natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Moore, M.M. and Doerr, C.L. (1990). Comparison of Chromosome Aberration Frequency and Small-Colony TK-Deficient Mutant Frequency in L5178Y/TK+/- - 3.7.2C Mouse Lymphoma Cells.
Moore, M.M. and Doerr, C.L., (1990) Comparison of Chromosome Aberration Frequency and Small-Colony TK-Deficient Mutant Frequency in L5178Y/TK+/- - 3.7.2C Mouse Lymphoma Cells.
Mutagenesis, 5, 609–614.
Mutagenesis, 5, p. 609-614.
Zkouška na neplánovanou syntézu DNA (UDS) umožňuje měřit reparační syntézu DNA po vyštěpení a nahrazení části DNA obsahující oblast poškození indukovaného chemickými nebo fyzikálními faktory.
The Unscheduled DNA Synthesis (UDS) test measures the DNA repair synthesis after excision and removal of a stretch of DNA containing the region of damage induced by chemical and physical agents.
Zkouška je založena na inkorporaci značeného thymidinu (3H-TdR) do DNA savčích buněk, které nejsou v S-fázi buněčného cyklu.
The test is based on the incorporation of tritium labelled thymidine (3H-TdR) into the DNA of mammalian cells, which are not in the S phase of the cell cycle.
Inkorporace 3H-TdR je stanovena autoradiograficky nebo kapalinovou scintilační spektrometrií (LSC) DNA exponovaných buněk.
The uptake of 3H-TdR may be determined by autoradiography or by liquid scintillation counting (LSC) of DNA from the treated cells.
Savčí buněčné kultury, pokud ne přímo primární buněčné kultury hepatocytů potkana, se exponují zkoušené látce jak v přítomnosti, tak i v nepřítomnosti vnějšího metabolického aktivačního systému.
Mammalian cells in culture, unless primary rat hepatocytes are used, are treated with the test agent with and without an exogenous metabolic activation system.
UDS může být také stanovena in vivo.
UDS may also be measured in in vivo systems.
Zkoušené chemické látky a kontroly nebo referenční látky se připraví v kultivačním médiu nebo se rozpustí nebo suspendují ve vhodných vehikulech a poté se pro účely stanovení zředí kultivačním médiem.
Test chemicals and control or reference substances should be prepared in growth medium or dissolved or suspended in appropriate vehicles and then further diluted in growth medium for use in the assay.
Konečná koncentrace vehikula v kultuře nesmí ovlivňovat životaschopnost buněk.
The final concentration of the vehicle should not affect cell viability.
Pro stanovení se použijí primární kultury hepatocytů potkana, lidských lymfocytů, nebo zavedených buněčných linií (lidských diploidních fibroblastů).
Primary cultures of rat hepatocytes, human lymphocytes or established cell lines (e.g. human diploid fibroblasts) may be used in the assay.
Buňky se exponují zkoušené chemické látce jak v přítomnosti, tak v nepřítomnosti vhodného metabolického aktivačního systému.
Cells should be exposed to the test chemical both in the presence and absence of an appropriate metabolic activation system.
Počet kultur
Number of cultures
Pro každý experimentální bod je potřeba nejméně dvou buněčných kultur pro autoradiografii a šesti kultur (nebo méně, jeli to vědecky zdůvodnitelné) pro metodu stanovení UDS pomocí LSC.
At least two cell cultures for autoradiography and six cultures (or less if scientifically justified) for LSC UDS determinations are necessary for each experimental point.
Do každého experimentu se nasadí souběžné pozitivní a negativní (neexponované a/nebo s vehikulem) kontroly v přítomnosti i v nepřítomnosti metabolického aktivačního systému.
Concurrent positive and negative (untreated and/or vehicle) controls with and without metabolic activation should be included in each experiment.
Příkladem pozitivní kontroly pro stanovení s hepatocyty potkana je 7,12-dimethylbenzoanthracen (7,12-DMBA) nebo N-(fluoren-2-yl)acetamid (2-AAF).
Examples of positive controls for the rat hepatocyte assay include 7,12- dimethylbenzathracene (7,12- DMBA) or 2-acetylaminofluorene (2-AAF).
Příkladem pozitivní kontroly pro zavedené buněčné linie jak pro autoradiografii, tak i pro LSC prováděné bez metabolické aktivace je 4-nitrochinolin-N-oxid (4-NQO); N-nitrosodimethylamin je příkladem chemické látky pro pozitivní kontrolu při použití metabolického aktivačního systému.
In the case of established cell lines 4-nitroquinoline-N-oxide (4-NQO) is an example of a positive control for both the autoradiographic and LSC assays performed without metabolic activation; N-dimethylnitrosamine is an example of a positive control compound when metabolic activation systems are used.
Použije se několik koncentrací zkoušené látky v rozsahu přiměřeném pro stanovení odezvy.
Multiple concentrations of the test substance over a range adequate to define the response should be used.
Nejvyšší koncentrace musí vyvolávat cytotoxické účinky.
The highest concentration should elicit some cytotoxic effects.
Látky, které jsou relativně nerozpustné ve vodě, se zkouší až k mezi rozpustnosti.
Relatively water-insoluble compounds should be tested up to the limit of solubility.
Nejvyšší koncentrace u netoxických látek dobře rozpustných ve vodě se určí případ od případu.
For freely water-soluble non-toxic chemicals, the upper test chemical concentration should be determined on a case-by-case basis.
Pro udržování kultur se použijí vhodná kultivační média, koncentrace CO2, teplota a vlhkost.
Appropriate growth media, CO2 concentration, temperature and humidity should be used in maintaining cultures.
U zavedených buněčných linií musí být pravidelně kontrolováno, zda nejsou kontaminovány mykoplasmaty.
Established cell lines should be periodically checked for Mycoplasma contamination.
U primárních kultur hepatocytů se nepoužívá metabolický aktivační systém.
A metabolic activation system is not used with primary hepatocyte cultures.
Zavedené buněčné linie a lymfocyty se exponují zkoušené látce za přítomnosti i nepřítomnosti vhodného metabolického aktivačního systému.
Established cell lines and lymphocytes are exposed to test substance both in the presence and absence of an appropriate metabolic activation system.
Zavedené buněčné linie se pomnoží ze zásobních kultur (trypsinací nebo setřepáním buněk z povrchu kultivační nádoby), naočkují se do kultivačních nádob ve vhodné hustotě a inkubují se při teplotě 37 oC.
Established cell lines are generated from stock cultures (e.g. by trypsinisation or by shaking off), seeded in culture vessels at appropriate density, and incubated at 37 oC.
Krátkodobé kultury hepatocytů potkana se připravují tak, že se umožní, aby se čerstvě izolované hepatocyty přichytily ve vhodném médiu k povrchu kultivační nádoby.
Short-term cultures of rat hepatocytes are established by allowing freshly dissociated hepatocytes in an appropriate medium to attach themselves to the growing surface.
Kultury lidských lymfocytů se založí vhodnou metodou.
Human lymphocyte cultures are set up using appropriate techniques.
Expozice kultur zkoušené látce
Treatment of the cultures with the test substance
Primární hepatocyty potkana
Primary rat hepatocytes
Čerstvě izolované hepatocyty potkana se vhodnou dobu exponují zkoušené látce v médiu obsahujícím 3H-TdR.
Freshly isolated rat hepatocytes are treated with the test substance in a medium containing 3H-TdR for an appropriate length of time.
Po ukončení expozice se médium z buněk odstraní, buňky se promyjí, fixují a vysuší.
At the end of the treatment period, medium should be drained off the cells, which are then rinsed fixed and dried.
Preparáty se ponoří do autoradiografické emulze (může být použita také sloupávací fólie), emulze se exponuje, vyvolá, obarví a vyhodnotí.
Slides should be dipped in autoradiographic emulsion (alternative stripping film may be used), exposed, developed, stained and counted.
Zavedené buněčné linie a lymfocyty
Established cell lines and lymphocytes
Autoradiografické techniky: Buněčné kultury se vhodnou dobu exponují zkoušené látce a poté se vystaví 3H-TdR.
Autoradiographic techniques: cell cultures are exposed to the test substance for appropriate durations followed by treatment with 3H-TdR.
Doba expozice je závislá na druhu zkoušené látky, na aktivitě metabolického systému a na typu buněk.
The times will be governed by the nature of the substance, the activity of metabolising systems and the type of cells.
K zachycení vrcholu UDS je třeba 3H-TdR přidat současně se zkoušenou látkou nebo několik minut po expozici.
To detect the peak of UDS, 3H-TdR should be added either simultaneously with the test subsrance or within a few minutes after exposure to the test substance.
Výběr mezi těmito postupy závisí na možné interakci mezi zkoušenou látkou a 3H-TdR.
The choice between these two procedures will be influenced by possible interactions between test substance and 3H-TdR.
K rozlišení UDS od semikonzervativní replikace DNA se používá médium deficientní na arginin, nízký obsah séra nebo hydroxymočovina v kultivačním médiu, což působí inhibici semikonzervativní replikace DNA.
In order to discriminate between UDS and semi-conservative DNA replication, the latter can be inhibited, for example, by the use of an arginine-deficient medium, low serum content or by hydroxyurea in the culture medium.
Stanovení UDS pomocí LSC: Před expozicí zkoušené látce se zablokuje vstup buněk do S-fáze, jak bylo uvedeno výše; buňky se poté exponují zkoušené látce způsobem popsaným pro autoradiografii.
LSC measurements of UDS: prior to treatment with test substance, entry of cells into S-phase should be blocked as described above; cells should then be exposed to test chemical as described for autoradiography.
Na konci kultivace se DNA extrahuje z buněk a stanoví se celkový obsah DNA a rozsah zabudování 3H-TdR.
At the end of the incubation period, DNA should be extracted from the cells and the total DNA content, and the extent of 3H-TdR, incorporation determined.
Použijí-li se ve výše uvedených metodách lidské lymfocyty, je v nestimulovaných kulturách suprese semikonzervativní replikace DNA zbytečná.
It should be noted that, where human lymphocytes are used in the above techniques, the suppression of semi-conservative DNA replication is unnecessary in unstimulated cultures.
Vyhodnocení autoradiografie
Autoradiographic determinations
Při vyhodnocování UDS v buněčné kultuře se jádra v S-fázi nehodnotí.
In determining UDS in cells in culture, S-phase nuclei are not counted.
Pro každou koncentraci se hodnotí nejméně 50 buněk.
At least 50 cells per concentration should be counted.
Preparáty se před hodnocením opatří kódem.
Slides should be coded before counting.
V každém preparátu se hodnotí několik náhodně vybraných vzájemně vzdálených polí.
Several widely separated random fields should be counted on each slide.
Množství zabudovaného 3H-TdR v cytoplazmě se určí v zóně o velikosti tří jader v cytoplazmě každé hodnocené buňky.
The amount of 3H-TdR incorporation in the cytoplasm should be determined by counting three nucleus-sized areas in the cyptoplasm of each cell counted.
Vyhodnocení LSC
LSC determinations
Pro stanovení UDS pomocí LSC se použije přiměřený počet kultur pro každou koncentraci a pro kontroly.
An adequate number of cultures should be used at each concentration and in the controls in LSC UDS determinations.
Údaje se zpracují v tabulkové formě.
Data should be presented in tabular form.
VYHODNOCENÍ AUTORADIOGRAFIE
AUTORADIOGRAPHIC DETERMINATIONS
Rozsah zabudování 3H-TdR do cytoplazmy a počet zrn nalezených mimo buněčné jádro se zaznamenají odděleně.
The extent of 3H-TdR incorporation in the cytoplasm and the number of grains found over the cell nucleus should be recorded separately.
Distribuci rozsahu zabudování 3H-TdR do cytoplazmy a počet zrn v jádře lze popsat střední hodnotou, mediánem a modem.
Mean, median and mode may be used to describe the distribution of the extent of 3H-TdR incorporation in the cytoplasm and the number of grains per nucleus.
VYHODNOCENÍ LSC
LSC DETERMINATIONS
U LSC se rozsah zabudování 3H-TdR zaznamená v dpm/μg DNA.
For LSC determinations, 3H-TdR incorporation should be reported as dpm/μg DNA.
Distribuci zabudování lze popsat střední hodnotou dpm/μg DNA a směrodatnou odchylkou.
The mean dpm/μg DNA with standard deviation may be used to describe the distribution of incorporation.
Údaje se vyhodnotí vhodnými statistickými metodami.
Data should be evaluated using appropriate statistical methods.
použité buňky, hustota a počet pasáží v době expozice kultury, počet buněčných kultur,
cells used, density and passage number at time of treatment, number of cell cultures,
metody použité k udržování buněčné kultury, včetně média, teploty a koncentrace CO2,
methods used for maintenance of cell cultures including medium, temperature and CO2 concentration,
zkoušená látka, vehikulum, koncentrace a zdůvodnění výběru koncentrací pro zkoušku,
test substance, vehicle, concentrations and rationale for selection of concentrations used in the assay,
podrobné údaje o metabolickém aktivačním systému,
details of metabolic activation systems,
plán expozice,
treatment schedule,
použitá autoradiografická technika,
autoradiographic technique used,
postupy použité k blokování vstupu buněk do S-fáze,
procedures used to block entry of cells into S-phase,
postupy použité k extrakci DNA a ke stanovení celkového obsahu DNA u metody LSC,
procedures used for DNA extraction and determination of total DNA content in LSC determination,
vztah dávka/odezva, jeli to možné,
dose/response relationship, where possible,
statistické vyhodnocení,
statistical evaluation,
HODNOCENÍ A INTERPRETACE
VALUATION AND INTERPRETATION
Stanovení výměny sesterských chromatid (SCE) je krátkodobou zkouškou zaměřenou na detekci reciproční výměny DNA mezi dvěma sesterskými chromatidami replikujícího se chromozomu.
The Sister Chromatid Exchange (SCE) assay is a short-term test for the detection of reciprocal exchanges of DNA between two sister chromatids of a duplicating chromosome.
SCE představuje vzájemnou výměnu produktů replikace DNA v lokusech jevících se jako homogenní.
SCEs represent the interchange of DNA replication products at apparently homologous loci.
Proces výměny pravděpodobně zahrnuje zlom a opětovné spojení DNA, ačkoliv zatím existuje málo znalostí o molekulárním základu tohoto procesu.
The exchange process presumably involves DNA breakage and reunion, although little is known about its molecular basis.
Detekce SCE vyžaduje rozdílné značení sesterských chromatid; toho se dosahuje zabudováním bromdeoxyuridinu (BrdU) do chromosomální DNA na dobu dvou buněčných cyklů.
Detection of SCEs requires some means of differentially labelling sister chromatids and this can be achieved by incorporation of bromodeoxyuridine (BrdU) into chromosomal DNA for two cell cycles.
Savčí buňky in vitro se exponují zkoušené látce podle potřeby za přítomnosti i nepřítomnosti savčího vnějšího metabolického aktivačního systému a kultivují se po dobu dvou replikačních cyklů v médiu obsahujícím BrdU.
Mammalian cells in vitro are exposed to the test chemical with and without a mammalian exogenous metabolic activation system, if appropriate, and cultured for two rounds of replication in BrdU-containing medium.
Ke konci kultivace se buňky zpracují inhibitorem dělicího vřeténka (např. kolchicinem), aby se akumulovaly buňky v C-metafázi mitózy; kultury se sklidí a připraví se preparáty pro analýzu chromozomů.
After treatment with a spindle inhibitor (e.g. colchicine) to accumulate cells in a metaphase-like stage of mitosis (c-metaphase), cells are harvested and chromosome preparations are made.
Pro stanovení se mohou používat primární kultury (lidské lymfocyty) nebo zavedené buněčné linie (např. ovariální buňky křečka čínského).
Primary cultures, (human lymphocytes) or established cell lines (e.g. Chinese hamster ovary cells) may be used in the assay.
U buněk musí být pravidelně kontrolováno, zda nejsou kontaminovány mykoplasmaty.
Cell lines should be checked for Mycoplasma contamination,
Použijí se vhodná kultivační média a inkubační podmínky (teplota, kultivační nádoby, koncentrace CO2 a vlhkost).
appropriate culture media and incubation conditions (e.g. temperature, culture vessels, CO2 concentration and humidity) should be used,
Před exponováním buněk se zkoušené látky rozpustí nebo suspendují v kultivačním médiu nebo ve vhodných vehikulech.
test substances may be prepared in culture media or dissolved or suspended in appropriate vehicles prior to treatment of the cells.
Konečná koncentrace vehikula v kultuře nesmí ovlivnit životaschopnost buněk nebo rychlost růstu; vliv na četnost SCE se sleduje kontrolou s rozpouštědlem.
The final concentration of a vehicle in the culture system should not significantly affect, cell viability or growth rate and effects on SCE frequency should be monitored by a solvent control,
Buňky se exponují zkoušené látce jak v přítomnosti, tak v nepřítomnosti vnějšího savčího metabolického aktivačního systému.
cells should be exposed to the test substance both in the presence and absence of an exogenous mammalian metabolic activation system.
Pokud se použijí buněčné typy s vnitřní metabolickou aktivitou, mělo by být známo, že úroveň a vlastnosti této aktivity jsou vhodné pro zkoušenou třídu chemických látek.
Alternatively, where cell types with intrinsic metabolic activity are used, the rate and nature of the activity should be appropriate to the chemical class being tested.
Pro každý experimentální bod se použijí nejméně dvě kultury.
At least duplicate cultures should be used for each experimental point.
Do každého experimentu se nasadí pozitivní kontroly využívající jak přímo působící chemickou látku, tak látku vyžadující metabolickou aktivaci; rovněž se použije kontrola s vehikulem.
Positive controls, using both a direct acting compound and a compound requiring metabolic activation should be included in each experiment; a vehicle control should also be used.
Příkladem pozitivní kontroly mohou být tyto látky:
The following are examples of substances which might be used as positive controls:
přímo působící látky:
direct acting compound:
ethyl-methansulfonát,
ethylmethanesulphonate,
nepřímo působící látky:
indirect acting compound:
cyklofosfamid.
cyclophosphamide.
Podle potřeby se zařadí další pozitivní kontrola ze stejné třídy chemických látek, jako je zkoušená látka.
When appropriate, an additional positive control of the same chemical class as the chemical under test may be included.
Zkoušejí se nejméně tři dostatečně odstupňované koncentrace zkoušené látky.
At least three adequately spaced concentrations of the test substance should be used.
Nejvyšší koncentrace musí vyvolat významné toxické účinky, avšak zároveň musí umožnit přiměřenou replikaci buněk.
The highest concentration should give rise to a significant toxic effect but must still allow adequate cell replication to occur.
Látky, které jsou relativně nerozpustné ve vodě, se zkouší až k mezi rozpustnosti za použití vhodných postupů.
Relatively water-insoluble substances should be tested up to the limit of solubility using appropriate procedures.
Nejvyšší koncentrace u netoxických látek dobře rozpustných ve vodě se určí případ od případu.
For freely water-soluble non-toxic substances the upper test substance concentration should be determined on a case-by-case basis.
Zavedené buněčné linie se pomnoží ze zásobní kultury (např. trypsinací nebo setřepáním buněk z povrchu kultivační nádoby), naočkují se do kultivačních nádob ve vhodné hustotě a inkubují se při teplotě 37 oC.
Established cell lines are generated from stock cultures (e.g. by trypsinisation or by shaking off), seeded in culture vessels at appropriate density and incubated at 37 oC.
Pro jednovrstevné kultury se stanoví takový počet buněk v kultivační nádobě, aby v době sklizně nepřesáhly 50 % konfluenci.
For monolayer cultures, the number of cells per culture vessel should be adjusted so that the cultures are not much more than 50 % confluent at the time of harvest.
Lze také použít suspensní kultury.
Alternatively, cells may be used in suspension culture.
Lidské lymfocytární kultury se připraví vhodnými postupy z heparinizované krve a inkubují při teplotě 37 oC.
Human lymphocyte cultures are set up from heparinized blood, using appropriate techniques, and incubated at 37 oC.
Expozice
Treatment
Buňky v exponenciální fázi růstu se vhodnou dobu exponují zkoušené látce; ve většině případů stačí jedna až dvě hodiny, avšak expozice může být v určitých případech prodloužena až na dva úplné buněčné cykly.
Cells in an exponential stage of growth are exposed to the test substance for a suitable period of time; in most cases one to two hours may be effective, but the treatment time may be extended up to two complete cell cycles in certain cases.
Buňky, které nemají dostatečnou vnitřní metabolickou aktivitu, musí být exponovány zkoušené chemické látce za přítomnosti i za nepřítomnosti vhodného metabolického aktivačního systému.
Cells without sufficient instrinsic metabolic activity should be exposed to the test chemical in the presence and absence of an appropriate metabolic activation system.
Na konci expoziční doby se z buněk vymyje zkoušená látka a buňky se kultivují v přítomnosti BrdU po dva replikační cykly.
At the end of the exposure period, cells are washed free of test substance and cultured for two rounds of replication in the presence of BrdU.
Je možné rovněž exponovat buňky současně zkoušené látce a BrdU po dobu dvou buněčných cyklů.
As an alternative procedure cells may be exposed simultaneously to the test chemical and BrdU for the complete culture time of two cell cycles.
Lidské lymfocytární kultury se exponují, dokud jsou v semisynchronizovaném stavu.
Human lymphocyte cultures are treated while they are in a semisynchronous condition.
Buňky se analyzují v druhém mitotickém dělení po expozici, přičemž se zajistí, aby expozice chemické látce proběhla v nejcitlivějším stádiu buněčného cyklu.
Cells are analysed in their second post-treatment division, ensuring that the most sensitive cell cycle stages have been exposed to the chemical.
Všechny kultury s přidaným BrdU se udržují až do sklizně v temnu nebo za slabého osvětlení žárovkou, aby se minimalizovala fotolýza DNA, ve které je zabudován BrdU.
All cultures to which BrdU is added should be handled in darkness or in dim light from incandescent lamps up to the harvesting of cells in order to minimise photolysis of BrdU-containing DNA.
Sklizeň buněk
Harvesting of cells
Jednu až čtyři hodiny před sklizní buněk se kultury zpracují inhibitorem dělicího vřeténka (např. kolchicinem).
Cell cultures are treated with a spindle inhibitor (e.g. colchicine) one to four hours prior to harvesting.
Každá kultura se sklidí a samostatně zpracuje pro přípravu preparátů pro analýzu chromosomů.
Each culture is harvested and processed separately for the preparation of chromosomes.
Příprava preparátů pro analýzu chromosomů a barvení
Chromosome preparation and staining
Preparáty pro analýzu chromosomů se připraví standardními cytogenetickými technikami.
Chromosome preparations are made by standard cytogenetic techniques.
Barvení preparátů ke znázornění SCE lze provést několika technikami (např. fluorescenční metodou plus Giemsa).
Staining of slides to show SCEs can be performed by several techniques, (e.g. the fluorescence plus Giemsa method).
Počet analyzovaných buněk závisí na spontánní četnosti SCE v kontrole.
The number of cells analysed should be based on the spontaneous control frequency of SCE.
Obvykle se hodnotí nejméně 25 dobře rozprostřených metafází na kulturu.
Usually, at least 25 well-spread metaphases per culture are analysed for SCEs.
Preparáty se před analýzou opatří kódem.
Slides are coded before analysis.
V lidských lymfocytech se analyzují pouze metafáze s 46 centromerami.
In human lymphocytes only metaphases containing 46 centromeres are analysed.
U zavedených linií se analyzují pouze metafáze, které se liší o ± 2 centromery od modálního počtu centromer.
In established cell lines only metaphases containing ± 2 centromeres of the modal number are analysed.
Je třeba stanovit, zda se za SCE považuje změna v barvení v oblasti centromery.
It should be stated whether or not centromeric switch of label is, scored as an SCE.
Všechny výsledky se potvrdí nezávislým experimentem.
The results should be confirmed in an independent experiment.