natgillin/translations-raw huggingface dataset:
С помощта на микроспринцовка с вместимост 500 μl (точка 3.6) в колба с вместимост 250 ml (точка 3.1) се въвежда обем вътрешен стандартен разтвор на α-холестанол (точка 4.20), чието съдържание на холестанол съответства на приблизително 10 % от съдържанието на стероли в пробата.
Using a 500 μl microsyringe (point 3.6) introduce into the 250 ml flask (point 3.1) a volume of the α-cholestanol internal standard solution (point 4.20) containing an amount of cholestanol corresponding to approximately 10 % of the sterol content of the sample.
Така например за мостра маслиново масло с маса 5 g се прибавят 500 μl разтвор на α-холестанол (точка 4.20) и 1500 μl, ако маслиновото масло е от остатъчен материал.
For example, for 5 g of olive oil sample add 500 μl of the α-cholestanol solution (point 4.20) and 1500 μl for olive-pomace oil.
Мострата се подлага на изпарение до изсъхване на топла водна баня със слаба струя азот; след охлаждане на колбата в нея се претеглят 5 ± 0,01 g от сухата филтрувана проба.
Evaporate until dryness with a gentle current of nitrogen in a warm water bath, after cooling the flask, weigh 5 ± 0,01 g of the dry filtered sample into the same flask.
Животинските или растителните масла, съдържащи значителни количества холестерол, могат да отбележат пик с време на задържане, подобно на това при холестанола.
Animal or vegetable oils and fats containing appreciable quantities of cholesterol may show a peak having a retention time close to cholestanol.
В този случай стероловата фракция се подлага на двукратен анализ — с вътрешен стандарт и без него.
If this occurs, the sterol fraction will have to be analysed in duplicate with and without internal standard.
Добавят се 50 ml 2 N етанолов разтвор на калиев хидроксид (точка 4.2) и малко пемза, поставя се обратният хладник и се нагрява до слабо кипене, докато се извърши осапуняването (разтворът се избистря).
Add 50 ml of 2 N ethanolic potassium hydroxide solution (point 4.2) and some pumice, fit the reflux condenser and heat to gentle boiling until saponification takes place (the solution becomes clear).
Нагряването продължава още 20 минути, след което през върха на хладника се прибавят 50 ml дестилирана вода, хладникът се отделя и колбата се охлажда до приблизително 30 °C.
Continue heating for a further 20 minutes, then add 50 ml of distilled water from the top of the condenser, detach the condenser and cool the flask to approximately 30 °C.
Съдържанието на колбата се прехвърля количествено в делителна фуния с вместимост 500 ml (точка 3.2), като се използват няколко части дестилирана вода (50 ml).
Transfer the contents of the flask quantitatively into a 500 ml separating funnel (point 3.2) using several portions of distilled water (50 ml).
Добавят се приблизително 80 ml етилов етер (точка 4.10) и делителната фуния се разклаща енергично в продължение на около 60 секунди, като налягането се освобождава периодично чрез нейното обръщане и отваряне на спирателния кран.
Add approximately 80 ml of ethyl ether (point 4.10), shake vigorously for approximately 60 seconds, periodically releasing the pressure by inverting the separating funnel and opening the stopcock.
Изчаква се до получаването на пълно разделяне на две фази (бележка 2).
Allow standing until there is complete separation of the two phases (Note 2).
След това сапуненият разтвор се отлива възможно най-изчерпателно в отделна делителна фуния.
Then draw off the soap solution as completely as possible into a second separating funnel.
По същия начин се извършват още две екстракции на фазата на водно-алкохолна смес, като всеки път се използват 60 до 70 ml етилов етер (точка 4.10).
Perform two further extractions on the water-alcohol phase in the same way using 60 to 70 ml of ethyl ether (point 4.10).
Бележка 2: Всяка емулсия може да бъде разрушена с прибавяне на малки количества етанол (точка 4.11).
Note 2: Any emulsion can be destroyed by adding small quantities of ethanol (point 4.11).
Трите етерни екстракта се смесват в делителна фуния, съдържаща 50 ml вода.
Combine the three ether extracts in one separating funnel containing 50 ml of water.
Промиването с вода (50 ml) продължава, докато промивната вода престане да се оцветява в розово при добавянето на капка разтвор на фенолфталеин (точка 4.21).
Continue to wash with water (50 ml) until the wash water no longer gives a pink colour on the addition of a drop of phenolphthalein solution (point 4.21).
След отстраняване на промивната вода се филтрува безводен натриев сулфат (точка 4.5) в предварително претеглена колба с вместимост 250 ml, като фунията и филтърът се промиват с малки количества етилов етер (точка 4.10).
When the wash water has been removed, filter on anhydrous sodium sulphate (point 4.5) into a previously weighed 250 ml flask, washing the funnel and filter with small quantities of ethyl ether (point 4.10).
Разтворителят се изпарява под вакуум чрез дестилация в ротационен изпарител при температура 30 °C.
Evaporate the solvent by distillation on a rotary evaporator at 30 °C under vacuum.
Добавят се 5 ml ацетон и летливият разтворител се отстранява напълно посредством лека въздушна струя.
Add 5 ml of acetone and remove the volatile solvent completely in a gentle current of air.
Остатъкът се изсушава в пещ при температура 103 ± 2 °C в продължение на 15 минути. След това се охлажда в десикатори и се претегля с точност до 0,1 mg.
Dry the residue in the oven at 103±2 °C for 15 min. Cool in desiccators and weigh to the nearest 0,1 mg.
Отделяне на фракцията на стеролите и тритерпеновите диалкохоли (еритродиол + уваол)
Separation of the sterol and triterpene dialcohols fraction (erythrodiol + uvaol)
Подготовка на основните плаки за тънкослойна хроматография.
Preparation of the basic thin layer chromatography plates.
Плаките със силикагел (точка 4.6) се потапят на 4 cm в 0,2 N етанолов разтвор на калиев хидроксид (точка 4.5) за 10 секунди, след което се оставят да изсъхнат в лабораторна камина за два часа и накрая се поставят в пещ при 100 °C за един час.
Immerse the silica gel plates (point 4.6) about 4 cm in the 0,2 N ethanolic potassium hydroxide solution (point 4.5) for 10 seconds, then allow to dry in a fume cupboard for two hours and finally place in an oven at 100 °C for one hour.
Изваждат се от пещта и се съхраняват в десикатор за калциев хлорид (точка 3.13) до момента на употреба (така обработените плаки трябва да се използват в рамките на 15 дни).
Remove from the oven and keep in a calcium chloride desiccator (point 3.13) until required for use (plates treated in this way must be used within 15 days).
Когато за отделяне на стероловата фракция се използват основни плаки със силикагел, не е необходимо неосапуняемата фракция да се обработва с диалуминиев триоксид.
When basic silica gel plates are used to separate the sterol fraction there is no need to treat the unsaponifiable fraction with alumina.
По този начин всички съединения с киселинни свойства (мастни киселини и други) се задържат в точката на накапване и ивицата на стеролите се отделя ясно от ивицата на алифатните и тритерпеновите алкохоли.
In this way all compounds of an acid nature (fatty acids and others) are retained on the spotting line and the sterols band is clearly separated from the aliphatic and triterpene alcohols band.
В проявителната камера се налива до дълбочина около 1 cm смес от хексан и етилов етер (точка 4.24) (бележка 4).
Place hexane/ethyl ether mixture (point 4.24) (Note 4) into the development chamber, to a depth of approximately 1 cm.
Камерата се затваря с подходящ капак и се оставя най-малко за половин час на хладно, така че да се установи равновесие между течността и парите. Към вътрешните повърхности на камерата могат да се прикрепят ивици от филтърна хартия, потопени в елуента.
Close the chamber with the appropriate cover and leave thus for at least half an hour, in a cool place, so that liquid-vapour equilibrium is established strips of filter paper dipping into the eluent may be placed on the internal surfaces of the chamber.
Това намалява времето за проявяване с приблизително една трета и осигурява по-равномерно и правилно елуиране на съставките.
This reduces developing time by approximately one-third and brings about more uniform and regular elution of the components.
Необходимо е проявителната смес да се подменя за всяко изпитване, за да се получат напълно възпроизводими условия за елуиране; допуска се употребата на алтернативен разтворител 50:50 (V/V) n-хексан/етилов етер.
The developing mixture needs to be replaced for every test, in order to achieve perfectly reproducible elution conditions, alternative solvent 50:50 (V/V) n-hexane/ethyl ether may be used.
Приготвя се приблизително 5 % разтвор на неосапуняемите съставки (точка 5.1.5) в етилацетат (точка 4.12) и с помощта на микроспринцовка с вместимост 100 μl 0,3 ml от разтвора се нанасят на тънка и равномерна ивица върху долния край (2 cm) на хроматографската плака (точка 5.2.1).
Prepare an approximately 5 % solution of the unsaponifiable (point 5.1.5) in ethyl acetate (point 4.12) and, using the 100 μl microsyringe, depose 0,3 ml of the solution on a narrow and uniform streak on the lower end (2 cm) of the chromatographic plate (point 5.2.1).
На същото равнище като ивицата се накапват 2 до 3 μl от референтния разтвор (точка 4.13.), така че ивицата на стеролите и тритерпеновите диалкохоли да може да бъде разпозната след проявяването.
In line with the streak, place 2 to 3 μl of the material reference solution (point 4.13), so that the sterol and triterpene dialcohols band can be identified after developing.
Плаката се поставя в проявителната камера, приготвена съгласно изискванията в точка 5.2.2.
Place the plate in the developing chamber prepared as specified in point 5.2.2.
Околната температура се поддържа между 15 и 20 °C (бележка 5).
The ambient temperature should be maintained between 15 and 20 °C (Note 5).
Камерата се затваря веднага с капака и се оставя за елуиране, докато фронтът на разтворителя достигне приблизително 1 cm от горния ръб на плаката.
Immediately close the chamber with the cover and allow eluting until the solvent front reaches approximately 1 cm from the upper edge of the plate.
След това плаката се изважда от проявителната камера и разтворителят се изпарява под струя горещ въздух или като плаката се остави за кратко време под камина.
Remove the plate from the developing chamber and evaporate the solvent in a flow of hot air or by leaving the plate for a short while, under a hood.
Бележка 5: По-високата температура може да влоши разделянето.
Note 5: Higher temperature could worsen the separation.
Плаката се напръсква леко и равномерно с разтвора на 2,7-дихлорофлуоресцеин (точка 4.14), след което се оставя да изсъхне.
Spray the plate lightly and uniformly with the 2,7-dichlorofluorescein solution (point 4.14) and then leave to dry.
Когато плаката се наблюдава под ултравиолетова светлина, ивиците на стеролите и тритерпеновите диалкохоли могат да се разпознаят, като се изравнят с петната, получени от референтния разтвор (точка 4.13).
When the plate is observed under ultraviolet light, the sterols and triterpene dialcohols bands can be identified through being aligned with the spots obtained from the reference solution (point 4.13).
Границите на ивиците се очертават с черен молив по краищата на флуоресценцията (вж. фигура 3 относно плаките за тънкослойна хроматография).
Mark the limits of the bands along the edges of the fluorescence with a black pencil (see TLC plate figure 3).
Силикагелът в очертаните участъци се изтърква с помощта на метална шпатула.
By using a metal spatula, scrape off the silica gel of the marked area.
Отделеният надробен материал от силикагел се поставя във фунията за филтруване (точка 3.7).
Place the finely comminuted material removed into the filter funnel (point 3.7).
Прибавят се 10 ml горещ етилов ацетат (точка 4.12), разбърква се добре с металната шпатула и се филтрува под вакуум, като филтратът се събира в конусовидната колба (точка 3.8.), свързана с фунията за филтруване.
Add 10 ml of hot ethyl acetate (point 4.12), mix carefully with the metal spatula and filter under vacuum, collecting the filtrate in the conical flask (point 3.8.) attached to the filter funnel.
Утайката от фунията се промива три пъти с етилов етер (точка 4.3) (приблизително 10 ml всеки път) и филтратът се събира в същата колба, свързана с фунията; филтратът се изпарява до обем 4—5 ml и остатъчният разтвор се прехвърля в епруветка с вместимост 10 ml (точка 3.9.), която е била претеглена предварително; изпарява се до изсъхване чрез слабо подгряване под слаба струя азот; утайката се разтваря отново с няколко капки ацетон (точка 4.8), след което отново се изпарява до изсъхване.
Wash the residue in the flask three times with ethyl ether (point 4.3) (approximately 10 ml each time), collecting the filtrate in the same flask attached to the funnel, evaporate the filtrate to a volume of 4 to 5 ml, transfer the residual solution to the previously weighed 10 ml test tube (point 3.9), evaporate to dryness by mild heating, in a gentle flow of nitrogen, make up again using a few drops of acetone (point 4.8), evaporate again to dryness,
Остатъкът в епруветката трябва да се състои от фракциите на стеролите и на тритерпеновите диалкохоли.
The residue contained in the test tube must consist of the sterol and triterpene dialchols fractions.
Приготвяне на триметилсилиловите етери.
Preparation of the trimethylsilyl ethers.
В епруветката, съдържаща фракцията на стеролите и тритерпена, се добавя реагентът за силилиране (точка 4.25) (бележка 6) в съотношение 50 μl за всеки милиграм стероли и тритерпенови диалкохоли, като се избягва проникването на влага (бележка 7).
Add the silylation reagent (point 4.25) (Note 6), in the ratio of 50 μl for every milligram of sterols and triterpene dialcohols, in the test tube containing the sterol and triterpene fraction, avoiding any uptake of moisture (Note 7).
Бележка 6:
Note 6:
Готови за употреба разтвори могат да се доставят от търговската мрежа.
Ready for use solutions are available commercially.
Могат да се доставят и други реагенти за силилиране, като например бистриметилсилилтрифлуороацетамид + 1 % триметилхлоросилан, който трябва да се разреди със същия обем безводен пиридин.
Other silylation reagents, such as, for example, bistrimethylsilyl trifluor acetamide + 1 % trimethylchlorosilane, which has to be diluted with an equal volume of anhydrous pyridine, are also available.
Пиридинът може да се замени със същото количество ацетонитрил.
Pyridine can be replaced by the same amount of acetonitrile.
Епруветката се затваря и внимателно се разклаща (без да се преобръща) до пълно разтваряне на съставките.
Stopper the test tube, shake carefully (without overturning) until the compounds are completely dissolved.
Оставя се за да престои най-малко 15 минути при стайна температура, след което се центрофугира в продължение на няколко минути.
Leave to stand for at least 15 minutes at ambient temperature and then centrifuge for a few minutes.
Бистрият разтвор е готов за анализ чрез газова хроматография.
The clear solution is ready for gas chromatographic analysis.
Бележка 7:
Note 7:
Слабата опалесценция, която може да се получи, е нормална и не причинява аномалии.
The slight opalescence, which may form, is normal and does not cause any anomaly.
Формирането на бял флокулат или появата на розово оцветяване е знак за наличието на влага или за увреждането на реагента.
The formation of a white flock or the appearance of a pink colour is indicative of the presence of moisture or deterioration of the reagent.
Ако това се случи, анализът трябва да бъде повторен (само ако се използва хексаметилдисилазан/ триметилхлоросилан).
If this occurs, the test must be repeated (only if hexamethyldisilazane/trimethylchlorosilane is used).
Анализ чрез газова хроматография
Gas chromatographic analysis.
Предварителни операции, кондициониране на капилярната колона.
Preliminary operations, capillary column conditioning.
Колоната (точка 3.11) се монтира в газовия хроматограф чрез свързване на входния край с инжектора с разделяне и на изходния край — с детектора.
Fit the column (point 3.11) in the gas chromatograph, by attaching the inlet end to the split injector and the outlet end to the detector.
Извършва се обща проверка на газовохроматографския агрегат (течове от газовите вериги, ефикасност на детектора, ефикасност на разделителната система и на записващата система и т.н.).
Carry out general checks on the gas chromatograph unit (leaks from the gas circuits, detector efficiency, efficiency of the splitting system and recording system, etc.).
Ако колоната се използва за първи път, се препоръчва тя да бъде кондиционирана: през нея се прокарва слаба струя газ, след което се включва газовохроматографският агрегат и се започва постепенно нагряване до достигането на температура от поне 20 °C над температурата за експлоатация (бележка 8).
If the column is being used for the first time, it is recommended that it be subjected to conditioning: passing a gentle flow of gas through the column itself, then switch on the gas chromatography unit and begin a gradual heating, up to a temperature of at least 20 °C above the operating temperature (Note 8).
Тази температура се поддържа в продължение на най-малко два часа, след което целият агрегат се привежда в работен режим (настройка на газовата струя и разделяне, възпламеняване на пламъка, свързване с изчислителната система, настройване на температурата на колоната, детектора и инжектора и т.н.) и след това се записва сигналът с поне два пъти по-висока чувствителност от тази, която ще се използва при анализа.
Hold this temperature for at least two hours, then place the entire unit in operating mode (adjustment of gas flows and splitting, ignition of the flame, connection with the computing system, adjustment of the column, detector and injector temperature, etc.) and then record the signal with a sensitivity at least two times greater than that one intended for the analysis.
Ходът на базовата линия трябва да е прав, без пикове от какъвто и да било вид и без измествания.
The course of the base line must be linear, without peaks of any kind, and must not show drift.
Отрицателното праволинейно изместване е показател за изтичане от свръзките на колоната, а положителното изместване — за нейното неподходящо кондициониране.
A negative straight-line drift indicates leakage from the column connections; a positive drift indicates inadequate conditioning of the column.
Бележка 8:
Note 8:
Температурата на кондициониране трябва винаги да е поне с 20 °C по-ниска от максималната температура, определена за използваната неподвижна фаза.
The conditioning temperature must always be at least 20 °C less than the maximum temperature specified for the stationary phase used.
Избор на условия за работа
Choice of operating conditions.
Условията за работа са следните:
The operating conditions are as follows:
температура на колоната: 260 ± 5 °C,
Column temperature: 260 ± 5 °C;
температура на инжектора: 280—300 °C,
Injector temperature: 280-300 °C;
температура на детектора: 280—300 °C,
Detector temperature: 280-300 °C;
линейна скорост на газа носител: хелий — 20 до 30 cm/s, водород — 30 до 50 cm/s,
Linear velocity of the carrier gas: helium 20 to 35 cm/s; hydrogen 30 to 50 cm/s;
коефициент на разделяне: 1:50 до 1:100,
Splitting ratio: from 1:50 to 1:100;
чувствителност на инструмента: 4 до 16 пъти минималното намаляване,
Instrument sensitivity: from 4 to 16 times the minimum attenuation;
чувствителност на записване: 1 до 2 mV от пълната скала,
Recording sensitivity: 1 to 2 mV full scale;
количество на инжектираното вещество: 0,5 до 1 μl от разтвора на триметилсилилови етери.
Amount of substance injected: 0,5 to 1 μl of TMSE solution.
Тези условия могат да се изменят в зависимост от характеристиките на колоната и на газовия хроматограф с цел да се получат хроматограми, отговарящи на следните изисквания:
These conditions may be changed according to the characteristics of the column and gas chromatograph, so as to obtain chromatograms, which meet the following requirements:
времето на задържане на β-ситостерола трябва да е 20 ± 5 минути,
The retention time for the ß-sitosterol peak should be at 20 ± 5 min;
пикът на кампестерола трябва да е, както следва: за маслиновото масло (средно съдържание 3 %) — 20 ± 5 % от пълната скала, за соевото масло (средно съдържание 20 %) — 80 ± 10 % от пълната скала,
The campesterol peak should be: for olive oil (mean content 3 %) 20 ± 5 % of full scale; for soybean oil (average content 20 %) 80 ± 10 % of full scale;
всички налични стероли трябва да са разделени.
All the present sterols must be separated.
В добавка към изискването за разделяне на пиковете те трябва да бъдат напълно отделени един от друг, т.е. следата на всеки пик трябва да се върне напълно до основата, преди да се издигне за следващия пик.
In addition to being separated the peaks, they must also be completely resolved, i.e. the peak trace should return to the base line before leaving for the next peak.
Допуска се обаче непълно отделяне, при условие че пикът при RRT 1,02 (ситостанол) може да се изрази количествено чрез използването на перпендикуляр.
Incomplete resolution is, however, tolerated, provided that the peak at RRT 1,02 (Sitostanol) can be quantified using the perpendicular.
Провеждане на анализа
Analytical procedure
С помощта на микроспринцовката с вместимост 10 μl се изтегля 1 μl хексан, въвежда се 0,5 μl въздух и впоследствие — 0,5 до 1 μl от разтвора на пробата.
By using the 10 μl microsyringe, take 1 μl of hexane, draw in 0,5 μl of air and then 0,5 to 1 μl of the sample solution.
Буталото на спринцовката се изтегля, за да се изпразни иглата.
Raise the plunger of the syringe further, so the needle is emptied.
Иглата се въвежда през мембраната на инжектора и след една до две секунди разтворът се инжектира бързо, като иглата се изважда бавно след приблизително пет секунди.
Push the needle through the membrane of the injector and after one to two seconds, inject rapidly, and then slowly remove the needle after around five seconds.
Също така може да се използва автоматичен инжектор.
An automatic injector can be used as well.
Записването продължава до пълното елуиране на триметилсилиловите етери на наличните тритерпенови диалкохоли.
Carry out the recording until the TMSE of the present triterpene dialcohols are completely eluted.
Базовата линия трябва да продължи да отговаря на изискванията (точка 5.4.1.2).
The base line must continue to meet the requirements (point 5.4.1.2).
Идентифициране на пиковете
Peak identification
Идентифицирането на отделните пикове се извършва съгласно времената на задържане и чрез сравнение със сместа от стероли и триметилсилилови етери на тритерпеновите диалкохоли, анализирани при същите условия (вж. допълнението).
Identify individual peaks on the basis of retention times and by comparison with the mixture of sterol and triterpene dialcohols TMSE, analysed under the same conditions (see Appendix).
Стеролите и тритерпеновите диалкохоли се елуират в следния ред: холестерол, брасикастерол, ергостерол, 24-метиленхолестерол, кампестерол, кампестанол, стигмастерол, Δ7-кампестерол, Δ5,23-стигмастадиенол, клеростерол, β-ситостерол, ситостанол, Δ5-авенастерол, Δ5,24-стигмастадиенол, Δ7-стигмастенол, Δ7-авенастерол, еритродиол и уваол.
The sterols and triterpene dialcohols are eluted in the following order: cholesterol, brassicasterol, ergosterol, 24-methylen-cholesterol, campesterol, campestanol, stigmasterol, Δ7-campesterol, Δ5,23-stigmastadienol, clerosterol, ß-sistosterol, sitostanol, Δ5-avenasterol, Δ5,24-stigmastadienol, Δ7-stigmastenol, Δ7-avenasterol, erythrodiol and uvaol.
Времената на задържане за ß-ситостерол за колони SE-52 и SE-54 са посочени в таблица 1.
The retention times for ß-sitosterol, for SE-52 and SE-54 columns, are shown in Table 1.
Типичните хроматограми за някои масла са показани на фигури 1 и 2.
Figures 1 and 2 show typical chromatograms for some oils.
Количествена оценка.
Quantitative evaluation.
С помощта на изчислителната система се намира площта на пиковете на α-холестанола и на стеролите и тритерпеновите диалкохоли.
Calculate the areas of the α-cholestanol and the sterol and triterpene dialcohols peaks by using the computing system.