natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Характеристиките, които показват, че изпитването на химикала във водни системи може да е трудно, включват:
Therefore, the total daily amount of food should be divided into smaller portions and fed at least twice daily.
високи коефициенти на разпределение октанол/вода (log Kow), висока летливост, склонност към хидролиза и склонност към фотолиза при заобикалящите условия на осветеност в лабораторията.
For this feed the feeding regime is outlined in Table 1.
Други фактори също могат да бъдат относими за определянето на изпитваемостта и следва да бъдат определяни за всеки отделен случай.
Feeding rates should be recorded.
Ако за химикала не е възможно успешно изпитване с използване на проточна система, може да се използва статична система с обновяване.
It can be fed dry or as a stock solution prepared in dilution water.
Ако нито една от тези системи не е в състояние да бъде адаптирана за изпитвания химикал, тогава по подразбиране той не следва да бъде изпитван по настоящия протокол.
Such a stock solution should be freshly prepared every other day and stored at 4 °C when not in use.
Система на експозиция
Feeding regime with commercial tadpole feed used in the validation studies for X. laevis tadpolesduring the in-life portion of the AMA in flow-through conditions
Системата с проточно разреждащо устройство, когато е възможно нейното използване, се предпочита пред статичната система с обновяване.
Study Day
Ако физическите и/или химическите свойства на някой от изпитваните химикали не позволяват използване на системата с проточно разреждащо устройство, може като алтернатива да се използва друга система (например статична система с обновяване).
Food ration (mg feed/animal/day)
Компонентите на системата трябва да имат компоненти за контакт с водата, изготвени от стъкло, неръждаема стомана и/или политетрафлуороетилен.
Analytical Chemistry
Независимо от това, може да бъде използвана подходяща пластмаса, ако не излага на риск изследването.
Prior to conducting a study, the stability of the test chemical should be evaluated using existing information on its solubility, degradability and volatility.
Съдовете за експозицията трябва да са аквариуми от стъкло или неръждаема стомана, оборудвани с вертикални тръби, в резултат на което съдът е с приблизителен обем между 4,0 и 10,0 l и с минимална дълбочина на водата от 10 до 15 cm.
Test solutions from each replicate tank at each concentration should be sampled for analytical chemistry analyses at test initiation (day 0), and weekly during the test for a minimum of four samples.
Системата следва да бъде в състояние да поддържа всички концентрации на експозиция и контрола, с четири повторения на третиране.
It is also recommended that each test concentration be analysed during system preparation, prior to test initiation, to verify system performance.
Дебитът на потока към всеки съд трябва да бъде постоянен по отношение както на поддържането на биологичните условия, така и на експозицията на химикала (напр.
In addition, it is recommended that stock solutions be analysed when they are changed, especially if the volume of the stock solution does not provide adequate amounts of chemical to span the duration of routine sampling periods.
25 ml/min).
In the case of chemicals which cannot be detected at some or all of the concentrations used in a test, stock solutions should be measured and system flow rates recorded in order to calculate nominal concentrations.
Местоположението на съдовете за третирането трябва да бъде определено на случаен принцип в рамките на системата за изпитването, с цел намаляване на потенциалните въздействия на местоположението, включително леките колебания в температурата, светлинния интензитет и др.
Chemical Delivery
Следва да се използва флуоресцентно осветление за осигуряване на период на осветеност от 12 часа светлина:
The method used to introduce the test chemical to the system can vary depending on its physicochemical properties.
12 часа тъмнина при интензитет от 600 до 2000 лукса (lumen/m2) на повърхността на водата.
Water soluble chemicals can be dissolved in aliquots of test water at a concentration which allows delivery at the target test concentration in a flow-through system.
Температурата на водата трябва да се поддържа на 22° ± 1 °C, рН се поддържа между 6,5 и 8,5, а концентрацията на разтворения кислород (DO) > 3,5 mg/l (> 40 % от стойността на насищане при равновесие с атмосферния въздух) във всеки съд за изпитване.
Chemicals which are liquid at room temperature and sparingly soluble in water can be introduced using liquid:liquid saturator methods.
Като минимум температурата на водата, рН и разтвореният кислород трябва да се измерват всяка седмица;
Chemicals which are solid at room temperature and are sparingly soluble in water can be introduced using glass wool column saturators (7).
за предпочитане е температурата да се измерва непрекъснато поне в един от съдовете за изпитване.
The preference is to use a carrier-free test system, however different test chemicals will possess varied physicochemical properties that will likely require different approaches for preparation of chemical exposure water.
В допълнение 1 се описват накратко условията на опита, при които следва да бъде изпълнен протоколът.
It is preferred that effort be made to avoid solvents or carriers because:
За допълнителна информация относно проточната система за експозиция, или статичната система с обновяване се използват Ръководството на ASTM за извършване на изпитвания за остра токсичност за материали с риби, макробезгръбначни и земноводни (5), както и общи изследвания за токсичност във водна среда.
certain solvents themselves may result in toxicity and/or undesirable or unexpected endocrinological responses, ii) testing chemicals above their water solubility (as can frequently occur through the use of solvents) can result in inaccurate determinations of effective concentrations, and iii) the use of solvents in longer-term tests can result in a significant degree of “biofilming” associated with microbial activity.
Качество на водата
For difficult to test chemicals, a solvent may be employed as a last resort, and the OECD Guidance Document on aquatic toxicity testing of difficult substances and mixtures should be consulted (4) to determine the best method.
Може да се използва всякаква вода, която се предлага на местно равнище (напр. изворна вода или филтрувана с въглен чешмяна вода) и позволява нормален растеж и развитие на поповите лъжички на X. laevis.
Solvents which have been found to be effective for aquatic toxicity testing include acetone, ethanol, methanol, dimethyl formamide and triethylene glycol.
Тъй като качеството на водата на местно равнище може да се различава значително от едно място на друго, следва да се извърши анализ на качеството на водата, по-специално ако няма на разположение данни за предходни периоди относно полезността на водата за отглеждане на Xenopus.
In case a solvent carrier is used, solvent concentrations should be below the chronic No Observed Effect Concentration (NOEC);
Следва да се обърне специално внимание водата да не съдържа мед, хлор и хлорамини, всички от които са токсични за жабите и поповите лъжички.
the OECD Guidance Document recommends a maximum of 100 μl/l;
Освен това се препоръчва да се анализира водата за фонови нива на флуорид, перхлорат и хлорат (странични продукти от дезинфекцията на водата за пиене), тъй като всички тези аниони са субстрати за транспортирането на йод за щитовидната жлеза и повишени нива на всеки от тези аниони може да доведат до невъзможност за разграничаване на резултатите от изследването.
a recent review recommends that solvent concentrations as low as 20 μl/l of dilution water be used (12).
Анализът следва да се извърши преди да започне изпитването и водата за изпитване по принцип трябва да не съдържа тези аниони.
If solvent carriers are used, appropriate solvent controls should be evaluated in addition to non-solvent controls (clean water).
Концентрация на йодид във водата за изпитване
If it is not possible to administer a chemical via the water, either because of physicochemical characteristics (low solubility) or limited chemical availability, introducing it via the diet may be considered.
За да може щитовидната жлеза да синтезира хормони, на разположение на ларвите трябва да има достатъчно йодид, чрез съчетание от източници на вода и на храна.
Preliminary work has been conducted on dietary exposures;
Понастоящем не съществуват емпирично изведени насоки за минималните концентрации на йодид.
however, this route of exposure is not commonly used.
Независимо от това наличността на йодид може да засегне способността на тиреоидната система да реагира на средства, активни по отношение на щитовидната жлеза, и за тази наличност е известно, че променя основната дейност на щитовидната жлеза — аспект, който заслужава внимание при интерпретиране на резултатите от тиреоидната хистопатология.
The choice of method should be documented and analytically verified.
Следователно, измерената концентрация на йодид във водата за изпитване следва да бъде протоколирана.
Establishing the High Test Concentration
Въз основа на наличните данни от проучванията за валидиране е доказано, че протоколът функционира добре, когато концентрацията на йодид (I–) във водата за изпитване е била между 0,5 и 10 μg/l.
For the purposes of this test, the high test concentration should be set by the solubility limit of the test chemical;
В идеалния случай минималната концентрация на йодид във водата за изпитване трябва да бъде 0,5μg/l.
the maximum tolerated concentration (MTC) for acutely toxic chemicals;
Ако водата за изпитване е възстановена от дейонизирана вода, йодът следва да се добави при минимална концентрация от 0,5μg/l.
or 100 mg/l, whichever is lowest.
Всяко допълнително добавяне на вода за изпитване с йод или други соли следва да се отбележи в протокола.
The MTC is defined as the highest test concentration of the chemical which results in less than 10 % acute mortality.
Отглеждане на животни
Using this approach assumes that there are existing empirical acute mortality data from which the MTC can be estimated.
Грижи за полово зрелите индивиди и за размножаването
Although the use of regression models may be the most technically sound approach to estimating the MTC, a useful approximation of the MTC can be derived from existing acute data by using 1/3 of the acute LC50 value.
Грижите за полово зрелите индивиди и за размножаването се полагат в съответствие със стандартните насоки и за по-подробна информация читателят се насочва към стандартното ръководство за изследване на тератогенезата при жабешки ембриони (FETAX) (6).
However, acute toxicity data may be lacking for the species on test.
Такива стандартни насоки предоставят пример за подходящи грижи и методи на размножаване, но не се изисква строго спазване.
If species specific acute toxicity data are not available, then a 96-hour LC50 test can be completed with tadpoles that are representative (i.e., same stage) of those on test in the AMA.
За предизвикване на размножаването двойки (3-5) от полово зрели женски и мъжки индивиди се инжектират с човешки хорионен гонадотропин (hCG).
Optionally, if data from other aquatic species are available (e.g. LC50 studies in fish or other amphibian species), then professional judgment may be used to estimate a likely MTC based on inter-species extrapolation.
Женски и мъжки екземпляри се инжектират съответно с около 800 IU-1000 IU и 600 IU-800 IU hCG, разтворен в 0,6-0,9 % физиологичен разтвор.
Alternatively, if the chemical is not acutely toxic and is soluble above 100 mg/l, then 100 mg/l should be considered the highest test concentration (HTC), as this concentration is typically considered “practically non-toxic.”
Двойките за размножаване се държат в големи съдове, без външно въздействие и при статични условия, за да се насърчи репродуктивното поведение.
Although not the recommended procedure, static renewal methods may be used where flow-through methods are inadequate to achieve the MTC.
На дъното на всеки съд за размножаване следва да има лъжливо дъно от мрежа от неръждаема стомана или пластмаса, което да позволява на яйцата да изпаднат на дъното на съда.
If static renewal methods are used, then the stability of the test chemical concentration should be documented and remain within the performance criteria limits.
Жаби, инжектирани в късния следобед, обикновено полагат повечето от яйцата си до средата на сутринта на следващия ден.
Twenty-four hour renewal periods are recommended.
След получаването и оплождането на достатъчно количество яйца, полово зрелите индивиди следва да бъдат отстранени от съдовете за размножаване.
Renewal periods exceeding 72 hours are not acceptable.
Грижи за ларвите и подбор
Additionally, water quality parameters (e.g. DO, temperature, pH, etc.) should be measured at the end of each renewal period, immediately prior to renewal.
След като полово зрелите индивиди бъдат отстранени от съдовете за размножение, яйцата се събират и се оценявани за жизнеспособност, с използване на представителна извадка от ембриони, взета от всички съдове за размножение.
Test Concentration Range
Най-доброто отделно снасяне (или снасяния) на яйца (препоръчват се 2-3 за оценяване на качеството на яйцата) следва да бъде запазено, на база на жизнеспособността на ембрионите и наличието на достатъчен брой ембриони (минимум 1500).
There is a required minimum of three test concentrations and a clean water control (and vehicle control if necessary).
Всички организми, които се използват в изследването, следва да произхождат само от едно снасяне на яйца (т.е. не следва да се смесват снасяния на яйца).
The minimum test concentration differential between the highest and lowest should be about one order of magnitude.
Ембрионите се прехвърлят в голямо, плоско блюдо или чиния и всички очевидно мъртви или необичайни яйца (виж определението в (5)) се отстраняват с помощта на пипета или капкомер за очи.
The maximum dose separation is 0,1 and the minimum is 0,33.
Здравите ембриони от всяко от трите снасяния на яйца се прехвърлят в три отделни съда за излюпване.
Test Initiation and Conduct
Четири дни след поставянето в съдовете за излюпване най-доброто снасяне на яйца, въз основа на жизнеспособността и успешното излюпване, се избира и ларвите се прехвърлят в подходящ брой съдове за отглеждане при 22° ± 1 °C.
The exposure should be initiated when a sufficient number of tadpoles in the pre-exposure stock population have reached developmental stage 51, according to Nieuwkoop and Faber (8), and which are less than or equal to 17 days of age post fertilisation.
Освен това, някои допълнителни ларви се преместват в допълнителни съдове за употреба за замяна в случай че се появи смъртност в съдовете за отглеждане през първата седмица.
For selection of test animals, healthy and normal looking tadpoles of the stock population should be pooled in a single vessel containing an appropriate volume of dilution water.
Тази процедура поддържа последователна гъстота на организмите и по този начин намалява различията в рамките на кохортата от отделното снасяне на яйца.
For developmental stage determination, tadpoles should be individually removed from the pooling tank using a small net or strainer and transferred to a transparent measurement chamber (e.g. 100 mm Petri dish) containing dilution water.
Всички съдове за отглеждане следва да се източват ежедневно.
For stage determination, it is preferred not to use anaesthesia, however one may individually anaesthetise the tadpoles using 100 mg/l tricaine methanesulfonate (e.g. MS-222), appropriately buffered with sodium bicarbonate (pH 7,0), before handling.
Като предпазна мярка, виниловите или нитрилните ръкавици са за предпочитане пред латексовите ръкавици.
If used, methodology for appropriately using e.g. MS-222 for anaesthesia should be obtained from experienced laboratories and reported with the test results.
При смъртност през първата седмица, умрелите екземпляри следва да се отстраняват ежедневно и следва да се добавят от приготвените за замяна ларви, за да се поддържа гъстотата на организмите.
Animals should be carefully handled during this transfer in order to minimise handling stress and to avoid any injury.
Храненето следва да е поне два пъти на ден.
The developmental stage of the animals is determined using a binocular dissection microscope.
По време на фазата преди експозицията поповите лъжички се аклиматизират към условията на действителната фаза на експозиция, включително вида на храната, температурата, цикъла светлина-тъмнина и средата за отглеждането.
To reduce the ultimate variability in developmental stage, it is important that this staging be conducted as accurately as possible.
Ето защо се препоръчва по време на фазата преди експозицията и на фазата на експозиция да се използва една и съща вода за отглеждането/разреждането.
According to Nieuwkoop and Faber (8), the primary developmental landmark for selecting stage 51 organisms is hind limb morphology.
Ако се използва статична система за отглеждане за поддържането на поповите лъжички по време на фазата преди експозицията, средата за отглеждане следва да се заменя изцяло поне два пъти седмично.
The morphological characteristics of the hind limbs should be examined under the microscope.
Следва да се избягват струпвания, предизвикани от голямата гъстота на ларвите по време на фазата преди експозицията, тъй като такива ефекти могат да засегнат чувствително развитието на поповите лъжички по време на следващата след това фаза на изпитването.
While the complete Nieuwkoop and Faber (8) guide should be consulted for comprehensive information on staging tadpoles, one can reliably determine stage using prominent morphological landmarks.
Поради това гъстотата на отглеждането не трябва да надвишава приблизително четири попови лъжички на литър среда за отглеждане (статична система на експозиция) или 10 попови лъжички на литър среда за отглеждане (напр. с дебит 50 ml/min във системата преди експозицията или системата за отглеждане).
The following table can be used to simplify and standardise the staging process throughout the study by identifying those prominent morphological landmarks associated with different stages, assuming that development is normal.
При тези условия поповите лъжички следва да се развият от етапи 45/46 към етап 51 в рамките на дванадесет дни.
Prominent morphological staging landmarks based on Neuwkoop and Faber guidance
Поповите лъжички, които са представителни екземпляри за тази изходна популация, следва да бъдат проверявани ежедневно за етапа на развитие, с цел да се определи подходящият момент за започване на експозицията.
Prominent Morphological Landmarks
Следва да се положат грижи за свеждане до минимум на стреса и травмирането на поповите лъжички, особено по време на преместване, почистване на аквариумите и манипулиране на ларвите.
Developmental Stage
Следва да бъдат избягвани стресиращите условия/действия, като например висок и/или непрекъснат шум, почукване по аквариума, вибрации в аквариума, прекомерна активност в лабораторията и резки промени в компонентите на околната среда (наличие на светлина, температура, pH, DO, дебит на водния поток и т.н.).
Hindlimb
Ако поповите лъжички не се развият до етап 51 в срок от 17 дни след оплождането, за потенциална причина следва да бъде считан прекомерният стрес.
Forelimb
Отглеждане и хранене на ларвите
Craniofacial structure
Поповите лъжички биват хранени напр. с достъпните в търговската мрежа храни за попови лъжички, използвани в изследванията за валидиране (вж. също допълнение 1) през целия период преди експозицията (по Nieuwkoop и Faber (NF) етап 45/46 (8)) и през целия период на изпитването от 21 дни, или са на друг хранителен режим, за който е доказано, че дава резултати, еквивалентни на тези в изследването за метаморфоза на земноводни.
Olfactory nerve morphology
Хранителният режим през целия период преди експозицията следва внимателно да се регулира така, че да отговаря на нуждите на развиващите се попови лъжички.
Tail length
Това означава, че на новоизлюпените малки попови лъжички следва да бъдат давани малки порции храна няколко пъти на ден (поне два пъти).
For test initiation, all tadpoles should be at stage 51.
Следва да се избягва прекомерното количество с цел i) да се запази качеството на водата и ii) да се предотврати задръстването на хрилните филтри с частици храна и детрит.
The most prominent morphological staging landmark for that stage is hind limb morphology, which is demonstrated in Figure 1.
За храните за попови лъжички, използвани в изследванията за валидиране, дневните хранителни дажби следва да бъдат увеличавани с растежа на поповите лъжички до около 30 mg на индивид на ден малко преди започването на изпитването.
Hind limb morphology of a stage 51 X. laevis tadpole
При проучванията за валидиране е доказано, че тази достъпна в търговската мрежа храна допринася за нормалния растеж и развитие на поповите лъжички на Х. laevis и същата представлява фини частици, суспендирани във водния стълб за дълъг период от време и подлежи на отмиване с оттока.
In addition to the developmental stage selection, an optional size selection of the experimental animals may be used.
Следователно общото дневно количество храна следва да се разделя на по-малки порции и да се дава поне два пъти дневно.
For this purpose, the whole body length (not SVL) should be measured at day 0 for a sub-sample of approximately 20 NF stage 51 tadpoles.
Хранителният режим за тази храна е посочен в таблица 1.
After calculation of the mean whole body length for this group of animals, minimum and maximum limits for the whole body length of experimental animals can be set by allowing a range of the mean value ± 3 mm (mean values of whole body length range between 24,0 and 28,1 mm for stage 51 tadpoles).
Скоростите на подаване на храната трябва да бъдат записвани.
However, developmental staging is the primary parameter in determining the readiness of each test animal.
Тя може да се дава в сухо състояние или като изходен разтвор, приготвен във вода за разреждане.
Tadpoles exhibiting grossly visible malformations or injuries should be excluded from the assay.
Този изходен разтвор трябва да се приготвя прясно през ден и да се съхранява при температура 4 °C, когато не се използва.
Tadpoles that meet the stage criteria described above are held in a tank of clean culture water until the staging process is completed.
Режим на хранене с храна за попови лъжички от търговската мрежа, използван в изследванията за валидиране за попови лъжички на Х. laevis по време на интравиталната част от ИМЗ в проточни условия
Once the staging is completed, the larvae are randomly distributed to exposure treatment tanks until each tank contains 20 larvae.
Ден от проучването
Each treatment tank is then inspected for animals with abnormal appearance (e.g., injuries, abnormal swimming behaviour, etc.).
Хранителната дажба (mg храна на индивид на ден)
Overtly unhealthy looking tadpoles should be removed from the treatment tanks and replaced with larvae newly selected from the pooling tank.
Аналитична химия
For more in-depth information on test termination procedures and processing of tadpoles, refer to the OECD Guidance Document on Amphibian Thyroid Histology (9).
Преди провеждането на проучването следва да бъде оценена стабилността на изпитвания химикал, като се използва съществуващата информация за неговата разтворимост, разграждане и летливост.
Day 7 Measurements
От разтворите за изпитване от всяко повторение при всяка концентрация следва да бъде взета проба за химични анализи в началото на изпитването (ден 0) и един път седмично по време на изпитването за минимум четири проби.
On day 7, five randomly chosen tadpoles per replicate are removed from each test tank.
Препоръчва се, също така, всяка една изпитвана концентрация да бъде анализирана по време на подготовката на системата, преди започването на изпитването, за да се провери действието на системата.
The random procedure used should give each organism on test equal probability of being selected.
Освен това се препоръчва изходните разтвори да се анализират когато се изменят, особено ако обемът на изходния разтвор не предоставя достатъчно количество химикал така, че да обхваща продължителността на рутинните периоди на вземане на проби.
This can be achieved by using any randomising method but requires that each tadpole be netted.