natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Камерите за изпитване следва да бъдат произволно разположени в инкубатора.
These observations are used for the determination of lethality: Any positive outcome in one of these observations means that the zebrafish embryo is dead.
Вода и условия на изпитване
Additionally, hatching is recorded in treatment and control groups on a daily basis starting from 48 hrs.
Препоръчително е водата за поддържане да се разрежда, за да се постигне равнище на твърдост, характерно за голяма част от повърхностните води.
Observations are recorded every 24 hrs, until the end of the test.
Водата за разреждане следва да се приготвя от възстановена вода (27).
Apical observations of acute toxicity in zebrafish embryos 24-96 hrs post fertilisation
Постигнатата степен на твърдост следва да бъде еквивалентна на 100—300 mg/l СаСО3, за да се предотврати прекомерно утаяване на калциев карбонат.
Exposure times
Може да се използват и други добре характеризирани повърхностни или изворни води.
24 hrs
Възстановената вода може да се адаптира до вода за поддържане с ниска твърдост чрез разреждане с дейонизирана вода до съотношение от 1:5 за постигане на минимална твърдост от 30—35 mg/l CaCO3.
48 hrs
Преди да се добави изпитваният химикал, водата се аерира до насищане с кислород.
72 hrs
В хода на изпитването температурата в гнездата следва да се поддържа на 26±1°С.
96 hrs
Стойността на pH следва да бъде в границите между рН 6,5 и 8,5 и в рамките на този диапазон да не варира с повече от 1,5 единици в хода на изпитването.
Coagulated embryos
Ако се очаква, че рН няма да се запази в този диапазон, следва да се направи корекция на рН преди началото на изпитването.
Lack of somite formation
Корекцията на рН следва да се направи по такъв начин, че концентрацията на изходния разтвор да не се промени в значителна степен и да не се предизвика никаква химична реакция или утаяване на изпитвания химикал.
Non-detachment of the tail
Препоръчва се използването на хлороводород (HCl) и натриев хидроксид (NaOH), за да се коригира рН в разтворите, съдържащи изпитващия химикал.
Lack of heartbeat
Разтворите за изпитване на избраните концентрации могат да се приготвят например чрез разреждане на изходен разтвор.
Coagulation of the embryo: Coagulated embryos are milky white and appear dark under the microscope (see Appendix 5, Fig.
Изходните разтвори следва да се приготвят за предпочитане чрез просто смесване или разбъркване на изпитвания химикал във водата за разреждане, като се използват механични средства (например разклащане и/или с помощта на ултразвук).
1).
Ако разтварянето на изпитвания химикал във вода е трудно, трябва да бъдат следвани процедурите, описани в ръководството на ОИСР с насоки № 23 за боравене с трудни вещества и смеси (28).
The number of coagulated embryos is determined after 24, 48, 72 and 96 hrs.
Използването на разтворители следва да се избягва, но в някои случаи може да се изисква с цел да се получи изходен разтвор с подходяща концентрация.
Lack of somite formation: At 26 ± 1 °C, about 20 somites have formed after 24 hrs (see Appendix 5, Figure 2) in a normally developing zebrafish embryo.
Когато за подготовката на изходния разтвор се използва разтворител, неговата окончателна концентрация не следва да превишава 100 μl/l и следва да бъде еднаква във всички съдове за изпитване.
A normally developed embryo shows spontaneous movements (side-to-side contractions).
Когато се използва разтворител, се изисква допълнителна контрола на разтворител.
Spontaneous movements indicate the formation of somites.
Поддържане на риби за размножаване
The absence of somites is recorded after 24, 48, 72 and 96 hrs.
За получаването на хайвер се използват риби за развъждане от неекспонирани диви екземпляри на зеброво данио с добре документиран процент на оплождане на хайвера.
Non-formation of somites after 24 hrs might be due to a general retardation of development.
По рибите следва да няма макроскопски симптоми на инфекции и заболявания и те следва да не са били подлагани на медикаментозно (интензивно или профилактично) лечение 2 месеца преди хвърлянето на хайвера.
At latest after 48 hrs, the formation of somites should be developed.
Рибите за развъждане се поддържат в аквариуми с препоръчителен капацитет на зареждане от 1 l вода на риба и фиксиран светъл период с продължителност от 12—16 часа (29) (30) (31) (32) (33).
If not, the embryos are considered dead.
Оптималната скорост на филтруване следа да бъде коригирана; прекалено високата скорост на филтруване причинява сериозни смущения на водата и следва да се избягва.
Non-detachment of the tail: In a normally developing zebrafish embryo, detachment of the tail (seeAppendix 5, Figure 3) from the yolk is observed following posterior elongation of the embryonic body.
За условията на хранене вж. допълнение 2.
Absence of tail detachment is recorded after 24, 48, 72 and 96 hrs.
Следва да се избягва прехранването и качеството на водата и чистотата на аквариумите следва да се следят редовно и, ако е необходимо, да се възстановяват до изходното състояние.
Lack of heartbeat: In a normally developing zebrafish embryo at 26 ± 1 °C, the heartbeat is visible after 48 hrs (see Appendix 5, Figure 4).
Изпитване за пригодност
Particular care should be taken when recording this endpoint, since irregular (erratic) heartbeat should not be recorded as lethal.
В качеството си на референтен химикал 3,4-дихлороанилинът (използван в изследванията за валидиране (1) (2)), следва да бъде изпитан в пълния диапазон концентрация-отклик с цел да се провери чувствителността на използвания рибен щам, като за предпочитане е това да става два пъти годишно.
Moreover, visible heartbeat without circulation in aorta abdominalis is considered non-lethal.
Всяка лаборатория, която за първи път започва да извършва такъв анализ, следва да използва референтния химикал.
To record this endpoint, embryos showing no heartbeat should be observed under a minimum magnification of 80x for at least one minute.
Лабораториите могат да използват този химикал за доказване на своята техническа компетентност за извършване на изследването преди предаване на данните за регулаторни цели.
Absence of heartbeat is recorded after 48, 72 and 96 hrs.
Получаване на хайвер
Hatching rates of all treatment and control groups should be recorded from 48 hrs onwards and reported.
Хайверът на зеброво данио може да бъде набавен чрез използване на групи за хвърляне на хайвер (в отделни резервоари за хвърляне на хайвер) или чрез масово хвърляне на хайвера (в резервоарите за поддържане).
Although hatching is not an endpoint used for the calculation of the LC50, hatching ensures exposure of the embryo without a potential barrier function of the chorion, and as such may help data interpretation.
Що се отнася до групите за хвърляне на хайвер, мъжките и женските риби (напр. в съотношение 2:1) в дадена група за развъждане се поставят в резервоари за хвърляне на хайвер няколко часа преди настъпването на тъмнина в деня преди изпитването.
Detailed descriptions of the normal (35) and examples of abnormal development of zebrafish embryos are illustrated in Appendixes 3 and 5.
Тъй като при зебровото данио групите за хвърляне на хайвер могат понякога да не успеят да хвърлят хайвера си, препоръчва се едновременно използване на най-малко три резервоара за хвърляне на хайвер.
Analytical measurements
С цел да се предотврати евентуално отклонение в генетично отношение хайверните зърна се събират, смесват и подбират на произволен принцип от минимум три групи за развъждане.
At the beginning and at the end of the test, pH, total hardness and conductivity in the control(s) and in the highest test chemical concentration are measured.
Що се отнася до събирането на хайверните зърна, ваните за хвърляне на хайвер се поставят в резервоарите за хвърляне на хайвер или в резервоарите за поддържане преди настъпване на тъмната част на денонощието в деня преди изпитването или преди настъпване на светлата част на денонощието в деня на изпитването.
In semi-static renewal systems the pH should be measured prior to and after water renewal.
С цел да се попречи на полово зрелите екземпляри зеброво данио да изядат хайвера ваните за хвърляне на хайвер се покриват с мрежа от инертен материал с подходящ размер на отворите (прибл.
The dissolved oxygen concentration is measured at the end of the test in the negative controls and highest test concentration with viable embryos, where it should be in compliance with the test validity criteria (see paragraph 8f).
2 ± 0,5 mm).
If there is concern that the temperature varies across the 24-well plates, temperature is measured in three randomly selected vessels.
Ако се сметне за необходимо, към мрежата могат да бъдат фиксирани изкуствени растения, изработени от инертен материал (например пластмаса или стъкло), за да служат като стимул за хвърляне на хайвер (3) (4) (5) (23) (35).
Temperature should be recorded preferably continuously during the test or, as a minimum, daily.
Следва да се използват устойчиви пластмасови материали, от които не се освобождават вещества (например фталати).
In a static system, the concentration of the test chemical should be measured, as a minimum, in the highest and lowest test concentrations, but preferably in all treatments, at the beginning and end of the test.
Чифтосването, хвърлянето на хайвера и оплождането се извършват в рамките на 30 минути след настъпване на светлата част на денонощието, след което ваните със събраните хайверни зърна могат да бъдат внимателно отстранени.
In semi-static (renewal) tests where the concentration of the test chemical is expected to remain within ± 20 % of the nominal values, it is recommended that, as a minimum, the highest and lowest test concentrations be analysed when freshly prepared and immediately prior to renewal.
След като бъдат събрани от ваните за хвърляне на хайвер се препоръчва хайверните зърна да се изплакват с възстановена вода.
For tests where the concentration of the test chemical is not expected to remain within ± 20 % of nominal, all test concentrations must be analysed when freshly prepared and immediately prior to renewal.
Делене на хайвера
In case of insufficient volume for analysis, merging of test solutions, or use of surrogate chambers being of the same material and having the same volume to surface area ratios as 24-well plates, may be useful.
При температура от 26°С след около 15 минути оплоденият хайвер преминава през първия стадий на делене и последващи синхронни деления на 4, 8, 16 и 32 клетъчни бластомера (вж. допълнение 3) (35).
It is strongly recommended that results be based on measured concentrations.
В тези стадии оплодените хайверни зърна могат ясно да бъдат идентифицирани чрез образуването на бластула.
When the concentrations do not remain within 80-120 % of the nominal concentration, the effect concentrations should be expressed relative to the geometric mean of the measured concentrations; see Chapter 5 in the OECD Guidance Document on Aquatic Toxicity Testing of Difficult Substances and Mixtures for more details (28).
Двадесет ембриона на концентрация (един ембрион на гнездо) се експонират на изпитвания химикал.
LIMIT TEST
Експозицията следва да бъде такава, че да позволява поддържане на ± 20 % от номиналната концентрация на химикала в хода на изпитването.
Using the procedures described in this test method, a limit test may be performed at 100 mg/l of test chemical or at its limit of solubility in the test medium (whichever is the lower) in order to demonstrate that the LC50 is greater than this concentration.
Ако в статична система това не е възможно, следва да се приложи полустатичен интервал на обновяване (например обновяване на всеки 24 часа).
The limit test should be performed using 20 embryos in the treatment, the positive control and –if necessary- in the solvent control and 24 embryos in the negative control.
В тези случаи концентрациите на експозицията поне за най-високите и най-ниските изпитвани концентрации трябва да се проверяват в началото и в края на всеки интервал на експозиция (вж. точка 36).
If the percentage of lethality at the concentration tested exceeds the mortality in the negative control (or solvent control) by 10 %, a full study should be conducted.
Ако поддържане на концентрация на експозицията в интервал ± 20 % от номиналната концентрация не е възможно, всички концентрации трябва да бъдат измерени в началото и в края на всеки интервал на експозиция (вж. точка 36).
Any observed effects should be recorded.
При обновяване следва да се внимава ембрионите да продължават да бъдат покрити с малка част от старите изпитвани разтвори, за да се предотврати тяхното изсушаване.
If mortality exceeds 10 % in the negative control (or solvent control), the test becomes invalid and should be repeated.
Планът на изпитването може да бъде адаптиран, така че да изпълнява изискванията за изпитване на конкретни вещества (напр. проточни (24) или пасивни системи за дозиране (25) за лесно разградими или силно адсорбиращи се вещества (29) или други за летливи вещества (36) (37)).
In this test, the individual wells are considered independent replicates for statistical analysis.
Във всеки случай следва да се подхожда внимателно, за да се минимизира стресът на ембрионите.
The percentages of embryos for which at least one of the apical observations is positive at 48 and/or 96 hrs are plotted against test concentrations.
Камерите за изпитване следва да бъдат кондиционирани с изпитваните разтвори поне 24 часа преди началото на изпитването.
For calculation of the slopes of the curve, LC50 values and the confidence limits (95 %), appropriate statistical methods should be applied (38) and the OECD Guidance Document on Current Approaches in the Statistical Analysis of Ecotoxicity Data should be consulted (39).
Условията на изпитване са обобщени в допълнение 2.
chemical identification, such as IUPAC or CAS name, CAS number, SMILES or InChI code, structural formula, purity, chemical identity of impurities as appropriate and practically feasible, etc. (including the organic carbon content, if appropriate).
Обикновено, за да се отговори на статистическите изисквания, са необходими пет концентрации на изпитвания химикал, равно отдалечени една от друга с кратност, която не надвишава 2,2.
Test organisms:
Следва да се представи обосновка, ако са използвани по-малко от пет концентрации.
test procedure used (e.g., semi-static renewal);
За предпочитане е най-високата изпитвана концентрация да предизвиква 100 % смъртност, а най-ниската изпитвана концентрация да няма видим ефект, както е посочено в точка 28.
photoperiod;
Изпитване за определяне на обхвата, проведено преди окончателното изпитване, позволява да се избере подходящият диапазон на концентрация.
test design (e.g., number of test chambers, types of controls);
За определяне на обхвата обикновено се използват по десет ембриона на концентрация.
water quality characteristics in fish maintenance (e.g. pH, hardness, temperature, conductivity, dissolved oxygen);
Указанията по-долу се отнасят за извършване на изпитване в 24-гнездни плаки.
dissolved oxygen concentration, pH, total hardness, temperature and conductivity of the test solutions at the start and after 96 hrs;
Ако за изпитването се използват различни камери (например малки блюда на Петри) или се изпитват повече концентрации, указанията трябва съответно да бъдат коригирани.
method of preparation of stock solutions and test solutions as well as frequency of renewal;
Подробности и визуални инструкции относно разпределението на концентрациите във всички 24-гнездни плаки са предоставени в точка 27 и в допълнение 4, фигура 1.
justification for use of solvent and justification for choice of solvent, if other than water;
Изискват се контроли на водата за разреждане както под формата на отрицателна контрола, така и под формата на вътрешни контроли на плаките.
the nominal test concentrations and the result of all analyses to determine the concentration of the test chemical in the test vessels; the recovery efficiency of the method and the limit of quantification (LoQ) should also be reported;
Ако при вътрешната контрола на плаката се констатира повече от един мъртъв ембрион, плаката се отхвърля, като по този начин се намалява броят на концентрациите, използвани за определянето на LC50.
evidence that controls met the overall survival validity criteria;
При отхвърляне на цялата плака способността за оценка и разграничаване на наблюдаваните ефекти може да бъде затруднена, особено ако е отхвърлена плаката с контролата на разтворител или плака, в която са засегнати и третираните ембриони.
fertilisation rate of the eggs;
В първия случай изпитването трябва да се повтори.
hatching rate in treatment and control groups.
Във втория загубата на цяла третирана група или групи поради смъртност във вътрешната контрола може да ограничи възможността за оценка на ефектите и за определяне на стойностите на LC50.
maximum concentration causing no mortality within the duration of the test;
Положителна контрола при фиксирана концентрация от 4 mg/l 3,4-дихлороанилин се извършва за всяка партида хайвер, която се използва за изпитване.
minimum concentration causing 100 % mortality within the duration of the test;
Когато се използва разтворител, на разтворителя се излага допълнителна група от 20 ембриона в отделна 24-гнездна плака, която служи за контрола на разтворителя.
cumulative mortality for each concentration at the recommended observation times;
За да може изпитването да се счете за приемливо, следва да се докаже, че разтворителят не оказва значимо въздействие по време на излюпването и преживяването и че не предизвиква каквито и да било други неблагоприятни ефекти върху ембрионите (вж. точка 8в).
the LC50 values at 96 hrs (and optionally at 48 hrs) for mortality with 95 % confidence limits, if possible;
Начало на експозицията и продължителност на изпитването
graph of the concentration-mortality curve at the end of the test;
Изпитването започва възможно най-скоро след оплождането на хайвера и приключва след 96-часова експозиция.
mortality in the controls (negative controls, internal plate controls, as well as positive control and any solvent control used);
Ембрионите следва да бъдат потапяни в изпитваните разтвори преди да започне дробенето на бластодиска или най-късно до 16-ия клетъчен стадий.
data on the outcome of each of the four apical observations;
За да се сведе до минимум забавянето на началото на експозицията, не по-късно от 90 минути след оплождането на случаен принцип се избират хайверни зърна, чийто брой надвишава поне два пъти необходимия за третираната група, и те се пренасят в съответните концентрации и контроли (напр. в 100-милилитрови блюда кристализатори; хайверните зърна следва да бъдат изцяло покрити).
incidence and description of morphological and physiological abnormalities, if any (see examples provided in Appendix 5, Figure 2);
До 180 минути след оплождането живите оплодени хайверни зърна следва да бъдат отделени от неоплодените хайверни зърна и да се прехвърлят в 24-гнездни плаки, предварително подготвени в продължение на 24 часа и напълнени с 2 ml/гнездо прясно приготвени изпитвани разтвори.
incidents in the course of the test which might have influenced the results;
С помощта на стереомикроскоп (за предпочитане с ≥30-кратно увеличение) се подбират оплодени хайверни зърна в процес на дробене, при които не се наблюдават явни недостатъци при дробенето (например асиметрия, образуване на везикули), нито нараняване на хориона.
statistical analysis and treatment of data (probit analysis, logistic regression model and geometric mean for LC50);
Относно събирането и разделянето на хайверните зърна вж. допълнение 3, фиг. 1 и 3 и допълнение 4, фиг. 2.
slope and confidence limits of the regression of the (transformed) concentration-response curve.
Разпределение на хайверните зърна в 24-гнездните плаки
Any deviation from the test method and relevant explanations.
В гнездните плаки се поставя следният брой хайверни зърна (вж. също допълнение 4, фиг. 1)
Discussion and interpretation of results.
20 хайверни зърна на една плака за всяка изпитвана концентрация;
OECD (2011) Validation Report (Phase 1) for the Zebrafish Embryo Toxicity Test: Part I and Part II.
20 хайверни зърна на една плака като контрола на разтворител (ако е необходимо);
Series on Testing and Assessment No. 157, OECD, Paris.
20 хайверни зърна на една плака като положителна контрола;
OECD (2012) Validation Report (Phase 2) for the Zebrafish Embryo Toxicity Test: Part I and Part II (Annexes).
4 хайверни зърна във водата за разреждане във всяка от горните плаки като вътрешна контрола на плаката;
Series on Testing and Assessment No. 179, OECD, Paris.
24 хайверни зърна на една плака във вода за разреждане като отрицателна контрола.
Belanger, S. E., Rawlings J. M. and Carr G. J. (2013).
Апикалните наблюдения за всеки изпитван ембрион включват: коагулация на ембрионите, отсъствие на образуване на сомити, неотделяне на опашка и отсъствие на сърдечна дейност (таблица 1).
Use of Fish Embryo Toxicity Tests for the Prediction of Acute Fish Toxicity to Chemicals.
Тези наблюдения се използват за определяне на леталитета: Всеки положителен резултат при някой от тези фактори за наблюдения означава, че ембрионът на зебровото данио е мъртъв.
Environmental Toxicology and Chemistry 32: 1768-1783. .
Освен това излюпването в третираните и контролните групи се записва ежедневно, като се започва от 48-ия час.
Pharmacol.: 149 (2), 196-209
Наблюденията се записват на всеки 24 часа до края на изпитването.
Chapter C.4 of this Annex: Ready Biodegradability.
Апикални наблюдения за остра токсичност при зеброво данио 24—96 часа след оплождането.
Chapter C.29 of this Annex: Ready Biodegradability, CO2 in sealed vessels.
Време на експозиция
Chapter C.48 of this Annex: Fish Short Term Reproduction Assay.. See Appendix 4a.
24 часа
35, 4097–4102.
48 часа
Available: [http://www.iso.org].
72 часа
Series on Testing and Assessment No. 23, OECD, Paris.
96 часа
European Commission (2007) Commission recommendation 2007/526/EC of 18 June 2007 on guidelines for the accommodation and care of animals used for experimental and other scientific purposes (notified under document number C(2007) 2525) [http://eur-lex.europa.eu/LexUriServ/LexUriServ.do?uri=OJ:L:2007:197:0001:0089:EN:PDF]
Коагулирани ембриони
European Union (2010) Directive 2010/63/EU of the European Parliament and Council of 22 September 2010 on the protection of animals used for scientific purposes (OJ L 276, 20.10.2010, p.
Отсъствие на образуване на сомити
33).
е отделяне на опашна пъпка в страничен изглед
http://eur-lex.europa.eu/LexUriServ/LexUriServ.do?uri=OJ:L:2010:276:0033:0079:EN:PDF
Отсъствие на сърдечна дейност
Chapter C.2 of this Annex: Daphnia sp., Acute Immobilistaion Test.
Коагулация на ембриона: Коагулираните ембриони са млечнобели и под микроскопа изглеждат тъмни (вж. допълнение 5, фиг. 1).
Series on Testing and Assessment No. 54.
Броят на коагулираните ембриони се определя след 24, 48, 72 и 96 часа.
OECD, Paris.
Отсъствие на образуване на сомити: При температура от 26 ± 1 °C при нормално развит ембрион на зеброво данио след 20 часа се образуват около 20 сомита (вж. допълнение 5, фигура 2).
Detailed review paper “Fish embryo toxicity assays”.
Нормално развитият ембрион извършва спонтанни движения (контракции от единия до другия край).
UBA report under contract no.
Спонтанните движения са индикация за образуването на сомити.
20385422 German Federal Environment Agency, Berlin.
Отсъствието на сомити се записва след 24, 48, 72 и 96 часа.
Apical endpoint
Отсъствието на образувани сомити след 24 часа може да се дължи на общо забавяне на развитието.
Causing effect at population level.
Образуването на сомити следва да навакса забавянето най-късно след 48 часа.
Blastula
Ако това не стане, ембрионите се считат за мъртви.
A cellular formation around the animal pole that covers a certain part of the yolk.
Неотделяне на опашката: При нормално развиващ се ембрион на зеброво данио отделянето на опашката (вж. допълнение 5, фигура 3) от жълтъка се наблюдава след удължаване на задната част на тялото на ембриона.
A substance or a mixture
Неотделянето на опашка се записва след 24, 48, 72 и 96 часа.
Epiboly