natgillin/translations-raw huggingface dataset:
a sonda: 5′-FAM-TAG-AGG-GCC-TTG-GTG-ATC-TTC-TG-BHQ1.
The ELISA plates shall be incubated for 20 minutes at room temperature in the dark and the reaction shall be stopped by adding 100 μl/well 0,5 M H2SO4.
Jednostupňová RT-qPCR:
The absorbance shall be monitored at a wavelength of 492 and 620 nm in an ELISA reader.
Každá zpracovávaná destička musí obsahovat negativní vzorové kontrolní vzorky a pozitivní kontrolní vzorky.
Samples shall be designated positive or negative after comparing the test results to the absorbance values for the positive and negative controls.
Podmínky cyklování: 30 minut při 50 °C, 15 minut při 95 °C; 40 cyklů: 15 sekund při 94 °C, 40 sekund při 60 °C a 20 sekund při 72 °C; v případě potřeby se tyto podmínky upraví.
In general, samples with combined absorbance (A) < 0,5 for undiluted material shall be considered negative, samples with A values between 0,5 and 1,0 shall be considered suspicious and samples with A values > 1,0 shall be considered positive.
Místo tohoto postupu lze také použít i jiné varianty RT-PCR či RT-qPCR, u nichž byla prokázána obdobná účinnost.
Other ELISA versions with a proven similar efficacy may be used instead of those referred to in this point.
U IHNV se provede amplifikace pomocí těchto primerů a sondy:
Immunofluorescence- IF
Přímý primer: 5′- AGA-GCC-AAG-GCA-CTG-TGC-G-3′;
The identification of listed pathogens VHSV and IHNV shall be performed by infecting cells in ‘Black’ 96-well plates, conventional 24-well plates or cover slips into 24-well plates.
Reverzní primer: 5′- TTCTTTGCGGCTTGGTTGA – 3′
When IHNV or VHSV or both are identified by infecting cells on cover slips, the following protocol shall apply:
a sonda: 5′ 6FAM-TGAGACTGAGCGGGACA-NFQ/MGB.
cover slips shall be seeded with cells at a density leading to between 60 % and 90 % confluence after 24 hours of cultivation.
Dvoustupňová RT-qPCR:
EPC cells shall be used where possible for this purpose because of their strong adherence to glass surfaces, but other cell lines such as BF-2, RTG-2 or FHM may be used as well.
Podmínky cyklování (po stupni RT): 2 minuty při 50 °C, 10 minut při 95 °C; následuje 40 cyklů: 15 sekund při 95 °C a 1 minuta při 60 °C; v případě potřeby se tyto podmínky upraví.
subsequently, cell culture medium shall be removed, and the infected cell monolayers fixed with 0,5 ml ice-cold, aqueous acetone solution (80 % vol:vol).
Podrobné diagnostické metody a postupy k potvrzení VHS nebo IHN či obou těchto nákaz při podezření na nákazy nebo k jejich vyloučení v případě podezření na jejich ohniska
Fixation shall take place in fume hood for 15 minutes at room temperature, then the acetone solution shall be removed and the cover glasses shall be air dried for at least 30 minutes.
Je-li v souladu s čl. 57 písm. b) směrnice 2006/88/ES vyžadováno laboratorní vyšetření za účelem potvrzení nebo vyloučení přítomnosti IHN, VHS či obou infekcí pomocí diagnostických metod stanovených v příloze I části 1 bodě II.3, použijí se tyto podrobné diagnostické metody a postupy:
At this stage, the plates shall either be processed immediately or stored at – 20 °C for further use;
obvyklá izolace viru s jeho následnou séroneutralizační, imunochemickou nebo molekulární identifikací;
specific monoclonal antibodies (namely for VHSV identification, MAb IP5B11 and for IHNV, Hyb 136-3 respectively) shall be diluted in 0,01 M PBST, pH 7,2 in the dilution recommended by the provider of the MAbs; 50 to 100 μl/well shall be added to the fixed monolayer and plates shall be incubated for one hour at 37 °C in a humid chamber;
zjišťování viru pomocí RT-PCR nebo RT-qPCR;
cover glasses shall be washed gently three times with PBS containing 0,05 % Tween-20 (PBS-T), and the buffer shall be removed completely after the last rinse.
jiné diagnostické techniky, například IFAT, ELISA, RT-PCR či imunohistochemická analýza.
The cells shall subsequently be incubated for one hour at 37 °C with fluorescein isothiocyanate (FITC) — or tetramethylrhodamine-5-(and-6-) isothiocyanate (TRITC)-conjugated antibodies against mouse immunoglobulin used as the primary antibody, diluted according to the supplier instructions, washed again in PBS-T, and dried.
1 Obvyklá izolace viru s jeho následnou identifikací
Stained cultures shall be mounted onto glass slides using glycerol saline and examined under incident ultraviolet (UV) light.
Odběr vzorků
Use 10 × or 12 × eyepieces and a × 25 or × 40 objective lens with numerical apertures > 0,7 and > 1,3 respectively.
K vyšetření je třeba vybrat minimálně deset ryb s typickými symptomy IHN respektive VHS.
Other IF techniques, with regard to cell cultures, fixation and antibodies of reference quality, of proven similar efficacy may be used instead.
Příprava a zaslání pro účely obvyklé izolace viru se řídí metodami a postupy stanovenými v bodě I.2.
Neutralisation
Příprava vzorků ke kultivačnímu vyšetření pro účely obvyklé izolace viru se řídí metodami a postupy stanovenými v bodě I.4.
serum containing group specific antibody against VHSV at a 1:50 (vol:vol) dilution;
Virologické vyšetření pro účely obvyklé izolace viru se řídí metodami a postupy stanovenými v bodě I.5.
serum containing group specific antibody against IHNV at a 1:50 (vol:vol) dilution;
Identifikace viru pro účely obvyklé izolace viru se řídí metodami a postupy stanovenými v bodě I.6.
pool of antisera against the indigenous serotypes of IPNV at a 1:50 (vol:vol) dilution;
2 Zjišťování viru pomocí RT-qPCR
medium alone (positive control).
Odběr vzorků pro účely zjišťování viru pomocí RT-qPCR se řídí metodami a postupy stanovenými v bodě I.1.2.
From each virus supernatant-serum mixture, at least two cell cultures shall be inoculated with 50 μl each and then incubated at 15 °C.
Příprava a zaslání pro účely zjišťování viru pomocí RT-qPCR se řídí metodami a postupy stanovenými v bodě I.2.
The development of CPE shall be checked as described in point I.5.4.
Odběr doplňkového diagnostického materiálu pro účely zjišťování viru pomocí RT-qPCR se řídí metodami a postupy stanovenými v bodě I.3.
VHSV strains and isolates that do not react in neutralisation tests shall be identified by IF or ELISA.
Příprava vzorků na RT-qPCR
Other neutralisation tests of proven similar efficacy may be used instead.
Příprava vzorků pro účely zjišťování viru pomocí RT-qPCR se řídí metodami a postupy stanovenými v bodě I.6.4.1.
RT-PCR/RT-qPCR
Zjišťování viru pomocí RT-qPCR se řídí metodami a postupy stanovenými v bodech I.6.4.1, I.6.4.3 a I.6.4.4.
Preparation of viral RNA
3 Jiné diagnostické postupy
All work with RNA shall be performed on ice, using gloves.
K analýze ELISA, k nepřímému imunofluorescenčnímu testu (IFAT) nebo k RT-PCR lze v souladu s bodem I.6.1 respektive bodem I.6.2 respektive bodem I.6.4 předložit supernatant připravený podle bodu I.4.3.
RNA shall be extracted using the phenol-chloroform method or by RNA affinity spin columns, according to the manufacturer's instructions.
Tkáňový materiál lze zkoumat jinými diagnostickými postupy (např. technikou IFAT na řezech zmrzlého materiálu či imunohistochemickou analýzou tkáňového materiálu fixovaného formalinem).
Commercially available RNA extraction kits that will produce high quality RNA suitable for use with the RT-PCR protocols detailed in the points below may be used.
Tyto rychlé postupy se do 48 hodin po odběru vzorku doplní virologickým vyšetřením v souladu s bodem II písm. a), nebo bodem II písm. b), pokud:
RNA shall be re-suspended in distilled RNAse-free water, (namely water treated with 0,1 % diethyl pyrocarbonate) or an appropriate elution buffer.
je výsledek negativní; nebo
The following primers shall be used for detection of IHNV:
je výsledek pozitivní u materiálu, jenž představuje první případ IHN nebo VHS.
Forward Primer 5′-AGA-GAT-CCC-TAC-ACC-AGA-GAC-3′;
Postup titrace k ověření vnímavosti buněčných kultur k infekcím
Reverse Primer 5′-GGT-GGT-GTT-GTT-TCC-GTG-CAA-3′.
Při provádění titrace k ověření vnímavosti buněčných kultur k infekcím podle bodu I.5.3 se dodrží postupy stanovené v následujících odstavcích tohoto bodu.
The following cycles shall be used (one-step RT-PCR): 1 cycle: 50 °C for 30 minutes; 1 cycle: 95 °C for 2 minutes; 30 cycles: 95 °C for 30 seconds, 50 °C for 30 seconds, 72 °C for 60 seconds; 1 cycle: 72 °C for 7 minutes and soak at 4 °C.
Použijí se nejméně dva izoláty VHSV a jeden izolát IHNV.
The following primers shall be used for detection of VHSV:
V izolátech musí být zastoupena nejdůležitější skupina virů v Evropské unii: konkrétně je třeba v případě VHSV použít jeden patogenní izolát pstruha duhového ve sladké vodě a jeden patogenní izolát pakambaly velké ve slané vodě a v případě IHNV jeden patogenní kmen pstruha duhového z Evropské unie.
VN For 5′-ATG-GAA-GGA-GGA-ATT-CGT-GAA-GCG-3′;
Použijí se dobře definované izoláty z členských států.
VN Rev 5′-GCG-GTG-AAG-TGC-TGC-AGT-TCC-C-3′.
Použije se kultivační médium s minimálně 10 % séra.
Subsequently, the reaction shall be held at 68 °C for 7 minutes.
Při naočkování se použije nízká multiplicita infekce (MOI menší než 1).
Quantity and specificity of the RT-PCR reactions shall be evaluated by gel electrophoresis in 1,5 % agarose gel with ethidium bromide and observed using UV transillumination.
V případě celkového CPE se virus odebírá 15minutovým odstřeďováním supernatantu buněčné kultury při 2000 × g, podrobí se sterilizační filtraci s pomocí membránového filtru (s velikostí pórů 0,45 μm) a rozdělí se do označených kryozkumavek.
A 693 bp PCR amplicon may be observed for IHNV.
Virus se uchovává při – 80 °C.
For VHSV, the size shall be 505 bp.
Týden po zmrazení se tři zkumavky (postup probíhá ve více replikacích) s každým virem nechají roztát ve studené vodě a titrují se na své příslušné buněčné linie.
The results of the PCR may vary depending on the conditions under which it is performed, namely the thermal protocols might need optimisation, depending on the thermal cycler in use.
Každý z izolátů viru se nechává roztát a titruje se minimálně každých šest měsíců či při podezření na sníženou vnímavost některé z buněčných linií.
Furthermore, false-positive results may occur because of false primer annealing or laboratory contamination.
Postupy titrace je nutno podrobně popsat a pokaždé provést stejným způsobem.
Adequate positive and negative controls and sequence amplicons shall therefore be included to avoid any doubts.
Titrace se ředěním do koncového bodu musí v každém kroku ředění zahrnovat minimálně šest replikací.
For the VHSV primers, special care shall be taken when using BF-2 cells, as the primers may react with the cell line DNA/RNA producing false-positive results of similar size.
Pokud poklesne titr jednoho ze tří izolátů viru ve srovnání s původním titrem o 2 řády (logy) nebo více, nesmí se již dotčená buněčná linie pro účely dozoru používat.
RT-qPCR for VHSV
Pokud se v laboratoři nacházejí různé buněčné linie, měla by být každá buněčná linie vyšetřena zvlášť.
For VHSV, amplification shall be performed using the following primers and probe:
Záznamy je třeba uchovávat minimálně deset let.
Forward primer: 5′-AAA-CTC-GCA-GGA-TGT-GTG-CGT-CC-3′;
PODROBNÉ DIAGNOSTICKÉ METODY A POSTUPY ZA ÚČELEM DOZORU NAD KOI HERPESVIRÓZOU (KHV) A JEJÍHO POTVRZENÍ
Reverse primer: 5′-TCT-GCG-ATC-TCA-GTC-AGG-ATG-AA-3′;
I.
and probe: 5′-FAM-TAG-AGG-GCC-TTG-GTG-ATC-TTC-TG-BHQ1.
Podrobné diagnostické metody a postupy za účelem potvrzení přítomnosti nebo vyloučení podezření na KHV
One-step RT-qPCR:
Je-li v souladu s čl. 57 písm. b) směrnice 2006/88/ES vyžadováno laboratorní vyšetření za účelem potvrzení přítomnosti nebo vyloučení podezření na KHV pomocí diagnostických metod stanovených v příloze I části 2 oddíle III, použijí se podrobné diagnostické metody a postupy stanovené v bodech I.1–I.2 v této části.
Negative template controls and positive controls shall be included on each plate run.
1 Příprava vzorků ryb
Cycling conditions: 50 °C for 30 minutes, 95 °C for 15 minutes, 40 cycles of 94 °C for 15 seconds, 60 °C for 40 seconds, 72 °C for 20 seconds; adjust if necessary.
Pro diagnostické účely lze k vyšetření běžnými metodami založenými na PCR či qPCR použít ryby (zaslané živé či usmrcené a samostatně zabalené v utěsněných aseptických nádobách) nebo zmrazené orgány nebo části orgánů konzervované v 80 % až absolutním ethanolu či virovém transportním médiu (je pak nutno je zpracovat do 48 hodin od odběru).
Other RT-PCR or RT-qPCR versions of proven similar efficacy may be used instead.
Za účelem zjištění KHV se odeberou žábry a ledviny; kromě toho lze jako další samostatný vzorek odebrat slezinu, mozek a střevo.
RT-qPCR for IHNV
V akutních případech lze v jednom vzorku smísit tkáňový materiál z až pěti ryb.
For IHNV, amplification shall be performed using the following primers and probe:
Dále lze v některých případech použít neletální vzorky, například krev, výtěry z žaber, bioptické vzorky žaber či stěr slizu (v případě podezření na přítomnost KHV tedy lze využít i velmi cenné ryby).
Forward primer: 5′- AGA-GCC-AAG-GCA-CTG-TGC-G-3′;
Extrakce DNA
Reverse primer: 5′- TTCTTTGCGGCTTGGTTGA - 3′;
DNA se extrahuje standardními postupy.
and probe: 5′ 6FAM-TGAGACTGAGCGGGACA-NFQ/MGB.
Lze použít komerčně dostupné sady pro extrakci DNA, kterými se získá vysoce kvalitní DNA vhodná k použití s protokoly PCR popsanými v bodě I.2.
Two-step RT-qPCR:
I.2.1 qPCR ke zjištění KHVV
As the following assay depends on a two-step amplification, extra care shall be taken when handling the tubes from one reaction to the other in order to prevent contamination.
Za účelem zjištění KHV pomocí qPCR se použije tento test qPCR:
Cycling conditions (after RT-step): 50 °C for 2 minutes, 95 °C for 10 minutes, followed by 40 cycles of 95 °C for 15 seconds and 60 °C for 1 minutes; adjustments shall be made if necessary.
přímý primer (KHV-86f): 5′- GACGCCGGAGACCTTGTG -3′;
Detailed diagnostic methods and procedures for the confirmation of or to rule out the suspicion of VHS or IHN or both in suspected outbreaks
reverzní primer (KHV-163r): 5′- CGGGTTCTTATTTTTGTCCTTGTT -3′
When a laboratory examination is required to confirm or rule out the presence of IHN or VHS or both in accordance with Article 57(b) of Directive 2006/88/EC using the diagnostic methods set out in point II.3 of Part 1 of Annex I, the following detailed diagnostic methods and procedures shall apply:
a sonda (KHV-109p): 5′- FAM- CTTCCTCTGCTCGGCGAGCACG -3′.
conventional virus isolation with subsequent seroneutralisation, immune-chemical or molecular virus identification;
Podmínky cyklování: 15 minut při 95 °C; následovaný 40 cykly: 15 sekund při 94 °C a 60 sekund při 60 °C.
virus detection by RT-PCR or RT-qPCR;
Místo tohoto postupu lze použít i jiné varianty qPCR, u nichž byla prokázána obdobná účinnost.
other diagnostic techniques such as IFAT, ELISA, RT-PCR, IHC.
Použije se test popsaný v tomto bodě, který se zaměřuje na gen thymidinkinázy přenášený KHV.
Conventional virus isolation with subsequent virus identification
Místo tohoto postupu lze však použít i jiné testy PCR, u nichž byla prokázána podobná citlivost a specifičnost jako v popisovaném testu.
Selection of samples
Přímý primer (KHV-TKf): 5′-GGGTTACCTGTAC GAG-3′;
At least 10 fish showing typical signs of IHN or VHS shall be selected for examination.
reverzní primer (KHV-TKr): 5′-CACCCAGTAGATTA TGC-3′.
The preparation and shipment for the purpose of conventional virus isolation shall follow the methods and procedures laid down in point I.2.
Podmínky cyklování: 5 minut při 95 °C; následovaný 35 cykly: 30 sekund při 95 °C, 30 sekund při 52 °C a 1 minuta při 72 °C; a jedním cyklem: 10 minut při 72 °C.
The collection of supplementary material for the purpose of conventional virus isolation shall follow the methods and procedures laid down in point I.3.
Velikost produktu by měla činit 409 bp.
Preparation of samples for cell culture examination
Kromě toho může nesprávné žíhání primerů nebo kontaminace laboratoře vést k falešně pozitivním výsledkům.
The preparation of samples for cell culture examination for the purpose of conventional virus isolation shall follow the methods and procedures laid down in point I.4.
Místo tohoto postupu lze použít i jiné varianty PCR, u nichž byla prokázána podobná účinnost.
The virological examination for the purpose of conventional virus isolation shall follow the methods and procedures laid down in point I.5.
První zjištění v oblasti se potvrdí sekvenováním nebo se k okamžité identifikaci zašle do národní referenční laboratoře či do referenční laboratoře EU pro nákazy ryb uvedené v příloze VI směrnice 2006/88/ES.
The virus identification for the purpose of conventional virus isolation shall follow the methods and procedures laid down in point I.6.
Podrobné diagnostické metody a postupy za účelem dozoru nad KHV
Virus detection by RT-qPCR
Při odběru vzorků a laboratorním vyšetření za účelem získání nebo zachování určitého nákazového statusu, pokud jde o KHV, podle přílohy I části 2 oddílu I pomocí diagnostických metod stanovených v části 2 oddílu II nebo III uvedené přílohy se použijí podrobné diagnostické metody a postupy stanovené v následujících bodech II.1 a II.2 této části.
The selection of samples for the purpose of virus detection by RT-qPCR shall follow the methods and procedures laid down in point I.1.2.
Je-li to možné, odeberou se vzorky z ryb, které byly delší dobu chovány v teplotním rozmezí příznivém pro virus, a to dva až tři týdny při teplotě 15 °C až 26 °C.
The preparation and shipment for the purpose of virus detection by RT-qPCR shall follow the methods and procedures laid down in point I.2.
Je-li to možné, odeberou se vzorky do 24 hodin, nejpozději však do 72 hodin, od provedení řídicích postupů, které mohou opět aktivovat virus u ryby se statusem přenašeče, jako je odlov do sítí nebo přeprava, tak aby se zvýšila pravděpodobnost zjištění KHV.
The collection of supplementary diagnostic material for the purpose of virus detection by RT-qPCR shall follow the methods and procedures laid down in point I.3.
Pro účely dozoru nad KHV lze ryby zaslat živé či usmrcené a samostatně zabalené v utěsněných aseptických nádobách nebo lze k vyšetření metodami založenými na PCR použít zmrazené orgány nebo části orgánů konzervované v 80 % až 100 % ethanolu či virovém transportním médiu (je pak nutno je zpracovat do 48 hodin od odběru).
Sample preparation for RT-qPCR
Pro účely dozoru nad KHV se odebere tkáň ze žaber a ledvin.
The sample preparation for the purpose of virus detection by RT-qPCR shall follow the methods and procedures laid down in point I.6.4.1.
Pro účely dozoru nad KHV je nezbytné pokud možno zabránit smísení vzorků.
The virus detection by RT-qPCR shall follow the methods and procedures laid down in points I.6.4.1, I.6.4.3 and I.6.4.4.
Je-li to nezbytné, lze smísit tkáňový materiál maximálně ze dvou ryb.
Other diagnostic techniques
Větší vzorky se homogenizují pomocí třecí misky a paličky nebo stomacheru a dílčí vzorky odebrané pro účely extrakce DNA před klarifikací.
Supernatant prepared as described in point I.4.3 may be submitted to ELISA, Indirect fluorescent antibody test (IFAT), or RT-PCR in accordance with point I.6.1, point I.6.2 or point I.6.4 respectively.
Dílčí vzorky lze alternativně odebrat z každé tkáně zařazené do vzorku do lyzačních zkumavek.
Tissue material may be subjected to other diagnostic techniques, such as IFAT on frozen sections, immunohistochemistry on formalin fixed tissue material.
Lze použít komerčně dostupné sady k extrakci DNA, kterými se získá vysoce kvalitní DNA vhodná k použití s protokoly PCR popsanými v bodě II.2.
Those rapid techniques shall be supplemented with a virological examination in accordance with either point II(a) or point II(b) within 48 hours after sampling, if:
Přijatelný poměr mezi tkání a médiem činí 1 hmotnostní díl v 9 objemových dílech.
a negative result is obtained; or
Předmětem vyšetření je 20 až 25 mg tkáňového materiálu.
a positive result is obtained with material representing the first case of IHN or VHS.
2 Dozor nad KHV pomocí metod založených na PCR
Procedure for titration to verify the susceptibility of the cell cultures to infection
Pro účely dozoru nad KHV se použije qPCR.
When titration to verify the susceptibility of the cell cultures to infection as referred to in point I.5.3 is carried out, the procedures set out in the following paragraphs of this point shall be followed.
Vyskytnou-li se pozitivní vzorky v oblasti, jež dříve jako pozitivní potvrzena nebyla, musí být výsledky vyšetření potvrzeny buď:
At least two VHSV isolates and one isolate of IHNV shall be used.
sekvenováním produktu PCR nebo „zahnízděné“ (nested) PCR ze vzorků.
The isolates shall represent the major group of viruses within the European Union, namely for VHSV one pathogenic isolate from rainbow trout in freshwater and one marine isolate pathogenic for turbot, and for IHNV one rainbow trout pathogenic strain from the European Union.
Získaná čistá konsenzuální sekvence musí (v rozsahu nejméně 98 %) odpovídat těmto referenčním sekvencím.
Well-defined isolates from the Member States shall be used.
nebo alternativně lze vzorky zaslat k potvrzení do národní referenční laboratoře.
Batches of virus in low cell culture passage numbers shall be propagated in cell culture flasks on BF-2 or RTG-2 cells for VHSV and on EPC or FHM cells for IHNV.
qPCR ke zjištění KHVV
Cell culture medium with at least 10 % serum shall be used.
Použije se qPCR odpovídající tomuto popisu:
Low MOI for inoculation (< 1) shall be used.
Podmínky cyklování: 15 minut při 95 °C; následovaný 50 cykly: 15 sekund při 94 °C a 60 sekund při 60 °C.
At total CPE, the virus shall be harvested by centrifugation of cell culture supernatant at 2000 × g for 15 minutes, filter sterilised through 0,45 μm membrane filter and distributed in labelled cryotubes.
Výsledky qPCR se mohou lišit v závislosti na podmínkách, za kterých se provádí, konkrétně může být v závislosti na používaném termocykleru zapotřebí optimalizovat teplotní protokol.
The virus shall be kept at – 80 °C.
Běžná reakce PCR za účelem potvrzení zjištěné přítomnosti KHV
1 week after freezing, three replicate vials with each virus shall be thawed under cold water and titrated on their respective cell lines.
Pro účely potvrzení přítomnosti infekce KHV se použije standardní „zahnízděná“ (nested) PCR popsaná v tabulce 2.1 níže, přičemž poté následuje sekvenování amplifikovaného produktu.
At least every 6 months, or if it is suspected that the susceptibility of a cell line has decreased, each virus isolate shall be thawed and titrated.
Tabulka 2.1
Titration procedures must be described in detail and the same procedure followed each time.
Primery a podmínky testu „zahnízděné“ (nested) PCR zaměřeného na všechny typy herpesviru kaprovitých ryb (CyHV-1, CyHV-2 a CyHV-3).
Titration by end point dilution shall include at least six replicates at each dilution step.
Název primeru
The titres shall be compared with previously obtained titres.
Sekvenování
If the titre of any of the three virus isolates drops by a factor of 2 logs or more, compared with the initial titre, the cell line shall no longer be used for surveillance purposes.
Podmínky cyklování
If different cell lines are kept in the laboratory each line shall be examined separately.
Velikost produktu
Records shall be kept for a period of at least 10 years.
CyHVpol – přímý
DETAILED DIAGNOSTIC METHODS AND PROCEDURES FOR THE SURVEILLANCE AND CONFIRMATION OF KHV DISEASE (KHVD)
1 cyklus:
When a laboratory examination is required for the purpose of confirmation of the presence of or to rule out the suspicion of KHVD in accordance with Article 57(b) of Directive 2006/88/EC, using the diagnostic methods set out in Section III of Part 2 of Annex I, the detailed diagnostic methods and procedures set out in points I.1 – I.2 of this Part shall apply.
2 minuty při 95 °C
Preparation of samples from fish
40 cyklů:
For diagnostic purposes the fish (sent alive or killed and packed separately in sealed aseptic containers) or alternatively frozen organs or organ pieces preserved in 80 % to absolute ethanol or viral transport medium (to be processed within 48 hours after collection) may be used for testing with conventional PCR or qPCR based methods.
30 sekund při 95 °C
For the detection of KHV, gill and kidney shall be collected; in addition spleen, encephalon and intestine may be included in an additional separated sample.