natgillin/translations-raw huggingface dataset:
26 ZKOUŠKA INHIBICE RŮSTU DRUHŮ LEMNA
The percentage inhibition, IT, of total oxygen consumption at each concentration of test chemical, is given by Equation 7:
Je založena na existujících metodách (1, 2, 3, 4, 5, 6), ale zahrnuje úpravy těchto metod, aby odrážela nejnovější výsledky výzkumu a konzultace v řadě klíčových otázek.
The percentage inhibition of oxygen uptake should be plotted against logarithm of the test chemical concentration (inhibition curve, see Fig.3 of Appendix 4).
Navrhovaná metoda byla validována mezinárodní okružní zkouškou (7).
Inhibition curves are plotted for each aeration period of 3 h or additionally after 30 min.
Tato zkušební metoda popisuje zkoušení toxicity pomocí druhů Lemna gibba a Lemna minor, které byly oba rozsáhle studovány a jsou předmětem shora uvedených norem.
The concentration of test chemical which inhibits the oxygen uptake by 50 % (EC50) should be calculated or interpolated from the graph.
Taxonomie druhů Lemna spp. je obtížná, přičemž ji komplikuje existence široké škály fenotypů.
If suitable data are available, the 95 % confidence limits of the EC50, the slope of the curve, and suitable values to mark the beginning of inhibition (for example, EC10 or EC20) and the end of the inhibition range (for example, EC80 or EC90) may be calculated or interpolated.
Ačkoliv se u druhů Lemna může vyskytnout genetická variabilita v odezvě na toxické látky, není v současnosti dostatek údajů o zdroji této variability, aby mohl být pro použití v rámci této metody doporučen specifický klon.
It should be noted that in view of the variability often observed in the results, it may in many cases be sufficient to express the results additionally in order of magnitude, for example:
Je třeba uvést, že zkouška se neprovádí axenicky (jednodruhově), ale v jednotlivých stupních během zkušebního procesu se provádí opatření pro udržení kontaminace jinými organismy na minimální úrovni.
1 mg/l to 10 mg/l
Podrobně se popisuje zkoušení s obnovením (semistatické a průtokové) a bez obnovení (statické) zkušebního roztoku.
10 mg/l to 100 mg/l
V závislosti na cílech zkoušky a právních požadavcích se doporučuje zvážit použití semistatických a průtokových metod, například pro chemické látky, které se z roztoku rychle ztrácejí v důsledku odpaření, fotodegradace, srážení nebo biologické rozložitelnosti.
> 100mg/l
Další pokyny jsou uvedeny v (8).
Interpretation of results
Exponenciálně rostoucí kultury rostlin rodu Lemna se po dobu sedmi dnů nechají růst jako monokultury v různých koncentracích zkoušené látky.
ECx-values including their associated lower and upper 95 % confidence limits for the parameter are calculated using appropriate statistical methods (e.g. probit analysis, logistic or Weibull function, trimmed Spearman-Karber method or simple interpolation (11)).
Cílem zkoušky je kvantifikovat účinky související s chemickou látkou na vegetativní růst během tohoto období, a to na základě hodnocení zvolených proměnných měření.
An ECx is obtained by inserting a value corresponding to x % of the control mean into the equation found.
Pro kvantifikaci účinků souvisejících s chemickou látkou se růst ve zkušebních roztocích porovnává s růstem v kontrolních vzorcích a stanoví se koncentrace způsobující stanovenou x % inhibici růstu (např. 50 %) a vyjádří se jako ECx (např. EC50).
If a statistical analysis is intended to determine the NOEC, per-vessel statistics (individual vessels are considered as replicates) are necessary.
Cílovým ukazatelem zkoušky je inhibice růstu vyjádřená jako logaritmické zvýšení proměnné měření (průměrná specifická růstová rychlost) během expoziční doby.
Appropriate statistical methods should be used according to the OECD Document on Current Approaches in the Statistical Analysis of Ecotoxicity Data:
Další proměnnou odezvy použitou v této zkušební metodě je výtěžek, který může být nutný ke splnění specifických právních požadavků v některých zemích.
a Guidance to Application (11).
Je definován jako proměnná měření na konci expoziční doby minus proměnná měření na počátku expoziční doby.
In general, adverse effects of the test chemical compared to the control are investigated using one-tailed (smaller) hypothesis testing at p ≤ 0,05.
Měla by být k dispozici analytická metoda s odpovídající citlivostí pro kvantifikaci chemické látky ve zkušebním médiu.
The test report should include the following information:
Užitečnými informacemi o zkoušené chemické látce pro účely stanovení zkušebních podmínek mohou být strukturní vzorec, čistota, rozpustnost ve vodě, stálost ve vodě a na světle, pKa, Kow, tlak par a biologická rozložitelnost.
common name, chemical name, CAS number, purity;
Rozpustnost ve vodě a tlak par lze použít pro výpočet Henryho konstanty z Henryho zákona, která bude ukazovat, zda jsou pravděpodobné významné ztráty zkoušené chemické látky během doby zkoušky.
physico-chemical properties of the test chemical (e.g. log Kow, water solubility, vapour pressure, Henry's constant (H) and possible information on the fate of the test chemical e.g. adsorption to activated sludge);
Toto pomáhá zjistit, zda by se měla podniknout konkrétní opatření ke kontrole takových ztrát.
Test system
Jestliže nejsou informace o rozpustnosti a stálosti zkoušené látky jisté, doporučuje se, aby byly hodnoceny za podmínek zkoušky, tj. v růstovém médiu, při teplotě a režimu osvětlení, které mají být při zkoušce použity.
source, conditions of operation of the wastewater treatment plant and influent it receives, concentration, pre-treatment and maintenance of the activated sludge;
Pokud je zvláště důležitá kontrola pH zkušebního média, např. zkoušejí-li se kovy nebo chemické látky, které jsou hydrolyticky nestálé, doporučuje se přídavek pufru do růstového média (viz odstavec 21).
test temperature, pH during the test and duration of the exposure phase(s);
Další pokyny pro zkoušení chemických látek s fyzikálně-chemickými vlastnostmi, které činí jejich zkoušení obtížné, jsou uvedeny v (8).
Results
Aby byla zkouška platná, musí být doba, za kterou se zdvojnásobí počet lístků v kontrolním vzorku, kratší než 2,5 dne (60 h), což odpovídá přibližně sedmi-násobnému zvýšení v sedmi dnech a průměrné specifické růstové rychlosti 0,275 d– 1.
specific oxygen consumption of the controls (mg O2/(g sludge × h);
Při použití média a zkušebních podmínek popsaných v této zkušební metodě lze tohoto kritéria dosáhnout použitím režimu statické zkoušky (5).
all measured data, inhibition curve(s) and method for calculation of EC50;
Rovněž se předpokládá, že toto kritérium bude splnitelné za podmínek semistatické a průtokové zkoušky.
and, if possible, 95 per cent confidence limits, possibly EC20, EC80;
Výpočet doby zdvojnásobení je uveden v odstavci 49.
possibly NOEC and the used statistical methods, if the EC50 cannot be determined;
Jako prostředek kontroly zkušebního postupu lze zkoušet referenční látku (látky), například 3,5-dichlorfenol použitý v mezinárodní okružní zkoušce (7).
results for total, and if appropriate, heterotrophic and nitrification inhibition;
Doporučuje se zkoušet referenční chemickou látku nejméně dvakrát ročně nebo – pokud se zkoušení provádí s menší četností – souběžně se stanovováním toxicity zkoušené chemické látky.
abiotic oxygen uptake in the physico-chemical control (if used);
Veškeré vybavení přicházející do styku se zkušebními médii by mělo být vyrobeno ze skla nebo jiného chemicky inertního materiálu.
name of the reference chemical and results with this chemical;
Skleněné pomůcky použité pro kultivační a zkušební účely je zapotřebí vyčistit od chemických kontaminantů, které by mohly unikat do zkušebního média, a musí být sterilní.
all observations and deviations from the standard procedure, which could have influenced the result.
Zkušební nádoby by měly být dostatečně široké, aby mohly lístky jednotlivých kolonií v kontrolních nádobách růst, aniž by se na konci zkoušky překrývaly.
Current approaches in the statistical analysis of ecotoxicity data:
Není důležité, zda se kořeny dotýkají dna zkušebních nádob, ale doporučuje se, aby v každé zkušební nádobě byla minimální hloubka 20 mm a minimální objem 100 ml.
a guidance to application, Series on testing and assessment No. 54, ENV/JM/MONO(2006)18, OECD, Paris.
Volba zkušebních nádob není zásadně důležitá, pokud budou splněny tyto požadavky.
The following definitions are applicable to this test method.
Jako vhodné se ukázaly skleněné kádinky, krystalizační misky nebo skleněné Petriho misky vhodných rozměrů.
Chemical means a substance or a mixture.
Zkušební nádoby musí být zakryty, aby se minimalizovalo odpařování a náhodná kontaminace, přičemž však musí být umožněna nezbytná výměna vzduchu.
ECx (Effect concentration for x % effect) is the concentration that causes an x % of an effect on test organisms within a given exposure period when compared with a control.
Vhodné zkušební nádoby, a zejména kryty, musí zabránit stínění nebo změnám spektrálních charakteristik světla.
For example, an EC50 is a concentration estimated to cause an effect on a test end point in 50 % of an exposed population over a defined exposure period.
Kultury a zkušební nádoby by se měly přechovávat odděleně.
NOEC (no observed effect concentration) is the test chemical concentration at which no effect is observed.
Toho se nejlépe dosáhne pomocí samostatných komor, inkubátorů či místností pro růst za podmínek prostředí.
In this test, the concentration corresponding to the NOEC, has no statistically significant effect (p < 0,05) within a given exposure period when compared with the control.
Osvětlení a teplota musí být regulovatelné a musí se udržovat na stálé úrovni (viz odstavce 35, 36).
Fig.
Zkušební organismus
1:
Organismem použitým pro tuto zkoušku je Lemna gibba nebo Lemna minor.
Examples for measuring unit
Stručný popis druhů okřehku, které byly použity pro zkoušení toxicity, je uveden v dodatku 2.
Key:
Rostlinný materiál lze získat ze sbírky kultur, z jiné laboratoře nebo v terénu.
1 activated sludge
Jestliže se sběr provádí z terénu, rostliny by se měly kultivovat ve stejném médiu, jaké se používá ke zkoušení, minimálně po dobu osmi týdnů před použitím.
2 synthetic medium
Terénní místa použitá pro sběr výchozích kultur musí být prostá zřejmých zdrojů kontaminace.
3 test chemical
Pokud se získávají z jiné laboratoře nebo ze sbírky kultur, měly by se podobně uchovávat po minimální dobu tří týdnů.
4 air
V závěrečné zprávě je vždy třeba uvést zdroj rostlinného materiálu a druhu a klonu (je-li znám) použitého ke zkoušení.
5 mixing vessel
Měly by se používat monokultury, které jsou očividně prosté kontaminace jinými organismy, například řasami a prvoky.
6 magnetic stirrer
Zdravé rostliny L. minor obsahují kolonie skládající se ze dvou až pěti lístků, zatímco zdravé kolonie L. gibba mohou obsahovat až sedm lístků.
7 oxygen measuring cell
Kvalita a jednotnost rostlin použitých ve zkoušce bude mít významný vliv na její výsledek a proto by se jejich výběru měla věnovat velká pozornost.
8 oxygen electrode
Měly by se používat mladé, rychle rostoucí rostliny bez viditelných lézí či odbarvení (chlorózy).
9 oxygen measuring instrument
Kultury dobré kvality se vyznačují vysokým výskytem kolonií obsahujících nejméně dva lístky.
10 recorder
Velký počet jednotlivých lístků je ukazatelem environmentálního stresu, např. nedostatku živin, a rostlinný materiál z takovýchto kultur by se ke zkoušení neměl používat.
Fig.
Kultivace
2:
Pro snížení četnosti udržování kultury (např. pokud se na určité období neplánují žádné zkoušky s Lemna) lze kultury udržovat za sníženého osvětlení a teploty (4–10 °C).
Example of measuring unit, using a BOD bottle
Podrobnosti o kultivaci jsou uvedeny v dodatku 3.
1 Test vessel
Očividné známky kontaminace řasami nebo jinými organismy vyžadují povrchovou sterilizaci dílčího vzorku lístků Lemna a následný přenos do čerstvého média (viz dodatek 3).
2 oxygen electrode
V tomto případě je třeba zbývající kontaminovanou kulturu zlikvidovat.
3 oxygen measuring instrument
Nejméně sedm dnů před zkoušením se dostatečný počet kolonií asepticky převede do čerstvého sterilního média a kultivuje se 7 až 10 dnů za podmínek zkoušky.
Fig.
Zkušební médium
3:
Pro Lemna minor a Lemna gibba se doporučují odlišná média, jak je dále uvedeno.
Example of inhibition curves
Je třeba pečlivě zvážit zahrnutí pH pufru do zkušebního média (MOPS (kyselina 4-morfolinpropansulfonová, č. CAS: 1132-61-2) do média pro L. minor a NaHCO3 do média pro L. gibba), když existuje podezření, že by mohl reagovat se zkoušenou chemickou látkou a ovlivňovat vyjádření její toxicity.
X concentration of 3,5-dichlorophenol (mg/l)
Steinbergovo médium (9) je rovněž přijatelné, pokud jsou splněna kritéria platnosti.
Y inhibition (%)
Pro kultivaci a zkoušení s L. minor se doporučuje úprava švédského standardního (SIS) růstového média pro Lemna.
inhibition heterotrophic respiration using a nitrifying sludge
Složení tohoto média je uvedeno v dodatku 4.
inhibition nitrification using a nitrifying sludge
Ke kultivaci a zkoušení s L. gibba se doporučuje růstové médium 20X AAP popsané v dodatku 4.
Chapter C.26 is replaced by the following:
Steinbergovo médium, popsané v dodatku 4, je rovněž vhodné pro L. minor, ale může se používat i pro L. gibba, pokud jsou splněna kritéria platnosti.
26 LEMNA SPECIES GROWTH INHIBITION TEST
Zkušební roztoky
This test method is equivalent to OECD Test Guideline (TG) 221 (2006).
Zkušební roztoky se obvykle připravují ředěním zásobního roztoku.
It is designed to assess the toxicity of chemicals to freshwater aquatic plants of the genus Lemna (duckweed).
Zásobní roztoky zkoušené chemické látky se obyčejně připravují rozpuštěním látky v růstovém médiu.
It is based on existing methods (1)(2)(3)(4)(5)(6) but includes modifications of those methods to reflect recent research and consultation on a number of key issues.
Nejvyšší zkušební koncentrace zkoušené chemické látky by obvykle neměla překročit rozpustnost látky ve vodě za zkušebních podmínek.
This Test Method has been validated by an international ring-test (7).
Je však třeba poznamenat, že Lemna spp. plují na povrchu a mohou být vystaveny působení chemických látek, které se hromadí na rozhraní voda-vzduch (např. látky špatně rozpustné ve vodě nebo hydrofobní či povrchově aktivní látky).
This test method describes toxicity testing using Lemna gibba and Lemna minor, both of which have been extensively studied and are the subject of the standards referred to above.
Za takových podmínek dochází k expozici jiným látkám, než které se nacházejí v roztoku, a zkušební koncentrace mohou v závislosti na vlastnostech zkoušené chemické látky překračovat rozpustnost ve vodě.
The taxonomy of Lemna spp. is difficult, being complicated by the existence of a wide range of phenotypes.
Pro zkoušené chemické látky s nízkou rozpustností ve vodě může být nezbytné připravit koncentrovaný zásobní roztok nebo disperzi látky pomocí organického rozpouštědla nebo dispergátoru, aby se usnadnilo přidávání přesných množství zkoušené chemické látky do zkušebního média, a napomohlo se tak její dispergaci a rozpuštění.
Although genetic variability in the response to toxicants can occur with Lemna, there are currently insufficient data on this source of variability to recommend a specific clone for use with this test method.
Měla by být vynaložena maximální snaha takové látky nepoužívat.
It should be noted that the test is not conducted axenically but steps are taken at stages during the test procedure to keep contamination by other organisms to a minimum.
Používání pomocných rozpouštědel nebo dispergátorů by nemělo způsobovat žádnou fytotoxicitu.
Details of testing with renewal (semi-static and flow-through) and without renewal (static) of the test solution are described.
Příkladem běžně používaných rozpouštědel, která nezpůsobují fytotoxicitu při koncentracích až do 100 μl/l, jsou aceton a dimetylformamid.
Depending on the objectives of the test and the regulatory requirements, it is recommended to consider the application of semi-static and flow through methods, e.g. for chemicals that are rapidly lost from solution as a result of volatilisation, photodegradation, precipitation or biodegradation.
Jestliže se použije rozpouštědlo nebo dispergátor, jeho konečná koncentrace by se měla zapsat v závěrečné zprávě a udržovat na minimální hodnotě (≤ 100 μl · l– 1) a všechny exponované vzorky a kontroly by měly obsahovat stejnou koncentraci rozpouštědla nebo dispergátoru.
Further guidance is given in (8).
Další pokyny k používání dispergátorů jsou uvedeny v (8).
Exponentially growing plant cultures of the genus Lemna are allowed to grow as monocultures in different concentrations of the test chemical over a period of seven days.
Zkoušené a kontrolní skupiny
The objective of the test is to quantify chemical-related effects on vegetative growth over this period based on assessments of selected measurement variables.
Předběžná znalost toxicity zkoušené chemické látky pro Lemna, např. z orientační zkoušky, pomůže při volbě vhodných zkušebních koncentrací.
Frond number is the primary measurement variable.
Při hlavní zkoušce toxicity se zpravidla použije alespoň pět zkušebních koncentrací tvořících geometrickou posloupnost.
At least one other measurement variable (total frond area, dry weight or fresh weight) is also measured, since some chemicals may affect other measurement variables much more than frond numbers.
Faktor mezi zkušebními koncentracemi by nejlépe neměl překročit 3,2, ale lze použít i vyšší hodnotu, jestliže je křivka závislosti koncentrace a odezvy plochá.
To quantify chemical-related effects, growth in the test solutions is compared with that of the controls and the concentration bringing about a specified x % inhibition of growth (e.g. 50 %) is determined and expressed as the ECx (e.g. EC50)
Použití méně než pěti koncentrací by mělo být zdůvodněno.
The test endpoint is inhibition of growth, expressed as logarithmic increase in measurement variable (average specific growth rate) during the exposure period.
Pro každou zkušební koncentraci se použijí nejméně tři opakování.
An additional response variable used in this Test Method is yield, which may be needed to fulfil specific regulatory requirements in some countries.
Při volbě rozsahu zkušebních koncentrací (pro orientační a/nebo hlavní zkoušku toxicity) je zapotřebí vzít v úvahu následující:
It is defined as measurement variables at the end of the exposure period minus the measurement variables at the start of the exposure period.
Pro stanovení ECx by se zkušební koncentrace měly pohybovat pod a nad hodnotu ECx, aby se zajistila patřičná úroveň spolehlivosti.
An analytical method, with adequate sensitivity for quantification of the chemical in the test medium, should be available.
Například pokud se odhaduje EC50, nejvyšší zkušební koncentrace by měla být vyšší než hodnota EC50.
Information on the test chemical which may be useful in establishing the test conditions includes the structural formula, purity, water solubility, stability in water and light, pKa, Kow, vapour pressure and biodegradability.
Jestliže hodnota EC50 leží mimo rozmezí zkušebních koncentrací, související intervaly spolehlivosti budou velké, a proto správné hodnocení statistické vhodnosti modelu nemusí být možné.
Water solubility and vapour pressure can be used to calculate Henry's Law constant, which will indicate if significant losses of the test chemical during the test period are likely.
Jestliže je cílem odhadnout LOEC/NOEC, nejnižší zkušební koncentrace by měla být dostatečně nízká, aby růst nebyl výrazně nižší než růst v kontrolním vzorku.
This will help indicate whether particular steps to control such losses should be taken.
Dále by nejvyšší zkušební koncentrace měla být dostatečně vysoká, aby byl růst výrazně nižší než růst v kontrolním vzorku.
Where information on the solubility and stability of the test chemical is uncertain, it is recommended that these be assessed under the conditions of the test, i.e. growth medium, temperature, lighting regime to be used in the test.
Pokud tomu tak není, zkouška se bude muset opakovat v odlišném rozmezí koncentrací (s výjimkou případů, kdy je nejvyšší koncentrace na mezi rozpustnosti nebo představuje maximální požadovaný koncentrační limit, např. 100 mg/l).
When pH control of the test medium is particularly important, e.g. when testing metals or chemicals which are hydrolytically unstable, the addition of a buffer to the growth medium is recommended (see paragraph 21).
Každá zkouška by měla zahrnovat kontrolní vzorky obsahující stejné živné médium, stejný počet lístků a kolonií, stejné podmínky okolního prostředí a postupy, jaké byly zvoleny pro zkušební nádoby, avšak neobsahují zkoušenou chemickou látku.
Further guidance for testing chemicals with physical-chemical properties that make them difficult to test is provided in (8).
Jestliže se použije pomocné rozpouštědlo nebo dispergátor, měla by být zahrnuta i další kontrolní expozice s rozpouštědlem/dispergátorem přítomným ve stejné koncentraci jako v nádobách se zkoušenou chemickou látkou.
For the test to be valid, the doubling time of frond number in the control must be less than 2,5 days (60 h), corresponding to approximately a seven-fold increase in seven days and an average specific growth rate of 0,275 d– 1.
Počet kontrolních nádob použitých k opakování (a případných nádob s rozpouštědly) by měl být nejméně roven počtu nádob použitých pro každou zkušební koncentraci; v ideálním případě by měl být dvojnásobný.
Using the media and test conditions described in this Test Method, this criterion can be attained using a static test regime (5).
Jestliže se stanovení NOEC nepožaduje, upořádání zkoušky lze pozměnit tak, že se zvýší počet koncentrací a sníží počet replik pro příslušnou koncentraci.
It is also anticipated that this criterion will be achievable under semi-static and flow-through test conditions.
Počet kontrolních replik však musí být nejméně tři.
Calculation of the doubling time is shown in paragraph 49.
Expozice
Reference chemical(s), such as 3,5-dichlorophenol used in the international ring test (7), may be tested as a means of checking the test procedure.
Kolonie tvořené 2 až 4 viditelnými lístky se převedou z očkovací kultury a za aseptických podmínek se náhodně přidají do zkušebních nádob.
It is advisable to test a reference chemical at least twice a year or, where testing is carried out at a lower frequency, in parallel to the determination of the toxicity of a test chemical.
Každá nádoba by měla celkem obsahovat 9 až 12 lístků.
All equipment in contact with the test media should be made of glass or other chemically inert material.
Počet lístků a kolonií by měl být v každé zkušební nádobě stejný.
Glassware used for culturing and testing purposes should be cleaned of chemical contaminants that might leach into the test medium and should be sterile.
Zkušenosti získané s touto metodou a údaje z okružní zkoušky ukazují, že použití tří replik na expozici, kdy pro každé opakování se zpočátku použije od 9 do 12 lístků, je dostatečné ke zjištění rozdílů v inhibici růstu přibližně o 4 až 7 % vypočítaných pomocí růstové rychlosti (10 až 15 % vypočítaných pomocí výtěžku) mezi jednotlivými expozicemi (7).
The test vessels should be wide enough for the fronds of different colonies in the control vessels to grow without overlapping at the end of the test.
K minimalizaci vlivu prostorových rozdílů v intenzitě světla nebo v teplotě je zapotřebí náhodně uspořádat zkušební nádoby v inkubátoru.
It does not matter if the roots touch the bottoms of the test vessels, but a minimum depth of 20 mm and minimum volume of 100 ml in each test vessel is advised.
Při prováděném pozorování se rovněž vyžaduje uspořádání do bloků nebo náhodné přemísťování nádob (nebo častější přemísťování).
The choice of test vessels is not critical as long as these requirements are met.
Jestliže předběžná zkouška stálosti ukazuje, že během doby trvání zkoušky (7 dnů) nelze udržet koncentraci zkoušené chemické látky (tj. měřená koncentrace poklesne pod 80 % naměřené počáteční koncentrace), doporučuje se režim semistatické zkoušky.
Glass beakers, crystallising dishes or glass petri dishes of appropriate dimensions have all proved suitable.