natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Насоки за отглеждане и синхронизиране на F. fimetaria и F. candida
At the end of the test approx.
Времето и продължителността, дадени в това ръководство, следва да се проверяват за всеки конкретен щам, за да се гарантира, че графикът ще даде възможност за достатъчно на брой синхронизирани ювенилни екземпляри.
200 ml of distilled water are added.
По принцип яйцеполагането, след прехвърлянето на полово зрелите индивиди на пресен субстрат, и излюпването на яйцата определят подходящия ден за събиране на яйца и за събиране на синхронни ювенилни екземпляри.
The soil is gently agitated with a fine paintbrush to allow Collembola to float to the water surface.
За препоръчване е да има постоянна изходна култура, състояща се например от 50 контейнера/блюда на Петри.
A small amount, approx.
Изходната култура следва да се захранва добре чрез ежеседмично хранене, добавяне на вода и отстраняване на хранителните остатъци и умрелите индивиди.
0,5 ml, of black Kentmere photographic dye may be added to the water to aid counting by increasing the contrast between the water and the white Collembola.
Ако върху субстрата има прекалено малко колемболи, това може да доведе до потискане поради увеличено развитие на гъбички.
The dye is not toxic to Collembola.
Ако изходната култура се използва прекомерно често за получаване на яйца, в нея може да настъпи умора.
Counting:
Признаци на умора са мъртви възрастни индивиди и плесен върху субстрата.
Counts of numbers may be carried out by eye or under a light microscope using a grid placed over the floatation vessel or by photographing the surface of each vessel and later counting the Collembola on enlarged prints or projected slides.
Яйцата, останали от получаването на синхронни индивиди, могат да се използват за подмладяване на културата.
Counts may also be performed using digital image processing techniques (12).
В една синхронизирана култура на F. fimetaria мъжките индивиди се разграничават от женските предимно по размер.
All techniques should be validated.
Мъжките са отчетливо по-малки от женските, и ходът на мъжките е по-бърз от този на женските.
Determination of the maximum WHC of the soil
Правилният подбор на пола изисква малко практика и може да бъде потвърден с микроскопска инспекция на гениталната област (13).
The following method for determining the maximum water holding capacity (WHC) of the soil has been found to be appropriate.
Отглеждане
It is described in Annex C of ISO DIS 11268-2 (Soil Quality — Effects of pollutants on earthworms (Eisenia fetida).
Приготвяне на субстрата за отглеждане
Part 2: Determination of effects on reproduction).
Субстратът за отглеждане е парижки гипс (калциев сулфат) с активен въглен.
Cover the bottom of the tube with a wet piece of filter paper and then place it on a rack in a water bath.
Това осигурява влажен субстрат, като функцията на активния въглен е да абсорбира отпадъчните газове и екскрети (14) (15).
The water holding capacity (WHC) should be calculated as follows:
За да се улеснят наблюденията над Collembola могат да се използват различни видове въглен.
Soil Quality — Determination of pH.
Например при F. candida и F. fimetaria се използва въглен на прах (получава се черен/сив парижки гипс):
C.40.
Съставки на субстрата:
SEDIMENT-WATER CHIRONOMID LIFE-CYCLE TOXICITY TEST USING SPIKED WATER OR SPIKED SEDIMENT
20 ml активен въглен
This test method is equivalent to OECD Testing Guideline (TG) 233 (2010).
200 ml дестилирана вода
It is designed to assess the effects of life-long exposure of chemicals on the freshwater dipteran Chironomus sp., fully covering the 1st generation (P generation) and the early part of the 2nd generation (F1 generation).
200 ml парижки гипс
It is an extension of the existing test methods C.28 (1) or C.27 (15) using a spiked-water exposure scenario or a spiked sediment scenario, respectively.
50 g активен въглен на прах
It takes into account existing toxicity test protocols for Chironomus riparius and Chironomus dilutus (previously named C. tentans (2)) that have been developed in Europe and North America (3) (4) (5) (6) (7) (8) (9) and subsequently ring-tested (1) (7) (10) (11) (12).
260-300 ml дестилирана вода
Other well documented chironomid species may also be used, e.g. Chironomus yoshimatsui (13) (14).
400 g парижки гипс.
The complete exposure duration is ca.
Сместа на субстрата се оставя да отлежи преди употреба.
44 days for C. riparius and C. yoshimatsui, and –ca.
Размножение
100 days for C. dilutus.
Колемболите се държат в контейнери, като например блюда на Петри (90 mm × 13 mm), с дъно, покрито със слой с дебелина 0,5 cm от субстрат гипс/въглен.
Both water and sediment exposure scenarios are described in this test method.
Те се отглеждат при 20 ± 1 °C на цикъл светлина-тъмнина 12 на 12 часа (400-800 lux).
The selection of an appropriate exposure scenario depends on the intended application of the test.
Контейнерите се съхраняват влажни във всеки един момент, като така се гарантира, че относителната влажност на въздуха в контейнерите е 100 %.
The water exposure scenario, spiking of the water column, is intended to simulate a pesticide spray drift event and covers the initial peak concentration in surface waters.
Това може да се гарантира от наличието на свободна вода в порестия гипс, но като се избягва получаването на воден слой върху повърхността на гипса.
Water spiking is also useful for other types of exposure (including chemical spills), but not for accumulation processes within the sediment lasting longer than the test period.
Загубата на вода може да бъде предотвратена чрез осигуряване на влажен въздух от околната среда.
In that case, and also when run-off is the main entry route of pesticides into water bodies, a spiked sediment design may be more appropriate.
Всички мъртви екземпляри трябва да се отстраняват от контейнерите, както и плесенясалата храна.
If other exposure scenarios are of interest, the test design may be readily adapted.
За стимулиране на получаването на яйца е необходимо полово зрелите животни да бъдат прехвърлени в блюда на Петри с новоприготвен субстрат парижки гипс/въглен.
For example, if the distribution of the test chemical between the water phase and the sediment layer is not of interest and adsorption to the sediment has to be minimised, the use of surrogate artificial sediment (e.g. quartz sand) may be considered.
Гранулираната сушена хлебна мая се използва като единствен източник на храна както за F. candida, така и за F. fimetaria.
Chemicals that require testing of sediment-dwelling organisms may persist in sediment over long periods.
Прясна храна се предоставя веднъж или два пъти седмично, за да се избегне плесенясването.
Sediment-dwelling organisms may be exposed via a number of routes.
Поставя се на купчинка непосредствено върху парижкия гипс.
The relative importance of each exposure route, and the time taken for each to contribute to the overall toxic effect, is dependent on the physical-chemical properties of the chemical.
Масата на добавената хлебна мая следва да се регулира според размера на популацията от колемболи, но като общо правило са достатъчни 2-15 mg.
For strongly adsorbing chemicals or for chemicals covalently binding to sediment, ingestion of contaminated food may be a significant exposure route.
Синхронизиране
In order not to underestimate the toxicity of highly lipophilic chemicals, the use of food added to the sediment before application of the test chemical may be considered (see paragraph 31).
Изпитването трябва да се провежда със синхронизирани индивиди до получаване на хомогенни изпитвани животни от един и същ стадий и с еднакъв размер.
Therefore, it is possible to include all routes of exposure and all life stages.
Освен това, синхронизирането позволява разграничаването на мъжките от женските F. fimetaria от възраст 3 седмици и след това, въз основа на половия диморфизъм, т.е., разликите в размера.
Measured endpoints are the total number of adults emerged (for both 1st and 2nd generations), development rate (for both 1st and 2nd generations), sex ratio of fully emerged and alive adults (for both 1st and 2nd generations), number of egg ropes per female (1st generation only) and fertility of the egg ropes (1st generation only).
Процедурата по-долу е предложение за това как да бъдат получени синхронизирани индивиди (практическите стъпки са по избор).
Formulated sediment is strongly recommended.
Синхронизиране.
Formulated sediment has several advantages over natural sediments:
Подготовка на контейнери с 0,5 cm слой субстрат парижки гипс/въглен.
experimental variability is reduced because it forms a reproducible “standardised matrix” and the need to source uncontaminated clean sediment is eliminated;
За излюпването на яйцата 150-200 полово зрели F. fimetaria и 50-100 F. candida се прехвърлят от най-добрите 15-20 контейнера с изходната култура със субстрат на възраст 4-8 седмици в контейнерите и се захранват с 15 mg хлебна мая.
tests can be initiated at any time without encountering seasonal variability in the test sediment and there is no need to pre-treat the sediment to remove indigenous fauna;
Избягва се поставянето на ювенилни екземпляри заедно с полово зрелите, тъй като присъствието на ювенилни екземпляри може да потисне получаването на яйца.
reduced cost compared to field collection of sufficient quantities required for routine testing;
Културата се държи при 20 ± 1 °C (средната стойност следва да е 20 °C) на цикъл светлина-тъмнина 12 на 12 часа (400-800 lux).
formulated sediment allows for comparisons of toxicity across studies and ranking chemicals accordingly (3).
Гарантира се, че има прясна храна на разположение и че въздухът е наситен с вода.
First instar chironomid larvae are exposed to a concentration range of the test chemical in a sediment-water system.
Липсата на храна може да доведе до дефекация на животните върху яйцата, което води до развитие на гъбички върху яйцата, или F. candida може да изяде собствените си яйца.
The test starts by placing first instar larvae (1st generation) into test beakers containing spiked sediment or alternately the test chemical is spiked into the water after addition of the larvae.
След 10 дни яйцата внимателно се събират с игла и шпатула и прехвърлят в „хартия за яйца“ (малки парчета филтърна хартия, накисната в каша от парижки гипс/въглен), която се поставя в контейнер с пресен субстрат гипс/въглен.
Chironomid emergence, time to emergence and sex ratio of the fully emerged and alive midges are assessed.
В субстрата се добавят няколко зрънца мая за привличане на ювенилните екземпляри, за да напуснат хартията за яйца.
Emerged adults are transferred to breeding cages, to facilitate swarming, mating and oviposition.
Важно е хартията за яйца и субстратът да са влажни, защото в противен случай яйцата се обезводняват.
The number of egg ropes produced and their fertility are assessed.
Като алтернатива, полово зрелите животни могат да бъдат отстранени от кутиите за синхронизиране на културата след получаването на яйца за 2 или 3 дни.
From these egg ropes, first instar larvae of the 2nd generation are obtained.
След три дни повечето от яйцата върху хартията за яйца ще са излюпени, и някои ювенилни екземпляри могат да бъдат намерени под хартията за яйца.
These larvae are placed into freshly prepared test beakers (spiking procedure as for the 1st generation) to determine the viability of the 2nd generation through an assessment of their emergence, time to emergence and the sex ratio of the fully emerged and alive midges (a schematic presentation of the life-cycle test is provided in Appendix 5).
За да се получат ювенилни екземпляри с еднаква възраст, хартията за яйца с неизлюпените яйца се отстранява от блюдото на Петри с пинцети.
All data are analysed either by a regression model to estimate the concentration that would cause X % reduction in the relevant endpoint, or by using hypothesis testing to determine a No Observed Effect Concentration (NOEC).
Ювенилните екземпляри, към този момент на 0-3 дни, се оставят в блюдото и се захранват с хлебна мая.
The latter requires a comparison of treatment responses with the appropriate control responses using statistical tests.
Неизлюпените яйца се изхвърлят.
It should be noted that in the spiked water scenario, in case of fast degrading chemicals, the later life stages of each generation (e.g. pupal phase) might be exposed to a considerably lower concentration level in the overlying water than the 1st instar larvae.
Яйцата и излюпените ювенилни екземпляри се отглеждат по същия начин, както полово зрелите индивиди.
If this is a concern, and a comparable exposure level for each life stage is needed, the following amendments of the test method might be considered:
По-специално за F. fimetaria следва да се вземат следните мерки:
parallel runs with spiking at different life stages, or
осигуряване на достатъчно количество прясна храна, отстраняване на плесенясалата храна, след 1 седмица ювенилните екземпляри се разделят в нови блюда на Петри, при условие че гъстотата е над 200.
repeated spiking (or overlying water renewal) of the test system during both test phases (1st and 2nd generation), whereby the spiking (renewal) intervals should be adjusted to the fate characteristics of the test chemical.
Боравене с колемболите при започването на изпитването
Such amendments are only feasible in the spiked water scenario, but not in the sediment spiked scenario.
Екземплярите от F. candida на възраст 9-12 дни или от F. fimetaria на възраст 23-26 дни се събират, напр. чрез засмукване, и се поставят в малък контейнер с влажен субстрат гипс/въглен и тяхното физическо състояние се проверява с микроскоп (наранените и увредени екземпляри се премахват).
The water solubility of the test chemical, its vapour pressure and log Kow, measured or calculated partitioning into sediment and stability in water and sediment should be known.
Всички стъпки следва да се правят като същевременно атмосферата на колемболите се поддържа влажна, за да се избегне стрес от изсушаване, например чрез използване на навлажнени повърхности и т.н.
A reliable analytical method for the quantification of the test chemical in overlying water, pore water and sediment with known and reported accuracy and limit of detection should be available.
Контейнерът се обръща с дъното нагоре и се почуква по него, за да се прехвърлят колемболите в почвата.
Useful information includes the structural formula and purity of the test chemical.
Статичното електричество трябва да бъде неутрализирано, защото в противен случай е възможно животните само да летят във въздуха, или да се прилепят странично към контейнера за изпитването и да изсъхнат.
Chemical fate of the test chemical (e.g. dissipation, abiotic and biotic degradation, etc.) is also useful.
За неутрализирането може да бъде използван йонизатор или влажна кърпа под контейнера.
Further guidance for testing chemicals with physical-chemical properties that make them difficult to perform the test is provided in (16).
Храната следва да бъдат разпръсната по цялата повърхност на почвата, а не само в една бучка.
Reference chemicals may be tested periodically as a means of assuring that the sensitivity of the laboratory population has not changed.
По време на прехвърлянето и по време на периода на изпитване следва да се избягват почуквания или други действия, физически засягащи контейнерите за изпитване, тъй като това може да повиши уплътняването на почвата и да възпрепятства взаимодействието между колемболите.
As with daphnids it would be sufficient to perform a 48-h acute test (following 17).
Алтернативни видове колемболи
However, until a validated acute guideline is available a chronic test according to Chapter C.28 of this Annex may be considered.
За изпитване в съответствие с настоящия метод за изпитване могат да бъдат избрани други видове колемболи, като например Proisotoma minuta, Isotoma viridis, Isotoma anglicana, Orchesella cincta, Sinella curviseta, Paronychiurus kimi, Orthonychiurus folsomi, Mesaphorura macrochaeta.
Examples of reference toxicants used successfully in ring-tests and validation studies are:
Преди използването на алтернативни видове следва предварително да бъдат изпълнени редица предпоставки:
lindane, trifluralin, pentachlorophenol, cadmium chloride and potassium chloride.
Те следва да бъдат идентифицирани по категоричен начин;
(1) (3) (6) (7) (18).
Следва да се направи обосновка на избора на вида.
For the test to be valid the following conditions apply:
Следва да се гарантира, че репродуктивната биология е включена във фазата на изпитването, така че да бъде потенциален прицелен обект по време на експозицията;
the mean emergence in the control treatment should be at least 70 % at the end of the exposure period for both generations (1) (7);
Следва да е известен жизненият цикъл:
for C. riparius and C. yoshimatsui, 85 % of the total emerged adult midges from the control treatment in both generations should occur between 12 and 23 days after the insertion of the first instar larvae into the vessels;
възраст при достигане на полова зрялост, продължителност на съзряване на яйцата и стадии, подлежащи на експозиция;
for C. dilutus, a period of 20 to 65 days is acceptable;
Субстратът за изпитването и даването на храна трябва да предоставят оптимални условия за растежа и размножаването;
the mean sex ratio of fully emerged and alive adults (as female or male fraction) in the control treatment of both generations should be at least 0,4, but not exceed 0,6; for each breeding cage the number of egg ropes in the controls of the 1st generation should be at least 0,6 per female added to the breeding cage;
Стойността на варирането следва да бъде достатъчно ниска за прецизна и точна оценка на токсичността.
the fraction of fertile egg ropes in each breeding cage of the controls of the 1st generation should be at least 0,6; at the end of the exposure period for both generations, pH and the dissolved oxygen concentration should be measured in each vessel.
Извличане и броене на индивидите
The oxygen concentration should be at least 60 % of the air saturation value (ASV [9]), and the pH of overlying water should be between 6 and 9 in all test vessels;
Могат да бъдат използвани два метода на извличане.
the water temperature should not differ by more than ± 1,0 °C.
Първи метод:
Test vessels and breeding cages
Може да се използва екстрактор с контролиран температурен градиент, основан на принципите на MacFadyen (1).
The larvae are exposed in 600 ml glass beakers measuring ca.
Топлината идва от нагревателен елемент в горната част на клетката за извличане (регулиран чрез термистор, поставен върху повърхността на почвената проба).
8,5 cm in diameter (see Appendix 5).
Температурата в охладената течност, заобикаляща съда за събирането, се регулира чрез термистор, разположен на повърхността на клетката за събиране (поставена под почвената среда).
Other vessels are suitable, but they should guarantee a suitable depth of overlying water and sediment.
Термисторите са свързани към програмируем блок за управление, който повишава температурата съгласно предварително програмиран график.
The sediment surface should be sufficient to provide 2 to 3 cm2 per larvae.
Екземплярите се събират в охладената клетка за събиране (2 °C) с дънен слой от парижки гипс/въглен.
The ratio of the depth of the sediment layer to the depth of the overlying water should be ca.
Извличането е с обща продължителност от 48 h, започва при 25 °C и температурата се увеличава автоматично с 5 °C на всеки 12 h.
1:4.
След 12 h при 40 °C извличането приключва.
Breeding cages (minimum 30 cm in all three dimensions) with a gauze (mesh size ca.
Втори метод:
1 mm) on the top and one side of the cage as a minimum should be used (see Appendix 5).
След опитния инкубационен период броят на ювенилните екземпляри от Collembola се оценява чрез флотация.
In each cage a 2 l crystallising dish, containing test water and sediment, is placed for oviposition.
За тази цел изпитването се извършва в съдове с обем приблизително 250 ml.
Also for the crystallising dish, the ratio of the depth of the sediment layer to the depth of the overlying water should be around 1:4.
В края на изпитването се добавят около 200 ml дестилирана вода.
After egg ropes are collected from the crystallising dish they are placed into a 12-well microtiter plate (one rope per well containing at least 2,5 ml water from the spiked crystallising dish) after which the plates are covered with a lid to prevent significant evaporation.
Почвата се разбърква леко с фина четка, за да се позволи на колемболите да изплуват върху повърхността на водата.
Other vessels suitable for keeping the egg ropes may also be used.
Малко количество, приблизително 0,5 ml черно фотографско багрило Kentmere, може да се добави към водата за подпомагане на броенето чрез увеличаване на контраста между водата и белите колемболи.
With the exception of the microtiter plates, all test vessels and other apparatus that will come into contact with the test system should be made entirely of glass or other chemically inert material (e.g. Polytetrafluoroethylene).
Багрилото не е токсично за колемболи.
The species to be used in the test is preferably Chironomus riparius.
Преброяване:
C. yoshimatsui may also be used.
Преброяването може да се извършва на око или под светлинен микроскоп, който използва мрежа, която се поставя върху съда за флотацията, или чрез фотографиране на повърхността на всеки съд и след това преброяване на колемболите върху увеличени разпечатани или прожектирани изображения.
C. dilutus is also suitable but more difficult to handle and requires a longer test period.
Преброяването може да се извършва също чрез използване на техники за цифрова обработка на изображения (12).
Details of culturing methods are given in Appendix 2 for C. riparius.
Всички техники следва да са валидирани.
Information on culture conditions are also available for C. dilutus (5) and C. yoshimatsui (14).
Определяне на максималната способност на почвата за задържане на вода
Identification of the species should be confirmed before testing but is not required prior to every test if the organisms come from an in-house culture.
Следният метод за определяне на максималната способност на почвата за задържане на вода (СЗВ) се счита за подходящ.
Formulated sediment (also called reconstituted, artificial or synthetic sediment) should preferably be used.
Той е описан в приложение В към ISO DIS 11268-2 (Качество на почвите — въздействия на замърсители върху земни червеи (Eisenia fetida).
However, if natural sediment is used, it should be characterised (at least pH, organic carbon content, determination of other parameters such as C/N ratio and granulometry are also recommended) and should be free from any contamination and other organisms that may compete with, or consume chironomid larvae.
Част 2: Определяне на въздействията върху размножаването).
It is also recommended, before testing, that sediments are conditioned for seven days under test conditions.
Дъното на сондата се покрива с парче влажна филтърна хартия и след това се поставя на стойка на водна баня.
The following formulated sediment, as described in (1), is recommended (1) (20) (21):
Способността за задържане на вода (СЗВ) трябва да се изчислява както следва:
4-5 % (dry weight) peat:
Качество на почвите — Определяне на pH.
as close to pH 5,5 to 6,0 as possible;
В.40.
it is important to use peat in powder form, finely ground (particle size ≤ 1 mm) and only air dried;
ИЗПИТВАНЕ ЗА ТОКСИЧНОСТ ПРЕЗ ЦЕЛИЯ ЖИЗНЕН ЦИКЪЛ НА ХИРОНОМИДИ В СИСТЕМА ВОДА-СЕДИМЕНТ С ИЗПОЛЗВАНЕ НА ВОДА С ДОБАВКА ИЛИ СЕДИМЕНТ С ДОБАВКА
20 % (dry weight) kaolin clay (kaolinite content preferably above 30 %);
Настоящият метод за изпитване е еквивалентен на насоките за изпитване на ОИСР (ТG) 233 (2010).
75-76 % (dry weight) quartz sand (fine sand should predominate with more than 50 per cent of the particles between 50 and 200 μm);
Той е предназначен за оценка на въздействието на химикали от експозицията през целия жизнен цикъл на сладководното двукрило Chironomus sp. и обхваща изцяло 1-вото поколение (поколение Р) и началото на 2-то поколение (поколение F1).
Deionised water is added to obtain moisture of the final mixture in the range of 30–50 %;