natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Еднократна по-голяма порция е приемлива, особено за съботите и неделите.
The correlation coefficient (R2) for calibration curves should be greater than 0,99.
Даването на храна се прекратява 12 часа преди пробовземането/аутопсията.
However, a high correlation is not sufficient to guarantee adequate prediction of concentration in all ranges.
Храната за риби следва да бъдат оценявана за наличието на замърсители, като например органохлорни пестициди, полициклични ароматни въглеводороди (PAH), полихлорирани бифенили (PCB).
In addition to having a sufficiently high correlation for the calibration curve, the concentration of each standard, as calculated from the calibration curve, should all fall between 70 and 120 % of its nominal concentration.
Храна с повишени нива на фитоестрогени, които биха нарушили отклика при изследването с познати естрогенни агонисти (напр.
If the nominal concentrations trend away from the calibration regression line (e.g. at lower concentrations), it may be necessary to split the calibration curve into low and high ranges or to use a nonlinear model to adequately fit the absorbance data.
17-бета-естрадиол) следва да се избягва.
If the curve is split, both line segments should have R2 > 0,99.
Неконсумираната храна и фекалните отпадъци следва да се отстраняват от съдовете за изпитване най-малко два пъти седмично, напр. чрез внимателно почистване на дъното на всеки съд, с използване на сифон.
The limit of detection (LOD) is defined as the concentration of the lowest analytical standard, and limit of quantitation (LOQ) is defined as the concentration of the lowest analytical standard multiplied by the lowest dilution factor.
Продължителността на излагане на светлина и температурата на водата следва да са подходящи за изпитваните видове (допълнение 2).
On each day that vitellogenin assays are performed, a fortification sample made using an inter-assay reference standard will be analysed (Appendix 7).
Честота на аналитичните определяния и измервания
The ratio of the expected concentration to the measured concentration will be reported along with the results from each set of assays performed on that day.
Преди започване на периода на експозиция следва да бъде гарантирано правилното функциониране на системата за доставяне на химикала.
Evaluation of Biomarker Responses by Analysis of Variance (ANOVA)
Всички необходими методи за анализ следва да бъдат установени, включително с достатъчно информация за стабилността на химикала в системата за изпитване.
To identify potential endocrine activity of a chemical, responses are compared between treatments and control groups using analysis of variance (ANOVA).
По време на изпитването концентрациите на изпитвания химикал се определят през постоянни интервали, както следва:
Where a solvent control is used, an appropriate statistical test should be performed between the dilution water and solvent controls for each endpoint.
дебитът на изходните разтвори на водата за разреждане и на токсичния химикал следва да се проверяват, за предпочитане ежедневно, но като минимум два пъти седмично и през време на изпитването не следва да се променят с повече от 10 %.
Guidance on how to handle dilution water and solvent control data in the subsequent statistical analysis can be found in OECD, 2006c (27).
Препоръчва се действителните концентрации на изпитвания химикал да се измерват във всички съдове в началото на изпитването и след това на интервали от една седмица.
All biological response data should be analysed and reported separately by sex.
Препоръчва се резултатите да се основават на измерени концентрации.
If the required assumptions for parametric methods are not met — non-normal distribution (e.g. Shapiro-Wilk's test) or heterogeneous variance (Bartlett's test or Levene's test), consideration should be given to transforming the data to homogenise variances prior to performing the ANOVA, or to carrying out a weighted ANOVA.
Обаче ако концентрацията на изпитвания химикал в разтвора е поддържана на задоволително ниво в рамките на ± 20 % от номиналната концентрация по време на изпитването, тогава резултатите могат да се основават или на номиналната, или на измерената стойност.
Dunnett's test (parametric) on multiple pair-wise comparisons or a Mann-Whitney with Bonferroni adjustment (non-parametric) may be used for non-monotonous dose-response.
Възможно е да се наложи филтруване (напр. с използване на отвори с размер 0,45 μm) или центрофугиране на пробите.
Other statistical tests may be used (e.g. Jonckheere-Terpstra test or Williams test) if the dose-response is approximately monotone.
Ако е необходимо, центрофугирането се препоръчва като процедура.
A statistical flowchart is provided in Appendix 8 to help in the decision on the most appropriate statistical test to be used.
Обаче в случай че изпитваният материал не се адсорбира от филтрите, филтруването също може да е приемливо.
Additional information can also be obtained from the OECD Document on Current Approaches to Statistical Analysis of Ecotoxicity Data (27).
По време на изпитването разтвореният кислород, температурата и рН следва да бъдат измервани във всеки съд за изпитване най-малко веднъж седмично.
Reporting of test results
Общата твърдост и алкалността следва да се измерват в контролите и в един съд с най-висока концентрация най-малко веднъж седмично.
Study data should include:
За предпочитане е температурата да се наблюдава непрекъснато най-малко в един съд за изпитване.
Testing facility:
По време на изследването или при приключването му се оценяват редица общи (напр. преживяване) или ключови биологични отклици (напр. нива на VTG).
Responsible personnel and their study responsibilities
Измерването и оценката на тези крайни точки и ползата от тях са описани по-долу.
Each laboratory should have demonstrated proficiency using a range of representative chemicals
Преживяване
Characterisation of test chemical
Рибите следва да се преглеждат всеки ден през периода на изпитването и всякаква смъртност следва да се записва, а мъртвите екземпляри се отстраняват колкото е възможно по-бързо.
Physical nature and relevant physicochemical properties
Мъртвите риби не следва да се заменят нито в съдовете с контроли, нито в съдове за третиране.
Method and frequency of preparation of test concentrations
Полът на рибите, които умират по време на изпитването, трябва да се определи чрез макроскопска оценка на гонадите.
Information on stability and biodegradability
Поведение и външен вид
Solvent:
Всяко необичайно поведение (в сравнение с контролите) трябва да бъде отбелязвано;
Characterization of solvent (nature, concentration used)
това може да включва признаци на обща токсичност, включително хипервентилация, некоординирано плуване, загуба на равновесие, и нетипично състояние на покой или нетипично поведение при хранене.
Justification of choice of solvent (if other than water)
Освен това следва да бъдат отбелязвани и външните аномалии (като кръвоизлив, обезцветяване).
Test animals:
Такива признаци на токсичност следва да се разглеждат внимателно при интерпретирането на данните, тъй като те могат да сочат концентрации, при които биомаркерите за ендокринна активност не са надеждни.
Species and strain
Такива наблюдения на поведението могат също да предоставят полезна качествена информация за потенциалните бъдещи изисквания за изпитвания на риби.
Supplier and specific supplier facility
Така например териториалната агресивност при нормални мъжки или при женски, придобили мъжки вторични полови белези, е наблюдавана при Pimephales promelas при андрогенна експозиция;
Age of the fish at the start of the test and reproductive/spawning status
При зебровото данио характерното поведение при чифтосване и хвърляне на хайвера, проявяващо се непосредствено след изгрев, се ограничава или се възпрепятства от естрогенна или антиандрогенна експозиция.
Details of animal acclimation procedure
Тъй като някои аспекти на външния вид (предимно цветът) могат да се променят бързо при боравенето, важно е качествените наблюдения да бъдат извършени преди отстраняването на животните от системата за изпитване.
Body weight of the fish at the start of the exposure (from a sub-sample of the fish stock)
От досегашния опит с Pimephales promelas се предполага, че някои ендокринно активни химикали може първоначално да предизвикат промени в следните външни характеристики:
Test Conditions:
оцветяване на тялото (светло или тъмно), начини на оцветяване (наличие на вертикални ленти) и форма на тялото (главата и гръдната област).
Test procedure used (test-type, loading rate, stocking density, etc.);
Поради това наблюденията на външния вид на рибите следва да бъдат правени по време на изпитването и при приключване на изследването
Method of preparation of stock solutions and flow-rate;
Умъртвяване на риби по хуманен начин
The nominal test concentrations, weekly measured concentrations of the test solutions and analytical method used, means of the measured values and standard deviations in the test vessels and evidence that the measurements refer to the concentrations of the test chemical in true solution;
На ден 21, т.е. при приключване на експозицията, рибите следва да бъдат подложени на евтаназия с подходящи количества трикаин (трикаинов метансулфонат, метакаин, MS-222 (CAS 886-86-2), 100-500 mg/l буфериран с 300 mg/l NaHCO3 (натриев хидрогенкарбонат, CAS 144-55-8), за да се намали дразненето на мукозните мембрани; след това се вземат проби от кръв или тъкани за определяне на вителогенин, както е обяснено в раздела за витогенин.
Dilution water characteristics (including pH, hardness, alkalinity, temperature, dissolved oxygen concentration, residual chlorine levels, total organic carbon, suspended solids and any other measurements made)
Наблюдение на вторични полови белези
Water quality within test vessels:
Някои химикали с активно действие върху ендокринната система могат да предизвикат промени в специализирани вторични полови белези (брой размножителни туберкули при мъжки Pimephales promelas, броят на папиларните израстъци при оризията от мъжки пол).
pH, hardness, temperature and dissolved oxygen concentration;
Следва да се отбележи, че химикали с известни начини на действие могат да са причина за анормална проява на вторични полови белези при животни от противоположния пол;
Detailed information on feeding (e.g. type of food(s), source, amount given and frequency and analyses for relevant contaminants if available (e.g. PCBs, PAHs and organochlorine pesticides).
например агонисти на андрогенните рецептори като например тренболон, метилтестостерон и дихидротестостерон, могат да предизвикат поява на подчертано развити размножителни туберкули у женски Pimephales promelas, или развитие на папиларни израстъци при оризията от женски пол (11, 20, 21).
Evidence that the controls met the acceptance criteria of the test;
Протоколирано е също, че агонисти на естрогенните рецептори могат да намалят броя на размножителните туберкули и размера на дорзалните отлагания на колаген при полово зрели мъжки индивиди (25, 26).
Data on mortalities occurring in any of the test concentrations and control;
Такива макроскопски наблюдения на морфологията могат да предоставят полезна качествена информация за потенциалните бъдещи изисквания за изпитвания на риби.
Statistical analytical techniques used, treatment of data and justification of techniques used;
Броят и размерът на размножителните туберкули при Pimephales promelas и папиларните израстъци при оризията могат да бъдат количествено определени директно или, по-практично, в консервирани екземпляри.
Data on biological observations of gross morphology, including secondary sex characteristics and vitellogenin;
Препоръчваните процедури за оценка на вторични полови белези при Pimephales promelas и при оризията са на разположение съответно в допълнение 5А и допълнение 5Б.
Results of the data analyses preferably in tabular and graphical form;
Вителогенин (VTG)
Incidence of any unusual reactions by the fish and any visible effects produced by the test chemical
Пробовземането на кръв се извършва от опашната артерия/вена с хепаринизирана микрокапилярка за хематокрит или, като алтернативен вариант, чрез сърдечна пункция със спринцовка.
GUIDANCE FOR THE INTERPRETATION AND ACCEPTANCE OF THE TEST RESULTS
В зависимост от размера на рибата обемът на кръвта за пробовземане обикновено варира между 5 и 60 μl на индивид за Pimephales promelas и 5-15 μl на индивид за зеброво данио.
This section contains a few considerations to be taken into account in the interpretation of test results for the various endpoints measured.
Плазмата се отделя от кръвта чрез центрофугиране и се съхранява с протеазни инхибитори при – 80 °C до анализа за вителогенин.
The results should be interpreted with caution where the test chemical appears to cause overt toxicity or to impact on the general condition of the test animal.
Като алтернатива, при оризията се използва черният дроб, а при зебровото данио като източник на тъкан за определяне на VTG може да се използва хомогенат глава/опашка (допълнение 6).
In setting the range of test concentrations, care should be taken not to exceed the maximum tolerated concentration to allow a meaningful interpretation of the data.
Измерването на VTG следва да се основава на валидиран хомоложен ELISA метод, като се използва хомоложен VTG стандарт и хомоложни антитела.
It is important to have at least one treatment where there are no signs of toxic effects.
Препоръчва се използването на метод, който позволява да се открият нива VTG от порядъка на няколко ng/ml плазма (или ng/mg тъкан), което е фоновото ниво при неекспонирани мъжки риби.
Signs of disease and signs of toxic effects should be thoroughly assessed and reported.
Контролът на качеството на анализа на VTG се извършва чрез използването на еталони, празни проби и анализи с най-малко две повторения.
For example, it is possible that production of VTG in females can also be affected by general toxicity and non-endocrine toxic modes of action, e.g. hepatotoxicity.
За всеки ELISA метод следва да се проведе изпитване за матричен ефект (ефект на разреждане на пробата), за да се определи минималният коефициент на разреждане на пробата.
However, interpretation of effects may be strengthened by other treatment levels that are not confounded by systemic toxicity.
Всяка ELISA плака, използвана за изследвания на VTG, следва да включва следните проби за контрол на качеството:
There are a few aspects to consider for the acceptance of test results.
най-малко 6 еталона за калибриране, покриващи диапазона от очаквани концентрации на VTG, и поне една празна проба за изследване за неспецифично свързване (анализ в две повторения).
As a guide, the VTG levels in control groups of males and females should be distinct and separated by about three orders of magnitude in fathead minnow and zebrafish, and about one order of magnitude for medaka.
Абсорбцията при тези празни проби следва да е по-малко от 5 % от максималната абсорбция на еталона за калибриране.
Examples of the range of values encountered in control and treatment groups are available in the validation reports (1, 2, 3, 4).
Следва да се анализират най-малко две аликвотни части (две повторения в отделни гнезда) от всяко разреждане на проба.
High VTG values in control males could compromise the responsiveness of the assay and its ability to detect weak oestrogen agonists.
Повторенията в отделни гнезда, които се различават с повече от 20 %, следва да бъдат анализирани повторно.
Low VTG values in control females could compromise the responsiveness of the assay and its ability to detect aromatase inhibitors and oestrogen antagonists.
Коефициентът на корелация (R2) за калибрационните криви трябва да бъде по-голям от 0,99.
The validation studies were used to build that guidance.
Независимо от това, високата корелация не е достатъчна, за да гарантира достатъчно прогнозиране на концентрацията във всички диапазони.
If a laboratory has not performed the assay before or substantial changes (e.g. change of fish strain or supplier) have been made it is advisable that a technical proficiency study is conducted.
В допълнение към достатъчно високата степен на корелация за калибрационната крива, концентрацията на всеки еталон, както е изчислена от калибрационната крива, следва да попада между 70 и 120 % от неговата номинална концентрация.
It is recommended that chemicals covering a range of modes of action or impacts on a number of the test endpoints are used.
В случай, че трендът на номиналните концентрации се отдалечава от тренда на регресионната линия (напр. при по-ниски концентрации), може да е необходимо калибрационната крива да се раздели на ниски и високи диапазони, или да се използва нелинеен модел за подходящо изглаждане на данните от абсорбцията.
In practice, each laboratory is encouraged to build its own historical control data for males and females and to perform a positive control chemical for estrogenic activity (e.g. 17β-estradiol at 100 ng/l, or a known weak agonist) resulting in increased VTG in male fish, a positive control chemical for aromatase inhibition (e.g. fadrozole or prochloraz at 300 μg/l) resulting in decreased VTG in female fish, and a positive control chemical for androgenic activity (e.g. 17β-trenbolone at 5 μg/l) resulting in induction of secondary sex characteristics in female fathead minnow and medaka.
Ако кривата е раздвоена, и двата линейни участъка следва да са с R2 > 0,99.
All these data can be compared to available data from the validation studies (1, 2, 3) to ensure laboratory proficiency.
Границата на откриване (LOD) се определя като границата, под която концентрацията е твърде ниска за откриване на веществото, а границата на количествено определяне (LOQ) се определя като границата, под която концентрацията е твърде ниска за откриване на веществото, умножена по най-ниския коефициент на разреждане.
In general, vitellogenin measurements should be considered positive if there is a statistically significant increase in VTG in males (p < 0,05), or a statistically significant decrease in females (p < 0,05) at least at the highest dose tested compared to the control group, and in the absence of signs of general toxicity.
Всеки ден, в който се извършват изпитвания за VTG, се анализира проба с внесена добавка с използване на еталон, който е референтен между различни изследвания (допълнение 7).
A positive result is further supported by the demonstration of a biologically plausible relationship between the dose and the response curve.
Отношението на очакваната концентрация към измерената концентрация се протоколира заедно с резултатите от всеки набор от изследвания от този ден.
As mentioned earlier, the vitellogenin decrease may not entirely be of endocrine origin;
Оценка на отклиците на биомаркерите чрез дисперсионен анализ (ANOVA)
however a positive result should generally be interpreted as evidence of endocrine activity in vivo, and should normally initiate actions for further clarification.
За идентифициране на потенциална ендокринна активност на даден химикал се сравняват отклиците между третираните и контролните групи с помощта на дисперсионен анализ (ANOVA).
Vitellogenin induction by 17β-estradiol and 17β-ethinylestradiol in male zebrafish (Danio rerio).
Когато се използва контрола на разтворител, за всяка крайна точка следва да се приложи подходящ статистически тест между контролите на вода за разреждане и на разтворител.
Development of an ELISA for determination of the hepatic vitellogenin in Medaka (Oryzias latipes).
Насоки за работата с данните за контролите на вода за разреждане и на разтворител при последващия статистически анализ могат да се намерят в източник OECD, 2006c (27).
Fish full life-cycle testing for androgen methyltestosterone on medaka (Oryzias latipes).
Всички биологични данни, свързани с отклици, следва да се анализират и протоколират отделно по пол.
Screening and testing for endocrine disruption in fish-biomarkers as “signposts”, not “traffic lights”, in risk assessment.
Ако изискваните допускания за използване на параметричен метод не са изпълнени — не е налице нормалност на разпределението (например тест на Шапиро-Уилк) или дисперсията е хетерогенна (тест на Бартлет или тест на Левин), преди извършването на ANOVA следва да се разгледа трансформиране на данните с оглед хомогенизиране на дисперсията, или извършване на ANOVA с претеглени средни.
Effects of waterborne exposure to 17β-estradiol on secondary sex characteristics and gonads of the fathead minnow (Pimephales promelas).
За немонотонна зависимост доза-отклик могат да се използват тестът на Дънет (параметричен) върху множествени сравнения по двойки, или тестът на Ман-Уитни с корекция на Бонферони (непараметричен).
Villeneuve and G.T.
Ако зависимостта е приблизително монотонна, могат да се използват други статистически тестове (напр. тестът на Йонкхере-Терпстра или тестът на Уйлямс).
Ankley.
За подпомагане при вземането на решение относно използването на най-подходящия статистически тест в допълнение 8 е представена статистическа блокова схема.
Abbreviations & definitions
Допълнителна информация може да бъде получена също и от документа на ОИСР „Съвременни подходи за статистически анализ на данни за екотоксичност“ (27).
Chemical
Протоколиране на резултатите от изпитването
A substance or a mixture
Данните от изследването следва да включват:
Coefficient of variation.
Извършваща изпитвания лаборатория:
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay.
Отговорен персонал и неговите отговорности, свързани с изследването
Loading rate
Всяка лаборатория трябва да е показала компетентността си чрез използване на набор от представителни химикали
Wet weight of fish per volume of water.
Характеризиране на изпитвания химикал (chemical)
Stocking density
Физична природа и относими физични и химични свойства
Number of fish per volume of water.
Метод и честота на приготвяне на изпитваните концентрации
VTG (Vitellogenin)
Информация за стабилността и биоразградимостта
Phospholipoglycoprotein precursor to egg yolk protein that normally occurs in sexually active females of all oviparous species.
Разтворител:
HPG axis
Характеристика на разтворителя (естество, използвана концентрация)
Hypothalamic-pituitary-gonadal axis.
Обосновка за избора на разтворителя (когато разтворителят е различен от вода)
MTC
Изпитвани животни:
Maximum Tolerated Concentration, representing about 10 % of the LC50.
Биологични видове и щам
Experimental conditions for the fish endocrine screening assay
Доставчик и специални съоръжения на доставчика
Recommended species
Възрастта на рибите в началото на изпитването и репродуктивен статус/статус по отношение на хвърляне на хайвера
Fathead minnow
Подробни данни за процедурата за аклиматизация на животните
(Pimephales promelas)
Телесно тегло на рибите в началото на експозицията (от подпроба от рибното потомство)
Medaka (Oryzias latipes)
Условия на изпитване:
Zebrafish
Използвана процедура на изпитване (тип изпитване, скорост на зареждане, гъстота на отглеждане и т.н.);
Test type
Метод за приготвяне на изходни разтвори и скорост на потока;
Flow-through
Номиналните концентрации на изпитване, измерваните седмично концентрации на разтворите за изпитването и използвания аналитичен метод, средни величини на измерените стойности и стандартни отклонения в съдовете за изпитване, и доказателство, че измерванията се отнасят за концентрациите на изпитвания химикал ( test chemical ) в истински разтвор;
Water temperature
Характеристиките на водата за разреждане (включително рН, твърдост, алкалност, температура, концентрация на разтворен кислород, нива на остатъци от хлор, общо съдържание на органичен въглерод, суспендирани твърди частици и всякакви други направени измервания)
Illumination quality
Качество на водата в съдовете за изпитване:
Fluorescent bulbs (wide spectrum)
рН, твърдост, температура и концентрация на разтворен кислород;
Light intensity 10-20 μE/m2/s, 540-1000 lux, or 50-100 ft-c (ambient laboratory levels)
Подробна информация за храненето (например вид на храната(ите), източник, дадено количество и честота, и анализи за съдържание на относими замърсители, ако са на разположение (напр. полихлорирани бифенили, полициклични ароматни въглеводороди и органохлорни пестициди).
10-20 μE/m2/s, 540-1000 lux, or 50-100 ft-c (ambient laboratory levels)