natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Holzhütter, H.G. (1997). A general measure of in vitro phototoxicity derived from pairs of dose-response curves and its use for predicting the in vivo phototoxicity of chemicals.
Holzhütter, H.G., (1997) A general measure of in vitro phototoxicity derived from pairs of dose-response curves and its use for predicting the in vivo phototoxicity of chemicals.
ATLA, 25, 445–462.
ATLA, 25, p. 445-462.
http://www.oecd.org/document/55/0,2340,en_2649_34377_2349687_1_1_1_1,00.html.
http://www.oecd.org/document/55/0,2340,en_2649_34377_2349687_1_1_1_1,00.html
Role zkoušky fototoxicity 3T3 NRU v postupném zkoušení fototoxicity chemických látek
Role of the 3T3 NRU PT in a sequential approach to the phototoxicity testing of chemicals
Počáteční vyhodnocení fyzikálních, chemických a toxikologických vlastností testovací látky
Initial Evaluation of the Physical, Chemical, and Toxicological Properties of the Test Substance
• Fyzikálně-chemické vlastnosti
Physico-chemical properties
• Chemická struktura, strukturální rizika
Chemical structure, structural alerts
• UV/vis - absorbce
UV/vis - absorption
• QSAR - fotochemie
QSAR - photochemistry
• Obecná toxicita (včetně kinetiky a metabolismu)
General toxicity (including kinetics and metabolism)
UV/vis absorbční spektra ve vhodném rozpouštědle (např. OECD TG 101)
UV/vis absorption spectra in appropriate solvent (e.g. OECD TG 101)
Bez absorbce
No Absorption
Testování fototoxicity nepovažováno za nutné
Phototoxicity Testing not considered necessary
Test fototoxicity in vitro 3T3 NRU a/nebo další metody, je-li to nutné
In Vitro 3T3 NRU Phototoxicity Test and/or other methods if necessary
Spektrální distribuce výkonu filtrovaného solárního simulátoru
Spectral power distribution of a filtered solar simulator
Intenzita ozáření [mW/cm2]
Irradiance [mW/cm2] Wavelength [nm]
SOL 500 + filtr H2
SOL 500 + H2 Filter
SOL 500 + filtr H1
SOL 500 + H1 Filter
SOL 500 + filtr H1 + víčko 96jamkové destičky Vlnová délka [nm]
SOL 500 + H1 Filter + lid of 96-well plate
(viz druhý odstavec bodu 1.4.1.5)
(see Section 1.4.1.5, second paragraph)
Obrázek 1 uvádí příklad přijatelné spektrální distribuce intenzity ozáření filtrovaného solárního simulátoru.
Figure 1 gives an example of an acceptable spectral irradiance distribution of a filtered solar simulator.
Pochází ze zdroje dopovaného halidy kovů, použitého ve validačním experimentu zkoušky fototoxicity 3T3 NRU (6, 8, 17).
It is from the doped metal halide source used in the validation trial of the 3T3 NRU PT (6)(8)(17).
Je ukázán účinek dvou různých filtrů a dodatečný filtrační účinek víčka 96jamkové destičky pro kultivaci buněk.
The effect of two different filters and the additional filtering effect of the lid of a 96-well cell culture plate are shown.
Filtr H2 byl použit pouze ve zkušebních systémech tolerantních k vyšší dávce UVB (zkouška modelu kůže a fotohemolytická zkouška červených krvinek).
The H2 filter was only used with test systems that can tolerate a higher amount of UVB (skin model test and red blood cell photo-haemolysis test).
Pro zkoušku fototoxicity 3T3 NRU byl použit filtr H1.
In the 3T3 NRU-PT the H1 filter was used.
Obrázek ukazuje, že dodatečný filtrační účinek víčka destičky je pozorován hlavně v oblasti UVB, přičemž víčkem proniká stále ještě dostatečné množství UVB ze spektra intenzity ozáření k excitování chemických látek obvykle absorbujících v UVB oblasti, jako amiodaron (viz tabulka 1).
The figure shows that additional filtering effect of the plate lid is mainly observed in the UVB range, still leaving enough UVB in the irradiation spectrum to excite chemicals typically absorbing in the UVB range, like Amiodarone (see Table 1).
Citlivost buněk Balb/c 3T3 k ozáření (měřená v oblasti UVA)
Irradiation sensivity of Balb/c 3T3 cells (as measured in the UVA range)
Životaschopnost buněk (v % úrovně příjmu neutrální červeně v kontrole v temnu)
Cell viability (% Neutral Red uptake of dark controls)
doba ozáření (v minutách)
irradiation time (minutes)
(10 min = 1 joule UVA/cm2)
10 min = 1 joule UVA/cm2)
(viz bod 1.4.1.5.2 druhý odstavec; 1.4.2.2.1, 1.4.2.2.2)
(see Sections 1.4.1.5.2 second paragraph; 1.4.2.2.1, 1.4.2.2.2)
Citlivost buněk Balb/c 3T3 k ozáření solárním simulátorem použitým ve validačním experimentu zkoušky fototoxicity 3T3 NRU, naměřená v UVA oblasti.
Sensitivity of Balb/c 3T3 cells to irradiation with the solar simulator used in the validation trial of the 3T3NRU-phototoxicity test, as measured in the UVA range.
Obrázek znázorňuje výsledky změřené v sedmi různých laboratořích v předvalidační studii (1).
Figure shows the results obtained in seven different laboratories in the pre-validation study (1).
Zatímco dvě křivky označené neplnými symboly byly získány se staršími buňkami (s vyšším počtem pasáží), které musely být nahrazeny novými buňkami, křivky s plnými symboly představují buňku s přijatelnou tolerancí k ozáření.
While the two curves with open symbols were obtained with aged cells (high number of passages), that had to be replaced by new cell stocks the curves with bold symbols show cells with acceptable irradiation tolerance.
Z těchto údajů byla odvozena nejvyšší necytotoxická dávka ozáření 5 J/cm2 (svislá čárkovaná čára).
From these data the highest non-cytotoxic irradiation dose of 5 J/cm2 was derived (vertical dashed line).
Vodorovná čárkovaná čára představuje navíc maximální přijatelný účinek ozáření uvedený v bodu 1.4.2.2.
The horizontal dashed line shows in addition the maximum acceptable irradiation effect given in paragraph 1.4.2.2.
Tato metoda rovnocenná metodě OECD TG 429 (2002).
This test method is equivalent to the OECD TG 429 (2002)
Zkouška s vyšetřením lokálních lymfatických uzlin (LLNA) byla dostatečně validována a uznána, což opravňuje její přijetí jako nové metody (1, 2, 3).
The Local Lymph Node Assay (LLNA) has been sufficiently validated and accepted to justify its adoption as a new Method (1)(2)(3).
Jedná se o druhou metodu zaměřenou na hodnocení schopnosti chemických látek senzibilizovat kůži zvířat.
This is the second method for assessing skin sensitisation potential of chemicals in animals.
První metoda (B.6) využívá zkoušek na morčatech, a to zvláště maximalizační zkoušku na morčatech a Bühlerův test (4).
The other method (B.6) utilises guinea pig tests, notably the guinea pig maximisation test and the Buehler test (4).
LLNA představuje alternativní metodu pro identifikaci chemických látek způsobujících senzibilizaci kůže a pro potvrzení, že chemické látky nemají významný potenciál senzibilizovat kůži.
The LLNA provides an alternative method for identifying skin sensitising chemicals and for confirming that chemicals lack a significant potential to cause skin sensitisation.
To však neznamená, že by se metoda LLNA měla používat ve všech případech místo zkoušek na morčatech; znamená to spíše, že tato metoda má stejnou hodnotu a že ji lze použít jako alternativní metodu, jejíž pozitivní ani negativní výsledky již nevyžadují žádné další potvrzování.
This does not necessarily imply that in all instances the LLNA should be used in place of guinea pig test, but rather that the assay is of equal merit and may be employed as an alternative in which positive and negative results generally no longer require further confirmation.
LLNA poskytuje určité výhody, pokud jde o vědecký pokrok a dobré zacházení se zvířaty.
The LLNA provides certain advantages with regard to both scientific progress and animal welfare.
Metoda zkoumá indukční fázi senzibilizace kůže a poskytuje kvantitativní údaje, které jsou vhodné pro hodnocení vztahu dávky a odezvy.
It studies the induction phase of skin sensitisation and provides quantitative data suitable for dose response assessment.
Podrobné údaje o validaci metody LLNA a přehled prací spojených s touto metodou byly publikovány (5, 6, 7, 8).
The details of the validation of the LLNA and a review of the associated work have been published (5)(6)(7)(8).
Kromě toho je třeba poznamenat, že mírně nebo středně silně senzibilizující látky, které se doporučují jako vhodné pozitivní kontrolní látky u zkoušek na morčatech, jsou vhodné také pro metodu LLNA (6, 8, 9).
In addition, it should be noted that the mild/moderate sensitisers, which are recommended as suitable positive control substances for guinea pig test m, are also appropriate for use with the LLNA (6)(8)(9).
LLNA je metodou in vivo a jako taková neeliminuje používání zvířat při hodnocení senzibilizující aktivity působící kontaktem.
The LLNA is an in vivo method and, as a consequence, will not eliminate the use of animals in the assessment of contact sensitising activity.
Tato metoda však umožňuje snížit počet zvířat, která jsou k tomuto účelu nezbytná.
It has, however, the potential to reduce the number of animals required for this purpose.
Kromě toho LLNA nabízí podstatné zlepšení zacházení se zvířaty, která jsou používána ke zkoušení kontaktní senzibilizace.
Moreover, the LLNA offers a substantial refinement of the way in which animals are used for contact sensitisation testing.
Metoda LLNA je založená na posouzení imunologických jevů navozených chemickými látkami během indukční fáze senzibilizace.
The LLNA is based upon consideration of immunological events stimulated by chemicals during the induction phase of sensitisation.
Na rozdíl od zkoušek na morčatech metoda LLNA nevyžaduje umělé vyvolání kožní přecitlivělosti.
Unlike guinea pig tests the LLNA does not require that challenged-induced dermal hypersensitivity reactions be elicited.
Kromě toho metoda LLNA nevyžaduje ani používání adjuvantu, jak je tomu v případě maximalizační zkoušky na morčatech.
Furthermore, the LLNA does not require the use of an adjuvant, as is the case for the guinea pig maximisation test.
Díky tomu metoda LLNA snižuje utrpení zvířat.
Thus, the LLNA reduces animal distress.
Ale i přes výhody, které má metoda LLNA ve srovnání s tradičními maximalizačními zkouškami na morčatech, je třeba si uvědomit, že zde existují určitá omezení, která si mohou vyžádat použití tradičních zkoušek na morčatech (např. falešně negativní výsledky při použití LLNA s určitými kovy, falešně pozitivní výsledky u určitých látek způsobujících podráždění kůže) (10).
Despite the advantages of the LLNA over traditional guinea pig tests, it should be recognised that there are certain limitations that may necessitate the use of traditional guinea pigs tests (e.g. false negative findings in the LLNA with certain metals, false positive findings with certain skin irritants)(10).
Viz také obecný úvod, část B.
See also Introduction part B.
Základní princip metody LLNA spočívá v tom, že senzibilizátory navozují primární proliferaci lymfocytů v lymfatických uzlinách drenujících místo aplikace chemické látky.
The basic principle underlying the LLNA is that sensitisers induce a primary proliferation of lymphocytes in the lymph node draining the site of chemical application.
Tato proliferace je úměrná aplikované dávce (a potenciálu alergenu) a poskytuje jednoduchý prostředek k získání objektivního kvantitativního měření senzibilizace.
This proliferation is proportional to the dose applied (and to the potency of the allergen) and provides a simple means of obtaining an objective, quantitative measurement of sensitisation.
LLNA ji hodnotí jako vztah dávka odezva a za tímto účelem se porovnává proliferace ve zkušebních skupinách s proliferací u skupin, kterým se podává vehikulum.
The LLNA assesses this proliferation as a dose-response relationship in which the proliferation in test groups is compared to that in vehicle treated controls.
Poměr proliferace u exponovaných skupin a u skupin s vehikulem, nazvaný index stimulace, musí být alespoň 3, aby bylo možné zkoušenou látku dále hodnotit jako případný senzibilizátor kůže.
The ratio of the proliferation in treated groups to that in vehicular controls, termed the Stimulation Index, is determined, and must be at least three before a test substance can be further evaluated as a potential skin sensitiser.
Metody, které jsou zde popsané, jsou založené na využívání radioaktivního značení k měření buněčné proliferace.
The methods described here are based on the use of radioactive labelling to measure cell proliferation.
Hodnocení této proliferace je však možné opřít i o další závěrečná zjištění, a to za předpokladu, že jsou zdůvodněná a existují pro ně vhodné vědecké důkazy, včetně úplných citací a popisu metodiky.
However, other endpoints for assessment of proliferation may be employed provided there is justification and appropriate scientific support, including full citations and description of the methodology.
Teplota v místnosti pro pokusná zvířata by měla být 22 oC (± 3 oC), relativní vlhkost vzduchu by měla být minimálně 30 % a pokud možno nepřesáhnout 70 %, kromě doby úklidu místnosti, cílem by měla být hodnota 50–60 %.
The temperature of the experimental animals room should be 22 oC (±3 oC). Although the relative humidity should be at least 30 % and preferably not exceed 70 % other than during room cleaning, the aim should be 50-60 %.
Zvířata se náhodně vyberou, pro usnadnění individuální identifikace se označí (v žádném případě formou značení uší) a chovají se v klecích minimálně 5 dnů před začátkem podávání látky, aby se mohla přizpůsobit laboratorním podmínkám.
The animals are randomly selected, marked to permit individual identification (but not by any form of ear marking), and kept in their cages for at least 5 days prior to the start of dosing to allow for acclimatisation to the laboratory conditions.
Před začátkem aplikace látky se všechna zvířata vyšetří, aby se ověřilo, že nemají žádné pozorovatelné kožní léze.
Prior to the start of treatment all animals are examined to ensure that they have no observable skin lesions.
Vhodným druhem pro tuto zkoušku je myš.
The mouse is the species of choice for this test.
Používají se mladé dospělé samice myší z kmene CBA/Ca nebo CBA/J, které musí být nullipary a nesmějí být březí.
Young adult female mice of CBA/Ca or CBA/J strain, which are nulliparous and non-pregnant are used.
Na začátku podávání dávek by zvířata měla být přibližně 8 až 12 týdnů stará a odchylky v hmotnosti zvířat by měly být pouze minimální a neměly by překročit 20 % průměrné hmotnosti.
At the start of the study, animals should be between eight to 12 weeks old, and the weight variation of the animals should be minimal and not exceed 20 % of the mean weight.
Ostatní kmeny a samci by se měli používat pouze tehdy, je-li k dispozici dostatek údajů, které by dokazovaly, že v rámci reakcí v metodě LLNA skutečně neexistují žádné specifické odlišnosti mezi kmeny a/nebo pohlavími.
Other strains and males may be used when sufficient data are generated to demonstrate that significant strain and/or gender-specific differences in the LLNA response do not exist.
Kontrola spolehlivosti
Reliability check
Pozitivní kontroly se používají k prokázání řádného provedení zkoušky a odborné způsobilosti laboratoře úspěšně provést zkoušky.
Positive controls are used to demonstrate appropriate performance of the assay and competency of the laboratory to successfully conduct the assay.
Pozitivní kontrola by měla vyvolat pozitivní reakci na LLNA při úrovni expozice, u které se očekává zvýšení indexu stimulace (SI) > 3 ve srovnání s negativní kontrolní skupinou.
The positive control should produce a positive LLNA response at an exposure level expected to give an increase in the stimulation index (SI) >3 over the negative control group.
Je třeba zvolit takovou pozitivní kontrolní dávku, aby reakce byla zřetelná, nikoliv však přehnaná.
The positive control dose should be chosen such that the induction is clear but not excessive.
K preferovaným látkám patří 2-benzylidenoktanal (CAS 101-86-0, EINECS 202-983-3) a 2-sulfanylbenzothiazol (CAS 149-30-4, EINECS 205-736-8).
Preferred substances are hexyl cinnamic aldehyde (CAS No 101-86-0, EINECS No 202-983-3) and mercaptobenzothiazole (CAS No 149-30-4, EINECS No 205-736-8).
Mohou existovat určité okolnosti, za nichž lze při řádném zdůvodnění použít jiné kontrolní látky, které splňují výše uvedená kritéria.
There may be circumstances in which, given adequate justification, other control substances, meeting the above criteria, may be used.
I když se pro každou zkoušku obvykle vyžaduje pozitivní kontrolní skupina, mohou se rovněž vyskytnout situace, kdy mají zkušební laboratoře k dispozici předchozí údaje o pozitivní kontrole prokazující homogenitu dostatečné reakce během šesti měsíců nebo delšího časového období.
While ordinarily a positive control group may be required in each assay, there may be situations in which test laboratories will have available historic positive control data to show consistency of a satisfactory response over a six-month or more extended period.
V takovém případě může být vhodnější méně četné testování s pozitivními kontrolami v intervalech, které by neměly být delší než 6 měsíců.
In those situations, less frequent testing with positive controls may be appropriate at intervals no greater than six months.
Ačkoliv by se pozitivní kontrolní látky měly testovat ve vehikulu, o kterém je známo, že vyvolává stále stejnou reakci (např. aceton, olivový olej), mohou nastat určité situace, kdy je z důvodů požadovaných v právních předpisech nezbytné provést zkoušku s použitím nestandardního vehikula (klinicky/chemicky relevantní receptura přípravku).
Although the positive control substance should be tested in the vehicle that is known to elicit a consistent response (e.g. acetone: olive oil), there may be certain regulatory situations in which testing in non-standard vehicle (clinically/chemically relevant formulation) will also be necessary.
V takovém případě je třeba testovat možnou interakci pozitivní kontroly s tímto nestandardním vehikulem.
In such situation the possible interaction of a positive control with this unconventional vehicle should be tested.
Počet zvířat, úrovně dávek a výběr vehikula
Number of animals, dose levels and vehicle selection.
Na každou dávkovou skupinu se použijí alespoň čtyři zvířata, přičemž se použijí minimálně tři koncentrace zkoušené látky, dále se použije negativní kontrolní skupina, které se podává pouze vehikulum zkoušené látky, a v případě potřeby pozitivní kontrola.
A minimum of four animals is used per dose group, with a minimum of three concentrations of the test substance, plus a negative control group treated only with the vehicle for the test substance, and, as appropriate, a positive control.
Jestliže se shromažďují údaje o jednotlivých zvířatech, použije se na každou dávkovou skupinu minimálně pět zvířat.
In those cases in which individual animal data are to be collected, a minimum of five animals per dose group are used.
S výjimkou aplikace zkoušené látky se se zvířaty v kontrolní skupině zachází stejným způsobem jako se zvířaty v experimentální skupině.
Except for absence of treatment with the test substance, animals in the control groups should be handled and treated in a manner identical to that of animals in the treatment groups.
Volba dávkování a vehikula by měla být založena na doporučeních uvedených v literatuře (1).
Dose and vehicle selection should be based on the recommendations given in reference (1).
Dávky se vybírají z řady koncentrací 100 %, 50 %, 25 %, 10 %, 5 %, 2,5 %, 1 %, 0,5 % atd. Při výběru tří po sobě jdoucích koncentrací je třeba zvážit již existující údaje o akutní toxicitě a kožní dráždivosti, jsou-li k dispozici, aby nejvyšší koncentrace maximalizovala expozici, ale aby současně nevyvolala systémovou toxicitu a nadměrné podráždění kůže (2, 11).
Doses are selected from the concentration series 100 %, 50 %, 25 %, 10 %, 5 %, 2,5 %, 1 %, 0,5 % etc. Existing acute toxicity and dermal irritation data should be considered, where available, in selecting the three consecutive concentrations so that the highest concentration maximises exposure whilst avoiding systemic toxicity and excessive local skin irritation (2)(11).
Vehikulum by mělo být vybráno tak, aby se maximalizovaly zkušební koncentrace a rozpustnost k přípravě roztoku/suspenze vhodné pro aplikaci zkoušené látky.
The vehicle should be selected on the basis of maximising the test concentrations and solubility whilst producing a solution/suspension suitable for application of the test substance.
Upřednostňují se vehikula v následujícím pořadí: aceton/olivový olej (4:1 obj.), N, N-dimethylformamid, ethyl(methyl)keton, propan-1,2-diol a dimethylsulfoxid (2, 10), jsou-li předloženy dostatečné vědecké důvody, mohou být použita i jiná vehikula.
In order of preference, recommended vehicles are acetone/olive oil (4:1 v/v), dimethylformamide, methyl ethyl ketone, propylene glycol and dimethyl sulphoxide (2)(10), but others may be used if sufficient scientific rationale is provided.
V určitých případech může být nezbytné použít jako doplňující kontrolu klinicky relevantní rozpouštědlo nebo běžný přípravek, v němž je zkoušená látka uváděna na trh.
In certain situations it may be necessary to use a clinically relevant solvent or the commercial formulation in which the test substance is marketed as an additional control.
Zvláštní pozornost je třeba věnovat zajištění toho, aby byly hydrofilní materiály zapracovány do takového vehikula, které zvlhčí kůži a nesteče ihned z pokožky. Z tohoto důvodu není vhodné používat zcela vodná vehikula.
Particular care should be taken to ensure that hydrophilic materials are incorporated into a vehicle system, which wets the skin and does not immediately run off. Thus, wholly aqueous vehicles are to be avoided.
Harmonogram zkoušky
Experimental schedule
Harmonogram zkoušky je následující:
The experimental schedule of the assay is as follows:
Den 1
Day 1:
Každé zvíře se zváží a zaznamená se jeho hmotnost.
individually identify and record the weight of each animal.
Provede se otevřená aplikace 25 μl příslušného ředění zkoušené látky, samotného vehikula nebo případně pozitivní kontrolní látky na dorsální část obou uší.
Open application of 25μl of the appropriate dilution of the test substance, the vehicle alone, or the positive control (as appropriate), to the dorsum of each ear.
Den 2 a 3
Days 2 and 3:
Zopakuje se postup aplikace provedený v den 1.
repeat the application procedure carried out on day 1.
Den 4 a 5
Days 4 and 5:
Žádná aplikace.
no treatment.
Den 6
Day 6:
Zaznamená se hmotnost každého zvířete.
record the weight of each animal.
Přes ocasní žílu se všem pokusným i kontrolním myším vpíchne 250 μl fyziologického roztoku ve fosfátovém pufru (PBS), obsahujícího 20 μCi (7,4.105 Bq) [3H]thymidinu (tritiovaném na methylu), nebo lze všem myším přes ocasní žílu vpíchnout 250 μl PBS obsahujícího 2 μCi (7,4e + 8(.104) Bq) [125I]joddeoxyuridinu a 10-5 M fluordeoxyuridinu.
Inject 250μl of phosphate-buffered saline (PBS) containing 20 μCi (7,4e + 8 Bq) of 3H-methyl thymidine into all test and control mice via the tail vein. Alternatively inject 250 μL PBS containing 2 μCi (7,4e + 7 Bq) of 125I-iododeoxyuridine and 10-5 M fluorodeoxyuridine into all mice via the tail vein.
O pět hodin později se myši usmrtí.
Five hours later, the animals are killed.
Drenující aurikulární lymfatické uzliny z obou uší se vyjmou a shromáždí se v PBS společně pro celou zkušební skupinu (metoda sdružení exponované skupiny), nebo se od každého zvířete vyjme pár lymfatických uzlin a tento pár se uloží do PBS (metoda individuálního přístupu ke zvířatům).
The draining auricular lymph nodes from each ear are excised and pooled in PBS for each experimental group (pooled treatment group approach); alternatively pairs of lymph nodes from individual animals may be excised and pooled in PBS for each animal (individual animal approach).
Podrobnosti a grafické znázornění označení uzlin a jejich disekce lze nalézt v příloze I v literatuře (10).
Details and diagrams of the node identification and dissection can be found in Appendix I of reference 10.
Příprava buněčné suspenze
Preparation of cell suspensions
Jedna společná buněčné suspenze s buňkami lymfatických uzlin (LNC) buď od celé exponované skupiny, nebo jejich párů od jednotlivých zvířat se připraví pomocí jemné mechanické deagregace přes 200 μm sítka z korozivzdorné oceli.
A single cell suspension of lymph node cells (LNC) either from pooled treatment groups or bilaterally from individual animals is prepared by gentle mechanical disaggregation through 200 μm-mesh stainless steel gauze.