natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Snížený výskyt druhotných pohlavních znaků u samečků by vzhledem k nízké statistické průkaznosti měl být interpretován s opatrností a měl by být založen na odborném posouzení a na závažnosti důkazů.
Surplus food and faeces should be removed, as necessary to avoid accumulation of waste
Pro použití dania pruhovaného v této zkoušce existují omezení v důsledku neexistence kvantifikovatelných druhotných pohlavních znaků, které by reagovaly na chemické látky s androgenním působením.
yolk-sac larvae require no food
U jelečka velkohlavého je hlavním indikátorem expozice exogennímu androgenu počet pářicích hrbolků, které se nacházejí na tlamě samičky.
filtered from mixed culture
U halančíka japonského představuje hlavní marker exogenní expozice androgenním chemickým látkám počet bradavkovitých výběžků u samiček.
granules from fermentation process.
Doporučené postupy, kterými je třeba se řídit při hodnocení pohlavních znaků, jsou pro jelečka velkohlavého uvedeny v dodatku 5A a pro halančíka japonského v dodatku 5B.
STATISTICAL GUIDANCE FOR NOEC DETERMINATION
21denní zkouška na rybách zahrnuje kvantitativní hodnocení produkce jiker a uchování gonád pro účely volitelného histopatologického hodnocení.
General
Některé regulační orgány mohou tento dodatečný ukazatel vyžadovat pro úplnější zhodnocení reprodukční způsobilosti zkušebních zvířat nebo v případech, kdy vitelogenin a druhotné pohlavní znaky neodpovídají expozici chemické látce.
The replicate tank is the unit of analysis.
Ačkoli některé ukazatele mohou být vysoce diagnostické (např. indukce VTG u samečků a tvorba hrbolků u samiček), ne všechny ukazatele zkoušky (např. plodnost a histopatologie gonád) jsou určeny k jednoznačnému stanovení specifických buněčných mechanismů působení.
Thus, for continuous measurements, such as size, the replicate mean or median should be calculated and these replicate values are the data for analysis.
Vyvozovat závěry, pokud jde o možná endokrinní narušení, umožňuje spíše soubor ukazatelů společně, a poskytuje tak vodítko pro další zkoušení.
The power of the tests used should be demonstrated, preferably based on an adequate historical database for each lab.
Plodnost, ač není závislá na endokrinním působení, vzhledem ke své prokázané citlivosti na nejrůznější známé chemické látky ovlivňující funkce endokrinního systému (5) je důležitým ukazatelem, který by měl být ve zkoušce sledován, protože není-li ovlivněna plodnost a další ukazatele, posiluje to přesvědčení, že daná sloučenina pravděpodobně neovlivňuje funkci endokrinního systému.
The size effect that can be detected with 75-80 % power should be provided for each endpoint with the statistical test to be used.
Je-li však plodnost ovlivněna, výrazně to přispěje k vyvození závěrů na základě váhy důkazů.
The databases available at the time of development of this test method establish the power possible under the recommended statistical procedures.
Tato zkušební metoda dále obsahuje pokyny týkající se interpretace údajů a přijatelnosti výsledků zkoušky.
An individual lab should demonstrate its ability to meet this power requirement either by conducting its own power analysis or by demonstrating that the Coefficient of Variation (CV) for each response does not exceed the 90th percentile of CVs used in developing the TG.
Definice použité v této zkušební metodě jsou uvedeny v dodatku 1.
Table 1 provides these CVs.
Jejich dospělost a reprodukční stav umožňují jasné rozlišení pohlaví, a tím i analýzu jednotlivých ukazatelů v závislosti na pohlaví, a zajišťuje jejich citlivost vůči exogenním chemickým látkám.
90th Percentile CVs for selected Freshwater Species
Zkouška obvykle začíná se vzorky ryb odebranými z populace, která je schopna tření; zestárlé ryby by se používat neměly.
CV_Between Replicates
U dania pruhovaného se použijí dvě nádrže nebo opakování pro každou expozici (každá nádrž obsahuje 5 samečků a 5 samiček).
Fathead Minnow
U jelečka velkohlavého se použijí čtyři nádrže nebo opakování pro každou expozici (každá nádrž obsahuje 2 samečky a 4 samičky).
For almost all statistical tests used to evaluate laboratory toxicology studies, the comparisons of interest are of treatment groups to control.
Účelem je zohlednit teritoriální chování samečků jelečka velkohlavého a současně zachovat dostatečnou průkaznost zkoušky.
For that reason, it is not appropriate to require a significant ANOVA F-test before using Dunnett's or Williams' test or a significant Kruskal-Wallis test before using the Jonckheere-Terpstra, Mann-Whitney, or Dunn test (Hochberg and Tamhane 1987, Hsu 1996, Dunnett 1955, 1964, Williams 1971, 1972, 1975, 1977, Robertson et al.
U halančíka japonského se použijí čtyři nádrže nebo opakování pro každou expozici (každá nádrž obsahuje 3 samečky a 3 samičky).
1988, Jonckheere 1954, Dunn 1964).
Expozice trvá 21 dnů a v den 21 expozice se u ryb odeberou vzorky.
Dunnett's test has a built-in multiplicity adjustment and its false positive and false negative rates are adversely affected by using the F-test as a gatekeeper.
Kvantitativní sledování plodnosti se provádí denně.
Similarly, the step-down Williams and Jonckheere-Terpstra tests using a 0,05 significance level at every step preserve an overall 5 % false positive rate and that rate and the power of the tests are adversely affected by using the F- or Kruskal-Wallis test as a gatekeeper.
Při odběru vzorků v den 21 se všechny ryby humánně usmrtí.
Mann-Whitney and Dunn's test have to be adjusted for multiplicity and the Bonferroni-Holm adjustment is advised.
U jelečka velkohlavého a halančíka japonského se změří druhotné pohlavní znaky (viz dodatek 5A a dodatek 5B); u dania pruhovaného a jelečka velkohlavého se odeberou vzorky krve pro stanovení VTG, alternativně lze pro stanovení VTG u dania pruhovaného odebrat hlavu/ocas (dodatek 6); u halančíka japonského se pro analýzu VTG odeberou játra (dodatek 6); pro potenciální histopatologické hodnocení se zafixují gonády buď vcelku, nebo v řezech (22).
A thorough discussion of most of the recommendations on hypothesis testing and verification of assumptions underlying these tests is given in OECD (2006), which also contains an extensive bibliography.
KRITÉRIA PŘIJATELNOSTI ZKOUŠKY
Treatment of Controls when a Solvent is Used
Aby byly výsledky zkoušky přijatelné, musí být splněny tyto podmínky:
If a solvent is used, then both a dilution water control and a solvent control should be included.
mortalita v kontrolách s vodou (nebo s rozpouštědlem) na konci doby expozice by neměla být větší než 10 %,
The two controls should be compared for each response and combined for statistical analysis if no significant difference is found between the controls.
koncentrace rozpuštěného kyslíku by po celou dobu expozice měla dosahovat alespoň 60 % hodnoty nasycení vzduchem (ASV),
Otherwise, the solvent control should be used for NOEC determination or ECx estimation and the water control is not used.
teplota vody ve zkušebních nádržích by se v kterémkoli čase během doby expozice neměla lišit o více než ± 1,5 °C a měla by být udržována v rozpětí 2 °C v teplotních rozmezích stanovených pro jednotlivé zkušební druhy (dodatek 2),
See restriction in the validity criteria (Paragraph 7)
měly by být k dispozici důkazy pro prokázání toho, že koncentrace zkoušené chemické látky v roztoku byly uspokojivě udržovány v rozmezí ± 20 % od středních naměřených hodnot,
For length, weight, proportion of egg hatch or larval mortality or abnormal larvae, and first or last day of hatch or swim-up, a T-test or Mann-Whitney test should be used to compare the dilution water- control and the solvent control at the 0,05 significance level, ignoring all treatment groups.
důkazy o tom, že před započetím expozice chemické látce se ryby aktivně třou ve všech opakováních a během zkoušky v kontrolních opakováních.
The results of these tests should be reported.
Normální laboratorní vybavení a zejména:
Size Measurements (length and weight)
a. oximetr a pH-metr;
Individual fish length and weight values can be normally or log-normally distributed.
b. vybavení pro stanovení tvrdosti a alkality vody;
In either case, the replicate mean values tend to be normally distributed by virtue of the Central Limit Theorem and confirmed from data from well over 100 ELS studies of three freshwater species.
c. vhodné zařízení pro regulaci teploty a pro její pokud možno nepřetržité sledování;
Alternatively, where the data or historical databases suggest a log-normal distribution for individual fish size values, the replicate mean logarithm of the individual fish values can be calculated and the data for analysis can then be the anti-logs of these replicate mean logarithms.
d. nádrže z chemicky inertního materiálu o vhodném objemu vzhledem k doporučené velikosti násady a hustotě obsádky (viz dodatek 2);
Data should be evaluated for consistency with a normal distribution and variance homogeneity.
e. třecí podklad pro jelečka velkohlavého a danio pruhované, potřebné podrobnosti jsou uvedeny v dodatku 4;
For this purpose, the residuals from an ANOVA model with concentration as the single explanatory class variable should be used.
f. dostatečně přesné váhy (tj. vážící s přesností na ± 0,5 mg).
Visual determination from scatterplots and histograms or stem-and-leaf plots can be used.
Jako zkušební voda může být použita jakákoli voda, v níž zkušební druh dlouhodobě přežívá a roste.
Alternatively, a formal test such as the Shapiro-Wilk or Anderson-Darling can be used.
Hodnota pH by měla být v rozmezí 6,5 až 8,5, avšak během zkoušky by se pH nemělo lišit o více než ± 0,5.
Consistency with variance homogeneity can be assessed from a visual examination of the same scatter plot or formally from Levene's test.
S cílem zajistit, aby ředicí voda neměla nadměrný vliv na výsledek zkoušky (například v důsledku tvorby komplexů zkoušené chemické látky), by v určitých intervalech měly být odebírány vzorky k analýze.
Only parametric tests (e.g. Williams, Dunnett) need be evaluated for normality or variance homogeneity.
Je-li kvalita ředicí vody relativně konstantní, mělo by být měření těžkých kovů (např. Cu, Pb, Zn, Hg, Cd a Ni), hlavních aniontů a kationtů (např. Ca2+, Mg2+, Na+, K+, Cl–, and SO42–), pesticidů (např. celkový obsah organických fosforových a chlorových pesticidů) a celkového obsahu organického uhlíku a suspendovaných látek provedeno např. každé tři měsíce.
Attention should be paid to possible outliers and their effect on analysis.
Je-li prokázáno, že kvalita vody je konstantní po dobu alespoň jednoho roku, mohou být stanovení méně častá a intervaly lze prodloužit (např. každých šest měsíců).
Tukey's outlier test and visual inspection of the same plots of residuals described above can be used.
Některé chemické charakteristiky doporučené ředicí vody jsou uvedeny v dodatku 3.
It should be recalled that observations are entire replicates, so omitting an outlier from analysis should be done only after careful consideration.
Zásobní roztok se připraví přednostně jednoduchým mechanickým mícháním nebo protřepáváním zkoušené chemické látky v ředicí vodě (např. mechanickým mícháním nebo pomocí ultrazvuku).
The statistical tests that make use of the characteristics of the experimental design and biological expectation are step-down trend tests, such as Williams and Jonckheere-Terpstra.
Pro dosažení vhodné koncentrace zásobního roztoku mohou být použity syticí kolony.
These tests assume a monotone concentration-response and the data should be assessed for consistency with that assumption.
Pokud je však rozpouštědlo nezbytné, měla by být souběžně nasazena kontrola s rozpouštědlem při stejné koncentraci rozpouštědla jako při expozicích chemické látce.
This can be done visually from a scatter plot of the replicate means against test concentration.
V případě chemických látek, jejichž zkoušení je obtížné, může být rozpouštědlo po technické stránce nejlepším řešením; konzultován by měl být metodický dokument OECD ke zkouškám toxicity složitých látek a směsí pro vodní organismy (23).
It will be helpful to overlay that scatter plot with a piecewise linear plot connecting the concentration means weighted by replicate sample size.
Volba rozpouštědla se řídí chemickými vlastnostmi dané látky nebo směsi.
Great deviation of this piecewise linear plot from monotonicity would indicate a possible need to use non-trend tests.
Dokument OECD doporučuje maximální koncentraci 100 μl/l, což by mělo být dodrženo.
Alternatively, formal tests can be used.
Nedávno provedený přezkum (24) však poukázal na další problémy při používání rozpouštědel ke zkoušení působení na endokrinní systém.
A simple formal test is to compute linear and quadratic contrasts of the concentration means.
Proto se doporučuje, aby byla koncentrace rozpouštědla – je-li nezbytné – snížena na co nejnižší úroveň, kdykoli je to technicky proveditelné (v závislosti na fyzikálně-chemických vlastnostech zkoušené chemické látky).
If the quadratic contrast is significant and the linear contrast is not significant that is an indication of a possible problem with monotonicity which should be further evaluated from plots.
Použije se průtokový zkušební systém.
Where normality or variance homogeneity may be an issue, these contrasts can be constructed from rank-order transformed data.
Takový systém nepřetržitě dávkuje a ředí zásobní roztok zkoušené látky (např. pomocí dávkovacího čerpadla, zařízení pro proporcionální ředění či syticího systému), aby byla zajištěna série koncentrací ve zkušebních komorách.
Alternative procedures, such as Bartholomew's test for monotonicity can be used, but add complexity.
Průtok zásobních roztoků a ředicí vody by měl být během zkoušky kontrolován v určitých intervalech, nejlépe denně, a neměl by se v průběhu zkoušky měnit o více než 10 %.
Figure 2
Je třeba zajistit, aby se nepoužívaly trubky z plastů nízké kvality nebo jiných materiálů, jež mohou obsahovat biologicky aktivní chemické látky.
NOEC Flow-Chart Size Measurements (length and weight)
Při výběru materiálu pro průtokový systém by měla být vzata v úvahu možná adsorpce zkoušené chemické látky na tento materiál.
Variances stabilising transform?
Zkušební ryby by měly pocházet z laboratorní populace, přednostně z jednoho chovu, která byla alespoň dva týdny před zkouškou udržována v podmínkách kvality vody a osvětlení podobných podmínkám použitým ve zkoušce.
Normalising transform?
Je důležité, aby velikost násady a hustota obsádky (viz definice v dodatku 1) vyhovovaly použitému zkušebnímu druhu (viz dodatek 2).
Tamhane-Dunnett test
mortalita vyšší než 10 % populace za sedm dnů: vyměnit celou obsádku,
Dunnett test
mortalita od 5 % do 10 % populace: aklimatizace dalších sedm dnů; je-li mortalita během následujících sedmi dnů vyšší než 5 %, vymění se celá obsádka,
Transform to normal, homogenous?
mortalita nižší než 5 % populace za sedm dnů: obsádka se použije do zkoušky.
Step-down Williams or Jonckherre
Během aklimatizačního období, v předexpozičním období nebo během expozice nesmí být u ryb léčeny žádné nemoci.
Rep means normal, homogenous?
Předexpozice a výběr ryb
Yes
Doporučuje se jedno- až dvoutýdenní předexpoziční období, kdy jsou ryby umístěny do podobných nádrží jako při skutečné zkoušce.
Are data consistent with monotone concentration-response?
V průběhu chovu a ve fázi expozice se rybám podává strava ad libitum.
Rep means normal?
Fáze expozice začíná s pohlavně dimorfními dospělými rybami z laboratorní dodávky reprodukčně zralých zvířat (např. s jasně viditelnými druhotnými pohlavními znaky, pokud jde o jelečka velkohlavého a halančíka japonského), která se aktivně třou.
Variances equal?
Jako obecné vodítko lze uvést, že jelečci velkohlaví by měli být ve věku přibližně 20 (± 2) týdnů za předpokladu, že byli po celou délku svého života chováni při teplotě 25 ± 2 °C (nelze to však posuzovat odděleně od pozorování skutečného reprodukčního stavu dané skupiny ryb).
If % effect at NOEC is large of % effect at LOEC is small, then try ECx
Halančíci japonští by měli být přibližně ve věku 16 (± 2) týdnů za předpokladu, že byli po celou dobu svého života chováni při teplotě 25 ± 2 °C.
Step-down Jonckherre
Dania pruhovaná by měla být přibližně ve věku 16 (± 2) týdnů za předpokladu, že po celou dobu svého života byla chována při teplotě 26 ± 2 °C.
Dunn or Mann-Whitney test
Během předexpoziční fáze by měla být denně posuzována produkce jiker.
Dashed figures are paths for 1st and last day of hatch or swimup (*) or abnormal larvae
Doporučuje se před tím, než jsou zařazeny do expoziční fáze zkoušky, sledovat tření ve všech nádržích (opakováních).
These responses never satisfy assumptions for parametric analysis or models.
Kvantitativní pokyny ohledně žádoucí denní produkce jiker nelze v současnosti udělit, ale je poměrně běžné pozorovat v průměru vytření >10 jiker z každé samičky za den u každého druhu.
Unless the data are not consistent with the requirements for these tests, the NOEC is determined by a step-down application of Williams' or the Jonckheere-Terpstra test.
Pro zajištění vyváženého rozložení opakování by mělo být použito náhodně blokové uspořádání podle celkové produkce jiker, umožňující přidělit opakování do různých experimentálních úrovní.
OECD (2006) provides details on these procedures.
USPOŘÁDÁNÍ ZKOUŠKY
For data not consistent with the requirements for a step-down trend test, Dunnett's test or the Tamhane-Dunnett (T3) test can be used, both of which have built-in adjustments for multiplicity.
Použijí se tři koncentrace zkoušené chemické látky, jedna kontrola (s vodou) a v případě potřeby jedna kontrola s rozpouštědlem.
These tests assume normality and, in the case of Dunnett, variance homogeneity.
Údaje lze analyzovat, aby se určily statisticky významné rozdíly mezi reakcí na expozici a reakcí kontrolní skupiny.
Where those conditions are not satisfied, Dunn's non-parametric test can be used.
Tyto analýzy ukážou, zda je nezbytné chemickou látku dále dlouhodoběji testovat na nepříznivé účinky (totiž na přežití, rozvoj, růst a reprodukci) a nepoužívat ji při posuzování rizik (25).
OECD (2006) contains details for all of these tests.
U dania pruhovaného se v den 21 experimentu odebere vzorek samečků a samiček pro každou úroveň expozice (5 samečků a 5 samiček v každé ze dvou duplikátních nádrží) a z kontroly (kontrol) za účelem změření vitelogeninu.
Figure 2 is giving an overview, how to find the test of choice.
U halančíka japonského se v den 21 experimentu odebere vzorek samečků a samiček pro každou úroveň expozice (3 samečci a 3 samičky v každé ze čtyř duplikátních nádrží) a z kontroly (kontrol) za účelem změření vitelogeninu a druhotných pohlavních znaků.
Egg Hatch and Larval Survival
U jelečka velkohlavého se v den 21 expozice odebere vzorek samečků a samiček (2 samečci a 4 samičky z každé ze čtyř duplikátních nádrží) a z kontroly (kontrol) za účelem změření vitelogeninu a druhotných pohlavních znaků.
The data are proportions of eggs that hatch or larvae that survive in individual replicates.
Vyžaduje se kvantitativní posouzení plodnosti a gonadální tkáně by měly být fixovány vcelku nebo v řezech pro případné histopatologické hodnocení, je-li požadováno.
These proportions should be assessed for extra-binomial variance, which is common but not universal for such measurements.
Výběr zkušebních koncentrací
The flowchart in figure 3 is guidance for the test of choice; see text for detailed descriptions.
Pro účely této zkoušky by nejvyšší zkušební koncentrace měla být stanovena na úrovni maximální tolerované koncentrace (MTC) určené na základě zkoušky ke zjištění rozsahu či jiných údajů o toxicitě, na úrovni 10 mg/l nebo na úrovni maximální rozpustnosti ve vodě, podle toho, která z hodnot je nejnižší.
Two tests are commonly used.
Maximální tolerovaná koncentrace je definována jako nejvyšší zkušební koncentrace chemické látky, která vede k nižší než 10 % mortalitě.
These are Tarone's C(α) test (Tarone, 1979) and chi-squared tests, each applied separately to every test concentration.
Použití tohoto přístupu předpokládá, že existují empirické údaje o akutní toxicitě nebo jiné údaje o toxicitě, z nichž je možné maximální tolerovanou koncentraci odhadnout.
If extra-binomial variance is found in even one test concentration, then methods that accommodate that should be used.
Odhad maximální tolerované koncentrace může být nepřesný a obvykle je nezbytný odborný úsudek.
Formula 1
Vyžadují se tři zkušební koncentrace odstupňované podle konstantního faktoru, který nepřekračuje 10, a kontrola s ředicí vodou (a v případě potřeby kontrola s rozpouštědlem).
Tarone's C (α) test (Tarone 1979)
Doporučené rozmezí faktorů odstupňování je mezi 3,2 a 10.
Where ̂ is the mean proportion for a given concentration, m is the number of replicate tanks, nj is the number of subjects in replicate j, and xj is the number of subjects in that replicate responding, e.g. not hatched or dead.
Výběr a vážení zkušebních ryb
This test is applied to each concentration separately.
Je důležité minimalizovat rozdíly v hmotnostech ryb na začátku zkoušky.
This test can be seen as an adjusted chi-squared test, but limited power simulations done by Tarone have shown it to be more powerful than a chi-squared test.
Vhodná rozpětí velikostí ryb různých druhů doporučených pro tuto zkoušku jsou uvedena v dodatku 2.
Figure 3
Rozpětí individuálních hmotností samečků a samiček na začátku zkoušky by pro celou násadu ryb použitých ve zkoušce mělo být pokud možno ± 20 % aritmetického průměru hmotností stejného pohlaví.
NOEC Flow Chart for Egg Hatch and Larval Mortality Yes Yes Yes No
Aby bylo možné odhadnout střední hodnotu hmotnosti, doporučuje se před zkouškou zvážit dílčí vzorek rybí populace.
Are data (*) consistent with a monotone concentration-response?
Doba trvání zkoušky je 21 dnů po předexpozičním období.
Step-down Rao-Scott Cochran-Armitage or Jonckheere test or, after arc-sin square-root transform, Williams test
Doporučené předexpoziční období je jeden až dva týdny.
Step-down Cochran-Armitage or Jonckheere test or, after arc-sin square-root transform, Williams test
Ryby by měly být krmeny ad libitum dostatečným množstvím vhodného krmiva (dodatek 2), aby si udržely tělesnou kondici.
Dunnett test Dunn test or Mann-Whitney No
Je třeba dbát na to, aby nedošlo k růstu mikroorganismů a k zakalení vody.
Data normally distributed, homogenous after arc-sin square-root transform?
Obecně lze říci, že denní množství krmiva lze rozdělit na dva nebo tři stejné díly a podáváno několikrát za den s odstupem alespoň tří hodin mezi dvěma krmeními.
C(α) or chi-squared Test for extra-binominal Variance significant?
Podávání v jedné větší porci je přijatelné zejména o víkendech.
Data are replicate proportion.
12 hodin před odběrem vzorků / pitvou se ryby přestanou krmit.
Where there is no significant evidence of extra-binomial variance, the step-down Cochran-Armitage test can be used.
Rybí potrava by měla být vyhodnocena z hlediska přítomnosti kontaminantů, např. organochlorových pesticidů, polycyklických aromatických uhlovodíků (PAH) a polychlorovaných bifenylů (PCB).
This test ignores replicates, so where there is such evidence, the Rao-Scott adjustment to the Cochran-Armitage test (RSCA) takes replicates, replicate sizes, and extra-binomial variance into account and is recommended.
Měla by být vyloučena potrava se zvýšenou hladinou fytoestrogenů, která by zpochybnila reakci na známého agonistu estrogenu (např. 17-b-estradiol).
Alternative tests include the step-down Williams and Jonckheere-Terpstra tests and Dunnett's test as described for size measurements.
Nespotřebovaná potrava a výkaly se ze zkušebních nádrží odstraňují alespoň dvakrát týdně, např. opatrným odsátím ze dna jednotlivých nádrží pomocí odsávačky.
These tests apply whether or not there is extra-binomial variance, but have somewhat lower power (Agresti 2002, Morgan 1992, Rao and Scott 1992, 1999, Fung et al.
Před započetím předexpoziční doby je třeba zajistit řádné fungování systému dávkování chemických látek.
1994, 1996).
Měly by se stanovit všechny analytické metody, které budou zapotřebí, včetně dostatečných znalostí o stabilitě chemických látek ve zkušebním systému.
First or Last Day of Hatch or Swim-up