natgillin/translations-raw huggingface dataset:
V případech s prudkými změnami vývoje pulců v důsledku expozice určité zkoušené chemické látce může dojít k tomu, že distribuce stadií ve skupinách exponovaných chemické látce se nebude překrývat s vypočtenou mediánovou hodnotou stadia vývoje kontrolní skupiny.
This test method is equivalent to OECD test guideline (TG) 231 (2009).
Pouze v těchto případech by postup výběru měl být pozměněn tak, že se použije stadium odlišné od mediánové hodnoty stadia kontroly, aby se dosáhlo odběru vzorků larev odpovídajícího stadia pro histopatologii štítné žlázy.
The need to develop and validate an assay capable of detecting chemicals active in the thyroid system of vertebrate species originates from concerns that environmental levels of chemicals may cause adverse effects in both humans and wildlife.
Dále, pokud stadia nejsou stanovena (tj. nejsou synchronizovaná), mělo by pro histologickou analýzu být náhodně vybráno 5 pulců z každého opakování.
In 1998, the OECD initiated a high-priority activity to revise existing TGs and to develop new TGs for the screening and testing of potential endocrine disrupters.
Důvody, proč byly do vzorku zařazeny jakékoli larvy, které nejsou ve stadiu stejném jako mediánová hodnota stadia vývoje kontroly, je třeba uvést ve zprávě.
One element of the activity was to develop a TG for the screening of chemicals active on the thyroid system of vertebrate species.
Určení biologických ukazatelů
Both an enhancement of the Repeated dose 28-day oral toxicity study in rodents (Chapter B.7 of this Annex) and the Amphibian Metamorphosis Assay (AMA) were proposed.
Během expoziční fáze, která trvá 21 dnů, se měření hlavních ukazatelů provádí v den 7 a 21, avšak zkušební zvířata je nezbytné pozorovat každodenně.
The enhanced test method B.7 underwent validation and a revised test method has been issued.
V tabulce 3 je uveden přehled měřených ukazatelů a časů příslušných pozorování.
The Amphibian Metamorphosis Assay (AMA) underwent an extensive validation programme which included intra- and inter-laboratory studies demonstrating the relevance and reliability of the assay (1, 2).
Podrobnější informace o technických postupech pro měření hlavních ukazatelů a histologická vyšetření obsahuje Metodický dokument OECD (9).
Subsequently, the validation of the assay was subject to peer-review by a panel of independent experts (3).
Časy pozorování hlavních ukazatelů při zkoušce metamorfózy obojživelníků.
This test method is the outcome of the experience gained during the validation studies for the detection of thyroid active chemicals, and of work conducted elsewhere in OECD member countries.
Hlavní ukazatele
The Amphibian Metamorphosis Assay (AMA) is a screening assay intended to empirically identify chemicals which may interfere with the normal function of the hypothalamic-pituitary-thyroid (HPT) axis.
Denně
The AMA represents a generalised vertebrate model to the extent that it is based on the conserved structures and functions of the HPT axis.
Mortalita
It is an important assay because amphibian metamorphosis provides a well-studied, thyroid-dependent process which responds to chemicals active within the HPT axis, and it is the only existing assay that detects thyroid activity in an animal undergoing morphological development.
Délka zadní končetiny
The general experimental design entails exposing stage 51 Xenopus laevis tadpoles to a minimum of three different concentrations of a test chemical and a dilution water control for 21 days.
Délka těla od tlamy po kloaku
There are four replicates of each test treatment.
Tělesná hmotnost ve vlhkém stavu
Larval density at test initiation is 20 tadpoles per test tank for all treatment groups.
Histologie štítné žlázy
The observational endpoints are hind limb length, snout to vent length (SVL), developmental stage, wet weight, thyroid histology, and daily observations of mortality.
Stadium vývoje, délka zadní končetiny, délka těla od tlamy po kloaku a hmotnost ve vlhkém stavu jsou hlavními sledovanými ukazateli při zkoušce metamorfózy obojživelníků a o každém z nich je v krátkosti pojednáno níže.
Test Species
Další technické informace o sběru těchto údajů lze najít v referenčních dokumentech, a to včetně postupů pro počítačovou analýzu, které se doporučuje používat.
Xenopus laevis is routinely cultured in laboratories worldwide and is easily obtainable through commercial suppliers.
Stadium vývoje pulců X. laevis se určí podle kritérií Nieuwkoopa a Fabera (8) pro určování stadií.
Reproduction can be easily induced in this species throughout the year using human chorionic gonadotropin (hCG) injections and the resultant larvae can be routinely reared to selected developmental stages in large numbers to permit the use of stage-specific test protocols.
Údaje o stadiu vývoje se obvykle používají k určení, zda je vývoj zrychlený, asynchronní, opožděný nebo není ovlivněn.
It is preferred that larvae used in the assay are derived from in-house adults.
Urychlení nebo opoždění vývoje se určuje srovnáním mediánové hodnoty stadia dosažené v kontrolní skupině a mediánové hodnoty stadia v exponovaných skupinách.
As an alternative although this is not the preferred procedure, eggs or embryos may be shipped to the laboratory performing the test and allowed to acclimate;
Asynchronní vývoj se zaznamená, jestliže zkoumané tkáně nevykazují malformace nebo abnormality, ale je porušeno relativní načasování morfogeneze nebo vývoje různých tkání jednotlivých pulců.
the shipping of larval stages for use in the test is unacceptable.
Diferenciace a růst zadních končetin jsou řízeny hormony štítné žlázy a jsou to důležité vývojové znaky, které již byly používány při určování stadia vývoje.
Equipment and Supplies
Vývoj zadní končetiny je při určení stadia vývoje používán kvalitativně, avšak zde je posuzován jako kvantitativní ukazatel.
The following equipment and supplies are needed for the conduct of this assay:
Proto se měří délka zadní končetiny jako ukazatel, který má odhalit účinky na osu štítné žlázy (obrázek 2).
Exposure system (see description below);
Kvůli jednotnosti se délka zadní končetiny měří na levé zadní končetině.
Glass or stainless steel aquaria (see description below);
Délka zadní končetiny se hodnotí v den 7 i v den 21 zkoušky.
Breeding tanks;
V den 7 je měření délky zadní končetiny jednoduché, jak je znázorněno na obrázku 2.
Temperature controlling apparatus (e.g., heaters or coolers (adjustable to 22° ± 1 °C));
Avšak v den 21 je měření délky zadní končetiny složitější vzhledem k záhybům na končetině.
Thermometer;
Měření délky zadní končetiny v den 21 by proto mělo začínat od bočního svalstva a sledovat střední linii končetiny přes jakékoli úhlové odchylky.
Binocular dissection microscope;
Změny v délce zadní končetiny v den 7, i kdyby nebyly zjevné v den 21, se přesto považují za významné z hlediska potenciálního tyreoidálního působení.
Digital camera with at least 4 megapixel resolution and micro function;
Měření délky se provádí z digitálních fotografií pomocí softwaru pro analýzu obrázků, jak je popsáno v Metodickém dokumentu OECD pro histologii štítné žlázy u obojživelníků (9).
Image digitising software;
Tělesná délka a hmotnost ve vlhkém stavu
Petri dish (e.g. 100 × 15 mm) or transparent plastic chamber of comparable size;
Určení délky těla od tlamy po kloaku (SVL) (obrázek 2) a hmotnosti ve vlhkém stavu se uvádí v protokolu o zkoušce, aby bylo možno zhodnotit možné účinky zkoušené chemické látky na tempo růstu pulců ve srovnání s kontrolní skupinou, a tyto hodnoty jsou užitečné při zjišťování obecné toxicity zkoušené chemické látky.
Analytical balance capable of measuring to 3 decimal places (mg);
Jelikož odstranění ulpělé vody při určování hmotnosti může u pulců vyvolat stresové podmínky a způsobit poškození kůže, provádějí se tato měření v den 7 na pulcích z dílčího vzorku a na všech ostatních pulcích až při ukončení zkoušky (den 21).
Dissolved oxygen meter;
Kvůli jednotnosti při měření použijte jako kaudální hranici okraj kloakálního otvoru ve směru k hlavě.
pH meter;
Délka těla od tlamy po kloaku (SVL) se používá k hodnocení růstu pulců, jak je znázorněno na obrázku 2.
Light intensity meter capable of measuring in lux units;
Typy měření tělesné délky a (B) měření délky zadní končetiny u pulců X. laevis (1).
Miscellaneous laboratory glassware and tools;
Stadium vývoje a délka zadní končetiny jsou sice důležitými ukazateli pro hodnocení změn v průběhu metamorfózy, avšak opožděný vývoj nelze sám o sobě považovat za diagnostický indikátor antityreoidálního působení.
Adjustable pipettes (10 to 5000 μl) or assorted pipettes of equivalent sizes;
Některé změny mohou být pozorovatelné pouze prostřednictvím běžné histopatologické analýzy.
Test chemical in sufficient quantities to conduct the study, preferably of one lot;
Diagnostickými kritérii jsou mimo jiné hypertrofie/atrofie štítné žlázy, hypertrofie folikulárních buněk, hyperplazie folikulárních buněk a dále pak i jiná kvalitativní kritéria:
Analytical instrumentation appropriate for the chemical on test or contracted analytical services.
oblast folikulární dutiny, kvalita koloidu a výška/tvar folikulárních buněk.
Chemical Testability
Ve zprávě je třeba uvést stupeň závažnosti (4 stupně).
The AMA is based upon an aqueous exposure protocol whereby test chemical is introduced into the test chambers via a flow-through system.
Informace k získávání a zpracování vzorků pro histologickou analýzu a pro provádění histologických analýz tkáňových vzorků jsou dostupné v literatuře ‚Amphibian Metamorphosis Assay: Part 1 – Technical guidance for morphologic sampling and histological preparation‘ a ‚Amphibian Metamorphosis Assay: Part 2 – Approach to reading studies, diagnostic criteria, severity grading and atlas‘ (9).
Flow-through methods however, introduce constraints on the types of chemicals that can be tested, as determined by the physicochemical properties of the chemical.
Laboratoře, které provádějí tuto zkoušku poprvé, by se před provedením histologické analýzy a hodnocení štítné žlázy měly obrátit o radu za účelem školení na zkušené patology.
Therefore, prior to using this protocol, baseline information about the chemical should be obtained that is relevant to determining the testability, and the OECD Guidance Document on Aquatic Toxicity Testing of Difficult Substances and Mixtures (4) should be consulted.
Při zjevných a významných změnách v hlavních ukazatelích nasvědčujících zrychlenému nebo asynchronnímu vývoji nemusí být histopatologická analýza štítné žlázy nezbytná.
Characteristics which indicate that the chemical may be difficult to test in aquatic systems include:
Avšak nepřítomnost zjevných morfologických změn nebo poznatky o opožděném vývoji vyžadují histologickou analýzu.
high octanol water partitioning coefficients (log Kow), high volatility, susceptibility to hydrolysis, and susceptibility to photolysis under ambient laboratory lighting conditions.
Všechny zkušební nádrže je třeba denně kontrolovat, zda neobsahují mrtvé pulce, a zaznamenávat počty v každé nádrži.
Other factors may also be relevant to determining testability and should be determined on a case by case basis.
U každého pozorování mortality by mělo být uvedeno datum, koncentrace a číslo nádrže.
If a successful test is not possible for the chemical using a flow-through test system, a static renewal system may be employed.
Mrtvé jedince ihned po jejich zpozorování je třeba ze zkušební nádrže odstranit.
If neither system is capable of accommodating the test chemical, then the default is to not test it using this protocol.
Míra mortality vyšší než 10 % může ukazovat na nevhodné zkušební podmínky nebo na toxické účinky zkoušené chemické látky.
Exposure System
Další pozorování
A flow-through diluter system is preferred, when possible, over a static renewal system.
Případy nestandardního chování a makroskopicky viditelných malformací a lézí by měly být zaznamenány.
If physical and/or chemical properties of any of the test chemicals are not amenable to a flow-through diluter system, then an alternative exposure system (e.g., static-renewal) can be employed.
U každého pozorování nestandardního chování, makroskopických malformací nebo lézí se uvede datum, koncentrace a číslo nádrže.
The system components should have water-contact components of glass, stainless steel, and/or Polytetrafluoroethylene.
Pro standardní chování je typické, že pulci při ponoření do vodního sloupce mají ocas zvednutý výše, než je hlava, pravidelně rytmicky mrskají ocasní ploutví, pravidelně vyplouvají k hladině, zavírají žábry a reagují na podnět.
However, suitable plastics can be utilised if they do not compromise the study.
Nestandardní chování by zahrnovalo například plavání na hladině, ležení na dně nádrže, obrácené nebo nepravidelné plavání, nepravidelné vyplouvání k hladině a nereagování na podnět.
Exposure tanks should be glass or stainless steel aquaria, equipped with standpipes that result in an approximate tank volume between 4,0 and 10,0 l and minimum water depth of 10 to 15 cm.
Kromě toho by měly být zaznamenány značné rozdíly ve spotřebě potravy mezi expozicemi.
The system should be capable of supporting all exposure concentrations and a control, with four replicates per treatment.
Pokud výskyt nebo míra výskytu v exponovaných nádržích je větší než v kontrolních, pak tento výskyt nebo míru výskytu je třeba považovat za důkaz zjevné toxicity.
The flow rate to each tank should be constant in consideration of both the maintenance of biological conditions and chemical exposure (e.g. 25 ml/min).
Sběr údajů
The treatment tanks should be randomly assigned to a position in the exposure system in order to reduce potential positional effects, including slight variations in temperature, light intensity, etc.
Veškeré údaje by měly být shromažďovány pomocí elektronických nebo ručních systémů, které jsou v souladu se zásadami správné laboratorní praxe (SLP).
Fluorescent lighting should be used to provide a photoperiod of 12 hr light:
charakterizace zkoušené chemické látky:
12 hr dark at an intensity that ranges from 600 to 2000 lux (lumen/m2) at the water surface.
chemické informace a údaje:
Water temperature should be maintained at 22° ± 1 °C, pH maintained between 6,5 to 8,5, and the dissolved oxygen (DO) concentration > 3,5 mg/l (> 40 % of the air saturation) in each test tank.
Měření zkoušených chemických látek může být nezbytné provádět jak u zásobních roztoků, tak i u zkušebních roztoků,
As a minimum water temperature, pH and dissolved oxygen should be measured weekly;
rozpouštědlo (pokud není použita voda):
temperature should preferably be measured continuously in at least one test vessel.
zdůvodnění výběru rozpouštědla a charakterizace rozpouštědla (povaha, použitá koncentrace).
Appendix 1 outlines the experimental conditions under which the protocol should be executed.
Záznamy obvykle obsahují:
Any water that is locally available (e.g. springwater or charcoal-filtered tap water) and permits normal growth and development of X. laevis tadpoles could be used.
teplotu okolí, zkušební teplotu, fotoperiodu, stav kritických složek systému expozice (např. čerpadel, počítačů cyklů, tlaky), průtoky, úrovně vody, výměny zásobních lahví a záznamy o krmení.
Because local water quality can differ substantially from one area to another, analysis of water quality should be undertaken, particularly, if historical data on the utility of the water for raising Xenopus is not available.
Obecné parametry kvality vody zahrnují:
Special attention should be given that the water is free of copper, chlorine and chloramines, all of which are toxic to frogs and tadpoles.
pH, rozpuštěný kyslík, vodivost, celkový jód, zásaditost a tvrdost,
It is further recommended to analyse the water concerning background levels of fluoride, perchlorate and chlorate (by-products of drinking water disinfection) as all of these anions are substrates of the iodine transporter of the thyroid gland and elevated levels of each of these anions may confound the study outcome.
odchylky od zkušební metody:
Analysis should be performed before testing begins and the testing water should normally be free from these anions.
zde je třeba uvést jakékoli údaje o odchylkách nebo slovní popis odchylek od zkušební metody.
Iodide Concentration in Test Water
biologická pozorování a údaje:
In order for the thyroid gland to synthesise TH, sufficient iodide needs to be available to the larvae through a combination of aqueous and dietary sources.
zahrnují každodenní pozorování mortality, spotřeby potravy, nestandardního plavání, letargie, ztráty rovnováhy, malformací, lézí atd. Pozorování a údaje shromážděné v předem stanovených intervalech obsahují:
Currently, there are no empirically derived guidelines for minimal iodide concentrations.
stadium vývoje, délku zadní končetiny, délku těla od tlamy po kloaku a hmotnost ve vlhkém stavu,
However, iodide availability may affect the responsiveness of the thyroid system to thyroid active agents and is known to modulate the basal activity of the thyroid gland, an aspect that deserves attention when interpreting the results from thyroid histopathology.
použití metod statistické analýzy a jejich zdůvodnění;
Therefore, measured aqueous iodide concentrations from the test water should be reported.
výsledky statistické analýzy pokud možno ve formě tabulky,
Based on the available data from the validation studies, the protocol has been demonstrated to work well when test water iodide (I-) concentrations ranged between 0,5 and 10 μg/l.
histologické údaje:
Ideally, the minimum iodide concentration in the test water should be 0,5 μg/l.
zahrnují slovní popisy, stupeň závažnosti a míry výskytu konkrétních pozorování, která jsou podrobně uvedena v pokynech pro histopatologii,
If the test water is reconstituted from deionised water, iodine should be added at a minimum concentration of 0,5 μg/l.
pozorování ad hoc:
Any additional supplementation of the test water with iodine or other salts should be noted in the report.
tato pozorování by měla zahrnovat slovní popisy o studii, které nespadají do dříve popsaných kategorií.
Holding of animals
Předkládání údajů
Adult Care and Breeding
Dodatek 2 obsahuje tabulky pro každodenní sběr údajů, které mohou být použity jako vodítko pro zápis naměřených údajů a pro výpočty souhrnných statistických údajů.
Adult care and breeding is conducted in accordance with standard guidelines and the reader is directed to the standard guide for performing the Frog Embryo Teratogenesis Assay (FETAX) (6) for more detailed information.
Poskytnuty jsou také vykazovací tabulky, vhodné pro sdělování souhrnných údajů o ukazatelích.
Such standard guidelines provide an example of appropriate care and breeding methods, but strict adherence is not required.
Vykazovací tabulky pro histologická hodnocení obsahuje dodatek 2.
To induce breeding, pairs (3-5) of adult females and males are injected with human chorionic gonadotropin (hCG).
Kritéria provedení zkoušky a přijatelnost/validita zkoušky
Female and male specimens are injected with approximately 800 IU-1000 IU and 600 IU-800 IU, respectively, of hCG dissolved in 0,6-0,9 % saline solution.
Obecně platí, že větší odchylky od zkušební metody povedou k údajům, které jsou z hlediska interpretace nebo vykazování nepřijatelné.
Breeding pairs are held in large tanks, undisturbed and under static conditions in order to promote amplexus.
Proto byla vypracována následující kritéria, uvedená v tabulce 4, jako vodítko pro určení kvality provedené zkoušky celkového stavu kontrolních organismů.
The bottom of each breeding tank should have a false bottom of stainless steel or plastic mesh which permits the egg masses to fall to the bottom of the tank.
Tabulka 4
Frogs injected in the late afternoon will usually deposit most of their eggs by mid morning of the next day.
Kritéria pro provedení zkoušky metamorfózy obojživelníků.
After a sufficient quantity of eggs are released and fertilised, adults should be removed from the breeding tanks.
Kritérium
Larval Care and Selection
Přijatelné meze
After the adults are removed from the breeding tanks, the eggs are collected and evaluated for viability using a representative sub-set of the embryos from all breeding tanks.
Zkušební koncentrace
The best individual spawn(s) (2-3 recommended to evaluate the quality of the spawns) should be retained based upon embryo viability and the presence of an adequate number (minimum of 1500) of embryos.
Udržována na ≤ 20 % variačního koeficientu (variabilita naměřené zkušební koncentrace) po celých 21 dnů zkoušky
All the organisms used in a study should originate from a single spawning event (i.e., the spawns should not be co-mixed).
Mortalita v kontrolních skupinách
The embryos are transferred into a large flat pan or dish and all obvious dead or abnormal eggs (see definition in (5)) are removed using a pipette or eyedropper.
≤ 10 % – mortalita v kterémkoli opakování by v kontrolních skupinách neměla být větší než 2 jedinci
The sound embryos from each of the three spawns are transferred into three separate hatching tanks.
Minimální medián stadia vývoje kontrolních skupin na konci zkoušky
Four days after being placed in the hatching tanks, the best spawn, based on viability and hatching success, is selected and the larvae are transferred into an appropriate number of rearing tanks at 22° ± 1 °C.
Rozpětí stadií vývoje v kontrolní skupině
In addition, some additional larvae are moved into extra tanks for use as replacements in the event that mortalities occur in the rearing tanks during the first week.
a 90. percentil distribuce stadií vývoje by se neměl lišit o více než 4 stadia
This procedure maintains consistent organism density and thereby reduces developmental divergence within the cohort of a single spawn.
Rozpuštěný kyslík
All rearing tanks should be siphoned clean daily.
≥ 40 % nasycení vzduchem [8]
As a precaution, vinyl or nitrile gloves are preferred to latex gloves.
Hodnota pH by měla být udržována mezi 6,5–8,5.
Mortalities should be removed daily and replacement larvae should be added back to maintain the organism density during the first week.
Rozdíly mezi opakováními/expozicemi by neměly být větší než 0,5
Feeding should occur at least twice per day.
± 1 °C – rozdíly mezi opakováními/expozicemi by neměly být větší než 0,5 °C
During the pre-exposure phase, tadpoles are acclimated to the conditions of the actual exposure phase, including the type of food, temperature, light-dark cycle and the culture medium.
Zkušební koncentrace bez zjevné toxicity
Therefore, it is recommended that the same culture/dilution water be used during the pre-exposure phase and the exposure phase.
Výsledky při opakováních
If a static culture system is used for maintaining tadpoles during the pre-exposure phase, the culture medium should be replaced completely at least twice per week.
≤ 2 opakování po celou dobu zkoušky mohou být zpochybněna
Crowding, caused by high larval densities during the pre-exposure period, should be avoided because such effects could markedly affect tadpole development during the subsequent testing phase.
Zvláštní podmínky pro použití rozpouštědla
Therefore, the rearing density should not exceed approximately four tadpoles/l culture medium (static exposure system) or 10 tadpoles/l culture medium (with e.g. 50 ml/min flow rate in the pre-exposure or culturing system).
Je-li použito nosné rozpouštědlo, měla by být použita kontrolní skupina s rozpouštědlem a kontrolní skupina s čistou vodou a výsledky by měly být zaznamenány
Under these conditions, tadpoles should develop from stages 45/46 to stage 51 within twelve days.
Statisticky významné rozdíly mezi kontrolní skupinou s rozpouštědlem a kontrolní skupinou s vodou se posuzují zvlášť.
Representative tadpoles of this stock population should be inspected daily for developmental stage in order to estimate the appropriate time point for initiation of exposure.
Více informací viz níže
Care should be used to minimise stress and trauma to the tadpoles, especially during movement, cleaning of aquaria, and manipulation of larvae.