natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Příprava preparátů pro analýzu chromozómů
Provided it is done concurrently with the non-activated test using the same treatment duration, this single positive control response will demonstrate both the activity of the metabolic activation system and the responsiveness of the test system.
Do buněčné kultury se obvykle 1–3 hodiny před ukončení kultivace přidá colcemid nebo kolchicin.
Long term treatment (without S9) should however have its own positive control as the treatment duration will differ from the test using metabolic activation.
Pro přípravu preparátů pro analýzu chromozómů se každá buněčná kultura zpracovává zvlášť.
Each positive control should be used at one or more concentrations expected to give reproducible and detectable increases over background in order to demonstrate the sensitivity of the test system (i.e. the effects are clear but do not immediately reveal the identity of the coded slides to the reader), and the response should not be compromised by cytotoxicity exceeding the limits specified in the test method.
Příprava preparátů pro analýzu chromozómů zahrnuje hypotonizaci buněk, fixaci a obarvení buněk.
Reference chemicals recommended for assessing laboratory proficiency and for selection of positive controls
Na konci doby expozice v trvání 3–6 hodin se v monovrstvách mohou vyskytovat mitotické buňky (které se vyznačují okrouhlým tvarem a odchlipováním od povrchu).
Category
Jelikož lze tyto mitotické buňky snadno oddělit, mohou být při odstranění média obsahujícího zkoušenou chemickou látku ztraceny.
Clastogens active without metabolic activation
Pokud v době sběru buněk existují důkazy podstatného nárůstu počtu mitotických buněk v porovnání s kontrolami, což pravděpodobně ukazuje na zastavení mitózy, pak by buňky měly být odebrány odstředěním a přidány zpět do kultur, aby se zabránilo ztrátě buněk, u nichž probíhá mitóza a mohou zde vznikat chromozómové aberace.
Methyl methanesulphonate
Analýza
Mitomycin C
Všechny preparáty, včetně pozitivních a negativních kontrol, by měly být před mikroskopickou analýzou chromozómových aberací nezávisle kódovány.
itroquinoline-N-Oxide
Poněvadž při fixaci u částu buněk v metafázi často dochází ke ztrátě chromozómů, měly by tudíž vyšetřované buňky obsahovat centromery v počtu rovném modální hodnotě +/- 2.
Cytosine arabinoside
Aby bylo možno vyhodnotit zkoušenou chemickou látku jako jasně negativní, u každé koncentrace a kontroly by mělo být hodnoceno alespoň 300 dobře rozprostřených metafází.
Clastogens requiring metabolic activation
Jsou-li využívány k replikám, mělo by být těchto 300 buněk rovnoměrně rozděleno mezi tyto kultury.
Benzo(a)pyrene
Pokud je pro každou koncentraci použita jediná kultura (viz odstavec 21), mělo by být hodnoceno alespoň 300 dobře rozprostřených metafází v této jedné kultuře.
Cyclophosphamide
Hodnocení 300 buněk má tu výhodu, že se zvyšuje statistická síla zkoušky a navíc budou zřídka pozorovány nulové hodnoty (předpokládá se, že pouze u 5 % buněk) (44).
PROCEDURE
Počet hodnocených metafází lze snížit, je-li pozorován velký počet chromozómových aberací a zkoušená chemická látka je považována za jasně pozitivní.
Treatment with test chemical
Měly by být hodnoceny buňky se strukturními chromozómovými aberacemi včetně gapů a s vyloučením gapů.
Proliferating cells are treated with the test chemical in the presence and absence of a metabolic activation system.
Zlomy a gapy jsou definovány v Dodatku 1 podle (45) (46).
Culture harvest time
Chromatidové a chromozómové aberace by měly být zaznamenávány odděleně a klasifikovány podle podtypů (zlomy, výměny).
For thorough evaluation, which would be needed to conclude a negative outcome, all three of the following experimental conditions should be conducted using a short term treatment with and without metabolic activation and long term treatment without metabolic activation (see paragraphs 43, 44 and 45):
Postupy používané v laboratoři by měly zajistit, aby analýzu chromozómových aberací prováděli dobře odborně připravení hodnotitelé a a aby tato analýza případně byla podrobena odborné revizi.
Cells should be exposed to the test chemical without metabolic activation for 3-6 hours, and sampled at a time equivalent to about 1,5 normal cell cycle lengths after the beginning of treatment (18),
Způsobilost laboratoře
Cells should be exposed to the test chemical with metabolic activation for 3-6 hours, and sampled at a time equivalent to about 1,5 normal cell cycle lengths after the beginning of treatment (18),
Způsobilost laboratoře Aby laboratoř prokázala dostatečnou zkušenost s testem před rutinním použitím, měla by provést sérii experimentů s referenčními pozitivními chemickými látkami, jež působí prostřednictvím různých mechanismů, a s různými negativními kontrolami (s použitím různých rozpouštědel/vehikul).
Cells should be continuously exposed without metabolic activation until sampling at a time equivalent to about 1,5 normal cell cycle lengths.
Odpovědi těchto pozitivních a negativních kontrol by měly být v souladu s odbornou literaturou.
Certain chemicals (e.g. nucleoside analogues) may be more readily detected by treatment/sampling times longer than 1,5 normal cell cycle lengths (24).
Toto se nepoužije na laboratoře, které tuto zkušenost mají, tj. které mají k dispozici databázi historických údajů, jak je definována v odstavci 37.
In the event that any of the above experimental conditions lead to a positive response, it may not be necessary to investigate any of the other treatment regimens.
U vybraných pozitivních chemických látek (viz tabulka 1 v odstavci 26) by měla být testována krátká a dlouhá expozice za nepřítomnosti metabolické aktivace a rovněž krátká expozice za přítomnosti metabolické aktivace, aby byla prokázána způsobilost pro detekci klastogenních chemických látek a stanovení účinnosti systému metabolické aktivace.
Chromosome preparation
Rozsah koncentrací by u vybraných chemických látek měl být zvolen tak, aby poskytl opakovatelná zvýšení účinku v závislosti na dávce nad úroveň pozadí, aby se tak prokázala citlivost a dynamické rozpětí testovacího systému.
Cell cultures are treated with colcemid or colchicine usually for one to three hours prior to harvesting.
Historické kontrolní údaje
Each cell culture is harvested and processed separately for the preparation of chromosomes.
Laboratoř by měla stanovit:
Chromosome preparation involves hypotonic treatment of the cells, fixation and staining.
historické rozmezí a distribuci pozitivních kontrol,
In monolayers, mitotic cells (identifiable as being round and detaching from the surface) may be present at the end of the 3-6 hour treatment.
historické rozmezí a distribuci negativních kontrol (neexponovaných, s rozpouštědlem).
Because these mitotic cells are easily detached, they can be lost when the medium containing the test chemical is removed.
Při prvním získávání údajů o historické distribuci negativních kontrol by měly být výsledky provedených negativních kontrol v souladu s publikovanými kontrolními údaji, pokud existují.
If there is evidence for a substantial increase in the number of mitotic cells compared with controls, indicating likely mitotic arrest, then the cells should be collected by centrifugation and added back to cultures, to avoid losing cells that are in mitosis, and at risk for chromosome aberration, at the time of harvest.
S tím, jak je do distribuce kontrol přidáváno více údajů z experimentů, měly by aktuální negativní kontroly v ideálním případě spadat do 95 % rozmezí této distribuce (44) (47).
Analysis
Historická databáze negativních kontrol dané laboratoře by měla být vytvořena na základě nejméně 10 experimentů, nejlépe však by měla zahrnovat nejméně 20 experimentů provedených za srovnatelných zkušebních podmínek.
All slides, including those of the positive and negative controls, should be independently coded before microscopic analysis for chromosomal aberrations.
Jakékoli změny zkušebního protokolu by měly být zvažovány z hlediska jejich souladu se stávající databází kontrolních údajů laboratoře.
The 300 cells should be equally divided among the replicates, when replicate cultures are used.
Jakýkoli větší rozdíl ve zkušebním protokolu by měl vést k zavedení nové historické kontrolní databáze.
When single cultures are used per concentration (see paragraph 21), at least 300 well spread metaphases should be scored in this single culture.
Údaje o negativních kontrolách by měly zahrnovat výskyt buněk s chromozómovými aberacemi z jedné kultury nebo ze souhrnu replikovaných kultur, jak je popsáno v odstavci 21.
Scoring 300 cells has the advantage of increasing the statistical power of the test and in addition, zero values will be rarely observed (expected to be only 5 %) (44).
Výsledky aktuálních negativních kontrol by v ideálním případě měly spadat do 95 % rozmezí distribuce v historické databázi negativních kontrol laboratoře (44) (47).
The number of metaphases scored can be reduced when high numbers of cells with chromosome aberrations are observed and the test chemical considered as clearly positive.
Pokud jsou údaje z aktuálních negativních kontrol mimo 95 % rozmezí, může být přijatelné je zahrnout do dosavadní distribuce kontrol, pokud tyto údaje nejsou mimořádně odlehlé a pokud existuje důkaz o tom, že testovací systém je „pod kontrolou“ (viz odstavec 37), a důkaz o tom, že nedošlo k technické nebo lidské chybě.
Cells with structural chromosomal aberration(s) including and excluding gaps should be scored.
Vyjádření výsledků
Breaks and gaps are defined in Appendix 1 according to (45) (46).
Měl by se vyhodnotit procentuální podíl buněk se strukturními chromozómovými aberacemi.
Chromatid- and chromosome-type aberrations should be recorded separately and classified by sub-types (breaks, exchanges).
Chromatidové a chromozómové aberace klasifikované podle podtypů (zlomy, výměny) by měly být uvedeny odděleně spolu s jejich počty a četností v experimentálních a kontrolních kulturách.
Procedures in use in the laboratory should ensure that analysis of chromosomal aberrations is performed by well-trained scorers and peer-reviewed if appropriate.
Gapy se zaznamenávají a uvádějí odděleně, ale nezahrnují se do celkové četnosti výskytu aberací.
Although the purpose of the test is to detect structural chromosomal aberrations, it is important to record polyploidy and endoreduplication frequencies when these events are seen.
Zaznamená se procentuální podíl polyploidie a/nebo endoreduplikovaných buněk, pokud jsou pozorovány.
(See paragraph 2).
Měly by být zaznamenány výsledky souběžného stanovení cytotoxicity u všech exponovaných kultur a negativních a pozitivních kontrolních kultur v hlavních experimentech pro hodnocení aberací.
Proficiency of the laboratory
Měly by se uvést údaje za jednotlivé kultury.
In order to establish sufficient experience with the test prior to using it for routine testing, the laboratory should have performed a series of experiments with reference positive chemicals acting via different mechanisms and various negative controls (using various solvents/vehicle).
Kromě toho se všechny údaje shrnou do tabulky.
These positive and negative control responses should be consistent with the literature.
Kritéria přijatelnosti
This is not applicable to laboratories that have experience, i.e. that have an historical data base available as defined in paragraph 37.
Přijetí zkoušky je založeno na následujících kritériích:
A selection of positive control chemicals (see Table 1 in paragraph 26) should be investigated with short and long treatments in the absence of metabolic activation, and also with short treatment in the presence of metabolic activation, in order to demonstrate proficiency to detect clastogenic chemicals and determine the effectiveness of the metabolic activation system.
souběžná negativní kontrola je považována za přijatelnou pro přidání do historické databáze negativních kontrol laboratoře, jak je popsáno v odstavci 39,
A range of concentrations of the selected chemicals should be chosen so as to give reproducible and concentration-related increases above the background in order to demonstrate the sensitivity and dynamic range of the test system.
souběžné pozitivní kontroly (viz odstavec 26) by měly vyvolat odpovědi, které jsou slučitelné s odpověďmi uvedenými v historické databázi pozitivních kontrol, a měly by vyvolat statisticky významný nárůst v porovnání se souběžnou negativní kontrolou,
Historical control data
měla by být splněna kritéria buněčné proliferace při kontrole s rozpouštědlem (odstavce 17 a 18),
The laboratory should establish:
test je proveden za všech tří popsaných experimentálních uspořádání, pokud jedno z nich nevedlo k pozitivním výsledkům (viz odstavec 28),
A historical positive control range and distribution,
je analyzovatelný adekvátní počet buněk a koncentrací (odstavce 31 a 21),
A historical negative (untreated, solvent) control range and distribution.
kritéria pro výběr nejvyšší koncentrace jsou v souladu s kritérii popsanými v odstavcích 22, 23 a 24.
When first acquiring data for an historical negative control distribution, concurrent negative controls should be consistent with published control data, where they exist.
Hodnocení a interpretace výsledků
As more experimental data are added to the control distribution, concurrent negative controls should ideally be within the 95 % control limits of that distribution (44) (47).
Za předpokladu, že všechna kritéria přijatelnosti byla splněna, lze zkoušenou chemickou látku považovat za jasně pozitivní, pokud v některé ze zkoumaných experimentálních uspořádání (viz odstavec 28):
The laboratory's historical negative control database should initially be built with a minimum of 10 experiments but would preferably consist of at least 20 experiments conducted under comparable experimental conditions.
alespoň jedna ze zkušebních koncentrací vykazuje statisticky významný nárůst v porovnání se souběžnou negativní kontrolou;
Laboratories should use quality control methods, such as control charts (e.g. C-charts or X-bar charts (48)), to identify how variable their positive and negative control data are, and to show that the methodology is ‘under control’ in their laboratory (44).
b. hodnocení pomocí vhodného trend-testu ukáže závislost tohoto nárůstu na dávce;
Further recommendations on how to build and use the historical data (i.e. criteria for inclusion and exclusion of data in historical data and the acceptability criteria for a given experiment) can be found in the literature (47).
pokud kterýkoli z výsledků je mimo distribuci historických údajů o negativních kontrolách (např. 95 % kontrolních limitů dle Poissonova rozdělení; viz odstavec 39).
Any changes to the experimental protocol should be considered in terms of their consistency with the laboratory's existing historical control databases.
Jsou-li splněna všechna tato kritéria, má se za to, že zkoušená chemická látka je schopna vyvolávat chromozómové aberace v kultivovaných savčích buňkách v tomto testovacím systému.
Any major inconsistencies should result in the establishment of a new historical control database.
Doporučení ohledně nejvhodnějších statistických metod lze najít v literatuře (49) (50) (51).
Negative control data should consist of the incidence of cells with chromosome aberrations from a single culture or the sum of replicate cultures as described in paragraph 21.
Za předpokladu, že byla splněna všechna kritéria přijatelnosti, lze zkoušenou chemickou látku považovat za jasně negativní, pokud za všech zkoumaných experimentálních uspořádání (viz odstavec 28):
Concurrent negative controls should ideally be within the 95 % control limits of the distribution of the laboratory's historical negative control database (44) (47).
a. žádná ze zkušebních koncentrací nevykazuje statisticky významný nárůst v porovnání se souběžně provedenou negativní kontrolou;
Where concurrent negative control data fall outside the 95 % control limits they may be acceptable for inclusion in the historical control distribution as long as these data are not extreme outliers and there is evidence that the test system is ‘under control’ (see paragraph 37) and evidence of absence of technical or human failure.
hodnocení pomocí vhodné zkoušky trendu ukáže, že nedochází k nárůstu v závislosti na koncentraci,
Presentation of the results
všechny výsledky spadají do rámce distribuce historických údajů o negativních kontrolách (např. 95 % kontrolních limitů dle Poissonova rozdělení; viz odstavec 39).
The percentage of cells with structural chromosomal aberration(s) should be evaluated.
Pak se má za to, že zkoušená chemická látka není schopna vyvolávat chromozómové aberace v kultivovaných savčích buňkách v tomto testovacím systému.
Chromatid- and chromosome-type aberrations classified by sub-types (breaks, exchanges) should be listed separately with their numbers and frequencies for experimental and control cultures.
Ověření jasně pozitivního či jasně negativního účinku není nutné.
Gaps are recorded and reported separately but not included in the total aberration frequency.
V případě, že odpověď není ani jasně negativní, ani jasně pozitivní, jak je popsáno výše, nebo s cílem napomoci při stanovení biologického významu výsledku, by měly být údaje vyhodnoceny na základě odborného posouzení a/nebo dalším šetřením.
Percentage of polyploidy and/or endoreduplicated cells are reported when seen.
Užitečné by mohlo být hodnocení většího počtu buněk (je-li vhodné) nebo provedení opakovaného experimentu, případně s použitím upravených zkušebních podmínek (např. rozsah koncentrací, jiné podmínky metabolické aktivace (např. koncentrace S9 nebo původu S9)).
Concurrent measures of cytotoxicity for all treated, negative and positive control cultures in the main aberration experiment(s) should be recorded.
V ojedinělých případech dokonce ani po dalším šetření nebude možné na základě daného souboru údajů učinit závěr, zda jsou výsledky pozitivní či negativní, a proto bude učiněn závěr, že odpověď na zkoumanou chemickou látku je neurčitá.
Individual culture data should be provided.
Nárůst počtu polyploidních buněk může znamenat, že zkoušená chemická látka má schopnost potlačit mitotické procesy a indukovat numerické chromozómové aberace (52).
Additionally, all data should be summarised in tabular form.
Nárůst počtu buněk s endoreduplikovanými chromozómy může znamenat, že zkoušené chemické látky mají schopnost potlačit progresi buněčného cyklu (53) (54) (viz odstavec 2).
Acceptability Criteria
Výskyt polyploidních buněk a buněk s endoreduplikovanými chromozómy by se proto měl zaznamenat odděleně.
Acceptance of a test is based on the following criteria:
zdroj, číslo šarže a je-li k dispozici, datum použitelnosti,
The concurrent negative control is considered acceptable for addition to the laboratory historical negative control database as described in paragraph 39.
stabilita zkoušené chemické látky samotné, je-li známa,
Concurrent positive controls (see paragraph 26) should induce responses that are compatible with those generated in the historical positive control data base and produce a statistically significant increase compared with the concurrent negative control.
rozpustnost a stabilita zkoušené chemické látky v rozpouštědle, je-li známa,
Cell proliferation criteria in the solvent control should be fulfilled (paragraphs 17 and 18).
měření pH, případně osmolality a sraženiny v kultivačním médiu, do něhož byla přidána zkoušená chemická látka.
All three experimental conditions were tested unless one resulted in positive results (see paragraph 28).
Jednosložková látka:
Adequate number of cells and concentrations are analysable (paragraphs 31 and 21).
fyzický vzhled, rozpustnost ve vodě a další relevantní fyzikálně-chemické vlastnosti,
The criteria for the selection of top concentration are consistent with those described in paragraphs 22, 23 and 24.
chemická identifikace, např. název podle IUPAC nebo CAS, číslo CAS, kód SMILES nebo InChI, strukturní vzorec, čistota, případně chemická identita nečistot, je-li to prakticky možné, atd.
Evaluation and interpretation of results
Vícesložkové látky, UVCB a směsi:
Providing that all acceptability criteria are fulfilled, a test chemical is considered to be clearly positive if, in any of the experimental conditions examined (see paragraph 28):
charakterizované pokud možno chemickou identitou (viz výše), kvantitativním výskytem a relevantními fyzikálně-chemickými vlastnostmi složek.
at least one of the test concentrations exhibits a statistically significant increase compared with the concurrent negative control,
Rozpouštědlo:
the increase is dose-related when evaluated with an appropriate trend test,
zdůvodnění volby rozpouštědla,
any of the results are outside the distribution of the historical negative control data (e.g. Poisson-based 95 % control limits; see paragraph 39).
měl by se též uvést procentuální podíl rozpouštědla v konečném kultivačním médiu.
When all of these criteria are met, the test chemical is then considered able to induce chromosomal aberrations in cultured mammalian cells in this test system.
Buňky:
Recommendations for the most appropriate statistical methods can be found in the literature (49) (50) (51).
typ a zdroj buněk,
Providing that all acceptability criteria are fulfilled, a test chemical is considered clearly negative if, in all experimental conditions examined (see paragraph 28):
vlastnosti karyotypu a vhodnost použitého typu buněk,
none of the test concentrations exhibits a statistically significant increase compared with the concurrent negative control,
nepřítomnost mykoplasmat v případě buněčných linií,
there is no concentration-related increase when evaluated with an appropriate trend test,
u buněčných linií informace o délce buněčného cyklu, době zdvojnásobení nebo proliferační index,
all results are inside the distribution of the historical negative control data (e.g. Poisson-based 95 % control limits; see paragraph 39).
pohlaví dárců krve, věk a další důležité informace o dárci, zda byla použita plná krev nebo separované lymfocyty, použitý mitogen,
The test chemical is then considered unable to induce chromosomal aberrations in cultured mammalian cells in this test system.
případně počet pasáží v případě buněčných linií,
There is no requirement for verification of a clearly positive or negative response.
metody udržování buněčných kultur v případě buněčných linií,
In case the response is neither clearly negative nor clearly positive as described above or in order to assist in establishing the biological relevance of a result, the data should be evaluated by expert judgement and/or further investigations.
modální hodnota počtu chromozómů v případě buněčných linií.
Scoring additional cells (where appropriate) or performing a repeat experiment possibly using modified experimental conditions (e.g. concentration spacing, other metabolic activation conditions (i.e. S9 concentration or S9 origin)) could be useful.
Zkušební podmínky:
In rare cases, even after further investigations, the data set will preclude making a conclusion of positive or negative results, and therefore the test chemical response will be concluded to be equivocal.
identifikace chemické látky zastavující metafázi, její koncentrace a délka expozice buněk,
An increase in the number of polyploid cells may indicate that the test chemicals have the potential to inhibit mitotic processes and to induce numerical chromosomal aberrations (52).
koncentrace zkoušené chemické látky vyjádřená jako konečná koncentrace v kultivačním médiu (např. v μg nebo mg/ml nebo mM kultivačního média),
An increase in the number of cells with endoreduplicated chromosomes may indicate that the test chemicals have the potential to inhibit cell cycle progress (53) (54) (see paragraph 2).
odůvodnění výběru koncentrací a počtu kultur, včetně např. údajů o cytotoxicitě a mezích rozpustnosti,
Therefore, incidence of polyploid cells and cells with endoreduplicated chromosomes should be recorded separately.
složení média, případně koncentrace CO2, vlhkost,
source, lot number, limit date for use, if available
koncentrace (a/nebo objem) rozpouštědla a zkoumané chemické látky přidaných do kultivačního média,
stability of the test chemical itself, if known;
inkubační teplota,
solubility and stability of the test chemical in solvent, if known.