natgillin/translations-raw huggingface dataset:
U standardní miskové metody (1, 2, 3, 4) bez metabolické aktivace se obvykle smíchá 0,05 ml nebo 0,1 ml zkušebních roztoků, 0,1 ml čerstvé bakteriální kultury (obsahující přibližně 108 životaschopných buněk) a 0,5 ml sterilního pufru s 2,0 ml vrchního agaru.
For the plate incorporation method (1)(2)(3)(4), without metabolic activation, usually 0,05 ml or 0,1 ml of the test solutions, 0,1 ml of fresh bacterial culture (containing approximately 108 viable cells) and 0,5 ml of sterile buffer are mixed with 2,0 ml of overlay agar.
V případě zkoušky s metabolickou aktivací se obvykle smíchá 0,5 ml metabolické aktivační směsi obsahující přiměřené množství postmitochondriální frakce (v rozmezí 5 až 30 % obj. v metabolické aktivační směsi) s vrchním agarem (2,0 ml) a zároveň s bakteriemi a zkoušenou látkou nebo zkušebním roztokem.
For the assay with metabolic activation, usually 0,5 ml of metabolic activation mixture containing an adequate amount of post-mitochondrial fraction (in the range from 5 to 30 % v/v in the metabolic activation mixture) are mixed with the overlay agar (2,0 ml), together with the bacteria and test substance/test solution.
Obsah každé zkumavky se promíchá a přelije přes povrch minimálního agaru na misce.
The contents of each tube are mixed and poured over the surface of a minimal agar plate.
Před inkubací se nechá vrchní agar ztuhnout.
The overlay agar is allowed to solidify before incubation.
U preinkubační metody (2, 3, 5, 6) se zkoušená látka nebo zkoušený roztok před smícháním s vrchním agarem a přelitím přes povrch minimálního agaru na misce obvykle 20 minut nebo déle preinkubuje s testovacím kmenem (obsahujícím přibližně 108 životaschopných buněk) a sterilním pufrem nebo metabolickým aktivačním systémem (0,5 ml) při 30–37 oC.
For the preincubation method (2)(3)(5)(6), the test substance/test solution is preincubated with the test strain (containing approximately 108 viable cells) and sterile buffer or the metabolic activation system (0,5 ml) usually for 20 min. or more at 30-37 oC prior to mixing with the overlay agar and pouring onto the surface of a minimal agar plate.
Obvykle se smíchá 0,05 nebo 0,1 ml zkoušené látky nebo zkušebního roztoku, 0,1 ml bakterií a 0,5 ml směsi S9 nebo sterilního pufru s 2,0 ml vrchního agaru.
Usually, 0,05 or 0,1 ml of test substance/test solution, 0,1 ml of bacteria, and 0,5 ml of S9-mix or sterile buffer are mixed with 2,0 ml of overlay agar.
Zkumavky by měly být během inkubace provzdušňovány na třepačce.
Tubes should be aerated during pre-incubation by using a shaker.
K dostatečnému odhadu odchylky by měly být při každé úrovni dávky použity 3 misky.
For an adequate estimate of variation, triplicate plating should be used at each dose level.
Použití dvou misek je přijatelné po vědeckém zdůvodnění.
The use of duplicate plating is acceptable when scientifically justified.
Případná ztráta misky nemusí znamenat znehodnocení zkoušky.
The occasional loss of a plate does not necessarily invalidate the assay.
Plynné nebo těkavé látky by měly být zkoušeny vhodnými metodami, např. v těsně uzavřených kultivačních nádobách (12, 14, 15, 16).
Gaseous or volatile substances should be tested by appropriate methods, such as in sealed vessels (12)(14)(15)(16).
Inkubace
Incubation
Všechny misky v dané zkoušce by měly být inkubovány při 37 oC po 48–72 hodinách.
All plates in a given assay should be incubated at 37 oC for 48-72 hours.
Po uplynutí inkubační doby se zjistí počet kolonií revertantů na misku.
After the incubation period, the number of revertant colonies per plate is counted.
Předloženými údaji by měly být počty kolonií revertantů připadající na misku.
Data should be presented as the number of revertant colonies per plate.
Měl by být rovněž uveden počet kolonií revertantů jak na miskách s negativní kontrolou (kontrola rozpouštědla a případně neexponovaná kontrola), tak na miskách s pozitivní kontrolou.
The number of revertant colonies on both negative (solvent control, and untreated control if used) and positive control plates should also be given.
Počty na jednotlivých miskách, střední hodnoty počtu kolonií revertantů na misku a směrodatná odchylka by měly být předloženy pro zkoušenou látku a pozitivní a negativní kontrolu (neexponovanou kontrolu a/nebo kontrolu rozpouštědla).
Individual plate counts, the mean number of revertant colonies per plate and the standard deviation should be presented for the test substance and positive and negative (untreated and/or solvent) controls.
Negativní výsledky musí být potvrzeny případ od případu.
Negative results need to be confirmed on a case-by-case basis.
K parametrům studie, které by mohly být změněny, patří rozmezí koncentrací, metoda zpracování (standardní misková metoda nebo preinkubace v kapalném médiu) a podmínky metabolické aktivace.
Study parameters that might be modified include the concentration spacing, the method of treatment (plate-incorporation or liquid pre-incubation), and metabolic activation conditions.
Pro stanovení pozitivního výsledku existuje několik kritérií, např. nárůst počtu kolonií revertantů na misku nad testovaný rozsah u alespoň jednoho kmene s metabolickým aktivačním systémem nebo bez něho, a to v závislosti na koncentraci, nebo reprodukovatelný nárůst tohoto počtu pro jednu nebo více koncentrací (23).
There are several criteria for determining a positive result, such as a concentration-related increase over the range tested and/or a reproducible increase at one or more concentrations in the number of revertant colonies per plate in at least one strain with or without metabolic activation system (23).
Při hodnocení výsledků zkoušky mohou být použity jako pomocný prostředek statistické metody (24).
Statistical methods may be used as an aid in evaluating the test results (24).
Statistická významnost by neměla být jediným určujícím faktorem pro pozitivní odpověď.
However, statistical significance should not be the only determining factor for a positive response.
Pozitivní výsledky zkoušky na reverzní mutace s bakteriemi znamenají, že zkoušená látka indukuje v genomu kmenů Salmonella typhimurium a/nebo Escherichia coli bodové mutace substitucí bází nebo posunem čtecího rámce.
Positive results from the bacterial reverse mutation test indicate that the substance induces point mutations by base substitutions or frameshifts in the genome of either Salmonella typhimurium and/or Escherichia coli.
Negativní výsledky znamenají, že zkoušená látka není za podmínek zkoušky pro testovací druhy mutagenní.
Negative results indicate that under the test conditions, the test substance is not mutagenic in the tested species.
zdůvodnění volby rozpouštědla/vehikula,
justification for choice of solvent/vehicle,
Kmeny:
Strains:
použité kmeny,
strains used,
počet buněk v kultuře,
number of cells per culture,
charakteristiky kmene.
strain characteristics.
množství zkoušené látky na misku (mg/misku nebo μl/misku) s odůvodněním výběru dávky a počtu misek na koncentraci,
amount of test substance per plate (mg/plate or μl/plate) with rationale for selection of dose and number of plates per concentration,
použitá média,
media used,
postup expozice.
treatment procedures.
počty na jednotlivých miskách,
individual plate counts,
střední hodnota počtu kolonií revertantů na misku a směrodatná odchylka,
the mean number of revertant colonies per plate and standard deviation,
údaje o souběžné negativní (rozpouštědlo/vehikulum) a pozitivní kontrole s rozpětími, středními hodnotami a směrodatnými odchylkami,
concurrent negative (solvent/vehicle) and positive control data, with ranges, means and standard deviations,
dosavadní údaje o negativní (rozpouštědlo/vehikulum) a pozitivní kontrole s rozpětími, středními hodnotami a směrodatnými odchylkami.
historical negative (solvent/vehicle) and positive control data with ranges, means and standard deviations.
Ames, B.N., McCann, J. and Yamasaki E. (1975). Methods for Detecting Carcinogens and Mutagens with the Salmonella/Mammalian-Microsome Mutagenicity Test.
Ames, B.N., McCann, J. and Yamasaki E., (1975) Methods for Detecting Carcinogens and Mutagens with the Salmonella/Mammalian-Microsome Mutagenicity Test.
Gatehouse, D., Haworth, S., Cebula, T., Gocke, E., Kier, L., Matsushima, T., Melcion, C., Nohmi, T., Venitt, S. and Zeiger, E. (1994). Recommendations for the Performance of Bacterial Mutation Assays.
Gatehouse, D., Haworth, S., Cebula, T., Gocke, E., Kier, L., Matsushima, T., Melcion, C., Nohmi, T., Venitt, S. and Zeiger, E., (1994) Recommendations for the Performance of Bacterial Mutation Assays.
Mutation Res., 312, 217–233.
Mutation Res., 312, p. 217-233.
Kier, L.D., Brusick D.J., Auletta, A.E., Von Halle, E.S., Brown, M.M., Simmon, V.F., Dunkel, V., McCann, J., Mortelmans, K., Prival, M., Rao, T.K. and Ray V. (1986). The Salmonella typhimurium/Mammalian Microsomal Assay: A report of the U.S.
Kier, L.D., Brusick D.J., Auletta, A.E., Von Halle, E.S., Brown, M.M., Simmon, V.F., Dunkel, V., McCann, J., Mortelmans, K., Prival, M., Rao, T.K. and Ray V., (1986) The Salmonella typhimurium/Mammalian Microsomal Assay: A Report of the U.S.
(1988). A Review and Analysis of the Chinese Hamster Ovary/Hypoxanthine Guanine Phosphoribosyl Transferase System to Determine the Mutagenicity of Chemical Agents: A Report of Phase III of the U.S. Environmental Protection Agency Gene-Tox Program.
Environmental Protection Agency Gene-Tox Program.
Mutation Res., 168, 69–240.
Mutation Res., 168, p. 69-240.
Yahagi, T., Degawa, M., Seino, Y.Y., Matsushima, T., Nagao, M., Sugimura, T. and Hashimoto, Y. (1975). Mutagenicity of Carcinogen Azo Dyes and their Derivatives, Cancer Letters, 1, 91–96.
Yahagi, T., Degawa, M., Seino, Y.Y., Matsushima, T., Nagao, M., Sugimura, T. and Hashimoto, Y., (1975) Mutagenicity of Carcinogen Azo Dyes and their Derivatives, Cancer Letters, 1, p. 91-96.
Matsushima, M., Sugimura, T., Nagao, M., Yahagi, T., Shirai, A. and Sawamura, M. (1980). Factors Modulating Mutagenicity Microbial Tests.
Matsushima, M., Sugimura, T., Nagao, M., Yahagi, T., Shirai, A. and Sawamura, M., (1980) Factors Modulating Mutagenicity Microbial Tests.
Norpoth K.H. and Garner, R.C., Springer, Berlin-Heidelberg-New York. s. 273–285.
Norpoth K.H. and Garner, R.C., Springer, Berlin-Heidelberg-New York. p. 273-285.
Gatehouse, D.G., Rowland, I.R., Wilcox, P., Callender, R.D. and Foster, R. (1980). Bacterial Mutation Assays.
Gatehouse, D.G., Rowland, I.R., Wilcox, P., Callender, R.D. and Foster, R., (1980) Bacterial Mutation Assays.
Kirkland, Cambridge University Press, s. 13–61.
Kirkland, Cambridge University Press, p. 13-61.
Aeschacher, H.U., Wolleb, U. and Porchet, L. (1987). Liquid Preincubation Mutagenicity Test for Foods.
Aeschacher, H.U., Wolleb, U. and Porchet, L., (1987) Liquid Preincubation Mutagenicity Test for Foods.
Food Safety, 8, 167–177.
Food Safety, 8, p. 167-177.
Green, M.H.L., Muriel, W.J. and Bridges, B.A. (1976). Use of a simplified fluctuation test to detect low levels of mutagens.
Green, M.H.L., Muriel, W.J. and Bridges, B.A., (1976) Use of a simplified fluctuation test to detect low levels of mutagens.
Mutation Res., 38, 33–42.
Mutation Res., 38, p. 33-42.
Hubbard, S.A., Green, M.H.L., Gatehouse, D. and J.W.
Hubbard, S.A., Green, M.H.L., Gatehouse, D. and J.W.
Bridges (1984). The Fluctuation Test in Bacteria.
Bridges (1984) The Fluctuation Test in Bacteria.
Kilbey, B.J., Legator, M., Nichols, W. and Ramel, C., Elsevier, Amsterdam-New York-Oxford, s. 141–161.
Kilbey, B.J., Legator, M., Nichols, W. and Ramel, C., Elsevier, Amsterdam-New York-Oxford, p. 141-161.
Thompson, E.D. and Melampy, P.J. (1981). An Examination of the Quantitative Suspension Assay for Mutagenesis with Strains of Salmonella typhimurium.
Thompson, E.D. and Melampy, P.J., (1981) An Examination of the Quantitative Suspension Assay for Mutagenesis with Strains of Salmonella typhimurium.
Environmental Mutagenesis, 3, 453–465.
Environmental Mutagenesis, 3, p. 453-465.
Araki, A., Noguchi, T., Kato, F. and T. Matsushima (1994). Improved Method for Mutagenicity Testing of Gaseous Compounds by Using a Gas Sampling Bag.
Araki, A., Noguchi, T., Kato, F. and T. Matsushima (1994) Improved Method for Mutagenicity Testing of Gaseous Compounds by Using a Gas Sampling Bag.
Mutation Res., 307, 335–344.
Mutation Res., 307, p. 335-344.
Prival, M.J., Bell, S.J., Mitchell, V.D., Reipert, M.D. and Vaughn, V.L. (1984). Mutagenicity of Benzidine and Benzidine-Congener Dyes and Selected Monoazo Dyes in a Modified Salmonella Assay.
Prival, M.J., Bell, S.J., Mitchell, V.D., Reipert, M.D. and Vaughn, V.L., (1984) Mutagenicity of Benzidine and Benzidine-Congener Dyes and Selected Monoazo Dyes in a Modified Salmonella Assay.
Mutation Res., 136, 33–47.
Mutation Res., 136, p. 33-47.
Zeiger, E., Anderson, B.E., Haworth, S., Lawlor, T. and Mortelmans, K. (1992). Salmonella Mutagenicity Tests.
Zeiger, E., Anderson, B.E., Haworth, S., Lawlor, T. and Mortelmans, K., (1992) Salmonella Mutagenicity Tests.
V. Results from the Testing of 311 Chemicals.
V. Results from the Testing of 311 Chemicals.
Mutagen., 19, 2–141.
Mutagen., 19, p. 2-141.
Simmon, V., Kauhanen, K. and Tardiff, R.G. (1977).
Simmon, V., Kauhanen, K. and Tardiff, R.G., (1977) Mutagenic Activity of Chemicals Identified in Drinking Water.
Mutagenic Activity of Chemicals Identified in Drinking Water. In Progress in Genetic Toxicology, D. Scott, B. Bridges and F. Sobels (Eds.)
In Progress in Genetic Toxicology, D. Scott, B. Bridges and F. Sobels (Eds.)
Elsevier, Amsterdam, s. 249–258.
Elsevier, Amsterdam, p. 249-258.
Hughes, T.J., Simmons, D.M., Monteith, I.G. and Claxton, L.D. (1987). Vaporization Technique to Measure Mutagenic Activity of Volatile Organic Chemicals in the Ames/Salmonella Assay.
Hughes, T.J., Simmons, D.M., Monteith, I.G. and Claxton, L.D., (1987) Vaporisation Technique to Measure Mutagenic Activity of Volatile Organic Chemicals in the Ames/Salmonella Assay.
Environmental Mutagenesis, 9, 421–441.
Environmental Mutagenesis, 9, p. 421-441.
Matsushima, T., Matsumoto, A., Shirai, M., Sawamura, M., and Sugimura, T. (1979). Mutagenicity of the Naturally Occurring Carcinogen Cycasin and Synthetic Methylazoxy Methane Conjugates in Salmonella typhimurium.
Matsushima, T., Matsumoto, A., Shirai, M., Sawamura, M., and Sugimura, T., (1979) Mutagenicity of the Naturally Occurring Carcinogen Cycasin and Synthetic Methylazoxy Methane Conjugates in Salmonella typhimurium.
Cancer Res., 39, 3780–3782.
Cancer Res., 39, p. 3780-3782.
Tamura, G., Gold, C., Ferro-Luzzi, A. and Ames, B.N. (1980).
Tamura, G., Gold, C., Ferro-Luzzi, A. and Ames, B.N., (1980) Fecalase: A Model for Activation of Dietary Glycosides to Mutagens by Intestinal Flora.
Molecular Dissection of Mutations at the Heterozygous Thymidine Kinase Locus in Mouse Lymphoma Cells.
Proc.
Proc.
Natl.
Acad. Sci.
Acad.
Sci.
Sci.
USA, 77, 4961–4965.
USA, 77, p. 4961-4965.
Wilcox, P., Naidoo, A., Wedd, D.J. and Gatehouse, D.G. (1990). Comparison of Salmonella typhimurium TA 102 with Escherichia coli WP2 Tester strains.
Wilcox, P., Naidoo, A., Wedd, D.J. and Gatehouse, D.G., (1990) Comparison of Salmonella typhimurium TA 102 with Escherichia coli WP2 Tester strains.
Mutagenesis, 5, 285–291.
Mutagenesis, 5, p. 285-291.
Matsushima, T., Sawamura, M., Hara, K. and Sugimura, T. (1976). A Safe Substitute for Polychlorinated Biphenyls as an Inducer or Metabolic Activation Systems.
Matsushima, T., Sawamura, M., Hara, K. and Sugimura, T., (1976) A Safe Substitute for Polychlorinated Biphenyls as an Inducer or Metabolic Activation Systems.
In: „In Vitro metabolic Activation in Mutagenesis Testing“ Eds.
‘In vitro metabolic Activation in Mutagenesis Testing’ Eds.
de Serres et al.
de Serres et al.
Elsevier, North Holland, s. 85–88.
Elsevier, North Holland, p. 85-88.
Elliot, B.M., Combes, R.D., Elcombe, C.R., Gatehouse, D.G., Gibson, G.G., Mackay, J.M. and Wolf, R.C. (1992). Alternatives to Aroclor 1254-induced S9 in In Vitro Genotoxicity Assays.
Elliot, B.M., Combes, R.D., Elcombe, C.R., Gatehouse, D.G., Gibson, G.G., Mackay, J.M. and Wolf, R.C., (1992) Alternatives to Aroclor 1254-induced S9 in in vitro Genotoxicity Assays.
Maron, D., Katzenellenbogen, J. and Ames, B.N. (1981).
Maron, D., Katzenellenbogen, J. and Ames, B.N., (1981) Compatibility of Organic Solvents with the Salmonella/Microsome Test.
Compatibility of Organic Solvents with the Salmonella/Microsome Test. Mutation Res., 88, 343–350.
Mutation Res., p. 88343-350.
Claxton, L.D., Allen, J., Auletta, A., Mortelmans, K., Nestmann, E. and Zeiger, E. (1987). Guide for the Salmonella typhimurium/Mammalian Microsome Tests for Bacterial Mutagenicity. Mutation Res.
Claxton, L.D., Allen, J., Auletta, A., Mortelmans, K., Nestmann, E. and Zeiger, E., (1987) Guide for the Salmonella typhimurium/Mammalian Microsome Tests for Bacterial Mutagenicity.
Mahon, G.A.T., Green, M.H.L., Middleton, B., Mitchell, I., Robinson, W.D. and Tweats, D.J. (1989).
Mahon, G.A.T., Green, M.H.L., Middleton, B., Mitchell, I., Robinson, W.D. and Tweats, D.J., (1989) Analysis of Data from Microbial Colony Assays.
Analysis of Data from Microbial Colony Assays. In: UKEMS Sub-Committee on Guidelines for Mutagenicity Testing.
UKEMS Sub-Committee on Guidelines for Mutagenicity Testing.
Kirkland, D.J., Cambridge University Press, s. 28–65.
Kirkland, D.J., Cambridge University Press, p. 28-65.
Různé haploidní a diploidní kmeny kvasinek Saccharomyces cerevisiae mohou být použity ke stanovení chemicky indukovaných genových mutací za přítomnosti metabolické aktivace nebo bez ní.
A variety of haploid and diploid strains of the yeast Saccharomyces cerevisiae can be used to measure the production of gene mutations induced by chemical agents with and without metabolic activation.
Jsou využívány přímé mutační systémy u haploidních kmenů, jako měření mutací z červených mutantů vyžadujících adenin (ade-1, ade-2) na dvojité bílé mutanty vyžadující adenin, a selektivní systémy, jako je indukce rezistence vůči kanavinu a cykloheximidu.
Forward mutation systems in haploid strains, such as the measurement of mutation from red, adenine-requiring mutants (ade-1, ade-2) to double adenine-requiring white mutants and selective systems such as the induction of resistance to canavnaine and cycloheximide, have been utilised.
V nejlépe ověřeném reverzním mutačním systému se využívá haploidního kmene XV 18514C s nonsense mutacemi (ochre) ade 2-1, arg 4-17, lys 1-1 and trp 5-48, které jsou vratné působením mutagenů vyvolávajících záměnu bází, indukujících mutace ve specifickém místě nebo ochre-supresorové mutace.
The most extensively validated reverse mutation system involves the use of the haploid strain XV 185-14C which carries the ochre nonsense mutations ade 2-1, arg 4-17, lys 1-1 and trp 5-48, which are reversible by base substitution mutagens that induce site specific mutations or ochre suppressor mutations.
XV 185-14C nese rovněž marker his 1-7 missense mutaci, revertovanou převážně mutacemi v dalším místě, a marker hom 3-10, který je revertován posunovými mutageny.
XV 185-14C also carries the his 1-7 marker, a missense mutation reverted mainly by second site mutations, and the marker hom 3-10 which is reverted by frameshift mutagens.
U diploidních kmenů S. cerevisiae je jediným široce využívaným kmenem D7, který je homozygotní pro ilv 1-92.
In diploid strains of S. cerevisiae the only extensively used strain is D7 which is homozygous for ilv 1-92.
Roztoky zkoušených chemických látek a kontrol se připraví těsně před zkoušením za použití vhodného vehikula.
Solutions of test chemicals and control should be prepared just prior to testing, using an appropriate vehicle.
U organických látek, které nejsou rozpustné ve vodě, se použije nejvýše 2 % (obj.) roztok v organických rozpouštědlech, jako jsou ethanol, aceton nebo dimethylsulfoxid (DMSO).
In the case of organic compounds, which are not water soluble, not more than a 2 % solution v/v of organic solvents such as ethanol, acetone or dimethylsulphoxide (DMSO) should be used.
Konečná koncentrace vehikula nesmí významně ovlivnit životaschopnost buněk a charakteristiky růstu.
The final concentration of the vehicle should not significantly affect cell viability and growth characertistics.
Buňky se exponují zkoušeným chemickým látkám jak v přítomnosti, tak v nepřítomnosti vhodného vnějšího metabolického aktivačního systému.
Cells should be exposed to test chemicals both in the presence and absence of an appropriate exogenous metabolic activation system.
Nejčastěji používaným systémem je kofaktorem dotovaná postmitochondriální frakce připravená z jater hlodavců, upravovaná činidly indukujícími enzymy.
The most commonly used system is a co-factor supplemented post-mitochondrial fraction from the livers of rodents pre-treated with enzyme inducing agents.
Použití jiných druhů, tkání, postmitochondriálních frakcí nebo postupů může být rovněž vhodné pro metabolickou aktivaci.
The use of other species, tissues, post-mitochondrial fractions, or procedures may also be appropriate for metabolic activation.
Zkušební kmeny
Tester strains
Nejpoužívanější kmeny pro studie genových mutací jsou haploidní kmen XV 185-14C a diploidní kmen D7.
The haploid strain XV 185-14C and the diploid strain D7 are the most used in gene mutation studies.
Jiné kmeny mohou být rovněž vhodné.
Other strains may also be appropriate.
Pro určení počtu přežívajících a mutovaných buněk se použijí vhodná kultivační média. Použití negativních a pozitivních kontrol
Appropriate culture media are used for the determination of survival and mutant numbers.
Použití negativních a pozitivních kontrol
Use of negative and positive controls
Souběžně se nasadí pozitivní kontroly, neexponované kontroly a kontroly s rozpouštědlem.
Positive, untreated and solvent controls should be performed concurrently.
Použije se nejméně pět dostatečně odstupňovaných koncentrací zkoušené chemické látky. U toxických látek nemá nejvyšší zkoušená koncentrace snižovat přežití na méně než 5–10 %.
Appropriate positive control chemicals should be used for each specific mutational endpoint.
Použije se nejméně pět dostatečně odstupňovaných koncentrací zkoušené chemické látky.
At least five adequately spaced concentrations of the test substance should be used.
Misky se inkubují v temnu čtyři až sedm dní při 28 až 30 oC.
For toxic substances, the highest concentration tested should not reduce survival below 5 to 10 %. Relatively water-insoluble substances should be tested up to their limit of solubility, using appropriate procedures.
Frekvence spontánních mutací
For freely water-soluble non-toxic substances, the upper concentration should be determined on a case by case basis. Incubation conditions
Použijí se subkultury s četností spontánních mutací v obvyklém přijatelném rozmezí.
The plates are incubated four to seven days at 28 to 30 oC in the dark. Spontaneous mutation frequencies
Počet misek
Sub-cultures should be used with spontaneous mutation frequencies within the accepted normal range.
Pro stanovení počtu prototrofních buněk vznikajících genovými mutacemi a pro stanovení životaschopnosti buněk se použijí nejméně tři misky na jednu koncentraci.
Number of replicates At least three replicate plates should be used per concentration for the assay of prototrophs produced by gene mutation and for cell viability.
U experimentů s markery, jako je hom 3-10 s nízkou mutační rychlostí, se počet misek zvýší, aby byly získány statisticky relevantní údaje.
In the case of experiments using markers such as hom 3-10 with a low mutation rate, the number of plates used must be increased to provide statistically relevant data.
Expozice kmenů S. cerevisiae se obvykle provede v kapalném prostředí a zahrnuje buď buňky ve stacionární fázi, nebo rostoucí buňky.
Treatment of S. cerevisiae strains is usually performed in a liquid test procedure involving either stationary or growing cells.
Výchozí experimenty se provedou na rostoucích buňkách: 1 – 5 × 107 buněk/ml se za protřepávání vystaví zkoušené látce na dobu až 18 hodin při 28 až 37 oC; podle potřeby se v průběhu expozice přidá odpovídající množství metabolické aktivační směsi.
Initial experiments should be carried out on growing cells: 1-5 × 107 cells/ml are exposed to the test chemical for up to 18 hours at 28 to 37 oC with shaking; an adequate amount of metabolic activation system is added during treatment when appropriate.