natgillin/translations-raw huggingface dataset:
CBPI посочва средния брой на клетъчните цикли на клетка по време на периода на експозиция на цитоБ и може да бъде използван за изчисляване на пролиферацията на клетките.
The CBPI indicates the average number of cell cycles per cell during the period of exposure to cytoB, and may be used to calculate cell proliferation.
RI посочва относителния брой на ядрата в третирани култури в сравнение с контролните култури и може да бъде използван за изчисляване на процента на цитостаза:
The RI indicates the relative number of nuclei in treated cultures compared to control cultures and can be used to calculate the % cytostasis:
Процент на цитостаза = 100 – 100(CBPIT – 1) ÷ (CBPIC – 1)
% Cytostasis = 100 – 100(CBPIT – 1) ÷ (CBPIC – 1)
както и
And:
T култура за изпитване с третирания химикал
T test chemical treatment culture
C контролни култури, третирани с носителя
C vehicle control culture
CBPI = Брой едноядрени клетки
CBPI = No. mononucleate cells
+ 2 × брой двуядрени клетки
+ 2 × No. binucleate cells
+ 3 × брой многоядрени клетки
+ 3 × No. multinucleate cells
Общ брой на клетките
Total number of cells
Поради това CBPI на стойност 1 (всички клетки са едноядрени) е еквивалентен на 100 % цитостаза.
Thus, a CBPI of 1 (all cells are mononucleate) is equivalent to 100 % cytostasis.
Цитостаза = 100 – RI
Cytostasis = 100 – RI
RI = Брой двуядрени клетки
RI = No. binucleated cells
+ 2 × брой многоядрени клетки
+ 2 × No. multinucleate cells
÷ общ брой на клетките
÷ Total number of cells
Брой двуядрени клетки
No. binucleated cells
T третирани култури
T treated cultures
C контролни култури
C control cultures
Поради това RI на стойност 53 % означава, че в сравнение с броя на клетките, които са претърпели делене, за да образуват двуядрени и многоядрени клетки в контролната култура, само 53 % от този брой са претърпели делене в третираната култура, т.е. 47 % цитостаза.
Thus, an RI of 53 % means that, compared to the numbers of cells that have divided to form binucleate and multinucleate cells in the control culture, only 53 % of this number divided in the treated culture, i.e. 47 % cytostasis.
Когато не се използва цитоБ, се препоръчва оценяване на цитотоксичността въз основа на относителния ръст в количеството клетки (RICC) или на относителното удвояване на популации (RPD) (58), тъй като и при двете се отчита съотношението на популацията на клетки, които са претърпели делене.
When cytoB is not used, evaluation of cytotoxicity based on Relative Increase in Cell Counts (RICC) or on Relative Population Doubling (RPD) is recommended (58), as both take into account the proportion of the cell population which has divided.
RICC = Увеличение на броя на клетките в третираните култури крайно – начално
RICC = Increase in number of cells in treated cultures final – starting
Увеличение на броя на клетките в контролни култури крайно – начално
Increase in number of cells in control cultures final – starting
RPD = Брой на удвояванията на популации в третирани култури
RPD = No. of Population doublings in treated cultures
Брой на удвояванията на популации в контролни култури
No. of Population doublings in control cultures
Удвояване на популации = [логаритъм (брой на клетките след третиране ÷ първоначален брой на клетките)] ÷ логаритъм 2
Population Doubling = [log (Post-treatment cell number ÷ Initial cell number)] ÷ log 2
Поради това RICC или RPD на стойност 53 % показва 47 % цитотоксичност/цитостаза.
Thus, a RICC, or a RPD of 53 % indicates 47 % cytotoxicity/cytostasis.
Чрез използване на индекса на пролиферация (PI) цитотоксичността може да бъде оценена чрез преброяване на броя на клонингите, които се състоят от 1 клетка (cl1), 2 клетки (cl2), 3 до 4 клетки (cl4) и 5 до 8 клетки (cl8)
By using a Proliferation Index (PI), cytotoxicity may be assessed via counting the number of clones consisting of 1 cell (cl1), 2 cells (cl2), 3 to 4 cells (cl4) and 5 to 8 cells (cl8)
PI = 1 × cl1
PI = 1 × cl1
+ cl2 + cl4 + cl8
+ cl2 + cl4 + cl8
PI е използван като ценен и надежден параметър за цитотоксичност и за клетъчни линии, култивирани in situ при липсата на цитоБ (25) (26) (27) (28).
The PI has been used as a valuable and reliable cytotoxicity parameter also for cell lines cultured in situ in the absence of cytoB (25) (26) (27) (28).
Препоръчителни референтни химикали за оценка на ефективността [1]
Reference chemicals recommended for assessing performance [1]
Кластогени, активни без метаболитно активиране
Clastogens active without metabolic activation
Цитозин арабинозид
Cytosine arabinoside
Митомицин С
Mitomycin C
Кластогени, изискващи метаболитно активиране
Clastogens requiring metabolic activation
Циклофосфамид
Cyclophosphamide
Анеугени
Aneugens
Вещества, даващи отрицателен резултат
Negative substances
Ди(2-етил-хексил)фталат
Di(2-ethylhexyl)phthalate
Налидиксова киселина
Nalidixic acid
Пирен
Pyrene
Референтните химикали са препоръчителните за използване химикали.
The reference chemicals are the recommended chemicals for use.
Заместване или добавяне на химикали към списъка на референтните химикали може да бъде направено, ако е известна тяхната активност и ако те индуцират микроядра чрез същите механизми за действие, както и ако е доказано, че имат отношение към химикалите, които ще бъдат изпитвани чрез използването на процедурата MNvit.
Substitution or adding of chemicals to the list of reference chemicals can be done if their activity is known and if they induce micronuclei by the same mechanisms of action, and if they are shown to be relevant to the chemicals that will be tested using the MNvit procedure.
В зависимост от целта обосновката би могла също така да включва изследване за валидиране, използващо голямо разнообразие от вещества или насочено към по-тесен спектър въз основа на химичния клас на изпитваното вещество или изпитвания механизъм на увреждане.
Depending on the purpose, justification could also include a validation study employing a broad variety of substances or focused on a narrower spectrum based on the chemical class of the test substance or the mechanism of damage being studied.
КОЖНА СЕНСИБИЛИЗАЦИЯ: ИЗСЛЕДВАНЕ НА ЛОКАЛНИТЕ ЛИМФНИ ВЪЗЛИ: DA
SKIN SENSITISATION: LOCAL LYMPH NODE ASSAY: DA
Указанията за изпитването на химикали на ОИСР и методите за изпитване на ЕС периодично се преразглеждат с оглед на научния прогрес, промяната на регулаторните нужди и съображенията, свързани с хуманното отношение към животните.
OECD Guidelines for the Testing of Chemicals and EU Test Methods are periodically reviewed in light of scientific progress, changing regulatory needs, and animal welfare considerations.
Първият метод за изпитване (МИ) (Б.42) за определянето на кожна сенсибилизация при мишки — изследването на локалните лимфни възли (LLNA, Указание за изпитване 429 на ОИСР) — бе преработен (1). Публикувана е подробна информация за валидирането на LLNA и е направен преглед на съответните научни трудове (2) (3) (4) (5) (6) (7) (8) (9).
The first Test Method (TM) (B.42) for the determination of skin sensitisation in the mouse, the Local Lymph Node Assay (LLNA; OECD Test Guideline 429) has been revised (1) The details of the validation of the LLNA and a review of the associated work have been published (2) (3) (4) (5) (6) (7) (8) (9).
При изследването LLNA се използва радиоизотопен тимидин или йод за измерване на пролиферацията на лимфоцитите и поради това изследването има ограничена употреба, когато придобиването, използването или обезвреждането на радиоактивни вещества е проблематично.
In the LLNA, radioisotopic thymidine or iodine is used to measure lymphocyte proliferation and therefore the assay has limited use where the acquisition, use, or disposal of radioactivity is problematic.
LLNA: DA (разработено от Daicel Chemical Industries, Ltd.) е нерадиоактивно изменение на LLNA, което определя количествено съдържанието на аденозин трифосфат (АТР) чрез биолуминесценция като индикатор за пролиферацията на лимфоцитите.
The LLNA: DA (developed by Daicel Chemical Industries, Ltd) is a non-radioactive modification to the LLNA, which quantifies adenosine triphosphate (ATP) content via bio-luminescence as an indicator of lymphocyte proliferation.
Методът за изпитване LLNA: DA е валидиран, преработен и препоръчван от международна група за партньорска оценка, тъй като се счита за полезен за идентифициране на химикалите, които са кожни сенсибилизатори, както и на химикалите, които не предизвикват кожна сенсибилизация (10) (11) (12) (13).
The LLNA: DA test method has been validated and reviewed and recommended by an international peer review panel as considered useful for identifying skin sensitising and non-sensitising chemicals, with certain limitations (10) (11) (12) (13).
Този МИ е предназначен за оценка на потенциала на химикалите (вещества и смеси) да предизвикват кожна сенсибилизация при животни.
This TM is designed for assessing skin sensitisation potential of chemicals (substances and mixtures) in animals.
В глава Б.6 от настоящото приложение и в Указание за изпитване 406 на ОИСР се използват изследвания върху морски свинчета, по-специално максимизиращ тест върху морски свинчета и тест на Buehler (14). LLNA (глава Б.42 от настоящото приложение; Указание за изпитване 429 на ОИСР) и двете му нерадиоактивни изменения: LLNA: DA (глава Б.50 от настоящото приложение; Указание за изпитване 442 А на ОИСР) и LLNA: BrdU-ELISA (глава Б.51 от настоящото приложение; Указание за изпитване 442 Б на ОИСР) — всички те предоставят предимство спрямо изследванията върху морски свинчета в Б.6 и Указание за изпитване 406 на ОИСР (14), що се отнася до намаляването на и усъвършенстването при използването на животни.
Chapter B.6 of this Annex and OECD Test Guideline 406 utilise guinea pig tests, notably the guinea pig maximisation test and the Buehler test (14) The LLNA (Chapter B.42 of this Annex; OECD Test Guideline 429) and the two non-radioactive modifications, LLNA: DA (Chapter B.50 of this Annex; OECD Test Guideline 442 A) and LLNA: BrdU-ELISA (Chapter B.51 of this Annex; OECD Test Guideline 442 B), all provide an advantage over the guinea pig tests in B.6 and OECD Test Guideline 406 (14) in terms of reduction and refinement of animal use.
Подобно на LLNA, LLNA: DA проучва индукционната фаза при кожна сенсибилизация и осигурява количествени данни, подходящи за оценяване на зависимостта доза—отговор.
Similar to the LLNA, the LLNA: DA studies the induction phase of skin sensitisation and provides quantitative data suitable for dose-response assessment.
Освен това способността за откриване на кожни сенсибилизатори без да е необходимо използването на радиомаркер за ДНК елиминира потенциалната възможност за професионална експозиция на радиоактивност, както и проблемите, свързани с обезвреждането на отпадъци.
Furthermore, an ability to detect skin sensitisers without the necessity for using a radiolabel for DNA eliminates the potential for occupational exposure to radioactivity and waste disposal issues.
Това от своя страна може да даде възможност за повишаване на използването на мишки за откриване на кожни сенсибилизатори, което още повече би могло да намали използването на морски свинчета за изпитване на потенциала за кожна сенсибилизация (т.е. Б.6; Указание за изпитване 406 на ОИСР) (14).
This in turn may allow for the increased use of mice to detect skin sensitisers, which could further reduce the use of guinea pigs to test for skin sensitisation potential (i.e. B.6; OECD Test Guideline 406) (14).
LLNA: DA е модифициран метод LLNA за определяне на химикалите, които са потенциални кожни сенсибилизатори, с известни ограничения.
The LLNA: DA is a modified LLNA method for identifying potential skin sensitising chemicals, with specific limitations.
Това не означава непременно, че при всички случаи следва да се използва LLNA: DA вместо LLNA или изследванията върху морски свинчета (т.е. Б.6, Указание за изпитване 406 на ОИСР) (14), а по-скоро че изпитването е равностойно и може да бъде използвано като алтернатива, при която обикновено положителните и отрицателните резултати вече не изискват допълнително потвърждаване (10) (11).
This does not necessarily imply that in all instances the LLNA: DA should be used in place of the LLNA or guinea pig tests (i.e. B.6; OECD Test Guideline 406) (14), but rather that the assay is of equal merit and may be employed as an alternative in which positive and negative results generally no longer require further confirmation (10) (11).
Тази информация следва да се вземе предвид, за да се определи дали LLNA: DA е подходящо за изпитваното веществото (с оглед на несъвместимостта на ограничен брой видове химикали с LLNA: DA [вж. точка 5] и като помощно средство при избора на доза.
This information should be considered in order to determine whether the LLNA: DA is appropriate for the test substance (given the incompatibility of limited types of chemicals with the LLNA: DA (see paragraph 5) and to aid in dose selection.
LLNA: DA е in vivo метод и вследствие на това няма да доведе до преустановяване на използването на животни при оценяването на алергичната контактна сенсибилизираща активност.
The LLNA: DA is an in vivo method and, as a consequence, will not eliminate the use of animals in the assessment of allergic contact sensitising activity.
Той обаче има потенциала да намали използването на животни за тази цел в сравнение с изследванията върху морски свинчета (Б.6; Указание за изпитване 406 на ОИСР) (14).
It has, however, the potential to reduce animal use for this purpose when compared to the guinea pig tests (B.6; OECD Test Guideline 406) (14).
Освен това LLNA: DA предлага съществено усъвършенстване (по-малко болка и страдание) на начина, по който животните се използват за изпитване на алергичната контактна сенсибилизация, тъй като за разлика от Б.6 и Указание за изпитване 406 на ОИСР LLNA: DA не изисква да се разкрие кожна свръхчувствителност след предизвикване.
Moreover, the LLNA: DA offers a substantial refinement (less pain and distress) of the way in which animals are used for allergic contact sensitisation testing, since unlike the B.6 and OECD Test Guideline 406, the LLNA: DA does not require that challenge-induced dermal hypersensitivity reactions be elicited.
Въпреки предимствата на LLNA: DA пред Б.6 и Указание за изпитване 406 на ОИСР (14), съществуват определени ограничения, които могат да доведат до необходимост от използване на Б.6 или на Указание за изпитване 406 на ОИСР (напр. изпитването на определени метали, фалшиво положителни резултати при определени кожни дразнители) [например някои видове повърхностноактивни вещества] (6) (1 и глава Б.42 от настоящото приложение) или разтворимостта на изпитваното вещество).
Despite the advantages of the LLNA: DA over B.6 and OECD Test Guideline 406 (14), there are certain limitations that may necessitate the use of B.6 or OECD Test Guideline 406 (e.g. the testing of certain metals, false positive findings with certain skin irritants (such as some surfactant-type substances) (6) (1 and Chapter B.42 in this Annex), solubility of the test substance).
Освен това химичните класове или вещества, съдържащи функционални групи, за които е доказано, че водят до възможно объркване (16), могат да доведат до необходимост от използване на изследванията върху морски свинчета (т.е. Б.6; Указание за изпитване 406 на ОИСР (14)).
In addition, chemical classes or substances containing functional groups shown to act as potential confounders (16) may necessitate the use of guinea pig tests (i.e. B.6; OECD Test Guideline 406 (14)).
В допълнение се препоръчва установените за LLNA ограничения (1 и глава Б.42 от настоящото приложение) да бъдат прилагани и по отношение на LLNA: DA (10).
Limitations that have been identified for the LLNA (1 and Chapter B.42 in this Annex) have been recommended to apply also to the LLNA: DA (10).
Освен това използването на LLNA: DA може да не е подходящо за изпитвани вещества, които влияят на нивата на аденозин трифосфат (АТР) (напр. вещества, които действат като инхибитори на АТР), или такива, които влияят на точното измерване на вътреклетъчния ATP (напр. наличието на ATP-разграждащи ензими, наличието на извънклетъчен ATP в лимфния възел).
Additionally, the use of the LLNA: DA might not be appropriate for testing substances that affect ATP levels (e.g. substances that function as ATP inhibitors) or those that affect the accurate measurement of intracellular ATP (e.g. presence of ATP degrading enzymes, presence of extracellular ATP in the lymph node).
С изключение на тези установени ограничения LLNA: DA следва да се прилага за изпитване на всички вещества, освен ако съществуват свързани с тези вещества свойства, които могат да повлияят на точността на LLNA: DA.
Other than such identified limitations, the LLNA: DA should be applicable for testing any substances unless there are properties associated with these substances that may interfere with the accuracy of the LLNA: DA.
Освен това следва да бъде обърнато внимание на възможността за гранични положителни резултати, когато са получени стойности на стимулационния индекс (SI) между 1,8 и 2,5 (вж. точка 31—32).
In addition, consideration should be given to the possibility of borderline positive results when Stimulation Index (SI) values between 1,8 and 2,5 are obtained (see paragraphs 31-32).
Това се основава на базата данни от валидирането, състояща се от 44 вещества, които използват SI ≥ 1,8 (вж. точка 6), за които изследването LLNA: DA: правилно е определило всички 32 сенсибилизатора при LLNA, но неправилно е определило три от 12-те вещества, които не са сенсибилизатори при LLNA със стойности на SI между 1,8 и 2,5 (т.е гранични положителни) (10).
This is based on the validation database of 44 substances using an SI ≥ 1,8 (see paragraph 6) for which the LLNA: DA correctly identified all 32 LLNA sensitisers, but incorrectly identified three of 12 LLNA non-sensitisers with SI values between 1,8 and 2,5 (i.e. borderline positive) (10).
При все това, тъй като същият набор от данни беше използван за определяне на стойностите на SI и изчисляване на прогнозните способности на изпитването, посочените резултати могат да представляват надценяване на реалните прогнозни способности.
However, as the same dataset was used for setting the SI-values and calculating the predictive properties of the test, the stated results may be an over-estimation of the real predictive properties.
ПРИНЦИП НА МЕТОДА ЗА ИЗПИТВАНЕ
PRINCIPLE OF THE TEST METHOD
Основният принцип, залегнал в LLNA: DA, е, че сенсибилизаторите предизвикват пролиферация на лимфоцитите в лимфните възли, дрениращи мястото на прилагане на изпитваното вещество.
The basic principle underlying the LLNA: DA is that sensitisers induce proliferation of lymphocytes in the lymph nodes draining the site of test substance application.
Съотношението на средната пролиферация във всяка третирана група спрямо тази в паралелната третирана с носителя контролна група, наречено SI, е предварително определено и следва да бъде ≥ 1,8, за да може изпитваното вещество да бъде оценено по-нататък като потенциален кожен сенсибилизатор.
The ratio of the mean proliferation in each treated group to that in the concurrent VC group, termed the SI, is determined, and should be ≥ 1,8 before further evaluation of the test substance as a potential skin sensitiser is warranted.
Описаните тук процедури се основават на измерването на съдържанието на ATP чрез използването на биолуминесценция (за която е известно, че корелира с броя на живите клетки) (17) за показване на увеличения брой на пролифериращите клетки в дрениращите аурикуларни (ушни) лимфни възли (18) (19).
The procedures described here are based on the use of measuring ATP content by bioluminescence (known to correlate with living cell number) (17) to indicate an increased number of proliferating cells in the draining auricular lymph nodes (18) (19).
Биолуминесцентният метод използва ензима луцифераза за катализиране на образуването на светлина от ATP и луциферин съгласно следната реакция:
The bioluminescent method utilises the luciferase enzyme to catalyse the formation of light from ATP and luciferin according to the following reaction:
ATP + Луциферин + O2
ATP + Luciferin + O2
Оксилуцифеpuн + AMP + PPi + CO2 + светлина
Oxyluciferin + AMP + PPi + CO2 + Light
Интензитетът на излъчваната светлина е в линейна зависимост от концентрацията на ATP и се измерва чрез използването на луминометър.
The emitted light intensity is linearly related to the ATP concentration and is measured using a luminometer.
Изпитването луциферин—луцифераза е чувствителен метод за количествено определяне на ATP и се използва в широк кръг от приложения (20).
The luciferin-luciferase assay is a sensitive method for ATP quantitation used in a wide variety of applications (20).
Изследванията за валидиране на LLNA: DA бяха проведени изключително с мишки от порода CBA/J, която поради това се счита за предпочитаната порода (12) (13).
Validation studies for the LLNA: DA were conducted exclusively with the CBA/J strain, which is therefore considered the preferred strain (12) (13).
Използват се млади възрастни мишки от женски пол, които не са раждали и не са бременни.
Young adult female mice, which are nulliparous and non-pregnant, are used.
Алтернативно могат да бъдат използвани животни от други породи и от мъжки пол, когато има достатъчно събрани данни, които доказват, че не съществува реакция при LLNA: DA, която да показва съществени различия, обусловени от пола и/или породата.
Alternatively, other strains and males may be used when sufficient data are generated to demonstrate that significant strain and/or gender-specific differences in the LLNA: DA response do not exist.
Мишките следва да бъдат групово отглеждани (21), освен ако е направена подходяща научна обосновка за индивидуално отглеждане на мишките.
Mice should be group-housed (21), unless adequate scientific rationale for housing mice individually is provided.
Положителните контролни химикали (ПК) се използват за доказване на подходящо провеждане на изпитването чрез реагиране с достатъчна и възпроизводима чувствителност на сенсибилизиращо изпитвано вещество, за което степента на реакция е добре характеризирана.
Positive control chemicals (PC) are used to demonstrate appropriate performance of the assay by responding with adequate and reproducible sensitivity to a sensitising test substance for which the magnitude of the response is well characterised.
Някои регулаторни органи също изискват ПК за всяко изпитване и поради това е препоръчително потребителите да се консултират със съответните органи преди провеждането на LLNA: DA.
Some regulatory authorities also require a PC for each study and therefore users are encouraged to consult the relevant authorities prior to conducting the LLNA: DA.
ПК следва да предизвика положителна LLNA: DA реакция при ниво на експозиция, при което се очаква нарастване на стимулационния индекс SI ≥ 1,8 спрямо отрицателната контролна група (ОК).
The PC should produce a positive LLNA: DA response at an exposure level expected to give an increase in the SI ≥ 1,8 over the negative control (NC) group.
Дозата за ПК следва да бъде избрана така, че да не причинява прекомерно кожно дразнене или системна токсичност и индукцията да е възпроизводима, но не прекомерна (например SI > 10 би се считало за прекомерно).
The PC dose should be chosen such that it does not cause excessive skin irritation or systemic toxicity and the induction is reproducible but not excessive (e.g. SI > 10 would be considered excessive).
Предпочитаните ПК са 25 % хексилканелен алдехид (№ 101-86-0 съгласно химичния регистър на Службата за химични индекси [CAS]) и 25 % евгенол (CAS номер 97-53-0) в ацетон: зехтин (4:1, об./об.).
Preferred PC are 25 % hexyl cinnamic aldehyde (Chemical Abstracts Service (CAS) number 101-86-0) and 25 % eugenol (CAS number 97-53-0) in acetone: olive oil (4:1, v/v).