natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Параметрите на потока на изходния разтвор и водата за разреждане следва да се проверяват на интервали, за предпочитане всеки ден по време на извършването на изпитването, и през това време не следва да се променят с повече от 10 %.
Because some aspects of appearance (primarily colour) can change quickly with handling, it is important that qualitative observations be made prior to removal of animals from the test system.
Трябва внимателно да се избягва използването на нискокачествени пластмасови тръби или други материали, които могат да съдържат биологично активни химикали.
Experience to date with fathead minnows suggests that some endocrine active chemicals may initially induce changes in the following external characteristics: body colour (light or dark), coloration patterns (presence of vertical bands), and body shape (head and pectoral region).
При избора на материали за проточната система трябва да бъде взета под внимание възможна адсорбция на изпитвания химикал върху този материал.
Therefore observations of physical appearance of the fish should be made over the course of the test, and at conclusion of the study
Рибата за изпитването следва да се избира от лабораторна популация, за предпочитане от един и същ рибен запас, която е била аклиматизирана в продължение на поне две седмици преди изпитването, при условия, свързани с качеството на водата и осветлението, подобни на тези, използвани при изпитването.
Fecundity
Важно е скоростта на зареждане и гъстотата на отглеждане (за определения, виж допълнение 1) да са подходящи за използваните за изпитването видове (вж. допълнение 2).
Daily quantitative observations of spawning should be recorded on a replicate basis.
при смъртност, по-голяма от 10 % от популацията за седем дни: отхвърля се цялата партида;
Egg production should be recorded as the number of eggs/surviving female/day on a replicate basis.
при смъртност между 5 % и 10 % от популацията: аклиматизация за нови седем дни; ако смъртността е повече от 5 % през вторите седем дни, се отхвърля цялата партида;
Eggs will be removed daily from the test chambers.
при смъртност по-малко от 5 % от популацията за седем дни: партидата се приема.
Spawning substrates should be placed in the test chamber for the fathead minnow and zebrafish to enable fish to spawn in normal conditions.
По време на аклиматизационния период, в периода преди експозицията или по време на периода на експозиция рибата не следва да бъде лекувана от заболявания.
Appendix 4 gives further details of recommended spawning substrates for zebrafish (Appendix 4A) and fathead minnow (Appendix 4B).
Период преди експозицията и подбор на риби
It is not considered necessary to provide spawning substrate for medaka.
Препоръчва се едноседмичен до двуседмичен период преди експозицията, в който животните се поставят в съдове, подобни на съдовете при действителното изпитване.
Humane killing of fish
Рибите следва да бъдат хранени ad libitum през време на периода на отглеждане и по време на фазата на експозиция.
At day 21, i.e. at termination of the exposure, the fish should be euthanised with appropriate amounts of Tricaine (Tricaine methane sulfonate, Metacain, MS-222 (CAS.886-86-2), 100-500 mg/l buffered with 300 mg/l NaHCO3 (sodium bicarbonate, CAS.144-55-8) to reduce mucous membrane irritation; blood or tissue is then sampled for VTG determination, as explained in the vitellogenin section.
Фазата на експозиция започва с полово диморфни възрастни риби от лабораторна доставка на зрели животни, способни на размножение (напр. с ясно видими вторични полови белези що се отнася до Pimephales promelas и японската оризия) и активно хвърлящи хайвер.
Observation of secondary sex characteristics
Само за общ ориентир (и без да се разглежда изолирано от наблюдаването на настоящия репродуктивен статус на дадена партида от риби), Pimephales promelas трябва да бъде на възраст приблизително 20 (± 2) седмици, като се приема, че рибите от този вид са били отглеждани при 25 ± 2 °C през жизнения им цикъл.
Some endocrine active chemicals may induce changes in specialised secondary sex characteristics (number of nuptial tubercles in male fathead minnow, papillary processes in male medaka).
Японската оризия трябва да бъде на възраст приблизително 16 (± 2) седмици, като се приема, че рибите от този вид са били отглеждани при 25 ± 2 °C през жизнения им цикъл.
Notably, chemicals with certain modes of action may cause abnormal occurrence of secondary sex characteristic in animals of the opposite sex; for example, androgen receptor agonists, such as trenbolone, methyltestosterone and dihydrotestosterone, can cause female fathead minnows to develop pronounced nuptial tubercles or female medaka to develop papillary processes (11, 20, 21).
Зебровото данио трябва да бъде на възраст приблизително 16 (± 2) седмици, като се приема, че рибите от този вид са били отглеждани при 26 ± 2 °C през жизнения им цикъл.
It also has been reported that oestrogen receptor agonists can decrease nuptial tubercle numbers and size of the dorsal nape pad in adult males of fathead minnow (26, 27).
Получаването на хайверни зърна следва да се оценява ежедневно по време на фазата преди експозицията.
Such gross morphological observations may provide useful qualitative and quantitative information to inform potential future fish testing requirements.
Препоръчва се хвърлянето на хайвера да се наблюдава във всички съдове с повторения преди включване във фазата на експозиция от изследването.
The number and size of nuptial tubercles in fathead minnow and papillary processes in medaka can be quantified directly or more practically in preserved specimens.
На този етап не могат да бъдат дадени количествени насоки относно желателното ежедневно получаване на хайверни зърна, но е сравнително обичайно да се наблюдава средно хвърляне на > 10 хайверни зърна/женска/ден за всеки вид.
Recommended procedures for the evaluation of secondary sex characteristics in fathead minnow and medaka are available from Appendix 5A and Appendix 5B, respectively.
Следва да се използва рандомизиран блоков план в съответствие с получените хайверни зърна, за разпределяне в повторенията на различните опитни равнища, за да се осигури балансирано разпределение при повторенията.
Vitellogenin (VTG)
ПЛАНИРАНЕ НА ИЗПИТВАНЕТО
Blood is collected from the caudal artery/vein with a heparinised microhematocrit capillary tubule, or alternatively by cardiac puncture with a syringe.
Използват се три концентрации на изпитвания химикал, една контрола (вода) и, ако е необходимо, една контрола на разтворител.
Depending upon the size of the fish, collectable blood volumes generally range from 5 to 60 μl per individual for fathead minnows and 5-15 μl per individual for zebrafish.
Данните могат да бъдат анализирани, за да се определят статистически значими разлики между отклиците в третиранията и контролите.
Plasma is separated from the blood via centrifugation, and stored with protease inhibitors at – 80 °C, until analysed for VTG.
Тези анализи ще дадат информация дали вместо за употреба при оценка на риска, не се изисква по-нататъшно по-дългосрочно изпитване за неблагоприятни последици (а именно преживяване, развитие, растеж и размножение) (25).
Alternatively, in medaka the liver will be used, and in zebrafish the head/tail homogenate can be used as tissue-source for VTG determination (Appendix 6).
За зебровото данио, в ден 21 на опита се пробовземат мъжки и женски животни от всяко ниво на третиране (5 мъжки и 5 женски животни във всяко от двете повторения) и от контролата(ите), за измерване на VTG.
The measurement of VTG should be based upon a validated homologous ELISA method, using homologous VTG standard and homologous antibodies.
За оризията, в ден 21 на опита се пробовземат мъжки и женски животни от всяко ниво на третиране (3 мъжки и 3 женски животни във всяко от четирите повторения) и от контролата(ите), за измерване на VTG и вторични полови белези.
It is recommended to use a method capable to detect VTG levels as low as few ng/ml plasma (or ng/mg tissue), which is the background level in unexposed male fish.
За Pimephales promelas в ден 21 на опита се пробовземат мъжки и женски животни (2 мъжки и 4 женски животни във всяко от четирите повторения) и от контролата(ите), за измерване на VTG и вторични полови белези.
Quality control of VTG analysis will be accomplished through the use of standards, blanks and at least duplicate analyses.
Изисква се количествена оценка на плодовитостта, и гонадните тъкани се фиксират изцяло или им се извършва дисекция за евентуална хистопатологичната оценка, ако се изисква.
For each ELISA method, a test for matrix effect (effect of sample dilution) should be run to determine the minimum sample dilution factor.
Избор на концентрации на изпитване
Each ELISA plate used for VTG assays should include the following quality control samples: at least 6 calibration standards covering the range of expected VTG concentrations, and at least one non-specific binding assay blank (analysed in duplicate).
За целите на това изпитване най-високата изпитвана концентрация трябва да се определя от максимално поносимата концентрация (МПК), определена при изпитване за определяне на обхвата, или от други данни за токсичност, или 10 mg/l, или максималната разтворимост във вода, в зависимост от това коя е най-ниска.
Absorbance of these blanks should be less than 5 % of the maximum calibration standard absorbance.
МПК се определя като най-високата изпитвана концентрация на химикала, която води до по-малко от 10 % смъртност.
At least two aliquots (well-duplicates) of each sample dilution will be analysed.
При използването на този подход се допуска, че са налице емпирични данни за смъртността от остра и друга токсичност, от които може да се оцени МПК.
Well-duplicates that differ by more than 20 % should be re-analysed.
Оценката на МПК може да бъде неточна и обикновено се изисква определена професионална преценка.
The correlation coefficient (R2) for calibration curves should be greater than 0,99.
Изискват се три изпитвани концентрации, раздалечени на равни интервали една от друга с кратност, която не надвишава 10, и контрола на вода за разреждане (както и контрола на разтворител, ако е необходимо).
However, a high correlation is not sufficient to guarantee adequate prediction of concentration in all ranges.
Препоръчва се раздалечаване с кратност между 3,2 и 10.
In addition to having a sufficiently high correlation for the calibration curve, the concentration of each standard, as calculated from the calibration curve, should all fall between 70 and 120 % of its nominal concentration.
Подбор и измерване теглото на изпитваните риби
If the nominal concentrations trend away from the calibration regression line (e.g. at lower concentrations), it may be necessary to split the calibration curve into low and high ranges or to use a nonlinear model to adequately fit the absorbance data.
Важно е варирането в теглото на рибите в началото на изпитването да се сведе до минимум.
If the curve is split, both line segments should have R2 > 0,99.
Подходящи диапазони на размерите за различните видове, които се препоръчват за използване в настоящото изпитване, са дадени в допълнение 2.
The limit of detection (LOD) is defined as the concentration of the lowest analytical standard, and limit of quantitation (LOQ) is defined as the concentration of the lowest analytical standard multiplied by the lowest dilution factor.
За цялата партида от риби, използвани в изпитването, стойностите на индивидуалните тегла в началото на изпитването следва да се запазят в ± 20 % от средноаритметичното тегло на рибите от същия пол.
On each day that VTG assays are performed, a fortification sample made using an inter-assay reference standard will be analysed (Appendix 7).
Препоръчва се да се измерва и теглото на подпроба от рибния запас преди изпитването с цел да се оцени средното тегло.
The ratio of the expected concentration to the measured concentration will be reported along with the results from each set of assays performed on that day.
Продължителността на изпитването е 21 дни, след период преди експозицията.
Evaluation of gonadal histopathology
Препоръчаният период преди експозицията е една до две седмици.
Performance of gonadal histopathology may be required by regulatory authorities to study the target organ on the HPG axis following chemical exposure.
Рибите следва да бъдат хранени ad libitum с подходяща храна (допълнение 2) в достатъчно количество за поддържане на телесното състояние.
In this respect, gonads are fixed either whole body or dissected.
Следва да се полагат грижи за избягване на развитието на микроби и на помътняване на водата.
When histopathology is required, specific endocrine-related responses on the gonads will be looked for in the assessment of the endocrine activity of the test chemical.
Като обща насока дневната порция може да бъде разделена на две или три равни части за многократно ежедневно хранене, с поне три часа между всяко хранене.
These diagnostic responses essentially include the presence of testicular oocytes, Leydig cell hyperplasia, decreased yolk formation, increased spermatogonia and perifollicular hyperplasia.
Еднократна по-голяма порция е приемлива, особено за съботите и неделите.
Other gonadal lesions like oocyte atresia, testicular degeneration, and stage changes, may have various causes.
Даването на храна се прекратява 12 часа преди пробовземането/аутопсията.
The Guidance document on fish gonadal histopathology specifies procedures that will be used in the dissection, fixation, sectioning and histopathological evaluation of the gonads (22).
Храната за риби следва да бъде оценявана за наличието на замърсители, като например органохлорни пестициди, полициклични ароматни въглеводороди (PAH), полихлорирани бифенили (PCB).
Evaluation of Biomarker Responses by Analysis of Variance (ANOVA)
Храна с повишени нива на фитоестрогени, които биха нарушили отклика при изследването с познати естрогенни агонисти (напр.
To identify potential activity of a chemical, responses are compared between treatments and control groups using analysis of variance (ANOVA).
17b-естрадиол), следва да се избягва.
Where a solvent control is used, an appropriate statistical test should be performed between the dilution water and solvent controls for each endpoint.
Неконсумираната храна и фекалните отпадъци следва да се отстраняват от съдовете за изпитване най-малко два пъти седмично, напр. чрез внимателно почистване на дъното на всеки съд, с използване на сифон.
Guidance on how to handle dilution water and solvent control data in the subsequent statistical analysis can be found in OECD, 2006c (28).
Преди започване на периода на експозиция следва да бъде гарантирано правилното функциониране на системата за доставяне на химикала.
All biological response data should be analysed and reported separately by sex.
Всички необходими методи за анализ следва да бъдат установени, включително с достатъчно информация за стабилността на химикала в системата за изпитване.
If the required assumptions for parametric methods are not met — non-normal distribution (e.g. Shapiro-Wilk's test) or heterogeneous variance (Bartlett's test or Levene's test), consideration should be given to transforming the data to homogenise variances prior to performing the ANOVA, or to carrying out a weighted ANOVA.
По време на изпитването концентрациите на изпитвания химикал се определят през постоянни интервали, както следва: дебитът на водата за разреждане и на изходния разтвор на токсичния химикал следва да се проверяват, за предпочитане ежедневно, но като минимум два пъти седмично и през време на изпитването не следва да се променят с повече от 10 %.
Dunnett's test (parametric) on multiple pair-wise comparisons or a Mann-Whitney with Bonferroni adjustment (non-parametric) may be used for non-monotonous dose-response.
Препоръчва се действителните концентрации на изпитвания химикал да се измерват във всички съдове в началото на изпитването и след това на интервали от една седмица.
Other statistical tests may be used (e.g. Jonckheere-Terpstra test or Williams test) if the dose-response is approximately monotone.
Препоръчва се резултатите да се основават на измерени концентрации.
A statistical flowchart is provided in Appendix 8 to help in the decision on the most appropriate statistical test to be used.
Обаче ако концентрацията на изпитвания химикал в разтвора е поддържана на задоволително ниво в рамките на ± 20 % от номиналната концентрация по време на изпитването, тогава резултатите могат да се основават или на номиналната, или на измерената стойност.
Additional information can also be obtained from the OECD Document on Current Approaches to Statistical Analysis of Ecotoxicity Data (28).
Възможно е да се наложи филтруване (напр. с използване на отвори с размер 0,45 μm) или центрофугиране на пробите.
Reporting of test results
Ако е необходимо, центрофугирането се препоръчва като процедура.
Study data should include:
Обаче в случай че изпитваният материал не се адсорбира върху филтрите, филтруването също може да е приемливо.
Testing facility:
По време на изпитването разтвореният кислород, температурата и рН следва да бъдат измервани във всеки съд за изпитване най-малко веднъж седмично.
Responsible personnel and their study responsibilities
Общата твърдост и алкалността следва да се измерват в контролите и в един съд с най-висока концентрация най-малко веднъж седмично.
Each laboratory should have demonstrated proficiency using a range of representative chemicals
По време на изследването или при приключването му се оценяват редица общи (напр. преживяване) и биологични отклици (напр. нива на VTG).
Characterisation of test chemical
Изисква се ежедневно наблюдаване на плодовитостта в количествено отношение.
Physical nature and relevant physicochemical properties
Измерването и оценката на тези крайни точки и ползата от тях са описани по-долу.
Method and frequency of preparation of test concentrations
Преживяване
Information on stability and biodegradability
Рибите следва да се преглеждат всеки ден през периода на изпитването и всякаква смъртност следва да се записва, а мъртвите екземпляри да се отстраняват колкото е възможно по-бързо.
Characterisation of solvent (nature, concentration used)
Мъртвите риби не следва да се заменят нито в съдовете с контроли, нито в съдове за третиране.
Justification of choice of solvent (if other than water)
Полът на рибите, които умират по време на изпитването, трябва да се определи чрез макроскопска оценка на гонадите.
Species and strain
Поведение и външен вид
Supplier and specific supplier facility
Всяко необичайно поведение (в сравнение с контролите) трябва да бъде отбелязвано; това може да включва признаци на обща токсичност, включително хипервентилация, некоординирано плуване, загуба на равновесие, и нетипично състояние на покой или нетипично поведение при хранене.
Age of the fish at the start of the test and reproductive/spawning status
Освен това следва да бъдат отбелязвани и външните аномалии (като кръвоизлив, обезцветяване).
Details of animal acclimation procedure
Такива признаци на токсичност следва да се разглеждат внимателно при интерпретирането на данните, тъй като те могат да сочат концентрации, при които биомаркерите за ендокринна активност не са надеждни.
Body weight of the fish at the start of the exposure (from a sub-sample of the fish stock)
Такива наблюдения на поведението могат също да предоставят полезна качествена информация за потенциалните бъдещи изисквания за изпитвания на риби.
Test procedure used (test-type, loading rate, stocking density, etc.);
Така например, териториалната агресивност при нормални мъжки или при женски, придобили мъжки вторични полови белези, е наблюдавана при Pimephales promelas при андрогенна експозиция; при зебровото данио характерното поведение при чифтосване и хвърляне на хайвера, проявяващо се непосредствено след изгрев, се ограничава или се възпрепятства от естрогенна или антиандрогенна експозиция.
Method of preparation of stock solutions and flow-rate;
Тъй като някои аспекти на външния вид (предимно цветът) могат да се променят бързо при боравенето, важно е качествените наблюдения да бъдат извършени преди отстраняването на животните от системата за изпитване.
The nominal test concentrations, weekly measured concentrations of the test solutions and analytical method used, means of the measured values and standard deviations in the test vessels and evidence that the measurements refer to the concentrations of the test chemical in true solution;
От досегашния опит с Pimephales promelas се предполага, че някои ендокринно активни химикали може първоначално да предизвикат промени в следните външни характеристики: оцветяване на тялото (светло или тъмно), начини на оцветяване (наличие на вертикални ленти) и форма на тялото (главата и гръдната област).
Dilution water characteristics (including pH, hardness, alkalinity, temperature, dissolved oxygen concentration, residual chlorine levels, total organic carbon, suspended solids and any other measurements made)
Поради това наблюденията на външния вид на рибите следва да бъдат правени по време на изпитването и при приключване на изследването
Water quality within test vessels: pH, hardness, temperature and dissolved oxygen concentration;
Плодовитост
Detailed information on feeding (e.g. type of food(s), source, amount given and frequency and analyses for relevant contaminants if available (e.g. PCBs, PAHs and organochlorine pesticides).
Ежедневните количествени наблюдения на хвърлянето на хайвера следва да се записват на основа повторение.
Evidence that the controls met the acceptance criteria of the test;
Получените хайверни зърна следва да бъдат записвани като брой хайверни зърна/преживяла женска/ден на основа повторение.
Data on mortalities occurring in any of the test concentrations and control;
Хайверните зърна ще бъдат отстранявани ежедневно от камерите за изпитване.
Statistical analytical techniques used, treatment of data and justification of techniques used;
Субстратите за хвърляне на хайвер трябва да се поставят в камерата за изпитване за Pimephales promelas и зебровото данио, за да се даде възможност на рибите да хвърлят хайвера си в нормални условия.
Data on biological observations of gross morphology, including secondary sex characteristics, egg production and VTG;
В допълнение 4 се дават допълнителни подробности за препоръчителни субстрати за хвърляне на хайвер за зебровото данио (приложение 4А) и Pimephales promelas (приложение 4Б).
Results of the data analyses preferably in tabular and graphical form;
Не се счита за необходимо да се предоставя субстрат за хвърляне на хайвер на оризията.
Incidence of any unusual reactions by the fish and any visible effects produced by the test chemical
Умъртвяване на риби по хуманен начин
GUIDANCE FOR THE INTERPRETATION AND ACCEPTANCE OF THE TEST RESULTS
На ден 21, т.е. при приключване на експозицията, рибите следва да бъдат подложени на евтаназия с подходящи количества трикаин (трикаинов метансулфонат, метакаин, MS-222 (CAS 886-86-2), 100-500 mg/l буфериран с 300 mg/l NaHCO3 (натриев хидрогенкарбонат, CAS 144-55-8), за да се намали дразненето на мукозните мембрани; след това се вземат проби от кръв или тъкани за определяне на VTG, както е обяснено в раздела за VTG.
This section contains a few considerations to be taken into account in the interpretation of test results for the various endpoints measured.
Наблюдение на вторични полови белези
The results should be interpreted with caution where the test chemical appears to cause overt toxicity or to impact on the general condition of the test animal.
Някои химикали с активно действие върху ендокринната система могат да предизвикат промени в специализирани вторични полови белези (брой размножителни туберкули при мъжки Pimephales promelas, брой на папиларните израстъци при оризията от мъжки пол).
In setting the range of test concentrations, care should be taken not to exceed the maximum tolerated concentration to allow a meaningful interpretation of the data.