natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Aby bylo možné před zahájením rutinního zkoušení zjistit, zda laboratoř má s danou zkouškou dostatečné zkušenosti, měla by prokázat schopnost reprodukovat očekávané výsledky z publikovaných údajů (17) (19) (20) (21) (22), pokud jde o četnost výskytu mikrojader, nejméně se dvěma pozitivními kontrolními chemickými látkami (včetně slabých odpovědí indukovaných nízkými dávkami u pozitivních kontrol), např. látkami uvedenými v tabulce 1, a s kontrolami s kompatibilním vehikulem/rozpouštědlem (viz odstavec 26).
Some books provide worked examples of comparable designs, in some cases with code for running the analyses using various software packages.
Při těchto experimentech by se měly používat dávky, jež poskytují reprodukovatelné nárůsty v závislosti na dávce, a měly by prokázat citlivost a dynamické rozpětí zkušebního systému ve sledované tkáni (kostní dřeni nebo periferní krvi) za použití hodnotící metody, jež má být v laboratoři uplatňována.
Statisticians who take a modelling approach such as using General Linear Models (GLMs) may approach the analysis in a different but comparable way but will not necessarily derive the traditional anova table, which dates back to algorithmic approaches to calculating the statistics developed in a pre-computer age.
Tento požadavek neplatí pro laboratoře, které tuto zkušenost mají, tj. které mají k dispozici historickou databázi, jak je definována v odstavci 14–18.
In Part B, Chapter B.12 is replaced by the following:
V laboratořích by měly být uplatňovány metody řízení jakosti, jako např. kontrolní diagramy (např.C-charts nebo X-bar charts (23)), z nichž je patrné, jak proměnlivé jsou jejich údaje a že metodika je v dané laboratoři „pod kontrolou“.
Mammalian Erythrocyte Micronucleus Test
Další doporučení, jak získat a používat dosavadní údaje (tj. kritéria pro zařazení údajů do historické databáze a jejich vyřazení a kritéria přijatelnosti pro daný experiment), lze najít v literatuře (24).
This test method is equivalent to OECD test guideline 474 (2016).
Pokud laboratoř neprovedla dostatečný počet experimentů, aby mohla během šetření způsobilosti (popsaného v odstavci 13) stanovit statisticky robustní distribuci negativních kontrol (viz odstavec 15), je přijatelné, aby distribuce byla stanovena během prvních rutinních zkoušek.
The mammalian in vivo micronucleus test is especially relevant for assessing genotoxicity because, although they may vary among species, factors of in vivo metabolism, pharmacokinetics and DNA repair processes are active and contribute to the responses.
Uplatňování tohoto přístupu by mělo vycházet z doporučení uvedených v literatuře (24) a výsledky negativních kontrol získané při těchto experimentech by měly zůstat v souladu s publikovanými údaji o negativních kontrolách.
The mammalian in vivo micronucleus test is used for the detection of damage induced by the test chemical to the chromosomes or the mitotic apparatus of erythroblasts.
Pouze případy větších rozdílů ve zkušebním protokolu by měly vést k zavedení nové historické kontrolní databáze, přičemž její odlišnost od dřívější distribuce se stanoví na základě odborného posouzení (viz odstavec 15).
The test evaluates micronucleus formation in erythrocytes sampled either in the bone marrow or peripheral blood cells of animals, usually rodents.
Údaje o negativních kontrolách by měly zahrnovat výskyt nezralých erytrocytů s mikrojádry u každého zvířete.
The purpose of the micronucleus test is to identify chemicals that cause cytogenetic damage which results in the formation of micronuclei containing either lagging chromosome fragments or whole chromosomes.
Pokud jsou údaje ze souběžných negativních kontrol mimo 95 % rozmezí, může být přijatelné je zařadit mezi dosavadní distribuci kontrol, pokud tyto údaje nejsou mimořádně odlehlé a pokud existuje důkaz o tom, že testovací systém je „pod kontrolou“ (viz odstavec 15), a neexistuje důkaz o tom, že by došlo k technické nebo lidské chybě.
When a bone marrow erythroblast develops into an immature erythrocyte (sometimes also referred to as a polychromatic erythrocyte or reticulocyte), the main nucleus is extruded; any micronucleus that has been formed may remain behind in the cytoplasm.
Použit lze myši, potkany nebo jiné vhodné druhy savců.
Visualisation or detection of micronuclei is facilitated in these cells because they lack a main nucleus.
Při použití periferní krve se musí stanovit, že detekci indukovaných mikrojader u zvoleného druhu neohrozí odstraňování buněk s mikrojádry z krevního oběhu ve slezině.
An increase in the frequency of micronucleated immature erythrocytes in treated animals is an indication of induced structural or numerical chromosomal aberrations.
Toto bylo jasně prokázáno u periferní krve myši a potkana (2).
Newly formed micronucleated erythrocytes are identified and quantitated by staining followed by either visual scoring using a microscope, or by automated analysis.
Jsou-li použity jiné druhy než hlodavci, doporučuje se měření indukovaných mikrojader začlenit do jiné vhodné zkoušky toxicity.
Counting sufficient immature erythrocytes in the peripheral blood or bone marrow of adult animals is greatly facilitated by using an automated scoring platform.
Zkušební podmínky
Such platforms are acceptable alternatives to manual evaluation (2).
Rozpouštědlo/vehikulum by nemělo mít při použitých úrovních dávek toxické účinky a nemělo by být schopno chemické reakce se zkoušenými chemickými látkami.
Comparative studies have shown that such methods, using appropriate calibration standards, can provide better inter- and intra-laboratory reproducibility and sensitivity than manual microscopic scoring (3) (4).
Neexistují-li historické nebo publikované kontrolní údaje prokazující, že zvolené atypické rozpouštědlo/vehikulum neindukuje mikrojádra nebo jiné zhoubné účinky, měla by být provedena počáteční studie za účelem stanovení přijatelnosti kontroly s tímto rozpouštědlem/vehikulem.
Automated systems that can measure micronucleated erythrocyte frequencies include, but are not limited to, flow cytometers (5), image analysis platforms (6) (7), and laser scanning cytometers (8).
Není-li zařazena souběžná pozitivní kontrolní skupina, měly by být v každém experimentu zařazeny hodnotící kontroly (fixované a nezbarvené preparáty nebo vzorky buněčné suspenze podle toho, co je vhodné pro danou hodnotící metodu).
Although not normally done as part of the test, chromosome fragments can be distinguished from whole chromosomes by a number of criteria.
Tyto hodnotící kontroly lze získat tak, že se do hodnocení studie zařadí vhodné referenční vzorky, které byly získány a uchovány ze samostatného experimentu s pozitivními kontrolami prováděného pravidelně (např. každých 6–18 měsíců), například během testování způsobilosti a poté pravidelně podle potřeby.
These include identification of the presence or absence of a kinetochore or centromeric DNA, both of which are characteristic of intact chromosomes.
Chemické látky pro pozitivní kontrolu by měly spolehlivě vyvolat pozorovatelné zvýšení výskytu buněk s mikrojádry nad spontánní úroveň.
The absence of kinetochore or centromeric DNA indicates that the micronucleus contains only fragments of chromosomes, while the presence is indicative of chromosome loss.
Při použití manuálního hodnocení za použití mikroskopie by dávky u pozitivní kontroly měly být zvoleny tak, aby byl účinek zřetelný, ale aby hodnotitel okamžitě nezjistil identitu kódovaného vzorku.
The bone marrow of young adult rodents is the target tissue for genetic damage in this test since erythrocytes are produced in this tissue.
Chemické látky a registrační číslo CAS (CASRN)
The measurement of micronuclei in immature erythrocytes in peripheral blood is acceptable in other mammalian species for which adequate sensitivity to detect chemicals that cause structural or numerical chromosomal aberrations in these cells has been demonstrated (by induction of micronuclei in immature erythrocytes) and scientific justification is provided.
ethyl-methansulfonát [CASRN 62-50-0]
The frequency of micronucleated immature erythrocytes is the principal endpoint.
methyl-methansulfonát [CASRN 66-27-3]
The frequency of mature erythrocytes that contain micronuclei in the peripheral blood also can be used as an endpoint in species without strong splenic selection against micronucleated cells and when animals are treated continuously for a period that exceeds the lifespan of the erythrocyte in the species used (e.g. 4 weeks or more in the mouse).
thyl-1-nitrosomočovina [CASRN 759-73-9]
Animals are exposed to the test chemical by an appropriate route.
cyklofosfamid (cyklofosfamid monohydrát) [CASRN 50-18-0 (CASRN 6055-19-2)]
If bone marrow is used, the animals are humanely euthanised at an appropriate time(s) after treatment, the bone marrow is extracted, and preparations are made and stained (9) (10) (11) (12) (13) (14) (15).
2,4,6-tris(aziridin-1-yl)- 1,3,5-triazin [CASRN 51-18-3]
When peripheral blood is used, the blood is collected at an appropriate time(s) after treatment and preparations are made and stained (12) (16) (17) (18).
kolchicin [CASRN 64-86-8] nebo vinblastin [CASRN 865-21-4] – jako aneugeny
When treatment is administered acutely, it is important to select bone marrow or blood harvest times at which the treatment-related induction of micronucleated immature erythrocytes can be detected.
Pokud však dosavadní údaje o negativních kontrolách v různých intervalech expozice v dané zkušební laboratoři prokazují konzistentní údaje o variabilitě zvířat a četnosti buněk s mikrojádry, může být pro negativní kontrolu nezbytný pouze jeden odběr.
In the case of peripheral blood sampling, enough time must also have elapsed for these events to appear in circulating blood.
Při použití periferní krve je u krátkodobých studií přijatelný vzorek odebraný před expozicí namísto souběžné negativní kontroly, pokud výsledné údaje jsou konzistentní s historickou kontrolní databází dané zkušební laboratoře.
Preparations are analysed for the presence of micronuclei, either by visualisation using a microscope, image analysis, flow cytometry, or laser scanning cytometry.
Určitým vodítkem pro maximální typické požadavky na počet zvířat může být, že studie s kostní dření prováděné podle parametrů uvedených v odstavci 37 se třemi exponovanými skupinami a souběžnými negativními a kontrolními skupinami (každá skupina složena z pěti zvířat jednoho pohlaví) by vyžadovala 25 až 35 zvířat.
In order to establish sufficient experience with the conduct of the assay prior to using it for routine testing, the laboratory should have demonstrated the ability to reproduce expected results from published data (17) (19) (20) (21) (22) for micronucleus frequencies with a minimum of two positive control chemicals (including weak responses induced by low doses of positive controls), such as those listed in Table 1 and with compatible vehicle/solvent controls (see paragraph 26).
Provádí-li se studie pro zjištění rozsahu dávek, poněvadž nejsou k dispozici vhodné údaje, jež by mohly pomoci při stanovení dávek, měla by být provedena ve stejné laboratoři, se stejným druhem, kmenem, pohlavím a za stejného režimu expozice, které se použijí v hlavní studii (27).
These experiments should use doses that give reproducible and dose-related increases and demonstrate the sensitivity and dynamic range of the test system in the tissue of interest (bone marrow or peripheral blood) and using the scoring method to be employed within the laboratory.
Cílem studie by mělo být zjistit maximální tolerovanou dávku, která je definována jako nejvyšší dávka, která bude po dobu trvání zkoušky tolerována bez příznaků toxicity omezující studii (např. vyvolání poklesu tělesné hmotnosti nebo cytotoxicity hematopoetického systému, avšak nikoli smrti nebo příznaků bolesti, utrpení nebo strádání, kdy je nezbytné zvířata humánně utratit (28)).
This requirement is not applicable to laboratories that have experience, i.e. that have a historical database available as defined in paragraphs 14-18.
Nejvyšší dávka může být také definována jako dávka vyvolávající v kostní dřeni toxicitu (např. snížení podílu nezralých erytrocytů z celkového počtu erytrocytů v kostní dřeni nebo v periferní krvi o více než 50 %, avšak nejméně na 20 % kontrolní hodnoty).
Laboratories should use quality control methods, such as control charts (e.g. C-charts or X-bar charts (23)), to identify how variable their data are, and to show that the methodology is ‘under control’ in their laboratory.
Při analýze CD71 pozitivních buněk v periferním krevním oběhu (tj. pomocí průtokové cytometrie) tato velmi mladá frakce nezralých erytrocytů odpovídá na toxické podněty rychleji než větší kohorta nezralých erytrocytů s pozitivní RNA.
Further recommendations on how to build and use the historical data (i.e. criteria for inclusion and exclusion of data in historical data and the acceptability criteria for a given experiment) can be found in the literature (24).
Vyšší zjevná toxicita proto může být zřejmá při uspořádání s akutní expozicí, kdy se zkoumá frakce CD71 pozitivních nezralých erytrocytů v porovnání s těmi uspořádáními, jež identifikují nezralé erytrocyty na základě obsahu RNA.
Where the laboratory does not complete a sufficient number of experiments to establish a statistically robust negative control distribution (see paragraph 15) during the proficiency investigations (described in paragraph 13), it is acceptable that the distribution can be built during the first routine tests.
A proto, jestliže se při experimentech využívá pěti nebo méně dnů expozice, může být nejvyšší dávka chemické látky způsobující toxicitu definována jako dávka, která způsobuje statisticky významné snížení podílu nezralých CD71 pozitivních erytrocytů z celkového množství erytrocytů, avšak nikoli na úroveň menší než 5 % kontrolní hodnoty (29).
This approach should follow the recommendations set out in the literature (24) and the negative control results obtained in these experiments should remain consistent with published negative control data.
Výjimku z kritérií pro stanovení dávek mohou představovat chemické látky, jež vykazují saturaci toxikokinetických vlastností nebo indukují detoxifikační procesy, které mohou vést ke snížení expozice po dlouhodobé aplikaci, a jež by měly být hodnoceny v každém jednotlivém případě.
Only major inconsistencies should result in the establishment of a new historical control database where expert judgement determines that it differs from the previous distribution (see paragraph 15).
Pokud zkoušená chemická látka ve studii ke stanovení rozsahu dávek nebo na základě existujících údajů nevyvolává toxicitu, měla by být nejvyšší dávka 1000 mg/kg tělesné hmotnosti/den při době podávání 14 dní nebo delší nebo 2000 mg/kg tělesné hmotnosti/den při dobách podávání kratších než 14 dní.
Negative control data should consist of the incidence of micronucleated immature erythrocytes in each animal.
Pro kratší než 14denní aplikaci je limitní dávka 2000 mg/kg tělesné hmotnosti/den.
Mice, rats, or another appropriate mammalian species may be used.
Proto lze zvolit odůvodněné způsoby expozice např. potravou, v pitné vodě, lokálně, subkutánně, nitrožilně, orálně (pomocí žaludeční sondy), inhalací, intratracheálně nebo implantací.
When peripheral blood is used, it must be established that splenic removal of micronucleated cells from the circulation does not compromise the detection of induced micronuclei in the species selected.
Je-li zkoušená chemická látka přimíchána do potravy nebo pitné vody, zejména v případě jednorázové dávky, mělo by se dbát na to, že prodleva mezi příjmem krmiva a vody a odběrem vzorku by měla být dostatečná, aby umožnila detekci účinků (viz odstavec 37).
This has been clearly demonstrated for mouse and rat peripheral blood (2).
Přednostně se provádějí 2 nebo více aplikací v intervalu 24 hodin, zejména při začlenění tohoto testu do jiných studií toxicity.
If species other than rodents are used, it is recommended that the measurement of induced micronuclei be integrated into another appropriate toxicity test.
Alternativně lze podat jedinou dávku, pokud je to vědecky odůvodněno (např. chemické látky, o nichž je známo, že blokují buněčný cyklus).
Test Conditions
Vzorky kostní dřeně se odeberou alespoň dvakrát (od nezávislých skupin zvířat), přičemž první odběr se provede nejdříve 24 hodin po aplikaci a poslední nejpozději 48 hodin po aplikaci, pokud není známo, že zkoušená chemická látka má mimořádné dlouhý poločas rozpadu, a s přiměřeným odstupem mezi odběry.
These can be obtained by including within the scoring of the study appropriate reference samples that have been obtained and stored from a separate positive control experiment conducted periodically (e.g. every 6-18 months); for example, during proficiency testing and on a regular basis thereafter, where necessary.
Odběr dříve než 24 hodin po aplikaci musí být zdůvodněn.
Positive control chemicals should reliably produce a detectable increase in micronucleus frequency over the spontaneous level.
Vzorky periferní krve se odeberou alespoň dvakrát (od téže skupiny zvířat), přičemž první odběr se provede nejdříve 36 hodin po aplikaci a poslední nejpozději 72 hodin po aplikaci a po prvním odběru se dodrží odpovídající odstup/y.
When employing manual scoring by microscopy, positive control doses should be chosen so that the effects are clear but do not immediately reveal the identity of the coded samples to the scorer.
Je-li po prvním odběru pozorována pozitivní odpověď, není další odběr nutný, pokud není potřeba získat kvantitativní informace o dávce a odezvě.
Chemicals and CASRN
Popsané doby odběrů jsou důsledkem kinetiky výskytu a vymizení mikrojader v těchto dvou tkáňových složkách;
Ethyl methanesulphonate [CASRN 62-50-0]
b. jsou-li podávány dvě dávky denně (např. dvě dávky v intervalu 24 hodin), měly by být vzorky při použití kostní dřeně odebrány jednou po 18 až 24 hodinách po poslední aplikaci a při použití periferní krve jednou po 36 až 48 hodinách po poslední aplikaci (30).
Methyl methanesulphonate [CASRN 66-27-3]
c. jsou-li podávány tři nebo více dávek denně (např. tři nebo více dávek v intervalu přibližně 24 hodin), měly by být vzorky při použití kostní dřeně odebrány nejpozději po 24 hodinách po poslední aplikaci a při použití periferní krve by měly být odebrány nejpozději po 40 hodinách po poslední aplikaci (31).
Ethyl nitrosourea [CASRN 759-73-9]
Tato možnost aplikace vyhovuje pro kombinaci s kometovým testem (např. odběr vzorků po 2–6 hodinách po poslední aplikaci) se zkouškou mikrojader a pro integraci zkoušky mikrojader se studiemi toxicity po opakovaných dávkách.
Mitomycin C [CASRN 50-07-7]
Z akumulovaných údajů vyplývá, že indukci mikrojader je možné pozorovat v těchto širších časových úsecích, pokud byly podány tři nebo více dávek (15).
Cyclophosphamide (monohydrate) [CASRN 50-18-0 (CASRN 6055-19-2)]
Popřípadě mohou být použity jiné režimy podávání dávek nebo odběru vzorků, je-li to vědecky zdůvodněno a k usnadnění integrace s jinými zkouškami toxicity.
Triethylenemelamine [CASRN 51-18-3]
Všechna zvířata by měla být zvážena na počátku studie, nejméně jednou týdně během studií s opakovanou dávkou a při utracení.
Colchicine [CASRN 64-86-8] or Vinblastine [CASRN 865-21-4] — as aneugens
Zvířata, která vykazují neletální indikátory nadměrné toxicity, by měla být humánně utracena před uplynutím doby zkoušky (28).
However, if consistent inter-animal variability and frequencies of cells with micronuclei are demonstrated by historical negative control data at each sampling time for the testing laboratory, only a single sampling for the negative control may be necessary.
Za určitých okolností by mohla být sledována tělesná teplota zvířete, protože hypertermie a hypotermie indukovaná expozicí může způsobovat falešné výsledky (32) (33) (34).
If peripheral blood is used, a pre-treatment sample is acceptable instead of a concurrent negative control for short-term studies when the resulting data are consistent with the historical control database for the testing laboratory.
Krevní vzorek by měl být odebrán ve vhodnou dobu (vhodné doby), aby mohlo být provedeno vyšetření hladiny zkoušené chemické látky v plazmě za účelem prokázání, že došlo k expozici kostní dřeně, pokud je to požadováno a pokud neexistují jiné údaje o expozici (viz odstavec 48).
It has been shown for rats that pre-treatment sampling of small volumes (e.g. below 100 μl/day) has minimal impact on micronucleus background frequency (25).
Příprava kostní dřeně nebo krve
In general, the micronucleus response is similar between male and female animals and, therefore, most studies could be performed in either sex (26).
Buňky kostní dřeně se obvykle získávají z femuru nebo tibie zvířat ihned po jejich humánním usmrcení.
Data demonstrating relevant differences between males and females (e.g. differences in systemic toxicity, metabolism, bioavailability, bone marrow toxicity, etc. including e.g. in a range-finding study) would encourage the use of both sexes.
Buňky se odeberou a zavedenými metodami se preparují a obarví.
As a guide to maximum typical animal requirements, a study in bone marrow conducted according to the parameters established in paragraph 37 with three dose groups and concurrent negative and positive controls (each group composed of five animals of a single sex) would require between 25 and 35 animals.
Malé objemy periferní krve lze podle příslušných standardů dobrého zacházení se zvířaty získat buď postupem, který umožňuje přežití zkušebního zvířete, např. odběrem z ocasní žíly nebo jiné vhodné krevní cévy, anebo srdeční punkcí nebo odběrem vzorku z velké cévy při utracení zvířete.
If a preliminary range-finding study is performed because there are no suitable data already available to aid in dose selection, it should be performed in the same laboratory, using the same species, strain, sex, and treatment regimen to be used in the main study (27).
U erytrocytů získaných z kostní dřeně nebo z periferní krve je možné, v závislosti na metodě analýzy, buňky ihned supravitálně obarvit (16) (17) (18), připravit preparáty roztěrem a poté je obarvit pro mikroskopii nebo vhodně fixovat a obarvit pro analýzu pomocí průtokové cytometrie.
The study should aim to identify the maximum tolerated dose (MTD), defined as the highest dose that will be tolerated without evidence of study-limiting toxicity, relative to the duration of the study period (for example, by inducing body weight depression or hematopoietic system cytotoxicity, but not death or evidence of pain, suffering or distress necessitating humane euthanasia (28)).
Použitím barviva specifického pro DNA [např. akridinová oranž (35) nebo Hoechst 33258 a pyronin-Y (36)] se lze vyhnout některým artefaktům spojeným s použitím barviva nespecifického pro DNA.
The highest dose may also be defined as a dose that produces toxicity in the bone marrow (e.g. a reduction in the proportion of immature erythrocytes among total erythrocytes in the bone marrow or peripheral blood of more than 50 %, but to not less than 20 % of the control value).
Tato výhoda nebrání použití konvenčních barviv (např. Giemsa pro analýzu pod mikroskopem).
However, when analysing CD71-positive cells in peripheral blood circulation (i.e., by flow cytometry), this very young fraction of immature erythrocytes responds to toxic challenges more quickly than the larger RNA-positive cohort of immature erythrocytes.
Přídavné systémy [např. celulosová kolona k odstranění buněk obsahujících jádra (37) (38)] lze použít za předpokladu, že se prokázalo, že jsou kompatibilní se systémy pro preparaci vzorků v laboratoři.
Therefore, higher apparent toxicity may be evident with acute exposure designs examining the CD71-positive immature erythrocyte fraction as compared to those that identify immature erythrocytes based on RNA content.