natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Съществено е да се изследва видът на всяка хроматограма преди количественото тълкуване, за да се открият всякакви отклонения, които се дължат или на неправилното функциониране на апаратурата, или на колоната, или на произхода и естеството на анализираната проба.
In this figure the CMPA peak is preceded by two small peaks.
Процедурата, описана в точки 8.2—8.4.4, се прилага с точност за стандартните проби (5.4.1—5.4.2).
It is essential to obtain a similar separation.
Използват се прясно приготвени разтвори, тъй като CMP се разрушават в 8 %-на трихлорооцетна среда при стайна температура.
Prior to chromatographic determination of the samples inject 100 μl of the standard sample without rennet whey [0] (5.4.1)
При 4 °C разтворът остава стабилен за 24 часа.
The chromatogram should not show a peak at the retention time of the CMPA peak.
В случай на дълги аналитични серии е желателно в автоматичния инжектор да се използва охладена подложка за проби.
Determine the response factors R by injecting the same volume of filtrate (8.5.1) as used for the samples.
Забележка: 8.4.2. може да бъде пропусната, ако % Б при първоначалните условия е известен от предходни анализи.
Calculation of the response factor R:
Хроматограмата на референтната проба [5] следва да е аналогична с представеното на фигура 1.
CMPA peak: R = W/H
На тази фигура пикът на CMPA се предхожда от два малки пика.
R = the response factor of the CMPA peak
Важно е да се получи подобно разделяне.
H = the height of the CMPA peak
Преди хроматографския анализ на пробите се впръскват 100 μl стандартна проба без сирищна суроватка [0] (5.4.1).
W = the quantity of whey in the standard sample [5].
Хроматограмата не следва да показва пик във времето на задържане на пика CMPA.
Calculation of the percentage of rennet whey powder in the sample
Определят се факторите на сигнала R чрез впръскване на същия обем от филтрата (8.5.1), какъвто е използван за пробите.
W(E) = the percentage (m/m) of rennet whey in the sample (E).
Изчисляване на фактора на сигнала R:
R = the response factor of the CMPA peak (9.1.1)
Пик на CMPA: R = W/H
H(E) = the height of the CMPA peak of the sample (E)
R = фактор на сигнала на пика на CMPA
If W(E) is greater than 1 % and the difference between the retention time and that of the standard sample [5] is smaller than 0,2 minutes then rennet whey solids are present.
H = височина на пика на CMPA
Not determined.
W = количество суроватка в стандартната проба [5].
Linearity
Изчисляване на процента на сирищна суроватка на прах в пробата
From 0 to 16 % of rennet whey a linear relationship should be obtained with a coefficient of correlation > 0,99.
W(E) = процент (m/m) сирищна суроватка в пробата (E),
The 1 % limit includes the uncertainty due to reproducibility.
R = фактор на сигнала на пика на CMPA (9.1.1)
Ni—4.6 standard
H(E) = височина на пика на CMPA на пробата (E)
Absorbance (220 nm)
Ако W(E) надвишава 1 % и разликата между времето на задържане и това на стандартната проба [5] е по-малка от 0,2 минути, тогава има наличие на сухо вещество на сирищна суроватка.
time (Minutes)
Не е определена.
International IDF Standard 135B/1991.
Линейност
Milk and milk products.
От 0 до 16 % сирищна суроватка трябва да даде линейна зависимост с коефициент на корелация > 0,99.
Precision characteristics of analytical methods.
Границата от 1 % включва неопределеността, свързана с възпроизводимостта.
Outline of collaborative study procedure.’
Ni—4.6 стандарт
the following Annexes are added:
Абсорбция (220 nm)
ANNEX VI
Време (в минути)
Methods of analysis of butter under private storage
Международен IDF стандарт 135B/1991 Мляко и млечни продукти.
Non Fat Solids (excluding salt)
Характеристики за точност на аналитичните методи.
Salt
Описание на процедурата за съвместни изследвания.“
The method to be applied shall be approved by the paying agency.
Добавят се следните приложения:
ANNEX VII
ПРИЛОЖЕНИЕ VI
Methods of analysis of skimmed milk powder under private storage
Методи за анализ на масло за частно складиране
ANNEX VIII
Сух безмаслен остатък (с изключение на сол)
Methods of analysis of cheeses under private storage
Сол
The method of analysis laid down in the Appendix shall be used to ensure that cheese made exclusively from ewe's milk, goat's milk or buffalo milk or from a mixture of ewe's milk, goat's milk and buffalo milk does not contain cow's milk casein.
Методът, който ще бъде използван, се одобрява от разплащателната агенция.
Cow's milk casein is considered to be present if the cow's milk casein content of the analysed sample is equal to or higher than the content of the reference sample containing 1 % cow's milk as laid down in the Appendix.
ПРИЛОЖЕНИЕ VII
Methods for detecting cow's milk casein in cheeses referred to in paragraph 1 may be used provided that:
Методи за анализ на обезмаслено мляко на прах за частно складиране
the detection limit is maximum 0,5 % and
ПРИЛОЖЕНИЕ VIII
there are no false-positive results and
Методи за анализ на сирена за частно складиране
cow's milk casein is detectable with the required sensitivity even after long ripening periods, as may occur in usual commercial conditions.
Методът за анализ, определен в допълнението, се използва, за да се гарантира, че сирене, което е произведено изключително от овче мляко, козе мляко или биволско мляко, или смес от овче, козе и биволско мляко, не съдържа казеин от краве мляко.
If any of the above mentioned requirements is not met, the methods laid down in the Appendix shall be used.
Счита се, че е налице казеин от краве мляко, ако съдържанието на казеин от краве мляко в анализираната проба е равно или е по-голямо от съдържанието в референтната проба, съдържаща 1 % краве мляко, както е описано в допълнението.
Appendix
Методите за откриване на казеин от краве мляко в сирената, посочени в параграф 1, могат да бъдат използвани, при условие че:
METHOD FOR THE DETECTION OF COW'S MILK AND CASEINATE IN CHEESES FROM EWE'S MILK, GOAT'S MILK OR BUFFALO MILK OR MIXTURES OF EWE'S MILK, GOAT'S MILK AND BUFFALO MILK
границата на откриване е максимум 0,5 %, и
SCOPE
няма фалшиви положителни резултати, и
Detection of cow's milk and caseinate in cheeses made from ewe's milk, goat's milk, buffalo milk or mixtures of ewe's, goat's and buffalo milk by isoelectric focusing of γ-caseins after plasminolysis.
казеинът от краве мляко може да се открие посредством необходимата чувствителност, дори и след дълги периоди на узряване, които могат да възникват при обичайни търговски условия.
FIELD OF APPLICATION
Ако някое от горните изисквания не е спазено, следва да се използват методите, определени в допълнението.
The method is suitable for sensitive and specific detection of native and heat-treated cow's milk and caseinate in fresh and ripened cheeses made from ewe's milk, goat's milk, buffalo milk or mixtures of ewe's, goat's and buffalo milk.
Допълнение
It is not suitable for the detection of milk and cheese adulteration by heat-treated bovine whey protein concentrates.
МЕТОД ЗА ОТКРИВАНЕ НА КРАВЕ МЛЯКО И КАЗЕИНАТИ В СИРЕНА ОТ ОВЧЕ МЛЯКО, КОЗЕ МЛЯКО ИЛИ БИВОЛСКО МЛЯКО, ИЛИ СМЕСИ ОТ ОВЧЕ, КОЗЕ И БИВОЛСКО МЛЯКО
Isolation of caseins from cheese and the reference standards
ОБХВАТ
Dissolving of the isolated caseins and submitting to plasmin (EC.3.4.21.7) cleavage
Откриване на краве мляко и казеинати в сирена, произведени от овче мляко, козе мляко, биволско мляко, или смеси от овче, козе и биволско мляко, чрез изоелектрическо фокусиране на γ-казеини след плазминолиза.
Isoelectric focusing of plasmin-treated caseins in the presence of urea and staining of proteins
ПРИЛОЖНО ПОЛЕ
Evaluation of stained γ3 and γ2 -casein patterns (evidence of cow's milk) by comparison of the pattern obtained from the sample with those obtained in the same gel from the reference standards containing 0 % and 1 % cow's milk.
Методът е подходящ за чувствително и специфично откриване на натурално и топлинно обработвано краве мляко и казеинати в пресни и узрели сирена, произведени от овче мляко, козе мляко, биволско мляко, или смеси от овче, козе и биволско мляко.
Unless otherwise indicated, analytical grade chemicals shall be used.
Той не е подходящ за откриване на подправяне на мляко и сирене чрез топлинно обработени концентрати на суроватъчен протеин от краве мляко.
Water shall be double-distilled or of equivalent purity.
Изолиране на казеини от сирене и от референтните проби.
Note: The following details apply to laboratory prepared polyacrylamide gels containing urea, of dimensions 265 × 125 × 0,25 mm.
Разтваряне на изолираните казеини и разграждане чрез плазмин (EC.3.4.21.7).
Where other sizes and types of gel are used, the separation conditions may have to be adjusted.
Изоелектрическо фокусиране на обработени с плазмин казеини в присъствието на уреа и оцветяване на протеините.
Isoelectric focusing
Оценка на оцветените γ3 и γ2-ивици на казеин (доказателство за краве мляко) чрез сравняване на получените от пробата ивици с тези, които са получени в същия гел от референтните проби, съдържащи 0 % и 1 % краве мляко.
Reagents for production of the urea containing polyacrylamide gels
Ако не е посочено друго, трябва да бъдат използвани химикали с аналитично качество.
Stock gel solution
Водата трябва да е двойно дестилирана или с еквивалента степен на чистота.
Dissolve:
Забележка: Указанията по-долу се прилагат за лаборатория, която е подготвила полиакриламидни гелове, съдържащи уреа, с размери 265 × 125 × 0,25 mm.
4,85 g acrylamide
Когато се използват други размери и типове гел, може да е необходимо коригиране на условията за отделяне.
0,15 g N, N′-methylene-bis-acrylamide (BIS)
Изоелектрическо фокусиране
48,05 g urea
Реагенти за получаване на полиакриламидни гелове, съдържащи уреа
15,00 g glycerol (87 % w/w),
Основен разтвор на гел
in water and make up to 100 ml and store in a brown glass bottle in the refrigerator.
Разтварят се:
Note: A commercially available pre-blended acrylamide/BIS solution may be used in preference to the quoted fixed weights of the neurotoxic acrylamides.
4,85 g акриламид
Where such a solution contains 30 % w/v acrylamide and 0,8 % w/v BIS, a volume of 16,2 ml shall be used for the formulation instead of the fixed weights.
0,15 g N, N′-метиленбисакриламид (BIS)
The shelf life of the stock solution is a maximum of 10 days; if its conductivity is more than 5 μS, de-ionize by stirring with 2 g Amberlite MB-3 for 30 minutes, then filter through a 0,45 μm membrane.
48,05 g уреа
Gel solution
15,00 g глицерин (87 % w/w)
Prepare a gel solution by mixing additives and ampholytes (*) with the stock gel solution (see 4.1.1).
във вода, допълва се до 100 ml и се съхранява в бутилка от кафяво стъкло в хладилник.
9,0 ml stock solution
Забележка: Вместо цитираните определени дози невротоксични акриламиди може да се използва готов разтвор акриламид/BIS, наличен в търговската мрежа.
24 mg β-alanine
Когато такъв разтвор съдържа 30 % w/v акриламид и 0,8 % w/v BIS, вместо определените дози за сместа трябва да бъде използван обем от 16,2 ml.
500 μl ampholyte pH 3,5-9,5
Годността на основния разтвор е максимум 10 дни; ако неговата проводимост е повече от 5 μS, той се дейонизира чрез разклащане с 2 g Амберлит MB-3 за 30 минути, след това се филтрира през мембрана от 0,45 μm.
250 μl ampholyte pH 5-7
Разтвор на гел
250 μl ampholyte pH 6-8
Приготвя се разтвор на гел чрез смесване на добавките и амфолити (*) с основния разтвор на гел (виж 4.1.1).
Mix the gel solution and de-gas for two to three minutes in an ultrasonic bath or in vacuum.
9,0 ml основен разтвор
Note: Prepare the gel solution immediately prior to pouring it (see 6.2).
24 mg β-аланин
Catalyst solutions
500 μl амфолит pH 3,5—9,5
N, N, N′ N′ — tetramethylethylenediamine (Temed)
250 μl амфолит pH 5—7
40 % w/v ammonium persulphate (PER):
250 μl амфолит pH 6—8
Dissolve 800 mg PER in water and make up to 2 ml.
Разтворът на гел се смесва и се дегазира за две до три минути в ултразвукова баня или във вакуум.
Note: Always use freshly prepared PER solution.
Забележка: Разтворът на гел се приготвя непосредствено преди изливането му (вж.
Contact fluid
6.2).
Kerosene or liquid paraffin
Катализаторни разтвори
Anode solution
N, N, N′ N′ — тетраметилетилендиамин (Temed)
Dissolve 5,77 g phosphoric acid (85 % w/w) in water and dilute to 100 ml.
40 % w/v амониев персулфат (PER):
Cathode solution
800 mg PER се разтварят във вода и се долива до 2 ml
Dissolve 2,00 g sodium hydroxide in water and dilute to 100 ml with water.
Забележка: Винаги се използва прясно приготвен разтвор на PER.
Sample preparation
Контактна течност
Reagents for protein isolation
Керосин или течен парафин
Dilute acetic acid (25,0 ml of glacial acetic acid made up to 100 ml with water)
Aноден разтвор
Dichloromethane
5,77 g фосфорна киселина (85 % w/w) се разтваря във вода и се разрежда до 100 ml.
Acetone
Катоден разтвор
Protein dissolving buffer
2,00 g натриев хидроксид се разтваря във вода и се разрежда до 100 ml с вода.
Dissolve
Подготовка на пробите
5,75 g glycerol (87 % w/w)
Реагенти за изолиране на протеин
24,03 g urea
Разредена оцетна киселина (25,0 ml ледена оцетна киселина с добавена вода до 100 ml)
250 mg dithiothreitol,
Дихлорометан
in water and make up to 50 ml
Ацетон
Note: Store in a refrigerator, maximum shelf-life one week.
Буфер за разтваряне на протеин
Reagents for plasmin cleavage of caseins
Разтварят се:
Ammonium carbonate buffer
5,75 g глицерин (87 % w/w)
Titrate a 0,2 mol/l ammonium hydrogencarbonate solution (1,58 g/100 ml water) containing 0,05 mol/l ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA, 1,46 g/100 ml with a 0,2 mol/l ammonium carbonate solution (1,92 g/100 ml water) containing 0,05 mol/l EDTA to pH 8.
24,03 g уреа
Bovine plasmin (EC.
250 mg дитиотрейтол
3.4.21.7), activity at least 5 U/ml
във вода и се долива до 50 ml.
ε-Aminocaproic acid solution for enzyme inhibition
Забележка: Съхранява се в хладилник, максимална годност — една седмица.
Dissolve 2,624 g ε-aminocaproic acid (6 amino-n-hexanoic acid) in 100 ml of 40 % (v/v) ethanol.
Реагенти за разграждане на казеини чрез плазмин
Standards
Буфер — амониев карбонат
Certified reference standards of a mixture of renneted ewe's and goat's skimmed milk containing 0 % and 1 % of cow's milk are available from the Commission's Institute for Reference Materials and Measurements, B-2440 Geel, Belgium
0,2 mol/l разтвор на амониев бикарбонат (1,58 g/100 ml вода), съдържащ 0,05 mol/l етилендиаминтетраоцетна киселина (EDTA, 1,46 g/100 ml), се титрува с 0,2 mol/l разтвор на амониев кaрбонат (1,92 g/100 ml вода), съдържащ 0,05 mol/l EDTA, до pH 8.
Preparation of laboratory interim-standards of buffalo's renneted milk containing 0 % and 1 % of cow's milk
Говежди плазмин (EC.
Skimmed milk is prepared by centrifuging of either buffalo or bovine raw bulk milk at 37 °C at 2500 g for 20 minutes.
3.4.21.7) с активност най-малко 5 U/ml
After cooling the tube and contents rapidly to 6 to 8 °C, the upper fat layer is removed completely.
Разтвор на ε-аминокапронова киселина за инхибиране на ензими
For the preparation of the 1 % standard add 5,00 ml of bovine skimmed milk to a 495 ml of buffalo's skimmed milk in a 1 l beaker, adjust the pH to 6,4 by the addition of dilute lactic acid (10 % w/v).
2,624 g ε-аминокапронова киселина (6 амино-n-хексанова киселина) се разтварят в 100 ml 40 % (v/v) етанол.
Adjust the temperature to 35 °C and add 100 μl of calf rennet (rennet activity 1: 10000, c.
Стандартни проби
3000 U/ml), stir for 1 minute and then leave the beaker covered with an aluminium foil at 35 °C for one hour to allow formation of the curd.
Сертифицирани референтни стандартни проби от смес от подсирени овче и козе обезмаслено мляко, съдържащи 0 % и 1 % краве мляко, могат да се намерят от Института за референтни материали и метрология на Комисията, B-2440 Гил, Белгия.
After the curd has formed, the whole renneted milk is freeze-dried without prior homogenization or draining of the whey.
Подготовка на вътрешни лабораторни стандартни проби от подсирено биволско мляко, съдържащо 0 % и 1 % краве мляко
After freeze-drying it is finely ground to produce a homogeneous powder.
Обезмасленото мляко се приготвя чрез центрофугиране на сурово непакетирано биволско или краве мляко при 37 °C (2500 g, 20 минути).
For the preparation of the 0 % standard, carry out the same procedure using genuine buffalo skimmed milk.
След бързо охлаждане на съда и съдържанието му до 6—8 °C, горният слой мазнина се отстранява напълно.
The standards shall be stored at – 20 °C.
За подготовката на 1 %-на стандартна проба към 495 ml биволско обезмаслено мляко се добавя 5,00 ml краве обезмаслено мляко в 1 l бехерова чаша и се постига pH 6,4 чрез прибавяне на разредена млечна киселина (10 % w/v).
Note: It is advisable to check the purity of the buffalo milk by isoelectric focusing of the plasmin-treated caseins before preparation of the standards.
Температурата се довежда до 35 °C и се прибавят 100 μl телешко сирище (активност 1: 10000, около 3000 U/ml), разклаща се за 1 минута и бехеровата чаша се оставя покрита с алуминиево фолио при 35 °C за един час, за да може съдържанието да се съсири.
Reagents for protein staining
След образуването на съсирека цялото подсирено мляко се суши чрез сублимиране без предварително хомогенизиране или отцеждане на суроватката.
Fixative
След сушенето чрез сублимиране то се смила ситно на хомогенен прах.
Dissolve 150 g trichloroacetic acid in water and make up to 1000 ml.
За подготовката на 0 %-ната стандартна проба се извършва същата процедура с използване на натурално биволско обезмаслено мляко.
Destaining solution
Стандартните проби трябва да бъдат съхранявани при – 20 °C.
Dilute 500 ml methanol and 200 ml glacial acetic acid to 2000 ml with distilled water.
Забележка: Препоръчително е да се проверява чистотата на биволското мляко чрез изоелектрическо фокусиране на третираните с плазмин казеини преди подготовката на стандартните проби.
Note: Prepare the destaining solution fresh every day; it can be prepared by mixing equal volumes of stock solutions of 50 % (v/v) methanol and 20 % (v/v) glacial acetic acid.
Реагенти за оцветяване на протеин
Staining solutions
Фиксатор
Staining solution (stock solution 1)
150 g трихлорооцетна киселина се разтварят във вода и се долива до 1000 ml.
Dissolve 3,0 g Coomassie Brilliant Blue G-250 (C.I. 42655) in 1000 ml 90 % (v/v) methanol using a magnetic stirrer (approximately 45 minutes), filter through two medium-speed folded filters.
Обезцветяващ разтвор
Staining solution (stock solution 2)
500 ml метанол и 200 ml ледена оцетна киселина се разреждат до 2000 ml с дестилирана вода.
Dissolve 5,0 g copper sulphate pentahydrate in 1000 ml 20 % (v/v) acetic acid.
Забележка: Всеки ден се приготвя пресен обезцветяващ разтвор; той може да бъде приготвен чрез смесване на равни обеми основни разтвори на 50 % (v/v) метанол и 20 % (v/v) ледена оцетна киселина.
Staining solution (working solution)
Оцветяващи разтвори
Mix together 125 ml of each of the stock solutions (4.11.1, 4.11.2) immediately prior to staining.
Оцветяващ разтвор (основен разтвор 1)
Note: The staining solution should be prepared on the day that it is used.
3,0 g Coomassie Brilliant Blue G-250 (C.I. 42655) се разтваря в 1000 ml 90 % (v/v) метанол, като се използва магнитна бъркалка (приблизително 45 минути), филтрира се през два нагънати филтъра със средна скорост.
EQUIPMENT
Оцветяващ разтвор (основен разтвор 2)
Glass plates (265 × 125 × 4 mm); rubber roller (width 15 cm); levelling table
5,0 g меден сулфат пентахидрат се разтваря в 1000 ml 20 % (v/v) оцетна киселина.
Gel carrier sheet (265 × 125 mm)
Оцветяващ разтвор (работен разтвор)
Covering sheet (280 × 125 mm).
Смесват се по 125 ml от всеки от основните разтвори (4.11.1, 4.11.2) непосредствено преди оцветяването.
Stick on strip of adhesive tape (280 × 6 × 0,25 mm) to each long edge (see Figure 1)
Забележка: Оцветяващият разтвор следва да бъде приготвен в деня, в който се използва.
Electrofocusing chamber with cooling plate (e.g. 265 × 125 mm) and suitable power supply (≥ 2,5 kV) or automatic electrophoresis device
ОБОРУДВАНЕ
Circulation cryostat, thermostatically controlled at 12 ± 0,5 °C
Стъклени плочи (265 × 125 × 4 mm); каучукова ролка (ширина 15 cm); нивелирна маса
Centrifuge, adjustable to 3000 g
Лист носител на гел (265 × 125 mm)
Electrode strips (≥ 265 mm long)
Покривен лист (280 × 125 mm).
Plastic dropping bottles for the anode and cathode solutions
По двете му дължини отстрани се поставя самозалепваща лента (280 × 6 × 0,25 mm) (вж. фигура 1)
Sample applicators (10 × 5 mm, viscose or low protein-adsorption filter paper)
Камера за електрофокусиране с охлаждаща плоча (напр.
Stainless steel or glass staining and destaining dishes (e.g. 280 × 150 mm instrument trays)
265 × 125 mm) и подходящо електрическо захранване (≥ 2,5 kV) или автоматично устройство за електрофореза
Adjustable rod homogenizer (10 mm shaft diameter), rpm range 8000 to 20000
Криостат с циркулация, термостатно контролиран на 12 ± 0,5 °C
Film welder
Центрофуга, регулируема за 3000g
25 μl micropipettes
Електродни ленти (с дължина ≥ 265 mm)
Vacuum concentrator or freeze-dryer
Пластмасови флакони за капене на анодните и катодните разтвори
Thermostatically controlled water bath adjustable to 35 and 40 ± 1 °C with shaker
Апликатори за проби (10 × 5 mm, вискозна филтърна хартия или филтърна хартия с ниска абсорбция на протеин)
Densitometer equipment reading at λ = 634 nm
Съдове от неръждаема стомана или от стъкло за оцветяване и обезцветяване (напр.
Isolation of caseins
280 × 150 mm таблички за инструменти)
Weigh the amount equivalent to 5 g dry mass of cheese or the reference standards into a 100 ml centrifuge tube, add 60 ml distilled water and homogenize with a rod homogenizer (8000 to 10000 rpm).
Регулируем хомогенизатор (с диаметър на оста 10 mm), от 8000 до 20000 об./мин.
Adjust to pH 4,6 with dil. acetic acid (4.5.1) and centrifuge (5 minutes, 3000 g).
Апарат за залепване на листовете
Decant the fat and whey, homogenize the residue at 20000 rpm in 40 ml distilled water adjusted to pH 4,5 with dil. acetic acid (4.5.1), add 20 ml dichloromethane (4.5.2), homogenize again and centrifuge (5 minutes, 3000 g).
25 μl микро-капкомери
Remove the casein layer that lies between the aqueous and organic phases (see Figure 2) with a spatula and decant off both phases.
Вакуумен концентратор или сушилня чрез сублимиране
Rehomogenise the casein in 40 ml distilled water (see above) and 20 ml dichloromethane (4.5.2) and centrifuge.
Термостатично контролирана водна баня, регулируема за 35 и за 40 ± 1 °C с възможност за разбъркване
Repeat this procedure until both extraction phases are colourless (two to three times).
Денсиметър, четящ при λ = 634 nm
Homogenize the protein residue with 50 ml acetone (4.5.3) and filter through a medium-speed folded filter paper.
Изолиране на казеини
Wash the residue on the filter with two separate 25 ml portions of acetone each time and allow to dry in the air or a stream of nitrogen, then pulverize finely in a mortar.
Количество, еквивалентно на 5 g сухо вещество сирене, или референтните стандартни проби се претеглят в 100 ml центрофужна епруветка, прибавя се 60 ml дестилирана вода и се хомогенизира с хомогенизатор (от 8000 до 10000 об./мин).
Note: Dry casein isolates should be kept at –20 °C.
Регулира се до pH 4,6 с разредена оцетна киселина (4.5.1) и се центрофугира (5 минути, 3000 g).
Plasmin cleavage of β-caseins to intensify γ-caseins
Мазнината и суроватката се отделят, утайката се хомогенизира при 20000 об./мин в 40 ml дестилирана вода, регулирана до pH 4,5 с разредена оцетна киселина (4.5.1), добавят се 20 ml дихлорометан (4.5.2), отново се хомогенизира и се центрофугира (5 минути, 3000 g).
Disperse 25 mg of isolated caseins (6.1.1) in 0,5 ml ammonium carbonate buffer (4.7.1) and homogenize for 20 minutes by e.g. using ultrasonic treatment.
Казеиновият слой, който се намира между водната и органичната фази (вж. фигура 2), се отстранява със шпатула и двете фази се отделят.
Heat to 40 °C and add 10 μl plasmin (4.7.2), mix and incubate for one hour at 40 °C with continuous shaking.
Казеинът се хомогенизира отново в 40 ml дестилирана вода (виж по-горе) и 20 ml дихлорометан (4.5.2) и се центрофугира.
To inhibit the enzyme add 20 μl ε-aminoproic acid solution (4.7.3), then add 200 mg of solid urea and 2 mg of dithiothreitol.