mwirth-epo/epo-nmt-datasets huggingface dataset:
설치 플레이트(3)는 적어도 하나의 스탬핑 플레이트(4)의 설치를 위해 구성되지만, 물론 도 1에서 점선으로 도시된 바와 같이 다중 스탬핑 플레이트(4)가 동시에 설치 플레이트(3)에 설치될 수도 있다.
The installation plate 3 is configured for the installation of at least one stamping plate 4, but of course also multiple stamping plates 4 can be installed on the installation plate 3 at the same time, as shown in Fig.1 in dashed lines.
그러나 설치 플레이트(3)는 선택 사항일 뿐이며, 적어도 하나의 스탬핑 플레이트(4)는 가열 플레이트(2)에 직접 부착될 수도 있다.
However, the installation plate 3 is only optional and the at least one stamping plate 4 could also be directly attached to the heating plate 2.
이 경우, 스탬핑 플레이트(4)의 설치를 위한 적절한 고정 요소가 가열 플레이트(2)에 제공된다.
In this case, suitable fastening elements for the installation of the stamping plate 4 are provided on the heating plate 2.
따라서, 가열 플레이트(2)는 가열을 위한 가열 플레이트 및 하나 또는 다수의 스탬핑 플레이트(4)의 설치를 위한 설치 플레이트로서의 역할을 한다.
Hence, the heating plate 2 serves as both heating plate for heating and installation plate for installation of the one or multiple stamping plates 4.
이하, 본 발명은 하나의 스탬핑 플레이트(4)만을 참조하여 설명될 것이다.]
In the following, the invention will be described with reference to one stamping plate 4 only.
[적어도 하나의 스탬핑 플레이트(4)가 강철 합금과 같은 적절한 열 전도성을 갖는 강성 재료로 제조될 수 있다.
The at least one stamping plate 4 can again be made of a rigid material with suitable heat conductivity like steel alloy.
스탬핑 플레이트(4)는 정사각형, 직사각형, 원형 또는 임의의 다른 형상을 가질 수 있다.
Again, the stamping plate 4 can have a square, rectangular, round or any other shape.
스탬핑 플레이트(4)는 제5 표면(A5) 및 대향하는 스탬핑 계면 표면(ASI)을 포함한다.
The stamping plate 4 comprises a fifth surface A5 and an opposite stamping interface surface ASI.
도 1에 도시된 예에 따라 가열 플레이트(2)와 스탬핑 플레이트(4) 사이에 별도의 설치 플레이트(3)가 배치된다고 가정하면, 제5 표면(A5)은 설치 플레이트(3)의 제4 표면(A4)과 접촉한다.
Assuming that a separate installation plate 3 is arranged between the heating plate 2 and the stamping plate 4 according to the example shown in Fig.1, the fifth surface A5 is in contact with the fourth surface A4 of the installation plate 3.
그러나, 스탬핑 기계(1)에 별도의 설치 플레이트(3)가 제공되지 않는 경우, 스탬핑 플레이트(4)의 제5 표면(A5)은 가열 플레이트(2)의 제2 표면(A2)에 부착된다.
However, in case where no separate installation plate 3 is provided in the stamping machine 1, the fifth surface A5 of the stamping plate 4 is attached to the second surface A2 of the heating plate 2.
스탬핑 플레이트(4)는 제5 표면(A5)과 스탬핑 계면 표면(ASI) 사이에서 바람직하게 균일한 두께를 차례로 갖는다.
The stamping plate 4 has in turn a preferably uniform thickness between the fifth surface A5 and the stamping interface surface ASI.
스탬핑 플레이트(4)는 예를 들어 도 1에 도시된 바와 같이 적절한 장착 브래킷(5)에 의해 설치 플레이트(3)에 고정될 수 있다.
The stamping plate 4 can be fixed on the installation plate 3 e.g. by means of suitable mounting brackets 5, as indicated in Fig.1.
설치 플레이트(3) 상의 다른 위치에도 하나 이상의 스탬핑 플레이트(4)를 빠르고 간단하게 설치할 수 있도록 하기 위해, 설치 플레이트(3)는 예를 들어 다수의 오목부를 갖는 벌집 구조를 가질 수 있다.
In order to enable a quick and simple installation of one or more stamping plates 4 also at different positions on the installation plate 3, the installation plate 3 can, for example, have a honeycomb construction with multiple recesses.
도 1에 도시된 예시적인 설치 플레이트(3)는 대향 표면(A3, A4)을 연결하고 바람직하게는 벌집형 구조를 달성하기 위해 설치 플레이트(3) 위에 고르게 분포하는 다수의 구멍(6)을 포함한다.]
The exemplary installation plate 3 shown in Fig.1 comprises multiple holes 6, which connect the opposite surfaces A3, A4 and which are preferably evenly spread over the installation plate 3 in order to achieve a honeycomb-like construction.
[스탬핑 플레이트(4)의 상부에는 스탬핑 기계(1)에 의한 스탬핑 공정을 수행함으로써 포일(9)이 스탬핑될 기판(S)이 배치될 수 있다.
On top of the stamping plate 4, a substrate S can be arranged, onto which a foil 9 is to be stamped by performing a stamping process by means of the stamping machine 1.
기판(S) 및 포일(9)에 다양한 재료 조합물을 사용할 수 있다.
A large variety of material-combinations can be used for the substrate S and the foil 9.
종이, 판지, 플라스틱, 가죽, 나무 등과 같은 재료를 기판(S)에 사용할 수 있다.
Materials such as paper, cardboard, plastics, leather, wood, etc. can be used for the substrate S. Essentially all metals and plastics, which are suitable for joining with the material of the used substrate S, can be used as material for the foil 9.
그러나 금속 포일은 금, 은, 청동, 구리 또는 다른 금속 합금과 같이 주로 사용된다.
However, metal foils are mostly used, e.g. gold, silver, bronze, copper or different metal alloys.
기판(S)은 예를 들어 스탬핑 플레이트(4)의 스탬핑 계면 표면(ASI) 상에 느슨하게 배치될 수 있고, 또는 적절한 고정 요소(들)에 의해 고정될 수 있지만, 그것은 기판(S)보다 약간 더 얇은 두께를 가져야 한다.]
The substrate S could, for example, be loosely arranged on the stamping interface surface ASI of the stamping plate 4 or could be fixed by means of any suitable fixing elements(s), which however need(s) to have a slightly smaller thickness than the substrate S.
[포일(9)은 예를 들어 포일(9)이 감겨 있는 하나 이상의 코일(9A)의 형태로 제공될 수 있다.
The foil 9 can, for example, be provided in the form of one or more coils 9A onto which the foil 9 is wound up.
코일(9A)로부터, 포일(9)은 스탬핑 기계의 처리 영역에서, 예를 들어, 하나 이상의 고정 또는 조정 가능한 롤러(12)에 걸쳐 기판(S)에 공급될 수 있다.
From the coil 9A, the foil 9 can be supplied to the substrate S in a processing region of the stamping machine, e.g. over one or more fixed or adjustable rollers 12.
간단한 실시예에서, 포일(9)은 예를 들어, 수동으로 포일(9)을 풀고 이동시켜 수동적으로 공급될 수 있다.
In a simple embodiment the foil 9 can by supplied manually, e.g. by manually unwinding and moving the foil 9.
그러나 더 높은 생산성을 달성하기 위해서는 포일(9)을 처리 영역으로, 예를 들어 적절한 드라이브로 자동으로 공급하는 것이 유리할 수 있다.
However, to achieve higher productivity it can be advantageous to automatically feed the foil 9 to the processing region, e.g. by a suitable drive.
예를 들어, 코일(9A) 및/또는 롤러(12)는 전기 모터(도시되지 않음)에 의해 구동될 수 있다.]
For example, the coil 9A and/or the rollers 12 can be driven by means of an electric motor (not shown).
[핫 포일 스탬핑 기계(1)는 도 1에서 이중 화살표로 나타낸 바와 같이 일반적으로 스탬핑 플레이트(4) 위에 이동 가능하게 배치되는 적어도 하나의 스탬핑 헤드(10)를 더 포함할 수 있다.
The hot foil stamping machine 1 can further comprise at least one stamping head 10, which is usually movably arranged above the stamping plate 4, as indicated with the double arrow in Fig.1.
스탬핑 헤드(10)는 적절한 재료, 예를 들어, 스탬핑 플레이트(4), 설치 플레이트(3) 또는 가열 플레이트(2)와 유사한 금속인 적절한 재료로 제조될 수 있다.
The stamping head 10 can be made of a suitable material, e.g. a metal similar to the stamping plate 4, the installation plate 3 or the heating plate 2.
스탬핑 공정을 수행하기 위해, 스탬핑 헤드(10)는 기판(S) 위로 포일(9)을 누르기 위해 기판(S) 쪽으로 이동할 수 있어서, 특정 스탬핑 힘이 포일(9)과 기판(S)에 가해지게 된다.
For performing a stamping process, the stamping head 10 can be moved towards the substrate S in order to press the foil 9 onto the substrate S, whereby a certain stamping force is applied onto the foil 9 and the substrate S. During the stamping process, the substrate S is heated to a certain desired stamping temperature by means of the heat generated by the heating plate 2 and conducted from the heating plate 2 via the installation plate 3 to the stamping plate 4.
가열 플레이트(2)에 의해 제공되는 열 및 가압력의 작용을 받아서, 포일(9)이 기판(S)에 도금된다.]
Under the action of the pressing force and the heat provided by the heating plate 2, the foil 9 is plated onto the substrate S.
[특정한 처리공정 시간 후, 스탬핑 헤드(10)가 철회되고, 부착된 포일(9)을 포함하는 완성된 기판(S)이 제거될 수 있다.
After a certain processing time, the stamping head 10 is retracted and the finished substrate S including the attached foil 9 can be removed.
지정된 조건(기판(S)의 재료 및 모양과 포일(9)의 재료)에 대해, 스탬핑 계면 표면(ASI)의 요구 온도는 알려져 있는 것으로 가정하고, 다음과 같이 스탬핑 플레이트(4)에 대한 계면 표면(ASI)의 원하는 온도(T, Sub[attributes={}; value=[SI_D]], )로 지정 한다.
The required processing temperature of the substrate S of course depends on the material of the foil 9 and the material of the substrate S itself and is usually in the range between 100°C and 300°C. For given conditions (material and shape of the substrate S as well as the material of the foil 9), the required temperature of the stamping interface surface ASI is assumed to be known and is in the following designated as desired temperature TSI_D of the interface surface ASI of the stamping plate 4.
스탬핑 플레이트(4)로부터 포일(9)이 스탬핑된 완성된 기판(S)의 제거를 용이하게 하기 위해, 분사 노즐(18)이 스탬핑 기계(1), 예를 들어 설치 플레이트(3)의 외부 모서리에 선택적으로 제공될 수 있다.
In order to facilitate the removal of the finished substrate S with the foil 9 stamped thereon from the stamping plate 4, blowing nozzles 18 can optionally be provided in the stamping machine 1, for example, on the outer edge of the installation plate 3.
분사 노즐(18)에 의해, 압축 공기가 기판(S)에 공급될 수 있다.
By means of the blowing nozzles 18 pressurized air can be supplied to the substrate S, e.g. preferably between the substrate S and the stamping interface surface ASI.
[로고, 텍스트 등과 같이 기판(S)에 스탬핑된 포일(9)의 특정 패턴을 달성하기 위해, 스탬핑 헤드(10)의 표면(기판(S)을 향함)도 각각의 방식으로 성형될 수 있다.
In order to achieve specific patterns of the foil 9 stamped on the substrate S, like logos, texts, etc., the surface of the stamping head 10 (facing the substrate S) can also be shaped in a respective fashion.
패턴을 유연하게 변경하기 위해, 다른 패턴의 교체 가능한 인서트가 제공될 수 있다.
In order to change the pattern flexibly, interchangeable inserts with different patterns could be provided.
간단한 구현예에서, 스탬핑 헤드(10)는 예를 들어 수동으로 예를 들면 레버(도시되지 않음)를 통해 작동될 수 있다..
In a simple implementation, the stamping head 10 can, for example, be manually operable, e.g. by means of a lever (not shown).
그러나, 더 높은 생산성과 더 나은 스탬핑 품질을 달성하기 위해, 스탬핑 헤드가 예를 들어, (전기)-기계적으로 또는 (전기)-유압적으로 적절한 드라이브(11)에 의해 자동으로 작동되는 것이 유리할 수 있다.
However, to achieve higher productivity and better stamping quality it can be advantageous that the stamping head is operated automatically by a suitable drive 11, e.g. (electro)-mechanically or (electro)-hydraulically.
따라서 일관된 공정처리 속도(기본적으로 프레스 동작의 지속 시간에 대응 함)와 일관된 스탬핑력에 도달할 수 있으며, 이는 일정한 스탬핑 품질로 이어진다.]
Thus, a consistent processing speed (which essentially corresponds to the duration of the pressing action) and a consistent stamping force can be reached, which lead to constant stamping quality.
[핫 포일 스탬핑 기계(1)를 제어하기 위해, 적어도 하나의 제어 유닛(8)이 예를 들어 적절한 마이크로프로세서 기반 하드웨어 및/또는 소프트웨어의 형태로 핫 포일 스탬핑 기계(1)에 제공된다.
For controlling the hot foil stamping machine 1, at least one control unit 8 is provided in the hot foil stamping machine 1, e.g. in the form of a suitable microprocessor-based hardware and/or software.
제어 유닛(8)은 또한, 예를 들어 PLC(Programmable Logic Controller), FPGA(Field Programmable Gate Array), ASIC(application-specific integrated circuit), 아날로그 컴퓨터 또는 아날로그 회로를 포함할 수도 있다.
The control unit 8 can, for example, also comprise a Programmable Logic Controller (PLC), a Field Programmable Gate Array (FPGA), an application-specific integrated circuit (ASIC), an analogue computer, or an analogue circuit.
제어 유닛(8)으로, 적어도 가열 플레이트(2), 특히 하나 이상의 가열 장치(7)가 제어될 수 있다.
With the control unit 8, at least the heating plate 2, in particular the one or more heating devices 7, can be controlled.
스탬핑 헤드(10)가 자동으로 예를 들어 드라이브(11)에 의해 구동되는 경우 및/또는 포일(9)이 예를 들어 롤러(12)의 드라이브에 의해 자동으로 공급되는 경우, 제어 유닛(8)이 또한 도 1의 연결 라인으로 표시된 바와 같이 드라이브(11) 및/또는 롤러(12)의 드라이브를 제어하는데 사용될 수도 있다.
If the stamping head 10 is automatically driven, e.g. by a drive 11 and/or the foil 9 is automatically supplied, e.g. by a drive of a roller 12, the control unit 8 can also be used for controlling the drive 11 and/or the drive of a roller 12, as is indicated by the connection lines in Fig. 1.
서버로부터 복수의 수업차량의 훈련상황을 취득하기 위한 통신모듈; 상기 복수의 수업차량의 훈련상황을 디스플레이하기 위한 디스플레이모듈; 훈련현장내의 코치의 지시에 따라 운전 트레이닝을 위한 제어명령을 생성하기 위한 제어모듈;을 포함하되, 상기 통신모듈은 상기 제어명령을 대응되는 수업차량의 차량용 단말에 발송하기 위한 것으로도 사용되는, 운전 트레이닝을 보조하기 위한 모바일기기.
A mobile device for assisting driving training, comprising: a communication module (101, 201) configured for acquiring training situations of a plurality of teaching vehicles from a server; a display module (102, 202) configured for displaying the training situations of the plurality of teaching vehicles; and a control module (103, 203) configured for generating a control command for driving training according to an instruction of a trainer in a training site, wherein the communication module (101, 201) is further configured for sending the control command to a vehicle-mounted terminal of a corresponding teaching vehicle.
제1항에 있어서,상기 제어모듈은,훈련현장내의 코치의 브레이크 지시에 따라 대응되는 수업차량을 제어하여 정차하도록 하기 위한 브레이크명령을 형성하기 위한 브레이크 제어유닛을 포함하는, 운전 트레이닝을 보조하기 위한 모바일기기.
The mobile device of claim 1, wherein the control module (203) comprises: a brake control unit (2031) configured for generating a brake command for controlling the corresponding teaching vehicle to stop, according to a brake instruction of the trainer in the training site.
제1항에 있어서,상기 통신모듈은 상기 서버로부터 상기 복수의 수업차량의 차량정보를 획득하기 위한 것으로도 사용되고, 상기 디스플레이모듈은 상기 복수의 수업차량의 차량정보를 디스플레이 하기 위한 것으로도 사용되는, 운전 트레이닝을 보조하기 위한 모바일기기.
The mobile device of claim 1 or 2, wherein the communication module (101, 201) is further configured for acquiring vehicle information of the plurality of teaching vehicles from the server; and the display module (102, 202) is further configured for displaying the vehicle information of the plurality of teaching vehicles, optionally, wherein the vehicle information comprises at least one of a real-time location of a vehicle or whether the vehicle is abnormal.
제1항에 있어서, 상기 통신모듈은,상기 복수의 수업차량의 차량용 단말중의 어느 하나와 음성 또는 영상통신하거나, 또는 상기 복수의 수업차량의 차량용 단말중의 적어도 2개와 그룹 음성 또는 영상통신하기 위한 것으로도 사용되는, 운전 트레이닝을 보조하기 위한 모바일기기.
The mobile device of any one of claims 1 to 3, wherein the communication module (101, 201) is further configured for at least one of: performing voice or video communication with any one of vehicle-mounted terminals of the plurality of teaching vehicles, or performing group voice or video communication with at least two of the vehicle-mounted terminals of the plurality of teaching vehicles, and communicating with a control end of a central control room through the server, and synchronizing data.
제1항에 있어서,수강자의 수업시간 정보, 훈련과정 정보, 심사평가정보 및 수업일기 정보중의 적어도 하나를 기록하기 위한 기록모듈을 더 포함하는, 운전 트레이닝을 보조하기 위한 모바일기기.
The mobile device of any one of claims 1 to 4, further comprising at least one of: a recording module configured for recording at least one of study time information, training process information, assessment information, or teaching log information of a learner, and a playing module configured for performing a historical playback operation on the training situations of the plurality of teaching vehicles.
제1항 내지 제8항 중 어느 한항에 있어서,상기 통신모듈은 4G, 5G 또는wifi 방식에 의해 서버 및 복수의 수업차량의 차량용 단말과 통신하는, 운전 트레이닝을 보조하기 위한 모바일기기.
The mobile device of any one of claims 1 to 5, wherein the communication module communicates with the server and the vehicle-mounted terminals of the plurality of teaching vehicles through 4G, 5G or WiFi.
모바일기기에 적용되는 방법에 있어서,서버로부터 복수의 수업차량의 훈련상황을 취득하는 단계;상기 복수의 수업차량의 훈련상황을 디스플레이하는 단계;훈련현장내의 코치의 지시에 따라 운전 트레이닝을 위한 제어명령을 생성하는 단계; 및 상기 제어명령을 대응되는 수업차량의 차량용 단말로 발송하는 단계를 포함하는 운전 트레이닝을 보조하기 위한 방법.
A method for assisting driving training, wherein the method is applied to a mobile device, and comprises: acquiring (S701) training situations of a plurality of teaching vehicles from a server; displaying (S702) the training situations of the plurality of teaching vehicles; generating (S703) a control command for driving training according to an instruction of a trainer in a training site; and sending (S704) the control command to a vehicle-mounted terminal of a corresponding teaching vehicle.
제10항에 있어서,상기 훈련현장내의 코치의 지시에 따라 운전 트레이닝을 위한 제어명령을 생성하는 단계는,훈련현장내의 코치의 브레이크 지시에 따라 대응되는 수업차량을 제어하여 정차하도록 하기 위한 브레이크명령을 생성하는 단계를 포함하는, 운전 트레이닝을 보조하기 위한 방법.
The method of claim 7, wherein the generating (S703) the control command for driving training according to the instruction of the trainer in the training site, comprises: generating a brake command for controlling the corresponding teaching vehicle to stop, according to a brake instruction of the trainer in the training site.
제10항에 있어서,상기 서버로 부터 상기 복수의 수업차량의 차량정보를 취득하고, 상기 복수의 수업차량의 차량정보를 디스플레이하는 단계를 더 포함하는, 운전 트레이닝을 보조하기 위한 방법.
The method of claim 7 or 8, further comprising: acquiring vehicle information of the plurality of teaching vehicles from the server, and displaying the vehicle information of the plurality of teaching vehicles, optionally, wherein the vehicle information comprises at least one of a real-time location of a vehicle or whether the vehicle is abnormal.
제10항에 있어서,복수의 수업차량의 차량용 단말중의 어느 하나와 음성 또는 영상통신하거나, 또는 복수의 수업차량의 차량용 단말중의 적어도 2개와 그룹 음성 또는 영상통신하는 단계를 더 포함하는, 운전 트레이닝을 보조하기 위한 방법.
The method of any one of claims 7 to 9, further comprising at least one of: performing voice or video communication with any one of vehicle-mounted terminals of the plurality of teaching vehicles, or performing group voice or video communication with at least two of the vehicle-mounted terminals of the plurality of teaching vehicles, and communicating with a control end of a central control room through the server, and synchronizing data.
제10항에 있어서,수강자의 수업시간 정보, 훈련과정 정보, 심사평가정보 및 수업일기 정보중의 적어도 하나를 기록하는 단계를 더 포함하는, 운전 트레이닝을 보조하기 위한 방법.
The method of any one of claims 7 to 10, further comprising at least one of: recording at least one of study time information, training process information, assessment information, or teaching log information of a learner, and performing a historical playback operation on the training situations of the plurality of teaching vehicles.
제10항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서,상기 서버 및 상기 복수의 수업차량의 차량용 단말과 통신하는 방식은 4G, 5G 또는 wifi 방식을 포함하는, 운전 트레이닝을 보조하기 위한 방법.
The method of any one of claims 7 to 11, wherein a way of communicating with the server and the vehicle-mounted terminals of the plurality of teaching vehicles comprises 4G, 5G or WiFi.
적어도 하나의 프로세서; 및상기 적어도 하나의 프로세서와 통신적으로 연결되는 메모리를 포함하며, 상기 메모리에는 상기 적어도 하나의 프로세서에 의해 실행 가능한 명령이 저장되어 있고, 상기 명령은 상기 적어도 하나의 프로세서에 의해 실행되어 제10항 내지 제17항 중 어느 한 항의 방법을 수행하도록 하는 전자 기기.
An electronic device, comprising: at least one processor; and a memory communicatively connected with the at least one processor, wherein the memory stores instructions executable by the at least one processor, and the instructions, when executed by the at least one processor, enable the at least one processor to perform the method of any one of claims 7 to 12.
컴퓨터 명령이 저장된 비일시적 컴퓨터 판독 가능 저장 매체로서,상기 컴퓨터 명령은 컴퓨터가 제10항 내지 제17항 중 어느 한 항의 방법을 수행하도록 하는 저장 매체.
A non-transitory computer-readable storage medium storing computer instructions, wherein the computer instructions, when executed by a computer, cause the computer to perform the method of any one of claims 7 to 12.
컴퓨터 판독 가능 저장 매체에 저장된 컴퓨터 프로그램으로서,컴퓨터 프로그램 중의 명령이 프로세서에 의해 실행될 경우, 제10항 내지 제17항 중 어느 한 항의 방법을 구현하는 컴퓨터 판독 가능 저장 매체에 저장된 컴퓨터 프로그램.
A computer program product comprising a computer program, wherein the computer program, when executed by a processor, implements the method of any one of claims 7 to 12.
상기 정제공정은 당해 기술 분야에 공지된 적합한 방법을 이용하여, 회수된 L-이소류신을 정제할 수 있다.
The purification process may be performed to purify the recovered L-isoleucine by using an appropriate -21method known in the art.
본 출원의 다른 하나의 양태는 서열번호 1의 아미노산 서열에서 136번 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된, 아세토하이드록시산 신타제 활성을 갖는 단백질 변이체가 발현되도록 미생물을 변형하는 것을 포함하는, L-이소류신 생산능을 증가시키는 방법을 제공한다.
Still another aspect of the present disclosure provides a method of increasing L isoleucine productivity, the method including modifying a microorganism to express the protein variant having acetohydroxy acid synthase activity, wherein the amino acid at position 136 in the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 is substituted with another amino acid.
본 출원의 다른 하나의 양태는 상기 단백질 변이체의 L-이소류신 생산능 증가 용도를 제공한다.
Still another aspect of the present disclosure provides use of the protein variant for increasing L-isoleucine productivity.
상기 단백질 변이체, 다른 아미노산에 관해서는 전술한 바와 같다.
The protein variant and another amino acid are the same as described above.
본 출원의 아세토하이드록시산 신타제 변이체를 포함하는 미생물을 배양하는 경우, 고수율의 L-이소류신 생산이 가능하다.
[Advantageous Effects] When a microorganism including the acetohydroxy acid synthase variant of the present disclosure is cultured, it is possible to produce L-isoleucine in a high yield.
이에, 산업적인 면에서 생산의 편의성 및 제조원가 절감의 효과를 기대할 수 있다.
Accordingly, from an industrial point of view, it is possible to expect the effects of production convenience and reduction of production costs.
이하 본 출원을 실시예에 의해 보다 상세하게 설명한다.
[DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION] Hereinafter, the present disclosure will be described in more detail with reference to the following Examples.
그러나 이들 실시예는 본 출원을 예시적으로 설명하기 위한 것으로, 본 출원의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것은 아니다.
However, these Examples are for illustrative purposes only, and the scope of the present disclosure is not intended to be limited by these Examples.
실시예 1. 인공변이법을 통한 무작위 돌연변이주 선별
Example 1.
본 실시예에서는 L-이소류신의 생산능이 향상된 미생물 변이주를 얻기 위해 하기와 같은 방법을 사용하여 미생물의 변이를 유도하였다.
Selection of Random Mutant Strains by Artificial Mutagenesis In this Example, in order to obtain a microorganism mutant strain having an enhanced ability to produce L-isoleucine, a mutation in a microorganism was induced in the following manner.
먼저 야생형 코리네박테리움 글루타미쿰 ATCC 13032 균주에 이소류신 생합성에서 중요한 효소로 작용하는 L-threonine dehydratase(ilvA)의 피드백 저해(feedback inhibition) 해소를 위한 ilvA(F383A) 변이를 도입하기 위해 서열번호 72, 서열번호 73 서열번호 74, 및 서열번호 75의 프라이머를 제작하였다.
First, in order to introduce, into a wild-type Corynebacterium glutamicum ATCC 13032 strain, ilvA(F383A) mutation for releasing feedback inhibition of L-threonine -22dehydratase (ilvA), which functions as an important enzyme in the biosynthesis of isoleucine, primers of SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 74, and SEQ ID NO: 75 were prepared.
코리네박테리움 글루타미쿰(Corynebacterium glutamicum) ATCC 13032의 게놈 DNA를 주형으로 서열번호 72와 73 및 서열번호 74와 서열번호 75의 프라이머를 이용하여 PCR을 수행하였다.
PCR was carried out using a genomic DNA of Corynebacterium glutamicum ATCC 13032 as a template and primers of SEQ ID NOS: 72 and 73 and SEQ ID NO: 74, and SEQ ID NO: 75.
PfuUltraTM 고-신뢰 DNA 폴리머라제(Stratagene)를 사용하여 PCR 하였으며, PCR 조건은 변성 95℃ 30초; 어닐링 55℃ 30초; 및 중합반응 72℃ 1분을 25회 반복하였다.
PCR was carried out using PfuUltra TM high-fidelity DNA polymerase (Stratagene), and PCR conditions were as follows: 25 cycles of denaturation at 95°C for 30 seconds, annealing at 55°C for 30 seconds, and polymerization at 72°C for 1 minute.
그 결과, 1000bp의 ilvA 유전자 상단부위와 1000bp ilvA 유전자 하단부위의 유전자 단편을 각각 획득하였고, QIAGEN사의 PCR Purification kit를 사용하여 각 증폭산물을 정제하여 벡터 제작을 위한 삽입 DNA 단편으로 사용하였다.
As a result, a 1,000 bp DNA fragment of the upstream region of ilvA gene, and a 1,000 bp DNA fragment of the downstream region of ilvA gene were obtained, and each amplification product was purified using a PCR purification kit of QIAGEN, and used as an insert DNA fragment for vector construction.
제한효소 smaI으로 처리한 후 65℃에서 20분간 열처리한 pDZ(대한민국 등록 특허 번호 제0924065호) 벡터와 DNA 단편들을 몰농도 (M) 1:2가 되도록 하여 다카라(TaKaRa)의 Infusion Cloning Kit를 사용하여 제공된 매뉴얼에 따라 클로닝함으로써 F383A 변이를 염색체상에 도입하기 위한 벡터 pDZ-F383A를 제작하였다.
After treatment with a restriction enzyme smaI, a pDZ vector (Korean Patent No. 0924065) which was heat-treated at 65°C for 20 minutes and the DNA fragments were cloned at a molar concentration (M) of 1:2 using an Infusion Cloning Kit (TaKaRa) according to the manual provided, thereby constructing a pDZ-F383A vector for introducing an F383A mutation on the chromosome.
제작된 벡터를 전기천공법에 의해 코리네박테리움 글루타미쿰 ATCC 13032 에 형질전환하고, 2차 교차 과정을 거쳐 염색체 상에서 각각 변이형 염기로 치환되어 있는 균주를 얻었다.
The constructed vector was transformed into Corynebacterium glutamicum ATCC 13032 by electroporation.
적절한 치환 여부는 하기의 프라이머 조합을 사용하여 MASA(Mutant Allele Specific Amplification) PCR 기법(Takeda et al., Hum. Mutation, 2, 112-117 (1993))을 사용하여 변이형 서열에 부합하는 프라이머 조합(서열번호 68 및 서열번호 76)에서는 증폭되는 균주를 선별함으로써 1차 결정하였으며, 선별된 균주의 ilvA 서열분석은 서열번호 77 및 서열번호 78의 프라이머 조합을 이용하여 변이형 서열 분석함으로써 2차 확인하였다.
Mutation, 2, 112-117 (1993)) by selecting a strain which was amplified by a primer combination (SEQ ID NO: 68 and SEQ ID NO: 76) corresponding to the mutated sequence, and the ilvA sequence of the selected strain was analyzed using a primer combination of SEQ ID NO: 77 and SEQ ID NO: 78 to secondarily confirm the mutated sequence.
다음으로 상기 ilvA(F383A) 변이가 도입된 균주에 hom(R407H)(한국등록특허 10-1996769호) 변이가 추가적으로 도입된 균주를 제작하기 위하여 서열번호 64, 서열번호 서열번호 65, 서열번호 66 및 서열번호 67의 프라이머를 제작하였다.
Next, in order to prepare a strain in which hom(R407H) (Korean Patent No. 10 1996769) mutation was additionally introduced into the ilvA(F383A) mutant-introduced - 23strain, primers of SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, and SEQ ID NO: 67 were prepared.
코리네박테리움 글루타미쿰(Corynebacterium glutamicum) ATCC 13032로부터 추출한 게놈 DNA를 주형으로 서열번호 64 와 서열번호 65 및 서열번호 66 및 서열번호 67의 프라이머를 사용하여 PCR을 수행하였다.
PCR was carried out using genomic DNA extracted from Corynebacterium glutamicum ATCC 13032 as a template and primers of SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, and SEQ ID NO: 67.