natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Připravte oddělené pozitivní kontrolní sklíčka s homologickým kmenem nebo s jiným srovnávacím kmenem C. m. subsp. sepedonicus, suspendovaném ve výluhu z brambor podle dodatku 2, a nepovinně v pufru.
Prepare separate positive control slides of the homologous strain or any other reference strain of C. m. subsp. sepedonicus, suspended in potato extract, as specified in Appendix 2, and optionally in buffer.
Pletivo infikované přirozenou cestou (uchovávané lyofilizací nebo zmrazením při teplotě –16 až –24 °C) by se mělo podle možnosti použít jako paralelní kontrola na stejném podložním sklíčku.
Naturally infected tissue (maintained by lyophilization or freezing at –16 to –24 °C) should be used where possible as a similar control on the same slide.
Jako negativní kontroly použijte alikvotní části vzorkových extraktů, které byly předtím testovány s negativním výsledkem.
As negative controls, use aliquots of sample extract which previously tested negative.
Používejte mikroskopická sklíčka s více okénky, nejlépe s 10 okénky o průměru nejméně 6 mm.
Use multiwell microscope slides with preferably 10 windows of at least 6 mm diameter.
Testujte kontrolní materiál stejným způsobem jako vzorek/vzorky.
Test control material in an identical manner as the sample(s).
Připravte sklíčka na test jedním z následujících postupů:
Prepare the test slides by one of the following procedures:
Pro pelety s relativně nízkým množstvím škrobového sedimentu:
For pellets with relatively little starch sediment:
Napipetujte měřené standardní množství (pro okénka o průměru 6 mm je vhodné 15 µl – pro větší okénka objem zvyšte) roztoku resuspendované bramborové pelety 1/100 do prvního okénka.
Pipette a measured standard volume (15 µl is appropriate for 6 mm window diameter-scale up volume for larger windows) of a 1/100 dilution of the resuspended potato pellet onto the first window.
Následně napipetujte stejné množství nezředěné pelety (1/1) do zbývajících okének v řadě.
Subsequently pipette a similar volume of undiluted pellet (1/1) onto the remaining windows on the row.
Druhou řadu lze použít jako duplikát nebo pro druhý vzorek podle obrázku 1.
The second row can be used as duplicate or for a second sample as presented in Figure 1.
Pro jiné pelety:
For other pellets:
Připravte desetinná ředění (1/10 a 1/100) resuspendované pelety v peletovém pufru.
Prepare decimal dilutions (1/10 and 1/100) of the resuspended pellet in pellet buffer.
Napipetujte měřené standardní množství (pro okénka o průměru 6 mm je vhodné 15 µl – pro větší okénka objem zvyšte) resuspendované pelety 1/100 a každého roztoku do řady okének.
Pipette a measured standard volume (15 µl is appropriate for 6 mm window diameter-scale up volume for larger windows) of the resuspended pellet and each dilution on a row of windows.
Druhou řadu lze použít jako duplikát nebo pro druhý vzorek podle obrázku 2.
The second row can be used as duplicate or for a second sample as presented in Figure 2.
Vysušte kapky při pokojové teplotě nebo zahřátím na teplotu 40 až 45 °C.
Dry the droplets at ambient temperatures or by warming at temperature of 40 to 45 °C.
Fixujte bakteriální buňky na sklíčko buď zahřátím (15 minut při teplotě 60 °C) nad plamenem pomocí 95 % etanolu nebo podle zvláštních pokynů dodavatelů protilátek.
Fix the bacterial cells to the slide either by heating (15 minutes at 60 °C), flaming, with 95 % ethanol or according to specific instructions from the suppliers of the antibodies.
V případě potřeby lze potom fixovaná sklíčka před dalším použitím skladovat zmrazená v suchém boxu po co možná nejkratší dobu (maximálně 3 měsíce).
If necessary, fixed slides may then be stored frozen in a desiccated box for as little time as necessary (up to a maximum of 3 months) prior to further testing.
Postup IF testu:
IF procedure:
Podle přípravy sklíčka na test v oddílu 4.1 písm. i):
According to test slide preparation in 4.1(i):
Připravte sadu dvojnásobných roztoků protilátky v IF pufru.
Prepare a set of twofold dilutions of the antibody in IF buffer.
V první jamce by měl být titr 1/2 (T/2), v ostatních titr 1/4 (T/4), titr 1/2 (T/2), titr (T) a dvojnásobný titr (2T).
The first well should have 1/2 of the titre (T/2), the others 1/4 of the titre (T/4), 1/2 of the titre (T/2), the titre (T) and twice the titre (2T).
Podle přípravy sklíčka na test v oddílu 4.1 písm. ii):
According to test slide preparation in 4.1(ii):
Připravte pracovní ředění (WD) protilátky v IF pufru.
Prepare the working dilution (WD) of the antibody in IF buffer.
Pracovní ředění ovlivňuje přesnost.
The working dilution affects the specificity.
Příprava sklíčka na test podle oddílu 4.1 písm. i) a oddílu 4.3 písm. i)
Preparation of the test slide according to 4.1(i) and 4.3(i)
Ředění resuspendované pelety
Dilutions of resuspended pellet
Ředění resuspendované pelety
Dilution of resuspended pellet
(T = titr)
(T = titre)
Dvojnásobné ředění antiséra/protilátky
Twofold dilutions of antiserum/antibody
Vzorek 1
Sample 1
Duplikát vzorku 1 nebo vzorek 2
Duplicate of sample 1 or sample 2
Příprava sklíčka na test podle oddílu 4.1 písm. ii) a oddílu 4.3 písm. ii)
Preparation of the test slide according to 4.1(ii) and 4.3(ii)
Pracovní ředění antiséra/protilátky
Working dilution of antiserum/antibody
prázdné
empty
Desetinné ředění resuspendované pelety
Decimal dilution of resuspended pellet
Umístěte sklíčka na vlhký papír.
Arrange the slides on moist paper.
Pokryjte každé testovací okénko kompletně ředěním protilátek.
Cover each test window completely with the antibody dilution(s).
Množství protilátky na každém okénku musí být nejméně stejné jako množství použitého extraktu.
The volume of antibody applied on each window must be at least the volume of extract applied.
Pokud nemáte konkrétní pokyny od dodavatele protilátek, řiďte se následujícím postupem:
The following procedure should be carried out in the absence of specific instructions from the suppliers of the antibodies:
Inkubujte sklíčka zakrytá na vlhkém papíru po dobu 30 minut při pokojové teplotě (18–25 °C).
Incubate the slides on moist paper under a cover for 30 minutes at ambient temperature (18 to 25 °C).
Setřeste kapky ze všech podložních sklíček a pečlivě opláchněte pufrem IF.
Shake the droplets off each slide and rinse carefully with IF buffer.
Umyjte ponořením po dobu 5 minut v pufru IF Tween (dodatek 3) a následně v pufru IF.
Wash by submerging for 5 minutes in IF buffer-Tween (Appendix 3) and subsequently for 5 minutes in IF buffer.
Zabraňte vzniku aerosolu nebo přenosu kapiček, které by mohly způsobit vzájemnou kontaminaci.
Avoid causing aerosols or droplet transfer that could result in cross-contamination.
Pečlivě odstraňte přebytečnou vlhkost jemným osušením.
Carefully remove excess moisture by blotting gently.
Testovací okénka pokryjte ředěním konjugátu FITC, kterým se stanovuje titr.
Cover the test windows with the dilution of FITC conjugate used to determine the titre.
Množství konjugátu naneseného do okének musí být stejné jako množství použité protilátky.
The volume of conjugate applied on the windows must be identical to the volume of antibody applied.
Setřeste kapky konjugátu ze sklíčka.
Shake the droplets of conjugate off the slide.
Opláchněte a umyjte jako předtím (4.3.3).
Rinse and wash as before (4.3.3).
Opatrně odstraňte přebytečnou vlhkost.
Carefully remove excess moisture.
Napipetujte 5–10 µl 0,1M fosfátového pufru s glycerolem (dodatek 3) nebo komerční krycí tekutiny do každého okénka a přiložte krycí sklíčko.
Pipette 5 to 10 µl of 0,1M phosphate-buffered glycerol (Appendix 3) or a commercially antifading mountant on each window and apply a coverslip.
Vyhodnocení IF testu:
Reading the IF test:
Prohlížejte testovací sklíčka epifluorescenčním mikroskopem s filtry vhodnými pro excitaci FITC pod olejovou nebo vodní imersí při zvětšení 500x až 1000x.
Examine test slides on an epifluorescence microscope with filters suitable for excitation of FITC, under oil or water immersion at a magnification of 500 to 1000.
Prohlížejte okénka napříč dvěma průměry v pravých úhlech a kolem obvodu.
Scan windows across two diameters at right angles and around the perimeter.
U vzorků, kde nejsou pozorovány žádné nebo málo buněk, pozorujte nejméně 40 polí mikroskopu.
For samples showing no or low number of cells observe at least 40 microscope fields.
Nejdřív zkontrolujte pozitivní kontrolní vzorek.
Check the positive control slide first.
Buňky musí být jasně fluoreskující a zcela obarvené v určeném titru protilátky nebo pracovnímu ředění.
Cells must be bright fluorescent and completely stained at the determined antibody titre or working dilution.
Pokud je barevnost odchylná, musí být test IF opakován (oddíl 4).
The IF test (section 4) must be repeated if the staining is aberrant.
Hledejte jasně fluoreskující buňky s morfologií charakteristickou pro C. m. subsp. sepedonicus v okénkách testovacích sklíček (viz internetová stránka http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).
Observe for bright fluorescing cells with characteristic morphology of C. m. subsp. sepedonicus in the test windows of the test slides (see web site http://forum.europa.eu.int/Public/irc/sanco/Home/main).
Intenzita fluorescence musí být při porovnání s pozitivním kontrolním kmenem ve stejném ředění protilátky stejná nebo lepší.
The fluorescence intensity must be equivalent or better to the positive control strain at the same antibody dilution.
Buňky, které nejsou zcela zbarveny nebo vykazují slabou fluorescenci, neberte v úvahu.
Cells with incomplete staining or with weak fluorescence must be disregarded.
Při podezření z jakékoli kontaminace musí být test zopakován.
If any contamination is suspected the test must be repeated.
To se může stát, když všechna sklíčka ve skupině vykazují pozitivní buňky díky kontaminaci pufru nebo při zjištění pozitivních buněk (mimo okénka sklíček) na povrchu sklíček.
This may be the case when all slides in a batch show positive cells due to the contamination of buffer or if positive cells are found (outside of the slide windows) on the slide coating.
Existuje několik problémů podstatných pro přesnost imunofluorescenčního testu.
There are several problems inherent to the specificity of the immunofluorescence test.
V peletách z pupkové části bramboru a částí stonku se mohou vyskytnout doprovodné populace fluoreskujících buněk s atypickou morfologií a křížově reagující saprofytické bakterie s velikostí a morfologií podobnou C. m. subsp. sepedonicus.
Background populations of fluorescing cells with atypical morphology and cross reacting saprophytic bacteria with size and morphology similar to C. m. sepedonicus are likely to occur in potato heel end core and stem segment pellets.
Uvažujte pouze fluoreskující buňky s typickou velikostí a morfologií v titru nebo pracovním ředění protilátek podle oddílu 4.3.
Consider only fluorescing cells with typical size and morphology at the titre or working dilution of the antibodies as in 4.3.
Interpretace výsledku IF testu:
Interpretation of the IF reading:
Pokud jsou přítomné jasně fluoreskující buňky s typickou morfologií, odhadněte průměrný počet typických buněk v 1 mikroskopovém poli a vypočítejte počet typických buněk v 1 ml resuspendované pelety (dodatek 4).
If bright fluorescing cells with characteristic morphology are found, estimate the average number of typical cells per microscope field and calculate the number of typical cells per ml of resuspended pellet (Appendix 4).
Výsledek IF je pozitivní u vzorků, kde je počet typických buněk na 1 ml resuspendované pelety nejméně 5 × 103.
The IF reading is positive for samples with at least 5 × 103 typical cells per ml of resuspended pellet.
Vzorek je považován za potenciálně infikovaný a je povinné další testování.
The sample is considered potentially contaminated. and further testing is required.
Výsledek IF testu je negativní pro vzorky, které obsahují méně než 5 × 103 buněk na 1 ml resuspendované pelety a vzorek se považuje za negativní.
The IF reading is negative for samples with less than 5 × 103 cells per ml resuspended pellet and the sample is considered negative.
Další testování není nutné.
Further testing is not required.
TEST FISH
FISH TEST
Když se jako první screeningový test použije FISH test a je pozitivní, musí být jako druhý povinný vyšetřovací test proveden IF test.
When the FISH test is used as the first screening test and found to be positive, the IF test must be performed as a second compulsory screening test.
Když se FISH test provede jako druhý screeningový test a je pozitivní, je k dokončení diagnózy nutné další testování podle postupového diagramu.
When the FISH test is used as the second screening test and found to be positive, further testing according to the flow scheme is required to complete the diagnosis.
Používejte validované oligosondy specifické pro C. m. subsp. sepedonicus (dodatek 7).
Use validated C. m. subsp. sepedonicus-specific oligo-probes (Appendix 7).
Úvodní testování touto metodou by mělo umožnit reprodukovatelné zjištění alespoň 103–104 buněk C. m. subsp. sepedonicus na ml přidané do extraktů ze vzorku, které byly předtím testovány s negativním výsledkem.
Preliminary testing with this method should permit reproducible detection of at least 103 to 104 cells of C. m. subsp. sepedonicus per ml added to sample extracts which previously tested negative.
Následující postup by měl být pokud možno proveden s čerstvě připravenými extrakty, ale je možné jej úspěšně provést s extraktem, který byl uchován v glycerolu při teplotě –16 až –24 nebo –68 až –86 °C.
The following procedure should preferably be performed on freshly prepared sample extract but can also be successfully performed on sample extract that has been stored under glycerol at –16 to –24 °C or –68 to –86 °C.
Jako negativní kontroly používejte alikvotní část extraktu ze vzorku, který byl předtím testován na C. m. subsp. sepedonicus s negativním výsledkem.
As negative controls, use aliquots of sample extract that previously tested negative for C. m. subsp. sepedonicus.
Jako pozitivní kontroly připravte suspenzi obsahující 105 až 106 buněk C. m. subsp. sepedonicus na ml (např. kmen NCPPB 4053 nebo PD 406) v 0,01 M fosfátového pufru (PB) z 3–5denní kultury (příprava viz dodatek 2).
As positive controls prepare suspensions containing 105 to 106 cells per ml of C. m. subsp. sepedonicus (e.g. strain NCPPB 4053, or PD 406) in 0,01M phosphate buffer (PB) from a three to five day culture (preparation see Appendix 2).
Připravte samostatná sklíčka s pozitivními kontrolními vzorky homologického kmene nebo jiného referenčního kmene C. m. subsp. sepedonicus suspendovaného v bramborovém extraktu podle dodatku 2.
Prepare separate positive control slides of the homologous strain or any other reference strain of C. m. subsp. sepedonicus, suspended in potato extract, as specified in Appendix 2.
Použití eubakteriálních oligosond značených FITC poskytuje kontrolu procesu hybridizace, protože zbarví všechny eubakterie přítomné ve vzorku.
The use of the FITC-labelled eubacterial oligo-probe offers a control for the hybridisation process, since it will stain all eubacteria that are present in the sample.
Fixace bramborového extraktu Následující protokol vychází z Wullings a kol.
Potato extract fixation
Připravte fixační roztok (viz dodatek 7).
Prepare fixative solution (see Appendix 7).
Napipetujte 100 µl každého vzorkového extraktu do Eppendorfovy mikrozkumavky a odstřeďujte po dobu 8 minut na 7000 g.
Pipette 100 µl of each sample extract into an Eppendorf tube and centrifuge for eight min at 7000 g.
Odstraňte supernatant a rozpusťte peletu v 500 µl fixačního roztoku připraveného max. 24 hodin předem.
Remove the supernatant and dissolve the pellet in 500 µl of fixative prepared < 24 hours previously.
Protřepejte a inkubujte přes noc při teplotě 4 °C.
Vortex and incubate overnight at 4 °C.
Alternativním fixačním činidlem je 96 % etanol.
An alternative fixative is 96 % ethanol.
Pro jeho použití rozpusťte peletu z kroku 5.1.2 v 50 μl 0,01 M PB a 50 μl 96 % etanolu.
To use this dissolve the pellet from step 5.1.2 in 50 µl 0,01M PB and 50 µl 96 % ethanol.
Promíchejte protřepáním a inkubujte při teplotě 4 °C po dobu 30–60 minut.
Vortex mix and incubate at 4 °C for 30 to 60 minutes.
Odstřeďujte po dobu 8 minut na 7000 g, odstraňte supernatant a resuspendujte peletu v 75 µl 0,01 M PB (viz dodatek 3).
Centrifuge for 8 min. at 7000 g, remove the supernatant and resuspend the pellet in 75 µl 0,01M PB (see Appendix 3).
Kápněte 16 µl fixované suspenze na čisté 10 okénkové sklíčko, jak ukazuje obrázek 3, přičemž použijete 2 různé vzorky na jedno sklíčko, a to neředěný a zředěný 1:100 s použitím 10 µl (v 0,01 M PB).
Spot 16 µl of the fixed suspensions onto a clean multitest slide as shown in Fig. 3. Apply two different samples per slide, undiluted and use 10 µl to make a 1:100 dilution (in 0,01M PB).
Zbývající roztok vzorku (49 µl) může být uložen při teplotě –20 °C po přidání 1 objemového množství 96 % etanolu.
The remaining sample solution (49 µl) can be stored at –20 °C after addition of 1 volume of 96 % ethanol.
V případě, že je třeba FISH metodu opakovat, odstraňte etanol odstředěním a přidejte stejné množství 0,01 M PB (zamíchejte protřepáním).
In case the FISH assay requires repeating, remove the ethanol by centrifugation and add an equal volume of 0,01M PB (mix by vortexing).
Rozmístění na sklíčku FISH
Layout for FISH slide
Prázdné
Blank
Vzorek 2
Sample 2
okénko 1
window 1
okénko 2
window 2
okénko 3
window 3
okénko 4
window 4
okénko 5
window 5
okénko 6
window 6
okénko 7
window 7
okénko 8
window 8
okénko 9
window 9
okénko 10
window 10
Krycí sklíčko 1
Coverslip 1
Krycí sklíčko 2
Coverslip 2
Nechte sklíčka uschnout na vzduchu (nebo sušičkou sklíček při teplotě 37 °C) a fixujte nad plamenem.
Air-dry the slides (or on slide dryer at 37 °C) and fix them by flaming.
V této fázi je možné postup přerušit a pokračovat v hybridizaci další den.
At this stage the procedure may be interrupted and the hybridisation continued the following day.
Sklíčka by měla být skladována chráněna před prachem a v suchu při pokojové teplotě.
Slides should be stored dust-free and dry at room temperature.
Předhybridizace a hybridizace
Pre-hybridisation and hybridisation
Připravte roztok lyzozymu obsahující 10 mg lyzozymu (Sigma L-6876) v 10 ml pufru (100 mM Tris-HCl, 50 mM EDTA, pH 8,0).
Prepare a lysozyme solution containing 10 mg lysozyme (Sigma L–6876) in 10 ml buffer (100 mM Tris-HCl, 50 mM EDTA, pH8.0).
Tento roztok lze skladovat, ale měl by se pouze jednou zmrazit a nechat roztát.
This solution can be stored but it should only be freeze-thawed once.
Každý vzorek dobře pokryjte přibližně 50 μl roztoku lyzozymu a inkubujte po dobu 10 minut při pokojové teplotě.
Cover each sample well with approximately 50 µl of lysozyme solution and incubate for 10 minutes at room temperature.
Potom ponořte sklíčka do demineralizované vody, pouze jednou, a osušte filtračním papírem.
Then dip the slides in demineralised water, once only and dry with filter paper.
Alternativně přidejte místo lyzozymu 50 μl proteinázy K 40–400 μg.ml–1 v pufru (20 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, pH 7,4) do každé jamky a inkubujte při teplotě 37 °C po dobu 30 minut.
Alternatively, instead of lysozyme add 50 µl of 40 to 400µg ml–1 proteinase K in buffer (20 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, pH 7,4) to each well and incubate at 37 °C for 30 minutes.
Sušte buňky ve stupňovaných sériích 50 %, 80 % a 96 % etanolu pokaždé po dobu 1 minuty.
Dehydrate the cells in a graded ethanol series of 50 %, 80 % and 96 % for one minute each.
Nechte sklíčka uschnout na vzduchu v držáku sklíček.
Air dry the slides in a slide-holder.
Připravte vlhkou inkubační komoru zakrytím dna vzduchotěsné krabice tkaninou nebo filtračním papírem namočeným v 1x hybmixu (dodatek 7).
Prepare a moist incubation chamber by covering the bottom of an air-tight box with tissue or filter paper soaked in 1x hybmix (Appendix 7).
Předinkubujte krabici v hybridizační peci při teplotě 55 °C po dobu alespoň 10 minut.
Pre-incubate the box in the hybridisation oven at 55 °C for at least 10 minutes.
Připravte hybridizační roztok (dodatek 7) s 45 μl na 1 sklíčko a předinkubujte po dobu 5 minut při teplotě 55 °C.
Prepare the hybridisation solution (Appendix 7) allowing 45 µl per slide, and preincubate for five minutes at 55 °C.
Umístěte sklíčka na horkou plotnu při teplotě 45 °C a přidejte do každého ze 4 okének na sklíčku/sklíčcích 10 μl hybridizačního roztoku.
Place slides on a hot plate at 45 °C and apply 10 µl of hybridization solution to each of the four wells on the slide(s).
Přikryjte každé sklíčko 2 krycími sklíčky (24 × 24 mm) tak, aby pod ně nevnikl vzduch.
Apply two coverslips (24 × 24 mm) to each slide without trapping air.
Umístěte sklíčka do předehřáté vlhké komory a hybridizujte přes noc v peci při teplotě 55 °C v temnu.
Place the slides in the pre-warmed moist chamber and hybridise overnight in the oven at 55 °C in the dark.
Připravte 3 kádinky obsahující 1 l sterilní vody (Ultra pure water = UPW), 1 l 1x hybmixu (334 ml 3x hybmix a 666 ml UPW) a 1 l 1/2x hybmixu (167 ml 3x hybmix a 833 ml UPW).
Prepare three beakers containing 1 l of Ultra pure water (UPW), 1 l of 1x hybmix (334 ml 3x hybmix and 666 ml UPW) and 1 l of 1/2x hybmix (167 ml 3x hybmix and 833 ml UPW).
Předinkubujte každou z nich ve vodní lázni při teplotě 55 °C.
Pre-incubate each in a waterbath at 55 °C.
Sejměte krycí sklíčka a umístěte podložní sklíčka do držáku sklíček.
Remove the coverslips from the slides and place the slides in a slide holder.
Spláchněte nadbytek vzorku inkubací po dobu 15 minut v kádince s 1x hybmixem při teplotě 55 °C.
Wash away excess probe by incubation for 15 mins. in the beaker with 1x hybmix at 55 °C.
Přemístěte držák sklíček do promývacího roztoku 1/2 hybmix a nechte inkubovat dalších 15 minut.
Transfer the slide holder to 1/2 hybmix washing solution and incubate for a further 15 mins.
Ponořte sklíčka krátce do UPW a položte je na filtrační papír.
Dip the slides briefly in UPW and place them on filter paper.
Odstraňte nadbytečnou vlhkost lehkým zakrytím povrchu filtračním papírem.
Remove excess moisture by covering the surface gently with filter paper.
Napipetujte 5–10 μl krycího roztoku (např. Vectashield, Vecta Laboratories, CA, USA nebo podobný) do každé jamky a celé sklíčko zakryjte velkým krycím sklíčkem (24 × 60 mm).
Pipette 5 to 10 μl of anti-fading mountant solution (e.g. Vectashield, Vecta Laboratories, CA, USA or equivalent) on each window and apply a large coverslip (24 × 60 mm) over the whole slide.
Hodnocení FISH testu
Reading the FISH test
Prohlížejte sklíčka ihned s mikroskopem vhodným pro epifluorescenční mikroskopii se zvětšením 630x nebo 1000x pod olejovou imerzí.
Observe the slides immediately with a microscope fitted for epifluorescence microscopy at 630 or 1000x magnification under immersions oil.
S filtrem vhodným pro fluorescein isothiokyanat (FITC) jsou eubakteriální buňky (včetně většiny gramnegativních buněk) ve vzorku zbarveny fluorescenčně zeleně.
With a filter suitable for fluorescein isothiocyanate (FITC) eubacterial cells (including most gram negative cells) in the sample are stained fluorescent green.
Použitím filtru pro tetramethylrhodamin-5-isothiokyanat se buňky C. m. subsp. sepedonicus obarvené Cy3 jeví fluorescenčně červené. Porovnejte buněčnou morfologii s morfologií pozitivních kontrolních vzorků.
Using a filter for tetramethylrhodamine-5-isothiocyanate, Cy3-stained cells of C. m. subsp. sepedonicus appear fluorescent red.
Buňky musí být jasně fluoreskující a zcela zbarveny.
Compare cell morphology with that of the positive controls.
Test FISH (oddíl 9.4) musí být zopakován, pokud je zbarvení odchylné.
Cells must be bright fluorescent and completely stained The FISH test (section 9.4) must be repeated if the staining is aberrant.
Intenzita fluorescence musí odpovídat nebo být lepší než u pozitivního kontrolního kmene.
The fluorescence intensity must be equivalent or better than that of the positive control strain.
Existuje několik problémů podstatných pro přesnost FISH testu.
There are several problems inherent to the specificity of the FISH test.