natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Pro každý homogenát se tlouček vymění za nový.
optionally gonadal histopathology
Podle výše popsaného postupu se všechna játra homogenizují za pomoci homogenizačního pufru.
Test acceptability
Odstředění suspendovaného homogenátu jater
Dissolved oxygen ≥ 60 % of saturation; mean temperature of 25 ± 2 °C; 90 % survival of fish in the controls; measured test concentrations within 20 % of mean measured values per treatment level.
Ověří se, že teplota v komoře chlazené odstředivky není ≤ 5 °C.
Dissolved oxygen ≥ 60 % of saturation; mean temperature of 26 ± 2 °C; 90 % survival of fish in the controls; measured test concentrations within 20 % of mean measured values per treatment level.
Mikrozkumavky o objemu 1,5 ml obsahující suspendovaný homogenát jater se vloží do chlazené odstředivky (v případě potřeby se provede vyvážení).
SOME CHEMICAL CHARACTERISTICS OF ACCEPTABLE DILUTION WATER
Suspendovaný homogenát jater se 10 minut odstřeďuje při zrychlení 13000 g a při teplotě ≤ 5 °C.
COMPONENT
Je-li však supernatant dostatečně oddělený, lze sílu a dobu odstředění upravit podle potřeby.
CONCENTRATIONS
Po odstředění se zkontroluje, zda je supernatant náležitě oddělený (na povrchu: tuk, uprostřed: supernatant, spodní vrstva: jaterní tkáň).
< 20 mg/l
Není-li odstředění dostatečné, suspenze se odstředí znovu za stejných podmínek.
< 2 mg/l
Všechny vzorky se vyjmou z chlazené odstředivky a uspořádají se na mrazicím stojánku podle pořadových čísel vzorků.
Unionised ammonia
Je třeba dát pozor, aby oddělené vrstvy po odstředění opět nesuspendovaly.
< 1 μg/l
Odběr supernatantu
< 10 μg/l
Do stojánku na zkumavky se vloží čtyři mikrozkumavky o objemu 0,5 ml pro uchovávání supernatantu.
Total organophosphorus pesticides
Pomocí mikropipety se z každého supernatantu (odděleného jako prostřední vrstva) odebere 30 μl a vloží se do jedné mikrozkumavky o objemu 0,5 ml.
< 50 ng/l
Je třeba dát pozor, aby nebyl odebrán tuk z povrchu nebo jaterní tkáň ze spodní vrstvy.
< 25 ng/l
Stejným způsobem se supernatant odebere a vloží do dalších dvou mikrozkumavek o objemu 0,5 ml.
Appendix 4A
Pomocí mikropipety se odebere zbytek supernatantu (nejméně ≥ 100 μl, je-li to proveditelné).
SPAWNING SUBSTRATE FOR ZEBRAFISH
Tento supernatant se poté vloží do zbývající mikrozkumavky o objemu 0,5 ml.
Spawning tray
Mikrozkumavka o objemu 0,5 ml se uzavře zátkou a objem supernatantu se zapíše na etiketu.
all glass instrument dish, for example 22 × 15 × 5,5 cm (l × w × d), covered with a removable stainless steel wire lattice (mesh width 2mm).
Poté se mikrozkumavky ihned ochladí v mrazicím stojánku.
The lattice should cover the opening of the instrument dish at a level below the brim.
Pro každý supernatant se použije nový hrot mikropipety.
On the lattice, spawning substrate should be fixed.
Ulpí-li na hrotu větší množství tuku, je třeba ho ihned nahradit novým hrotem, aby nedošlo ke kontaminaci jaterního extraktu tukem.
It should provide structure for the fish to move into.
Podle postupu popsaného výše se všechen odstředěný supernatant vloží do čtyř mikrozkumavek o objemu 0,5 ml.
For example, artificial aquaria plants made of green plastic material are suitable (NB: possible adsorption of the test chemical to the plastic material should be considered).
Po vložení supernatantu do mikrozkumavek o objemu 0,5 ml se všechny mikrozkumavky s identifikačními etiketami uloží do stojánku na zkumavky a ihned poté se zmrazí v mrazničce.
The plastic material should be leached out in sufficient volume of warm water for sufficient time to ensure that no chemicals may be disposed to the test water.
Měří-li se koncentrace VTG okamžitě po předúpravě, zkumavka o objemu 0,5 ml (obsahující 30 μl supernatantu) se uchová v chladu ve stojánku na zkumavky a přenese se na pracoviště, kde se provádí analýza ELISA.
When using glass materials it should be ensured that the fish are neither injured nor cramped during their vigorous actions.
V takovém případě se ostatní mikrozkumavky vloží do stojánků na zkumavky a zmrazí se v mrazničce.
The distance between the tray and the glass panes should be at least 3 cm to ensure that the spawning is not performed outside the tray.
Po odběru supernatantu se reziduum vhodným způsobem odstraní.
The eggs spawned onto the tray fall through the lattice and can be sampled 45-60 min after the start of illumination.
Skladování vzorku
The transparent eggs are non-adhesive and can easily be counted by using transversal light.
Mikrozkumavky o objemu 0,5 ml obsahující supernatant homogenátu jater se skladují při teplotě ≤ – 70 °C do doby, než jsou použity pro analýzu ELISA.
When using five females per vessel, egg numbers up to 20 at a day can be regarded as low, up to 100 as medium and more than 100 as high numbers.
Postup 3A:
The spawning tray should be removed, the eggs collected and the spawning tray re-introduced in the test vessel, either as late as possible in the evening or very early in the morning.
Danio pruhované, odběr krve z ocasní žíly/tepny
The time until re-introduction should not exceed one hour since otherwise the cue of the spawning substrate may induce individual mating and spawning at an unusual time.
Ihned po anestetizaci se příčně oddělí ocasní stopka a z ocasní tepny/žíly se odebere krev pomocí heparinizované mikrohematokritové kapiláry.
If a situation needs a later introduction of the spawning tray, this should be done at least 9 hours after start of the illumination.
Objemy krve se nacházejí v rozmezí od 5 do 15 mikrolitrů v závislosti od velikosti ryby.
At this late time of the day, spawning is not induced any longer.
Do mikrokapiláry se přidá stejný objem pufru s aprotininem (6 mikrogramů aprotininu na ml fosfátového pufru (PBS)) a plazma se od krve oddělí odstředěním (po dobu 5 minut při zrychlení 600 g).
Appendix 4B
Plazma se shromáždí do zkušebních zkumavek a uskladní se při teplotě – 20 °C do doby, než se analyzuje na VTG nebo na jiné proteiny, jež jsou předmětem zájmu.
SPAWNING SUBSTRATE FOR FATHEAD MINNOW
Postup 3B:
Two or three combined plastic/ceramic/glass or stainless steel spawning tiles and trays are placed in each of the test chamber (e.g. 80 mm length of grey semi-circular guttering sitting on a lipped tray of 130mm length) (see picture).
Danio pruhované, odběr krve srdeční punkcí
Properly seasoned PVC or ceramic tiles have demonstrated to be appropriate for a spawning substrate (Thorpe et al, 2007).
Aby nedošlo ke koagulaci krve a rozložení proteinu, vzorky se odebírají ve fosfátovém pufru (PBS) obsahujícím heparin (1000 jednotek/ml) a inhibitor proteázy aprotinin (2 TIU/ml).
It is recommended that the tiles are abraded to improve adhesion.
Jako složky pro přípravu tohoto pufru se doporučuje použít heparin, amonnou sůl a lyofilizovaný aprotinin.
The tray should also be screened to prevent fish from access to the fallen eggs unless the egg adhesion efficiency has been demonstrated for the spawning substrate used.
Odběr krve se doporučuje provést injekční stříkačkou (o objemu 1ml) s fixovanou tenkou jehlou (např. značky Braun Omnikan-F).
The base is designed to contain any eggs that do not adhere to the tile surface and would therefore fall to the bottom of the tank (or those eggs laid directly onto the flat plastic base).
Injekční stříkačka by se měla předem naplnit pufrem (přibližně 100 mikrolitrů) tak, aby malé objemy krve z každé ryby byly plně eluovány.
All spawning substrates should be leached for a minimum of 12 hours, in dilution water, before use.
Vzorky krve se odeberou srdeční punkcí.
Appendix 5A
Ryba se nejprve anestetizuje roztokem MS-222 (v koncentraci 100 mg/l).
ASSESSMENT OF SECONDARY SEX CHARACTERISTICS IN FATHEAD MINNOW FOR THE DETECTION OF CERTAIN ENDOCRINE ACTIVE CHEMICALS
Správný režim anestezie umožní uživateli rozeznat srdeční tep dania pruhovaného.
Overview
Při provádění srdeční punkce se píst injekční stříkačky udržuje pod slabým tlakem.
Potentially important characteristics of physical appearance in adult fathead minnows in endocrine disrupter testing include body colour (i.e., light/dark), coloration patterns (i.e., presence or absence of vertical bands), body shape (i.e., shape of head and pectoral region, distension of abdomen), and specialised secondary sex characteristics (i.e., number and size of nuptial tubercles, size of dorsal pad and ovipositor).
Množství krve, která lze odebrat, se nacházejí v rozmezí 20–40 mikrolitrů.
Nuptial tubercles are located on the head (dorsal pad) of reproductively-active male fathead minnows, and are usually arranged in a bilaterally-symmetric pattern (Jensen et al.
Po srdeční punkci se směs krve/pufru vloží do zkušební zkumavky.
2001).
Plazma se oddělí od krve odstředěním (po dobu 20 minut při 5000 g) a uskladní se při teplotě – 80 °C do doby, než bude použita pro analýzu.
Control females and juvenile males and females exhibit no tubercle development (Jensen et al.
Postup 3C:
2001).
Standardní operační postup: danio pruhované, homogenizace hlavy a ocasu
There can be up to eight individual tubercles around the eyes and between the nares of the males.
Ryba se anestetizuje a usmrtí v souladu s popisem zkoušky.
The greatest numbers and largest tubercles are located in two parallel lines immediately below the nares and above the mouth.
Odřízne se hlava a ocas, jak znázorňuje obrázek 1.
In many fish there are groups of tubercles below the lower jaw; those closest to the mouth generally occur as a single pair, while the more ventral set can be comprised of up to four tubercles.
Důležité: Veškeré preparační nástroje a pracovní stůl je třeba mezi zpracováním každé jednotlivé ryby řádně omýt a vyčistit (např. 96 % ethanolem), aby se zabránilo „znečištění vitelogeninem“ v důsledku přenosu ze samiček nebo ze samečků, u kterých byly vyvolány účinky, na samečky, u kterých účinky vyvolány nebyly.
The actual numbers of tubercles is seldom more than 30 (range, 18-28; Jensen et al.
Pro histologii gonád
2001).
Řez za prsní ploutví
The predominant tubercles (in terms of numbers) are present as a single, relatively round structure, with the height approximately equivalent to the radius.
Řez za hřbetní ploutví
Most reproductively-active males also have, at least some, tubercles which are enlarged and pronounced such that they are indistinguishable as individual structures.
Pro analýzu VGT
Some types of endocrine-disrupting chemicals can cause the abnormal occurrence of certain secondary sex characteristics in the opposite sex; for example, androgen receptor agonists, such as 17α-methyltestosterone or 17β-trenbolone, can cause female fathead minnows to develop nuptial tubercles (Smith 1974; Ankley et al.
Stanoví se společná hmotnost hlavy a ocasu každé ryby se zaokrouhlením na mg.
2001; 2003), while oestrogen receptor agonists may decrease number or size of nuptial tubercles in males (Miles-Richardson et al.
Po zvážení se části vloží do vhodných zkumavek (např. Eppendorfovy zkumavky o objemu 1,5 ml) a zmrazí se při teplotě – 80 °C až do homogenizace nebo se přímo homogenizují na ledu pomocí dvou plastových paliček.
1999; Harries et al.
Když je dosaženo homogenní hmoty, přidá se homogenizační pufr [1] chlazený na ledu v množství čtyřnásobně větším než hmotnost tkáně.
2000).
Pokračuje se v práci s paličkami, dokud není směs homogenní.
Below is a description of the characterisation of nuptial tubercles in fathead minnows based on procedures used at the U.S. Environmental Protection Agency lab in Duluth, MN.
Důležitá poznámka: Na každou rybu se použijí nové paličky.
Specific products and/or equipment can be substituted with comparable materials available.
Vzorky se uloží na led až do odstřeďování při teplotě 4 °C po dobu 30 minut při zrychlení 50000 g.
Viewing is best accomplished using an illuminated magnifying glass or 3X illuminated dissection scope.
Pomocí pipety se části supernatantu o objemu 20 μl přenesou do nejméně dvou zkumavek tak, že se špička pipety ponoří pod tukovou vrstvu na hladině a opatrně se nasaje supernatant bez frakcí tuku nebo sedimentu.
View fish dorsally and anterior forward (head toward viewer).
Zkumavky se uskladní při teplotě – 80 °C až do použití.
Place fish in small Petri dish (e.g. 100 mm in diameter), anterior forward, and ventral down.
VZORKY OBOHACENÉ VITELOGENINEM A REFERENČNÍ STANDARD PRO OPAKOVATELNOST
Focus viewfinder to allow identification of tubercles.
Každý den provádění zkoušek na VTG se analyzuje obohacený vzorek vytvořený pomocí referenčního standardu pro opakovatelnost.
Gently and slowly roll fish from side to side to identify tubercle areas.
Pro přípravu referenčního standardu pro opakovatelnost se použije VTG z jiné šarže, než jaká byla použita pro přípravu kalibračních standardů pro zkoušku, která se nyní provádí.
Count and score tubercles.
Obohacený vzorek se připraví tak, že se známé množství standardu pro opakovatelnost přidá do vzorku plazmy samečků z kontrolní skupiny.
Repeat the observation on the ventral head surface by placing the fish dorsal anterior forward in the Petri dish.
Vzorek se obohatí tak, aby se dosáhlo koncentrace VTG 10krát až 100krát vyšší než očekávaná koncentrace vitelogeninu u samečků ryb z kontrolní skupiny.
Observations should be completed within 2 min for each fish.
Vzorek plazmy samečků z kontrolní skupiny, který se obohacuje, může pocházet z jedné ryby, nebo to může být směsný vzorek z několika ryb.
Tubercle Counting and Rating
Dílčí vzorek neobohacené plazmy samečků z kontrolní skupiny se analyzuje alespoň ve dvou duplikátních jamkách.
Six specific areas have been identified for assessment of tubercle presence and development in adult fathead minnows.
Rovněž obohacený vzorek se analyzuje alespoň ve dvou duplikátních jamkách.
A template was developed to map the location and quantity of tubercles present (see end of this appendix).
Za účelem stanovení očekávané koncentrace se střední hodnota množství vitelogeninu z obou neobohacených vzorků plazmy samečků z kontroly přičte k vypočtenému množství VTG přidaného za účelem obohacení vzorků.
The number of tubercles is recorded and their size can be quantitatively ranked as: 0- absence, 1-present, 2-enlarged and 3-pronounced for each organism (Fig.
Poměr mezi touto očekávanou koncentrací a naměřenou koncentrací se zaznamená spolu s výsledky všech souborů zkoušek provedených v týž den.
1).
Střední hodnoty opakování testovat Dunnovým nebo Mannovým– Whitneyovým testem
Rate 0 — absence of any tubercle.
Výsledky hierarchické ANOVA testovat Tamhaneovým– Dunnettovým testem
Rating 1 — present, is identified as any tubercle having a single point whose height is nearly equivalent to its radius.
Výsledky hierarchické ANOVA testovat Dunnettovým testem
Rating 2 — enlarged, is identified by tissue resembling an asterisk in appearance, usually having a large radial base with grooves or furrows emerging from the centre.
Normalizační transformace?
Tubercle height is often more jagged but can be somewhat rounded at times.
Střední hodnoty opakování testovat Dunnovým testem
Rating 3 — pronounced, is usually quite large and rounded with less definition in structure.
Jonckheerův nebo Williamsův test sestupného trendu
At times these tubercles will run together forming a single mass along an individual or combination of areas (B, C and D, described below).
Střední hodnoty opakování nejsou normální nebo nejsou homogenní
Coloration and design are similar to rating 2 but at times are fairly indiscriminate.
Střední hodnoty opakování jsou normální a homogenní
Using this rating system generally will result in overall tubercle scores of < 50 in a normal control male possessing a tubercle count of 18 to 20 (Jensen et al.
Střední hodnoty opakování nemají normální rozdělení
2001).
<=3 opak. pro každou konc.
The actual number of tubercles in some fish may be greater than the template boxes for a particular rating area.
transformace ke stabilizaci rozptylu?
If this happens, additional rating numbers may be marked within, to the right or to the left of the box.
Ne Ano Ano Ne
The template therefore does not need to display symmetry.
Hierarchická ANOVA je normální
An additional technique for mapping tubercles which are paired or joined vertically along the horizontal plane of the mouth could be done by double-marking two tubercle rating points in a single box.
Hierarchická ANOVA není normální
Mapping regions:
Transformace ke stabilizaci rozptylu?
A — Tubercles located around eye.
Stejný rozptyl
Mapped dorsal to ventral around anterior rim of eye.
Jonckheerův test sestupného trendu
Commonly multiple in mature control males, not present in control females, generally paired (one near each eye) or single in females exposed to androgens.
Není monotónní
B — Tubercles located between nares, (sensory canal pores).
Monotónní
Normally in pairs for control males at more elevated levels (2- enlarged or 3- pronounced) of development.
Určit, zda je odezva na dávku monotónní
Not present in control females with some occurrence and development in females exposed to androgens.
C.49 Zkouška akutní toxicity na rybích embryích (FET)
C — Tubercles located immediately anterior to nares, parallel to mouth.
Tato zkušební metoda je rovnocenná Pokynu OECD pro zkoušení (TG) č. 236 (2013).
Generally enlarged or pronounced in mature control males.
Popisuje zkoušku akutní toxicity na rybích embryích (FET) dania pruhovaného (Danio rerio).
Present or enlarged in less developed males or androgen-treated females.
Tato zkouška je určena ke stanovení akutní toxicity chemických látek pro embryonální stadia vývoje ryb.
D — Tubercles located parallel along mouth line.
Zkouška FET je založena na studiích a validacích provedených na daniu pruhovaném (1)(2)(3)(4)(5)(6)(7)(8)(9)(10)(11)(12)(13)(14).
Generally rated developed in control males.
Zkouška FET byla úspěšně aplikována na širokou škálu chemických látek s různými mechanismy působení, různou rozpustností, těkavostí a hydrofobností (přehled v (15) a (16)).
Absent in control females but present in androgen-exposed females.
Čerstvě oplodněné jikry dania pruhovaného se vystaví působení zkoušené chemické látky po dobu 96 hodin.
E — Tubercles located on lower jaw, close to mouth, usually small and commonly in pairs.
Každých 24 hodin se zaznamenají pozorování až čtyř hlavních ukazatelů letality (6): i) koagulace oplodněných jiker, ii) netvoří se somity, iii) nedojde k oddělení ocasního pupenu od žloutkového váčku a iv) nepřítomnost srdečního tepu.
Varying in control or treated males, and treated females.
Na konci expoziční doby se stanoví akutní toxicita na základě pozitivního výsledku kteréhokoli ze čtyř zaznamenaných pozorování hlavních ukazatelů a vypočítá se hodnota LC50.
F — Tubercles located ventral to E. Commonly small and paired.
K užitečným informacím o vlastnostech jednotlivých látek patří strukturní vzorec, molekulová hmotnost, čistota, stabilita ve vodě a na světle, pKa a Kow, rozpustnost ve vodě a tlak par, jakož i výsledky zkoušky snadné biologické rozložitelnosti (zkušební metoda C.4 (17) nebo C.29 (18)).
Present in control males and androgen-exposed females.
Rozpustnost ve vodě a tlak par lze použít pro výpočet Henryho konstanty, která určí pravděpodobnost význmných ztrát zkoušené chemické látky během doby zkoušky.
Tubercle Template:
Měla by být k dispozici spolehlivá analytická metoda pro stanovení množství látky ve zkušebních roztocích, a to se známou a doloženou přesností a mezí stanovitelnosti.
Numerical Rating
Jestliže se zkušební metoda použije ke zkoušení směsi, mělo by být pokud možno charakterizováno její chemické složení například chemickou identitou jejích složek, jejich kvantitativním výskytem a jejich vlastnostmi v dané látce (viz odstavec 4).
Date
Pokud jde o látky, které lze aktivovat prostřednictvím metabolismu, je prokázáno, že embrya dania pruhovaného mají biotransformační schopnosti (19)(20)(21)(22).
resent
Metabolická schopnost ryb v embryonálním stadiu však není vždy obdobná jako u nedospělých nebo dospělých ryb.
Total Score
Například ve zkušební metodě FET nebyl zjištěn protoxický alylalkohol (9).
nlarged
Existují-li nějaké známky toho, že metabolity nebo jiné příslušné produkty transformace mohou být toxičtější než výchozí sloučenina, doporučuje se proto provést zkoušku také s těmito metabolity / transformačními produkty a při hodnocení toxicity zkoušené chemické látky použít také tyto výsledky, nebo alternativně provést jinou zkoušku, která více zohlední metabolismus.
ronounced
U látek s molekulovou hmotností ≥ 3 kDa, s velmi složitou molekulární strukturou a u látek způsobujících opožděné líhnutí, které by mohly zabránit expozici po vylíhnutí nebo ji omezit, se nepředpokládá citlivost embryí na takové látky vzhledem k jejich omezené biologické dostupnosti a pro tento případ by mohly být vhodnější jiné zkoušky toxicity.
Appendix 5B
Aby byly výsledky zkoušky platné, musí být splněna tato kritéria:
ASSESSMENT OF SECONDARY SEX CHARACTERISTICS IN MEDAKA FOR THE DETECTION OF CERTAIN ENDOCRINE ACTIVE CHEMICALS
Celková míra oplodnění všech odebraných jiker by ve zkoušené sadě měla být ≥ 70 %.
Below is a description of the measurement of papillary processes [1], which are the secondary sex characteristics in medaka (Oryzias latipes).
Teplota vody by se měla ve zkušebních nádržích po celou dobu zkoušky udržovat na 26 ± 1 °C.
After the excision of the liver (Appendix 6), the carcass is placed into a conical tube containing about 10 ml of 10 % neutral buffered formalin (upside: head, downside: tail).
Celková míra přežití embryí v negativní kontrole (s ředicí vodou) a případně v kontrole s rozpouštědlem by do konce 96hodinové expozice měla být ≥ 90 %.
If the gonad is fixed in a solution other than 10 % neutral buffered formalin, make a transverse cut across the carcass between anterior region of anal fin and anus using razor, taking care not to harm the gonopore and gonad itself (Fig.3).
Expozice pozitivní kontroly (např. 4,0 mg/l 3,4-dichloranilinu u dania pruhovaného) by měla vést minimálně k 30 % mortalitě na konci 96hodinové doby expozice.
Place the cranial side of the fish body into the fixative solution to preserve the gonad, and the tail side of the fish body into the 10 % neutral buffered formalin as described above.
Míra vylíhnutí v negativní kontrole (a v kontrole s rozpouštědlem, byla-li použita) by měla být ≥ 80 % na konci 96hodinové doby expozice.
After placing the fish body into 10 % neutral buffered formalin, grasp the anterior region of the anal fin with tweezers and fold it for about 30 seconds to keep the anal fin open.
Na konci 96hodinové doby expozice by koncentrace rozpuštěného kyslíku v negativní kontrole a při nejvyšší zkušební koncentraci měla být ≥ 80 % nasycení.
When grasping the anal fin with tweezers, grasp a few fin rays in the anterior region with care not to scratch the papillary processes.
Přehled doporučených podmínek pro chov a zkoušení ryb je uveden v dodatku 2.
After keeping the anal fin open for about 30 seconds, store the fish body in 10 % neutral buffered formalin at room temperature until the measurement of the papillary processes (measurement should be conducted after fixing for at least 24 hours).
Potřebné je toto vybavení:
Measurement
nádrže na ryby z chemicky inertního materiálu (např. skla) o vhodném objemu vzhledem k doporučené velikosti násady (viz Chov matečných ryb, odstavec 14);
After fixing the fish body in the 10 % neutral buffered formalin for at least 24 hours, pick up the fish carcass from the conical tube and wipe the formalin on the filter paper (or paper towel).
inverzní a/nebo binokulární mikroskop alespoň s 80násobným zvětšením.
Place the fish abdomen side up.
Není-li možné v místnosti, kde se provádí pozorování se záznamy, nastavit teplotu na 26 ± 1 °C, je nezbytné použít křížový stolek mikroskopu s regulací teploty nebo jiné metody pro udržování teploty;
Then cut the anal fin using small dissection scissors carefully (it is preferable to cut the anal fin with small amount of pterygiophore).
zkušební komory; např. standardní destičky s 24 jamkami o hloubce cca 20 mm (viz Zkušební komory, odstavec 11);
Grasp the anterior region of the severed anal fin with tweezers and put it on a glass slide with a several drops of water.
např. samolepicí fólie pro zakrytí 24jamkových destiček;
Then cover the anal fin with a cover glass.