natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Глава В.28 от настоящото приложение, Изпитване за токсичност на хирономиди в система вода-седимент с използване на вода с добавка.
The composition of the formulated sediment should be as follows:
Глава В.27 от настоящото приложение, Изпитване за токсичност на хирономиди в система вода-седимент с използване на седимент с добавка.
Sphagnum moss peat, as close to pH 5,5-6,0 as possible, no visible plant remains, finely ground (particle size ≤ 1 mm) and air dried
J. Amer.
4 - 5
OECD (2006), Current Approaches in the Statistical Analysis of Ecotoxicity Data: a Guidance to Application, OECD Series on Testing and Assessment No.
> 50 % of the particles should be in the range of 50-200 μm
54, 146 pp., ENV/JM/MONO(2006)18, OECD, Paris.
CaCO3, pulverised, chemically pure
Формулиран седимент или възстановен, изкуствен или синтетичен седимент, е смес от материали, използвани за симулиране на физичните съставки на естествен седимент.
0,05 - 0,1
Вода над седимента е водата, която се намира над седимента в съда за изпитване.
Conductivity ≤ 10 μS/cm
Интерстициална вода, или вода между частиците на седимента е водата, която заема пространството между седимента и частиците на почвата.
PREPARATION
Вода с добавка е вода, към която е добавен изпитваният химикал.
The suspension is conditioned for at least two days with gentle stirring at 20 ± 2 °C, to stabilise pH and establish a stable microbial component. pH is measured again and should be 6,0 ± 0,5.
Препоръки за отглеждане на Chironomus riparius
The pH of the final mixture is measured once again and is adjusted to 6,5 to 7,5 with CaCO3 if necessary.
Ларвите на Chironomus могат да се отглеждат в блюда кристализатори или в по-големи контейнери.
Then, before it is used in the chironomid toxicity test, it is recommended that the formulated sediment be conditioned for seven days under the same conditions which prevail in the subsequent test.
На дъното на контейнера се разпръсква фин кварцов пясък на тънък слой с дебелина 5 до 10 mm.
STORAGE
Беше посочено, че кизелгурът (напр. арт.
The dry constituents for preparation of the artificial sediment may be stored in a dry and cool place at room temperature.
8117 на Merck) също е подходящ субстрат (по-тънък слой от само няколко mm е достатъчен).
The formulated (wet) sediment should not be stored prior to its use in the test.
След това се добавя подходяща вода до достигане на дълбочина от няколко сm.
It should be used immediately after the 7 days conditioning period that ends its preparation.
Долива се вода, ако е необходимо, за да се компенсира загубата от изпаряване и за да се предотврати изсушаването.
OECD (1984), Earthworm, Acute Toxicity Test, Test Guideline No. 207, Guidelines for the Testing of Chemicals, OECD, Paris.
Водата може да се сменя, ако е необходимо.
Meller, M., Egeler, P., Roembke, J., Schallnass, H., Nagel, R. and B. Streit (1998), Short-term toxicity of lindane, hexachlorobenzene and copper sulfate on tubificid sludgeworms (Oligochaeta) in artificial media, Ecotox.
Следва да се осигури умерено аериране.
Environ.
Съдовете за отглеждане на ларвите следва да се поставят в подходяща клетка, с която да се предотврати напускането на имагиниращите полово зрели индивиди.
Safety, 39:
Клетката следва да бъде с достатъчни размери, за да се даде възможност за оформяне на рой от имагиниралите полово зрели индивиди, защото в противен случай може да не се стигне до копулация (най-малко около 30 × 30 × 30 сm).
10-20.
Клетките следва да се държат при стайна температура или в помещение с постоянни характеристики на средата при 20 ± 2 °С със светъл период от 16 часа (интензитет около 1000 lux) и 8 часа тъмнина.
Chemical Characteristics of an Acceptable Dilution water
Докладвано е, че относителна влажност на въздуха, по-ниска от 60 %, може да възпрепятства размножаването.
CONSTITUENT
Може да се използва всяка естествена или синтетична вода.
CONCENTRATIONS
Практиката е да се използва вода от кладенец, дехлорирана чешмяна вода и изкуствена среда (напр. среда Elendt „M4“ или „M7“).
Hardness as CaCO3
Преди употреба водата трябва да бъде аерирана.
However, it should be noted that if there is an interaction suspected between hardness ions and the test chemical, lower hardness water should be used (and thus, Elendt Medium M4 should not be used in this situation).
Ако е необходимо, водата за отглеждане може да се обновява, като се внимателно се излива или изсмуква използваната вода от съдовете за отглеждане, без да се унищожават тръбичките на ларвите.
Guidance for test performance
Хранене на ларвите
Example of a breeding cage:
Ларвите на Chironomus трябва да се хранят с храна за риба на люспи (Tetra Min®, Tetra Phyll® или друга подобна търговска марка храна за риба) по около 250 mg на съд на ден.
A gauze on the top and at least one side of the cage (mesh size ca.
Храната може да се дава като сух смлян прах или като суспензия във вода:
1 mm)
1,0 g храна във вид на люспи се добавя към 20 ml вода за разреждане и се разбърква, за да се образува хомогенна смес.
B aperture for placing the emerged adults inside the breeding cage and to remove the laid egg ropes from the crystallisation dishes (not shown in this graphic)
Така получената смес може да се дава в количество от около 5 ml на съд дневно. (разбърква се преди употреба).
C breeding cage size minimum 30 cm length, 30 cm height and 30 cm width
По-старите ларви могат да получават повече храна.
Example of a test vessel:
Храненето се коригира съобразно качеството на водата.
A pasteur pipette for air supply of the overlying water
Ако средата за отглеждане стане мътна, количеството храна трябва да се намали.
B glass lid to prevent emerged midges from escaping
Добавянето на храна се следи внимателно.
C water surface layer
Даването на прекалено малко храна ще предизвика миграция на ларвите във водата над седимента, а твърде много храна ще предизвика увеличаване на дейността на микробите и по-ниски нива на кислорода.
D test vessel (glass beaker minimum 600 ml)
И двете обстоятелства могат да доведат до по-ниска скорост на развитие.
E sediment layer
Могат също да се добавят и клетки от някои зелени водорасли (напр.
Example of an exhauster for capturing adult midges (arrows indicate air flow direction):
Scenedesmus subspicatus, Chlorella vulgaris), когато се подготвят нови съдове за отглеждане.
A glass tube (inner diameter ca.
Хранене на имагиниралите възрастни
5 mm) connected to a self-priming pump B cork of vulcanised rubber, perforated with glass tube (A).
Някои експериментатори изказват идеята, че тампон от памук, напоен с наситен разтвор на захароза, може да се използва за хранене на имагиниралите възрастни.
On the inside, the opening of glass tube (A) is covered with some cotton and a gauze (mesh size ca.
При температура от 20 °С ± 2 °С след приблизително 13—15 дни от съдовете за отглеждане на ларви ще започнат да имагинират полово зрелите индивиди.
1 mm) to prevent damaging the midges when they are sucked into the exhauster
Мъжките лесно се разпознават по перестите си антени и слабото телосложение.
C transparent container (plastic or glass, length ca.
Яйчни маси
15 cm) for captured midges
Щом в клетката за размножаване се поставят полово зрели индивиди, всички съдове за отглеждане трябва да се проверяват три пъти седмично за полагане на пихтиести яйчни маси.
D cork of vulcanised rubber, perforated with tube (E).
Ако са налице, яйчните маси следва да бъдат внимателно отстранени.
To release midges into the breeding cage, cork D is released from container C
Те следва да се преместят в малко блюдо, съдържащо проба от водата за размножаване.
E tube (plastic or glass, inner diameter ca.
Яйчните маси се използват за започване на отглеждане в нов съд за отглеждане (напр.
8 mm) to collect adult midges from vessel
2—4 яйчни маси/съд) или се използват в изпитванията за токсичност.
Schematic presentation of a life-cycle test:
След 2—3 дни следва да се излюпят ларви от първи стадий.
A 1st generation — test vessels containing a sediment-water system, eight replicates, 20 first instar larvae per vessel
Създаване на нови съдове за отглеждане
B four test vessels for each breeding cage, A and B
След като е сложено началото на отглеждането, следва да е възможно да се създава нов съд за отглеждане на ларви всяка седмица или по-рядко, в зависимост от изискванията на изпитването, като старите съдове се отстраняват от изпитването, след като имагинирането на полово зрелите индивиди е завършило.
C breeding cages (A and B) for swarming, mating and oviposition
Използването на тази система позволява редовно получаване на полово зрели индивиди с минимална организация.
D crystallising dishes for deposition of egg ropes
Приготвяне на разтвори за изпитване „М4“ и „М7“
E micro plates, one well for each egg rope
В Elendt (1990) е описана среда „М4“.
F 2nd generation — test vessels containing a sediment-water system, eight replicates, 20 first instar larvae per vessel
Среда „М7“ се приготвя като „М4“, освен по отношение на указаните в таблица 1 вещества, при които за „М7“ се използват концентрации, четири пъти по-ниски, отколкото използваните в „М4“.
C.41.
Разтворът за изпитване не трябва да се приготвя според Elendt and Bias (1990), тъй като концентрациите на NaSiO3 · 5H2O, NaNO3, KH2PO4 and K2HPO4, посочени за приготвянето на изходния разтвор, не са подходящи.
FISH SEXUAL DEVELOPMENT TEST
Приготвяне на среда „М7“
This test method is equivalent to OECD test guideline (TG) 234 (2011).
Всеки изходен разтвор (I) се приготвя отделно и с изходните разтвори (I) се приготвя комбиниран изходен разтвор (II) (вж. таблица 1).
It is based on a decision from 1998 to develop new or update existing test methods for the screening and testing of potential endocrine disrupters.
За получаване на среда „М7“ петдесет ml от комбинирания изходен разтвор (II) и посочените в таблица 2 количества от изходните разтвори на макро храни се допълват до 1 литър с дейонизирана вода.
The Fish Sexual Development Test (FSDT) was identified as a promising test method covering a sensitive fish life stage responsive to both oestrogen and androgen-like chemicals.
Приготвя се изходен разтвор на витамини, като се добавят трите витамина, както е посочено в таблица 3, към дейонизирана вода, и 0,1 ml от комбинирания изходен разтвор на витамини се добавя към крайната среда „М7“ малко преди употреба.
The test method went through an inter-laboratory validation exercise from 2006 to 2010, where Japanese medaka (Oryzias latipes), zebrafish (Danio rerio) and three spined stickleback (Gasterosteus aculeatus) were validated and fathead minnow (Pimephales promelas) was partially validated (41) (42) (43).
Изходният разтвор на витамини се съхранява замразен на малки аликвотни части.
This protocol includes Japanese medaka, the three-spined stickleback and zebrafish.
Средата се аерира и стабилизира.
The protocol is in principle an enhancement of OECD TG 210 Fish, Early Life Stage Toxicity Test (1), where the exposure is continued until the fish are sexually differentiated, i.e. about 60 days post-hatch (dph) for Japanese medaka, the three-spined stickleback and zebrafish (the exposure period can be shorter or longer for other species that are validated in the future), and endocrine-sensitive endpoints are added.
Изходни разтвори на микроелементи за среди М4 и М7
The FSDT assesses early life-stage effects and potential adverse consequences of putative endocrine disrupting chemicals (e.g. oestrogens, androgens and steroidogenesis inhibitors) on sexual development.
Изходни разтвори (I)
The combination of the two core endocrine endpoints, vitellogenin (VTG) concentration and phenotypic sex ratio enable the test to indicate the mode of action of the test chemical.
Количество (mg), разреждано до 1 l с дейонизирана вода
Due to the population-relevant change in phenotypic sex ratio, the FSDT can be used for hazard and risk assessment.
За приготвянето на комбинирания изходен разтвор (II):
However, if the test is used for hazard or risk assessment, the stickleback should not be used because the validation data available so far showed that in this species the alterations of phenotypic sex ratio by the test chemicals were uncommon.
смесват се следните количества (ml) от всеки от изходните разтвори (I) и се долива до 1 литър дейонизирана вода.
The protocol is based on fish exposed via water to chemicals during the sex labile period in which the fish is expected to be most sensitive to the effects of endocrine disrupting chemicals that interfere with sexual development.
Крайни концентрации в разтворите за изпитване (mg/l)
Two core endpoints are measured as indicators of endocrine-associated developmental aberrations, the VTG concentrations and sex ratios (proportions of sex) determined via gonad histology.
MnCl2 · 4H2O [1]
Gonadal histopathology (evaluation and staging of oocytes and spermatogenetic cells) is optional.
SrCl2 · 6H2O [1]
Additionally, the genetic sex is determined whenever possible (e.g. in Japanese medaka and the three spined stickleback).
MoO4 · 2H2O [1]
The presence of a genetic sex marker is a considerable advantage as it increases the power of the sex ratio statistics and enables the detection of individual phenotypic sex reversal.
CuCl2 · 2H2O [1]
Other apical endpoints that should be measured include hatching rate, survival, length and body weight.
CaCl2 · 6H2O
The test method might be adaptable to other species than those mentioned above provided that the other species undergo a validation equal to the one accomplished for Japanese medaka, the three-spined stickleback and zebrafish, that the control fish are sexually differentiated at the end of the test, that VTG levels are sufficiently high to detect significant chemical-related variations, and that sensitivity of the test system is established using endocrine active reference chemicals ((anti)-oestrogens, (anti)-androgens, aromatase inhibitors etc).
EDTA · 2H2O [1] [2]
In addition, any validation report(s) referring to FSDT data using other species should be reviewed by the OECD, and the validation outcome should be considered as satisfactory.
FeSO4 · 7H2O [1] [2]
Initial considerations and limitations
Изходни разтвори на макрохранителни вещества за среди М4 и М7
VTG is normally produced by the liver of female oviparous vertebrates in response to circulating endogenous oestrogen (2).
Количество, разреждано до 1 l с дейонизирана вода
The VTG synthesis is very limited, though detectable, in immature fish and adult male fish because they lack sufficient circulating oestrogen.
Изходни разтвори на макрохранителни вещества, добавяни за приготвяне на среди М4 и М7
However, the liver is capable of synthesising and secreting VTG in response to exogenous oestrogen stimulation (3) (4) (5).
(mg/l)
The measurement of VTG serves for the detection of chemicals with oestrogenic, anti-oestrogenic, androgenic modes of action and chemicals that interfere with steroidogenesis as for example aromatase inhibitors.
Крайни концентрации в разтвори за изпитване М4 и М7
The detection of oestrogenic chemicals is possible via the measurement of VTG induction in male fish, and it has been abundantly documented in the scientific peer-reviewed literature.
Изходни разтвори на витамини за среди М4 и М7
VTG induction has also been demonstrated following exposure to aromatisable androgens (6) (7).
Събират се всички три разтвора на витамини, за да се приготви един общ изходен разтвор на витамини
A reduction in the circulating level of oestrogen in females, for instance through the inhibition of the aromatase converting the endogenous androgen to the natural oestrogen 17β-oestradiol, causes a decrease in the VTG concentration, which is used to detect chemicals having aromatase inhibiting properties or steroidogenesis inhibitors more broadly (33).
Количество изходен разтвор на витамини, добавяно за приготвяне на среди М4 и М7
The biological relevance of the VTG response following oestrogenic/aromatase inhibition is established and has been broadly documented (8) (9).
Тиаминхидрохлорид
However, it is possible that production of VTG in females can also be affected by general toxicity and non-endocrine toxic modes of action.
Цианокобаламин (B12)
Several measurement methods have been successfully developed and standardised for routine use to quantify VTG in blood, liver, whole body or head/tail homogenate samples collected from individual fish.
Биотин
This is the case for zebrafish, three-spined stickleback and Japanese medaka and also the partially validated species fathead minnow;
Тези вещества се различават в М4 и М7, както е посочено по-горе
species-specific Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) methods using immunochemistry for the quantification of VTG are available (5) (10) (11) (12) (13) (14) (15) (16).
Тези разтвори се приготвят отделно, изливат се заедно и незабавно се автоклавират.
In Japanese medaka and zebrafish, there is a good correlation between VTG measured from blood plasma, liver and homogenate samples although homogenates tend to show slightly lower values than plasma (17) (18) (19).
Приготвяне на формулиран седимент
Appendix 5 provides the recommended procedures for sample collection for VTG analysis.
СЪСТАВ НА СЕДИМЕНТА
Change in the phenotypic sex ratio (proportions of sex) is an endpoint reflecting sex reversal.
Съставът на формулирания седимент е, както следва:
In principle, oestrogens, anti-oestrogens, androgens, anti-androgens and steroidogenesis inhibiting chemicals can affect the sex ratio of developing fish (20).
Торф от торфен мъх, с рН възможно най-близо до 5,5—6,0, без видими остатъци от растения и фино смлян (размер на частиците ≤ 1 mm) и изсушен на въздух
It has been shown that this sex reversal is partly reversible in zebrafish (21) following oestrogen-like chemical exposure, whereas sex reversal following androgen-like chemical exposure is permanent (30).
4 — 5
The sex is defined as female, male, intersex (both oocytes and spermatogenetic cells in one gonad) or undifferentiated, determined in individual fish via histological examination of the gonads.
> 50 % от частиците следва да бъдат в интервала 50-200 μm
Guidance is given in Appendix 7 and in the OECD Guidance Document on the Diagnosis of Endocrine-Related Histopathology of Fish Gonads (22).
CaCO3, на прах, химически чист
Genetic sex is examined via genetic markers when they exist in a given fish species.
0,05 — 0,1
In Japanese medaka the female XX or male XY genes can be detected by Polymerase Chain-Reaction (PCR), or the Y-linked DM domain gene (DMY) can be analysed (DMY negative or positive) as described in (23) (24).
Проводимост ≤ 10 μS/cm
In three-spined stickleback, there is an equivalent PCR method for genetic sex determination described in Appendix 10.
ПРИГОТВЯНЕ
Where the genetic sex can be individually linked to the phenotypic sex, the power of the test is improved and therefore genetic sex should be determined in species with documented genetic sex markers.
Суспензията се аклиматизира най-малко два дни при 20 ± 2 °C, като се разбърква леко, за да се стабилизира рН и да се създаде стабилна микробна среда.
The two core endocrine endpoints, VTG and sex ratio, can in combination demonstrate the endocrine mode of action (MOA) of the chemical (Table 1).
Отново се измерва рН, което трябва да бъде 6,0 ± 0,5.
The sex ratio is a population relevant biomarker (25) (26) and for some well defined modes of action, the FSDT results may be used for hazard and risk assessment purposes when deemed appropriate by the regulatory agency.
Измерва се отново рН на крайната смес и, ако е необходимо, се коригира до 6,5—7,5 с CaCO3.
These modes of action are at present oestrogens, androgens and steroidogenesis inhibitors.
Освен това, препоръчва се преди използването му в изпитване за токсичност за хирономиди, изкуственият седимент да бъде аклиматизиран в продължение на седем дни при същите условия, при които ще се провежда изпитването.
Reaction of the endocrine endpoints to different modes of action of chemicals
СЪХРАНЕНИЕ
↑ = increasing, ↓ = decreasing, — = not investigated
Сухите съставки за приготвянето на изкуствения седимент могат да се съхраняват в сухо и хладно място при стайна температура.
References
Формулираният (влажен) седимент не трябва да се съхранява преди употребата му в изпитването.
Weak oestrogen agonist
Той следва да се употребява незабавно след 7-дневния период за аклиматизация, с който завършва приготвянето му.
↑♀ or ↑Undiff
OECD (1984), Earthworm, Acute Toxicity Test, Test Guideline No.
Strong oestrogen agonist
207, Guidelines for the Testing of Chemicals, OECD, Paris.
↑♀ or ↑Undiff, No ♂
Meller, M., Egeler, P., Roembke, J., Schallnass, H., Nagel, R. and B. Streit (1998), Short-term toxicity of lindane, hexachlorobenzene and copper sulfate on tubificid sludgeworms (Oligochaeta) in artificial media, Ecotox.
Oestrogen antagonist
Environ.
↓♀, ↑Undiff.
Safety, 39:
Androgen agonist
Химични характеристики на приемлива вода за разреждане
↑♂, No ♀
СЪСТАВКА
Androgen antagonist
КОНЦЕНТРАЦИИ
↑Intersex
Твърдост, изразена като CaCO3
Aromatase inhibitor
Трябва обаче да се отбележи, че ако се предполага взаимодействие между йоните, от които произтича твърдостта, и изпитвания химикал, следва да се използва вода с по-ниска твърдост (и затова в този случай не трябва да се използва среда „Elendt M4“).
The FSDT does not cover the reproductive life stage of the fish and therefore chemicals that are suspected to affect reproduction at lower concentrations than sexual development should be examined in a test that covers reproduction.
Насоки за параметрите на изпитването
Definitions for the purpose of this Test Method are given in Appendix 1.
Пример за клетка за размножение:
The in vivo FSDT is intended to detect chemicals with androgenic and oestrogenic properties as well as anti-androgenic, anti-oestrogenic and steroidogenesis inhibiting properties.
A марля (с размер на отвора приблизително 1 mm) в горната част и една странична част на клетката като минимум
The FSDT validation phases (1 and 2) did cover oestrogenic, androgenic and steroidogenesis inhibiting chemicals.
B отвор за поставяне на имагиниралите възрастни в клетката за размножение, както и за отстраняване на положените яйчни маси от блюдата кристализатори (не е показан на тази графика)
The effects in the FSDT of oestrogen- and androgen antagonists can be seen in Table 1 but these MOA are less documented at present time.
C клетка за размножаване с минимални размери 30 cm дължина, 30 cm ширина и 30 cm височина
In the test, fish are exposed, from newly fertilised egg until the completion of sexual differentiation, to at least three concentrations of the test chemical dissolved in water.
Пример за съд за изпитване:
The test conditions should be flow-through unless not possible due to the availability or nature (e.g. limited solubility) of the test chemical.
A пипета „Пастьор“ за подаване на въздух във водата над седимента
The test starts with the placing of newly fertilised eggs (before cleavage of the blastodisc) in the test chambers.
B стъклен капак за предотвратяване на напускането на имагиниралите индивиди
The loading of the chambers is described for each species in paragraph 27.
C воден слой
For the validated fish species, Japanese medaka, the three-spined stickleback and zebrafish, the test is terminated at 60 dph.
D съд за изпитване (стъклена бехерова чаша с минимална вместимост 600 ml)
At test termination, all fish are euthanised humanely.
E слой на седимента
A biological sample (blood plasma, liver or head/tail homogenate) is collected for VTG analysis from each fish and the remaining part is fixed for histological evaluation of the gonads to determine the phenotypic sex;
Пример за всмукателен вентилатор за улавяне на полово зрелите индивиди (стрелките указват посоката на въздушния поток):
optionally, histopathology (e.g. staging of gonads, severity of intersex) can be performed.
A стъклена тръба (вътрешен диаметър приблизително 5 mm), свързана със самозасмукваща помпа
A biological sample (the anal- or the dorsal fin) for the determination of the genetic sex is taken in species possessing appropriate markers (Appendices 9 and 10).