natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Ако тестовете не са позволили вирусът да бъде идентифициран окончателно за една седмица, супернатантът се изпраща в националната референтна лаборатория или в референтната лаборатория на ЕС за болести по рибите, посочени в приложение VI към Директива 2006/88/ЕО, за да бъде незабавно идентифициран.
Virus identification
Извършва се двоен сандвич ELISA за антитела, за да се идентифицира изолатът на вируса.
If evidence of CPE has been observed in a cell culture, medium (supernatant) shall be collected and examined by one or more of the following techniques: Enzyme-linked immunosorbent essay (ELISA), Immunofluorescence (IF), neutralisation, RT-PCR or RT-qPCR.
Микроплаките се покриват с 50 μl/клетъчно гнездо (0,9 pg) с доказано качествени пречистени с белтък-А имуноглобулини (Ig) от заешки антисеруми срещу вируса на ИХН или ВХС, разтворени в карбонатен буферен разтвор (рН 9,6), съдържащ 15 mM натриев азид и инкубирани от 18 часа до 2 седмици при температура 4 °C.
If these tests have not allowed definitive identification of the virus within 1 week, the supernatant shall be forwarded to the national reference laboratory or to the EU reference laboratory for fish diseases referred to in Annex VI to Directive 2006/88/EC for immediate identification.
Върху плочка за разреждане всяка проба, съдържаща 1 % Triton X-100, и положителните контролни проби се разреждат с буферен разтвор (а именно фосфатен буферен разтвор (PBS)-T-BSA, 1 % BSA) в 4-кратно разреждане: неразреден, 1:4, 1:16, 1:64.
A double antibody sandwich ELISA shall be performed in order to identify the virus isolate.
Плаките за ELISA се измиват в PBS, съдържащ 0,05 % Tween-20 (PBS-T) и 50 μl от всяко разреждане се пренася от плочката за разреждане към измитата и покрита плочка за ELISA.
Microwell plates shall be coated with 50 μl/well (0,9 pg) of proven quality protein-A purified immunoglobulins(Ig) from rabbit antisera against IHNV or VSHV diluted in carbonate buffer (pH 9,6) containing 15 mM sodium azide and incubated from 18 hours to 2 weeks at 4 °C.
След това плаките за ELISA се инкубират в продължение на 30 минути на 37 °C.
On a dilution plate, each sample containing 1 % Triton X-100 and the positive controls shall be diluted with buffer solution (namely, phosphate buffered saline (PBS)-T-BSA, 1 % BSA) in a 4-fold dilution: undiluted, 1:4, 1:16, 1:64.
След това плаките се измиват и инкубират в продължение на 30 минути при 37 °C със специфични моноклонални антитела (а именно съответно за идентификация на вируса на ВХС MAb IP5B11, а за вируса на ИХН Hyb 136-3).
The ELISA plates shall be washed in PBS containing 0,05 % Tween-20 (PBS-T) and 50 μl of each dilution shall be transferred from the dilution plate to the washed and coated ELISA-plate.
На плочката за ELISA се прехвърлят 50μl анти-миши заешки антитела, конюгирани с пероксидаза от хрян (HRP), разредени в съотношение 1:1000 в PBS-T-BSA.
ELISA plates shall then be incubated for 30 minutes at 37 °C.
И накрая, след ново миене реакциите се предизвикват, като се добавя 50 μl/клетъчно гнездо от орто-фенилендиамин.
Subsequently plates shall be washed and incubated for 30 minutes at 37 °C with specific monoclonal antibodies (namely for VHSV identification MAb IP5B11 and for IHNV Hyb 136-3, respectively).
Плаките за ELISA се инкубират в продължение на 20 минути на стайна температура на тъмно, като реакцията се прекратява с добавянето на 100 μl/клетъчно гнездо от 0,5 M H2SO4.
50 μl of horseradish-peroxidase (HRP) conjugated rabbit anti mouse antibodies diluted 1:1000 in PBS-T-BSA shall be transferred to the ELISA plate.
Абсорбцията се наблюдава при дължина на вълната 492 и 620 nm в четеца на плаките ELISA.
Finally, after renewed washing the reactions shall be developed adding 50 μl/well of ortho-phenylenediamine (OPD).
Пробите се определят като положителни или отрицателни след сравняване на резултатите от теста със стойностите на абсорбцията за положителните и отрицателните контролни проби.
The ELISA plates shall be incubated for 20 minutes at room temperature in the dark and the reaction shall be stopped by adding 100 μl/well 0,5 M H2SO4.
По принцип пробите с комбинирана абсорбция (A) < 0,5 за неразреден материал се считат за отрицателни, пробите с A стойности между 0,5 и 1,0 се считат са съмнителни, а пробите с A стойности > 1,0 се считат за положителни.
The absorbance shall be monitored at a wavelength of 492 and 620 nm in an ELISA reader.
Вместо посочените в настоящата точка варианти на ELISA могат да се използват и други варианти на ELISA с доказана сходна ефективност.
Samples shall be designated positive or negative after comparing the test results to the absorbance values for the positive and negative controls.
Имунофлуоресценция — IF
In general, samples with combined absorbance (A) < 0,5 for undiluted material shall be considered negative, samples with A values between 0,5 and 1,0 shall be considered suspicious and samples with A values > 1,0 shall be considered positive.
Идентификацията на включените в списъка патогени вируса на ВХС и на ИХН се извършва посредством заразяване на клетки в плаки Black с 96 клетъчни гнезда, конвенционални 24-ямкови плаки или покривни стъкла в 24-ямкови плаки.
Other ELISA versions with a proven similar efficacy may be used instead of those referred to in this point.
Когато бъдат идентифицирани вирусите на ВХС или ИХН или и двете посредством заразяването клетки върху покривни стъкла, се прилага следният протокол:
Immunofluorescence- IF
покривните стъкла се посяват с клетки с гъстота, която предизвиква между 60 % и 90 % формиран монослой след 24-часова култура.
The identification of listed pathogens VHSV and IHNV shall be performed by infecting cells in ‘Black’ 96-well plates, conventional 24-well plates or cover slips into 24-well plates.
За тази цел, когато е възможно, се използват клетките ЕРС поради силното им прилепване към стъклените повърхности, но могат да бъдат използвани и други клетъчни линии, като BF-2, RTG-2 или FHМ.
When IHNV or VHSV or both are identified by infecting cells on cover slips, the following protocol shall apply:
150 μl клетъчен супернатант в две различни разреждания (1:10 и 1:1000) се инокулира в дубликат върху еднодневни монослоеве и се инкубира при температура 15 °C в продължение на 24 часа;
cover slips shall be seeded with cells at a density leading to between 60 % and 90 % confluence after 24 hours of cultivation.
след това се отстранява средата с клетъчна култура, а заразените клетъчни монослоеве се фиксират с 0,5 ml ледено студен воден разтвор на ацетон (80 % обем:обем).
EPC cells shall be used where possible for this purpose because of their strong adherence to glass surfaces, but other cell lines such as BF-2, RTG-2 or FHM may be used as well.
Фиксирането се извършва в лабораторна камина в продължение на 15 минути на стайна температура, след което ацетоновият разтвор се отстранява, и покривните стъкла се изсушават на въздух в продължение на най-малко 30 минути.
150 μl cell culture supernatant in two different dilutions (1:10 and 1:1000) shall be inoculated in duplicate onto 1-day-old monolayers and incubated at 15 °C for 24 hours;
На този етап плаките или се обработват незабавно, или се съхраняват при температура – 20 °C за по-нататъшна употреба;
subsequently, cell culture medium shall be removed, and the infected cell monolayers fixed with 0,5 ml ice-cold, aqueous acetone solution (80 % vol:vol).
специфични моноклонални антитела (а именно съответно за идентификация на вируса на ВХС Mab IP5B11, а за вируса на ИХН Hyb 136-3) се разреждат с 0,01 М PBST, pH 7,2 в разреждането, препоръчано от доставчика на MAbs; 50 до 100 μl/клетъчно гнездо се добавя към фиксирания монослой и плаките се инкубират в продължение на час при 37 °C във влажна камера;
Fixation shall take place in fume hood for 15 minutes at room temperature, then the acetone solution shall be removed and the cover glasses shall be air dried for at least 30 minutes.
покривните стъкла се измиват внимателно три пъти с PBS, съдържащ 0,05 % Tween-20 (PBS-T), а буферният разтвор се отстранява изцяло след последното изплакване.
At this stage, the plates shall either be processed immediately or stored at – 20 °C for further use;
След това клетките се инкубират за един час при 37 °C с конюгирани с флуоресцеин изотиоцианат (FITC) или с тетраметилродамин-5-(и- 6-) изотиоцианат (TRITC) антитела срещу миши имуноглобулин, използвани като първично антитяло, разтворени в съответствие с инструкциите на доставчика и отново се изплакват с PBS-Т и изсушават.
specific monoclonal antibodies (namely for VHSV identification, MAb IP5B11 and for IHNV, Hyb 136-3 respectively) shall be diluted in 0,01 M PBST, pH 7,2 in the dilution recommended by the provider of the MAbs; 50 to 100 μl/well shall be added to the fixed monolayer and plates shall be incubated for one hour at 37 °C in a humid chamber;
Оцветените култури се поставят върху предметно стъкло, като се използва солен глицеролов разтвор и се изследват под ултравиолетови (УВ) лъчи.
cover glasses shall be washed gently three times with PBS containing 0,05 % Tween-20 (PBS-T), and the buffer shall be removed completely after the last rinse.
Използват се окуляри 10 × или 12 × обективни лещи × 25 или × 40, чиито дигитални отвори са съответно > 0,7 и > 1,3.
The cells shall subsequently be incubated for one hour at 37 °C with fluorescein isothiocyanate (FITC) — or tetramethylrhodamine-5-(and-6-) isothiocyanate (TRITC)-conjugated antibodies against mouse immunoglobulin used as the primary antibody, diluted according to the supplier instructions, washed again in PBS-T, and dried.
По отношение на клетъчните култури, фиксирането и антителата за референтно качество могат да бъдат прилагани други IF техники, които са с доказана сходна ефективност.
Stained cultures shall be mounted onto glass slides using glycerol saline and examined under incident ultraviolet (UV) light.
Неутрализация
Use 10 × or 12 × eyepieces and a × 25 or × 40 objective lens with numerical apertures > 0,7 and > 1,3 respectively.
Клетките на събрания супернатант се премахват посредством центрофугиране (2000 to 4000 × g) или чрез филтриране през мембрана (0,45 μm) с нисък процент на свързване на протеините, след това супернатантът се разрежда 1:100 и 1: 10000 в среда за клетъчна култура.
Other IF techniques, with regard to cell cultures, fixation and antibodies of reference quality, of proven similar efficacy may be used instead.
Смесват се аликвотни части от минимум два разредени разтвора на супернатанта и се инкубират поотделно за 60 минути при 15 °C с равни части със следните реактиви:
Neutralisation
серум, съдържащ групови специфични антитела на вируса на ХВС при разреждане 1:50 (обем:обем);
Cells from the collected supernatant shall be removed by centrifugation (2000 to 4000 × g) or membrane filtration (0,45 μm) with a low protein binding membrane and the supernatant shall be diluted 1:100 and 1:10000 in cell culture medium.
серум, съдържащ групови специфични антитела на вируса на ИХН при разреждане 1:50 (обем:обем);
Aliquots of a minimum of two supernatant dilutions shall be mixed and incubated for 60 minutes at 15 °C with equal parts of the following reagents separately:
обединени антисеруми срещу местните серотипове на вируса на ИПН при разреждане 1:50 (обем:обем);
serum containing group specific antibody against VHSV at a 1:50 (vol:vol) dilution;
само среда за култура (положителна контролна проба).
serum containing group specific antibody against IHNV at a 1:50 (vol:vol) dilution;
От всяка вирусна супернатантна-серумна смес се инокулират най-малко две клетъчни култури с 50 μl всяка, а след това инкубирани при 15 °C.
pool of antisera against the indigenous serotypes of IPNV at a 1:50 (vol:vol) dilution;
Развитието на цитопатичен ефект се проверява, както е описано в точка I.5.4.
medium alone (positive control).
Щамове и изолати на ВХС, които не реагират при неутрализационните тестове, се идентифицират чрез техниките IF или ELISA.
From each virus supernatant-serum mixture, at least two cell cultures shall be inoculated with 50 μl each and then incubated at 15 °C.
Могат да бъдат използвани и други неутрализационни тестове с доказана сходна ефективност.
The development of CPE shall be checked as described in point I.5.4.
RT-PCR/ RT-qPCR
VHSV strains and isolates that do not react in neutralisation tests shall be identified by IF or ELISA.
Подготовка на вирусна РНК
Other neutralisation tests of proven similar efficacy may be used instead.
Работата с РНК се извършва върху лед, като се използват ръкавици.
RT-PCR/RT-qPCR
РНК се извлича с помощта на метода фенол-хлороформ или с помощта на спин колонки за извличане на РНК в съответствие с инструкциите на производителя.
Preparation of viral RNA
Могат да бъдат използвани подробно описаните в точките по-долу налични в търговската мрежа комплекти за извличане на РНК, които ще предоставят висококачествена РНК и са подходящи за използване с RT-PCR протоколи.
All work with RNA shall be performed on ice, using gloves.
РНК се поставя отново в суспензия в дестилирана вода без RNAse (а именно вода, обработена с 0,1 % диетилов пирокарбонат) или в подходящ елюиран буферен разтвор.
RNA shall be extracted using the phenol-chloroform method or by RNA affinity spin columns, according to the manufacturer's instructions.
Използват се следните праймери за откриване на вируса на ИХН:
Commercially available RNA extraction kits that will produce high quality RNA suitable for use with the RT-PCR protocols detailed in the points below may be used.
Прав праймер 5′-AGA-GAT-CCC-TAC-ACC-AGA-GAC-3′;
RNA shall be re-suspended in distilled RNAse-free water, (namely water treated with 0,1 % diethyl pyrocarbonate) or an appropriate elution buffer.
Обратен праймер 5′-GGT-GGT-GTT-GTT-TCC-GTG-CAA-3′.
The following primers shall be used for detection of IHNV:
Използват се следните цикли (едностепенна RT-PCR): 1 цикъл: 50 °C в продължение на 30 минути; 1 цикъл: 95 °C в продължение на 2 минути; 30 цикъла: 95 °C в продължение на 30 секунди, 50 °C в продължение на 30 секунди, 72 °C в продължение на 60 секунди; 1 цикъл: 72 °C в продължение на 7 минути и накисване при 4 °C.
Forward Primer 5′-AGA-GAT-CCC-TAC-ACC-AGA-GAC-3′;
Използват се следните праймери за откриване на вируса на ВХС:
Reverse Primer 5′-GGT-GGT-GTT-GTT-TCC-GTG-CAA-3′.
VN прав 5′-ATG-GAA-GGA-GGA-ATT-CGT-GAA-GCG-3′;
The following cycles shall be used (one-step RT-PCR): 1 cycle: 50 °C for 30 minutes; 1 cycle: 95 °C for 2 minutes; 30 cycles: 95 °C for 30 seconds, 50 °C for 30 seconds, 72 °C for 60 seconds; 1 cycle: 72 °C for 7 minutes and soak at 4 °C.
VN обратен 5′-GCG-GTG-AAG-TGC-TGC-AGT-TCC-C-3′.
The following primers shall be used for detection of VHSV:
Използват се следните цикли (едностепенна RT-PCR): 50 °C в продължение на 30 минути, 95 °С в продължение на 15 минути, 35 цикъла при температура 94 °C в продължение на 30 секунди, 55 °C в продължение на 30 секунди и 68 °C за 60 секунди.
VN For 5′-ATG-GAA-GGA-GGA-ATT-CGT-GAA-GCG-3′;
Впоследствие реакцията се задържа при 68 °C за 7 минути.
VN Rev 5′-GCG-GTG-AAG-TGC-TGC-AGT-TCC-C-3′.
Количеството и специфичността на RT-PCR реакциите се оценяват от гел електрофореза в 1,5 % агарозен гел с етидиев бромид и се наблюдават чрез УВ осветление.
The following cycles shall be used (one-step RT-PCR): 50 °C for 30 minutes, 95 °C for 15 minutes, 35 cycles at 94 °C for 30 seconds, 55 °C for 30 seconds, and 68 °C for 60 seconds.
За вируса на ИХН се наблюдава A 693 pb PCR ампликон.
Subsequently, the reaction shall be held at 68 °C for 7 minutes.
За вируса на ХВС размерът е 505 bp.
Quantity and specificity of the RT-PCR reactions shall be evaluated by gel electrophoresis in 1,5 % agarose gel with ethidium bromide and observed using UV transillumination.
Размер на продукта 155 bp.
A 693 bp PCR amplicon may be observed for IHNV.
Резултатите от PCR може да се променят в зависимост от условията, при които се получават, а именно за термичните протоколи може да се наложи оптимизиране в зависимост от използвания термоциклер.
For VHSV, the size shall be 505 bp.
Освен това може да се появят фалшиви положителни резултати поради неправилно отгряване на праймера или лабораторно замърсяване.
The results of the PCR may vary depending on the conditions under which it is performed, namely the thermal protocols might need optimisation, depending on the thermal cycler in use.
Следователно се включват подходящи положителни и отрицателни контроли и секвенирани ампликони, за да бъдат избегнати всякакви съмнения.
Furthermore, false-positive results may occur because of false primer annealing or laboratory contamination.
За праймерите на вируса на ВХС се прилагат специални мерки при използването на клетки BF-2, тъй като праймерите могат да реагират с клетъчни линии ДНК/РНК, произвеждащи фалшиви положителни резултати със сходен размер.
Adequate positive and negative controls and sequence amplicons shall therefore be included to avoid any doubts.
При изследване на супернатант от BF-2 клетки се секвенират всички PCR фрагменти.
For the VHSV primers, special care shall be taken when using BF-2 cells, as the primers may react with the cell line DNA/RNA producing false-positive results of similar size.
RT-qPCR за вируса на ВХС
When testing supernatant from BF-2 cells, any amplified PCR fragments shall be sequenced.
За вируса на ВХС амплификацията се извършва, като се използват следните праймери и сонди:
RT-qPCR for VHSV
Прав праймер: 5′-AAA-CTC-GCA-GGA-TGT-GTG-CGT-CC-3′;
For VHSV, amplification shall be performed using the following primers and probe:
Обратен праймер: 5′-TCT-GCG-ATC-TCA-GTC-AGG-ATG-AA-3′;
Forward primer: 5′-AAA-CTC-GCA-GGA-TGT-GTG-CGT-CC-3′;
и сонда: 5′-FAM-TAG-AGG-GCC-TTG-GTG-ATC-TTC-TG-BHQ1.
Reverse primer: 5′-TCT-GCG-ATC-TCA-GTC-AGG-ATG-AA-3′;
Едностепенна RT-qPCR:
and probe: 5′-FAM-TAG-AGG-GCC-TTG-GTG-ATC-TTC-TG-BHQ1.
Отрицателни контроли на образеца и положителни контроли се включват за всеки цикъл с плаките.
One-step RT-qPCR:
Условия на циклите: 50 °C в продължение на 30 минути, 95 °С в продължение на 15 минути, 40 цикъла при температура 94 °C в продължение на 15 секунди, 60 °C в продължение на 40 секунди, 72 °C за 20 секунди. при необходимост да се адаптира.
Negative template controls and positive controls shall be included on each plate run.
Могат да бъдат използвани и други варианти на RT-PCR или RT-qPCR с доказана сходна ефективност.
Cycling conditions: 50 °C for 30 minutes, 95 °C for 15 minutes, 40 cycles of 94 °C for 15 seconds, 60 °C for 40 seconds, 72 °C for 20 seconds; adjust if necessary.
RT-qPCR за вируса на ИХН
Other RT-PCR or RT-qPCR versions of proven similar efficacy may be used instead.
За вируса на ИХН амплификацията се извършва, като се използват следните праймери и сонди:
RT-qPCR for IHNV
Прав праймер: 5′- AGA-GCC-AAG-GCA-CTG-TGC-G-3′;
For IHNV, amplification shall be performed using the following primers and probe:
Обратен праймер: 5′- TTCTTTGCGGCTTGGTTGA — 3′;
Forward primer: 5′- AGA-GCC-AAG-GCA-CTG-TGC-G-3′;
и сонда: 5′ 6FAM-TGAGACTGAGCGGGACA-NFQ/MGB.
Reverse primer: 5′- TTCTTTGCGGCTTGGTTGA - 3′;
Двустепенна RT-qPCR:
and probe: 5′ 6FAM-TGAGACTGAGCGGGACA-NFQ/MGB.
Тъй като следният анализ зависи от двустепенна амплификация, допълнително трябва да се внимава при боравенето с епруветките от една реакция към друга, за да се предотврати замърсяване.
Two-step RT-qPCR:
Условия на циклите (след етапа RT): 50 °C в продължение на 2 минути, 95 °С в продължение на 10 минути, последвани от 40 цикъла при температура 95 °C в продължение на 15 секунди и 60 °C в продължение на 1 минута; при необходимост да се адаптира.
As the following assay depends on a two-step amplification, extra care shall be taken when handling the tubes from one reaction to the other in order to prevent contamination.
Подробни диагностични методи и процедури за потвърждаване или за отхвърляне на съмнението за ХВС и ИХН или и двете при подозирани огнища
Cycling conditions (after RT-step): 50 °C for 2 minutes, 95 °C for 10 minutes, followed by 40 cycles of 95 °C for 15 seconds and 60 °C for 1 minutes; adjustments shall be made if necessary.
Когато се изисква лабораторно изследване, за да се потвърди или отхвърли присъствието на ИХН или ВХС или и двете в съответствие с член 57, буква б) от Директива 2006/88/ЕО, като се използват диагностичните методи, определени в част 1, точка II.3 от приложение I, се прилагат следните подробни диагностични методи и процедури:
Detailed diagnostic methods and procedures for the confirmation of or to rule out the suspicion of VHS or IHN or both in suspected outbreaks
конвенционално изолиране на вируса, последвано от серонеутрализация, имунно-химична или молекулярна идентификация на вируса;
When a laboratory examination is required to confirm or rule out the presence of IHN or VHS or both in accordance with Article 57(b) of Directive 2006/88/EC using the diagnostic methods set out in point II.3 of Part 1 of Annex I, the following detailed diagnostic methods and procedures shall apply:
откриване на вируса посредством RT-PCR или RT-qPCR;
conventional virus isolation with subsequent seroneutralisation, immune-chemical or molecular virus identification;
други диагностични техники, като например IFAT, ELISA, RT-PCR, IHC.
virus detection by RT-PCR or RT-qPCR;
Конвенционално изолиране на вируса, последвано от идентификация на вируса
other diagnostic techniques such as IFAT, ELISA, RT-PCR, IHC.
Подбор на пробите
Conventional virus isolation with subsequent virus identification
За изследване се подбират минимум 10 риби с типични признаци на ИХН или ВХС.
Selection of samples
Подготовката и изпращането за конвенционално изолиране на вируса се извършват съгласно методите и процедурите, предвидени в точка I.2.
At least 10 fish showing typical signs of IHN or VHS shall be selected for examination.
Събирането на допълнителен материал за конвенционално изолиране на вируса се извършва съгласно методите и процедурите, предвидени в точка I.3.
The preparation and shipment for the purpose of conventional virus isolation shall follow the methods and procedures laid down in point I.2.
Подготовка на пробите за изследване на клетъчна култура
The collection of supplementary material for the purpose of conventional virus isolation shall follow the methods and procedures laid down in point I.3.
Подготовката на пробите за изследване на клетъчна култура за конвенционално изолиране на вируса се извършва съгласно методите и процедурите, предвидени в точка I.4.
Preparation of samples for cell culture examination
Вирусологичното изследване за конвенционално изолиране на вируса се извършва съгласно методите и процедурите, предвидени в точка I.5.
The preparation of samples for cell culture examination for the purpose of conventional virus isolation shall follow the methods and procedures laid down in point I.4.
Идентификацията на вируса за конвенционално изолиране на вируса се извършва съгласно методите и процедурите, предвидени в точка I.6.
The virological examination for the purpose of conventional virus isolation shall follow the methods and procedures laid down in point I.5.
Откриване на вируса посредством RT-qPCR;
The virus identification for the purpose of conventional virus isolation shall follow the methods and procedures laid down in point I.6.
Подборът на пробите за откриване на вируса посредством RT-qPCR се извършва съгласно методите и процедурите, предвидени в точка I.1.2.
Virus detection by RT-qPCR
Подготовката и изпращането за откриване на вируса посредством RT-qPCR се извършва съгласно методите и процедурите, предвидени в точка I.2.
The selection of samples for the purpose of virus detection by RT-qPCR shall follow the methods and procedures laid down in point I.1.2.
Събирането на допълнителен материал за диагностициране за откриване на вируса посредством RT-qPCR се извършва съгласно методите и процедурите, предвидени в точка I.3.
The preparation and shipment for the purpose of virus detection by RT-qPCR shall follow the methods and procedures laid down in point I.2.
Подготовка на пробите за RT-qPCR
The collection of supplementary diagnostic material for the purpose of virus detection by RT-qPCR shall follow the methods and procedures laid down in point I.3.
Подготовката и на пробите за откриване на вируса посредством RT-qPCR се извършва съгласно методите и процедурите, предвидени в точка I.6.4.1.
Sample preparation for RT-qPCR