natgillin/translations-raw huggingface dataset:
При много риби съществуват групи от туберкули под долната челюст; тези, които са най-близо до устата, обикновено са един чифт, докато разположените вентрално от тях могат да се състоят от до четири туберкули.
If necessary, take a photograph of the anal fin and count the number of joint plate with papillary processes on the photograph.
Действителният брой на туберкулите рядко е повече от 30 (обхват от 18—28; Jensen et al.
After the measurement, put the anal fin into the conical tube described in (1) and store it.
2001).
Fig.1.
Преобладаващите туберкули (по отношение на броя) представляват единични, относително заоблени структури, с височина приблизително равна на радиуса.
Diagram showing sexual difference in shape and size of the anal fin.
Повечето репродуктивно активни мъжки животни също имат поне няколко туберкули, които са разширени и подчертано развити по такъв начин, че не могат да бъдат разграничени като отделни структури.
A, male; B, female.
Някои типове химикали, нарушаващи функциите на ендокринната система, могат да причинят необичайната поява на някои вторични полови белези в другия пол; например агонисти на андрогенните рецептори като например 17α-метилтестостерон или 17β-тренболон, могат да предизвикат поява на подчертано развити размножителни туберкули у женски Pimephales promelas (Smith, 1974 г.; Ankley et al.
Fig.2.
2001; 2003), докато агонисти на естрогенните рецептори могат да предизвикат намаляване на размножителните туберкули у мъжки индивиди (Miles-Richardson et al.
A, Processes on joint plates of anal fin-ray.
1999; Harries et al.
J.P., joint plate; A.S., axial space; P., process.
2000).
B, Distal extremity of fin-ray.
По-долу е представено описание на характеризирането на размножителни туберкули у Pimephales promelas въз основа на процедурите, използвани в лабораторията на Американската агенция за защита на околната среда в Duluth, MN.
Actinotrichia (Act.) are on the tip.
Специфичните продукти и/или оборудване могат да бъдат заменени с налични сравними материали.
Fig.3.
Наблюдението се извършва най-добре с помощта на увеличително стъкло с осветително тяло или със стереомикроскоп с осветително тяло и увеличение 3X.
Photograph of fish body showing the cut site when the gonad is fixed in the fixing solution other than 10 % neutral buffered formalin.
Рибата се наблюдава дорзално с предната част в посока напред (глава към наблюдателя).
In that case, the remaining body will be cut off between anterior region of anal fin and anal using razor (red bar), and the head side of fish body will be put into the fixing solution for gonad and the tail side of the fish body will be put into the 10 % neutral buffered formalin.
Рибата се поставя в малко блюдо на Петри (напр.
Papillary processes normally appear only in adult males and are found on fin rays from the second to the seventh or eighth counting from the posterior end of the anal fin (Fig.1 and 2).
100 mm в диаметър), с предната част в посока напред, с коремния дял надолу.
However, processes rarely appear on the first fin ray from the posterior end of the anal fin.
Визьорът се фокусира, за да се даде възможност за идентифициране на туберкулите.
This SOP covers the measurement of processes on the first fin ray (the fin ray number refers to the order from the posterior end of the anal fin in this SOP).
Рибата се обръща леко и бавно от една страна на друга, за да се идентифицират областите с туберкули.
RECOMMENDED PROCEDURES FOR SAMPLE COLLECTION FOR VITELLOGENIN ANALYSIS
Туберкулите се преброяват и ранжират.
Care should be taken to avoid cross-contamination between VTG samples of males and females.
Наблюдението се повтаря по отношение на предната част на коремния дял, чрез поставяне на рибата дорзално с предната част в посока напред в блюдото на Петри.
Procedure 1A:
Наблюденията трябва да бъдат извършени в рамките на 2 минути за всяка риба.
Fathead Minnow, Blood Collection from the Caudal Vein/Artery
Броене и ранжиране на туберкулите
After anaesthetisation, the caudal peduncle is partially severed with a scalpel blade and blood is collected from the caudal vein/artery with a heparinised microhematocrit capillary tube.
Определени са шест конкретни области за оценка на наличието и развитието на туберкули в полово зрели Pimephales promelas.
After the blood has been collected, the plasma is quickly isolated by centrifugation for 3 min at 15000 g (or alternatively for 10 min. at 15000 g at 4 °C).
Разработен е образец за отбелязване на местоположението и количеството на налични туберкули (вж. в края на настоящото допълнение).
If desired, percent haematocrit can be determined following centrifugation.
Броят на туберкулите се записва и техните размери могат да бъдат количествено ранжирани като: 0- липсва, 1-наличен, 2-уголемен и 3-подчертано развит за всеки организъм (фиг.
The plasma portion is then removed from the microhematocrit tube and stored in a centrifuge tube with 0,13 units of aprotinin (a protease inhibitor) at – 80 °C until determination of VTG can be made.
1).
Depending on the size of the fathead minnow (which is sex-dependent), collectable plasma volumes generally range from 5 to 60 microliters per fish (Jensen et al.
Ранг 0 — липса на туберкули.
2001).
Ранг 1 — наличен, присвоява се на всеки туберкул, който има точка, чиято височина е почти равна на радиуса му.
Procedure 1B:
Ранг 2 — уголемен, присвоява се при тъкан с външен вид, наподобяващ звездичка, обикновено с голяма радиална база с вдлъбнатини или бразди, излизащи от центъра.
Fathead Minnow, Blood Collection from Heart
Височината на туберкула често е по-неравна, но понякога може до известна степен да е закръглена.
Alternatively, blood may also be collected by cardiac puncture using a heparinised syringe (1000 units of heparin per ml).
Ранг 3 — подчертано развит, обикновено е доста голям и закръглен, с по-неопределена структура.
The blood is transferred into Eppendorf tubes (held on ice) and then centrifuged (5 min, 7000 g, room temperature).
Понякога тези туберкули са разположени заедно, образувайки обща маса по протежение на отделна област или съчетание от области (B, C и D, описани по-долу).
The plasma should be transferred into clean Eppendorf tubes (in aliquots if the volume of plasma makes this feasible) and promptly frozen at – 80 °C, until analysed (Panter et al., 1998).
Оцветяването и формата са сходни с ранг 2, но понякога са твърде произволни.
Procedure 2A:
Използването на тази рангова система най-общо води като цяло до резултати от ранжирането < 50 в нормален контролен мъжки индивид, притежаващ 18 до 20 броя туберкули (Jensen et al.
Japanese Medaka, Excision of the Liver in Medaka
2001).
Removal of the test fish from the test chamber
Действителният брой на туберкулите при някои риби може да е по-голям от полетата в образеца за определена област на ранжиране.
Test fish should be removed from the test chamber using the small spoon-net.
В такъв случай вътре могат да бъдат отбелязани допълнителни числа, вдясно или вляво от полето.
Be careful not to drop the test fish into other test chambers.
Следователно не е необходимо образецът да показва симетрия.
In principle, the test fish should be removed in the following order: control, solvent control (where appropriate), lowest concentration, middle concentration, highest concentration and positive control.
Допълнителен метод за отбелязване на местоположението на туберкули, които са чифтни или съединени вертикално по протежение на хоризонталната равнина на устата, може да се осъществи чрез двойно отбелязване на два ранга на туберкули в едно поле.
In addition, all males should be removed from one test chamber before the remaining females are removed.
Области за отбелязване на местоположението:
The sex of each test fish is identified on the basis of external secondary sex characteristics (e.g. the shape of the anal fin).
A — туберкули, разположени около окото.
Place the test fish in a container for transport and carry it to the workstation for excision of the liver.
Положението се отбелязва дорзално към вентрално около предния край на окото.
Check the labels of the test chamber and the transport container for accuracy and to confirm that the number of fish that have been removed from the test chamber and that the number of fish remaining in the test chamber are consistent with expectation.
Обичайно са много при полово зрели мъжки от контроли, не са налични при женски, като цяло чифтни (един в близост до всяко око) или единични при женски животни, експонирани на андрогени.
If the sex cannot be identified by the fish's external appearance, remove all fish from the test chamber.
B-туберкули, разположени между ноздрите (сензорни канали).
In this case, the sex should be identified by observing the gonad or secondary sex characteristics under a stereoscopic microscope.
Обикновено чифтни при мъжките в контролите с по-висок ранг за развитие (2- уголемен или 3- подчертано развит).
Excision of the liver
Не са налични при женски от контролите, с известно срещане и развитие при женски животни, експонирани на андрогени.
Transfer the test fish from the container for transport to the anaesthetic solution using the small spoon-net.
C — туберкули, разположени непосредствено задно от ноздрите, успоредно на устата.
After the test fish is anesthetised, transfer the test fish on the filter paper (or a paper towel) using tweezers (commodity type).
Обикновено уголемени или подчертано развити при полово зрели мъжки от контроли.
When grasping the test fish, apply the tweezers to the sides of the head to prevent breaking the tail.
Налични или уголемени при по-слабо развитите мъжки или при женски животни, експонирани на андрогени.
Wipe the water on the surface of the test fish on the filter paper (or the paper towel).
D — туберкули, разположени успоредно по линията на устата.
Then make a small transverse incision partway between the ventral neck region and the mid-abdominal region using dissection scissors.
Като цяло се ранжират като развити в контролните животни от мъжки пол.
Insert the dissection scissors into the small incision, and incise the abdomen from a point caudal to the branchial mantle to the cranial side of the anus along the midline of the abdomen.
Липсващи в контролните животни от женски пол, но налични при женски животни, експонирани на андрогени.
Be careful not to insert the dissection scissors too deeply so as to avoid damaging the liver and gonad.
E — туберкули, разположени по долната челюст, близо до устата, обикновено малки и обичайно чифтни.
Conduct the following operations under the stereoscopic microscope.
Варират при контролните или третираните мъжки, и третираните женски индивиди.
Place the test fish abdomen side up on the paper towel (glass Petri dish or slide glass are also available).
F — туберкули, разположени вентрално от E. Обикновено малки и чифтни.
Extend the walls of the abdominal cavity with precision tweezers and exteriorise the internal organs.
Налични в контролните животни от мъжки пол и при женски животни, експонирани на андрогени.
It is also acceptable to exteriorise the internal organs by removing one side of the wall of the abdominal cavity if necessary.
Образец за туберкули
Expose the connected portion of the liver and gallbladder using another pair of precision tweezers.
Ранжиране с числови стойности на ранга
Then grasp the bile duct and cut off the gallbladder.
Дата
Be careful not to break the gallbladder.
аличен
Grasp the oesophagus and excise the gastrointestinal tract from the liver in the same way.
Общ резултат
Be careful not to leak the contents of the gastrointestinal tract.
големен
Excise the caudal gastrointestinal tract from the anus and remove the tract from the abdominal cavity.
одчертано развит
Trim the mass of fat and other tissues from the periphery of the liver.
Допълнение 5Б
Be careful not to scratch the liver.
ОЦЕНКА НА ВТОРИЧНИ ПОЛОВИ БЕЛЕЗИ У ЯПОНСКАТА ОРИЗИЯ ЗА ОТКРИВАНЕ НА ОПРЕДЕЛЕНИ ХИМИКАЛИ С АКТИВНО ДЕЙСТВИЕ ВЪРХУ ЕНДОКРИННАТА СИСТЕМА
Grasp the hepatic portal area using the precision tweezers and remove the liver from the abdominal cavity.
По-долу е представено описание на измерването на папиларните израстъци [1], които са вторични полови белези при японската оризия (Oryzias latipes).
Place the liver on the slide glass.
След изрязване на черния дроб (допълнение 6), трупът се поставя в конична епруветка, съдържаща около 10 ml 10 % неутрален буфериран формалин (горна страна: глава, долна страна: опашка).
Using the precision tweezers, remove any additional fat and extraneous tissue (e.g. abdominal lining), if needed, from the surface of the liver.
Ако гонадата е фиксирана в разтвор, различен от 10 % неутрален буфериран формалин, прави се напречен разрез през трупа между предната област на аналната перка и ануса, с използване на бръснач, като се внимава да не се увреди половият отвор и самата гонада (фиг.
Measure the liver weight with 1,5 ml microtube as a tare using an electronic analytical balance.
3).
Record the value on the worksheet (read: 0,1 mg).
Краниалната част от тялото на рибата се поставя в разтвора на фиксатора за запазване на гонадата, а опашната част от тялото на рибата се поставя в 10 % неутрален буфериран формалин, както е описано по-горе.
Confirm the identification information on the microtube label.
След поставянето на тялото на рибата в 10 % неутрален буфериран формалин задният край на аналната перка се захваща с пинцети и се разтваря за около 30 секунди, за да се запази аналната перка отворена.
Close the cap of the microtube containing the liver.
При захващането на аналната перка с пинцети се захващат няколко лъча на перката в предната област, като се внимава да не се надраскат папиларните израстъци.
Store it in a cooling rack (or ice rack).
След държането на аналната перка отворена в продължение на около 30 секунди, тялото на рибата се съхранява в 10 % неутрален буфериран формалин при стайна температура до измерването на папиларните израстъци (измерването следва да се проведе след фиксиране в продължение най-малко на 24 часа).
Following the excision of one liver, clean the dissection instruments or replace them with clean ones.
Измерване
Remove livers from all of the fish in the transport container as described above.
След фиксиране на тялото на рибата в 10 % неутрален буфериран формалин в продължение най-малко на 24 часа, трупът на рибата се взема от коничната епруветка и формалинът се избърсва върху филтърна хартия (или хартиена кърпа).
After the livers have been excised from all of the fish in the transport container (i.e., all males or females in a test chamber), place all liver specimens in a tube rack with a label for identification and store it in a freezer.
Рибата се поставя с корема нагоре.
When the livers are donated for pre-treatment shortly after the excision, the specimens are carried to the next workstation in a cooling rack (or ice rack).
След това аналната перка се изрязва внимателно с малки ножици за дисекция (за предпочитане е да се изреже аналната перка с малко количество птеригиофор).
Following liver excision, the fish carcass is available for gonad histology and measurement of secondary sex characteristics.
С пинцети се захваща предната област от отрязаната анална перка и тя се поставя върху предметно стъкло с няколко капки вода.
Specimen
След това аналната перка се покрива с покривно стъкло.
Store the liver specimens taken from the test fish at ≤ – 70 °C if they are not used for the pre-treatment shortly after the excision.
При захващането на аналната перка с пинцети се внимава да не се надраскат папиларните израстъци.
A cut is made just anterior to pectoral fins with scissors
Отчита се броят членчета с папиларни израстъци, като се използва брояч под биологичен микроскоп (изправен или инвертен микроскоп).
The midline of abdomen is incised with scissors to a point approximately 2 mm cranial to the anus
Папиларните израстъци се познават, когато в задната част на членчетата се вижда малко образувание от израстъци.
The abdominal walls are spread with forceps for exposure of the liver and other internal organs
В работната таблица се записва броят на членчетата с папиларни израстъци във всеки лъч на перка (напр. първи лъч на перка: 0, втори лъч на перка: 10, трети лъч на перка: 12 и т.н.) и се вписва сумата им в таблицата в Excel за всеки отделен екземпляр.
(Alternatively, the abdominal walls may be pinned laterally).
Ако е необходимо, аналната перка се фотографира и върху снимката се отчита броят на членчетата с папиларни израстъци.
Arrow shows liver
След измерването аналната перка се поставя в коничната епруветка, описана в 1) и се съхранява.
The liver is bluntly dissected and excised using forceps
Фиг.
Figure 5
1.
The intestines are gently retracted using forceps
Схема, показваща разликата при половете по отношение на формата и размера на аналната перка.
Figure 6
A, мъжка; B, женска.
Both ends of the intestines and any mesenteric attachments are severed using scissors
Фиг.
Figure 7 (female)
2.
The procedure is identical for the female
А, папиларни израстъци върху членчета от лъч на анална перка.
Figure 8
J.P., членче; A.S., аксиално пространство; P., израстък.
The completed procedure
B, дистален край на лъч на перка.
Procedure 2 B:
Дистално в края на лъча са разположени колагенни фибри (Actinotrichia) (Act.).
Japanese Medaka (Oryzias latipes), Liver Pre-treatment for Vitellogenin Analysis
Фиг.
Take the bottle of homogenate buffer from the ELISA kit and cool it with crushed ice (temperature of the solution: ≤ 4°C).
3.
If homogenate buffer from EnBio ELISA system is used, thaw the solution at room temperature, and then cool the bottle with crushed ice.
Снимка на тяло на риба, показваща мястото на срязване, когато гонадата се фиксира в разтвор на фиксатор, различен от 10 % неутрален буфериран формалин.
Calculate the volume of homogenate buffer for the liver on the basis of its weight (add 50 μl of homogenate buffer per mg liver weight).
В този случай останалата част от тялото се разрязва между предната област на аналната перка и ануса с помощта на бръснач (червена лента), и предната част от тялото на рибата се поставя в разтвора на фиксатор за гонади, а опашната част от тялото на рибата се поставя в 10 % неутрален буфериран формалин.
For example, if the weight of the liver is 4,5 mg, the volume of homogenate buffer for the liver is 225 μl.
Папиларните израстъци обикновено се появяват само при полово зрели мъжки и се намират на лъчите на перките, като се започне от втория, до седмия или осмия от задния край на аналната перка (фиг.
Prepare a list of the volume of homogenate buffer for all livers.
1 и 2).
Preparation of the liver for pre-treatment
Независимо от това, израстъци рядко се появяват на първия лъч от задния край на аналната перка.
Take the 1,5 ml microtube containing the liver from the freezer just before the pre-treatment.
Тази стандартна оперативна процедура (СОП) обхваща измерването на израстъците на първия лъч на перка (в настоящата СОП номерът на лъча на перка се отнася за поредния номер, считано от първия лъч в задния край на аналната перка).
Pre-treatment of the liver from males should be performed before females to prevent vitellogenin contamination.
ПРЕПОРЪЧИТЕЛНИ ПРОЦЕДУРИ ЗА СЪБИРАНЕТО НА ПРОБИ ЗА АНАЛИЗ НА ВИТЕЛОГЕНИН
In addition, the pre-treatment for test groups should be conducted in the following order: control, solvent control (where appropriate), lowest concentration, middle concentration, highest concentration and positive control.
Трябва да се вземат мерки за избягване на кръстосано замърсяване между пробите с VTG от мъжки и от женски животни.
The number of 1,5 ml microtubes containing liver samples taken from the freezer at a given time should not exceed the number that can be centrifuged at that time.
Процедура 1А:
Arrange the 1,5 ml microtubes containing liver samples in the order of specimen number on the ice rack (no need to thaw the liver).
Вземане на кръвна проба от опашна вена/артерия от Pimephales promelas
Operation of the pre-treatment
След подлагане на анестезия, опашното стъбло частично се отрязва със скалпел и се взема кръв от опашната вена/артерия с хепаринизирана микрокапилярка за хематокрит.
Addition of the homogenate buffer
След вземането на кръвната проба плазмата бързо се отделя чрез центрофугиране при 15000 g за 3 минути (или алтернативно при 15000 g за 10 минути при 4 °C).
Check the list for the volume of the homogenate buffer to be used for a particular sample of liver and adjust the micropipette (volume range: 100-1000 μl) to the appropriate volume.
По избор, процентът хематокрит може да се определи след центрофугирането.
Attach a clean tip to the micropipette.
Частта плазма се отстранява от микрокапилярката за хематокрит и се съхранява в центрофужна епруветка с 0,13 единици апротинин (протеазен инхибитор) при – 80 °C, докато може да бъде извършено определяне на VTG.
Take the homogenate buffer from the reagent bottle and add the buffer to the 1,5 ml microtube containing the liver.
В зависимост от размера на Pimephales promelas (който зависи от пола) събираемият обем плазма обикновено е в интервала от 5 до 60 микролитра на риба (Jensen et al.
Add the homogenate buffer to all of 1,5 ml microtubes containing the liver according to the procedure described above.
2001).
There is no need to change the micropipette tip to a new one.
Процедура 1B:
However, if the tip is contaminated or suspected to be contaminated, the tip should be changed.
Вземане на кръвна проба от сърце от Pimephales promelas
Homogenisation of the liver
Като алтернатива, кръвна проба може също така да се вземе чрез сърдечна пункция с помощта на хепаризирана спринцовка (1000 единици хепарин/ml).
Attach a new pestle for homogenisation to the microtube homogeniser.
Кръвта се прехвърля в епендорфови епруветки (държани върху лед) и се центрофугира (5 минути, 7000 g, стайна температура).
Insert the pestle into the 1,5 ml microtube.
Плазмата следва да се прехвърли в чисти епендорфови епруветки (в аликвотни части, ако обемът на плазмата позволява това) и бързо да се замрази при температура – 80 °C до нейното анализиране (Panter et al., 1998).
Hold the microtube homogeniser to press the liver between the surface of the pestle and the inner wall of the 1,5 ml microtube.
Процедура 2A:
Operate the microtube homogeniser for 10 to 20 seconds.
Изрязване на черен дроб от японска оризия
Cool the 1,5 ml microtube with crushed ice during the operation.
Отстраняване на изпитваната риба от камерата за изпитване
Lift up the pestle from the 1,5 ml microtube and leave it at rest for about 10 seconds.
Изпитваната риба следва да се отстрани от изпитвателната камера с помощта на малко кепче.
Then conduct a visual check of the state of the suspension.
Следва да се внимава изпитваната риба да не попадне в други камери за изпитване.
If pieces of liver are observed in the suspension, repeat the operations (3) and (4) to prepare satisfactory liver homogenate.
По принцип изпитваните риби следва да бъдат отстранявани в следния ред: контрола, контрола на разтворител (където е приложимо), най-ниска концентрация, средна концентрация, най-висока концентрация и положителна контрола.
Cool the suspended liver homogenate on the ice rack until centrifugation.
В допълнение, всички мъжки животни следва да бъдат отстранени от дадена камера за изпитване преди да бъдат отстранени оставащите женски.
Change the pestle to the new one for each homogenate.
Полът на всяка изпитвана риба се определя въз основа на външни вторични полови белези (напр. формата на аналната перка).
Homogenise all livers with homogenate buffer according to the procedure described above.
Изпитваната риба се поставя в контейнер за пренасяне и се пренася до работното място за изрязване на черния дроб.
Centrifugation of the suspended liver homogenate
За точност и за потвърждаване, че броят на рибите, които са отстранени от камерата за изпитване, и броят на рибите, останали в камерата за изпитване, са в съответствие с очакванията, се проверяват етикетите на камерата за изпитване и на контейнера за пренасяне.
Confirm the temperature of the refrigerated centrifuge chamber at ≤ 5 °C.
Ако полът не може да бъде определен по външния вид на рибата, от камерата за изпитване се отстраняват всички риби.
Insert the 1,5 ml microtubes containing the suspended liver homogenate in refrigerated centrifuge (adjust the balance if necessary).