natgillin/translations-raw huggingface dataset:
B запушалка от вулканизиран каучук, перфорирана със стъклена тръба (А). от вътрешната страна отворът на стъклената тръба (А) е покрит с малко памук и марля (размер на отворите около 1 mm), за да се избегне увреждане на индивидите при засмукването им във всмукателния вентилатор
An overview of relevant test conditions specific for validated species:
C прозрачен контейнер (пластмасов или стъклен, дължина около 15 cm) за уловените индивиди
Japanese medaka, the three-spined stickleback and zebrafish is provided in Appendix 2.
D корк от вулканизиран каучук, перфориран с тръба (Д).
Results from an acute toxicity test or other short-term toxicity assay [e.g. test method C.14 (34) and OECD TG 210 (1)], preferably performed with the species chosen for this test, should be available.
За освобождаване на индивидите в клетката за размножаване, коркът Г се освобождава от контейвера В
This implies that the water solubility and the vapour pressure of the test chemical are known and a reliable analytical method for the quantification of the chemical in the test chambers, with known and reported accuracy and limit of detection, is available.
E тръба (пластмаса или стъкло, вътрешен диаметър приблизително 8 mm) за събиране на полово зрелите индивиди от съда
Other useful information includes the structural formula, purity of the chemical, stability in water and light, pKa, Pow and results of a test for ready biodegradability (Test Method C.4) (35).
Схематично представяне на изпитване за целия жизнен цикъл:
Test acceptance criteria
А 1-во поколение — съдове за изпитване, съдържащи система седимент-вода, осем повторения, 20 ларви в първи ларвен стадий на съд
The dissolved oxygen concentration should be at least 60 per cent of the air saturation value (ASV) throughout the test;
Б четири съда за изпитване за всяка клетка за размножаване, А и Б
The water temperature should not differ by more than ± 1,5 °C between test chambers at any one time during the exposure period and be maintained within the temperature ranges specified for the test species (Appendix 2);
В клетки за размножаване (А и Б) за роене, чифтосване и яйцеполагане
A validated method for analysis of the exposure chemical with a detection limit well below the lowest nominal concentration should be available and evidence should be gathered to demonstrate that the concentrations of the test chemical in solution have been satisfactorily maintained within ± 20 % of the mean measured values;
Г блюда кристализатори за полагане на яйчни маси
Overall survival of fertilised eggs in the controls and, where relevant, in the solvent controls, should be greater than or equal to the limits defined in Appendix 2;
Д микроплаки, по едно гнездо за всяка яйчна маса
Acceptance criteria related to growth and proportions of sex at termination of the test are based on data from the control groups (pooled solvent and water control unless they are significantly different, then solvent only):
Е 2-ро поколение — съдове за изпитване, съдържащи система седимент-вода, осем повторения, 20 ларви в първи ларвен стадий на съд
Japanese medaka
В.41.
Three-spined stickleback
ИЗПИТВАНЕ ЗА РАЗВИТИЕ НА ПОЛА ПРИ РИБИТЕ
Growth
Настоящият метод за изпитване е еквивалентен на насоките за изпитване на ОИСР (ТG) 234 (2011).
Fish wet weight, blotted dry
Той се основава на решение от 1998 г. за разработване на нови или актуализиране на съществуващи методи за изпитване за скрининг и изпитвания за потенциални нарушители на функциите на ендокринната система.
> 75 mg
Изпитването за развитие на пола при рибите (ИРПР) бе идентифицирано като многообещаващ метод за изпитване, обхващащ чувствителен стадий от жизнения цикъл на рибите, с отклик на химикали, подобни както на естроген, така и на андроген.
Length (standard length)
Методът за изпитване е преминал през междулабораторно валидиране, извършено от 2006 до 2010 г., при което японската оризия (Oryzias latipes), зебровото данио (Danio rerio) и трииглата бодливка (Gasterosteus aculeatus) са били валидирани, а Pimephales promelas е била частично валидирана (41) (42) (43).
> 20 mm
Настоящият протокол включва японската оризия, трииглата бодливка и зебровото данио.
> 14 mm
Протоколът по принцип е усъвършенстван вариант на Насоки на ОИСР 210 „Риби, изследване на токсичността в ранния жизнен стадий“ (1), при който експозицията продължава докато полът на рибите се диференцира, т.е. около 60 дни след излюпването (dph) за японската оризия, трииглата бодливка и зебровото данио (периодът на експозиция може да е по-кратък или по-дълъг за други видове, валидирани в бъдеще), и се добавят чувствителни за функциите на ендокринната система крайни точки.
Sex ratio (% males or females)
Чрез ИРПР се оценява въздействието в ранните етапи от жизнения цикъл, както и потенциалните неблагоприятни последици за развитието на пола от химикали, за които се предполага, че нарушават функциите на ендокринната система (напр. естрогени, андрогени и инхибитори на стероидогенезата).
When a solvent is used it should have no statistical significant effect on survival and should not produce any endocrine disrupting effects or other adverse effects on the early-life stages as revealed by a solvent control.
Комбинацията от двете основни крайни точки за ендокринната система — концентрацията на вителогенин (VTG) и фенотипното съотношение между половете позволява на изпитването да посочи начина на действие на изпитвания химикал.
If a deviation from the test acceptance criteria is observed, the consequences should be considered in relation to the reliability of the test data and these considerations should be included in the reporting.
Поради значими за популацията изменения на фенотипното съотношение между половете, ИРПР може да се използва за оценка на опасността и риска.
Test chambers
Независимо от това, ако изпитването се използва за оценка на опасността или риска, не следва да се използва бодливката, тъй като наличните до момента данни от валидирането са показали, че при този вид не са обичайни предизвиканите от изпитвания химикал изменения на съотношението между фенотипните полове.
Any glass, stainless steel or other chemically inert chambers can be used.
Протоколът се основава на риби, експонирани на въздействието на химикали чрез водата по време на периода между диференцирането на гонадите и образуването на първите гамети, през който рибите се очаква да бъдат по-чувствителни към въздействията от химикали, нарушаващи функциите на ендокринната система, които пречат на развитието на пола.
The dimensions of the chambers should be large enough to allow compliance with loading rate criteria given below.
Две основни крайни точки се измерват като показатели за свързани с ендокринната система отклонения в развитието — концентрациите на VTG и съотношенията между половете (дялове на съответните полове), определяни чрез хистология на гонадите.
It is desirable that test chambers be randomly positioned in the test area.
Хистопатологията на гонадите (оценка и определяне на етапите при овоцитите и сперматогенните клетки) е по избор.
A randomised block design with each concentration being present in each block is preferable to a completely randomised design.
Освен това, когато е възможно, се определя генетичният пол (напр. при японската оризия и трииглата бодливка).
The test chambers should be shielded from unwanted disturbance.
Присъствието на маркер за генетичния пол е значително предимство, защото увеличава мощността на статистиките за съотношението между половете и дава възможност за откриване на индивидуална инверсия на фенотипния пол.
Recommended fish species are given in Appendix 2.
Други апикални крайни точки, които трябва да бъдат измерени, включват процент на излюпване, преживяване, дължина и телесно тегло.
The procedures for inclusion of new species are given in paragraph 2.
Този метод за изпитване може да се приспособява към видове, различни от посочените по-горе, при условие че другите видове бъдат подложени на валидиране, еквивалентно на извършеното за японската оризия, трииглата бодливка и зебровото данио, че рибите в контролите са полово диференцирани в края на изпитването, че нивата на VTG са достатъчно високи за откриване на значимо вариране, свързано с химикалите, и че чувствителността на системата за изпитване се определя с използване на ендокринно активни референтни химикали ((анти)-естрогени, (анти)-андрогени, инхибитори на ароматазата и др.).
Holding of parental fish
В допълнение, всеки протокол (или протоколи) за валидиране, позоваващ се на данни от ИРПР с използване на други видове, следва да бъде проверен от ОИСР и резултатът от валидирането следва да се смята за задоволителен.
Details on holding the parental fish under satisfactory conditions may be found in OECD TG 210(1).
Първоначални съображения и ограничения
Parental fish should be fed once or twice a day with appropriate food.
VTG обикновено се произвежда от черния дроб на женски яйценосни гръбначни животни в отговор на циркулиращия ендогенен естроген (2).
Handling of embryos and larvae
Синтезът на VTG е много ограничен, макар и забележим, в недостигнали полова зрялост риби и в полово зрели мъжки риби, поради липса у тях на достатъчно количество циркулиращ естроген.
Initially, embryos and larvae may be exposed within a main chamber in smaller glass or stainless steel chambers, fitted with mesh sides or ends to permit a flow of test chemical through the chamber.
Черният дроб обаче може да синтезира и секретира VTG в отговор на външно естрогенно стимулиране (3) (4) (5).
Non-turbulent flow through these small chambers may be induced by suspending them from an arm arranged to move the chamber up and down but always keeping the organisms submerged.
Измерването на VTG служи за откриване на химикали с естрогенен, анти-естрогенен и андрогенен начин на действие, и на химикали, които пречат на стероидогенезата, например като инхибитори на ароматазата.
Where egg containers, grids or meshes have been used to hold eggs within the main test chamber, these restraints should be removed after the larvae hatch, except that meshes should be retained to prevent the escape of the fish.
Откриването на химикали с естрогенно действие е възможно чрез измерване на индуцирането на VTG в мъжки риби, и е много добре документирано в научната литература, преминала през партньорска проверка.
If there is a need to transfer the larvae, they should not be exposed to the air and nets should not be used to release fish from egg containers.
Индуциране на VTG е доказано и след експозиция на андрогени, които могат да се ароматизират (6) (7).
The timing of this transfer varies with the species and transfer may not always be necessary.
Намаляването на равнището на циркулиращ естроген в женските животни, например посредством инхибиране на ароматазата, превръщаща ендогенния андроген в природния естроген 17β-естрадиол, води до намаляване на концентрацията на VTG, което се използва за откриване на химикали, притежаващи свойства на инхибитори по отношение на ароматазата или, по-общо, на инхибитори на стероидогенезата (33).
Any water in which the test species shows control survival at least as good as in water described in Appendix 3 is suitable as test water.
Биологичната значимост на отговора с VTG след естрогенно/ароматазно инхибиране е установена и е широко документирана (8) (9).
In order to ensure that the dilution water will not unduly influence the test result (for example by reacting with the test chemical) or adversely affect the performance of the brood stock, samples should be taken at intervals for analysis.
Възможно е обаче образуването на VTG в женски животни да е също така повлияно от обща токсичност и начини на токсично действие, различни от ендокринните.
Total organic carbon, conductivity, pH and suspended solids should be measured, for example every three months where dilution water is known to be relatively constant in quality.
Няколко методи за измерване са успешно разработени и стандартизирани за рутинна употреба, за количествено определяне на VTG във взети от отделни риби проби в кръвта, в черния дроб, в цялото тяло или в хомогенат глава/опашка.
Measurements of heavy metals (e.g. Cu, Pb, Zn, Hg, Cd, Ni), major anions and cations (e.g. Ca2+, Mg2+, Na+, K+, Cl–, SO42–) and pesticides should be done, if water quality is questionable.
Такъв е случаят със зебровото данио, трииглата бодливка и японската оризия, както и с частично валидирания вид Pimephales promelas;
Details about chemical analysis and water collection can be found in paragraph 34.
На разположение са специфични за отделните видове ензимно-свързани имуносорбентни анализи (ELISA), използващи имунохимия за количествено определяне на VTG (5) (10) (11) (12) (13) (14) (15) (16).
Flow-through system should be used if practically possible.
При японската оризия и зебровото данио съществува добра корелация между VTG, измерен в проби от кръвна плазма, черен дроб и хомогенат, въпреки че при хомогенати като цяло се получават малко по-ниски стойности, отколкото от плазма (17) (18) (19).
For flow-through tests, a system that continually dispenses and dilutes a stock solution of the test chemical (e.g. metering pump, proportional diluter, and saturator system) is necessary to deliver a series of concentrations to the test chambers.
В допълнение 5 са дадени препоръчителните процедури за събирането на проби за анализ на VTG.
The flow rates of stock solutions and dilution water should be checked at intervals during the test and should not vary by more than 10 % throughout the test.
Промяна в съотношението между фенотипните полове на (дялове на съответните полове) е крайна точка, отразяваща инверсията на пола.
A flow rate equivalent to at least five test chamber volumes per 24 hours has been found suitable (1).
По принцип естрогените, анти-естрогените, андрогените, анти-андрогените и химикалите, потискащи стероидогенезата, могат да повлияят на съотношението между половете при развиващи се риби (20).
Care should be taken to avoid the use of plastic tubing or other materials, some of which may contain biologically active chemicals or may adsorb the test chemical.
Доказано е, че тази инверсия на пола е отчасти обратима при зебровото данио (21) след експозиция на химикал, сходен с естроген, докато инверсията на пола след експозиция на химикал, сходен с андроген, е окончателна (30).
The stock solution should preferably be prepared without the use of solvents by simply mixing or agitating the test chemical in the dilution water by using mechanical means (e.g. stirring or ultrasonication).
Полът се дефинира като женски, мъжки, междинен (в една гонада има както овоцити, така и сперматогенни клетки) или недиференциран, и се определя в отделните риби чрез хистологично изследване на гонадите.
If the test chemical is difficult to dissolve in water, procedures described in the OECD Guidance Document on aquatic toxicity testing of difficult substances and mixtures should be followed (36).
Указания са дадени в допълнение 7 и в Ръководството на ОИСР за диагностициране на свързана с ендокринната система хистопатология на гонадите при риби (22).
The use of solvents should be avoided but may be necessary in some cases in order to produce a suitably concentrated stock solution.
Генетичният пол се проверява чрез генетични маркери, когато има такива в даден вид риби.
Examples of suitable solvents are given in (36).
При японската оризия женските ХХ или мъжките XY гени могат да бъдат открити чрез полимеразна верижна реакция (PCR), или свързаният с Y ген от домен DM (DMY) може да бъде анализиран (DMY-отрицателен или положителен), както е описано в (23) (24).
Semi-static test conditions should be avoided unless justification is provided on compelling reasons associated with the test chemical (e.g. stability, limited availability, high cost or hazard).
При трииглата бодливка има еквивалентен PCR метод за определяне на генетичния пол, описан в допълнение 10.
For the semi-static technique, two different renewal procedures may be followed.
Когато генетичният пол може да бъде индивидуално свързан с фенотипния пол, мощта на теста се подобрява и следователно генетичният пол следва да бъде определян във видовете с документирани маркери за генетичния пол.
Either new test solutions are prepared in clean chambers and surviving eggs and larvae gently transferred into the new chambers, or the test organisms are retained in the test chambers whilst a proportion (at least two thirds) of the test water is changed daily.
Двете основни ендокринни крайни точки, VTG и съотношението между половете, могат в съчетание да докажат ендокринния начин на действие (НД) на химикала (таблица 1).
Conditions of Exposure
Съотношението между половете е значим за популацията биомаркер (25) (26) и за някои ясно определени начини на действие резултатите от ИРПР могат да бъдат използвани за целите на оценката на опасността и риска, когато това се счита за целесъобразно от регулаторния орган.
Collection of eggs and duration
Тези начини на действие са понастоящем естрогените, андрогените и инхибиторите на стероидогенезата.
To avoid genetic bias, eggs are collected from a minimum of three breeding pairs or groups, mixed and randomly selected to initiate the test.
Реакция на ендокринните крайни точки за различни начини на действие на химикали:
For the three-spined stickleback, see the description of artificial fertilisation in Appendix 11.
↑= нараства, ↓= намалява, — = не е изследвано
The test should start as soon as possible after the eggs have been fertilised, the embryos preferably being immersed in the test solutions before cleavage of the blastodisc commences, or as close as possible after this stage and no later than 12 h post fertilisation.
Позовавания
The test should continue until sexual differentiation in the control group is completed (60 dph for Japanese medaka, the three-spined stickleback and zebrafish).
Слаб естрогенен агонист
Loading
↑ ♀ или ↑Недифер
The number of fertilised eggs at the start of the test should be at least 120 per concentration divided between a minimum of 4 replicates (square root allocation to control is accepted).
Силен естрогенен агонист
The eggs should be randomly distributed (by using statistical tables for randomisation) among treatments.
↑ ♀ или ↑Недифер, няма ♂
The loading rate (for definition, see Appendix 1) should be low enough in order that a dissolved oxygen concentration of at least 60 % of the ASV can be maintained without direct aeration of the chambers.
Естрогенен антагонист
For flow-through tests, a loading rate not exceeding 0,5 g/l per 24 hours, and not exceeding 5 g/l of solution at any time is recommended.
↓♀, ↑Недифер.
No later than 28 days post fertilisation the number of fish per replicate should be redistributed, so that each replicate contains as equal a number of fish as possible.
Андрогенен агонист
If exposure related mortality occurs, the number of replicates should be reduced appropriately so that fish density between treatment levels is kept as equal as possible.
↑ ♂, няма ♀
The photoperiod and water temperature should be appropriate for the test species (see Appendix 2 for experimental conditions for the FSDT).
Андрогенен антагонист
Food and feeding are critical, and it is essential that the correct food for each stage is supplied at appropriate time intervals and at a level sufficient to support normal growth.
↑Междинен пол
Feeding should be ad libitum whilst minimising the surplus.
Инхибитор на ароматазата
To obtain a sufficient growth rate, fish should be fed at least twice daily (accepting once daily on weekends), separated by at least three hours between each feed.
ИРПР не обхваща стадия на размножаване на рибите и следователно химикалите, за които се предполага, че влияят върху размножаването при концентрации, по-ниски тези за развитието на пола, следва да бъдат проучени в изпитване, обхващащо размножаването.
Surplus food and faeces should be removed, as necessary, to avoid accumulation of waste.
Определенията, използвани за целите на настоящия метод за изпитване, са дадени в допълнение 1.
As experience is gained, food and feeding regimes are continuously being refined to improve survival and optimise growth.
ИРПР in vivo е предназначен за откриване на химикали с андрогенни и естрогенни свойства, както и анти-андрогенни, анти-естрогенни и потискащи стероидогенезата свойства.
Effort should therefore be made to confirm the proposed regime with acknowledged experts.
Фазите на валидирането на ИРПР (1 и 2) не обхващат естрогенни, андрогенни и потискащи стероидогенезата химикали.
Feeding should be withheld 24 hours before ending the test.
Въздействията в ИРПР на естрогенни и андрогенни антагонисти може да се види в таблица 1, но тези ЕНД са по-слабо документирани към момента.
Examples of appropriate food items are listed in Appendix 2 (see also the OECD Fish Testing Framework (39).
При изпитването рибите се експонират от новооплодения хайвер до завършването на половата диференциация, най-малко на три концентрации на изпитвания химикал, разтворен във вода.
Test chemicals should be spaced as described in Appendix 4.
Изпитването трябва да е при проточни условия, освен ако това не е възможно поради наличието или природата (напр. ограничена разтворимост) на изпитвания химикал.
A minimum of three test concentrations in at least four replicates should be used.
Изпитването започва с поставянето на новооплодени хайверни зърна (преди дробенето на бластодиска) в камерите за изпитване.
The curve relating LC50 to period of exposure in the acute studies available should be considered when selecting the range of test concentrations.
Зареждането на камерите е описано за всеки вид в точка 27.
Five test concentrations are recommended if the data are to be used for risk assessment.
За валидираните рибни видове (японската оризия, трииглата бодливка и зебровото данио) изпитването приключва на 60 dph.
Concentrations of the chemical higher than 10 % of the acute adult LC50 or 10 mg/l, whichever is the lower, need not be tested.
При приключването на изпитването всички риби се умъртвяват по хуманен начин.
The maximum test concentration should be 10 % of the LC50 on the larval/juvenile life-stage.
От всяка риба се взема биологична проба (кръвна плазма, черен дроб или хомогенат глава/опашка) за анализ на VTG, а останалата част се фиксира за хистологична оценка на гонадите с цел определяне на фенотипния пол;
Controls
по избор може да бъде извършвана хистопатология (например определяне на етапите при гонадите, степен на проява на междинния пол).
A dilution water control (≥ 4 replicates) and, if relevant, a solvent control (≥ 4 replicates) should be run in addition to the test concentrations.
Биологична проба (аналната или гръбната перка) за определяне на генетичния пол се взема от видовете, притежава подходящите маркери (допълнения 9 и 10).
Only solvents that have been investigated not to have any statistical significant influence on the test endpoints should be used in the test.
Преглед на съответните условия на изпитване, специфични за валидираните видове:
Where a solvent is used, its final concentration should not be greater than 0,1 ml/l (36) and it should be the same concentration in all test chambers, except the dilution water control.
японската оризия, трииглата бодливка и зебровото данио) е даден в допълнение 2.
However, every effort should be made to avoid the use of such solvent or keep solvent's concentrations to a minimum.
На разположение следва да са резултати от изпитване за остра токсичност или друго краткосрочно изследване за токсичност [напр. метод за изпитване В.14 (34), и насоки на ОИСР 210 (1)], за предпочитане извършено с видовете, избрани за настоящото изпитване.
Frequency of Analytical Determinations and Measurements
Това предполага, че разтворимостта във вода и парното налягане на изпитвания химикал са известни и е налице надежден аналитичен метод за количествено определяне на химикала в камерите за изпитване с позната и протоколирана точност и граница на откриване.
Chemical analysis of the test chemical concentration should be performed before initiation of the test to check compliance with the acceptance criteria.
Друга полезна информация включва структурната формула, чистотата на химикала, стабилността му във вода или на светлина, pKa, Pow и резултатите от изпитване за пълна биоразградимост (вж. метод В.4) (35).
All replicates should be analysed individually at the beginning and termination of the test.