natgillin/translations-raw huggingface dataset:
По-дълго време за електрофореза (напр.
Many measures of cytotoxicty have been proposed and of these histopathological changes are considered a relevant measure of tissue toxicity.
30 или 40 минути, за да се постигне максимална чувствителност) обикновено води до по-силни положителни отклици с познати мутагени.
Observations such as inflammation, cell infiltration, apoptotic or necrotic changes have been associated with increases in DNA migration, however, as demonstrated by the JaCVAM validation trial (12) no definitive list of histopathological changes that are always associated with increased DNA migration is available.
Независимо от това, времената на електрофорезата могат също така да доведат до прекомерна миграция в контролните проби.
Changes in clinical chemistry measures (e.g. AST, ALT), can also provide useful information on tissue damage and additional indicators such as caspase activation, TUNEL stain, Annexin V stain, etc. may also be considered.
Във всеки опит напрежението следва да се поддържа постоянно, а варирането на другите параметри следва да е в тесен и определен обхват, например в изпитването на JaCVAM 0,7 V/cm при изходен ток от 300 mA.
However, there are limited published data where the latter have been used for in vivo studies and some may be less reliable than others.
Дълбочината на буфера следва да бъде коригирана, за да се получат необходимите условия, и следва да се поддържа по време на целия опит.
Hedgehogs (or clouds, ghost cells) are cells that exhibit a microscopic image consisting of a small or non-existent head, and large diffuse tails and are considered to be heavily damaged cells, although the etiology of the hedgehogs is uncertain (see Appendix 3).
Токът в началото и в края на електрофорезата следва да бъде записан.
Due to their appearance, % tail DNA measurements by image analysis are unreliable and therefore hedgehogs should be evaluated separately.
Оптималните условия трябва следователно да бъдат определени по време на първоначалното доказване на пригодност в съответната лаборатория по отношение на всяка проучвана тъкан.
The occurrence of hedgehogs should be noted and reported and any relevant increase thought to be due to the test chemical should be investigated and interpreted with care.
Стойността на температурата на разтвора за електрофореза по време на разплитането и на електрофорезата следва да се поддържа на ниско равнище, обикновено 2-10 °C (10).
Knowledge of the potential mode of action of the test chemicals may help with such considerations.
Температурата на разтвора за електрофореза в началото на разплитането, началото на електрофорезата и края на електрофорезата следва да се записва.
The animal is the experimental unit and therefore both individual animal data and summarized results should be presented in tabular form.
След приключването на електрофорезата предметните стъкла следва да се потопят/изплакнат в буфера за неутрализиране за най-малко 5 минути.
Due to the hierarchical nature of the data it is recommended that the median %tail DNA for each slide is determined and the mean of the median values is calculated for each animal (12).
Геловете могат да бъдат оцветявани и стойностите отчетени „в прясно състояние“ (напр. в рамките на 1-2 дни) или могат да бъдат дехидратирани за по-късно отчитане (напр. в рамките на 1-2 седмици след оцветяването) (56).
The mean of the individual animal means is then determined to give a group mean.
Независимо от това, условията следва да бъдат валидирани по време на доказването на пригодността и данните за предходни периоди следва да се получат и съхранят поотделно за всяко от тези условия.
All of these values should be included in the report.
В последния случай предметните стъкла трябва да бъдат дехидратирани чрез потапяне в чист етанол в продължение най-малко на 5 минути, да се оставят да се изсушат на въздух, след което да се съхранят при стайна температура или в контейнер в хладилник до отчитането.
Alternative approaches (see paragraph 53) may be used if scientifically and statistically justified.
Методи за измерване
Statistical analysis can be done using a variety of approaches (58) (59) (60) (61).
Кометите следва да бъдат количествено отчетени чрез система за изцяло автоматичен или полуавтоматичен анализ на изображения.
When selecting the statistical methods to be used, the need for transformation (e.g. log or square root) of the data and/or addition of a small number (e.g. 0,001) to all (even non-zero) values to mitigate the effects of zero cell values, should be considered as discussed in the above references.
Предметните стъкла се оцветяват с подходящ флуоресцентен оцветител, напр.
Details of analysis of treatment/sex interactions when both sexes are used, and subsequent analysis of data where either differences or no differences are found is given in Appendix 2.
SYBR Gold, Green I, пропидиев йодид или етидиев бромид и измерванията се извършват при подходящо увеличение (напр.
Data on toxicity and clinical signs should also be reported.
200x) с микроскоп, оборудван за епифлуоресценция и с подходящи детектори, или цифров (напр.
The concurrent negative control is considered acceptable for addition to the laboratory historical negative control database as described in paragraph 16
CCD) фотоапарат.
Concurrent positive controls (see paragraph 29) should induce responses that are compatible with those generated in the historical positive control database and produce a statistically significant increase compared with the concurrent negative control.
Клетките могат да бъдат класифицирани в три категории, както е описано в Атласа с изображения на комети (57), а именно такива, които могат да бъдат отчетени, такива, които не могат да бъдат отчетени и „фантомни“ (вж. точка 56 за допълнително обсъждане).
Adequate numbers of cells and doses have been analysed (paragraphs 52 and 36-38).
Само клетки, които могат да бъдат отчетени (ясно определени глава и опашка без влияние от съседни клетки) следва да бъдат отчитани за % ДНК в опашката, за да се избегнат артефакти.
The criteria for the selection of highest dose are consistent with those described in paragraph 36.
Не е необходимо да се протоколира честотата на клетките, които не могат да бъдат отчетени.
Providing that all acceptability criteria are fulfilled, a test chemical is considered to be clearly positive if:
Честотата на „фантомните“ клетки следва да се определя въз основа на визуално отчитане (тъй като липсата на ясно дефинирана глава ще означава, че те не могат да бъдат лесно открити чрез анализ на изображения) на поне 150 клетки от проба (вж. точка 56 за допълнително обсъждане), и да се документира отделно.
at least one of the test doses exhibits a statistically significant increase compared with the concurrent negative control,
Всички предметни стъкла за анализ, включително тези на положителните и отрицателните контроли, следва да се кодират независимо едно от друго и да се отчитат „сляпо“, така че отчитащият да не е запознат с условията на третирането.
any of the results are outside the distribution of the historical negative control data for a given species, vehicle, route, tissue, and number of administrations.
За всяка проба (на тъкан на животно) следва да бъдат анализирани най-малко 150 клетки (с изключение на фантомните — вж. точка 56).
When all of these criteria are met, the test chemical is then considered able to induce DNA strand breakage in the tissues studied in this test system.
Отчитането на 150 клетки на едно животно в най-малко 5 животни на дадена доза (по-малко в паралелна положителна контрола — вж. точка 29) предоставя достатъчна статистическа мощност в съответствие с анализа на Smith et al., 2008 (5).
If only one or two of these criteria are satisfied, see paragraph 62.
Ако се използват предметни стъкла, може да се извърши отчитане на 2 или 3 предметни стъкла за всяка проба, като се използват пет животни за група.
Providing that all acceptability criteria are fulfilled, a test chemical is considered clearly negative if:
Няколко области от предметното стъкло следва да бъдат наблюдавани при плътност, която гарантира, че няма припокриване на опашки.
there is no concentration-related increase when evaluated with an appropriate trend test.
Отчитането по ръбовете на предметните стъкла трябва да се избягва.
all results are inside the distribution of the historical negative control data for a given species, vehicle, route, tissue, and number of administrations.
Скъсванията във веригата на ДНК в кометното изследване могат да бъдат измерени чрез независими крайни точки като % ДНК в опашката, дължина на опашката и момент на опашката.
direct or indirect evidence supportive of exposure of, or toxicity to, the target tissue(s) has been demonstrated.
Всичките три измервания могат да се направят, ако се използва подходяща система със софтуер за анализ на изображения.
The test chemical is then considered unable to induce DNA strand breakage in the tissues studied in this test system.
Независимо от това % ДНК в опашката (известен също като % интензитет на опашката) се препоръчва за оценка и тълкуване на резултатите (12) (40) (41) (42), и се определя от интензитета на ДНК фрагмента в опашката, изразен като процент от общата стойност на интензитета за клетката (13).
In case the response is neither clearly negative nor clearly positive (i.e. not all the criteria listed in paragraphs 59 or 60 are met) and in order to assist in establishing the biological relevance of a result, the data should be evaluated by expert judgement and/or further investigations conducted, if scientifically justified.
Увреждане на тъканите и цитотоксичност
Scoring additional cells (where appropriate) or performing a repeat experiment possibly using optimised experimental conditions (e.g. dose spacing, other routes of administration, other sampling times or other tissues) could be useful.
Положителните резултати в кометния анализ може да не се дължат единствено на генотоксичност, а токсичността за прицелната тъкан може също така да доведе до увеличаване на ДНК миграцията (12) (41).
In rare cases, even after further investigations, the data set will preclude making a conclusion of positive or negative results, and will therefore be concluded as equivocal.
Обратно, при известни генотоксини често се наблюдава слаба или умерена цитотоксичност (12), което показва, че чрез кометното изследване само по себе си не е възможно да се разграничи миграцията на ДНК, предизвикана от генотоксичност, от тази, предизвикана от цитотоксичност.
To assess the biological relevance of a positive or equivocal result, information on cytotoxicity at the target tissue is required (see paragraphs 54-55).
Независимо от това, когато се наблюдава увеличение на миграцията на ДНК, се препоръчва проверка на един или повече показатели за цитотоксичност, тъй като това може да спомогне за тълкуването на резултатите.
Where positive or equivocal findings are observed solely in the presence of clear evidence of cytotoxicity, the study would be concluded as equivocal for genotoxicity unless there is enough information that is supportive of a definitive conclusion.
Увеличението на миграцията на ДНК при наличието на ясни доказателства за цитотоксичност следва да се тълкува предпазливо.
In cases of a negative study outcome where there are signs of toxicity at all doses tested, further study at non-toxic doses may be advisable.
Предложени са много измерители за цитотоксичността, от които хистопатологичните изменения се смятат за относим измерител на токсичността за тъканите.
source, lot number if available;
Наблюдения като възпалението, клетъчната инфилтрация, апоптичните или некротичните изменения се свързват с увеличаване на ДНК миграцията, но независимо от това, както се вижда от изпитването за валидиране на JaCVAM (12), няма окончателен списък на хистопатологичните изменения, които да са винаги свързани с увеличение на ДНК миграцията.
stability of the test chemical, limit date for use, or date for re-analysis if known.
Измененията в измерители от областта на клиничната химия (напр.
Solvent/vehicle:
ALT, AST) могат също така да предоставят полезна информация за увреждането на тъканите и допълнителни показатели, като например активиране на каспазата, оцветяване за TUNEL, оцветяване с Анексин V и други могат също да бъдат взети предвид.
justification for choice of solvent/vehicle;
Съществуват обаче ограничени публикувани данни, съгласно които последните са били използвани за in vivo изследвания и някои могат да бъдат по-малко надеждни от други.
preparation of dose formulations;
Фантомните клетки (или hedgehog-клетки) са клетки с микроскопско изображение, състоящо се от малка или несъществуваща глава и големи дифузни опашки, и се считат за силно увредени клетки, въпреки че етиологията тези клетки е несигурна (вж. допълнение 3).
analytical determinations on formulations (e.g. stability, homogeneity, nominal concentrations).
Поради външния им вид измерванията на % ДНК в опашката чрез анализ на изображения са ненадеждни и следователно фантомните клетки следва да се оценяват поотделно.
species/strain used and scientific and ethical justifications for the choice;
Получаването на фантомни клетки следва да се отбележи и протоколира, а всички увеличения, за които се смята, че са свързани с изпитвания химикал, следва да се проучват и тълкуват внимателно.
source, housing conditions, diet, enrichment, etc.;
Знанията на потенциалния начин на действие на изпитваните химикали могат да помогнат при такива съображения.
individual weight of the animals at the start and at the end of the test, including body weight range, mean and standard deviation for each group.
Опитна единица е отделното животно и следователно както индивидуалните данни за животните, така и обобщените резултати следва да се представят в табличен вид.
results from the range-finding study (if conducted);
Поради йерархичния характер на данните се препоръчва да се определи медианната стойност на % ДНК в опашката за всяко предметно стъкло, и да се изчисли средното на медианните стойности за всяко животно (12).
rationale for route of administration;
След това се определя средната стойност на средните за отделните животни, която да даде средна стойност за групата.
site of injection (for subcutaneous or intravenous studies);
Всички тези стойност следва да се включат в протокола.
methods for sample preparation, where available, histopathological analyses, especially for a chemical giving a positive comet response;
Могат да се използват алтернативни подходи (вж. точка 53), ако са научно и статистически обосновани.
rationale for tissue selection;
Статистически анализ може да се извърши, като се използват разнообразни подходи (58) (59) (60) (61).
methods for verifying that the test chemical reached the target tissue, or general circulation, if negative results are obtained;
При избора на статистическите методи, които ще се използват, следва да се вземе предвид нуждата от трансформация (напр. log или квадратен корен) на данните и/или добавяне на малко число (напр.
details of diet and water quality;
0,001) към всички (дори различни от нулеви) стойности, както е обсъдено в горните препратки, за да се смекчи въздействието на нулевите стойности за клетката.
detailed description of treatment and sampling schedules and justifications for the choices (e.g. toxicokinetic data, where available);
Подробности за анализа на третирането/взаимодействията между половете, когато се използват животни и от двата пола, и последващият анализ на данни, при които са установени или не са установени различия, са дадени в допълнение 2.
method of pain relief, analgesia;
Данните за токсичността и за клиничните признаци следва също да бъдат протоколирани.
procedures for isolating and preserving tissues;
а.
methods for preparing single cell/nucleus suspension;
Паралелната отрицателна контрола се счита за приемлива за допълване към базата данни на дадената лаборатория за отрицателните контроли за предходни периоди, както е описано в точка 16.
source and lot numbers of all reagents (where possible);
б.
methods for evaluating cytotoxicity;
Паралелните положителни контроли (вж. точка 29) трябва да предизвикват отклици, които са съвместими с генерираните в базата данни за положителните контроли за предходни периоди, и да генерират статистически значимо увеличение в сравнение с паралелната отрицателна контрола.
electrophoresis conditions;
в.
staining techniques used; and
Анализирани са достатъчен брой клетки и дози (точки 52 и 36—38).
methods for scoring and measuring comets.
г.
General clinical observations, if any, prior to and throughout the test period for each animal;
Критериите за избор на най-високата доза са съвместими с описаните в точка 36.
evidence of cytotoxicity if performed;
При условие, че са изпълнени всички критерии за приемливост, изпитваният химикал се счита за ясно положителен, ако:
for studies longer than one week: Individual body weights during the study, including body weight range, mean and standard deviation for each group; food consumption;
а. при най-малко една от изпитваните дози се наблюдава статистически значимо увеличение в сравнение с паралелната отрицателна контрола,
dose-response relationship, where evident;
в. някой от резултатите е извън разпределението на данните за отрицателните контроли от предходни периоди за даден вид, носител, път, тъкан и брой прилагания.
for each tissue/animal, the % tail DNA (or other measures, if chosen) and median values per slide, mean values per animal and mean values per group;
Ако всички тези критерии са изпълнени, се смята, че изпитваният химикал може да предизвика скъсвания във веригата на ДНК в тъканите, изследвани в тази система за изпитване.
concurrent and historical negative control data with ranges, means/medians and standard deviations for each tissue evaluated;
Ако са изпълнени само един или два от тези критерии, вж. точка 62.
concurrent and historical positive control data;
При условие, че са изпълнени всички критерии за приемливост, изпитваният химикал се счита за ясно отрицателен, ако:
for tissues other than liver, a dose-response curve using the positive control.
б. няма увеличение, свързано с концентрацията, при оценка, извършена с подходящ трендов тест,
This can be from data collected during the demonstration of proficiency (see paragraphs 16-17) and should be accompanied by a justification, with citations to current literature, for the appropriateness of the magnitude and scatter of the responses to the controls in that tissue;
в. всички резултати са в рамките на разпределението на данните за отрицателните контроли от предходни периоди за даден вид, носител, път, тъкан и брой прилагания.
statistical analyses and methods applied; and criteria for considering a response as positive, negative or equivocal;
г. с преки или косвени доказателства е доказана експозиция на прицелната тъкан (тъкани) или токсичност за тази тъкан.
frequency of hedgehogs in each group and per animal.
Тогава се смята, че изпитваният химикал може да предизвика скъсвания във веригата на ДНК в тъканите, изследвани в тази система за изпитване.
Durand (1990), Heterogeneity in radiation-induced DNA damage and repair in tumor and normal cells using the “Comet” assay, Radiation Research, Vol.
В случай че откликът не е нито ясно отрицателен, нито ясно положителен (т.е. не всички критерии, изброени в точки 59 и 60, са изпълнени), и с цел подпомагане на установяването на биологичната относимост на даден резултат, данните следва да се оценяват чрез експертна оценка и/или чрез допълнителни изследвания, ако е научно обосновано.
122/1, pp. 86-94.
Отчитането на допълнителни клетки (когато е уместно) или извършването на опит с повторение с възможност за използване на оптимизирани опитни условия (напр. интервал на разполагане на дозите, други пътища на прилагане, други моменти на пробовземане и други) може да се окажат от полза.
Chapter B.8 of this Annex: Subacute Inhalation Toxicity: 28-Day Study.
В редки случаи дори след допълнителни изследвания наборът от данни не позволява стигането до заключение за положителни или отрицателни резултати и следователно се заключава, че е неясен.
Chapter B.29 of this Annex: Subchronic Inhalation Toxicity: 90-day Study.
За оценяване на биологичната относимост на даден положителен или неясен резултат се изисква информация относно цитотоксичността в прицелната тъкан (вж. точки 54-55).
OECD (2002), “Guidance Document on the Recognition, Assessment and Use of Clinical Signs as Humane Endpoints for Experimental Animals Used in Safety Evaluation”, OECD Environment, Health and Safety Publications (EHS), Series on Testing and Assessment, No. 19, OECD Publishing, Paris.
Когато се наблюдава положителен или неясен резултат само при наличието на ясни признаци на цитотоксичност, за изследването следва да се заключи, че е неясно по отношение на генотоксичността, освен ако има достатъчно информация в подкрепа на окончателно заключение.
Alkaline single cell gel electrophoresis
В случай на изследване с отрицателен резултат, когато са налице признаци за токсичност във всички изпитвани дози, може да е препоръчително допълнително проучване при нетоксични дози.
Sensitive technique for the detection of primary DNA damage at the level of individual cell/nucleus.
източник, номер на партидата, при наличност;
Comet
стабилност на изпитвания химикал, крайна дата за употреба или дата за повторен анализ, ако е известна.
The shape that nucleoids adopt after submitted to one electrophoretic field, due to its similarity to comets: the head is the nucleus and the tail is constituted by the DNA migrating out of the nucleus in the electric field.
Разтворител/носител:
A critical variable/parameter
обосновка за избора на разтворител/носител;
This is a protocol variable for which a small change can have a large impact on the conclusion of the assay.
приготвяне на формулировките с дозите;
Critical variables can be tissue-specific.
аналитични определяния, свързани с формулировките (напр. устойчивост, хомогенност, номинални концентрации:
Critical variables should not be altered, especially within a test, without consideration of how the alteration will alter an assay response, for example as indicated by the magnitude and variability in positive and negative controls.
използван вид/порода и обосновка за избора от научна и етична гледна точка;
The test report should list alterations of critical variables made during the test or compared to the standard protocol for the laboratory and provide a justification for each alteration.
източник, условия на отглеждане, хранителен режим, облагородяване на жизнената среда и т.н.;
Tail intensity or % tail DNA
индивидуално тегло на животните в началото и в края на изпитването, в т.ч. обхват на телесното тегло, средни стойности и стандартно отклонение за всяка група;
This corresponds to the intensity of the comet tail relative to the total intensity (head plus tail).
резултати от изследването за установяване на обхвата (ако е проведено);
It reflects the amount of DNA breakage, expressed as a percentage.
обосновка на пътя на прилагане;
THE FACTORIAL DESIGN FOR IDENTIFYING SEX DIFFERENCES IN THE IN VIVO COMET ASSAY
място на инжектирането (за подкожно и интравенозно проучвания);
In this design, a minimum of 5 males and 5 females are tested at each concentration level resulting in a design using a minimum of 40 animals (20 males and 20 females, plus relevant positive controls.)
методи за пробоподготовка, при наличност хистопатологични анализи, особено за химикал, който дава положителен отклик в кометното изследване;
The analysis partitions the variability in the dataset into that between the sexes, between the concentrations and that related to the interaction between the sexes and the concentrations.
обосновка на избора на тъкан;
Full details of the underlying methodology are available in many standard statistical textbooks (see references) and in the 'help' facilities provided with statistical packages.
методи за проверка дали изпитваният химикал е достигнал до прицелната тъкан, или до общото кръвообращение, ако са получени отрицателни резултати;
CURRENT LIMITATIONS OF THE ASSAY
подробности относно качество на хранителния режим и водата;
Due to the current status of knowledge, several limitations are associated with the in vivo comet assay.