natgillin/translations-raw huggingface dataset:
В случай на химикали, които не могат да бъдат открити при някои или при всички концентрации, използвани при изпитването, следва да се измерят изходните разтвори и да се запише дебитът на системата, за да се изчислят номиналните концентрации.
Tadpoles not selected are returned to the tank of origin and the selected tadpoles are humanely euthanised in 150 to 200 mg/l e.g. MS-222, appropriately buffered with sodium bicarbonate to achieve pH 7,0.
Доставка на химикал
The euthanised tadpoles are rinsed in water and blotted dry, followed by body weight determination to the nearest milligram.
Методът, използван за въвеждане на изпитвания химикал в системата, може да варира в зависимост от неговите физични и химични свойства.
Hind limb length, snout to vent length, and developmental stage (using a binocular dissection microscope) are determined for each tadpole.
Разтворимите във вода химикали могат да бъдат разтворени в аликвотни части вода за изпитване при концентрация, която позволява доставка при целевата концентрация на изпитване при проточна система.
Day 21 Measurements (Test Termination)
Химикали, които са в течно състояние при стайна температура и умерено разтворими във вода, могат да бъдат въвеждани с методи със сатуратор течност-течност.
At test termination (day 21), the remaining tadpoles are removed from the test tanks and humanely euthanised in 150 to 200 mg/l e.g. MS-222, appropriately buffered with sodium bicarbonate, as above.
Химикали, които са в твърдо състояние при стайна температура и умерено разтворими във вода, могат да бъдат въвеждани със сатуратор с колона със стъклена вата (7).
Tadpoles are rinsed in water and blotted dry, followed by body weight determination to the nearest milligram.
За предпочитане е да се използва система за изпитване без носител, но отделните изпитвани химикали имат различни физични и химични свойства, които вероятно ще изискват различни подходи за подготвяне на водата за експозиция на химикала.
Developmental stage, SVL, and hind limb lengths are measured for each tadpole.
За препоръчване е да бъдат положени усилия за избягване на разтворители или носители, защото:
All larvae are placed in Davidson's fixative for 48 to 72 hours either as whole body samples or as trimmed head tissue samples containing the lower jaw for histological assessments.
някои разтворители сами по себе си могат да доведат до токсичност и/или нежелан или непредвиден ендокринен отговор, ii) изпитването на химикали на равнища над разтворимостта им във вода (както може често да се случи при използването на разтворители) може да доведе до неточно определяне на ефективните концентрации, и iii) употребата на разтворители в по-дългосрочните изпитвания може да доведе до значително „образуване на биофилм“, свързано с микробната активност.
For histopathology, a total of five tadpoles should be sampled from each replicate tank.
За трудни за изпитване химикали могат да се използват разтворители в краен случай, и за определяне на най-добрия метод следва да бъде консултиран документът на ОИСР с насоки за изпитване за токсичност във водна среда на трудни вещества и смеси (4).
Since follicular cell height is stage dependent (10), the most appropriate sampling approach for histological analyses is to use stage-matched individuals, whenever possible.
Разтворители, за които е установено, че са ефективни за изпитване за водна токсичност, включват ацетон, етанол, метанол, диметилформамид и триетиленгликол.
In order to select stage-matched individuals, all larvae should first be staged prior to selection and subsequent processing for data collection and preservation.
В случай, че се използва разтворител за носител, концентрациите на разтворителя трябва да бъдат под хроничната концентрация без наблюдавано въздействие (NOEC);
This is necessary because normal divergence in development will result in differential stage distributions within each replicate tank.
Документът на ОИСР с насоки препоръчва максимум от 100μl/l;
Animals selected for histopathology (n = 5 from each replicate) should be matched to the median stage of the controls (pooled replicates) whenever possible.
в неотдавнашен преглед се препоръчва използване на разтворител с концентрация само 20μl на литър вода за разреждане (12).
If there are replicate tanks with more than five larvae at the appropriate stage, then five larvae are randomly selected.
Ако се използва разтворител за носител, следва да се оценят подходящи контроли на разтворител в допълнение към контролите без разтворител (чиста вода).
If there are replicate tanks with less than five larvae at the appropriate stage, then randomly selected individuals from the next lower or upper developmental stage should be sampled to reach a total sample size of five larvae per replicate.
Ако прилагането на химикала чрез водата не е възможно — поради физични или химични характеристики (малка разтворимост) или поради ограничена наличност на химикала — може да бъде взето предвид въвеждането чрез хранителния режим.
Preferably, the decision to sample additional larvae from either the next lower or upper developmental stage should be made based on an overall evaluation of the stage distribution in the control and chemical treatments.
Върху експозицията чрез хранителен режим има извършена предварителна работа;
That is, if the chemical treatment is associated with a retardation of development, then additional larvae should be sampled from the next lower stage.
независимо от това, използването на този път на експозиция не е обичайно.
In turn, if the chemical treatment is associated with an acceleration of development, then additional larvae should be sampled from the next upper stage.
Изборът на метод следва да бъде документирано и проверено по аналитичен път.
In cases of severe alterations of tadpole development due to treatment with a test chemical, there might be no overlap of the stage distribution in the chemical treatments with the calculated control median developmental stage.
Определяне на висока концентрация на изпитване
In only these cases, the selection process should be modified by using a stage different from the control median stage to achieve a stage-matched sampling of larvae for thyroid histopathology.
За целите на това изпитване високата изпитвана концентрация трябва да се определи от прага на разтворимост на изпитвания химикал;
Furthermore, if stages are indeterminate (i.e., asynchrony), then 5 tadpoles from each replicate should be randomly chosen for histological analysis.
максимално поносимата концентрация (МПК) за остро токсични химикали;
The rationale underlying sampling of any larvae that are not at a stage equivalent to the control median developmental stage should be reported.
или 100 mg/l, в зависимост от това коя е най-ниска.
Determination of Biological Endpoints
МПК се определя като най-високата изпитвана концентрация на химикала, която води до по-малко от 10 % смъртност в резултат от остра токсичност.
During the 21 day exposure phase, measurement of primary endpoints is performed on days 7 and 21, however daily observation of test animals is necessary.
При използването на този подход се допуска, че са налице емпирични данни за смъртността от остра токсичност, от които може да се оцени МПК.
Table 3 provides an overview of the measurement endpoints and the corresponding observation time points.
Въпреки че използването на регресионни модели може да е най-издържаният в техническо отношение подход за оценяване на МПК, полезна апроксимация на МПК може да бъде изведена от съществуващите данни за остра токсичност, като се използва 1/3 от стойността на LC50 за остра токсичност.
More detailed information for technical procedures for measurement of apical endpoints and histological assessments is available in the OECD guidance documents (9).
Въпреки това, възможно е да липсват данни за остра токсичност за изпитваните животински видове.
Observation time points for primary endpoints in the AMA
Ако липсват специфични за съответния животински вид данни за остра токсичност, може да бъде извършено 96-часово изпитване за определяне на LC50 с попови лъжички, които са представителни за изпитваните в ИМЗ (т.е., са на същия етап на развитие).
Apical Endpoints
Като вариант, ако са налични данни за други водни видове (напр. изследвания за LC50 за риби, или за други земноводни видове), тогава може да се използва професионална преценка за оценка на вероятната МПК въз основа на екстраполация между отделните видове.
Daily
Като алтернатива, ако химикалът не предизвиква остра токсичност и разтворимостта му е над 100 mg/l, тогава следва 100 mg/l да се приеме за най-високата изпитвана концентрация, тъй като тази концентрация обикновено се счита за „практически нетоксична“.
Mortality
Въпреки че не се препоръчват като процедура, статичните методи с обновяване могат да бъдат използвани, когато проточните методи са неподходящи за постигането на МПК.
Hind Limb Length
Ако се използват статични методи с обновяване, стабилността на концентрацията на изпитвания химикал следва да бъде документирана и да остава в границите на критериите за параметрите.
Snout-Vent Length
Препоръчват се двадесет и четири периода на обновяване.
Wet Body Weight
Периоди на обновяване, надвишаващи 72 часа, са неприемливи.
Thyroid Gland Histology
Освен това параметрите за качество на водата (например DO, температура, рН и т.н.) следва да се измерват в края на всеки период на обновяване, непосредствено преди обновяването.
Developmental stage, hind limb length, SVL and wet weight are the apical endpoints of the AMA, and each is briefly discussed below.
Диапазон от концентрации на изпитване
Further technical information for collecting these data is available in the guidance documents referenced including procedures for computer-assisted analysis which are recommended for use.
Изискват се най-малко три концентрации на изпитване и контрола с чиста вода (и контрола на носител, ако е необходимо).
The developmental stage of X. laevis tadpoles is determined using the staging criteria of Nieuwkoop and Faber (8).
Минималната разлика между най-високата и най-ниската концентрация на изпитване следва да бъде около един порядък.
Developmental stage data are used to determine if development is accelerated, asynchronous, delayed or unaffected.
Максималното разделяне на дозите е 0,1, а минималното е 0,33.
Acceleration or delay of development is determined by making a comparison between the median stage achieved by the control and treated groups.
Започване и провеждане на изпитването
Asynchronous development is reported when the tissues examined are not malformed or abnormal, but the relative timing of the morphogenesis or development of different tissues is disrupted within a single tadpole.
Експозицията следва да започне, когато достатъчно на брой попови лъжички в изходната популация преди експозицията са достигнали етап на развитие 51 по Nieuwkoop и Faber (8), и когато същите са на възраст по-малко или равна на 17 дни след оплождането.
Differentiation and growth of the hind limbs are under control of thyroid hormones and are major developmental landmarks already used in the determination of developmental stage.
За подбор на екземпляри за изпитването, в единичен съд, съдържащ подходящ обем вода за разреждане, следва да се обединят здрави попови лъжички изходната популация, с нормален външен вид.
Hind limb development is used qualitatively in the determination of developmental stage, but is considered here as a quantitative endpoint.
За определяне на етапа на развитие поповите лъжички следва да бъдат отстранени с малка мрежа или сито от съда, в който са били обединени, и прехвърлени в прозрачна измервателна камера (например 100 mm блюдо на Петри), съдържаща вода за разреждане.
Therefore, hind limb length is measured as an endpoint to detect effects on the thyroid axis (Figure 2).
Предпочита се за определяне на етапа да не се използва анестезия, но може да се използва индивидуална анестезия на поповите лъжички с 100 mg/l трикаинметансулфонат (напр.
For consistency, hind limb length is measured on the left hind limb.
MS-222), подходящо буфериран с натриев бикарбонат (рН 7,0) преди обработката.
Hind limb length is evaluated both at day 7 and at day 21 of the test.
Ако се използва, следва от опитни лаборатории да се получи методология за използване, напр. на MS-222, по подходящ начин, и да се протоколира заедно с резултатите от изпитването.
On day 7, measuring hind limb length is straightforward, as illustrated in Figure 2.
По време на това прехвърляне с животните трябва да се борави внимателно, за да се сведе до минимум стресът от боравенето, както и да се избегне каквото и да е увреждане.
However, measuring hind limb length on day 21 is more complicated due to bends in the limb.
Етапът на развитие на животните се определя като се използва бинокулярен стереомикроскоп.
Therefore, measurements of hind limb length at day 21 should originate at the body wall and follow the midline of the limb through any angular deviations.
За намаляване на крайното вариране в етапа на развитие, важно е това определяне на етапа да се провежда колкото е възможно по-точно.
Changes in hind limb length at day 7, even if not evident at day 21, are still considered significant for potential thyroid activity.
Според Nieuwkoop и Faber (8) основният ориентир за развитието при подбор на организми на етап 51 е морфологията на задните крайници.
Length measurements are acquired from digital photographs using image analysis software as described in the OECD Guidance Document on Amphibian Thyroid Histology (9).
Морфологичните характеристики на задните части следва да бъдат изучени под микроскоп.
Body Length and Wet Weight
Въпреки че за изчерпателна информация относно определянето на етапа на развитие при поповите лъжички следва да бъде консултирано ръководството по Nieuwkoop и Faber (8), може надеждно да се определи етапът, като се използват видими морфологични ориентири.
Determinations of snout to vent length (SVL) (Figure 2) and wet weight are included in the test protocol to assess possible effects of test chemicals on the growth rate of tadpoles in comparison to the control group and are useful in detecting generalised toxicity to the test chemical.
Следната таблица може да бъде използвана за опростяване и стандартизиране на процедурата за определяне на етапа чрез определяне на видими морфологични ориентири, свързани с различни етапи, като се допуска нормално развитие.
Because the removal of adherent water for weight determinations can cause stressful conditions for tadpoles and may cause skin damage, these measurements are performed on the day 7 sub-sampled tadpoles and all remaining tadpoles at test termination (day 21).
Видими морфологични ориентири за определяне на етапа съгласно насоките на Neuwkoop и Faber.
For consistency, use the cranial aspect of the vent as the caudal limit of the measurement.
Видими морфологични ориентири
Snout to vent length (SVL) is used to assess tadpole growth as illustrated in Figure 2.
Етап на развитие
Types of body length measurements and (B) Hind limb length measurements for X. laevis tadpoles (1)
Задни крайници
While developmental stage and hind limb length are important endpoints to evaluate exposure-related changes in metamorphic development, developmental delay cannot, by itself, be considered a diagnostic indicator of anti-thyroidal activity.
Предни крайници
Some changes may only be observable by routine histopathological analysis.
Черепно-лицева структура
Diagnostic criteria include thyroid gland hypertrophy/atrophy, follicular cell hypertrophy, follicular cell hyperplasia, and as additional qualitative criteria:
Морфология на обонятелен нерв
follicular lumen area, colloid quality and follicular cell height/shape.
Дължина на опашката
Severity grading (4 grades) should be reported.
За започване на изпитването всички попови лъжички трябва да са на етап 51.
Information on obtaining and processing samples for histological analysis and for performing histologic analyses on tissue samples is available in “Amphibian Metamorphosis Assay: Part 1 — Technical guidance for morphologic sampling and histological preparation” and “Amphibian Metamorphosis Assay: Part 2 — Approach to reading studies, diagnostic criteria, severity grading and atlas” (9).
Най-видимият морфологичен ориентир за определяне на посочения етап е морфологията на задните крайници, която е показана на фигура 1.
Laboratories performing the assay for the first time(s) should seek advice from experienced pathologists for training purpose prior to undertaking histological analysis and evaluation of the thyroid gland.
Морфология на задните крайници на попова лъжичка на Х. laevis на етап 51.
Overt and significant changes in apical endpoints indicating developmental acceleration or asynchrony may preclude the necessity to perform histopathological analysis of the thyroid glands.
В допълнение към избора на етапа на развитие може да се използва незадъжителен подбор по размера на екземплярите за изпитване.
However, absence of overt morphological changes or evidence of developmental delay warrants histological analyses.
За тази цел цялата дължина на тялото (не SVL) следва да се измери в ден 0 за подпроба от приблизително 20 попови лъжички на етап 51 по NF.
All test tanks should be checked daily for dead tadpoles and the numbers recorded for each tank.
След изчисляване на средната цялостна дължина на тялото за тази група животни, минималните и максималните граници за цялостната дължина на тялото на опитните животни може да се определи, като се даде интервал около средната стойност ± 3 mm (средните стойности на цялостната дължина на тялото са в диапазон от 24,0 до 28,1 mm за попови лъжички на етап 51).
The date, concentration and tank number for any observation of mortality should be recorded.
Независимо от това, определянето на етапа е първичният параметър при определяне на готовността на всеки екземпляр за изпитване.
Dead animals should be removed from the test tank as soon as observed.
Поповите лъжички, показващи видими макроскопски дефекти или увреждания, следва да бъдат изключени от изследването.
Mortality rates exceeding 10 % may indicate inappropriate test conditions or toxic effects of the test chemical.
Поповите лъжички, които отговарят на критериите за етапа, описани по-горе, се държат в съд с чиста вода за отглеждане до приключване на процеса на определяне на етапа.
Additional Observations
След приключване на определянето на етапа ларвите се разпределят на случаен принцип към съдове за третиране с експозиция до запълване на всеки такъв съд с 20 ларви.
Cases of abnormal behaviour and grossly visible malformations and lesions should be recorded.
Сред това всеки съд за третиране се проверява за животни с анормален външен вид (напр. увреждания, необичаен начин на плуване и т.н.).
The date, concentration and tank number for any observation of abnormal behaviour, gross malformations or lesions should be recorded.
Поповите лъжички с явно нездрав външен вид следва да бъдат отстранявани от съдовете за третиране и заменяни с новоизбрани ларви от съда, в който са били обединени.
Normal behaviour is characterised by the tadpoles being suspended in the water column with tail elevated above the head, regular rhythmic tail fin beating, periodic surfacing, operculating, and being responsive to stimulus.
За по-подробна информация относно процедурите за приключване на изпитването и обработката на поповите лъжички вж.
Abnormal behaviour would include, for example, floating on the surface, lying on the bottom of the tank, inverted or irregular swimming, lack of surfacing activity, and being nonresponsive to stimulus.
Ръководството на ОИСР за тиреоидна хистология на земноводни (9).
In addition, gross differences in food consumption between treatments should be recorded.
Измервания на Ден 7
Gross malformations and lesions could include morphological abnormalities (e.g. limb deformities), hemorrhagic lesions, bacterial or fungal infections, to name a few.
В ден 7 пет случайно избрани попови лъжички от всяко повторение се отстраняват от всеки съд за изпитване.
These determinations are qualitative and should be considered akin to clinical signs of disease/stress and made in comparison to control animals.
Използваната процедура с избор на случаен принцип следва да предоставя равен шанс за избиране на всеки изпитван организъм.
If the occurrence or rate of occurrence is greater in exposed tanks than in the controls, then these should be considered as evidence for overt toxicity.
Това може да се постигне чрез използване на произволен метод за рандомизация, но се изисква всяка попова лъжичка да бъде уловена с мрежа.
Data Collection
Поповите лъжички, които не са избрани, се връщат в първоначалния съд, избраните попови лъжички се подлагат на евтаназия по хуманен начин в 150 до 200 mg/l, напр.
All data should be collected using electronic or manual systems which conform to good laboratory practices (GLP).
MS-222, подходящо буфериран с натриев бикарбонат за постигане на рН 7,0.
Characterisation of the test chemical:
Подложените на евтаназия попови лъжички се промиват с вода и водата се попива, след което се определя телесното тегло с точност до милиграм.
physical-chemical properties;
За всяка попова лъжичка се определят дължината на задните крайници, дължината от върха на муцуната до клоачния отвор и етапът на развитие (като се използва бинокулярен стереомикроскоп).
information on stability and biodegradability;
Ден 21 Измервания (Приключване на изпитването)
Chemical information and data:
При приключването на изпитването (ден 21) останалите попови лъжички се отстраняват от съдовете за изпитване и се подлагат на евтаназия по хуманен начин в 150 до 200 mg/l, напр.
method and frequency of preparation of dilutions.
MS-222, подходящо буфериран с натриев бикарбонат, както е посочено по-горе.
Test chemical information includes actual and nominal concentrations of the test chemical, and in some cases, non-parent chemical, as appropriate.
Поповите лъжички се промиват с вода и водата се попива, след което се определя телесното тегло с точност до милиграм.
Test chemical measurements may be required for stock solutions as well as for test solutions;
За всяка попова лъжичка се измерват етапът на развитие, дължината от върха на муцуната до клоачния отвор и дължината на задните крайници.
Solvent (if other than water):
Всички ларви се поставят във фиксатор на Davidson за 48 до 72 часа или като проби с цяло тяло, или като проби от тъкан с почистена глава, съдържащи долната челюст за хистологична оценка.
justification of the choice of solvent, and characterisation of solvent (nature, concentration used);
Като проби за хистопатологията се вземат общо пет попови лъжички от всеки съд с повторение.
Operational records:
Тъй като височината на фоликуларната клетка зависи от етапа (10), най-подходящият подход за вземане на проби за хистологични анализи е да се използват индивиди със съвпадащ етап, когато това е възможно.
these consist of observations pertaining to the functioning of the test system and the supporting environment and infrastructure.
С цел да се подберат индивиди със съвпадащ етап следва етапът на ларвите да бъде определен преди подбора и последващата обработка за събиране на данни и съхранение.
Typical records include:
Това е необходимо, тъй като обичайните различия в развитието ще доведат до различни разпределения по етапи в рамките на всеки съд с повторение.
ambient temperature, test temperature, photoperiod, status of critical components of the exposure system (e.g. pumps, cycle counters, pressures), flow rates, water levels, stock bottle changes, and feeding records.
Животните, избрани за хистопатология (n=5 от всяко повторение) следва да са еднакви с медианната стойност на етапа от контролите (обединени повторения), когато това е възможно.
General water quality parameters include:
Ако са налице съдове с повторение с повече от пет ларви на подходящ етап, тогава се избират пет ларви на случаен принцип.
pH, DO, conductivity, total iodine, alkalinity, and hardness;
Ако са налице съдове с повторение с по-малко от пет ларви на подходящ етап, тогава като извадка следва да бъдат взети на случаен принцип индивиди от следващия надолу или нагоре етап на развитие, до достигане на общ размер на извадката от пет ларви на повторение.
Deviations from the test method: