natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Kapitola B.54 této přílohy, Uterotrofní biologická zkouška na hlodavcích:
OECD (1996), Combined Repeated Dose Toxicity Study with the Reproduction/Developmental Toxicity Screening Test, OECD Guideline for Testing of Chemicals, No 422, OECD, Paris.
Krátkodobá screeningová zkouška estrogenních vlastností.
Chapter B.43 of this Annex, Neurotoxicity Study in Rodents
Kapitola B.55 této přílohy, Hershbergerova biologická zkouška na potkanech:
OECD (2000), Guidance Document on the recognition, assessment, and use of clinical signs as humane endpoints for experimental animals used in safety evaluations, Series on Testing and Assessment, No 19, ENV/JM/MONO(2000)7, OECD, Paris.
Krátkodobá screeningová zkouška androgenních/antiandrogenních vlastností.
Chapter B.53 of this Annex, Developmental Neurotoxicity Study
OECD (2009), Guidance Document for Histologic Evalution of Endocrine and Reproductive Test in Rodents, Series on Testing and Assessment, No.
Chapter B.54 of this Annex, Uterotrophic Bioassay in Rodents:
106, OECD, Paris.
A short-term Screening Test for Oestrogenic Properties
OECD (2011), Guidance Document on the Current Implementation of Internal Triggers in the Extended One Generation Reproductive Toxicity Study in the United States and Canada, Series on Testing and Assessment, No.
Chapter B.55 of this Annex, Hershberger Bioassay in Rats:
117, ENV/JM/MONO(2011)21, OECD, Paris.
A Short-term Screening Assay for (Anti)Androgenic Properties
151, OECD, Paris.
OECD (2009), Guidance Document for Histologic Evaluation of Endocrine and Reproductive Test in Rodents, Series on Testing and Assessment, No 106, OECD, Paris.
Opatření a pozorování zahrnutá do funkční pozorovací baterie (Kohorta 2 A)
OECD (2011), Guidance Document on the Current Implementation of Internal Triggers in the Extended One Generation Reproductive Toxicity Study in the United States and Canada, Series on Testing and Assessment, No 117, ENV/JM/MONO(2011)21, OECD, Paris.
Chovná klec a otevřený prostor
Extended One Generation Reproductive Toxicity Study, Series on Testing and Assessment, No 151, OECD, Paris.
Manipulační
Measures and observations included in the functional observational battery (Cohort 2A)
Fyziologická
Home Cage & Open Field
Poloha
Manipulative
Snadnost přemístění
Physiologic
Teplota
Posture
Nedobrovolné klonické a tonické pohyby
Ease of removal
Snadnost manipulace
Temperature
Srostlá víčka
Involuntary Clonic & Tonic
Svalový tonus
Ease of handling
Reakce zorniček
Palpebral Closure
Naježení chlupů
Muscle Tone
Reakce při přiblížení
Pupil response
Velikost zorniček
Piloerection
Tvorba slin
Approach Response
Reakce na dotyk
Pupil size
Tvorba slz
Salivation
Reakce na zvukový podnět
Touch Response
Vydávání zvuků
Lacrimation
Reakce na sevření ocasu
Auditory Response
Odchov
Vocalisations
Vzpřimovací reakce
Tail Pinch Response
Anomálie chůze
Rearing
Roztažení zadních nohou při pádu z výšky
Righting Response
Vzrušení
Gait Abnormalities
Síla úchopu předních končetin
Landing Foot Splay
Stereotypy v chování
Arousal
Síla úchopu zadních končetin
Forelimb Grip Strength
Zvláštní chování
Stereotypy
Skvrny
Hindlimb Grip Strength
Respirační anomálie
Bizarre Behaviour
Chemická látka
Stains
látka nebo směs.
Respiratory Abnormalities
Zkoušená chemická látka
Chemical
Zkoušená chemická látka
A substance or a mixture.
B.57 ZKOUŠKA STEROIDOGENEZE H295R
Test Chemical
Tato zkušební metoda je rovnocenná pokynu OECD pro zkoušení (TG) 456 (2011).
Any substance or mixture tested using this test method.
V roce 1998 zahájila OECD činnost vysoké priority, jejíž podstatou je revize stávajících a vytvoření nových pokynů pro screening a zkoušení potenciálních endokrinních disruptorů.
B.57 H295R STEROIDOGENESIS ASSAY
Koncepční rámec OECD z roku 2002 pro zkoušení a posuzování endokrinních disruptorů je tvořen pěti úrovněmi, které odpovídají různým úrovním biologické komplexnosti (1).
This test method is equivalent to OECD Test Guideline (TG) 456 (2011).
Zkouška steroidogeneze in vitro H295R (zkouška H295R) popsaná v této zkušební metodě využívá lidskou buněčnou linii adrenálního karcinomu (buňky NCI-H295R) a představuje úroveň 2 koncepčního rámce: ‚zkoušky in vitro poskytující mechanistické údaje‘ pro účely screeningu a stanovení priorit.
The OECD initiated a high-priority activity in 1998 to revise existing, and to develop new, test guidelines for the screening and testing of potential endocrine disrupting chemicals.
Vývoj a standardizace zkoušky jako screeningu pro chemické účinky na steroidogenezi, konkrétně na produkci estradiolu (E2) a testosteronu (T), proběhly formou vícestupňového procesu.
The 2002 OECD Conceptual Framework for Testing and Assessment of Endocrine Disrupting Chemicals comprises five levels, each level corresponding to a different level of biological complexity (1).
Zkouška H295R byla optimalizována a validována (2) (3) (4) (5).
The in vitro H295R Steroidogenesis Assay (H295R) described in this test method utilises a human adreno-carcinoma cell line (NCI-H295R cells) and constitutes a level 2 “in vitro assay, providing mechanistic data”, to be used for screening and prioritisation purposes.
Cílem zkoušky steroidogeneze H295R je odhalit chemické látky, které mají vliv na produkci hormonů E2 a T.
Development and standardisation of the assay as a screen for chemical effects on steroidogenesis, specifically the production of 17β-oestradiol (E2) and testosterone (T), was carried out in a multi–step process.
Cílem zkoušky H295R je identifikovat xenobiotika, která mají jako své cílové místo, případně cílová místa, endogenní složky, které zahrnují nitrobuněčnou biochemickou dráhu začínající řadou reakcí počínaje cholesterolem až po produkci E2 a/nebo T.
The H295R assay has been optimised and validated (2) (3) (4) (5).
Účelem zkoušky H295R není identifikovat chemické látky, které mají vliv na steroidogenezi z důvodu účinků na osu hypotalamus – hypofýza – pohlavní žlázy (HPG).
The objective of the H295R Steroidogenesis Assay is to detect chemicals that affect production of E2 and T. The H295R assay is intended to identify xenobiotics that have as their target site(s) the endogenous components that comprise the intracellular biochemical pathway beginning with the sequence of reactions from cholesterol to the production of E2 and/or T. The H295R assay is not intended to identify chemicals that affect steroidogenesis due to effects on the hypothalamic-pituitary-gonadal (HPG) axis.
Cílem zkoušky je poskytnout odpověď ANO/NE, pokud jde o potenciál chemické látky vyvolávat nebo tlumit produkci hormonů T a E2.
The goal of the assay is to provide a YES/NO answer with regard to the potential of a chemical to induce or inhibit the production of T and E2;
V některých případech však mohou být získány kvantitativní výsledky (viz odstavce 53 a 54).
however, quantitative results may be obtained in some cases (see paragraphs 53 and 54).
Výsledky zkoušky jsou vyjádřeny jako relativní změny v produkci hormonu v porovnání s kontrolami pomocí rozpouštědel (SC).
The results of the assay are expressed as relative changes in hormone production compared with the solvent controls (SCs).
Účelem zkoušky není poskytnout specifické mechanistické informace týkající se interakce zkoušené chemické látky s endokrinním systémem.
The assay does not aim to provide specific mechanistic information concerning the interaction of the test chemical with the endocrine system.
Proběhly výzkumy, které používaly tuto buněčnou linii k identifikaci účinků na specifické enzymy a meziproduktové hormony, např. progesteron (2).
Research has been conducted using the cell line to identify effects on specific enzymes and intermediate hormones such as progesterone (2).
Definice a zkratky používané v této zkušební metodě jsou popsány v dodatku.
Definitions and abbreviations used in this test method are described in the Appendix.
Podrobný pracovní postup včetně pokynů, jak připravit roztoky, kultivovat buňky a provádět různé aspekty zkoušek, je k dispozici v dodatku I–III dokumentu OECD ‚Multi-Laboratory Validation of the H295R Steroidogenesis Assay to Identify Modulators of Testosterone and Estradiol Production‘ (4).
A detailed protocol including instructions on how to prepare solutions, cultivate cells and perform various aspects of the test is available as Appendix I-III to the OECD document “Multi-Laboratory Validation of the H295R Steroidogenesis Assay to Identify Modulators of Testosterone and Estradiol Production” (4).
Biosyntézy pohlavních steroidních hormonů se účastní pět různých enzymů, které působí jako katalyzátor v šesti různých reakcích.
Five different enzymes catalysing six different reactions are involved in sex steroid hormone biosynthesis.
Enzymatická konverze cholesterolu na pregnenolon cytochromem P450 (CYP), konkrétně štěpením cholesterolového bočního řetězce enzymem CYP11 A, představuje úvodní krok v sérii biochemických reakcí, které vrcholí syntézou steroidních konečných produktů.
Enzymatic conversion of cholesterol to pregnenolone by the cytochrome P450 (CYP) cholesterol side-chain cleavage enzyme (CYP11A) constitutes the initial step in a series of biochemical reactions that culminate in synthesis of steroid end-products.
V závislosti na pořadí dalších dvou reakcí se steroidogenní dráha rozdvojí, na Δ5-hydroxysteroidní dráhu a Δ4-ketosteroidní dráhu, které se sbíhají v produkci androstendionu (obrázek 1).
Depending upon the order of the next two reactions, the steroidogenic pathway splits into two paths, the Δ5-hydroxysteroid pathway and Δ4-ketosteroid pathway, which converge in the production of androstenedione (Figure 1).
Androstendion se přeměňuje na testosteron (T) působením 17β-hydroxysteroid dehydrogenasou (17β-HSD).
Androstenedione is converted to testosterone (T) by 17β-hydroxysteroid dehydrogenase (17β-HSD).
Testosteron je meziprodukt i konečný produkt/hormon.
Testosterone is both an intermediate and end-hormone product.
V mužském těle se T může přeměnit na dihydrotestosteron (DHT) díky 5α-reduktáze, která se nachází v buněčných membránách, jaderném obalu a endoplazmatickém retikulu cílových tkání androgenního působení, např. v prostatě a semenných váčcích.
In the male, T can be converted to dihydrotestosterone (DHT) by 5α-reductase, which is found in the cellular membranes, nuclear envelope, and endoplasmic reticulum of target tissues of androgenic action such as prostate and seminal vesicles.
DHT je jako androgen výrazně účinnější než T a je též považován za konečný hormon.
DHT is significantly more potent as an androgen than T and is also considered an end-product hormone.
Zkouška H295R nedetekuje DHT (viz odstavec 10).
The H295R assay does not measure DHT (see paragraph 10).
Enzym na steroidogenní dráze, který přeměňuje androgenní chemické látky na estrogenní chemické látky, je aromatáza (CYP19).
The enzyme in the steroidogenic pathway which converts androgenic chemicals into oestrogenic chemicals is aromatase (CYP19).
CYP19 přeměňuje T na 17β-estradiol (E2) a androstendion na estron.
CYP19 converts T into 17β-oestradiol (E2) and androstenedione into oestrone.
E2 a T jsou považovány za konečné hormony steroidogenní dráhy.
E2 and T are considered end-product hormones of the steroidogenic pathway.
Specifičnost činnosti lyázy CYP17 se mezi druhy liší z hlediska intermediálních substrátů.
The specificity of the lyase activity of CYP17 differs for the intermediate substrates among species.
U lidí enzym upřednostňuje substráty Δ5-hydroxysteroidní dráhy (pregnenolon), zatímco substráty na Δ4-ketosteroidní dráze (progesteron) jsou upřednostňovány u potkanů (19).
In the human, the enzyme favours substrates of the Δ5-hydroxysteroid pathway (pregnenolone), whereas substrates in the Δ4-ketosteroid pathway (progesterone) are favoured in the rat (19).
Takové rozdíly v činnosti lyázy CYP17 mohou vysvětlovat některé rozdíly závislé na daném živočišné druhu v reakci na chemické látky, které mění steroidogenezi in vivo (6).
Such differences in the CYP17 lyase activity may explain some species-dependent differences in response to chemicals that alter steroidogenesis in vivo (6).
Bylo prokázáno, že buňky H295 nejblíže odrážejí expresi adrenálního enzymu a vzorec produkce steroidů u dospělých osob (20), ale je známo, že zajišťují expresi enzymů jak pro Δ5-hydroxysteroidní, tak pro Δ4-ketosteroidní dráhu androgenní syntézy (7) (11) (13) (15).
The H295 cells have been shown to most closely reflect human adult adrenal enzyme expression and steroid production pattern (20), but are known to express enzymes for both the Δ5-hydroxysteroid and Δ4-ketosteroid pathways for androgen synthesis (7) (11) (13) (15).
Steroidogenní dráha v buňkách H295R
Steroidogenic pathway in H295R cells.
Enzymy jsou psány kurzivou, hormony jsou psány tučně a šipky značí směr syntézy.
Enzymes are in italics, hormones are bolded and arrows indicate the direction of synthesis.
Šedé pozadí značí kortikosteroidní dráhy/produkty.
Gray background indicates corticosteroid pathways/products.
Dráhy/produkty pohlavních steroidů jsou v bílém poli.
Sex steroid pathways/products are circled.
CYP = cytochrom P450;
CYP = cytochrome P450;
HSD = hydroxysteroidní dehydrogenasa;
HSD = hydroxysteroid dehydrogenase;
DHEA = dehydroepiandrosteron.
DHEA = dehydroepiandrosterone.
Lidská buněčná linie adrenálního karcinomu H295R je užitečným modelem in vitro pro zkoumání účinků na syntézu steroidních hormonů (2) (7) (8) (9) (10).
The human H295R adreno-carcinoma cell line is a useful in vitro model for the investigation of effects on steroid hormone synthesis (2) (7) (8) (9) (10).
Buněčná linie H295R má exprimovány geny, které kódují všechny klíčové enzymy pro steroidogenezi uvedenou výše (11) (15) (obrázek 1).
The H295R cell line expresses genes that encode for all the key enzymes for steroidogenesis noted above (11) (15) (Figure 1).
To je jedinečná vlastnost, protože exprese těchto genů in vivo je specifická z hlediska tkáně a vývojového stadia, přičemž zpravidla žádná tkáň ani žádné vývojové stadium neexprimuje všechny geny účastnící se steroidogeneze (2).
This is a unique property because in vivo expression of these genes is tissue and developmental stage-specific with typically no one tissue or one developmental stage expressing all of the genes involved in steroidogenesis (2).
Buňky H295R mají fyziologické charakteristiky zonálně nediferencovaných adrenálních buněk lidského plodu (11).
H295R cells have physiological characteristics of zonally undifferentiated human foetal adrenal cells (11).
Tyto buňky představují jedinečný systém in vitro v tom, že mají schopnost produkovat veškeré steroidní hormony, které se nacházejí v kůře nadledvin a v pohlavních žlázách, což umožňuje provést zkoušky jak účinků na kortikosteroidovou syntézu, tak účinků na produkci pohlavních steroidních hormonů, jako jsou androgeny a estrogeny, ačkoli zkouška byla validována pouze pro detekci hormonů T a E2.
The cells represent a unique in vitro system in that they have the ability to produce all of the steroid hormones found in the adult adrenal cortex and the gonads, allowing testing for effects on both corticosteroid synthesis and the production of sex steroid hormones such as androgens and oestrogens, although the assay was validated only to detect T and E2.
Změny, které tento zkušební systém zaznamenává ve formě změn v produkci T a E2, mohou být výsledkem velkého množství různých interakcí zkoušených chemických látek se steroidogenními funkcemi, které probíhají v buňkách H295R.
Changes recorded by the test system in the form of alteration in the production of T and E2 can be the result of a multitude of different interactions of test chemicals with steroidogenic functions that are expressed by the H295R cells.
Patří mezi ně modulace exprese, syntézy nebo funkce enzymů, které se účastní produkce, přeměny nebo eliminace steroidních hormonů (12) (13) (14).
These include modulation of the expression, synthesis or function of enzymes involved in the production, transformation, or elimination of steroid hormones (12) (13) (14).
Inhibice produkce hormonů může být způsobena přímou kompetitivní vazbou na enzym v této dráze účinkem na kofaktory jako jsou NADPH (nikotinamidadenindinukleotidfosfát) a cAMP (cyklický adenosinmonofosfát), a/nebo zvýšením metabolismu steroidů nebo potlačením genové exprese určitých enzymů v dráze steroidogeneze.
Inhibition of hormone production can be due to direct competitive binding to an enzyme in the pathway, impact on co-factors such as NADPH (Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate) and cAMP (cyclic Adenosine Monophosphate), and/or increase in steroid metabolism or suppression of gene expression of certain enzymes in the steroidogenesis pathway.
Zatímco inhibice může být funkcí jak přímých, tak nepřímých procesů účastnících se produkce hormonů, indukce má zpravidla nepřímý charakter, například ovlivňuje kofaktory, jako jsou NADPH a cAMP (stejně jako v případě forskolinu), snižuje metabolismus steroidů (13) a/nebo zvyšuje steroidogenní genovou expresi.
While inhibition can be a function of both direct or indirect processes involved with hormone production, induction is typically of an indirect nature, such as by affecting co-factors such as NADPH and cAMP (as in the case of forskolin), decreasing steroid metabolism (13), and or up-regulating steroidogenic gene expression.
Zkouška H295R má několik výhod:
The H295R assay has several advantages:
umožňuje odhalení nárůstů i poklesů v produkci T i E2,
It allows for the detection of both increases and decreases in the production of both T and E2;
dovoluje přímé zhodnocení případného vlivu chemické látky na buněčnou životaschopnost/cytotoxicitu.
It permits the direct assessment of the potential impact of a chemical on cell viability/cytotoxicity.
To je důležitá vlastnost, protože umožňuje rozlišení účinků, které jsou vyvolány cytotoxicitou, a účinků, které jsou vyvolány přímou interakcí chemických látek se steroidogenními drahami, což není možné v systémech tkáňových explantátů, které jsou tvořeny mnoha buněčnými typy s proměnlivou citlivostí a funkčností,
This is an important feature as it allows for the discrimination between effects that are due to cytotoxicity from those due to the direct interaction of chemicals with steroidogenic pathways, which is not possible in tissue explants systems that consist of multiple cell types of varying sensitivities and functionalities;
není nutné využívat zvířata,
It does not require the use of animals;
buněčná linie H295R je komerčně dodávána.
The H295R cell line is commercially available.
Základní omezení zkoušky jsou následující:
The principle limitations of the assay are as follows:
Není známa její metabolická schopnost, ale pravděpodobně je dost omezená;
Its metabolic capability is unknown but probably quite limited;
chemické látky, které musí být metabolicky aktivovány, pravděpodobně nebudou v této zkoušce zachyceny.
therefore, chemicals that need to be metabolically activated will probably be missed in this assay.
Jelikož je H295R získávána z tkáně nadledvin, obsahuje enzymy schopné produkovat gluko- a mineralokortikoidy, stejně jako pohlavní hormony.
Being derived from adrenal tissue, the H295R possesses the enzymes capable of producing the gluco-, and mineral-corticoids as well as the sex hormones;
Z tohoto důvodu by účinky na produkci gluko- a mineralokortikoidů mohly ovlivnit úrovně hormonů T a E2 pozorované ve zkoušce.
therefore, effects on the production of gluco-, and mineral corticoids could influence the levels of T and E2 observed in the assay.
Neměří DHT, a tudíž se neočekává, že by při ní byly odhaleny chemické látky, které inhibují 5α-reduktázu.
It does not measure DHT and, therefore, would not be expected to detect chemicals that inhibit 5α-reductase in which case the Hershberger assay (16) can be used.
V takovém případě lze použít Hershbergerovu zkoušku (16).
The H295R assay will not detect chemicals that interfere with steroidogenesis by affecting the hypothalamic-pituitary-gonadal axis (HPG) axis as this can only be studied in intact animals.
Zkouška H295R neodhalí chemické látky, které zasahují do steroidogeneze tím, že postihují osu hypotalamus – hypofýza – pohlavní žlázy (HPG), protože tu lze studovat pouze u zvířat in vivo.
The purpose of the assay is the detection of chemicals that affect T and E2 production.
Účelem této zkoušky je odhalit chemické látky, které mají vliv na produkci T a E2.
T is also an intermediate in the pathway to produce E2.
T je také meziproduktem na dráze k produkci E2.
The assay can detect chemicals that typically inhibit or induce the enzymes of the steroidogenesis pathway.
Zkouška může odhalit chemické látky, které zpravidla inhibují anebo indukují enzymy dráhy steroidogeneze.
The assay is usually performed under standard cell culture conditions in 24-well culture plates.
Zkouška se obvykle provádí za standardních podmínek kultivace buněk v 24jamkových kultivačních destičkách.
Alternatively, other plate sizes can be used for conducting the assay;
Případně lze k provedení zkoušky použít jiné velikosti destiček.
however, seeding and experimental conditions should be adjusted accordingly to maintain adherence to the performance criteria.
Nasazení buněk a experimentální podmínky by však měly být podle toho upraveny tak, aby byl zachován soulad s kritérii provedení testu.
After an acclimation period of 24 h in multi-well plates, cells are exposed for 48 h to seven concentrations of the test chemical in at least triplicate.
Po aklimatizačním období v délce 24 hodin ve vícejamkových destičkách jsou buňky po dobu 48 hodin vystaveny sedmi koncentracím zkoušené chemické látky, alespoň ve třech souběžných experimentech/opakováních.
Solvent and a known inhibitor and inducer of hormone production are run at a fixed concentration as negative and positive controls.
Rozpouštědlo a známý inhibitor a induktor produkce hormonů v určené koncentraci jsou použity jako negativní a pozitivní kontroly.
At the end of the exposure period, the medium is removed from each well.
Na konci období expozice je médium ze všech jamek odstraněno.
Cell viability in each well is analysed immediately after removal of medium.
Bezprostředně po odstranění média je analyzována životaschopnost buněk v každé jamce.
Concentrations of hormones in the medium can be measured using a variety of methods including commercially available hormone measurement kits and/or instrumental techniques such as liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS).
Koncentrace hormonů v médiu lze měřit pomocí celé řady metod včetně komerčně dostupných sad k měření hormonů a/nebo přístrojových technik, jako je kombinace kapalinové chromatografie s hmotnostní spektrometrií (LC-MS).
Data are expressed as fold change relative to the solvent control and the Lowest-Observed-Effect-Concentration (LOEC).
Údaje jsou vyjádřeny jako násobná změna vztažená k negativní kontrole (rozpouštědlo) a jako nejnižší koncentrace testované látky, při které jsou pozorovány účinky (Lowest-Observed-Effect-Concentration, LOEC).
If the assay is negative, the highest concentration tested is reported as the No-Observed-Effect-Concentration (NOEC).
Je-li zkouška negativní, je nejvyšší testovaná koncentrace označena jako nejvyšší koncentrace testovaného vzorku nevyvolávající žádné pozorovatelné účinky (No-Observed-Effect-Concentration, NOEC).
Conclusions regarding the ability of a chemical to affect steroidogenesis should be based on at least two independent test runs.
Závěry týkající se schopnosti chemické látky ovlivnit steroidogenezi by měly vycházet nejméně ze dvou nezávislých pokusů.
The first test run may function as a range finding run with subsequent adjustment of concentrations for runs 2 and 3, if applicable, if solubility or cytotoxicity problems are encountered or the activity of the chemical seems to be at the end of the range of concentrations tested.
První pokus může fungovat jako pokus zjišťující rozmezí dávek případně s následnou úpravou koncentrací pro pokusy 2 a 3, pokud se objeví problémy s rozpustností nebo cytotoxicitou nebo pokud se zdá, že aktivita chemické látky je na hranici rozpětí zkoušených koncentrací.
CULTURE PROCEDURE
KULTIVACE
Cell Line
Buněčná linie
The NCI-H295R cells are commercially available from the American Type Culture Collections (ATCC) upon signing a Material Transfer Agreement (MTA) [14].