natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Тест на Дън или на Ман-Уитни върху средни от повторения
The “male-samples” should show one band and the “female-samples” shouldn't show any band (after staining and gel-electrophoresis).
Тест на Йонкxере със стъпка назад или тест на Уйлямс
“DMTYa (upper/forward)” → GGC CGG GTC CCC GGG TG
Средни от повт. нормално разпределени и хомогенни
“DMTYd (lower/reverse)” → TTT GGG TGA ACT CAC ATG G
Не Да Да
Staining of the PCR-samples:
Тест на Дън или на Ман-Уитни Монотонна
Staining solution:
Определя се дали зависимостта доза-отклик е монотонна
50 % Glycerol
Тест на Дън върху средни от повторения <=3 повт. на конц.
0,25 % Bromphenolblue
Комбинират се контролите, отделят се подгрупи
0,25 % Xylenecyanol
Сравнение на контролите с тест на Уилкоксън или T-тест.
Pipette 1 μl of the staining solution into each single tube
Различават ли се контролите?
Start of the Gel-Electrophoresis:
Има контрола на разтворител и контрола без разтворител
The prepared 1 % agarose gel will be transferred into a gel-electrophoresis-chamber filled with 1 × TAE-Buffer
Статистическа блокова схема при анализ на съотношението между половете
10 - 15 μl of each stained PCR-sample will be pipetted into an agarose gel slot
Прилага се тест на Йонкхере-Терпстра със стъпка назад (+) за определяне на NOEC
Also 5 - 15 μl of the 1kb-“Ladder”(Invitrogen) will be pipetted into a separate slot
Тест на Дън или U-тест на Ман-Уитни с корекция на Бонферони-Холм за определяне на NOEC
Start the electrophoresis by 200 V
За определяне на NOEC при хомогенни дисперсии се използва тест на Дънет (*), в противен случай тест на Тамхане-Дънет (T3)
Stop after 30-45 min
Данните с нормално разпределение ли са?
Determination of the bands:
Данните съответстват ли на монотонна зависимост дозаотклик?
Clean the agarose gel in distilled H2O
(‡) Или друг договорен избор на контрола
Now transfer the agarose gel into Ethidium bromide for 15 - 30 min
След трансформация „аркуссинус от корен квадратен“
After that, a picture of the agarose gel should be taken in an UV-light-box
(+) При под 5 опитни единици на третиране следва да се ползва точен тест на Й-У или на М-У, при наличие
Finally the samples are analysed in comparison to the positive control-band (or bands) and the ladder
Комбинират се контролите
Appendix 10
Изоставя се контролата на вода (‡)
Guidance on tissue sampling for genetic sex determination by PCR method in the three-spined stickleback
Сравнение на контроли t-тест.
Tissue sampling and DNA extraction
Използван ли е разтворител?
DNA can be extracted using a variety of commercially available reagents and both manual and automated extraction systems.
Допълнение 9
The protocol used at the Cefas Weymouth laboratory is outlined below, and the alternative approaches have been added where appropriate.
Насоки за вземане на тъканни проби за определяне на генетичния пол и за определяне на генетичния пол чрез метод с PCR
With fine scissors, a small piece of tissue (10-20 mg) from the dorsolateral area (after removing the head and tail for VTG analysis), is removed from each individual fish.
Вземане на тъканни проби, приготвяне и съхранение преди определяне на генетичния пол чрез метод с PCR при оризия (изготвено от Лабораторията по водни организми на Bayer CropScience AG)
The tissue is added into a tube and either placed directly in liquid nitrogen (for storage at – 80 °C) or filled with 70 % ethanol (for transport and subsequent storage at 4 °C).
От всяка отделна риба с тънка ножица се отрязва аналната или гръбната перка и се поставя в епруветка, напълнена с 100 μl буфер за извличане 1 (подробности за приготвянето на буфера са дадени по-долу).
The scissors are cleaned after each single fish in 70 % ethanol then in distilled water and dried with tissue paper.
Ножиците се почистват след всяка отделна риба в бехерова чаша, напълнена с дестилирана H2О, и се изсушават с абсорбираща хартия.
The ethanol (if present) is removed by aspiration and the tissue is digested overnight with proteinase K in 400 μl of ATL buffer (Qiagen).
Тъканта на перката се хомогенизира с тефлонов пестик за микроепруветки за лизис на клетките.
An aliquot (200 μl) of the digest is transferred to a 96-well S-block (Qiagen) and the DNA extracted in a 96-well format using the Qiagen Universal BioRobot and the QIamp Investigator BioRobot kit.
За всяка епруветка се използва нов пестик за предотвратяване на всякакво замърсяване.
The DNA is eluted in a 50 μl of DNase and RNase free water.
Пестиците се поставят за престояване до следващия ден в 0,5 M NaOH, изплакват се в продължение на 5 минути в дестилирана H2O и до използването се съхраняват в етанол или в стерилна среда след автоклавиране.
If using hard tissues to extract DNA (such as a spine or a pectoral fin) it may be necessary to homogenise the sample in the lysis buffer using a FastPrep® tissue lyser or equivalent tissue disruption system.
Възможно е също така тъканта от перка да се съхранява без буфер за извличане 1, поставена върху сух лед и след това в хладилник при – 80 °C, за да се предотврати всякакво разграждане на ДНК.
Alternatively,
Но извличането функционира по-добре, ако извличането на ДНК е по същото време (за обработка вж. по-горе; пробите трябва да се размразят върху лед след съхранение при температура – 80 °C преди поставянето на буфера в епруветките).
the tissue is digested overnight with proteinase K in 400 μl of G2 lysis buffer (Qiagen) and DNA is extracted from 200 μl of the digest using either the EZ-1 DNA easy tissue kit and the EZ-1 biorobot or the DNA easy tissue mini kit.
След хомогенизирането всички епруветки се поставят на водна баня и се загряват в продължение на 15 минути при 100 °C.
The DNA is eluted in a 50 μl volume.
След това 100 μl от буфер за извличане 2 (подробности за приготвянето на буфера са дадени по-долу) се добавят с пипета във всяка епруветка.
The tissues are processed using the DNAzol reagent.
Пробите се съхраняват на стайна температура в продължение на 15 минути, като от време време леко се разклащат с ръка.
Briefly, tissue samples are lysed in 1ml of DNAzol for 10 minutes in a 1,5 ml micro centrifuge tube and then centrifuged at 13000 rpm for 5 minutes to remove any particulate matter.
След това всички епруветки се поставят отново на водна баня и отново се загряват в продължение на 15 минути при 100 °C.
The lysed sample is then transfered to a new 1,5 ml micro centrifuge tube containing 500 μl of 100 % molecular grade ethanol and then centrifuged at 13000 rpm for 10 minutes to precipitate the DNA.
До последващия анализ епруветките се замразяват при – 20 °C.
The ethanol is removed and replaced with 400 μl of 70 % molecular grade ethanol, centrifuged at 13000 rpm for 5 minutes and the DNA pellet is dissolved in 50 μl molecular DNase and RNase free water.
Подготовка на буфер
Again, when using the hard tissues (pectoral fin) it may be necessary to homogenise the sample in the lysis buffer using a FastPrep® tissue lyser or equivalent tissue disruption system prior to extracting the DNA.
буфер 1 за PCR:
The DNA is stored at – 20 °C until required.
500 mg N-лауроилсаркозин (напр.
gloves must be worn during the procedures.
Merck KGaA, Darmstadt, GE)
Polymerase chain reaction (PCR) analysis
добавя се 100 ml дест.
Amplifications were performed using 2,5 μl of the DNA extract in a 50 μl reaction volume using the Idh locus primers (as described by Peichel et al., 2004.
→ Автоклав
Current Biology 1:1416-1424):
буфер 2 за PCR:
Forward primer
20 g Chelex (напр.
Reverse primer
Biorad, Munich, GE)
There are numerous suppliers of suitable PCR reagents.
обемът се увеличава в 100 ml дест.
The method outlined below is that currently used at the Cefas Weymouth laboratory.
Определяне на генетичния пол (чрез метод с PCR) при оризия (изготвено от Лабораторията по водни организми на Bayer CropScience AG и Universität Würzburg Biozentrum)
Preparation of the “Reaction Mix” (50 μl per sample):
Приготвените и замразени епруветки (описани в горния раздел) се размразяват върху лед.
A mastermix is prepared as follows.
След това те се центрофугират с помощта на центрофуга Епендорф (30 секунди на максимална скорост, при стайна температура).
This can be prepared in advance and stored frozen at – 20 °C until required.
За PCR се използва чистият супернатант, отделен от утайката.
Make sufficient mastermix for a negative control (molecular biology grade water only).
Следва абсолютно да се избягва прехвърлянето в PCR на всякакви следи от Chelex (локализиран в утайката), тъй като това ще пречи на активността на Taq полимеразата.
Volume (stock conc.)/ sample
Супернатантът се използва пряко или може да се съхранява замразяван (при – 20 °C) и след това размразяван отново в няколко цикъла без отрицателно въздействие върху ДНК за последващи анализи.
® Reaction Buffer
Приготвяне на „реакционна смес“ (25 μl на проба):
Nucleotides (dATP, dCTP, dGTP, dTTP)
Обем
0,5 μl (25 mM each)
Крайна концентрация
250 μM each
Изходна ДНК
Forward Primer
0,5 μl-2 μl
0,5μl (0,1 nmol/μl)
буфер за PCR с MgCl2
Reverse Primer
2,5 μl
2,0μM
Нуклеотиди (всеки от dATP, dCTP, dGTP, dTTP)
Molecular biology grade water
Начален праймер (10 μm) (вж. по-долу 3-5)
GoTaq polymerase
0,5 μl
Dispense 47,5 μl to a labelled 0,5 ml thin walled PCR tube.
Обратен праймер (10μM) (вж. по-долу 3-5)
Add 2,5 μl of the purified DNA to the appropriately labelled tube.
Вода (с чистота за PCR)
Repeat for all samples and the negative control.
до 25 μl
Over lay with 2 drops of mineral oil.
Taq E полимераза
Alternatively, use a thermal cycler with a heated lid.
0,3 μl
Close the lids.
буфер за PCR с MgCl2:
Samples were denatured in a Peltier PTC-225 thermal cycler at 94 ± 2 °C for 5 minutes followed by 39 cycles of 94 ± 2 °C for 1 minute, 55 ± 2 °C for 1 minute, 72 ± 2 °C for 1 minute, and a final extension of 72 ± 2 °C for 10 minutes.
670 mM TRIS хидрохлорид (pH 8,8 при 25 °C), 160 mM (NH4)2SO4, 25 mM MgCl2, 0,1 % Tween 20
Preparation of the agarose gel (2 %):
За всяка PCR (вж. по-долу 3-5) са необходими специалният праймер като нова комбинация от „реакционна смес“ и достатъчно необходимо количество изходна ДНК за всяка проба (вж. по-горе).
Traditionally the PCR products are resolved on a 20 % agarose gel containing ethidium bromide.
Съответните количества се прехвърлят в нови епруветки чрез пипети.
Capillary based electrophoresis systems can also be used.
След това всички епруветки се затварят, разбъркват (приблизително 10 секунди) и центрофугират (10 секунди, на стайна температура).
Weigh 2 g agarose in 100 ml 1 × TAE-buffer
В този момент могат да бъдат започнати съответните PCR програми.
Heat in a microwave (ca.
Допълнително във всяка PCR програма се използват положителна контрола (примерна проба ДНК с известна активност и ясни резултати) и отрицателна контрола (1 μl дест.
2-3 min) to dissolve the agarose.
H2O)
Add 2 drops of ethidium bromide final concentration 0,5 μg/ml
Приготвяне на гела от агароза (1 %) — по време на изпълняващи се PCR програми:
Transfer the hot solution into the gel casting equipment.
Разтварят се 3 g агароза в 300 ml 1 × TAE буфер (1 % агарозен гел)
Allow the gel to harden
Този разтвор трябва да се изварява с използване на микровълнова фурна (около 2-3 мин.)
Gel-Electrophoresis:
Горещият разтвор се прехвърля, като се налива в специална поставка, която се намира върху лед.
Transferred the agarose gel to the electrophoresis equipment and submerge in 1 × TAE-buffer
След около 20 минути агарозният гел е готов за ползване
Load 20 μl of each sample to a separate well, adding a molecular weight marker (100 bp DNA ladder, Promega) to a spare well.
Агарозният гел се съхранява в 1x TAE буфер до края на PCR програмите
Electrophoresis is performed at 120 V for 30-45 minutes.
PCR програма за актин:
Visualisation of the amplification products
Тази PCR цели да се покаже, че ДНК в пробата не е увредена.
If the ethidium bromide was incorporated in to the agarose gel as described above, the DNA products are visualised under a UV source.
Специален праймер:
Alternatively the agarose gel is stained by covering the gel in a dilute solution of ethidium bromide (0,5 μg/ml in water) for 30 minutes prior to visualisation.
„Mact1(upper/forward)“ → TTC AAC AGC CCT GCC ATG TA
Appendix 11
„Mact2(lower/reverse)“ → GCA GCT CAT AGC TCT TCT CCA GGG AG
Guidance for artificial fertilisation procedure for the three-spined stickleback
Програма:
The purpose of this section is to describe the procedures to obtain fertilised eggs from the three-spined stickleback in view of using them in the FSDT.
Цикъл (35 пъти):
Procedures
Денатуриране
Obtaining sperm from the males
→ 45 sec при 95 °C
A well-coloured male of the desired population is euthanised.
Хибридизация
The testes are dissected from each side of the fish.
→ 45 sec при 56 °C
The testes are generally heavily pigmented, rod shaped structures that are readily apparent at the lateral midline of the body.
Удължаване
Use either of the following methods:
→ 1 min при 68 °C
Using a pair of fine scissors, begin at the cloaca and make a 1-1,5 cm incision with a single snip angled at about 45 degrees.
15 min 68 °C
Use a scalpel to make a small incision in the side of the fish slightly posterior to the pelvis and just ventral of the lateral plates.
PCR програма за X- и Y-гени:
The testes are removed using fine forceps and placed into a petri dish.
Пробите с интактна ДНК се използват при тази PCR програма за откриване на X- и Y-гени.
Each testis is covered with 100 μl freshly made Hank's final solution.
Мъжката ДНК следва да показва една двойна лента, а женската ДНК следва да показва една единична лента (след оцветяване и гелна електрофореза).
The testes are finely diced by using a razor blade or scalpel.
В изпълнението на тази програма следва да се включат една положителна контрола за мъжки (XY проба) и една за женски (XX проба).
This will release sperm and give the Hank's solution a milky appearance.
„PG 17.5“ (upper/forward) → CCG GGT GCC CAA GTG CTC CCG CTG
The fluid containing sperm is added into a tube, while trying not to include any pieces of testes tissue when pipetting.
„PG 17.6“ (lower/reverse) → GAT CGT CCC TCC ACA GAG AAG AGA
800 μl of Hank's final solution are added into the tube and mixed well.
Цикъл (40 пъти):
If required, the male can be preserved by fixing in 100 % ethanol or other desired fixative.
→ 45 sec при 55 °C
This is particularly important if the study is assigning parental origin of offsprings.
→ 1 min 30 sec при 68 °C
Although most of the stock solutions required can be made in advance, stock 5 and subsequently the final solution, should be made up fresh on the day of use.
PCR програма за Y-ген като „контрола“ за PCR програмата за X- и Y-ген:
Stock 1
Тази PCR програма проверява резултатите от „PCR програмата за X- и Y-ген“.
8,00 g
„Мъжките проби“ следва да показват една лента, а „женските проби“ не трябва да показват никаква лента (след оцветяване и гелна електрофореза).
0,40 g
„DMTYa (upper/forward)“ → GGC CGG GTC CCC GGG TG
Distilled water (DW)
„DMTYd (lower/reverse)“ → TTT GGG TGA ACT CAC ATG G
100 ml
Оцветяване на PCR проби:
Stock 2
Оцветяващ разтвор:
HPO4 (anhydrous)
50 % глицерол
0,358 g
0,25 % Бромофенолово синьо
0,60 g
0,25 % Ксиленцианол
Stock 3
Отмерва се с пипета 1 μl от оцветяващия разтвор във всяка отделна епруветка
0,72 g
Начало на гелната електрофореза:
50 ml
Приготвеният 1 %-ен агарозен гел се прехвърля в контейнер за гелна електрофореза, напълнен с 1 × TAE буфер.
Stock 4
Обем от 10 — 15 μl от всяка оцветена PCR проба се добавя с пипета в улей за агарозния гел
MgSO4.7H2O
Също така, 5 — 15 μl от 1kb-„Ladder“(Invitrogen) се добавя с пипета в отделен улей
1,23 g
Начало на електрофорезата с 200 V
Stock 5 (freshly prepared)
Прекратяване след 30-45 min
0,35 g
Определяне на лентите:
10 ml
Агарозният гел се почиства в дестилирана H2O
If you already have some of the above salts but with different water content (i.e. 2H2O instead of anhydrous) you can still use it but first adjust weight based on molecular weight).
След това агарозният гел се прехвърля в етидиев бромид за 15-30 min
For Hank's final solution combine in the following order:
След това следва да се заснеме изображение на агарозния гел в UV кутия
stock 1
Накрая пробите се анализират в сравнение с лентата с положителна контрола (или ленти) и маркера.
1,0 ml
Допълнение 10
stock 2
Насоки за вземане на тъканни проби от триигла бодливка за определяне на генетичния пол чрез метод с PCR
0,1 ml
Вземане на тъканни проби и извличане на ДНК
stock 3
ДНК може да бъде извлечена посредством различни достъпни в търговската мрежа реактиви и както с ръчни, така и с автоматични системи за извличане.
8,6 ml
Протоколът, използван в Cefas Weymouth Laboratory е изложен по-долу, а където е уместно, са добавени алтернативните подходи.
stock 4
От всяка отделна риба с тънка ножица се отстранява малка част от тъкан (10-20 mg) от дорзолатералната област (след отстраняване на главата и опашката за анализ на VTG).
stock 5
Тъканта се слага в епруветка, след което или се поставя директно в течен азот (за съхранение при – 80 °C), или се напълва с 70 % етанол (за транспортиране и последващо съхраняване при 4 °C).
Mix well before use.
Ножицата се почиства след всяка отделна риба в 70 % етанол, след това в дестилирана вода, и се изсушава с абсорбираща хартия.
Fertilisation
Етанолът (ако е наличен) се отстранява чрез аспирация и тъканта се разгражда до следващия ден с протеиназа K в 400 μl ATL буфер (Qiagen).
Large, gravid females are identified from the desired population;
Една аликвотна част (200 μl) от разградената тъкан се прехвърля В 96-гнездов S-блок (Qiagen) и ДНК, извлечена в 96-гнездови формат с Qiagen Universal BioRobot и комплект QIamp Investigator BioRobot.
females are ready for squeezing only when you can see eggs protruding from the cloaca.
ДНК се елуира в 50 μl вода, несъдържаща дезоксирибонуклеази и рибонуклеази.
Ready females have the characteristic “head up” posture.
Ако се използват твърди тъкани за извличане на ДНК (например гръбнак или гръдна перка), може да се окаже необходимо да се хомогенизира пробата в лизиращ буфер, като се използва устройство за лизис на тъкани FastPrep® или еквивалентна система за разрушаване на тъканната структура.
Gently run a finger or thumb down the side of the fish towards the tail to encourage the expulsion of an egg sack into a fresh petri dish.
Алтернативно,
Repeat on the other side and return the fish to its tank.
тъканта се разгражда до следващия ден с протеиназа K в 400 μl G2 лизиращ буфер (Qiagen) и ДНК се извлича от 200 μl от разградения материал се подлага на преглед чрез използването на комплект EZ-1 DNA easy tissue и EZ-1 biorobot, или миникомплект DNA easy tissue.
The eggs can be spread out (forming a monolayer) using a fine paintbrush.
ДНК се елуира в 50 μl обем.
It is important to try and expose as many eggs as possible to the sperm so maximising the surface area of the eggs is helpful.
Тъканите се обработват с помощта на реактив DNAzol.
Keep the eggs humid by laying damp tissue around them (it is important the eggs do not touch water directly as this can prematurely harden the chorion preventing fertilisation).
За кратко време тъканните проби се лизират в 1 ml DNAzol в продължение на 10 min в микроцентрофужна епруветка от 1,5 ml и след това се центрофугират при 13000 rpm в продължение на 5 минути, за да се отстранят всякакви твърди частици.
There is a large variation in the number of eggs each female can produce but as an average, about 150 eggs should be easily obtained from a single gravid female.
След това лизираната проба се прехвърля в нова микроцентрофужна епруветка от 1,5 ml, съдържаща 500 μl 100 % етанол с чистота „за молекулярна биология“ и след това се центрофугира при 13000 rpm в продължение на 10 минути, за да се утаи ДНК.
of sperm in Hank's mixture is spread evenly over the whole surface of the eggs using the paintbrush.
Етанолът се отстранява и се заменя с 400 μl 70 % етанол, центрофугира се при 13000 оборота в минута в продължение на 5 минути и ДНК пелетата се разтваря в 50 μl вода с чистота „за молекулярна биология“, несъдържаща дезоксирибонуклеази и рибонуклеази.
The eggs will quickly harden and change colour (within a minute) once fertilisation has begun.
Отново, при използване на твърди тъкани (гръдна перка), преди извличане на ДНК може да се окаже необходимо да се хомогенизира пробата в лизиращ буфер, като се използва устройство за лизис на тъкани FastPrep® или еквивалентна система за разрушаване на тъканната структура.
If the estimated number of eggs is more than 150, repeat the procedure.
ДНК се съхранява при – 20 °С, докато стане необходима.
Similarly if the eggs don't harden within a minute add a bit more sperm.
по време на процедурите трябва да бъдат носени ръкавици.
Adding more sperm does not necessarily improve fertilisation rate.
Анализ с полимеразна верижна реакция (PCR)
The eggs and the sperm solution should be left to “interact” for at least 15 minutes and the fertilised eggs should be placed into the exposure aquaria within 1,5 hours post fertilisation.
Извършени са амплификации с използване на 2,5 μl ДНК екстракт в 50 μl реакционен обем чрез използване на Idh локус-специфични праймери (както е описано от Peichel et al., 2004.
The procedure is repeated using another female until the desired number of eggs is collected.
Current Biology 1:1416-1424):
Spare few eggs from the last batch and fix them in 10 % acetic acid.
Начален праймер
Counting and distributing eggs in test aquaria
Обратен праймер
Eggs should be evenly distributed between each treatment level to avoid genetic bias.
Съществуват множество доставчици на подходящи PCR реактиви.
Each batch of fertilised eggs should be separated into equal size groups (as many as the treatment levels) by the use of a blunt instrument (i.e. wide-blade entomology forceps or use of an inoculation loop).
Методът, изложен по-долу, е използваният понастоящем в Cefas Weymouth Laboratory.
If you aim for 4 replicates per treatment, with 20 eggs each then you need to distribute 80 eggs per exposure aquaria.
Приготвяне на „реакционна смес“ (50 μl на проба):
It is advisable to add an extra 20 % (i.e. 96 eggs per treatment level) until you are confident that you obtain 100 % fertilisation rates.
Mastermix се приготвя, както следва.
Stickleback eggs are very prone to fungal infections outside the father-guarded nest.
Тя може да бъде приготвена предварително и да се съхраняваа замразена при – 20 °С, докато стане необходима.
In this respect, treatment of all eggs with methylene blue during the first 5 days of the test is critically important.
Приготвя се достатъчно Mastermix за отрицателна контрола (само вода с чистота „за молекулярна биология“).
A stock solution of methylene blue is prepared at 1 mg/ml and added to the exposure aquaria to give a maximum final concentration of 2,125 mg/l.
Обем (изходна конц.)/проба)
Sticklebacks should not be exposed to methylene blue once hatched so the system should be free of methylene blue by day 6.
® реакционен буфер
The eggs are inspected daily and any dead or unfertilised eggs are recorded as such.
Нуклеотиди (dATP, dCTP, dGTP, dTTP)
The eggs should never be outside water until they hatch even for very brief periods.
0,5 μl (25 mM всеки)
Hank's Buffered Salt Solution (HBSS):HBSS is needed to preserve the sperm whilst preparing for fertilisation.
250 μM всеки
C.42 BIODEGRADABILITY IN SEAWATER
Начален праймер
GENERAL INTRODUCTION
0,5 μl (0,1 nmol/μl)
This test method is equivalent to OECD Test Guideline (TG) 306 (1992).
Обратен праймер
When the original test methods were developed, it was not known to what extent results from the screening tests for ready biodegradability using freshwater, and sewage effluent or activated sludge as inoculum, could be applied to the marine environment.
2,0 μM
Variable results on this point have been reported (e.g. (1)).
вода с чистота „за молекулярна биология“
Many industrial waste waters, containing a variety of chemicals, reach the sea either by direct discharge or via estuaries and rivers in which the residence times are low compared with the period necessary for complete biodegradation of many of the chemicals present.
GoTaq полимераза
Because of the growing awareness of the need to protect the marine environment against increasing loads of chemicals and the need to estimate the probable concentration of chemicals in the sea, test methods for biodegradability in seawater have been developed.