natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Използването на подходящи оцветители (напр. акридиново оранжево (78) или Хьохст 33258 плюс пиронин-Y (79)) може да елиминира някои от артефактите, свързани с използването на оцветител, който не е специфичен за ДНК.
When single cultures per concentration are used (see paragraph 28), at least 2000 cells per culture should be scored in this single culture.
Анти-кинетохорни антитела, FISH с панцентромерни ДНК сонди или in situ белязване с панцентромерно-специфични праймери, заедно с подходящо контрастно оцветяване на ДНК, могат да бъдат използвани за идентифициране на съдържанието (целите хромозоми ще бъдат оцветени, докато ацентричните хромозомни фрагменти няма да бъдат) на микроядрата, ако механистичната информация за тяхното образуване представлява интерес (16) (17).
If substantially fewer than 1000 cells per culture (for duplicate cultures), or 2000 (for single culture), are available for scoring at each concentration, and if a significant increase in micronuclei is not detected, the test should be repeated using more cells, or at less cytotoxic concentrations, whichever is appropriate.
Могат да бъдат използвани и други методи за разграничаване на кластогените от анеугените, ако те са се доказали като ефективни и ако са валидирани.
When cytoB is used, a CBPI or an RI should be determined to assess cell proliferation (see Appendix 2) using at least 500 cells per culture.
Например за определени клетъчни линии измерванията на суб-2N ядра като хиподиплоидни, използвайки технологии като напр. анализ на изображения, цитометрия с лазерно сканиране или поточна цитометрия, също така биха могли да предоставят полезна информация (80) (81) (82).
When treatments are performed in the absence of cytoB, it is essential to provide evidence that the cells in culture have divided, as discussed in paragraphs 24-28.
Морфологичното наблюдение на ядрата също може да предостави индикации за възможна анеуплоидия.
In order to establish sufficient experience with the assay prior to using it for routine testing, the laboratory should have performed a series of experiments with reference positive chemicals acting via different mechanisms (at least one with and one without metabolic activation, and one acting via an aneugenic mechanism, and selected from the chemicals listed in Table 1) and various negative controls (including untreated cultures and various solvents/vehicle).
Освен това, изпитване за метафазни хромозомни аберации, за предпочитане в същия тип клетки и с протокол със сравнима чувствителност, би могло също да бъде полезен начин за определяне дали микроядрата се дължат на разкъсване на хромозоми (като се знае, че хромозомна загуба не би била открита в изпитването за хромозомни аберации).
This is not applicable to laboratories that have experience, i.e. that have an historical data base available as defined in paragraphs 49 to 52.
Всички предметни стъкла, включително тези за разтворителя и за нетретираните (ако се използват) и положителните контроли, следва да се кодират независимо преди микроскопския анализ на честотата на микроядрата.
A selection of positive control chemicals (see Table 1) should be investigated with short and long treatments in the absence of metabolic activation, and also with short treatment in the presence of metabolic activation, in order to demonstrate proficiency to detect clastogenic and aneugenic chemicals, determine the effectiveness of the metabolic activation system and demonstrate the appropriateness of the scoring procedures (microscopic visual analysis, flow cytometry, laser scanning cytometry or image analysis).
Когато се използва автоматизирана система за преброяване, например поточна цитометрия, цитометрия с лазерно сканиране или анализ на изображения, следва да се използват подходящи техники за контрол на всяко изместване или дрейф, Независимо че за преброяване на микроядрата се използва автоматична платформа, паралелно следва да се оценяват CBPI, RI, RPD, или RICC.
When first acquiring data for an historical negative control distribution, concurrent negative controls should be consistent with published negative control data where they exist.
При култури, третирани с цитоБ, честотата на микроядрата следва да бъде анализирана при поне 2000 двуядрени клетки на концентрация и контрола (83), разделени поравно между повторенията, ако се използват повторения.
As more experimental data are added to the control distribution, concurrent negative controls should ideally be within the 95 % control limits of that distribution (87) (88).
В случай на една култура на доза без повторение (вж. точка 28), в тази култура следва да бъдат преброени поне 2000 двуядрени клетки на култура (83).
The laboratory's historical negative control database, should initially be built with a minimum of 10 experiments but would preferably consist of at least 20 experiments conducted under comparable experimental conditions.
Ако за преброяване при всяка концентрация са налични съществено по-малко от 1000 двуядрени клетки на култура (за култури с повторения), или по-малко от 2000 (при една култура без повторение), и ако не е открито съществено увеличение на микроядрата, изпитването следва да бъде повторено с използване на повече клетки или при по-малко цитотоксични концентрации, което от двете е уместно.
Laboratories should use quality control methods, such as control charts (e.g. C-charts or X-bar charts (88)), to identify how variable their positive and negative control data are, and to show that the methodology is ‘under control’ in their laboratory (83).
Трябва да се внимава да не се преброяват двуядрени клетки с неправилна форма или такива, в които двете ядра се различават в голяма степен по размер.
Further recommendations on how to build and use the historical data (i.e. criteria for inclusion and exclusion of data in historical data and the acceptability criteria for a given experiment) can be found in the literature (87).
Освен това, двуядрените клетки не следва да се бъркат с недобре разнесените многоядрени клетки.
Any changes to the experimental protocol should be considered in terms of the consistency of the data with the laboratory's existing historical control databases.
Клетките, които съдържат повече от две основни ядра, следва да не бъдат анализирани за наличието на микроядра, тъй като базовата честота на микроядрата може да бъде по-висока при тези клетки (84).
Negative control data should consist of the incidence of micronucleated cells from a single culture or the sum of replicate cultures as described in paragraph 28.
Преброяването на едноядрените клетки е приемливо, ако е доказано, че изпитваният химикал оказва влияние върху активността на цитоБ.
Concurrent negative controls should ideally be within the 95 % control limits of the distribution of the laboratory's historical negative control database (87) (88).
В подобни случаи може да е полезно изпитване без цитоБ с повторение.
Where concurrent negative control data fall outside the 95 % control limits, they may be acceptable for inclusion in the historical control distribution as long as these data are not extreme outliers and there is evidence that the test system is ‘under control’ (see paragraph 50) and there is evidence of absence of technical or human failure.
Преброяването на едноядрени клетки в допълнение към двуядрените клетки може да предостави полезна информация (85) (86), но не е задължително.
If the cytokinesis-block technique is used, only the frequencies of binucleate cells with micronuclei (independent of the number of micronuclei per cell) are used in the evaluation of micronucleus induction.
При клетъчни линии, изпитвани без третиране с цитоБ, микроядрата следва да се преброят поне в 2000 клетки на изпитвана концентрация и контрола (83), разделени поравно между повторенията, ако се използват повторения.
The scoring of the numbers of cells with one, two, or more micronuclei can be reported separately and could provide useful information, but is not mandatory.
Когато се използва култура без повторение на концентрация (вж. точка 28), в тази култура без повторение следва да се преброят най-малко 2000 клетки на култура.
Concurrent measures of cytotoxicity and/or cytostasis for all treated, negative and positive control cultures should be determined (16).
Ако за преброяване при всяка концентрация са налични съществено по-малко от 1000 клетки на култура (за култури с повторения) или по-малко от 2000 (при една култура без повторение), и ако не е открито съществено увеличение на микроядрата, изпитването следва да бъде повторено с използване на повече клетки или при по-малко цитотоксични концентрации, което от двете е уместно.
The CBPI or the RI should be calculated for all treated and control cultures as measurements of cell cycle delay when the cytokinesis-block method is used.
Когато се употребява цитоБ, за оценка на пролиферацията на клетките (вж. допълнение 2) следва да бъдат определени CBPI или RI, като се използват поне 500 клетки на култура.
In the absence of cytoB, the RPD or the RICC should be used (see Appendix 2).
Когато третиранията се извършват в отсъствие на цитоБ от съществено значение е да бъдат предоставени доказателства, че клетките в културата са преминали през делене, както е обсъдено в точки 24—28.
The concurrent negative control is considered acceptable for addition to the laboratory historical negative control database as described in paragraph 50.
За да се натрупа достатъчно опит по отношение на изследването преди използването му за рутинно изпитване, лабораторията следва да е извършила поредица опити с положителни референтни химикали, действащи чрез различни механизми (най-малко по един със и един без метаболитно активиране, както и един действащ чрез анеугенен механизъм, избрани от химикалите, изброени в таблица 1) и различни отрицателни контроли (включително нетретирани култури и различни разтворители/носители).
Concurrent positive controls (see paragraph 50) should induce responses that are compatible with those generated in the laboratory's historical positive control data base and produce a statistically significant increase compared with the concurrent negative control.
Това не се прилага за лаборатории, които разполагат с опит, т.е. които разполагат с налична база данни за предходни периоди, както е определено в точки 49—52.
Cell proliferation criteria in the solvent control should be fulfilled (paragraph 25-27).
Подбрани химикали за положителни контроли (вж. таблица 1) следва да бъдат изследвани с краткосрочно и дългосрочно третиране в отсъствието на метаболитно активиране, и също така с краткосрочно третиране с метаболитно активиране за доказване на пригодността за откриване на кластогенни и анеугенни химикали и за определяне на ефективността на системата за метаболитно активиране и за доказване на целесъобразността на процедурите за преброяване (микроскопски визуален анализ, поточна цитометрия, цитометрия с лазерно сканиране или анализ на изображения).
All experimental conditions were tested unless one resulted in positive results (paragraphs 36-40).
При първото придобиване на данни за разпределението при отрицателните контроли от предходни периоди паралелните отрицателни контроли следва да бъдат съобразени с публикуваните данни за отрицателните контроли, когато такива са налице.
Adequate number of cells and concentrations are analysable (paragraphs 28 and 44-46).
При добавяне на повече опитни данни към разпределението при контролите паралелните отрицателни контроли следва в идеалния случай да бъдат в рамките на граници за контрол 95 % на това разпределение (87) (88).
The criteria for the selection of top concentration are consistent with those described in paragraphs 24-31.
Базата данни с отрицателни контроли от предходни периоди на лабораторията следва първоначално да се създаде с минимум 10 опита, но е за предпочитане тя да се състои най-малко от 20 опита, проведени при сравними опитни условия.
Providing that all acceptability criteria are fulfilled, a test chemical is considered to be clearly positive if, in any of the experimental conditions examined (see paragraphs 36-39):
Лабораториите трябва да използват методи за контрол на качеството, като например контролни карти (напр.
at least one of the test concentrations exhibits a statistically significant increase compared with the concurrent negative control (89)
C-карти или карти за средна стойност (X-bar) (88)), за определяне на варирането на данните им за положителните и отрицателните контроли, и за доказване, че методологията е „под контрол“ в техните лаборатории (83).
the increase is dose-related in at least one experimental condition when evaluated with an appropriate trend test (see paragraph 28)
В литературата (87) могат да се намерят допълнителни препоръки относно начина на създаване и използване на данни от предходни периоди (т.е. критерии за включване и изключване на данни в данните за предходни периоди и критериите за приемливост за даден опит).
any of the results are outside the distribution of the historical negative control data (e.g. Poisson-based 95 % control limits; see paragraph 52).
Всички промени в опитния протокол следва да бъдат разглеждани от гледна точка на съгласуваността на данните със съществуващите бази данни на дадената лаборатория за контролите за предходни периоди.
When all of these criteria are met, the test chemical is then considered able to induce chromosome breaks and/or gain or loss in this test system.
Данните за отрицателните контроли следва да включват броя на клетките с микроядра при култури без повторение или сбора за културите с повторения, както е описано в точка 28.
Recommendations for the most appropriate statistical methods can also be found in the literature (90) (91) (92).
Паралелните отрицателни контроли в идеалния случай следва да бъдат в рамките на граници за контрол 95 % от разпределението от базата данни на дадената лаборатория за отрицателните контроли за предходни периоди (87) (88).
Providing that all acceptability criteria are fulfilled, a test chemical is considered clearly negative if, in all experimental conditions examined (see paragraphs 36-39):
Когато данните за паралелните отрицателни контроли попадат извън 95 %-ните граници за контрол, те могат да бъдат приемливи за включване в разпределението при контролите от предходни периоди, при условие че тези данни не са екстремални стойности, силно различаващи се от нормалните, и има доказателства, че системата за изпитване е „под контрол“ (вж. точка 50), както и доказателства за липса на техническа или човешка грешка.
all results are inside the distribution of the historical negative control data (e.g. Poisson-based 95 % control limits; see paragraph 52).
Ако се използва техниката на блокиране на цитокинезата, в оценката на индуцирането на микроядра се използват само честотите на двуядрените клетки с микроядра (независимо от броя на микроядрата в една клетка).
The test chemical is then considered unable to induce chromosome breaks and/or gain or loss in this test system.
Преброяването на броя на клетките с едно, две или повече микроядра може да се протоколира отделно и може да предостави полезна информация, но не е задължително.
There is no requirement for verification of a clear positive or negative response.
Следва да се определят паралелните измервания на цитотоксичността и/или цитостазата за всички третирани култури, за отрицателните и положителните контролни култури (16).
In case the response is neither clearly negative nor clearly positive as described above and/or in order to assist in establishing the biological relevance of a result, the data should be evaluated by expert judgement and/or further investigations.
Следва да бъдат изчислени CBPI или RI за всички третирани и контролни култури като измервания на забавяне на клетъчния цикъл, когато се използва методът на блокиране на цитокинезата.
Scoring additional cells (where appropriate) or performing a repeat experiment possibly using modified experimental conditions (e.g. concentration spacing, other metabolic activation conditions [i.e. S9 concentration or S9 origin]) could be useful.
В отсъствие на цитоБ следва да бъдат използвани RPD или RICC (вж. допълнение 2).
In rare cases, even after further investigations, the data set will not allow a conclusion of positive or negative, and will therefore be concluded as equivocal.
паралелната отрицателна контрола се смята за приемлива за допълване към базата данни на дадената лаборатория за отрицателните контроли за предходни периоди, както е описано в точка 50.
Test chemicals that induce micronuclei in the MNvit test may do so because they induce chromosome breakage, chromosome loss, or a combination of the two.
Паралелните положителни контроли (вж. точка 50) трябва да предизвикват отклици, които са съвместими с генерираните в базата данни за положителните контроли за предходни периоди, и да генерират статистически значимо увеличение в сравнение с паралелната отрицателна контрола.
Further analysis using anti-kinetochore antibodies, centromere specific in situ probes, or other methods may be used to determine whether the mechanism of micronucleus induction is due to clastogenic and/or aneugenic activity.
Критериите за клетъчна пролиферация в контролата на разтворител трябва да бъдат спазени (точки 25—27).
reactivity of the test chemicals with the solvent/vehicle or cell culture media;
Всичките опитни условия са били подложени на изпитване, освен ако едно от тях е довело до положителни резултати (точки 36—40).
solubility and stability of the test chemical in solvent, if known;
Достатъчен брой клетки и концентрации са годни за анализ (точки 28 и 44—46).
measurement of pH, osmolality, and precipitate in the culture medium to which the test chemical was added, as appropriate.
Критериите за избор на най-високата концентрация са съвместими с описаните в точки 24—31.
justification for choice of solvent;
При условие, че са изпълнени всички критерии за приемливост, изпитваният химикал се счита за ясно положителен, ако в някое от изследваните опитни условия (вж. точки 36—39):
percentage of solvent in the final culture medium
при най-малко една от изпитваните концентрации се наблюдава статистически значимо увеличение в сравнение с паралелната отрицателна контрола (89),
type and source of cells used;
увеличението е свързано с дозата при поне едно опитно условие, при оценка, извършена с подходящ трендов тест (вж. точка 28),
suitability of the cell type used;
някой от резултатите е извън разпределението на данните за отрицателните контроли от предходни периоди (напр. на основата на разпределение на Поасон с граници за контрол 95 %; вж. точка 52).
absence of mycoplasma, in case of cell lines;
Ако всички тези критерии са изпълнени се смята, че изпитваният химикал може да предизвика хромозомни разкъсвания и/или загуба или допълнително наличие в тази система за изпитване.
for cell lines, information on cell cycle length or proliferation index;
Препоръки за най-подходящите статистически методи могат да се намерят в литературните източници (90) (91) (92).
where lymphocytes are used, sex of blood donors, age and any relevant information on the donor, whole blood or separated lymphocytes, mitogen used;
При условие, че са изпълнени всички критерии за приемливост, изпитваният химикал се счита за ясно отрицателен, ако във всички изследвани опитни условия (вж. точки 36—39):
normal (negative control) cell cycle time;
всички резултати са в рамките на разпределението на данните за отрицателните контроли от предходни периоди (напр. на основата на разпределение на Поасон с граници за контрол 95 %; вж. точка 52).
methods for the maintenance of cell cultures, for cell lines;
Тогава се смята, че изпитваният химикал не може да предизвика хромозомни разкъсвания и/или загуба или допълнително наличие в тази система за изпитване.
modal number of chromosomes, for cell lines;
Няма изискване за потвърждаване на ясно положителен или ясно отрицателен отклик.
Test Conditions:
В случай че откликът не е нито ясно отрицателен, нито ясно положителен, както е описано по-горе, или с цел подпомагане на установяването на биологичната относимост на даден резултат, данните следва да се оценяват чрез експертна оценка и/или чрез допълнителни изследвания.
identity of the cytokinesis blocking substance (e.g. cytoB), if used, and its concentration and duration of cell exposure;
Преброяването на допълнителни клетки (когато е уместно) или извършването на опит с повторение с възможност за използване на изменени опитни условия [напр. интервал на разполагане на концентрациите, други условия на метаболитно активиране (т.е. концентрация на S9 или произход на S9)] може да се окажат от полза.
concentration of the test chemical expressed as a final concentration in the culture medium (e.g. μg or mg/mL, or mM of culture medium);
В редки случаи дори след допълнителни изследвания наборът от данни не позволява стигането до заключение за положителни или отрицателни резултати и следователно се заключава, че е неясен.
rationale for the selection of concentrations and the number of cultures, including cytotoxicity data and solubility limitations;
Изпитваните химикали, които индуцират микроядра в изпитването MNvit, постигат това, като предизвикват хромозомни разкъсвания, хромозомни загуби или комбинация от двете.
composition of media, CO2 concentration, if applicable, humidity level;
Последващият анализ, при който се използват антикинетохорни антитела, специфични за центромерата in situ сонди или други методи, може да бъде използван за определяне дали механизмът за индуциране на микроядра се дължи на кластогенна и/или анеугенна активност.
concentration (and/or volume) of the solvent and test chemical added in the culture medium;
реакционна способност на изпитвания химикал с разтворителя/носителя или средата за клетъчните култури.
incubation temperature and time;
разтворимост и стабилност на изпитвания химикал в разтворител, ако са известни.
cell density at seeding, if applicable;
измерване на рН, осмолалитет и утайка в средата за отглеждане, към която е добавен изпитваният химикал, когато е уместно.
type and composition of metabolic activation system, (source of S9, method of preparation of the S9 mix, the concentration or volume of S9 mix and S9 in the final culture medium, quality controls of S9 (e.g. enzymatic activity, sterility, metabolic capability);
обосновка на избора на разтворител;
positive and negative control chemicals, final concentrations, conditions and durations of treatment and recovery periods;
процентно съдържание на разтворителя в окончателната среда за отглеждане.
methods of slide preparation and the staining technique used;
тип и източник на използваните клетки;
criteria for scoring micronucleate cells (selection of analysable cells and identification of micronucleus);
дали използваният тип клетки е подходящ;
numbers of cells analysed;
за клетъчни линии — отсъствие на микоплазма;
criteria for considering studies as positive, negative, or equivocal;
за клетъчни линии — информация за продължителността на клетъчния цикъл или индекса на пролиферация;
method(s) of statistical analysis used;
при използване на лимфоцити — пол на кръвните донори, възраст и всякаква относима информация по отношение на донор, цяла кръв или изолирани лимфоцити, използван митоген;
methods, such as use of anti-kinetochore antibody or pan-centromeric specific probes, to characterise whether micronuclei contain whole or fragmented chromosomes, if applicable;
нормално (отрицателна контрола) време на клетъчен цикъл;
definition of acceptable cells for analysis;
за клетъчни линии — методи за поддържане на клетъчните култури;
in the absence of cyto B, the number of cells treated and the number of cells harvested for each culture in case of cell lines;
за клетъчни линии — модален брой на хромозомите;
measurement of cytotoxicity used, e.g. CBPI or RI in the case of cytokinesis-block method; RICC or RPD when cytokinesis-block methods are not used; other observations if any (e.g. cell confluency, apoptosis, necrosis, metaphase counting, frequency of binucleated cells);
Условия на изпитване:
data on pH and osmolality of the treatment medium, if determined;
идентичност на блокера на цитокинезата (напр. цитоБ), ако се използва такъв, неговата концентрация и времетраене на експозицията на клетките;
distribution of mono-, bi-, and multi-nucleate cells if a cytokinesis block method is used;