natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Dospělí zkušební živočichové se odeberou ze synchronizované kultury a vloží do zkušebních nádob mezi 28. a 35. dnem poté, co rodičovské samičky zahájily kladení vajíček (tj. 7–14 dní po dosažení dospělosti).
If heat extraction is applied directly to the test vessel, then a bottom mesh of appropriate mesh size could be added (sealed until extraction), and soil depth should be sufficient to allow for a temperature and moisture gradient.
Tím se zaručí, že zkušební samičky již prošly obdobím před kladením vajíček a spářily se se samečky, kteří jsou rovněž přítomni v kultivační nádobě.
Standard laboratory equipment is required, specifically the following:
Pozorováním kultur v laboratoři se zjistilo, že samičky se páří okamžitě nebo krátce po dosažení dospělosti, jestliže jsou samečci přítomni (Ruf, Vaninnen, osobní sdělení).
preferably glass vessels with screw lids;
Období sedmi dní je zvoleno, aby se usnadnila integrace do laboratorních podmínek a byl poskytnut čas pro vyrovnání individuální vývojové variability mezi roztoči.
brushes for transferring mites
Kladení vajíček by mělo být zahájeno alespoň se stejným počtem samiček, jaký bude nakonec potřebný při zkoušce.
pH-meter and luxmeter;
Alespoň 1200 vajíček by měl být startovní bod pro synchronizovanou populaci (poměr pohlaví cca 0,5; mortalita cca 0,2).
temperature-controlled incubator or small room;
Aby se předešlo kanibalismu, je vhodnější nedržet v jedné nádobě více než 20–30 samiček kladoucích vajíčka.
equipment for extraction (see Appendix 5) (13)
Extrakční metody
overhead light panel with light control
Pro mikročlenovce je tepelná extrakce vhodnou metodou vyjmutí zkušebních jedinců z půdy/substrátu (viz obrázek níže).
collection jars for extracted mites.
Metoda je založena na aktivitě organismů, takže pouze pohybliví jedinci budou mít šanci být zaznamenáni.
For this test, an artificial soil is used.
Podstatou tepelné extrakce je vytvořit pro organismy ve vzorku postupně horší a horší podmínky, až pak opustí substrát a spadnou do fixační kapaliny (např. ethanolu).
The artificial soil consists of the following components (all values based on dry mass):
Klíčovými body jsou trvání extrakce a gradient zhoršování podmínek pro organismy, od dobrých přes středně dobré až po špatné.
5 % sphagnum peat, air-dried and finely ground (a particle size of 2 ± 1 mm is acceptable);
Extrakce pro ekotoxikologické zkoušky musí být co možná nejkratší, protože jakýkoli populační růst během doby extrakce by zkreslil výsledky.
approximately 74 % air-dried industrial sand (depending on the amount of CaCO3 needed), predominantly fine sand with more than 50 % of the particles between 50 and 200 microns.
Na druhé straně musí být podmínky teploty a vlhkosti ve vzorku vždy v rozmezí, které umožňuje pohyb roztočů.
The exact amount of sand depends on the amount of CaCO3 (see below), together they should add up to 75 %.
Zahřívání vzorku půdy vede k vysušování substrátu.
< 1,0 % calcium carbonate (CaCO3, pulverised, analytical grade) to obtain a pH of 6,0 ± 0,5;
Jestliže je vysychání příliš rychlé, někteří roztoči by sami mohli vyschnout dříve, než by se jim podařilo uniknout.
the amount of calcium carbonate to be added may depend principally on the quality/nature of the peat (see Note 1).
70 % ethanol.
The amount of CaCO3 required will depend on the components of the soil substrate and should be determined by measuring the pH of soil sub-samples immediately before the test (14).
Podrobnosti:
The peat content of the artificial soil deviates from other test methods on soil organisms, where in most cases 10 % peat is used (e.g. (15)).
Tkanina by měla mít velikost ok 1,0 až 1,5 mm.
However, according to EPPO (16) a typical agricultural soil has not more than 5 % organic matter, and the reduction in peat content thus reflects the decreased possibilities of a natural soil for sorption of the test chemical to organic carbon.
Tkanina se připevní gumičkou.
If required, e.g. for specific testing purposes, natural soils from unpolluted sites may also serve as test and/or culture substrate.
Lahvička se opatrně otočí dnem vzhůru a umístí do extrakčního zařízení.
However, if natural soil is used, it should be characterised at least by origin (collection site), pH, texture (particle size distribution) and organic matter content.
Tkanina brání, aby substrát vypadával do fixační kapaliny, ale umožňuje roztočům opustit vzorek.
If available, the type and name of the soil according to soil classification should be included, and the soil should be free from any contamination.
Když jsou všechny lahvičky vloženy, spustí se režim zahřívání.
In case the test chemical is a metal or organo-metal, the cation exchange capacity (CEC) of the natural soil should also be determined.
Extrakce se ukončí po 48 hodinách.
Special attention should be paid to meet the validity criteria as background information on natural soils typically is rare.
Fixační lahvičky se vyjmou a roztoči se spočítají pomocí mikroskopu s malým zvětšením.
For the determination of pH a mixture of soil and 1 M potassium chloride (KCl) or 0,01 M calcium chloride (CaCl2) solution in a 1:5 ratio is used (see (14) and Appendix 3).
Účinnost extrakce vybranou metodou se musí prověřovat jednou nebo dvakrát ročně za použití nádob obsahujících známý počet mláďat a dospělých roztočů držených v neexponovaném zkušebním substrátu.
If the soil is more acidic than the required range (see paragraph 10), it can be adjusted by addition of an appropriate amount of CaCO3.
Účinnost by měla být ≥ 90 % v průměru kombinovaném pro všechna vývojová stadia.
If the soil is too alkaline it can be adjusted by the addition of more of the mixture comprising the first three components described in paragraph 10, but excluding the CaCO3.
Extrakční zařízení Tullgrenova typu
Two to seven days before starting the test, the dry artificial soil is pre-moistened by adding enough distilled or de-ionised water to obtain approximately half of the final water content, that being 40 to 60 % of the maximum WHC.
Wine mesh barrier
The moisture content is adjusted to 40-60 % of the maximum WHC by the addition of the test chemical solution and/or by adding distilled or de-ionised water (see paragraphs 16-18).
Jak se připraví zkušební ampulka po skončení zkoušky před extrakcí.
An additional rough check of the soil moisture content should be obtained by gently squeezing the soil in the hand, if the moisture content is correct small drops of water should appear between the fingers.
Identifikace Hypoaspis (Geolaelaps ) aculeifer
Soil moisture content is determined at the beginning and at the end of the test by drying to constant weight at 105 °C in accordance with ISO 11465 (17) and soil pH in accordance with Appendix 3 or ISO 10390 (14).
Podtřída/řád/podřád:
These measurements should be carried out in additional samples without mites, both from the control soil and from each test concentration soil.
Čeleď:
The moisture content should be monitored throughout the test by weighing the vessels periodically (see paragraphs 20 and 24).
Rod/podrod/druh:
The species used in the test is Hypoaspis (Geolaelaps) aculeifer (Canestrini, 1883).
Autor a datum:
Adult female mites, obtained from a synchronised cohort are required to start the test.
Použitá literatura:
Mites should be introduced ca.
Plánovaně řízené charakteristiky:
7-14 days after becoming adult, 28 - 35 days after the start of the egg laying in the synchronisation (see paragraph 3 and Appendix 4).
Tectum se zaobleným pilovitým okrajem;
The source of the mites or the supplier and maintenance of the laboratory culture should be recorded.
hypostomální rýhy s více než 6 zoubky;
If a laboratory culture is kept, it is recommended that the identity of the species is confirmed at least once a year.
kaudální dorsální sety Z4 nepříliš dlouhé;
An identification sheet is included as Appendix 6.
dorsální sety štětinovité;
The test chemical is mixed into the soil.
normální štít genitálií, nepříliš zvětšený a nedosahující k análnímu štítu;
Organic solvents used to aid treatment of the soil with the test chemical should be selected on the basis of their low toxicity to mites and appropriate solvent control must be included in the test design (see paragraph 29).
zadní polovina dorsálního štítu bez nepárových set;
It is recommended to use an appropriate quantity of water to reach the required moisture content, i.e. 40 to 60 % of the maximum WHC (see paragraph 12).
nohy II a IV s několika silnými makrosetami;
When such vehicles are used, all test concentrations and the control should contain the same minimum amount of the vehicle.
dorsální seta Z5 asi dvakrát delší než J5;
The vehicle is sprayed on or mixed with a small amount, for example 10 g, of fine quartz sand.
pevný článek chelicer s 12–14 zoubky a pohyblivý článek s 2 zoubky;
The total sand content of the substrate should be corrected for this amount.
délka idiosomy 520–685 μm.
The vehicle is eliminated by evaporation under a fume hood for at least one hour.
Roztoči Hypoaspis miles se rovněž používají při biologické kontrole a mohou se splést s H. aculeifer.
This mixture of quartz sand and test chemical is added to the pre-moistened soil and thoroughly mixed by adding an appropriate amount of de-ionised water to obtain the moisture required.
Hlavní rozdíl je:
Note that some solvents may be toxic to mites.
Noha IV (samička)
It is therefore recommended to use an additional water control without vehicle if the toxicity of the solvent to mites is not known.
Noha II (samička) Hypoaspis aculeifer, Hřbetní štít s charakteristickými sety Originální kresba od F.
If it is adequately demonstrated that the solvent (in the concentrations to be applied) has no effects, the water control may be excluded.
Farajiho
Test chemical poorly soluble in water and organic solvents
Hypoaspis miles dle Hughes, 1976
For chemicals that are poorly soluble in water and organic solvents, the equivalent of 2,5 g of finely ground quartz sand per test vessel (for example 10 g of fine quartz sand for four replicates) is mixed with the quantity of test chemical to obtain the desired test concentration.
Hypoaspis aculeifer dle Hughes, 1976
The total sand content of the substrate should be corrected for this amount.
Základní informace o biologii roztočů Hypoaspis (Geolaelaps) aculeifer
This mixture of quartz sand and test chemical is added to the pre-moistened soil and thoroughly mixed after adding an appropriate amount of deionised water to obtain the required moisture content.
Roztoči Hypoaspis aculeifer náleží do čeledi Lealapidae, řádu Acari (roztoči), třídy Arachnida, kmenu Arthropoda.
Ten adult females in 20 g dry mass of artificial soil are recommended for each control and treatment vessel.
V případě nedostatku potravy se uchylují ke kanibalismu (27).
In specific cases (e.g. when ageing is considered to be a determining factor), the time between preparation of the final test substrate and the addition of the mites can be prolonged (for details of such ageing, see (18)).
Jasné dělení idiosomy na prosomu (hlavohruď) a opistosomu (zadeček) nemají.
After the addition of the mites to the soil, the mites are provided with food and the initial weight of each test vessel should be measured to be used as reference for monitoring soil moisture content throughout the test as described in paragraph 24.
Gnathosoma (hlavový štít) nese orgány pro příjem potravy, jako jsou palpy (makadla) a chelicery (klepítka).
The test vessels are then covered as described in paragraph 8 and placed in the test chamber.
Chelicery jsou tříčlánkové a opatřené zoubky různého tvaru.
Appropriate controls are prepared for each of the methods of test chemical application described in paragraphs 15 to 18.
Kromě požírání používají samečci své chelicery zejména k přenosu spermatofor na samičky.
Thus, where appropriate, organic solvents, quartz sand or other vehicles are applied to the controls in concentrations/amounts like in the treatments.
Dorsální štít kryje téměř celou idiosomu.
Where a solvent or other vehicle is used to add the test chemical, an additional control without the vehicle or test chemical should also be prepared and tested in case the toxicity of the solvent is not known (see paragraph 17).
Velkou část idiosomy samičky zabírají rozmnožovací orgány, které jsou zvláště výrazné krátce před kladením vajíček.
The test temperature should be 20 ± 2 °C.
Na ventrální straně lze nalézt dva štíty, hrudní a genitální štít.
Temperature should be recorded at least daily and adjusted, if necessary.
Všechny nohy jsou vybaveny chlupy a trny.
The test is carried out under controlled light-dark cycles (preferably 16 hours light and 8 hours dark) with illumination of 400 to 800 lux in the vicinity of the test vessels.
Chlupy se používají jako opora při zavrtávání do půdy nebo při pohybu na jejím povrchu.
For reasons of comparability, these conditions are the same as in other soil ecotoxicological tests (e.g. (15)).
První pár nohou se používá hlavně jako tykadla.
Gaseous exchange should be guaranteed by aerating the test vessels at least twice a week in case screw lids are used.
Druhý pár nohou se používá nejen k pohybu, ale rovněž k sevření kořisti.
If gauze covers are used, special attention should be paid to the maintenance of the soil moisture content (see paragraphs 8 and 24).
Trny čtvrtého páru nohou mohou sloužit k obraně a také k pohybu (28).
The water content of the soil substrate in the test vessels is maintained throughout the test by weighing and if needed re-watering the test vessels periodically (e.g. once per week).
Samečci jsou dlouzí 0,55–0,65 mm a váží 10–15 μg.
The moisture content during the test should not differ by more than 10 % from the start value.
Samičky jsou dlouhé 0,8–0,9 mm a váží 50–60 μg (8, 28) (obrázek 1).
Cheese mites (Tyrophagus putrescentiae (Schrank, 1781)) have been shown to be a suitable food source.
Obrázek 1
Small collembolans (e.g. juvenile Folsomia candida Willem, 1902 or Onychiurus fimatus (19), (20), enchytraeids (e.g. Enchytraeus crypticus Westheide & Graefe, 1992) or nematodes (e.g. Turbatrix silusiae de Man, 1913)) may be also suitable (21).
Samička, sameček, protonymfa a larva H. aculeifer.
It is recommended to check the food before using it in a test.
Při 23 °C dosahují roztoči sexuální zralosti po 16 dnech (samičky) a 18 dnech (samečci) (6).
The type and amount of food should secure an adequate number of juveniles in order to fulfil the validity criteria (paragraph 6).
Samičky přenášejí spermie pomocí solenostomu, odkud se pak přemístí do vaječníku.
For the prey selection, the mode of action of the test item should be considered (e.g. an acaricide may be toxic to the food mites too, see paragraph 26).
Spermie ve vaječníku dospějí a ukládají se.
Food should be provided ad libitum (i.e. each time a small amount (tip of a spatula)).
K oplodnění dochází pouze po dozrání spermií ve vaječníku.
For this purpose, also low suction exhaustor as proposed in the collembolan test or a fine paint brush can also be used.
Oplodněná nebo neoplodněná vajíčka samičky kladou ve shlucích nebo odděleně, především do puklin nebo děr.
Supplying food at the beginning of the test and two to three times a week will usually be sufficient.
Spářené samičky mohou plodit mláďata obou pohlaví, zatímco z vajíček nespářených samiček se vylíhnou pouze mláďata samečků.
When the test item appears to be toxic to the prey, an increased feeding rate and/or an alternative food source should be considered.
Během vývoje k dospělosti procházejí roztoči čtyřmi vývojovými fázemi (vajíčko–larva, larva–protonymfa, protonymfa–deutonymfa, deutonymfa–dospělý jedinec).
Prior knowledge of the toxicity of the test chemical should help in selecting appropriate test concentrations, e.g. from range-finding studies.
Vajíčka jsou mléčně bílá, sklovitá, eliptická a přibližně 0,37 mm dlouhá s pevným pláštěm.
When necessary, a range-finding test is conducted with five concentrations of the test chemical in the range of 0,1 – 1000 mg/kg dry soil, with at least one replicate for treatments and control.
Podle (8) jsou larvy 0,42 až 0,45 mm veliké.
The duration of the range finding test is 14 days, after which mortality of the adult mites and the number of juveniles is determined.
Mají pouze tři páry nohou.
The concentration range in the final test should preferably be chosen so that it includes concentrations at which juvenile numbers are affected while survival of the maternal generation is not.
V oblasti hlavy jsou vyvinuty palpy a chelicery.
This, however, may not be possible for chemicals that cause lethal and sub-lethal effects at almost similar concentrations.
Chelicery opatřené několika malými zoubky slouží k vyklubání z vajíčka.
Extrapolating much below the lowest concentration affecting the test organisms or above the highest tested concentration should be done only in exceptional cases, and a full explanation should be given in the report.
Po prvním svlékání, 1–2 dny po vylíhnutí, se vyvinou protonymfy.
Dose response tests
Ty jsou rovněž bílé, o velikosti 0,45–0,62 mm (8) a mají čtyři páry nohou.
Three test designs are proposed, based on the recommendations arising from another ring test (Enchytraeid reproduction test (22)).
Chelicery jsou kompletně vybaveny zoubky.
The general suitability of all these designs was confirmed by the outcome of H. aculeifer validation.
Počínaje tímto stadiem začínají roztoči shánět potravu.
For determination of the ECx (e.g. EC10, EC50), twelve concentrations should be tested.
Chelicery mohou rovněž sloužit k vytrhnutí větších částí z hrudek potravy (28).
If no effects are observed at the highest concentration in the range-finding test (i.e. 1000 mg/kg dw soil), the definitive reproduction test can be performed as a limit test, using a test concentration of 1000 mg/kg dw soil.
Po dalším svlékání se vyvinou deutonymfy.
A limit test will provide the opportunity to demonstrate that the NOEC or the EC10 for reproduction is greater than the limit concentration, whilst minimising the number of mites used in the test.
Ty jsou velké 0,60–0,80 mm (8) a mají žlutou až světle hnědou barvu.
Any observed differences between the behaviour and the morphology of the mites in the control and the treated vessels should be recorded.
Počínaje tímto stadiem vývoje se dělí na samičky a samečky.
On day 14 the surviving mites are extracted from the soil via heat/light extraction or by another appropriate method (see Appendix 5).
Po další ekdyzi, během níž jsou živočichové neaktivní a vytváří se jim hnědý štít (po cca 14 dnech), jsou roztoči dospělí (28, 29, 30).
The numbers of juveniles (i.e. larvae, protonymphs and deutonymphs) and adults are counted separately.
Při teplotě 25 °C žijí 48 až 100 dní (27).
Any adult mites not found at this time are to be recorded as dead, assuming that such mites have died and decomposed prior to the assessment.
Dodatek 8
Extraction efficiency must be validated once or twice a year in controls with known numbers of adults and juveniles.
Čas (dny)
Adult and juvenile counts are not adjusted for efficiency.
začátek zkoušky = den 0
Information on the statistical methods that may be used for analysing the test results is given in paragraphs 36 to 41.
Činnost/úkol
In addition, OECD Document 54 on the “Current Approaches in the Statistical Analysis of Ecotoxicity Data: a Guidance to Application” (31) should be consulted.
Den – 35
Test main endpoint is the reproductive output, here the number of juveniles produced per replicate test vessel (with 10 adult females introduced).
až – 28
The statistical analysis requires the arithmetic mean (X) and the variance (s2) for the reproductive output to be calculated per treatment and per control.
Samičky se přemístí ze zásobní kultury do čistých nádob pro zahájení synchronizace
X and s2 are used for ANOVA procedures such as the Student t test, Dunnett test, or Williams' test as well as for the computation of 95 % confidence intervals.
Po 2 dnech:
This main endpoint is equivalent with fecundity measured as the number of living juveniles produced during the test divided by the number of parental females introduced at the start of the test.
samičky se vyjmou
The number of surviving females in the untreated controls is a major validity criterion and has to be documented.
Dvakrát až třikrát za týden:
As in the range-finding test, all other harmful signs should be recorded in the final report as well.
dodá se dostatek krmiva
ECx-values including their associated lower and upper 95 % confidence limits for the parameter described in paragraph 34 are calculated using appropriate statistical methods (e.g. probit analysis, logistic or Weibull function, trimmed Spearman-Karber method, or simple interpolation).
Den – 5 (± 2)
To compute the EC50 or any other ECx, the per treatment means (X) should be subjected to regression analysis.
Den – 4 (± 2)
In general, adverse effects of the test item compared to the control are investigated using one-tailed (smaller) hypothesis testing at p ≤ 0,05.
Stanovení RVK umělé půdy
Examples are given in the following paragraphs.
Vysušení přes noc
Normal distribution of data can be tested e.g. with the Kolmogorov-Smirnov goodness-of-fit test, the Range-to-standard-deviation ratio test (R/s-test) or the Shapiro-Wilk test (two-sided, p ≤ 0,05).
Následující den:
Multiple comparisons (e.g. Dunnett's t-test) or step-down trend tests (e.g. Williams' test in case of a monotonous dose-response relationship) can be used to calculate whether there are significant differences (p ≤ 0,05) between the controls and the various test item concentrations (selection of the recommended test according to OECD Document 54 on the Current Approaches in the Statistical Analysis of Ecotoxicity Data: a Guidance to Application).
vzorky se zváží a vypočítá se RVK
Otherwise, non-parametric methods (e.g. Bonferroni-U-test according to Holm or Jonckheere-Terpstra trend test) should be used to determine the NOEC and the LOEC.
Den – 4 (± 2)
If a limit test (comparison of control and one treatment only) has been performed and the prerequisites of parametric test procedures (normality, homogeneity) are fulfilled, metric responses can be evaluated by the Student test (t-test).
Zvlhčí se umělá půda, aby se dosáhlo 20–30 % RVK
The test report should at least include the following information:
Zahájení zkoušky:
the identity of the test chemical, name, batch, lot and CAS-number, purity;
do umělé půdy se přidá zkoušená chemická látka
physico-chemical properties of the test chemical (e.g. log Kow, water solubility, vapour pressure, Henry's constant (H) and preferably information on the fate of the test chemical in soil).
Do každého opakování se vloží 10 samiček
identification and supplier of the test organisms, description of the culturing conditions;
Každé opakování se zváží
age range of test organisms.
Příprava abiotických kontrolních vzorků pro obsah vlhkosti a pH, 2 opakování pro každou expozici
detailed specification if natural soil is used (origin, history, particle size distribution, pH, organic matter content and if available the soil classification)
Přes noc se vysuší vlhké kontrolní vzorky
size of test vessels and dry mass of test soil per vessel;
zváží se vlhké kontrolní vzorky
pH and water content of the soil at the start and during the test (control and each treatment)
Každé opakování se zváží a nakonec se doplní odpařená voda
number of adult females and adult mortality (%) in each test vessel at the end of the test
Ukončení zkoušky, připraví se extrakce se všemi opakováními plus kontrolní vzorky účinnosti extrakce
a description of obvious symptoms or distinct changes in behaviour;
změří se pH sušených kontrolních vzorků
deviations from procedures described in this test method and any unusual occurrences during the test.
Den 16
Chapter C.8 of this Annex -.
Ukončení extrakce
Toxicity for Earthworms.
Den 16 +
Chapter C.32 of this Annex- Enchytraeid reproduction test.
Zaznamená se počet dospělých jedinců a mláďat v extrahovaném materiálu
Diet-dependent female choice for males with “good genes” in a soil predatory mite.
Výsledky se zpracují do vzorových tabulek
The following definitions are applicable to this test method (in this test all effect concentrations are expressed as a mass of test chemical per dry mass of the test soil):
Zkušební postup se uvede v listech závěrečné zprávy
Chemical is a substance or a mixture