natgillin/translations-raw huggingface dataset:
C – hrbolky nacházející se bezprostředně anteriorně před nosními dírkami, souběžně s tlamou.
The results should be interpreted with caution where the test chemical appears to cause overt toxicity or to impact on the general condition of the test animal.
U zralých samečků v kontrolních skupinách jsou zpravidla zvětšené nebo výrazně zvětšené.
In setting the range of test concentrations, care should be taken not to exceed the maximum tolerated concentration to allow a meaningful interpretation of the data.
U méně vyvinutých samečků nebo u samiček exponovaných androgenům bývají stupně 1 (přítomné) nebo zvětšené.
It is important to have at least one treatment where there are no signs of toxic effects.
D – hrbolky nacházející se souběžně s linií tlamy.
Signs of disease and signs of toxic effects should be thoroughly assessed and reported.
Zpravidla jsou klasifikovány u samečků v kontrolních skupinách.
For example, it is possible that production of VTG in females can also be affected by general toxicity and non-endocrine toxic modes of action, e.g. hepatotoxicity.
U samiček z kontrolních skupin se nevyskytují, ale bývají přítomné u samiček exponovaných androgenům.
However, interpretation of effects may be strengthened by other treatment levels that are not confounded by systemic toxicity.
E – hrbolky nacházející se na dolní čelisti, poblíž tlamy; obvykle jsou malé a většinou párové.
There are a few aspects to consider for the acceptance of test results.
U samečků v kontrolních skupinách nebo u exponovaných samečků bývají různé, stejně tak u exponovaných samiček.
As a guide, the VTG levels in control groups of males and females should be distinct and separated by about three orders of magnitude in fathead minnow and zebrafish, and about one order of magnitude for medaka.
F – hrbolky nacházející se ventrálně k poloze E.
Examples of the range of values encountered in control and treatment groups are available in the validation reports (1, 2, 3, 4).
Obvykle jsou malé a párové.
High VTG values in control males could compromise the responsiveness of the assay and its ability to detect weak oestrogen agonists.
Bývají přítomné u samečků v kontrole a samiček exponovaných androgenům.
Low VTG values in control females could compromise the responsiveness of the assay and its ability to detect aromatase inhibitors and oestrogen antagonists.
Šablona pro pářicí hrbolky:
The validation studies were used to build that guidance.
Číselná klasifikace
Concerning the quantification of egg production, this is subject to important variations [the coefficient of variation (CV) may range from 20 to 60 %] that impinge the ability of the assay to detect a significant decrease in egg production smaller than 70 % as the CV approaches 50 % or more.
Datum
When the CV is confined to lower values (around 20-30 %), then the assay will have acceptable power (80 %) to detect 40-50 % decrease in egg production.
1 – přítomné
The test design used for the fathead minnow, including four replicates per treatment level, should allow more power to the fecundity endpoint, compared to a test design with 2 replicates only.
Celkové hodnocení
If a laboratory has not performed the assay before or substantial changes (e.g. change of fish strain or supplier) have been made it is advisable that a technical proficiency study is conducted.
2 – zvětšené
It is recommended that chemicals covering a range of modes of action or impacts on a number of the test endpoints are used.
3 – výrazně zvětšené
In practice, each laboratory is encouraged to build its own historical control data for males and females and to perform a positive control chemical for estrogenic activity (e.g. 17β-estradiol at 100 ng/l, or a known weak agonist) resulting in increased VTG in male fish, a positive control chemical for aromatase inhibition (e.g. fadrozole or prochloraz at 300 μg/l) resulting in decreased VTG in female fish, and a positive control chemical for androgenic activity (e.g. 17β-trenbolone at 5 μg/l) resulting in induction of secondary sex characteristics in female fathead minnow and medaka.
Dodatek 5B
All these data can be compared to available data from the validation studies (1, 2, 3) to ensure laboratory proficiency.
POSUZOVÁNÍ DRUHOTNÝCH POHLAVNÍCH ZNAKŮ U HALANČÍKA JAPONSKÉHO ZA ÚČELEM ZJIŠTĚNÍ URČITÝCH CHEMICKÝCH LÁTEK S ENDOKRINNÍM PŮSOBENÍM
In general, VTG measurements should be considered positive if there is a statistically significant increase in VTG in males (p < 0,05), or a statistically significant decrease in females (p < 0,05) at least at the highest dose tested compared to the control group, and in the absence of signs of general toxicity.
Následuje popis měření bradavkovitých výběžků [1], které jsou druhotným pohlavním znakem u halančíka japonského (Oryzias latipes).
A positive result is further supported by the demonstration of a biologically plausible relationship between the dose and the response curve.
Po vyříznutí jater (dodatek 6) se mrtvé tělo vloží do kónické zkumavky, která obsahuje asi 10 ml 10 % neutrálního pufrovaného formalínu (hlavou nahoru, ocasem dolů).
As mentioned earlier, the VTG decrease may not entirely be of endocrine origin; however a positive result should generally be interpreted as evidence of endocrine activity in vivo, and should normally initiate actions for further clarification.
Fixuje-li se gonáda v jiném roztoku než v 10 % neutrálním pufrovaném formalínu, provede se příčný řez skalpelem přes celé mrtvé tělo mezi anteriorní oblastí řitní ploutve a řitním otvorem, přičemž je nutno dbát na to, aby nedošlo k poškození vývodu pohlavních žláz a samotné gonády (obrázek 3).
Gonadal histopathology evaluation may be required by regulatory authorities to determine the reproductive fitness of the test animals and to allow a weight of evidence assessment of the test results.
Kraniální část rybího těla se vloží do fixačního roztoku, aby se zachovala gonáda, a ocasní část rybího těla do 10 % neutrálního pufrovaného formalínu, jak bylo popsáno výše.
Performance of gonadal histopathology may not be necessary in cases where either, VTG or secondary sex characteristics is positive (i.e. VTG increase or decrease, or induction of secondary sex characteristics).
Po uložení rybího těla do 10 % neutrálního pufrovaného formalínu se anteriorní oblast řitní ploutve uchopí pinzetou a stiskne se asi na 30 vteřin tak, aby řitní ploutev zůstala otevřená.
OECD (2006b).
Při uchopení řitní ploutve pinzetou se opatrně uchopí několik ploutevních paprsků v anteriorní oblasti tak, aby se nepoškrábaly bradavkovité výběžky.
OECD (2007).
Poté, co řitní ploutev zůstala asi po 30 vteřin otevřená, se rybí tělo uloží do 10 % neutrálního pufrovaného formalínu při pokojové teplotě až do změření bradavkovitých výběžků (měření se provádí po fixaci trvající alespoň 24 hodin).
Owens JW (2007).
Měření
US EPA (2007).
Po fixaci rybího těla v 10 % neutrálním pufrovaném formalínu po dobu alespoň 24 hodin se mrtvé tělo ryby vyjme z kónické zkumavky a formalín se otře do filtračního papíru (nebo papírového ubrousku).
OECD (2008).
Ryba se položí břichem nahoru.
Sumpter J.P. and S. Jobling (1995).
Poté se malými preparačními nůžkami opatrně odstřihne řitní ploutev (upřednostňuje se řitní ploutev odstřihnout s malým množstvím interneurálních trnů (pterygioforů).
Pawlowski S., et al.
Anteriorní oblast oddělené řitní ploutve se uchopí pinzetou a položí na skleněné podložní sklíčko spolu s několika kapkami vody.
Andersen L., et al (2006).
Poté se řitní ploutev překryje krycím sklíčkem.
Ankley G.T., et al.
Je třeba dát pozor, aby se při uchopení řitní ploutve pinzetou nepoškrábaly bradavkovité výběžky.
Panter G.H., et al.
Pod biologickým mikroskopem (vzpřímený mikroskop nebo inverzní mikroskop) se pomocí počítadla stanoví počet článků s bradavkovitými výběžky.
Parks L.G., et al.
Bradavkovité výběžky se započítají, pokud je na posteriorním okraji článku viditelná malá formace výběžků.
Part C Pharmacology, toxicology and endocrinology; 123(2):113-25.
Počet článků s bradavkovitými výběžky na každé řitní ploutvi se zaznamená v pracovním listu (např. první ploutevní paprsek: 0, druhý ploutevní paprsek: 10, třetí ploutevní paprsek: 12 atd.) a součet těchto čísel u jednotlivých ryb se zanese do excelové tabulky.
Application of an ELISA to quantify vitellogenin concentrations in fathead minnows (Pimephales promelas) exposed to endocrine disrupting chemicals.
V případě potřeby se řitní ploutev vyfotografuje a počet článků s bradavkovitými výběžky se spočítá na fotografii.
CEFIC-EMSG research report reference AQ001.
Po ukončení měření se řitní ploutev vloží do kónické zkumavky popsané v bodě 1) a uskladní se.
CEFIC, Brussels, Belgium.
Obrázek 1.
Fenske M., et al.
Schéma znázorňující rozdíl mezi pohlavími v tvaru a velikosti řitní ploutve.
Development and validation of a homologous zebrafish (Danio rerio Hamilton- Buchanan) vitellogenin enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and its application for studies on estrogenic chemicals.
A – sameček, B – samička.
Comp.
Obrázek 2.
Biochem.
A – výběžky na článcích paprsků řitní ploutve.
Phys.
J.
C 129 (3): 217-232.
P. – článek, A.
Holbech H., et al.
S. – osová vzdálenost, P. – výběžek.
Development of an ELISA for vitellogenin in whole body homogenate of zebrafish (Danio rerio).
B – distální konec ploutvového paprsku.
Comparative Biochemistry and Physiology.
Na hrotu paprsku se nacházejí actinotrichia (Act.).
Part C Pharmacology, toxicology and endocrinology; 130: 119-131 (16) Rose J., et al.
Obrázek 3.
Vitellogenin induction by 17β-estradiol and 17α-ethinylestradiol in male zebrafish (Danio rerio).
Fotografie rybího těla, na které je znázorněno místo řezu při fixaci gonád ve fixačním roztoku, nejedná-li se o 10 % neutrální pufrovaný formalín.
C 131: 531-539.
V takovém případě se zbývající část těla pomocí břitvy odřízne mezi anteriorní oblastí řitní ploutve a řitním otvorem (červená čára), hlavová část rybího těla se uloží do fixačního roztoku pro gonády a ocasní část se uloží do 10 % neutrálního pufrovaného formalínu.
Brion F., et al.
Bradavkovité výběžky se obvykle objevují pouze u dospělých samečků a nacházejí se na paprscích ploutví, a to od druhého do sedmého nebo osmého paprsku od posteriorního konce řitní ploutve (obrázek 1 a 2).
Development and validation of an enzyme-linked immunosorbent assay to measure vitellogenin in the zebrafish (Danio rerio).
Na prvním ploutevním paprsku od posteriorního konce řitní ploutve se výběžky vyskytují jen zřídka.
Environmental Toxicology and Chemistry; vol 21: 1699-1708.
Uvedené standardní operační postupy zahrnují měření výběžků na prvním ploutevním paprsku (pořadové číslo ploutevního paprsku v tomto standardním operačním postupu označuje pořadí od posteriorního konce řitní ploutve).
Yokota H., et al.
DOPORUČENÉ POSTUPY PRO ODBĚR VZORKŮ ZA ÚČELEM ANALÝZY VITELOGENINU
Development of an ELISA for determination of the hepatic vitellogenin in Medaka (Oryzias latipes).
Je třeba dbát na to, aby nedošlo ke vzájemné kontaminaci mezi vzorky VTG samečků a samiček.
Jpn J Environ Toxicol 4:87–98.
Postup 1A:
(19) Tatarazako N., et al.
Jeleček velkohlavý, odběr krve z ocasní žíly/tepny
Journal of Health Science 50:301-308.
Po anestetizaci se skalpelem částečně oddělí ocasní stopka a heparinizovanou mikrohematokritovou kapilárou se odebere krev z ocasní žíly/tepny.
Effects of the androgenic growth promoter 17-beta-trenbolone on fecundity and reproductive endocrinology of the fathead minnow.
Po odebrání krve se rychle izoluje plazma, a to odstředěním po dobu 3 minut při zrychlení 15000 g (nebo alternativně po dobu 10 minut při zrychlení 15000 g a při teplotě 4 °C).
Environmental Toxicology and Chemistry; 22(6): 1350-60.
Je-li to požadováno, lze po odstředění stanovit procento hematokritu.
Seki M, et al (2004).
Část plazmy se poté přenese z mikrohematokritové kapiláry a uloží se do odstředivkové zkumavky s 0,13 jednotkami aprotininu (inhibitor proteázy) při teplotě – 80 °C do doby, než bude možné provést stanovení VTG.
Fish full life-cycle testing for androgen methyltestosterone on medaka (Oryzias latipes).
Podle velikosti jelečka velkohlavého (závisející na pohlaví) se objem plazmy, kterou lze odebrat, zpravidla nachází v rozmezí od 5 do 60 mikrolitrů z každé ryby (Jensen et al., 2001).
OECD (2010).
Postup 1B:
Guidance Document on Fish Gonadal Histopathology.
Jeleček velkohlavý, odběr krve ze srdce
OECD Environmental Health and Safety Publications Series on Testing and Assessment No. 123, Paris.
Alternativně lze krev odebrat také srdeční punkcí pomocí heparinizované injekční stříkačky (1000 jednotek heparinu na ml).
OECD (2000) Guidance Document on Aquatic Toxicity Testing of Difficult Substances and Mixtures.
Krev se přenese do Eppendorfových zkumavek (uložených na ledu) a poté odstředí (po dobu 5 minut při zrychlení 7000 g a pokojové teplotě).
Paris
Plazma se přenese do čistých Eppendorfových zkumavek (v poměrných částech, pokud je to s ohledem na objem plazmy proveditelné), urychleně se zmrazí při teplotě – 80 °C a takto se ponechá až do analýzy (Panter et al., 1998).
Hutchinson T.H., et al.
Postup 2A:
Aquatic Toxicology, 76; pp.69–92.
Halančík japonský, vyříznutí jater
(2006b).
Vyjmutí zkušební ryby ze zkušební komory
Screening and testing for endocrine disruption in fish-biomarkers as “signposts”, not “traffic lights,” in risk assessment.
Zkušební ryba se pomocí malého čeřenu vyjme ze zkušební komory.
Environmental Health Perspectives; 114 Suppl 1:106-14.
Je třeba dát pozor a neupustit zkušební rybu do jiné zkušební komory.
Miles-Richardson S.R., et al.
V zásadě by se zkušební ryby měly vyjímat v tomto pořadí: kontrolní skupina, kontrola s rozpouštědlem (existuje-li), skupina s nejnižší koncentrací, skupina se střední koncentrací, skupina s nejvyšší koncentrací a pozitivní kontrola.
Effects of waterborne exposure to 17β-estradiol on secondary sex characteristics and gonads of the fathead minnow (Pimephales promelas).
Všichni samečkové se ze zkušební komory vyjmou dříve než zbývající samičky.
Aquat.
Pohlaví každé zkušební ryby se zjistí na základě vnějších druhotných pohlavních znaků (např. tvaru řitní ploutve).
Toxicol.
Zkušební ryby se umístí do přepravní nádrže a dopraví se na pracoviště, kde se provádí vyříznutí jater.
47, 129-145.
Etikety ze zkušební komory a přepravní nádrže se zkontrolují kvůli přesnosti a pro ověření, zda se počet ryb, jež byly vyjmuty ze zkušební komory, a počet ryb, které ve zkušební komoře zůstávají, shodují s očekáváním.
Martinovic D., et al.
Nelze-li pohlaví ryb zjistit podle jejich vnějšího vzhledu, vyjmou se ze zkušební komory všechny ryby.
Characterization of reproductive toxicity of vinclozolin in the fathead minnow and co-treatment with an androgen to confirm an anti-androgenic mode of action.
V takovém případě se pohlaví zjistí vyšetřením gonád nebo druhotných pohlavních znaků pod stereoskopickým mikroskopem.
Environ.
Vyříznutí jater
Toxicol.
Zkušební ryba se pomocí malého čeřenu přenese z nádrže pro přepravu do anestetického roztoku.
Chem.
Po anestetizaci se ryba přenese pinzetou na filtrační papír (nebo na papírový ubrousek).
27, 478-488.
Ryba se uchopí pinzetou za hlavu z obou stran, aby nedošlo k porušení ocasu.
OECD (2006c), Current Approaches in the Statistical Analysis of Ecotoxicity Data: A Guidance to Application, OECD Environmental Health and Safety Publications, Series on Testing and Assessment No.54, OECD, Paris.
Voda na povrchu těla ryby se otře filtračním papírem (nebo papírovým ubrouskem).
(29) US EPA (2008), Peer-Review Results for the Fish Short-Term Reproduction Assay, dated 30 January 2008, US Environmental Protection Agency, Washington DC.
Poté se pomocí preparačních nůžek provede malý příčný řez v polovině vzdálenosti mezi ventrální hřbetní oblastí a střední břišní oblastí.
OECD (2012), OECD Conceptual Framework for Testing and Assessment of Endocrine Disrupters, OECD Environmental Health and Safety Publications, Series on Testing and Assessment No. 150, OECD, Paris.
Do tohoto malého řezu se vloží preparační nůžky a rozstřihne se břicho podél střední linie břicha od bodu ležícího kaudálně od žaberního krytu až po kraniální stranu řitního otvoru.
ABBREVIATIONS & DEFINITIONS:
Je třeba dát pozor, aby preparační nůžky nepronikly příliš hluboko a aby nedošlo k poškození jater a gonád.
a substance or a mixture
Následující kroky se provedou pod stereoskopickým mikroskopem.
coefficient of variation
Zkušební ryba se položí břichem nahoru na papírový ubrousek (použít lze rovněž skleněnou Petriho misku nebo podložní sklíčko mikroskopu).
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay
Stěny břišní dutiny se roztáhnou jemnou pinzetou a odkryjí se tak vnitřní orgány.
HPG axis
V případě potřeby je rovněž přijatelné odkrýt vnitřní orgány tak, že se odstraní jedna strana stěny břišní dutiny.
hypothalamic-pituitary-gonadal axis
Pomocí druhé jemné pinzety se odhalí přirostlá část jater a žlučový měchýř.
Loading rate
Poté se uchopí žlučovod a odřízne se žlučový měchýř.
the wet weight of fish per volume of water.
Je třeba dbát na to, aby se žlučový měchýř neprotrhl.
MTC
Stejným způsobem se uchopí jícen a od jater se odřízne gastrointestinální trakt.
Maximum Tolerated Concentration, representing about 10 % of the LC50
Je třeba dát pozor, aby obsah trávicí soustavy nevytekl.
Stocking density
Kaudální část gastrointestinálního traktu se odřízne od řitního otvoru a gastrointestinální trakt se vyjme z břišní dutiny.
is the number of fish per volume of water.
Od periferie jater se ořízne tuková hmota a jiné tkáně.
vitellogenin is a phospholipoglycoprotein precursor to egg yolk protein that normally occurs in sexually active females of all oviparous species.
Je třeba dát pozor, aby se játra nepoškrábala.
EXPERIMENTAL CONDITIONS FOR THE FISH ENDOCRINE SCREENING ASSAY
Oblast jaterního portálu se uchopí jemnou pinzetou a játra se vyjmou z břišní dutiny.
(Pimephales promelas)
Játra se umístí na podložní sklíčko.
Medaka (Oryzias latipes)
V případě potřeby se pomocí jemné pinzety z povrchu jater odstraní veškerý zbývající tuk a vnější tkáně (např. břišní výstelka).
Test type
Na elektronických analytických vahách se změří hmotnost jater s mikrozkumavkou o objemu 1,5 ml jako vahou obalu.
Flow-through
Hodnota se zaznamená v pracovním listu (s přesností na 0,1 mg).
Water temperature
Na etiketě mikrozkumavky se ověří identifikační údaje.
Illumination quality
Mikrozkumavka s játry se zazátkuje.
Fluorescent bulbs (wide spectrum)
Skladuje se v chladicím (nebo mrazicím) stojánku.
Light intensity
Po odříznutí jedněch jater se preparační nástroje vyčistí nebo nahradí čistými.
10-20 μE/m2/s, 540-1000 lux, or 50-100 ft-c (ambient laboratory levels)
Výše popsaným způsobem se vyjmou játra u všech ryb v přepravní nádrži.
Photoperiod (dawn / dusk transitions are optional, however not considered necessary) 16 h light, 8 h dark
Po vyříznutí jater ze všech ryb v přepravní nádrži (tj. všech samečků nebo samiček ze zkušební komory) se všechny vzorky jater umístí do stojánku na zkumavky s etiketou kvůli identifikaci a uskladní se v mrazničce.
12-16 h light, 12-8 h dark
Jsou-li játra krátce po vyříznutí dodána k předběžné úpravě, vzorky se na další pracoviště přenesou v chladicím (nebo mrazicím) stojánku.
< 5 g per l
Po odnětí jater je mrtvé tělo ryby k dispozici pro histologii gonád a měření druhotných pohlavních znaků.
Test chamber size
Vzorek
10 l (minimum)
Pokud se vzorky jater odebrané u zkušebních ryb krátce po vyříznutí nepoužijí pro předběžnou úpravu, skladují se při teplotě ≤ – 70 °C.
2 l (minimum)
Nůžkami se vede řez těsně před prsními ploutvemi.
5 l (minimum)
Pomocí nůžek se rozstřihne střední linie břicha až k bodu, který se nachází přibližně 2 mm kraniálně od řitního otvoru.
Test solution volume
Pinzetou se rozevřou břišní stěny, aby se odkryla játra a další vnitřní orgány.
8 l (minimum)
(Alternativně lze břišní stěny laterálně přišpendlit.)
1,5 l (minimum)
Šipka označuje játra.
4 l (minimum)
Játra se pomocí pinzety vypreparují a vyříznou.
Volume exchanges of test solutions
Obrázek 5.
Minimum of 6 daily
Pinzetou se jemně odtáhnou střeva.
Minimum of 5 daily
Obrázek 6.
Age of test organisms
Oba konce střev a veškeré střevní okruží se oddělí nůžkami.
See paragraph 21
Obrázek 7 (samička).
Approximate wet weight of adult fish (g)
U samiček je postup stejný.
Females: 1,5 ± 20 %
Obrázek 8.
Males: 2,5 ± 20 %
Dokončený postup.
Females: 0,35 ± 20 %
Postup 2B:
Males: 0,35 ± 20 %
Halančík japonský (Oryzias latipes), předúprava jater pro analýzu vitelogeninu
Females: 0,65 ± 20 %
Ze soupravy pro analýzu ELISA se vezme lahev s homogenizačním pufrem a ochladí se v ledové tříšti (teplota roztoku ≤ 4 °C).
Males: 0,4 ± 20 %
Je-li použit homogenizační pufr ze systému ELISA EnBio, roztok se rozmrazí při pokojové teplotě a poté se lahev ochladí v ledové tříšti.
No. of fish per test vessel
Objem pufru pro homogenizaci jater se vypočítá na základě jejich hmotnosti (na mg hmotnosti jater se přidá 50 μl homogenizačního pufru).
6 (2 males and 4 females)
Například je-li hmotnost jater 4,5 mg, objem pufru pro homogenizaci jater je 225 μl.
6 (3 males and 3 females)
Připraví se seznam objemů homogenizačního pufru pro všechna játra.
10 (5 males and 5 females)
Příprava jater pro předúpravu
No. of treatments
Mikrozkumavka o objemu 1,5 ml obsahující játra se vyjme z mrazničky těsně před předúpravou.
= 3 (plus appropriate controls)
Předúprava samčích jater by se měla provádět dříve než předúprava samičích jater, aby se předešlo kontaminaci vitelogeninem.
No. vessels per treatment
U zkušebních skupin by se kromě toho předúprava měla provádět v tomto pořadí: kontrolní skupina, kontrola s rozpouštědlem (existuje-li), skupina s nejnižší koncentrací, skupina se střední koncentrací, skupina s nejvyšší koncentrací a pozitivní kontrola.
4 minimum
Počet mikrozkumavek o objemu 1,5 ml obsahujících vzorky jater, které se vyjmou z mrazničky v daný čas, by neměl být větší než počet zkumavek, které lze současně odstředit.
2 minimum
Mikrozkumavky o objemu 1,5 ml s jaterními vzorky se uspořádají na mrazicím stojánku podle pořadových čísel (játra není třeba rozmrazovat).
No. of fish per test concentration
Provedení předúpravy
16 adult females and 8 males (4 females and 2 males in each replicate vessel)
Přidání homogenizačního pufru
12 adult females and 12 males (3 females and 3 males in each replicate vessel)
Kontrolou seznamu se zjistí, jaký objem homogenizačního pufru má být přidán pro daný konkrétní vzorek jater, a mikropipeta (rozmezí objemů 100–1000 μl) se nastaví na příslušný objem.
10 adult females and 10 males (5 females and 5 males in each replicate vessel)
Na mikropipetu se nasadí čistý hrot.
Feeding regime
Z lahve s činidlem se nabere homogenizační pufr a přidá se do zkumavky o objemu 1,5 ml obsahující játra.
Live or frozen adult or nauplii brine shrimp two or three times daily (ad libitum), commercially available food or a combination of the above
Podle výše uvedeného postupu se homogenizační pufr přidá do všech mikrozkumavek o objemu 1,5 ml obsahujících játra.
Brine shrimp nauplii two or three times daily (ad libitum), commercially available food or a combination of the above
Hrot mikropipety není třeba měnit za nový.
Brine shrimp nauplii two or three times daily (ad libitum),commercially available food or a combination of the above
Je-li hrot kontaminován nebo existuje-li podezření, že je kontaminován, musí se vyměnit.
None unless DO concentration falls below 60 % air saturation
Homogenizace jater
Dilution water
Vezme se nový homogenizační tlouček pro homogenizátor pro mikrozkumavky.
Clean surface, well or reconstituted water or dechlorinated tap water
Tlouček se vloží do mikrozkumavky o objemu 1,5 ml.
Pre- exposure period
Homogenizátor se uchopí tak, aby tlačil na játra mezi povrchem tloučku a vnitřní stěnou mikrozkumavky o objemu 1,5 ml.
7-14 days recommended
Homogenizátor pro mikrozkumavky se ponechá v činnosti 10–20 sekund.
Chemical exposure duration
Mikrozkumavka o objemu 1,5 ml se během této činnosti chladí ledovou tříští.
Biological endpoints
Tlouček se vyjme z mikrozkumavky o objemu 1,5 ml a ponechá se asi na 10 sekund v nečinnosti.
survival
Poté se provede vizuální kontrola stavu suspenze.
behaviour
Jsou-li v suspenzi patrné kousky jater, kroky 3) a 4) se opakují, aby se připravil uspokojivý homogenát jater.
fecundity
Suspendovaný homogenát jater se chladí v chladicím stojánku až do odstřeďování.
sex characteristics