points).
Na začátku zkoušky je třeba zvážit vzorek ryb z kmenové populace (a změřit jejich celkovou délku).
If an oil or carrier solvent is used as a vehicle for the test substance, an equivalent amount of the same vehicle (excluding test substance) should be mixed with the control diet in order to maintain equivalency with the spiked diet.
Tyto ryby by měly být odebrány krátce před prvním podáním obohaceného krmiva a přiděleny k experimentálnímu dnu 0.
The spiked diet should be stored under conditions that maintain stability of the test substance within the feed mix (e.g. refrigeration) and these conditions reported.
Počet ryb v tomto vzorku by měl být přinejmenším stejný jako počet ryb ve vzorcích během zkoušky.
Selection of fish species
Některé z nich mohou být tytéž ryby, které jsou použity pro analýzu lipidů před začátkem fáze příjmu (srov. odstavec 153).
Fish species as specified for the aqueous exposure may be used (cf. paragraph 32 and Appendix 3).
Při každém odběru vzorků se ryby nejprve zváží a změří se jejich délka.
Rainbow trout (Oncorhynchus mykiss), carp (Cyprinus carpio) and fathead minnow (Pimephales promelas) have been commonly used in dietary bioaccumulation studies with organic substances before the publication of this TM.
U každého jedince by naměřená hmotnost (a délka) měla být vztažena ke koncentraci analyzované chemické látky (a případně k obsahu lipidů), například tak, že se každé rybě ve vzorku přidělí jedinečný identifikační kód.
The test species should have a feeding behaviour that results in rapid consumption of the administered food ration to ensure that any factor influencing the concentration of the test substance in food (e.g. leaching into the water and the possibility of aqueous exposure) is kept to a minimum.
Měření těchto ryb ve vzorku lze použít k odhadu hmotnosti (a délky) ryb, které zůstávají ve zkušební a kontrolní nádrži.
Fish within the recommended size/weight range (cf. Appendix 3) should be used.
Experimentální hodnocení
Fish should not be so small as to hamper ease of analyses on an individual basis.
Každý den se má sledovat případná mortalita a výsledky se zaznamenají.
Species tested during a life-stage with rapid growth can complicate data interpretation, and high growth rates can influence the calculation of assimilation efficiency [48].
Měla by být prováděna další pozorování, zda nedochází k nepříznivým účinkům, například k abnormálnímu chování nebo pigmentaci, a výsledky se zaznamenají.
Holding of fish
Ryby jsou považovány za mrtvé, pokud u nich nedochází k dýchacím pohybům a nelze u nich detekovat žádnou reakci na slabý mechanický podnět.
Acclimatisation, mortality and disease acceptance criteria are the same as for the aqueous exposure method prior to test conductance (cf. paragraphs 33-35).
Veškeré mrtvé nebo zjevně umírající ryby musí být odstraněny.
Pre-study work and range-finding test
Výsledky zkoušky se použijí k odvození rychlostní konstanty vylučování (k2) jako funkce celkové živé hmotnosti ryb.
Pre-study analytical work is necessary to demonstrate recovery of the substance from spiked food/spiked fish tissue.
Vypočítá se rychlostní konstanta růstu, kg, založená na střední hodnotě nárůstu hmotnosti ryb a případně se použije k získání rychlostní konstanty vylučování upravené o růst, k2g.
A range-finding test to select a suitable concentration in the food is not always necessary.
Ve zprávě by rovněž měla být uvedena účinnost asimilace (a; absorpce ze střev), kinetický bioobohacovací faktor (BMFK) (v případě potřeby upravený o růst, BMFKg), jeho hodnota upravená o lipidy (BMFKL nebo BMFKgL, je-li upravená o zředění růstem) a množství potravy.
For the purposes of showing that no adverse effects are observed and evaluating the palatability of spiked diet, sensitivity of analytical method for fish tissue and food, and selection of suitable feeding rate and sampling intervals during depuration phase etc., preliminary feeding experiments may be undertaken but are not obligatory.
Je-li možné provést odhad doby potřebné k dosažení rovnovážného stavu (např. 95 % rovnovážného stavu neboli t95 = 3,0/k2), lze rovněž uvést odhad BMF v rovnovážném stavu (BMFSS) (srov. odstavce 105 a 106 a dodatek 5), pokud hodnota t95 naznačuje, že mohlo být dosaženo podmínek rovnovážného stavu.
A preliminary study may be valuable to estimate numbers of fish needed for sampling during the depuration phase.
U této hodnoty BMFSS by měla být použita stejná úprava o lipidy jako u kineticky odvozeného BMF (BMFK), čímž se získá hodnota upravená o lipidy, BMFSSL (je nutné upozornit na to, že neexistuje žádný schválený postup pro úpravu BMF v rovnovážném stavu o ředění růstem).
This can result in significant reduction in the number of fish used, especially for test substances that are particularly susceptible to metabolism.
Vzorce a příklady výpočtů jsou uvedeny v dodatku 7.
Conditions of exposure
Jsou k dispozici postupy, jež umožňují odhadnout hodnotu kinetického biokoncentračního faktoru (BCFK) z údajů získaných ve studii potravy.
Uptake Phase duration
O tom se pojednává v dodatku 8.
An uptake phase of 7-14 days is usually sufficient, during which one group of fish are fed the control diet and another group of fish the test diet daily at a fixed ration dependent on the species tested and the experimental conditions, e.g. between 1-2 % of body weight (wet weight) in the case of rainbow trout.
Živé hmotnosti a délky jednotlivých ryb ve všech časových úsecích se uvedou v tabulkách zvlášť za zkušební a za kontrolní skupinu ve všech dnech odběru vzorků během fáze příjmu (kmenová populace na začátku příjmu; kontrolní skupina a zkušební skupina na konci příjmu, a provádí-li se raná fáze (např. ve dnech 1–3 příjmu)), a během vylučování (např. ve dnech 1, 2, 4, 7, 14, 28 za kontrolní a za zkušební skupinu).
If needed the uptake phase may be extended based on practical experience from previous studies or knowledge of the test substance's (or analogue's) uptake/depuration in fish.
Pro účely úpravy o zředění růstem je upřednostňovaným měřítkem hmotnost.
The start of the test is defined as the time of first feeding with spiked food.
Metoda (metody), které se používají k úpravě údajů o zředění růstem, jsou uvedeny dále (odstavce 162 a 163).
An experimental day runs from the time of feeding to shortly before the time of next feeding (e.g. one hour).
Údaje o koncentraci zkoušené látky v rybách Měření reziduí zkoušené látky v jednotlivých rybách (nebo ve sdružených vzorcích ryb, pokud měření jednotlivých ryb není možné), vyjádřených jako koncentrace v hmotnostních procentech z živé hmotnosti, se uvedou v tabulkách za zkušební a za kontrolní ryby při jednotlivých odběrech vzorků.
Thus the first experimental day of uptake runs from the time of first feeding with spiked food and ends shortly before the second feeding with spiked food.
Pokud byla prováděna analýza lipidů na každé rybě ve vzorku, lze odvodit jednotlivé koncentrace upravené o lipidy, vyjádřené jako koncentrace lipidů (v hmotnostních procentech lipidů z živé hmotnosti) a uvést ve formě tabulky.
In practice the uptake phase ends shortly before (e.g. one hour) the first feeding with unspiked test substance as the fish will continue to digest spiked food and absorb the test substance in the intervening 24 hours.
Měření reziduí zkoušené látky v jednotlivých rybách (nebo ve sdružených vzorcích ryb, pokud měření jednotlivých ryb není možné, srov. odstavec 66) ve fázi vylučování se převedou na jejich přirozené logaritmy a vynesou se do grafu oproti času (ve dnech).
It is important to ensure that a sufficiently high (non-toxic) body burden of the test substance is achieved with respect to the analytical method, so that at least an order of magnitude decline can be measured during the depuration phase.
Jestliže se vizuální kontrolou grafu zjistí zjevné odlehlé hodnoty, lze použít statisticky validní test odlehlých hodnot k odstranění nevěrohodných datových bodů spolu s podloženým odůvodněním jejich vypuštění.
In special cases an extended uptake phase (up to 28 days) may be used with additional sampling to gain an insight into uptake kinetics.
Vypočítá se lineární korelace nejmenších čtverců pro údaje ln (koncentrace) oproti vylučování (dny).
During uptake the concentration in the fish may not reach steady-state.
Směrnice a úsek přímky se uvedou jako jako celková rychlostní konstanta vylučování (k2) a přirozený logaritmus odvozené koncentrace v čase nula (C0,d) (podrobněji viz dodatek 5 a dodatek 7).
Equations for estimating time to steady-state, as an indication of the likely duration needed to achieve appreciable fish concentrations, can be applied here as for the aqueous exposure test (cf. Appendix 5).
Pokud by to nebylo možné, protože koncentrace klesne na hodnotu nižší, než je mez kvantifikace pro druhý vzorek ve fázi vylučování, lze provést konzervativní odhad hodnoty k2 (srov. dodatek 7).
In some cases it may be known that uptake of substance in the fish over 7-14 days will be insufficient for the food concentration used to reach a high enough fish concentration to analyse at least an order of magnitude decline during depuration, either due to poor analytical sensitivity or to low assimilation efficiency.
Odchylky od sklonu a úseku přímky se vypočítají pomocí běžných statistických postupů, vyhodnotí se 90 % (nebo 95 %) intervaly spolehlivosti těchto výsledků a uvedou se ve zprávě.
In such cases it may be advantageous to extend the initial feeding phase to longer than 14 days, or, especially for highly metabolisable substances, a higher dietary concentration should be considered.
Vypočítá se rovněž střední hodnota naměřené koncentrace v rybách v poslední den fáze příjmu (naměřené koncentrace v čase nula, C0,m) a porovná se s odvozenou hodnotou C0,d.
However, care should be taken to keep the body burden during uptake below the (estimated) chronic no effect concentration (NOEC) in fish tissue (cf. paragraph 138).
V případě, že odvozená hodnota je nižší než naměřená hodnota, může tento rozdíl naznačovat přítomnost nestrávené obohacené potravy ve střevech.
Depuration typically lasts for up to 28 days, beginning once the test group fish are fed pure, untreated diet after the uptake phase.
Je-li odvozená hodnota mnohem vyšší než naměřená hodnota, může to nasvědčovat tomu, že hodnota odvozená z lineární regrese údajů o vylučování je chybná a měla by být přehodnocena (viz dodatek 7).
Depuration begins with the first feeding of “unspiked” food rather than straight after the last “spiked” food feeding as the fish will continue to digest the food and absorb the test substance in the intervening 24 hours, as noted in paragraph 126.
Rychlost vylučování a bioobohacovací faktor
Hence the first sample in the depuration phase is taken shortly before the second feeding with unspiked diet.
Aby bylo možné z údajů vypočítat bioobohacovací faktor, je třeba nejprve získat hodnotu účinnosti asimilace (absorpce zkoušené látky ve střevech, α).
This depuration period is designed to capture substances with a potential half-life of up to 14 days, which is consistent with that of bioaccumulative substances [49], so 28 days comprises two half-lives of such substances.
K tomu by měla být použita rovnice A7.1 z dodatku 7, pro kterou je nutné znát odvozenou koncentraci v rybách v čase nula fáze vylučování (C0,d), (celkovou) rychlostní konstantu vylučování (k2), koncentraci v potravě (Cfood), rychlostní konstantu pojídání potravy (I) a délku fáze příjmu (t).
In cases of very highly bioaccumulating substances it may be advantageous to extend the depuration phase (if indicated by preliminary testing).If a substance is depurated very slowly such that an exact half-life may not be determined in the depuration phase, the information may still be sufficient for assessment purposes to indicate a high level of bioaccumulation.
Směrnice a úsek lineárního vztahu mezi ln (koncentrací) a fází vylučování se uvedou jako celková rychlostní konstanta vylučování (k2 = směrnice) a koncentrace v čase nula (C0,d = eintercept), jak je uvedeno výše.
Conversely, if a substance is depurated so fast that a reliable time zero concentration (concentration at the end of uptake/start of depuration, C0,d) and k2 cannot be derived, a conservative estimate of k2 can be made (cf. Appendix 7).
Odvozené hodnoty by měly být zkontrolovány, zda jsou biologicky možné (např. účinnost asimilace jako zlomek není větší než 1).
If analyses of fish at earlier intervals (e.g. 7 or 14 days) show that the substance has depurated below quantification levels before the full 28-day period, then subsequent sampling may be discontinued and the test terminated.
Hodnota (I) se vypočítá vydělením hmotnosti potravy hmotností ryb, kterým byla podána potrava každý den (je-li podáváno množství odpovídající 2 % tělesné hmotnosti, bude hodnota (I) 0,02).
In few cases no measurable uptake of the test substance may have occurred at the end of the uptake period (or with the second depuration sample).
Množství potravy použité ve výpočtu však možná bude nutné upravit o růst ryb (to lze provést tak, že se známá rychlostní konstanta růstu použije k odhadu hmotnosti ryb při každém odběru vzorků během fáze příjmu; viz dodatek 7).
If it can be demonstrated that: i) the validity criteria in paragraph 113 are fulfilled; and ii) lack of uptake is not due to some other shortcoming of the test (e.g. uptake duration not long enough, deficiency in food spiking technique leading to poor bioavailability, lack of sensitivity of the analytical method, fish not consuming food, etc.); it may be possible to terminate the study without the need to re-run it with a longer uptake duration.
V případech, kdy hodnoty k2 a C0,d není možné odvodit, protože například koncentrace klesla pod mez detekce pro druhý vzorek ve fázi vylučování, lze provést konzervativní odhad k2 a „horní odhad“ BMFk (srov. dodatek 7).
If preliminary work has indicated that this may be the case, analysis of faeces, if possible, for undigested test substance may be advisable as part of a “mass balance” approach.
Jakmile je získána účinnost asimilace (α), je možné vypočítat bioobohacovací faktor tak, že se α vynásobí rychlostní konstantou pojídání potravy (I) a výsledek se dělí (celkovou) rychlostní konstantou vylučování (k2).
Similar to the aqueous exposure test, fish of similar weight and length should be selected, with the smallest fish being no less than two-thirds of the weight of the largest (cf. paragraphs 40-42).
Bioobohacovací faktor upravený o růst se vypočítá stejně, ale s použitím rychlostní konstanty vylučování upravené o růst (k2g; viz odstavce 162 a 163).
The total number of fish for the study should be selected based on the sampling schedule (a minimum of one sample at the end of the uptake phase and four to six samples during the depuration phase, but depending on the phases' durations), taking into account the sensitivity of the analytical technique, the concentration likely to be achieved at the end of the uptake phase (based on prior knowledge) and the depuration duration (if prior knowledge allows estimation).
Obsah lipidů v zkušebních rybách (který je úzce spojen s bioakumulací hydrofobních látek) a obsah lipidů v potravě může v praxi dosti kolísat, takže je nezbytná jejich úprava, aby bylo možné odvodit bioobohacovací faktory smysluplným způsobem.
Fish should be stored, weighed individually (even if it proves necessary for the sample results to be combined subsequently) and total length measured.
Bioobohacovací faktor by měl být upraven o zředění růstem (stejně jako se upravuje kinetický BCF v metodě expozice ve vodním prostředí) a upraven o obsah lipidů v potravě v porovnání s obsahem lipidů v rybách (faktor úpravy o lipidy).
For a standard test with, for example, a 28-day depuration duration including five depuration samples, this means a total of 59-120 fish from test and 50-110 from control groups, assuming that the substance's analytical technique allows lipid content analysis to be carried out on the same fish.
Rovnice a příklady těchto výpočtů lze najít v dodatku 5 a dodatku 7.
If lipid analysis cannot be conducted on the same fish as chemical analysis, and using control fish only for lipid analysis is also not feasible (cf. paragraph 56), an additional 15 fish would be required (three from the stock population at test start, three each from control and test groups at the start of depuration and three each from control and test groups at the end of the experiment).
Aby bylo možné provést úpravu o ředění růstem, je třeba vypočítat rychlostní konstantu vylučování upravenou o růst (k2g) (rovnice viz dodatek 5).
An example sampling schedule with fish numbers can be found in Appendix 4.
Tato rychlostní konstanta vylučování upravená o růst (k2g) se poté použije k výpočtu bioobohacovacího faktoru upraveného o růst, jak je uvedeno v odstavci 73.
Similarly high water-to-fish ratios should be used as for the aqueous exposure method (cf. paragraphs 43 and 44).
V některých případech není tento postup možný.
Although fish-to-water loading rates do not have an effect on exposure concentrations in this test, a loading rate of 0,1-1,0 g of fish (wet weight) per litre of water per day is recommended to maintain adequate dissolved oxygen concentrations and minimise test organism stress.
Toho lze snadno dosáhnout, neboť zkoušky podle této metody by měly vztahovat zaznamenané koncentrace v tkáních k hmotnosti jednotlivých ryb.
Test diet and Feeding
Upozorňujeme, že hodnota k2 by přesto měla být odhadnuta a uvedena ve zprávě, i když se použije tento alternativní přístup.
During the acclimatisation period, fish should be fed an appropriate diet as described above (paragraph 117).
Aby bylo možné provést úpravu o obsah lipidů v potravě a v rybách, jestliže analýza lipidů nebyla provedena u všech ryb ve vzorku, odvodí se střední hodnota frakcí lipidů (v procentech hmotnosti) v rybách a v potravě [52].
If the test is being conducted under flow-through conditions, the flow should be suspended while the fish are fed.
Faktor úpravy o lipidy ( Lc) se poté vypočítá tak, že se střední hodnota frakce lipidů v rybách dělí střední hodnotou frakce lipidů v potravě.
During the test, the diet for the test group should adhere to that described above (paragraphs 116-121).
Bioobohacovací faktor, upravený o růst či nikoli, se vydělí faktorem úpravy o lipidy a vypočítá se bioobohacovací faktor upravený o lipidy.
In addition to consideration of substance-specific factors, analytical sensitivity, expected concentration in the diet under environmental conditions and chronic toxicity levels/body burden, selection of the target spiking concentration should take into account palatability of the food (so that fish do not avoid eating).
Jestliže byla analýza chemické látky a analýza lipidů provedena na týchž rybách při každém odběru vzorků, pak údaje o tkáních jednotlivých ryb upravené o lipidy mohou být přímo použity k výpočtu BMF upraveného o lipidy (srov. (37)).
Nominal spiking concentration of the test substance should be documented in the report.
Grafickým znázorněním údajů o koncentracích upravených o lipidy se získá hodnota C0,d na základě lipidů a hodnota k2.
Based on experience, spiking concentrations in the range of 1-1000 μg/g provide a practical working range for test substances that do not exhibit a specific toxic mechanism.
Poté může proběhnout matematická analýza za pomoci stejných rovnic jako v dodatku 7, avšak účinnost asimilace (a) se vypočítá s použitím rychlostní konstanty pojídání potravy s normalizovanými lipidy (Ilipid) a koncentrace v potravě na základě lipidů (Cfood-lipid).
For substances acting via a non-specific mechanism, tissue residue levels should not exceed 5 μmol/g lipid since residues above this level are likely to pose chronic effects (19) (48) (50) [50].
Parametry upravené o lipidy se poté podobně použijí k výpočtu BMF (povšimněte si, že pro výpočet hodnoty BMFKgL upravené o růst, upravené o lipidy by se také úprava rychlostní konstantou růstu měla použít na frakci lipidů, a nikoli na živou hmotnost ryb).
For other substances care should be taken that no adverse effects occur from the accumulated exposure (cf. paragraph 127).
Rychlostní konstanty růstu nebo křivky růstu v obou skupinách by se měly porovnávat vhodným postupem [53].Závěrečná zpráva
This is especially true if more than one substance is being tested simultaneously (cf. paragraph 112).