natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Мутациите, възникващи при гризачи, се отчитат чрез отделяне на трансгена и анализиране на фенотипа на репортерния ген в бактериален гостоприемник, в който репортерният ген липсва.
Mutations of interest are in vivo mutations that arise in the mouse or rat.
Изследванията за генни мутации при TGR измерват мутациите, индуцирани в генетично неутрални гени, отделени от почти всички тъкани при гризачи.
In vitro and ex vivo mutations, which may arise during phage/plasmid recovery, replication or repair, are relatively rare, and in some systems can be specifically identified, or excluded by the bacterial host/positive selection system.
Тези изпитвания, следователно, заобикалят много от съществуващите ограничения, свързани с изследване на генна мутация in vivo в собствени гени (напр. ограничени тъкани, подходящи за анализ, положителен/отрицателен подбор по отношение на мутации).
Preparations
Оценката на значимостта на доказателствения материал показва, че трансгените отговарят на мутагени по подобен начин на собствените гени, особено по отношение на откриването на заместване на двойка бази, мутации с изместване на рамката на разчитане и малки делеции и инсерции (24).
A variety of transgenic mouse gene mutation detection models are currently available, and these systems have been more widely used than transgenic rat models.
На Международните семинари относно изпитванията за генотоксичност (IWGT) е потвърдено включването на изследванията за генни мутации при TGR за откриване in vivo на генни мутации, и е препоръчан протокол за тяхното изпълнение (15)(29).
If the rat is clearly a more appropriate model than the mouse (e.g. when investigating the mechanism of carcinogenesis for a tumour seen only in rats, to correlate with a rat toxicity study, or if rat metabolism is known to be more representative of human metabolism) the use of transgenic rat models should be considered.
Настоящият метод за изпитване се основава на тези препоръки.
The temperature in the experimental animal room ideally should be 22 °C (± 3 °C).
Допълнителен анализ в подкрепа на използването на настоящия протокол е на разположение в (16).
Although the relative humidity should be at least 30 % and preferably not exceed 70 % other than during room cleaning, the goal should be to maintain a relative humidity of 50-60 %.
Очаква се, че в бъдеще може да съществува възможност за съчетаване на изследванията за генни мутации при TGR с изследвания за токсичност при повтарящи се дози (глава Б.7 от настоящото приложение).
Lighting should be artificial, with a daily sequence of 12 hours light, followed by 12 hours dark.
Въпреки това са необходими данни за гарантиране, че чувствителността на изследванията за генни мутации при TGR не се влияе от по-краткия еднодневен период между края на периода на прилагане и времето на пробовземане, както се прилага при изследвания за токсичност при повтарящи се дози, в сравнение с 3-дневния период, използван в изследванията за генни мутации при TGR.
The choice of diet may be influenced by the need to ensure a suitable admixture of a test chemical when administered by this route.
Също така са необходими данни, които да показват, че параметрите на изследванията при повтарящи се дози няма да бъдат неблагоприятно повлияни от използването на трансгенни породи гризачи вместо обичайни породи гризачи.
Animals should be housed in small groups (no more than five) of the same sex if no aggressive behaviour is expected.
Когато тези данни бъдат налични, настоящият метод за изпитване ще бъде актуализиран.
Animals may be housed individually if scientifically justified.
Определенията на ключови термини са дадени в допълнението.
Healthy young sexually mature adult animals (8-12 weeks old at start of treatment) are randomly assigned to the control and treatment groups.
Изследванията за генни мутации при TGR, за които има достатъчно налични данни за подкрепа на използването им в настоящия метод за изпитване, са:
The animals are identified uniquely.
мишка, носеща бактериофаг, съдържащ lacZ (Muta™Mouse);
The animals are acclimated to the laboratory conditions for at least five days.
мишка, носеща плазмид, съдържащ lacZ;
At the commencement of the study, the weight variation of animals should be minimal and not exceed ± 20 % of the mean weight of each sex.
мишка и плъх gpt delta (gpt и Spi–);мишка и плъх, носещи lacI (Big Blue®), извършвани при стандартни условия.
Preparation of doses
В допълнение, изследването с положителна селекция на cII може да бъде използвано за оценка на мутациите в моделите Big Blue® и Muta™Mouse.
Solid test chemicals should be dissolved or suspended in appropriate solvents or vehicles or admixed in diet or drinking water prior to dosing of the animals.
Мутагенезата в моделите с TGR се оценява по принцип като честота на мутантите;
Liquid test chemicals may be dosed directly or diluted prior to dosing.
ако е необходимо обаче, чрез молекулярен анализ на мутациите може да бъде предоставена допълнителна информация (вж. параграф 24).
For inhalation exposures, test chemicals can be administered as gas, vapour or a solid/liquid aerosol, depending on their physicochemical properties.
Тези изпитвания за генна мутация in vivo при гризачи са особено важни за оценка на мутагенната опасност, поради това че отговорите при изследванията зависят от метаболизма in vivo, от фармакокинетиката, от процесите на репарация на ДНК и синтеза на ДНК чрез повредени участъци, въпреки че те могат да варират според вида, тъканта и вида увреждане на ДНК.
Fresh preparations of the test chemical should be employed unless stability data demonstrate the acceptability of storage.
Изследването in vivo за генни мутации е полезно за по-нататъшното проучване на мутагенен ефект, установен чрез система in vitro, както и за проследяване на резултатите от изпитвания, използващи други крайни точки in vivo (24).
Test Conditions
Освен че има причинно-следствена връзка с предизвикването на рак, генната мутация е относима крайна точка за прогнозиране на основани на мутация неракови заболявания на соматичните тъкани (12)(13), както и на болести, предавани чрез зародишната линия.
Solvent/vehicle
Ако има доказателства, че изпитваният химикал, или относим метаболит, не достига никоя от представляващите интерес тъкани, извършването на изследване за генни мутации при TGR не е подходящо.
The solvent/vehicle should not produce toxic effects at the dose volumes used, and should not be suspected of chemical reaction with the test chemical.
В изследванията, описани в параграф 8, прицелният ген по произход е от бактерия или бактериофаг, и средството за отделяне от геномната ДНК при гризачи е чрез включването на трансгена в λ бактериофаг или плазмид като вектор совалка.
If other than well-known solvents/vehicles are used, their inclusion should be supported with reference data indicating their compatibility.
Процедурата включва извличането на геномна ДНК от представляваща интерес тъкан от гризач, обработка in vitro на геномната ДНК (т.е. опаковане на λ вектори, или лигиране и електропорация на плазмиди за отделяне на вектора совалка) и последващо откриване на мутации в бактерии гостоприемници при подходящи условия.
It is recommended that wherever possible, the use of an aqueous solvent/vehicle should be considered first.
При изследванията се използват неутрални трансгени, които могат да бъдат лесно изолирани от повечето тъкани.
Positive Controls
Основният опит, свързан с генна мутация при TGR, включва третиране на гризач с химикал за определен период от време.
Concurrent positive control animals should normally be used.
Химикалите могат да се прилагат посредством всякакви подходящи пътища, включително имплантация (напр. изпитване на медицинско изделие).
However, for laboratories that have demonstrated competency (see paragraph 23) and routinely use these assays, DNA from previous positive control treated animals may be included with each study to confirm the success of the method.
Общата продължителност на дозиране на дадено животно се нарича период на прилагане.
Such DNA from previous experiments should be obtained from the same species and tissues of interest, and properly stored (see paragraph 36).
Прилагането обикновено е последвано от период от време, предхождащ умъртвяването, през които химикалът не се прилага, и по време на който нерепарираните повреди в ДНК се фиксират в стабилни мутации.
When concurrent positive controls are used, it is not necessary to administer them by the same route as the test chemical;
В литературата този период се нарича по различни начини — период на проява, период на фиксиране или период на експресия;
however, the positive controls should be known to induce mutations in one or more tissues of interest for the test chemical.
краят на този период е моментът на пробовземането (15)(29).
The doses of the positive control chemicals should be selected so as to produce weak or moderate effects that critically assess the performance and sensitivity of the assay.
След като животното бъде умъртвено, геномната ДНК се изолира от представляващата интерес тъкан или тъкани и се пречиства.
Examples of positive control chemicals and some of their target tissues are included in Table 1.
Данните за отделна тъкан на животно от множество опакования/лигирания обикновено се обобщават и честотата на мутантите като цяло се оценява с помощта на общо между 105 и 107 образуващи плака единици или образуващи колония единици.
Examples of positive control chemicals and some of their target tissues
При използване на методи за положителна селекция общият брой образуващи плака единици се определя с отделен набор неселективни плаки.
Positive control chemical and CAS No
Разработени са методи за положителна селекция за улесняване на откриването на мутации както в gpt гена [gpt delta мишка и плъх, gpt– фенотип (20)(22)(28)], така и в гена lacZ [Muta™Mouse или lacZ, съдържащи се в плазмиди в мишки (3)(10)(11)(30)];
EINECS name and EINECS No
докато мутациите на гена lacI в животни Big Blue® се откриват чрез неселективен метод, с който мутантите се установяват чрез генериране на оцветени (в синьо) плаки.
Characteristics
Методологията за положителна селекция позволява също така и откриване на точкови мутации, възникващи в гена cII от вектора совалка на λ бактериофага [Big Blue® мишка или плъх, и Muta™Mouse (17)] и мутации чрез делеции в гените λ red и gam [Spi– селекция при gpt delta мишка или плъх (21)(22)(28)].
Mutation Target Tissue
Честотата на мутантитесе изчислява, като се раздели броят на плаките/плазмидите, съдържащи мутации в трансгена, на общия брой плаки/плазмиди, отделени от същата проба от ДНК.
Mouse
При изследванията за генни мутации при TGR честотата на мутантите е докладваният параметър.
N-Ethyl-N-nitrosourea
Освен това дадена честота на мутация може да се определи като дял от клетки, носещи независими мутации;
[CAS No 759-73-9]
за това изчисление се изисква корекция за клонална експанзия чрез определяне на първичната структура на изолираните мутанти (24).
Direct acting mutagen
Мутациите, отчитани в изследванията на lacI, lacZ, cII и gpt за точкова мутация,се състоят предимно от мутации чрез заместване на двойка бази, мутации с изместване на рамката на разчитане и малки инсерции/делеции.
Liver, lung
Относителният дял на тези типове мутации сред спонтанните мутации е подобен на този, който се наблюдава в собствения ген Hprt.
Bone marrow, colon, colonic epithelium, intestine, liver, lung, spleen, kidney, ovarian granulosa cells, male germ cells
Големи делеции са открити само при изследванията със селекция на Spi– и с плазмиди, съдържащи lacZ (24).
Ethyl carbamate (urethane)
Представляващите интерес мутации са мутации in vivo, които възникват при мишки или плъхове.
[CAS No 51-79-6]
Мутациите in vitro и ex vivo, които могат да възникнат по време на отделяне на фаг/плазмид, репликация или репарация, са относително редки и в някои системи могат да бъдат конкретно определени, или изключени от бактерията гостоприемник/системата за положителна селекция.
Urethane
Подготовка
Mutagen, requires metabolism but produces only weak effects
Понастоящем са налични разнообразни модели за откриване на генни мутации в трансгенни мишки и тези системи са по-широко използвани от моделите с трансгенни плъхове.
Bone marrow, forestomach, small intestine, liver, lung, spleen
Ако плъховете са явно по-подходящ модел от мишките (например при проучване на механизма на карциногенезата за тумор, наблюдаван само при плъхове с оглед съпоставяне с изследване за токсичност при плъхове, или ако е известно, че метаболизмът при плъховете е по-представителен за човешкия метаболизъм) трябва да бъде взето под внимание използването на модели с трансгенни плъхове.
2,4-Diaminotoluene
Температурата в експерименталното помещение с животните трябва в идеалния случай да бъде 22 °C (± 3 °C).
[CAS No 95-80-7]
Въпреки че относителната влажност следва да бъде най-малко 30 % и е препоръчително тя да не надвишава 70 %, освен по време на почистване на стаята, целта е относителната влажност да се поддържа в интервала 50—60 %.
ethyl-m-phenylenediamine
Осветлението трябва да бъде изкуствено, като дневната последователност е 12 часа светлина, следвани от 12 часа тъмнина.
Mutagen, requires metabolism, also positive in the Spi– assay
Изборът на хранителен режим може да бъде повлиян от нуждата да се осигури подходящо смесване с изпитван химикал, когато прилагането му е по този път.
Liver
Животните трябва да бъдат разпределени в малки групи (не повече от пет) от един и същ пол, ако не се очаква агресивно поведение.
Benzo[a]pyrene
Животните могат да се настаняват отделно, ако това е научно обосновано.
[CAS No 50-32-8]
Здрави, млади, полово зрели животни в зряла възраст (на възраст от 8—12 седмици в началото на третирането) се разпределят на случаен принцип в контролни групи и третирани групи.
Benzo[def]chrysene
На животните се дава уникална идентифакация.
Mutagen, requires metabolism
Животните се аклиматизират към лабораторните условия поне пет дни.
Liver, omenta,
В началото на изследването вариациите в теглото на животните следва да са минимални и да не превишават ± 20 % от средното тегло на всеки пол.
Bone marrow, breast, colon, forestomach, glandular stomach, heart, liver, lung, male germ cells
Подготовка на дозите
Negative controls
Твърдите изпитвани химикали следва да се разтворят или суспендират в подходящи разтворители или носители, или да се смесят в хранителния режим или в питейната вода преди дозирането на животните.
Negative controls, treated with solvent or vehicle alone, and otherwise treated in the same way as the treatment groups, should be included for every sampling time.
Течните изпитвани химикали могат да се дозират директно или да се разредят преди дозиране.
In the absence of historical or published control data showing that no deleterious or mutagenic effects are induced by the chosen solvent/vehicle, untreated controls should also be included for every sampling time in order to establish acceptability of the vehicle control.
При експозиция чрез инхалация изпитваните химикали могат да се прилагат като газ, пари или аерозол с твърда/течна фаза, в зависимост от техните физични и химични свойства.
Verification of laboratory proficiency
Следва да се използват пресни смеси на изпитвания химикал, освен ако данните за стабилността показват, че е допустимо съхранение.
Competency in these assays should be established by demonstrating the ability to reproduce expected results from published data (24) for:
Условия на изпитване
mutant frequencies with positive control chemicals (including weak responses) such as those listed in Table 1, non-mutagens, and vehicle controls;
Разтворител/носител
and 2) transgene recovery from genomic DNA (e.g. packaging efficiency).
Разтворителят/носителят не следва да има токсични ефекти при използваните обеми на доза, а също така не следва да има съмнения за химическа реакция между него и изпитвания химикал.
Sequencing of mutants
Ако се използват други освен добре познатите разтворители/носители, включването им следва да се подкрепи от референтни данни за съвместимостта им.
For regulatory applications, DNA sequencing of mutants is not required, particularly where a clear positive or negative result is obtained.
Препоръчва се, винаги когато е възможно, първо да се разглежда възможността за прилагането на вода като разтворител/носител.
However, sequencing data may be useful when high inter-individual variation is observed.
Положителни контроли
In these cases, sequencing can be used to rule out the possibility of jackpots or clonal events by identifying the proportion of unique mutants from a particular tissue.
Обикновено следва да се използват паралелни положителни контроли с животни.
Sequencing approximately 10 mutants per tissue per animal should be sufficient for simply determining if clonal mutants contribute to the mutant frequency;
Въпреки това за лаборатории, които са доказали пригодността си (вж. параграф 23) и редовно използват тези изследвания, във всяко изследване може да бъде включена ДНК от предходни третирани като положителни контроли животни за потвърждаване на успешността на метода.
sequencing as many as 25 mutants may be necessary to correct mutant frequency mathematically for clonality.
Такава ДНК от предходни опити следва да е получена от същите животински видове и представляващи интерес тъкани, и да е съхранявана по подходящ начин (вж. параграф 36).
Sequencing of mutants also may be considered when small increases in mutant frequency (i.e. just exceeding the untreated control values) are found.
Когато се използват паралелни положителни контроли, не е необходимо прилагането при тях да е по същия път като изпитвания химикал;
Differences in the mutant spectrum between the mutant colonies from treated and untreated animals may lend support to a mutagenic effect (29).
въпреки това, за положителните контроли следва да е известно, че предизвикват мутации в една или повече тъкани, представляващи интерес във връзка с изпитвания химикал.
Also, mutation spectra may be useful for developing mechanistic hypotheses.
Дозите на химикали за положителните контроли следва да бъдат подбрани така, че да се получат слаби или умерени ефекти, въз основа на които да може да се извърши критична оценка на параметрите и на чувствителността на изследването.
When sequencing is to be included as part of the study protocol, special care should be taken in the design of such studies, in particular with respect to the number of mutants sequenced per sample, to achieve adequate power according to the statistical model used (see paragraph 43).
Примери за химикали за положителни контроли и някои от техните прицелни тъкани са включени в таблица 1.
Number and Sex of Animals
Примери за химикали за положителни контроли и някои от техните прицелни тъкани
The number of animals per group should be predetermined to be sufficient to provide statistical power necessary to detect at least a doubling in mutant frequency.
Химикал за положителна контрола и CAS №
Group sizes will consist of a minimum of five animals;
Наименование по EINECS и EINECS №
however, if the statistical power is insufficient, the number of animals should be increased as required.
Характеристики
Male animals should normally be used.
Прицелна тъкан за мутация
There may be cases where testing females alone would be justified;
Мишки
for example, when testing human female-specific drugs, or when investigating female-specific metabolism.
N-етил-N-нитрозоуреа
If there are significant differences between the sexes in terms of toxicity or metabolism, then both males and females will be required.
[CAS № 759-73-9]
Administration Period
Мутаген с пряко действие
Based on observations that mutations accumulate with each treatment, a repeated-dose regimen is necessary, with daily treatments for a period of 28 days.
Черен дроб, бял дроб
This is generally considered acceptable both for producing a sufficient accumulation of mutations by weak mutagens, and for providing an exposure time adequate for detecting mutations in slowly proliferating organs.
Костен мозък, колон, епител на колона, черва, черен дроб, бял дроб, далак, бъбреци, гранулозни клетки от яйчниците, мъжки зародишни клетки
Alternative treatment regimens may be appropriate for some evaluations, and these alternative dosing schedules should be scientifically justified in the protocol.
Етилкарбамат (уретан)
Treatments should not be shorter than the time required for the complete induction of all the relevant metabolising enzymes, and shorter treatments may necessitate the use of multiple sampling times that are suitable for organs with different proliferation rates.
[CAS № 51-79-6]
In any case, all available information (e.g. on general toxicity or metabolism and pharmacokinetics) should be used when justifying a protocol, especially when deviating from the above standard recommendations.
Уретан
While it may increase sensitivity, treatment times longer than 8 weeks should be explained clearly and justified, since long treatment times may produce an apparent increase in mutant frequency through clonal expansion (29).
Мутаген, изисква метаболизъм, но произвежда само слаби ефекти
Dose Levels
Костен мозък, предстомах, тънко черво, черен дроб, бял дроб, далак
Dose levels should be based on the results of a dose range-finding study measuring general toxicity that was conducted by the same route of exposure, or on the results of pre-existing sub-acute toxicity studies.
2,4-диаминотолуен
Non-transgenic animals of the same rodent strain may be used for determining dose ranges.
(CAS № 95-80-7)
In the main test, in order to obtain dose response information, a complete study should include a negative control group (see paragraph 22) and a minimum of three, appropriately-spaced dose levels, except where the limit dose has been used (see paragraph 28).
етил-m-фенилендиамин
The top dose should be the Maximum Tolerated Dose (MTD).
Мутаген, изисква метаболизъм, също така положителен в Spi– изследване
The MTD is defined as the dose producing signs of toxicity such that higher dose levels, based on the same dosing regimen, would be expected to produce lethality.
Черен дроб
Chemicals with specific biological activities at low non-toxic doses (such as hormones and mitogens), and chemicals which exhibit saturation of toxicokinetic properties may be exceptions to the dose-setting criteria and should be evaluated on a case-by-case basis.
Бензо[a]пирен
The dose levels used should cover a range from the maximum to little or no toxicity.
(CAS № 50-32-8)
Limit Test
бензо[def]хризен
If dose range-finding experiments, or existing data from related rodent strains, indicate that a treatment regime of at least the limit dose (see below) produces no observable toxic effects,and if genotoxicity would not be expected based upon data from structurally related chemicals, then a full study using three dose levels may not be considered necessary.
Мутаген, изисква метаболизъм
For an administration period of 28 days (i.e. 28 daily treatments), the limit dose is 1000 mg/kg body weight/day.
Черен дроб, була,
For administration periods of 14 days or less, the limit dose is 2000 mg/kg/body weight/day (dosing schedules differing from 28 daily treatments should be scientifically justified in the protocol; see paragraph 26).
Костен мозък, гърди, колон, предстомах, жлезист стомах, сърце, черен дроб, бял дроб, мъжки зародишни клетки
Administration of Doses
Отрицателни контроли
The test chemical is usually administered by gavage using a stomach tube or a suitable intubation cannula.
Отрицателни контроли, третирани само с разтворител или носител, и в друго отношение третирани по същия начин като третираните групи, следва да се включат за всеки момент на пробовземане.
In general, the anticipated route of human exposure should be considered when designing an assay.
При липсата на предходни или публикувани данни за контроли, показващи, че избраният разтворител/носител не предизвиква никакви неблагоприятни или мутагенни ефекти, за всеки момент на пробовземане следва да бъдат включени и нетретирани контроли, за да се установи допустимостта на контролата на носител.
Therefore, other routes of exposure (such as drinking water, subcutaneous, intravenous, topical, inhalation, intratracheal, dietary, or implantation) may be acceptable where they can be justified.