natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Odstupňované dávky zkoušené chemické látky se podávají nejméně dvěma experimentálním skupinám (pro pokyny viz odstavec 33) pokusných zvířat s použitím jedné úrovně dávky na každou skupinu a dobou aplikace tři po sobě jdoucí dny v případě použití metody nezralých mláďat a nejméně tři po sobě jdoucí dny v případě metody dospělého zvířete s odstraněnými vaječníky.
The reproducibility and sensitivity of the assay for chemicals with purely anti-oestrogenic activity will be more clearly defined later on, after the test procedure has been in routine use for some time and more chemicals with this modality of action are identified.
Přibližně po 24 hodinách od poslední dávky se zvířata podrobí pitvě.
It is acknowledged that all animal based procedures will conform to local standards of animal care;
U agonistů estrogenu se posoudí střední hmotnost dělohy experimentálních skupin zvířat v porovnání se skupinou s vehikulem s cílem zjistit, zda došlo ke statisticky významnému zvýšení.
the descriptions of care and treatment set forth below are minimal performance standards, and will be superseded by local regulations such as Directive 2010/63/EU of the European Parliament and of the Council of 22 September 2010 on the protection of animals used for scientific purposes (38).
Statisticky významné zvýšení střední hmotnosti dělohy experimentální skupiny ukazuje na pozitivní reakci v této biologické zkoušce.
Further guidance of the humane treatment of animals is given by the OECD (25).
POPIS METODY
As with all assays using live animals, it is essential to ensure that the data are truly necessary prior to the start of the assay.
Při validaci byly například použity kmeny potkanů Sprague-Dawley a Wistar.
high exposure potential (Level 1 of the Conceptual Framework, Appendix 2) or indications for oestrogenicity (Level 2) to investigate whether such effects may occur in vivo;
Neměly by se používat kmeny, o kterých se ví nebo předpokládá, že mají méně reaktivní dělohu.
effects indicating oestrogenicity in Level 4 or 5 in vivo tests to substantiate that the effects were related to an oestrogenic mechanism that cannot be elucidated using an in vitro test.
Laboratoř by měla prokázat citlivost použitého kmene, jak je popsáno v odstavcích 26 a 27.
Definitions used in this test method are given in Appendix 1.
Od 30. let 20. století jsou k uterotrofní biologické zkoušce běžně používáni potkani a myši.
The Uterotrophic Bioassay relies for its sensitivity on an animal test system in which the hypothalamic-pituitary-ovarian axis is not functional, leading to low endogenous levels of circulating oestrogen.
Validační studie OECD byly prováděny pouze na potkanech na základě toho, že existuje obecná shoda, jež předpokládá, že oba druhy jsou rovnocenné, a proto by v zájmu úspory zdrojů a zvířat měl pro celosvětové ověření postačovat jeden druh.
This will ensure a low baseline uterine weight and a maximum range of response to administered oestrogens.
Ve většině studií reprodukční a vývojové toxicity je zvoleným druhem potkan.
Two oestrogen sensitive states in the female rodent meet this requirement:
Vzhledem k tomu, že u myší existuje rozsáhlá historická databáze a aby působnost zkušební metody pro provádění uterotrofní biologické zkoušky na hlodavcích byla rozšířena i na použití myší jako zkušebního druhu, byla provedena zkrácená následná validační studie na myších (16).
immature females after weaning and prior to puberty; and
V souladu s původním záměrem úspory zdrojů a zvířat byl vybrán překlenovací přístup s omezeným počtem zkoušených chemických látek, zúčastněných laboratoří a bez testování kódovaných vzorků.
young adult females after ovariectomy with adequate time for uterine tissues to regress.
Tato překlenovací validační studie ukazuje, že v případě uterotrofní biologické zkoušky na mladých dospělých myších s odstraněnými vaječníky jsou údaje získané u potkanů a myší kvalitativně i kvantitativně v souladu.
The test chemical is administered daily by oral gavage or subcutaneous injection.
To umožňuje v případech, kdy výsledek uterotrofní biologické zkoušky může předcházet dlouhodobé studii, použít v obou studiích zvířata stejného kmene a původu.
Graduated test chemical doses are administered to a minimum of two treatment groups (see paragraph 33 for guidance) of experimental animals using one dose level per group and an administration period of three consecutive days for immature method and a minimum administration period of three consecutive days for ovx-adult method.
Překlenovací přístup byl omezen na myši s odstraněnými vaječníky a zpráva neposkytuje spolehlivý soubor údajů pro ověření modelu s nezralými mláďaty, a tudíž model s nezralými mláďaty u myší se do stávající zkušební metody nezahrnuje.
The animals are necropsied approximately 24 hours after the last dose.
V některých případech tedy mohou být místo potkanů použity myši.
For oestrogen agonists, the mean uterine weight of the treated animal groups relative to the vehicle group is assessed for a statistically significant increase.
Výběr tohoto druhu je třeba zdůvodnit na základě toxikologických, farmakokinetických a/nebo jiných kritérií.
A statistically significant increase in the mean uterine weight of a test group indicates a positive response in this bioassay.
U myší mohou být nezbytné změny v testovacím postupu.
DESCRIPTION OF THE METHOD
Například spotřeba potravy na základě tělesné hmotnosti je u myší vyšší než u potkanů, a obsah fytoestrogenu v potravě by proto měl být u myší nižší než u potkanů (9)(20)(22).
Commonly used laboratory rodent strains may be used.
Veškeré postupy by měly vyhovovat místním normám péče o laboratorní zvířata.
As an example, Sprague-Dawley and Wistar strains of rats were used during the validation.
Zde uvedené popisy péče a zacházení představují minimální požadavky a budou nahrazeny místními právními předpisy, např. směrnicí Evropského parlamentu a Rady 2010/63/EU ze dne 22. září 2010 o ochraně zvířat používaných pro vědecké účely (38).
Strains with uteri known or suspected to be less responsive should not be used.
Teplota v místnosti pro pokusná zvířata by měla být 22 °C (s přibližným rozpětím ± 3 °C).
The laboratory should demonstrate the sensitivity of the strain used as described in paragraphs 26 and 27.
Relativní vlhkost by měla být minimálně 30 % a neměla by pokud možno přesáhnout 70 %, kromě doby úklidu místnosti.
The rat and mouse have been routinely used in the Uterotrophic Bioassay since the 1930s.
Cílem musí být relativní vlhkost 50–60 %.
The OECD validation studies were only performed with rats based on an understanding that both species are expected to be equivalent and therefore one species should be enough for the world-wide validation in order to save resources and animals.
Osvětlení by mělo být umělé.
The rat is the species of choice in most reproductive and developmental toxicity studies.
Mělo by se střídat 12 hodin světla a 12 hodin tmy.
Taking into consideration that a vast historical database exists for mice and thus to broaden the scope of the Uterotrophic Bioassay test method in rodents to the use of mice as test species, a limited follow-up validation study was carried out in mice (16).
Laboratorní stravu a pitnou vodu dostávají zvířata v libovolném množství.
A bridging approach with a limited number of test chemicals, participating laboratories and without coded sample testing has been selected in keeping with the original intent to save resources and animals.
Mladá dospělá zvířata lze chovat jednotlivě nebo v klecích po skupinách, maximálně tříčlenných.
This bridging validation study shows for the Uterotrophic Bioassay in young adult ovariectomised mice that, qualitatively and quantitatively, the data obtained in rats and mice correspond well with each other.
Vzhledem k nízkému věku nezralých zvířat se doporučuje chov v sociálních skupinách.
Where the Uterotrophic Bioassay result may be preliminary to a long-term study, this allows animals from the same strain and source to be used in both studies.
Je známo, že vysoká úroveň fytoestrogenů v laboratorní stravě zvyšuje hmotnost dělohy u hlodavců v míře, která může narušit uterotrofní biologickou zkoušku (13)(14)(15).
The bridging approach was limited to the OVX mice and the report does not provide a robust data set to validate the immature model, thus the immature model for mice is not considered under the scope of the current test method.
Vysoká úroveň fytoestrogenů a metabolizovatelné energie v laboratorní stravě může mít rovněž za následek časný nástup puberty, jestliže se používají nezralá zvířata.
Thus, in some cases mice may be used instead of rats.
Přítomnost fytoestrogenů vyplývá především ze zařazení produktů ze sóji a vojtěšky do laboratorní stravy a ukázalo se, že koncentrace fytoestrogenů v jednotlivých šaržích standardní laboratorní stravy je různá (23).
A rationale should be given for this species, based on toxicological, pharmacokinetic, and/or other criteria.
Důležitou proměnnou je tělesná hmotnost, neboť množství spotřebované potravy souvisí s tělesnou hmotností.
Modifications of the protocol may be necessary for mice.
Skutečná dávka spotřebovaných fytoestrogenů ze stejné stravy se proto může lišit podle druhu a podle věku (9).
For example, the food consumption of mice on a body weight basis is higher than that of rats and therefore the phyto-oestrogen content in food should be lower for mice than for rats (9)(20)(22).
U nezralých samic potkana může být spotřeba potravy na jednotku tělesné hmotnosti přibližně dvojnásobně vyšší než u mladých dospělých samic s odstraněnými vaječníky.
All procedures should conform with local standards of laboratory animal care.
U mladých dospělých myší může být spotřeba potravy na jednotku tělesné hmotnosti přibližně čtyřnásobně vyšší než u mladých dospělých samic potkana s odstraněnými vaječníky.
These descriptions of care and treatment are minimum standards and will be superseded by local regulations such as Directive 2010/63/EU of the European Parliament and of the Council of 22 September 2010 on the protection of animals used for scientific purposes (38).
Výsledky uterotrofní biologické zkoušky (9)(17)(18)(19) však ukazují, že omezené množství fytoestrogenů ve stravě je přijatelné a nesnižuje citlivost biologické zkoušky.
The temperature in the experimental animal room should be 22 °C (with an approximate range ± 3 °C).
Určitým vodítkem může být, že u nezralých samic potkana Sprague-Dawley a Wistar by úroveň fytoestrogenů ve stravě neměla přesáhnout 350 μg ekvivalentů genisteinu na gram laboratorní stravy (6)(9).
The relative humidity should be a minimum of 30 % and preferably should not exceed a maximum 70 %, other than during room cleaning.
Taková strava by měla být vhodná i při zkouškách na mladých dospělých potkanech s odstraněnými vaječníky, protože spotřeba potravy měřená na jednotku tělesné hmotnosti je u mladých dospělých nižší než u nezralých zvířat.
The aim should be relative humidity of 50-60 %.
Mají-li být použity dospělé myši s odstraněnými vaječníky nebo potkani citlivější na fytoestrogeny, musí být zváženo úměrné snížení úrovně fytoestrogenů v stravě (20).
Lighting should be artificial.
Rozdíly v dostupné metabolizovatelné energii z různé stravy navíc mohou vést k časovým posunům v nástupu puberty (21)(22).
The daily lighting sequence should be 12 hours light, 12 hours dark.
Před studií je nutný pečlivý výběr stravy bez zvýšené úrovně fytoestrogenů (jako vodítko viz (6)(9)) nebo zvýšené úrovně metabolizovatelné energie, jež mohou zkreslit výsledky (15)(17)(19)(22)(36).
Laboratory diet and drinking water should be provided ad libitum.
Pro zajištění náležité výkonnosti zkušebního systému, který laboratoř použije, jak stanoví odstavec 26 a 27, je důležité zkontrolovat oba tyto faktory.
Young adult animals may be housed individually or be caged in groups of up to three animals.
Pro jistotu by v souladu se zásadami správné laboratorní praxe (SLP) měly být z každé sady stravy podávané během studie odebrány reprezentativní vzorky pro případnou analýzu obsahu fytoestrogenů (např. v případě vysoké kontrolní hmotnosti dělohy ve srovnání s historickými kontrolami nebo nepřiměřené reakce na referenční estrogen, 17-alfa-ethinylestradiol).
Due to the young age of the immature animals, social group housing is recommended.
Vzorky by měly být analyzovány během studie nebo zmrazené na –20 °C nebo ošetřené takovým způsobem, aby se zabránilo změně složení před analýzou.
High levels of phyto-oestrogens in laboratory diets have been known to increase uterine weights in rodents to a degree enough as to interfere with the Uterotrophic Bioassay (13)(14)(15).
Některá steliva mohou obsahovat přirozeně se vyskytující estrogenní nebo antiestrogenní chemické látky (např. je známo, že kukuřičný klas ovlivňuje cykličnost u potkanů a podle všeho je antiestrogenní).
High levels of phyto-oestrogens and of metabolisable energy in laboratory diets may also result in early puberty, if immature animals are used.
Zvolené stelivo by mělo obsahovat minimální úroveň fytoestrogenů.
The presence of phyto-oestrogens results primarily from the inclusion of soy and alfalfa products in the laboratory diets and concentrations of phyto-oestrogens have been shown to vary from batch-to-batch of standard laboratory diets (23).
Příprava zvířat
Body weight is an important variable, as the quantity of food consumed is related to body weight.
Pokusná zvířata bez příznaků jakékoli choroby nebo fyzických abnormalit se náhodným výběrem rozdělí do kontrolních a experimentálních skupin.
Therefore, the actual phyto-oestrogen dose consumed from the same diet may vary among species and by age (9).
Zvířata se jednoznačně identifikují.
For immature female rats, food consumption on a body weight basis may be approximately double that of ovariectomised young adult females.
Nezralá zvířata by během aklimatizace měla být pokud možno umístěna do klecí s matkami nebo adoptivními matkami až do odstavení.
For young adult mice, food consumption on a body weight basis may be approximately quadruple that of ovariectomised young adult female rats.
Doba aklimatizace před zahájením studie by u mladých dospělých zvířat a u nezralých zvířat dodaných spolu s matkami nebo adoptivními matkami měla trvat přibližně 5 dnů.
Uterotrophic Bioassay results (9)(17)(18)(19), however, show that limited quantities of dietary phyto-oestrogens are acceptable and do not reduce the sensitivity of the bioassay.
Pokud jsou nezralá zvířata získána jako odstavená mláďata bez matek, může se stát, že dobu aklimatizace bude nutné zkrátit, jelikož podávání dávek by mělo začít bezprostředně po odstavení (viz odstavec 29).
As a guide, dietary levels of phyto-oestrogens should not exceed 350 μg of genistein equivalents/gram of laboratory diet for immature female Sprague Dawley and Wistar rats (6)(9).
Ověření odborné způsobilosti laboratoře
Such diets should also be appropriate when testing in young adult ovariectomised rats because food consumption on a body weight basis is less in young adult as compared to immature animals.
Odbornou způsobilost laboratoře lze ověřit dvěma různými způsoby:
If adult ovariectomised mice or more phyto-oestrogen-sensitive rats are to be used, proportional reduction in dietary phyto-oestrogen levels must be considered (20).
pravidelné ověřování založené na počáteční výchozí studii s pozitivní kontrolní látkou (viz odstavec 27).
In addition, the differences in available metabolic energy from different diets may lead to time shifts for the onset of puberty (21)(22).
Nejméně každých 6 měsíců – a pokaždé, když dojde ke změně, která může ovlivnit provedení studie (např. nové složení stravy, změna personálu provádějícího sekce, změna kmene nebo dodavatele zvířat apod.) – by měla být ověřena reakční schopnost zkušebního systému (modelu zvířat) pomocí vhodné dávky (na základě výchozí studie s pozitivní kontrolní látkou popsané v odstavci 27) referenčního estrogenu:
Prior to the study, careful selection is required of a diet without an elevated level of phyto-oestrogens (for guidance see (6)(9)) or metabolisable energy, that can confound the results (15)(17)(19)(22)(36).
lfa-ethinylestradiolu (číslo CAS 57-63-6)(EE).
Ensuring the proper performance of the test system used by the laboratory as specified in paragraphs 26 and 27 is an important check on both of these factors.
použití souběžných kontrol tak, že se do každé zkoušky zařadí skupina, které je podávána vhodná dávka referenčního estrogenu.
As a safeguard consistent with good laboratory practice (GLP) representative sampling of each batch of diet administered during the study should be conducted for possible analysis of phyto-oestrogen content (e.g. in the case of high uterine control weight relative to historic controls or an inadequate response to the reference oestrogen, 17 alpha ethinyl estradiol).
Jestliže systém nereaguje podle očekávání, měly by se zkušební podmínky přezkoumat a odpovídajícím způsobem upravit.
Aliquots should be analysed as part of the study or frozen at – 20 °C or in such a way as to prevent the sample from decomposing prior to analysis.
Doporučuje se, aby dávka referenčního estrogenu, která má být použita při každém postupu, byla přibližně 70 až 80 ED.
Some bedding materials may contain naturally occurring oestrogenic or antioestrogenic chemicals (e.g. corn cob is known to affects the cyclicity of rats and appears to be antioestrogenic).
Výchozí studie s pozitivní kontrolní látkou.
The selected bedding material should contain a minimum level of phyto-oestrogens.
Dříve, než laboratoř provede poprvé studii podle této zkušební metody, měla by být prokázána odborná způsobilost laboratoře zkouškou reakční schopnosti daného modelu zvířat, při které se vyvolá reakce na dávku referenčního estrogenu:
Preparation of animals
lfa-ethinylestradiolu (číslo CAS 57-63-6) (EE) s aplikací nejméně čtyř dávek.
Experimental animals without evidence of any disease or physical abnormalities are randomly assigned to the control and treatment groups.
Počet a stav zvířat
The animals should be identified uniquely.
Každá pokusná a kontrolní skupina by měla zahrnovat nejméně 6 zvířat (pro oba protokoly metody nezralých mláďat a metody dospělých s odstraněnými vaječníky).
Preferably, immature animals should be caged with dams or foster dams until weaning during acclimatisation.
Věk nezralých zvířat
The acclimatisation period prior to the start of the study should be about 5 days for young adult animals and for the immature animals delivered with dams or foster dams.
U uterotrofní biologické zkoušky s nezralými zvířaty musí být uveden den narození.
If immature animals are obtained as weanlings without dams a shorter duration of the acclimatisation period may become necessary as dosing should start immediately after weaning (see paragraph 29).
Podávání dávek by mělo začít dostatečně brzy, aby se zajistilo, že na konci podávání zkoušené chemické látky ještě nedojde k fyziologickému růstu endogenních estrogenů spojenému s pubertou.
Verification of Laboratory Proficiency
Na druhé straně existují poznatky, že velmi mladá zvířata mohou být méně citlivá.
Two different options can be used to verify laboratory proficiency:
Pro stanovení optimálního věku by každá laboratoř měla vzít v úvahu své vlastní podkladové údaje o dozrávání.
Periodic verification, relying on an initial baseline positive control study (see paragraph 27).
Podávání dávek u potkanů by mělo být ukončeno v 21. postnatální den, ale v každém případě před 25. postnatálním dnem, protože po dosažení tohoto věku se hypothalamo-hypofýzo-ovariální osa stává funkční a úroveň endogenního estrogenu může začít růst, což je doprovázeno růstem průměrné základní hmotnosti dělohy a nárůstem směrodatných odchylek ve skupinách (2)(3)(10)(11)(12).
ethinyl estradiol (CAS No 57-63-6) (EE).
Postup odstranění vaječníků
Use of concurrent controls, by including a group administered with an appropriate dose of reference oestrogen in each assay.
U samic potkana a myši (experimentální skupina a kontrolní skupina), kterým mají být odstraněny vaječníky, by k odstranění vaječníků mělo dojít mezi 6. a 8. týdnem věku.
If the system does not respond as expected, the experimental conditions should be examined and modified accordingly.
U potkanů by mezi odstraněním vaječníků a prvním dnem podávání mělo uplynout nejméně 14 dnů, aby se umožnil návrat dělohy do minimálního, stabilního výchozího stavu.
It is recommended that the dose of reference oestrogen to be used in either approach be approximately the ED70 to 80.
U myší by mezi odstraněním vaječníků a prvním dnem podávání mělo uplynout nejméně 7 dnů.
Baseline Positive Control Study — Before a laboratory conducts a study under this test method for the first time, laboratory proficiency should be demonstrated by testing the responsiveness of the animal model, by establishing the dose response of a reference oestrogen:
Jelikož pro vyvolání významné cirkulující úrovně estrogenů (3) postačí malé množství tkáně vaječníků, zvířata by před použitím měla být nejméně po pět po sobě jdoucích dnů (např. u potkanů v 10.–14. den po odstranění vaječníků) zkoušena pozorováním epiteliálních buněk získaných výtěrem z vaginy.
ethinyl estradiol (CAS No 57-63-6) (EE) with a minimum of four doses.
Pokud zvířata vykazují jakékoli příznaky, že vstupují do estru, neměla by být použita.
The uterine weight response will be compared to established historical data (see reference (5)).
Dále by při pitvě měly být zkoumány zbytky vaječníků, zda neexistují příznaky přítomnosti vaječníkové tkáně.
If this baseline positive control study does not yield the anticipated results the experimental conditions should be examined and modified.
Pokud ano, dané zvíře by nemělo být použito pro výpočty (3).
Number and condition of animals
Při zahájení postupu odstranění vaječníků je zvíře ve ventrální poloze poté, co bylo řádně anestetizováno.
Each treated and control group should include at least 6 animals (for both immature and ovx-adult method protocols).
Řez otevírající dorzo-laterální stěnu břišní by měl být přibližně 1 cm dlouhý, od středu mezi spodním okrajem žeber a hřebenem kosti kyčelní a několik milimetrů vedle bočního okraje bederního svalu.
Age of immature animals
Vaječník se vyjme z břišní dutiny a položí na aseptickou podložku.
For the Uterotrophic Bioassay with immature animals the day of birth must be specified.
Vaječník se oddělí ve spojení vejcovodu s tělem dělohy.
Dosing should begin early enough to ensure that, at the end of test chemical administration, the physiological rise of endogenous oestrogens associated with puberty has not yet taken place.
Po ujištění, že nedochází k masivnímu krvácení, by břišní stěna měla být uzavřena suturou a kůže klipsy nebo vhodným stehem.
On the other hand, there is evidence that very young animals may be less sensitive.
Místa podvazu jsou schematicky ukázány na obrázku 1.
For defining the optimal age each laboratory should take its own background data on maturation into consideration.
Mělo by být použito vhodné pooperační tišení bolesti v souladu s doporučením veterinárního lékaře se zkušenostmi v oblasti péče o hlodavce.
As a general guide, dosing in rats may begin immediately after early weaning on postnatal day 18 (with the day of birth being postnatal day 0).
Tělesná hmotnost
Dosing in rats preferably should be completed on postnatal day 21 but in any case prior to postnatal day 25, because, after this age, the hypothalamic-pituitary-ovarian axis becomes functional and endogenous oestrogen levels may begin to rise with a concomitant increase in baseline uterine weight means and an increase in the group standard deviations (2)(3)(10)(11)(12).
Při metodě dospělých samic s odstraněnými vaječníky tělesná hmotnost a hmotnost dělohy spolu nekorelují, protože hmotnost dělohy je ovlivňována hormony, např. estrogeny, ale nikoli růstovými faktory, které regulují velikost těla.
Procedure for ovariectomy
Naopak v modelu s nezralými zvířaty tělesná hmotnost s hmotností dělohy souvisí, dokud dospívají (34).
For the ovariectomised female rat and mouse (treatment and control groups), ovariectomy should occur between 6 and 8 weeks of age.