natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Změny v chování (např. neschopnost zavrtat se do půdy; ležení bez pohybu proti skleněné stěně zkušební nádoby) a v morfologii (např. přítomnost otevřených ran) dospělých jedinců by však rovněž měly být zaznamenány spolu s přítomností jakýchkoli mláďat.
This mixture of quartz sand and test chemical is added to the pre-moistened soil and thoroughly mixed after adding an appropriate amount of de-ionised water to obtain the required moisture content.
Pro stanovení LC50 se obvykle užívá probitová analýza (21) nebo logistická regrese.
The final mixture is divided between the test vessels.
Avšak v případech, kdy tato metoda analýzy není vhodná (např. jsou-li k dispozici méně než tři koncentrace s usmrcením pouze části zkušební skupiny), je možné použít alternativní metody.
The procedure is repeated for each test concentration and an appropriate control is also prepared.
Mezi takové metody můžeme počítat klouzavé průměry (22), upravenou Spearman-Karberovu metodu (23) nebo jednoduchou interpolaci (např. geometrický průměr LC0 a LC100 vypočítaný jako druhá odmocnina ze součinu LC0 a LC100).
Chemicals should not normally be tested at concentrations higher than 1000 mg/kg dry mass of soil.
V hlavní zkoušce je cílovým ukazatelem plodnost (tj. počet zplozených mláďat).
Testing at higher concentrations may however be required in accordance with the objectives of a specific test.
V závěrečné zprávě by se však měly zaznamenat i všechny ostatní známky poškození, stejně jako u orientační zkoušky.
PERFORMANCE OF THE TESTS
Statistická analýza vyžaduje výpočet aritmetického průměru a směrodatné odchylky účinku na reprodukci u exponovaných a kontrolních souborů.
Test groups and controls
Jestliže byla provedena analýza rozptylu, mohou se směrodatná odchylka s a stupně volnosti df nahradit odhadnutým sloučeným rozptylem získaným z ANOVA a jeho stupni volnosti – za předpokladu, že rozptyl nezávisí na koncentraci.
For each test concentration, an amount of test soil corresponding to 20 g dry weight is placed into the test vessel (see paragraphs 19-21).
V takovém případě použijte jednotlivé rozptyly kontrol a ošetření.
Controls, without the test chemical, are also prepared.
Tyto hodnoty se obvykle spočítají pomocí běžně dostupného statistického softwaru, přičemž výsledky pro jednotlivé nádoby se považují za opakování.
Food is added to each vessel in accordance with procedures described in paragraph 29.
Jestliže se sloučení dat pro negativní a kontrolní vzorky s rozpouštědly ukáže jako rozumnější než statistické testování vůči jedné z variant, pak je třeba provést test, který prokáže, zda je mezi nimi významný rozdíl (vhodné statistické metody jsou uvedeny v odstavci 45 a dodatku 7).
Ten worms are randomly allocated to each test vessel.
Další statistické testy a závěry závisí na tom, zda mají hodnoty opakování normální rozdělení a jsou homogenní, co se týká jejich rozptylu.
The worms are carefully transferred into each test vessel and placed on the surface of the soil using, for example, jeweller's tweezers, hooks or loops.
Odhad hodnoty NOEC
The number of replicates for test concentrations and for controls depends on the test design used (see paragraph 34).
Mělo by se upřednostnit použití výkonných testů.
The test vessels are positioned randomly in the test incubator and these positions are re-randomised weekly.
Je třeba použít informace např. z předchozích zkušeností s okružním testováním či jiná historická data ke zjištění, zda mají data přibližně normální distribuci.
If a vehicle is used for application of the test chemical, one control series containing quartz sand sprayed or mixed with solvent should be run in addition to the test series.
Ještě důležitější je homogenita rozptylu (homoskedasticita).
The solvent or dispersant concentration should be the same as that used in the test vessels containing the test chemical.
Zkušenosti ukazují, že rozptyl se často zvětšuje s rostoucí střední hodnotou.
A control series containing additional quartz sand (2,5 g per vessel) should be run for chemicals requiring administration in accordance with the procedures described in paragraph 21.
V těchto případech je možno homoskedasticity dosáhnout transformací dat.
The test temperature is 20 ± 2 °C.
Avšak taková transformace by měla být založena spíše na zkušenostech s předchozími daty než na datech právě zkoumaných.
To discourage worms from escaping from the soil, the test is carried out under controlled light-dark cycles (preferably 16 hours light and 8 hours dark) with illumination of 400 to 800 lux in the area of the test vessels.
S homogenními daty se provádějí vícenásobné t-testy, jako je Williamsův test (α = 0,05, jednostranný) (24, 25) nebo v určitých případech Dunnettův test (26, 27).
In order to check the soil humidity, the vessels are weighed at the beginning of the test and thereafter once a week.
Je třeba upozornit, že v případě nerovného počtu opakování se musí tabulkové t-hodnoty korigovat způsobem navrženým Dunnettem a Williamsem.
Weight loss is replenished by the addition of an appropriate amount of deionised water.
Odezvy někdy v důsledku velkého rozptylu nevzrůstají/neklesají pravidelně.
It should be noted that loss of water can be reduced by maintaining a high air-humidity (> 80 %) in the test incubator.
V případě silné odchylky od monotónnosti je vhodnější Dunnetův test.
The moisture content and the pH, should be measured at the beginning and the end of both the range-finding test and the definitive test.
Jestliže existují odchylky od homoskedasticity, může být rozumné zkoumat možné účinky na hodnoty rozptylu blíže, aby se rozhodlo, zda může být aplikován t-test, aniž by se podstatně snížila vypovídací schopnost testu (28).
Measurements should be made in control and treated (all concentrations) soil samples prepared and maintained in the same way as the test cultures but not containing worms.
Jestliže byla provedena limitní zkouška a podmínky pro použití parametrických testů jsou splněny (normálnost, homogenita), je možné použít párový Studentův t-test, v opačném případě pak neparametrický Mann-Whitneyův U-test (29).
Food should only be added to these soil samples at the start of the test to facilitate microbial activity.
Odhad hodnoty ECx
The amount of food added should be the same as that added to the test cultures.
Pro výpočet hodnoty ECx se poté, co byla získána vhodná funkce závislosti odezvy na dávce, použijí k regresní analýze střední hodnoty pro každé ošetření zkoušenou látkou (lineární nebo nelineární).
It is not necessary to add further food to these vessels during the test.
Pro růst roupic jako kontinuální odezvu mohou být hodnoty ECx odhadnuty použitím vhodné regresní analýzy (35).
Feeding
Mezi vhodné funkce pro binární data (mortalita/přežití a počet zplozených potomků) patří normální sigmoidní, logistická nebo Weibullova funkce obsahující dva až čtyři parametry, z nichž některé mohou rovněž modelovat hormetické odezvy.
A food capable of maintaining the enchytraeid population can be used.
Pokud byla funkce závislosti odezvy na dávce proložena pomocí lineární regresní analýzy, měl by se před odhadnutím hodnoty ECx pomocí regresní analýzy zjistit významný r2 (koeficient determinace) a/nebo směrnice vložením hodnoty odpovídající x % střední hodnoty kontroly do rovnice zjištěné při regresní analýze.
Rolled oats, preferably autoclaved before use to avoid microbial contamination (heating is also appropriate), have been found to be a suitable feeding material.
Meze 95 % intervalu spolehlivosti se vypočítají podle Fiellera (citován ve Finney (21)) nebo jinými vhodnými moderními metodami.
Food is first provided by mixing 50 mg of ground rolled oats with the soil in each vessel before introducing the worms.
Alternativně se odpověď modeluje jako procentní část modelového parametru, který je interpretován jako střední hodnota odpovědi kontroly.
Thereafter, food is supplied weekly up to Day 21.
V těchto případech je často možné výsledky snadno proložit normální (logistickou, Weibullovou) sigmoidní křivkou za použití probitového regresního postupu (21).
Feeding is not carried out on Day 28 since the adults have been removed at this stage and the juvenile worms need relatively little additional food beyond this point.
V těchto případech musejí být váhové funkce nastaveny pro metrické odezvy, jak uvádí Christensen (36).
Feeding during the test comprises 25 mg of ground rolled oats per vessel placed carefully on the surface of the soil so as to avoid injuring the worms.
Avšak jestliže byla pozorována hormeze, měla by se probitová analýza nahradit čtyřparametrickou logistickou nebo Weibullovou funkcí za použití nelineární regrese (36).
In order to reduce fungal growth, the oats flakes should be buried in the soil by covering with small amounts of soil.
Jestliže není možné data proložit vhodnou funkcí dávka-odezva, je možné použít alternativní metody pro odhad hodnoty ECx a jejího intervalu spolehlivosti, jako je metoda klouzavých průměrů podle Thompsona (22) a očištěná Spearman-Karberova metoda (23).
If food remains uneaten the ration should be reduced.
Závěrečná zpráva musí obsahovat tyto údaje:
Design for the range-finding test
fyzikální povaha a tam, kde je to podstatné, fyzikálně-chemické vlastnosti (např. rozpustnost ve vodě, tlak par),
When necessary, a range-finding test is conducted with, for example, five test chemical concentrations of 0,1, 1,0, 10, 100, and 1000 mg/kg (dry weight of soil).
chemická identifikace zkoušené chemické látky podle nomenklatury IUPAC, číslo CAS, šarže, dávka, strukturní vzorec a čistota,
One replicate for each treatment and control is sufficient.
datum konce použitelnosti vzorku.
The duration of the range-finding test is two weeks.
použité zkušební organismy:
At the end of the test, mortality of the worms is assessed.
druh, vědecký název, zdroj organismů a podmínky chovu.
A worm is recorded as dead if it has no reaction to a mechanical stimulus at the anterior end.
složky umělé půdy a její příprava,
Additional information to mortality may also be useful in deciding on the range of concentrations to be used in the definitive test.
metoda aplikace zkoušené chemické látky,
Changes in adult behaviour (e.g. the inability to dig into the soil; lying motionless against the glass wall of the test vessel) and morphology (e.g. the presence of open wounds) should therefore also be recorded along with the presence of any juveniles.
popis zkušebních podmínek, včetně teploty, obsahu vlhkosti, pH atd.,
The latter can be determined using the staining method described in Appendix 6.
úplný popis experimentálního uspořádání a postupů.
The LC50 can be approximately determined by calculating the geometrical mean of mortality data.
Výsledky zkoušek:
In setting the concentration range for the definitive test, effects on the reproduction are assumed to be lower than the LC50 by a factor of up to 10.
mortalita dospělých roupic po dvou týdnech a počet mláďat na konci orientační zkoušky,
However, this is an empirical relation ship and in any specific case it might be different.
mortalita dospělých roupic po třech týdnech expozice a úplný záznam mláďat na konci hlavní zkoušky,
Additional observations made in the range-finding test such as the occurrence of juveniles can help refine the test chemical concentration range to be used for the definitive test.
jakékoli pozorované fyzikální nebo patologické symptomy a změny chování zkušebních organismů,
In order for an accurate determination of the LC50 performing the test using at least four replicates each of the test chemical concentration and an adequate number of concentrations to cause at least four statistically significantly different mean responses at these concentrations) is recommended.
hodnoty LC50, NOEC anebo ECx (např. EC50, EC10) pro reprodukci, jestliže některé z nich jsou použitelné pro intervaly spolehlivosti, a graf proložené modelové křivky použité při jeho výpočtu, všechny informace a pozorování užitečné pro interpretaci výsledků.
A similar number of the concentrations and replicates for the controls are used when they are applicable.
Odchylky od postupů popsaných v této zkušební metodě a jakékoli neobvyklé jevy, které se vyskytly během zkoušky.
Design for the definitive reproduction test
Kapitola C.8 této přílohy, Toxicita pro žížaly.
Three designs are proposed based on recommendations arising from a ring test (2)
Part 1: Determination of acute toxicity using Artificial Soil substrate, No.
For determination of the NOEC, at least five concentrations in a geometric series should be tested.
Part 2: Determination of effects on reproduction, No.
Four replicates for each test concentration plus eight controls are recommended.
11268-2.
The concentrations should be spaced by a factor not exceeding 1,8.
Pro účel této zkušební metody jsou platné následující definice:
For determination of the ECx (e.g. EC10, EC50), at least five concentrations should be tested and the concentrations should bracket ECx in order to enable ECx interpolation and not extrapolation At least four replicates for each test concentration and four control replicates are recommended.
Při této zkoušce jsou koncentrace vyvolávající účinek vyjádřeny jako hmotnost zkoušené chemické látky na hmotnost sušiny zkušební půdy.
The spacing factor may vary, i.e. less than or equal to 1,8 in the expected effect range and above 1,8 at the higher and lower concentrations.
(koncentrace bez letálního účinku) je koncentrace zkoušené chemické látky, která neusmrtí žádný z exponovaných zkušebních organismů během daného období.
A combined approach allows for determination of both the NOEC and ECx.
V této zkoušce je LC0 vyjádřena jako hmotnost zkoušené chemické látky na suchou hmotnost zkušební půdy.
Eight treatment concentrations in a geometric series should be used.
(medián letální koncentrace) je koncentrace zkoušené chemické látky, která zahubí 50 % exponovaných zkušebních organismů během daného časového období.
Four replicates for each treatment plus eight controls are recommended.
Při této zkoušce je LC50 vyjádřena jako hmotnost zkoušené chemické látky na hmotnost sušiny zkušební půdy.
Ten adult worms per test vessel should be used (see paragraph 23).
(letální koncentrace) je koncentrace zkoušené chemické látky, která usmrtí 100 % exponovaných zkušebních organismů během daného období.
Food is added to the test vessels at the beginning of the test and then once a week (see paragraph 29) up to and including Day 21.
V této zkoušce je LC100 vyjádřena jako hmotnost zkoušené chemické látky na suchou hmotnost zkušební půdy.
On Day 21 the soil samples are carefully hand searched and living adult worms are observed and counted and changes in behaviour (e.g. inability to dig into the soil; lying motionless against the glass wall of the test vessel) and in morphology (e.g. open wounds) are recorded.
Nejnižší koncentrace s pozorovaným účinkem (LOEC) je nejnižší koncentrace zkoušené chemické látky, která má statisticky významný účinek (p < 0,05).
All adult worms are then removed from the test vessels and the test soil.
Při této zkoušce je LOEC vyjádřena jako hmotnost zkoušené chemické látky na hmotnost sušiny zkušební půdy.
The test soil containing any cocoons that had been produced are incubated for three additional weeks under the same test conditions except that feeding takes place only on Day 35 (i.e. 25 mg ground rolled oats per vessel).
Všechny zkušební koncentrace vyšší než LOEC by měly obvykle vykazovat účinek, který je statisticky odlišný od kontroly.
After six weeks, the newly hatched worms are counted.
Jakékoli odchylky z výše uvedeného v identifikaci LOEC musejí být zdůvodněny v závěrečné zprávě.
The method based on Bengal red staining (see Appendix 6) is recommended although other wet (but not heat) extraction and floatation techniques (see Appendix 6) have also proved suitable (4)(10)(11)(20).
Koncentrace bez pozorovaných účinků (NOEC) je nejvyšší koncentrace zkoušené chemické látky hned pod LOEC, při níž nejsou pozorovány žádné účinky.
Bengal red staining is recommended because wet extraction from a soil substrate can be hampered by turbidity caused by suspended clay particles.
Rychlost reprodukce je střední hodnota počtu mladých roupic zplozených daným počtem dospělých jedinců během zkušebního období.
If no effects are observed at the highest concentration in the range-finding test (i.e. 1000 mg/kg), the reproduction test can be performed as a limit test, using 1000 mg/kg in order to demonstrate that the NOEC for reproduction is greater than this value.
Stanovení maximální retenční vodní kapacity
Summary and timetable for the test
Stanovení retenční vodní kapacity umělé půdy
The steps of the test can be summarised as follows:
Následující metoda byla shledána vhodnou.
Time
Je popsána v příloze C normy ISO DIS 11268-2.
Day –7 or earlier
Odeberte stanovené množství (např. 5 g) zkušebního půdního substrátu použitím vhodného nástroje na odběr vzorku (spirálový trubkový vzorkovač atd.).
Prepare artificial soil (mixing of dry constituents)
Dno trubky se pokryje kusem filtračního papíru, trubka se naplní vodou a umístí na stojan ve vodní lázni.
Day –5
Trubici je třeba postupně ponořovat, dokud hladina vody nepřevýší vrchní část půdy.
Check pH of artificial soil
Poté by měla být ponechána asi na tři hodiny ve vodě.
Measure max WHC of soil
Jelikož ne všechna voda absorbovaná půdními kapilárami může být zadržena, měl by se vzorek půdy ponechat okapat dvě hodiny tak, že se trubka umístí na lůžko z velmi mokrého, jemně mletého křemenného písku v uzavřené nádobě (aby se zabránilo vysušení).
Day –5 to –3
Vzorek, vysušený na konstantní hmotnost při teplotě 105 °C, je poté třeba zvážit.
Sort worms for acclimatisation
Retenční vodní kapacita (RVK) se pak vypočítá podle následujícího vzorce:
Day — 3 to 0
RVKv % suché hmotnosti
Acclimatise worms for at least 24 hours
kde:
Day –1
S hmotnost substrátu nasyceného vodou + hmotnost trubice + hmotnost filtračního papíru
Pre-moisten artificial soil and distribute into batches
T hmotnost obalu (hmotnost trubice + hmotnost filtračního papíru)
Day 0
D suchá hmotnost substrátu
Prepare stock solutions
LITERATURA:
Apply test chemical
Určení pH půdy
Weigh test substrate into test vessels
Následující metoda stanovení pH vzorku půdy vychází z popisu v ISO 10390 (Kvalita půdy – Stanovení pH).
Mix in food
Definované množství půdy se vysuší při laboratorní teplotě po dobu alespoň 12 hodin.
Introduce worms
Suspenze půdy (obsahující alespoň 5 gramů půdy) se pak doplní do 5násobného objemu buď 1 M analyticky čistého chloridu draselného (KCl) nebo 0,01 M roztoku analyticky čistého chloridu vápenatého (CaCl2).
Measure soil pH and moisture content
Suspenze se pak důkladně třepe 5 minut.
Day 7
Kultivační podmínky Enchytraeus sp.
Check soil moisture content
Roupicovití druhu Enchytraeus albidus (stejně jako jiné druhy Enchytraeus) mohou být kultivováni ve velkých plastových krabicích (např. 30 × 60 × 10 cm) naplněných 1:1 směsí umělé půdy a přírodní nekontaminované zahradní půdy.
Feed
Nesmí se používat kompostovaný materiál, protože by mohl obsahovat toxické chemické látky, jakými jsou těžké kovy.
Day 14
Fauna se musí z půdy před použitím odstranit (např. hlubokozmrazením).
Determine adult mortality
Je rovněž možné použít substrát obsahující pouze umělou půdu, ale rychlost reprodukce může být nižší než v případě promíchaného půdního substrátu.
Estimate number of juveniles
Substrát použitý pro kultivaci by měl mít pH 6,0 ± 0,5.
Day 21
Kultura se udržuje v temnu při teplotě 15 až 20 °C ± 2 °C.
Observe adult behaviour
Teplota nesmí překročit 23 °C.
Remove adults
Půda se musí udržovat vlhká, ale ne mokrá.
Day 28
Správný obsah vlhkosti půdy je indikován malými kapkami vody, které se objeví mezi prsty po lehkém stisknutí půdy.
No feeding
Roupice je možné krmit ovesnými vločkami.
Count juvenile worms
Ovesné vločky se uchovávají v utěsněných nádobách a před použitím by se měly zpracovat v autoklávu nebo zahřát, aby se zabránilo infikování moučnými roztoči (např. Glyzyphagus sp., Astigmata, Acarina) nebo dravými roztoči (např. Hypoaspis (Cosmolaelaps) miles, Gamasida, Acarina).
Treatment of results
Po zahřátí se krmivo umele, aby se dalo snadno rozsypat na půdní povrch.
Although an overview is given in Appendix 7, no definitive statistical guidance for analysing test results is given in this test method.
Občas se mohou ovesné vločky obohatit přidáním vitamínů, mléka a oleje z tresčích jater.
In the range finding test, the main endpoint is mortality.
Dalšími vhodnými krmnými zdroji jsou pekařské droždí a rybí krmivo ‚Tetramin‘.
Changes in behaviour (e.g. inability to dig into the soil; lying motionless against the glass wall of the test vessel) and morphology (e.g. open wounds) of the adult worms should however also be recorded along with the presence of any juveniles.
Krmení se provádí přibližně dvakrát týdně.
Probit analysis (21) or logistic regression should normally be applied to determine the LC50.
Vhodné množství ovesných vloček se rozsype na půdní povrch nebo opatrně zamíchá do substrátu při rozrušování půdy pro možné provzdušnění.
However, in cases where this method of analysis is unsuitable (e.g., if less then three concentrations with partial kills are available), alternative methods can be used.
Absolutní množství dodaného krmiva závisí na počtu roupic přítomných v substrátu.
These methods could include moving averages (22), the trimmed Spearman-Karber method (23) or simple interpolation (e.g., geometrical mean of LC0 and LC100, as computed by the square root of LC0 multiplied by LC100).
Jako vodítko, že množství krmiva je třeba zvýšit, může sloužit pozorování, že je všechno spotřebováno během jednoho dne od přidání.
In the definitive test, test endpoint is fecundity (i.e. number of juveniles produced).
Naopak jestliže krmivo ještě zůstává na povrchu v čase druhého krmení (po týdnu), je třeba dávku snížit.
However, as in the range-finding test, all other harmful signs should be recorded in the final report.
Krmivo kontaminované plísněmi se musí odstranit a nahradit.
The statistical analysis requires the arithmetic mean and the standard deviation per treatment and per control for reproduction to be calculated.
Po třech měsících se červi přemístí do čerstvě připraveného substrátu.
If an analysis of variance has been performed, the standard deviation, s, and the degrees of freedom, df, may be replaced by the pooled variance estimate obtained from the ANOVA and by its degrees of freedom, respectively — provided variance does not depend on the concentration.
Kultivační podmínky se považují za vyhovující, jestliže roupice:
In this case, use the single variances of control and treatments.
se nepokoušejí opustit půdní substrát, b) se pohybují rychle půdou, c) vykazují lesklý vnější povrch bez ulpívajících půdních částic, d) jejich zbarvení je více méně bělavé, e) vykazují rozmanitost rozmezí stáří v kulturách a f) kontinuálně se reprodukují.
Those values are usually calculated by commercial statistical software using the per-vessel results as replicates.
Účinnost zkoušky s jinými druhy Enchytraeus
If pooling of data for the negative and solvent controls appears reasonable rather than testing against one of those, they should be tested to see that they are not significantly different (for appropriate tests see paragraph 45 and Appendix 7).
Výběr druhů
Further statistical testing and inference depends on whether the replicate values are normally distributed and are homogeneous with regard to their variance.
Je možné použít jiné druhy než E. albidus, ale postup zkoušky a kritéria platnosti se musí příslušně upravit.
NOEC Estimation
Mnoho druhů Enchytraeus je snadno k dispozici a mohou se vyhovujícím způsobem udržovat v laboratoři, proto je nejdůležitějším kritériem pro výběr druhu jiného než E. albidus ekologická významnost a srovnatelná citlivost.
The application of powerful tests should be preferred.
Pro výměnu druhů mohou rovněž existovat formální důvody.
One should use information e.g. from previous experience with ring-testing or other historic data on whether data are approximately normally distributed.
Například v zemích, kde se E. albidus nevyskytuje a není možné ho dovézt (např. z důvodů karanténních omezení), bude nezbytné použít jiný druh Enchytraeus.
Variance homogeneity (homoscedasticity) is more critical.