natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Při použití výsledku zkoušky pro legislativní účely není vyžadováno sekvenování DNA mutací, obzvláště pak tam, kde bylo dosaženo jasného pozitivního nebo negativního výsledku.
Liver, lung
Údaje o sekvenování však mohou být užitečné při pozorování rozdílu mezi jedinci.
Bone marrow, colon, colonic epithelium, intestine, liver, lung, spleen, kidney, ovarian granulosa cells, male germ cells
V těchto případech lze sekvenování použít k vyloučení možnosti vzniku jackpotů nebo klonálních událostí identifikací podílu jedinečných mutací z konkrétní tkáně.
Ethyl carbamate (urethane)
Sekvenování přibližně 10 mutací na tkáň a zvíře by mělo být dostatečné pro jednoduché určení, zda klonální mutace přispívají k četnosti mutací.
[CAS No 51-79-6]
Sekvenování až 25 mutací bude možná nutné pro matematickou korekci četnosti mutací na klonalitu.
Urethane
O sekvenování mutací lze také uvažovat při zjištění malého nárůstu četnosti mutací (tj. mírné překročení hodnot kontrol bez aplikace).
Mutagen, requires metabolism but produces only weak effects
Rozdíly ve spektru mutací mezi koloniemi mutací ze zvířat, jimž je a není podávána látka, mohou podpořit rozhodnutí o mutagenním účinku (29).
Bone marrow, forestomach, small intestine, liver, lung, spleen
Spektra mutací mohou být rovněž užitečná pro formulování mechanistických hypotéz.
2,4-Diaminotoluene
Má-li být sekvenování zahrnuto do provedení studie, je třeba věnovat speciální pozornost plánování takových studií, zvláště s ohledem na počet mutací sekvenovaných na jeden vzorek, aby bylo možné dosáhnout adekvátní síly experimentu vzhledem k použitému statistickému modelu (viz odstavec 43).
[CAS No 95-80-7]
Počet a pohlaví zvířat
ethyl-m-phenylenediamine
Počet zvířat ve skupině by měl být stanoven předem tak, aby stačil k dosažení statistické síly nezbytné pro zjištění nejméně zdvojnásobení četnosti mutací.
Mutagen, requires metabolism, also positive in the Spi– assay
V jedné skupině bude minimálně pět zvířat.
Liver
Pokud ale bude statistická síla nedostatečná, počet zvířat by měl být dle potřeby zvýšen.
Benzo[a]pyrene
Zpravidla by se měli používat samci.
[CAS No 50-32-8]
Pokud jsou mezi pohlavími z hlediska toxicity nebo metabolismu výrazné rozdíly, budou požadováni samci i samice.
Benzo[def]chrysene
Doba podávání
Mutagen, requires metabolism
Na základě pozorování, že se mutace s každou aplikací akumulují, je nutný režim opakované každodenní aplikace po dobu 28 dnů.
Liver, omenta,
To je obecně považováno za přijatelné pro produkci dostatečné akumulace mutací slabými mutageny a pro poskytnutí doby expozice vhodné pro zjištění mutací v pomalu rostoucích orgánech.
Bone marrow, breast, colon, forestomach, glandular stomach, heart, liver, lung, male germ cells
Pro některá hodnocení mohou být vhodné alternativní režimy aplikace a tyto alternativní harmonogramy podávání dávek by měly být vědecky odůvodněny v plánu studie.
Negative controls
Aplikace by neměla být kratší než doba požadovaná pro úplnou indukci všech příslušných metabolizujících enzymů a kratší aplikace mohou vyžadovat několik intervalů pro odběr vzorků, přizpůsobených pro orgány s různou rychlostí růstu.
Negative controls, treated with solvent or vehicle alone, and otherwise treated in the same way as the treatment groups, should be included for every sampling time.
Veškeré dostupné informace (např. o obecné toxicitě nebo metabolismu a farmakokinetice) by každopádně měly být použity při odůvodňování plánu studie, zejména pokud se odchyluje od výše uvedených standardních doporučení.
In the absence of historical or published control data showing that no deleterious or mutagenic effects are induced by the chosen solvent/vehicle, untreated controls should also be included for every sampling time in order to establish acceptability of the vehicle control.
Ačkoli se může zvýšit citlivost, doba aplikace delší než osm týdnů by měla být jasně vysvětlena a odůvodněna, jelikož dlouhé doby aplikace mohou způsobit zjevný nárůst četnosti mutací prostřednictvím klonální expanze (29).
Verification of laboratory proficiency
Při určování rozmezí dávek lze použít netransgenní zvířata stejného kmene hlodavců.
and 2) transgene recovery from genomic DNA (e.g. packaging efficiency).
V hlavní zkoušce by s cílem získat informace o závislosti účinku na dávce měla úplná studie zahrnovat negativní kontrolní skupinu (viz odstavec 22) a minimálně tři, náležitě rozvržené úrovně dávek, ledaže byla použita limitní dávka (viz odstavec 28).
Sequencing of mutants
Nejvyšší dávka by měla být maximální tolerovaná dávka (MTD).
For regulatory applications, DNA sequencing of mutants is not required, particularly where a clear positive or negative result is obtained.
MTD je definována jako dávka vyvolávající takové známky toxicity, že vyšší dávky by vedly podle očekávání při stejném režimu dávkování k letalitě.
However, sequencing data may be useful when high inter-individual variation is observed.
Chemické látky se specifickým biologickým působením při nízkých netoxických dávkách (jako jsou hormony a mitogeny) a chemické látky, které vykazují saturaci toxikokinetických vlastností, mohou představovat výjimky z kritérií stanovení dávek a každý případ by měl být hodnocen individuálně.
In these cases, sequencing can be used to rule out the possibility of jackpots or clonal events by identifying the proportion of unique mutants from a particular tissue.
Použité dávky by měly pokrývat rozpětí dané maximální a minimální toxicitou, případně nulovou toxicitou.
Sequencing approximately 10 mutants per tissue per animal should be sufficient for simply determining if clonal mutants contribute to the mutant frequency;
Limitní zkouška
sequencing as many as 25 mutants may be necessary to correct mutant frequency mathematically for clonality.
Pokud experimenty pro určení rozmezí dávek nebo stávající údaje získané u příbuzných kmenů hlodavců naznačují, že aplikace limitní dávky (viz níže) nevyvolá pozorovatelné toxické účinky,a pokud by genotoxicita nebyla očekávána na základě údajů o strukturně příbuzných chemických látkách, nemusí být úplná studie se třemi úrovněmi dávek pokládána za nutnou.
Sequencing of mutants also may be considered when small increases in mutant frequency (i.e. just exceeding the untreated control values) are found.
Pro dobu podávání v délce 28 dnů (tj. 28 každodenních aplikací) je limitní dávka 1000 mg/kg tělesné hmotnosti a den.
Differences in the mutant spectrum between the mutant colonies from treated and untreated animals may lend support to a mutagenic effect (29).
Pro dobu podávání v délce maximálně 14 dnů je limitní dávka 2000 mg/kg tělesné hmotnosti a den (harmonogramy podávání dávek odlišné od 28 každodenních aplikací by měly být vědecky odůvodněny v plánu studie, viz odstavec 26).
Also, mutation spectra may be useful for developing mechanistic hypotheses.
Podávání dávek
When sequencing is to be included as part of the study protocol, special care should be taken in the design of such studies, in particular with respect to the number of mutants sequenced per sample, to achieve adequate power according to the statistical model used (see paragraph 43).
Zkoušená chemická látka se obvykle podává nitrožaludečně žaludeční sondou nebo vhodnou intubační kanylou.
Number and Sex of Animals
Při plánování zkoušky by měl být zvážen předpokládaný způsob expozice člověka.
The number of animals per group should be predetermined to be sufficient to provide statistical power necessary to detect at least a doubling in mutant frequency.
Z tohoto důvodu mohou být přijatelné i jiné způsoby expozice (například v pitné vodě, podkožně, nitrožilně, místně, inhalací, intratracheálně, stravou nebo implantací), pokud je bude možné odůvodnit.
Group sizes will consist of a minimum of five animals;
Intraperitoneální aplikace se nedoporučuje, protože to není fyziologicky relevantní způsob expozice člověka.
however, if the statistical power is insufficient, the number of animals should be increased as required.
Maximální objem kapaliny, který může být najednou podán žaludeční sondou nebo injekčně, závisí na velikosti pokusného zvířete.
Male animals should normally be used.
Objem by neměl překročit 2 ml/100 g tělesné hmotnosti.
There may be cases where testing females alone would be justified;
Použití objemů větších než tento by mělo být odůvodněno.
for example, when testing human female-specific drugs, or when investigating female-specific metabolism.
S výjimkou dráždivých nebo žíravých chemických látek, které ve vyšších koncentracích mají obvykle navýšený účinek, měla by být variabilita aplikovaného objemu minimalizována tím, že aplikované koncentrace se nastaví tak, aby aplikovaný objem byl konstantní při všech úrovních dávek.
If there are significant differences between the sexes in terms of toxicity or metabolism, then both males and females will be required.
Doba odběru vzorků
Administration Period
Somatické buňky
Based on observations that mutations accumulate with each treatment, a repeated-dose regimen is necessary, with daily treatments for a period of 28 days.
Doba odběru vzorků je kritická proměnná, protože je určována dobou potřebnou pro fixaci mutací.
This is generally considered acceptable both for producing a sufficient accumulation of mutations by weak mutagens, and for providing an exposure time adequate for detecting mutations in slowly proliferating organs.
Toto období závisí na příslušné tkáni a zdá se, že souvisí s dobou obratu buněčné populace, přičemž kostní dřeň a střevo reagují rychle a játra jsou mnohem pomalejší.
Alternative treatment regimens may be appropriate for some evaluations, and these alternative dosing schedules should be scientifically justified in the protocol.
Pokud jsou pomalu rostoucí tkáně obzvláště důležité, pak bude možná vhodnější pozdější doba odběru vzorků, a to 28 dní následujících po 28denní době podávání.
Treatments should not be shorter than the time required for the complete induction of all the relevant metabolising enzymes, and shorter treatments may necessitate the use of multiple sampling times that are suitable for organs with different proliferation rates.
V takových případech by pozdější doba odběru vzorků nahradila třídenní dobu odběru a musela by být vědecky odůvodněna.
In any case, all available information (e.g. on general toxicity or metabolism and pharmacokinetics) should be used when justifying a protocol, especially when deviating from the above standard recommendations.
Zárodečné buňky
While it may increase sensitivity, treatment times longer than 8 weeks should be explained clearly and justified, since long treatment times may produce an apparent increase in mutant frequency through clonal expansion (29).
Zkoušky TGR jsou velmi vhodné pro studii indukce genových mutací v samčích zárodečných buňkách (7) (8) (27), kde je dobře definováno načasování a kinetika spermatogeneze (27).
Dose Levels
Nízké počty vajíček dostupných pro analýzu, dokonce i po superovulaci, a skutečnost, že v oocytu neprobíhá žádná syntéza DNA, vylučují detekci mutací v samičích zárodečných buňkách pomocí transgenních zkoušek (31).
Dose levels should be based on the results of a dose range-finding study measuring general toxicity that was conducted by the same route of exposure, or on the results of pre-existing sub-acute toxicity studies.
Doby odběru vzorků pro samčí zárodečné buňky by měly být zvoleny tak, aby byl pokryt celý rozsah exponovaných buněčných typů po celou dobu vývoje zárodečných buněk a pro buňky ve stadiu zachyceném dobou odběru byla zajištěna dostatečná expozice.
Non-transgenic animals of the same rodent strain may be used for determining dose ranges.
Progrese vývoje zárodečných buněk ze spermatogonálních kmenových buněk ve zralou spermii, která se dostane do chámovodu/ocasu nadvarletetrvá ~49 dnů u myší (36) a ~70 dnů u potkanů (34) (35).
In the main test, in order to obtain dose response information, a complete study should include a negative control group (see paragraph 22) and a minimum of three, appropriately-spaced dose levels, except where the limit dose has been used (see paragraph 28).
Po 28denní expozici s následnou třídenní dobou odběru vzorků budou akumulované spermie odebrané z chámovodu/ocasu nadvarlete (7)(8) představovat populaci buněk, které byly předmětem expozice přibližně během druhé poloviny spermatogeneze, která zahrnuje meiotické a postmeiotické období, nikoli však spermatogonální období nebo období kmenových buněk.
The top dose should be the Maximum Tolerated Dose (MTD).
Pro adekvátní odběr vzorků buněk z chámovodu/ocasu nadvarlete, které byly během období expozice spermatogonálními kmenovými buňkami, je vyžadována další doba odběru vzorků v minimální délce sedmi týdnů (myši) nebo deseti týdnů (potkani) po ukončení aplikace.
The MTD is defined as the dose producing signs of toxicity such that higher dose levels, based on the same dosing regimen, would be expected to produce lethality.
Buňky vypuzené ze semenných tubulů po režimu 28 + 3 dny zahrnují smíšenou populaci obohacenou pro všechna stadia vývoje zárodečných buněk (7) (8).
Chemicals with specific biological activities at low non-toxic doses (such as hormones and mitogens), and chemicals which exhibit saturation of toxicokinetic properties may be exceptions to the dose-setting criteria and should be evaluated on a case-by-case basis.
Všeobecné klinické pozorování by se mělo provádět nejméně jednou denně, nejlépe ve stejnou dobu (stejné doby) a s uvážením doby očekávaného maxima účinku po podání látky.
If dose range-finding experiments, or existing data from related rodent strains, indicate that a treatment regime of at least the limit dose (see below) produces no observable toxic effects,and if genotoxicity would not be expected based upon data from structurally related chemicals, then a full study using three dose levels may not be considered necessary.
Zaznamenává se zdravotní stav zvířat.
For an administration period of 28 days (i.e. 28 daily treatments), the limit dose is 1000 mg/kg body weight/day.
Nejméně dvakrát denně by měla být provedena prohlídka všech zvířat za účelem zjištění morbidity a mortality.
For administration periods of 14 days or less, the limit dose is 2000 mg/kg/body weight/day (dosing schedules differing from 28 daily treatments should be scientifically justified in the protocol; see paragraph 26).
Všechna zvířata by měla být vážena nejméně jednou týdně a při utracení.
Administration of Doses
Měření spotřeby potravy by se mělo provádět nejméně jednou týdně.
The test chemical is usually administered by gavage using a stomach tube or a suitable intubation cannula.
Pokud je zkoušená chemická látka podávána v pitné vodě, měla by se spotřeba vody měřit při každé výměně vody a alespoň jednou týdně.
In general, the anticipated route of human exposure should be considered when designing an assay.
Zvířata, která vykazují neletální indikátory nadměrné toxicity, by měla být utracena před uplynutím doby zkoušky (23).
Therefore, other routes of exposure (such as drinking water, subcutaneous, intravenous, topical, inhalation, intratracheal, dietary, or implantation) may be acceptable where they can be justified.
Odběr tkání
Intraperitoneal injection is not recommended since it is not a physiologically relevant route of human exposure.
Mělo by být jasně definováno odůvodnění odběru tkání.
The maximum volume of liquid that can be administered by gavage or injection at one time depends on the size of the test animal.
Jelikož lze studovat indukci mutací v podstatě v jakékoli tkáni, výběr tkání, které budou odebrány, by se měl opírat o důvody, k jakému účelu má být studie provedena, a o jakékoli stávající údaje o mutagenitě, karcinogenitě nebo toxicitě týkající se šetřené chemické látky.
The volume should not exceed 2 ml/100 g body weight.
K důležitým zvažovaným faktorům by měl patřit způsob podání (na základě pravděpodobných způsobů expozice člověka), předpokládaná distribuce látky v tkáních a možný mechanismus působení.
The use of volumes greater than this should be justified.
Při absenci jakýchkoli základních informací by mělo být odebráno několik somatických tkání, které mohou být zajímavé.
Except for irritating or corrosive chemicals, which will normally reveal exacerbated effects at higher concentrations, variability in test volume should be minimised by adjusting the concentration to ensure a constant volume at all dose levels.
Ty by měly reprezentovat rychle rostoucí a pomalu rostoucí tkáně a tkáně prvního kontaktu.
Sampling Time
Kromě toho by pro případ, že bude v budoucnosti požadována analýza mutagenity zárodečných buněk, měly být ze semenných tubulů (viz odstavce 32 a 33) odebrány spermie z chámovodu/ocasu nadvarlat a vyvíjející se zárodečné buňky.
Somatic Cells
Měla by být zjištěna hmotnost orgánů a v případě větších orgánů by měly být odběry prováděny vždy ze stejného místa u všech zvířat.
The sampling time is a critical variable because it is determined by the period needed for mutations to be fixed.
Uskladnění tkání a DNA
This period is tissue-specific and appears to be related to the turnover time of the cell population, with bone marrow and intestine being rapid responders and the liver being much slower.
Tkáně (nebo tkáňové homogenáty) by se měly skladovat při teplotě – 70 °C nebo nižší a pro izolaci DNA by se měly použít do pěti let.
A suitable compromise for the measurement of mutant frequencies in both rapidly and slowly proliferating tissues is 28 consecutive daily treatments (as indicated in paragraph 26) and sampling three days after the final treatment;
Izolovaná DNA uskladněná v chladničce při teplotě 4 °C ve vhodném pufru by se měla využít pro analýzu mutací optimálně do jednoho roku.
although the maximum mutant frequency may not manifest itself in slowly proliferating tissues under these conditions.
Výběr tkání pro analýzu mutací
If slowly proliferating tissues are of particular importance, then a later sampling time of 28 days following the 28 day administration period may be more appropriate (16) (29).
Výběr tkání by měl vycházet z úvah jako:
In such cases, the later sampling time would replace the 3 day sampling time, and would require scientific justification.
způsob podání nebo místo prvního kontaktu (např. žláznatý žaludek, dochází-li k orální aplikaci, plíce, probíhá-li aplikace formou inhalace, nebo kůže, pokud byla použita místní aplikace);
Germ Cells
a 2) farmakokinetické parametry pozorované ve studiích obecné toxikologie, které ukazují na distribuci ve tkáních, retenci nebo akumulaci nebo cílové orgány pro toxicitu.
TGR assays are well-suited for the study of gene mutation induction in male germ cells (7) (8) (27), in which the timing and kinetics of spermatogenesis have been well-defined (27).
Pokud jsou studie prováděny s cílem navázat na studie karcinogenity, měly by být zváženy cílové tkáně pro karcinogenitu.
The low numbers of ova available for analysis, even after super-ovulation, and the fact that there is no DNA synthesis in the oocyte, preclude the determination of mutation in female germ cells using transgenic assays (31).
Výběr tkání pro analýzu by měl maximalizovat zjišťování účinků chemických látek, které jsou přímo působícími mutageny in vitro, které jsou rychle metabolizované, vysoce reaktivní nebo nedostatečně absorbované, nebo ty, pro které je cílová tkáň určena způsobem aplikace (6).
The sampling times for male germ cells should be selected so that the range of exposed cell types throughout germ cell development is sampled, and so that the stage targeted in the sampling has received sufficient exposure.
Nejsou-li k dispozici základní informace, a s přihlédnutím k místu kontaktu z důvodu způsobu aplikace by měla být mutagenita detekována v játrech a nejméně jedné rychle se dělící tkáni (např. žláznatý žaludek nebo kostní dřeň).
The time for the progression of developing germ cells from spermatogonial stem cells to mature sperm reaching the vas deferens/cauda epididymisis ~ 49 days for the mouse (36) and ~70 days for the rat (34) (35).
Ve většině případů lze výše uvedených požadavků dosáhnout analýzou dvou pečlivě vybraných tkání, avšak někdy budou zapotřebí tři nebo více tkání.
Following a 28-day exposure with a subsequent three day sampling period, accumulated sperm collected from the vas deferens/cauda epididymis (7)(8) will represent a population of cells exposed during approximately the latter half of spermatogenesis, which includes the meiotic and postmeiotic period, but not the spermatogonial or stem cell period.
Existují-li důvody specifického zájmu o účinky na zárodečné buňky, včetně pozitivních výsledků získaných v somatických buňkách, pak měly být mutace zjišťovány i v zárodečných buňkách.
In order to adequately sample cells in the vas deferens/cauda epididymis that were spermatogonial stem cells during the exposure period, an additional sampling time at a minimum of 7 weeks (mice) or 10 weeks (rat), after the end of treatment is required.
Metody měření
Cells extruded from seminiferous tubules after a 28 + 3 day regimen comprise a mixed population enriched for all stages of developing germ cells (7) (8).
Pro doporučené transgenní modely jsou k dispozici standardní laboratorní nebo publikované metody pro zjišťování mutací:
Sampling these cells for gene mutation detection does not provide as precise an assessment of the stages at which germ cell mutations are induced as can be obtained from sampling spermatozoa from the vas deferens/cauda epididymis (since there is a range of germ cell types sampled from the tubules, and there will be some somatic cells contaminating this cell population).
Potřeba velkého počtu sbalování pro dosažení vhodného počtu plaků může být známkou nízké kvality DNA.
However, sampling cells from seminiferous tubules in addition to spermatozoa from the vas deferens/cauda epididymis following only a 28 + 3 day sampling regimen would provide some coverage of cells exposed across the majority of phases of germ cell development, and may be useful for detecting some germ cell mutagens.
V takových případech by údaje měly být brány v úvahu obezřetně, protože mohou být nespolehlivé.
General clinical observations should be made at least once a day, preferably at the same time(s) each day and considering the peak period of anticipated effects after dosing.
Obecně je požadováno minimálně 125000 až 300000 plaků, pokud spontánní četnost mutací je v řádu 3 × 10–5 (15).
The health condition of the animals should be recorded.
U zkoušky Big Blue® lacI je důležité prokázat, že celý rozsah barevných fenotypů mutací lze zjistit zahrnutím příslušných barevných kontrol souběžných s každým nanesením.
At least twice daily, all animals should be observed for morbidity and mortality.
Tkáně a výsledné vzorky (položky) by se měly zpracovávat a analyzovat pomocí blokového přístupu, kde jsou položky z kontrolní skupiny vehikulum/rozpouštědlo, ze skupiny pozitivní kontroly (je-li použita) nebo DNA pozitivní kontroly (je-li to relevantní) a z každé experimentální skupiny zpracovány společně.
All animals should be weighed at least once a week, and at sacrifice.
Zpracování výsledků
Measurements of food consumption should be made at least weekly.
Údaje pro jednotlivá zvířata by měly být zpracovány ve formě tabulky.
If the test chemical is administered via the drinking water, water consumption should be measured at each change of water and at least weekly.
Experimentální jednotkou je zvíře.
Animals exhibiting non-lethal indicators of excess toxicity should be euthanatised prior to completion of the test period (23).
Protokol by měl obsahovat celkový počet jednotek tvořících plak (pfu) nebo jednotek tvořících kolonii (cfu), počet mutací a četnost mutací pro každou tkáň z každého zvířete.
Tissue Collection
Pokud existuje více reakcí sbalování (packaging/rescue reactions), měl by být dokumentován počet reakcí na jeden vzorek DNA.
The rationale for tissue collection should be defined clearly.
Údaje o každé jednotlivé reakci by měly být archivovány, ve zprávě stačí uvádět pouze celkové počty pfu nebo cfu.
Since it is possible to study mutation induction in virtually any tissue, the selection of tissues to be collected should be based upon the reason for conducting the study and any existing mutagenicity, carcinogenicity or toxicity data for the chemical under investigation.