natgillin/translations-raw huggingface dataset:
За достигането до етапа на полова зрялост индивидът преминава през четири фази на развитие (яйца — ларви, ларви — протонимфа, протонимфа — дейтонимфа, дейтонимфа — полово зрял индивид).
AY FISH ASSAY:
Яйцето е млечнобяло, прозрачно, елипсовидно и с дължина приблизително 0,37 mm, с твърда обвивка.
A SHORT-TERM SCREENING FOR OESTROGENIC AND ANDROGENIC ACTIVITY, AND AROMATASE INHIBITION
Според (8) ларвите са с размер между 0,42 и 0,45 mm.
This test method is equivalent to OECD test guideline (TG) 230 (2009).
Те имат само три двойки крака.
The need to develop and validate a fish assay capable of detecting certain endocrine active chemicals originates from the concerns that environmental levels of chemicals may cause adverse effects in both humans and wildlife due to the interaction of these chemicals with the endocrine system.
В областта на главата са развити педипалпите и хелицерите.
In 1998, the OECD initiated a high-priority activity to revise existing guidelines and to develop new guidelines for the screening and testing of potential endocrine disrupters.
Хелицерите се използват за излюпване от яйцето, тъй като разполагат с няколко малки зъбци.
One element of the activity was to develop a Test Guideline for the screening of chemicals active on the endocrine system of fish species.
Протонимфите се развиват след първото линеене, 1-2 дни след излюпването.
The 21-day Fish Endocrine Screening Assay underwent an extensive validation programme consisting of inter-laboratory studies with selected chemicals to demonstrate the relevance and reliability of the assay for the detection of oestrogenic and aromatase inhibiting chemicals (1, 2, 3, 4, 5) in the three fish species investigated (the fathead minnow, the Japanese medaka and the zebrafish);
Те също така са с бял цвят, с размери 0,45-0,62 mm (8) и имат четири двойки крака.
the detection of androgenic activity is possible in the fathead minnow and the medaka, but not in the zebrafish.
Зъбците са изцяло налични върху хелицерите.
This test method does not allow the detection of anti-androgenic chemicals.
От горепосочения стадий акарите започват да търсят храна.
The validation work has been peer-reviewed by a panel of experts nominated by the National Coordinators of the Test Guideline Programme (6).
За тази цел кутикулата на жертвата се пробива с хелицерите и в жертвата се изпуска секреция за извънтелесно смилане.
The assay is not designed to identify specific mechanisms of hormonal disruption because the test animals possess an intact hypothalamic-pituitary-gonadal (HPG) axis, which may respond to chemicals that impact on the HPG axis at different levels.
След това хранителната каша може да бъде всмукана от акара. хелицерите могат също да се използват за откъсване на по-големи частици от късовете храна (28).
The Fish Short Term Reproduction assay (OECD TG 229) includes fecundity and, as appropriate, gonadal histopathology for the fathead minnow, as well as all endpoints included in this test method.
След още едно линеене се развиват дейтонимфи.
OECD TG 229 provides a screening of chemicals which affect reproduction through various mechanisms including endocrine modalities.
Те са с размери 0,60-0,80 mm (8) и с жълт до светлокафяв цвят.
This should be considered prior to selecting the most appropriate test method.
Със започването на тази фаза те могат да бъдат разделени на женски и мъжки.
This test method describes an in vivo screening assay where sexually mature male and spawning female fish are held together and exposed to a chemical during a limited part of their life-cycle (21 days).
След още едно линеене, през времето на което индивидите са неактивни и се развива кафявият щит (приблизително след 14 дни) акарите стават полово зрели (възрастни) индивиди (28) (29) (30).
At termination of the 21-day exposure period, depending on the species used, one or two biomarker endpoint(s) are measured in males and females as indicators of oestrogenic, aromatase inhibition or androgenic activity of the test chemical;
Техният жизнен цикъл е между 48 и 100 дни при 25 °C (27).
these endpoints are vitellogenin and secondary sexual characteristics.
Допълнение 8
Vitellogenin is measured in fathead minnow, Japanese medaka and zebrafish, whereas secondary sex characteristics are measured in fathead minnow and Japanese medaka only.
Обобщение и времеви график за основните действия, които трябва да бъдат предприети с оглед извършване на изпитването с Hypoaspis
This bioassay serves as an in vivo screening assay for certain endocrine modes of action and its application should be seen in the context of the “OECD Conceptual Framework for the Testing and Assessment of Endocrine Disrupting Chemicals” (28).
Време (дни)
INITIAL CONSIDERATIONS AND LIMITATIONS
начало на изпитването = ден 0
Vitellogenin is normally produced by the liver of female oviparous vertebrates in response to circulating endogenous oestrogen.
Дейност/Задача
It is a precursor of egg yolk proteins and, once produced in the liver, travels in the bloodstream to the ovary, where it is taken up and modified by developing eggs.
Ден – 35
Vitellogenin is almost undetectable in the plasma of immature female and male fish because they lack sufficient circulating oestrogen;
до – 28
however, the liver is capable of synthesizing and secreting vitellogenin in response to exogenous oestrogen stimulation.
Прехвърляне на женските индивиди от изходната култура в чисти съдове за започване на синхронизацията
The measurement of vitellogenin serves for the detection of chemicals with various oestrogenic modes of action.
2 дни по-късно:
The detection of oestrogenic chemicals is possible via the measurement of vitellogenin induction in male fish, and it has been abundantly documented in the scientific peer-reviewed literature (e.g. (7)).
отстраняване на женските
Vitellogenin induction has also been demonstrated following exposure to aromatizable androgens (8, 9).
два или три пъти в седмицата:
A reduction in the circulating level of oestrogen in females, for instance through the inhibition of the aromatase converting the endogenous androgen to the natural oestrogen 17β-estradiol, causes a decrease in the vitellogenin level, which is used to detect chemicals having aromatase inhibiting properties (10, 11).
даване на достатъчни количества храна
The biological relevance of the vitellogenin response following oestrogenic/aromatase inhibition is established and has been broadly documented.
Ден – 5 (+/– 2)
However, it is possible that production of VTG in females can also be affected by general toxicity and non-endocrine toxic modes of action, e.g. hepatotoxicity.
Подготовка на изкуствена почва
Several measurement methods have been successfully developed and standardised for routine use.
Ден – 4 (+/– 2)
This is the case of species-specific Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) methods using immunochemistry for the quantification of vitellogenin produced in small blood or liver samples collected from individual fish (12, 13, 14, 15, 16, 17, 18).
Определяне на СЗВ на изкуствената почва
Fathead minnow blood, zebrafish blood or head/tail homogenate, and medaka liver are sampled for VTG measurement.
Изсушаване през нощта
In medaka, there is a good correlation between VTG measured from blood and from liver (19).
На следващия ден:
Appendix 6 provides the recommended procedures for sample collection for vitellogenin analysis.
претегляне на пробите и изчисляване на СЗВ
Kits for the measurement of vitellogenin are widely available;
Ден – 4 (+/– 2)
such kits should be based on a validated species-specific ELISA method.
Предварително навлажняване на изкуствената почва за постигане на 20-30 % от СЗВ
Secondary sex characteristics in male fish of certain species are externally visible, quantifiable and responsive to circulating levels of endogenous androgens;
Начало на изпитването:
this is the case for the fathead minnow and the medaka — but not for zebrafish, which does not possess quantifiable secondary sex characteristics.
изпитваният химикал се добавя към изкуствената почва
Females maintain the capacity to develop male secondary sex characteristics, when they are exposed to androgenic chemicals in water.
Във всяко повторение се въвеждат 10 женски
Several studies are available in the scientific literature to document this type of response in fathead minnow (20) and medaka (21).
Всяко повторение се претегля
A decrease in secondary sex characteristics in males should be interpreted with caution because of low statistical power, and should be based on expert judgement and weight of evidence.
Приготвят се абиотични контроли за съдържание на влага и pH, 2 повторения за всяко третиране
There are limitations to the use of zebrafish in this assay, due to the absence of quantifiable secondary sex characteristics responsive to androgenic acting chemicals.
Контролите за съдържание на влага се изсушават през нощта
In the fathead minnow, the main indicator of exogenous androgenic exposure is the number of nuptial tubercles located on the snout of the female fish.
контролите за съдържание на влага се претеглят
In the medaka, the number of papillary processes constitutes the main marker of exogenous exposure to androgenic chemicals in female fish.
измерва се рН на изсушените абиотични контроли
Appendix 5A and Appendix 5B indicate the recommended procedures to follow for the evaluation of sex characteristics in fathead minnow and in medaka, respectively.
Ден 3, 6, 9, 12 (приблизително)
Definitions used in this test method are given in Appendix 1.
Във всяко повторение се осигуряват достатъчно организми, представляващи жертви
In the assay, male and female fish in a reproductive status are exposed together in test vessels.
Всяко повторение се претегля и евентуално се добавя вода за компенсиране на изпарената
Their adult and reproductive status enables a clear differentiation of each sex, and thus a sex-related analysis of each endpoint, and ensures their sensitivity towards exogenous chemicals.
Изпитването се приключва, подготвя се извличането, с всички повторения плюс контролите за ефикасността на извличането
At test termination, sex is confirmed by macroscopic examination of the gonads following ventral opening of the abdomen with scissors.
Контролите за съдържание на влага се изсушават през нощта
An overview of the relevant bioassay conditions is provided in Appendix 2.
Контролите за съдържание на влага се претеглят
The assay is normally initiated with fish sampled from a population that is in spawning condition;
измерва се рН на изсушените контроли
senescent animals should not be used.
Ден 16
Guidance on the age of fish and on the reproductive status is provided in the section on Selection of fish.
Приключва се извличането
The assay is conducted using three chemical exposure concentrations as well as a water control, and a solvent control if necessary.
Ден 16 +
Two vessels or replicates per treatment are used (each vessel containing 5 males and 5 females) in medaka and zebrafish, whereas four vessels or replicates per treatment are used (each vessel containing 2 males and 4 females) in fathead minnow.
Записва се броят на полово зрелите и ювенилните екземпляри в извлечения материал
This is to accommodate the territorial behaviour of male fathead minnow while maintaining sufficient power of the assay.
Резултатите се протоколират в таблици по образец
The exposure is conducted for 21 days and sampling of fish is performed at day 21 of exposure.
Процедурата на изпитването се протоколира в листовете за протоколиране на изпитването
On sampling at day 21, all animals are killed humanely.
В.37.
Secondary sex characteristics are measured in fathead minnow and medaka (see Appendix 5A and Appendix 5B);
НЕВНО ИЗСЛЕДВАНЕ НА РИБИ:
blood samples are collected for determination of vitellogenin in zebrafish and fathead minnow, alternatively head/tail can be collected for the determination of vitellogenin in zebrafish (Appendix 6);
КРАТКОСРОЧЕН СКРИНИНГ ЗА ЕСТРОГЕННА АКТИВНОСТ, АНДРОГЕННА АКТИВНОСТ И ПОТИСКАНЕ НА АРОМАТАЗАТА
liver is collected for VTG analysis in medaka (Appendix 6).
Настоящият метод за изпитване е еквивалентен на насоките за изпитване на ОИСР (ТG) 230 (2009).
TEST ACCEPTANCE CRITERIA
Необходимостта от разработване и валидиране на изследване, позволяващо откриване на някои ендокринно активни химикали, произлиза от загрижеността, че нивата на химикали в околната среда могат да причинят неблагоприятни въздействия както за хората, така и за дивата флора и фауна, поради взаимодействието на тези химикали с ендокринната система.
For the test results to be acceptable the following conditions apply:
През 1998 г.
the mortality in the water (or solvent) controls should not exceed 10 % at the end of the exposure period;
ОИСР стартира с висок приоритет дейност по преразглеждане на съществуващите Насоки за изпитване и по разработване на нови Насоки за изпитване за скрининг и изпитвания за потенциални нарушители на функциите на ендокринната система.
the dissolved oxygen concentration should be at least 60 % of the air saturation value (ASV) throughout the exposure period;
Един от елементите на дейността бе да се разработи насока за изпитване за скрининг на химикали, активни в ендокринната система на риби.
the water temperature should not differ by more than ± 1,5 °C between test vessels at any one time during the exposure period and be maintained within a range of 2 °C within the temperature ranges specified for the test species (Appendix 2);
невното скринингово изследване на ендокринната система на риби премина на обширна програма за валидиране, състояща се от междулабораторни изследвания с подбрани химикали, за доказване уместността и надеждността на анализа за откриване на химикали, потискащи естрогенната активност и ароматазата (1, 2, 3, 4, 5) в трите изследвани вида риби (Pimephales promelas, японска оризия и зеброво данио);
evidence should be available to demonstrate that the concentrations of the test chemical in solution have been satisfactorily maintained within ± 20 % of the mean measured values.
откриването на андрогенна активност е възможно при Pimephales promelas и японска оризия, но не при зеброво данио.
Normal laboratory equipment and especially the following:
Настоящият метод за изпитване не позволява откриването на антиандрогенни химикали.
oxygen and pH meters;
Работата по валидирането е преминала през партньорска проверка от група от експерти, назначени от националните координатори на Програмата за насоки за изпитване (6).
equipment for determination of water hardness and alkalinity;
Изследването не е предназначено за идентифициране на специфични механизми на хормонални нарушения, тъй като изпитваните животни имат интактна хипоталамус-хипофиза-гонадна ос (ХХГ ос), която може да реагира на химикали, оказващи въздействие върху ХХГ оста на различни равнища.
adequate apparatus for temperature control and preferably continuous monitoring;
Краткосрочно изследване на размножаването при риби (ОИСР TG 229) включва плодовитостта и, по целесъобразност, хистопатологията на гонадите за Pimephales promelas, както и всички крайни точки, включени в настоящия метод за изпитване.
tanks made of chemically inert material and of a suitable capacity in relation to the recommended loading and stocking density (see Appendix 2);
Насоки за изпитване № 229 на ОИСР предоставят скрининг на химикали, които въздействат върху размножаването чрез различни механизми, в това число ендокринни механизми.
spawning substrate for fathead minnow and zebrafish, Appendix 4 gives the necessary details;
Това следва да бъде взето предвид преди избора на най-подходящия метод за изпитване.
suitably accurate balance (i.e. accurate to ± 0,5 mg).
Настоящият метод за изпитване описва скринингово изследване in vivo, при което полово зрели мъжки и хвърлящи хайвер женски индивиди се държат заедно и се експонират на даден химикал през ограничена част от жизнения им цикъл (21 дни).
Any water in which the test species shows suitable long-term survival and growth may be used as test water.
При приключване на 21-дневния период на експозиция в зависимост от използвания биологичен вид като крайни точки се измерват един или два биомаркера в мъжки и женски индивиди, в качеството им на показатели за естрогенна активност, потискане на ароматазата или андрогенна активност на изпитвания химикал;
It should be of constant quality during the period of the test.
тези крайни точки са вителогенин и вторични полови белези.
The pH of the water should be within the range 6,5 to 8,5, but during a given test it should be within a range of ± 0,5 pH units.
Вителогенин се измерва в Pimephales promelas, японска оризия и зеброво данио, докато вторични полови белези се измерват само в Pimephales promelas и японска оризия.
In order to ensure that the dilution water will not unduly influence the test result (for example by complexion of test chemical), samples should be taken at intervals for analysis.
Настоящото биологично изследване служи като скринингово изследване in vivo за някои ендокринни механизми на действие и неговото прилагане следва да се разглежда в контекста на „Концептуалната рамка на ОИСР за изпитване и оценка на химикали, нарушаващи функциите на ендокринната система“ (28).
Measurements of heavy metals (e.g. Cu, Pb, Zn, Hg, Cd, and Ni), major anions and cations (e.g. Ca2+, Mg2+, Na+, K+, Cl-, and SO42-), pesticides (e.g. total organophosphorus and total organochlorine pesticides), total organic carbon and suspended solids should be made, for example, every three months where dilution water is known to be relatively constant in quality.
ПЪРВОНАЧАЛНИ СЪОБРАЖЕНИЯ И ОГРАНИЧЕНИЯ
If water quality has been demonstrated to be constant over at least one year, determinations can be less frequent and intervals extended (e.g. every six months).
Вителогенинът (VTG) обикновено се произвежда от черния дроб на женски яйценосни гръбначни животни в отговор на циркулиращия ендогенен естроген.
Some chemical characteristics of acceptable dilution water are listed in Appendix 3.
Той е прекурсор на белтъците в яйчния жълтък и след образуването си в черния дроб преминава в кръвообращението, откъдето стига до яйчника и там се модифицира в образуващия се хайвер.
Test solutions of the chosen concentrations are prepared by dilution of a stock solution.
Вителогенинът е почти неоткриваем в плазмата на незрели женски и мъжки риби поради липса на достатъчно циркулиращ естроген;
The stock solution should preferably be prepared by simply mixing or agitating the test chemical in dilution water by using mechanical means (e.g. stirring or ultrasonication).
черният дроб обаче може да синтезира и секретира VTG в отговор на външно естрогенно стимулиране.
Saturation columns (solubility columns) can be used for achieving a suitable concentrated stock solution.
Измерването на VTG служи за откриване на химикали с различни естрогенни механизми на действие.
The use of a solvent carrier is not recommended.
Откриването на химикали с естрогенно действие е възможно чрез измерване на индуцирането на VTG в мъжки риби, и е много добре документирано в научната литература, преминала през партньорска проверка (напр.
However, in case a solvent is necessary, a solvent control should be run in parallel, at the same solvent concentration as the chemical treatments.
(7)).
For difficult test chemicals, a solvent may be technically the best solution;
Индуцирането на VTG е доказано и след експозиция на андрогени, които могат да се ароматизират (8, 9).
the OECD Guidance Document on aquatic toxicity testing of difficult substances and mixtures should be consulted (22).
Намаляването на равнището на циркулиращ естроген в женските животни, например посредством инхибиране на ароматазата, превръщаща ендогенния андроген в природния естроген 17β-естрадиол, води до намаляване на нивото на VTG, което се използва за откриване на химикали, притежаващи свойства на инхибитори по отношение на ароматазата (10, 11).
The choice of solvent will be determined by the chemical properties of the chemical.
Биологичната значимост на отговора с VTG след естрогенно/ароматазно инхибиране е установена и е широко документирана.
The OECD Guidance Document recommends a maximum of 100 μl/l, which should be observed.
Възможно е обаче образуването на VTG в женски животни да е също така повлияно от обща токсичност и начини на токсично действие, различни от ендокринните, напр. хепатотоксичност.
However a recent review (23) highlighted additional concerns when using solvents for endocrine activity testing.
Успешно са разработени и стандартизирани за рутинна употреба няколко метода за измерване.
Therefore it is recommended that the solvent concentration, if necessary, is minimised wherever technically feasible (dependent on the physical-chemical properties of the test chemical).
Такъв е случаят със специфичните за отделните видове ензимно-свързани имуносорбентни анализи (ELISA), използващи имунохимия за количествено определяне на получавания VTG в малки проби от кръв или черен дроб, взети от отделните риби (12, 13, 14, 15, 16, 17, 18).
A flow-through test system will be used.
Проби за измерване на VTG се вземат от кръв от Pimephales promelas, кръв или хомогенат глава/опашка от зеброво данио и черен дроб от японска оризия.
Such a system continually dispenses and dilutes a stock solution of the test chemical (e.g. metering pump, proportional diluter, saturator system) in order to deliver a series of concentrations to the test chambers.
При японската оризия е налице добра корелация между VTG, измерен от кръв и от черен дроб (19).
The flow rates of stock solutions and dilution water should be checked at intervals, preferably daily, during the test and should not vary by more than 10 % throughout the test.
В допълнение 6 са дадени препоръчителните процедури за събирането на проби за анализ на VTG.
Care should be taken to avoid the use of low-grade plastic tubing or other materials that may contain biologically active chemicals.
Комплектите за измерване на VTG са широко разпространени;
When selecting the material for the flow-through system, possible adsorption of the test chemical to this material should be considered.
такива комплекти следва да се основават на валидиран специфичен за отделните видове ELISA метод.
Holding of fish
Вторичните полови белези в мъжки екземпляри от някои видове риби са видими външно, количествено определяеми и чувствителни към нивата на циркулиращите ендогенни андрогени;
Test fish should be selected from a laboratory population, preferably from a single stock, which has been acclimated for at least two weeks prior to the test under conditions of water quality and illumination similar to those used in the test.
такъв е случаят с Pimephales promelas и японската оризия, но не и със зебровото данио, което не притежава количествено определяеми вторични полови белези.
It is important that the loading rate and stocking density (for definitions, see Appendix 1) be appropriate for the test species used (see Appendix 2).
Женските запазват способността си за развиване на мъжки вторични полови белези, когато са експонирани на андрогенни химикали във вода.
Following a 48-hour settling-in period, mortalities are recorded and the following criteria applied:
В научната литература са на разположение няколко проучвания, документиращи този тип отговор в Pimephales promelas (20) и японската оризия (21).
mortalities of greater than 10 % of population in seven days:
Намаляването при вторични полови белези у мъжките индивиди следва да се тълкува внимателно поради неголямата статистическата мощност, и следва да се основава на експертна оценка и определяне на значимостта на доказателствения материал.
reject the entire batch;
Съществуват ограничения за използването на зебровото данио в настоящото изследване поради липсата на количествено определяеми вторични полови белези, реагиращи на андрогенно активни химикали.
mortalities of between 5 % and 10 % of population:
При Pimephales promelas основният показател за външна андрогенна експозиция е броят на размножителните туберкули, разположени по муцуната на женския индивид.
acclimation for seven additional days;
При оризията броят на папиларните израстъци представлява основният маркер на екзогенна експозиция на андрогенни химикали при женските риби.
if more than 5 % mortality during second seven days, reject the entire batch;