natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Příprava zkušebních koncentrací
carrot (Daucus carota);
Zkoušená chemická látka rozpustná ve vodě
oats (Avena sativa);
Připraví se roztok zkoušené chemické látky v deionizované vodě v množství dostatečném pro všechna opakování s jednou zkušební koncentrací.
perennial ryegrass (Lolium perenne);
Doporučuje se použít vhodné množství vody, aby byl dosažen požadovaný obsah vlhkosti, tj. 40 až 60 % maximální RVKmax (viz odstavec 13).
corn (Zea mays);
Každý roztok zkoušené chemické látky se před zavedením do zkušební nádoby pečlivě smísí s jednou sadou navlhčené půdy.
onion (Allium cepa).
Zkoušená chemická látka nerozpustná ve vodě
C.32.
V případě chemických látek nerozpustných ve vodě, ale rozpustných v organických rozpouštědlech se zkoušená chemická látka může rozpustit v co nejmenším objemu vhodného nosiče (např. acetonu).
ENCHYTRAEID REPRODUCTION TEST
Je třeba používat pouze těkavá rozpouštědla.
This test method is equivalent to OECD test guideline (TG) 220 (2004).
Tato směs křemenného písku a zkoušené chemické látky se přidá do navlhčené půdy a důkladně se promíchá; předem se přidá příslušné množství deionizované vody, aby bylo dosaženo požadované vlhkosti.
It is designed to be used for assessing the effects of chemicals on the reproductive output of the enchytraeid worm, Enchytraeus albidus Henle 1873, in soil.
Konečná směs se vkládá do zkušebních nádob.
It is based principally on a method developed by the Umweltbundesamt, Germany (1) that has been ring-tested (2).
V případě chemických látek obtížně rozpustných ve vodě i v organických rozpouštědlech se ekvivalent 2,5 g jemně mletého křemenného písku na zkušební nádobu promíchá s příslušným množstvím zkoušené chemické látky, aby se získala požadovaná zkušební koncentrace.
Other methods for testing the toxicity of chemicals to Enchytraeidae and earthworms have also been considered (3)(4)(5)(6)(7)(8).
Tato směs křemenného písku a zkoušené chemické látky se přidá do navlhčené půdy a důkladně se promíchá; předem se přidá příslušné množství deionizované vody, aby se dosáhlo požadované vlhkosti.
Soil-dwelling annelids of the genus Enchytraeus are ecologically relevant species for ecotoxicological testing.
Konečná směs se rozdělí do zkušebních nádob.
Whilst enchytraeids are often found in soils containing earthworms it is also true that they are often abundant in many soils where earthworms are absent.
Tento postup se opakuje pro každou zkušební koncentraci a připraví se rovněž příslušná kontrola.
Enchytraeids can be used in laboratory tests as well as in semi-field and field studies.
Chemické látky by se obvykle neměly zkoušet při koncentracích vyšších než 1000 mg/kg suché hmotnosti půdy.
From a practical point of view, many Enchytraeus species are easy to handle and breed, and their generation time is significantly shorter than that of earthworms.
Zkoušení při vyšších koncentracích však může být požadováno podle cílů konkrétní zkoušky.
The duration for a reproduction test with enchytraeids is therefore only 4-6 weeks while for earthworms (Eisenia fetida) it is 8 weeks.
ÚČINNOST ZKOUŠEK
Basic information on the ecology and ecotoxicology of enchytraeids in the terrestrial environment can be found in (9)(10)(11)(12).
Zkušební skupiny a kontroly
Adult enchytraeid worms are exposed to a range of concentrations of the test chemical mixed into an artificial soil.
Pro každou zkušební koncentraci se do zkušební nádoby umístí příslušné množství zkušební půdy odpovídající 20 g hmotnosti sušiny (viz odstavce 19–21).
The test can be divided into two steps:
Připraví se rovněž kontrolní vzorky bez zkoušené chemické látky.
a range-finding test, in case no sufficient information is available, in which mortality is the main endpoint assessed after two weeks exposure and (b) a definitive reproduction test in which the total number of juveniles produced by parent animal and the survival of parent animals are assessed.
Do každé nádoby se přidá krmivo podle postupů popsaných v odstavci 29.
The duration of the definitive test is six weeks.
Do každé zkušební nádoby se náhodně rozmístí deset roupic.
After the first three weeks, the adult worms are removed and morphological changes are recorded.
Roupice se opatrně přemístí do každé ze zkušebních nádob a položí na povrch půdy použitím například klenotnických pinzet, háčků nebo smyček.
After an additional three weeks, the number of offspring, hatched from the cocoons produced by the adults, is counted.
Počet opakování pro zkušební koncentrace a pro kontrolní vzorky závisí na použitém uspořádání zkoušky (viz odstavec 34).
The reproductive output of the animals exposed to the test chemical is compared to that of the control(s) in order to determine (i) the no observed effect concentration (NOEC) and/or (ii) ECx (e.g. EC10, EC50) by using a regression model to estimate the concentration that would cause a x % reduction in reproductive output.
Zkušební nádoby se do zkušebního inkubátoru umístí náhodně a jejich poloha se každý týden náhodně mění.
The test concentrations should bracket the ECx (e.g. EC10, EC50) so that the ECx then comes from interpolation rather than extrapolation.
Jestliže se pro aplikaci zkoušené chemické látky použije nosič, je třeba kromě zkoušené série provést zkoušku s jednou kontrolní sérií obsahující křemenný písek postříknutý nebo promíchaný s rozpouštědlem.
The water solubility, the log Kow, the soil water partition coefficient (e.g. Chapter C.18 or C.19 of this Annex) and the vapour pressure of the test chemical should preferably be known.
Koncentrace rozpouštědla nebo dispergátoru má být stejná jako jejich koncentrace použitá ve zkušebních nádobách se zkoušenou chemickou látkou.
Additional information on the fate of the test chemical in soil, such as the rates of photolysis and hydrolysis is desirable.
V případě chemické látky vyžadující administraci ve shodě s postupy popsanými v odstavci 21 by se měla provést zkouška s kontrolní sérií obsahující další křemenný písek (2,5 g na nádobu).
This test method can be used for water soluble or insoluble chemicals.
Zkušební teplota je 20 ± 2 °C.
However, the mode of application of the test chemical will differ accordingly.
Aby se roupicím zabránilo uniknout z půdy, provádí se zkouška v řízených cyklech světlo-tma (výhodně 16 hodin světla a 8 hodin tmy) s intenzitou osvětlení 400 až 800 luxů v místě zkušebních nádob.
The test method is not applicable to volatile chemicals, i.e. chemicals for which the Henry's constant or the air/water partition coefficient is greater than one, or chemicals for which the vapour pressure exceeds 0,0133 Pa at 25 °C.
Při prověřování vlhkosti půdy se nádoby váží na začátku zkoušky a pak jednou týdně.
For the test to be valid, the following performance criteria should be met in the controls:
Ztráta hmotnosti se doplní přidáním příslušného množství deionizované vody.
adult mortality should not exceed 20 % at the end of the range-finding test and after the first three weeks of the reproduction test.
Je třeba podotknout, že ztrátu hmotnosti vody lze snížit udržováním vysoké vlhkosti vzduchu (> 80 %) ve zkušebním inkubátoru.
assuming that 10 adults per vessel were used in setting up the test, an average of at least 25 juveniles per vessel should have been produced at the end of the test.
Obsah vlhkosti a pH se měří na začátku a konci jak orientační zkoušky, tak hlavní zkoušky.
the coefficient of variation around the mean number of juveniles should not be higher than 50 % at the end of the reproduction test.
Měření se provádí v kontrolních a exponovaných (všechny koncentrace) vzorcích půdy připravených a udržovaných stejným způsobem jako zkušební kultury, ale neobsahujících roupice.
Where a test fails to meet the above validity criteria the test should be terminated unless a justification for proceeding with the test can be provided.
Krmivo se přidává pouze do těchto vzorků půdy na začátku zkoušky, aby byla usnadněna mikrobiální aktivita.
The justification should be included in the test report.
Množství přidaného krmiva musí být stejné, jako se přidává do zkušebních kultur.
A reference chemical should be tested either at regular intervals or possibly included in each test to verify that the response of the test organisms has not changed significantly over time.
Není nezbytné do těchto nádob během zkoušky přidávat další krmivo.
A suitable reference chemical is carbendazim, which has been shown to affect survival and reproduction of enchytraeids (13)(14), or other chemicals whose toxicity data are well known could be also used.
Krmení
A formulation of carbendazim known by the trade name of Derosal™ supplied by AgrEvo Company (Frankfurt, Germany) and containing 360 g/l (32,18 %) active ingredient was used in a ring-test (2).
Je možné použít krmivo schopné uchovat populaci roupicovitých.
The EC50 for reproduction determined in the ring test was in the range of 1,2 ± 0,8 mg active ingredient (a.i) /kg dry mass (2).
Jako vhodný krmný materiál se ukázaly ovesné vločky, přednostně před použitím ošetřené v autoklávu, aby se předešlo mikrobiální kontaminaci (zahřátí je rovněž vhodné).
If a positive toxic standard is included in the test series, one concentration is used and the number of replicates should be the same as that in the controls.
Krmivo se nejdříve podává promícháním 50 mg mletých vloček s půdou v každé nádobě před vložením roupic.
For carbendazim, the testing of 1,2 mg a.i./kg dry weight (tested as a liquid formulation) is recommended.
Pak se krmivo dodává týdně až do 21. dne.
DESCRIPTION OF THE TEST
Krmení se neprovádí 28. den neboť dospělí jedinci byli v této fázi vyjmuti a mladé roupice potřebují po tomto dni relativně málo dalšího krmiva.
Equipment
Krmení během zkoušky spočívá v 25 mg mletých ovesných vloček na nádobu umístěných opatrně na povrch půdy, aby se předešlo poranění živočichů.
The test vessels should be made of glass or other chemically inert material.
Aby se potlačil růst plísní, měly by se ovesné vločky zapracovat do půdy pokrytím malým množstvím půdy.
Glass jars (e.g. volume: 0,20 - 0,25 litre; diameter: ≈ 6 cm) are suitable.
Jestliže krmivo zůstane nesnědené, dávka se sníží.
The vessels should have transparent lids (e.g. glass or polyethylene) that are designed to reduce water evaporation whilst allowing gas exchange between the soil and the atmosphere.
Uspořádání orientační zkoušky
The lids should be transparent to allow light transmission.
Je-li to nezbytné, provede se orientační zkouška, například s pěti koncentracemi zkoušené chemické látky 0,1; 1,0; 10;
Normal laboratory equipment is required, specifically the following:
Jedno opakování pro každé ošetření zkoušenou látkou a kontrolu je dostačující.
drying cabinet;
Doba trvání orientační zkoušky je dva týdny.
stereomicroscope;
Na konci zkoušky se vyhodnotí mortalita roupic.
pH-meter and photometer;
Živočich je zaznamenán jako mrtvý, jestliže nijak nereaguje na mechanické stimuly na ventrálním konci.
suitable accurate balances;
Pro rozhodování o rozsahu koncentrací použitých v hlavní zkoušce mohou být užitečné i další informace o mortalitě.
adequate equipment for temperature control;
Proto je třeba zaznamenat změny v chování dospělých jedinců (např. neschopnost zavrtat se do půdy; ležení bez pohybu proti skleněné stěně zkušební nádoby) a v morfologii (např. přítomnost otevřených ran) spolu s přítomností jakýchkoli mláďat.
adequate equipment for humidity control (not essential if exposure vessels have lids);
Mláďata je možné identifikovat použitím barvící metody popsané v dodatku 6.
incubator or small room with air-conditioner;
Hodnotu LC50 je možné přibližně stanovit výpočtem geometrického průměru z dat mortality.
tweezers, hooks or loops;
Při určování rozsahu koncentrací pro hlavní zkoušku se předpokládá, že účinky na reprodukci jsou nižší než LC50 s faktorem až 10.
photo basin.
Jedná se však o empirický vztah a v každém specifickém případě může být tato hodnota jiná.
Preparation of the artificial soil
Další pozorování prováděná během orientační zkoušky, jako je výskyt mláďat, mohou pomoci v přesnějším určení rozsahu koncentrací zkoušené chemické látky, který má být použit v hlavní zkoušce.
An artificial soil is used in this test (5)(7) with the following composition (based on dry weights, dried to a constant weight at 105 °C):
Pro přesné stanovení LC50 se doporučuje provádět zkoušku s použitím alespoň čtyř opakování pro každou koncentraci zkoušené chemické látky a adekvátní počet koncentrací, aby bylo dosaženo alespoň čtyř statisticky významně rozdílných středních hodnot odezvy při těchto koncentracích.
10 % sphagnum peat, air-dried and finely ground (a particle size of 2 ± 1 mm is acceptable);
Podobný počet koncentrací a opakování se použije pro kontrolní vzorky, když se používají.
it is recommended to check that a soil prepared with a fresh batch of peat is suitable for culturing the worms before it is used in a test;
Uspořádání hlavní zkoušky toxicity pro reprodukci
20 % kaolin clay (kaolinite content preferably above 30 %);
Jsou navržena tři uspořádání na základě doporučení plynoucích z okružního testu (2)
approximately 0,3 to 1,0 % calcium carbonate (CaCO3, pulverised, analytical grade) to obtain a pH of 6,0 ± 0,5;
Pro stanovení NOEC je třeba zkoušet alespoň pět koncentrací v geometrické posloupnosti.
the amount of calcium carbonate to be added may depend principally on the quality/nature of the peat;
Doporučují se čtyři opakování pro každou zkoušenou koncentraci plus osm kontrolních vzorků.
approximately 70 % air-dried quartz sand (depending on the amount of CaCO3 needed), predominantly fine sand with more than 50 % of the particles between 50 and 200 microns.
Koncentrace by měly být odstupňovány podle faktoru, který nebude vyšší než 1,8.
It is advisable to demonstrate the suitability of an artificial soil for culturing the worms and for achieving the test validity criteria before using the soil in a definitive test.
Při stanovení ECx (např. EC10, EC50) je třeba zkoušet alespoň pět koncentrací a rozsah koncentrací by měl zahrnovat ECx, aby bylo možno hodnotu ECx interpolovat, a nebylo nutno extrapolovat.
It is especially recommended to make such a check to ensure that the performance of the test is not compromised if the organic carbon content of the artificial soil is reduced, e.g. by lowering the peat content to 4-5 % and increasing the sand content accordingly.
Doporučuje se použít alespoň čtyři opakování pro každou zkušební koncentraci a čtyři kontrolní opakování.
By such a reduction in organic carbon content, the possibilities of adsorption of test chemical to the soil (organic carbon) may be decreased and the availability of the test chemical to the worms may increase.
Koeficient rozložení koncentrací se může lišit, tj. být menší nebo rovný 1,8 v rozmezí očekávaného účinku a vyšší než 1,8 při vyšších a nižších koncentracích.
It has been demonstrated that Enchytraeus albidus can comply with the validity criteria on reproduction when tested in field soils with lower organic carbon content than mentioned above (e.g. 2,7 %) (15), and there is experience — though limited — that this can also be achieved in artificial soil with 5 % peat.
Kombinovaný přístup umožňuje stanovení jak NOEC, tak ECx.
When using natural soil in additional (e.g. higher tier) testing, the suitability of the soil and achieving the test validity criteria should also be demonstrated.
Použije se osm exponovaných koncentrací v geometrické řadě.
The dry constituents of the soil are mixed thoroughly (e.g. in a large-scale laboratory mixer).
Doporučují se čtyři opakování každé expozice a osm kontrolních skupin.
This should be done at least one week before starting the test.
Na zkušební nádobu se použije deset dospělých jedinců (viz odstavec 23).
The mixed soil should be stored for two days in order to equilibrate/stabilise the acidity.
Krmivo se přidá do zkušebních nádob na začátku zkoušky a pak jednou za týden (viz odstavec 29) až do 21. dne (včetně).
For the determination of pH a mixture of soil and 1 M potassium chloride (KCl) or 0,01 M calcium chloride (CaCl2) solution in a 1:5 ratio is used (see (16) and Appendix 3).
21. dne se vzorky půdy opatrně ručně prozkoumají;
If the soil is more acidic than the required range (see paragraph 11), it can be adjusted by addition of an appropriate amount of CaCO3.
pozorují se a spočítají žijící dospělí jedinci; zaznamenají se změny v chování (např. neschopnost zavrtat se do půdy; ležení bez pohybu u skleněné stěny zkušební nádoby) a v morfologii (např. otevřené rány).
If the soil is too alkaline it can be adjusted by the addition of more of the mixture, referred to in paragraph 11, but excluding the CaCO3.
Všichni dospělí jedinci se pak vyjmou ze zkušebních nádob a ze zkušební půdy.
The maximum water holding capacity (WHC) of the artificial soil is determined in accordance with procedures described in Appendix 2.
Zkušební půdy obsahující jakékoli zplozené zámotky se inkubují po další tři týdny za stejných zkušebních podmínek s tou výjimkou, že krmení se provádí pouze v 35. den (tj. 25 mg mletých ovesných vloček na nádobu).
One or two days before starting the test, the dry artificial soil is pre-moistened by adding enough de-ionised water to obtain approximately half of the final water content, that being 40 to 60 % of the maximum water holding capacity.
Po šesti týdnech se spočítají nově vylíhlí jedinci.
At the start of the test, the pre-moistened soil is divided into portions corresponding with the number of test concentrations (and reference chemical where appropriate) and controls used for the test.
Doporučuje se metoda využívající barvení bengálskou červení (viz dodatek 6), ačkoli se jako vhodné ukázaly i jiné techniky používající mokrou (ale ne horkou) extrakci a flotaci (viz dodatek 6) (4, 10, 11, 20).
The moisture content is adjusted to 40-60 % of the maximum WHC by the addition of the test chemical solution and/or by adding distilled or de-ionised water (see paragraphs 19-21).
Barvení bengálskou červení se doporučuje, protože mokrá extrakce z půdního substrátu může být brzděna turbiditou způsobenou suspendovanými jílovými částicemi.
The moisture content is determined at the beginning and at the end of the test (by drying to constant weight at 105 °C) and should be within the optimal range for the survival of the worms.
Jestliže při nejvyšší koncentraci v orientační zkoušce (tj. 1000 mg/kg) nejsou pozorovány žádné účinky, může se zkouška toxicity pro reprodukci provést jako limitní zkouška použitím koncentrace 1000 mg/kg, aby se prokázalo, že hodnota NOEC pro reprodukci je vyšší než tato hodnota.
A rough check of the soil moisture content can be obtained by gently squeezing the soil in the hand, if the moisture content is correct small drops of water should appear between the fingers.
Souhrn a harmonogram zkoušky
Selection and preparation of test animals
Kroky zkoušky lze shrnout takto:
The recommended test species is Enchytraeus albidus Henle 1837 (white potworm), a member of the family Enchytraeidae (order Oligochaeta, phylum Annelida).
Čas
E. albidus is one of the largest species of enchytraeids, with specimens of up to 35 mm in length being recorded (17)(18).
Den – 7 nebo dříve
E. albidus has a world-wide distribution and is found in marine, freshwater and terrestrial habitats, mainly in decaying organic matter (seaweed, compost) and rarely in meadows (9).
Den – 5
E. albidus is commercially available, as a fish food.
Zjistí se pH umělé půdy
It should be checked whether the culture is contaminated by other, usually smaller, species (1) (19).
Změřit maximální vodní kapacitu půdy
If contamination occurs, all worms should be washed with water in a petri dish.
Den – 5 až – 3
Large adult specimens of E. albidus should then be selected (using a stereomicroscope) to start a new culture and all other worms are discarded.
Vytřídí se roupice pro aklimatizaci
E. albidus can be bred easily in a wide range of organic materials (see Appendix 4).
Den – 3 až 0
The life-cycle of E. albidus is short since maturity is reached between 33 days (at 18 °C) and 74 days (at 12 °C) (1).
Roupice se aklimatizují alespoň 24 hodin
Only cultures that have been kept without problems in the laboratory for at least 5 weeks (one generation) will be used for the test.
Den – 1
Other species of the Enchytraeus genus are also suitable, e.g. E. buchholzi Vejdovsky 1879 or E. crypticus Westheide & Graefe 1992 (see Appendix 5).
Umělá půda se zvlhčí a rozdělí do várek
If other species of Enchytraeus are used, they must be clearly identified and the rationale for the selection of the species should be reported.
Den 0
The animals used in the tests are adult worms.
Připraví se zásobní roztoky
They should have eggs (white spots) in the clitellum region, and they should be approximately the same size (about 1 cm long).
Aplikuje se zkoušená chemická látka
Synchronisation of the breeding culture is not necessary.
Odváží se zkušební substrát do zkušebních nádob
If the enchytraeids are not bred in the same soil type and under the conditions (including feeding) used for the final test they must be acclimatised for at least 24 hours and up to three days.
Zamíchá se krmivo
A larger number of adults than that needed for performing the test should initially be acclimatised to allow scope for rejection of damaged or otherwise unsuitable specimens.
Přidají se roupice
At the end of the acclimatisation period, only worms containing eggs and exhibiting no behavioural abnormalities (e.g. trying to escape from the soil) are selected for the test.
Změří se pH a obsah vlhkosti půdy
The worms are carefully removed using jeweller's tweezers, hooks or loops and placed in a petri dish containing a small amount of fresh water.
Den 7
Reconstituted fresh water as proposed in Chapter C.20 of this Annex (Daphnia magna Reproduction Test) is preferred for this purpose since de-ionised, de-mineralised or tap water could be harmful to the worms.
Zjistí se obsah vlhkosti půdy
The worms are inspected under a stereomicroscope and any that do not contain eggs are discarded.
Krmivo
Care is taken to remove and discard any mites or springtails that might have infected the cultures.
Den 14
Healthy worms not used for the test are returned to the stock culture.
Stanoví se mortalita dospělých jedinců
Preparation of test concentrations
Odhadne se počet mláďat
Test chemical soluble in water
Den 21
A solution of the test chemical is prepared in deionised water in a quantity sufficient for all replicates of one test concentration.
Pozoruje se chování dospělých jedinců
It is recommended to use an appropriate quantity of water to reach the required moisture content, i.e. 40 to 60 % of the maximum WHC (see paragraph 13).
Vyjmou se dospělí jedinci
Each solution of test chemical is mixed thoroughly with one batch of pre-moistened soil before being introduced into the test vessel.
Den 28
Test chemical insoluble in water
Žádné krmení
For chemicals insoluble in water but soluble in organic solvents, the test chemical can be dissolved in the smallest possible volume of a suitable vehicle (e.g. acetone).
Den 35
Only volatile solvents should be used.
Den 42
The vehicle is sprayed on or mixed with a small amount, for example 2,5 g, of fine quartz sand.
Spočítají se mladí jedinci
The vehicle is eliminated by evaporation under a fume hood for at least one hour.
Zpracování výsledků
This mixture of quartz sand and test chemical is added to the pre-moistened soil and thoroughly mixed after adding an appropriate amount of de-ionised water to obtain the moisture required.
Ačkoli je přehled statistických metod uveden v dodatku 7, neexistují u této zkušební metody žádné závazné pokyny pro statistickou analýzu výsledků zkoušky.
The final mixture is introduced into the test vessels.
Při orientační zkoušce je hlavním cílovým ukazatelem mortalita.
For chemicals that are poorly soluble in water and organic solvents, the equivalent of 2,5 g of finely ground quartz sand per test vessel is mixed with the quantity of test chemical to obtain the desired test concentration.