natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Съставките на седимента следва да се проверят за липса на замърсяване с химикал (напр. тежки метали, органохлорни съединения, органофосфорни съединения и т.н.).
Normally, the larvae begin to hatch a couple of days after the eggs are laid (2 to 3 days for C. riparius at 20 °C and 1 to 4 days for C. dilutus at 23 °C and C. yoshimatsui at 25 °C) and larval growth occurs in four instars, each of 4-8 days duration.
Пример за приготвянето на формулирания седимент е даден в допълнение 3.
First instar larvae (maximum 48 h post hatching) should be used in the test.
Допустимо е също и смесването на сухи съставки, ако се докаже, че след добавянето на надседиментната вода не настъпва разделяне на съставките (напр. изплуване на торфените частици), и че торфът или седиментът е аклиматизиран в необходимата степен.
The instar stage of larvae can potentially be checked using head capsule width (7).
Всяка вода, която отговаря на изброените в допълнение 2 и 4 химични характеристики за вода, приемлива за използване за разреждане, е подходяща за използване като вода за изпитването.
Twenty first instar larvae for the 1st generation are allocated randomly to each test vessel containing the sediment-water system, using a blunt pipette.
Всяка подходяща вода, природна вода (от повърхностни или подпочвени води), възстановена вода (вж. допълнение 2) или дехлорирана чешмяна вода може да се използва за отглеждане и за изпитване, ако хирономидите преживяват в нея за времето на отглеждане и изпитване, без да показват признаци на стрес.
Aeration of the water is stopped whilst adding larvae to test vessels and should remain so for 24 hours following addition of larvae (see paragraph 32).
В началото на изпитването рН на водата за изпитване трябва да бъде между 6 и 9, а общата ѝ твърдост — не по-висока от 400 mg/l, изразена като CaCO3.
According to the test design used (see paragraphs 19 and 20), the number of larvae used per concentration is at least 120 (6 replicates per concentration) for the ECX approach and 160 for the NOEC approach (8 replicates per concentration).
Ако обаче се предполага взаимодействие между отговорните за твърдостта йони и изпитвания химикал, следва да се използва вода с по-ниска твърдост (и затова в този случай не трябва да се използва среда „Elendt M4“).
In the spiked sediment design, exposure starts with the addition of the larvae.
По време на цялото изпитване трябва да се използва един и същи тип вода.
Spiking the overlying water
Качествените параметри на водата, изброени в допълнение 4, следва да се измерват поне два пъти годишно или всеки път когато има подозрение, че тези характеристики може да са се променили значително.
Twenty-four hours after adding the first instar larvae for the 1st generation, the test chemical is spiked into the overlying water column, and slight aeration is again supplied (for possible amendments of the test design, see paragraph 7).
Изходни разтвори — вода с добавка
Small volumes of the test chemical stock solutions are applied below the surface of the water using a pipette.
а.
The overlying water should then be mixed with care not to disturb the sediment.
Концентрациите, при които се прави изпитването, се изчисляват въз основа на концентрациите в обема на водата, т.е., водата над седимента.
In the spiked water design, exposure starts with the spiking of the water (i.e. one day after addition of the larvae).
Разтворите с избраните концентрации, които ще се ползват в изпитването, обикновено се приготвят чрез разреждане на изходен разтвор.
Collecting emerged adults
Изходните разтвори се приготвят за предпочитане чрез разтваряне на изпитвания химикал във водата за изпитване.
Emerged midges of the 1st generation are collected at least once, but preferably twice a day (see point 36) from the test vessels using an aspirator, exhauster or similar device (see Appendix 5).
В някои случаи може да се наложи да се използват разтворители или диспергиращи средства, с цел да се получи изходен разтвор с подходяща концентрация.
Special care should be taken not to damage the adults.
Като подходящи разтворители могат да се посочат: ацетон, етанол, метанол, моноетилов етер на етиленгликола, диметилов етер на етиленгликола, диметилформамид и триетиленгликол.
The collected midges from four test vessels within one treatment are released into a breeding cage to which they had been previously assigned.
Като диспергиращи средства могат да се използват Cremophor RH40, Tween 80, метилцелулоза 0,01 % и НСО-40.
At the day of first (male) emergence, crystallising dishes are spiked by pipetting a small volume of the test chemical stock solution below the water surface (spiked water design).
Концентрацията на средството за повишаване на разтворимостта в окончателната среда за изпитване следва да е минимална (т.е. ≤ 0,1 ml/l и трябва да бъде една и съща във всички третирания.
The concentration of test chemical in the crystallising dish is nominally the same as in the treatment vessels which are assigned to that specific breeding cage.
Когато се използва средство за повишаване на разтворимостта, то не трябва да оказва значимо въздействие върху преживяването, което се вижда от контрола на разтворител в сравнение с отрицателна контрола (вода).
For the spiked sediment design, the crystallising dishes are prepared at around day 11 after the start of the exposure (i.e. addition of the 1st generation larvae) so that they can equilibrate for about 48 hours before the first egg ropes are produced.
Въпреки това, следва да се положат всички усилия, за да се избегне употребата на такива материали.
Egg ropes are collected from the crystallising dish in the breeding cage using tweezers or a blunt pipette.
Изходни разтвори — седименти с добавка
Each egg rope is placed into a vessel containing culture medium from the crystallising dish it was collected from (e.g. a well of a 12-well micro-plate together with at least 2,5 ml of medium).
б.
The vessels with the egg ropes are covered with a lid to prevent significant evaporation.
Обикновено седиментите с добавка с избрана концентрация се приготвят чрез добавяне на разтвор на изпитвания химикал директно към седимента.
Egg ropes are kept for observation for at least six days after they have been produced so that they can be classified as fertile or infertile.
Изходен разтвор на изпитвания химикал, разтворен в дейонизирана вода, се смесва с формулирания седимент с помощта на валцова мелница, смесител за фураж, или смесване с ръка.
For starting the 2nd generation, at least three but preferably six fertile egg ropes are selected from each breeding cage and together with some food allowed to hatch.
Ако е малко разтворим във вода, изпитваният химикал може да бъде разтворено във възможно най-малък обем подходящ органичен разтворител (например хексан, ацетон или хлороформ).
These egg ropes should have been produced at the peak of oviposition, which normally occurs around test day 19 in the controls.
След това този разтвор се смесва с 10 g фин кварцов пясък за всеки съд за изпитване.
Ideally, the 2nd generation of all treatments is initiated on the same day, but due to chemical related effects on larval development, this may not always be possible.
Оставя се разтворителят да се изпари и същият следва да бъде напълно елиминиран от пясъка;
In such a case, the higher concentrations may be initiated later than the lower treatments and the (solvent) control.
тогава пясъкът се смесва с необходимото количество седимент.
a.
За разтваряне, диспергиране или емулгиране на изпитвания химикал могат да се използват само средства, които лесно се изпаряват.
In the spiked water design, the sediment-water system for the 2nd generation is prepared by spiking the test chemical into the overlying water column ca.
Трябва да се помни, че пясъкът, добавен заедно с изпитвания химикал, и пясъчната смес трябва да се вземат предвид при приготвянето на седимента (т.е., седиментът трябва следователно да се приготвя с по-малко количество пясък).
1 hour before adding the first instar larvae to the test vessels.
Ако е необходимо, може да се анализират подпроби, за да се определи степента на хомогенност.
Small volumes of the test chemical solutions are applied below the surface of the water using a pipette.
Планирането на изпитването е свързано с избор на броя на стойностите на концентрацията на изпитване и интервалите между тези стойности, броя на съдовете за всяка концентрация, броя на ларвите във всеки съд, броя на блюдата кристализатори и клетките за размножение.
After spiking, slight aeration is supplied.
По-долу са описани планове за ECx, за NOEC и за провеждане на гранично изпитване.
b.
Планиране на регресионния анализ
In the spiked sediment design, the exposure vessels containing the sediment-water system for the 2nd generation are prepared in the same way as for the 1st generation.
Ефективната концентрация (ECx) и диапазонът от концентрации, над който въздействието на изпитвания химикал представлява интерес, следва да бъдат обхванати от изпитването, така че крайната точка да не се екстраполира извън обхвата на генерираните данни.
Twenty first instar larvae (maximum 48 h post hatching) of the 2nd generation are allocated randomly to each test vessel containing the spiked sediment-water system, using a blunt pipette.
Следва да се избягват екстраполации за стойности, много по-ниски от най-ниската концентрация или по-високи от най-високата концентрация.
Aeration of the water should be stopped while adding the first instar larvae to the test vessels and remain so for another 24 hours after addition of the larvae.
Предварително изпитване за определяне на обхвата в съответствие с методи за изпитване В.27 или В.28 може да е полезно при избора на подходящ диапазон от концентрации на изпитването.
According to the test design used (see paragraphs 19 and 20), the number of larvae used per concentration is at least 120 (6 replicates per concentration) for the ECX approach and 160 for the NOEC approach (8 replicates per concentration).
За подход за ECx следва да се извърши изпитване при най-малко пет концентрации и осем повторения за всяка концентрация.
It is necessary to feed the larvae in the test vessels, preferably daily or at least three times per week.
За всяка концентрация следва да се използват две клетки за размножаване (А и Б).
Fish-food (a suspension in water or finely ground food, e.g. Tetra-Min or Tetra-Phyll; see details in Appendix 2) of 0,25 - 0,5 mg (0,35 - 0,5 mg for C. yoshimatsui) per larvae per day is an adequate amount of food for young larvae during the first 10 days of their development.
Осемте повторения се разделят на две групи с по четири повторения за всяка клетка за размножаване.
Slightly more food may be necessary for older larvae:
Това сливане на повторения е необходимо поради броя на индивидите, необходим в клетката, за надеждна оценка на размножаването.
0,5 - 1,0 mg per larvae per day should be sufficient for the rest of the test.
Независимо от това, за 2-то поколение отново има осем повторения, които започват от експонираните популации в клетките за размножаване.
The food ration should be reduced in all treatments and control if fungal growth is seen or if mortality is observed in controls.
Кратността, с чиято помощ се получава следващата концентрация, не бива да бъде по-голяма от две (може да се направи изключение в случаите, в които графиката на зависимостта доза-отклик има твърде слаб наклон).
If fungal development cannot be stopped the test should be repeated.
Броят на повторенията за всяко третиране може да се намали до шест (три повторения за всяка клетка за размножение), ако се увеличи броят на изпитваните концентрации, които предизвикват различни отклици.
The toxicological relevance of exposure via ingestion is generally higher in chemicals with a high affinity for organic carbon or chemicals covalently binding to the sediment.
Увеличаването на броя на повторенията или намаляването на кратността на интервалите между изпитваните концентрации обикновено води до стесняване на доверителния интервал около ECX.
Hence, when testing chemicals with such properties, the amount of food necessary to ensure survival and natural growth of the larvae may be added to the formulated sediment before the stabilisation period, depending on the regulatory demand.
Планиране на изпитване за оценка на NOEC
To prevent deterioration of the water quality, plant material should be used instead of fish food, e.g. addition of 0,5 % (dry weight) finely ground leaves of stinging nettle (Urtica dioica), mulberry (Morus alba), white clover (Trifolium repens), spinach (Spinacia oleracea) or other plant material (Cerophyl or α-cellulose).
За подход за NOEC следва да се извърши изпитване при пет концентрации и най-малко осем повторения (4 за всяка клетка за размножение, А и Б), а кратността между стойностите на концентрациите не бива да е по-голяма от две.
Addition of the complete ration of an organic food source to the sediment before spiking is not trivial with respect to water quality and biological performance (21), nor a standardised method, but recent studies provide indications that this method works (19) (26).
Броят на отделните повторения следва да е достатъчен за осигуряване на достатъчно статистическа мощност за откриване на разлика от 20 % по отношение на контролата при равнище на значимост от 5 % (α = 0,05).
Adult midges in the breeding cage need no feeding normally, but fecundity and fertility are enhanced when a cotton wool pad soaked in a saturated sucrose solution is offered as a food source for emerged adults (34).
По отношение на скоростта на развитие, плодовитостта и оплождането обикновено е подходящ дисперсионен анализ (ANOVA), последван тест на Дънет или тест на Уйлямс (22-25).
Gentle aeration of the overlying water in the test vessels is supplied 24 hours after addition of the first instar larvae of both generations and is continued throughout the test (care should be taken that the dissolved oxygen concentration does not fall below 60 % of ASV).
За съотношението на имагиниране и съотношението между половете може да са подходящи тестът на Кокрън-Армитидж, точният тест на Фишер (с корекция на Бонферони) или тестът на Мантел-Хенцал.
Aeration is provided through a glass Pasteur pipette of which the outlet is fixed 2-3 cm above the sediment layer giving a few bubbles/sec.
Може да се предприеме гранично изпитване (с една концентрация за изпитване и контрола(контроли)), ако не е наблюдавано въздействие в предварителното изпитване по избор за определяне на обхвата до максимална концентрация.
When testing volatile chemicals, consideration should be given not to aerate the sediment-water system, while at the same time the validity criterion of minimal 60 % ASV (paragraph 10) should be fulfilled.
Предназначението на граничното изпитване е да се покаже, че всякакво токсично въздействие на изпитвания химикал се открива на равнища, които са по-високи от изпитваната пределна концентрация.
Further guidance is provided in (16).
За вода се предлагат 100 mg/l, а за седимент — 1000 mg/kg (сухо тегло).
The test with C. riparius is conducted at a constant temperature of 20 °C (± 2 °C).
Обикновено са необходими най-малко осем повторения както на третираните проби, така и на контролите.
For C. dilutus and C. yoshimatsui, recommended temperatures are 23 °C and 25 °C (± 2 °C), respectively.
Следва да се докаже достатъчна статистическа мощност за откриване на разлика от 20 % по отношение на контролата при равнище на значимост от 5 % (α = 0,05).
A 16 hours photoperiod is used and the light intensity should be 500 to 1000 lux.
По отношение на метричния отклик (например скорост на развитие), t-тестът е подходящ статистически метод, ако данните отговарят на изискванията на посочения тест (нормалност, хомогенни дисперсии).
For the breeding cages an additional one hour dawn and dusk phase may be included.
Ако посочените изисквания не са изпълнени, може да се използва t-тест за нееднаква дисперсия или непараметричен тест, напр. тест на Уилкоксън-Ман-Уитни.
Exposure duration
По отношение на съотношението на имагиниране е подходящ точният тест на Фишер.
Spiked water design:
Приготвяне на системата вода-седимент (вода с добавка)
The exposure period of the 1st generation starts when the test chemical is spiked into the overlying water of the test vessels (which is one day after insertion of the larvae — for possible amendments of the exposure design, see paragraph 7).
а.
Exposure of the 2nd larval generation starts immediately, since they are inserted into a sediment-water system that has been already spiked.
Подходящи количества формулиран седимент (вж. точки 13—14 и допълнение 3) се слагат във всеки съдове за изпитване и блюдо кристализатор, така че да се образува слой от най-малко 1,5 cm (за блюдото кристализатор може да е малко по-малко), но не повече от 3 cm.
The maximum exposure duration for the 1st generation is 27 days and for the 2nd generation 28 days (the 1st generation larvae spend one day in the vessels without exposure) for C. riparius and C. yoshimatsui.
Добавя се вода (вж. точка 15) така, че съотношението между дебелината на слоя седимент и тази на водата да не надвишава 1:4.
Considering the overlap, the complete test duration is approximately 44 days.
След подготовката на съдовете за изпитване системата седимент-вода трябва да се остави, при леко аериране, за около седем дни, преди да бъдат добавени ларвите в първи ларвен стадий от 1-вото или от 2-то поколение (вж. точка 14 и допълнение 3).
For C. dilutus, maximum exposure durations are 64 and 65 days, for the 1st and 2nd generation, respectively.
Системата седимент-вода в блюдата кристализатори не се аерира по време на изпитването, тъй като не е необходимо тя да осигурява преживяване на ларви (преди излюпването яйчните маси вече са събрани).
The total duration is approximately 100 days.
За да се избегне разделяне на съставките на седимента и повторно суспендиране на фините частици по време на добавянето на водата за изпитването във водата над седимента, седиментът може да се покрие с пластмасов диск, докато се налива водата.
Spiked sediment design:
Дискът се отстранява незабавно след това.
exposure starts with the addition of the larvae and is maximum 28 days for both generations for C. riparius and C. yoshimatsui and maximum 65 days for both generations for C. dilutus.
Могат да бъдат подходящи и други устройства.
Emergence
Приготвяне на системата вода-седимент (седимент с добавка)
Development time and the total number of fully emerged and alive male and female midges are determined for both generations.
б.
Males are easily identified by their plumose antennae and thin body posture.
Седиментите с добавка, приготвени в съответствие с точка 16б, се поставят в съдовете и блюдото кристализатор и се добавя вода над седимента до получаване на обемно съотношение седимент-вода от 1:4.
Test vessels of both generations should be observed at least three times per week to make visual assessment of any abnormal behaviour of the larvae (e.g. leaving sediment, unusual swimming), compared to the control.
Дълбочината на слоя седимент трябва да бъде в интервала от 1,5 до 3 cm (тя може да бъде малко по-малка за блюдото кристализатор).
During the period of emergence, which starts about 12 days after insertion of the larvae for C. riparius and C. yoshimatsui (after 20 days for C. dilutus), emerged midges are counted and sexed at least once, but preferably twice a day (early morning and late afternoon).
За да се избегне разделяне на съставките на седимента и повторно суспендиране на фините частици по време на добавянето на водата за изпитването във водата над седимента, седиментът може да се покрие с пластмасов диск, докато се налива водата, веднага след което дискът трябва да се извади.
After identification, the midges of the 1st generation are carefully removed from the vessels and transferred to a breeding cage.
След като е приготвен седиментът с добавка, заедно с водата над седимента, желателно е да се даде възможност изпитваният химикал от седимента да се разпредели в течната фаза (4)(5)(7)(18).
Midges of the 2nd generation are removed and killed after identification.
Подходящото време за достигане на равновесие зависи от седимента и химикала и може да варира от няколко часа до дни, в редки случаи дори до пет седмици.
Any egg ropes deposited in the test vessels of the 1st generation should be collected individually and transferred with at least 2,5 ml native water to 12-well microplates (or other suitable vessels) which are covered with a lid to prevent significant evaporation.
Тъй като това би довело до разграждането на много химикали, не се чака достигане на равновесие, а се препоръчва период за уравновесяване, равен на 48 часа.
The number of dead larvae and visible pupae that have failed to emerge should also be recorded.
Въпреки това, когато е известно, че времето на полуразграждане на химикала в седимента е дълго (вж. точка 8), времето за достигане на равновесие може да бъде удължено.
Examples of a breeding cage, test vessel and exhauster are provided in Appendix 5.
В края на този допълнителен период за достигане на равновесие следва да се измери концентрацията на изпитвания химикал във водата над седимента, във водата между частиците на седимента и в седимента, най-малкото при най-високата и при по-ниска концентрация (вж. точка 38).
Reproduction
Посочените аналитични определяния на изпитвания химикал дават възможност за изчисляване на масовия баланс и изразяване на резултати въз основа на измерените концентрации.
Effects on reproduction are assessed via the number of egg ropes produced by the 1st generation of midges and the fertility of these egg ropes.
Съдовете за изпитването следва да бъдат покрити (напр. със стъклени пластинки).
Once per day the egg ropes are collected from the crystallising dish that is placed in each breeding container.
Ако е необходимо, по време на изследването съдовете могат да се допълват до първоначалния обем, за да се компенсира изпаряването.
The egg ropes should be collected and transferred with at least 2,5 ml native water to a 12-wells microplate (one egg rope in each well) or other suitable vessels, which are covered with a lid to prevent significant evaporation.
Това следва да се извърши, като се използва дестилирана или дейонизирана вода, за да се избегне всякакво образуване на соли.
The following characteristics are documented for each egg rope:
Блюдата кристализатори в клетките за размножаване не се покриват и при тях може, но не е задължително, да се извършва компенсация за загубата на вода по време на периода на изпитването, тъй като яйчните маси са в контакт с водата само за около един ден и блюдата за кристализиране се използват само в кратък етап от изпитването.
day of production, size (normal, i.e. 1,0 ± 0,3 cm or small; typically ≤ 0,5 cm), and structure (normal = banana-form with spiralled egg string or abnormal, e.g. unspiralled egg string) and fertility (fertile or infertile).
Добавяне на изпитваните организми
Over the course of six days after it was produced the fertility of an egg rope is assessed.
Четири до пет дни преди да бъдат добавени ларвите в първи ларвен стадий от 1-вото поколение, яйчните маси следва да се извадят от културата и да се сложат в малки съдове в среда за отглеждане.
An egg rope is considered fertile when at least one third of the eggs hatch.
Може да се използва зряла среда от онази, в която е отглеждана изходната култура, или прясно приготвена среда.
The total number of females added to the breeding cage is used to calculate the number of egg ropes per female and the number of fertile egg ropes per female.
Във всеки случай към средата за отглеждане се добавя малко количество храна, напр. няколко капки филтрат от суспензия от фино смляна храна за риби (вж. допълнение 2).
If required, the number of eggs in an egg rope can be estimated non-destructively by using the ring count method (detailed in 32 and 33).
Следва да се използват само прясно снесени яйчни маси.
Analytical measurements
Като правило, ларвите започват да се излюпват няколко дни след снасянето на яйцата (2 до 3 дни за Chironomus riparius при 20 °C, 1 до 4 дни за C. dilutus при 23 °C и C. yoshimatsui при 25 °C), а растежът на ларвите преминава през четири стадия, всеки от които трае от 4 до 8 дни.
Concentration of the test chemical