natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Разтворимостта във вода, коефициентът за разделяне октанол/вода (Pow) и парното налягане на изпитваното вещество трябва да са известни и да е на разположение валидиран метод за количествено измерване на веществото в изпитваните разтвори с отчетена ефективност на възстановяването и граница на откриването.
The water solubility, octanol water partition coefficient (Pow) and the vapour pressure of the test substance should be known, and a validated method for the quantification of the substance in the test solutions with reported recovery efficiency and limit of detection should be available.
РЕФЕРЕНТНО ВЕЩЕСТВО
REFERENCE SUBSTANCE
Референтното(ите) вещество(а), като например 3,5-дихлорфенол, използван в международното кръгово изпитване (4), може(гат) да бъде(ат) изпитвано(и) като средство за проверка на процедурата за изпитване.
Reference substance(s), such as 3,5-dichlorophenol used in the international ring test (4), may be tested as a means of checking the test procedure.
Калиевият дихромат също може да бъде използван като референтно вещество за зелените водорасли.
Potassium dichromate can also be used as a reference substance for green algae.
Желателно е референтното вещество да се изпитва най-малко два пъти годишно.
It is desirable to test a reference substance at least twice a year.
ВАЛИДНОСТ НА ИЗПИТВАНЕТО
VALIDITY OF THE TEST
За да е валидно изпитването, трябва да бъдат изпълнени следните критерии за резултати:
For the test to be valid, the following performance criteria should be met:
Биомасата в контролните култури би трябвало да се е увеличила експоненциално с фактор най-малко 16 в рамките на 72-часовия период на изпитване.
The biomass in the control cultures should have increased exponentially by a factor of at least 16 within the 72-hour test period.
Това съответства на специфична скорост на растеж от 0,92 ден–1.
This corresponds to a specific growth rate of 0,92 day–1.
За най-често използваните видове скоростта на растеж обикновено е значително по-висока (вижте допълнение 1).
For the most frequently used species, the growth rate is usually substantially higher (see Appendix 1).
Този критерий може да не бъде изпълнен, когато се използват видове, които растат по-бавно от тези, изброени в допълнение 1.
This criterion may not be met when species that grow slower than those listed in Appendix 1 are used.
В този случай периодът на изпитване се удължава, за да се получи поне 16-кратен растеж на контролните култури, като същевременно растежът трябва да бъде експоненциален през целия период на изпитване.
In this case, the test period should be extended to obtain at least a 16-fold growth in control cultures, while the growth has to be exponential throughout the test period.
Периодът на изпитване може да бъде намален на поне 48 часа, за да се поддържа неограничен експоненциален растеж по време на изпитването, при условие че се постига минималният фактор за умножение 16.
The test period may be shortened to at least 48 h to maintain unlimited exponential growth during the test, as long as the minimum multiplication factor of 16 is reached.
Средният коефициент на вариация за специфични скорости на растеж по сектори (дни 0—1, 1—2 и 2—3 за 72-часови изпитвания) в контролните култури (вижте раздел 1.2, „коефициент на вариация“) не трябва да превишава 35 %.
The mean coefficient of variation for section-by-section specific growth rates (days 0-1, 1-2 and 2-3, for 72-hour tests) in the control cultures (see section 1.2 under ‘coefficient of variation’) must not exceed 35 %.
Вижте втората алинея от раздел 2.2.1 за изчисляване на специфичната скорост на растеж по сектори.
See the second paragraph in section 2.2.1 for the calculation of section-by-section specific growth rate.
Този критерий се прилага за средната стойност на коефициентите на вариация, изчислени за повторните контролни култури.
This criterion applies to the mean value of coefficients of variation calculated for replicate control cultures.
Коефициентът на вариация на средните специфични скорости на растеж по време на целия период на изпитване в повторни контролни култури не трябва да превишава 7 % в изпитванията с Pseudokirchneriella subcapitata и Desmodesmus subspicatus.
The coefficient of variation of average specific growth rates during the whole test period in replicate control cultures must not exceed 7 % in tests with Pseudokirchneriella subcapitata and Desmodesmussubspicatus.
За други, по-рядко изпитвани видове, стойността не бива да превишава 10 %.
For other less frequently tested species, the value should not exceed 10 %.
Съдовете за изпитване и другите апарати, които ще бъдат в контакт с изпитваните разтвори, трябва да бъдат направени изцяло от стъкло или друг химически инертен материал.
Test vessels and other apparatus, which will come into contact with the test solutions should be made entirely of glass or other chemically inert material.
Предметите трябва да бъдат добре почистени, за да се гарантира, че няма органични или неорганични замърсители, които да повлияят на растежа на водораслите или върху състава на изпитваните разтвори.
The items should be thoroughly washed to ensure that no organic or inorganic contaminants may interfere with the algal growth or composition of the test solutions.
Съдовете за изпитване обикновено са стъклени колби с размери, които позволяват достатъчен обем на културата за измервания по време на изпитването и достатъчен пренос на маса от CO2 от атмосферата (вижте втората алинея от раздел 1.8.9).
The test vessels will normally be glass flasks of dimensions that allow a sufficient volume of culture for measurements during the test and a sufficient mass transfer of CO2 from the atmosphere (see the second paragraph in section 1.8.9).
Отбележете, че обемът на течността трябва да бъде достатъчен за аналитични изчисления (вижте петата алинея от раздел 1.8.11).
Note that the liquid volume must be sufficient for analytical determinations (see the fifth paragraph in section 1.8.11).
В допълнение ще се изискват някои или всички от следните уреди:
In addition, some or all of the following equipment will be required:
Апаратура за култивиране: препоръчва се шкаф или камера, в който/която избраната инкубационна температура да може да бъде поддържана при ±2 °C.
Culturing apparatus: a cabinet or chamber is recommended, in which the chosen incubation temperature can be maintained at ±2 °C.
Уреди за измерване на светлината: важно е да се отбележи, че методът на измерване на интензитета на светлината, и по-специално видът на рецептора (колектора), ще окаже въздействие върху измерената стойност.
Light measurement instruments: it is important to note that the method of measurement of light intensity, and in particular the type of receptor (collector), will affect the measured value.
Препоръчително е измерванията да бъдат направени с използването на сферичен (4 π) рецептор (който реагира на пряка и отразена светлина от всички ъгли над и под равнината на измерване), или 2 π рецептор (който реагира на светлината от всички ъгли над равнината на измерване).
Measurements should preferably be made using a spherical (4 π) receptor (which responds to direct and reflected light from all angles above and below the plane of measurement), or a 2 π receptor (which responds to light from all angles above the measurement plane).
Апарат за определяне на биомасата от водорасли.
Apparatus to determine algal biomass.
Преброяването на клетки, което е най-често използваният сурогатен параметър за биомаса от водорасли, може да бъде направено с използването на електронен брояч на частици, микроскоп с броячна камера или поточен цитометър.
Cell count, which is the most frequently used surrogate parameter for algal biomass, may be made using an electronic particle counter, a microscope with counting chamber, or a flow cytometer.
Другите заместители на биомасата могат да бъдат измерени с използването на поточен цитометър, флуориметър, спектрофотометър или колориметър.
Other biomass surrogates can be measured using a flow cytometer, fluorimeter, spectrophotometer or colorimeter.
Полезно е да се изчисли коефициент на превръщане, свързващ броя на клетките със сухото тегло.
A conversion factor relating cell count to dry weight is useful to calculate.
За да се осигурят полезни измервания при ниски концентрации на биомаса при използването на спектрофотометър, може да е необходимо да се използват кювети с дължина на светлинния път поне 4 cm.
In order to provide useful measurements at low biomass concentrations when using a spectrophotometer, it may be necessary to use cuvettes with a light path of at least 4 cm.
Изпитвани организми
Test organisms
Могат да се използват няколко вида неприкрепени микроводорасли и цианобактерии.
Several species of non-attached microalgae and cyanobacteria may be used.
Щамовете, изброени в допълнение 1, са демонстрирани като подходящи при използването на процедурата на изпитване, определена в настоящия метод на изпитване.
The strains listed in Appendix 1 have been shown to be suitable using the test procedure specified in this Testing Method.
Ако се използват други видове, следва да се докладва щамът и/или произходът.
If other species are used, the strain and/or origin should be reported.
Трябва да бъде потвърдено, че експоненциалният растеж на избраните изпитвани водорасли може да бъде поддържан по време на периода на изпитване при преобладаващите условия.
It has to be confirmed that exponential growth of the selected test alga can be maintained throughout the test period under the prevailing conditions.
Среда на растеж
Growth medium
Препоръчват се две алтернативни среди на растеж, средите на ОИСР и на AAP.
Two alternative growth media, the OECD and the AAP medium, are recommended.
Съставът на тези среди е показан в допълнение 2.
The compositions of these media are shown in Appendix 2.
Отбележете, че първоначалната стойност на pH и буферната способност (регулираща увеличаването на pH) на двете среди са различни.
Note that the initial pH value and the buffering capacity (regulating pH increase) of the two media are different.
Следователно резултатите от изпитванията могат да бъдат различни в зависимост от използваната среда, особено когато се изпитват йонизиращи вещества.
Therefore the results of the tests may be different depending on the medium used, particularly when testing ionising substances.
Може да е необходимо изменение на средата на растеж за определени цели, например когато се изпитват метали или хелатни агенти или за изпитване при различни стойности на pH.
Modification of the growth media may be necessary for certain purposes, e.g. when testing metals and chelating agents or testing at different pH values.
Използването на изменена среда трябва да бъде подробно описано и обосновано (3)(4).
Use of a modified medium must be described in detail and justified (3)(4).
Начална концентрация на биомасата
Initial biomass concentration
Началната биомаса в изпитваните култури трябва да бъде еднаква във всички изпитвани култури и достатъчно ниска, за да позволява експоненциален растеж през целия инкубационен период без риск от изчерпване на хранителните вещества.
The initial biomass in the test cultures must be the same in all test cultures and sufficiently low to allow exponential growth throughout the incubation period without risk of nutrient depletion.
Началната биомаса не трябва да превишава 0,5 mg/l като сухо тегло.
The initial biomass should not exceed 0,5 mg/l as dry weight.
Препоръчват се следните начални концентрации на клетки:
The following initial cell concentrations are recommended:
клетки/ml
cells/ml
Концентрации на изпитваното вещество
Concentrations of test substance
Диапазонът на концентрация, в който е възможно да настъпят въздействия, може да бъде определен на базата на резултати от изпитвания за откриване на диапазон.
The concentration range in which effects are likely to occur may be determined on the basis of results from range-finding tests.
За крайното определящо изпитване трябва да се изберат поне пет концентрации, подредени в геометрична поредица с фактор, който не превишава 3,2.
For the final definitive test, at least five concentrations arranged in a geometric series with a factor not exceeding 3,2 should be selected.
За изпитвани вещества, показващи полегата крива на реагиране на концентрация, може да бъде обоснован и по-висок фактор.
For test substances showing a flat concentration response curve, a higher factor may be justified.
Поредицата от концентрации трябва по възможност да обхваща диапазона, при който се постига 5—75 % потискане на скоростта на растеж на водораслите.
The concentration series should preferably cover the range causing 5-75 % inhibition of algal growth rate.
Повторни проби и контролни проби
Replicates and controls
Планът на изпитването следва да включва три повторни проби от всяка една изпитвана концентрация.
The test design should include three replicates at each test concentration.
Ако не се изисква определяне на NOEC, планът на изпитването може да бъде изменен, за да се увеличи броят на концентрациите и да се намали броят на повторните проби за всяка концентрация.
If determination of the NOEC is not required, the test design may be altered to increase the number of concentrations and reduce the number of replicates per concentration.
Броят на контролните повторни проби трябва да бъде поне три и в най-добрия случай следва да бъде два пъти повече от броя на повторните проби, използвани за всяка една изпитвана концентрация.
The number of control replicates must be at least three, and ideally should be twice the number of replicates used for each test concentration.
Може да бъде приготвен отделен набор от изпитвани разтвори за аналитично определяне на концентрациите на изпитваното вещество (вижте четвърта и шеста алинея от раздел 1.8.11).
A separate set of test solutions may be prepared for analytical determinations of test substance concentrations (see the fourth and sixth paragraphs in section 1.8.11).
Когато се използва разтворител, за да се направи разтворимо изпитваното вещество, в плана на изпитването трябва да бъдат включени допълнителни контролни проби, съдържащи разтворителя в същата концентрация, каквато е използвана в изпитваните култури.
When a solvent is used to solubilise the test substance, additional controls containing the solvent at the same concentration as used in the test cultures must be included in the test design.
Подготвяне на инокулант
Preparation of inoculum culture
За да се адаптират изпитваните водорасли към условията за изпитване и да се гарантира, че водораслите са във фаза на експоненциален растеж, когато се използват за инокулация на изпитваните разтвори, се приготвя инокулант в изпитваната среда 2—4 дни преди започване на изпитването.
In order to adapt the test alga to the test conditions and ensure that the algae are in the exponential growth phase when used to inoculate the test solutions, an inoculum culture in the test medium is prepared 2-4 days before start of the test.
Биомасата от водорасли следва да бъде приспособена, за да се осигури преобладаване на експоненциалния растеж в инокуланта до започване на изпитването.
The algal biomass should be adjusted in order to allow exponential growth to prevail in the inoculum culture until the test starts.
Инокулантът се инкубира при същите условия като изпитваните култури.
The inoculum culture shall be incubated under the same conditions as the test cultures.
Измерете увеличаването на биомасата в инокуланта, за да гарантирате, че растежът е в рамките на нормалния диапазон за изпитвания щам при условията за култивиране.
Measure the increase in biomass in the inoculum culture to ensure that growth is within the normal range for the test strain under the culturing conditions.
В допълнение 3 е описан пример за процедурата на култивиране на водорасли.
An example of the procedure for algal culturing is described in Appendix 3.
За да се избегне синхронното делене на клетките по време на изпитването, би могло да се наложи втори стадий в размножаването на инокуланта.
To avoid synchronous cell divisions during the test, a second propagation step of the inoculum culture may be required.
Приготвяне на изпитваните разтвори
Preparation of test solutions
Всички разтвори за изпитване трябва да съдържат еднакви концентрации на средата на растеж и началната биомаса на изпитваните водорасли.
All test solutions must contain the same concentrations of growth medium and initial biomass of test algae.
Изпитваните разтвори на избраните концентрации обикновено се приготвят чрез смесване на стандартен разтвор на изпитваното вещество със средата на растеж и инокуланта.
Test solutions of the chosen concentrations are usually prepared by mixing a stock solution of the test substance with growth medium and inoculum culture.
Стандартните разтвори обикновено се приготвят чрез разтваряне на веществото в изпитваната среда.
Stock solutions are normally prepared by dissolving the substance in test medium.
Разтворители, като например ацетон, терт-бутилов алкохол и диметилформамид, могат да се използват като носители за добавяне на вещества със слаба водоразтворимост към изпитваната среда (2)(3).
Solvents, e.g. acetone, t-butyl alcohol and dimethyl formamide, may be used as carriers to add substances of low water solubility to the test medium (2)(3).
Концентрацията на разтворителя не трябва да превишава 100 µl/l и към всички култури (включително и контролните) в изпитваните серии следва да се добави същата концентрация на разтворителя.
The solvent concentration should not exceed 100 µl/l, and the same concentration of solvent should be added to all cultures (including controls) in the test series.
Инкубация
Incubation
Запушете съдовете за изпитване с въздухопропускливи запушалки.
Cap the test vessels with air-permeable stoppers.
Съдовете се разклащат и поставят в апаратурата за култивиране.
The vessels are shaken and placed in the culturing apparatus.
По време на изпитването е необходимо водораслите да се държат в суспензия и да се улесни преносът на CO2.
During the test it is necessary to keep the algae in suspension and to facilitate transfer of CO2.
За тази цел следва да се осъществява постоянно разклащане или разбъркване.
To this end, constant shaking or stirring should be used.
Културите следва да бъдат поддържани при температура в диапазона от 21 до 24 °C, регулирана с отклонение от ±2 °C.
The cultures should be maintained at a temperature in the range of 21 to 24 °C, controlled at ±2 °C.
За видовете, различни от посочените в допълнение 1, например тропическите видове, може да са подходящи по-високи температури, при условие че могат да бъдат изпълнени критериите за валидност.
For species other than those listed in Appendix 1, e.g. tropical species, higher temperatures may be appropriate, providing that the validity criteria can be fulfilled.
Препоръчва се колбите да бъдат поставяни на случаен принцип и местата им в инкубатора да бъдат сменяни всеки ден.
It is recommended to place the flasks randomly and to reposition them daily in the incubator.
Стойността на pH на контролната среда не трябва да се повишава с повече от 1,5 единици по време на изпитването.
The pH of the control medium should not increase by more than 1,5 units during the test.
За метали и смеси, които частично се йонизират при стойности на pH около стойността на pH при изпитването, може да е нужно ограничаване на отклонението на pH, за да се получат възпроизводими и добре дефинирани резултати.
For metals and compounds that partly ionise at a pH around the test pH, it may be necessary to limit the pH drift to obtain reproducible and well defined results.
Отклонение < 0,5 pH единици е технически осъществимо и може да бъде постигнато с осигуряване на адекватен процент на пренос на маса от CO2 от заобикалящия въздух към изпитвания разтвор, например чрез увеличаване на честотата на разклащане.
A drift of < 0,5 pH units is technically feasible and can be achieved by ensuring an adequate CO2 mass transfer rate from the surrounding air to the test solution, e.g. by increasing the shaking rate.
Друга възможност е да се намали потребността от CO2 чрез намаляване на първоначалната биомаса или продължителността на изпитването.
Another possibility is to reduce the demand for CO2 by reducing the initial biomass or the test duration.
Повърхността, където се инкубират културите, следва да получава непрекъсната хомогенна флуоресцентна светлина, например от вида „студена бяла светлина“ или „дневна светлина“.
The surface where the cultures are incubated should receive continuous, uniform fluorescent illumination e.g. of ‘cool-white’ or ‘daylight’ type.
Щамовете от водорасли и цианобактерии се различават в изискванията си за светлина.
Strains of algae and cyanobacteria vary in their light requirements.
Интензитетът на светлината следва да бъде избран така, че да подхожда на използвания изпитван организъм.
The light intensity should be selected to suit the test organism used.
За препоръчваните видове зелени водорасли интензитетът на светлината на нивото на изпитваните разтвори се избира в диапазона на 60—120 µE·m–2·s–1, когато се измерва в диапазона на фотосинтетичната ефективна дължина на вълната от 400—700 nm с използването на подходящ рецептор.
For the recommended species of green algae, the light intensity at the level of the test solutions shall be selected from the range of 60-120 µE·m–2·s–1 when measured in the photosynthetically effective wavelength range of 400-700 nm using an appropriate receptor.
Някои видове, по-специално Anabaena flos-aquae, растат добре при ниски интензитети на светлина и могат да бъдат увредени при високи интензитет.
Some species, in particular Anabaena flos-aquae, grow well at lower light intensities and may be damaged at high intensities.
За такива видове следва да се избере среден интензитет на светлината в диапазона 40—60 µE·m–2·s–1.
For such species an average light intensity in the range 40-60 µE·m–2·s–1 should be selected.
(За уреди за измерване на светлината, калибрирани в луксове, еквивалентният диапазон от 4 440—8 880 lux за студена бяла светлина съответства приблизително на препоръчвания интензитет на светлината от 60—120 µE·m–2·s–1).
(For light-measuring instruments calibrated in lux, an equivalent range of 4440-8880 lux for cool white light corresponds approximately to the recommended light intensity 60-120 µE·m–2·s–1).
Интензитетът на светлината не се отклонява с повече от ±15 % от средния интензитет на светлината върху инкубационната площ.
The light intensity shall not vary more than ±15 % from the average light intensity over the incubation area.
Продължителност на изпитването
Test duration
Продължителността на изпитването обикновено е 72 часа.
The test duration is normally 72 hours.
Въпреки това може да се използва по-кратка или по-дълга продължителност на изпитванията, при условие че са спазени всички критерии за валидност в раздел 1.7.
However, shorter or longer test durations may be used, provided that all validity criteria in section 1.7 can be met.
Измервания и аналитични определения
Measurements and analytical determinations
Биомасата от водорасли във всяка колба се определя най-малко веднъж дневно по време на изпитването.
The algal biomass in each flask is determined at least daily during the test period.
Ако измерванията се правят на малки обеми, взети от изпитвания разтвора с пипета, те не бива да се връщат обратно.
If measurements are made on small volumes removed from the test solution by pipette, these should not be replaced.
Измерването на биомасата се извършва чрез ръчно преброяване на клетките с микроскоп или електронен брояч на частици (чрез преброяване на клетки и/или обем на биомаса).
Measurement of biomass is done by manual cell counting by microscope or an electronic particle counter (by cell counts and/or biovolume).
Могат да се използват алтернативни техники, например поточна цитометрия, in vitro или in vivo хлорофилна флуоресценция (6)(7) или оптична плътност, при условие че може да бъде демонстрирана задоволителна корелация с биомасата в диапазона на биомасата, която се явява по време на изпитването.
Alternative techniques, e.g. flow cytometry, in vitro or in vivo chlorophyll fluorescence (6)(7), or optical density can be used providing a satisfactory correlation with biomass can be demonstrated over the range of biomass occurring in the test.