natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Той представлява продължение на съществуващите методи за изпитване В.28 (1) и В.27 (15), като се използва сценарий на експозиция съответно на вода с добавка или на седимент с добавка.
Calcium carbonate of chemically pure quality (CaCO3) is added adjust the pH of the final mixture of the sediment to 7,0 ± 0,5;
Методът също така взима под внимание съществуващите протоколи за изпитвания на токсичността за Chironomus riparius и Chironomus dilutus (с предходно наименование C. tentans (2)), разработени в Европа и Северна Америка (3)(4)(5)(6)(7)(8)(9) и впоследствие преминали през кръгово изпитване (1) (7) (10) (11) (12).
Organic carbon content of the final mixture should be 2 % (± 0,5 %) and is to be adjusted by the use of appropriate amounts of peat and sand, according to (a) and (c).
Могат да се използват и други добре документирани видове хирономиди, напр.
The source of peat, kaolin clay and sand should be known.
Chironomus yoshimatsui (13)(14).
The sediment components should be checked for the absence of chemical contamination (e.g. heavy metals, organochlorine compounds, organophosphorous compounds).
Цялостната продължителност на експозицията е около 44 дни за C. riparius и C. yoshimatsui и около 100 дни за C. dilutus.
An example for the preparation of the formulated sediment is described in Appendix 3.
В настоящия метод за изпитване са описани и двата сценария на експозиция — на вода и на седимент.
Mixing of dry constituents is also acceptable if it is demonstrated that after addition of overlying water a separation of sediment constituents (e.g. floating of peat particles) does not occur, and that the peat or the sediment is sufficiently conditioned.
Изборът на подходящ сценарий за експозиция зависи от предвиденото приложение на изпитването.
Any water which conforms to the chemical characteristics of acceptable dilution water as listed in Appendices 2 and 4 is suitable as test water.
Със сценария с експозиция чрез водата, при който добавката е към водата над седимента, се цели да се симулира разнасяне на пестицид, и същият обхваща началната пикова стойност на концентрацията в повърхностните води.
Any suitable water, natural water (surface or ground water), reconstituted water (see Appendix 2) or dechlorinated tap water are acceptable as culturing water and test water, if chironomids will survive in it for the duration of the culturing and testing without showing signs of stress.
Сценарият с вода с добавка е полезен също и за други типове експозиция (в това число разливане на химикали), но не за процесите на натрупване в рамките на седимента, които продължават по-дълго от времетраенето на изпитването.
At the start of the test, the pH of the test water should be between 6 and 9 and the total hardness not higher than 400 mg/l as CaCO3.
В този случай, а също и когато оттичането е основен път за навлизането на пестициди във водни обекти, постановката със седимент с добавка може да е по-подходяща.
However, if there is an interaction suspected between hardness ions and the test chemical, lower hardness water should be used (and thus, Elendt Medium M4 should not be used in this situation).
Ако интерес представляват други сценарии на експозиция, планът на изпитването може да бъде лесно адаптиран.
The same type of water should be used throughout the entire study.
Например, ако разпределението на изпитвания химикал между водната фаза и слоя от седимент не представлява интерес и адсорбцията в седимента трябва да бъде сведена до минимум, може да бъде взето под внимание използването на сурогатен изкуствен седимент (напр. кварцов пясък).
The water quality characteristics listed in Appendix 4 should be measured at least twice a year or when it is suspected that these characteristics may have changed significantly.
Химикали, които изискват изпитване на обитаващите седимента организми, могат да се задържат в седимента в продължение на дълги периоди от време.
Stock solutions — Spiked water
Обитаващите седимента организми могат да бъдат експонирани по различни пътища.
a.
Относителната важност на всеки път на експозиция и времето, необходимо за всеки от тях да способства за общото токсично въздействие, зависят от физичните и химичните свойства на химикала.
Test concentrations are calculated on the basis of water column concentrations, i.e. the water overlying the sediment.
За силно адсорбиращите химикали или за химикали, които образуват ковалентна връзка със седимента, поглъщането на замърсена храна може да бъде значим път на експозиция.
Test solutions of the chosen concentrations are usually prepared by dilution of a stock solution.
За да не се подцени токсичността на силно липофилните химикали, може да се разгледа възможността за добавяне на храна в седимента, преди да бъде приложен изпитваният химикал (вж. точка 31).
Stock solutions should preferably be prepared by dissolving the test chemical in test water.
Поради това е възможно да се включат всички пътища на експозиция и всички етапи от жизнения цикъл.
The use of solvents or dispersants may be required in some cases in order to produce a suitably concentrated stock solution.
Измерваните крайни точки са общият брой на имагиниралите полово зрели индивиди (както за 1-во, така и за 2-ро поколение), скоростта на развитие (както за 1-во, така и за 2-ро поколение), съотношението между половете на имагиниралите и живите полово зрели индивиди (както за 1-во, така и за 2-ро поколение), броят на яйчните маси на женски индивид (само от 1-во поколение) и оплождането на яйчните маси (само от 1-во поколение).
Examples of suitable solvents are acetone, ethylene glycol monoethyl ether, ethylene glycol dimethylether, dimethylformamide and triethylene glycol.
Настоятелно се препоръчва формулиран седимент.
Dispersants which may be used are Cremophor RH40, Tween 80, methylcellulose 0,01 % and HCO-40.
Формулираният седимент има някои преимущества пред естествените седименти:
The solubilising agent concentration in the final test medium should be minimal (i.e. ≤ 0,1 ml/l) and should be the same in all treatments.
намалява се варирането при опитите, тъй като формулираният седимент играе ролята на възпроизводима „стандартна матрица“ и отпада необходимостта да се намират източници на незамърсен и чист седимент;
When a solubilising agent is used, it should have no significant effects on survival as revealed by a solvent control in comparison with a negative (water) control.
изпитванията могат да започнат по всяко време, без да се влияят от сезонното вариране на включения в изпитването седимент, и без да се налага седиментът да се подлага на предварителна подготовка за отстраняване на собствената му фауна;
However, every effort should be made to avoid the use of such materials.
по-ниски разходи в сравнение с тези за събирането в полеви условия на достатъчно количество седимент за рутинните изпитвания;
Stock solutions — Spiked sediment
формулираният седимент позволява сравняване на токсичността между изследванията и съответно ранжиране на химикалите (3).
b.
Ларви на хирономиди в първи ларвен стадий се експонират на диапазон от концентрации на изпитвания химикал в система седимент — вода.
Spiked sediments of the chosen concentration are usually prepared by addition of a solution of the test chemical directly to the sediment.
Изпитването започва с въвеждането на ларви в първи ларвен стадий (1-во поколение) в бехеровите чаши за изпитването, съдържащи седимент с добавка, или алтернативно, изпитваният химикал се добавя във водата след добавянето на ларвите.
A stock solution of the test chemical dissolved in deionised water is mixed with the formulated sediment by rolling mill, feed mixer or hand mixing.
Оценяват се имагинирането на хирономидите, времето до имагинирането и съотношението между половете на напълно имагиниралите живи организми.
If poorly soluble in water, the test chemical can be dissolved in as small a volume as possible of a suitable organic solvent (e.g. hexane, acetone or chloroform).
Имагиниралите възрастни се прехвърлят в клетки за размножение, за улесняване на роенето, чифтосването и яйцеполагането.
This solution is then mixed with 10 g of fine quartz sand for each test vessel.
Оценяват се броят на получените яйчни маси и тяхното оплождане.
The solvent is allowed to evaporate and it should be totally removed from sand;
От тези яйчни маси се получават ларвите в първи ларвен стадий от 2-ро поколение.
the sand is then mixed with the suitable amount of sediment.
Тези ларви се поставят в наскоро приготвени изпитвателни бехерови чаши (процедура за добавяне както за 1-то поколение), за да се определи жизнеспособността на 2-рото поколение чрез оценка на имагинирането на хирономидите, времето до имагинирането и съотношението между половете на напълно имагиниралите живи организми (схематично представяне на изпитването за жизнения цикъл е дадено в допълнение 5).
Only agents which volatilise readily can be used to solubilise, disperse or emulsify the test chemical.
Всички данни се анализират или чрез регресионен модел, за да се оцени концентрацията, която би причинила х % намаляване в съответната крайна точка, или като се използва проверка на хипотези, за да се определи дадена концентрация без наблюдавано въздействие (NOEC).
It should be born in mind that the sand provided by the test chemical and sand mixture, should be taken into account when preparing the sediment (i.e. the sediment should thus be prepared with less sand).
Последното изисква сравнение на стойностите на отклиците от третирането с подходящите отклици при контролите, като се използват статистически тестове.
If necessary, subsamples can be analysed to determine degree of homogeneity.
Следва да се отбележи, че в сценария с вода с добавка, в случай на бързо разградими химикали, по-късните етапи от живота на всеки етап на всяко поколение (напр. фаза на какавида) могат да бъдат експонирани на значително по-ниско равнище на концентрация във водата над седимента от ларвите от 1-ви ларвен стадий.
The test design relates to the selection of the number and spacing of the test concentrations, the number of vessels at each concentration, the number of larvae per vessel, the number of crystallising dishes and breeding cages.
Ако това е повод за загриженост, и е необходимо сравнимо ниво на експозиция за всеки от етапите на жизнения им цикъл, могат да се разгледат следните изменения на метода на изпитване:
Designs for ECx, NOEC and a limit test are described below.
успоредни провеждания с добавяне при различни етапи на жизнения цикъл, или
Design for analysis by regression
повторно добавяне (или обновяване на водата над седимента) на системата за изпитване по време на двете фази на изпитването (1-во и 2-ро поколение), при което интервалите на добавяне (обновяване) следва да бъдат съобразени с характеристиките на съдбата на изпитвания химикал.
The effect concentration (ECx) and the concentration range over which the effect of the test chemical is of interest, should be spanned by the test, such that the endpoint is not extrapolated outside the bounds of the data generated.
Такива промени са осъществими само в рамките на сценария с вода с добавка, но не и в сценария със седимент с добавка.
Extrapolation much below the lowest or above the highest concentration should be avoided.
Разтворимостта във вода на изпитвания химикал, неговото парно налягане и log Kow, измереното или изчисленото му разпределение в седимента и стабилността му във вода следва да са известни.
A preliminary range-finding test according to Test Methods C.27 or C.28 may be helpful for selecting a suitable range of test concentrations.
Следва да е на разположение и надежден метод за анализ за количествено определяне на изпитвания химикал във водата над седимента, във водата между частиците на седимента и в седимента, с известни и протоколирани точност и граница на откриване.
For an ECx approach, at least five concentrations and eight replicates for each concentration are required.
Полезната информация включва структурната формула и чистотата на изпитвания химикал.
For each concentration two breeding cages should be used (A and B).
Информацията за химичната съдба на изпитвания химикал (напр. разсейване, абиотично и биотично разграждане и т.н.) също е полезна.
The eight replicates are divided into two groups of four replicates to serve each breeding cage.
Допълнителни насоки за изпитване на химикали с физични и химични свойства, които ги правят трудни за изпитване, са дадени в (16).
This merger of replicates is necessary due to the number of midges needed in the cage for sound reproduction assessments.
Референтните химикали може да се изпитват периодично като средство за потвърждение, че чувствителността на популацията в лабораторията не е изменена.
However, the 2nd generation has eight replicates again, which are initiated from the exposed populations in the breeding cages.
Както при водните бълхи, би било достатъчно да се извърши изпитване за 48-часова остра токсичност (по 17).
The factor between concentrations should not be greater than two (an exception could be made in cases when the dose response curve has a shallow slope).
Независимо от това, докато няма налична валидирана насока за остра токсичност, може да бъде взета предвид Глава В.28 от настоящото приложение.
The number of replicates at each treatment can be reduced to six (three for each breeding case) if the number of test concentrations with different responses is increased.
Могат да се посочат като пример следните референтни токсични вещества, използвани успешно в кръгови изпитвания и в изследвания за валидиране:
Increasing the number of replicates or reducing the size of the test concentration intervals tends to lead to narrower confidence intervals around the ECX.
линдан, трифлуралин, пентахлорофенол, кадмиев хлорид и калиев хлорид (1) (3) (6) (7) (18).
Design for estimation of a NOEC
За да е валиден тестът, прилагат се следните условия:
For a NOEC approach, five test concentrations with at least eight replicates (4 for each breeding cage, A and B) should be used and the factor between concentrations should not be greater than two.
в края на експозицията и за двете поколения средното имагиниране в контролните третирания трябва да бъде поне 70 % (1)(7);
The number of replicates should be sufficient to ensure adequate statistical power to detect a 20 % difference from the control at the 5 % level of significance (α = 0,05).
за C. riparius и C. yoshimatsui 85 % от общия брой на имагиниралите полово зрели индивиди от контролното третиране при двете поколения трябва да се появяват между 12 и 23 дни след въвеждането на ларвите в първи ларвен стадий в съдовете;
For the development rate, fecundity and fertility an analysis of variance (ANOVA) is usually appropriate, followed by Dunnett's test or Williams' test (22-25).
за C. dilutus е приемлив период от 20 до 65 дни;
For the emergence ratio and sex ratio the Cochran-Armitage, Fisher's exact (with Bonferroni correction), or Mantel-Haentzal tests may be appropriate.
средното съотношението между половете на имагиниралите и живи полово зрели индивиди (като дял женски или дял мъжки индивиди) в контролното третиране на двете поколения, следва да бъде най-малко 0,4, но не може да надвишава 0,6;
A limit test may be performed (one test concentration and control(s)) if no effects are observed in the optional preliminary range-finding test up to a maximum concentration.
за всяка клетка за размножаване броят на яйчните маси в контролите от 1-вото поколение следва да бъде най-малко 0,6 на женски индивид, добавен към клетка за размножение;
The purpose of the limit test is to indicate that any toxic effects of the test chemical are found at levels greater than the limit concentration tested.
делът на оплодените яйчни маси във всяка клетка за размножаване от контролите от 1-то поколение следва да бъде най-малко 0,6; в края на периода на експозиция за двете поколения следва да се измери рН и концентрацията на разтворения кислород във всеки от съдовете.
For water, 100 mg/l and for sediment 1000 mg/kg (dry weight) are suggested.
Концентрацията на разтворен кислород трябва да бъде поне 60 % от стойността на насищане при равновесие с атмосферния въздух (ASV [9]), а рН на водата над седимента следва да бъде в обхвата 6—9 във всички съдове за изпитване,
Usually, at least eight replicates for both the treatment and control are necessary.
ОПИСАНИЕ НА МЕТОДА Съдове за изпитване и клетки за размножение
Adequate statistical power to detect a 20 % difference from the control at the 5 % level of significance (α = 0,05) should be demonstrated.
Ларвите се експонират в 600 ml стъклени бехерови чаши с диаметър около 8,5 cm (виж допълнение 5).
With metric responses (e.g. development rate), the t-test is a suitable statistical method if data meet the requirements of this test (normality, homogeneous variances).
Подходящи са и други съдове, но те следва да осигуряват подходяща дълбочина на водата над седимента и на самия седимент.
An unequal-variance t-test or a non-parametric test, such as the Wilcoxon-Mann-Whitney test may be used, if these requirements are not fulfilled.
Площта на седимента трябва да бъде достатъчна, за да осигурява 2 до 3 cm2 на ларва.
With the emergence ratio, Fisher's exact test is appropriate.
Съотношението между дебелината на слоя седимент и тази на водата над него трябва да бъде около 1:4.
Preparation of the water-sediment system (water spiking)
Следва да бъдат използвани клетки за размножаване (най-малко по 30 см във всяко от трите измерения) с марля (размер на отвора приблизително 1 mm) в горната част и една странична част на клетката като минимум (вж. допълнение 5).
a.
Във всяка клетка се поставя за яйцеполагане блюдо кристализатор от 2 l, със съдържание на вода за изпитване и на седимент.
Formulated sediment (see paragraphs 13-14 and Appendix 3) is added to each test vessel and crystallising dish to form a layer of at least 1,5 cm (for the crystallising dish it may be somewhat lower) but maximally 3 cm.
Също така, за блюдото кристализатор съотношението между дебелината на слоя седимент и тази на водата над него трябва да бъде около 1:4.
Water (see paragraph 15) is added so that the ratio of the depth of the sediment layer and the depth of the water does not exceed 1:4.
След като яйчните маси бъдат събрани от блюдото кристализатор, те се поставят в тигел на 12-гнездна микротитърна плака (една яйчна маса в гнездо, съдържаща минимум 2,5 ml вода от блюдото кристализатор с добавка), след което плаките се покриват с капак, за да се предотврати значимо изпаряване.
After preparation of the test vessels the sediment-water system should be left under gentle aeration for approximately seven days prior to addition of the first instar larvae of the 1st or 2nd generation (see paragraph 14 and Appendix 3).
Могат да се използват и други съдове, подходящи за съхранение на яйчните маси.
The sediment-water system of the crystallising dishes is not aerated during the test, since they do not need to support larval survival (before hatching the egg ropes are already collected).
С изключение на микротитърните плаки, всички съдове за изпитване и другото оборудване, което ще влезе в контакт с изпитваната система, следва да бъдат изцяло от стъкло или от друг химически инертен материал (напр. политетрафлуороетилен).
To avoid separation of sediment ingredients and re-suspension of fine material during addition of test water in the water column, the sediment can be covered with a plastic disc while water is poured onto it.
За предпочитане е видът, който се използва за изпитването, да е Chironomus riparius.
The disc is removed immediately afterwards.
C. yoshimatsui също може да бъде използван.
Other devices may also be appropriate.
C. dilutus също е подходящ, но с него се борави по-трудно и е необходим по-дълъг период на изпитване.
Preparation of the water-sediment system (spiked sediment)
Подробности за методите на отглеждане на Chironomus riparius са дадени в допълнение 2.
b.
Информация за условията на отглеждане е на разположение също и за C. dilutus (5) и C. yoshimatsui (14).
The spiked sediments prepared according to paragraph 16b are placed in the vessels and crystallising dish and overlying water is added to produce a sediment-water volume ratio of 1:4.
Идентичността на видовете трябва да се потвърждава преди изпитването, но не е задължителна преди всяко изпитване, ако организмите са получени при отглеждане в изпитващата лаборатория.
The depth of the sediment layer should be in the range of 1,5 to 3 cm (it may be somewhat lower for the crystallising dish).
За предпочитане е да се използва формулиран седимент (наричан още възстановен, изкуствен или синтетичен седимент).
To avoid separation of sediment ingredients and re-suspension of fine material during addition of test water in the water column, the sediment can be covered with a plastic disc while water is poured onto it, and the disc removed immediately afterwards.
Ако обаче се използва естествен седимент, трябва да се определят характеристиките му (най-малко рН и съдържание на органичен въглерод, а определянето на други параметри, напр. на съотношението C/N и зърнометричния състав, също се препоръчва), той следва да бъде незамърсен и в него да няма други организми, които да се конкурират с ларвите на хирономидите, или да се хранят с тях.
Once the spiked sediment with overlying water has been prepared, it is desirable to allow partitioning of the test chemical from the sediment to the aqueous phase (4) (5) (7) (18).
Също така се препоръчва преди изпитването седиментите да бъдат аклиматизиран в продължение на седем дни при условията на изпитването.
Appropriate equilibration time is sediment and chemical specific, and can be in the order of hours to days and in rare cases up to five weeks.
Препоръчва се следният описан в (1) формулиран седимент (1) (20) (21):
As this would leave time for degradation of many chemicals, equilibrium is not awaited but an equilibration period of 48 hours is recommended.
а.
However, when the degradation half-life of the chemical in sediment is known to be long (see paragraph 8), the equilibration time may be extended.
4—5 % торф (сухо тегло);
At the end of this further equilibration period, the concentration of the test chemical should be measured in the overlying water, the pore water and the sediment, at least at the highest concentration and a lower one (see paragraph 38).
с рН възможно най-близко до обхвата 5,5—6,0;
These analytical determinations of the test chemical allow for calculation of a mass balance and expression of results based on measured concentrations.
важно е да се използва торф под формата на прах, ситно смлян (размер на частиците ≤ 1 mm) и изсушен само с въздух.
Test vessels should be covered (e.g. by glass plates).
б.
If necessary, during the study the water levels may be topped up to the original volume in order to compensate for evaporation.
20 % каолин (сухо тегло) (за предпочитане съдържанието на каолинит да е повече от 30 %);
This should be performed using distilled or deionised water to prevent any build-up of salts.
в.
Crystallising dishes in the breeding cages are not covered and may, but do not need to be adjusted to compensate for water loss during the test period, since the egg ropes are only in contact with the water for about one day and the dishes are only used during a short phase of the test.
75—76 % кварцов пясък (сухо тегло) (трябва да преобладава финият пясък с размер на над 50 % от частиците между 50 и 200 μm);
Addition of test organisms
г. добавя се дейонизирана вода, така че влажността на крайната смес да бъде в обхвата 30–50 %;
Four to five days before adding the first instar larvae for the 1st generation, egg masses should be taken from the culture and placed in small vessels in culture medium.
д. добавя се химически чист калциев карбонат (CaCO3), за да се коригира рН на крайната смес на седимента до 7,0 ± 0,5;
Aged medium from the stock culture or freshly prepared medium may be used.
е. съдържанието на органичен въглерод в крайната смес следва да бъде 2 % (± 0,5 %) и да бъде коригирано, като се използват подходящи количества торф и пясък, в съответствие с а) и в).
In any case, a small amount of food, e.g. a few droplets of filtrate from a finely ground suspension of flaked fish food, should be added to the culture medium (see Appendix 2).
Източниците на торф, каолин и пясък трябва да са известни.
Only freshly laid egg masses should be used.