natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Инжектира се 250 μL стерилен буферен физиологичен разтвор с фосфат (PBS), съдържащ 20 μСi (7,4 × 105 Bq) тритиев (3H)-метил тимидин на всички изследвани и контролни мишки през опашната вена.
Inject 250 μL of sterile phosphate-buffered saline (PBS) containing 20 μCi (7,4 × 105 Bq) of tritiated (3H)-methyl thymidine into all test and control mice via the tail vein.
Алтернативно се инжектира 250 μL стерилен PBS, съдържащ 2 μСi (7,4 × 104 Bq) 125I-йододеоксиуридин и 10–5Μ флуородеоксиуридин на всички мишки през опашната вена.
Alternatively, inject 250 μL sterile PBS containing 2 μCi (7,4 × 104 Bq) of 125I-iododeoxyuridine and 10–5M fluorodeoxyuridine into all mice via the tail vein.
Пет часа (5 h) по-късно животните се умъртвяват по хуманен начин.
Five hours (5 h) later, humanely kill the animals.
Дрениращите аурикуларни (ушни) лимфни възли от всяко ухо на мишката се отрязват и се обработват заедно в PBS за всяко животно (индивидуален подход към животните); алтернативно лимфните възли от всяко ухо се отрязват и събират в PBS за всяка третирана група (общ подход за третиране на групата).
Excise the draining auricular lymph nodes from each mouse ear and process together in PBS for each animal (individual animal approach); alternatively excise and pool the lymph nodes from each ear in PBS for each treatment group (pooled treatment group approach).
Подробности и диаграми за идентифицирането и дисекцията на лимфните възлите могат да бъдат намерени в позоваване (12).
Details and diagrams of the lymph node identification and dissection can be found in reference (12).
За допълнително наблюдение на локалната кожна реакция при основното изпитване в протокола от изпитването могат да бъдат включени допълнителни параметри като оценяване на ушната еритема или измервания на дебелината на ушите (получени или чрез използването на измервателен уред за дебелината, или чрез продупчване на ушите и определяне на теглото на взетите продупчени части при аутопсията).
To further monitor the local skin response in the main study, additional parameters such as scoring of ear erythema or ear thickness measurements (obtained either by using a thickness gauge, or ear punch weight determinations at necropsy) may be included in the study protocol.
Приготвяне на клетъчни суспензии
Preparation of cell suspensions
Клетъчна суспензия от единични клетки се приготвя от клетки от лимфните възли (КЛВ), отрязани двустранно, като се използва индивидуалният подход към животните или алтернативно общият подход за третиране на групата, чрез леко механично раздробяване през 200-микронови отвори на мрежа от неръждаема стомана или чрез друга приемлива техника за получаване на клетъчна суспензия от единични клетки.
A single-cell suspension of lymph node cells (LNC) excised bilaterally using the individual animal approach or alternatively, the pooled treatment group approach is prepared by gentle mechanical disaggregation through 200 micron-mesh stainless steel gauze or another acceptable technique for generating a single-cell suspension.
Клетките от лимфните възли се измиват двукратно с голямо количество PBS и ДНК-то се преципитира с 5 % трихлороцетна киселина (ТСА) при 4 °C в продължение на 18 часа (3).
The LNC are washed twice with an excess of PBS and the DNA is precipitated with 5 % trichloroacetic acid (TCA) at 4 °C for 18h (3).
Малките сферични топчета или повторно се суспендират в 1 ml ТСА и се прехвърлят в сцинтилационни стъкленици, съдържащи 10 mL сцинтилационна течност за 3H-преброяване, или се прехвърлят директно в гама броителни епруветки за 125I-преброяване.
Pellets are either resuspended in 1 mL TCA and transferred to scintillation vials containing 10 mL of scintillation fluid for 3H-counting, or transferred directly to gamma counting tubes for 125I-counting.
Определяне на клетъчната пролиферация (инкорпорирана радиоактивност)
Determination of cellular proliferation (incorporated radioactivity)
Инкорпорирането на 3H-метил тимидин се измерва чрез β-сцинтилационен брояч като разпадане (дезинтегриране) за минута (DPM).
Incorporation of 3H-methyl thymidine is measured by β-scintillation counting as disintegrations per minute (DPM).
Инкорпорирането на 125I-йододеоксиуридин се измерва чрез 125I-брояч и също се изразява като DPM.
Incorporation of 125I-iododeoxyuridine is measured by 125I-counting and also is expressed as DPM.
В зависимост от използвания подход инкорпорирането се изразява като DPM/мишка (индивидуален подход към животните) или DPM/третирана група (общ подход за третиране на групата).
Depending on the approach used, the incorporation is expressed as DPM/mouse (individual animal approach) or DPM/treatment group (pooled treatment group approach).
Ограничено LLNA
Reduced LLNA
В определени случаи, когато е налице регулаторна необходимост да се потвърди отрицателна прогноза за потенциален кожен сенсибилизатор, може да се използва незадължителен протокол за rLLNA (16) (17) (18), при който се използват по-малко животни, при условие че се спазват всички други протоколни спецификации за LLNA, описани в настоящия МИ.
In certain situations, when there is a regulatory need to confirm a negative prediction of skin sensitising potential, an optional rLLNA protocol (16) (17) (18) using fewer animals may be used, provided there is adherence to all other LLNA protocol specifications in this TM.
Ако се получи положителен или неясен резултат, може да е необходимо допълнително изпитване за тълкуване или изясняване на резултата.
If a positive or equivocal result is obtained, additional testing may be needed in order to interpret or clarify the finding.
Намаляването на броя подложени на различни дози групи е единствената разлика между протоколите за методите на изпитване LLNA и rLLNA и поради тази причина rLLNA не предоставя информация за зависимостта доза—реакция.
The reduction in number of dose groups is the only difference between the LLNA and the rLLNA test method protocols and for this reason the rLLNA does not provide dose-response information.
Следователно rLLNA не трябва да се използва, когато е необходима информация за зависимостта доза—реакция.
Therefore, the rLLNA should not be used when dose-response information is needed.
Както при използващото множество дози LLNA, концентрацията на изпитваното вещество, оценявана при rLLNA, следва да бъде максималната концентрация, която не причинява явна систематична токсичност и/или прекомерно локално кожно дразнене на мишката (вж. точка 18).
Like the multi-dose LLNA, the test substance concentration evaluated in the rLLNA should be the maximum concentration that does not induce overt systemic toxicity and/or excessive local skin irritation in the mouse (see paragraph 18).
НАБЛЮДЕНИЯ
OBSERVATIONS
Клинични наблюдения
Clinical observations
Всяка мишка следва да бъде внимателно наблюдавана поне веднъж дневно за всякакви клинични признаци за локално дразнене на мястото на прилагане или за систематична токсичност.
Each mouse should be carefully observed at least once daily for any clinical signs, either of local irritation at the application site or of systemic toxicity.
Всички наблюдения систематично се записват, като се водят дневници за всяка мишка.
All observations are systematically recorded with records being maintained for each mouse.
Плановете за наблюдение следва да включват критерии за бързото идентифициране на мишките, които показват признаци на систематична токсичност, прекомерно локално кожно дразнене или корозивност на кожата, за да бъдат подложени на евтаназия (37).
Monitoring plans should include criteria to promptly identify those mice exhibiting systemic toxicity, excessive local skin irritation, or corrosion of skin for euthanasia (37).
Телесни тегла
Body weights
Както е посочено в точка 25, индивидуалните телесни тегла на животните следва да бъдат измерени в началото на изпитването и при планираното умъртвяване на животните по хуманен начин.
As stated in paragraph 25, individual animal body weights should be measured at the start of the test and at the scheduled humane kill.
ИЗЧИСЛЯВАНЕ НА РЕЗУЛТАТИТЕ
CALCULATION OF RESULTS
Резултатите за всяка третирана група се изразяват чрез стимулационния индекс (SI).
Results for each treatment group are expressed as the SI.
Когато се използва индивидуалният подход към животните, SI се получава чрез разделяне на средната стойност на DPM/мишка във всяка група, изследвана с изпитваното вещество, както и в положителната контролна група, на средната стойност на DPM/мишка за контролната група, третирана само с разтворителя/носителя.
When using the individual animal approach, the SI is derived by dividing the mean DPM/mouse within each test substance group, and the PC group, by the mean DPM/mouse for the solvent/VC group.
Средната стойност на SI за контролите, третирани с носителя, е единица.
The average SI for the VCs is then one.
Когато се използва общият подход за третиране на групата, SI се получава чрез разделяне на общото радиоактивно инкорпориране за всяка третирана група на инкорпорирането на общата третирана само с носителя контролна група; така се получава средният SI.
When using the pooled treatment group approach, the SI is obtained by dividing the pooled radioactive incorporation for each treatment group by the incorporation of the pooled VC group; this yields a mean SI.
При процеса на вземане на решение, даден резултат се счита за положителен, когато SI ≥ 3.
The decision process regards a result as positive when SI ≥ 3.
При гранични резултати, обаче, могат да бъдат взети предвид и силата на зависимостта доза—отговор, статистическата значимост и съответствието на реакциите при третиране с разтворител/носител и ПК реакциите (4) (5) (6).
However, the strength of the dose-response, the statistical significance and the consistency of the solvent/vehicle and PC responses may also be used when determining whether a borderline result is declared positive (4) (5) (6).
Ако е необходимо изясняване на получените резултати, следва да се обърне внимание на различните свойства на изпитваното вещество, включително дали то има структурна връзка с познати кожни сенсибилизатори, дали причинява прекомерно кожно дразнене при мишките, както и на естеството на наблюдаваната зависимост доза—отговор.
If it is necessary to clarify the results obtained, consideration should be given to various properties of the test substance, including whether it has a structural relationship to known skin sensitisers, whether it causes excessive local skin irritation in the mouse, and the nature of the dose-response relationship seen.
Тези и други съображения подробно се обсъждат на друго място (7).
These and other considerations are discussed in detail elsewhere (7).
Събирането на данни за радиоактивността на нивото на отделните мишки дава възможност за статистически анализ на наличието и степента на зависимостта доза—отговор в данните.
Collecting radioactivity data at the level of the individual mouse will enable a statistical analysis for presence and degree of dose-response relationship in the data.
Всяка статистическа оценка би могла да включва оценка на зависимостта доза—отговор, както и подходящо направени сравнения между изпитваните групи (напр. сравнения по двойки на третираните с определени дози групи съответно с паралелната третирана с носител контролна група).
Any statistical assessment could include an evaluation of the dose-response relationship as well as suitably adjusted comparisons of test groups (e.g. pair-wise dosed group versus concurrent VC comparisons).
Статистическите анализи могат да включват например линейна регресия или изпитването на William за оценка на тенденциите в зависимостта доза—отговор и изпитването на Dunnett за сравнения по двойки.
Statistical analyses may include, e.g. linear regression or William’s test to assess dose-response trends, and Dunnett’s test for pair-wise comparisons.
При избора на подходящ метод за статистически анализ, изследователят следва да обърне внимание на възможни различия в дисперсиите и други свързани с тях проблеми, които могат да наложат трансформация на данните или провеждане на статистически анализ без параметри.
In choosing an appropriate method of statistical analysis, the investigator should maintain an awareness of possible inequalities of variances and other related problems that may necessitate a data transformation or a non-parametric statistical analysis.
Във всеки случай на изследователя може да му се наложи да извърши изчисления за SI и статистически анализи със и без определени точки с данни (понякога наричани „отклоняващи се стойности“).
In any case the investigator may need to carry out SI calculations and statistical analyses with and without certain data points (sometimes called “outliers”).
Данните следва да бъдат обобщени в табличен вид.
Data should be summarised in tabular form.
Когато се използва индивидуалният подход към животните, се посочват индивидуалните DPM стойности за отделните животни, средната за групата стойност DPM/животно, съответните граници на отклонения (напр. SD, SEM) и средният SI за всяка подложена на дадена доза група в сравнение с паралелната третирана с носителя контролна група.
When using the individual animal approach, show the individual animal DPM values, the group mean DPM/animal, its associated error term (e.g. SD, SEM), and the mean SI for each dose group compared against the concurrent VC group.
Когато се използва общият подход за третиране на групата, се посочва средната/междинната DPM стойност и средният SI за всяка подложена на дадена доза група в сравнение с паралелната третирана с носителя контролна група.
When using the pooled treatment group approach, show the mean/median DPM and the mean SI for each dose group compared against the concurrent VC group.
Протоколът от изпитването следва да включва следната информация:
The test report should contain the following information:
Изпитвани и контролни вещества:
Test and control substances:
идентификационни данни (напр. CAS и EC номера, ако са налични; източник, чистота, известни примеси, номер на партидата);
identification data (e.g. CAS and EC numbers, if available; source; purity; known impurities; lot number);
физична форма и физикохимични свойства (напр. летливост, устойчивост, разтворимост);
physical nature and physicochemical properties (e.g. volatility, stability, solubility);
ако е смес, състав и относително съотношение в проценти на елементите.
if mixture, composition and relative percentages of components;
Разтворител/носител:
Solvent/vehicle:
идентификационни данни (чистота; концентрация, където е подходящо; използвано количество);
identification data (purity; concentration, where appropriate; volume used);
обосновка за изборa на носител.
justification for choice of vehicle;
Опитни животни:
Test animals:
произход на мишките от порода CBA;
source of CBA mice;
микробиологичен статус на животните, ако е известен;
microbiological status of the animals, when known;
брой и възраст на животните;
number and age of animals;
произход на животните, условия на отглеждане, диета и т.н.
source of animals, housing conditions, diet, etc.;
подробна информация за приготвянето и прилагането на изпитваното вещество;
details of test substance preparation and application;
обосновка за избора на доза (включително резултатите от предварителното скринингово изпитване, ако е проведено);
justification for dose selection (including results from pre-screen test, if conducted);
използвани концентрации на изпитваното вещество и носителя и общо количество на приложеното изпитвано вещество;
vehicle and test substance concentrations used, and total amount of test substance applied;
подробна информация за качеството на храната и водата (включително вид/източник на диетата, водоизточник);
details of food and water quality (including diet type/source, water source);
подробна информация за графиците на третиране и вземане на проби;
details of treatment and sampling schedules;
методи за измерване на токсичността;
methods for measurement of toxicity;
критерии за считане на изпитванията за положителни или отрицателни;
criteria for considering studies as positive or negative;
подробна информация за всякакви отклонения от протокола и обяснение за това как отклонението влияе на планирането на изпитването и на резултатите от него.
details of any protocol deviations and an explanation on how the deviation affects the study design and results;
Проверка на надеждността:
Reliability check:
обобщение на резултатите от последната проверка на надеждността, включително информация за използваните изпитвано вещество, концентрация и носител;
summary of results of latest reliability check, including information on test substance, concentration and vehicle used;
данни за паралелни и/или предишни положителни контроли и паралелни отрицателни контроли в лабораторията, провеждаща изпитването;
concurrent and/or historical PC and concurrent NC data for testing laboratory;
ако не е била включена паралелна положителна контрола, се посочва датата и лабораторният доклад на най-скорошното периодично изпитване с положителна контрола и доклад, в който подробно се представят данните от предишни изпитвания с положителни контроли на лабораторията и който обосновава защо не се провежда паралелна положителна контрола.
if a concurrent PC was not included, the date and laboratory report for the most recent periodic PC and a report detailing the historical PC data for the laboratory justifying the basis for not conducting a concurrent PC;
индивидуални тегла на мишките в началото на дозирането и при планираното им умъртвяване; както и средният и граница на отклонение (напр. SD, SEM) за всяка третирана група;
individual weights of mice at start of dosing and at scheduled kill; as well as mean and associated error term (e.g. SD, SEM) for each treatment group;
признаци на токсичност и време на настъпването им, включително кожно дразнене на мястото на прилагане, ако има такова, за всяко животно;
time course of onset and signs of toxicity, including dermal irritation at site of administration, if any, for each animal;
таблица на DPM стойностите и стойностите на SI за всяка мишка (индивидуален подход към животните) или средните/медианните стойности (общ подход за третиране на групата) DPM стойности и стойности на SI за всяка третирана група;
a table of individual mouse (individual animal approach) or mean/median (pooled treatment group approach) DPM values and SI values for each treatment group;
средната стойност и съответната граница на отклонение (напр. SD, SEM) за DPM/мишка за всяка третирана група и резултатите от анализа на отклоняващите се стойности за всяка третирана група, когато се използва индивидуалният подход към животните;
mean and associated error term (e.g. SD, SEM) for DPM/mouse for each treatment group and the results of outlier analysis for each treatment group when using the individual animal approach;
изчисленият SI и подходяща мярка за вариабилността, при която се отчита вариабилността между животните както в групата с изпитваното вещество, така и в контролната група, когато се използва индивидуалният подход към животните;
calculated SI and an appropriate measure of variability that takes into account the inter-animal variability in both the test substance and control groups when using the individual animal approach;
зависимостта доза—отговор;
dose-response relationship;
статистически анализи, където е подходящо.
statistical analyses, where appropriate;
Обсъждане на резултатите:
Discussion of results:
кратък коментар на резултатите, анализ на зависимостта доза—отговор и статистически анализ, където е подходящо, със заключение дали изпитваното вещество следва да се счита за кожен сенсибилизатор.
a brief commentary on the results, the dose-response analysis, and statistical analyses, where appropriate, with a conclusion as to whether the test substance should be considered a skin sensitiser.
OECD Guideline for the Testing of Chemicals № 429, Paris.
OECD Guideline for the Testing of Chemicals No 429, Paris.
На разположение на адрес: [http://www.oecd.org/env/testguidelines]
Available at: [http://www.oecd.org/env/testguidelines]
На разположение на адрес:[http://iccvam.niehs.nih.gov/docs/immunotox_docs/llna-ps/LLNAPerfStds.pdf]
Available at: [http://iccvam.niehs.nih.gov/docs/immunotox_docs/llna-ps/LLNAPerfStds.pdf]
OECD Guideline for Testing of Chemicals № 406, OECD, Paris.
OECD Guideline for Testing of Chemicals No 406, OECD, Paris.
OECD (2005), Guidance Document on the Validation and International Acceptance of New or Updated Test Methods for Hazard Assessment, Environment, Health and Safety Monograph, Series on Testing and Assessment № 34, ENV/JM/MONO(2005)14, OECD, Paris.
OECD (2005), Guidance Document on the Validation and International Acceptance of New or Updated Test Methods for Hazard Assessment, Environment, Health and Safety Monograph, Series on Testing and Assessment No 34, ENV/JM/MONO(2005)14, OECD, Paris.
ESAC (2007), Statement on the Reduced Local Lymph Node Assay (rLLNA), European Commission Directorate General, Joint Research Centre, Institute for Health and Consumer Protection, European Centre for the Validation of Alternative Methods, April 2007.
ESAC (2007), Statement on the Reduced Local Lymph Node Assay (rLLNA), European Commission Directorate-General, Joint Research Centre, Institute for Health and Consumer Protection, European Centre for the Validation of Alternative Methods, April 2007.
На разположение на адрес: [http://ecvam.jrc.it/ft_doc/ESAC26_statement_rLLNA_20070525-1.pdf]
Available at: [http://ecvam.jrc.it/ft_doc/ESAC26_statement_rLLNA_20070525-1.pdf]
На разположение на адрес: [http://iccvam.niehs.nih.gov/]
Available at: [http://iccvam.niehs.nih.gov/]
ICCVAM (1999), The Murine Local Lymph Node Assay: A Test Method for Assessing the Allergic Contact Dermatitis Potential of Chemicals/Compounds, The Results of an Independent Peer Review Evaluation Coordinated by the Interagency Coordinating Committee on the Validation of Alternative Methods (ICCVAM) and the National Toxicology Program Interagency Center for the Evaluation of Alternative Toxicological Methods (NICEATM), NIH Publication № 99-4494, Research Triangle Park, NC: National Institute of Environmental Health Sciences.
ICCVAM (1999), The Murine Local Lymph Node Assay: A Test Method for Assessing the Allergic Contact Dermatitis Potential of Chemicals/Compounds, The Results of an Independent Peer Review Evaluation Coordinated by the Interagency Coordinating Committee on the Validation of Alternative Methods (ICCVAM) and the National Toxicology Program Interagency Center for the Evaluation of Alternative Toxicological Methods (NICEATM), NIH Publication No 99-4494, Research Triangle Park, NC: National Institute of Environmental Health Sciences.
На разположение на адрес: [http://iccvam.niehs.nih.gov/docs/immunotox_docs/llna/llnarep.pdf]
Available at: [http://iccvam.niehs.nih.gov/docs/immunotox_docs/llna/llnarep.pdf]
Assessment of the Validity of the LLNA for Testing Pesticide Formulations and Other Products, Metals, and Substances in Aqueous Solutions, NIH Publication Number 10-7512, Research Triangle Park, NC: National Institute of Environmental Health Sciences, на разположение на адрес: [http://iccvam.niehs.nih.gov/]
Assessment of the Validity of the LLNA for Testing Pesticide Formulations and Other Products, Metals, and Substances in Aqueous Solutions, NIH Publication Number 10-7512, Research Triangle Park, NC: National Institute of Environmental Health Sciences, Available at: [http://iccvam.niehs.nih.gov/]
OECD Guideline for Testing of Chemicals № 404, Paris, France.
OECD Guideline for Testing of Chemicals No 404, Paris, France.
На разположение на адрес: [http://www.oecd.org/document/40/0,3343,en_2649_34377_37051368_1_1_1_1,00.html]
Available at: [http://www.oecd.org/document/40/0,3343,en_2649_34377_37051368_1_1_1_1,00.html]
На разположение на адрес: [http://iccvam.niehs.nih.gov/methods/immunotox/fcLLNA/BRDcomplete.pdf]
Available at: [http://iccvam.niehs.nih.gov/methods/immunotox/fcLLNA/BRDcomplete.pdf]
OECD (1987), Acute Dermal Toxicity, OECD Guideline for Testing of Chemicals № 402, Paris, France.
OECD (1987), Acute Dermal Toxicity, OECD Guideline for Testing of Chemicals No 402, Paris, France.