natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Други видове от род Enchytraeus също са подходящи, напр.
For chemicals insoluble in water but soluble in organic solvents, the test chemical can be dissolved in the smallest possible volume of a suitable vehicle (e.g. acetone).
E. buchholzi Vejdovsky 1879 или E. crypticus Westheide & Graefe 1992 (вж. допълнение 5).
Only volatile solvents should be used.
Ако се използват други видове от род Enchytraeus, те следва да бъдат ясно определени и да се отчетат причините за избора им.
The vehicle is sprayed on or mixed with a small amount, for example 2,5 g, of fine quartz sand.
При изпитванията се използват полово зрели червеи.
The vehicle is eliminated by evaporation under a fume hood for at least one hour.
Те следва да имат яйца (бели точки) в областта на клителума и да са с приблизително еднакъв размер (около 1 см в дължина).
This mixture of quartz sand and test chemical is added to the pre-moistened soil and thoroughly mixed after adding an appropriate amount of de-ionised water to obtain the moisture required.
Синхронизиране при отглеждането им не е необходимо.
The final mixture is introduced into the test vessels.
Ако представителите на семейство Enchytraeidae не са отгледани в същия тип почва и при условията (включително хранене), използвани при крайното изпитване, те трябва да бъде аклиматизирани в продължение на най-малко 24 часа и най-много до три дни.
For chemicals that are poorly soluble in water and organic solvents, the equivalent of 2,5 g of finely ground quartz sand per test vessel is mixed with the quantity of test chemical to obtain the desired test concentration.
Първоначално следва да бъде аклиматизиран по-голям брой полово зрели индивиди в сравнение с необходимите за извършване на изпитването, за да се остави възможност за отстраняване на увредени или други неподходящи екземпляри.
This mixture of quartz sand and test chemical is added to the pre-moistened soil and thoroughly mixed after adding an appropriate amount of de-ionised water to obtain the required moisture content.
В края на периода на аклиматизация единствено червеите, които са с яйца и не проявяват поведенчески отклонения (например, опити да избягат от почвата) се избират за изпитването.
The final mixture is divided between the test vessels.
Червеите внимателно се отстраняват, като се използват мека златарска пинсета, куки или примки, и се поставят в блюдо на Петри, съдържащо малко количество прясна вода.
The procedure is repeated for each test concentration and an appropriate control is also prepared.
Възстановената сладка вода, както е предложено в глава В.20 от настоящото приложение („тест за възпроизвеждане на гигантска водна бълха“) се предпочита за целта, тъй като дейонизираната, деминерализираната или чешмяната вода биха могли да навредят на червеите.
Chemicals should not normally be tested at concentrations higher than 1000 mg/kg dry mass of soil.
Червеите се проверяват под стереомикроскоп и всички, които не съдържат яйца, се отстраняват.
Testing at higher concentrations may however be required in accordance with the objectives of a specific test.
Вземат се мерки за отстраняване и изхвърляне на всички акари или колемболи, които може да са заразили културите.
PERFORMANCE OF THE TESTS
Здравите червеи, които не се използват за изпитването, се връщат в изходната култура.
Test groups and controls
Приготвяне на концентрации за изпитване
For each test concentration, an amount of test soil corresponding to 20 g dry weight is placed into the test vessel (see paragraphs 19-21).
Разтворим във вода изпитван химикал
Controls, without the test chemical, are also prepared.
Разтвор на изпитвания химикал се приготвя в дейонизирана вода в количество, достатъчно за всички повторения на една концентрация за изпитване.
Food is added to each vessel in accordance with procedures described in paragraph 29.
Препоръчително е да се използва подходящо количество вода до достигане на изискуемото съдържание на влага, т.е., 40—60 % от максималната СЗВ (вж. точка 13).
Ten worms are randomly allocated to each test vessel.
Всеки разтвор на изпитвания химикал се смесва грижливо с една партида предварително навлажнена почва, преди да бъде внесен в съда за изпитване.
The worms are carefully transferred into each test vessel and placed on the surface of the soil using, for example, jeweller's tweezers, hooks or loops.
Неразтворим във вода изпитван химикал
The number of replicates for test concentrations and for controls depends on the test design used (see paragraph 34).
За химикалите, които са неразтворими във вода, но разтворими в органични разтворители, изпитваният химикал може да бъде разтворен във възможно най-малък обем подходящ носител (напр. ацетон).
The test vessels are positioned randomly in the test incubator and these positions are re-randomised weekly.
Следва да се използват само летливи разтворители.
If a vehicle is used for application of the test chemical, one control series containing quartz sand sprayed or mixed with solvent should be run in addition to the test series.
Носителят се разпръсква върху малко количество фин кварцов пясък, например 2,5 g, или се смесва с него., Носителят се отстранява чрез изпаряване в лабораторна камина в продължение най-малко на един час.
The solvent or dispersant concentration should be the same as that used in the test vessels containing the test chemical.
Сместа от кварцов пясък и изпитван химикал се добавя в предварително навлажнената почва и старателно се смесва, след добавяне на подходящо количество дейонизирана вода, за да се получи необходимото съдържание на влага.
A control series containing additional quartz sand (2,5 g per vessel) should be run for chemicals requiring administration in accordance with the procedures described in paragraph 21.
Крайната смес се въвежда в съдовете за изпитване.
The test temperature is 20 ± 2 °C.
За малко разтворимите във вода и в органични разтворители химикали, еквивалентът на 2,0—2,5 g фино стрит кварцов пясък на изпитвателен съд се смесва с количеството изпитван химикал, така че да се получи желаната концентрация за изпитването.
To discourage worms from escaping from the soil, the test is carried out under controlled light-dark cycles (preferably 16 hours light and 8 hours dark) with illumination of 400 to 800 lux in the area of the test vessels.
Сместа от кварцов пясък и изпитван химикал се добавя в предварително навлажнената почва и старателно се смесва, след добавяне на подходящо количество дейонизирана вода, за да се получи необходимото съдържание на влага.
In order to check the soil humidity, the vessels are weighed at the beginning of the test and thereafter once a week.
Крайната смес се разпределя между съдовете за изпитване.
Weight loss is replenished by the addition of an appropriate amount of deionised water.
Процедурата се повтаря за всяка концентрация за изпитване, като се приготвя и подходяща контрола.
It should be noted that loss of water can be reduced by maintaining a high air-humidity (> 80 %) in the test incubator.
Химикали обикновено не следва да се изпитват в концентрации, по-високи от 1000 mg/kg суха маса почва.
The moisture content and the pH, should be measured at the beginning and the end of both the range-finding test and the definitive test.
Изпитването при по-високи концентрации обаче може да се изисква в съответствие с целите на определено изпитване.
Measurements should be made in control and treated (all concentrations) soil samples prepared and maintained in the same way as the test cultures but not containing worms.
ПРОВЕЖДАНЕ НА ИЗПИТВАНЕТО
Food should only be added to these soil samples at the start of the test to facilitate microbial activity.
Групи на изпитване и контроли
The amount of food added should be the same as that added to the test cultures.
За всяка концентрация за изпитване в съда за изпитване (вж. точки 19-21) се поставя количество почва за изпитване, съответстващо на 20 g сухо тегло.
It is not necessary to add further food to these vessels during the test.
Приготвят се и контролите без изпитвания химикал.
Feeding
Към всеки съд се добавя храна в съответствие с процедурите, описани в точка 29.
A food capable of maintaining the enchytraeid population can be used.
Десет червея се разпределят на случаен принцип във всеки съд за изпитване.
Rolled oats, preferably autoclaved before use to avoid microbial contamination (heating is also appropriate), have been found to be a suitable feeding material.
Червеите внимателно се прехвърлят във всеки съд за изпитване и се поставят върху повърхността на почвата, например чрез използване на мека златарска пинсета, куки или примки.
Food is first provided by mixing 50 mg of ground rolled oats with the soil in each vessel before introducing the worms.
Броят на повторенията за концентрациите за изпитване и за контролите зависи от използвания план за изпитването (вж. точка 34).
Thereafter, food is supplied weekly up to Day 21.
Съдовете за изпитване се поставят в инкубатор за изпитване на случаен принцип и тези позиции се разместват веднъж седмично, също на случаен принцип.
Feeding is not carried out on Day 28 since the adults have been removed at this stage and the juvenile worms need relatively little additional food beyond this point.
Ако за прилагане на изпитвания химикал се използва носител, една поредица контроли, съдържащи кварцов пясък, напръскани или смесени с разтворител, следва да бъдат включени допълнително към изпитваните поредици.
Feeding during the test comprises 25 mg of ground rolled oats per vessel placed carefully on the surface of the soil so as to avoid injuring the worms.
Концентрацията на разтворителя или на диспергиращото средство следва да е същата, като използваната в съдовете за изпитване, съдържащи изпитвания химикал.
In order to reduce fungal growth, the oats flakes should be buried in the soil by covering with small amounts of soil.
Една поредица контроли, съдържаща допълнително кварцов пясък (2,5 g за всеки съд) следва да бъде приготвена за химикали, които изискват прилагане в съответствие с процедурите, описани в точка 21.
If food remains uneaten the ration should be reduced.
Температурата на изпитването е 20 ± 2 °C.
Design for the range-finding test
С цел да не се насърчава избягването на червеи от почвата, изпитването се провежда при контролирани цикли светлина-тъмнина (за предпочитане 16 часа светлина и 8 часа тъмнина) с осветление от 400 до 800 lux в зоната на съдовете за изпитване.
When necessary, a range-finding test is conducted with, for example, five test chemical concentrations of 0,1, 1,0, 10, 100, and 1000 mg/kg (dry weight of soil).
С цел проверка на влажността на почвата, съдовете се претеглят в началото на изпитването и един път седмично след това.
One replicate for each treatment and control is sufficient.
Загубата на тегло се запълва чрез добавяне на подходящо количество дейонизирана вода.
The duration of the range-finding test is two weeks.
Следва да се отбележи, че загубата на вода може да се намали чрез поддържане на висока влажност на въздуха в инкубатора за изпитване (> 80 %).
At the end of the test, mortality of the worms is assessed.
Съдържанието на влага и стойността на pH трябва да се измерят в началото и в края както на изпитването за определяне на обхвата, така и на окончателното изпитване.
A worm is recorded as dead if it has no reaction to a mechanical stimulus at the anterior end.
Измерванията трябва да се извършват в контролните и третираните почвени проби (всички концентрации), подготвени и поддържани по същия начин като изпитваните култури, но несъдържащи червеи.
Additional information to mortality may also be useful in deciding on the range of concentrations to be used in the definitive test.
Храна следва да се добавя само към тези почвени проби в началото на изпитването за улесняване на микробната активност.
Changes in adult behaviour (e.g. the inability to dig into the soil; lying motionless against the glass wall of the test vessel) and morphology (e.g. the presence of open wounds) should therefore also be recorded along with the presence of any juveniles.
Количеството на храната следва да бъде същото като добавеното към изпитваните култури.
The latter can be determined using the staining method described in Appendix 6.
Не е необходимо да се добавя допълнително храна към тези съдове по време на изпитването.
The LC50 can be approximately determined by calculating the geometrical mean of mortality data.
Хранене
In setting the concentration range for the definitive test, effects on the reproduction are assumed to be lower than the LC50 by a factor of up to 10.
Може да се използва храна, която е в състояние да поддържа популацията от представители на сем.
However, this is an empirical relation ship and in any specific case it might be different.
Enchytraeidae.
Additional observations made in the range-finding test such as the occurrence of juveniles can help refine the test chemical concentration range to be used for the definitive test.
Сплескани овесени ядки, за предпочитане обработени в автоклав преди употреба, за да се избегне микробно замърсяване (загряване също е целесъобразно), се считат за подходящ материал за храненето.
In order for an accurate determination of the LC50 performing the test using at least four replicates each of the test chemical concentration and an adequate number of concentrations to cause at least four statistically significantly different mean responses at these concentrations) is recommended.
Храната се предоставя най-напред чрез смесване на 50 mg смлени сплескани овесени ядки с почвата във всеки съд, преди въвеждането на червеите.
A similar number of the concentrations and replicates for the controls are used when they are applicable.
След това храна се доставя седмично до ден 21.
Design for the definitive reproduction test
Хранене не се извършва в ден 28, тъй като на този етап полово зрелите индивиди се отстраняват, а ювенилните червеи се нуждаят от сравнително малко допълнителна храна след този ден.
Three designs are proposed based on recommendations arising from a ring test (2)
Храненето по време на изпитването се състои от 25 mg смлени сплескани овесени ядки на съд, поставени внимателно върху повърхността на почвата, така че да се избегне нараняването на червеите.
For determination of the NOEC, at least five concentrations in a geometric series should be tested.
С цел да се намали растежът на гъбички, овесените ядки трябва да се заровят в почвата, като се покриват с малки количества от почвата.
Four replicates for each test concentration plus eight controls are recommended.
Ако храната остава неизядена, дажбата трябва да бъде намалена.
The concentrations should be spaced by a factor not exceeding 1,8.
План за изпитването за определяне на обхвата
For determination of the ECx (e.g. EC10, EC50), at least five concentrations should be tested and the concentrations should bracket ECx in order to enable ECx interpolation and not extrapolation At least four replicates for each test concentration and four control replicates are recommended.
Когато е необходимо, се провежда изпитване за определяне на обхвата, например за пет концентрации на изпитвания химикал от 0,1, 1,0, 10, 100 и 1000 mg/kg (сухо тегло на почвата).
The spacing factor may vary, i.e. less than or equal to 1,8 in the expected effect range and above 1,8 at the higher and lower concentrations.
За всяка третирана и контролна проба е достатъчно едно повторение.
A combined approach allows for determination of both the NOEC and ECx.
Продължителността на изпитването за определяне на обхвата е две седмици.
Eight treatment concentrations in a geometric series should be used.
В края на изпитването се оценява смъртността на червеите.
Four replicates for each treatment plus eight controls are recommended.
Червеят се отчита като мъртъв, когато не реагира на механичен стимул в предния край.
Ten adult worms per test vessel should be used (see paragraph 23).
Допълнителна информация за смъртността може също да бъде полезна при вземането на решение за диапазона на концентрациите, които да се използват в окончателното изпитване.
Food is added to the test vessels at the beginning of the test and then once a week (see paragraph 29) up to and including Day 21.
Промени в поведението (напр. не е способен да копае в почвата; лежи неподвижно срещу стъклената стена на съда за изпитване) и морфологията (напр. наличие на открити рани) на полово зрелите индивиди също следва да бъдат записвани заедно с наличието на ювенилни екземпляри.
On Day 21 the soil samples are carefully hand searched and living adult worms are observed and counted and changes in behaviour (e.g. inability to dig into the soil; lying motionless against the glass wall of the test vessel) and in morphology (e.g. open wounds) are recorded.
Последното може да се определи с помощта на метода с оцветяване, описан в допълнение 6.
All adult worms are then removed from the test vessels and the test soil.
Стойността на LC50 може да бъде приблизително определена чрез изчисляване на геометричната средна стойност от данните за смъртността.
The test soil containing any cocoons that had been produced are incubated for three additional weeks under the same test conditions except that feeding takes place only on Day 35 (i.e. 25 mg ground rolled oats per vessel).
При определяне на диапазона на концентрациите за окончателното изпитване, въздействието върху размножаването се приемат с по-ниска стойност от стойността на LC50 с коефициент в размер до 10.
After six weeks, the newly hatched worms are counted.
Това обаче е емпирична зависимост и във всеки конкретен случай би могла да бъде различна.
The method based on Bengal red staining (see Appendix 6) is recommended although other wet (but not heat) extraction and floatation techniques (see Appendix 6) have also proved suitable (4)(10)(11)(20).
Допълнителните наблюдения при изпитването за определяне на обхвата, като срещането на ювенилни екземпляри, могат да допринесат за по-точно определяне на диапазона на концентрациите на изпитвания химикал, които да се използват за окончателното изпитване.
Bengal red staining is recommended because wet extraction from a soil substrate can be hampered by turbidity caused by suspended clay particles.
С цел точно определяне на LC50 се препоръчва изпитване с използване най-малко на четири повторения за всяка от концентрациите на изпитвания химикал, и достатъчен брой концентрации за получаване на най-малко четири статистически значими различни средни отклика при тези концентрации.
If no effects are observed at the highest concentration in the range-finding test (i.e. 1000 mg/kg), the reproduction test can be performed as a limit test, using 1000 mg/kg in order to demonstrate that the NOEC for reproduction is greater than this value.
Когато се прилагат контроли, за тях се използва подобен брой концентрации и повторения.
Summary and timetable for the test
План за окончателното изпитване за размножаване
The steps of the test can be summarised as follows:
Въз основа на препоръките от кръгово изпитване се предлагат три вида планове (2)
Time
За определяне на NOEC следва да се изпитат най-малко пет концентрации в геометрична прогресия.
Day –7 or earlier
Препоръчват се четири повторения за всяка концентрация за изпитване, плюс осем контроли.
Prepare artificial soil (mixing of dry constituents)
Концентрациите трябва да бъдат разделени една от друга с кратност, която не превишава 1,8.
Day –5
За определяне на ECx (напр.
Check pH of artificial soil
EC10, EC50) следва да се изпитат поне пет концентрации, като те трябва да обхващат ECx, за да се даде възможност за определяне на ECx чрез интерполация, а не чрез екстраполация.
Measure max WHC of soil
Препоръчват се най-малко по четири повторения за всяка изпитвана концентрация и четири контролни повторения.
Day –5 to –3
Кратността на разделянето може да варира, т.е., да е по-малка или равна на 1,8 в диапазона на очакваното въздействие и над 1,8 при по-високите и по-ниските концентрации.
Sort worms for acclimatisation
Комбинираният подход дава възможност за едновременно определяне на NOEC и ЕСх.
Day — 3 to 0
Следва да бъдат използвани осем концентрации на третиране в геометрична прогресия.
Acclimatise worms for at least 24 hours
Препоръчват се четири повторения за всяко третиране, плюс осем контроли.
Day –1
Трябва да бъдат използвани по десет полово зрели червея на съд за изпитване (вж. точка 23).
Pre-moisten artificial soil and distribute into batches
Храната се добавя в стъклените съдове за изпитване в началото на теста, след това веднъж седмично (вж. точка 29) включително до ден 21.
Day 0
В ден 21 почвените проби се подлагат на внимателно ръчно претърсване и живите полово зрели червеи се наблюдават и отчитат и се записват промените в поведението (напр. неспособност да се копае в почвата; лежане неподвижно срещу стъклената стена на съда за изпитване) и морфологията (напр. наличие на открити рани).
Prepare stock solutions
След това всички полово зрели червеи се отстраняват от съдовете за изпитване и от изпитваната почва.
Apply test chemical
Използваната при изпитването почва и всички получени пашкулчета, съдържащи се в нея, се инкубират в продължение на три допълнителни седмици при същите условия на изпитване, с изключение на това, че храненето се извършва само в ден 35 (т.е.
Weigh test substrate into test vessels
25 mg смлени сплескани овесени ядки, за всеки съд).
Mix in food
След шест седмици новоизлюпените червеи се преброяват.
Introduce worms
Методът, основан на оцветяване в бенгалско червено (вж. допълнение 6), се препоръчва, въпреки че други техники, като извличане с вода (но не с топлина) и флотация (вж. допълнение 6), също са се оказали подходящи (4) (10) (11) (20).
Measure soil pH and moisture content
Оцветяването в бенгалско червено се препоръчва, тъй като извличането с вода от почвата може да се възпрепятства от мътност, причинена от суспендирани частици глина.
Day 7
Ако при изпитването за определяне на обхвата не се наблюдават въздействия при най-високата концентрация (т.е.
Check soil moisture content
1000 mg/kg), изпитването за размножаването може да бъде проведено като гранично изпитване, като се използва 1000 mg/kg, за да се покаже, че NOEC за размножаването е по-висока от тази стойност.
Feed
Обобщение и график за провеждане на изпитването
Day 14
Етапите на изпитването могат да бъдат обобщени както следва:
Determine adult mortality
Време
Estimate number of juveniles
Ден – 7 или по-рано
Day 21
Приготвяне на изкуствена почва (смесване на сухи съставки)
Observe adult behaviour
Ден – 5
Remove adults
проверява се pH на изкуствената почва
Day 28
Измерване на максималната СЗВ на почвата
No feeding
Ден – 5 до – 3
Day 35
сортиране на червеите с оглед на аклиматизацията
Day 42
Ден – 3 to 0
Count juvenile worms
червеите се аклиматизират в продължение на поне 24 часа
Treatment of results
Ден – 1
Although an overview is given in Appendix 7, no definitive statistical guidance for analysing test results is given in this test method.
предварително намокряне на изкуствената почва и разделяне на партиди
In the range finding test, the main endpoint is mortality.
Ден 0
Changes in behaviour (e.g. inability to dig into the soil; lying motionless against the glass wall of the test vessel) and morphology (e.g. open wounds) of the adult worms should however also be recorded along with the presence of any juveniles.
приготвят се изходни разтвори
Probit analysis (21) or logistic regression should normally be applied to determine the LC50.
прилага се изпитваният химикал
However, in cases where this method of analysis is unsuitable (e.g., if less then three concentrations with partial kills are available), alternative methods can be used.
претегляне на изпитвания субстрат в съдовете за изпитване
These methods could include moving averages (22), the trimmed Spearman-Karber method (23) or simple interpolation (e.g., geometrical mean of LC0 and LC100, as computed by the square root of LC0 multiplied by LC100).
смесване на храната
In the definitive test, test endpoint is fecundity (i.e. number of juveniles produced).
въвеждане на червеите
However, as in the range-finding test, all other harmful signs should be recorded in the final report.
измерване на рН и съдържанието на влага на почвата
The statistical analysis requires the arithmetic mean and the standard deviation per treatment and per control for reproduction to be calculated.