natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Действителният брой на туберкулите рядко е повече от 30 (обхват от 18—28; Jensen et al.
After the excision of the liver (Appendix 6), the carcass is placed into a conical tube containing about 10 ml of 10 % neutral buffered formalin (upside: head, downside: tail).
2001).
If the gonad is fixed in a solution other than 10 % neutral buffered formalin, make a transverse cut across the carcass between anterior region of anal fin and anus using razor, taking care not to harm the gonopore and gonad itself (Fig.
Преобладаващите туберкули (по отношение на броя) представляват единични, относително заоблени структури, с височина приблизително равна на радиуса.
3).
Повечето репродуктивно активни мъжки животни също имат поне няколко туберкули, които са разширени и подчертано развити по такъв начин, че не могат да бъдат разграничени като отделни структури.
Place the cranial side of the fish body into the fixative solution to preserve the gonad, and the tail side of the fish body into the 10 % neutral buffered formalin as described above.
Някои типове химикали, нарушаващи функциите на ендокринната система, могат да причинят необичайната поява на някои вторични полови белези в другия пол;
After placing the fish body into 10 % neutral buffered formalin, grasp the anterior region of the anal fin with tweezers and fold it for about 30 seconds to keep the anal fin open.
например на агонисти на андрогенните рецептори, като 17β-метилтестостерон или 17β-тренболон, могат да предизвикат развитие на размножителни туберкули у женски Pimephales promelas (Smith 1974; Ankley et al.
When grasping the anal fin with tweezers, grasp a few fin rays in the anterior region with care not to scratch the papillary processes.
2001; 2003), докато агонисти на естрогенните рецептори могат да предизвикат намаляване на размножителните туберкули у мъжки индивиди (Miles-Richardson et al.
After keeping the anal fin open for about 30 seconds, store the fish body in 10 % neutral buffered formalin at room temperature until the measurement of the papillary processes (measurement should be conducted after fixing for at least 24 hours).
1999; Harries et al.
Measurement
2000).
After fixing the fish body in the 10 % neutral buffered formalin for at least 24 hours, pick up the fish carcass from the conical tube and wipe the formalin on the filter paper (or paper towel).
По-долу е представено описание на характеризирането на размножителни туберкули у Pimephales promelas въз основа на процедурите, използвани в лабораторията на Американската агенция за защита на околната среда в Duluth, MN.
Place the fish abdomen side up.
Специфичните продукти и/или оборудване може да бъдат заменени с налични равностойни материали.
Then cut the anal fin using small dissection scissors carefully (it is preferable to cut the anal fin with small amount of pterygiophore).
Наблюдението се извършва най-добре с помощта на увеличително стъкло с осветително тяло или със стереомикроскоп с осветително тяло и увеличение 3X.
Grasp the anterior region of the severed anal fin with tweezers and put it on a glass slide with a several drops of water.
Рибата се наблюдава дорзално с предната част в посока напред (глава към наблюдателя).
Then cover the anal fin with a cover glass.
Рибата се поставя в малко блюдо на Петри (напр.
Be careful not to scratch the papillary processes when grasping the anal fin with tweezers.
100 mm в диаметър), с предната част в посока напред, с коремния дял надолу.
Count the number of the joint plate with papillary processes using the counter under a biological microscope (upright microscope or inverted microscope).
Визьорът се фокусира, за да се даде възможност за идентифициране на туберкулите.
The papillary processes are recognized when a small formation of processes is visible on the posterior margin of joint plate.
Рибата се обръща леко и бавно от една страна на друга, за да се идентифицират областите с туберкули.
Write the number of joint plate with papillary processes in each fin ray to the worksheet (e.g. first fin ray: 0, second fin ray: 10, third fin ray: 12, etc.) and enter the sum of this number on the Excel spreadsheet by individual fish.
Туберкулите се преброяват и ранжират.
If necessary, take a photograph of the anal fin and count the number of joint plate with papillary processes on the photograph.
Наблюдението се повтаря по отношение на предната част на коремния дял, чрез поставяне на рибата дорзално с предната част в посока напред в блюдото на Петри.
After the measurement, put the anal fin into the conical tube described in (1) and store it.
Наблюденията трябва да бъдат извършени в рамките на 2 минути за всяка риба.
Fig.1.
Броене и ранжиране на туберкулите
Diagram showing sexual difference in shape and size of the anal fin.
Определени шест конкретни области за оценка на наличието и развитието на туберкули в полово зрели Pimephales promelas.
A, male;
Разработен е образец за отбелязване на местоположението и количеството на налични туберкули (вж. в края на настоящото допълнение).
B, female.
Броят на туберкулите се записва и техните размери могат да бъдат количествено ранжирани като:
Fig.2.A.
0- липсва, 1-наличен, 2-уголемен и 3-подчертано развит (фиг.
Processes on joint plates of anal fin-ray.
1).
J.P., joint plate;
Ранг 0 — липса на туберкули.
A.S., axial space;
Ранг 1 — наличен се определя за всеки туберкул, който има точка, чиято височина е почти равна на радиуса му (диаметъра).
P., process.
Ранг 2 — уголемен се определя при тъкан с външен вид, наподобяващ звездичка, обикновено с голяма радиална база с вдлъбнатини или бразди, излизащи от центъра.
B, Distal extremity of fin-ray.
Височината на туберкула често е по-неравна, но понякога може до известна степен да е закръглена.
Actinotrichia (Act.) are on the tip.
Ранг 3 — подчертано развит обикновено е доста голям и закръглени, с по-неопределена структура.
Fig.3.
Понякога тези туберкули са разположени заедно, образувайки обща маса по протежение на отделна област или съчетание от области (B, C и D, описани по-долу).
Photograph of fish body showing the cut site when the gonad is fixed in the fixing solution other than 10 % neutral buffered formalin.
Оцветяването и формата са сходни с ранг 2, но понякога са твърде произволни.
In that case, the remaining body will be cut off between anterior region of anal fin and anal using razor (red bar), and the head side of fish body will be put into the fixing solution for gonad and the tail side of the fish body will be put into the 10 % neutral buffered formalin.
Използването на тази рангова система най-общо води като цяло резултати от ранжирането < 50 в нормален контролен мъжки индивид, притежаващ 18 до 20 броя туберкули (Jensen et al.
Papillary processes normally appear only in adult males and are found on fin rays from the second to the seventh or eighth counting from the posterior end of the anal fin (Fig.1 and 2).
2001).
However, processes rarely appear on the first fin ray from the posterior end of the anal fin.
Действителният брой на туберкулите при някои риби може да е по-голям от полетата в образеца (допълнение A) за определена област.
This SOP covers the measurement of processes on the first fin ray (the fin ray number refers to the order from the posterior end of the anal fin in this SOP).
В такъв случай вътре могат да бъдат отбелязани допълнителни числа, вдясно или вляво от полето.
Recommended procedures for sample collection for vitellogenin analysis
Следователно не е необходимо образецът да показва симетрия.
Care should be taken to avoid cross-contamination between VTG samples of males and females.
Допълнителен метод за отбелязване на местоположението на туберкули, които са чифтни или съединени вертикално по протежение на хоризонталната равнина на устата, може да се осъществи чрез двойно отбелязване на два ранга на туберкули в едно поле.
Procedure 1A:
Области за отбелязване на местоположението:
Fathead Minnow, Blood Collection from the Caudal Vein/Artery
A туберкули, разположени около окото.
After anaesthetisation, the caudal peduncle is partially severed with a scalpel blade and blood is collected from the caudal vein/artery with a heparinised microhematocrit capillary tube.
Положението се отбелязва дорзално към вентрално около предния край на окото.
After the blood has been collected, the plasma is quickly isolated by centrifugation for 3 min at 15000 g (or alternatively for 10 min. at 15000 g at 4 °C).
Обичайно са много при полово зрели мъжки от контроли, не са налични при женски, като цяло чифтни (един в близост до всяко око) или единични при женски животни, експонирани на андрогени.
If desired, percent hematocrit can be determined following centrifugation.
B туберкули, разположени между ноздрите (сензорни канали).
The plasma portion is then removed from the microhematocrit tube and stored in a centrifuge tube with 0,13 units of aprotinin (a protease inhibitor) at – 80 °C until determination of vitellogenin can be made.
Обикновено чифтни при мъжките в контролите с по-висок ранг за развитие (2- уголемен или 3- подчертано развит).
Depending on the size of the fathead minnow (which is sex-dependent), collectable plasma volumes generally range from 5 to 60 microlitres per fish (Jensen et al.
Не са налични при женски от контролите, с известно срещане и развитие при женски животни, експонирани на андрогени.
2001).
C туберкули, разположени непосредствено задно от ноздрите, успоредно на устата.
Procedure 1B:
Обикновено уголемени или подчертано развити при полово зрели мъжки от контроли.
Fathead Minnow, Blood Collection from Heart
С ранг налични или уголемени при по-слабо развитите мъжки или при женски животни, експонирани на андрогени.
Alternatively, blood may also be collected by cardiac puncture using a heparinized syringe (1000 units of heparin per ml).
D туберкули, разположени успоредно по линията на устата.
The blood is transferred into Eppendorf tubes (held on ice) and then centrifuged (5 min, 7000 g, room temperature).
Като цяло се класифицират като развити в контролните животни от мъжки пол.
The plasma should be transferred into clean Eppendorf tubes (in aliquots if the volume of plasma makes this feasible) and promptly frozen at – 80 °C, until analyzed (Panter et al., 1998).
С ранг липсващи в контролните животни от женски пол, но с ранг налични при женски животни, експонирани на андрогени.
Procedure 2A:
E туберкули, разположени по долната челюст, близо до устата, обикновено малки и обичайно чифтни.
Japanese Medaka, Excision of the Liver in Medaka
Варират при контролните или третираните мъжки, и третираните женски индивиди.
Removal of the test fish from the test chamber
F туберкули, разположени вентрално от E. Обикновено малки и чифтни.
Test fish should be removed from the test chamber using the small spoon-net.
Налични в контролните животни от мъжки пол и при женски животни, експонирани на андрогени.
Be careful not to drop the test fish into other test chambers.
Образец за туберкули
In principle, the test fish should be removed in the following order:
Ранжиране с числови стойности на ранга
control, solvent control (where appropriate), lowest concentration, middle concentration, highest concentration and positive control.
аличен
In addition, all males should be removed from one test chamber before the remaining females are removed.
Дата
The sex of each test fish is identified on the basis of external secondary sex characteristics (e.g. the shape of the anal fin).
големен
Place the test fish in a container for transport and carry it to the workstation for excision of the liver.
Общ резултат развит
Check the labels of the test chamber and the transport container for accuracy and to confirm that the number of fish that have been removed from the test chamber and that the number of fish remaining in the test chamber are consistent with expectation.
одчертано
If the sex cannot be identified by the fish's external appearance, remove all fish from the test chamber.
Допълнение 5Б
In this case, the sex should be identified by observing the gonad or secondary sex characteristics under a stereoscopic microscope.
Оценка на вторични полови белези у японската оризия за откриване на определени химикали с активно действие върху ендокринната система
Excision of the liver
По-долу е представено описание на измерването на папиларните израстъци, които са вторични полови белези при японската оризия (Oryzias latipes).
Transfer the test fish from the container for transport to the anaesthetic solution using the small spoon-net.
След изрязване на черния дроб (допълнение 6), трупът се поставя в конична епруветка, съдържаща около 10 ml 10 % неутрален буфериран формалин (горна страна: глава, долна страна: опашка).
After the test fish is anaesthetised, transfer the test fish on the filter paper (or a paper towel) using tweezers (commodity type).
Ако гонадата е фиксирана в разтвор, различен от 10 % неутрален буфериран формалин, прави се напречен разрез през трупа между предната област на аналната перка и ануса, с използване на бръснач, като се внимава да не се увреди половият отвор и самата гонада (фиг.
When grasping the test fish, apply the tweezers to the sides of the head to prevent breaking the tail.
3).
Wipe the water on the surface of the test fish on the filter paper (or the paper towel).
Краниалната част от тялото на рибата се поставя в разтвора на фиксатора за запазване на гонадата, а опашната част от тялото на рибата се поставя в 10 % неутрален буфериран формалин, както е описано по-горе.
Then make a small transverse incision partway between the ventral neck region and the mid-abdominal region using dissection scissors.
След поставянето на тялото на рибата в 10 % неутрален буфериран формалин задният край на аналната перка се захваща с пинцети и се разтваря за около 30 секунди, за да се запази аналната перка отворена.
Insert the dissection scissors into the small incision, and incise the abdomen from a point caudal to the branchial mantle to the cranial side of the anus along the midline of the abdomen.
При захващането на аналната перка с пинцети се захващат няколко лъча на перката в предната област, като се внимава да не се надраскат папиларните израстъци.
Be careful not to insert the dissection scissors too deeply so as to avoid damaging the liver and gonad.
След държането на аналната перка отворена в продължение на около 30 секунди, тялото на рибата се съхранява в 10 % неутрален буфериран формалин при стайна температура до измерването на папиларните израстъци (измерването следва да се проведе след фиксиране в продължение най-малко на 24 часа).
Conduct the following operations under the stereoscopic microscope.
Измерване
Place the test fish abdomen side up on the paper towel (glass Petri dish or slide glass are also available).
След фиксиране на тялото на рибата в 10 % неутрален буфериран формалин в продължение най-малко на 24 часа, трупът на рибата се взема от коничната епруветка и формалинът се избърсва върху филтърна хартия (или хартиена кърпа).
Extend the walls of the abdominal cavity with precision tweezers and exteriorise the internal organs.
Рибата се поставя с корема нагоре.
It is also acceptable to exteriorise the internal organs by removing one side of the wall of the abdominal cavity if necessary.
След това аналната перка се изрязва внимателно с малки ножици за дисекция (за предпочитане е да се изреже аналната перка с малко количество птеригиофор).
Expose the connected portion of the liver and gallbladder using another pair of precision tweezers.
С пинцети се захваща предната област от отрязаната анална перка и тя се поставя върху предметно стъкло с няколко капки вода.
Then grasp the bile duct and cut off the gallbladder.
След това аналната перка се покрива с покривно стъкло.
Be careful not to break the gallbladder.
При захващането на аналната перка с пинцети се внимава да не се надраскат папиларните израстъци.
Grasp the oesophagus and excise the gastrointestinal tract from the liver in the same way.
Отчита се броят членчета с папиларни израстъци, като се използва брояч под биологичен микроскоп (изправен или инвертен микроскоп).
Be careful not to leak the contents of the gastrointestinal tract.
Папиларните израстъци се познават, когато в задната част на членчетата се вижда малко образувание от израстъци.
Excise the caudal gastrointestinal tract from the anus and remove the tract from the abdominal cavity.
В работната таблица се записва броят на членчетата с папиларни израстъци във всеки лъч на перка (напр. първи лъч на перка: 0, втори лъч на перка: 10, трети лъч на перка: 12 и т.н.) и се вписва сумата им в таблицата в Excel за всеки отделен екземпляр.
Trim the mass of fat and other tissues from the periphery of the liver.
Ако е необходимо, аналната перка се фотографира и върху снимката се отчита броят на членчетата с папиларни израстъци.
Be careful not to scratch the liver.
След измерването аналната перка се поставя в коничната епруветка, описана в 1) и се съхранява.
Grasp the hepatic portal area using the precision tweezers and remove the liver from the abdominal cavity.
Фиг.
Place the liver on the slide glass.
1.
Using the precision tweezers, remove any additional fat and extraneous tissue (e.g., abdominal lining), if needed, from the surface of the liver.
Схема, показваща разликата при половете по отношение на формата и размера на аналната перка.
Measure the liver weight with 1.5 ml microtube as a tare using an electronic analytical balance.
A, мъжка;
Record the value on the worksheet (read: 0,1 mg).
B, женска.
Confirm the identification information on the microtube label.
Фиг.
Close the cap of the microtube containing the liver.
2.
Store it in a cooling rack (or ice rack).
А, папиларни израстъци върху членчета от лъч на анална перка.
Following the excision of one liver, clean the dissection instruments or replace them with clean ones.
J.P., членче;
Remove livers from all of the fish in the transport container as described above.
A.S., аксиално пространство;
After the livers have been excised from all of the fish in the transport container (i.e., all males or females in a test chamber), place all liver specimens in a tube rack with a label for identification and store it in a freezer.
P., израстък.
When the livers are donated for pre-treatment shortly after the excision, the specimens are carried to the next workstation in a cooling rack (or ice rack).
B, дистален край на лъч на перка.
Following liver excision, the fish carcass is available for measurement of secondary sex characteristics.
Дистално в края на лъча са разположени колагенни фибри (Actinotrichia) (Act.).
Specimen
Фиг.
Store the liver specimens taken from the test fish at ≤ – 70 °C if they are not used for the pre-treatment shortly after the excision.
3.
A cut is made just anterior to pectoral fins with scissors.
Снимка на тяло на риба, показваща мястото на срязване, когато гонадата се фиксира в разтвор на фиксатор, различен от 10 % неутрален буфериран формалин.
Figure 2
В този случай останалата част от тялото се разрязва между предната област на аналната перка и ануса с помощта на бръснач (червена лента), и предната част от тялото на рибата се поставя в разтвора на фиксатор за гонади, а опашната част от тялото на рибата се поставя в 10 % неутрален буфериран формалин.
The midline of abdomen is incised with scissors to a point approximately 2 mm cranial to the anus.
Папиларните израстъци обикновено се появяват само при полово зрели мъжки и се намират на лъчите на перките, като се започне от втория, до седмия или осмия от задния край на аналната перка (фиг.
Figure 3
1 и 2).
The abdominal walls are spread with forceps for exposure of the liver and other internal organs.
Независимо от това, израстъци рядко се появяват на първия лъч от задния край на аналната перка.
(Alternatively, the abdominal walls may be pinned laterally).
Тази стандартна оперативна процедура (СОП) обхваща измерването на израстъците на първия лъч на перка (в настоящата СОП номерът на лъча на перка се отнася за поредния номер, считано от първия лъч в задния край на аналната перка).
Figure 4
Препоръчителни процедури за пробовземане за анализ на вителогенин
The liver is bluntly dissected and excised using forceps.
Трябва да се вземат мерки за избягване на кръстосано замърсяване между пробите с VTG от мъжки и от женски животни.
Figure 5
Процедура 1А:
The intestines are gently retracted using forceps.
Вземане на кръвна проба от опашна вена/артерия от Pimephales promelas
Testis 6
След подлагане на анестезия, опашното стъбло частично се отрязва със скалпел и се взема кръв от опашната вена/артерия с хепаринизирана микрокапилярка за хематокрит.
Both ends of the intestines and any mesenteric attachments are severed using scissors.
След вземането на кръвната проба плазмата бързо се отделя чрез центрофугиране при 15000 g за 3 минути (или алтернативно при 15000 g за 10 минути при 4 °C).
Testis 7 (female)
По избор, процентът хематокрит може да се определи след центрофугирането.
The procedure is identical for the female.
Частта плазма се отстранява от микрокапилярката за хематокрит и се съхранява в центрофужна епруветка с 0,13 единици апротинин (протеазен инхибитор) при – 80 °C докато може да бъде извършено определяне на вителогенин.
Testis 8
В зависимост от размера на Pimephales promelas (който зависи от пола) събираемият обем плазма обикновено се намира в интервала от 5 до 60 микролитра на риба (Jensen et al.
The completed procedure.
2001).
Procedure 2 B:
Процедура 1Б:
Japanese Medaka (Oryzias latipes), Liver Pre-treatment for Vitellogenin Analysis
Вземане на кръвна проба от сърце от Pimephales promelas
Take the bottle of homogenate buffer from the ELISA kit and cool it with crushed ice (temperature of the solution: ≤ 4 °C).
Като алтернатива, кръвна проба може също така да се вземе чрез сърдечна пункция с помощта на хепаризирана спринцовка (1000 единици хепарин/ml).
If homogenate buffer from EnBio ELISA system is used, thaw the solution at room temperature, and then cool the bottle with crushed ice.
Кръвта се прехвърля в епендорфови епруветки (държани върху лед) и се центрофугира (5 минути, 7000 g, стайна температура).
Calculate the volume of homogenate buffer for the liver on the basis of its weight (add 50 μl of homogenate buffer per mg liver weight for homogenate).
Плазмата следва да се прехвърли в чисти епендорфови епруветки (в аликвотни части, ако обемът на плазмата позволява това) и бързо да се замрази при температура – 80 °C до нейното анализиране (Panter et al., 1998).
For example, if the weight of the liver is 4,5 mg, the volume of homogenate buffer for the liver is 225 μl.
Процедура 2А:
Prepare a list of the volume of homogenate buffer for all livers.
Изрязване на черен дроб от японска оризия
Preparation of the liver for pre-treatment
Отстраняване на изпитваната риба от камерата за изпитване
Take the 1,5 ml microtube containing the liver from the freezer just before the pre-treatment.
Изпитваната риба следва да се отстрани от изпитвателната камера с помощта на малко кепче.
Pre-treatment of the liver from males should be performed before females to prevent vitellogenin contamination.
Следва да се внимава изпитваната риба да не попадне в други камери за изпитване.
In addition, the pre-treatment for test groups should be conducted in the following order:
По принцип изпитваните риби следва да бъдат отстранявани в следния ред:
The number of 1,5 ml microtubes containing liver samples taken from the freezer at a given time should not exceed the number that can be centrifuged at that time.
контрола, контрола на разтворител (където е приложимо), най-ниска концентрация, средна концентрация, най-висока концентрация и положителна контрола.
Arrange the 1,5 ml microtubes containing liver samples in the order of specimen number on the ice rack (no need to thaw the liver).
В допълнение, всички мъжки животни следва да бъдат отстранени от дадена камера за изпитване преди да бъдат отстранени оставащите женски.
Operation of the pre-treatment
Полът на всяка изпитвана риба се определя въз основа на външни вторични полови белези (напр. формата на аналната перка).
Addition of the homogenization buffer
Опитната риба се поставя в контейнер за пренасяне и се пренася до работното място за изрязване на черния дроб.
Check the list for the volume of the homogenate buffer to be used for a particular sample of liver and adjust the micropipette (volume range: 100-1000 μl) to the appropriate volume.