natgillin/translations-raw huggingface dataset:
Екстрактът (т. 5.2) се прехвърля количествено в горната част на подготвената колона от амберлит (т. 5.3.1) и се елуюира, като се изхвърля елуатът.
Transfer the extract (5.2) quantitatively to the top of the prepared Amberlite column (5.3.1) and elute, discarding the eluate.
Скоростта на потока за елуиране не трябва да надвишава 20 ml/min.
The rate of elution must not exceed 20 ml/min.
Облодънната колба се изплаква с 20 ml солна киселина (т. 3.17), която се използва и за да се измие колоната със смола.
Rinse the round-bottomed flask with 20 ml of hydrochlorid acid (3.17) and use this to wash the resin column.
Евентуално останалият киселинен разтвор се отстранява с въздушен поток.
Blow through any remaining acid solution with a stream of air.
Промивните течности се отстраняват.
Discard the washings.
Добавят се 100 ml метанол (т. 3.8) към колоната и се оставя процесът на елуиране да продължи от 5 до 10 min, като елуатът се събира в облодънна колба с вместимост 250 ml.
Add 100 ml of methanol (3.8) to the column and allow 5 to 10 ml to elute, collecting the eluate in a 250 ml round-bottomed flask.
Оставя се останалият метанол за 10 min, за да влезе в равновесие със смолата, и се продължава елуирането със скорост 20 ml/min, като елуатът се събира в същата облодънна колба.
Leave the remaining methanol for 10 minutes to equilibrate with the resin and continue the elution at a rate not exceeding 20 ml/min. collecting the eluate in the same round-bottomed flask.
Изпарява се метанолът върху ротационния тънкослоен изпарител (т. 4.2), като температурата на водната баня не трябва да превишава 40 oС.
Evaporate the methanol on the rotary film evaporator (4.2), the temperature of the water bath must not exceed 40 oC.
Остатъкът се прехвърля количествено в мерителна колба от 10 ml, като се използва подвижната фаза (т. 3.21).
Transfer the residue quantitatively into a 10 ml calibrated flask using the mobile phase (3.21).
Долива се до номиналния обем с подвижната фаза и се разбърква.
Make up to the mark with mobile phase and mix.
Една аликвотна част се филтрира през мембранен филтър (т. 4.7).
An aliquot is filtered through a membrane filter (4.7).
Този разтвор се запазва за определяне с помощта на HPLC (т. 5.4).
Reserve this solution for the HPLC determination (5.4).
Следните указания за параметрите са ориентировъчни, като могат да се използват и други параметри, при условие че с тях се получават еквивалентни резултати:
The following conditions are offered for guidance, other conditions may be used provided they yield equivalent results.
Колона за течна хроматография (т. 4.4.1);
Liquid chromatographic column (4.4.1)
Подвижна фаза за HPLC (т. 3.21);
HPLC Mobile phase (3.21)
Скорост на изтичане: 1,5 до 2 ml/min.
Flow rate: 1,5 to 2 ml/min.
Дължина на вълната за откриване: 243 nm
Detection wavelength: 243 nm
Обем за впръскване: от 40 до 100 μl.
Injection volume: 40 to 100 μl.
Проверява се стабилността на хроматографската система, като калибрационният разтвор (т. 3.6.2), съдържащ 3 μg/ml, се впръсква няколко пъти, докато височината на пиковете (или площите) и времето на задържане останат постоянни.
Check the stability of the chromatographic system, injecting the calibration solution (3.6.2) containing 3,0 μg/ml several times, until constant peak heights (or areas) and retention times are achieved.
Калибрационна крива
Calibration graph
Всеки калибрационен разтвор (т. 3.6.2) се впръсква няколко пъти и се измерват височините на пиковете (площите) за всяка концентрация.
Inject each calibration solution (3.6.2) several times and measure the peak heights (areas) for each concentration.
Построява се калибрационна крива, като за ординати се използват средните височини на пиковете (площите) на калибрационните разтвори, а за абсциси — съответните концентрации в μg/ml.
Plot a calibration graph using the mean peak heights or areas of the calibration solutions as the ordinates and the corresponding concentrations in μg/ml as the abscissae.
Разтвор на пробата
Sample solution
Екстрактът на пробата (т. 5.3.2) се впръсква няколко пъти, като се използва същият обем, който е взет за калибрационните разтвори, и се определя средната височина на пиковете (площи) за пиковете за халофугинона.
Inject the sample extract (5.3.2) several times, using the same volume as taken for the calibration solutions and determine the mean peak height (area) of the halofuginone peaks.
Концентрацията на разтвора на пробата в μg/ml се определя от средната височина (площ) на пиковете за халофугинона от разтвора на пробата, като се сравнява с калибрационната крива (т. 5.4.2).
Determine the concentration of the sample solution in μg/ml, from the mean height (area) of the halofuginone peaks of the sample solution by reference to the calibration graph (5.4.2).
Съдържанието w (mg/kg) на халофугинон в пробата се получава със следната формула:
The content of halofuginone w (mg/kg) of the sample is given by the following formula:
c концентрация на халофугинон в разтвора на пробата в μg/ml,
c halofuginone concentration of the sample solution in μg/ml,
m тегло на частта от пробата за анализ в грамове.
m weight of the test portion in grams.
Потвърждаване на резултатите
Validation of the results
Идентичност
Identity
Идентичността на аналита може да се потвърди с помощта на кохроматография или като се използва детектор с диодна матрица, с който се сравняват спектрите на екстракта на пробата и на калибрационния разтвор (т. 3.6.2), съдържащ 6,0 μg/ml.
The identity of the analyte can be confirmed by co-chromatography, or by using a diode-array detector by which the spectra of the sample extract and the calibration solution (3.6.2) containing 6,0 μg/ml are compared.
Кохроматография
Co-chromatography
Екстракт на пробата се обогатява като се добавя целесъобразно количество калибрационен разтвор (т. 3.6.2).
A sample extract is fortified by addition of an appropriate amount of a calibration solution (3.6.2).
Количеството добавен халофугинон трябва да е сходно с предполагаемото количество халофугинон, намерен в екстракта на пробата.
The amount of added halofuginone must be similar to the estimated amount of halofuginone found in the sample extract.
Увеличава се само височината на пика на халофугинона, след като се вземе под внимание както добавеното количество, така и разреждането на екстракта.
Only the height of the halofuginone peak shall be enhanced after taking into account both the amount added and the dilution of the extract.
Широчината на пика, на половината от неговата максимална височина, трябва да бъде в рамките на ± 10 % от първоначалната широчина.
The peak width, at half of its maximum height, must be within ± 10 % of the original width.
Детектиране с диодна матрица
Diode-array detection
Резултатите се оценяват според следните критерии:
The results are evaluated according to the following criteria:
Дължината на вълната на максимална абсорбция на пробата трябва да бъде същата като тази на спектрите на стандарта, регистрирана в най-високата точка на хроматограмата и при отконение, определено от разделителната способност на детектиращата система.
the wavelength of maximum absorption of the sample and of the standard spectra, recorded at the peak apex on the chromatogram, must be the same within a margin determined by the resolving power of the detection system.
За детектирането с диодна матрица, отклонението обикновено е в рамките на ± 2 nm;
For diode-array detection, this is typically within ± 2 nm;
между 225 и 300 nm спектрите на пробата и на стандарта, отчетени в най-високата точка на хроматограмата, не трябва да се различават помежду си за тези части от спектъра, които са в интервала между 10 до 100 % от относителната екстинкция.
between 225 and 300 nm, the sample and standard spectra recorded at the peak apex on the chromatogram, must not be different for those parts of the spectrum within the range 10 % to 100 % of relative absorbance.
Критерият е изпълнен тогава, когато са налице едни и същи максимуми и не е регистрирана точка, в която отклонението между двата спектра превишава 15 % от екстинцията на стандартния аналит;
This criterion is met when the same maxima are present and at no observed point the deviation between the two spectra exceeds 15 % of the absorbance of the standard analyte;
между 225 и 300 nm спектрите на възходящата линия, максимума и низходящата линия на пика, получени при анализа на екстракта на пробата, не трябва да се различават един от друг в тези части от спектъра, които попадат в интервала между 10 до 100 % относителна екстинкция.
between 225 and 300 nm, the spectra of the upslope, apex and downslope of the peak produced by the sample extract must not be different from each other for those parts of the spectrum within the range 10 % to 100 % of relative absorbance.
Критерият е изпълнен тогава, когато налице са едни и същи максимуми и когато във всички регистрирани точки отклонението между спектрите не надминава 15 % от екстинкцията на спектъра на най-високата точка.
This criterion is met when the same maxima are present and when at all observed points the deviation between the spectra does not exceed 15 % of the absorbance of the spectrum of the apex.
Ако някой от критериите не е изпълнен, наличието на аналита не се потвърждава.
If one of these criteria is not met the presence of the analyte has not been confirmed.
Разликата между резултатите от две паралелни определяния, проведени върху една и съща проба, не трябва да надвишава 0,5 mg/kg за съдържание на халофугинон до 3 mg/kg.
The difference between results of two parallel determinations carried out on the same sample must not exceed 0,5 mg/kg for halofuginone contents up to 3 mg/kg.
За обогатената празна проба възстановяването трябва да е минимум 80 %.
For the fortified blank sample the recovery shall be at least 80 %.
Беше проведено съвместно изследване, при което три проби са били подложени на анализ от осем лаборатории.Резултати
A collaborative study was arranged in which three samples were analysed by eight laboratories. Results
Проба А
Sample A
(празна)
(blank)
При получаване
On receipt
Проба Б (брашно)
Sample B (Meal)
Проба В (пелети)
Sample C (Pellets)
След два месеца
After two months
Среднa стойност [mg/kg]
Mean [mg/kg]
Възст. [ %]
Rec. [%]
НО не е открито
ND not detected
коефициент на вариация на възпроизводимостта ( %)
coefficient of variation of reproducibility (%)
Възст. възстановяване ( %)
Rec. recovery (%)
ОПРЕДЕЛЯНЕ НА РОБЕНИДИН
DETERMINATION OF ROBENIDINE
1,3-bis[(4-хлоробензилиден)амино]гванидин хидрохлорид
1,3-bis [(4-chlorobenzylidene)amino]guanidine — hydrochloride
Настоящият метод позволява определянето на съдържанието на робенидин във фуражите.
This method makes it possible to determine the levels of robenidine in feed.
Прагът на количествено определяне е 5 mg/kg.
The limit of quantification is 5 mg/kg.
Пробата се екстрахира с помощта на подкиселен метанол.
The sample is extracted with acidified methanol.
Екстрактът се изсушава, след което аликвотна част от него се подлага на пречистване в колона с алуминиев оксид.
The extract is dried and an aliquot portion subjected to a clean-up on an aluminium oxide column.
Робенидинът се елуира от колоната с метанол, концентрира се и се разрежда до желания обем с подвижна фаза.
Robenidine is eluted from the column with methanol, concentrated, and made up to a suitable volume with mobile phase.
Съдържанието на робенидин се определя с помощта на високоефективна течна хроматография с обратна фаза (HPLC), като се използва UV-детектор.
The content of robenidine is determined by reversed-phase high-performance liquid chromatography (HPLC) using an UV detector.
Подкиселен метанол
Acidified methanol.
Поставят се 4,0 ml солна киселина (ρ20 = 1,18 g/ml) в градуирана колба от 500 ml, допълва се с метанол до пълния обем (т. 3.1), и се разбърква.
Transfer 4,0 ml hydrochloric acid (ρ20 = 1,18 g/ml) into a 500 ml graduated flask, make up to the mark with methanol (3.1) and mix.
Разтворът се приготвя непосредствено преди употреба.
This solution shall be freshly prepared before use.
Молекулно сито
Molecular sieve.
Тип 3А, частици с меш от 8 до 12 (частици от 1,6—2,5 mm, кристален алуминосиликат, диаметър на порите 0,3 mm)
Type 3A, 8 to 12 mesh beads (1,6-2,5 mm beads, crystalline alumino-silicate, diameter of pores 0,3 mm).
Алуминиев оксид със степен на киселинна активност I за колонна хроматография
Aluminium oxide acidic activity grade I for column chromatography.
В подходящ съд се поставят 100 g алуминиев оксид и се прибавят 2,0 ml вода.
Transfer 100 g aluminium oxide into a suitable container and add 2,0 ml of water.
Запушва се и се разклаща за приблизително 20 min. Така полученият разтвор се съхранява в добре запушен съд.
Stopper and shake for approximately 20 minutes. Store in a well stoppered container.
Разтвор на калиев дихидроген фосфат, с = 0,025 mol/l
Potassium dihydrogen phosphate solution, c = 0,025 mol/l.
В градуирана колба от 1000 ml се разтварят 3,40 g калиев дихидроген фосфат във вода (чиста за HPLC), допълва се до пълния обем и се разбърква.
Dissolve 3,40 g of potassium dihydrogen phosphate in water (HPLC grade) in a 1000 ml graduated flask, make up to the mark and mix.
Разтвор на динатриев хидроген фосфат, с = 0,025 mol/l
Di-sodium hydrogen phosphate solution, c = 0,025 mol/l.
В градуирана колба от 1 литър се Разтварят 3,55 g безводен динатриев хидроген фосфат (или 4,45 g дихидрат или 8,95 g додекахидрат) във вода (с чистота за HPLC), допълва се до пълния обем и се разбърква.
Dissolve 3,55 g of anhydrous (or 4,45 g of dihydrate or 8,95 g of dodecahydrate) di-sodium hydrogen phosphate in water (equivalent to HPLC grade) in a 1 litre graduated flask, make up to the mark and mix.
Подвижна фаза за HPLC
HPLC mobile phase.
Смесват се следните реагенти:
Mix together the following reagents:
650 ml ацетонитрил (т. 3.3),
650 ml acetonitrile (3.3),
250 ml вода (с чистота за HPLC),
250 ml water (equivalent to HPLC-grade),
50 ml разтвор на калиев дихидроген фосфат (т. 3.6),
50 ml potassium di-hydrogen phosphate solution (3.6),
50 ml разтвор на динатриев хидроген фосфат (т. 3.7).
50 ml di-sodium hydrogen phosphate solution (3.7).
Разтворът се филтрира през филтър с размер на порите 0,22 μm (т. 4.6) и се обезгазява (напр. чрез подлагане на въздействието на ултразвук в продължение на 10 минути).
Filter through a 0,22 μm filter (4.6) and degas the solution, (e.g. by ultrasonification for 10 minutes).
Стандартно вещество
Standard substance.
Чист робенидин: 1,3-bis[(4-хлоробензилиден)амино] гуанидин хидрохлорид.
Pure robenidine: 1,3-bis [(4-chlorobenzylidene)amino]guanidine — hydrochloride.
Основен стандартен разтвор на робенидин: 300 μg/ml
Robenidine stock standard solution: 300 μg/ml
С точност до 0,1 mg се отмерват 30 mg от стандартното вещество робенидин (т. 3.9).
Weigh to the nearest 0,1 mg, 30 mg of robenidine standard substance (3.9).
Това количество се разтваря в подкиселен метанол (т. 3.2) в градуирана колба от 100 ml, допълва се до пълния обем със същия разтворител и се разбърква.
Dissolve in acidified methanol (3.2) in a 100 ml graduated flask, make up to the mark with the same solvent and mix.
Колбата се увива с алуминиево фолио и се съхранява на тъмно място.
Wrap the flask with aluminium foil and store in a dark place.
Междинен стандартен разтвор на робенидин: 12 μg/ml
Robenidine intermediate standard solution: 12 μg/ml
Прехвърлят се 10,0 ml от основния стандартен разтвор (т. 3.9.1) в градуирана колба от 250 ml, долива се с подвижната фаза (т. 3.8) до пълния обем и се разбърква.
Transfer 10,0 ml of the stock standard solution (3.9.1) into a 250 ml graduated flask, make up to the mark with the mobile phase (3.8) and mix.
В мерителни колби от 50 ml се поставят съответно 5,0, 10,0, 15,0, 20,0 и 25,0 ml от междинния стандартен разтвор (т. 3.9.2).
Into a series of 50 ml calibrated flasks, transfer 5,0, 10,0, 15,0, 20,0 and 25,0 ml of the intermediate standard solution (3.9.2).
Колбите се допълват до пълния им обем с подвижната фаза (т. 3.8) и се течността се разбърква.
Make up to the mark with mobile phase (3.8) and mix.
Разтворите отговарят съответно на 1,2; 2,4; 3,6; 4,8 и 6,0 μg/ml робенидин.
These solutions correspond to 1,2, 2,4, 3,6, 4,8 and 6,0 μg/ml of robenidine respectively.
Вода с чистота за HPLC
Water equivalent to HPLC grade.
Стъклена колона
Glass column.
Направена от непрозрачно стъкло и снабдена със спирателно кранче, с резервоар с обем приблизително 150 ml, вътрешен диаметър от 10 до 15 mm и дължина 250 mm.
Constructed of amber glass fitted with a stopcock and a reservoir of approximately 150 ml capacity, internal diameter 10 to 15 mm, length 250 mm.
Апарат за HPLC с UV-детектор с настройка на дължината на вълната или с диодна матрица, която работи в обхвата 250—400 nm.
HPLC equipment with variable wavelength ultraviolet detector or diode array detector operating in the range of 250 to 400 nm.
Колона за течна хроматаграфия: 300 mm ×4 mm, С18, пълнеж от 10 μm или еквивалентна
Liquid chromatographic column: 300 mm x 4 mm, C18 10 μm packing or equivalent.
Филтър от стъклени нишки (Whatman GF/A или еквивалентен).
Glass fibre filter paper (Whatman GF/A or equivalent).
Мембранни филтри, 0,22 μm.
Membrane filters, 0,22 μm.
Мембранни филтри, 0,45 μm.
Membrane filters, 0,45 μm.
Робенидинът е чувствителен към светлина.
Robenidine is light-sensitive.
Трябва да се използват непрозрачни лабораторни съдове при всички операции.
Amber glassware shall be used in all operations.
Необходимо е да се анализира фураж без добавки с цел да се провери наличието на робенидин или вщества, които пречат на анализа.
A blank feed shall be analysed to check that neither robenidine nor interfering substances are present.
Необходимо е да се проведе тест за възстановяване, като се анализира проба от фураж без робенидин (т. 5.1.1.), обогатена чрез добавяне на известно количество робенидин, сходно с това в пробата.
A recovery test shall be carried out by analysing the blank feed (5.1.1) which has been fortified by addition of a quantity of robenidine, similar to that present in the sample.
За да се постигне обогатяване до равнище 60 mg/kg, в конична колба от 250 ml се прехвърлят 3,0 ml от основния стандартен разтвор (т. 3.9.1). Разтворът се изпарява до прибл.
To fortify at a level of 60 mg/kg, transfer 3,0 ml of the stock standard solution (3.9.1) to a 250 ml conical flask.
0,5 ml под приток на азот.
Evaporate the solution to ca. 0,5 ml in a stream of nitrogen.
Прибавят се 15 g от фуража без добавки, разбърква се добре и се изчаква 10 min, преди да се продължи с етапа на екстракция (т. 5.2).
Add 15 g of the blank feed, mix and wait for 10 minutes before proceeding with the extraction step (5.2).
За целите на метода пробата от фураж, който не съдържа робенидин, трябва да бъде сходна по вид с анализираната проба и при анализ в нея не трябва да се открие робенидин.
For the purpose of this method, the blank feed shall be similar in type to that of the sample and on analysis robenidine shall not be detected.
Отмерват се с точност до 0,01 g приблизително 15 g от приготвената проба.
Weigh to the nearest 0,01 g, approximately 15 g of the prepared sample.
Прехвърлят се в конична колба от 250 ml и се добавят 100,0 ml подкиселен метанол (т. 3.2), съдът се запушва добре и се разклаща в продължение на 1 h в клатачна машина (т. 4.2).
Transfer to a 250 ml conical flask and add 100,0 ml of acidified methanol (3.2), stopper and shake for one hour on the shaker (4.2).
Разтворът се филтрира през филтрова хартия от стъклени нишки (т. 4.5) и целият филтрат се събира в конична колба от 150 ml.
Filter the solution through a glass fibre filter paper (4.5) and collect the whole filtrate in a 150 ml conical flask.
Прибавят се 7,5 g молекулно сито (т. 3.4), съдът се запушва добре и се разклаща в продължение на 5 min. Незабавно се филтрира през филтрова хартия от стъклени нишки.
Add 7,5 g molecular sieve (3.4), stopper and shake for five minutes. Filter immediately through a glass-fibre filter paper.
Разтворът се запазва за етапа на пречистване (т. 5.3).
Retain this solution for the purification step (5.3).
Пречистване
Purification
Подготовка на колоната с алуминиев оксид
Preparation of the aluminium-oxide column
Долният край на стъклената колона (т. 4.1) се запушвас тапа от стъклен памук, която се вкарва с помощта на стъклена пръчка.
Insert a small glass-wool plug into the lower end of a glass column (4.1) and tamp it down using a glass rod.
Отмерват се 11 g от приготвения алуминиев оксид (т. 3.5) и се прехвърлят в колоната.
Weigh out 11,0 g of the prepared aluminium oxide (3.5) and transfer to the column.
По време на тази манипулация излагането на въздействието на обкръжаващия въздух се свежда до минимум.
Care shall be taken to minimise the exposure to the atmosphere during this stage.
Напълнената колона се почуква леко в долния край, за да улегне алуминиевият оксид.
Gently tap the loaded column at its lower end to settle the aluminium oxide.
Пречистване на пробата
Sample purification
С пипета се прехвърлят в колоната 5 ml от екстракта на пробата, приготвен съгласно точка 5.2. Краят на пипетата се поставя близо до стената на колоната и се оставя разтворът да се абсорбира от алуминиевия оксид.
Transfer onto the column by pipette 5,0 ml of the sample extract prepared in (5.2) Rest the pipette tip close to the column wall and allow the solution to be absorbed onto the aluminium oxide.
Робенидинът от колоната се елуира, като се използват 100 ml метанол (т. 3.1) при скорост на изтичане 2—3 ml/min, а елуатът се събира в облодънна колба с вместимост 250 ml.
Elute the robenidine from the column using 100 ml methanol (3.1), at a flow rate of 2 to 3 ml/minute and collect the eluate in a 250 ml round bottomed flask.
Метаноловият разтвор се подлага на изпаряване до изсъхване при намалено налягане при температура 40 oC с помощта на ротационен тънкослоен изпарител (т. 4.3).
Evaporate the methanol solution to dryness under reduced pressure at 40 oC by means of a rotary film evaporator (4.3).
Остатъкът се разтваря отново в 3—4 ml от подвижната фаза (т. 3.8) и се прехвърля количествено в градуирана колба от 10 ml.
Re-dissolve the residue in 3 to 4 ml of mobile phase (3.8) and transfer quantitatively to a 10 ml graduated flask.
Колбата се изплаква на няколко пъти с порции от 1—2 ml от подвижната фаза и изплакнатите количества се прехвърлят в градуираната колба.
Rinse the flask with several 1 to 2 ml portions of mobile phase and transfer these rinsings to the graduated flask.
Допълва се до пълния обем със същия разтворител и се разбърква.
Make up to the mark with the same solvent and mix.
Една аликвотна част се филтрира през мембранен филтър от 0,45 μm (т. 4.7).
An aliquot is filtered through a 0,45 μm membrane filter (4.7).
Разтворът се запазва за определяне чрез HPLC (т. 5.4).
Reserve this solution for HPLC determination (5.4).
Дават се следните указания за параметрите, могат да се използват и други параметри, при условие че с тях се получават еквивалентни резултати:
The following conditions are offered for guidance, other conditions may be used provided they yield equivalent results:
Колона за течна хроматография (т. 4.4.1),
Liquid chromatographic column (4.4.1),
подвижна фаза за HPLC (т. 3.8),
HPLC mobile phase (3.8),
Скорост на изтичане: 1,5 до 2 ml/min,
Flow rate: 1,5 to 2 ml/minute,
Дължина на вълната, на която е настроен детекторът: 317 nm
Detector wavelength: 317 nm,
обем за впръскване: от 20 до 50 μl.
Injection volume: 20 to 50 μl.
Проверява се стабилността на хроматографската система, като на няколко пъти се впръсква калибрационен разтвор (т. 3.9.3), съдържащ 3,6 μg/ml, докато се постигнат постоянни височини на пика и постоянни времена на задържане.
Check the stability of the chromatographic system, injecting the calibration solution (3.9.3) containing 3,6 μg/ml several times, until constant peak heights and retention times are achieved.
Всеки от калибрационните разтвори (т. 3.9.3), се впръсква няколко пъти и се измерват височините (площите) за всяка концентрация.
Inject each calibration solution (3.9.3) several times and measure the peak heights (areas) for each concentration.