natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Например, консумацията на храна на телесно тегло при мишки е по-висока от тази на плъховете и следователно съдържанието на фитоестрогени в храната при мишките следва да бъде по-ниско при мишките, отколкото при плъховете (9)(20)(22).
As a safeguard consistent with good laboratory practice (GLP) representative sampling of each batch of diet administered during the study should be conducted for possible analysis of phyto-oestrogen content (e.g. in the case of high uterine control weight relative to historic controls or an inadequate response to the reference oestrogen, 17 alpha ethinyl estradiol).
Всички процедури трябва да са в съответствие с местните стандарти за полагане на грижи за лабораторни животни.
Aliquots should be analysed as part of the study or frozen at – 20 °C or in such a way as to prevent the sample from decomposing prior to analysis.
Тези описания на грижите и третирането представляват минимални стандарти и се заменят от местни разпоредби, като например Директива 2010/63/ЕС на Европейския парламент и на Съвета от 22 септември 2010 г. относно защитата на животните, използвани за научни цели (38).
Some bedding materials may contain naturally occurring oestrogenic or antioestrogenic chemicals (e.g. corn cob is known to affects the cyclicity of rats and appears to be antioestrogenic).
Температурата в стаята на опитните животни трябва да бъде 22 °C (с приблизително отклонение ± 3 °C).
The selected bedding material should contain a minimum level of phyto-oestrogens.
Относителната влажност следва да бъде най-малко 30 % и е препоръчително тя да не надвишава 70 % освен по време на почистване на помещението.
Preparation of animals
Целта следва да бъде относителна влажност 50—60 %.
Experimental animals without evidence of any disease or physical abnormalities are randomly assigned to the control and treatment groups.
Осветлението трябва да бъде изкуствено.
The animals should be identified uniquely.
Ежедневната последователност при осветлението трябва да е 12 часа светлина, 12 часа тъмнина.
Preferably, immature animals should be caged with dams or foster dams until weaning during acclimatisation.
Лабораторна храна и питейна вода трябва да се предоставят ad libitum.
The acclimatisation period prior to the start of the study should be about 5 days for young adult animals and for the immature animals delivered with dams or foster dams.
Млади полово зрели животни могат да бъдат отглеждани в индивидуални клетки или да се разпределят в група до три животни в клетка.
If immature animals are obtained as weanlings without dams a shorter duration of the acclimatisation period may become necessary as dosing should start immediately after weaning (see paragraph 29).
Поради младата възраст на незрелите животни, за тях се препоръчва отглеждане на групи в общи клетки.
Verification of Laboratory Proficiency
За високите нива на фитоестрогени в лабораторни храни е известно, че увеличават теглото на матката при гризачи в степен, достатъчна, за да попречи на утеротрофичното биологично изследване (13)(14)(15).
Two different options can be used to verify laboratory proficiency:
Високите нива на фитоестрогени и енергия от обмяна на веществата в лабораторни храни могат също така да доведат до ранен пубертет, ако се използват незрели животни.
Periodic verification, relying on an initial baseline positive control study (see paragraph 27).
Наличието на фитоестрогени произтича основно от включването на продукти от соя и люцерна в лабораторните храни и е доказано, че концентрациите на фитоестрогени варират от една партида стандартни лабораторни храни към друга (23).
At least every 6 months and each time there is a change that may influence the performance of the assay (e.g. a new formulation of diet, change in personnel performing dissections, change in animal strain or supplier, etc.), the responsiveness of the test system (animal model) should be verified using an appropriate dose (based on the baseline positive control study described in paragraph 27) of a reference oestrogen:
Телесното тегло е важна променлива, тъй като количеството на консумираната храна е свързано с телесно тегло.
ethinyl estradiol (CAS No 57-63-6) (EE).
Следователно действителната доза фитоестрогени, консумирана по същия хранителен режим, може да варира при различните видове и според възрастта (9).
Use of concurrent controls, by including a group administered with an appropriate dose of reference oestrogen in each assay.
При незрели женски плъхове консумацията на храна на телесно тегло може да е приблизително два пъти по-висока от тази при овариектомизирани млади полово зрели женски животни.
If the system does not respond as expected, the experimental conditions should be examined and modified accordingly.
При млади полово зрели мишки консумацията на храна на телесно тегло може да е приблизително четири пъти по-висока от тази при овариектомизирани млади полово зрели женски плъхове.
It is recommended that the dose of reference oestrogen to be used in either approach be approximately the ED70 to 80.
Резултатите от утеротрофичното биологично изследване (9)(17)(18)(19) обаче сочат, че ограничени количества на фитоестрогени в хранителния режим са приемливи и не намаляват чувствителността на биологичното изследване.
Baseline Positive Control Study — Before a laboratory conducts a study under this test method for the first time, laboratory proficiency should be demonstrated by testing the responsiveness of the animal model, by establishing the dose response of a reference oestrogen:
Като насока, равнищата на фитоестрогени в хранителния режим не следва да надвишават 350 μg еквивалент на генистеин на грам лабораторни храни за незрели женски плъхове от породите Sprague Dawley и Wistar (6)(9).
ethinyl estradiol (CAS No 57-63-6) (EE) with a minimum of four doses.
Такива хранителни режими също трябва да са подходящи, когато се изпитват овариектомизирани млади полово зрели плъхове, тъй като консумацията на храна на телесно тегло е по-малка при младите полово зрели животни в сравнение с незрелите животни.
The uterine weight response will be compared to established historical data (see reference (5)).
Ако трябва да бъдат използвани овариектомизирани полово зрели мишки или по-чувствителни към фитоестрогени плъхове, следва да бъде взето предвид пропорционално намаление на нивата на фитоестрогени в хранителния режим (20).
If this baseline positive control study does not yield the anticipated results the experimental conditions should be examined and modified.
Освен това, различията в наличната енергия от обмяната на веществата при различните хранителни режими може да доведе до измествания на началото на пубертета във времето (21)(22).
Number and condition of animals
Преди проучването се изисква внимателен подбор на хранителнен режим без повишени нива на фитоестрогени (за насоки вж.
Each treated and control group should include at least 6 animals (for both immature and ovx-adult method protocols).
(6)(9)) или енергия от обмяна на веществата, които могат да доведат до невъзможност за разграничаване на резултатите (15)(17)(19)(22)(36).
Age of immature animals
За гарантиране на правилното изпълнение на използваната от лабораторията система за изпитване, както е посочено в параграфи 26 и 27, е важно да бъде извършена проверка на тези два фактора.
For the Uterotrophic Bioassay with immature animals the day of birth must be specified.
Като предпазна мярка в съответствие с добрата лабораторна практика (ДЛП), следва да бъдат вземани представителни проби от всяка партида храни, давани по време на изследването, за евентуален анализ за съдържание на фитоестрогени (напр. в случай на висока стойност на теглото на матката в сравнение с контролни данни от предходни периоди, или на неадекватен отговор на референтния естроген, 17алфа-етинилестрадиол).
Dosing should begin early enough to ensure that, at the end of test chemical administration, the physiological rise of endogenous oestrogens associated with puberty has not yet taken place.
Като част от проучването трябва да бъдат анализирани аликвотни части, или същите да бъдат замразени при температура — 20 °C или по такъв начин, че да се предотврати разлагане на пробата преди анализа.
On the other hand, there is evidence that very young animals may be less sensitive.
Някои материали за постилане могат да съдържат срещани в природата естрогенни или антиестрогенни химикали (напр. за царевичните кочани е известно, че засягат цикъла при плъхове и изглежда, че имат антиестрогенно действие).
For defining the optimal age each laboratory should take its own background data on maturation into consideration.
Избраният материал за постилане трябва да съдържа минимално ниво на фитоестрогени.
As a general guide, dosing in rats may begin immediately after early weaning on postnatal day 18 (with the day of birth being postnatal day 0).
Подготовка на животните
Dosing in rats preferably should be completed on postnatal day 21 but in any case prior to postnatal day 25, because, after this age, the hypothalamic-pituitary-ovarian axis becomes functional and endogenous oestrogen levels may begin to rise with a concomitant increase in baseline uterine weight means and an increase in the group standard deviations (2)(3)(10)(11)(12).
Опитни животни без видими признаци на заболяване или физически отклонения се разпределят на случаен принцип в контролните и третираните групи.
Procedure for ovariectomy
Животните трябва да бъдат индивидуално идентифицирани.
For the ovariectomised female rat and mouse (treatment and control groups), ovariectomy should occur between 6 and 8 weeks of age.
За предпочитане е незрелите животни да бъдат поставяни в клетки с майки или приемни майки до отбиване по време на аклиматизацията.
For rats, a minimum of 14 days should elapse between ovariectomy and the first day of administration in order to allow the uterus to regress to a minimum, stable baseline.
Периодът на аклиматизация преди началото на изследването следва да е около 5 дни за млади полово зрели животни и за незрели животни, доставени с майки или приемни майки.
For mice, at least 7 days should elapse between ovariectomy and the first day of administration.
Ако незряло животно е получено като отбито без майка, може да е необходима по-кратка продължителност на периода на аклиматизация, тъй като дозирането трябва да започне веднага след отбиването (вж. параграф 29).
As small amounts of ovarian tissue are sufficient to produce significant circulating levels of oestrogens (3), the animals should be tested prior to use by observing epithelial cells swabbed from the vagina on at least five consecutive days (e.g. days 10-14 after ovariectomy for rats).
Проверка на пригодността на лабораторията
If the animals indicate any evidence entering oestrous, the animals should not be used.
Могат да бъдат използвани два различни варианта за проверка на пригодността на лабораторията:
Further, at necropsy, the ovarian stubs should be examined for any evidence that ovarian tissue is present.
Периодична проверка, основаваща се на изследване с положителна контрола и изходна стойност (вж. параграф 27).
If so, the animal should not be used in the calculations (3).
Поне веднъж на всеки 6 месеца и всеки път, когато има промяна, която може да повлияе на провеждането на изследването (например нова рецептура за хранителния режим, промяна в персонала, отговорен за извършването на дисекцията, промяна на породата на животните или на доставчика и др.), реагирането на системата на изпитване (животински модел) следва да бъде проверено, като се използва подходяща доза (основаваща се на изследването с положителна контрола и изходна стойност, описано в параграф 27) на референтен естроген:
The ovariectomy procedure begins with the animal in ventral recumbency after the animal has been properly anesthetised.
етинилестрадиол (CAS № 57-63-6) (EE).
The incision opening the dorso-lateral abdominal wall should be approximately 1 cm lengthways at the mid-point between the costal inferior border and the iliac crest, and a few millimetres lateral to the lateral margin of the lumbar muscle.
Използване на паралелни контроли чрез включване на група, третирана с подходяща доза от референтен естроген във всяко изследване.
The ovary should be removed from the abdominal cavity onto an aseptic field.
Ако системата не отговаря според очакванията, условията на опита трябва да бъдат проверени и съответно изменени.
The ovary should be disconnected at the junction of the oviduct and the uterine body.
Препоръчва се дозата от референтния естроген, която ще се използва и при двата подхода, да бъде приблизително ED70—ED80.
After confirming that no massive bleeding is occurring, the abdominal wall should be closed by a suture and the skin closed by autoclips or appropriate suture.
Изследване с положителна контрола и изходна стойност — преди дадена лаборатория да проведе за първи път изследване съгласно настоящия метод за изпитване, пригодността на лабораторията следва да бъде доказана чрез изпитване на реагирането на животинския модел чрез установяване на зависимостта доза-отговор по отношение на референтен естроген:
The ligation points are shown schematically in Figure 1.
етинилестрадиол (CAS № 57-63-6) (EE) с най-малко четири дози.
Appropriate post-operative analgesia should be used as recommended by a veterinarian experienced in rodent care.
Отговорът, изразяващ се в теглото на матката, ще бъде сравнен с установените данни за минали периоди (вж. позоваване (5).
Body weight
Ако това изследване с положителна контрола и изходна стойност не даде очакваните резултати, условията на опита трябва да бъдат проверени и изменени.
In the ovx-adult method, body weight and uterine weight are not correlated because uterine weight is affected by hormones like oestrogens but not by the growth factors that regulate body size.
Брой и състояние на животните
On the contrary, body weight is related to uterine weight in the immature model, while it is maturing (34).
Всяка третирана и всяка контролна група трябва да включва поне 6 животни (за протоколи от методите с незрели и с овариектомизирани полово зрели животни).
Thus, at the commencement of the study the weight variation of animals used, in the immature model, should be minimal and not exceed ± 20 % of the mean weight.
Възраст на незрелите животни
This means that the litter size should be standardised by the breeder, to ensure that offspring of different mother animals will be fed approximately the same.
За утеротрофичното биологично изследване с незрели животни следва да бъде определен денят на раждане.
Animals should be assigned to groups (both control and treatment) by randomised weight distribution, so that mean body weight of each group is not statistically different from any other group.
Дозирането трябва да започне достатъчно рано, за да се гарантира, че в края на прилагането на изпитвания химикал физиологичното увеличение на ендогенните естрогени, свързано с пубертета, все още не е настъпило.
Consideration should be given to avoid assignment of littermates to the same treatment group as far as practicable without increasing the number of litters to be used for the investigation.
От друга страна, съществуват доказателства, че много младите животни могат да бъдат по-малко чувствителни.
In order to establish whether a test chemical can have oestrogenic action in vivo, two dose groups and a control are normally sufficient and this design is therefore preferred for animal welfare reasons.
За определяне на оптималната възраст всяка лаборатория трябва да вземе предвид свои собствени съпътстващи данни относно съзряването.
If the purpose is either to obtain a dose-response curve or to extrapolate to lower doses, at least 3 dose groups are needed.
Като обща насока, дозирането при плъховете може да започне незабавно след ранното отбиване през постнатален ден 18 (като денят на раждането се счита за постнатален ден 0).
If information beyond identification of oestrogenic activity (such as an estimate of potency) is required, a different dosing regimen should be considered.
За предпочитане е дозирането при плъхове да бъде приключено през постнатален ден 21 и във всички случаи преди постнатален ден 25, тъй като след тази възраст хипоталамус-хипофиза-гонадната ос започва да функционира и нивата на ендогенния естроген може да започнат да нарастват със съпътстващо увеличение на средните стойности на теглото на матката и увеличение на стандартните отклонения за групата (2)(3)(10)(11)(12).
Except for treatment with the test chemical, animals in the control group should be handled in an identical manner to the test group subjects.
Процедура за овариектомия
If a vehicle is used in administering the test chemical, the control group should receive the same amount of vehicle used with the treated groups (or highest volume used with the test groups if different among groups).
При овариектомизираните женски плъхове и мишки (третирани и контролни групи) овариектомията трябва да се извърши във възраст между 6 и 8 седмици.
The objective in the case of the Uterotrophic Bioassay is to select doses that ensure animal survival and that are without significant toxicity or distress to the animals after three consecutive days of chemical administration up to a maximum dose of 1000 mg/kg/d.
За плъхове трябва да изминат минимум 14 дни между овариектомията и първия ден на прилагането, за да се даде възможност на матката да достигне стабилно минимално изходно тегло.
All dose levels should be proposed and selected taking into account any existing toxicity and (toxico-) kinetic data available for the test chemical or related materials.
За мишки трябва да изминат минимум 7 дни между овариектомията и първия ден на прилагането.
The highest dose level should first take into consideration the LD50 and/or acute toxicity information in order to avoid death, severe suffering or distress in the animals (24)(25)(26).
Тъй като малки количества овариална тъкан са достатъчни за производството на значителни нива на циркулиращи естрогени (3), животните трябва да бъдат изпитани, преди да бъдат използвани, чрез наблюдение на епителиални клетки, взети с тампон от влагалището, в продължение най-малко на пет последователни дни (напр. дни 10—14 след овариектомията при плъхове).
The highest dose should represent the maximum tolerated dose (MTD);
Ако при животните има показания за навлизане в еструс, животните не трябва да се използват.
a study conducted at a dose level that induced a positive uterotrophic response would be accepted too.
По-нататък, по време на аутопсията, местата на срезовете на яйчниците следва да бъдат изследвани за наличие на овариална тъкан.
As a screen, large intervals (e.g. one half log units corresponding to a dose progression of 3,2 or even up to one log units) between dosages are generally acceptable.
При наличие, животното не трябва да се използва при изчисленията (3).
If there are no suitable data available, a range finding study may be performed to aid the determination of the doses to be used.
Процедурата по овариектомия започва с животното, лежащо по корем, след като е било правилно анестезирано.
Alternatively, if the oestrogenic potency of an agonist can be estimated by in vitro (or in silico) data, these may be taken into consideration for dose selection.
Инцизията за отваряне на задностраничната коремна стена следва да бъде с дължина приблизително 1 cm надлъжно по средата между долния ръб на ребрата и хълбочния гребен, и няколко милиметра странично от страничния ръб на поясния мускул.
For example, the amount of the test chemical that would produce uterotrophic responses equivalent to the reference agonist (ethinyl estradiol) is estimated by its relative in vitro potencies to ethinyl estradiol.
Яйчникът трябва да се извади от коремната кухина върху асептично поле.
The highest test dose would be given by multiplying this equivalent dose by an appropriate factor e.g. 10 or 100.
Яйчникът следва да бъде отстранен при свързването на яйцепровода с тялото на матката.
Considerations for range finding
След потвърждаване, че не се наблюдава силно кръвотечение, коремната стена трябва да бъде затворена с хирургичен шев и кожата трябва да бъде затворена с автоматични скоби (autoclips) или подходящ хирургичен шев.
If necessary, a preliminary range finding study can be carried out with few animals.
Точките на лигатурата са представени схематично на фигура 1.
In this respect, OECD Guidance Document No 19(25) may be used defining clinical signs indicative of toxicity or distress to the animals.
Следва да се използва подходящо постоперативно обезболяване, както е препоръчано от ветеринар с опит при грижите за гризачи.
If feasible within this range finding study after three days of administration, the uteri may be excised and weighed approximately 24-hours after the last dose.
Телесно тегло
These data could then be used to assist the main study design (select an acceptable maximum and lower doses and recommend the number of dose groups).
При метода с овариектомизирани полово зрели животни телесното тегло и теглото на матката не са взаимосвързани, тъй като теглото на матката се влияе от хормони като естрогените, но не и от фактори на растежа, които регулират размерите на тялото.
The test chemical is administered by oral gavage or subcutaneous injection.
Обратно, при модела с незрели животни телесното тегло е свързано с теглото на матката, докато животното съзрява (34).
Animal welfare considerations as well as toxicological aspects like the relevance to the human route of exposure to the chemical (e.g. oral gavage to model ingestion, subcutaneous injection to model inhalation or dermal adsorption), the physical/chemical properties of the test material and especially existing toxicological information and data on metabolism and kinetics (e.g. need to avoid first pass metabolism, better efficiency via a particular route) have to be taken into account when choosing the route of administration.
Следователно в началото на изследването вариациите в теглото на животните, използвани при модела с незрели животни, следва да са минимални и да не превишават ± 20 % от средното тегло.
It is recommended that, wherever possible, the use of an aqueous solution/suspension be considered first.
Това означава, че големината на котилото следва да бъде стандартизирана от снабдителя, за да се гарантира, че поколението от различни майки ще бъде хранено приблизително по еднакъв начин.
But as most oestrogen ligands or their metabolic precursors tend to be hydrophobic, the most common approach is to use a solution/suspension in oil (e.g. corn, peanut, sesame or olive oil).
Животните трябва да бъдат разпределени към групи (както контролни, така и третирани) чрез случайно разпределение по тегло, така че средното телесно тегло във всяка група да не е статистически различно от това в която и да е друга група.
However, these oils have different caloric and fat content, thus the vehicle might affect total metabolisable energy (ME) intake, thereby potentially altering measured endpoints such as the uterine weight especially in the immature method (33).
Следва да се обърне внимание, за да се избегне разпределяне на животни от едно котило към същата третирана група, доколкото това е практически възможно, без да се увеличава броят на котилата, които да се използват за проучването.
Thus, prior to the study, any vehicle to be used should be tested against controls without vehicles.
С цел да се установи дали даден изпитван химикал може да има естрогенно действие in vivo, обичайно са достатъчни две групи с определена доза и една контролна и затова тази постановка е предпочитана от съображения за хуманно отношение към животните.
Test chemicals can be dissolved in a minimal amount of 95 % ethanol or other appropriate solvents and diluted to final working concentrations in the test vehicle.
Ако целта е да се получи крива доза-отговор или да се екстраполира към по-ниски дози, необходими са най-малко 3 групи с определена доза.
The toxic characteristics of the solvent must be known, and should be tested in a separate solvent-only control group.
Ако се изисква информация извън тази за естрогенната активност (като например оценка на ефикасността), трябва да бъде взета под внимание отделна схема на дозиране.
If the test chemical is considered stable, gentle heating and vigorous mechanical action can be used to assist in dissolving the test chemical.