natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Numerická aberace: odchylka počtu chromozomů od normálního počtu obvyklého u použitého typu buněk.
Numerical aberration: a change in the number of chromosomes from the normal number characteristic of the cells utilised.
Polyploidie: násobek haploidního počtu chromosomových sad (n) jiný než diploidní (tj. 3n, 4n atd.).
Polyploidy: a multiple of the haploid chromosome number (n) other than the diploid number (i.e. 3n, 4n and so on).
Strukturní aberace: mikroskopicky pozorovatelné změny struktury chromozomů při buněčném dělení ve stadiu metafáze; jeví se jako delece a fragmenty, intrachromozomální nebo interchromozomální změny.
Structural aberration: a change in chromosome structure detectable by microscopic examination of the metaphase stage of cell division, observed as deletions and fragments, intrachanges or interchanges.
Buněčné kultury jsou vystaveny zkoušené látce, a to s metabolickou aktivací a bez ní.
Cell cultures are exposed to the test substance both with and without metabolic activation.
V předem stanovených intervalech po zkoušené látce se do buněčných kultur přidá látka zastavující metafázi (např. Colcemid nebo kolchicin), kultury se sklidí, obarví a přítomnost chromozomových aberací se zjistí mikroskopickým pozorováním buněk.
At predetermined intervals after exposure of cell cultures to the test substance, they are treated with a metaphase-arresting substance (e.g. Colcemid® or colchicine), harvested, stained and metaphase cells are analysed microscopically for the presence of chromosome aberrations.
Buňky
Cells
Mohou být použity různé buněčné linie, kmeny nebo primární buněčné kultury, včetně lidských buněčných linií (např. fibroblasty křečka čínského, lymfocyty periferní krve člověka nebo jiných savců).
A variety of cell lines, strains or primary cell cultures, including human cells, may be used (e.g. Chinese hamster fibroblasts, human or other mammalian peripheral blood lymphocytes).
Média a kultivační podmínky
Media and culture conditions
Pro udržování kultur by měla být použita vhodná kultivační média a inkubační podmínky (kultivační nádoby, koncentrace CO2 teplota a vlhkost).
Appropriate culture media and incubation conditions (culture vessels, CO2 concentration, temperature and humidity) should be used in maintaining cultures.
U stabilizovaných buněčných linií a kmenů by měla být rutinně kontrolována stabilita modální hodnoty počtu chromozomů a mělo by být kontrolováno, zda nejsou kontaminovány mykoplasmaty; v případě kontaminace by neměly být použity.
Established cell lines and strains should be checked routinely for stability in the modal chromosome number and the absence of mycoplasma contamination and should not be used if contaminated.
Pro použité buňky a inkubační podmínky by měla být známa normální délka buněčného cyklu.
The normal cell cycle time for the cells and culture conditions used should be known.
Příprava kultur
Preparation of cultures
Stabilizované buněčné linie a kmeny: buňky se pomnoží z kmenových kultur, nasadí se do kultivačního média v takové hustotě, aby nedosáhly konfluence před sklizením, a inkubují se při 37 oC.
Established cell lines and strains: cells are propagated from stock cultures, seeded in culture medium at a density such that the cultures will not reach confluency before the time of harvest, and incubated at 37 oC.
Lymfocyty: krev ošetřená antikoagulantem (např. heparinem) nebo oddělené lymfocyty zdravých probandů se přidají do kultivačního média obsahujícího mitogen (např. fytohemaglutinin) a inkubují se při 37 oC.
Lymphocytes: whole blood treated with an anti-coagulant (e.g. heparin) or separated lymphocytes obtained from healthy subjects are added to the culture medium containing a mitogen (e.g. phytohaemagglutinin) and incubated at 37 oC.
Metabolická aktivace
Metabolic activation
Buňky by měly být vystaveny zkoušené látce, a to s vhodnou metabolickou aktivací a bez ní.
Cells should be exposed to the test substance both in the presence and absence of an appropriate metabolic activation system.
Nejčastěji používaným systémem je kofaktorem dotovaná postmitochondriální frakce (S9) připravená z jater hlodavců zpracovaná činidlem indukujícím enzymy, jako je Aroclor 1254 (6, 7, 8 a 9), nebo směs fenobarbitonu a β-naftoflavonu (10, 11 a 12).
The most commonly used system is a cofactor-supplemented post-mitochondrial fraction (S9) prepared from the livers of rodents treated with enzyme-inducing agents such as: Aroclor 1254 (6)(7)(8)(9), or a mixture of phenobarbitone and ß–naphthoflavone (10)(11)(12).
Postmitochondriální frakce je v konečném testovacím médiu obvykle používána v koncentracích 1–10 % obj. Stav metabolického aktivačního systému může záviset na třídě chemické látky, která je zkoušena.
The post-mitochondrial fraction is usually used at concentrations in the range from 1-10 % v/v in the final test medium. The condition of a metabolic activation system may depend upon the class of chemical being tested.
V některých případech může být vhodné použít více než jednu koncentraci postmitochondriální frakce.
In some cases it may be appropriate to utilise more than one concentration of post-mitochondrial fraction.
Řada výsledků vývoje, včetně přípravy geneticky modifikovaných buněčných linií exprimujících specifické aktivační enzymy, poskytuje možnosti pro endogenní aktivaci.
A number of developments, including the construction of genetically engineered cell lines expressing specific activating enzymes, may provide the potential for endogenous activation.
Volba použitých buněčných linií by měla být vědecky zdůvodněna (např. důležitostí isoenzymu cytochromu P450 pro metabolismus zkoušené látky).
The choice of the cell lines used should be scientifically justified (e.g. by the relevance of the cytochrome P450 isoenzyme for the metabolism of the test substance).
Příprava zkoušené látky
Test substance/Preparation
Pevné zkoušené látky by měly být před aplikací na buňky rozpuštěny nebo suspendovány ve vhodných rozpouštědlech nebo vehikulech a popřípadě zředěny.
Solid test substances should be dissolved or suspended in appropriate solvents or vehicles and diluted if appropriate prior to treatment of the cells.
Kapalné zkoušené látky mohou být přidány přímo k testovacím systémům a/nebo mohou být před aplikací zředěny.
Liquid test substances may be added directly to the test systems and/or diluted prior to treatment.
Měly by být použity čerstvě připravené zkoušené látky, pokud údaje o stálosti neprokazují možnost skladování.
Fresh preparations of the test substance should be employed unless stability data demonstrate the acceptability of storage.
Rozpouštědlo/vehikulum
Solvent/vehicle
Rozpouštědlo/vehikulum by mělo být mimo podezření, že reaguje se zkoušenou látkou, a mělo by být slučitelné s přežitím buněk a s aktivitou S9.
The solvent/vehicle should not be suspected of chemical reaction with the test substance and should be compatible with the survival of the cells and the S9 activity.
Jsou-li použita jiná než známá rozpouštědla/vehikula, mělo by být jejich zařazení podloženo údaji o jejich kompatibilitě.
If other than well-known solvent/vehicles are used, their inclusion should be supported by data indicating their compatibility.
Doporučuje se pokud možno nejdříve zvážit použití vodných rozpouštědel/vehikul.
It is recommended that wherever possible, the use of an aqueous solvent/vehicle be considered first.
Při zkoušení látek nestálých ve vodě by měla být použita organická rozpouštědla neobsahující vodu.
When testing water-unstable substances, the organic solvents used should be free of water.
Vodu lze odstranit přidáním molekulového síta.
Water can be removed by adding a molecular sieve.
Mezi kritéria, která mají být zohledněna při stanovení nejvyšší koncentrace, patří cytotoxicita, rozpustnost v testovacím systému a změny pH nebo osmolality.
Among the criteria to be considered when determining the highest concentration are cytotoxicity, solubility in the test system and changes in pH or osmolality.
Cytotoxicita by měla být stanovena s metabolickou aktivací a bez ní v hlavním experimentu za použití vhodných indikátorů buněčné integrity a růstu, jako jsou stupeň konfluence, počet životaschopných buněk nebo mitotický index.
Cytotoxicity should be determined with and without metabolic activation in the main experiment using an appropriate indication of cell integrity and growth, such as degree of confluency, viable cell counts, or mitotic index.
Může být výhodné stanovit cytotoxicitu a rozpustnost v předběžném experimentu.
It may be useful to determine cytotoxicity and solubility in a preliminary experiment.
Měly by být použity alespoň tři analyzovatelné koncentrace.
At least three analysable concentrations should be used.
V případě cytotoxicity by měly tyto koncentrace pokrývat rozmezí dané maximální až minimální toxicitou, případně žádnou toxicitou, což obvykle znamená, že by se koncentrace neměly lišit více nežli faktorem 2 až 10.
Where cytotoxicity occurs, these concentrations should cover a range from the maximum to little or no toxicity; this will usually mean that the concentrations should be separated by no more than a factor between 2 and √10.
V okamžiku sklizně by měla nejvyšší koncentrace vykazovat významné snížení stupně konfluence, počtu buněk nebo mitotického indexu (vše o více než 50 %).
At the time of harvesting, the highest concentration should show a significant reduction in degree of confluency, cell count or mitotic index, (all greater than 50 %).
Mitotický index je pouze nepřímým měřítkem cytotoxických nebo cytostatických účinků a závisí na době, která uplynula od expozice.
The mitotic index is only an indirect measure of cytotoxic/cytostatic effects and depends on the time after treatment.
Mitotický index je však přijatelný u suspenzních kultur, u nichž mohou být jiné metody stanovení toxicity obtížné a nepraktické.
However, the mitotic index is acceptable for suspension cultures in which other toxicity measurements may be cumbersome and impractical.
Informace o kinetice buněčného cyklu, například průměrná generační doba (AGT), mohou být použity jako dodatkové informace.
Information on cell cycle kinetics, such as average generation time (AGT), could be used as supplementary information.
V případě AGT však jde o celkovou průměrnou hodnotu, z níž nelze usoudit na existenci zpožděných subpopulací, a i malý přírůstek průměrné generační doby může mít za následek velmi podstatné oddálení okamžiku optimálního výtěžku aberací.
AGT, however, is an overall average that does not always reveal the existence of delayed subpopulations, and even slight increases in average generation time can be associated with very substantial delay in the time of optimal yield of aberrations.
V případě relativně necytotoxických látek by měla být maximální zkušební koncentrace 5 μl/ml, 5 mg/ml nebo 0,01 M, podle toho, která z nich je nejnižší.
For relatively non-cytotoxic substances, the maximum test concentration should be 5 μl/ml, 5 mg/ml or 0,01 M, whichever is the lowest.
V případě relativně nerozpustných látek, které nejsou toxické při koncentracích nižších, než je jejich rozpustnost, by měla být použita nejvyšší dávka v koncentraci, jež je nad mezí rozpustnosti v konečném kultivačním médiu na konci doby aplikace.
For relatively insoluble substances that are not toxic at concentrations lower than the insoluble concentration, the highest dose used should be a concentration above the limit of solubility in the final culture medium at the end of the treatment period.
V určitých případech (např. projeví-li se toxicita pouze při vyšších koncentracích, než je rozpustnost) se doporučuje vyzkoušet více koncentrací, při nichž dochází ke srážení.
In some cases (e.g. when toxicity occurs only at higher than the lowest insoluble concentration) it is advisable to test at more than one concentration with visible precipitation.
Může být užitečné stanovit rozpustnost na začátku a na konci expozice, neboť koncentrace v testovacím systému se může v průběhu expozice měnit v důsledku přítomnosti buněk, séra S9 atd. Nerozpustnost lze zjistit vizuálně.
It may be useful to assess solubility at the beginning and the end of the treatment, as solubility can change during the course of exposure in the test system due to presence of cells, S9, serum etc. Insolubility can be detected by using the unaided eye.
Sraženina by neměla vadit při vyšetřování.
The precipitate should not interfere with the scoring.
Negativní a pozitivní kontroly
Negative and positive controls
Součástí každého experimentu by měly být pozitivní a negativní kontroly (kontroly rozpouštědla nebo vehikula).
Concurrent positive and negative (solvent or vehicle) controls, both with and without metabolic activation, should be included in each experiment.
Při použití metabolické aktivace by měla být pro pozitivní kontrolu použita chemická látka, která k mutagenní reakci vyžaduje aktivaci.
When metabolic activation is used, the positive control chemical should be the one that requires activation to give a mutagenic response.
K pozitivní kontrole by měl být použit známý elastogen v expozičních koncentracích, které nejspíše poskytnou reprodukovatelný a detekovatelný nárůst nad pozadí, čímž se prokáže citlivost testovacího systému.
Positive controls should employ a known clastogen at exposure levels expected to give a reproducible and detectable increase over background, which demonstrates the sensitivity of the test system.
Koncentrace pozitivních kontrol by měly být zvoleny tak, aby byl účinek zřetelný, ale aby při odečtu nevyšla ihned najevo kódovaná identifikace preparátu.
Positive control concentrations should be chosen so that the effects are clear but do not immediately reveal the identity of the coded slides to the reader.
Příklady látek pro pozitivní kontrolu:
Examples of positive control substances include:
Stav metabolické aktivace
Metabolic Activation condition
Č. EINECS
EINECS No
Bez vnější metabolické aktivace
Absence of exogenous metabolic Activation
methyl-methansulfonát
Methyl methanesulphonate
ethyl-methansulfonát
Ethyl methanesulphonate
1-ethyl-1-nitrosomočovina
Ethyl nitrosourea
4-nitrochinolin-1-oxid
4-Nitroquinoline-N-oxide
S vnější metabolickou aktivací
Presence of exogenous metabolic Activation
benzo[a]pyren
Benzo[a]pyrene
cyklofosfamid
Cyclophosphamide
cyklofosfamid monohydrát
Cyclophosphamide monohydrate
Mohou být použity také jiné látky pro pozitivní kontrolu.
Other appropriate positive control substances may be used.
Pro pozitivní kontrolu by mělo být pokud možno vzato v úvahu použití chemických látek ze stejné chemické třídy.
The use of chemical class-related positive control chemicals should be considered, when available.
V okamžiku sklizení by měly být použity negativní kontroly skládající se ze samotného rozpouštědla nebo vehikula v kultivačním médiu a zpracované stejným způsobem jako kultury.
Negative controls, consisting of solvent or vehicle alone in the treatment medium, and treated in the same way as the treatment cultures, should be included for every harvest time.
Kromě toho by měly být neexponované kontroly použity také tehdy, neexistují-li dosud žádné kontrolní údaje prokazující, že zvolené rozpouštědlo nevyvolává žádné zhoubné nebo mutagenní účinky.
In addition, untreated controls should also be used unless there are historical control data demonstrating that no deleterious or mutagenic effects are induced by the chosen solvent.
Expozice zkoušené látce
Treatment with the test substance
Proliferující buňky se vystaví zkoušené látce jak za přítomnosti metabolického aktivačního systému, tak bez něho.
Proliferating cells are treated with the test substance in the presence and absence of a metabolic activation system.
Expozice lymfocytů by měla být zahájena asi 48 hodin po mitogenní stimulaci.
Treatment of lymphocytes should commence at about 48 hours after mitogenic stimulation.
Pro každou koncentraci by měly být obvykle použity duplicitní kultury, a totéž se důrazně doporučuje u kultur pro negativní kontrolu nebo kontrolu rozpouštědla.
Duplicate cultures should normally be used at each concentration, and are strongly recommended for negative/solvent control cultures.
Jestliže lze na základě dosavadních údajů prokázat (13, 14), že mezi duplicitními kulturami je minimální rozdíl, může být přípustné použití jediné kultury.
Where minimal variation between duplicate cultures can be demonstrated (13)(14), from historical data, it may be acceptable for single cultures to be used at each concentration.
Plynné nebo těkavé látky by měly být zkoušeny vhodnými metodami, např. v těsně uzavřených kultivačních nádobách (15, 16).
Gaseous or volatile substances should be tested by appropriate methods, such as in sealed culture vessels (15)(16).
Doba sklizně kultur
Culture harvest time
V prvním experimentu by měly být buňky vystaveny zkoušené látce, jak s metabolickou aktivací, tak bez ní, na dobu 3–6 hodin, a měly by být odebrány po takové době od zahájení aplikace, která odpovídá 1,5násobku normální délky buněčného cyklu (12).
In the first experiment, cells should be exposed to the test substance, both with and without metabolic activation, for three to six hours, and sampled at a time equivalent to about 1,5 normal cell cycle length after the beginning of treatment (12).
Jestliže tento postup dává negativní výsledky jak s aktivací, tak bez aktivace, měl by být proveden dodatečný experiment bez aktivace s nepřetržitou expozicí až do odběru v době, která odpovídá 1,5násobku normální délky buněčného cyklu.
If this protocol gives negative results both with and without activation, an additional experiment without activation should be done, with continuous treatment until sampling at a time equivalent to about 1,5 normal cell cycle lengths.
Určité chemické látky lze snáze detekovat při dobách aplikace nebo odběru delších než 1,5násobek délky cyklu.
Certain chemicals may be more readily detected by treatment/sampling times longer than 1,5 cycle lengths.
Negativní výsledky při metabolické aktivaci musí být potvrzeny případ od případu.
Negative results with metabolic activation need to be confirmed on a case-by-case basis.
V případech, kdy se nepovažuje potvrzení negativních výsledků za nezbytné, by mělo být podáno zdůvodnění.
In those cases where confirmation of negative results is not considered necessary, justification should be provided.
Příprava preparátů pro analýzu chromosomů
Chromosome preparation
Do buněčné kultury se obvykle 1–3 hodiny před sklizením přidá Colcemid nebo kolchicin.
Cell cultures are treated with Colcemid® or colchicine usually for one to three hours prior to harvesting.
Pro přípravu preparátů pro analýzu chromozomů se každá buněčná kultura sklízí a zpracovává zvlášť.
Each cell culture is harvested and processed separately for the preparation of chromosomes.
Příprava preparátů pro analýzu chromozomů zahrnuje hypotonizaci buněk, fixaci a obarvení buněk.
Chromosome preparation involves hypotonic treatment of the cells, fixation and staining.
Všechny preparáty, včetně preparátů pozitivních a negativních kontrol, by měly být před analýzou pod mikroskopem nezávisle kódovány.
All slides, including those of positive and negative controls, should be independently coded before microscopic analysis.
Poněvadž při fixaci často dochází ke zlomu části buněk v metafázi a ke ztrátě chromozomů, měly by vyšetřované buňky obsahovat centromery v počtu rovném modální hodnotě ± 2 pro všechny typy buněk.
Since fixation procedures often result in the breakage of a proportion of metaphase cells with loss of chromosomes, the cells scored should therefore contain a number of centromeres equal to the modal number ± 2 for all cell types.
Na každou koncentraci a kontrolu by mělo být hodnoceno alespoň 200 dobře rozprostřených metafází, případně rovnoměrně rozdělených mezi duplicitní kultury.
At least 200 well spread metaphases should be scored per concentration and control, equally divided amongst the duplicates, if applicable.
Tento počet lze snížit, je-li pozorován velký počet aberací.
This number can be reduced when high number of aberrations is observed.
Ačkoli je účelem zkoušky detekovat strukturní chromozomové aberace, je důležité zaznamenat polyploidii a endoreduplikace, jsou-li pozorovány.
Though the purpose of the test is to detect structural chromosome aberrations, it is important to record polyploidy and endoreduplication when these events are seen.
Experimentální jednotkou je buňka a mělo by tedy být vyhodnoceno množství buněk se strukturní chromozomovou aberací (aberacemi) vyjádřené v procentech.
The experimental unit is the cell, and therefore the percentage of cells with structural chromosome aberration(s) should be evaluated.
Pro kontrolní a experimentální kultury by měly být uvedeny různé typy strukturních chromozomových aberací s jejich počtem a četností.
Different types of structural chromosome aberrations should be listed with their numbers and frequencies for experimental and control cultures.
Gapy se zaznamenávají odděleně a uvádějí se, ale nezahrnují se do celkové četnosti aberací.
Gaps are recorded separately and reported but generally not included in the total aberration frequency.
Měla by být také zaznamenána opatření, která byla provedena pro stanovení cytotoxicity u všech exponovaných kultur a negativních kultur v hlavních experimentech s aberacemi.
Concurrent measures of cytotoxicity for all treated and negative control cultures in the main aberration experiments should also be recorded.
Měly by být uvedeny údaje pro jednotlivé kultury.
Individual culture data should be provided.
Údaje by měly být dále shrnuty ve formě tabulky.
Additionally, all data should be summarised in tabular form.
Ověření jasně pozitivní odpovědi se nepožaduje.
There is no requirement for verification of a clear positive response.
Dvojznačné výsledky by měly být vyjasněny dalším zkoušením, nejlépe s úpravami experimentálních podmínek.
Equivocal results should be clarified by further testing preferably using modification of experimental conditions.
Nezbytnost potvrdit negativní výsledky byla diskutována v bodu 1.4.3.3.
The need to confirm negative results has been discussed in 1.4.3.3.
Změna parametrů studie s cílem rozšířit rozsah posuzovaných podmínek by měla být zvážena v následných experimentech.
Modification of study parameters to extend the range of conditions assessed should be considered in follow-up experiments.
K parametrům studie, které by mohly být změněny, patří rozmezí koncentrací a podmínky metabolické aktivace.
Study parameters that might be modified include the concentration spacing and the metabolic activation conditions.
VYHODNOCENÍ A INTERPRETACE VÝSLEDKŮ
EVALUATION AND INTERPRETATION OF RESULTS
Pro stanovení pozitivního výsledku existuje několik kritérií, např. nárůst počtu buněk s chromozomovými aberacemi v závislosti na koncentraci, nebo reprodukovatelný nárůst tohoto počtu.
There are several criteria for determining a positive result, such as a concentration-related increase or a reproducible increase in the number of cells with chromosome aberrations.
Nejdříve by měla být uvážena biologická relevance výsledků.
Biological relevance of the results should be considered first.
Při hodnocení výsledků zkoušky mohou být použity jako pomocný prostředek statistické metody (3, 13).
Statistical methods may be used as an aid in evaluating the test results (3)(13).
Statistická významnost by neměla být jediným určujícím faktorem pro pozitivní odpověď.
Statistical significance should not be the only determining factor for a positive response.
Nárůst počtu polyploidie buněk může znamenat, že zkoušená látka má schopnost potlačit mitotické procesy a indukovat numerické chromozomové aberace.
An increase in the number of polyploid cells may indicate that the test substance has the potential to inhibit mitotic processes and to induce numerical chromosome aberrations.
Nárůst počtu buněk s endoreduplikovanými chromozomy může znamenat, že zkoušená látka má schopnost potlačit progresi buněčného cyklu (17, 18).
An increase in the number of cells with endoreduplicated chromosomes may indicate that the test substance has the potential to inhibit cell cycle progression (17)(18).
Zkoušená látka, jejíž výsledky nesplňují výše uvedená kritéria, se v tomto systému považuje za nemutagenní.
A test substance for which the results do not meet the above criteria is considered non-mutagenic in this system.