natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Критерии за приемане на изпитването
One replicate per test concentration should be analysed at least once per week during the test, changing systematically between replicates (1,2,3,4,1,2…).
концентрацията на разтворен кислород трябва да бъде най-малко 60 от стойността на насищане при равновесие с атмосферния въздух (ASV) по време на извършването на изпитването;
If samples are stored to be analysed at a later time, the storage method of the samples should be previously validated.
температурата на водата трябва да се различава с не повече от ± 1,5 °C между камерите за изпитване по всяко време на провеждането на изпитването, и се поддържа в рамките на температурните диапазони, посочени за изпитваните видове (допълнение 2).
Samples should be filtered (e.g. using a 0,45 μm pore size) or centrifuged to ensure that the determinations are made on the chemical in true solution.
Следва да е на разположение валидиран метод за анализ на химикала за експозицията, като границата на откриване на този метод следва да е доста под най-ниската номинална концентрация, и следва да се съберат доказателства, доказващи, че концентрацията на изпитвания химикал в разтвор е била задоволително поддържана в рамките на ± 20 % от средните измерени стойности;
During the test, dissolved oxygen, pH, total hardness, conductivity, salinity (if relevant), and temperature should be measured in all test chambers.
цялостното преживяване на оплодените хайверни зърна в контролите и, където е относимо, в контролите на разтворител, трябва да бъде по-голямо или равно на границите, определени в допълнение 2;
As a minimum dissolved oxygen, salinity (if relevant), and temperature should be measured weekly, and pH, conductivity and hardness at the beginning and at the end of the test.
Критерии за приемане, свързани с растежа и дяловете на половете при приключването на изпитването се основават на данни от контролните групи (обединени контроли на разтворител и на вода, освен ако те се различават значимо, като в последния случай само на разтворител):
Temperature should preferably be monitored continuously in at least one test chamber.
японска оризия
Results should be based on measured concentrations.
триигла бодливка
However, if the concentration of the test chemical in solution has been satisfactorily maintained within ± 20 % of the nominal concentration throughout the test, then the results can either be based on nominal or measured values.
Растеж
Observations and measurements
Риба, мокро тегло, след попиване
Stage of embryonic development
> 75 mg
The exposure should begin as soon as possible after fertilisation and before cleavage of the blastodisc commences and no later than 12 h post fertilisation to ensure exposure during early embryonic development.
Дължина (стандартна дължина)
Hatching and survival
> 20 mm
Observations on hatching and survival should be made at least once daily and numbers recorded.
> 14 mm
Dead embryos, larvae and juvenile fish should be removed as soon as observed since they can decompose rapidly and may be broken up by the actions of the other fish.
Съотношение между половете (% мъжки или женски)
Extreme care should be taken when removing dead individuals not to knock or physically damage adjacent eggs/larvae, these being extremely delicate and sensitive.
Когато се използва разтворител, той следва да няма статистически значимо въздействие върху преживяването и трябва да не предизвиква никакво нарушаване на функциите на ендокринната система или други вредни въздействия на ранните стадии от жизнения цикъл, което се вижда при контрола на разтворител.
Criteria for death vary according to life stage:
Ако се наблюдава отклонение от критериите за приемане на изпитването, последиците следва да се съобразят с надеждността на данните от изпитването и тези съображения следва да бъдат включени в протоколирането.
for eggs:
Камери за изпитване
particularly in the early stages, a marked loss of translucency and change in coloration, caused by coagulation and/or precipitation of protein, leading to a white opaque appearance;
Могат да се използват всякакви камери от стъкло, неръждаема стомана или други химически неутрални материали.
for larvae and juvenile fish:
Камерите следва да са достатъчно широки, за да съответстват на критериите за степен на зареждане, посочени по-долу.
immobility and/or absence of respiratory movement and/or absence of heart-beat and/or white opaque coloration of central nervous system and/or lack of reaction to mechanical stimulus.
Препоръчва се камерите за изпитване да са разположени на случаен принцип в зоната на извършване на изпитването.
Abnormal appearance
Рандомизираният блоков план, при който всяка концентрация е налична във всеки блок, се предпочита пред напълно рандомизирания.
The number of larvae or fish showing abnormality of body form should be recorded, and the appearance and the nature of the abnormality described.
Камерите за изпитване следва да са защитени от нежелани смущения.
It should be noted that abnormal embryos and larvae occur naturally and can be of the order of several per cent in the control(s) in some species.
Препоръчваните видове риби са дадени в допълнение 2.
Abnormal animals should only be removed from the test chambers on death.
Процедурите за включване на нови видове са дадени в точка 2.
However, in accordance with Directive 2010/63/EU of the European Parliament and of the Council of 22 September 2010 on the protection of animals used for scientific purposes, if abnormalities result in pain, suffering and distress or lasting harm, and death can be reliably predicted, animals should be anaesthetised and euthanised according to the description in paragraph 44 and treated as mortality for data analysis..
Отглеждане на родителски индивиди
Abnormal behaviour
Подробности относно съхраняването на родителските риби при задоволителни условия могат да се намерят в насоки на ОИСР 210 (1).
Abnormalities, e.g. hyperventilation, uncoordinated swimming, atypical quiescence and atypical feeding behaviour should be recorded at appearance.
Родителските риби следва да бъдат хранени веднъж или два пъти дневно с подходяща храна.
Weight
Третиране на ембрионите и ларвите
At the end of the test all surviving fish should be euthanised (anaesthetised if blood samples should be taken), and individual wet weight (blotted dry) should be measured.
Първоначално ембрионите и ларвите могат да се експонират, в рамките на основната камера, в по-малки камери от стъкло или неръждаема стомана, снабдени със страни или краища с отвори, за да се позволи потокът на изпитвания химикал през камерата.
Length
Може да се предизвика слаб поток през тези малки камери чрез поставянето им на ръчка, монтирана да премества съда нагоре и надолу, но като запазва винаги организмите във водата.
At the end of the test, individual lengths (standard length) should be measured.
Когато за задържане на хайвера в основната камера за изпитване са били използвани контейнери с хайвер, решетки и сита, тези ограничители се отстраняват след излюпването на ларвите, c изключение на ситата, които следва да се задържат, за да се предотврати изпускането на рибите.
These observations will result in some or all of the following data being available for reporting:
Ако има нужда от прехвърляне на ларвите, те следва да не се излагат на въздух и не следва да се използват мрежи, да за се освободи рибата от контейнерите с хайвера.
cumulative mortality;
Графикът за това прехвърляне е различен за различните видове, и прехвърлянето не винаги е необходимо.
numbers of healthy fish at end of test;
Всяка вода, в която изпитваният вид показва преживяване в контролата най-малко такова, каквото и във водата, описана в допълнение 3, е подходяща да се използва като вода за изпитването.
time to start of hatching and end of hatching;
За да се гарантира, че водата за разреждане няма да повлияе неправилно върху резултата от изпитването (например чрез реагиране с изпитвания химикал) или да навреди на родителите, пробите за анализ следва да се вземат на интервали.
length and weight of surviving animals;
Общият органичен въглерод, проводимостта, рН и суспендираните твърди вещества следва да се измерват, например на всеки три месеца, когато се знае, че водата за разреждане има относително постоянно качество.
numbers of deformed larvae;
Ако качеството на водата не е сигурно, следва да се правят измервания за тежки метали (например Cu, Pb, Zn, Hg, Cd, Ni), основни аниони и катиони (например Ca2+, Mg2+, Na+, K+, Cl–, SO42–) и пестициди.
numbers of fish exhibiting abnormal behaviour.
Подробности относно химичния анализ и събирането на водата могат да бъдат намерени в точка 34.
Sampling of fish
Следва да се използва проточна система, ако е практически възможно.
Fish sampling is performed at termination of the test.
За изпитванията с проточна система се изисква система, която постоянно подава и разрежда изходен разтвор на изпитвания химикал (например система с измерваща помпа, пропорционално разреждащо устройство и сатуратор), за да се подават серии от концентрации към камерите за изпитване.
Sampled fish should be euthanised with e.g. MS-222 (100-500 mg per l buffered with 200 mg NaHCO3 per l) or FA-100 (4-allyl-2-methoxyphenol: eugenol) and individually measured and weighed as wet weight (blotted dry) or anaesthetised if a blood sample should be taken (see paragraph 49).
Дебитът на изходните разтвори и този на водата за разреждане следва да се проверяват на интервали по време на изпитването и през това време не следва да се променят с повече от 10 %.
Sampling for VTG analysis and sex determination via histological evaluation
За подходящ се счита дебит, равен на поне пет обема на камера за изпитване за 24 часа (1).
All fish should be sampled and prepared for analysis of sex and VTG.
Трябва внимателно да се избягва използването на пластмасови тръби или други материали, някои от които могат да съдържат биологично активни химикали или могат да адсорбират изпитвания химикал.
All fish should be analysed histologically to determine sex.
Изходният разтвор се приготвя за предпочитане без използване на разтворители, чрез просто смесване и разбъркване на изпитвания химикал във водата за разреждане, като се използват механични средства (например разклащане или ултрасонификация).
For the VTG measurements, a sub-sampling of at least 16 fish from each replicate is accepted.
Ако разтварянето на изпитвания химикал във вода е е трудно, трябва да бъдат следвани процедурите, описани в ръководството на ОИСР с насоки за изпитване за токсичност във водна среда на трудни вещества и смеси (36).
More fish should be analysed for VTG if the results of the sub-sampling turn out to be unclear.
Използването на разтворители следва да се избягва, но в някои случаи може да се наложи, с цел да се получи изходен разтвор с подходяща концентрация.
The sampling procedure for VTG and sex determination is dependent on the VTG analysis method:
Примери за подходящи разтворители са дадени в (36).
Head/tail homogenate method for VTG analysis
Условията на полустатично изпитване следва да се избягват, освен в случаите, когато е представена обосновка за наложителни причини, свързани с изпитвания химикал (например стабилност, ограничена наличност, високи разходи или опасност).
The fish is euthanised.
При полустатичните техники могат да се следват две различни процедури за обновяване — или се приготвят нови разтвори за изпитване в чисти камери и преживелите хайверни зърна и ларви внимателно се пренасят в новите камери, или изпитваните организми се запазват в камерите за изпитване, като известен дял (поне две трети) от водата за изпитване се сменя ежедневно.
Head and tail of each fish are separated from the body of the fish by cuts made right behind the pectoral fins, and right behind the dorsal fin, using a scalpel (See Figure 1).
Условия на експозиция
The head and tail part from each fish are pooled, weighed and individually numbered, frozen in liquid nitrogen and stored at – 70° or less for VTG analysis.
Събиране на хайвер и продължителност
The body part of the fish is numbered and fixed in an appropriate fixative for histological evaluation (22).
За да се избегне отклонение в генетично отношение, хайверът се събира от минимум три на брой двойки за размножаване или групи, смесени и избрани на случаен принцип за започване на изпитването.
By use of this method VTG and histopathology are evaluated on each individual and a possible change in the VTG level can thus be related to the phenotypic sex of the fish or genetic sex (Japanese medaka and the three-spined stickleback) of the fish.
За трииглата бодливка, вж. описанието за изкуствено оплождане в допълнение 11.
For further information see guidance for homogenisation (Appendix 5) and guidance for VTG quantification (Appendix 6).
Изпитването трябва да започне възможно най-бързо след оплождането на хайвера, като е за предпочитане ембрионите да са потопени в разтворите за изпитване преди започването на дробенето на бластодиска или колкото е възможно по-скоро след този етап, и не по-късно от 12 часа след оплождането.
Liver homogenate method for VTG analysis
Изпитването трябва да продължи до приключването на половата диференциация в контролната група (60 dph за японската оризия, трииглата бодливка и зебровото данио).
The liver is dissected out and stored at – 70 °C or below.
Зареждане
Recommended procedures for liver excision and pre-treatment are available in OECD TG 229 (37) or Chapter C.37 of this Annex (38).
Броят на оплодените хайверни зърна в началото на изпитването следва да е поне 120 на концентрация, разделени между минимум 4 повторения (допустимо е разпределяне към контролата с използване на корен квадратен).
Livers are then individually homogenised as described in OECD TG 229 or Chapter C.37 of this Annex.
Хайверните зърна следва да са разпределени на случаен принцип (с помощта на статистически таблици за рандомизация) сред третиранията.
The supernatant collected is used for measuring VTG with a homologous ELISA technique (see Appendix 6 for an example of quantification in zebrafish or OECD TG 229 (37) for Japanese medaka).
Скоростта на зареждане (за определение вж. допълнение 1) следва да е достатъчно ниска с цел да се поддържа концентрация на разтворения кислород от поне 60 % от ASV без директно аериране на камерите.
Following this approach, it is also possible to have individual fish data on both VTG and gonad histology.
За изпитванията с проточна система се препоръчва скорост на зареждане не по-голяма от 0,5 g/1 за 24 часа и не повече от 5 g/1 от разтвора по всяко време.
Blood plasma method for VTG analysis
Не по-късно от 28 дни след оплождането броят на рибите на повторение следва да бъде преразпределен така, че броят на рибите във всяко повторение да бъде колкото е възможно по-близък до равния.
Blood is collected from the anaesthetised fish by cardiac puncture, caudal vein or tail cutting, and centrifuged at 4 °C for plasma collection.
Ако се появи смъртност, свързани с експозицията, броят на отделните повторения следва да бъде намален до подходящ размер, така че гъстотата на рибите между нивата на третиране да се поддържа със стойности колкото е възможно по-близо до равните.
The plasma is stored at – 70 °C or below until use.
Периодът на осветеност и температурата на водата следва да са подходящи за изпитваните видове (вж. допълнение 1 за опитните условия за ИРПР).
The whole fish is euthanised and fixed for histology.
Храната и храненето са изключително важни и е от съществено значение да се предоставя подходящата храна за всеки етап, на подходящи времеви интервали и в количества, които са достатъчни за поддържане на нормален растеж.
Both plasma samples and fish are numbered individually to relate VTG levels to the sex of the fish.
Храненето следва да бъде ad libitum при същевременно свеждане до минимум на излишъка.
How to cut a fish for measurement of VTG in head/tail homogenate and histological evaluation of the mid section
За осигуряване на достатъчна скорост на растеж рибите следва да бъдат хранени поне два пъти на ден (допустимо е веднъж на ден в събота и неделя), на интервал от поне три часа между всяко хранене.
Genetic sex determination
Излишната храна и изпражненията трябва да бъдат отстранявани, когато е необходимо, за да се избегне натрупване на отпадъци.
A biological sample for the determination of the genetic sex is taken from individual fish in species possessing appropriate markers.
С натрупването на опит храната и хранителните режими непрекъснато се усъвършенстват с оглед подобряване на преживяемостта и оптимизиране на растежа.
For Japanese medaka, the anal fin or dorsal fin is collected.
Следователно трябва да се положат усилия да се потвърди предлаганият режим с признати експерти.
A detailed description is given in Appendix 9 including tissue sampling and sex determination by a PCR-method.
Храна не следва да се предоставя 24 часа преди приключването на изпитването.
Equally, for the three spined stickleback, a description of tissue sampling and a sex determining PCR-method is given in Appendix 10.
Примери за подходящи хранителни продукти са изброени в допълнение 2 (Вж. също рамката на ОИСР за изпитвания върху риб (39).
VTG measurement
Концентрациите на изпитваните химикали следва да бъдат разположени както е описано в допълнение 4.
The measurement of VTG should be based upon a quantitative and analytically validated method.
Следва да бъдат използвани минимум три концентрации за изпитването, с най-малко по четири повторения.
Information should be available upon the intra-assay and inter-assay variability of the method used in a given laboratory.
Когато се избира диапазонът на концентрациите на изпитване следва да се има предвид кривата, свързваща LC50 и периода на експозиция при наличните проучвания за остра токсичност.
The source of inter- and intra-laboratory variability is (most likely) based on the different developing stages of the fish population.
Ако данните ще бъдат използвани за оценка на риска, препоръчителни са пет концентрации на изпитване.
Considering the variability of VTG measurement, NOECs based on this endpoint alone should be treated with great care.
Не е нужно да се изпитват концентрации на химикала, по-високи от 10 % от LC50 за остра токсичност при полово зрели индивиди, или 10 mg/1, според това коя от двете е по-ниска.
Different methods are available to assess VTG production in the fish species considered in this assay.
Максималната концентрация на изпитване следва да е 10 % от стойността на LC50 за стадий ларви/ювенилни екземпляри.
A measurement technique that is both relatively sensitive and specific is the determination of protein concentrations via enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).
Контроли
Homologous antibodies (raised against VTG of the same species) and most important homologous standards should be used.
Една контрола на вода за разреждане (≥ 4 повторения) и, ако е относимо, контрола на разтворител (≥ 4 повторения), следва да бъдат включени допълнително към концентрациите на изпитване.
Sex determination
По време на изпитването следва да се използват само разтворители, за които е проучено, че нямат статистически значимо влияние върху крайните точки от изпитването.
Dependent on the VTG sampling procedure, whole fish or the remaining mid-section of each fish is placed in a pre-labelled processing cassette and fixed in an appropriate fixative for histological determination of sex (optionally also for evaluation of gonadal staging).
Когато се използва разтворител, неговата крайна концентрация не следва да е по-висока от 0,1 ml/l (36) и концентрацията следва да бъде една и съща във всички камери за изпитване, с изключение на контролата на вода за разреждане.
Guidance on fixation and embedding is provided in Appendix 7 as well as in the OECD Guidance Document on the Diagnosis of Endocrine-Related Histopathology of Fish Gonads (22).
Въпреки това, следва да се положат всички усилия, за да се избегне употребата на такъв разтворител, или неговите концентрации следва да бъдат поддържани на минимално равнище.
After processing, the fish are embedded in paraffin blocks.
Честота на аналитичните определяния и измервания
The individuals should be placed longitudinally in the paraffin block.
Преди започване на изпитването следва да бъде извършен химичен анализ на концентрацията на изпитвания химикал, за да се провери съответствието с критериите за приемане.
At least six longitudinal sections (3-5 μm in thickness) in a frontal plane including gonadal tissue from both gonads are taken from each individual.
Всички повторения трябва да бъдат анализирани поотделно в началото и в края на изпитването.
The interval between these sections should be approximately 50 μm for males and 250 μm for females.
Едно повторение за всяка концентрация на изпитване трябва да се анализира поне веднъж на седмица по време на изпитването, като повторенията се сменят системно (1,2,3,4,1,2...).
However, since each block will often contain males and females (if more than one individual are embedded in each block), the interval between sections from these blocks should be approximately 50 μm until at least six sections of the gonads from each male are obtained.
Ако се съхраняват проби, за да бъдат анализирани по-късно, методът за съхранение на пробите следва да бъде предварително валидиран.
Thereafter, the interval between sections can be increased to approximately 250 μm for the females.
Пробите следва да бъдат филтрувани (например с използване на размер на порите 0,45 μm) или центрофугирани, за да се гарантира, че определянията на химикала се правят в истински разтвор.
Sections are stained with haematoxylin and eosin and examined by light-microscopy with focus on sex (male, female, intersex or undifferentiated).
По време на теста следва да бъдат измервани разтвореният кислород, рН, общата твърдост, проводимостта, солеността (ако е относима) и температурата във всяка камера за изпитване.
Intersex is defined as presence of more than one oocyte in testis per six sections analysed or spermatogenic cells (yes/no) in ovaries.
Като минимум разтвореният кислород, солеността (ако е относима) и температурата трябва да се измерват всяка седмица, а рН, проводимостта и твърдостта — в началото и в края на изпитването.
Histopathology and staging of ovaries and testis is optional but if investigated, the results should be statistically analyzed and reported.
За предпочитане е температурата да се наблюдава непрекъснато най-малко в една камера за изпитване.
It should be noted that some fish species naturally lack a fully developed pair of gonads and only one gonad may be present (e.g. Japanese medaka and occasionally zebrafish).
Резултатите следва да се основават върху измерените концентрации.
All such observations should be recorded.
Обаче ако концентрацията на изпитвания химикал в разтвора е поддържана на задоволително ниво в рамките на ± 20 % от номиналната концентрация по време на изпитването, тогава резултатите могат да се основават или на номиналната, или на измерената стойност.
Genetic sex determination in individual Japanese medaka is based on the presence or absence of the medaka male-sex determining gene, DMY, which is located on the Y chromosome.
Наблюдения и измервания
The genotypic sex of medaka can be identified by sequencing the DMY gene from DNA extracted from for instance a piece of anal fin or dorsal fin.
Стадий на ембрионално развитие
The presence of DMY indicates a XY (male) individual regardless of phenotype, while the absence of DMY indicates a XX (female) individual regardless of phenotype (23).
Експозицията следва да започне колкото е възможно по-скоро след оплождането и преди започването на дробенето на бластодиска, и не по-късно от 12 часа след оплождането, за да се гарантира експозиция по време на ранното ембрионално развитие.
Guidance for tissue preparation and PCR method is given in Appendix 9.
Излюпване u преживяване
The genetic sex determination in individual three-spined stickleback is also performed via a PCR method, described in Appendix 10.
Наблюденията върху излюпването и преживяването се правят поне веднъж на ден и се записва броят.
The occurrence of intersex (for definition, see Appendix 1) should be reported.
Мъртвите ембриони, ларви и ювенилни екземпляри следва да се отстраняват веднага след като са забелязани, тъй като могат да се разложат бързо и да бъдат разкъсани от действията на другите риби.
Secondary sexual characteristics