natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Při těchto experimentech by se měly používat dávky, jež poskytují reprodukovatelné nárůsty v závislosti na dávce, a měly by prokázat citlivost a dynamické rozpětí zkušebního systému ve sledované tkáni (kostní dřeň) za použití hodnotící metody, jež má být v laboratoři uplatňována.
In Part B, Chapter B.11 is replaced by the following:
Tento požadavek neplatí pro laboratoře, které tuto zkušenost mají, tj. které mají dostupnou databázi historických údajů, jak je definována v odstavcích 10–14.
Mammalian Bone Marrow Chromosomal Aberration Test
Historické kontrolní údaje
This test method is equivalent to OECD test guideline 475 (2016).
V průběhu šetření způsobilosti by laboratoř měla stanovit:
The mammalian in vivo bone marrow chromosomal aberration test is especially relevant for assessing genotoxicity because, although they may vary among species, factors of in vivo metabolism, pharmacokinetics and DNA-repair processes are active and contribute to the responses.
historické rozmezí a distribuci pozitivních kontrolních účinků a
An in vivo assay is also useful for further investigation of genotoxicity detected by an in vitro system.
historické rozmezí a distribuci negativních kontrolních účinků.
The mammalian in vivo chromosomal aberration test is used for the detection of structural chromosome aberrations induced by test chemicals in bone marrow cells of animals, usually rodents (2) (3) (4) (5).
Při prvním získávání údajů o dosavadní distribuci negativních kontrol by měly být výsledky provedených negativních kontrol v souladu s publikovanými kontrolními údaji, pokud existují.
Structural chromosomal aberrations may be of two types, chromosome or chromatid.
S tím, jak je do distribuce kontrol přidáváno více údajů z experimentů, měly by souběžné negativní kontroly v ideálním případě spadat do 95 % rozmezí této distribuce.
While the majority of genotoxic chemical-induced aberrations are of the chromatid-type, chromosome-type aberrations also occur.
Historická databáze negativních kontrol laboratoře by měla být statisticky robustní, aby byla zajištěna schopnost laboratoře posuzovat distribuci svých údajů o negativních kontrolách.
Chromosomal damage and related events are the cause of many human genetic diseases and there is substantial evidence that, when these lesions and related events cause alterations in oncogenes and tumour suppressor genes, they are involved in cancer in humans and experimental systems.
V literatuře se doporučuje, že nezbytným minimem může být 10 experimentů, nejlépe však by databáze měla zahrnovat nejméně 20 experimentů provedených za srovnatelných zkušebních podmínek.
Polyploidy (including endoreduplication) could arise in chromosome aberration assays in vivo.
V laboratořích by měly být uplatňovány metody řízení jakosti, jako např. kontrolní diagramy (např.C-charts nebo X-bar charts (7)), z nichž je patrné, jak proměnlivé jsou jejich údaje a že metodika je v dané laboratoři „pod kontrolou“.
However, an increase in polyploidy per se does not indicate aneugenic potential and can simply indicate cell cycle perturbation or cytotoxicity.
Další doporučení, jak získat a používat dosavadní údaje (tj. kritéria pro zařazení údajů do historické databáze a jejich vyřazení a kritéria přijatelnosti pro daný experiment), lze najít v literatuře (8).
An in vivo mammalian erythrocyte micronucleus test (Chapter B.12 of this Annex) or the in vitro mammalian cell micronucleus test (Chapter B.49 of this Annex) would be the in vivo and in vitro tests, respectively, recommended for the detection of aneuploidy.
Pokud laboratoř neprovedla dostatečný počet experimentů, aby mohla během ověření šetření způsobilosti (popsaného v odstavci 9) stanovit statisticky robustní distribuci negativních kontrol (viz odstavec 11), je přijatelné, aby distribuce byla stanovena během prvních rutinních zkoušek.
Definitions of terminology used are set out in Appendix 1.
Uplatňování tohoto přístupu by mělo vycházet z doporučení uvedených v literatuře (8) a výsledky negativních kontrol získané při těchto experimentech by měly zůstat v souladu s publikovanými údaji o negativních kontrolách.
Rodents are routinely used in this test, but other species may in some cases be appropriate if scientifically justified.
Jakékoli změny zkušebního protokolu by měly být zvažovány z hlediska jejich dopadu na výsledné údaje tak, aby zůstaly v souladu se stávající historickou kontrolní databází laboratoře.
Bone marrow is the target tissue in this test since it is a highly vascularised tissue and it contains a population of rapidly cycling cells that can be readily isolated and processed.
Pouze případy větších rozdílů ve zkušebním protokolu by měly vést k zavedení nové historické kontrolní databáze, přičemž její odlišnost od dřívější distribuce se stanoví na základě odborného posouzení (viz odstavec 11).
The scientific justification for using species other than rats and mice should be provided in the report.
V průběhu opětovného stanovení nemusí být k provedení aktuální zkoušky nutná úplná databáze negativních kontrol, pokud laboratoř prokáže, že hodnoty jejích souběžných negativních kontrol zůstávají v souladu s její předchozí databází nebo s odpovídajícími publikovanými údaji.
If species other than rodents are used, it is recommended that the measurement of bone marrow chromosomal aberration be integrated into another appropriate toxicity test.
Údaje o negativních kontrolách by měly zahrnovat výskyt strukturních chromozómových aberací (s vyloučením gapů) u každého zvířete.
If there is evidence that the test chemical(s), or its metabolite(s), will not reach the target tissue, it may not be appropriate to use this test.
Výsledky souběžných negativních kontrol by v ideálním případě měly být v 95 % rozmezí distribuce v historické databázi negativních kontrol laboratoře.
PRINCIPLE OF THE TEST METHOD
Pokud jsou údaje ze souběžných negativních kontrol mimo 95 % rozmezí, může být přijatelné je zařadit mezi dosavadní distribuci kontrol, pokud tyto údaje nejsou mimořádně odlehlé a pokud existuje důkaz o tom, že testovací systém je „pod kontrolou“ (viz odstavec 11), a neexistuje důkaz o tom, že by došlo k technické nebo lidské chybě.
Animals are exposed to the test chemical by an appropriate route of exposure and are humanely euthanised at an appropriate time after treatment.
Výběr zvířecích druhů
Prior to euthanasia, animals are treated with a metaphase-arresting agent (e.g. colchicine or colcemid).
Měly by být použity běžně používané laboratorní kmeny zdravých mladých pohlavně dospělých zvířat.
Chromosome preparations are then made from the bone marrow cells and stained, and metaphase cells are analysed for chromosomal aberrations.
Běžně je používán potkan, ale vhodná může být také myš.
VERIFICATION OF LABORATORY PROFICIENCY
Použit může být i jakýkoli jiný vhodný druh savce, je-li ve zprávě poskytnuto vědecké zdůvodnění.
Proficiency Investigations
Podmínky chovu a krmení zvířat
In order to establish sufficient experience with the conduct of the assay prior to using it for routine testing, the laboratory should have demonstrated the ability to reproduce expected results from published data (e.g. (6)) for chromosomal aberration frequencies with a minimum of two positive control chemicals (including weak responses induced by low doses of positive controls), such as those listed in Table 1 and with compatible vehicle/solvent controls (see paragraph 22).
Teplota v místnosti pro zvířata by u hlodavců měla být 22 °C (± 3 °C).
These experiments should use doses that give reproducible and dose related increases and demonstrate the sensitivity and dynamic range of the test system in the tissue of interest (bone marrow) and using the scoring method to be employed within the laboratory.
Relativní vlhkost vzduchu by v ideálním případě měla být 50–60 %, ale minimálně 40 % a neměla by pokud možno přesáhnout 70 % kromě doby úklidu místnosti.
This requirement is not applicable to laboratories that have experience, i.e. that have a historical database available as defined in paragraphs 10-14.
Ke krmení lze použít konvenční laboratorní krmivo s neomezeným přísunem pitné vody.
Historical Control Data
Výběr druhu potravy může být ovlivněn její dostatečnou mísitelností se zkoušenou chemickou látkou, je-li látka podávána tímto způsobem.
During the course of the proficiency investigations, the laboratory should establish:
Hlodavci by měli být chováni v malých skupinách (nejvýše po pěti v každé kleci) téhož pohlaví a se stejnou aplikací, pokud se nepředpokládá agresivní chování, přednostně v klecích s pevnou podlahou s vhodným obohacením životního prostředí.
A historical positive control range and distribution, and
Zvířata mohou být umístěna v klecích individuálně, pouze je-li to vědecky odůvodněné.
A historical negative control range and distribution.
Příprava zvířat
When first acquiring data for a historical negative control distribution, concurrent negative controls should be consistent with published control data, where they exist.
Obvykle se používají zdravá mladá dospělá zvířata (u hlodavců ideálně ve věku 6–10 týdnů na počátku expozice, ale přijatelná jsou i zvířata poněkud starší), která se náhodně přiřadí do kontrolních a experimentálních skupin.
As more experimental data are added to the historical control distribution, concurrent negative controls should ideally be within the 95 % control limits of that distribution.
Jednotlivá zvířata se jednoznačně identifikují humánní, co nejméně invazivní metodou (např. kroužkováním, označením štítkem, pomocí mikročipu nebo biometrické identifikace, avšak nikoli nastřihnutím ucha nebo prstu dolní končetiny) a nechají se v laboratorních podmínkách alespoň pět dní aklimatizovat.
The laboratory's historical negative control database should be statistically robust to ensure the ability of the laboratory to assess the distribution of their negative control data.
Klece by měly být uspořádány tak, aby byl vliv umístění klecí minimalizován.
The literature suggests that a minimum of 10 experiments may be necessary but would preferably consist of at least 20 experiments conducted under comparable experimental conditions.
Mělo by se zabránit vzájemné kontaminaci pozitivní kontroly a zkoušené chemické látky.
Laboratories should use quality control methods, such as control charts (e.g. C-charts or X-bar charts (7)), to identify how variable their data are, and to show that the methodology is ‘under control’ in their laboratory.
V okamžiku zahájení studie by měla být odchylka v hmotnosti zvířat minimální a neměla by překročit ± 20 % střední hodnoty hmotnosti zvířat daného pohlaví.
Further recommendations on how to build and use the historical data (i.e. criteria for inclusion and exclusion of data in historical data and the acceptability criteria for a given experiment) can be found in the literature (8).
Příprava dávek
Where the laboratory does not complete a sufficient number of experiments to establish a statistically robust negative control distribution (see paragraph 11) during the proficiency investigations (described in paragraph 9), it is acceptable that the distribution can be built during the first routine tests.
Pevné zkoušené chemické látky by se měly rozpustit nebo suspendovat ve vhodných rozpouštědlech nebo vehikulech nebo by měly být přimíchány do potravy nebo pitné vody před podáním dávky zvířatům.
This approach should follow the recommendations set out in the literature (8) and the negative control results obtained in these experiments should remain consistent with published negative control data.
Kapalné zkoušené chemické látky mohou být podávány přímo nebo se před podáním zředí.
Any changes to the experimental protocol should be considered in terms of their impact on the resulting data remaining consistent with the laboratory's existing historical control database.
Pro účely expozice inhalací lze zkoušené chemické látky v závislosti na jejich fyzikálně-chemických vlastnostech podávat jako plyn, páru nebo pevný/kapalný aerosol.
Only major inconsistencies should result in the establishment of a new historical control database, where expert judgement determines that it differs from the previous distribution (see paragraph 11).
Používat by se měla čerstvě připravená zkoušená chemická látka, pokud údaje o stabilitě neprokazují možnost skladování a nestanoví vhodné podmínky pro skladování.
During the re-establishment, a full negative control database may not be needed to permit the conduct of an actual test, provided that the laboratory can demonstrate that their concurrent negative control values remain either consistent with their previous database or with the corresponding published data.
Rozpouštědlo/vehikulum
Negative control data should consist of the incidence of structural chromosomal aberration (excluding gaps) in each animal.
Rozpouštědlo/vehikulum by nemělo mít při použitých hladinách dávek toxické účinky a mělo by být vyloučeno podezření, že reaguje se zkoušenou chemickou látkou.
Concurrent negative controls should ideally be within the 95 % control limits of the distribution of the laboratory's historical negative control database.
Jsou-li použita jiná než známá rozpouštědla/vehikula, mělo by být jejich zařazení podloženo referenčními údaji o jejich kompatibilitě.
Where concurrent negative control data fall outside the 95 % control limits, they may be acceptable for inclusion in the historical control distribution as long as these data are not extreme outliers and there is evidence that the test system is ‘under control” (see paragraph 11) and no evidence of technical or human failure.
Doporučuje se nejprve zvážit použití vodného rozpouštědla/vehikula.
Selection of animal species
Jako příklad běžně používaných kompatibilních rozpouštědel/vehikul lze uvést vodu, fyziologický roztok, roztok methylcelulosy, roztok sodné soli karboxymethylcelulosy, olivový olej a kukuřičný olej.
Commonly used laboratory strains of healthy young adult animals should be employed.
Neexistují-li historické nebo publikované kontrolní údaje prokazující, že zvolené atypické rozpouštědlo/vehikulum nevyvolává žádné strukturní aberace nebo jiné zhoubné účinky, měla by být provedena počáteční studie za účelem stanovení přijatelnosti kontroly s tímto rozpouštědlem/vehikulem.
Rats are commonly used, although mice may also be appropriate.
Pozitivní kontroly
Any other appropriate mammalian species may be used, if scientific justification is provided in the report.
V každé zkoušce by měla být obvykle zařazena jedna skupina zvířat vystavených pozitivní kontrolní chemické látce.
Animal housing and feeding conditions
Od toho lze upustit, jestliže zkušební laboratoř prokázala způsobilost k provádění zkoušky a stanovila historické rozmezí pozitivních kontrol.
For rodents, the temperature in the animal room should be 22 °C (± 3 °C).
Není-li zařazena souběžná pozitivní kontrolní skupina, měly by být v každém experimentu zařazeny hodnotící kontroly (fixované a neobarvené preparáty).
Although the relative humidity ideally should be 50-60 %, it should be at least 40 % and preferably not exceed 70 % other than during room cleaning.
Tyto hodnotící kontroly lze získat tak, že se do hodnocení studie zařadí vhodné referenční vzorky, které byly získány a uchovány ze samostatného experimentu s pozitivními kontrolami prováděného pravidelně (např. každých 6–18 měsíců) v laboratoři, kde se provádí daná zkouška, například během testování způsobilosti a poté pravidelně podle potřeby.
For feeding, conventional laboratory diets may be used with an unlimited supply of drinking water.
Chemické látky pro pozitivní kontrolu by měly spolehlivě vyvolat pozorovatelné zvýšení výskytu buněk se strukturními chromozómovými aberacemi nad spontánní úroveň.
The choice of diet may be influenced by the need to ensure a suitable admixture of a test chemical when administered by this route.
Dávky pozitivní kontroly by měly být zvoleny tak, aby byly účinky zřetelné, ale aby hodnotitel okamžitě nezjistil identitu kódovaného preparátu.
Rodents should be housed in small groups (no more than five per cage) of the same sex and treatment group if no aggressive behaviour is expected, preferably in solid floor cages with appropriate environmental enrichment.
Je přijatelné, aby látka v pozitivní kontrole byla podávána jiným způsobem než zkoušená chemická látka, podle odlišného harmonogramu expozice, a aby se odběr vzorků prováděl pouze v jediném okamžiku.
Animals may be housed individually only if scientifically justified.
Pro pozitivní kontrolu navíc může být vzato v úvahu použití chemických látek ze stejné chemické třídy, je-li to vhodné.
Preparation of the animals
Příklady pozitivních kontrolních chemických látek jsou uvedeny v tabulce 1.
Healthy young adult animals (for rodents, ideally 6-10 weeks old at start of treatment, though slightly older animals are also acceptable) are normally used, and are randomly assigned to the control and treatment groups.
Příklady chemických látek pro pozitivní kontroly.
The individual animals are identified uniquely using a humane, minimally invasive method (e.g. by ringing, tagging, micro-chipping or biometric identification, but not ear or toe clipping) and acclimated to the laboratory conditions for at least five days.
ethyl-methansulfonát
Cages should be arranged in such a way that possible effects due to cage placement are minimised.
thyl-1-nitrosomočovina
Cross contamination by the positive control and the test chemical should be avoided.
cyklofosfamid (cyklofosfamid monohydrát)
At the commencement of the study, the weight variation of animals should be minimal and not exceed ± 20 % of the mean weight of each sex.
Negativní kontroly
Preparation of doses
V každém expozičním intervalu by měla být zařazena souběžná negativní kontrolní skupina zvířat, která jinak podstupují stejný proces jako exponované skupiny až na to, že nejsou vystavena zkoušené chemické látce.
Solid test chemicals should be dissolved or suspended in appropriate solvents or vehicles or admixed in diet or drinking water prior to dosing the animals.
Používá-li se při podávání zkoušené chemické látky rozpouštědlo/vehikulum, měla by toto rozpouštědlo/vehikulum dostávat i kontrolní skupina.
Liquid test chemicals may be dosed directly or diluted prior to dosing.
Je-li u negativních kontrol použit jediný odběr, měl by se provést v prvním (nejkratším) intervalu expozice použitém ve studii.
For inhalation exposures, test chemicals can be administered as a gas, vapour, or a solid/liquid aerosol, depending on their physicochemical properties.
51-18-3
Fresh preparations of the test chemical should be employed unless stability data demonstrate the acceptability of storage and define the appropriate storage conditions.
Negativní kontroly V každém expozičním intervalu by měla být zařazena souběžná negativní kontrolní skupina zvířat, které jinak podstupují stejný proces jako exponované skupiny až na to, že nejsou vystavena zkoušené chemické látce.
Solvent/vehicle
Používá-li se při podávání zkoušené chemické látky rozpouštědlo/vehikulum, měla by toto rozpouštědlo/vehikulum dostávat i kontrolní skupina.
The solvent/vehicle should not produce toxic effects at the dose levels used, and should not be suspected of chemical reaction with the test chemicals.
V případě použití obou pohlaví by mohlo být vhodné použít faktoriální pokus.
If other than well-known solvents/vehicles are used, their inclusion should be supported with reference data indicating their compatibility.
Podrobnosti ohledně toho, jak pomocí tohoto pokusu analyzovat údaje, jsou uvedeny v dodatku 2.
It is recommended that wherever possible, the use of an aqueous solvent/vehicle should be considered first.
Indukce mikrojader je v zásadě u samic a samců podobná, a většinu studií je proto možné provést s kterýmkoli z obou pohlaví (26).
Examples of commonly used compatible solvents/vehicles include water, physiological saline, methylcellulose solution, carboxymethyl cellulose sodium salt solution, olive oil and corn oil.
V tomto případě může být vhodné provést studii s oběma pohlavími, např. jako součást studie toxicity po opakovaných dávkách.
Positive controls
V případě použití obou pohlaví by mohlo být vhodné použít faktoriálního uspořádání experimentu.
A group of animals treated with a positive control chemical should normally be included with each test.
Podrobnosti ohledně toho, jak analyzovat údaje získané při tomto uspořádání experimentu, jsou uvedeny v dodatku 2.
This may be waived when the testing laboratory has demonstrated proficiency in the conduct of the test and has established a historical positive control range.
Určitým vodítkem pro maximální typické požadavky na počet zvířat může být, že studie s buňkami kostní dřeně při dvou odběrech se třemi skupinami exponovanými dávce jednou souběžnou negativní kontrolní skupinou plus jednou pozitivní kontrolní skupinou (každá skupina složena z pěti zvířat jednoho pohlaví) by vyžadovala 45 zvířat.
These can be obtained by including within the scoring of the study appropriate reference samples that have been obtained and stored from a separate positive control experiment conducted periodically (e.g. every 6-18 months) in the laboratory where the test is performed; for example, during proficiency testing and on a regular basis thereafter, where necessary.
Jestliže se provádí předběžná studie pro stanovení rozsahu dávek, poněvadž nejsou k dispozici vhodné údaje, jež by mohly pomoci při stanovení dávek, pak by měla být provedena ve stejné laboratoři, se stejným druhem, kmenem, pohlavím a za stejného režimu expozice, které se použijí v hlavní studii (10).
Positive control doses should be chosen so that the effects are clear but do not immediately reveal the identity of the coded samples to the scorer.
Cílem studie by mělo být zjistit maximální tolerovanou dávku, která je definována jako nejvyšší dávka, která bude po dobu trvání zkoušky tolerována bez příznaků toxicity omezující studii (např. vyvolání poklesu tělesné hmotnosti nebo cytotoxicity hematopoetického systému, avšak nikoli smrti nebo příznaků bolesti, utrpení nebo strádání, kdy je nezbytné zvířata humánně utratit (11)).
It is acceptable that the positive control be administered by a route different from the test chemical, using a different treatment schedule, and for sampling to occur only at a single time point.
Nejvyšší dávku lze rovněž definovat jako dávku, která vyvolává určité známky toxicity pro kostní dřeň.
In addition, the use of chemical class-related positive control chemicals may be considered, when appropriate.
Výjimku z kritérií pro stanovení dávek mohou představovat chemické látky, jež vykazují saturaci toxikokinetických vlastností nebo indukují detoxifikační procesy, které mohou vést ke snížení expozice po dlouhodobé aplikaci a jež by měly být hodnoceny v každém jednotlivém případě.
Examples of positive control chemicals are included in Table 1.
Aby bylo možné získat informace o dávce a účinku, měla by úplná studie zahrnovat negativní kontrolní skupinu a minimálně tři úrovně dávek, které jsou zpravidla odstupňovány faktorem 2, avšak nepřevyšujícím 4.
Examples of positive control chemicals
Pokud ve studii ke stanovení rozsahu dávek nebo na základě stávajících údajů zkoušená chemická látka nevyvolává toxicitu, měla by nejvyšší dávka při jednorázovém podávání odpovídat 2000 mg/kg tělesné hmotnosti.
Ethyl methanesulphonate
Pokud však zkoušená chemická látka způsobuje toxicitu, měla by být největší podávanou dávkou maximální tolerovaná dávka a úrovně dávek by měly přednostně pokrývat rozmezí od maximální dávky až po dávku vyvolávající malou toxicitu nebo nevyvolávající žádnou toxicitu.
Ethyl nitrosourea
Je-li toxicita pro cílovou tkáň (kostní dřeň) pozorována na všech testovaných úrovních dávek, doporučuje se další studie s netoxickými dávkami.
Cyclophosphamide (monohydrate)
Studie, jejichž cílem je úplnější charakteristika kvantitativních informací o dávce a odezvě, mohou vyžadovat zařazení doplňkových skupin zvířat exponovaných dalším dávkám.
Triethylenemelamine
Pro některé typy zkoušených chemických látek (např. humánních léčivých přípravků), na něž se vztahují specifické požadavky, se tyto limity mohou lišit.
Negative controls
Limitní zkouška
Negative control group animals should be included at every sampling time and otherwise handled in the same way as the treatment groups, except for not receiving treatment with the test chemical.