natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Ако дисперсията е хетерогенна, използва се тестът на Тамхане-Дънет.
Air saturation value
В другите случаи се използва точният тест на Ман-Уитни с корекция на Бонферони-Холм.
Biomarker
Блокова схема с описание на статистиките на съотношенията между половете е дадена в допълнение 8.
Causing effect at individual level
Съотношенията между половете следва да бъдат представени в таблици като концентрационни отношения ± SD за мъжки, женски, междинен и недиференциран пол.
A substance or a mixture.
Статистическата значимост следва да бъде подчертана.
Days post hatch
Примери са представени в доклада за валидиране на фаза 2 от ИРПР (42).
Y-specific DM-domain gene required for male development in the medaka fish
Генетичният пол следва да се протоколира като процент на инверсия на фенотипния пол на индивидите от мъжки, женски, междинен и недиференциран пол.
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay
Концентрации на VTG
Fish weight
Концентрациите на VTG следва да бъдат анализирани за значимо въздействие (подход NOEC/LOEC) на експозицията.
Fish wet weight (blotted dry)
Тестът на Дънет се предпочита пред t-теста с корекция на Бонферони.
FSDT
Когато се използва корекция на Бонферони, предпочита се корекция на Бонферони-Холм.
Fish Sexual Development Test
Необходимо е да се предвиди лог-трансформация на VTG за постигане на нормалност и хомогенност на дисперсията.
Hypothalamic-pituitary-gonadal axis
На следващо място, ако зависимостта концентрация-отклик е в съответствие с монотонността, тогава тестът на Йонкхере-Терпстра е за предпочитане пред всички горепосочени.
Intersex fish
Ако се използват t-тестове или тестът на Дънет, за продължаване на работата не е необходим F-тест за значимост при ANOVA.
Fish with more than one oocyte in testis per 6 sections analysed or spermatogenetic cells in ovaries (yes/no)
За подробности виж диаграмата в допълнение 8.
Wet weight of fish per volume of water
Резултатите следва да бъдат протоколирани в таблици като средни стойности на концентрациите ± SD отделно за мъжки, женски, междинен и недиференциран пол.
Mode of action
Статистическата значимост на фенотипните женски и фенотипните мъжки индивиди трябва да бъде ясно обозначена.
Reverse Transcriptase Polymerase Chain-Reaction
Действителни концентрации на изпитвания химикал
Undifferentiated fish
Действителните концентрации на изпитвания химикал в камерите трябва да бъдат анализирани в честоти, описани в точка 34.
Fish with gonads exhibiting no discernible germ cells.
Резултатите следва да се протоколират в таблици, като средна стойност на концентрацията ± SD на база повторение, както и на база концентрация с ясно обозначени информация за броя на пробите и стойностите, силно различаващи се от нормалните за средната концентрация на третиране ± 20 %.
Vitellogenin
Примери могат да бъдат намерени в доклада за валидиране на фаза 2 от ИРПР (42).
Experimental conditions for the FSDT (freshwater species)
Резултатите от изпитването следва да се тълкуват внимателно, когато измерените концентрации на изпитвания химикал в разтворите за изпитване са на нива, които са близки до границата на откриване на метода за анализ.
Japanese medaka (Oryzias latipes)
Относими физични и химични свойства;
Zebrafish (Danio rerio)
данни за идентификация на химикала, включително чистота и аналитичен метод за количествено определяне на изпитвания химикал.
Three-spined Stickleback (Gasterostreus aculeatus)
Използвана процедура за изпитване (например проточна или полустатична/с обновяване);
Flow-through or semi-static
планът на изпитването, включително концентрации на изпитване, метод на подготовка на изходните разтвори, честота на обновяване (трябва да са посочени средството за повишаване на разтворимостта и неговата концентрация, когато се използва такова);
Fluorescent bulbs (wide spectrum
номиналната концентрация на изпитване, средните стойности на измерените величини и техните стандартни отклонения в камерите за изпитването, и методът, чрез който са получени (използваният метод за анализ трябва да бъде представен в приложение); доказателство, че измерванията се отнасят за концентрациите на изпитвания химикал в истински разтвор;
Light intensity
качество на водата в камерите за изпитване:
10-20 μE/m2/s, 540-1080 lux, or 50-100 ft-c (ambient laboratory levels)
подробна информация за храненето (например вид на храната(ите), дадено количество и честота, и анализи за съдържание на замърсители, напр. полихлорирани бифенили, полициклични ароматни въглеводороди и органохлорни пестициди), ако е относимо.
12-16 h light, 8-12 h dark
Доказателство, че контролите съответстват на критериите за валидност:
Minimum chamber size
в таблиците данните за процента на излюпване следва да бъдат представени като процент на повторение и на концентрация.
Individual chambers should contain a minimum of 7 l water volume
Стойностите, силно различаващи се от критериите за признаване (при контролите), следва да бъдат ясно посочени.
Age of test organisms at start of exposure
Преживяването следва да бъде представено като процент на повторение и на концентрация.
Newly fertilised eggs (Early blastula stage)
Стойностите, силно различаващи се от критериите за валидност (при контролите), следва да бъдат ясно посочени;
Newly fertilised eggs
Ясно посочване на резултатите, получени за различните наблюдавани крайни точки:
No. of eggs per treatment
преживяване на ембриони и процент на излюпване;
Minimum 120
необичаен външен вид;
Minimum 3 (plus appropriate controls)
дължина и тегло;
No. replicates per treatment
измервания на VTG (ng/g хомогенат, ng/ml плазма или ng/mg черен дроб);
Minimum 4 (unless square root allocation to controls)
хистология на гонадите, съотношение между половете, данни за генетичния пол;
Live Artemia, frozen adult brine shrimp, flake food, etc.
проява на необичайни реакции от страна на рибите и всякакви видими въздействия, причинени от изпитвания химикал.
It is recommended to feed twice daily
Резултатите трябва да бъдат представени като средни стойности ± стандартно отклонение (SD) или стандартна грешка (SE).
Special fry food, live Artemia, frozen adult brine shrimp, flake food, etc.
Статистиките следва да бъдат протоколирани най-малко като NOEC и LOEC и доверителни интервали.
It is recommended to feed twice daily
Следва да се спазва статистическата блокова схема (допълнение 8).
None unless DO concentration falls below 60 % saturation
Sumpter, 1996, „Inhibition of testicular growth in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) exposed to estrogenic alkylphenolic chemicals“, Environmental Toxicology and Chemistry 15, pp. 194-202.
None unless DO concentration falls below 70 % saturation
Sumpter, J.P. and S. Jobling, 1995, „Vitellogenesis As A Biomarker for Estrogenic Contamination of the Aquatic Environment“, Environmental Health Perspectives 103, pp. 173-178.
Clean surface, well or reconstituted water
Hutchinson, S. Maddix, and H. Trip (1999), „An in vivo testing system for endocrine disruptors in fish early life stages using induction of vitellogenin“, Environmental Toxicology and Chemistry 18, pp. 337-347.
Test chemical exposure duration
Pedersen, and P. Bjerregaard (2001a), „Development of an ELISA for vitellogenin in whole body homogenate of zebrafish (Danio rerio)“, Comparative Biochemistry and Physiology C-Toxicology & Pharmacology 130, pp. 119-131.
Hatching success, Survival Gross- morphology, VTG gonadal histology, Genetic sex, Sex ratio
Andersen, L., P. Bjerregaard, and B. Korsgaard ( 2003), „Vitellogenin induction and brain aromatase activity in adult male and female zebrafish exposed to endocrine disrupters“, Fish Physiology and Biochemistry 28, pp. 319-321.
Hatching success, Survival Gross- morphology, VTG gonadal histology, Sex ratio
Petersen (2003), „Gonad development and vitellogenin production in zebrafish (Danio rerio) exposed to ethinylestradiol and methyltestosterone“, Aquatic Toxicology 65, pp. 397-411.
Test acceptability criteria for pooled replicates of controls
Tyler (2002), „Utility of a juvenile fathead minnow screening assay for detecting (anti-)estrogenic substances“, Environmental Toxicology and Chemistry 21, pp. 319-326.
Hatching success > 80 %
Wang (2007), „Toxicity of the aromatase inhibitor letrozole to Japanese medaka (Oryzias latipes) eggs, larvae and breeding adults“, Comparative Biochemistry and Physiology C-Toxicology & Pharmacology 145, pp. 533-541.
Post hatch survival ≥ 70 %
LeBlanc, and C.V.Sullivan (1999), „Fathead minnow (Pimephales promelas) vitellogenin: purification, characterization and quantitative immunoassay for the detection of estrogenic compounds“, Comparative Biochemistry and Physiology C-Toxicology & Pharmacology 123, pp. 113-125.
growth (Fish wet weight, blotted dry) > 150 mg
Porcher (2002), „Development and validation of an enzyme-linked immunosorbent assay to measure vitellogenin in the zebrafish (Danio rerio)“, Environmental Toxicology and Chemistry 21, pp. 1699-1708.
growth (Fish wet weight, blotted dry) > 75 mg
Hatano, H. Mizukami, M. Yamashita, R. Sakakibara, and E. Tamiya (2002), „Development and application of a monoclonal antibody-based sandwich ELISA for quantification of Japanese medaka (Oryzias latipes) vitellogenin“, Comparative Biochemistry and Physiology C-Toxicology & Pharmacology 132, pp. 161-169.
growth (Fish wet weight, blotted dry) > 120 mg
Bengtsson (2004), „The juvenile three-spined stickleback (Gasterosteus aculeatus L.) as a model organism for endocrine disruption — II — kidney hypertrophy, vitellogenin and spiggin induction“, Aquatic Toxicology 70, pp. 311-326.
Length (standard length) > 20mm
Tatarazako, N., M. Koshio, H. Hori, M. Morita, and T. Iguchi (2004), „Validation of an enzyme-linked immunosorbent assay method for vitellogenin in the medaka“, Journal of Health Science 50, pp. 301-308.
Length (standard length) > 14 mm
Eidem, J.K., H. Kleivdal, K. Kroll, N. Denslow, R. van Aerle, C. Tyler, G. Panter, T. Hutchinson, and A. Goksoyr (2006), „Development and validation of a direct homologous quantitative sandwich ELISA for fathead minnow (Pimephales promelas) vitellogenin.
Length (standard length) > 20 mm
Aquatic Toxicology“, 78, pp. 202-206.
Sex ratio (% males or females) 30 %-70 %
Ankley (2006), „Evaluation of a commercial kit for measuring vitellogenin in the fathead minnow (Pimephales promelas)“, Ecotoxicology and Environmental Safety 64, pp. 101-105.
Chemical characteristics of an acceptable dilution water
Holbech, H., Petersen, G. I., Norman, A., Örn, S, Norrgren, L., and Bjerregaard, P (2001b), „Suitability of zebrafish as test organism for detection of endocrine disrupting chemicals.
CONCENTRATION
Comparison of vitellogenin in plasma and whole body homogenate from zebrafish (Danio rerio) and rainbow trout (Oncorhynchus mykiss)“, Nordic Council of Ministers, TemaNord 2001:597, pp. 48-51.
Particular matter
Porcher, and A. Goksoyr (2004), „Development of quantitative vitellogenin-ELISAs for fish test species used in endocrine disruptor screening“, Analytical and Bioanalytical Chemistry 378, pp. 621-633.
From test method C.14/Guidance on test concentrations
Orn, S., S. Yamani, and L. Norrgren (2006), „Comparison of vitellogenin induction, sex ratio, and gonad morphology between zebrafish and Japanese medaka after exposure to 17 alpha-ethinylestradiol and 17 beta-trenbolone“, Archives of Environmental Contamination and Toxicology 51, pp. 237-243.
Column (Number of concentrations between 100 and 10, or between 10 and 1) [1]
Scholz, S. and N. Kluver (2009), Effects of Endocrine Disrupters on Sexual, Gonadal Development in Fish, Sexual Development 3, pp. 136-151.
A series of three (or more) successive concentrations may be chosen from a column.
Fenske, M., G. Maack, C. Schafers, and H. Segner (2005), „An environmentally relevant concentration of estrogen induces arrest of male gonad development in zebrafish, Danio rerio“, Environmental Toxicology and Chemistry 24, pp. 1088-1098.
Mid-points between concentrations in column (x) are found in column (2x + 1).
Nagahama (2004), „Two DM domain genes, DMY and DMRT1, involved in testicular differentiation and development in the medaka, Oryzias latipes“, Developmental Dynamics 231, pp. 518-526.
The values listed can represent concentrations expressed as percentage per volume or weight (mg/l or μg/l).
Shinomiya, A., H. Otake, K. Togashi, S. Hamaguchi, and M. Sakaizumi (2004), „Field survey of sex-reversals in the medaka, Oryzias latipes: genotypic sexing of wild populations“, Zoological Science 21, pp. 613-619.
Values can be multiplied or divided by any power of 10 as appropriate.
Flick (2007), „Collapse of a fish population after exposure to a synthetic estrogen“, Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 104, pp. 8897-8901.
Column 1 might be used if there was considerable uncertainty on the toxicity level.
Kidd (2009), „Interspecies differences in biochemical, histopathological, and population responses in four wild fish species exposed to ethynylestradiol added to a whole lake“, Canadian Journal of Fisheries and Aquatic Sciences 66, pp. 1920-1935.
Guidance for homogenisation of head & tail from juvenile zebrafish, fathead minnow, three spined stickleback and Japanese medaka
Tyler (2006), „Development of chronic tests for endocrine active chemicals — Part 1.
The purpose of this section is to describe the procedures that occur prior to the quantification of the VTG concentration.
An extended fish early-life stage test for oestrogenic active chemicals in the fathead minnow (Pimephales promelas)“, Aquatic Toxicology 77, pp. 279-290.
Other procedures that result in comparable VTG quantification can be used.
Petersen, P. Jackson, K. Hylland, L. Norrgren, and P. Bjerregaard (2006), „Detection of endocrine disrupters: Evaluation of a Fish Sexual Development Test (FSDT)“, Comparative Biochemistry and Physiology C-Toxicology & Pharmacology 144, pp. 57-66.
It is an option to determine the VTG concentration in blood plasma or liver instead of head/tail homogenate.
Andersen, L., K. Kinnberg, H. Holbech, B. Korsgaard, and P. Bjerregaard (2004), „Evaluation of a 40 day assay for testing endocrine disrupters: Effects of an anti-estrogen and an aromatase inhibitor on sex ratio and vitellogenin concentrations in juvenile zebrafish (Danio rerio)“, Fish Physiology and Biochemistry 30, pp. 257-266.
The head and tail are cut of the fish in accordance with the test description.
Morthorst, J.E., H. Holbech, and P. Bjerregaard (2010), „Trenbolone causes irreversible masculinization of zebrafish at environmentally relevant concentrations“, Aquatic Toxicology 98, pp. 336-343.
All dissection instruments, and the cutting board should be rinsed and cleaned properly (e.g. with 96 % ethanol) between handling of each single fish to prevent “VTG pollution” from females or induced males to un-induced males.
Metcalf (2003), „Effects of the antiandrogens, vinclozolin and cyproterone acetate on gonadal development in the Japanese medaka (Oryzias latipes)“, Aquatic Toxicology 63, pp. 391-403.
When a homogenous mass is achieved an amount of 4-10 time the tissue weight of ice-cold homogenisation buffer is added (note the dilution).
Tyler (2004), „Successful detection of (anti-) androgenic and aromatase inhibitors in pre-spawning adult fathead minnows (Pimephales promelas) using easily measured endpoints of sexual development“, Aquatic Toxicology 70, pp. 11-21.
The samples are placed on ice until centrifugation at 4 °C at 50000 g for 30 min.
Petersen, and P. Bjerregaard (2007), „Effects of the fungicide prochloraz on the sexual development of zebrafish (Danio rerio)“, Comparative Biochemistry and Physiology C-Toxicology & Pharmacology 145, pp. 165-170.
Use a pipette to dispense portions of 20 to 50 μl (note the amount) supernatant into at least two tubes by dipping the tip of the pipette below the fat layer on the surface and carefully sucking up the supernatant without fat- or pellet fractions.
Глава В.14 от настоящото приложение, Изпитване за растеж на ювенилни (полово незрели) риби.
Place on ice during use
Глава В.5 от настоящото приложение, Пълна биоразградимост.
Homogenisation buffer:50 mM Tris-HCl pH 7,4;
Глава В.37 от настоящото приложение, 21-дневно изследване на риби:
1 % Protease inhibitor cocktail (Sigma):
Краткосрочен скрининг за естрогенна активност, андрогенна активност и потискане на ароматазата.
12 ml Tris-HCl pH 7,4 + 120 μl Protease inhibitor cocktail (or equivalent protease inhibitor cocktails).TRIS:
Schäfers, C., Teigeler, M., Wenzel, A., Maack, G., Fenske, M., Segner, H (2007), „Concentration- and time-dependent effects of the synthetic estrogen, 17 alpha-ethinylestradiol, on reproductive capabilities of the zebrafish, Danio rerio“ Journal of Toxicology and Environmental Health-Part A, 70, 9-10 pp 768-779.
TRIS-ULTRA PURE (ICN)Protease inhibitor cocktail:
Съкращения и определения
From Sigma (for mammalian tissue) Product number P 8340.
Апикална крайна точка
Guidance for quantification of head & tail homogenate vitellogenin in zebrafish (Danio rerio) (modified from Holbech et al., 2001). other procedures using homologous antibodies and standards can be used
Причиняване на въздействие на равнище популация
Microtiter plates (certified Maxisorp F96, Nunc, Roskilde Denmark) previously coated with 5 μg/ml anti zebrafish lipovitellin-IgG are thawed and washed 3 times with washing buffer (*).
Стойност на насищане при равновесие с атмосферния въздух
Purified zebrafish vitellogenin standard [1] is serially diluted to 0,2, 0,5, 1, 2, 5, 10 and 20 ng/ml in dilution buffer (**) and samples are diluted at least 200 times (to prevent matrix effect) in dilution buffer and applied to the plates.
Биомаркер
An assay control is applied in duplicate.
Причиняване на въздействие на равнище индивид
150 μl are applied to each well.
Вещество или смес.
Standards are applied in duplicate and samples in triplicate.
Дни след излюпването
Incubate over night at 4 °C on a shaker.
свързан с Y ген от домен DM, необходим за развитие на мъжки индивиди при оризията
The plates are washed 5 times with washing buffer (*)
Ензимно-свързан имуносорбентен анализ
HRP coupled to a dextran chain (e.g. AMDEX A/S, Denmark) and conjugated antibodies are diluted in washing buffer;
Тегло на риба
Actual dilution differs by batch and age.
Мокро тегло на риба (след попиване)
150 μl are applied to each well and the plates are incubated for 1 hour at room temperature on a shaker.
ИРПР
The plates are washed 5 times with washing buffer (*) and the bottom of the plates is carefully cleaned with ethanol.
Изпитване за развитие на пола при рибите
150 μl TMB plus (***) are applied to each well.
хипоталамус-хипофиза-гонадна ос
Protect the plate against light with tinfoil, and watch the colour development on a shaker.
риба с междинен пол
When the standard curve is fully developed the enzyme activity is stopped by adding 150 μl 0,2 M H2SO4 to each well.
Риба с наличие на повече от един овоцит в тестисите за 6 анализирани среза, или сперматогенни клетки в яйчниците (да/не)
The absorbance is measured at 450 nm (e.g. on a Molecular Devices Thermomax plate reader).
Мокро тегло на рибите на обем вода
Data are analysed on the associated software (e.g. Softmax).
Начин на действие
Washing buffer:
Полимеразна верижна реакция с използване на обратна транскриптаза
PBS-stock (****)
риба с недиференциран пол
Adjust pH to 7,3 and fill to 5 l with millipore H2O.
Риба с гонади, не проявяващи видими зародишни клетки.
Store at 4 °C.
Вителогенин
Dilution buffer:
Опитни условия за ИРПР (сладководни видове)
PBS-Stock (****)
Японска оризия (Oryzias latipes)
Adjust pH to 7,3 and fill to 1 l with millipore H2O.
Зеброво данио (Danio rerio)
TMB plus is a “ready-to-use” substrate produced by KemEnTec (Denmark).
Триигла бодливка (Gasterostreus aculeatus)
It is sensitive to light.
Проточно или полустатично
PBS stock
Луминесцентни крушки (широк спектър)
HPO4 · 2H2O
Светлинен интензитет
Adjust pH to 6,8 and fill with millipore H2O to 2 l.
10-20 μE/m2/s, 540-1080 lux, или 50-100 ft-c (заобикалящи равнища на осветеност в лабораторията)
Store at room temperature.
12-16 h светлина, 8-12 h тъмнина
Battelle AP4.6.04 (1,18 mg/ml (AAA)), purified according to:
Минимални размери на камерата
Guidance for the preparation of tissue sections for sex determination and staging of gonads
Отделните камери следва да съдържат обем вода минимум 7 l
The purpose of this section is to describe the procedures that occur prior to the evaluation of histological sections.
Възраст на изпитваните организми в началото на експозицията
Other procedures that result in similar sex determination and gonadal staging can be used.
Новооплодени хайверни зърна (стадий ранна бластула)
With a few exceptions, these procedures are similar for Japanese medaka (JMD) and zebrafish (ZF).
Новооплодени хайверни зърна
Euthanasia, Necropsy, and Tissue Fixation
Брой хайверни зърна на третиране
Objectives:
Минимум 120
Provide for the humane sacrifice of fish.
Минимум 3 (плюс подходящи контроли)
Obtain necessary body weights and measurements.
Брой повторения на третиране
Evaluate secondary sex characteristics.
Минимум 4 (освен при разпределяне към контролите с използване на корен квадратен)
Dissect tissues for VTG analysis.
Живи Artemia, замразени възрастни морски скариди, храна във вид на люспи и т.н.
Fixation of the gonads.
Препоръчително е храната да се дава два пъти дневно
Procedures:
Специална пържена храна, живи Artemia, замразени възрастни морски скариди, храна във вид на люспи и т.н.
Fish should be sacrificed immediately prior to necropsy.
Препоръчително е храната да се дава два пъти дневно
Therefore, unless multiple prosectors are available, multiple fish should not be sacrificed simultaneously.
Няма, освен в случаите, когато концентрацията на разтворения кислород падне под 60 % насищане
Using the small dip net, a fish is removed from the experimental chamber and transported to the necropsy area in the transport container.
Няма, освен в случаите, когато концентрацията на разтворения кислород падне под 70 % насищане
The fish is placed in the euthanasia solution.
Чиста вода от повърхностни води, от кладенец или възстановена
The fish is removed from the solution when there is cessation of respiration and the fish is unresponsive to external stimuli.
Продължителност на експозицията на изпитвания химикал
The fish is wet weighed.
Процент на излюпване, преживяване, макроскопска морфология, VTG, хистология на гонадите, генетичен пол, съотношение между половете
For preparation of tissues for VTG analysis, the fish can be placed on a corkboard on the stage of a dissecting microscope.
Процент на излюпване, преживяване, макроскопска морфология, VTG, хистология на гонадите, съотношение между половете
For zebrafish the head is cut right behind the pectoral fin and tail is cut right behind the dorsal fin.
Критерии за приемливост на изпитването за обединени повторения на контроли
For Japanese medaka the abdomen is opened via a carefully made incision that extends along the ventral midline from the pectoral girdle to a point just cranial to the anus.
Процент на излюпване > 80 %
Using the small forceps and small scissors, the liver is carefully removed.
Преживяване след излюпването ≥ 70 %
Specimen for VTG analysis are placed in eppendorf tubes and immediately frozen in liquid nitrogen.
растеж (мокро тегло на риба, след попиване) > 150 mg
The carcass including the gonads is placed into a pre-labelled plastic tissue cassette, which is transferred into Davidson's or Bouin's fixative.
растеж (мокро тегло на риба, след попиване) > 75 mg
The volume of fixative should be at least 10 times the approximated volume of the tissues.
растеж (мокро тегло на риба, след попиване) > 120 mg
The fixative container is gently agitated for five seconds to dislodge air bubbles from the cassette.
Дължина (стандартна дължина) > 20mm
All tissues remain in Davidson's fixative overnight, followed by transfer to individual containers of 10 % neutral buffered formalin the next day.
Дължина (стандартна дължина) > 14 mm
Containers with cassettes are gently agitated for 5 seconds to ensure adequate penetration of formalin into cassettes.
Дължина (стандартна дължина) > 20 mm
Tissues remain in Bouins fixative for 24 h, followed by transfer to 70 % ethanol.
Съотношение между половете (% мъжки или женски) 30 %-70 %
Tissue Processing
Химични характеристики на приемлива вода за разреждане
Dehydrate tissue for adequate penetration of paraffin.