natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Zvláště je třeba dbát na to, aby byly hydrofilní zkoušené látky zapracovány do takového vehikula, které zvlhčí kůži a nesteče ihned z pokožky. Toho lze dosáhnout použitím vhodných solubilizérů (jako je např. 1 % Pluronic® L92).
Particular care should be taken to ensure that hydrophilic test substances are incorporated into a vehicle system, which wets the skin and does not immediately run off, by incorporation of appropriate solubilisers (e.g. 1 % Pluronic® L92).
Není tudíž vhodné používat zcela vodná vehikula.
Thus, wholly aqueous vehicles are to be avoided.
Zpracování lymfatických uzlin z jednotlivých myší umožňuje posoudit variabilitu mezi jednotlivými zvířaty a provést statistické porovnání rozdílu mezi hodnotami zkoušené látky a hodnotami naměřenými u kontrolní skupiny se samotným vehikulem (viz odstavec 35).
The processing of lymph nodes from individual mice allows for the assessment of inter-animal variability and a statistical comparison of the difference between test substance and VC group measurements (see paragraph 35).
Kromě toho je vhodné posoudit možnost snížit počet myší v pozitivní kontrolní skupině, když se zaznamenávají údaje od jednotlivých zvířat (12).
In addition, evaluating the possibility of reducing the number of mice in the PC group is feasible when individual animal data are collected (12).
Sběr údajů od jednotlivých zvířat navíc vyžadují i některé regulační orgány.
Further, some regulatory authorities require the collection of individual animal data.
Souhrnné údaje za všechna zvířata mohou být nicméně některými regulačními orgány považovány za přijatelné, přičemž v takových situacích se mohou uživatelé rozhodnout, zda zvolí individuální nebo souhrnné údaje.
Nonetheless, pooled animal data may be considered acceptable by some regulatory authorities and in such situations, users may have the option of collecting either individual or pooled animal data.
Předběžná screeningová zkouška
Pre-screen test
Nejsou-li k dispozici informace pro stanovení nejvyšší dávky, která má být předmětem zkoušky (viz odstavec 18), měla by se provést předběžná screeningová zkouška umožňující vymezit vhodné dávkování, které se bude metodou LLNA zkoušet.
In the absence of information to determine the highest dose to be tested (see paragraph 18), a pre-screen test should be performed in order to define the appropriate dose level to test in the LLNA.
Účelem předběžné screeningové zkoušky je poskytnout vodítko pro volbu maximálního dávkování, které se má použít v hlavní studii LLNA, pokud nejsou k dispozici informace o koncentraci, která vyvolává systémovou toxicitu (viz odstavec 24) a/nebo nadměrné lokální podráždění kůže (viz odstavec 23).
The purpose of the pre-screen test is to provide guidance for selecting the maximum dose level to use in the main LLNA study, where information on the concentration that induces systemic toxicity (see paragraph 24) and/or excessive local skin irritation (see paragraph 23) is not available.
Maximální zkoušenou dávkou by mělo být 100 % zkoušené látky v případě kapalin, respektive maximální možná koncentrace v případě pevných látek nebo suspenzí.
The maximum dose level tested should be 100 % of the test substance for liquids or the maximum possible concentration for solids or suspensions.
Předběžná screeningová zkouška se provádí za stejných podmínek jako hlavní studie LLNA až na to, že se nehodnotí proliferace buněk z lymfatických uzlin a lze použít méně zvířat na dávkovou skupinu.
The pre-screen test is conducted under conditions identical to the main LLNA study, except there is no assessment of lymph node proliferation and fewer animals per dose group can be used.
Navrhuje se počet jednoho až dvou zvířat na dávkovou skupinu.
One or two animals per dose group are suggested.
Všechny myši se denně pozorují, zda nevykazují klinické příznaky systémové toxicity nebo lokálního podráždění v místě aplikace.
All mice will be observed daily for any clinical signs of systemic toxicity or local irritation at the application site.
Před zahájením zkoušky a před jejím ukončením (den 6) se zaznamenají hodnoty tělesné hmotnosti zvířat.
Body weights are recorded pre-test and prior to termination (Day 6).
Na obou uších každé myši se sleduje výskyt erytému, který se vyhodnotí podle tabulky 1 (25).
Both ears of each mouse are observed for erythema and scored using Table 1 (25).
Tloušťka ucha se změří tloušťkoměrem (např. digitálním mikrometrem nebo tloušťkoměrem s kruhovou stupnicí) v den 1 (před aplikací první dávky), v den 3 (přibl. 48 hodin po první dávce) a v den 6.
Ear thickness measurements are taken using a thickness gauge (e.g. digital micrometer or Peacock Dial thickness gauge) on Day 1 (pre-dose), Day 3 (approximately 48 hours after the first dose), and Day 6.
Kromě toho lze v den 6 určit tloušťku ucha na základě stanovení hmotnosti části ucha vyseknuté speciálními kleštěmi, což by se mělo provádět až poté, co se zvířata humánně usmrtí.
Additionally, on Day 6, ear thickness could be determined by ear punch weight determinations, which should be performed after the animals are humanely killed.
Známkou nadměrného lokálního podráždění kůže je zarudnutí ohodnocené 3 nebo více body a/nebo zvýšení tloušťky ucha o 25 % nebo více v kterýkoli den měření (26) (27).
Excessive local skin irritation is indicated by an erythema score ≥ 3 and/or an increase in ear thickness of ≥ 25 % on any day of measurement (26) (27).
Jako nejvyšší dávka se pro hlavní studii LLNA v rámci řady koncentrací zjištěných při předběžné screeningové zkoušce (viz odstavec 18) zvolí nejbližší nižší dávka, která nevyvolává systémovou toxicitu a/nebo nadměrné lokální podráždění kůže.
The highest dose selected for the main LLNA study will be the next lower dose in the pre-screen concentration series (see paragraph 18) that does not induce systemic toxicity and/or excessive local skin irritation.
Bodové hodnocení erytému
Erythema Scores
Pozorované příznaky
Observation
Bodové ohodnocení
Score
Žádný erytém
No erythema
slabý erytém (sotva patrný)
slight erythema (barely perceptible)
Zřetelně viditelný erytém
Well-defined erythema
Mírný až výrazný erytém
Moderate to severe erythema
Těžký erytém (silné zarudnutí) nebo tvorba příškvaru znemožňující posouzení erytému
Severe erythema (beet redness) to eschar formation preventing grading of erythema
Kromě 25 % zvýšení tloušťky ucha (26) (27) se k identifikaci dráždivých látek při zkoušce LLNA používá také statisticky významné zvýšení tloušťky ucha u myší ze zkušební skupiny ve srovnání s kontrolními zvířaty (28) (29) (30) (31) (32) (33) (34).
In addition to a 25 % increase in ear thickness (26) (27), a statistically significant increase in ear thickness in the treated mice compared to control mice has also been used to identify irritants in the LLNA (28) (29) (30) (31) (32) (33) (34).
Ačkoli mohou nastat případy statisticky významného zvýšení, i když se tloušťka ucha zvýší o méně než 25 %, nebyly tyto případy spojeny výhradně s nadměrným podrážděním (30))32) (33) (34).
However, while statistically significant increases can occur when ear thickness is less than 25 % they have not been associated specifically with excessive irritation (30) (32) (33) (34).
O systémové toxicitě (35) (36) mohou při použití v rámci integrovaného hodnocení svědčit tyto poznatky z klinického pozorování, a tudíž mohou indikovat maximální dávku, která by se měla použít v hlavní studii LLNA: změny fungování nervového systému (např. piloerekce, ataxie, třes a křeče), změny chování (např. agresivita, změna činností týkajících se péče o srst, výrazná změna úrovně aktivity), změny způsobů dýchání (tj. změny frekvence a intenzity dýchání, např. dušnost, lapání po dechu a chropy) a změny v přijímání potravy a vody.
The following clinical observations may indicate systemic toxicity (35) (36) when used as part of an integrated assessment and therefore may indicate the maximum dose level to use in the main LLNA: changes in nervous system function (e.g. pilo-erection, ataxia, tremors, and convulsions); changes in behaviour (e.g. aggressiveness, change in grooming activity, marked change in activity level); changes in respiratory patterns (i.e. changes in frequency and intensity of breathing such as dyspnea, gasping, and rales), and changes in food and water consumption.
Při hodnocení je navíc nutno brát v úvahu známky letargie a/nebo absence reagování, veškeré klinické příznaky více než mírné nebo momentální bolesti či utrpení nebo snížení tělesné hmotnosti ode dne 1 do dne 6 o více než 5 % a také úmrtnost.
In addition, signs of lethargy and/or unresponsiveness and any clinical signs of more than slight or momentary pain and distress, or a > 5 % reduction in body weight from Day 1 to Day 6, and mortality should be considered in the evaluation.
Umírající zvířata nebo zvířata, která očividně trpí bolestí nebo jeví známky silného a trvalého utrpení, by se měla humánně usmrtit 37).
Moribund animals or animals obviously in pain or showing signs of severe and enduring distress should be humanely killed (37).
Harmonogram zkoušek v rámci hlavní studie
Main study experimental schedule
Den 1 Každé zvíře se zváží a zaznamená se jeho hmotnost a jakékoli poznatky z klinického pozorování.
Day 1 Individually identify and record the weight of each animal and any clinical observation.
Na hřbet každého ucha se aplikuje 25 μl vhodně zředěného roztoku zkoušené látky, samotné vehikulum nebo pozitivní kontrola (tu lze provádět buď souběžně, nebo lze použít pozitivní kontrolu z nedávné jiné zkoušky – v závislosti na postupech dané laboratoře při zohlednění odstavců 11 až 15).
Apply 25 μL of the appropriate dilution of the test substance, the vehicle alone, or the PC (concurrent or recent, based on laboratory policy in considering paragraphs 11-15), to the dorsum of each ear.
Den 2 a den 3 Zopakuje se postup aplikace provedený v den 1.
Days 2 and 3 Repeat the application procedure carried out on Day 1.
Den 4 a den 5 Žádná aplikace.
Days 4 and 5 No treatment.
Den 6 Zaznamená se hmotnost každého zvířete.
Day 6 Record the weight of each animal.
Přes ocasní žílu se všem pokusným i kontrolním myším vpíchne 250 μl fyziologického roztoku ve fosfátovém pufru (PBS) obsahujícího 20 μCi (7,4×105 Bq) [3H]thymidinu (tritiovaného na methylu).
Inject 250 μL of sterile phosphate-buffered saline (PBS) containing 20 μCi (7,4 × 105 Bq) of tritiated (3H)-methyl thymidine into all test and control mice via the tail vein.
Jinou možností je všem myším přes ocasní žílu vpíchnout 250 μl PBS obsahujícího 2 μCi (7,4×104 Bq) [125I]joddeoxyuridinu a 10–5 M fluordeoxyuridinu.
Alternatively, inject 250 μL sterile PBS containing 2 μCi (7,4 × 104 Bq) of 125I-iododeoxyuridine and 10–5M fluorodeoxyuridine into all mice via the tail vein.
O pět hodin (5 hod.) později se zvířata humánně usmrtí.
Five hours (5 h) later, humanely kill the animals.
U každého zvířete se vyjmou lymfatické uzliny drenující aurikulární oblast obou uší a zpracují se v PBS (individuální přístup) nebo se lymfatické uzliny vyjmou na obou stranách u všech myší z celé zkušební skupiny a společně se uloží do PBS (přístup založený na sdružení exponované skupiny).
Excise the draining auricular lymph nodes from each mouse ear and process together in PBS for each animal (individual animal approach); alternatively excise and pool the lymph nodes from each ear in PBS for each treatment group (pooled treatment group approach).
Podrobnosti a grafické znázornění vyhledání uzlin a jejich disekce lze nalézt v literatuře (12).
Details and diagrams of the lymph node identification and dissection can be found in reference (12).
Pro účely dalšího sledování lokální kožní reakce v rámci hlavní studie lze do protokolu studie zařadit i další parametry, jako je bodové ohodnocení erytému ucha nebo údaje o tloušťce ucha (získané buď pomocí tloušťkoměru, nebo na základě stanovení hmotnosti části ucha vyseknuté speciálními kleštěmi při pitvě).
To further monitor the local skin response in the main study, additional parameters such as scoring of ear erythema or ear thickness measurements (obtained either by using a thickness gauge, or ear punch weight determinations at necropsy) may be included in the study protocol.
Příprava buněčných suspenzí
Preparation of cell suspensions
Jednobuněčná suspenze obsahující buňky vyňatých lymfatických uzlin drenujících oblast obou uší a pocházejících od jednotlivých zvířat nebo od celé exponované skupiny se připraví jemnou mechanickou deagregací přes 200 μm sítko z korozivzdorné oceli nebo jiným přijatelným postupem vytvoření jednobuněčné suspenze.
A single-cell suspension of lymph node cells (LNC) excised bilaterally using the individual animal approach or alternatively, the pooled treatment group approach is prepared by gentle mechanical disaggregation through 200 micron-mesh stainless steel gauze or another acceptable technique for generating a single-cell suspension.
Buňky lymfatických uzlin se dvakrát propláchnou v dostatečném množství PBS a jejich DNA se nechá vysrážet s 5 % kyselinou trichloroctovou při 4 °C po dobu 18 hod. (3).
The LNC are washed twice with an excess of PBS and the DNA is precipitated with 5 % trichloroacetic acid (TCA) at 4 °C for 18h (3).
Sediment se buď resuspenduje v 1 ml kyseliny trichloroctové a přemístí do scintilačních kyvet obsahujících 10 ml kapalného scintilátoru pro měření aktivity 3H, nebo se přenese přímo do zkumavek pro měření aktivity 125I.
Pellets are either resuspended in 1 mL TCA and transferred to scintillation vials containing 10 mL of scintillation fluid for 3H-counting, or transferred directly to gamma counting tubes for 125I-counting.
Stanovení buněčné proliferace (inkorporované radioaktivity)
Determination of cellular proliferation (incorporated radioactivity)
Inkorporace [3H]thymidinu se měří β-scintilační metodou a vyjadřuje se počtem rozpadů za minutu (DPM).
Incorporation of 3H-methyl thymidine is measured by β-scintillation counting as disintegrations per minute (DPM).
Inkorporace [125I]joddeoxyuridinu se měří prostřednictvím aktivity 125I a rovněž se vyjadřuje v DPM.
Incorporation of 125I-iododeoxyuridine is measured by 125I-counting and also is expressed as DPM.
V závislosti na použitém přístupu se inkorporace vyjádří v DPM na zvíře (individuální přístup) nebo v DPM na zkušební skupinu (sdružený přístup).
Depending on the approach used, the incorporation is expressed as DPM/mouse (individual animal approach) or DPM/treatment group (pooled treatment group approach).
Redukovaná metoda LLNA
Reduced LLNA
V určitých situacích, kdy právní předpisy vyžadují potvrzení negativní predikce potenciálu určité chemické látky senzibilizovat kůži, lze použít volitelný protokol zkoušky rLLNA (16) (17) (18) vyžadující menší počet zvířat, pokud se dodrží všechny ostatní specifikace protokolu LLNA popsané v této ZM.
In certain situations, when there is a regulatory need to confirm a negative prediction of skin sensitising potential, an optional rLLNA protocol (16) (17) (18) using fewer animals may be used, provided there is adherence to all other LLNA protocol specifications in this TM.
Pokud jsou získány pozitivní nebo nejednoznačné výsledky, může být k interpretaci nebo objasnění výsledku nezbytné provést další zkoušky.
If a positive or equivocal result is obtained, additional testing may be needed in order to interpret or clarify the finding.
Snížení počtu dávkových skupin je jediný rozdíl mezi protokoly zkušebních metod LLNA a rLLNA, a proto zkouška rLLNA neposkytuje informace o závislosti odezvy na dávce.
The reduction in number of dose groups is the only difference between the LLNA and the rLLNA test method protocols and for this reason the rLLNA does not provide dose-response information.
Proto by se metoda rLLNA neměla používat, když je nutno získat informace o závislosti odezvy na dávce.
Therefore, the rLLNA should not be used when dose-response information is needed.
Stejně jako při vícedávkové zkoušce LLNA by měla hodnocená koncentrace látky zkoušené metodou rLLNA být maximální koncentrací, která nevyvolává zjevnou systémovou toxicitu a/nebo nadměrné lokální podráždění kůže u myší (viz odstavec 18).
Like the multi-dose LLNA, the test substance concentration evaluated in the rLLNA should be the maximum concentration that does not induce overt systemic toxicity and/or excessive local skin irritation in the mouse (see paragraph 18).
ZÍSKANÉ POZNATKY
OBSERVATIONS
Poznatky z klinického pozorování
Clinical observations
Každá myš se jednou denně pečlivě vyšetří, zda nevykazuje jakékoli klinické příznaky lokálního podráždění v místě aplikace nebo příznaky systémové toxicity.
Each mouse should be carefully observed at least once daily for any clinical signs, either of local irritation at the application site or of systemic toxicity.
Všechny získané poznatky se systematicky zaznamenají, přičemž záznamy se vedou zvlášť za každou myš.
All observations are systematically recorded with records being maintained for each mouse.
Plány sledování by měly obsahovat kritéria umožňující rychle identifikovat myši, jež vykazují známky systémové toxicity, nadměrného lokálního podráždění pokožky nebo poleptání kůže, aby mohly být usmrceny (37).
Monitoring plans should include criteria to promptly identify those mice exhibiting systemic toxicity, excessive local skin irritation, or corrosion of skin for euthanasia (37).
Hodnoty tělesné hmotnosti
Body weights
Jak je uvedeno v odstavci 25, tělesnou hmotnost jednotlivých zvířat je nutno zjistit na začátku zkoušky a v době plánovaného humánního usmrcení zvířete.
As stated in paragraph 25, individual animal body weights should be measured at the start of the test and at the scheduled humane kill.
Výsledky za každou exponovanou skupinu se vyjádří jako index stimulace (SI).
Results for each treatment group are expressed as the SI.
Při individuálním přístupu se SI stanoví jako podíl průměrné hodnoty DPM na zvíře jak u každé exponované skupiny, tak u pozitivní kontrolní skupiny, a průměrné hodnoty DPM na zvíře u kontrolní skupiny s rozpouštědlem/vehikulem.
When using the individual animal approach, the SI is derived by dividing the mean DPM/mouse within each test substance group, and the PC group, by the mean DPM/mouse for the solvent/VC group.
Průměrná hodnota SI u kontrolních skupin s vehikulem je pak rovna 1.
The average SI for the VCs is then one.
Při sdruženém přístupu se SI stanoví jako podíl sdružené inkorporované radioaktivity u jednotlivých exponovaných skupin a sdružené radioaktivity kontrolní skupiny s vehikulem; získá se tak průměrná hodnota SI.
When using the pooled treatment group approach, the SI is obtained by dividing the pooled radioactive incorporation for each treatment group by the incorporation of the pooled VC group; this yields a mean SI.
Výsledek se považuje za pozitivní, když SI ≥ 3.
The decision process regards a result as positive when SI ≥ 3.
Avšak při rozhodování, zda prohlásit hraniční výsledek za pozitivní, lze použít rovněž intenzitu odezvy na dávku, statistickou významnost a shodnost odezvy při použití rozpouštědla/vehikula a při použití pozitivní kontroly (4) (5) (6).
However, the strength of the dose-response, the statistical significance and the consistency of the solvent/vehicle and PC responses may also be used when determining whether a borderline result is declared positive (4) (5) (6).
Je-li nezbytné objasnit získané výsledky, měla by se věnovat pozornost různým vlastnostem zkoušené látky včetně toho, zda se její struktura podobá struktuře známých senzibilizátorů kůže, zda u myší způsobuje nadměrné lokální podráždění kůže, a také povaze zjištěné závislosti odezvy na dávce.
If it is necessary to clarify the results obtained, consideration should be given to various properties of the test substance, including whether it has a structural relationship to known skin sensitisers, whether it causes excessive local skin irritation in the mouse, and the nature of the dose-response relationship seen.
Těmito faktory a dalšími a. s.pekty, které je třeba zvážit, se podrobně zabývá literatura (7).
These and other considerations are discussed in detail elsewhere (7).
Shromažďování údajů o radioaktivitě na úrovni jednotlivých myší umožní provést statistickou analýzu, kterou se na základě těchto údajů zjistí existence a míra závislosti odezvy na dávce.
Collecting radioactivity data at the level of the individual mouse will enable a statistical analysis for presence and degree of dose-response relationship in the data.
Případné statistické hodnocení by mohlo obsahovat posouzení závislosti odezvy na dávce, jakož i vhodně upravená srovnání zkušebních skupin (např. skupiny s párově srovnávaným dávkováním oproti souběžné kontrolní skupině s vehikulem).
Any statistical assessment could include an evaluation of the dose-response relationship as well as suitably adjusted comparisons of test groups (e.g. pair-wise dosed group versus concurrent VC comparisons).
Statistické analýzy mohou zahrnovat např. lineární regresi nebo Williamsovu zkoušku k posouzení trendů závislosti odezvy na dávce a Dunnettovu zkoušku pro párová srovnání.
Statistical analyses may include, e.g. linear regression or William’s test to assess dose-response trends, and Dunnett’s test for pair-wise comparisons.
Při výběru vhodné metody pro statistickou analýzu by si měl být zkoušející vědom možných nestejných odchylek a jiných souvisejících problémů, které si mohou vyžádat transformaci údajů nebo neparametrickou statistickou analýzu.
In choosing an appropriate method of statistical analysis, the investigator should maintain an awareness of possible inequalities of variances and other related problems that may necessitate a data transformation or a non-parametric statistical analysis.
V každém případě může být nezbytné, aby zkoušející provedl výpočty SI a statistické analýzy jednak za použití určitých hodnot (někdy označovaných výrazem ‚odlehlé hodnoty‘) a jednak bez nich.
In any case the investigator may need to carry out SI calculations and statistical analyses with and without certain data points (sometimes called “outliers”).
ÚDAJE A VYKAZOVÁNÍ
DATA AND REPORTING
Údaje by se měly shrnout do tabulky.
Data should be summarised in tabular form.
Při použití individuálního přístupu se uvedou hodnoty DPM získané za jednotlivá zvířata, průměrná hodnota DPM na zvíře za celou skupinu, příslušný chybový výraz (např. směrodatná odchylka – SD, směrodatná odchylka průměrných hodnot – SEM) a průměrná hodnota SI za každou dávkovou skupinu oproti souběžné kontrolní skupině s vehikulem.
When using the individual animal approach, show the individual animal DPM values, the group mean DPM/animal, its associated error term (e.g. SD, SEM), and the mean SI for each dose group compared against the concurrent VC group.
Při použití sdruženého přístupu se uvedou průměrné/mediánové hodnoty DPM a průměrná hodnota SI za každou dávkovou skupinu ve srovnání oproti souběžné kontrolní skupině s vehikulem.
When using the pooled treatment group approach, show the mean/median DPM and the mean SI for each dose group compared against the concurrent VC group.
Protokol o zkoušce musí obsahovat tyto informace:
The test report should contain the following information:
identifikační údaje (např. číslo CAS a číslo ES, jsou-li k dispozici, zdroj, čistota, známé nečistoty, číslo šarže),
identification data (e.g. CAS and EC numbers, if available; source; purity; known impurities; lot number);
skupenství a fyzikálně-chemické vlastnosti (např. prchavost, stálost, rozpustnost),
physical nature and physicochemical properties (e.g. volatility, stability, solubility);
jedná-li se o směs, je nutno uvést její složení a poměrné procentuální zastoupení složek.
if mixture, composition and relative percentages of components;
Rozpouštědlo/vehikulum:
Solvent/vehicle:
identifikační údaje (čistota, popřípadě koncentrace, použitý objem),
identification data (purity; concentration, where appropriate; volume used);
zdůvodnění volby vehikula.
justification for choice of vehicle;
zdroj myší z kmene CBA,
source of CBA mice;
mikrobiologický stav zvířat, je-li znám,
microbiological status of the animals, when known;
počet a věk zvířat,
number and age of animals;
původ zvířat, podmínky chovu, strava atd.
source of animals, housing conditions, diet, etc.;
podrobnosti o přípravě a aplikaci zkoušené látky,
details of test substance preparation and application;