natgillin/translations-raw huggingface dataset:
8 l (minimálně)
For the purposes of this test, the highest test concentration should be set by the maximum tolerated concentration (MTC) determined from a range finder or from other toxicity data, or 10 mg/l, or the maximum solubility in water, whichever is lowest.
1,5 l (minimálně)
The MTC is defined as the highest test concentration of the chemical which results in less than 10 % mortality.
4 l (minimálně)
Using this approach assumes that there are existing empirical acute toxicity data or other toxicity data from which the MTC can be estimated.
Výměny objemu zkušebního roztoku
Estimating the MTC can be inexact and typically requires some professional judgment.
Nejméně 6krát denně
Three test concentrations, spaced by a constant factor not exceeding 10, and a dilution-water control (and solvent control if necessary) are required.
Nejméně 5krát denně
A range of spacing factors between 3,2 and 10 is recommended.
Stáří zkušebních organismů
Selection and weighing of test fish
Viz odstavec 21
It is important to minimise variation in weight of the fish at the beginning of the assay.
Přibližná živá hmotnost dospělých ryb (v g)
Suitable size ranges for the different species recommended for use in this test are given in Appendix 2.
Samičky: 1,5 ± 20 %
For the whole batch of fish used in the test, the range in individual weights for male and female fish at the start of the test should be kept, if possible, within ± 20 % of the arithmetic mean weight of the same sex.
Samečci: 2,5 ± 20 %
It is recommended to weigh a subsample of the fish stock before the test in order to estimate the mean weight.
Samičky: 0,35 ± 20 %
The test duration is 21 days, following a pre-exposure period.
Samečci: 0,35 ± 20 %
The recommended pre-exposure period is one to two weeks.
Samičky: 0,65 ± 20 %
Fish should be fed ad libitum with an appropriate food (Appendix 2) at a sufficient rate to maintain body condition.
Samečci: 0,4 ± 20 %
Care should be taken to avoid microbial growth and water turbidity.
Počet ryb v každé zkušební nádrži
As a general guidance, the daily ration may be divided into two or three equal portions for multiple feeds per day, separated by at least three hours between each feed.
6 (2 samečci a 4 samičky)
A single larger ration is acceptable particularly for weekends.
6 (3 samečci a 3 samičky)
Food should be withheld from the fish for 12 hours prior to sampling/necropsy.
10 (5 samečků a 5 samiček)
Fish food should be evaluated for the presence of contaminants such as organochlorine pesticides, polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs), polychlorinated biphenyls (PCBs).
Počet expozic
Food with an elevated level of phytoestrogens that would compromise the response of the assay to known oestrogen agonist (e.g. 17β- estradiol) should be avoided.
= 3 (plus příslušné kontrolní skupiny)
Uneaten food and faecal material should be removed from the test vessels at least twice weekly, e.g. by carefully cleaning the bottom of each tank using a siphon.
Počet nádrží pro každou expozici
Prior to initiation of the exposure period, proper function of the chemical delivery system should be ensured.
minimálně 4
All analytical methods needed should be established, including sufficient knowledge on the chemical stability in the test system.
minimálně 2
During the test, the concentrations of the test chemical are determined at regular intervals, as follows: the flow rates of diluent and toxicant stock solution should be checked preferably daily but as a minimum twice per week, and should not vary by more than 10 % throughout the test.
Počet ryb pro každou zkušební koncentraci
It is recommended that the actual test chemical concentrations be measured in all vessels at the start of the test and at weekly intervals thereafter.
16 dospělých samiček a 8 samečků (4 samičky a 2 samečci v každé duplikátní nádrži)
It is recommended that results be based on measured concentrations.
12 dospělých samiček a 12 samečků (3 samičky a 3 samečci v každé duplikátní nádrži)
However, if concentration of the test chemical in solution has been satisfactorily maintained within ±20 % of the nominal concentration throughout the test, then the results can either be based on nominal or measured values.
10 dospělých samiček a 10 samečků (5 samiček a 5 samečků v každé duplikátní nádrži)
Samples may need to be filtered (e.g. using a 0,45 μm pore size) or centrifuged.
Krmný režim
If needed, then centrifugation is the recommended procedure.
Živé nebo zmrazené dospělé nebo larvy (nauplia) žábronožky solné dvakrát nebo třikrát denně (ad libitum), komerčně dostupná potrava nebo kombinace výše uvedeného
However, if the test material does not adsorb to filters, filtration may also be acceptable.
Larvy (nauplia) žábronožky solné dvakrát nebo třikrát denně (ad libitum), komerčně dostupná potrava nebo kombinace výše uvedeného
During the test, dissolved oxygen, temperature, and pH should be measured in all test vessels at least once per week.
Larvy (nauplia) žábronožky solné dvakrát nebo třikrát denně (ad libitum), komerčně dostupná potrava nebo kombinace výše uvedeného
Total hardness and alkalinity should be measured in the controls and one vessel at the highest concentration at least once per week.
Žádné, dokud koncentrace rozpuštěného kyslíku neklesne pod 60 % nasycení vzduchem
A number of general (e.g. survival) and biological responses (e.g. VTG levels) are assessed over the course of the assay or at termination of the assay.
Ředicí voda
The daily quantitative monitoring of fecundity is required.
Čistá povrchová, studniční nebo rekonstituovaná voda nebo odchlorovaná vodovodní voda
Measurement and evaluation of these endpoints and their utility are described below.
doporučeno 7 až 14 dnů
Fish should be examined daily during the test period and any mortality should be recorded and the dead fish removed as soon as possible.
Biologické ukazatele
Sex of fish that die during the test should be determined by macroscopic evaluation of the gonads.
přežití
Behaviour and appearance
chování
Any abnormal behaviour (relative to controls) should be noted; this might include signs of general toxicity including hyperventilation, uncoordinated swimming, loss of equilibrium, and atypical quiescence or feeding.
plodnost
Additionally external abnormalities (such as haemorrhage, discoloration) should be noted.
druhotné pohlavní znaky
Such signs of toxicity should be considered carefully during data interpretation since they may indicate concentrations at which biomarkers of endocrine activity are not reliable.
volitelně histopatologie gonád
Such behavioural observations may also provide useful qualitative information to inform potential future fish testing requirements.
Přijatelnost zkoušky
For example, territorial aggressiveness in normal males or masculinised females has been observed in fathead minnows under androgenic exposure; in zebrafish, the characteristic mating and spawning behaviour after the dawn onset of light is reduced or hindered by oestrogenic or anti-androgenic exposure.
Obsah rozpuštěného kyslíku ≥ 60 % nasycení; střední teplota 25 ± 2 °C; 90 % přežití ryb v kontrolních skupinách; naměřené zkušební koncentrace v rozmezí 20 % středních naměřených hodnot pro každou úroveň expozice.
Because some aspects of appearance (primarily colour) can change quickly with handling, it is important that qualitative observations be made prior to removal of animals from the test system.
Obsah rozpuštěného kyslíku ≥ 60 % nasycení; střední teplota 26 ± 2 °C; 90 % přežití ryb v kontrolních skupinách; naměřené zkušební koncentrace v rozmezí 20 % středních naměřených hodnot pro každou úroveň expozice.
Experience to date with fathead minnows suggests that some endocrine active chemicals may initially induce changes in the following external characteristics: body colour (light or dark), coloration patterns (presence of vertical bands), and body shape (head and pectoral region).
NĚKTERÉ CHEMICKÉ CHARAKTERISTIKY DOPORUČENÉ ŘEDICÍ VODY
Therefore observations of physical appearance of the fish should be made over the course of the test, and at conclusion of the study
SLOŽKA
Fecundity
KONCENTRACE
Daily quantitative observations of spawning should be recorded on a replicate basis.
< 20 mg/l
Egg production should be recorded as the number of eggs/surviving female/day on a replicate basis.
< 2 mg/l
Eggs will be removed daily from the test chambers.
Neionizovaný amoniak
Spawning substrates should be placed in the test chamber for the fathead minnow and zebrafish to enable fish to spawn in normal conditions.
< 1 μg/l
Appendix 4 gives further details of recommended spawning substrates for zebrafish (Appendix 4A) and fathead minnow (Appendix 4B).
< 10 μg/l
It is not considered necessary to provide spawning substrate for medaka.
Celkový obsah organofosforových pesticidů
Humane killing of fish
< 50 ng/l
At day 21, i.e. at termination of the exposure, the fish should be euthanised with appropriate amounts of Tricaine (Tricaine methane sulfonate, Metacain, MS-222 (CAS.886-86-2), 100-500 mg/l buffered with 300 mg/l NaHCO3 (sodium bicarbonate, CAS.144-55-8) to reduce mucous membrane irritation; blood or tissue is then sampled for VTG determination, as explained in the vitellogenin section.
celoskleněná miska na nástroje, např. o rozměrech (d × š × v) 22 × 15 × 5,5 cm, pokrytá snímatelnou drátěnou mřížkou z nerezové oceli (šířka otvorů 2 mm).
Such gross morphological observations may provide useful qualitative and quantitative information to inform potential future fish testing requirements.
Mřížka by měla pokrývat misku na nástroje v místech pod úrovní okraje.
The number and size of nuptial tubercles in fathead minnow and papillary processes in medaka can be quantified directly or more practically in preserved specimens.
Na mřížku se připevní třecí podklad.
Recommended procedures for the evaluation of secondary sex characteristics in fathead minnow and medaka are available from Appendix 5A and Appendix 5B, respectively.
Měl by vytvořit strukturu, do které budou ryby vplouvat.
Vitellogenin (VTG)
Vhodné jsou například umělé akvarijní rostliny vyrobené ze zeleného plastového materiálu (poznámka: je třeba vzít v potaz možnou adsorpci zkoušené chemické látky na plastový materiál).
Blood is collected from the caudal artery/vein with a heparinised microhematocrit capillary tubule, or alternatively by cardiac puncture with a syringe.
Při použití skleněných materiálů je třeba zajistit, aby se ryby při prudkých pohybech neporanily a netísnily.
Plasma is separated from the blood via centrifugation, and stored with protease inhibitors at – 80 °C, until analysed for VTG.
Jikry vytřené do roštu propadávají mřížkou a 45–60 minut od začátku osvětlení je lze odebírat.
The measurement of VTG should be based upon a validated homologous ELISA method, using homologous VTG standard and homologous antibodies.
Průsvitné jikry nejsou přilnavé a lze je snadno spočítat pomocí bočního světla.
It is recommended to use a method capable to detect VTG levels as low as few ng/ml plasma (or ng/mg tissue), which is the background level in unexposed male fish.
Při použití pěti samiček v každé nádrži se počet jiker do 20 za den považuje za nízký, do 100 za den za středně vysoký a více než 100 jiker za den za vysoký.
Quality control of VTG analysis will be accomplished through the use of standards, blanks and at least duplicate analyses.
Třecí rošt se odstraní, odeberou se jikry a třecí rošt se poté opět vsadí do zkušební nádrže, a to co nejpozději večer nebo velmi časně zrána.
For each ELISA method, a test for matrix effect (effect of sample dilution) should be run to determine the minimum sample dilution factor.
Doba do opětovného vsazení by neměla překročit jednu hodinu, protože jinak může pod vlivem třecího podkladu dojít k individuálnímu páření a tření v neobvyklé době.
Each ELISA plate used for VTG assays should include the following quality control samples: at least 6 calibration standards covering the range of expected VTG concentrations, and at least one non-specific binding assay blank (analysed in duplicate).
Pokud situace vyžaduje pozdější vsazení třecího roštu, mělo by se tak stát alespoň 9 hodin po začátku osvětlení.
Absorbance of these blanks should be less than 5 % of the maximum calibration standard absorbance.
V tuto pozdní denní dobu již tření vyvoláno nebývá.
At least two aliquots (well-duplicates) of each sample dilution will be analysed.
Dodatek 4B
Well-duplicates that differ by more than 20 % should be re-analysed.
TŘECÍ PODKLAD PRO JELEČKA VELKOHLAVÉHO
The correlation coefficient (R2) for calibration curves should be greater than 0,99.
Do jedné zkušební komory se umístí dvě nebo tři kombinované třecí roury a plastové/keramické/skleněné rošty nebo rošty z nerezové oceli (např. šedý žlábek polokruhového tvaru o délce 80 mm uložený na podložce se zvednutými okraji o délce 130 mm) (viz obrázek).
However, a high correlation is not sufficient to guarantee adequate prediction of concentration in all ranges.
Bylo prokázáno, že pro třecí podklad jsou vhodné starší roury z PVC nebo keramiky (Thorpe et al, 2007).
In addition to having a sufficiently high correlation for the calibration curve, the concentration of each standard, as calculated from the calibration curve, should all fall between 70 and 120 % of its nominal concentration.
Roury se doporučuje obrousit, aby se zlepšila přilnavost.
If the nominal concentrations trend away from the calibration regression line (e.g. at lower concentrations), it may be necessary to split the calibration curve into low and high ranges or to use a nonlinear model to adequately fit the absorbance data.
Rošt by rovněž měl být odstíněn, aby se rybám zabránilo v přístupu k vypadlým jikrám, pokud u použitého třecího podkladu nebylo prokázáno, že na něm jikry dobře ulpívají.
If the curve is split, both line segments should have R2 > 0,99.
Účelem základny je pojmout veškeré jikry, které neulpěly na povrchu roury a které by tak spadly na dno nádrže (nebo jikry, které jsou kladeny přímo na plochou plastovou základnu).
The limit of detection (LOD) is defined as the concentration of the lowest analytical standard, and limit of quantitation (LOQ) is defined as the concentration of the lowest analytical standard multiplied by the lowest dilution factor.
Všechny třecí podklady by se před použitím měly nejméně 12 hodin proplachovat v ředicí vodě.
On each day that VTG assays are performed, a fortification sample made using an inter-assay reference standard will be analysed (Appendix 7).
Dodatek 5A
The ratio of the expected concentration to the measured concentration will be reported along with the results from each set of assays performed on that day.
POSUZOVÁNÍ DRUHOTNÝCH POHLAVNÍCH ZNAKŮ U JELEČKA VELKOHLAVÉHO ZA ÚČELEM ZJIŠTĚNÍ URČITÝCH CHEMICKÝCH LÁTEK S ENDOKRINNÍM PŮSOBENÍM
Evaluation of gonadal histopathology
Mezi potenciálně důležité charakteristiky tělesného vzhledu dospělých jelečků velkohlavých při zkouškách endokrinních disruptorů patří zbarvení těla (tj. světlé/tmavé), forma zbarvení (tj. přítomnost či nepřítomnost svislých pruhů), tvar těla (tj. tvar hlavy a hrudní oblasti, rozšíření břicha) a druhotné pohlavní znaky specifické pro tento druh (tj. počet a velikost pářicích hrbolků, velikost dorzálního polštářku a kladélka).
In this respect, gonads are fixed either whole body or dissected.
Pářicí hrbolky se nacházejí na hlavě (dorzální polštářek) reprodukčně aktivních jelečků velkohlavých a obvykle jsou uspořádány symetricky po obou stranách (Jensen et al., 2001).
When histopathology is required, specific endocrine-related responses on the gonads will be looked for in the assessment of the endocrine activity of the test chemical.
U samiček v kontrolních skupinách a u nedospělých samečků a samiček nebyl vývoj hrbolků zaznamenán (Jensen et al., 2001).
These diagnostic responses essentially include the presence of testicular oocytes, Leydig cell hyperplasia, decreased yolk formation, increased spermatogonia and perifollicular hyperplasia.
Samečci mohou mít až osm jednotlivých hrbolků kolem očí a mezi nosními dírkami.
Other gonadal lesions like oocyte atresia, testicular degeneration, and stage changes, may have various causes.
Nejvíce hrbolků největší velikosti se nachází ve dvou souběžných řadách bezprostředně pod nosními dírkami a nad tlamou.
The Guidance document on fish gonadal histopathology specifies procedures that will be used in the dissection, fixation, sectioning and histopathological evaluation of the gonads (22).
Skutečný počet hrbolků je zřídka větší než 30 (v rozmezí 18–28; Jensen et al., 2001).
Where a solvent control is used, an appropriate statistical test should be performed between the dilution water and solvent controls for each endpoint.
Nejvíce hrbolků má podobu jednotlivých, zaoblených struktur, jejichž výška se přibližně rovná jejich poloměru.
Guidance on how to handle dilution water and solvent control data in the subsequent statistical analysis can be found in OECD, 2006c (28).
Většina reprodukčně aktivních samečků má rovněž alespoň některé hrbolky zvětšené a vystouplé do té míry, že je nelze odlišit jako jednotlivé struktury.
All biological response data should be analysed and reported separately by sex.
Některé druhy chemických látek narušujících činnost endokrinních žláz mohou způsobit abnormální výskyt určitých druhotných pohlavních znaků u opačného pohlaví.
If the required assumptions for parametric methods are not met — non-normal distribution (e.g. Shapiro-Wilk's test) or heterogeneous variance (Bartlett's test or Levene's test), consideration should be given to transforming the data to homogenise variances prior to performing the ANOVA, or to carrying out a weighted ANOVA.
Například agonisté androgenního receptoru, jako je 17-alfa-methyltestosteron nebo 17-beta-trenbolon, mohou způsobit, že se pářicí hrbolky vyvinou u samiček jelečka velkohlavého (Smith, 1974; Ankley et al., 2001; 2003), a agonisté estrogenního receptoru mohou způsobit snížení počtu nebo velikosti pářicích hrbolků u samečků (Miles-Richardson et al., 1999; Harries et al., 2000).
Dunnett's test (parametric) on multiple pair-wise comparisons or a Mann-Whitney with Bonferroni adjustment (non-parametric) may be used for non-monotonous dose-response.
Následuje popis, jak charakterizovat pářicí hrbolky u jelečka velkohlavého, založený na postupech používaných v laboratoři americké Agentury na ochranu životního prostředí (EPA) v Duluthu ve státě Minnesota.
Other statistical tests may be used (e.g. Jonckheere-Terpstra test or Williams test) if the dose-response is approximately monotone.
Specifické produkty a/nebo vybavení lze nahradit srovnatelnými materiály, které jsou k dispozici.
A statistical flowchart is provided in Appendix 8 to help in the decision on the most appropriate statistical test to be used.
Ryby se prohlížejí z dorzálního směru a anteriorní stranou dopředu (hlavou k pozorovateli).
Reporting of test results
Ryba se vloží do malé Petriho misky (např. o průměru 100 mm), anteriorní stranou dopředu a ventrální stranou dolů.
Study data should include:
Hledáček se zaostří tak, aby bylo možné identifikovat hrbolky.
Testing facility:
Ryba se jemně a pomalu obrací z boku na bok, aby bylo možné identifikovat oblasti s hrbolky.
Responsible personnel and their study responsibilities
Hrbolky se spočítají a zaznamená se jejich hodnocení.
Each laboratory should have demonstrated proficiency using a range of representative chemicals
Pozorování se opakuje na ventrálním povrchu hlavy tak, že se ryba položí na Petriho misku dorzálně, anteriorní stranou dopředu.
Characterisation of test chemical
Pozorování by u každé ryby měla být dokončena do 2 min.
Physical nature and relevant physicochemical properties
Počítání hrbolků a jejich klasifikace
Method and frequency of preparation of test concentrations
Bylo zjištěno šest specifických oblastí pro posuzování přítomnosti a vývoje hrbolků u dospělých jelečků velkohlavých.
Information on stability and biodegradability
Ke zmapování umístění a množství přítomných hrbolků byla vytvořena šablona (viz konec tohoto dodatku).
Characterisation of solvent (nature, concentration used)
U každého organismu se zaznamená počet hrbolků a jejich velikost pak lze kvantitativně seřadit takto: 0 – nevyskytují se, 1 – přítomné, 2 – zvětšené a 3 – výrazně zvětšené (obrázek 1).
Justification of choice of solvent (if other than water)
Stupeň 0 – žádné hrbolky se nevyskytují.
Species and strain
Stupněm 1 (přítomné) se označí všechny hrbolky s jedním vrcholem, jejichž výška se přibližně rovná jejich poloměru.
Supplier and specific supplier facility
Stupeň 2 (zvětšené) se projevuje tkání v hvězdicovitém tvaru, který má obvykle velkou radiální základnu s rýhami nebo brázdami směřujícími od středu.
Age of the fish at the start of the test and reproductive/spawning status
Horní část hrbolku je často spíše rozeklaná, ale může být i poněkud zaoblená.
Details of animal acclimation procedure
Při stupni 3 (výrazně zvětšené) jsou hrbolky obvykle poměrně velké a zaoblené, s málo rozlišenou strukturou.
Body weight of the fish at the start of the exposure (from a sub-sample of the fish stock)
Někdy se hrbolky mohou vyskytovat společně a vytvářet jednolitou strukturu v určité oblasti nebo v několika oblastech najednou (B, C a D, jak jsou popsány níže).
Test procedure used (test-type, loading rate, stocking density, etc.);
Zbarvení a tvar jsou podobné jako u stupně 2, ale někdy je obtížné je navzájem rozlišit.
Method of preparation of stock solutions and flow-rate;
Použití tohoto klasifikačního systému zpravidla vede k celkovému hodnocení hrbolků nižšímu než 50 u normálních samečků v kontrolních skupinách, kteří mají 18–20 hrbolků (Jensen et al., 2001).
The nominal test concentrations, weekly measured concentrations of the test solutions and analytical method used, means of the measured values and standard deviations in the test vessels and evidence that the measurements refer to the concentrations of the test chemical in true solution;
Skutečný počet hrbolků u některých ryb může být v konkrétní oblasti klasifikace větší, než je počet políček v šabloně.
Dilution water characteristics (including pH, hardness, alkalinity, temperature, dissolved oxygen concentration, residual chlorine levels, total organic carbon, suspended solids and any other measurements made)
Nastane-li tento případ, lze vpravo nebo vlevo od daného políčka vepsat další klasifikační čísla.
Water quality within test vessels: pH, hardness, temperature and dissolved oxygen concentration;
Šablona proto nemusí být symetrická.
Detailed information on feeding (e.g. type of food(s), source, amount given and frequency and analyses for relevant contaminants if available (e.g. PCBs, PAHs and organochlorine pesticides).
Další způsob zmapování hrbolků, které jsou párové nebo spojené vertikálně podél horizontální roviny tlamy, lze provést tak, že se do jednoho políčka uvedou klasifikační body dvou hrbolků.
Evidence that the controls met the acceptance criteria of the test;
Oblasti mapování:
Data on mortalities occurring in any of the test concentrations and control;
A – hrbolky nacházející se kolem oka.
Statistical analytical techniques used, treatment of data and justification of techniques used;
Mapují se od dorzálních po ventrální kolem anteriorního okraje oka.
Data on biological observations of gross morphology, including secondary sex characteristics, egg production and VTG;
U dospělých samečků v kontrolních skupinách jsou obvykle početné, u samiček v kontrolních skupinách se nevyskytují, zpravidla jsou párové (po jednom u každého oka), u samiček exponovaných androgenům může být pouze jeden.
Results of the data analyses preferably in tabular and graphical form;
B-hrbolky nacházející se mezi nosními dírkami (póry senzorických kanálků).
Incidence of any unusual reactions by the fish and any visible effects produced by the test chemical
U samečků v kontrolní skupině jsou obvykle párové a vyššího stupně (2 – zvětšené nebo 3 – výrazně zvětšené).
GUIDANCE FOR THE INTERPRETATION AND ACCEPTANCE OF THE TEST RESULTS
U samiček v kontrolní skupině se nevyskytují, do určité míry se mohou vyskytnout a vyvinout u samiček exponovaných androgenům.
This section contains a few considerations to be taken into account in the interpretation of test results for the various endpoints measured.