natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Правилното извършване на анестезията позволява на ползвателя да различава пулсирането на сърцето на зебровото данио.
An overview of recommended maintenance and test conditions is available in Appendix 2.
При извършването на сърдечната пункция буталото на спринцовката се държи под слаб натиск.
The following equipment is needed:
Обемът на кръвната проба, който може да бъде взет, варира между 20 и 40 микролитра.
Fish tanks made of chemically inert material (e.g. glass) and of a suitable capacity in relation to the recommended loading (see “Maintenance of brood fish”, paragraph 14);
След сърдечната пункция сместа от кръвта и буфера следва да бъде поставена в епруветката за изпитване.
Inverted microscope and/or binocular with a capacity of at least 80-fold magnification.
Плазмата се отделя от кръвта чрез центрофугиране (20 мин.; 5000 g) и следва да се съхранява при –80 °C докато бъде необходима за анализ.
If the room used for recording observations cannot be adjusted to 26 ± 1 °C, a temperature-controlled cross movement stage or other methods to maintain temperature are necessary;
Процедура 3С:
Test chambers; e.g., standard 24-well plates with a depth of approx.
СОП: Зеброво данио, хомогенизиране на главата и опашката
20 mm. (see “Test chambers”, paragraph 11);
Рибите се подлагат на анестезия и евтаназия в съответствие с описанието на изпитването.
e.g., self-adhesive foil to cover the 24-well plates;
Главата и опашката се изрязват от рибата в съответствие с фигура 1.
Incubator or air-conditioned room with controlled temperature, allowing to maintain 26 ± 1 °C in wells (or test chambers);
Важно: Всички инструменти за дисекция и плоскостта за разрязване трябва да се промият и почистят по подходящ начин (например с 96 % етанол) между обработването на всяка отделна риба, за да се предотврати „замърсяване с вителогенин“ от женски или индуцирани мъжки.
Oxygen meter;
Срез зад гръбна перка
Equipment for determination of hardness of water and conductivity;
За гонадна хистология
Spawn trap: instrument trays of glass, stainless steel or other inert materials; wire mesh (grid size 2 ± 0,5 mm) of stainless steel or other inert material to protect the eggs once laid; spawning substrate (e.g. plant imitates of inert material) (TM C.48, Appendix 4a (23));
За анализ на VTG
Pipettes with widened openings to collect eggs;
За анализ на VGT
Glass vessels to prepare different test concentrations and dilution water (beakers, graduated flasks, graduated cylinders and graduated pipettes) or to collect zebrafish eggs (e.g. beakers, crystallisation dishes);
Теглото на обединените глава и опашка от всяка риба се измерва с точност до един mg.
If alternative exposure systems, such as flow-through (24) or passive dosing (25) are used for the conduct of the test, appropriate facilities and equipment are needed.
След като се претеглят, частите се поставят в подходящи епруветки (напр.
Glass or polystyrene test chambers should be used (e.g. 24-well plates with a 2,5-5 ml filling capacity per well).
1,5 ml епендорфова епруветка) и се замразяват при –80 °С до хомогенизирането, или направо се хомогенизират върху лед с два пластмасови пестика.
In case adsorption to polystyrene is suspected (e.g., for non-polar, planar substances with high KOW), inert materials (glass) should be used to reduce losses due to adsorption (26).
(Могат да се използват други методи, ако те се извършват върху лед и резултатът е хомогенна маса).
Test chambers should be randomly positioned in the incubator.
Важно: Епруветките следва да бъдат номерирани по подходящ начин, така че главата и опашката от рибата да могат да бъдат свързани с частта от тялото, останала след изрязването им и използвана за хистология на гонадите.
Water and test conditions
Когато се достигне до хомогенна маса, се добавя леденостуден буфер за хомогенизиране [1] в количество, равно на 4 пъти теглото на тъканта.
Dilution of the maintenance water is recommended to achieve hardness levels typical of a wide variety of surface waters.
Продължава се работата с пестиците, докато сместа стане хомогенна.
Dilution water should be prepared from reconstituted water (27).
Важна забележка: За всяка риба се използват нови пестици.
The resulting degree of hardness should be equivalent to 100-300 mg/l CaCO3 in order to prevent excessive precipitation of calcium carbonate.
Пробите се поставят върху лед до центрофугирането при 4 °C на 50000 g за 30 min.
Other well-characterised surface or well water may be used.
Използва се пипета за поставяне на порции от 20 μl супернатант в поне две епруветки, чрез потапяне на върха на пипетата под слоя мазнини на повърхността, и внимателно изсмукване на супернатанта, без фракции от мазнини или пелети.
The reconstituted water may be adapted to maintenance water of low hardness by dilution with deionised water up to a ratio of 1:5 to a minimum hardness of 30-35 mg/l CaCO3.
Епруветките се съхраняват при – 80 °C до момента на употребата.
The water is aerated to oxygen saturation prior to addition of the test chemical.
Буфер за хомогенизиране:(50 mM Tris-HCl pH 7,4; 1 % смес от инхибитори на протеаза (Sigma): 12 ml Tris-HCl pH 7,4 + 120 μl смес от инхибитори на протеаза.TRIS: TRIS-ULTRA PURE (ICN) напр. от Bie & Berntsen, Дания.Смес от инхибитори на протеаза: От Sigma (за тъкани от бозайници) Продуктов номер P 8340.БЕЛЕЖКА: Буферът за хомогенизирането следва да се използва на същия ден, в който е приготвен.
Temperature should be kept at 26 ± 1 °C, in the wells, throughout the test.
По време на употреба се поставя върху лед.
The pH should be in a range between pH 6,5 and 8,5, and not vary within this range by more than 1,5 units during the course of the test.
ПРОБИ С ВНЕСЕНА ДОБАВКА ВИТЕЛОГЕНИН И ЕТАЛОН, КОЙТО Е РЕФЕРЕНТЕН МЕЖДУ РАЗЛИЧНИ ИЗСЛЕДВАНИЯ
If the pH is not expected to remain in this range, then pH adjustment should be done prior to initiating the test.
Всеки ден, в който се извършват изследвания за VTG, се анализира проба с внесена добавка с използване на еталон, който е референтен между различни изследвания.
The pH adjustment should be made in such a way that the stock solution concentration is not changed to any significant extent and that no chemical reaction or precipitation of the test chemical is caused.
Вителогенинът, използван за получаването на еталона, референтен между различни изследвания, ще е от партида, различна от използваната за приготвяне на еталони за калибриране за извършваното изследване.
Use of hydrogen chloride (HCl) and sodium hydroxide (NaOH) to correct pH in the solutions containing the test chemical is recommended.
Пробата с внесена добавка се приготвя чрез добавяне на предварително известно количество от еталона, референтен между различни изследвания, в проба от плазма от контролен мъжки екземпляр.
Test solutions of the selected concentrations can be prepared, e.g. by dilution of a stock solution.
В пробата се внася добавка с цел постигане на концентрация на вителогенин между 10 и 100 пъти по-висока от очакваната концентрация на вителогенин в контролен мъжки екземпляр.
The stock solutions should preferably be prepared by simply mixing or agitating the test chemical in the dilution water by mechanical means (e.g. stirring and/or ultra-sonification).
Пробата от плазма от контролен мъжки екземпляр, в която се внася добавка, може да бъде от отделна риба, или може да бъде съставена от няколко риби.
If the test chemical is difficult to dissolve in water, procedures described in the OECD Guidance Document No. 23 for handling difficult substances and mixtures should be followed (28).
Подпроба от плазма от контролен мъжки екземпляр, в която не е внесена добавка, се анализира най-малко в две гнезда с повторения.
The use of solvents should be avoided, but may be required in some cases in order to produce a suitably concentrated stock solution.
Пробата с внесена добавка също се анализира най-малко в две гнезда с повторения.
Where a solvent is used to assist in stock solution preparation, its final concentration should not exceed 100 μl/l and should be the same in all test vessels.
Средното количество вителогенин в двете проби от плазма от контролен мъжки екземпляр, в които не е внесена добавка, се добавя към изчисленото количество вителогенин, внесено като добавка в пробите, за да се определи очаквана концентрация.
When a solvent is used, an additional solvent control is required.
Отношението на тази очаквана концентрация към измерената концентрация се протоколира заедно с резултатите от всеки набор от изследвания от този ден.
Maintenance of brood fish
БЛОКОВА СХЕМА ЗА СТАТИСТИЧЕСКИЯ АНАЛИЗ Трансформ. за стабилизация на дисперсията?
A breeding stock of unexposed, wild-type zebrafish with well-documented fertilisation rate of eggs is used for egg production.
Step-down Jonckheere test
Fish should be free of macroscopically discernible symptoms of infection and disease and should not have undergone any pharmaceutical (acute or prophylactic) treatment for 2 months before spawning.
ANOVA с вложен дизайн не е нормално
Breeding fish are maintained in aquaria with a recommended loading capacity of 1 l water per fish and a fixed 12 - 16 hour photoperiod (29)(30)(31)(32)(33).
Средни от повторения нормално разпределени
Optimal filtering rates should be adjusted; excess filtering rates causing heavy perturbation of the water should be avoided.
Тест на Дън за средни от повторения
For feeding conditions, see Appendix 2.
Тест на Тамхане-Дънет за ANOVA с вложен дизйн
Surplus feeding should be avoided, and water quality and cleanness of the aquaria should be monitored regularly and be reset to the initial state, if necessary.
Тест на Дънет за ANOVA с вложен дизайн
Proficiency Testing
Тест на Тамхане-Дънет
As a reference chemical, 3,4-dichloroaniline (used in the validation studies (1)(2)), should be tested in a full concentration-response range to check the sensitivity of the fish strain used, preferably twice a year.
>=4 повторения на концентрация
For any laboratory initially establishing this assay, the reference chemical should be used.
<=3 повторения на концентрация
A laboratory can use this chemical to demonstrate their technical competence in performing the assay prior to submitting data for regulatory purposes.
Трансформация за стабилизация на дисперсията?
Egg production
Средни от повторения не са нормални или не са хомогенни
Zebrafish eggs may be produced via spawning groups (in individual spawning tanks) or via mass spawning (in the maintenance tanks).
Средни от повторения нормални и хомогенни
In the case of spawning groups, males and females (e.g., at a ratio of 2:1) in a breeding group are placed in spawning tanks a few hours before the onset of darkness on the day prior to the test.
Средни от повторения не са нормално разпределени
Since spawning groups of zebrafish may occasionally fail to spawn, the parallel use of at least three spawning tanks is recommended.
Stept-down Jonckheere or Williams' test
To avoid genetic bias, eggs are collected from a minimum of three breeding groups, mixed and randomly selected.
Нормализираща трансформация?
For the collection of eggs, spawn traps are placed into the spawning tanks or maintenance tanks before the onset of darkness on the day prior to the test or before the onset of light on the day of the test.
>=4 reps per conc <=3 reps per conc
To prevent predation of eggs by adult zebrafish, the spawn traps are covered with inert wire mesh of appropriate mesh size (approx.
Тест на Дън или на Ман-Уитни
2 ± 0,5 mm).
Тест на Дън
If considered necessary, artificial plants made of inert material (e.g., plastic or glass) can be fixed to the mesh as spawning stimulus (3)(4)(5)(23)(35).
Нормализираща трансформация?
Weathered plastic materials which do not leach (e.g., phthalates) should be used.
Не Да Да Не
Mating, spawning and fertilisation take place within 30 min after the onset of light and the spawn traps with the collected eggs can be carefully removed.
Нееднакви дисперсии Тест на Дънет
Rinsing eggs with reconstituted water after collection from spawning traps is recommended.
Еднакви дисперсии
Egg differentiation
Трендов тест със стъпка назад за средни от повторения
At 26 °C, fertilised eggs undergo the first cleavage after about 15 min and the consecutive synchronous cleavages form 4, 8, 16 and 32 cell blastomers (see Appendix 3)(35).
Не е монотонна
At these stages, fertilised eggs can be clearly identified by the development of a blastula.
Монотонна
Twenty embryos per concentration (one embryo per well) are exposed to the test chemical.
Определяне дали доза-отклик е монотонна
Exposure should be such that ± 20 % of the nominal chemical concentration are maintained throughout the test.
В.49 Изпитване за остра токсичност при рибни ембриони (ТРЕ)
If this is not possible in a static system, a manageable semi-static renewal interval should be applied (e.g. renewal every 24 hrs).
Настоящият метод за изпитване е еквивалентен на насоките за изпитване на ОИСР (TG) 236 (2013 г.).
In these cases exposure concentrations need to be verified as a minimum in the highest and lowest test concentrations at the beginning and the end of each exposure interval (see paragraph 36).
Той описва изпитване за остра токсичност при рибни ембриони (ТРЕ) със зеброво данио (Danio rerio).
If an exposure concentration of ± 20 % of the nominal concentrations cannot be maintained, all concentrations need to be measured at the beginning and the end of each exposure interval (see paragraph 36).
Това изпитване е предназначено за определяне на остра токсичност на химикали върху стадиите на развитие на рибните ембриони.
Upon renewal, care should be taken that embryos remain covered by a small amount of old test solutions to avoid drying.
Изпитването за остра токсичност при рибни ембриони се основава на проучвания и действия за валидиране, извършени по отношение на зеброво данио (1)(2)(3)(4)(5)(6)(7)(8)(9)(10)(11)(12)(13)(14).
The test design can be adapted to meet the testing requirements of specific substances (e.g,. flow-through (24) or passive dosing systems (25) for easily degradable or highly adsorptive substances (29), or others for volatile substances (36)(37)).
Изпитването за остра токсичност при рибни ембриони е успешно прилагано за широк спектър от химикали, проявяващи различни начини на действие, разтворимост, летливост и хидрофобност (прегледани в (15) и (16).
In any case, care should be taken to minimise any stress to the embryos.
Новооплодените хайверни зърна на зеброво данио са изложени на изпитвания химикал за период от 96 часа.
Test chambers should be conditioned at least for 24 hrs with the test solutions prior to test initiation.
На всеки 24 часа до четири апикални наблюдения се записват като показатели за смъртност (6): i) коагулация на оплодените хайверни зърна; ii) отсъствие на образуване на сомити; iii) отсъствие на отделяне на опашката от жълтъчната торбичка; и iv) отсъствие на сърдечна дейност.
Test conditions are summarised in Appendix 2.
В края на периода на експозиция острата токсичност се определя въз основа на положителен резултат при всяко от четирите записани апикални наблюдения и се изчислява LC50.
Normally, five concentrations of the test chemical spaced by a constant factor not exceeding 2,2 are required to meet statistical requirements.
Полезна информация относно специфичните за веществото свойства включват структурната формула, молекулното тегло, чистотата, стабилността във вода и на светлина, pKa и Kow, разтворимостта във вода и парното налягане, както и резултатите от изпитването за пълна биоразградимост (МИ В.4 (17) или МИ В.29 (18)).
Justification should be provided, if fewer than five concentrations are used.
Разтворимостта и парното налягане може да се използват за изчисляване на константата по закона на Хенри, която ще покаже дали се очакват загуби на изпитвания химикал поради изпарение.
The highest concentration tested should preferably result in 100 % lethality, and the lowest concentration tested should preferably give no observable effect, as defined in paragraph 28.
Следва да е на разположение и надежден метод за анализ за характеризиране на веществото в изпитвания разтвор, с известна и протоколирана точност и граница на откриване.
A range-finding test before the definitive test allows selection of the appropriate concentration range.
Ако методът за изпитване се използва за изпитване на смес, нейният състав следва да бъде характеризиран, доколкото е възможно, напр. чрез химичната идентичност на нейните съставки, техния количествен състав и специфичните свойства на нейните съставки (вж. точка 4).
The range-finding is typically performed using ten embryos per concentration.
Що се отнася до вещества, които могат да бъдат активирани чрез метаболизъм, има доказателства, че ембрионите на зеброво данио действително имат капацитет за биотрансформация (19) (20) (21) (22).
The following instructions refer to performing the test in 24-well plates.
Капацитетът за метаболизиране на рибните ембриони обаче невинаги е подобен на този на ювенилните или полово зрелите екземпляри.
If different test chambers (e.g. small Petri dishes) are used or more concentrations are tested, instructions have to be adjusted accordingly.
Например метаболитният прекурсор на токсични вещества алиловият алкохол (9) е пропуснат в изпитването за остра токсичност при рибни ембриони.
Details and visual instructions for allocation of concentrations across 24-well plates are available in paragraph 27 and Appendix 4, Figure 1.
Ето защо, ако има някакви признаци, че метаболити или други продукти на трансформацията от значение могат да бъдат по-токсични от базовото съединение, също се препоръчва да се извърши изпитването с тези метаболити/продукти на трансформация, както и да се използват тези резултати, когато се правят заключения относно токсичността на изпитвания химикал, или алтернативно да се извърши друго изпитване, при което се отделя допълнително внимание на метаболизма.
Dilution water controls are required both as negative control and as internal plate controls.
За вещества с молекулно тегло ≥ 3kDa, такива с много обемиста молекулярна структура, както и вещества, които причиняват забавяне на излюпването, което може да възпрепятства или намали експозицията след излюпването, не се очаква ембрионите да са чувствителни поради ограничената бионаличност на веществото и може да са по-подходящи други изпитвания за токсичност.
If more than 1 dead embryo is observed in the internal plate control, the plate is rejected, thus reducing the number of concentrations used to derive the LC50.
За да са приемливи резултатите от изпитването, се прилагат следните критерии:
If an entire plate is rejected the ability to evaluate and discern observed effects may become more difficult, especially if the rejected plate is the solvent control plate or a plate in which treated embryos are also affected.
Общият процент на оплождане на всичкия събран хайвер следва да бъде ≥ 70 % в изпитваната партида.
In the first case the test must be repeated.
Температурата на водата следва да се поддържа на 26 ± 1 °C в камерите за изпитване по всяко време по време на изпитването.
In the second one the loss of an entire treatment group(s) due to internal control mortality may limit the ability to evaluate effects and determine LC50 values.
Общата преживяемост на ембрионите в отрицателната контрола (контрола на вода за разреждане) и, когато е приложимо, в контролата на разтворителя следва да бъде ≥ 90 % до края на експозицията от 96 часа.
A positive control at a fixed concentration of 4 mg/l 3,4-dichloroaniline is performed with each egg batch used for testing.
Експозицията на положителната контрола (например 4,0 mg/l 3,4-дихлороанилин за зеброво данио) следва да доведе до минимална смъртност от 30 % в края на експозицията от 96 часа.
In case a solvent is used, an additional group of 20 embryos is exposed to the solvent on a separate 24-well plate, thus serving as a solvent control.
Скоростта на излюпване в отрицателната контрола (и контролата на разтворителя, ако е приложимо) следва да е ≥80 % в края на 96-часовата експозиция.
To consider the test acceptable, the solvent should be demonstrated to have no significant effects on time to hatch, survival, nor produce any other adverse effects on the embryos (cf. paragraph 8c).
В края на 96-часовата експозиция концентрацията на разтворения кислород в отрицателната контрола и най-високата изпитвана концентрация следва да бъде ≥80 % от стойността на насищане.
Start of exposure and duration of test
Преглед на препоръчителните условия на поддържане и изпитване е наличен в допълнение 2.
The test is initiated as soon as possible after fertilisation of the eggs and terminated after 96 hrs of exposure.
Нужно е следното оборудване:
The embryos should be immersed in the test solutions before cleavage of the blastodisc commences, or, at latest, by the 16 cell-stage.
съдове за рибите, направени от химични инертни материали (напр. стъкло) и с подходящ капацитет по отношение на препоръчителната гъстота на зареждане (вж. „Поддържане на риби за размножаване“, точка 14);
To start exposure with minimum delay, at least twice the number of eggs needed per treatment group are randomly selected and transferred into the respective concentrations and controls (e.g. in 100 ml crystallisation dishes; eggs should be fully covered) not later than 90 minutes post fertilisation.
инвертен и/или бинокулярен микроскоп с капацитет за поне 80-кратно увеличение.
Viable fertilised eggs should be separated from unfertilised eggs and be transferred to 24-well plates pre-conditioned for 24 hrs and refilled with 2 ml/well freshly prepared test solutions within 180 minutes post fertilisation.
Ако температурата в стаята, която се използва за запис на наблюденията, не може да се регулира на 26±1 °C, температурата трябва да се поддържа с помощта на напречно задвижвана платформа с контролирана температура или други методи;
By means of stereomicroscopy (preferably ≥30-fold magnification), fertilised eggs undergoing cleavage and showing no obvious irregularities during cleavage (e.g. asymmetry, vesicle formation) or injuries of the chorion are selected.
камери за изпитване; например стандартни 24-гнездни плаки с дълбочина от около 20 mm. (вж. „Камери за изпитване“, точка 11);
For egg collection and separation, see Appendix 3, Fig. 1 and 3 and Appendix 4, Fig.
например самозалепващо фолио за покриване на 24-гнездните плаки;
2.
инкубатор или климатизирано помещение с контролирана температура, позволяващи да се поддържа температура от 26 ± 1 °C в гнездата (или камерите за изпитване);
Distribution of eggs over the 24-well plates
кислородомер;
Eggs are distributed to well plates in the following numbers (see also Appendix 4, Fig.
уред за определяне твърдостта на водата и проводимостта;
1)
вана за хвърляне на хайвера: вани от стъкло, неръждаема стомана или други инертни материали; телена мрежа (размер на решетката 2 ± 0,5 mm) от неръждаема стомана или друг инертен материал, за защита на вече поставените хайверни зърна; субстрат за хвърляне на хайвер (например изкуствени растения от инертен материал) (МИ В.48, допълнение 4а, (23));
20 eggs on one plate for each test concentration;
пипети с разширени отвори за събиране на хайверните зърна;
20 eggs as solvent control on one plate (if necessary);
стъклени съдове за приготвяне на различни изпитвани концентрации и на водата за разреждане (стъкленици, градуирани колби, градуирани цилиндри и градуирани пипети) или за събиране на хайвера на зеброво данио (например стъкленици, блюда кристализатори);
20 eggs as positive control on one plate;
ако за провеждане на изпитването се използват алтернативни системи на експозиция, като проточно (24) или пасивно дозиране (25), са необходими подходящи съоръжения и оборудване.
4 eggs in dilution water as internal plate control on each of the above plates;
Следва да се използват камери за изпитване от стъкло или полистирен (например 24-гнездни плаки с капацитет на запълване от 2,5—5 ml на гнездо).
24 eggs in dilution water as negative control on one plate.
В случай на съмнения за адсорбция върху полистирен (например при неполярни планарни вещества с високо KOW), за да се намалят загубите, дължащи се на адсорбцията (26), следва да се използват инертни материали (стъкло).
Apical observations performed on each tested embryo include: coagulation of embryos, lack of somite formation, non-detachment of the tail, and lack of heartbeat (Table 1).