natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Проверка на пригодността на лабораторията
Intraperitoneal injection is not recommended since it is not a physiologically relevant route of human exposure.
Пригодността за тези изследвания следва да бъде установена чрез доказване на способността за възпроизвеждане на очаквани резултати от публикувани данни (24) за:
The maximum volume of liquid that can be administered by gavage or injection at one time depends on the size of the test animal.
честоти на мутантите с химикали за положителни контроли (включително слабите отговори), като например посочените в таблица 1, химикали без мутагенно действие и контроли на носител;
The volume should not exceed 2 ml/100 g body weight.
и 2) отделяне на трансген от геномна ДНК (например ефикасност на опаковането).
The use of volumes greater than this should be justified.
Определяне на първичната структура при мутанти
Except for irritating or corrosive chemicals, which will normally reveal exacerbated effects at higher concentrations, variability in test volume should be minimised by adjusting the concentration to ensure a constant volume at all dose levels.
За нормативни цели не се изисква определяне на първичната структура на ДНК на мутанти, в частност когато е получен ясен положителен или отрицателен резултат.
Sampling Time
Независимо от това данните от определянето на първичната структура могат да бъдат от полза, когато се наблюдават големи колебания между отделните индивиди.
Somatic Cells
В тези случаи определянето на първичната структура може да се използва, за да се изключи възможността за множество мутанти от една мутация или за клониране чрез определяне на дела на уникални мутанти от дадена тъкан.
The sampling time is a critical variable because it is determined by the period needed for mutations to be fixed.
Определяне на първичната структура на приблизително 10 мутанта от тъкан и от животно следва да бъде достатъчно за лесно определяне дали в честотата на мутантите няма включени клонирани мутанти;
This period is tissue-specific and appears to be related to the turnover time of the cell population, with bone marrow and intestine being rapid responders and the liver being much slower.
Определяне на първичната структура на 25 мутанта може да бъде необходимо, за да се коригира математически честотата на мутантите за клоналност.
A suitable compromise for the measurement of mutant frequencies in both rapidly and slowly proliferating tissues is 28 consecutive daily treatments (as indicated in paragraph 26) and sampling three days after the final treatment;
Определяне на първичната структура на мутанти също може да бъде взето под внимание при откриване на неголеми увеличения на честотата на мутантите (т.е. непосредствено над стойностите за нетретираните контроли).
although the maximum mutant frequency may not manifest itself in slowly proliferating tissues under these conditions.
Различията в мутационния спектър между колониите от мутанти от третирани и от нетретирани животни могат да подкрепят мутагенен ефект (29).
If slowly proliferating tissues are of particular importance, then a later sampling time of 28 days following the 28 day administration period may be more appropriate (16) (29).
Също така, мутационните спектри могат да бъдат полезни за разработването на механистични хипотези.
In such cases, the later sampling time would replace the 3 day sampling time, and would require scientific justification.
Когато определянето на първичната структура трябва да бъде включено като част от протокола от изследването, при планирането на такива изследвания следва да се обърне специално внимание, по-специално по отношение на броя на мутантите с определена първична структура в проба, за да се постигне достатъчна статистическа мощност в съответствие с използвания статистически модел (вж. параграф 43).
Germ Cells
Брой и пол на животните
TGR assays are well-suited for the study of gene mutation induction in male germ cells (7) (8) (27), in which the timing and kinetics of spermatogenesis have been well-defined (27).
Броят животни в група следва да бъде предварително определен така, че да е достатъчен, за да осигури статистическата мощност, необходима за откриване най-малко на удвояване на честотата на мутантите.
The low numbers of ova available for analysis, even after super-ovulation, and the fact that there is no DNA synthesis in the oocyte, preclude the determination of mutation in female germ cells using transgenic assays (31).
Групите са с размер най-малко пет животни;
The sampling times for male germ cells should be selected so that the range of exposed cell types throughout germ cell development is sampled, and so that the stage targeted in the sampling has received sufficient exposure.
независимо от това, ако статистическата мощност е недостатъчна, броят животни трябва да се увеличи, както се изисква.
The time for the progression of developing germ cells from spermatogonial stem cells to mature sperm reaching the vas deferens/cauda epididymisis ~ 49 days for the mouse (36) and ~70 days for the rat (34) (35).
Обикновено следва да се използват мъжки животни.
Following a 28-day exposure with a subsequent three day sampling period, accumulated sperm collected from the vas deferens/cauda epididymis (7)(8) will represent a population of cells exposed during approximately the latter half of spermatogenesis, which includes the meiotic and postmeiotic period, but not the spermatogonial or stem cell period.
Може да има случаи, когато би било обосновано изпитването само на женски животни;
In order to adequately sample cells in the vas deferens/cauda epididymis that were spermatogonial stem cells during the exposure period, an additional sampling time at a minimum of 7 weeks (mice) or 10 weeks (rat), after the end of treatment is required.
например, при изпитване на лекарства, специфични за жени, или когато се изследва метаболизъм, специфичен за женския пол.
Cells extruded from seminiferous tubules after a 28 + 3 day regimen comprise a mixed population enriched for all stages of developing germ cells (7) (8).
Ако съществуват значителни различия между половете по отношение на токсичността или на метаболизма, тогава се изисква използване и на мъжки, и на женски екземпляри.
Sampling these cells for gene mutation detection does not provide as precise an assessment of the stages at which germ cell mutations are induced as can be obtained from sampling spermatozoa from the vas deferens/cauda epididymis (since there is a range of germ cell types sampled from the tubules, and there will be some somatic cells contaminating this cell population).
Период на прилагане
However, sampling cells from seminiferous tubules in addition to spermatozoa from the vas deferens/cauda epididymis following only a 28 + 3 day sampling regimen would provide some coverage of cells exposed across the majority of phases of germ cell development, and may be useful for detecting some germ cell mutagens.
Въз основа на наблюдения, че мутациите се натрупват с всяко третиране, е необходима схема с повтаряща се доза, с ежедневно третиране в продължение на 28 дни.
General clinical observations should be made at least once a day, preferably at the same time(s) each day and considering the peak period of anticipated effects after dosing.
Това по принцип се счита за приемливо както за генериране на достатъчно натрупване на мутации от слаби мутагени, така и за предоставяне на времето на експозиция, подходящо за откриване на мутации в бавно пролифериращи органи.
The health condition of the animals should be recorded.
За някои оценки могат да бъдат подходящи алтернативни схеми на третиране, и тези алтернативни графици на дозиране следва да бъдат научно обосновани в протокола.
At least twice daily, all animals should be observed for morbidity and mortality.
Периодите на третиране не трябва да бъдат по-кратки от времето, необходимо за пълното индуциране на всички относими метаболизиращи ензими, и по-кратки третирания могат да доведат до необходимост от използване на множество моменти на пробовземане, които са подходящи за органи с различни степени на пролиферация.
All animals should be weighed at least once a week, and at sacrifice.
Във всички случаи при обосновката на даден протокол следва да се използва цялата налична информация (например за обща токсичност или метаболизъм и фармакокинетика), особено при отклонение от горните стандартни препоръки.
Measurements of food consumption should be made at least weekly.
По-дълги от 8 седмици периоди на третиране, въпреки че могат да доведат до увеличаване на чувствителността, следва да бъдат ясно обяснени и обосновани, тъй като дългите периоди на третиране могат да доведат до видимо увеличение на честотата на мутантите чрез клонална експанзия (29).
If the test chemical is administered via the drinking water, water consumption should be measured at each change of water and at least weekly.
Нива на доза
Animals exhibiting non-lethal indicators of excess toxicity should be euthanatised prior to completion of the test period (23).
Нивата на доза следва да се основават на резултатите от изследване за определяне на обхвата на дозите, измерващо общата токсичност, проведено с използване на същия път на експозиция, или на резултатите от предходни изследвания за субакутна токсичност.
Tissue Collection
Нетрансгенните животни от същата порода гризачи могат да се използват за определяне на обхватите на дозите.
The rationale for tissue collection should be defined clearly.
С цел получаване на информация за зависимостта доза-отговор, основното изпитване следва да включва отрицателна контролна група (вж. параграф 22) и най-малко три, разположени на подходящи интервали, нива на доза, с изключение на случаите, когато е използвана пределната доза (вж. параграф 28).
Since it is possible to study mutation induction in virtually any tissue, the selection of tissues to be collected should be based upon the reason for conducting the study and any existing mutagenicity, carcinogenicity or toxicity data for the chemical under investigation.
Най-високата доза следва да е максималната допустима доза (МДД).
Important factors for consideration should include the route of administration (based on likely human exposure route(s)), the predicted tissue distribution, and the possible mechanism of action.
Най-високата доза се определя като доза, генерираща признаци на такава токсичност, че би могло да се очаква по-високи нива на доза при същия график на дозиране да доведат до леталност.
In the absence of any background information, several somatic tissues as may be of interest should be collected.
Химикали със специфична биологична активност при ниски, нетоксични дози (като хормони и митогени) и химикали, които показват насищане по отношение на токсикокинетични свойства, могат да бъдат изключения от критериите за определяне на дозата и следва да се оценяват за всеки конкретен случай.
These should represent rapidly proliferating, slowly proliferating and site of contact tissues.
Нивата на доза следва да обхващат от максимална до слаба токсичност или липса на токсичност.
In addition, spermatozoa from the vas deferens/cauda epididymis and developing germ cells from the seminiferous tubules (as described in paragraphs 32 and 33) should be collected and stored in case future analysis of germ cell mutagenicity is required.
Изпитване при пределна концентрация
Organ weights should be obtained, and for larger organs, the same area should be collected from all animals.
Ако опити за определяне на обхвата на дозите, или съществуващи данни от свързани породи гризачи, показват че режим на третиране най-малко при пределна концентрация (вж. по-долу) не дава забележими токсични ефекти, а генотоксичност не би могла да се очаква на базата на данни от структурно свързани химикали, то тогава пълно изследване с три нива на доза може да не се смята за необходимо.
Storage of Tissues and DNA
За период на прилагане от 28 дни (т.е.
Tissues (or tissue homogenates) should be stored at or below – 70 °C and be used for DNA isolation within 5 years.
28 ежедневни третирания) пределната доза е 1000 mg/kg телесно тегло/ден.
Isolated DNA, stored refrigerated at 4 °C in appropriate buffer, should be used optimally for mutation analysis within 1 year.
За периоди на прилагане от 14 дни или по-кратки пределната доза е 2000 mg/kg телесно тегло/ден (графици на дозиране, различни от 28 ежедневни третирания, следва да бъдат научно обосновани в протокола; вж. параграф 26).
Selection of Tissues for Mutant Analysis
Прилагане на дозите
The choice of tissues should be based on considerations such as:
Изпитваният химикал обикновено се прилага със сонда, като се използва стомашна тръба или подходяща интубационна канюла.
the route of administration or site of first contact (e.g. glandular stomach if administration is oral, lung if administration is through inhalation, or skin if topical application has been used);
Като цяло, при планирането на изследването следва да бъде взет предвид очакваният път на експозиция на човека.
and 2) pharmacokinetic parameters observed in general toxicity studies, which indicate tissue disposition, retention or accumulation, or target organs for toxicity.
Следователно други пътища на експозиция (като например чрез питейна вода, подкожно, интравенозно, локално, чрез вдишване, интратрахеално, чрез хранителен режим или чрез имплантация) могат да бъдат приемливи, ако могат да бъдат обосновани.
If studies are conducted to follow up carcinogenicity studies, target tissues for carcinogenicity should be considered.
Интраперитонеалното инжектиране не се препоръчва, тъй като то не е физиологично относим път на експозиция на човека.
The choice of tissues for analysis should maximise the detection of chemicals that are direct-acting in vitro mutagens, rapidly metabolised, highly reactive or poorly absorbed, or those for which the target tissue is determined by route of administration (6).
Максималният обем течност, който може да се приложи еднократно със сонда или инжекция, зависи от големината на изпитваното животно.
In the absence of background information and taking into consideration the site of contact due to route of administration, the liver and at least one rapidly dividing tissue (e.g. glandular stomach, bone marrow) should be evaluated for mutagenicity.
Обемът не трябва да надвишава 2 ml/100 g телесно тегло.
In most cases, the above requirements can be achieved from analyses of two carefully selected tissues, but in some cases, three or more would be needed.
Обеми, по-високи от този, следва да се обосноват.
If there are reasons to be specifically concerned about germ cell effects, including positive responses in somatic cells, germ cell tissues should be evaluated for mutations.
С изключение на дразнещи или корозивни химикали, при които обикновено се проявяват изострени ефекти при по-високи концентрации, варирането в изпитвания обем трябва да бъде сведено до минимум чрез регулиране на концентрацията с оглед осигуряване на постоянен обем при всички нива на доза.
Methods of Measurement
Момент на пробовземане
Standard laboratory or published methods for the detection of mutants are available for the recommended transgenic models:
Соматични клетки
lacZ lambda bacteriophage and plasmid (30);
Моментът на пробовземане е критична променлива, защото се определя от периода, който е необходим за фиксирането на мутациите.
lacI mouse (2) (18);
Този период е специфичен за дадена тъкан и изглежда е свързан с времето за обновяване на популацията от клетки, като отговорът при костния мозък и червата е бърз, докато отговорът при черния дроб е много по-бавен.
gpt delta mouse (22);
Подходящ компромис за измерване на честотите на мутантите както в бързо, така и в бавно пролифериращите тъкани, е 28 последователни ежедневни третирания (както е посочено в параграф 26) и пробовземане три дни след последното третиране;
gpt delta rat (28);
максималната честота на мутантите може обаче да не се прояви в бавно пролифериращите тъкани при тези условия.
Modifications should be justified and properly documented.
Ако бавно пролифериращите тъкани са от особено значение, тогава може да бъде по-подходящ по-късен момент на пробовземане — 28 дни след 28-дневния период на прилагане (16)(29).
Data from multiple packagings can be aggregated and used to reach an adequate number of plaques or colonies.
В такива случаи, вторият момент на пробовземане заменя момента на пробовземане след 3 дни, и изисква научна обосновка.
However, the need for a large number of packaging reactions to reach the appropriate number of plaques may be an indication of poor DNA quality.
Зародишни клетки
In such cases, data should be considered cautiously because they may be unreliable.
Изследванията с TGR са подходящи за изследване на индуцирането на генна мутация в мъжки зародишни клетки (7)(8)(27), за което графикът и кинетиката на сперматогенезата са добре установени (27).
The optimal total number of plaques or colonies per DNA sample is governed by the statistical probability of detecting sufficient numbers of mutants at a given spontaneous mutant frequency.
Малкият брой яйцеклетки, налични за анализ, дори след свръховулация, както и фактът, че няма синтез на ДНК в овоцити, изключва възможността за определяне на мутации в женските зародишни клетки чрез използване на трансгенни изследвания (31).
In general, a minimum of 125000 to 300000 plaques is required if the spontaneous mutant frequency is in the order of 3 × 10–5 (15).
Моментите на пробовземане за мъжки зародишни клетки следва да се изберат така, че да бъдат взети проби в обхвата на експонираните видове клетки по време на развитието на зародишните клетки, и така, че прицелният за пробовземането етап да е получил достатъчна експозиция.
For the Big Blue® lacI assay, it is important to demonstrate that the whole range of mutant colour phenotypes can be detected by inclusion of appropriate colour controls concurrent with each plating.
Времето за нарастване на развиващите се зародишни клетки от сперматогониални стволови клетки до зрели сперматозоиди, достигнали семепровода/опашката на епидидима, е ~ 49 дни при мишки (36) и ~ 70 дни при плъхове (34)(35).
Tissues and the resulting samples (items) should be processed and analysed using a block design, where items from the vehicle/solvent control group, the positive control group (if used) or positive control DNA (where appropriate), and each treatment group are processed together.
След 28-дневна експозиция с последващи три дни преди момента на пробовземане акумулираните сперматозоиди, събрани от семепровода/опашката на епидидима (7)(8), представляват клетъчна популация, експонирана приблизително по време на втората половина на сперматогенезата, което включва и мейотичния, и постмейотичния период, но не сперматогониалния период или периода на стволовите клетки.
Treatment of Results
С цел адекватно пробовземане на клетки в семепровода/опашката на епидидима, които са били сперматогониални стволови клетки по време на периода на експозиция, се изисква допълнителен момент на пробовземане най-малко 7 седмици (мишки) или 10 седмици (плъхове) след прекратяване на третирането.
Individual animal data should be presented in tabular form.
Клетките, получени от семенните каналчета след режима от 28 + 3 дни, изграждат смесена популация, обогатена за всички етапи на развиващите се зародишни клетки (7)(8).
The experimental unit is the animal.
Пробовземането на тези клетки за откриването на генна мутация не предоставя оценка на етапите, на които се индуцират мутации в зародишните клетки, която да е толкова точна, колкото тази, която може да се получи при пробовземане на сперматозоиди от семепровода/опашката на епидидима (тъй като от каналчетата се пробовземат редица типове зародишни клетки и има известни количества соматични клетки, замърсяващи тази клетъчна популация).
The report should include the total number of plaque-forming units (pfu) or colony-forming units (cfu), the number of mutants, and the mutant frequency for each tissue from each animal.
Независимо от това вземането на проби от клетки от семенните каналчета в допълнение към сперматозоидите от семепровода/опашката на епидидима след режим за пробовземане от само 28 + 3 дни ще обхване в известна степен клетки, експонирани през по-голямата част от етапите на развитие на зародишните клетки, и може да бъде полезно за откриване на някои мутагени в зародишни клетки.
If there are multiple packaging/rescue reactions, the number of reactions per DNA sample should be reported.
Общи клинични наблюдения следва да бъдат извършвани поне един път дневно, за предпочитане по едно и също време всеки ден и като се има предвид пиковият период за поява на очакваните ефекти след дозиране.
While data for each individual reaction should be retained, only the total pfu or cfu need be reported.
Здравословното състояние на животните следва да се записва.
Data on toxicity and clinical signs as per paragraph 34 should be reported.
Поне два пъти дневно всички животни следва да се наблюдават за заболяемост и смъртност.
Any sequencing results should be presented for each mutant analysed, and resulting mutation frequency calculations for each animal and tissue should be shown.
Теглото на всички животни следва да се измерва поне един път в седмицата и при умъртвяването.
Statistical Evaluation and Interpretation of Results
Консумацията на храна се измерва най-малко един път седмично.
There are several criteria for determining a positive result, such as a dose-related increase in the mutant frequency, or a clear increase in the mutant frequency in a single dose group compared to the solvent/vehicle control group.
Ако изпитваният химикал се прилага чрез водата за пиене, консумацията на вода следва да се измерва при всяка смяна на водата и най-малко един път в седмицата.
At least three treated dose groups should be analysed in order to provide sufficient data for dose-response analysis.
Животни, проявяващи нелетални признаци на прекалена токсичност, следва да се умъртвят преди приключването на периода на изпитване (23).
While biological relevance of the results should be the primary consideration, appropriate statistical methods may be used as an aid in evaluating the test results (4) (14) (15) (25) (26).
Събиране на тъкани
Statistical tests used should consider the animal as the experimental unit.
Обосновката за събиране на тъкани следва да бъде ясно определена.
A test chemical for which the results do not meet the above criteria in any tissue is considered non-mutagenic in this assay.
Тъй като е възможно индуцирането на мутации да бъде изследвано в почти всяка тъкан, изборът на тъкани, които трябва да бъдат събрани, следва да се основава на причината за провеждането на изследването и на всички съществуващи данни за мутагенност, канцерогенност или токсичност на проучвания химикал.
For biological relevance of a negative result, tissue exposure should be confirmed.
Важни фактори за разглеждане следва да включват пътя на прилагане (въз основа на вероятния път или пътища на експозиция на човека), прогнозираното разпределение в тъканите, както и възможния механизъм на действие.
For DNA sequencing analyses, a number of statistical approaches are available to assist in interpreting the results (1) (5) (9) (19).
При липсата на каквато и да било съпътстваща информация следва да бъдат събрани няколко соматични тъкани, които могат да представляват интерес.
Consideration of whether the observed values are within or outside of the historical control range can provide guidance when evaluating the biological significance of the response (32).
Те следва да представляват бързо пролифериращите, бавно пролифериращите тъкани и тъканите от местата на контакт.
identification data and CAS no, if known;
В допълнение, сперматозоидите от семепровода/опашката на епидидима и развиващите се зародишни клетки от семенните каналчета (както е описано в параграфи 32 и 33) следва да се събират и съхраняват в случай че се изисква бъдещ анализ за мутагенност за зародишни клетки.
source, lot number if available;
Теглото на органите следва да бъде измерено, като за по-големите органи от всички животни следва да бъде взета една и съща площ.
physical nature and purity;
Съхранение на тъкани и ДНК
physiochemical properties relevant to the conduct of the study;