natgillin/translations-raw huggingface dataset:
EPA на САЩ (2000 (7)) препоръчва на степен на зареждане не по-голяма от 1:
At the end of the test, each replicate is examined (additional vessels designated for chemical analyses may be excluded from examination).
50 (суха биомаса: TOC).
An appropriate method should be used to recover all worms from the test vessel.
За формулирания седимент, описан в точка 22, това съответства на около 43 g седимент (сухо тегло) на 10 червея при съдържание на ТОС от 2,0 % от сухия седимент.
Care should be taken that all worms are recovered uninjured.
В случаите, в които се използват повече от 10 червея на съд, количеството на седимента и на водата над седимента следва да бъде съответно коригирано.
One possible method is sieving the worms from the sediment.
Всички червеи, използвани в дадено изпитване, следва да идват от един и същ източник, и да бъдат индивиди със сходен физиологичен статус (вж. допълнение 5).
A stainless steel mesh of appropriate mesh size can be used.
Следва да бъдат избрани червеи със сходен размер (вж. точка 39).
Most of the overlying water is carefully decanted, and the remaining sediment and water is agitated to result in a slurry, which can be passed through the sieve.
Препоръчва се преди изпитването да се претегли подпроба от партидата или запаса от червеи, за да се оцени средното тегло.
Using a 500 μm mesh, most of the sediment particles will pass the sieve very quickly;
Червеите, които трябва да се използват при дадено изпитване, се отстраняват от културата (вж. допълнение 5 за повече подробности).
however, sieving should be done quickly, in order to prevent the worms from crawling into or through the mesh.
Големите (полово зрели) животни, които не показват признаци на неотдавнашно разкъсване, се прехвърлят в стъклени блюда (напр. блюда на Петри), съдържащи чиста вода.
Using a 250 μm mesh will prevent the worms from crawling into or through the mesh;
Впоследствие те се синхронизират, както е описано в допълнение 5.
however, care should be taken that as little as possible of the sediment particles is retained on the mesh.
След регенериране за период от 10 до 14 дни за изпитването следва да се използват интактните цели червеи със сходен размер, които активно плават или пълзят след лек механичен стимул.
The sieved slurry of each replicate vessel may be passed through the sieve a second time in order to ensure that all worms are recovered.
Ако условията на изпитването се различават от условията на отглеждането (например температура, режим на осветление и вода над седимента), фаза от напр.
An alternative method could be warming of the sediment by placing the test vessels in a water bath at 50 – 60 °C;
24 h при същите като изпитването температура, режим на осветление и вода над седимента следва да е достатъчна за адаптирането на червеите към условията на изпитване.
the worms will leave the sediment and can be collected from the sediment surface by use of a fire-polished wide-mouth pipette.
Адаптираните олигохети следва да се разпределят на случаен принцип в съдовете за изпитване.
Another alternative method could be to produce a sediment slurry and pour this slurry onto a shallow pan of suitable size.
Тъй като храна се добавя към седимента преди (или по време на) прилагането на изпитвания химикал, червеите не се захранват допълнително по време на изпитването.
From the shallow layer of slurry the worms can be picked up by a steel needle or watchmakers' tweezers (to be used rather like a fork than forceps to avoid injuring the worms) and transferred to clean water.
Светлина и температура
After separating the worms from the sediment slurry, these are rinsed in test medium and counted.
Продължителността на излагане на светлина в културата и при изпитването обикновено е 16 часа (3), (7).
Independently of the method used, laboratories should demonstrate that their personnel are able to recover an average of at least 90 % of the organisms from whole sediment.
Интензитетът на светлината трябва да бъде поддържан нисък (напр.
For example, a certain number of test organisms could be added to control sediment or test sediments, and recovery could be determined after 1 h (7).
100-500 lx), за да се симулират естествените условия на повърхността на седимента, и се измерва поне веднъж по време на периода на експозиция.
The total number of living and dead individuals per replicate should be recorded and assessed.
Температурата трябва да бъде 20 °C ± 2 °C по време на цялото изпитване.
The following groups of worms are considered to be dead:
Разликата в температурите между съдовете за изпитване, измерена на зададена дата, трябва да не е по-висока от ± 1 °C.
there is no reaction after a gentle mechanical stimulus
Съдовете за изпитване следва да се поставят в инкубатора за изпитване или в зоната за изпитване на случаен принцип, например с цел да се сведе до минимум изместването на стойностите на размножаването, дължащо се на местоположението на съда.
there are signs of decomposition (in combination with “a”)
Аериране
number of missing worms
Водата над седимента в съдовете за изпитване следва леко да се аерира (напр.
Additionally, the living worms can be assigned to one of three groups:
2-4 мехурчета в секунда) с помощта на пипета „Пастьор“, разположена на приблизително 2 cm над повърхността на седимента, за да се ограничи максимално нарушаването на седимента.
large complete worms (adults) without regenerated body regions
Следва да се вземат мерки концентрацията на разтворения кислород да не се понижава под 30 % от стойността на насищането с разтворен въздух (ASV).
complete worms with regenerated, lighter-coloured body regions (i.e., with new posterior part, with new anterior part, or with both new posterior and anterior parts)
Снабдяването с въздух следва да се контролира и, ако е необходимо, да се коригира поне веднъж на ден в работните дни.
incomplete worms (i.e., recently fragmented worms with non-regenerated body regions)
Измерване на качеството на водата
These additional observations are not mandatory, but can be used for additional interpretation of the biological results (for example, a high number of worms assigned to group c may indicate a delay of reproduction or regeneration in a given treatment).
Във водата над седимента трябва да се измерват следните параметри за качество на водата:
Additionally, if any differences in appearance (e.g. lesions of the integument, oedematous body sections) are observed between treated and control worms, these should be recorded.
поне в един съд за изпитване на всяко равнище на концентрация и в един съд за изпитване от контролите веднъж седмично и в началото и в края на периода на експозиция;
Immediately after counting/assessment, the living worms found in each replicate are transferred to dried, pre-weighed and labelled weigh pans (one per replicate), and killed using a drop of ethanol per weigh pan.
Ако е възможно, температурата в заобикалящата среда (въздух от околната среда или водна баня) може да се записва допълнително, напр. на всеки час;
The weigh pans are placed in a drying oven at 100 ± 5 °C to dry overnight, after which they are weighed after cooling in a desiccator, and worm dry weight is determined (preferably in g, at least 4 post-decimal digits).
Съдържание на разтворения кислород:
In addition to the total dry weight, the ash-free dry weight may be determined as described in (49) in order to account for inorganic components originating from ingested sediment present in the alimentary tract of the worms.
изразено като mg/l и стойността на ASV (%);
The biomass is determined as total biomass per replicate including adult and young worms.
Снабдяване с въздух:
Dead worms should not be taken into account for the determination of biomass per replicate.
следва да бъде контролирано поне веднъж на ден в работните дни и, ако е необходимо, коригирано;
Verification of test chemical concentrations
Обща твърдост на водата:
Sampling
най-малко в едно повторение на контролите и в един съд за изпитване при най-високата концентрация в началото и в края на периода на експозиция;
Samples for chemical analysis of the test chemical should be taken at least of the highest concentration and a lower one, at least at the end of the equilibration phase (before adding the test organisms), and at the end of the test.
изразена като mg/l CaCO3;
At least the bulk sediment and the overlying water should be sampled for analysis.
Общо съдържание на амоняк:
At least two samples should be taken per matrix and treatment on each sampling date.
най-малко в едно повторение на контролите и в един съд за изпитване за всяка концентрация в началото на периода на експозиция, и впоследствие 3 пъти в седмицата;
One of the duplicate samples may be stored as a reserve (to be analysed e.g. in the event that initial analysis falls outside the ± 20 % range from the nominal concentration).
изразено като mg/l NH4+ или NH3 или общо азот от амоняк.
In case of specific chemical properties, e.g. if rapid degradation of the test chemical is expected, the analytical schedule may be refined (e.g. more frequent sampling, analysis of more concentration levels) on the basis of expert judgment.
Ако измерването на параметри за качество на водата изисква отстраняване на значителни водни проби от съдовете, може да е препоръчително да се приготвят отделни съдове за измерванията на качеството на водата, така че да не се променя обемното съотношение на водата към седимента.
Samples may then be taken on intermediate sampling dates (e.g. on day seven after start of exposure).
Биологични наблюдения
The overlying water should be sampled by carefully decanting or siphoning off the overlying water so as to minimise perturbation of the sediment.
По време на експозицията съдовете за изпитване следва да бъдат наблюдавани, за да се оценят визуално всякакви разлики в поведението при червеите (напр. избягване на седимента, фекални пелети, видими върху повърхността на седимента) в сравнение с контролите.
The volume of the samples should be recorded.
Наблюденията следва да се записват.
After the overlying water has been removed, the sediment should be homogenised and transferred to a suitable container.
В края на изпитването всяко повторение се изследва (допълнителните съдове, определени за химични анализи, могат да бъдат изключени от разглеждането).
The weight of the wet sediment sample is recorded.
Трябва да се използва подходящ метод за обратно извличане на всички червеи от съда за изпитване.
If analysis of the test chemical in the pore water is required additionally, the homogenised and weighed sediment samples should be centrifuged to obtain the pore water.
Следва да се вземат мерки всички червеи да бъдат извлечени без наранявания.
For example, approximately 200 ml of wet sediment can be filled into 250 ml centrifugation beakers.
Един от възможните методи е пресяване на червеите от седимента.
Thereafter the samples should be centrifuged without filtration to isolate the porewater, e.g. at 10000 ± 600 × g for 30 - 60 min at a temperature not exceeding the temperature used in the test.
Може да се използва мрежа от неръждаема стомана с подходящ размер на отворите.
After centrifugation, the supernatant is decanted or pipetted taking care that no sediment particles are introduced, and the volume is recorded.
По-голямата част от водата над седимента се отдекантира внимателно, а оставащите седимент и вода се разбъркват до каша, която може да премине през ситото.
The weight of the remaining sediment pellet is recorded.
При използване на отвори с размер 500 μm повечето от частиците на седимента преминават много бързо през ситото;
It may facilitate the estimation of the mass balance or recovery of the test chemical in the water-sediment system, if the sediment dry weight is determined at each sampling date.
независимо от това, пресяването следва да се извърши бързо, за да се не се допусне пълзене на червеите в ситото или през него.
In some cases it might not be possible to analyse concentrations in the pore water as the sample size is too small.
При използване на отвори с размер 250 μm се предотвратява пълзенето на червеите в ситото или през него;
Failing immediate analysis, all samples should be stored by an appropriate method, e.g. under the storage conditions recommended for minimum degradation of the particular test chemical (e.g., environmental samples are commonly stored at – 18 °C in the dark).
Независимо от това следва да се внимава колкото е възможно по-малко частици от седимента да се задържат върху мрежата.
Obtain information on the proper storage conditions for the particular test chemical — for example, duration and temperature of storage, extraction procedures, etc. — before beginning the study.
Пресятата каша от всеки съд с повторение може да бъде прекарана през сито за втори път, за да се гарантира, че са извлечени всички червеи.
Analytical method
Алтернативен метод би могъл да бъде затоплянето на седимента чрез поставяне на съдовете за изпитване във водна баня при температура 50—60 °C;
Since the whole procedure is governed essentially by the accuracy, precision and sensitivity of the analytical method used for the test chemical, check experimentally that the precision and reproducibility of the chemical analysis, as well as the recovery of the test chemical from water and sediment samples are satisfactory for the particular method at least at the lowest and highest test concentrations.
червеите напускат седимента и могат да бъдат събрани от повърхността на седимента с използване на пипета с широк отвор с огнева полировка.
Also, check that the test chemical is not detectable in the control chambers in concentrations higher than the limit of quantification.
Друг алтернативен метод би могъл да бъде изготвянето на каша от седимент и поставянето на тази каша в плитко блюдо с подходящ размер.
If necessary, correct the nominal concentrations for the recoveries of quality control spikes (e.g. where recovery is outside 80 - 120 % of spiked amount).
От плиткия слой на кашата червеите могат да бъдат взети със стоманена игла или часовникарска пинсета (която следва да се използва по-скоро като вилица, отколкото като щипци, за да се избегне нараняването на червеите) и прехвърлени в чиста вода.
Handle all samples throughout the test in such a manner so as to minimise contamination and loss (e.g. resulting from adsorption of the test chemical on the sampling device).
След отделяне на червеите от кашата от седимент, те се измиват в средата за изпитване и се преброяват.
The recovery of test chemical, the limit of quantification, and the limit of detection in sediment and water should be recorded and reported.
Независимо от използвания метод, лабораториите следва да докажат, че техният персонал е в състояние да извлече обратно най-малко средно 90 % от организмите от цялото количество седимент.
The main mandatory response variables of the test to be evaluated statistically are the biomass and the total number of worms per replicate.
Например, определен брой от изпитвани организми може да се добави към седимент в контрола или към изпитван седименти, и извличането би могло да се определи след 1 час (7).
Optionally, reproduction (as increase of worm numbers) and growth (as increase of dry biomass) could be also evaluated.
Общият брой на живите и мъртви индивиди на повторение трябва да бъде записан и оценен.
In this case, an estimate of the dry weight of the worms at start of exposure should be obtained e.g. by measurement of the dry weight of a representative sub-sample of the batch of synchronised worms to be used for the test.
Следните групи от червеи се смятат за мъртви:
Although mortality is not an endpoint of this test, mortalities should be evaluated as far as possible.
няма реакция след лек механичен стимул
In order to estimate mortalities, the number of worms that do not react to a gentle mechanical stimulus or showed signs of decomposition, and the missing worms should be considered dead.
има признаци за разлагане (в съчетание с „а“)
Mortalities should at least be recorded and considered when interpreting the test results.
брой на липсващите червеи
Effect concentrations should be expressed in mg/kg sediment dry weight.
Освен това, живите червеи могат да бъдат причислени към една от следните три групи:
If the recovery of test chemical measured in the sediment, or in sediment and overlying water at start of exposure, is between 80 and 120 % of the nominal concentrations, the effect concentrations (ECx, NOEC, LOEC) may be expressed based on nominal concentrations.
големи цели червеи (полово зрели) без регенерирани части на тялото
If recovery deviates from the nominal concentrations by more than ± 20 % of the nominal concentrations, the effect concentrations (ECx, NOEC, LOEC) should be based on the initially measured concentrations at the beginning of the exposure, e.g. taking into account the mass balance of the test chemical in the test system (see paragraph 30).
цели червеи с регенерирани, по-светло оцветени телесни зони (т.е. с нова задна част, с нова предна част, или с нови и задна, и предна част)
In these cases, additional information can be obtained from analysis of stock and/or application solutions in order to confirm that the test sediments were prepared correctly.
разкъсани червеи (т.е. наскоро разкъсани червеи с нерегенерирани телесни зони)
ECx-values for the parameters described in paragraph 60 are calculated using appropriate statistical methods (e.g. probit analysis, logistic or Weibull function, trimmed Spearman-Karber method, or simple interpolation).
Тези допълнителни наблюдения не са задължителни, но могат да бъдат използвани за допълнително тълкуване на биологичните резултати (например, голям брой червеи, причислени към група „C“, може да означава забавяне на размножаването или регенерация при дадено третиране).
Guidance on statistical evaluation is given in (15) and (50).
Освен това, ако се наблюдават разлики във външния вид (напр. увреждания на външната обвивка, едематозни участъци от тялото) между третираните и контролните червеи, те следва да бъдат записани.
To compute the EC50 or any other ECx, the per-treatment means ( X
Незабавно след преброяването/оценката, живите червеи, открити във всяко повторение, се прехвърлят върху изсушени, предварително претеглени и етикетирани блюда за теглене (по едно за всяко повторение), и се умъртвяват с помощта на една капка етанол на блюдо за теглене.
) should be subjected to regression analysis.
Блюдата за теглене се поставят в пещ за сушене при 100 ± 5 °C, за изсушаване през нощта, след което се претеглят след охлаждане в сушилня, и се определя сухото тегло на червеите (за предпочитане в g, с точност май-малко 4 знака след десетичната запетая).
If a statistical analysis is intended to determine the NOEC/LOEC, per-vessel statistics (individual vessels are considered replicates) are necessary.
В допълнение към общото сухо тегло, сухото тегло без пепел може да бъде определено както е описано в (49), за да се отчетат произхождащите от погълнатия седимент неорганични съставки, налични в храносмилателния тракт на червеите.
Appropriate statistical methods should be used.
Биомасата се определя като обща биомаса за повторение, включително полово зрелите и новородените червеи.
In general, adverse effects of the test item compared to the control are investigated using one-tailed (smaller) hypothesis testing at p ≤ 0,05.
Мъртвите червеи не следва да се вземат предвид за определяне на биомасата в едно повторение.
Examples are given in the following paragraphs.
Проверка на концентрацията на изпитвания химикал
Guidance on selection of appropriate statistical methods is given in (15) and (50).
Пробовземане
Normal distribution of data can be tested e.g. with the Kolmogorov-Smirnov goodness-of-fit test, the Range-to-standard-deviation ratio test (R/s-test) or the Shapiro-Wilk test, (two-sided, p ≤ 0,05).
Проби за химичен анализ на изпитвания химикал следва да се вземат като минимум при най-високата и при една по-ниска концентрация, най-малко в края на фаза на достигане на равновесие (преди добавянето на изпитваните организми) и в края на изпитването.
Cochran's test, Levene test or Bartlett's test, (two-sided, p ≤ 0,05) may be used to test variance homogeneity.
Трябва да се вземат проби за анализ най-малко от самия седимент и от водата над него.
If the prerequisites of parametric test procedures (normality, variance homogeneity) are fulfilled, One-way Analysis of Variance (ANOVA) and subsequent multi-comparison tests can be performed.
На всяка дата на вземане на пробата следва да се вземат най-малко по две проби от всяка матрица и от всяко третиране.
Pairwise comparisons (e.g. Dunnett's t-test) or step-down trend tests (e.g. Williams' test) can be used to calculate whether there are significant differences (p ≤ 0,05) between the controls and the various test item concentrations.
Една от пробите от повторението може да се съхранява като резервна (за анализ например в случай, че първоначалният анализ попадне извън диапазона ± 20 % от номиналната концентрация).
Otherwise, non-parametric methods (e.g. Bonferroni-U-test according to Holm or Jonckheere-Terpstra trend test) should be used to determine the NOEC and the LOEC.
В случай на специфични химически свойства, например ако се очаква бързо разграждане на изпитвания химикал, графикът за анализа може да се прецизира (напр. по-често вземане на проби, анализ на повече равнища на концентрация) въз основа на експертна преценка.
If a limit test (comparison of control and one treatment only) has been performed and the prerequisites of parametric test procedures (normality, homogeneity) are fulfilled, metric responses (total worm number, and biomass as worm dry weight) can be evaluated by the Student test (t-test).
В такъв случай пробите могат да се вземат на междинни дати за вземане на проби (напр. на ден седми след началото на експозицията).
The unequal-variance t-test (Welch t-test) or a non parametric test, such as the Mann-Whitney-U-test may be used, if these requirements are not fulfilled.
Проби от водата над седимента следва да се вземат чрез внимателно декантиране или източване със сифон на водата над седимента, така че да се сведе до минимум нарушаването на седимента.
Some information on the statistical power found during hypothesis testing in the ring test of the method is given in Appendix 6.
Записват се обемите на взетите проби.
To determine significant differences between the controls (control and solvent control), the replicates of each control can be tested as described for the limit test.
След като водата над седимента е отстранена, седиментът се хомогенизира и се прехвърля в подходящ съд.
If these tests do not detect significant differences, all control and solvent control replicates may be pooled.
Теглото на пробата от влажния седимент се записва.
Otherwise all treatments should be compared with the solvent control.
Ако в допълнение се изисква анализ на изпитвания химикал във водата между частиците на седимента, хомогенизираните и претеглени проби от седимента трябва да се центрофугират за получаване на водата между частиците на седимента.
The results should be interpreted with caution if there were deviations from this test method, and where measured concentrations of test concentrations occur at levels close to the detection limit of the analytical method used.
Например, около 200 ml влажен седимент може да се напълни в 250 ml бехерови чаши за центрофугиране.
Any deviations from this test method must be noted.
След това пробите следва да се центрофугират без филтруване, за да се изолира водата между частиците на седимента, например на 10000 ± 600 × g за 30—60 min. при температура, не по-висока от температурата, при която се провежда изпитването.
The test report should include at least the following information:
След центрофугирането супернатантната течност се декантира или се отстранява с пипета, като се внимава да не се въвеждат частици седимент, и обемът се записва.
chemical identification data (common name, chemical name, structural formula, CAS number, etc.) including purity and analytical method for quantification of test chemical; source of the test chemical, identity and concentration of any solvent used.