natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Той се състои от организиран базален, спинозен и грануларен слой, и от многослоенстратум корнеум, съдържащ междуклетъчни ламелни липидни слоеве, представляващи основните липидни класове, аналогични на тези, които се наблюдават in vivo.
It consists of organised basal, spinous and granular layers, and a multilayered stratum corneum containing intercellular lamellar lipid layers representing main lipid classes analogous to those found in vivo.
Кожното дразнене, предизвикано от химикали, което се проявява с еритема и оток, е резултат от поредица от събития, започваща с проникване в роговия слой и увреждане на по-долните слоеве кератиноцити.
Chemical-induced skin irritation, manifested by erythema and oedema, is the result of a cascade of events beginning with penetration of the stratum corneum and damage to the underlying layers of keratinocytes.
Умиращите кератиноцити освобождават медиатори, които дават начало на каскадата на възпалението, действаща върху клетките в дермиса, по-специално върху стромалните и ендотелиалните клетки.
The dying keratinocytes release mediators that begin the inflammatory cascade which acts on the cells in the dermis, particularly the stromal and endothelial cells.
Разширяването и повишената пропускливост на ендотелиалните клетки водят до получаването на наблюдаваните еритема и оток (24).
It is the dilatation and increased permeability of the endothelial cells that produce the observed erythema and oedema (24).
Основаните на RhE методи измерват началните събития, настъпващи в рамките в каскадата.
The RhE-based methods measure the initiating events in the cascade.
Клетъчната жизнеспособност в моделите RhE се измерва чрез ензимно превръщане на виталния оцветител MTT [3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолиев бромид, тиазолил синьо; CAS номер 298-93-1] в синя формазанова сол, която се измерва количествено след екстракция от тъканите (25).
Cell viability in RhE models is measured by enzymatic conversion of the vital dye MTT (3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, Thiazolyl blue); CAS number 298-93-1 into a blue formazan salt that is quantitatively measured after extraction from tissues (25).
Дразнещите химикали се определят по способността им да намаляват клетъчната жизнеспособност под определени прагови нива (т.е. ≤ 50 % за дразнители от категория 2 по GHS на ООН/Регламент CLP на ЕС).
Irritant chemicals are identified by their ability to decrease cell viability below defined threshold levels (i.e. ≤ 50 %, for UN GHS/EU CLP Category 2).
В зависимост от регулаторната рамка, в която се използват резултатите от настоящия МИ, химикалите, при които клетъчната жизнеспособност е над определеното прагово ниво, могат да се считат за химикали, които не са дразнители (т.е. > 50 %, „Без категория“).
Depending on the regulatory framework in which the results of this TM are used, chemicals that produce cell viabilities above the defined threshold level, may be considered non-irritants (i.e. > 50 %, No Category).
ДОКАЗВАНЕ НА КОМПЕТЕНТНОСТ
DEMONSTRATION OF PROFICIENCY
Преди рутинното използване на който и да било от трите валидирани метода, които се придържат към настоящия МИ, лабораториите следва да докажат техническа компетентност, като използват десетте референтни химикала, посочени в таблица 1.
Prior to routine use of any of the three validated methods that adhere to this TM, laboratories should demonstrate technical proficiency, using the ten Reference Chemicals listed in Table 1.
По отношение на сходни методи, разработени съгласно настоящия МИ, или изменения на някой от трите валидирани метода, следва да бъдат спазени изискванията на стандартите за ефективност, описани в допълнение 2 от настоящия МИ, преди методът да бъде използван за регулаторно изпитване.
For similar methods developed under this TM or for modifications of any of the three validated methods, the PS requirements described in Appendix 2 of this TM should be met prior to using the method for regulatory testing.
Като част от процедурата за доказване на компетентност, е препоръчително след получаването на тъканите ползвателят да провери бариерните им свойства, както е посочено от производителя на модела на RhE.
As part of the proficiency exercise, it is recommended that the user verifies the barrier properties of the tissues after receipt as specified by the RhE model producer.
Това е особено важно, ако тъканите са били превозвани на дълго разстояние или в продължение на дълги периоди от време.
This is particularly important if tissues are shipped over long distance/time periods.
След като един метод е успешно установен и е доказана компетентност по отношение на неговото използване, такава проверка няма да бъде рутинно необходима.
Once a method has been successfully established and proficiency in its use has been demonstrated, such verification will not be necessary on a routine basis.
Когато обаче методът се използва рутинно, се препоръчва да се продължи оценяването на бариерните свойства на редовни интервали.
However, when using a method routinely, it is recommended to continue to assess the barrier properties in regular intervals.
Референтни химикали [1]
Reference Chemicals [1]
CAS №
CAS NR
Балова оценка in vivo [2]
In vivo score [2]
Категория по GHS на ООН/ Регламент CLP на ЕС
UN GHS/EU CLP Category
Нафтилоцетна киселина
naphthalene acetic acid
Изопропанол
isopropanol
Течно
Liquid
Метилов стеарат
methyl stearate
Твърдо
Solid
Хептил бутират
heptyl butyrate
(Незадължителна категория 3) [3] [4]
(Optional Cat. 3) [3], [4]
Хексил салицилат
hexyl salicylate
Цикламен алдехид
cyclamen aldehyde
Течно
Liquid Cat.
ромхексан
romohexane
Калиев хидроксид (5 % воден разтвор)
potassium hydroxide (5 % aq.)
етил-3-фенил-1-пиперазин
ethyl-3-phenyl-1-piperazine
Твърдо
Solid Cat.
Хептанал
Heptanal
По-долу са описани елементите и процедурите на метод RhE за оценка на кожно дразнене.
The following is a description of the components and procedures of a RhE method for skin irritation assessment.
Следва да бъде реконструиран модел на RhE, като той може да бъде изготвен на място или закупен от търговски източник.
A RhE model should be reconstructed, and can be in-house-prepared or obtained commercially.
Налични са стандартни работни процедури (СРП) за методите EpiSkinTM, EpiDermTM SIT (EPI-200) и SkinEthicTM RHE (26) (27) (28).
Standard Operating Procedures (SOPs) for the EpiSkinTM, EpiDermTM SIT (EPI-200) and SkinEthicTM RHE are available (26) (27) (28).
Елементи на метода за изпитване RhE
RhE Test Method Components
За реконструирането на епитела следва да се използват нетрансформирани човешки кератиноцити.
Non-transformed human keratinocytes should be used to reconstruct the epithelium.
Под функционалния рогов слой следва да има множество слоеве от жизнеспособни епителни клетки (базален, спинозен и грануларен слой).
Multiple layers of viable epithelial cells (basal layer, stratum spinosum, stratum granulosum) should be present under a functional stratum corneum.
Роговият слой следва да бъде многослоен и да съдържа основния липиден профил, за да създаде функционална бариера, която е достатъчно здрава, за да устои на бързото проникване на цитотоксични химични маркери, например натриев додецил сулфат (SDS) или Triton X-100.
Stratum corneum should be multilayered containing the essential lipid profile to produce a functional barrier with robustness to resist rapid penetration of cytotoxic marker chemicals, e.g. sodium dodecyl sulphate (SDS) or Triton X-100.
Бариерната функция следва да бъде доказана и може да бъде оценена или чрез определяне на концентрацията, при която химичен маркер намалява жизнеспособността на тъканите с 50 % (IC50) след определено време на експозиция, или чрез определяне на времето на експозиция, необходимо за намаляване на жизнеспособността с 50 % (ET50) при прилагане на химичния маркер с определена фиксирана концентрация.
The barrier function should be demonstrated and may be assessed either by determination of the concentration at which a marker chemical reduces the viability of the tissues by 50 % (IC50) after a fixed exposure time, or by determination of the exposure time required to reduce cell viability by 50 % (ET50) upon application of the marker chemical at a specified, fixed concentration.
Задържащите свойства на модела на RhE следва да предотвратяват преминаването на материал около роговия слой към жизнеспособната тъкан, което би довело до неадекватно моделиране на експозицията на кожата.
The containment properties of the RhE model should prevent the passage of material around the stratum corneum to the viable tissue, which would lead to poor modelling of skin exposure.
Моделът на RhE следва да не е заразен с бактерии, вируси, микоплазма или гъбички.
The RhE model should be free of contamination by bacteria, viruses, mycoplasma, or fungi.
Функционални условия
Functional conditions
Използваното изпитване за определяне на величината на жизнеспособността е изпитването с MTT (25).
The assay used for determining the magnitude of viability is the MTT-assay (25).
Ползвателите на модела на RhE следва да гарантират, че всяка използвана партида от модела на RhE отговаря на определените критерии за отрицателната контрола (ОК).
The RhE model users should ensure that each batch of the RhE model used meets defined criteria for the negative control (NC).
Оптичната плътност (ОП) на разтворителя, който се използва за екстракцията, сама по себе си следва да бъде достатъчно малка, т.е. ОП < 0.1.
The optical density (OD) of the extraction solvent alone should be sufficiently small, i.e. OD< 0,1.
Разработчикът/доставчикът на модела на RhE определя интервал на приемливост (горна и долна граница) за стойностите на ОП на отрицателната контрола (при условията на метода за изпитване за кожно дразнене), като интервалите на приемливост за трите валидирани метода са дадени в таблица 2.
An acceptability range (upper and lower limit) for the negative control OD values (in the Skin Irritation Test Method conditions) are established by the RhE model developer/supplier, and the acceptability ranges for the 3 validated methods are given in Table 2.
Следва да се документира, че тъканите, третирани с ОК, са стабилни като култура (дават сходни измервания на жизнеспособността) за периода на продължителност на експозицията при изпитването.
It should be documented that the tissues treated with NC are stable in culture (provide similar viability measurements) for the duration of the test exposure period.
Интервали на приемливост за стойностите на ОП на отрицателната контрола
Acceptability ranges for negative control OD values
Долна граница на приемливост
Lower acceptance limit
Горна граница на приемливост
Upper acceptance limit
Роговият слой и липидният му състав следва да бъдат достатъчни, за да устоят на бързото проникване на цитотоксични химични маркери, например SDS или Triton X-100, оценено с IC50 или ET50 (таблица 3).
The stratum corneum and its lipid composition should be sufficient to resist the rapid penetration of cytotoxic marker chemicals, e.g. SDS or Triton X-100, as estimated by IC50 or ET50 (Table 3).
Следва да бъде проведено хистологично изследване на модела на RhE, за да се докаже структура, подобна на човешки епидермис (включително на многослойния рогов слой).
Histological examination of the RhE model should be performed demonstrating human epidermis-like structure (including multilayered stratum corneum).
Резултатите от положителните контролни химикали (ПК) и отрицателните контроли (ОК) на метода за изпитване следва да доказват възпроизводимост с течение на времето.
The results of the positive control chemical (PC) and negative controls (NC) of the test method should demonstrate reproducibility over time.
Контрол на качеството (КК)
Quality control (QC)
Разработчикът/доставчикът на модела на RhE следва да гарантира и докаже, че всяка използвана партида от модела на RhE отговаря на определени критерии за пускане в обращение на продукцията, сред които най-значими са тези за жизнеспособността (точка 17), бариерната функция (точка 18) и морфологията (точка 19).
The RhE model developer/supplier should ensure and demonstrate that each batch of the RhE model used meets defined production release criteria, among which those for viability (paragraph 17), barrier function (paragraph 18) and morphology (paragraph 19) are the most relevant.
Тези данни следва да бъдат предоставени на ползвателите на метода, така че те да могат да включат тази информация в протокола от изпитването.
These data should be provided to the method users, so that they are able to include this information in the test report.
Разработчикът/доставчикът на модела на RhE (или изследователят, ако се използва собствен модел) следва да определи интервал на приемливост (горна и долна граница) за IC50 или ET50.
An acceptability range (upper and lower limit) for the IC50 or the ET50 should be established by the RhE model developer/supplier (or investigator when using an in-house model).
За надеждно прогнозиране на класификацията на дразненето могат да се приемат само резултати, получени с отговарящи на изискванията тъкани.
Only results produced with qualified tissues can be accepted for reliable prediction of irritation classification.
Интервалите на приемливост за трите валидирани метода са дадени като пример в таблица 3.
As an example, the acceptability ranges for the three validated methods are given in Table 3.
асово третиране с SDS) (26)
(18 hours treatment with SDS) (26)
Прилагане на изпитваните и контролните химикали
Application of the Test and Control Chemicals
За всеки изпитван химикал и за контролите във всяко изпитване следва да се използват най-малко три репликата.
At least three replicates should be used for each test chemical and for the controls in each run.
За течни, както и за твърди вещества следва да се прилага достатъчно количество от изпитвания химикал за равномерното покриване на повърхността на епидермиса, като същевременно се избягва прилагането на изобилна доза, т.е. следва да се използват най-малко 25 μL/cm2 или 25 mg/cm2.
For liquids as well as solids, sufficient amount of test chemical should be applied to uniformly cover the epidermis surface while avoiding an infinite dose, i.e. a minimum of 25 μL/cm2 or 25 mg/cm2 should be used.
Преди прилагането на твърдите вещества повърхността на епидермиса следва да се овлажни с дейонизирана или дестилирана вода, за да се подобри контакта между изпитвания химикал и повърхността на епидермиса.
For solids, the epidermis surface should be moistened with deionised or distilled water before application, to improve contact between the test chemical and the epidermis surface.
Когато е възможно, твърдите вещества следва да се изпитват под формата на фин прах.
Whenever possible, solids should be tested as a fine powder.
В края на периода на експозиция изпитваният химикал следва внимателно да се измие от повърхността на епидермиса с буферен воден разтвор или 0,9 % NaCl.
At the end of the exposure period, the test chemical should be carefully washed from the epidermis surface with aqueous buffer, or 0,9 % NaCl.
В зависимост от това кой от трите валидирани метода на RhE се използва, периодът на експозиция варира между 15 и 60 минути, а температурата на инкубация — между 20 и 37 °C.
Depending on which of the three validated RhE methods is used, the exposure period varies between 15 and 60 minutes, and the incubation temperature between 20 and 37 °C.
Тези периоди на експозиция и температури са оптимизирани за всеки метод на RhE и представляват различните присъщи свойства на методите, за подробности вж. стандартните работни процедури (СРП) за методите (26) (27) (28).
These exposure periods and temperatures are optimised for each RhE method and represent the different intrinsic properties of the methods, for details, see the Standard Operating Procedures (SOPs) for the methods (26) (27) (28).
За да се докаже, че жизнеспособността (с ОК), бариерната функция и получената в резултат тъканна чувствителност (с ПК) на тъканите са в границите на определен от предишни изследвания интервал на приемливост, при всяко изпитване следва да се използват паралелни отрицателни (ОК) и положителни контроли (ПК).
Concurrent NC and PC should be used in each run to demonstrate that viability (with the NC), barrier function and resulting tissue sensitivity (with the PC) of the tissues are within a defined historical acceptance range.
За положителна контрола е предложен 5 % воден разтвор на SDS.
The suggested PC is 5 % aqueous SDS.
Като химикали за отрицателни контроли са предложени вода или буферен физиологичен разтвор с фосфат (PBS).
The suggested NC chemicals are water or phosphate buffered saline (PBS).
Измервания на клетъчната жизнеспособност
Cell Viability Measurements
Най-важният елемент на процедурата за изпитване е измерванията на жизнеспособността да не се провеждат веднага след експозицията на изпитваните химикали, а в чиста среда след достатъчно дълъг инкубационен период след третирането на промитите тъкани.
The most important element of the test procedure is that viability measurements are not performed immediately after the exposure to the test chemicals, but after a sufficiently long post-treatment incubation period of the rinsed tissues in fresh medium.
Този период позволява както възстановяването от леките цитотоксични ефекти, така и появата на ясно изразени цитотоксични ефекти.
This period allows both for recovery from weak cytotoxic effects and for appearance of clear cytotoxic effects.
По време на фазата на оптимизиране на изпитването (11) (12) (13) (14) (15) беше доказано, че оптималният период на инкубация след третирането е 42 часа.
The test optimisation phase (11) (12) (13) (14) (15) demonstrated that a 42 hours post-treatment incubation period was optimal.
Изпитването с MTT е валидиран количествен метод, който следва да се използва за измерване на клетъчната жизнеспособност съгласно настоящия МИ.
The MTT assay is a validated quantitative method which should be used to measure cell viability under this TM.
Кожната проба се поставя в разтвор на MTT с подходяща концентрация (например 0,3—1 mg/mL) за 3 часа.
The tissue sample is placed in MTT solution of appropriate concentration (e.g. 0,3-1 mg/mL) for 3 hours.
След това утаеният син формазанов продукт се извлича от тъканта с помощта на разтворител (например изопропанол, киселинен изопропанол), а концентрацията на формазан се измерва, като се определи ОП при 570 nm, използвайки ширина на филтърната дължина на вълната най-много ± 30 nm.
The precipitated blue formazan product is then extracted from the tissue using a solvent (e.g. isopropanol, acidic isopropanol), and the concentration of formazan is measured by determining the OD at 570 nm using a filter band pass of maximum ± 30 nm.
Оптичните свойства на изпитвания химикал или химичното му въздействие върху MTT могат да повлияят на изпитването, като доведат до погрешна оценка на жизнеспособността (защото изпитваният химикал може да предотврати, да предизвика или да промени оцветяването).
Optical properties of the test chemical or its chemical action on the MTT may interfere with the assay leading to a false estimate of viability (because the test chemical may prevent or reverse the colour generation as well as cause it).
Това може да се случи, ако определен изпитван химикал не бъде напълно отстранен от тъканта чрез промиване или когато проникне през епидермиса.
This may occur when a specific test chemical is not completely removed from the tissue by rinsing or when it penetrates the epidermis.
Ако изпитваният химикал действа пряко върху MTT (редуктор на МТТ), ако е естествено оцветен или се оцветява по време на третиране на тъканта, следва да се използват допълнителни контроли, за да се открие и коригира въздействието на изпитвания химикал върху техниката за измерване на жизнеспособността.
If a test chemical acts directly on the MTT (MTT-reducer), is naturally coloured, or becomes coloured during tissue treatment, additional controls should be used to detect and correct for test chemical interference with the viability measurement technique.
Подробно описание на това как да се коригира пряката редукция на MTT и въздействията на оцветителите е налично в СРП за трите валидирани метода (26) (27) (28).
Detailed description of how to correct direct MTT reduction and interferences by colouring agents is available in the SOPs for the three validated methods (26) (27) (28).
Критерии за приемливост
Acceptability Criteria
За всеки модел, използващ валидни партиди на модели на RhE (вж. точка 21), тъканите, третирани с отрицателната контрола, следва да показват оптична плътност, отразяваща състоянието на тъканите, които са преминали през етапите по транспортиране и приемане, както и през всички процедури по протокола.
For each method using valid RhE model batches (see paragraph 21), tissues treated with the NC should exhibit OD reflecting the quality of the tissues that followed shipment, receipt steps and all protocol processes.
Стойностите на оптичната плътност на контролите не трябва да са по-ниски от установените граници от предишни изпитвания.
Control OD values should not be below historically established boundaries.
По подобен начин тъканите, третирани с положителната контрола, т.е. 5 % воден разтвор на SDS, следва да отразяват способността им да реагират на дразнещ химикал при условията на МИ (26) (27) (28).
Similarly, tissues treated with the PC, i.e. 5 % aqueous SDS, should reflect their ability to respond to an irritant chemical under the conditions of the TM(26) (27) (28).
Следва да се определят съответни и подходящи критерии за оценка на вариабилността между тъканните репликати (например ако се използват стандартните отклонения (СО), те следва да бъдат в рамките на 1-странен интервал на толерантност от 95 %, изчислен на базата на данни от предишни изследвания; за СО на ВРМ < 18 %).
Associated and appropriate measures of variability between tissue replicates should be defined (e.g. if standard deviations (SD) are used they should be within the 1-sided 95 % tolerance interval calculated from historical data; for the VRM SD < 18 %).
Интерпретация на резултатите и модел за прогнозиране
Interpretation of Results and Prediction Model
Получените стойности за оптична плътност за всеки изпитван химикал могат да се използват за изчисляването на процентната жизнеспособност, нормализирана спрямо ОК, която е определена на 100 %.
The OD values obtained with each test chemical can be used to calculate the percentage of viability normalised to NC, which is set to 100 %.
Граничната стойност за процента на клетъчната жизнеспособност, която разграничава дразнещите от некласифицираните изпитвани химикали, и статистическата(ите) процедура(и), използвана(и) за оценка на резултатите и определяне на дразнещите химикали, следва да бъдат ясно определени и документирани, както и доказано целесъобразни.
The cut-off value of percentage cell viability distinguishing irritant from non-classified test chemicals and the statistical procedure(s) used to evaluate the results and identify irritant chemicals should be clearly defined, documented, and proven to be appropriate.
Граничните стойности за прогнозиране на дразненето са дадени по-долу:
The cut-off values for the prediction of irritation are given below:
Изпитваният химикал се счита за дразнещ кожата в съответствие с категория 2 по GHS на ООН/Регламент CLP на ЕС, ако жизнеспособността на тъканта след експозиция и инкубация след третирането е по-малка или равна (≤) на 50 %.
the test chemical is considered to be irritant to skin in accordance with UN GHS/EU CLP Category 2 if the tissue viability after exposure and post-treatment incubation is less than or equal (≤) to 50 %.
В зависимост от регулаторната рамка, в която се използват резултатите от настоящия МИ, изпитваният химикал може да се счита за недразнещ кожата в съответствие с категорията „Без категория“ по GHS на ООН/Регламент CLP на ЕС, ако жизнеспособността на тъканта след експозиция и инкубация след третирането е по-голяма (>) от 50 %.
depending on the regulatory framework in which the results of this TM are used, the test chemical may be considered to be non-irritant to skin in accordance with UN GHS/EU CLP No Category if the tissue viability after exposure and post-treatment incubation is more than (>) 50 %.