natgillin/translations-raw huggingface dataset:
При приключване на 21-дневния период на експозиция като крайни точки се измерват два биомаркера в мъжки и женски индивиди, в качеството им на показатели за ендокринна активност на изпитвания химикал; тези крайни точки са вителогенин и вторични полови белези.
The stock solution should preferably be prepared by simply mixing or agitating the test chemical in dilution water by using mechanical means (e.g. stirring or ultrasonication).
Вителогенин се измерва в Pimephales promelas, японска оризия и зеброво данио, докато вторични полови белези се измерват в Pimephales promelas и японска оризия.
Saturation columns (solubility columns) can be used for achieving a suitable concentrated stock solution.
Освен това плодовитостта в количествено отношение се наблюдава ежедневно по време на изпитването.
However, in case a solvent is necessary, a solvent control should be run in parallel, at the same solvent concentration as the chemical treatments.
Гонадите също се запазват и хистопатологията може да бъде оценена за определяне на репродуктивното здраве на изпитваните животни и за увеличаване на тежестта на доказателствата от други крайни точки.
For difficult to test chemicals, a solvent may be technically the best solution; the OECD guidance document on aquatic toxicity testing of difficult substances and mixtures should be consulted (23).
Това биологично изследване служи като скринингово изследване in vivo на репродукцията и неговото прилагане следва да се разглежда в контекста на „Концептуалната рамка на ОИСР за изпитване и оценка на химикали, нарушаващи функциите на ендокринната система“ (30).
The choice of solvent will be determined by the chemical properties of the substance or mixture.
В тази концептуална рамка краткосрочното изследване на размножаването при риби е предложено в равнище 3 като изследване in vivo, предоставящо данни относно избран(и) ендокринен(ни) механизъм(и)/път(ища).
The OECD guidance document recommends a maximum of 100 μl/l, which should be observed.
Вителогенинът (VTG) обикновено се произвежда от черния дроб на женски яйценосни гръбначни животни в отговор на циркулиращия ендогенен естроген.
However a recent review (24) highlighted additional concerns when using solvents for endocrine activity testing.
Той е прекурсор на белтъците в яйчния жълтък и след образуването си в черния дроб преминава в кръвообращението, откъдето стига до яйчника и там се модифицира в образуващия се хайвер.
Therefore it is recommended that the solvent concentration, if necessary, is minimised wherever technically feasible (dependent on the physical-chemical properties of the test chemical).
Вителогенинът е почти неоткриваем в плазмата на незрели женски и мъжки риби поради липса на достатъчно циркулиращ естроген; черният дроб обаче може да синтезира и секретира VTG в отговор на външно естрогенно стимулиране.
A flow-through test system will be used.
Измерването на VTG служи за откриване на химикали с различни естрогенни механизми на действие.
Such a system continually dispenses and dilutes a stock solution of the test chemical (e.g. metering pump, proportional diluter, saturator system) in order to deliver a series of concentrations to the test chambers.
Откриването на химикали с естрогенно действие е възможно чрез измерване на индуцирането на VTG в мъжки риби, и е много добре документирано в научната литература, преминала през партньорска проверка (напр.
The flow rates of stock solutions and dilution water should be checked at intervals, preferably daily, during the test and should not vary by more than 10 % throughout the test.
(7)).
Care should be taken to avoid the use of low-grade plastic tubing or other materials that may contain biologically active chemicals.
Индуцирането на VTG е доказано и след експозиция на андрогени, които могат да се ароматизират (8, 9).
When selecting the material for the flow-through system, possible adsorption of the test chemical to this material should be considered.
Намаляването на равнището на циркулиращ естроген в женските животни, например посредством инхибиране на ароматазата, превръщаща ендогенния андроген в природния естроген 17β-естрадиол, води до намаляване на нивото на VTG, което се използва за откриване на химикали, притежаващи свойства на инхибитори по отношение на ароматазата (10, 11).
Test fish should be selected from a laboratory population, preferably from a single stock, which has been acclimated for at least two weeks prior to the test under conditions of water quality and illumination similar to those used in the test.
Биологичната значимост на отговора с VTG след естрогенно/ароматазно инхибиране е установена и е широко документирана.
It is important that the loading rate and stocking density (for definitions, see Appendix 1) be appropriate for the test species used (see Appendix 2).
Възможно е обаче образуването на VTG в женски животни да е също така повлияно от обща токсичност и начини на токсично действие, различни от ендокринните, напр. хепатотоксичност.
mortalities of greater than 10 % of population in seven days: reject the entire batch;
Успешно са разработени и стандартизирани за рутинна употреба няколко метода за измерване.
mortalities of between 5 % and 10 % of population: acclimation for seven additional days; if more than 5 % mortality during second seven days, reject the entire batch;
Такъв е случаят със специфичните за отделните видове ензимно-свързани имуносорбентни анализи (ELISA), използващи имунохимия за количествено определяне на получавания VTG в малки проби от кръв или черен дроб, взети от отделните риби (12, 13, 14, 15, 16, 17, 18).
mortalities of less than 5 % of population in seven days: accept the batch.
Проби за измерване на VTG се вземат от кръв от Pimephales promelas, кръв или хомогенат глава/опашка от зеброво данио и черен дроб от японска оризия.
Fish should not receive treatment for disease during the acclimation period, in the pre-exposure period, or during the exposure period.
При японската оризия е налице добра корелация между VTG, измерен от кръв и от черен дроб (19).
Pre-exposure and selection of fish
В допълнение 6 са дадени препоръчителните процедури за събирането на проби за анализ на VTG.
The one to two-week pre-exposure period is recommended with animals placed in vessels similar to the actual test.
Комплектите за измерване на VTG са широко разпространени; такива комплекти следва да се основават на валидиран специфичен за отделните видове ELISA метод.
Fish should be fed ad libitum throughout the holding period and during the exposure phase.
Вторичните полови белези в мъжки екземпляри от някои видове риби са видими външно, количествено определяеми и чувствителни към нивата на циркулиращите ендогенни андрогени; такъв е случаят с Pimephales promelas и японската оризия, но не и със зебровото данио, което не притежава количествено определяеми вторични полови белези.
The exposure phase is started with sexually dimorphic adult fish from a laboratory supply of reproductively mature animals (e.g. with clear secondary sexual characteristics visible as far as fathead minnow and medaka are concerned), and actively spawning.
Женските запазват способността си за развиване на мъжки вторични полови белези, когато са експонирани на андрогенни химикали във вода.
For general guidance only (and not to be considered in isolation from observing the actual reproductive status of a given batch of fish), fathead minnows should be approximately 20 (± 2) weeks of age, assuming they have been cultured at 25 ± 2 °C throughout their lifespan.
В научната литература са на разположение няколко проучвания, документиращи този тип отговор в Pimephales promelas (20) и японската оризия (21).
Japanese medaka should be approximately 16 (± 2) weeks of age, assuming they have been cultured at 25 ± 2 °C throughout their lifespan.
Намаляването при вторични полови белези у мъжките индивиди следва да се тълкува внимателно поради неголямата статистическата мощност, и следва да се основава на експертна оценка и на тежестта на доказателствата.
Zebrafish should be approximately 16 (± 2) weeks of age, assuming they have been cultured at 26 ± 2 °C throughout their lifespan.
Съществуват ограничения за използването на зебровото данио в настоящото изследване поради липсата на количествено определяеми вторични полови белези, реагиращи на андрогенно активни химикали.
Egg production should be assessed daily during the pre-exposure phase.
При Pimephales promelas основният показател за външна андрогенна експозиция е броят на размножителните туберкули, разположени по муцуната на женския индивид.
It is recommended that spawning be observed in all replicate tanks prior to inclusion in the exposure phase of the assay.
При оризията броят на папиларните израстъци представлява основният маркер на екзогенна експозиция на андрогенни химикали при женските риби.
Quantitative guidance on desirable daily egg production cannot be provided at this stage, but it is relatively common to observe average spawns of > 10 eggs/female/day for each species.
Допълнение 5А и допълнение 5Б посочват препоръчваните процедури, които трябва да се спазват при оценката на половите белези съответно при Pimephales promelas и оризията.
A randomised block design according to egg production output should be used to allocate replicates to the various experimental levels to ensure balanced distribution of replicates.
невното изследване на риби включва количествена оценка на получаването на хайверни зърна и запазване на гонадите за незадължително хистопатологично изследване.
TEST DESIGN
Някои регулаторни органи могат да изискват тази допълнителна крайна точка за по-пълна оценка на репродуктивното здраве на изпитваните животни, или в случаи, когато при VTG и вторичните полови характеристики не е имало отклик на експозицията на химикала.
Three concentrations of the test chemical, one control (water) and, if needed, one solvent control are used.
Въпреки че някои крайни точки могат да са с висока диагностична стойност (напр. индуциране на VTG в мъжки и образуване на туберкули в женски), не всички крайни точки (напр. плодовитост и гонадна хистопатология) в изследването са предназначени за недвусмислено идентифициране на специфични клетъчни механизми на действие.
The data may be analysed in order to determine statistically significant differences between treatment and control responses.
Обратно, наборът от крайни точки, взети заедно, позволява да се правят изводи по отношение на възможни ендокринни смущения и по този начин да се предоставят насоки за по-нататъшно изпитване.
These analyses will inform whether further longer term testing for adverse effects (namely, survival, development, growth and reproduction) is required for the chemical, rather than for use in risk assessment (25).
Въпреки че не е ендокринно специфична, плодовитостта, поради нейната доказана чувствителност към известните ендокринно активни химикали (5), е важна крайна точка за включване, тъй като когато тя и други крайни точки не са повлияни, това дава по-голяма увереност, че дадено съеднинение е малко вероятно да е ендокринно активно.
For zebrafish, on day 21 of the experiment, males and females from each treatment level (5 males and 5 females in each of the two replicates) and from the control(s) are sampled for the measurement of vitellogenin.
Въпреки това, когато е засегната, плодовитостта ще допринесе значително за изводите по отношение на тежестта на доказателствата.
For medaka, on day 21 of the experiment, males and females from each treatment level (3 males and 3 females in each of the four replicates) and from the control(s) are sampled for the measurement of vitellogenin and secondary sex characteristics.
Насоки за тълкуване на данните и приемането на резултатите от изпитването са предоставени по-нататък в настоящия метод за изпитване.
For fathead minnow, on day 21 of exposure, males and females (2 males and 4 females in each of the four replicates) and from the control(s) are sampled for the measurement of vitellogenin and secondary sex characteristics.
Определенията, използвани за този метод за изпитване, са дадени в допълнение 1.
Quantitative assessment of fecundity is required, and gonadal tissues should be fixed in whole or dissected for potential histopathological evaluation, if required.
В рамките на изследването мъжки и женски риби, способни на размножаване, се експонират заедно в съдове за изпитване.
Selection of test concentrations
Техният статус на полово зрели и способни на размножаване индивиди позволява ясното разграничаване на половете и следователно дава възможност за свързан с пола анализ на всяка крайна точка, и гарантира тяхната чувствителност към външни химикали.
For the purposes of this test, the highest test concentration should be set by the maximum tolerated concentration (MTC) determined from a range finder or from other toxicity data, or 10 mg/l, or the maximum solubility in water, whichever is lowest.
При завършване на изпитването полът се потвърждава с макроскопско изследване на гонадите след отваряне на корема с ножици.
The MTC is defined as the highest test concentration of the chemical which results in less than 10 % mortality.
Преглед на съответните условия на биологичното изследване е даден в допълнение 2.
Using this approach assumes that there are existing empirical acute toxicity data or other toxicity data from which the MTC can be estimated.
Изследването обикновено започва с риби, пробовзети от популация, която е в състояние на хвърляне на хайвер; застаряващи индивиди не следва да се използват.
Estimating the MTC can be inexact and typically requires some professional judgment.
Указания относно възрастта на рибите и репродуктивния им статус са дадени в раздела за подбора на риби.
Three test concentrations, spaced by a constant factor not exceeding 10, and a dilution-water control (and solvent control if necessary) are required.
Изпитването се провежда, като се използват три концентрации на експозиция на химикал, както и контрола на вода и, ако е необходимо, контрола на разтворител.
A range of spacing factors between 3,2 and 10 is recommended.
За зебровото данио се използват два съда или повторения на третиране (всеки съд съдържа 5 мъжки и 5 женски).
Selection and weighing of test fish
За Pimephales promelas се използват четири съда или повторения на третиране (всеки съд съдържа 2 мъжки и 4 женски).
It is important to minimise variation in weight of the fish at the beginning of the assay.
Това е така с цел приспособяване към териториалното поведение на мъжките при Pimephales promelas, като се поддържа достатъчна мощност на изследването.
Suitable size ranges for the different species recommended for use in this test are given in Appendix 2.
За оризията се използват четири съда или повторения на третиране (всеки съд съдържа 3 мъжки и 3 женски).
For the whole batch of fish used in the test, the range in individual weights for male and female fish at the start of the test should be kept, if possible, within ± 20 % of the arithmetic mean weight of the same sex.
Експозицията се провежда в продължение на 21 дни и вземане на проби от риби се извършва на 21-ия ден от експозицията.
It is recommended to weigh a subsample of the fish stock before the test in order to estimate the mean weight.
Плодовитостта в количествено отношение се наблюдава ежедневно.
The test duration is 21 days, following a pre-exposure period.
При вземането на проби на 21-ия ден от експозицията животните се умъртвяват по хуманен начин.
The recommended pre-exposure period is one to two weeks.
Вторичните полови белези се измерват при Pimephales promelas и японската оризия (виж допълнение 5А и допълнение 5Б); кръвни проби за определяне на VTG се вземат от зебровото данио и Pimephales promelas, като алтернатива хомогенат глава/опашка може да се вземе от зебровото данио за определяне на VTG (допълнение 6); черен дроб за анализа на VTG се взема от оризията (допълнение 6).
Fish should be fed ad libitum with an appropriate food (Appendix 2) at a sufficient rate to maintain body condition.
Гонадите се фиксират или цели, или след дисекция, за евентуална хистопатологична оценка (22).
Care should be taken to avoid microbial growth and water turbidity.
КРИТЕРИИ ЗА ПРИЕМАНЕ НА ИЗПИТВАНЕТО
As a general guidance, the daily ration may be divided into two or three equal portions for multiple feeds per day, separated by at least three hours between each feed.
За да са приемливи резултатите от изпитването, се прилагат следните условия:
A single larger ration is acceptable particularly for weekends.
смъртността в контролите на вода (или на разтворител) не трябва да надвишава 10 % в края на периода на експозиция;
Food should be withheld from the fish for 12 hours prior to sampling/necropsy.
концентрацията на разтворен кислород трябва да бъде най-малко 60 от стойността на насищане при равновесие с атмосферния въздух (ASV) по време на периода на експозиция;
Fish food should be evaluated for the presence of contaminants such as organochlorine pesticides, polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs), polychlorinated biphenyls (PCBs).
температурата на водата трябва да се различава с не повече от ± 1,5 °C между съдовете за изпитване по всяко време на периода на експозиция, и се поддържа в диапазон от 2 °C в рамките на температурните диапазони, посочени за изпитваните видове (допълнение 2).
Food with an elevated level of phytoestrogens that would compromise the response of the assay to known oestrogen agonist (e.g. 17β- estradiol) should be avoided.
следва да бъдат на разположение доказателства, че концентрацията на изпитвания химикал в разтвора е била задоволително поддържана в рамките на ± 20 % от усреднените измерени стойности;
Uneaten food and faecal material should be removed from the test vessels at least twice weekly, e.g. by carefully cleaning the bottom of each tank using a siphon.
доказателства, че рибата активно хвърля хайвер във всички повторения преди да започне експозицията на химикала, и в повторенията с контроли по време на изпитването.
Prior to initiation of the exposure period, proper function of the chemical delivery system should be ensured.
Обикновено лабораторно оборудване и специално следното:
All analytical methods needed should be established, including sufficient knowledge on the chemical stability in the test system.
а. устройства за измерване на съдържанието на кислород и рН-метри;
During the test, the concentrations of the test chemical are determined at regular intervals, as follows: the flow rates of diluent and toxicant stock solution should be checked preferably daily but as a minimum twice per week, and should not vary by more than 10 % throughout the test.
б. оборудване за определяне твърдост и алкалност на водата;
It is recommended that the actual test chemical concentrations be measured in all vessels at the start of the test and at weekly intervals thereafter.
в. подходяща апаратура за контрол на температурата и за предпочитане продължителен мониторинг;
It is recommended that results be based on measured concentrations.
г. съдове, направени от химически инертни материали и с подходящ капацитет по отношение на препоръчителната гъстота на зареждане и отглеждане (вж. допълнение 2);
However, if concentration of the test chemical in solution has been satisfactorily maintained within ±20 % of the nominal concentration throughout the test, then the results can either be based on nominal or measured values.
д. субстрат за хвърляне на хайвер за Pimephales promelas и зебровото данио, допълнение 4 съдържа необходимите подробности;
Samples may need to be filtered (e.g. using a 0,45 μm pore size) or centrifuged.
е. подходящи точни везни (т.е. точност до ± 0,5 mg).
If needed, then centrifugation is the recommended procedure.
Всяка вода, в която изпитваният вид показва съответните признаци за дългосрочно преживяване и растеж, може да се използва като вода за изпитването.
However, if the test material does not adsorb to filters, filtration may also be acceptable.
Стойността на рН на водата следва да е от 6,5 до 8,5, но по време на дадено изпитване трябва да е в диапазон ± 0,5 рН единици.
During the test, dissolved oxygen, temperature, and pH should be measured in all test vessels at least once per week.
За да се гарантира, че водата за разреждане няма да повлияе неправилно върху резултата от изпитването (например чрез образуване на комплекс с изпитвания химикал), пробите за анализ следва да се вземат на интервали.
Total hardness and alkalinity should be measured in the controls and one vessel at the highest concentration at least once per week.
Следва да се правят измервания за тежки метали (например Cu, Pb, Zn, Hg, Cd и Ni), основни аниони и катиони (например Ca2+, Mg2+, Na+, K+, Cl– и SO42–), пестициди (например общо органофосфорни и общо органохлорни пестициди), общ органичен въглерод и суспендирани частици, например на всеки три месеца, когато се знае, че водата за разреждане има относително постоянно качество.
A number of general (e.g. survival) and biological responses (e.g. VTG levels) are assessed over the course of the assay or at termination of the assay.
Ако е доказано, че качеството на водата е постоянно най-малко в продължение на една година, определянията могат да се правят по-рядко и могат да се увеличат интервалите (например на всеки шест месеца).
The daily quantitative monitoring of fecundity is required.
Някои от химичните характеристики на приемливата вода за разреждане са изброени в допълнение 3.
Measurement and evaluation of these endpoints and their utility are described below.
Изходният разтвор се приготвя за предпочитане чрез просто смесване и разбъркване на изпитвания химикал във водата за разреждане с помощта на механични средства (например разклащане или ултрасонификация).
Survival
За постигане на подходящо концентриран изходен разтвор могат да се използват колони за насищане (колони за разтворимост).
Fish should be examined daily during the test period and any mortality should be recorded and the dead fish removed as soon as possible.
Независимо от това, в случай че е необходим разтворител, успоредно следва да се проведе изпитване на контрола на разтворител, при същата концентрация на разтворител, като тази при третиранията с химикала.
Dead fish should not be replaced in either the control or treatment vessels.
За трудно разтворими изпитвани химикали е възможно разтворителят да бъде технически най-доброто решение; следва да се консултира Ръководството на ОИСР с насоки за изпитване за токсичност във водна среда на трудни вещества и смеси (23).
Sex of fish that die during the test should be determined by macroscopic evaluation of the gonads.
Изборът на разтворител се определя в зависимост от химичните свойства на веществото или сместа.
Behaviour and appearance
Ръководството на ОИСР препоръчва максимум от 100μl/l, което следва да се спазва.
Any abnormal behaviour (relative to controls) should be noted; this might include signs of general toxicity including hyperventilation, uncoordinated swimming, loss of equilibrium, and atypical quiescence or feeding.
Независимо от това неотдавнашен преглед (24) подчерта допълнителни проблеми при използването на разтворители за изпитване на ендокринна активност.
Additionally external abnormalities (such as haemorrhage, discoloration) should be noted.
Поради това се препоръчва концентрацията на разтворителя, ако е необходим, да бъде сведена до минимум, когато това е технически осъществимо (в зависимост от физичните и химичните свойства на изпитвания химикал).
Such signs of toxicity should be considered carefully during data interpretation since they may indicate concentrations at which biomarkers of endocrine activity are not reliable.
Използва се проточна система за изпитване.
Such behavioural observations may also provide useful qualitative information to inform potential future fish testing requirements.
Такава система постоянно подава и разрежда изходен разтвор на изпитвания химикал (например система с измерваща помпа, пропорционално разреждащо устройство, сатуратор), за да се подават серии от концентрации към камерите за изпитване.
For example, territorial aggressiveness in normal males or masculinised females has been observed in fathead minnows under androgenic exposure; in zebrafish, the characteristic mating and spawning behaviour after the dawn onset of light is reduced or hindered by oestrogenic or anti-androgenic exposure.