natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Složka (eluent) B: acetonitril (3.4).
Eluent B: acetonitrile (3.4).
Složka (eluent) C: methanol (3.5).
Eluent C: methanol (3.5).
Mechanické míchací zařízení.
Mechanical shaker
Zařízení pro HPLC s ternárním gradientem.
Equipment for ternary gradient HPLC
Kolona pro kapalinovou chromatografii, Hypersil ODS, náplň 3 μm, 100 mm × 4,6 mm nebo obdobná.
Liquid chromatographic column, Hypersil ODS, 3 μm packing, 100 mm x 4,6 mm, or equivalent
UV detektor s nastavitelnou vlnovou délkou nebo detektor diodového pole.
UV detector with variable wavelength adjustment or diode array detector
Membránový filtr, 0,45 μm.
Membrane filter, 0,45 μm
Vakuové zařízení.
Vacuum manifold
Slepý vzorek krmiva
Blank feed
Za účelem kontroly toho, že slepý vzorek krmiva neobsahuje ani diclazuril, ani jiné rušivé látky, se provede slepá zkouška.
A blank feed shall be analysed to check that neither diclazuril nor interfering substances are present.
Slepý vzorek krmiva má podobné složení jako zkoušený vzorek a není zjištěn diclazuril ani jiné rušivé látky.
The blank feed shall be similar in type to that of the sample and on analysis diclazuril or interfering substances shall not be detected.
Zkouška na výtěžnost
Recovery test
Zkouška na výtěžnost se provede na slepém vzorku krmiva, ke kterému bylo přidáno takové množství diclazurilu, které odpovídá množství diclazurilu ve zkoušeném vzorku.
A recovery test shall be carried out by analysing the blank feed which has been fortified by addition of a quantity of diclazuril similar to that present in the sample.
Pro obohacení na obsah 1 mg/kg se k 50 g slepého vzorku krmiva přidá 0,1 ml základního standardního roztoku (3.8.1). Důkladně se promíchá, nechá se 10 minut stát a před zahájením extrakce (5.2) se znovu několikrát promíchá.
To fortify at a level of 1 mg/kg add 0,1 ml of the stock standard solution (3.8.1) to 50 g of a blank feed, mix thoroughly and leave for 10 min. mixing again several times before proceeding (5.2).
Není-li k dispozici slepý vzorek krmiva podobného složení jako zkoušený vzorek (viz 5.1.1), lze provést zkoušku na výtěžnost metodou standardního přídavku.
Alternatively, if a blank feed similar in type to that of the sample is not available (see 5.1.1), a recovery test can be performed by means of the standard addition method.
V tom případě se ke zkoušenému vzorku přidá přibližně stejné množství diclazurilu, jaké je ve vzorku již obsaženo.
In this case, the sample to be analysed is fortified with a quantity of diclazuril, similar to that already present in the sample.
Obohacený vzorek se potom zkouší společně se vzorkem neobohaceným a výtěžnost se vypočte odečtením.
This sample is analysed, together with the unfortified sample and the recovery can be calculated by subtraction.
Směs se přes noc třepe na míchacím zařízení (4.1).
Shake the mixture on the shaker (4.1) overnight.
Poté se nechá 10 minut usadit.
Allow to settle for 10 minutes.
20 ml supernatantu se převede do vhodné skleněné nádoby a zředí se 20 ml vody.
Transfer a 20 ml aliquot of the supernatant to a suitable glass container and dilute with 20 ml water.
Tento roztok se nanese na extrakční patronu (3.11) a prosaje se pomocí vakua (4.5).
Transfer this solution on an extraction cartridge (3.11), and pass through by applying vacuum (4.5).
Patrona se promyje 25 ml směsi složené z extrakční směsi (3.12) a vody, 65 + 35 (V + V).
Wash the cartridge with 25 ml of a mixture of extraction solvent (3.12) and water, 65 + 35 (V + V).
Spojené frakce se odstraní, účinná látka a interní standard se eluují 25 ml směsi složené z extrakční směsi (3.12) a vody, 80 + 20 (V + V).
Discard the collected fractions and elute the compounds with 25 ml of a mixture of extraction solvent (3.12) and water, 80 + 20 (V + V).
Tato frakce se v rotační odparce (4.3) odpaří při 60 oC do sucha.
Evaporate this fraction until it had just reached dryness by means of the rotary evaporator (4.3) at 60 oC.
Odparek se rozpustí v 1,0 ml DMF (3.6), přidá se 1,5 ml vody (3.1) a promíchá.
Dissolve the residue in 1,0 ml DMF (3.6), add 1,5 ml of water (3.1) and mix.
Roztok se přefiltruje přes membránový filtr (4.4).
Filter through a membrane filter (4.4).
Dále se pokračuje se stanovením HPLC (5.3).
Proceed to the HPLC determination (5.3).
Směs se přes noc třepe na třepačce (4.1).
Shake the mixture overnight on the shaker (4.1).
10000/p ml (p = deklarovaný obsah diclazurilu v premixu v mg/kg) supernatantu se převede do baňky s kulatým dnem vhodné velikosti.
Transfer an aliquot of 10000/p ml (p = nominal content of diclazuril in the premix in mg/kg) of the supernatant to a round bottomed flask of suitable size.
V rotační odparce (4.3) se odpaří za sníženého tlaku při 60 oC do sucha.
Evaporate until it had just reached dryness, under reduced pressure at 60 oC by means of the rotary evaporator (4.3).
Odparek se rozpustí v 10,0 ml DMF (3.6), přidá se 15,0 ml vody (3.1) a promíchá.
Redissolve the residue in 10,0ml DMF (3.6), add 15,0 ml water (3.1) and mix.
Následující podmínky jsou doporučené, mohou být použity jiné podmínky za předpokladu, že poskytují rovnocenné výsledky:
The following conditions are offered for guidance, other conditions may be used provided that they give equivalent results.
Kolona pro kapalinovou chromatografii (4.2.1):
Liquid chromatographic column (4.2.1)
100 mm × 4,6 mm, Hypersil ODS, náplň 3 μm nebo obdobná
100 mm × 4,6 mm, Hypersil ODS, 3 μm packing, or equivalent
Složka A (3.13.1):
Eluent A (3.13.1):
vodný roztok octanu amonného a tetrabutylamonium hydrogensíranu
Aqueous solution of ammonium acetate and tetrabutyl-ammonium hydrogen sulphate
Složka B (3.13.2):
Eluent B (3.13.2):
Složka C (3.13.3):
Eluent C (3.13.3):
Druh eluce:
Elution mode:
lineární gradientová eluce
linear gradient
výchozí podmínky: A + B + C = 60 + 20 + 20 (V + V + V)
initial conditions: A + B + C = 60 + 20 + 20 (V + V + V)
po 10 minutách gradientová eluce po dobu 30 minut do: A + B + C = 45 + 20 + 35 (V + V + V)
after 10 min. gradient elution during 30 min. to: A + B + C = 45 + 20 + 35 (V + V + V)
10 minut proplachovat složkou B
Flush with B during 10 min.
1,5–2 ml/min
1,5-2 ml/min.
Objem nástřiku:
Injection volume:
Vlnová délka detektoru:
Detector wavelength:
Stabilita chromatografického systému se kontroluje opakovaným nástřikem kalibračního roztoku (3.10), který obsahuje 2 μg/ml, dokud se nedosáhne konstantních výšek píků a konstantních retenčních časů.
Check the stability of the chromatographic system, injecting several times the calibration solution (3.10), containing 2 μg/ml, until constant peak heights and retention times are achieved.
Kalibrační roztok
Calibration solution
Několikrát se nastřikuje 20 μl kalibračního roztoku (3.10) a stanoví se průměrná hodnota výšky (plochy) píku diclazurilu a interního standardu.
Inject 20 μl of the calibration solution (3.10) several times and determine the mean peak height (area) of the diclazuril and internal standard peaks.
Několikrát se nastřikuje 20 μl roztoku vzorku (5.2.1 nebo 5.2.2) a stanoví se průměrná hodnota výšky (plochy) píku diclazurilu a interního standardu.
Inject 20 μl of the sample solution (5.2.1 or 5.2.2) several times and determine the mean peak height (area) of the diclazuril and internal standard peaks.
Krmiva
Feeds
Obsah diclazurilu (w) v mg/kg ve vzorku se vypočte podle následujícího vzorce:
The diclazuril content w (mg/kg) in the sample is given by the following formula:
výška (plocha) píku diclazurilu v roztoku vzorku (5.2.1)
peak height (area) of diclazuril in the sample solution (5.2.1)
výška (plocha) píku interního standardu v roztoku vzorku (5.2.1)
peak height (area) of the internal standard in the sample solution (5.2.1)
výška (plocha) píku diclazurilu v kalibračním roztoku (3.10)
peak height (area) of diclazuril in the calibration solution (3.10)
výška (plocha) píku interního standardu v kalibračním roztoku (3.10)
peak height (area) of the internal standard in the calibration solution (3.10)
koncentrace diclazurilu v kalibračním roztoku v μg/ml (3.10)
diclazuril concentration in the calibration solution in μg/ml (3.10)
V objem extrakční směsi podle 5.2.1 (tj. 2,5 ml).
V volume of the sample extract according to 5.2.1 (i.e. 2,5 ml)
výška (plocha) píku diclazurilu v roztoku vzorku (5.2.2)
peak height (area) of diclazuril in the sample solution (5.2.2)
výška (plocha) píku interního standardu v roztoku vzorku (5.2.2)
peak height (area) of the internal standard in the sample solution (5.2.2)
V objem extrakční směsi podle 5.2.2 (tj. 25 ml)
V volume of the sample extract according to 5.2.2 (i.e. 25 ml)
p deklarovaný obsah diclazurilu v premixu v mg/kg.
p nominal content of diclazuril in mg/kg in the premixture
Identitu analytů lze potvrdit opakovaným stanovením s přídavkem (co-chromatography) nebo využitím detektoru diodového pole, přičemž se srovnávají spektra extraktu vzorku (5.2.1 nebo 5.2.2) a kalibračního roztoku (3.10).
The identity of the analyte can be confirmed by co-chromatography, or by using a diode-array detector by which the spectra of the sample extract (5.2.1 or 5.2.2) and the calibration solution (3.10) are compared.
K extraktu vzorku (5.2.1 nebo 5.2.2) se přidá vhodné množství kalibračního roztoku (3.10).
A sample extract (5.2.1 or 5.2.2) is fortified by addition of an appropriate amount of calibration solution (3.10).
Přidané množství diclazurilu musí odpovídat obsahu diclazurilu v extraktu vzorku.
The amount of added diclazuril must be similar to the amount of diclazuril found in the sample extract.
Přídavek se projeví pouze zvýšením píku diclazurilu a píku interního standardu, a to úměrně přidanému množství a ředění.
Only the height of the diclazuril peak and the internal standard peak shall be enhanced after taking into account both the amount added and the dilution of the extract.
Šířka píku v polovině maximální výšky se může odchylovat od šířky původního píku diclazurilu nebo píku interního standardu v neobohaceném extraktu vzorku nejvýše o ± 10 %.
The peak width, at half of its height, must be within ± 10 % of the original width of the diclazuril peak or the internal standard peak of the unfortified sample extract.
při vlnové délce maximální absorpce vzorku i standardu musí být záznam spektra zaznamenaný ve vrcholu píku na chromatogramu stejný s přesností danou rozlišovací schopností detekčního systému.
The wavelength of maximum absorption of the sample and of the standard spectra, recorded at the peak apex on the chromatogram, must be the same within a margin determined by the resolving power of the detection system.
Pro detektor diodového pole se udává obvykle ±2 nm;
For diode-array detection this is typically within ± 2 nm.
při vlnové délce mezi 230 a 320 nm se nesmí záznam spektra zkoušeného vzorku a standardu zaznamenaný ve vrcholu píku chromatogramu lišit od ostatních částí spektra v rozsahu 10–100 % relativní absorbance.
Between 230 and 320 nm, the sample and standard spectra recorded at the peak apex of the chromatogram, must not be different for those parts of the spectrum within the range 10 % 100 % of relative absorbance.
Tohoto kritéria je dosaženo, jestliže jsou vykázána stejná maxima a jestliže odchylka mezi dvěma spektry nikde nepřesahuje 15 % absorbance standardního analytu;
This criterion is met when the same maxima are present and at no observed point the deviation between the two spectra exceeds 15 % of the absorbance of the standard analyte.
při vlnové délce mezi 230 a 320 nm se nesmí spektrum vzestupné části, vrcholu a sestupné části píku zkoušeného vzorku lišit od ostatních částí spektra v rozsahu 10–100 % relativní absorbance.
Between 230 and 320 nm, the spectra of the upslope, apex and downslope of the peak produced by the sample extract must not be different from each other for those parts of the spectrum within the range 10 % 100 % of relative absorbance.
Tohoto kritéria je dosaženo, jestliže jsou vykázána stejná maxima a jestliže ve všech sledovaných bodech odchylka mezi spektry nepřesahuje nikde 15 % absorbance spektra ve vrcholu píku.
This criterion is met when the same maxima are present and when at all observed points the deviation between the spectra does not exceed 15 % of the absorbance of the spectrum of the peak apex.
30 % relat. z hodnoty vyššího výsledku u obsahu diclazurilu mezi 0,5 mg/kg a 2,5 mg/kg,
30 % relative, to the higher value for diclazuril contents from 0,5 mg/kg to 2,5 mg/kg,
0,75 mg/kg u obsahu diclazurilu mezi 2,5 mg/kg a 5 mg/kg,
0,75 mg/kg for diclazuril contents between 2,5 mg/kg and 5 mg/kg,
15 % relat. z hodnoty vyššího výsledku u obsahu diclazurilu nad 5 mg/kg.
15 % relative to the higher value for diclazuril contents of more than 5 mg/kg.
Pro obohacený (slepý) vzorek musí být výtěžnost nejméně 80 %.
For a fortified (blank) sample the recovery shall be at least 80 %.
Při mezilaboratorních zkouškách bylo zkoušeno 5 vzorků 11 laboratořemi.
A collaborative study was arranged in which 5 samples were analysed by 11 laboratories.
Tyto vzorky sestávaly ze dvou premixů, z nichž jeden byl smísen s organickou (O 100) a druhý s anorganickou matricí (A 100).
These samples consisted of two premixtures; one was mixed with an organic matrix (O 100) and the other with an inorganic matrix (A 100).
Teoretický obsah diclazurilu je 100 mg/kg.
The theoretical content is 100 mg diclazuril per kg.
Tři krmné směsi pro drůbež pocházely od 3 různých výrobců (NL) (L1/Z1/K1).
The three mixed feeds for poultry were made by 3 different producers (NL) (L1/Z1/K1).
Teoretický obsah diclazurilu je 1 mg/kg.
The theoretical content is 1 mg diclazuril per kg.
Laboratoře byly pověřeny, aby každý ze vzorků podrobily jedné nebo dvěma zkouškám.
The laboratories were instructed to analyse each of the samples once or in duplicate.
(Přesnější údaje o těchto kruhových testech viz Journal of AOAC International, Volume 77, No6, 1994, s. 1 359–1 361).
(More detailed information on this collaborative study can be found in the Journal of AOAC International, Volume 77, No 6, 1994, p. 1359-1361).
Výsledky jsou shrnuty v níže uvedené tabulce.
The results are given in the following table.
Deklarovaný obsah (mg/kg)
Nominal content (mg/kg)
Musí být předem prokázáno, že odezva diclazurilu je měřena v lineární oblasti koncentrace.
The diclazuril response must have been previously demonstrated to be linear over the range of concentrations being measured.
STANOVENÍ OBSAHU LASALOCIDU
DETERMINATION OF LASALOCID SODIUM
Sodná sůl polyetherové karboxylové kyseliny produkované Streptomyces lasaliensis
Sodium salt of a polyether monocarboxylic acid produced by Streptomyces lasaliensis
Tato metoda umožňuje stanovení obsahu lasalocidu v krmivech a premixech.
The method makes it possible to determine the level of lasalocid sodium in feed and premixtures.
Mez detekce je 5 mg/kg, mez kvantifikace 10 mg/kg.
The limit of detection is 5 mg/kg, the limit of quantification is 10 mg/kg.
Lasalocid se extrahuje ze vzorku okyseleným methanolem a stanoví se vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC) na reverzní fázi s použitím spektrofluorimetru.
Lasalocid sodium is extracted from the sample into acidified methanol and determined by reversed-phase high performance liquid chromatography (HPLC) using a spectrofluorometric detector.
Dihydrogenfosforečnan draselný (KH2PO4).
Potassium dihydrogen phosphate (KH2PO4).
Kyselina fosforečná, w (w/w) = 85 %.
Orthophosphoric acid, w (w/w) = 85 %.
Roztok kyseliny fosforečné, c = 20 %.
Orthophosphoric acid solution, c = 20 %.
23,5 ml kyseliny fosforečné (3.2) se doplní vodou na 100 ml.
Dilute 23,5 ml of orthophosphoric acid (3.2) to 100 ml with water.
6-methyl-2-heptylamin (1,5-dimethylhexylamin), w (w/w) = 99 %.
6-Methyl-2-heptylamine (1,5-dimethylhexylamine), w (w/w) = 99 %.
Kyselina chlorovodíková, hustota = 1,19 g/ml.
Hydrochloric acid, density = 1,19 g/ml.
Fosfátový tlumivý roztok, c = 0,01 mol/l.
Phosphate buffer solution, c = 0,01 mol/l.
V 500 ml vody (3.11) se rozpustí 1,36 g KH2PO4 (3.1), přidá se 3,5 ml kyseliny fosforečné (3.2) a 10,0 ml 6-methyl-2-heptylaminu (3.4).
Dissolve 1,36 g of KH2PO4 (3.1) in 500 ml of water (3.11), add 3,5 ml of orthophosphoric acid (3.2) and 10,0 ml of 6-methyl-2-heptylamine (3.4).
Hodnota pH se upraví roztokem kyseliny fosforečné (3.3) na 4,0 a doplní se vodou (3.11) na 1000 ml.
Adjust the pH to 4,0 with orthophosphoric acid solution (3.3) and dilute to 1000 ml with water (3.11).
Do 1000 ml odměrné baňky se odměří 5,0 ml kyseliny chlorovodíkové (3.6), doplní se methanolem (3.5) po značku a promíchá.
Transfer 5,0 ml of hydrochloric acid (3.6) into a 1000 ml graduated flask, make up to the mark with methanol (3.5) and mix.
HPLC mobilní fáze, roztok fosfátového tlumivého roztoku a methanolu 5 + 95 (V + V).
HPLC mobile phase, phosphate buffer-methanol solution 5 + 95 (V + V).
Smíchá se 5 ml fosfátového tlumivého roztoku (3.7) a 95 ml methanolu (3.5).
Mix 5 ml of phosphate buffer solution (3.7) with 95 ml of methanol (3.5).
Standardní látka lasalocid, sodná sůl s deklarovanou čistotou, C34H53O8Na (sodná sůl polyetherové karboxylové kyseliny produkované Streptomyces lasaliensis), E 763.
Lasalocid sodium standard substance with guaranteed purity, C34H53O8Na (sodium salt of a polyether monocarboxylic acid produced by Streptomyces lasaliensis), E763.
Základní standardní roztok lasalocidu, 500 μg/ml
Lasalocid sodium stock standard solution, 500 μg/ml
Do 100 ml odměrné baňky se naváží 50 mg lasalocidu (3.10) s přesností na 0,1 mg a rozpustí se v okyseleném methanolu (3.8), doplní se jím po značku a promíchá.
Weigh to the nearest 0,1 mg, 50 mg of lasalocid sodium (3.10) into a 100 ml graduated flask, dissolve in acidified methanol (3.8), make up to the mark with the same solvent and mix.
Tento roztok se musí připravovat čerstvý před použitím.
This solution must be freshly prepared before use.
Pracovní standardní roztok lasalocidu, 50 μg/ml
Lasalocid sodium intermediate standard solution, 50 μg/ml
10,0 ml základního standardního roztoku (3.10.1) se odpipetuje do 100 ml odměrné baňky, doplní se po značku okyseleným methanolem (3.8) a promíchá.
Pipette 10,0 ml of stock standard solution (3.10.1) into a 100 ml graduated flask, make up to the mark with acidified methanol (3.8) and mix.
Do řady 50 ml odměrných baněk se odpipetuje 1,0, 2,0, 4,0, 5,0 a 10,0 ml pracovního standardního roztoku (3.10.2).
Into a series of 50 ml graduated flasks transfer 1,0, 2,0, 4,0, 5,0 and 10,0 ml of the intermediate standard solution (3.10.2).
Doplní se po značku okyseleným methanolem (3.8) a promíchá.
Make up to the mark with acidified methanol (3.8) and mix.
Tyto roztoky odpovídají 1,0, 2,0, 4,0, 5,0 a 10,0 μg lasalocidu na ml.
These solutions correspond to 1,0, 2,0, 4,0, 5,0 and 10,0 μg of lasalocid sodium per ml respectively.
Tyto roztoky se musí připravovat čerstvé před použitím.
These solutions must be prepared freshly before use.
Ultrazvuková lázeň (nebo vodní třepací lázeň) s kontrolou teploty.
Ultrasonic bath (or shaking water-bath) with temperature control.
Zařízení HPLC s dávkovacím systémem na 20 μl.
HPLC equipment with injection system, suitable for injecting volumes of 20 μl.
Kolona pro kapalinovou chromatografii 125 mm × 4 mm, reverzní fáze C18, náplň 5 μm nebo obdobná.
Liquid chromatographic column 125 mm x 4 mm, reversed-phase C18, 5 μm packing or equivalent.
Spektrofluorimetr s nastavitelnou excitační i emisní vlnovou délkou.
Spectrofluorometer with variable wavelength adjustment of excitation and emission wavelengths.
Pro provedení zkoušky na výtěžnost (5.1.2) se provede zkouška slepého vzorku krmiva pro kontrolu, že není přítomen ani lasalocid ani jiné rušivé látky.
For the performance of the recovery test (5.1.2) a blank feed shall be analysed to check that neither lasalocid sodium nor interfering substances are present.
Slepý vzorek krmiva má podobné složení jako zkoušený vzorek a není zjištěn lasalocid ani jiné rušivé látky.
The blank feed shall be similar in type to that of the sample and lasalocid sodium or interfering substances shall not be detected.
Zkouška na výtěžnost se provede na slepém vzorku krmiva, ke kterému bylo přidáno takové množství lasalocidu, které odpovídá množství lasalocidu ve zkoušeném vzorku.
A recovery test shall be carried out by analysing the blank feed which has been fortified by addition of a quantity of lasalocid sodium, similar to that present in the sample.
Pro obohacení na obsah 100 mg/kg se přidá 10,0 ml základního standardního roztoku (3.10.1) do 250 ml kónické baňky a roztok se odpaří na objem asi 0,5 ml.
To fortify at a level of 100 mg/kg, transfer 10,0 ml of the stock standard (3.10.1) to a 250 ml conical flask and evaporate the solution to approximately 0,5 ml.
Potom se přidá 50 g slepého vzorku krmiva. Důkladně se promíchá, nechá se 10 minut stát a před zahájením extrakce (5.2) se znovu několikrát promíchá.
Add 50 g of the blank feed, mix thoroughly and leave for 10 minutes mixing again several times before proceeding with the extraction step (5.2).
V tom případě se ke zkoušenému vzorku přidá přibližně stejné množství lasalocidu, jaké je ve vzorku již obsaženo.
In this case the sample to be analysed is fortified with a quantity of lasalocid sodium similar to that already present in the sample.
Obohacený vzorek se potom zkouší společně se vzorkem neobohaceným a výtěžnost se vypočte odečtením.
This sample is analysed together with the unfortified sample and the recovery calculated by subtraction.
Baňka se volně uzavře zátkou a promíchá kroužením.
Stopper loosely and swirl to disperse.
Potom se vloží na 20 minut do ultrazvukové lázně (4.1) při teplotě asi 40 oC. Pak se baňka vyjme a ochladí na laboratorní teplotu.
Place the flask in an ultrasonic bath (4.1) at approximately 40 oC for 20 minutes, then remove and cool to room temperature.
Nechá se stát asi hodinu, aby se usadily suspedované částice, a potom se alikvotní část přefiltruje přes membránový filtr 0,45 μm (4.2) do vhodné nádoby.
Allow to stand for about 1 hour until the suspended matter has settled, then filter an aliquot portion through a 0,45 μm membrane filter (4.2) into a suitable vessel.
Potom se vloží na 20 minut do ultrazvukové lázně (4.1) při teplotě asi 40 oC. Pak se baňka vyjme a ochladí na laboratorní teplotu.
Place the flask and contents in an ultrasonic bath (4.1) at approximately 40 oC for 20 minutes, then remove and cool to room temperature.
Doplní se po značku okyseleným methanolem (3.8) a důkladně promíchá.
Dilute to the mark with acidified methanol (3.8) and mix thoroughly.
Nechá se stát asi hodinu, aby se usadily suspendované částice, a potom se alikvotní část přefiltruje přes membránový filtr 0,45 μm (4.2).
Allow to stand for 1 hour until the suspended matter has settled, then filter an aliquot portion through a 0,45 μm membrane filter (4.2).
Vhodný objem čirého filtrátu se naředí okyseleným methanolem (3.8) na konečnou koncentraci asi 4 μg/ml lasalocidu.
Dilute an appropriate volume of the clear filtrate with acidified methanol (3.8) to produce a final test solution containing about 4 μg/ml of lasalocid sodium.
Následující podmínky jsou doporučené; mohou být použity jiné podmínky za předpokladu, že poskytují rovnocenné výsledky:
The following conditions are offered for guidance; other conditions may be used, provided they yield equivalent results:
Kolona pro kapalinovou chromatografii (4.3.1):
Liquid chromatographic column (4.3.1):
125 mm × 4 mm, reverzní fáze C18, náplň 5 μm nebo obdobná
125 mm × 4 mm, reversed-phase C18, 5 μm packing or equivalent
směs fosfátového tlumivého roztoku (3.7) a methanolu (3.5), 5 + 95 (V + V)
Mixture of phosphate buffer solution (3.7) and methanol (3.5), 5+95 (V+V)
Detekční vlnová délka:
Detection wavelengths:
excitace:
Excitation:
emise:
Emission:
Stabilita chromatografického systému se kontroluje opakovaným nástřikem kalibračního roztoku (3.10.3), který obsahuje 4,0 μg/ml, dokud se nedosáhne konstantních výšek (nebo ploch) píků a konstantních retenčních časů.
Check the stability of the chromatographic system, injecting the calibration solution (3.10.3) containing 4,0 μg/ml several times, until constant peak heights (or areas) and retention times are achieved.
Každý kalibrační roztok (3.10.3) se nastřikuje několikrát a změří se výšky (plochy) píků pro každou koncentraci.
Inject each calibration solution (3.10.3) several times and determine the mean peak heights (areas) for each concentration.