natgillin/translations-raw huggingface dataset:
První jamka se naočkuje 100 μl zásobního preparátu ISAV (s minimálním titrem infekční dávky tkáňové kultury v 50 % koncovém bodu (TCID50 ml– 1) v hodnotě 107) a promíchá se.
However, a one-step reaction, where the two reactions are run in one tube, may also be performed.
Objem této látky v první jamce se přenese do druhé, naředí se v poměru 1: 10 a promíchá se.
The one-step method shall be used where possible, as the one tube assay minimises the risk of cross-contamination as no transfer of content have to be made and it is regarded to be as sensitive as the two-step method.
Tento postup se opakuje u každé jamky na destičce, přičemž se vytvoří šest desetiprocentních roztoků.
The primers and assay described in this point, namely the ILA1 or ILA2 primer pair that target segment 8 and which have been found suitable for detection of ISAV in outbreaks and in carrier fish, shall be used.
Zásobu ISAV lze skladovat při teplotě – 80 °C po dobu minimálně dvou let, avšak po rozmrazení musí být použita do tří dní.
The ILA2 reverse primer does not match isolates from North America and an alternative primer set shall be used in those cases.
Je třeba dávat pozor na to, aby se zabránilo křížové kontaminaci mezi testovacími destičkami a materiálem pozitivního kontrolního vzorku.
Forward primer (ILA1): 5′-GGCTATCTACCATGAACGAATC-3′;
Aby se toto nebezpečí vyloučilo, je třeba pozitivní kontrolní vzorky zpracovávat a ošetřovat odděleně od testovacích destiček.
Reverse primer (ILA2): 5′-GCCAAGTGTAAGTAGCACTCC-3′.
Použití pozitivního kontrolního vzorku při každém očkování lze nahradit tím, že se každých šest měsíců provede test citlivost buněk ASK vůči izolátům ISAV.
Cycling conditions: one cycle of 50 °C for 30 minutes, 1 cycle of 94 °C for 15 minutes, 40 cycles of 94 °C for 30 seconds, 55 °C for 30 seconds, 72 °C for 60 seconds; one cycle of 72 °C for 5 min.
Vzorky se inkubují při teplotě 15 ± 2 °C po dobu až 15 dní.
Product size 155 bp.
Ke zjištění CPE se buněčné kultury dvakrát vyšetří pod mikroskopem: nejprve mezi pátým a sedmým a poté mezi dvanáctým a čtrnáctým dnem po naočkování.
However, other RT-PCR versions of proven similar efficacy may be used instead.
Pokud se u kterékoli směsi zjistí CPE, musí být okamžitě zahájeny postupy identifikace viru v souladu s bodem II.2.4.
RT-qPCR for ISAV detection
Pokud není CPE do čtrnáctého dne pozorován, provede se nepřímý imunofluorescenční test (IFAT), hemadsorpční test nebo RT-PCR.
The use of RT-qPCR may increase specificity and probably also sensitivity.
Subkultivace se provádí od třináctého do patnáctého dne.
The method can be performed more rapidly as no gel electrophoresis step is required and it reduces the risk of cross contamination as it is possible to estimate the amount of viral genomic RNA within the sample tube.
Do jamek obsahujících mladé, aktivně rostoucí buněčné kultury se přidá supernatant kultury ve vhodném (10 %) roztoku na destičkách s více jamkami a inkubuje se při teplotě 14 ± 2 °C po dobu 18 dní.
A drawback of the RT-qPCR assay is that it is often not possible to sequence amplified products.
Ke zjištění CPE se buněčné kultury dvakrát vyšetří pod mikroskopem: nejprve mezi pátým a sedmým a poté mezi čtrnáctým dnem a osmnáctým dnem po naočkování.
However, if there is doubt on the specificity of the amplified product, another ISAV specific assay must be run to verify the result.
Pokud není CPE do čtrnáctého až osmnáctého dne pozorován, provede se hemadsorpční test nebo test RT-PCR.
The assay described in this point, which is an assay that target segment 8, shall be used.
Pokud je během prvních sedmi dní po inkubaci zjištěna cytotoxicita, provede se subkultivace tak, že se buňky nechají inkubovat po dobu 14 až 18 dní a pak se provede nová subkultivace, která trvá dalších 14 až 18 dní.
This assay shall cover isolates from the European Union, the European Free Trade Association and North America.
Pokud se objeví cytotoxicita po sedmi dnech, nechají se buňky inkubovat tak, aby se dospělo k celkové době 28 až 36 dní inkubace od prvotního naočkování.
The one-step method shall be used where possible, because the one tube assay minimises the risk of cross-contamination.
Pokud se v prvotní kultuře objeví bakteriální kontaminace, musí se vyšetření opakovat, a to za použití homogenátu tkáně skladovaného při teplotě – 80 °C.
Forward primer: 5′- CTACACAGCAGGATGCAGATGT -3′;
Před naočkováním se homogenát tkáně odstřeďuje při 4000 × g po dobu 15 až 30 minut za teploty 0 až 6 °C a supernatant se filtruje filtrem s póry o velikosti 0,22 μm.
Reverse primer: 5′- CAGGATGCCGGAAGTCGAT -3′;
Pokud se bakteriální kontaminace objeví během subkultivačního stupně, na povrchu plovoucí vrstva se filtruje na 0,22 μm, naočkuje se do čerstvých buněk a nechá se inkubovat po dalších 14 až 18 dní.
and probe: 5′-FAM- CATCGTCGCTGCAGTTC – MGBNFQ-3′.
Vyšetření k identifikaci viru
Cycling conditions: one cycle of 50 °C for 30 minutes, one cycle of 95 °C for 15 minutes, 40 cycles of 94 °C for 15 seconds, 60 °C for 60 seconds; it shall be adjusted if necessary.
Pokud jsou v kterémkoliv stádiu pozorovány důkazy CPE nebo pokud je výsledek hemadsorpčního testu pozitivní, provede se identifikace viru.
Sequencing of amplified PCR products
Obvyklými metodami k identifikaci ISAV je RT-PCR v souladu s bodem II.1 a imunofluorescence (IF) v souladu s bodem II.2.6.
Forward primer (ILAs6-3F): 5′-ATGAGGGAGGTAGCATTGCA -3′;
Pokud se předpokládá přítomnost dalších virů, musí být k identifikaci viru provedena doplňková vyšetření.
Reverse primer (ILAs6-2R): 5′-CATGCTTTCCAACCTGCTAGGA -3′.
Nevedou-li tato vyšetření do jednoho týdne ke konečné identifikaci viru, předá se supernatant k okamžité identifikaci:
Cycling conditions (One-step RT-PCR): one cycle of 50 °C for 30 minutes, one cycle of 94 °C for 15 minutes, 40 cycles of 94 °C for 30 seconds, 55 °C for 30 seconds, 72 °C for 60 seconds, one cycle of 72 °C for 5 minutes; it shall be adjusted if necessary.
referenční laboratoři pro ISA Světové organizace pro zdraví zvířat (OIE); nebo
Alternatively, the following method for sequencing HPR in segment 6 may be used:
národní referenční laboratoři či referenční laboratoři EU pro nákazy ryb v souladu s přílohou VI směrnice 2006/88/ES.
Forward primer: 5′-GAC-CAG-ACA-AGC-TTA-GGT-AAC-ACA-GA-3′;
Hemadsorpce
Reverse primer: 5′-GAT-GGT-GGA-ATT-CTA-CCT-CTA-GAC-TTG-TA-3′;
Replikace ISAV v buněčných kulturách nevede vždy k CPE, a proto musí být u každé jamky proveden test RT-PCR nebo hemadsorpční test v souladu s tímto bodem nebo imunofluorescenční test v souladu s bodem II.2.6.
Product size: 304 nt if HPR0.
Z každé jamky, včetně jamek s pozitivními a negativními kontrolními vzorky, se odebere kultivační médium a umístí se do označených sterilních zkumavek.
RT-PCR assays with similar sensitivities and specificities to the assays described in this point may also be used.
Do každé jamky se přidá 500 μl 0,2 % roztoku (obj./obj.) omytých červených krvinek králíka nebo koně nebo 0,05 % roztok (obj./obj.) omytých červených krvinek pstruha duhového nebo lososa obecného a nechá se inkubovat za pokojové teploty po dobu 45 minut.
The purity of the amplified RT-PCR product shall be checked by gel electrophoresis before sequencing.
Červené krvinky se odstraní a každá jamka se dvakrát opláchne médiem L-15.
If only one pure fragment appears, it shall be purified directly from the PCR reaction.
Každá jamka se vyšetří pod mikroskopem.
If multiple amplified fragments are present, the fragment of interest shall be purified by gel electrophoresis.
Přítomnost shluků červených krvinek přichycených na povrchu buněk ASK je třeba považovat za známku podezření na infekci orthomyxovirem.
The purification of PCR fragments from solutions or agarose gels shall be made using PCR fragment affinity spin columns, according to the manufacturer's instructions.
Pokud je hemadsorpční test pozitivní, musí být okamžitě provedeno vyšetření k identifikaci viru v souladu s bodem II.2.4.
Sequencing shall be performed using amplification primers at external specialised sequencing companies.
Imunofluorescence (IF)
The results shall be analysed with the search tool BLAST and the sequences shall be compared with other known sequences in the US National Centre for Biotechnical Information (NCBI) nucleotide database.
Buňky ASK (subkultivační číslo 65 nebo nižší) se kultivují v médiu L-15 s 10 % fetálním bovinním sérem, 2 % (obj./obj.) 200mM L-glutaminem a 0,08 % (obj./obj.) 50mM 2-merkaptoetanolem na destičkách s více jamkami, přičemž se použijí při konfluenci přesahující 50 %.
Sequencing must eliminate any doubt on the specificity of an amplified RT-PCR product.
Lze použít i jiné buněčné linie nebo jiná kultivační média, jejichž účinnost byla prokázána.
ISAV isolation on cell cultures
Do dvou jamek se vždy přidá 225 μl supernatantu kultury, u níž se předpokládá infikace virem, jamky se promíchají a 225 μl se přenese do dvou dalších jamek, přičemž se ředí 1: 5.
Preparation of samples
Dvě další nenaočkované jamky poslouží jako kontrolní vzorky.
The tissue may be kept at – 80 °C.
Se vzorky z každého hospodářství s chovem ryb se pracuje na samostatných destičkách, podobně jako s kontrolními vzorky viru.
The tissue shall only be frozen and thawed once before examination.
Kontrolní vzorek viru se vytvoří za použití referenčního izolátu ISAV.
For surveillance and control purposes, the examination shall be undertaken as fast as possible.
Destičky se inkubují při teplotě 14 ± 2 °C a vyšetřují pod mikroskopem po dobu až sedmi dní.
Each sample (tissue pool in transport solution) shall be completely homogenised using a validated homogeniser, centrifuged at 2000 to 4000 × g for 15 minutes at 0 to 6 °C, and the supernatant shall be filtered (0,45 μm) and incubated with an equal volume of a suitably diluted pool of antisera to the indigenous serotypes of IPNV.
Pokud se zjistí předčasný CPE nebo pokud není CPE do sedmi dnů pozorován, následuje fixace.
The titre of the antiserum must be at least 1:2000 in a 50 % plaque neutralisation test.
Jamky se opláchnou fosfátovým pufrem s chloridem sodným (PBS) a fixují se inkubací s 80 % acetonem po dobu 20 minut při pokojové teplotě.
The mixture shall be incubated for one hour at 15 °C.
Destičky se usuší na vzduchu a neprodleně obarví nebo se před obarvením maximálně po 24 hodin při teplotě 0 až 6 °C skladují.
This shall represent the inoculum.
Jamky (postup probíhá ve více replikacích) se obarví směsí monoklonálních protilátek ISAV (MAb) 3H6F8 a 1OC9F5 nebo jinou monoklonální protilátkou, jejíž účinnost a specifičnost byla prokázána, naředí se PBS a inkubují při teplotě 37 ± 4 °C po dobu 30 minut.
Treatment of all inocula with antiserum to Infectious pancreatic necrosis virus (a virus which in some parts of the Europe occurs in 50 % of fish samples) aims at preventing cytopatic effect (CPE) due to IPN virus from developing in inoculated cell cultures.
MAb se odstraní a destičky se třikrát opláchnou 0,05 % roztokem Tween 20 v PBS.
To reduce the duration of the virological examinations as well as the number of cases in which occurrence of CPE would have to be considered potentially indicative of ISAV, such treatment may be carried out.
Do každé jamky se přidá konjugát anti-myšího IgG a fluorescein-isothiokyanátu (FITC) ředěný v PBS a inkubuje se při teplotě 37 ± 4 °C po dobu 30 minut.
When samples come from production units which are considered free from IPN, the treatment of inocula with antiserum to IPN virus may be omitted.
Roztoky různých dávek MAb a konjugátu FITC se v každé laboratoři optimalizují.
Inoculation on cell cultures
Protilátka se odstraní a destičky se třikrát opláchnou 0,05 % roztokem Tween 20 v PBS.
Atlantic salmon kidney (ASK) cells shall be used for primary ISAV isolation.
Replikační jamky se neprodleně vyšetří za použití inverzního mikroskopu zařízeného k fluorescenční mikroskopii s vhodným filtrem upraveným k excitaci FITC.
Other cell lines of proven efficacy and sensitivity in isolating ISAV may be used, taking into consideration strain variability and the ability of different strains to replicate in different cell lines.
Test se považuje za pozitivní, pokud jsou pozorovány fluorescenční buňky.
The ASK cells seem to support isolation and growth of the hitherto known virus isolates, as long as a low passage level is used.
Aby test byl platný, musí být pozitivního výsledku dosaženo také u kontrolních pozitivních vzorků a u negativních vzorků musí být dosaženo výsledku negativního.
A more distinct cytopathic effect (CPE) may appear in ASK cells than in other susceptible cell lines like SHK-1 (Salmon head kidney-1).
3 Vyšetření jiných tkání
ASK (pass 65 or lower) cells shall be grown in L-15 medium containing 10 % foetal bovine serum, 2 % (vol:vol) 200 mM L-glutamine, and 0,08 % (vol:vol) 50 mM 2-mercaptoethanol in multi-well plates.
Technika uvedená v bodě II.2.6 se může použít i na jiné tkáně ryb, například na játra, slezinu a srdce, a to za podmínky, že na sklíčko se podaří uložit dostatečné množství endotelových buněk, leukocytů nebo lymfocytů.
Antiserum-treated organ suspension shall be inoculated into young actively growing cell cultures to give a final dilution of tissue material to culture medium of 1:1000.
Obarvení probíhá u každé tkáně totožně, avšak u některých tkání může být vhodnější nepoužívat značení propidiumiodidem a upřednostnit k identifikaci typů buněk přítomných v otisku fázové osvětlení.
For each organ, suspension 40 μl of inoculum shall be added to one well containing 2 ml of culture medium.
4 Histologie
To minimise the risk of cross-contamination, separate 12- or 24-well plates shall be used for samples from different fish farm sites.
Řezy zalité do parafínu se nakrájí na kousky o velikosti 5 μm a obarví hematoxylinen a eosinem.
One plate shall be left uninoculated to serve as a negative control.
Histologické změny u klinicky nemocného lososa obecného jsou různé, jejich součástí však mohou být:
A separate plate shall be inoculated with a reference isolate of ISAV as a positive control, as follows.
četné erytrocyty v centrálním žilním splavu a lamelózních kapilárách žaber, přičemž se mohou tvořit také shluky erytrocytů;
One hundred μl of a stock preparation of ISAV (minimum titre 107 Tissue culture infective dose at the 50 % end point (TCID50 ml– 1)) shall be inoculated into the first well and mixed.
multifokální nebo splývající petechie nebo nekróza hepatocytů případně obojí dohromady v určité vzdálenosti od velkých cév v játrech; multifokální nahromadění erytrocytů v dilatovaných jaterních sinusoidách;
A volume of this material shall be transferred from the first well to the second well to make a 1:10 dilution and mixed.
nahromadění erytrocytů v krevních cévách v lamina propria ve střevech a případně i krvácení do lamina propria;
This shall be repeated across the plate to make six 10-fold dilutions.
stroma sleziny rozšířené v důsledku nahromadění erytrocytů;
Stock ISAV may be stored at – 80 °C for at least 2 years but once thawed must be used within 3 days.
lehce multifokální až značně rozšířené intersticiální krvácení s tubulární nekrózou v oblastech krvácení, nahromaděním erytrocytů v glomerulech v ledvinách;
Care shall be taken to prevent cross-contamination of test plates with positive control material.
erytrofagocytóza ve slezině a sekundární krvácení jater a ledvin.
To avoid that risk, positive controls shall be set up and handled separately from test plates.
5 Imunohistochemie (IHC)
A sensitivity test every 6 months of ASK cells towards ISAV isolates may replace the use of including a positive control at each inoculation.
Použije se polyklonální protilátka proti nukleoproteinu ISAV na řezech z tkáně fixované formalinem zalitých do parafínu.
Samples shall be incubated at 15 ± 2 °C for up to 15 days.
Orgány, které mají být vyšetřeny, jsou prvoledvina a srdce (přechodová oblast zahrnující všechny tři komory a chlopně).
Using a microscope, cell cultures shall be examined for CPE twice, between 5 to 7 and 12 to 14 days following inoculation.
Případy, u kterých existuje vzhledem k patologickým příznakům podezření, se ověří pozitivní IHC.
If any pool shows CPE, virus identification procedures shall be initiated immediately in accordance with point II.2.4.
Histologické řezy se připraví podle standardních metod.
If no CPE is observed by day 14, an Indirect fluorescent antibody test (IFAT), haemadsorption or RT-PCR shall be performed.
Příprava tkáňových řezů
Subcultivation shall be carried out between days 13 to 15.
Tkáně se fixují v neutrálním, fosfátem pufrovaném 10 % roztoku formalinu po dobu nejméně jednoho dne, dehydratují se ve stupňované etanolové řadě, vyčistí se v xylenu a zalijí se do parafínu v souladu se standardními protokoly.
Culture supernatant shall be added to wells containing fresh actively growing cells in appropriate dilution (1/10) in multi-well plates and incubated at 14 ± 2 °C for up to 18 days.
Přibližně 5 μm silné řezy (v případě IHC umístěných na sklíčku pokrytém poly-L-lysinem) se na dobu 20 minut zahřejí na teplotu 56 °C až 58 °C (maximálně 60 °C), odparafínují se v xylenu, rehydratují se ve stupňované etanolové řadě a obarví se hematoxylinem a eosinem pro účely patomorfologie a IHC v souladu s bodem 2.
Using a microscope, cell cultures shall be examined for CPE twice, between days five to seven and days 14 to 18 following inoculation.
Obarvování pro účely IHC
If no CPE is observed by days 14 to 18, a haemadsorption or an RT-PCR test shall be performed.
Není-li v tomto rozhodnutí stanoveno jinak, provedou se veškeré inkubace při pokojové teplotě na třepačce:
If cytotoxicity occurs within the first 7 days of incubation, subcultivation shall be performed at that stage, and the cells shall be incubated for 14 to 18 days and sub cultivated again with a further period of 14 to 18 days incubation.
antigen se získá tak, že se řezy vaří v 0,1 M citrátového pufru pH 6,0 po dobu 2 × 6 minut, následuje blokování za pomoci 5 % netučného sušeného mléka a 2 % kozího séra v 50 mM TBS (TBS; Tris/HCl 50 mM, NaCl 150 mM, pH 7,6) po dobu 20 minut;
If cytotoxicity occurs after 7 days, subcultivation shall be performed once and the cells shall be incubated to achieve the total period of 28 to 36 days incubation from the primary inoculation.
řezy se poté přes noc inkubují pomocí primární protilátky (monospecifická králičí protilátka proti nukleoproteinu ISAV) ředěné v TBS za pomoci 1 % netučného sušeného mléka, poté se třikrát opláchnou v TBS s 0,1 % Tween 20;
If bacterial contamination occurs in the primary culture, the test shall be set up again using the tissue homogenate stored at – 80 °C.
za účelem zjištění vázaných protilátek se řezy inkubují za pomoci protilátek konjugovaných alkalickou fosfatázou proti králičímu IgG po dobu 60 minut.
Prior to inoculation, the tissue homogenate shall be centrifuged at 4000 × g for 15 to 30 minutes at 0 to 6 °C and the supernatant shall be filtered at 0,22 μm.
Po posledním opláchnutí se přidá Fast Red (1 mg ml– 1) a naftol AS-MX fosfát (0,2 mg ml– 1) s 1 mM Levamisolu v 0,1 M TBS (pH 8,2) a nechá se po 20 minut reagovat.
If bacterial contamination occurs during the subcultivation step the supernatant shall be filtered at 0,22 μm, inoculated onto fresh cells and incubated for a further 14 to 18 days.
Řezy se následně opláchnou kohoutkovou vodou, kontrastně se obarví Harrisovým hematoxylinem a montují se do montovacího média rozpustného ve vodě.
Virus identification tests
Součástí každé testové sestavy musí být kontrolní vzorky tkáňových řezů pozitivních a negativních na ISAV.
If evidence of CPE is observed at any stage, or if a haemadsorption test is positive, virus identification shall be carried out.
Interpretace výsledků imunohistochemické analýzy (IHC)
The methods of choice for the identification of ISAV shall be RT-PCR in accordance with point II.1 and Immunofluorescence (IF) in accordance with point II.2.6.
Interpretace výsledků testu IHC je stanovena v písmenech a) a b):
If it is considered that other viruses may be present, supplementary virus identification tests shall be carried out.
kontrolní řezy se považují za pozitivní, pokud je pozorováno, že mají zřetelně viditelné červené (načervenalé) cytoplazmatické a intranukleární zabarvení endoteliálních buněk v krevních cévách endokardu.
If those tests have not resulted in a definitive identification of the virus within 1 week, the supernatant shall be forwarded for immediate identification to:
Řez testovaného vzorku se považuje za pozitivní pouze tehdy, pokud se zjistí takovéto zřetelné intranukleární červené zabarvení endoteliálních buněk;
the World Organisation for Animal Health (OIE) reference laboratory for ISA, or;
kontrolní řezy se považují za negativní, pokud nevykazují žádné významné barevné reakce.
a national reference laboratory or the EU reference laboratory for fish diseases as referred to in Annex VI to Directive 2006/88/EC.
Intranukleární lokalizace je specifická v případě nukleoproteinu orthomyxoviru ve fázi replikace viru, ale souběžné cytoplazmatické zabarvení je často dominantní.
Haemadsorption
Cytoplazmatické zabarvení a další barevné struktury při absenci intranukleární lokalizace je třeba považovat za nespecifické či neprůkazné.
As replication of ISAV in cell cultures does not always result in a CPE, every well shall be subject to an RT-PCR test or a haemadsorption test in accordance with this point, or an IF test in accordance with point II.2.6.
K nejsilnějším pozitivním barevným reakcím dochází zpravidla u endoteliálních buněk srdce a ledvin.
Cell culture medium shall be removed from each well, including those of positive and negative controls, and placed in labelled sterile tubes.
Barevné reakce u endoteliálních buněk v rámci velmi rozsáhlých hemoragických lézí mohou být slabé nebo k nim nemusí dojít vůbec, zřejmě z důvodu lýzy infikovaných endoteliálních buněk.
500 μl of a 0,2 % (vol:vol) suspension of washed rabbit or horse red blood cells, or a 0,05 % (vol:vol) suspension of washed rainbow trout or Atlantic salmon red blood cells, shall be added to each well and incubated at room temperature for 45 minutes.
PODROBNÉ DIAGNOSTICKÉ METODY A POSTUPY ZA ÚČELEM DOZORU NAD INFEKCÍ MARTEILIÓZOU (MARTEILIA REFRINGENS) A JEJÍHO POTVRZENÍ
The red blood cells shall be removed and each well shall be washed twice with L-15 medium.
I.
Each well shall be examined using a microscope.
Podrobné diagnostické metody a postupy za účelem diagnostiky infekce marteiliózou (Marteilia refringens)
The presence of clusters of red blood cells attaching to the surface of ASK cells shall be indicative of presumptive infection with an orthomyxovirus.
Při odběru vzorků a laboratorním vyšetření za účelem získání nebo zachování nákazového statusu, pokud jde o infekci Marteilia refringens, podle přílohy I části 4 oddílu I, nebo za účelem potvrzení či vyloučení výskytu této nákazy uvedené na seznamu v souladu s čl. 57 písm. b) směrnice 2006/88/ES pomocí diagnostických metod stanovených v příloze I části 4 oddíle II se použijí podrobné diagnostické metody a postupy stanovené v bodech I.1, I.2 a I.3 této části.
If a haemadsorption test is positive, a virus identification test shall be performed immediately in accordance with point II.2.4.
K odběru vzorků se přednostně použijí jednotliví rozevření nebo čerstvě uhynulí měkkýši, aby se zvýšila pravděpodobnost nalezení infikovaných živočichů.
Immunofluorescence (IF)
Po odebrání se vzorky ústřic a slávek uchovávají při teplotě 4 °C nebo na chlazeném ledu v plastovém sáčku se štítkem, na němž jsou uvedeny údaje o vlastnostech a původu ústřic nebo slávek, a to po dobu maximálně 24 hodin v případě, že obsahují rozevřené měkkýše, a po dobu maximálně 72 hodin v případě, že je neobsahují.
ASK (pass 65 or lower) shall be grown in a L-15 medium containing 10 % foetal bovine serum, 2 % (vol:vol) 200 mM L-glutamine, and 0,08 % (vol:vol) 50 mM 2-mercaptoethanol in multi-well plates and used at greater than 50 % confluence.
Rozevření nebo čerstvě uhynulí měkkýši se uchovávají odděleně od ostatních měkkýšů.
Other cell lines or growth medium of proven efficacy may also be used.
Pro účely histologického diagnostikování Marteilia refringens se použije 3 až 5 mm silný řez zahrnující tkáň ze žaber a srdce.
225 μl of putative virus-infected culture supernatant shall be added to each of two wells, mixed and 225 μl transferred to two further wells, namely a 1:5 dilution.