natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Imax е по-голяма (>) от 1,5 пъти и разликата спрямо контролата (отрицателна) на разтворител е статистически значима (определена с двустранен t-тест на Стюдънт за несдвоени разлики);
A graph depicting dose-response curves for induction of luciferase activity and viability;
Клетъчната жизнеспособност е по-голяма (>) от 70 % при най-ниската концентрация с индукция на луциферазна активност над 1,5 пъти (т.е. при концентрацията, определяща ЕС1,5);
Description of any other relevant observations, if applicable.
Стойността на ЕС1,5 е по-малка от (<) 1000 μM (или < 200 μg/ml за изпитвани химикали без определено MW);
Discussion of the results obtained with the KeratinoSensTM assay;
има видима зависимост доза-отклик за луциферазната индукция (или двуфазен отклик, както е посочено в точка 33).
Consideration of the test method results within the context of an IATA, if other relevant information is available.
Ако в дадено извършено повтаряне са изпълнени всички от първите три условия, но не може да бъде наблюдавана ясна зависимост доза-отклик за луциферазната индукция, тогава резултатът от това извършено повтаряне следва да се счита за недостатъчен за формулиране на заключение и може да бъде необходимо допълнително изпитване (фигура 1).
Available at: http://www.unece.org/trans/danger/publi/ghs/ghs_rev05/05files_e.html.
Освен това, отрицателният резултат, получен с концентрации < 1000 μM (или < 200 μg/ml за изпитвани химикали без определено MW), следва също да се разглежда като недостатъчен за формулиране на заключение (вж. точка 11).
OECD Environment, Health and Safety publications, Series on Testing and Assessment No. 168.
Фигура 1
OECD, Paris.
Модел на прогнозиране, използвани в изследването KeratinoSensTM.
Chapter B.42 of this Annex: Skin sensitization: Local Lymph Node assay.
Прогнозирането по KeratinoSensTM следва да се разглежда в рамките на IATA и в съответствие с разпоредбите на точки 9 и 11.
Chapter B.50 of this Annex: Skin sensitization: Local Lymph Node assay: DA.
В редки случаи изпитваните химикали, които индуцират луциферазна активност при равнища, които са много близки до цитотоксичните, могат да бъдат положителни в някои извършени повтаряния при нетоксични равнища (т.е.
Chapter B.51 of this Annex: Skin sensitization: Local Lymph Node assay: BrdU-ELISA.
EC1,5, определяща концентрация под (<) IC30), а в други извършени повтаряния — само при цитотоксични равнища (т.е.
Recommendation on the KeratinoSensTM assay for skin sensitisation testing, 42 pp.
EC1,5, определяща концентрация над (>) IC30).
Available at: http://ihcp.jrc.ec.europa.eu/our_labs/eurl-ecvam/eurl-ecvam-recommendations/recommendation-keratinosens-skin-sensitisation.
Такива изпитвани химикали се изпитват отново с по-стеснен анализ доза-отклик, с използване на по-малък коефициент на разреждане (напр.
DB-ALM (INVITTOX) (2013) Protocol 155: KeratinoSensTM., 17 pp.
1,33 или √2 (= 1,41) кратно разреждане между гнездата), за да се определи дали индукцията е получена при цитотоксични нива, или не (9).
Available: http://ecvam-dbalm.jrc.ec.europa.eu/beta/index.cfm/methodsAndProtocols/index
Външен вид, разтворимост във вода, разтворимост в DMSO, молекулно тегло и допълнителни относими физични и химични свойства, според наличността;
OECD Guidelines for Chemical Testing No. 457.
Външен вид, разтворимост във вода, разтворимост в DMSO и допълнителни относими физични и химични свойства, според наличността;
The term is often used interchangeably with “concordance”, to mean the proportion of correct outcomes of a test method (29).
Външен вид, разтворимост във вода, разтворимост в DMSO, молекулно тегло и допълнителни относими физични и химични свойства, според наличността, където е приложимо;
Antioxidant response element (also called EpRE, electrophile response element), is a response element found in the upstream promoter region of many cytoprotective and phase II genes.
Отрицателно контрола (носител)
When activated by Nfr2, it mediates the transcriptional induction of these genes.
Химична идентификация, като наименование(я) по IUPAC или по CAS, CAS номер(а) и/или други идентификатори;
Interpolated concentration for a 1,5 fold luciferase induction.
Външен вид, молекулно тегло и допълнителни относими физични и химични свойства в случай че са използвани отрицателни контроли/носители, различни от упоменатите в настоящия метод за изпитване и в зависимост от наличността;
Concentration effecting a reduction of cellular viability by 30 %.
Обосновка за избора на разтворител за всеки изпитван химикал.
Concentration effecting a reduction of cellular viability by 50 %.
Условия на метода за изпитване
Maximal induction factor of luciferase activity compared to the solvent (negative) control measured at any test chemical concentration.
Описание на използвания метод за изпитване;
Kelch-like ECH-associated protein 1, is a sensor protein that can regulate the Nrf2 activity.
Използвана клетъчна линия, условия за нейното съхранение и източник (например мястото, от което са взети);
Under un-induced conditions the Keap1 sensor protein targets the Nrf2 transcription factor for ubiquitinylation and proteolytic degradation in the proteasome.
Брой пасажи и равнище на сливане на клетките, използвани за изпитването;
Covalent modification of the reactive cysteine residues of Keap 1 by small molecules can lead to dissociation of Nrf2 from Keap1 (8) (10) (11).
Метод на преброяване на клетките, използван за посяване преди изпитването, и мерки, предприети за гарантиране на хомогенно разпределение на броя на клетките (вж. точка 20);
Nuclear factor (erythroid-derived 2)-like 2, is a transcription factor involved in the antioxidant response pathway.
използван луминометър (напр. модел), включително настройки, използван луциферазен субстрат, и доказване на съответни измервания на луминесценцията въз основа на контролното изпитване, описано в допълнение 3;
When Nrf2 is not ubiquitinylated, it builds up in the cytoplasm and translocates into the nucleus, where it combines to the ARE in the upstream promoter region of many cytoprotective genes, initiating their transcription (8) (10) (11).
Процедурата, използвана за доказване на пригодността на лабораторията за извършване на метода за изпитване (например чрез изпитване на вещества за изпитването за пригодност), или за доказване на възпроизводимостта на характеристиките на метода за изпитване във времето.
Relevance incorporates consideration of the accuracy (concordance) of a test method (29).
Процедура за изпитване
It is assessed by calculating intra- and inter-laboratory reproducibility and intra-laboratory repeatability (29).
Брой на извършените повтаряния и използвани повторения;
The agreement among results obtained from testing the same chemical using the same test protocol (see reliability) (29).
Концентрации на изпитвания химикал, процедура за прилагане и продължителност на експозицията (ако е различно от препоръчаното)
The proportion of all positive / active chemicals that are correctly classified by the test method.
Представяне в табличен вид на Imax, EC1,5 и стойностите за жизнеспособността (т.е.
It is a measure of accuracy for a test method that produces categorical results, and is an important consideration in assessing the relevance of a test method (29).
IC50, IC30), получени за изпитвания химикал и за положителната контрола за всяко извършено повтаряне, както и средните стойности (Imax: средна стойност; EC1,5 и стойностите за жизнеспособността: средно геометрично) и SD, изчислени с използване на данните от всички отделно извършени повтаряния, и посочване на ранга на изпитвания химикал в съответствие с модела за прогнозиране;
A replicate containing all components of a test system except of the test chemical, but including the solvent that is used.
Коефициент на вариация, получен за отчетените стойности за луминесценцията в отрицателната контрола за всеки опит;
It is used to establish the baseline response for the samples treated with the test chemical dissolved in the same solvent.
Графика, показваща кривите доза-отклик за индукцията на луциферазна активност и за жизнеспособността;
The proportion of all negative / inactive chemicals that are correctly classified by the test method.
Описание на всякакви други относими наблюдения, ако е приложимо.
It is a measure of accuracy for a test method that produces categorical results and is an important consideration in assessing the relevance of a test method (29).
Обсъждане на резултатите, получени с изследването KeratinoSensTM;
A test method is never valid in an absolute sense, but only in relation to a defined purpose (29).
Разглеждане на резултатите от метода за изпитване в рамките на контекста на IATA, ако е налична друга относима информация.
In Vitro Skin Sensitisation: ARE-Nrf2 Luciferase Test Method
На разположение на адрес: http://www.unece.org/trans/danger/publi/ghs/ghs_rev05/05files_e.html.
Prior to routine use of this test method, laboratories should demonstrate technical proficiency by correctly obtaining the expected KeratinoSens™ prediction for the 10 Proficiency Substances recommended in Table 1 and by obtaining the EC1,5 and IC50 values that fall within the respective reference range for at least 8 out of the 10 proficiency substances.
OECD Environment, Health and Safety publications, Series on Testing and Assessment No.
These Proficiency Substances were selected to represent the range of responses for skin sensitisation hazards.
OECD, Paris.
Other selection criteria were commercial availability, availability of high quality in vivo reference, and availability of high quality in vitro data from the KeratinoSens™ assay.
Глава Б.42 от настоящото приложение: Кожна сенсибилизация: изследване на локалните лимфни възли.
Recommended substances for demonstrating technical proficiency with the KeratinoSens™ assay
Глава Б.50 от настоящото приложение: Кожна сенсибилизация: изследване на локалните лимфни възли: DA.
Proficiency Substances
Глава Б.51 от настоящото приложение: Кожна сенсибилизация: изследване на локалните лимфни възли: BrdU-ELISA.
In Vivo Prediction [1]
Recommendation on the KeratinoSensTM assay for skin sensitisation testing, 42 pp.
KeratinoSens™ Prediction [2]
На разположение на адрес: http://ihcp.jrc.ec.europa.eu/our_labs/eurl-ecvam/eurl-ecvam-recommendations/recommendation-keratinosens-skin-sensitisation.
,5 (μM) Reference Range [3]
DB-ALM (INVITTOX) (2013) Protocol 155: KeratinoSensTM, 17 pp.
(μM ) Reference Range [3]
Available: http://ecvam-dbalm.jrc.ec.europa.eu/beta/index.cfm/methodsAndProtocols/index
Isopropanol
OECD Guidelines for Chemical Testing No.
Non-sensitiser
Терминът често се използва взаимозаменяемо с термина „съответствие“, за да се обозначи относителният дял на правилните резултати при даден метод за изпитване (29).
Salicylic acid
елемент, активиращ се в отговор на антиоксидантно въздействие (наричан също EpRE, елемент, активиращ се в отговор на електрофилно въздействие), е елемент, активиращ се в отговор на въздействие, разположен в участъка на промотор, предшестващ останалите участъци в посоката на транскрипцията, в множество цитопротективни гени и гени от фаза II.
Lactic acid
Когато се активира чрез Nfr2, той е посредник при транскрипционната индукция на тези гени.
Cinnamyl alcohol
Интерполирана концентрация за 1,5 кратна луциферазна индукция.
Sensitiser (weak)
Концентрация, предизвикваща намаляване на клетъчната жизнеспособност с 30 %.
25 - 175
Концентрация, предизвикваща намаляване на клетъчната жизнеспособност с 50 %.
Ethylene glycol dimethacrylate
максималната кратност на индукцията на луциферазна активност (Imax) по отношение на контролата на разтворител (отрицателната контрола), измерена при която и да е концентрация на изпитван химикал
5 - 125
Keap1 (Kelch-like ECH-associated protein) представлява рецепторен белтък, който може да регулира активността на Nrf2.
ercaptobenzothiazole
В отсъствие на индукция рецепторният белтък Keap1 се насочва към транскрипционния фактор Nrf2, с оглед убиквитиниране и протеолитично разграждане в протеазомата.
Sensitiser (moderate)
Ковалентно изменение на реактивните цистеинови остатъци на Keap1 от малки молекули може да доведе до дисоциация на Nrf2 от Keap1 (8) (10) (11).
25 - 250
Ядреният фактор „(erythroid-derived 2)-like 2“ е транскрипционен фактор, участващ в пътя за антиоксидантен отговор.
Methyldibromo glutaronitrile
Когато Nrf2 не е убиквитиниран, той се отделя в цитоплазмата и се транслоцира в ядрото, където се свързва с ARE в участъка на промотора, предшестващ останалите участъци в посоката на транскрипцията в множество цитопротективни гени, като инициира транскрипцията им (8) (10) (11).
Sensitiser (strong)
Относимостта включва разглеждането на точността (съответствието) на метода за изпитване (29).
20 - 100
Оценката за нея се прави като се изчислява вътрешнолабораторната и междулабораторната възпроизводимост и вътрешнолабораторната повторяемост (29).
ethylaminophenol sulfate
Съгласуваността между резултатите, получени чрез изследване на същия химикал, като се използва същият протокол за изпитване (вж. надеждност) (29).
20 - 200
Относителният дял на всички положителни/активни химикали, които са класифицирани правилно чрез метода за изпитване.
2,4-Dinitro-chlorobenzene
Това е мярка за точността на метода за изпитване, която предоставя категорични резултати и е важен фактор при оценката на относимостта на метода за изпитване (29).
Sensitiser (extreme)
Повторение, съдържащо всички съставки на дадена изпитвана система, с изключение на изпитвания химикал, но с разтворителя, който се използва.
5 - 20
Използва се за определяне на базовия отклик на пробите, третирани с изпитвания химикал, разтворен в същия разтворител.
The in vivo hazard (and potency) predictions are based on LLNA data (13).
Относителният дял на всички отрицателни/неактивни химикали, които са класифицирани правилно чрез метода за изпитване.
The in vivo potency is derived using the criteria proposed by ECETOC (24).
Това е мярка за точността на метода за изпитване, която предоставя категорични резултати и е важен фактор при оценката на относимостта на метода за изпитване (29).
A KeratinoSens™ prediction should be considered in the framework of an IATA and in accordance with the provisions of paragraphs 9 and 11 of this test method.
Даден метод за изпитване никога не е валиден в абсолютен смисъл, а само по отношение на определена цел (29).
Based on the historical observed values (12).
In vitro кожна сенсибилизация: Метод за изпитване ARE-Nrf2 луцифераза
QUALITY CONTROL OF LUMINESCENCE MEASUREMENTS
Преди рутинното използване на настоящия метод за изпитване, лабораториите следва да докажат техническата си компетентност, като правилно получат очакваната прогноза по KeratinoSenTM за 10-те вещества за изпитване за пригодност, препоръчани в Таблица 1, и чрез получаване на стойности за EC1,5 и IC50, които попадат в съответния референтен обхват за минимум 8 от 10-те вещества за изпитване за пригодност.
Basic experiment for ensuring optimal luminescence measurements in the KeratinoSens™ assay
Тези вещества за изпитване за пригодност са подбрани като представителни за размаха от отклици за опасностите от кожна сенсибилизация.
The following three parameters are critical to ensure obtaining reliable results with the luminometer:
Други критерии за подбор са, че те са налични в търговската мрежа, че са налични висококачествени in vivo референтни данни и че са налични висококачествени in vitro данни от изследването KeratinoSensTM.
having a sufficient sensitivity giving a stable background in control wells;
Препоръчвани вещества за доказване на техническа компетентност по отношение на изследването KeratinoSensTM
having no gradient over the plate due to long reading times; and
Вещества за изпитване за пригодност
having no light contamination in adjacent wells from strongly active wells.
In vivo прогноза [1]
Prior to testing it is recommended to ensure having appropriate luminescence measurements, by testing a control plate set-up as described below (triplicate analysis).
KeratinoSensTM Прогноза [2]
Plate setup of first training experiment
Референтен обхват EC1,5 (μM) (3)
Blank
Референтен обхват EC50 (μM) [3]
EGDMA Ethylene glycol dimethacrylate (CAS No.: 97-90-5) a strongly inducing chemical
Изопропанол
CA Cinnamic aldehyde, positive reference (CAS No.: 104-55-2)
Непредизвикващо сенсибилизация вещество
The quality control analysis should demonstrate:
Салицилова киселина
a clear dose-response in row D, with the Imax > 20 fold above background (in most cases Imax values between 100 and 300 are reached);
Млечна киселина
no dose-response in row C and E (no induction value above 1,5 (ideally not above 1,3) due to possible light contamination especially next to strongly active wells in the EGDMA row;
Цинамилов алкохол
no statistically significant difference between the rows A, B, C, E, F and G. (i.e. no gradient over plate); and
Сенсибилизатор (слаб)
variability in any of the rows A, B, C, E, F and G and in the DMSO wells in row H should be below 20 % (i.e. stable background).
25 — 175
B.61 Fluorescein Leakage Test Method for Identifying Ocular Corrosives and Severe Irritants
Етиленгликолдиметакрилат
This test method (TM) is equivalent to OECD test guideline (TG) 460 (2012).
5 — 125
The Fluorescein Leakage (FL) test method is an in vitro test method that can be used under certain circumstances and with specific limitations to classify chemicals (substances and mixtures) as ocular corrosives and severe irritants, as defined by the United Nations (UN) Globally Harmonized System of Classification and Labelling of Chemicals (GHS) (Category 1), Regulation (EC) No1272/2008 on Classification, Labelling and Packaging of Substances and Mixtures (CLP) [19] (Category 1), and the U.S. Environmental Protection Agency (EPA) (Category I) (1)(2).
еркаптобензотиазол
For the purpose of this test method, severe ocular irritants are defined as chemicals that cause tissue damage in the eye following test chemical administration that is not reversible within 21 days or causes serious physical decay of vision, while ocular corrosives are chemicals that cause irreversible tissue damage to the eye.
Сенсибилизатор (умерен)
These chemicals are classified as UN GHS Category 1, EU CLP Category 1, or U.S. EPA Category I.While the FL test method is not considered valid as a complete replacement for the in vivo rabbit eye test, the FL is recommended for use as part of a tiered testing strategy for regulatory classification and labelling.
25 — 250
Thus, the FL is recommended as an initial step within a Top-Down approach to identify ocular corrosives/severe irritants, specifically for limited types of chemicals (i.e. water soluble substances and mixtures) (3)(4).
Метилдибромоглутаронитрил
It is currently generally accepted that, in the foreseeable future, no single in vitro eye irritation test will be able to replace the in vivo eye test (TM B.5 (5)) to predict across the full range of irritation for different chemical classes.
Сенсибилизатор (силен)
However, strategic combinations of several alternative test methods within a (tiered) testing strategy may be able to replace the in vivo eye test (4).
20 — 100
The Top-Down approach (4) is designed to be used when, based on existing information, a chemical is expected to have high irritancy potential.
етиламинофенолсулфат
Based on the prediction model detailed in paragraph 35, the FL test method can identify chemicals within a limited applicability domain as ocular corrosives/severe irritants (UN GHS Category 1; EU CLP Category 1; U.S. EPA Category I) without any further testing.
20 — 200
The same is assumed for mixtures although mixtures were not used in the validation.
2,4-динитрохлоробензен
Therefore, the FL test method may be used to determine the eye irritancy/corrosivity of chemicals, following the sequential testing strategy of TM B.5 (5).
Сенсибилизатор (изключително силен)
However, a chemical that is not predicted as ocular corrosive or severe irritant with the FL test method would need to be tested in one or more additional test methods (in vitro and/or in vivo) that are capable of accurately identifying i) chemicals that are in vitro false negative ocular corrosives/severe irritants in the FL (UN GHS Category 1; EU CLP Category 1; U.S. EPA Category I); ii) chemicals that are not classified for eye corrosion/irritation (UN GHS No Category; EU CLP No Category; U.S. EPA Category IV); and/or iii) chemicals that are moderate/mild eye irritants (UN GHS Categories 2A and 2B; EU CLP Category 2; U.S. EPA Categories II and III).
5 — 20
The purpose of this test method is to describe the procedures used to evaluate the potential ocular corrosivity or severe irritancy of a test chemical as measured by its ability to induce damage to an impermeable confluent epithelial monolayer.
In vivo прогнозите за опасност (и потенциал) се основават на данни от LLNA (13).
The integrity of trans-epithelial permeability is a major function of an epithelium such as that found in the conjunctiva and the cornea.
In vivo потенциалът е изведен с използване на критериите, предложени от ECETOC (24).
Trans-epithelial permeability is controlled by various tight junctions.
Прогнозата по KeratinoSensTM следва да се разглежда в рамките на IATA и в съответствие с разпоредбите на точки 9 и 11 от настоящия метод за изпитване.
Increasing the permeability of the corneal epithelium in vivo has been shown to correlate with the level of inflammation and surface damage observed as eye irritation develops.
Въз основа на наблюдавани стойности от предходни периоди (12).
In the FL test method, toxic effects after a short exposure time to the test chemical are measured by an increase in permeability of sodium fluorescein through the epithelial monolayer of Madin-Darby Canine Kidney (MDCK) cells cultured on permeable inserts.
КОНТРОЛ НА КАЧЕСТВОТО ПРИ ИЗМЕРВАНИЯТА НА ЛУМИНЕСЦЕНЦИЯТА
The amount of fluorescein leakage that occurs is proportional to the chemical-induced damage to the tight junctions, desmosomal junctions and cell membranes, and can be used to estimate the ocular toxicity potential of a test chemical.
Основен опит за осигуряването на оптимални измервания на луминесценцията в изследването KeratinoSensTM
Appendix 1 provides a diagram of MDCK cells grown on an insert membrane for the FL test method.
Следните три параметъра са от решаващо значение, за да се гарантира получаването на надеждни резултати с луминометъра:
Definitions are provided in Appendix 2.
наличие на достатъчна чувствителност, даваща стабилен фон в гнездата с контролите;
This test method is based on the INVITTOX protocol No. 71 (6) that has been evaluated in an international validation study by the European Centre for the Validation of Alternative Methods (ECVAM), in collaboration with the US Interagency Coordinating Committee on the Validation of Alternative Methods (ICCVAM) and the Japanese Center for the Validation of Alternative Methods (JaCVAM).
отсъствие на градиент в плаката, дължащ се на продължителното време за отчитане на стойностите; както и
The FL test method is not recommended for the identification of chemicals which should be classified as mild/moderate irritants or of chemicals which should not be classified for ocular irritation (substances and mixtures) (i.e. GHS Cat.
отсъствие на светлинно замърсяване в прилежащите гнезда от гнезда с висока активност.
2A/2B, no category; EU CLP Cat.
Преди изпитването се препоръчва да се гарантира наличието на подходящи измервания на луминесценцията чрез изпитване на план с контролна плака, описан по-долу (анализ с три повторения).
2, no category; US EPA Cat.
План за плака за първия предварителен опит
II/III/IV), as demonstrated by the validation study (3) (7).
Празна проба
The test method is only applicable to water soluble chemicals (substances and mixtures).
EGDMA Етиленгликолдиметакрилат (CAS №: 97-90-5) силно индуциращ химикал
The ocular severe irritation potential of chemicals that are water soluble and/or where the toxic effect is not affected by dilution is generally predicted accurately using the FL test method (7).
CA Канелен алдехид, положителна референтна контрола (CAS №: 104-55-2)
To categorise a chemical as water soluble, under experimental conditions, it should be soluble in sterile calcium-containing (at a concentration of 1,0-1,8 mM), phenol red-free, Hanks' Balanced Salt Solution (HBSS) at a concentration ≥ 250 mg/ml (one dose above the cut-off of 100 mg/ml).